JP2006288321A5

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Publication number: JP2006288321A5
Application number: JP2005116177A
Authority: JP
Filing date: 2005-04-13
Publication date: 2008-05-15
Anticipated expiration: 2025-04-13

Claims

ＲＮＡ分子が、細胞内において、ＲＮＡｉによって、正常対立遺伝子と比較して、標的変異対立遺伝子の発現を特異的に抑制するかどうかを評価する方法であって、
前記ＲＮＡ分子と、
発現に必要な要素の制御下に置かれた、第一のマーカータンパク質をコードする第一のＤＮＡ断片を含んでなり、かつ該第一のＤＮＡ断片における３’末端非翻訳領域が、前記標的変異対立遺伝子を含んでなる、第一のベクターと、
発現に必要な要素の制御下に置かれた、前記第一のマーカータンパク質と峻別可能な第二のマーカータンパク質をコードする第二のＤＮＡ断片を含んでなり、かつ該第二のＤＮＡ断片における３’末端非翻訳領域が、前記正常対立遺伝子を含んでなる、第二のベクターとを細胞に導入し、
前記第一および第二のマーカータンパク質の発現レベルを測定し、
前記第一のマーカータンパク質の発現レベルと、前記第二のマーカータンパク質の発現レベルとを比較することを少なくとも含んでなる、方法。
前記第一のマーカータンパク質の発現レベルが、前記第二のマーカータンパク質の発現レベルより低い場合、ＲＮＡ分子が、前記標的変異対立遺伝子の発現をＲＮＡiによって特異的に抑制したものとする、請求項１に記載の方法。
前記第一および第二のベクターにおいて、前記第一のマーカータンパク質をコードする第一のＤＮＡ断片および前記第二のマーカータンパク質をコードする第二のＤＮＡ断片とが各々、実質的に同一の構造を有してベクター中に存在している、請求項１に記載の方法。
前記第一および第二のベクターにおいて、前記第一のマーカータンパク質をコードする第一のＤＮＡ断片と、前記第二のマーカータンパク質をコードする第二のＤＮＡ断片とが各々、同一のプロモーターと連結されている、請求項１に記載の方法。
前記プロモーターが、ＴＫプロモーターである、請求項４に記載の方法。
前記ベクターがプラスミドである、請求項１に記載の方法。
前記第一および第二のマーカータンパク質が、蛍光タンパク質である、請求項１に記載の方法。
前記第一のマーカータンパク質および第二のマーカータンパク質の組み合わせが、ホタル・ルシフェラーゼタンパク質およびウミシイタケ・ルシフェラーゼの組み合わせである、請求項１に記載の方法。
前記標的変異対立遺伝子が、ＡＰＰ前駆タンパク質の変異対立遺伝子である、請求項１に記載の方法。
前記標的変異対立遺伝子が、配列番号３で表されるＤＮＡ配列、配列番号７で表されるＤＮＡ配列、配列番号９で表されるＤＮＡ配列、または配列番号１１で表されるＤＮＡ配列を有するものである、請求項１に記載の方法。
前記ＲＮＡ分子が二本鎖ＲＮＡ分子である、請求項１に記載の方法。
前記ＲＮＡ分子がsiＲＮＡである、請求項１に記載の方法。
前記細胞が哺乳動物細胞である、請求項１に記載の方法。
前記標的変異対立遺伝子の発現をＲＮＡiによって特異的に抑制するＲＮＡ分子のスクリーニングに用いられる、請求項１に記載の方法。
ＲＮＡ分子が、細胞内において、正常対立遺伝子と比較して標的変異対立遺伝子の発現を特異的に抑制するかどうかを評価するためのキットであって、少なくとも請求項１〜１０のいずれか一項に記載の第一および第二のベクターを含んでなるものである、キット。
細胞内でＡＰＰ前駆タンパク質の変異対立遺伝子の発現をＲＮＡｉにより特異的に抑制するための二本鎖ＲＮＡ分子であって、
その二本鎖部分の長さが１９〜２０塩基対からなり、
前記二本鎖ＲＮＡ分子を構成するアンチセンス鎖が、その二本鎖部分において、
（１）配列番号３における第１８番〜４３番で表される、第一の標的配列、
（２）配列番号７における第１８番〜４０番で表される、第二の標的配列、
（３）配列番号９における第１８番〜４０番で表される、第三の標的配列、または
（４）配列番号１１における第１９番〜４１番で表される、第四の標的配列から選択される、標的配列と相補的なヌクレオチド配列を有し、
前記二本鎖ＲＮＡ分子を構成するセンス鎖が、その３’末端において突出部を有さず、かつその二本鎖部分において、３’末端から順に１以上のヌクレオチド残基が、アンチセンス鎖に相補的でないヌクレオチド残基とされ、かつ該ヌクレオチド残基以外のセンス鎖におけるヌクレオチド残基がアンチセンス鎖と相補的である、二本鎖ＲＮＡ分子。
前記標的配列が第一の標的配列である、請求項１６に記載の二本鎖ＲＮＡ分子。
前記標的配列が第二の標的配列である、請求項１６に記載の二本鎖ＲＮＡ分子。
前記標的配列が第三の標的配列である、請求項１６に記載の二本鎖ＲＮＡ分子。
前記標的配列が第四の標的配列である、請求項１６に記載の二本鎖ＲＮＡ分子。
前記センス鎖における３’末端から順に１〜４個のヌクレオチド残基が、アンチセンス鎖に相補的でないヌクレオチド残基である、請求項１６に記載の二本鎖ＲＮＡ分子。
前記センス鎖における３’末端から順に２個のヌクレオチド残基が、アンチセンス鎖に相補的でないヌクレオチド残基である、請求項１６に記載の二本鎖ＲＮＡ分子。
請求項１６〜２２のいずれか一項に記載の二本鎖ＲＮＡ分子を含んでなる、アルツハイマー病用治療剤。
アルツハイマー病用治療剤の製造における、請求項１６〜２２のいずれか一項に記載の二本鎖ＲＮＡ分子の使用。