JP2006117542A

JP2006117542A - 神経成長因子産生抑制剤、並びにその神経成長因子産生抑制剤を配合した皮膚外用剤、化粧料、医薬部外品、痒み予防及び治療剤、及びアトピー性皮膚炎治療剤

Info

Publication number: JP2006117542A
Application number: JP2004303956A
Authority: JP
Inventors: Hiroshi Tonogaito; 浩殿垣内; Koichi Nakaoji; 浩一仲尾次; Kaoru Sakai; 薫酒井; Kazuhiko Hamada; 和彦濱田; Kenichi Nagamine; 賢一永峰
Original assignee: Nichirei Biosciences Inc; Pias Corp
Current assignee: Nichirei Biosciences Inc; Pias Corp
Priority date: 2004-10-19
Filing date: 2004-10-19
Publication date: 2006-05-11
Also published as: CN101035551A; CN100574769C; US20070286915A1; WO2006043477A1

Abstract

【課題】Ｃ繊維の表皮への伸長に深く関与する神経成長因子の産生を抑制する作用をもつと同時に安全性の高い神経成長因子産生抑制剤、並びにその神経成長因子産生抑制剤を配合した皮膚外用剤、化粧料、医薬部外品、痒み予防及び治療剤、及びアトピー性皮膚炎治療剤を提供することを課題とする。
【解決手段】アセロラ種子抽出物を神経成長因子産生抑制剤に含有させたことを特徴とする。
【選択図】なし

Description

本発明は、神経成長因子産生抑制剤、並びにその神経成長因子産生抑制剤を配合した皮膚外用剤、化粧料、医薬部外品、痒み予防及び治療剤、及びアトピー性皮膚炎治療剤に関する。

痒みは、皮膚、粘膜、角膜でのみ生じる特有の感覚で「引っ掻く欲望を伴う不快な感覚」と説明される。近年社会的問題になっているアトピー性皮膚疾患、花粉症、食物アレルギー、蕁麻疹等の炎症性及びアレルギー性の皮膚疾患において、この痒みという感覚は非常に重要且つ深刻な症状の一つである。また皮膚の乾燥を伴った老人性皮膚掻痒症や黄疸や透析に伴う痒み、糖尿病や悪性腫瘍の合併症においても痒みは問題になっている。

痒みは、皮膚の乾燥や温度変化、汗、圧迫、接触などの物理的刺激や起痒物質による化学刺激など、多種多様な刺激により、末梢性にまた中枢性に誘発される。内因性の起痒物質として最も重要で、その拮抗薬が臨床使用されているのはヒスタミンのみであり、Ｈ₁受容体が関与していると考えられている。ヒスタミンに対する競合拮抗物質、例えばマレイン酸クロルフェニラミン、ジフェンヒドラミン及びその類縁物質を配合した外用剤が痒みの治療に外用されている。しかし、これら抗ヒスタミン作用を有する外用剤には副作用のあることが問題とされている。

そこで、安全性に着目して天然の含有成分を配合した皮膚外用剤に関する下記特許文献１のような出願がなされている。この特許文献１は竹抽出成分を含有させた皮膚外用剤に関する発明を開示するものであるが、その従来技術の欄には、ボルネオールの肥満細胞膜安定化能を利用するもの（特開平６−２１１７１３号）、放線菌培養液による炎症抑制作用を利用するもの（特開平５−２５０５３号）、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）やリノレン酸を含む油脂の抗アレルギー性を利用するもの（特開平２−２９０８１号）等が開示され、これら天然に存する抗アレルギー剤は副作用が少ないが、効果が十分でないことが記載されている。
特開２００３−２１２７８６号公報

しかし、この特許文献１に係る発明も、ヒスタミン遊離抑制試験やロイコトリエン分泌抑制試験で痒み抑制の効果を示すにとどまっている。

一方、近年の研究では、健常人皮膚では表皮真皮境界部までしか存在が認められていない痒みの伝達繊維終末（Ｃ繊維終末）が、アトピー性皮膚炎の皮膚や乾燥した皮膚では皮膚の表皮層まで伸長しており、このＣ繊維終末の表皮への伸長が老人性掻痒症、アトピー性皮膚炎、乾燥肌での激しい痒みの発生の一因ではないかと指摘されている。

このような問題に関しては、たとえば下記特許文献２の従来技術の欄に記載されている（明細書〔０００５〕〜〔０００７〕）。この特許文献２に係る発明は、ツリフネ草の花弁のエキスを抗アレルギー組成物に含有させたことを特徴とするものであるが、上記のような痒みのメカニズムを明らかにした上で、解決を図るものではないため、発明の効果も抗アレルギー、抗アナフィラキシー効果を奏するにとどまっている。
特開２００１−２７８７９６号公報

いずれにしても、皮膚表皮へのＣ繊維伸長の抑制を作用機序とした痒み抑制剤は未だに開発されていないのが現状である。

本発明は、このような問題点を解決するためになされたもので、Ｃ繊維の表皮への伸長に深く関与する神経成長因子の産生を抑制する作用をもつと同時に安全性の高い神経成長因子産生抑制剤、並びにその神経成長因子産生抑制剤を配合した皮膚外用剤、化粧料、医薬部外品、痒み予防及び治療剤、及びアトピー性皮膚炎治療剤を提供することを課題とする。

本発明者らは、このような課題を解決すべく鋭意研究した結果、アセロラ種子抽出物が、優れた神経成長因子産生抑制作用、特に皮膚に生じる炎症や痒みを緩和、改善すると同時に生体に対しては安全であることを見出し、本発明を完成するに至った。

すなわち本発明は、神経成長因子産生抑制剤、並びにその神経成長因子産生抑制剤を配合した皮膚外用剤、化粧料、医薬部外品、痒み予防及び治療剤、及びアトピー性皮膚炎治療剤としてなされたもので、神経成長因子産生抑制剤に係る請求項１記載の発明は、アセロラ種子抽出物を神経成長因子産生抑制剤に含有させたことを特徴とする。

本発明において、「アセロラ種子抽出物を神経成長因子産生抑制剤に含有させる」とは、アセロラ種子抽出物のみからなるものの他、アセロラ種子抽出物以外のものをも含む場合があることを意味する。

また、請求項２記載の発明は、請求項１記載の神経成長因子産生抑制剤を配合した皮膚外用剤に係る発明であり、請求項３記載の発明は、請求項１記載の神経成長因子産生抑制剤を配合した化粧料であり、請求項４記載の発明は、請求項１記載の神経成長因子産生抑制剤を配合した医薬部外品に係る発明である。

さらに、請求項５記載の発明は、請求項１記載の神経成長因子産生抑制剤を配合した痒み予防及び治療剤に関する発明であり、請求項６記載の発明は、請求項１記載の神経成長因子産生抑制剤を配合したアトピー性皮膚炎治療剤に係る発明である。

上述のようにＣ繊維終末は、健常人皮膚では表皮真皮境界部までしか存在が認められていないのであるが、アトピー性皮膚炎等の皮膚や乾燥した皮膚では皮膚の表皮層まで伸長しており、このＣ繊維終末の表皮への伸長が痒み発生の一因と考えらている。そして、このようにＣ繊維終末が表皮へ伸長するのは、神経成長因子であるＮＧＦがＣ繊維終末に作用するためであると推定され、従って本発明の神経成長因子産生抑制剤を用いることでＮＧＦの産生を抑制することができ、それによってＣ繊維終末が表皮まで伸長するのを阻止することができるのである。

上述のように、本発明によれば、Ｃ繊維の表皮への伸長に深く関与する神経成長因子であるＮＧＦの産生を抑制することで、痒みの要因を直接的に除去することができ、且つ安全性の高い神経成長因子産生抑制剤、並びにその神経成長因子産生抑制剤を配合した皮膚外用剤、化粧料等を提供することができる。

本発明で用いる抽出物とは、アセロラ（Acerola 、学名：Malpighia emarginata DC ）の種子を乾燥し、又は乾燥することなく粉砕した後、低温又は室温ないし加温下に溶媒により抽出するか、又はソックスレー抽出器などの抽出器具を用いて抽出することにより得られる各種溶媒抽出液、その希釈液、その濃縮液、あるいはその乾燥末を意味するものである。

上記の抽出溶媒としては、例えば水、メタノール、エタノールなどの低級１価アルコール、グリセリン、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール等の液状多価アルコール、含水アルコール類等の１種または２種以上を組み合わせて用いることができる。好ましい抽出方法の例としては、含水濃度２０〜８０容量％のエタノール又は１，３−ブチレングリコールを用い、室温にて１〜５日間抽出を行ったのち、濾過する方法が挙げられる。

本発明の皮膚外用剤、化粧料等におけるアセロラ種子抽出物の各神経成長因子産生抑制剤の配合量は特に限定されるものではないが、乾燥固形物重量（複数の抽出物を含む場合はその合計量）で、総量を基準として０．０００１〜２０．０重量％が好ましい。配合量が０．０００１重量％未満であると、本発明の効果が充分に得られず、一方２０．０重量％を超えても、その増量に見合った効果の向上は認められないからである。この観点からは、０．０００５〜５．０重量％であることがより好ましい。

本発明の神経成長因子産生抑制剤は、皮膚外用剤として、例えば、ローション類、乳液類、クリーム類、軟膏類、パック類、ファンデーション等の剤型とすることができる。本発明の神経成長因子産生抑制剤には、形態に応じ、色素、防腐剤、界面活性剤、香料、顔料等を適宜配合することができる。

以下、本発明の実施例について説明する。
（実施例１）
本実施例は、アセロラ種子抽出物を含有した神経成長因子産生抑制剤の実施例である。粉砕したアセロラ種子８０ｋｇに、１４０ｋｇの１，３−ブチレングリコール含量が３０重量％の１，３−ブチレングリコール水溶液を加え、室温で一晩攪拌した。全量を遠心分離処理後、その上清を０．２２μｍフィルターでろ過し、アセロラ種子抽出物を得た。乾燥固形分量は、０．７１重量％であった。

（試験例１）
本試験例は、正常ヒト皮膚線維芽細胞（ＮＨＤＦ）を用いた神経成長因子抑制試験である。すなわち、上記実施例１のアセロラ種子抽出物からなる神経成長因子産生抑制剤を用いて、ＮＨＤＦ神経成長因子産生抑制試験を行った。

正常ヒト皮膚線維芽細胞（ＮＨＤＦ）は、１０％牛胎児血清（５６℃、３０分処理）を含むDulbecco's MEM培地（Sigma 製）で３７℃、５％ＣＯ₂下培養した。ＮＨＤＦを１０⁵cells/ml となるように１０％牛胎児血清（５６℃、３０分処理）を含むDulbecco's MEM培地に懸濁させ、その懸濁液を１ウェルあたり１ｍｌずつ２４ウェルマイクロプレート（IWAKI製）に分注した。

２４時間培養後、上清を吸引して取り除き、予め調製した０．２容量％、０．１容量％、０．０５容量％、又は０．０２５容量％のアセロラ種子抽出物を含む１０％牛胎児血清（５６℃、３０分処理、ICN 製）を含むDulbecco's MEM培地（Sigma 製）４５０μｌを分注した。３０分間インキュベートしたのち、１００ｎｇ／ｍｌのヒトインターロイキン１α／１０％牛胎児血清（５６℃、３０分処理）を含むDulbecco's MEM培地（Sigma 製）溶液５０μｌを加え、さらに２４時間インキュベートした。培養上清を回収し、培養上清中の神経成長因子濃度をNGF Emax Immunoassay kit（Promega 製）で測定した。測定はＮ＝４で行い、平均値と標準偏差で表した。その結果を図１に示す。

図１からも明らかなように、アセロラ種子抽出物を添加しない線維細胞の培養上清中へ神経成長因子の遊離量が１４．６９ｐｇ／ｍｌであったのに対して、アセロラ種子抽出物を添加したときの培養上清中の神経成長因子濃度は、０．０２５容量％添加で８．５８ｐｇ／ｍｌ、０．０５容量％添加で５．８７ｐｇ／ｍｌ、０．１容量％添加で１．０９ｐｇ／ｍｌ、０．２容量％添加で１．８６ｐｇ／ｍｌであった。

（試験例２）
本試験例は、マウス接触性皮膚炎に対する抑制効果の試験である。７週齢のBALB/c系雄性マウスをＳＬＣ（株) より購入し、室温２３±３℃、湿度５５±１５％、明暗サイクル１２時間（明期７：００〜１９：００）の条件下に飼育した。アセロラ種子抽出物は感作３０分後投与（Ｎ＝５）群を設定した。当日に刈毛したマウスの腹部皮膚に５％ピクリルクロライド−エタノール溶液０．１５ｍｌを塗布し、感作処置を施した。その５日後に１％ピクリルクロライド−アセトン：オリーブオイル（４：１）溶液を左側耳介皮膚の両面に２０μl 塗布し、アレルギー反応を惹起した。

アレルギー反応を惹起した３０分後、５０容量％エタノール溶液にて調製した５容量％アセロラ種子抽出物溶液５０μｌをマウス耳介部に投与した。対照群は５０μｌの５０容量％エタノール溶液にて調製した１．５容量％１，３−ブチレングリコール溶液を同様に投与した。アレルギー反応惹起前とその２４時間後に左側耳介の厚さをmicrometer（MITUTOYO）で測定し、耳介浮腫率より耳介浮腫抑制率を求めた。各群間の有意差検定はt-検定を行った。試験結果を図２に示す。

図２からも明らかなように、対象群の耳介浮腫率が６７．８±２０．９％であったのに対し、アセロラ種子抽出物投与群の耳介浮腫率は３９．０±１５．４％（ｐ＝０．０３５）であった。アセロラ種子抽出物の投与により、有意に耳介浮腫を抑制した。上記試験は、アトピー性皮膚炎及び花粉症のスクリーニングとして用いられているものである。

（試験例３）
本試験例は、ＮＣ／Ｎｇａマウスを用いた痒み抑制試験である。ＮＣ／Ｎｇａマウスは、コンベンショナルグレードの動物であって、アトピー性皮膚炎を自然発症するアトピー性皮膚炎モデルマウスであり、アトピーの発症に伴い痒みを誘発する。４週齢のＮＣ／Ｎｇａ系雄性マウス１０匹を日本チャールズ・リバー（株）より購入し、室温２３±３℃、湿度５５±１５％、明暗サイクル１２時間（明期７：００〜１９：００）の条件下に飼育した。マウスは１ケージ５匹飼いとし、予備飼育後、アトピー性皮膚炎を発症した動物を１群５匹として以下の実験に供した。アセロラ種子抽出物は５日間連続投与（Ｎ＝５）群を設定した。

マウス背部をバリカンおよび電気シェーバーにて剃毛し、１日２回、５０容量％エタノール溶液にて調製した５容量％アセロラ種子抽出物溶液１５０μｌを週５回連続して塗布投与した。対照群は１５０μｌの５０容量％エタノール溶液にて調製した１．５容量％１，３−ブチレングリコール溶液を同様に投与した。試験終了時に各マウスの２０分間の引っ掻き回数を測定した。測定値は、平均値と標準偏差で表した。各群間の有意差検定はｔ−検定を行い、５％以下の危険率を有意とした。

試験結果を図３に示す。試験終了時の２０分間の引っ掻き回数の測定では、コントロール群が３０９±９２回、アセロラ種子抽出物投与群が１５８±７９回であり、有意な引っ掻き回数の低下が認められた。

（処方例１）
本処方例は、化粧料の一例としてのクリームの処方例であり、その組成は次のとおりである。

組成配合比（重量％）
セタノール２．５％
スクワレン１０．０％
サラシミツロウ１．０％
トリオクタン酸グリセリル５．０％
ミリスチン酸オクチルドデシル１５．０％
酢酸トコフェロール０．１％
１，３−ブチレングリコール７．０％
モノステアリン酸グリセリン３．０％
ＰＯＥ（２０）ソルビタンモノステアレート１．０％
ソルビタンモノステアレート２．０％
アセロラ種子抽出物０．１％
濃グリセリン５．０％
パラオキシ安息香酸ブチル０．１％
パラオキシ安息香酸エチル０．２％
精製水残量

上記配合成分のうち、セタノール、スクワレン、サラシミツロウ、ミリスチン酸オクチルドデシルを加熱溶解後、トリオクタン酸グリセリル、酢酸トコフェロール、モノステアリン酸グリセリン、ＰＯＥ（２０）ソルビタンモノステアレート（界面活性剤）、ソルビタンモノステアレートを加え、７０℃に調整し、均一に分散・溶解して油性ゲルを得た。次に、アセロラ種子抽出物、１，３−ブチレングリコール、濃グリセリン、パラオキシ安息香酸ブチル（防腐剤）、パラオキシ安息香酸エチル（防腐剤）を所定濃度精製水に溶解し、７０℃に調整した後、油性ゲルの中へ十分に攪拌しながらゆっくりと添加した。ホモミキサーで均一に混合した後、脱気、濾過後、３０℃まで冷却し、クリームを得た。

（処方例２）
本処方例もクリームの処方例であるが、神経成長因子産生抑制剤としてのアセロラ種子抽出物の配合量を上記処方例１よりも多くしたこと以外は処方例１と組成は同じである。その組成は次のとおりである。クリームの調製は上記処方例１と同様に行なった。

組成配合比（重量％）
セタノール２．５％
スクワレン１０．０％
サラシミツロウ１．０％
トリオクタン酸グリセリル５．０％
ミリスチン酸オクチルドデシル１５．０％
酢酸トコフェロール０．１％
１，３−ブチレングリコール７．０％
モノステアリン酸グリセリン３．０％
ＰＯＥ（２０）ソルビタンモノステアレート１．０％
ソルビタンモノステアレート２．０％
アセロラ種子抽出物０．５％
濃グリセリン５．０％
パラオキシ安息香酸ブチル０．１％
パラオキシ安息香酸エチル０．２％
精製水残量

（処方例３）
本処方例もクリームの処方例であるが、神経成長因子産生抑制剤としてのアセロラ種子抽出物の配合量を上記処方例１、２よりも多くしたこと以外は処方例１、２と組成は同じである。その組成は次のとおりである。クリームの調製は上記処方例１と同様に行なった。

組成配合比（重量％）
セタノール２．５％
スクワレン１０．０％
サラシミツロウ１．０％
トリオクタン酸グリセリル５．０％
ミリスチン酸オクチルドデシル１５．０％
酢酸トコフェロール０．１％
１，３−ブチレングリコール７．０％
モノステアリン酸グリセリン３．０％
ＰＯＥ（２０）ソルビタンモノステアレート１．０％
ソルビタンモノステアレート２．０％
アセロラ種子抽出物１．０％
濃グリセリン５．０％
パラオキシ安息香酸ブチル０．１％
パラオキシ安息香酸エチル０．２％
精製水残量

（試験例４）
本試験例では、上記処方例１乃至３のクリームについて痒み抑制試験を行った。
試験方法は次のとおりである。処方例１乃至３のクリームを、それぞれ乾燥に伴う皮膚の痒みを訴える女子被験者（２５歳〜４５歳）２５人を対象にして、１日２回３ケ月間連用塗布した。評価は、皮膚の痒みを感じなくなったと回答した人数で示した。一方、クリーム基剤の組成が上記処方例１乃至３と同じであってアセロラ種子抽出物の配合されていない次の組成のクリームを比較例１として同様の試験を行った。

（比較例１）
組成配合比（重量％）
セタノール２．５％
スクワレン１０．０％
サラシミツロウ１．０％
トリオクタン酸グリセリル５．０％
ミリスチン酸オクチルドデシル１５．０％
酢酸トコフェロール０．１％
１，３−ブチレングリコール７．０％
モノステアリン酸グリセリン３．０％
ＰＯＥ（２０）ソルビタンモノステアレート１．０％
ソルビタンモノステアレート２．０％
濃グリセリン５．０％
パラオキシ安息香酸ブチル０．１％
パラオキシ安息香酸エチル０．２％
精製水残量

試験結果を表１に示す。

表１から明らかなように、処方例１では、皮膚の痒みを感じなくなったと回答した人数は比較例１と同じであったが、処方例２ではその人数が比較例１に比べて約１．５倍となり、さらに処方例３では約２倍以上となった。

（試験例５）
本試験例は、紫外線による炎症抑制試験である。上記処方例１乃至３のクリームを用い、炎症に対する改善効果を試験した。一方、陽性対象として抗炎症剤の一つであるインドメタシンを配合した医薬品であるインテバンクリーム（住友製薬）を比較例２として用いた。

〔試験方法〕
４週齢のハートレー系モルモットをＳＬＣ（株）より購入し、室温２３±３℃、湿度５５±１５％、明暗サイクル１２時間（明期７：００〜１９：００）の条件下に飼育した。モルモットの背部をバリカンおよび電気シェーバーにて剃毛し、剃毛部位２ｃｍ×２ｃｍ）に、上記処方例１乃至３及び比較例１、２の試料を３日間連用し、紫外線を照射した。紫外線照射部位の皮膚色は色差計を用いて測定した。皮膚紅斑は、比較例１の場合を１００として比較算出したａ＊値で示した。

試験結果を表２に示す。

表２から明らかなように、処方例１ではａ＊値が比較例１に比べて少し減少した程度であったが、処方例２ではａ＊値が比較例１に比べて約２０％程度減少し、さらに処方例３では約半分に減少した。ただし、比較例２の減少率には及ばなかった。しかしながら比較例２のインドメタシンは、副作用があることが一般に知られており、安全性の面では処方例１乃至３のものは、比較例２に比べて優れていると認められる。

本発明の神経成長因子産生抑制剤は、皮膚外用剤、化粧料、医薬部外品等に全般的に広く適用することができる他、用途の面からは、アトピー性皮膚炎治療剤、痒み予防及び治療剤、アレルギーによる肌荒れ改善作用を有する組成物等に広く適用することができる。

正常ヒト皮膚線維芽細胞（ＮＨＤＦ）を用いた神経成長因子抑制試験であって、アセロラ種子抽出物の濃度とＮＧＦの遊離量との相関関係を示すグラフ。マウス接触性皮膚炎に対する抑制効果を示すグラフ。ＮＣ／Ｎｇａマウスを用いた痒み抑制効果を示すグラフ。

Claims

アセロラ種子抽出物を含有することを特徴とする神経成長因子産生抑制剤。
請求項１記載の神経成長因子産生抑制剤を配合したことを特徴とする皮膚外用剤。
請求項１記載の神経成長因子産生抑制剤を配合したことを特徴とする化粧料。
請求項１記載の神経成長因子産生抑制剤を配合したことを特徴とする医薬部外品。
請求項１記載の神経成長因子産生抑制剤を配合した痒み予防及び治療剤。
請求項１記載の神経成長因子産生抑制剤を配合したアトピー性皮膚炎治療剤。