JP2006506101A5

JP2006506101A5 -

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Publication number: JP2006506101A5
Application number: JP2005507162A
Authority: JP
Filing date: 2003-11-13
Publication date: 2007-02-01

Claims

インフルエンザウイルスのＮＳ１タンパク質またはそのｄｓＲＮＡ結合断片、および前記タンパク質に結合し、約１６塩基対の長さを有するｄｓＲＮＡの複合体を含む反応混合物を含む組成物。
前記ＮＳ１タンパク質が、インフルエンザＡ型のＮＳ１タンパク質（ＮＳ１Ａ）である請求項１に記載の組成物。
前記ＮＳ１Ａタンパク質のｄｓＲＮＡ結合断片を含む請求項２に記載の組成物。
前記ｄｓＲＮＡ結合断片が、ＮＳ１Ａのアミノ酸残基１〜７３を含む請求項３に記載の組成物。
前記ＮＳ１タンパク質が、インフルエンザＢ型のＮＳ１タンパク質（ＮＳ１Ｂ）である請求項１に記載の組成物。
前記ＮＳ１Ｂタンパク質のｄｓＲＮＡ結合断片を含む請求項５に記載の組成物。
前記ｄｓＲＮＡ結合断片が、ＮＳ１Ｂのアミノ酸残基１〜９３を含む請求項６に記載の組成物。
前記ｄｓＲＮＡが、一本鎖ＲＮＡ分子中の分子内塩基対形成により形成される、請求項１に記載の組成物。
前記ｄｓＲＮＡ結合断片が、ＮＳ１Ａのアミノ酸残基１〜７３を含み、前記前記ｄｓＲＮＡが、一本鎖ＲＮＡ分子中の分子内塩基対形成により形成される、請求項１に記載の組成物。
前記ｄｓＲＮＡ結合断片が、ＮＳ１Ｂのアミノ酸残基１〜９３を含む、請求項１に記載の組成物。
インフルエンザウイルスに対する阻害活性についてテストされた化合物をさらに含む請求項１に記載の組成物。
前記ＮＳ１タンパク質またはｄｓＲＮＡが、検出可能に標識されている請求項１に記載の組成物。
インフルエンザウイルスに対する阻害活性を有する化合物を同定する方法であって、
ａ）インフルエンザウイルスのＮＳ１タンパク質またはそのｄｓＲＮＡ結合ドメイン、前記タンパク質またはその結合ドメインに結合するｄｓＲＮＡ、および候補化合物を含む反応系を調製準備するステップと；
ｂ）前記ＮＳ１タンパク質と前記ｄｓＲＮＡとの間の結合の程度を検出するステップであって、対照と比べて、前記化合物の存在下における前記ＮＳ１タンパク質と前記ｄｓＲＮＡとの間の低下した結合は、インフルエンザウイルスに対する前記化合物の阻害活性を示す、ステップと；
を含む、方法。
前記ＮＳ１タンパク質またはそのｄｓＲＮＡ結合ドメインが、固体支持体に固定化されている請求項１３に記載の方法。
前記候補化合物を、前記ＮＳ１タンパク質および前記ｄｓＲＮＡに先立って、またはそれと同時に反応系に添加する請求項１３に記載の方法。
前記候補化合物を、前記ＮＳ１タンパク質および前記ｄｓＲＮＡの添加の後に反応系に添加する請求項１３に記載の方法。
前記検出するステップの前に、前記ｄｓＲＮＡ、ＮＳ１タンパク質またはそのｄｓＲＮＡ結合ドメインを、検出可能な標識で標識するステップをさらに含む請求項１３に記載の方法。
前記検出可能標識が、前記ＮＳ１タンパク質またはそのｄｓＲＮＡ結合ドメインに結合する抗体またはその断片を含む請求項１７に記載の方法。
前記検出可能な標識が酵素を含み、前記反応系が前記酵素の基質をさらに含む請求項１７に記載の方法。
前記検出可能な標識が、放射性同位体を含む請求項１７に記載の方法。
前記検出可能な標識が、蛍光標識を含む請求項１７に記載の方法。
前記検出するステップが、蛍光共鳴エネルギー移動を介して行われる請求項１３に記載の方法。
前記検出するステップが、蛍光偏光異方性測定を介して行われる請求項１３に記載の方法。
前記ＮＳ１タンパク質またはそのｄｓＲＮＡ結合断片が、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼとの融合タンパク質として反応系に存在する請求項１３に記載の方法。
前記ＮＳ１タンパク質がＮＳ１Ａタンパク質である請求項１３に記載の方法。
前記ＮＳ１タンパク質がＮＳ１Ｂタンパク質である請求項１３に記載の方法。
前記反応系が、前記ＮＳ１タンパク質のｄｓＲＮＡ結合ドメインを含むＮＳ１タンパク質の断片を含む請求項１３に記載の方法。
前記ｄｓＲＮＡ結合ドメインが、ＮＳ１（１〜７３）を含む請求項２７に記載の方法。
前記ｄｓＲＮＡ結合ドメインが、ＮＳ１Ｂ（１〜９３）を含む請求項２７に記載の方法。
前記ｄｓＲＮＡが、約１６塩基対の長さを有する請求項１３に記載の方法。
前記同定方法が、高スループットスクリーニングアッセイを含む請求項１３に記載の方法。
インフルエンザウイルスに対する阻害活性を有する化合物を同定する方法であって、
ａ）インフルエンザウイルスのＮＳ１タンパク質またはそのｄｓＲＮＡ結合ドメイン、前記タンパク質またはその結合ドメインに結合するｄｓＲＮＡ、および候補化合物を含む反応系を準備するステップと；
ｂ）前記ＮＳ１タンパク質と前記ｄｓＲＮＡとの間の結合の程度を検出するステップであって、対照と比べて、前記化合物の存在下における前記ＮＳ１タンパク質と前記ｄｓＲＮＡとの間の低下した結合は、インフルエンザウイルスに対する前記化合物の阻害活性を示す、ステップと；
ｃ）阻害活性を有するものとしてｂ）で同定された化合物が、インビトロにてインフルエンザウイルスの増殖を阻害する程度を決定するステップと；
を含む、方法。
阻害活性を有する化合物を同定する前記方法が、（ａ）ＮＭＲ化学シフト摂動、（ｂ）ゲル濾過クロマトグラフィー、および（ｃ）分析用超遠心を用いる沈降平衡測定からなる群から選択される請求項３２に記載の方法。
ｄ）インビトロでインフルエンザウイルスの増殖を阻害するものとしてｃ）で同定された化合物が、非ヒト動物においてインフルエンザの複製を阻害する程度を決定するステップをさらに含む請求項３２に記載の方法。
インビトロまたはインビボでインフルエンザウイルスの複製を阻害するための組成物を調製する方法であって、
ａ）インフルエンザウイルスのＮＳ１タンパク質またはそのｄｓＲＮＡ結合ドメイン、前記タンパク質またはその結合ドメインに結合するｄｓＲＮＡ、および候補化合物を含む反応系を準備するステップと；
ｂ）前記ＮＳ１タンパク質と前記ｄｓＲＮＡとの間の結合の程度を検出するステップであって、対照と比べて、前記化合物の存在下での前記ＮＳ１タンパク質と前記ｄｓＲＮＡとの間の低下した結合は、インフルエンザウイルスに対する前記化合物の阻害活性を示す、ステップと；
ｃ）阻害活性を有するものとしてｂ）で同定された化合物が、インビトロでインフルエンザウイルスの増殖を阻害する程度を決定するステップと；
ｄ）インビトロにてインフルエンザウイルスの増殖を阻害するものとしてｃ）で同定された化合物が、非ヒト動物においてインフルエンザウイルスの複製を阻害する程度を決定するステップと；
ｅ）非ヒト動物においてインフルエンザウイルスの複製を阻害するものとしてｄ）で同定された化合物の阻害有効量を、担体と共に、処方することによって組成物を調製するステップと；
を含む、方法。
ｆ）ｃ）およびｄ）から得られた結果に基づいて、前記化合物の前記阻害有効量を決定するステップをさらに含む請求項３５に記載の方法。
前記担体が、吸入または吹入れを介して動物に投与するのに適したものである請求項３５に記載の方法。
インフルエンザウイルスの阻害剤として用いられる化合物を同定する方法であって、
（ａ）インフルエンザウイルスＮＳ１タンパク質の三次元構造についての座標を得るステップと；
（ｂ）ステップ（ａ）で得られた三次元構造についての前記座標により合理的薬物設計を行うことによって潜在的化合物を選択するステップであって、ＮＳ１−ｄｓＲＮＡ複合体のコンピューターモデリングと組み合わせて行われる、ステップと；
（ｃ）前記潜在的化合物をインフルエンザウイルスと接触させるステップと；
（ｄ）インフルエンザウイルスの活性を測定するステップであって、潜在的化合物は、その非存在下と比べて、前記化合物の存在下においてインフルエンザウイルスの活性の減少がある場合に、インフルエンザウイルスを阻害する化合物として同定される、ステップと；
を含む、方法。
前記ＮＳ１タンパク質が、ＮＳ１Ａタンパク質またはそのｄｓＲＮＡ結合ドメインである請求項３８に記載の方法。
ｄｓＲＮＡ結合ドメインが、ＮＳ１Ａ（１〜７３）である請求項３９に記載の方法。
前記ＮＳ１タンパク質が、ＮＳ１Ｂタンパク質またはそのｄｓＲＮＡ結合ドメインである請求項３８に記載の方法。
ｄｓＲＮＡ結合ドメインが、ＮＳ１Ｂ（１〜９３）である請求項４１に記載の方法。