JP2006289071A - Sterilization method for compound - Google Patents
Sterilization method for compound Download PDFInfo
- Publication number
- JP2006289071A JP2006289071A JP2006074030A JP2006074030A JP2006289071A JP 2006289071 A JP2006289071 A JP 2006289071A JP 2006074030 A JP2006074030 A JP 2006074030A JP 2006074030 A JP2006074030 A JP 2006074030A JP 2006289071 A JP2006289071 A JP 2006289071A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- compound
- aqueous solution
- radiation
- rays
- antithrombin
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Apparatus For Disinfection Or Sterilisation (AREA)
Abstract
Description
本発明は、医薬、医療、プロテオーム解析および食品製造などの分野で好適に用いられる化合物の滅菌技術に関するものである。 The present invention relates to a compound sterilization technique suitably used in fields such as medicine, medicine, proteome analysis and food production.
医薬品や医療器具が医療の現場で使用されるとき、それらは滅菌された状態でなければならない。すなわち、医薬品や医療器具を生産するとき最終的に滅菌する必要がある。日本薬局方において、医薬品や医療用具の最終滅菌方法として加熱法、ガス法および照射法が示されている。 When pharmaceuticals and medical devices are used in the medical setting, they must be sterilized. That is, it is necessary to finally sterilize when producing pharmaceuticals and medical instruments. In the Japanese Pharmacopoeia, a heating method, a gas method, and an irradiation method are shown as final sterilization methods for pharmaceuticals and medical devices.
照射法は、大きく分けて放射線法と高周波法がある。それらのうち放射線法は、熱による滅菌対象物の変性も少なく、残留ガスによる毒性の問題も少ないので近年広く用いられている滅菌方法である。照射線には高エネルギー放射線が用いられ、なかでもγ線が標準的に用いられる。γ線のエネルギーが物質に吸収されると、物質の分子は電離したり、励起状態になる。そして解離反応を起こし、その結果として、非常に反応性に富んだラジカルが生成され、通常の分子と次々と反応を起こす。この一連の反応が、微生物の生命を維持するのに最も重要な核酸で発生すると、核酸分子が切断され、直接的に微生物を死滅させる。 Irradiation methods are broadly classified into radiation methods and high-frequency methods. Among them, the radiation method is a sterilization method that has been widely used in recent years because it hardly causes denaturation of an object to be sterilized by heat and there are few problems of toxicity due to residual gas. High-energy radiation is used for irradiation, and γ-ray is typically used. When γ-ray energy is absorbed by a substance, the molecule of the substance is ionized or excited. Then, a dissociation reaction occurs, and as a result, highly reactive radicals are generated and react one after another with ordinary molecules. When this series of reactions occurs with the most important nucleic acid to maintain the life of a microorganism, the nucleic acid molecule is cleaved and directly kills the microorganism.
しかしながら、γ線照射により発生したラジカルは微生物だけでなく、医薬品や医療材料を構成する分子とも反応し、その機能や物理特性を劣化させることがある。また近年、基材表面に、化学的または生化学的修飾を行い、特異的な吸着、反応性や生体適合性を付与することが行われるが、これらにより得られた表面特性は、γ線照射により、それら機能が低下することが問題となっている。 However, radicals generated by γ-ray irradiation may react not only with microorganisms but also with molecules constituting pharmaceuticals and medical materials, thereby deteriorating their functions and physical properties. In recent years, the surface of a substrate has been chemically or biochemically modified to give specific adsorption, reactivity, or biocompatibility. Therefore, it is a problem that these functions are deteriorated.
かかる問題に対して、基材にピロ亜硫酸ナトリウムやアスコルビン酸などの抗酸化剤を含浸させた状態で放射線滅菌する方法（特許文献１参照）や、凍結した状態で放射線滅菌する方法（特許文献２参照）や、残留溶媒量を低下させた状態で放射線滅菌する方法（特許文献３参照）が提案されている。 With respect to such problems, a method of radiation sterilization with a base material impregnated with an antioxidant such as sodium pyrosulfite or ascorbic acid (see Patent Document 1), or a method of radiation sterilization in a frozen state (Patent Document 2). And a method of radiation sterilization in a state in which the amount of residual solvent is reduced (see Patent Document 3).
上記の抗酸化剤を基材に含浸させる方法では、抗酸化剤が放射線照射により変性し有害な物質になることが問題となっている。例えば、ピロ亜硫酸ナトリウムを用いると亜硫酸や二酸化硫黄などの有害物質が発生するので、医薬品や医療機器の最終滅菌に用いるのは好ましくない。また、抗酸化剤の原材料費以外にも抗酸化剤を添加するプロセスが増えたり、それに伴う設備が必要となるためコスト的にも不利である。 In the method of impregnating the base material with the above-mentioned antioxidant, there is a problem that the antioxidant is denatured by irradiation and becomes a harmful substance. For example, when sodium pyrosulfite is used, harmful substances such as sulfurous acid and sulfur dioxide are generated. Therefore, it is not preferable to use it for final sterilization of pharmaceuticals and medical devices. In addition to the cost of raw materials for antioxidants, it is also disadvantageous in terms of cost because the number of processes for adding antioxidants increases and the associated equipment is required.
また、凍結した状態で放射線照射する方法は、生理活性を有する化合物などを凍結した場合、生理活性を失ってしまうという大きな問題がある。また、凍結させるために必要な設備やそれに必要な電力、そして凍結状態での輸送などコスト増加が問題となる。 In addition, the method of irradiating with radiation in a frozen state has a big problem that the physiological activity is lost when a compound having physiological activity is frozen. Further, there is a problem of cost increase such as equipment necessary for freezing, electric power necessary for the freezing, and transportation in a frozen state.
また、残留溶媒を低下させた状態で放射線滅菌する方法は、すなわち水分率を２％以下にするということであり、湿潤状態に保つ必要のある化合物に対しては用いることはできない。例えば、血液透析膜などは材料の微多孔構造に依存しており、乾燥によりこれら構造が変化して当初計画した性能が得られないという問題がある。
そこで本発明の目的は、放射線に対して不安定な化合物において、放射線滅菌により該化合物の変性などによる機能低下を抑制し、かつ有害な副生成物の発生が少なく凍結などの処理を必要とせず、かつ乾燥による化合物の変性が少ない化合物の滅菌方法を提供することにある。 Therefore, an object of the present invention is to suppress a functional deterioration due to denaturation of a compound by radiation sterilization in a compound unstable to radiation, and generates no harmful by-products and does not require a treatment such as freezing. Another object of the present invention is to provide a method for sterilizing a compound with little modification of the compound by drying.
上記目的を達成するために、本発明の化合物の滅菌方法は以下の構成を有するものである。
（１）放射線に対して不安定な化合物を有機溶媒に溶解および／または分散させた状態で放射線を照射することを特徴とする化合物の滅菌方法。
（２）有機溶媒が水酸基を含有することを特徴とする前記（１）に記載の化合物の滅菌方法。
（３）水酸基が少なくとも一つ２級または３級の水酸基であること特徴とする前記（２）に記載の化合物の滅菌方法
（４）有機溶媒の水分率が２０％以下であることを特徴とする前記（１）〜（３）のいずれかに記載の化合物の滅菌方法。
（５）放射線に対して不安定な化合物がアミノ酸を構成要素とするものであることを特徴とする前記（１）〜（４）のいずれかに記載の化合物の滅菌方法。
（６）放射線に対して不安定な化合物が血液抗凝固活性を有することを特徴とする前記（１）〜（５）のいずれかに記載の化合物の滅菌方法。
（７）放射線に対して不安定な化合物が抗トロンビン活性を有することを特徴とする前記（１）〜（６）のいずれかに記載の化合物の滅菌方法。
In order to achieve the above object, the method for sterilizing a compound of the present invention has the following constitution.
(1) A method for sterilizing a compound, which comprises irradiating radiation in a state where a compound unstable to radiation is dissolved and / or dispersed in an organic solvent.
(2) The method for sterilizing a compound as described in (1) above, wherein the organic solvent contains a hydroxyl group.
(3) The method for sterilizing a compound as described in (2) above, wherein the hydroxyl group is at least one secondary or tertiary hydroxyl group. (4) The water content of the organic solvent is 20% or less. The method for sterilizing a compound according to any one of (1) to (3) above.
(5) The method for sterilizing a compound according to any one of (1) to (4), wherein the compound unstable to radiation comprises an amino acid as a constituent element.
(6) The method for sterilizing a compound according to any one of (1) to (5) above, wherein the compound unstable to radiation has blood anticoagulant activity.
(7) The method for sterilizing a compound according to any one of (1) to (6) above, wherein the compound unstable to radiation has antithrombin activity.
本発明によれば、放射線に対して不安定な化合物を放射線滅菌する際に、該化合物を有機溶媒に溶解および／または分散することにより、該化合物の変性などによる機能低下を防ぎ、かつ有害な副生成物の発生が少なく凍結などの処理を必要とせず、かつ乾燥による化合物の変性が少ない滅菌を行うことが可能となる。 According to the present invention, when a compound unstable to radiation is sterilized by radiation, the compound is dissolved and / or dispersed in an organic solvent, thereby preventing deterioration of the function due to modification of the compound and harmful. It is possible to perform sterilization with little generation of by-products, no need for treatment such as freezing, and less denaturation of the compound by drying.
本発明の化合物の滅菌方法は、放射線に対して不安定な化合物を有機溶媒に溶解および／または分散させた状態で放射線を照射することを特徴とするものである。 The compound sterilization method of the present invention is characterized by irradiating radiation in a state where a compound unstable to radiation is dissolved and / or dispersed in an organic solvent.
本発明で用いられる放射線とは、高エネルギーの粒子線および電磁波のことであり、例えば、α線、β線、γ線、Ｘ線、紫外線、電子線および中性子線などが挙げられる。これらのうち、γ線、電子線およびＸ線が効率よく微生物を殺滅できるので滅菌に好適である。放射線の照射線量は５ｋＧｙ以上であることが好ましく、１０ｋＧｙ以上がより好ましく、１５ｋＧｙ以上がさらに好ましい。ただし、過剰な放射線の照射は化合物を変性させるだけでなく、照射に要する時間も長くなり生産性が低下するので、５０００ｋＧｙ以下が好ましく、１０００ｋＧｙ以下がより好ましく、１００ｋＧｙ以下がさらに好ましい。
また、本発明で用いられる放射線に対して不安定な化合物とは、放射線が照射されたときに化合物中の少なくとも一部において化学結合の切断や生成、あるいは酸化反応などにより分子構造に変化を生じ、強度などの機械的特性、導電性などの電気的特性、屈折率などの光学特性、表面張力のような物理的機能および／または触媒活性や吸着特性などの化学的な機能および／または生体適合性や酵素活性や抗体活性などの生物的な機能が変化する化合物のことをさす。本発明で用いられる放射線に対して不安定な化合物の詳細については、後述する。
The radiation used in the present invention refers to high-energy particle beams and electromagnetic waves, and examples include α rays, β rays, γ rays, X rays, ultraviolet rays, electron beams, and neutron rays. Of these, γ-rays, electron beams and X-rays are suitable for sterilization because they can kill microorganisms efficiently. The radiation dose is preferably 5 kGy or more, more preferably 10 kGy or more, and further preferably 15 kGy or more. However, irradiation with excessive radiation not only denatures the compound, but also increases the time required for irradiation and decreases productivity, so 5000 kGy or less is preferable, 1000 kGy or less is more preferable, and 100 kGy or less is more preferable.
In addition, the compound unstable to radiation used in the present invention means that when irradiated with radiation, at least a part of the compound causes a change in molecular structure due to chemical bond breaking or generation, or oxidation reaction. Mechanical properties such as strength, electrical properties such as conductivity, optical properties such as refractive index, physical functions such as surface tension and / or chemical functions such as catalytic activity and adsorption properties and / or biocompatibility It refers to a compound that changes biological functions such as sex, enzyme activity and antibody activity. Details of the compound unstable to radiation used in the present invention will be described later.
放射線に対して不安定な化合物は、当該化合物を単独で滅菌しても良いし、医療材料などの基材と共に滅菌しても良い。このように、本発明では医療材料の滅菌も同時に行うことができるので生産工程数を減らすことができる。この場合、放射線に対して不安定な化合物を基材表面に化学的にグラフトすることも可能である。
本発明で好適に用いられる有機溶媒としては、分子中に炭素原子および／またはケイ素原子を含む溶媒が挙げられる。水酸基は、放射線照射により発生したラジカルを安定化する効果が高く、かつ非イオン性の官能基であり強い表面電荷を有する化合物との相互作用が小さく、かつ酸化還元力も小さく化合物の変性も少ないので、分子中に水酸基を有する有機溶媒、例えば、メタノール、エタノール、１−プロパノール、１−ブタノール、１，４−ブタンジオールおよびポリエチレングリコールなどが好ましく用いられる。特に、２級および３級の水酸基は、ラジカルを安定化する効果がより高いので、少なくとも一つに２級または３級の水酸基を有する有機溶媒、例えば、グリセリンやプロピレングリコールやイソプロパノール、２−ブタノール、２，３−ブタンジオールおよび１，３−ブタンジオールなどが好ましく用いられる。
また、本発明の化合物の滅菌方法を医療用具に用いる際は、その安全性を考慮する必要があるため、非水溶媒は毒性の低いものが好適に用いられる。有機溶媒量の上限は特にはなく多い方が好ましいが、有機溶媒量が少ないと発生したラジカルの安定化を十分に行うことができないので、有機溶媒量は全溶媒量の０．５％以上であることが好ましく、より好ましくは１０％以上であり、更に好ましくは２０％以上である。
本発明において、放射線に対して不安定な化合物が溶解するとは、その化合物が有機溶媒に溶けて均一混合物、すなわち溶液になることを指す。また、放射線に対して不安定な化合物が分散するとは、その化合物が有機溶媒中に散在することを指す。化合物の濃度については特に限定されるものではないが、化合物によっては濃度が濃すぎると化合物間で架橋反応が進行してゲル化などにより、化合物本来の物性が失われるおそれがあるので、化合物の濃度は５０％以下が好ましく、より好ましくは３０％以下であり、さらに好ましくは２０％以下である。
本発明における水分率とは、次式で定義されるものである。
（放射線に不安定な化合物および該化合物を溶解および／または分散している有機溶媒に含まれる水の重量）／（放射線に対して不安定な化合物および該化合物を溶解および／または分散している有機水溶媒の重量）×１００
水分率測定は、第十四改正日本薬局方の水分測定法（カールフィッシャー法）で行うこととする。
水分率が高いと、放射線照射により活性が高いヒドロキシラジカルが発生し、周囲の化合物を変性させるおそれがあるので、水分率は２０％以下であることが好ましく、より好ましくは１５％以下であり、さらに好ましくは１０％以下である。また、放射線照射までの保管中に水分率が上がることを抑制するために、シリカゲルなどの乾燥剤を用いても良い。
A compound unstable to radiation may be sterilized alone or together with a substrate such as a medical material. Thus, in the present invention, since the medical material can be sterilized at the same time, the number of production steps can be reduced. In this case, it is also possible to chemically graft a compound unstable to radiation onto the substrate surface.
Examples of the organic solvent suitably used in the present invention include a solvent containing a carbon atom and / or a silicon atom in the molecule. Hydroxyl groups have a high effect of stabilizing radicals generated by radiation irradiation, are nonionic functional groups, have little interaction with compounds with strong surface charges, have little redox power, and have little modification of compounds. An organic solvent having a hydroxyl group in the molecule, such as methanol, ethanol, 1-propanol, 1-butanol, 1,4-butanediol and polyethylene glycol, is preferably used. In particular, secondary and tertiary hydroxyl groups are more effective in stabilizing radicals, and therefore organic solvents having at least one secondary or tertiary hydroxyl group, such as glycerin, propylene glycol, isopropanol, and 2-butanol. 2,3-butanediol and 1,3-butanediol are preferably used.
Further, when the method for sterilizing a compound of the present invention is used for a medical device, it is necessary to consider its safety, and therefore, a non-aqueous solvent having low toxicity is preferably used. The upper limit of the amount of the organic solvent is not particularly large and is preferably large. However, since the generated radical cannot be sufficiently stabilized if the amount of the organic solvent is small, the amount of the organic solvent is 0.5% or more of the total amount of the solvent. Preferably, it is 10% or more, more preferably 20% or more.
In the present invention, dissolution of a compound unstable to radiation means that the compound dissolves in an organic solvent to form a uniform mixture, that is, a solution. In addition, the dispersion of a compound unstable to radiation means that the compound is scattered in an organic solvent. The concentration of the compound is not particularly limited, but depending on the compound, if the concentration is too high, the cross-linking reaction proceeds between the compounds and the original physical properties of the compound may be lost due to gelation or the like. The concentration is preferably 50% or less, more preferably 30% or less, and still more preferably 20% or less.
The moisture content in the present invention is defined by the following equation.
(Weight of water contained in the radiation labile compound and the organic solvent in which the compound is dissolved and / or dispersed) / (radiation labile compound and the compound dissolved and / or dispersed) Weight of organic water solvent) x 100
Moisture content is measured by the 14th revised Japanese Pharmacopoeia moisture measurement method (Karl Fischer method).
When the moisture content is high, hydroxy radicals having high activity are generated by irradiation and there is a possibility of modifying the surrounding compounds. Therefore, the moisture content is preferably 20% or less, more preferably 15% or less, More preferably, it is 10% or less. In addition, a desiccant such as silica gel may be used in order to suppress an increase in moisture content during storage until irradiation.
本発明において、アミノ酸を構成要素としている化合物とは、天然に存在するアミノ酸を含有する化合物のことであり、例えば、タンパク質やペプチドなどのアミノ酸だけから構成されるものや、糖タンパク質、アミノ酸錯体およびアミノアシルアデニル酸等のアミノ酸とアミノ酸以外のものから構成されるものも挙げられるが、これらに限定されるものではない。 In the present invention, the compound having an amino acid as a constituent element is a compound containing a naturally occurring amino acid. For example, a compound composed only of amino acids such as proteins and peptides, glycoproteins, amino acid complexes and Although what is comprised from amino acids and amino acids, such as aminoacyl adenylic acid, is mentioned, It is not limited to these.
血液抗凝固活性を有する化合物とは、血液に化合物を１０μｇ／ｍｌの濃度となるように加えたとき未添加の血液と比較してプロトロンビン時間が３０％以上延長するような化合物を指す。プロトロンビン時間の測定は、次の文献に記載の方法で行うことができる。
金井正光ら、「臨床検査法提要 改訂第３０版」、金原出版、１９９３年、ｐｐ．４１６−４１８
すなわち、３．２％クエン酸ナトリウム１容と血液の９容を混じて、分取したクエン酸血漿０．１ｍｌを小試験管（内径８ｍｍ、長さ７．５ｃｍ）にとり、３７℃恒温水槽に入れ約３分間加熱する。同温度に保温した組織トロンボプラスチン・カルシウム試薬０．２ｍｌを加えると同時に秒時計を始動し軽く振とうし、傾斜させながらフィブリンが析出するまでの時間を測定する。
血液抗凝固活性を有する化合物としては、ヘパリン、ナファモスタットメシレート、クエン酸ナトリウム、シュウ酸ナトリウム、α１アンチトリプシン、α２マクログロブリン、Ｃ１インヒビタ、トロンボモジュリンおよびプロテインＣ等が挙げられるが、これらに限定されるものではない。血液抗凝固活性を有する化合物の中で、トロンビンの活性を抑制することで強力な血液抗凝固作用を示す化合物がある。
本発明における抗トロンビン活性を有する化合物とは、血液中の凝固関連物質であるトロンビンの活性を抑制する化合物のことであり、化合物を１０μｇ／ｍｌの濃度で加えた血漿のＨＥＡＭＯＳＹＳ社「ＥＣＡ−Ｔ ｋｉｔ」における測定値が、化合物未添加血漿のものと比較して５０％以上増加するような化合物を指す。抗トロンビン活性を有する化合物の例として、下記の化学式で示される
４−ｍｅｔｈｏｘｙ−ｂｅｎｚｅｎｅｓｕｌｆｏｎｙｌ−Ａｓｎ（ＰＥＧ２０００−Ｏｍｅ）−Ｐｒｏ−４ａｍｉｄｉｎｏｂｅｎｚｙｌａｍｉｄｅ（以下、化合物Ａと略す。）、アンチトロンビンＩＩＩ、およびヒルジンなどが挙げられる。
The compound having blood anticoagulant activity refers to a compound in which the prothrombin time is prolonged by 30% or more when the compound is added to blood so as to have a concentration of 10 μg / ml as compared with unadded blood. The prothrombin time can be measured by the method described in the following document.
Masamitsu Kanai et al., “Proposal for Clinical Examination Revised 30th Edition”, Kanehara Publishing, 1993, pp. 416-418
That is, mix 1 volume of 3.2% sodium citrate and 9 volumes of blood, and take 0.1 ml of citrated plasma collected in a small test tube (inner diameter 8 mm, length 7.5 cm) in a 37 ° C. constant temperature water bath. Heat for about 3 minutes. At the same time as adding 0.2 ml of tissue thromboplastin / calcium reagent kept at the same temperature, start the second clock, shake gently, and measure the time until fibrin precipitates while tilting.
Examples of the compound having anticoagulant activity, heparin, nafamostat mesylate, sodium citrate, sodium oxalate, alpha 1 antitrypsin, alpha 2 macroglobulin, C1 inhibitor, but thrombomodulin and protein C, etc., in these It is not limited. Among the compounds having blood anticoagulant activity, there are compounds that exhibit a strong blood anticoagulant effect by suppressing the activity of thrombin.
The compound having antithrombin activity in the present invention is a compound that suppresses the activity of thrombin, which is a coagulation-related substance in blood, and the plasma HEAMOSYS “ECA-T” added with a compound at a concentration of 10 μg / ml. A compound whose measured value in “kit” is increased by 50% or more compared to that of plasma without compound. As examples of compounds having antithrombin activity, 4-methoxy-benzenesulfonyl-Asn (PEG2000-Ome) -Pro-4amidinobenzylamide (hereinafter abbreviated as Compound A), antithrombin III, hirudin and the like represented by the following chemical formulas are given. Can be mentioned.
（式中、ＰＥＧはポリエチレングリコール残基、Ｍｅはメチル基を表す。）
以下、実施例を挙げて本発明の化合物の滅菌方法について具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例によって限定されるものではない。
(In the formula, PEG represents a polyethylene glycol residue, and Me represents a methyl group.)
Hereinafter, the method for sterilizing the compound of the present invention will be specifically described with reference to examples, but the present invention is not limited to these examples.
（抗トロンビン活性値の測定）
抗トロンビン活性値の測定には、試薬にＨＡＥＭＯＳＹＳ社製のＥＣＡ−Ｔキットを使用し、装置にＴＥＣＯ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ社製のＣＯＡＴＲＯＮ Ｍ１（ｃｏｄｅ ８０ ８００ ０００）を使用した。ヒト血漿（コスモバイオ発売 Ｈｕｍａｎ Ｐｌａｓｍａ １２２７１２１０， ｌｏｔ．１６８７８）８０μｌ、測定対象溶液を２０μｌ加え攪拌した。この溶液をサンプル溶液とする。サンプル溶液は、測定の直前まで氷浴上で冷却しておく。ＥＣＡ ｐｒｏｔｈｒｏｍｂｉｎ ｂｕｆｆｅｒ １００μｌ、サンプル溶液３０μｌ、ＥＣＡ−Ｔ ｓｕｂｓｔｒａｔｅ ２５μｌを混合し３７℃の温度で６０秒間インキュベートし、装置にセッティングした。ＥＣＡ ｅｃａｒｉｎ ｒｅａｇｅｎｔ ５０μｌ加えて測定を行った。ブランクとして、測定対象溶液に超純水を用い調製したサンプルで測定を行った。
（水分率の測定）
平沼産業株式会社製ＡＱ−７平沼微量水分測定装置を用い、電解液として平沼産業株式会社製ハイドラナールアクアライトＲＳ、アクアライトＣＮを用い、装置付属の取扱説明書に従って測定を行った。
（実施例１）
超純水９．９５ｍｌとグリセリン（シグマアルドリッチ製 Ｃｏｄｅ １２−１１２０−５）０．０５ｍｌを溶解してグリセリン水溶液を調製した。該グリセリン水溶液に
４−ｍｅｔｈｏｘｙ−ｂｅｎｚｅｎｅｓｕｌｆｏｎｙｌ−Ａｓｎ（ＰＥＧ２０００−Ｏｍｅ）−Ｐｒｏ−４ａｍｉｄｉｎｏｂｅｎｚｙｌａｍｉｄｅ（化合物Ａ）を溶解して濃度５０００重量ｐｐｍの化合物Ａグリセリン水溶液を調製した。該化合物Ａグリセリン水溶液の水分率測定を行った。水分率は９９．４％であった。該化合物Ａグリセリン水溶液にγ線照射した。このときγ線の吸収線量は２６ｋＧｙであった。放射線照射前の化合物Ａグリセリン水溶液および放射線照射後の化合物Ａグリセリン水溶液の抗トロンビン活性値を測定し、次式（１）から、抗トロンビン活性値の残存率を計算した。その結果、抗トロンビン残存率は６．０％であった。
Ａ＝１００×（Ｂ−Ｄ）／（Ｃ−Ｄ） 式（１）
上記の式（１）中の記号の定義は次のとおりである。
・Ａ：抗トロンビン活性残存率（％）
・Ｂ：放射線照射後のサンプル測定値（ｓｅｃ．）
・Ｃ：放射線照射前のサンプル測定値（ｓｅｃ．）
・Ｄ：ブランク測定値（ｓｅｃ．）。
（実施例２）
超純水８ｍｌとグリセリン（シグマアルドリッチ製 Ｃｏｄｅ １２−１１２０−５）２ｍｌを溶解してグリセリン水溶液を調製した。該グリセリン水溶液に実施例１で用いた化合物Ａを溶解して濃度５０００重量ｐｐｍの化合物Ａグリセリン水溶液を調製した。該化合物Ａグリセリン水溶液の水分率測定を行った。水分率は８１．２％であった。該化合物Ａグリセリン水溶液にγ線照射した。このときγ線の吸収線量は２６ｋＧｙであった。放射線照射前の化合物Ａグリセリン水溶液および放射線照射後の化合物Ａグリセリン水溶液の抗トロンビン活性値を測定し、上記の式（１）から抗トロンビン活性値の残存率を計算した。その結果、抗トロンビン残存率は４７．６％であった。
（実施例３）
超純水１ｍｌとグリセリン（シグマアルドリッチ製 Ｃｏｄｅ １２−１１２０−５）９ｍｌを溶解してグリセリン水溶液を調製した。該グリセリン水溶液に実施例１で用いた化合物Ａを溶解して濃度５０００重量ｐｐｍの化合物Ａグリセリン水溶液を調製した。該化合物Ａグリセリン水溶液の水分率測定を行った。水分率は９．９％であった。該化合物Ａグリセリン水溶液にγ線照射した。このときγ線の吸収線量は２６ｋＧｙであった。放射線照射前の化合物Ａグリセリン水溶液および放射線照射後の化合物Ａグリセリン水溶液の抗トロンビン活性値を測定し、上記の式（１）から、抗トロンビン活性値の残存率を計算した。その結果、抗トロンビン残存率は７３．６％であった。
（実施例４）
超純水０．１ｍｌとグリセリン（シグマアルドリッチ製 Ｃｏｄｅ １２−１１２０−５）９．９ｍｌを溶解してグリセリン水溶液を調製した。該グリセリン水溶液に実施例１で用いた化合物Ａを溶解して濃度５０００重量ｐｐｍの化合物Ａグリセリン水溶液を調製した。該化合物Ａグリセリン水溶液の水分率測定を行った。水分率は１．９％であった。該化合物Ａグリセリン水溶液にγ線照射した。このときγ線の吸収線量は２６ｋＧｙであった。放射線照射前の化合物Ａグリセリン水溶液および放射線照射後の化合物Ａグリセリン水溶液の抗トロンビン活性値を測定し、上記の式（１）から抗トロンビン活性値の残存率を計算した。その結果、抗トロンビン残存率は８４．０％であった。
（実施例５）
超純水９．９５ｍｌとプロピレングリコール（和光純薬工業株式会社製 Ｃｏｄｅ １６４−０４９９６）０．０５ｍｌを溶解してプロピレングリコール水溶液を調製した。該プロピレングリコール水溶液に実施例１で用いた化合物Ａを溶解して濃度５０００重量ｐｐｍの化合物Ａプロピレングリコール水溶液を調製した。該化合物Ａプロピレングリコール水溶液の水分率測定を行った。水分率は９９．５％であった。該化合物Ａプロピレングリコール水溶液にγ線照射した。このときγ線の吸収線量は２６ｋＧｙであった。放射線照射前の化合物Ａプロピレングリコール水溶液および放射線照射後の化合物Ａプロピレングリコール水溶液の抗トロンビン活性値を測定し、上記の式（１）から抗トロンビン活性値の残存率を計算した。その結果、抗トロンビン残存率は１２．２％であった。
（実施例６）
超純水８ｍｌとプロピレングリコール（和光純薬工業株式会社製 Ｃｏｄｅ １６４−０４９９６）２ｍｌを溶解してプロピレングリコール水溶液を調製した。該プロピレングリコール水溶液に実施例１で用いた化合物Ａを溶解して濃度５０００重量ｐｐｍの化合物Ａプロピレングリコール水溶液を調製した。該化合物Ａプロピレングリコール水溶液の水分率測定を行った。水分率は８１．７％であった。該化合物Ａプロピレングリコール水溶液にγ線照射した。このときγ線の吸収線量は２６ｋＧｙであった。放射線照射前の化合物Ａプロピレングリコール水溶液および放射線照射後の化合物Ａプロピレングリコール水溶液の抗トロンビン活性値を測定し、上記の式（１）から抗トロンビン活性値の残存率を計算した。その結果、抗トロンビン残存率は４０．６％であった。
（実施例７）
超純水１ｍｌとプロピレングリコール（和光純薬工業株式会社製 Ｃｏｄｅ １６４−０４９９６）９ｍｌを溶解してプロピレングリコール水溶液を調製した。該プロピレングリコール水溶液に実施例１で用いた化合物Ａを溶解して濃度５０００重量ｐｐｍの化合物Ａプロピレングリコール水溶液を調製した。該化合物Ａプロピレングリコール水溶液の水分率測定を行った。水分率は１０．１％であった。該化合物Ａプロピレングリコール水溶液にγ線照射した。このときγ線の吸収線量は２６ｋＧｙであった。放射線照射前の化合物Ａプロピレングリコール水溶液および放射線照射後の化合物Ａプロピレングリコール水溶液の抗トロンビン活性値を測定し、上記の式（１）から抗トロンビン活性値の残存率を計算した。その結果、抗トロンビン残存率は６９．５％であった。
（実施例８）
超純水０．１ｍｌとプロピレングリコール（和光純薬工業株式会社製 Ｃｏｄｅ １６４−０４９９６）９．９ｍｌを溶解してプロピレングリコール水溶液を調製した。該プロピレングリコール水溶液に実施例１で用いた化合物Ａを溶解して濃度５０００重量ｐｐｍの化合物Ａプロピレングリコール水溶液を調製した。該化合物Ａプロピレングリコール水溶液の水分率測定を行った。水分率は１．４％であった。該化合物Ａプロピレングリコール水溶液にγ線照射した。このときγ線の吸収線量は２６ｋＧｙであった。放射線照射前の化合物Ａプロピレングリコール水溶液および放射線照射後の化合物Ａプロピレングリコール水溶液の抗トロンビン活性値を測定し、上記の式（１）から抗トロンビン活性値の残存率を計算した。その結果、抗トロンビン残存率は７８．０％であった。
（実施例９）
超純水９．９５ｍｌとエチレングリコール（シグマアルドリッチ製 Ｃｏｄｅ ３２４５５８）０．０５ｍｌを溶解してエチレングリコール水溶液を調製した。該エチレングリコール水溶液に実施例１で用いた化合物Ａを溶解して濃度５０００重量ｐｐｍの化合物Ａエチレングリコール水溶液を調製した。該化合物Ａエチレングリコール水溶液の水分率測定を行った。水分率は９９．６％であった。該化合物Ａエチレングリコール水溶液にγ線照射した。このときγ線の吸収線量は２６ｋＧｙであった。放射線照射前の化合物Ａエチレングリコール水溶液および放射線照射後の化合物Ａエチレングリコール水溶液の抗トロンビン活性値を測定し、上記の式（１）から抗トロンビン活性値の残存率を計算した。その結果、抗トロンビン残存率は１．６％であった。
（実施例１０）
超純水８ｍｌとエチレングリコール（シグマアルドリッチ製 Ｃｏｄｅ ３２４５５８）２ｍｌを溶解してエチレングリコール水溶液を調製した。該エチレングリコール水溶液に実施例１で用いた化合物Ａを溶解して濃度５０００重量ｐｐｍの化合物Ａエチレングリコール水溶液を調製した。該化合物Ａエチレングリコール水溶液の水分率測定を行った。水分率は７９．９％であった。該化合物Ａエチレングリコール水溶液にγ線照射した。このときγ線の吸収線量は２６ｋＧｙであった。放射線照射前の化合物Ａエチレングリコール水溶液および放射線照射後の化合物Ａエチレングリコール水溶液の抗トロンビン活性値を測定し、上記の式（１）から抗トロンビン活性値の残存率を計算した。その結果、抗トロンビン残存率は９．７％であった。
（実施例１１）
超純水１ｍｌとエチレングリコール（シグマアルドリッチ製 Ｃｏｄｅ ３２４５５８）９ｍｌを溶解してエチレングリコール水溶液を調製した。該エチレングリコール水溶液に実施例１で用いた化合物Ａを溶解して濃度５０００重量ｐｐｍの化合物Ａエチレングリコール水溶液を調製した。該化合物Ａエチレングリコール水溶液の水分率測定を行った。水分率は１０．１％であった。該化合物Ａエチレングリコール水溶液にγ線照射した。このときγ線の吸収線量は２６ｋＧｙであった。放射線照射前の化合物Ａエチレングリコール水溶液および放射線照射後の化合物Ａエチレングリコール水溶液の抗トロンビン活性値を測定し、上記の式（１）から抗トロンビン活性値の残存率を計算した。その結果、抗トロンビン残存率は２０．２％であった。
（実施例１２）
超純水０．１ｍｌとエチレングリコール（シグマアルドリッチ製 Ｃｏｄｅ ３２４５５８）９．９ｍｌを溶解してエチレングリコール水溶液を調製した。該エチレングリコール水溶液に実施例１で用いた化合物Ａを溶解して濃度５０００重量ｐｐｍの化合物Ａエチレングリコール水溶液を調製した。該化合物Ａエチレングリコール水溶液の水分率測定を行った。水分率は１．１％であった。該化合物Ａエチレングリコール水溶液にγ線照射した。このときγ線の吸収線量は２６ｋＧｙであった。放射線照射前の化合物Ａエチレングリコール水溶液および放射線照射後の化合物Ａエチレングリコール水溶液の抗トロンビン活性値を測定し、上記の式（１）から抗トロンビン活性値の残存率を計算した。その結果、抗トロンビン残存率は３７．８％であった。
（実施例１３）
超純水９．９５ｍｌとポリエチレングリコール（ナカライテスク製 ポリエチレングリコール＃２００Ｃｏｄｅ ２８２−１３）０．０５ｍｌを溶解してポリエチレングリコール水溶液を調製した。該ポリエチレングリコール水溶液に化合物Ａを溶解して濃度５０００重量ｐｐｍの化合物Ａポリエチレングリコール水溶液を調製した。該化合物Ａポリエチレングリコール水溶液の水分率測定を行った。水分率は９９．５％であった。該化合物Ａポリエチレングリコール水溶液にγ線照射した。このときγ線の吸収線量は２６ｋＧｙであった。放射線照射前の化合物Ａポリエチレングリコール水溶液および放射線照射後の化合物Ａポリエチレングリコール水溶液の抗トロンビン活性値を測定し、上記の式（１）から抗トロンビン活性値の残存率を計算した。その結果、抗トロンビン残存率は２．９％であった。
（実施例１４）
超純水８ｍｌとポリエチレングリコール（ナカライテスク製 ポリエチレングリコール＃２００Ｃｏｄｅ ２８２−１３）２ｍｌを溶解してポリエチレングリコール水溶液を調製した。該ポリエチレングリコール水溶液に実施例１で用いた化合物Ａを溶解して濃度５０００重量ｐｐｍの化合物Ａポリエチレングリコール水溶液を調製した。該化合物Ａポリエチレングリコール水溶液の水分率測定を行った。水分率は８０．８％であった。該化合物Ａポリエチレングリコール水溶液にγ線照射した。このときγ線の吸収線量は２６ｋＧｙであった。放射線照射前の化合物Ａポリエチレングリコール水溶液および放射線照射後の化合物Ａポリエチレングリコール水溶液の抗トロンビン活性値を測定し、上記の式（１）から抗トロンビン活性値の残存率を計算した。その結果、抗トロンビン残存率は５．６％であった。
（実施例１５）
超純水１ｍｌとポリエチレングリコール（ナカライテスク製 ポリエチレングリコール＃２００Ｃｏｄｅ ２８２−１３）９ｍｌを溶解してポリエチレングリコール水溶液を調製した。該ポリエチレングリコール水溶液に実施例１で用いた化合物Ａを溶解して濃度５０００重量ｐｐｍの化合物Ａポリエチレングリコール水溶液を調製した。該化合物Ａポリエチレングリコール水溶液の水分率測定を行った。水分率は１０．４％であった。該化合物Ａポリエチレングリコール水溶液にγ線照射した。このときγ線の吸収線量は２６ｋＧｙであった。放射線照射前の化合物Ａポリエチレングリコール水溶液および放射線照射後の化合物Ａポリエチレングリコール水溶液の抗トロンビン活性値を測定し、上記の式（１）から抗トロンビン活性値の残存率を計算した。その結果、抗トロンビン残存率は９．４％であった。
（実施例１６）
超純水０．０１ｍｌとポリエチレングリコール（ナカライテスク製 ポリエチレングリコール＃２００Ｃｏｄｅ ２８２−１３）９．９ｍｌを溶解してポリエチレングリコール水溶液を調製した。該ポリエチレングリコール水溶液に実施例１で用いた化合物Ａを溶解して濃度５０００重量ｐｐｍの化合物Ａポリエチレングリコール水溶液を調製した。該化合物Ａポリエチレングリコール水溶液の水分率測定を行った。水分率は１．１％であった。該化合物Ａポリエチレングリコール水溶液にγ線照射した。このときγ線の吸収線量は２６ｋＧｙであった。放射線照射前の化合物Ａポリエチレングリコール水溶液および放射線照射後の化合物Ａポリエチレングリコール水溶液の抗トロンビン活性値を測定し、上記の式（１）から抗トロンビン活性値の残存率を計算した。その結果、抗トロンビン残存率は３８．５％であった。
（実施例１７）
超純水９．９５ｍｌとイソプロパノール（シグマアルドリッチジャパン（株）製 Ｃｏｄｅ １５−２３２０−５）０．０５ｍｌを溶解してイソプロパノール水溶液を調製した。該イソプロパノール水溶液に実施例１で用いた化合物Ａを溶解して濃度５０００重量ｐｐｍの化合物Ａイソプロパノール水溶液を調製した。該化合物Ａイソプロパノール水溶液の水分率測定を行った。水分率は９９．５％であった。該化合物Ａイソプロパノール水溶液にγ線照射した。このときγ線の吸収線量は２６ｋＧｙであった。放射線照射前の化合物Ａイソプロパノール水溶液および放射線照射後の化合物Ａイソプロパノール水溶液の抗トロンビン活性値を測定し、上記の式（１）から抗トロンビン活性値の残存率を計算した。その結果、抗トロンビン残存率は１３．３％であった。
（実施例１８）
超純水８ｍｌとイソプロパノール（シグマアルドリッチジャパン（株）製 Ｃｏｄｅ １５−２３２０−５）２ｍｌを溶解してイソプロパノール水溶液を調製した。該イソプロパノール水溶液に実施例１で用いた化合物Ａを溶解して濃度５０００重量ｐｐｍの化合物Ａイソプロパノール水溶液を調製した。該化合物Ａイソプロパノール水溶液の水分率測定を行った。水分率は８１．７％であった。該化合物Ａイソプロパノール水溶液にγ線照射した。このときγ線の吸収線量は２６ｋＧｙであった。放射線照射前の化合物Ａイソプロパノール水溶液および放射線照射後の化合物Ａイソプロパノール水溶液の抗トロンビン活性値を測定し、上記の式（１）から抗トロンビン活性値の残存率を計算した。その結果、抗トロンビン残存率は４２．１％であった。
（実施例１９）
超純水１ｍｌとイソプロパノール（シグマアルドリッチジャパン（株）製 Ｃｏｄｅ １５−２３２０−５）９ｍｌを溶解してイソプロパノール水溶液を調製した。該イソプロパノール水溶液に実施例１で用いた化合物Ａを溶解して濃度５０００重量ｐｐｍの化合物Ａイソプロパノール水溶液を調製した。該化合物Ａイソプロパノール水溶液の水分率測定を行った。水分率は１０．１％であった。該化合物Ａイソプロパノール水溶液にγ線照射した。このときγ線の吸収線量は２６ｋＧｙであった。放射線照射前の化合物Ａイソプロパノール水溶液および放射線照射後の化合物Ａイソプロパノール水溶液の抗トロンビン活性値を測定し、上記の式（１）から抗トロンビン活性値の残存率を計算した。その結果、抗トロンビン残存率は６８．８％であった。
（実施例２０）
超純水０．１ｍｌとイソプロパノール（シグマアルドリッチジャパン（株）製 Ｃｏｄｅ １５−２３２０−５）９．９ｍｌを溶解してイソプロパノール水溶液を調製した。該イソプロパノール水溶液に実施例１で用いた化合物Ａを溶解して濃度５０００重量ｐｐｍの化合物Ａイソプロパノール水溶液を調製した。該化合物Ａイソプロパノール水溶液の水分率測定を行った。水分率は１．４％であった。該化合物Ａイソプロパノール水溶液にγ線照射した。このときγ線の吸収線量は２６ｋＧｙであった。放射線照射前の化合物Ａイソプロパノール水溶液および放射線照射後の化合物Ａイソプロパノール水溶液の抗トロンビン活性値を測定し、上記の式（１）から抗トロンビン活性値の残存率を計算した。その結果、抗トロンビン残存率は７９．８％であった。
（比較例１）
実施例１で用いた化合物Ａを超純水溶解して濃度５０００重量ｐｐｍの化合物Ａ水溶液を調製した。該水溶液にγ線を照射した。このときγ線の吸収線量は２６ｋＧｙであった。放射線照射前の溶液および放射線照射後の溶液の抗トロンビン活性値を測定し、上記の式（１）から抗トロンビン活性値の残存率を計算した。その結果、抗トロンビン残存率は０％であった。
(Measurement of antithrombin activity value)
For the measurement of the antithrombin activity value, an ECA-T kit manufactured by HAEMOSYS was used as a reagent, and COATRON M1 (code 80 800 000) manufactured by TECO Medical Instruments Production was used as an apparatus. Human plasma (Cosmo Bio release Human Plasma 12271210, lot. 16878) 80 μl and a measurement target solution 20 μl were added and stirred. This solution is used as a sample solution. The sample solution is cooled on an ice bath until immediately before the measurement. 100 μl of ECA prothrombin buffer, 30 μl of sample solution and 25 μl of ECA-T substrate were mixed, incubated at a temperature of 37 ° C. for 60 seconds, and set in the apparatus. Measurement was performed by adding 50 μl of ECA ecarin reagent. As a blank, measurement was performed using a sample prepared using ultrapure water as a measurement target solution.
(Measurement of moisture content)
Using AQ-7 Hiranuma trace moisture measuring device manufactured by Hiranuma Sangyo Co., Ltd., Hydranal Aqualite RS, Aqualite CN manufactured by Hiranuma Sangyo Co., Ltd. was used as the electrolyte, and the measurement was performed according to the instruction manual attached to the device.
Example 1
An aqueous glycerin solution was prepared by dissolving 9.95 ml of ultrapure water and 0.05 ml of glycerin (Code 12-1120-5 manufactured by Sigma-Aldrich). 4-methoxy-benzenesulfonyl-Asn (PEG2000-Ome) -Pro-4amidinobenzamide (Compound A) was dissolved in the aqueous glycerin solution to prepare an aqueous Compound A glycerin solution having a concentration of 5000 ppm by weight. The water content of the Compound A glycerin aqueous solution was measured. The moisture content was 99.4%. The compound A glycerin aqueous solution was irradiated with γ rays. At this time, the absorbed dose of γ rays was 26 kGy. The antithrombin activity value of the compound A glycerol aqueous solution before irradiation and the compound A glycerol aqueous solution after irradiation was measured, and the residual ratio of the antithrombin activity value was calculated from the following formula (1). As a result, the antithrombin residual rate was 6.0%.
A = 100 × (BD) / (CD) Formula (1)
The definitions of the symbols in the above formula (1) are as follows.
A: Antithrombin activity remaining rate (%)
B: Sample measurement value after irradiation (sec.)
C: Sample measurement value before irradiation (sec.)
D: Blank measurement value (sec.).
(Example 2)
8 ml of ultrapure water and 2 ml of glycerin (Code 12-1120-5 manufactured by Sigma-Aldrich) were dissolved to prepare a glycerin aqueous solution. Compound A used in Example 1 was dissolved in the glycerin aqueous solution to prepare a Compound A glycerin aqueous solution having a concentration of 5000 ppm by weight. The water content of the Compound A glycerin aqueous solution was measured. The moisture content was 81.2%. The compound A glycerin aqueous solution was irradiated with γ rays. At this time, the absorbed dose of γ rays was 26 kGy. The antithrombin activity value of the compound A glycerin aqueous solution before irradiation and the compound A glycerin aqueous solution after irradiation was measured, and the residual ratio of the antithrombin activity value was calculated from the above formula (1). As a result, the antithrombin residual rate was 47.6%.
(Example 3)
An aqueous solution of glycerin was prepared by dissolving 1 ml of ultrapure water and 9 ml of glycerin (Code 12-1120-5 manufactured by Sigma-Aldrich). Compound A used in Example 1 was dissolved in the glycerin aqueous solution to prepare a Compound A glycerin aqueous solution having a concentration of 5000 ppm by weight. The water content of the Compound A glycerin aqueous solution was measured. The moisture content was 9.9%. The compound A glycerin aqueous solution was irradiated with γ rays. At this time, the absorbed dose of γ rays was 26 kGy. The antithrombin activity values of the Compound A glycerol aqueous solution before irradiation and the Compound A glycerol aqueous solution after irradiation were measured, and the residual ratio of the antithrombin activity value was calculated from the above formula (1). As a result, the antithrombin residual rate was 73.6%.
Example 4
0.1 ml of ultrapure water and 9.9 ml of glycerin (Code 12-1120-5 manufactured by Sigma-Aldrich) were dissolved to prepare a glycerin aqueous solution. Compound A used in Example 1 was dissolved in the glycerin aqueous solution to prepare a Compound A glycerin aqueous solution having a concentration of 5000 ppm by weight. The water content of the Compound A glycerin aqueous solution was measured. The moisture content was 1.9%. The compound A glycerin aqueous solution was irradiated with γ rays. At this time, the absorbed dose of γ rays was 26 kGy. The antithrombin activity value of the compound A glycerin aqueous solution before irradiation and the compound A glycerin aqueous solution after irradiation was measured, and the residual ratio of the antithrombin activity value was calculated from the above formula (1). As a result, the antithrombin residual rate was 84.0%.
(Example 5)
An aqueous propylene glycol solution was prepared by dissolving 9.95 ml of ultrapure water and 0.05 ml of propylene glycol (Code 164-04996, manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd.). Compound A used in Example 1 was dissolved in the propylene glycol aqueous solution to prepare a compound A propylene glycol aqueous solution having a concentration of 5000 ppm by weight. The water content of the compound A propylene glycol aqueous solution was measured. The moisture content was 99.5%. The compound A propylene glycol aqueous solution was irradiated with γ rays. At this time, the absorbed dose of γ rays was 26 kGy. The antithrombin activity values of the compound A propylene glycol aqueous solution before irradiation and the compound A propylene glycol aqueous solution after irradiation were measured, and the residual ratio of the antithrombin activity value was calculated from the above formula (1). As a result, the antithrombin residual rate was 12.2%.
(Example 6)
8 ml of ultrapure water and 2 ml of propylene glycol (Code 164-04996 manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) were dissolved to prepare a propylene glycol aqueous solution. Compound A used in Example 1 was dissolved in the propylene glycol aqueous solution to prepare a compound A propylene glycol aqueous solution having a concentration of 5000 ppm by weight. The water content of the compound A propylene glycol aqueous solution was measured. The moisture content was 81.7%. The compound A propylene glycol aqueous solution was irradiated with γ rays. At this time, the absorbed dose of γ rays was 26 kGy. The antithrombin activity values of the compound A propylene glycol aqueous solution before irradiation and the compound A propylene glycol aqueous solution after irradiation were measured, and the residual ratio of the antithrombin activity value was calculated from the above formula (1). As a result, the antithrombin residual rate was 40.6%.
(Example 7)
1 ml of ultrapure water and 9 ml of propylene glycol (Code 164-04996, manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) were dissolved to prepare a propylene glycol aqueous solution. Compound A used in Example 1 was dissolved in the propylene glycol aqueous solution to prepare a compound A propylene glycol aqueous solution having a concentration of 5000 ppm by weight. The water content of the compound A propylene glycol aqueous solution was measured. The moisture content was 10.1%. The compound A propylene glycol aqueous solution was irradiated with γ rays. At this time, the absorbed dose of γ rays was 26 kGy. The antithrombin activity values of the compound A propylene glycol aqueous solution before irradiation and the compound A propylene glycol aqueous solution after irradiation were measured, and the residual ratio of the antithrombin activity value was calculated from the above formula (1). As a result, the antithrombin residual rate was 69.5%.
(Example 8)
0.1 ml of ultrapure water and 9.9 ml of propylene glycol (Code 164-04996 manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) were dissolved to prepare a propylene glycol aqueous solution. Compound A used in Example 1 was dissolved in the propylene glycol aqueous solution to prepare a compound A propylene glycol aqueous solution having a concentration of 5000 ppm by weight. The water content of the compound A propylene glycol aqueous solution was measured. The moisture content was 1.4%. The compound A propylene glycol aqueous solution was irradiated with γ rays. At this time, the absorbed dose of γ rays was 26 kGy. The antithrombin activity values of the compound A propylene glycol aqueous solution before irradiation and the compound A propylene glycol aqueous solution after irradiation were measured, and the residual ratio of the antithrombin activity value was calculated from the above formula (1). As a result, the antithrombin residual rate was 78.0%.
Example 9
An aqueous ethylene glycol solution was prepared by dissolving 9.95 ml of ultrapure water and 0.05 ml of ethylene glycol (Code 324558 manufactured by Sigma-Aldrich). Compound A used in Example 1 was dissolved in the ethylene glycol aqueous solution to prepare a compound A ethylene glycol aqueous solution having a concentration of 5000 ppm by weight. The water content of the aqueous solution of Compound A ethylene glycol was measured. The moisture content was 99.6%. The compound A ethylene glycol aqueous solution was irradiated with γ rays. At this time, the absorbed dose of γ rays was 26 kGy. The antithrombin activity values of the compound A ethylene glycol aqueous solution before irradiation and the compound A ethylene glycol aqueous solution after irradiation were measured, and the residual ratio of the antithrombin activity value was calculated from the above formula (1). As a result, the antithrombin residual rate was 1.6%.
(Example 10)
8 ml of ultrapure water and 2 ml of ethylene glycol (Code 324558 manufactured by Sigma-Aldrich) were dissolved to prepare an ethylene glycol aqueous solution. Compound A used in Example 1 was dissolved in the ethylene glycol aqueous solution to prepare a compound A ethylene glycol aqueous solution having a concentration of 5000 ppm by weight. The water content of the aqueous solution of Compound A ethylene glycol was measured. The moisture content was 79.9%. The compound A ethylene glycol aqueous solution was irradiated with γ rays. At this time, the absorbed dose of γ rays was 26 kGy. The antithrombin activity values of the compound A ethylene glycol aqueous solution before irradiation and the compound A ethylene glycol aqueous solution after irradiation were measured, and the residual ratio of the antithrombin activity value was calculated from the above formula (1). As a result, the antithrombin residual rate was 9.7%.
(Example 11)
1 ml of ultrapure water and 9 ml of ethylene glycol (Code 324558 manufactured by Sigma-Aldrich) were dissolved to prepare an ethylene glycol aqueous solution. Compound A used in Example 1 was dissolved in the ethylene glycol aqueous solution to prepare a compound A ethylene glycol aqueous solution having a concentration of 5000 ppm by weight. The water content of the aqueous solution of Compound A ethylene glycol was measured. The moisture content was 10.1%. The compound A ethylene glycol aqueous solution was irradiated with γ rays. At this time, the absorbed dose of γ rays was 26 kGy. The antithrombin activity values of the compound A ethylene glycol aqueous solution before irradiation and the compound A ethylene glycol aqueous solution after irradiation were measured, and the residual ratio of the antithrombin activity value was calculated from the above formula (1). As a result, the antithrombin residual rate was 20.2%.
(Example 12)
An ethylene glycol aqueous solution was prepared by dissolving 0.1 ml of ultrapure water and 9.9 ml of ethylene glycol (Code 324558 manufactured by Sigma-Aldrich). Compound A used in Example 1 was dissolved in the ethylene glycol aqueous solution to prepare a compound A ethylene glycol aqueous solution having a concentration of 5000 ppm by weight. The water content of the aqueous solution of Compound A ethylene glycol was measured. The moisture content was 1.1%. The compound A ethylene glycol aqueous solution was irradiated with γ rays. At this time, the absorbed dose of γ rays was 26 kGy. The antithrombin activity values of the compound A ethylene glycol aqueous solution before irradiation and the compound A ethylene glycol aqueous solution after irradiation were measured, and the residual ratio of the antithrombin activity value was calculated from the above formula (1). As a result, the antithrombin residual rate was 37.8%.
(Example 13)
An aqueous solution of polyethylene glycol was prepared by dissolving 9.95 ml of ultrapure water and 0.05 ml of polyethylene glycol (polyethylene glycol # 200 Code 282-13 manufactured by Nacalai Tesque). Compound A was dissolved in the polyethylene glycol aqueous solution to prepare a compound A polyethylene glycol aqueous solution having a concentration of 5000 ppm by weight. The water content of the compound A polyethylene glycol aqueous solution was measured. The moisture content was 99.5%. The compound A polyethylene glycol aqueous solution was irradiated with γ rays. At this time, the absorbed dose of γ rays was 26 kGy. The antithrombin activity values of the aqueous Compound A polyethylene glycol solution before irradiation and the aqueous Compound A polyethylene glycol solution after irradiation were measured, and the residual ratio of the antithrombin activity value was calculated from the above formula (1). As a result, the antithrombin residual rate was 2.9%.
(Example 14)
8 ml of ultrapure water and 2 ml of polyethylene glycol (polyethylene glycol # 200 Code 282-13 manufactured by Nacalai Tesque) were dissolved to prepare a polyethylene glycol aqueous solution. Compound A used in Example 1 was dissolved in the polyethylene glycol aqueous solution to prepare a compound A polyethylene glycol aqueous solution having a concentration of 5000 ppm by weight. The water content of the compound A polyethylene glycol aqueous solution was measured. The moisture content was 80.8%. The compound A polyethylene glycol aqueous solution was irradiated with γ rays. At this time, the absorbed dose of γ rays was 26 kGy. The antithrombin activity values of the aqueous Compound A polyethylene glycol solution before irradiation and the aqueous Compound A polyethylene glycol solution after irradiation were measured, and the residual ratio of the antithrombin activity value was calculated from the above formula (1). As a result, the antithrombin residual rate was 5.6%.
(Example 15)
An aqueous solution of polyethylene glycol was prepared by dissolving 1 ml of ultrapure water and 9 ml of polyethylene glycol (polyethylene glycol # 200 Code 282-13 manufactured by Nacalai Tesque). Compound A used in Example 1 was dissolved in the polyethylene glycol aqueous solution to prepare a compound A polyethylene glycol aqueous solution having a concentration of 5000 ppm by weight. The water content of the compound A polyethylene glycol aqueous solution was measured. The moisture content was 10.4%. The compound A polyethylene glycol aqueous solution was irradiated with γ rays. At this time, the absorbed dose of γ rays was 26 kGy. The antithrombin activity values of the aqueous Compound A polyethylene glycol solution before irradiation and the aqueous Compound A polyethylene glycol solution after irradiation were measured, and the residual ratio of the antithrombin activity value was calculated from the above formula (1). As a result, the antithrombin residual rate was 9.4%.
(Example 16)
An aqueous solution of polyethylene glycol was prepared by dissolving 0.01 ml of ultrapure water and 9.9 ml of polyethylene glycol (polyethylene glycol # 200 Code 282-13 manufactured by Nacalai Tesque). Compound A used in Example 1 was dissolved in the polyethylene glycol aqueous solution to prepare a compound A polyethylene glycol aqueous solution having a concentration of 5000 ppm by weight. The moisture content of the compound A polyethylene glycol aqueous solution was measured. The moisture content was 1.1%. The compound A polyethylene glycol aqueous solution was irradiated with γ rays. At this time, the absorbed dose of γ rays was 26 kGy. The antithrombin activity values of the aqueous Compound A polyethylene glycol solution before irradiation and the aqueous Compound A polyethylene glycol solution after irradiation were measured, and the residual ratio of the antithrombin activity value was calculated from the above formula (1). As a result, the antithrombin residual rate was 38.5%.
(Example 17)
An aqueous solution of isopropanol was prepared by dissolving 9.95 ml of ultrapure water and 0.05 ml of isopropanol (Code 15-2320-5 manufactured by Sigma-Aldrich Japan Co., Ltd.). Compound A used in Example 1 was dissolved in the aqueous isopropanol solution to prepare an aqueous solution of Compound A isopropanol having a concentration of 5000 ppm by weight. The moisture content of the aqueous solution of Compound A isopropanol was measured. The moisture content was 99.5%. The aqueous solution of Compound A isopropanol was irradiated with γ rays. At this time, the absorbed dose of γ rays was 26 kGy. The antithrombin activity values of the aqueous Compound A isopropanol solution before irradiation and the aqueous Compound A isopropanol solution after irradiation were measured, and the residual ratio of the antithrombin activity value was calculated from the above formula (1). As a result, the antithrombin residual rate was 13.3%.
(Example 18)
An aqueous solution of isopropanol was prepared by dissolving 8 ml of ultrapure water and 2 ml of isopropanol (Code 15-2320-5 manufactured by Sigma-Aldrich Japan Co., Ltd.). Compound A used in Example 1 was dissolved in the aqueous isopropanol solution to prepare an aqueous solution of Compound A isopropanol having a concentration of 5000 ppm by weight. The moisture content of the aqueous solution of Compound A isopropanol was measured. The moisture content was 81.7%. The aqueous solution of Compound A isopropanol was irradiated with γ rays. At this time, the absorbed dose of γ rays was 26 kGy. The antithrombin activity values of the aqueous Compound A isopropanol solution before irradiation and the aqueous Compound A isopropanol solution after irradiation were measured, and the residual ratio of the antithrombin activity value was calculated from the above formula (1). As a result, the antithrombin residual rate was 42.1%.
(Example 19)
1 ml of ultrapure water and 9 ml of isopropanol (Code 15-2320-5 manufactured by Sigma Aldrich Japan Co., Ltd.) were dissolved to prepare an isopropanol aqueous solution. Compound A used in Example 1 was dissolved in the aqueous isopropanol solution to prepare an aqueous solution of Compound A isopropanol having a concentration of 5000 ppm by weight. The moisture content of the aqueous solution of Compound A isopropanol was measured. The moisture content was 10.1%. The aqueous solution of Compound A isopropanol was irradiated with γ rays. At this time, the absorbed dose of γ rays was 26 kGy. The antithrombin activity values of the aqueous Compound A isopropanol solution before irradiation and the aqueous Compound A isopropanol solution after irradiation were measured, and the residual ratio of the antithrombin activity value was calculated from the above formula (1). As a result, the antithrombin residual rate was 68.8%.
(Example 20)
0.1 ml of ultrapure water and 9.9 ml of isopropanol (Code 15-2320-5 manufactured by Sigma-Aldrich Japan Co., Ltd.) were dissolved to prepare an isopropanol aqueous solution. Compound A used in Example 1 was dissolved in the aqueous isopropanol solution to prepare an aqueous solution of Compound A isopropanol having a concentration of 5000 ppm by weight. The moisture content of the aqueous solution of Compound A isopropanol was measured. The moisture content was 1.4%. The aqueous solution of Compound A isopropanol was irradiated with γ rays. At this time, the absorbed dose of γ rays was 26 kGy. The antithrombin activity values of the aqueous Compound A isopropanol solution before irradiation and the aqueous Compound A isopropanol solution after irradiation were measured, and the residual ratio of the antithrombin activity value was calculated from the above formula (1). As a result, the antithrombin residual rate was 79.8%.
(Comparative Example 1)
Compound A used in Example 1 was dissolved in ultrapure water to prepare a Compound A aqueous solution having a concentration of 5000 ppm by weight. The aqueous solution was irradiated with γ rays. At this time, the absorbed dose of γ rays was 26 kGy. The antithrombin activity values of the solution before irradiation and the solution after irradiation were measured, and the residual ratio of the antithrombin activity value was calculated from the above equation (1). As a result, the antithrombin residual rate was 0%.
本発明は、放射線に対して不安定な血液抗凝固活性を有する化合物を、その活性を維持しつつ放射線滅菌する方法であり、抗酸化剤を用いることなく滅菌が可能で有害な抗酸化剤分解物のリスクを減らすことが期待できる。このように、本発明によれば、種々の放射線に対して不安定な生理活性物質を変性を抑制しつつ滅菌することが可能である。 The present invention is a method of radiation sterilizing a compound having blood anticoagulant activity which is unstable to radiation, while maintaining its activity, and can be sterilized without using an antioxidant, and harmful antioxidant decomposition It can be expected to reduce the risk of goods. As described above, according to the present invention, it is possible to sterilize physiologically active substances that are unstable to various radiations while suppressing denaturation.
Claims (7)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2006074030A JP2006289071A (en) | 2005-03-18 | 2006-03-17 | Sterilization method for compound |
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2005078760 | 2005-03-18 | ||
| JP2006074030A JP2006289071A (en) | 2005-03-18 | 2006-03-17 | Sterilization method for compound |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2006289071A true JP2006289071A (en) | 2006-10-26 |
Family
ID=37410293
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2006074030A Pending JP2006289071A (en) | 2005-03-18 | 2006-03-17 | Sterilization method for compound |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2006289071A (en) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2008206915A (en) * | 2007-02-28 | 2008-09-11 | Toray Ind Inc | Sterilization method for compound and manufacturing method of medical material using it |
| KR101322712B1 (en) | 2011-09-01 | 2013-10-28 | 한국원자력연구원 | Hygienic method of flower by combined treatment of irradiation with ethanol |
| JP2014062060A (en) * | 2012-09-20 | 2014-04-10 | Nihon Denshi Shosha Service Kk | Chlorhexidine gluconate formulation, disinfection kit and method of sterilization |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH02292212A (en) * | 1989-04-20 | 1990-12-03 | Tremedic Ab | Bactericide gel |
| JPH05192397A (en) * | 1992-01-20 | 1993-08-03 | Nikkiso Co Ltd | Manufacture of hemocatharsis device |
| JPH09500553A (en) * | 1993-07-22 | 1997-01-21 | スターウエイズ・パイオニア・インコーポレーテツド | Product sterilization method |
| US6500386B1 (en) * | 1998-11-04 | 2002-12-31 | Albert H. Burstein | Method for preserving sterilized implant components |
| JP2005503239A (en) * | 2001-09-24 | 2005-02-03 | クリアラント・インコーポレイテッド | Method for disinfecting biological materials containing non-aqueous solvents |
-
2006
- 2006-03-17 JP JP2006074030A patent/JP2006289071A/en active Pending
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH02292212A (en) * | 1989-04-20 | 1990-12-03 | Tremedic Ab | Bactericide gel |
| JPH05192397A (en) * | 1992-01-20 | 1993-08-03 | Nikkiso Co Ltd | Manufacture of hemocatharsis device |
| JPH09500553A (en) * | 1993-07-22 | 1997-01-21 | スターウエイズ・パイオニア・インコーポレーテツド | Product sterilization method |
| US6500386B1 (en) * | 1998-11-04 | 2002-12-31 | Albert H. Burstein | Method for preserving sterilized implant components |
| JP2005503239A (en) * | 2001-09-24 | 2005-02-03 | クリアラント・インコーポレイテッド | Method for disinfecting biological materials containing non-aqueous solvents |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2008206915A (en) * | 2007-02-28 | 2008-09-11 | Toray Ind Inc | Sterilization method for compound and manufacturing method of medical material using it |
| KR101322712B1 (en) | 2011-09-01 | 2013-10-28 | 한국원자력연구원 | Hygienic method of flower by combined treatment of irradiation with ethanol |
| JP2014062060A (en) * | 2012-09-20 | 2014-04-10 | Nihon Denshi Shosha Service Kk | Chlorhexidine gluconate formulation, disinfection kit and method of sterilization |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Li et al. | A logic‐based diagnostic and therapeutic hydrogel with multistimuli responsiveness to orchestrate diabetic bone regeneration | |
| Ke et al. | Haem-assisted dityrosine-cross-linking of fibrinogen under non-thermal plasma exposure: one important mechanism of facilitated blood coagulation | |
| KR20040025698A (en) | Dry Hemostatic Compositions and Methods for their Preparation | |
| Le Thi et al. | Calcium peroxide-mediated in situ formation of multifunctional hydrogels with enhanced mesenchymal stem cell behaviors and antibacterial properties | |
| WO2014194931A1 (en) | Pathogen reduction treatment | |
| JP2006291193A (en) | Reformed substrate and manufacturing method thereof | |
| JP2008523129A (en) | Methods for preparing two- and three-dimensional polymer supports | |
| JP2006289071A (en) | Sterilization method for compound | |
| JP2015500687A (en) | Radiation protection compositions and their manufacture and use | |
| KR101651046B1 (en) | Reactive oxidative species generating materials and methods of use | |
| JP2009508925A (en) | Method for stabilizing protein solutions by addition of hydroxyl radical quenchers and sterilization by ionizing radiation | |
| JP5327826B2 (en) | Method for sterilizing compound and method for producing medical material using the same | |
| US10071061B2 (en) | Sterile composition | |
| CA3083551C (en) | Prothrombin time reagent comprising an iron chelator | |
| Lewandowska et al. | Optimization of novel human acellular dermal dressing sterilization for routine use in clinical practice | |
| Anitua et al. | Ozone dosing alters the biological potential and therapeutic outcomes of plasma rich in growth factors | |
| KR102583766B1 (en) | Separators for blood collection tubes | |
| JP2008206914A (en) | Sterilization method for compound and manufacturing method of medical material using it | |
| JP6317307B2 (en) | Radiation sterilization resistant protein composition | |
| EP1286706A2 (en) | Gamma irradiation of protein-based pharmaceutical products | |
| JPH11286453A (en) | Virus inactivation treatment of protein-containing composition by irradiation of ultraviolet light | |
| Chen et al. | A natural extracellular matrix hydrogel through selective nutrient restriction for hyperinflammatory starvation therapy | |
| Laidmäe et al. | Characterization of the biological effect of fish fibrin glue in experiments on rats: immunological and coagulation studies | |
| Yan et al. | A method to accelerate the gelation of disulfide-crosslinked hydrogels | |
| Hopkins | Development of high capacity hyperbranched nitric oxide donors for controlling subcutaneous inflammation |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20090317 |
|
| A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20101111 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20101130 |
|
| A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20110127 |
|
| A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20110222 |