JP2005529595A5 - - Google Patents
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Claims (38)
- 無性発生段階におけるSporozoea網の偏性細胞内原虫の連続培養のための方法であって、該方法は、以下:
(a)Sporozoea種を増殖するのに適した不死化哺乳類宿主細胞を含む細胞培養系を提供する工程;
(b)感染段階のSporozoea網の偏性細胞内原虫と該宿主細胞とを接触させ、該宿主細胞において無性段階における連続増殖が可能であるメロゾイト集団の増殖を生じる工程であって、ここで、該接触させる工程が、該宿主細胞の感染に有効な条件下において行われる、工程;および
(c)無性生殖の分裂形態において、該メロゾイト集団を繁殖させる工程、
を包含し、ここで、該偏性細胞内原虫が、Isospora、Cystoisospora、Cryptosporidium、Eimeriaおよびそれらの組み合わせからなる群から選択される属に属する種であり、そして、該Eimeria種はトリ宿主に感染し得る、方法。 - 前記細胞培養系が、前記宿主細胞および前記Sporozoea種生物を維持するのに適した増殖培地を含む、請求項1に記載の方法。
- 前記増殖培地が、還元剤を含む、請求項2に記載の方法。
- 前記還元剤は、生殖が無性生殖であるライフサイクル段階において、無限培養でSporozoea種生物を維持するのに有効な濃度で存在する、請求項3に記載の方法。
- 前記還元剤が、β−メルカプトエタノール、メルカプトエチルアミン、2,3−ジメルカプトコハク酸、ペニシラミン、β−ラクタム、N−アセチルシステイン、アスコルベート、グルタチオンおよびそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項3に記載の方法。
- 前記還元剤が、約0.01mM〜約0.5mMにわたる濃度のβ−メルカプトエタノールである、請求項5に記載の方法。
- 前記宿主細胞が、哺乳類網内皮細胞由来の食作用活性を保持する不死化細胞である、請求項1に記載の方法。
- 前記網内皮細胞が、単球である、請求項7に記載の方法。
- 前記培養物を分割し、メロゾイトの連続産生を確実にする工程をさらに包含する、請求項1に記載の方法。
- 前記原虫が、Eimeria tenella、Eimeria acervulina、Eimeria maxima、Eimeria necatrix、Eimeria mitis、Eimeria praecoxおよびEimeria brunetti、Eimeria meleagrimitis、Eimeria adenoeides、Eimeria gallopavonis、Eimeria dispersa、Eimeria meleagridis、Eimeria innocua、Eimeria subrotundaおよびそれらの組み合わせからなる群から選択される、トリ宿主を感染し得るEimeria種である、請求項1に記載の方法。
- 前記原虫が、Eimeria acervulinaまたはEimeria tenellaである、請求項10に記載の方法。
- 前記宿主細胞における前記メロゾイト集団が、少なくとも18日間の無性発生段階の連続増殖が可能である、請求項1に記載の方法。
- 前記宿主細胞における前記メロゾイト集団が、少なくとも150日間の無性発生段階の連続増殖が可能である、請求項12に記載の方法。
- 請求項1に記載の方法によって繁殖されたメロゾイト集団を含む、抗原虫ワクチン組成物。
- 原虫メロゾイトまたはオーシストを伴うメロゾイトの単離された集団であって、ここで、該原虫が、Eimeria tenella、Eimeria acervulina、Eimeria maxima、Eimeria necatrix、Eimeria mitis、Eimeria praecoxおよびEimeria brunetti、Eimeria meleagrimitis、Eimeria adenoeides、Eimeria gallopavonis、Eimeria dispersa、Eimeria meleagridis、Eimeria innocua、Eimeria subrotundaおよびそれらの組み合わせからなる群から選択される、メロゾイトの単離された集団。
- 保護性の抗原虫免疫を誘発するために、トリにワクチン接種する方法であって、該方法が、請求項1に記載の方法によって産生された生存可能な生物を、それを必要とするトリに投与する工程を包含し、ここで、生存可能な生物の数がトリに保護免疫を誘発するのに有効である、方法。
- 前記トリが家畜のトリであり、前記原虫がCoccidiosiaである、請求項16に記載の方法。
- 前記トリが、Anatida、Columbidae、Phasianida、Thesienidae、Psittacineおよびそれらの種からなる群から選択される、請求項16に記載の方法。
- 前記トリが、シチメンチョウまたはニワトリである、請求項16に記載の方法。
- 前記生存可能な生物の数が、メロゾイトまたはオーシストまたはそれらの混合物を含み、該生存可能な生物の総数が10〜106個にわたる、請求項16に記載の方法。
- 前記生存可能な生物の数が102〜105個のメロゾイトまたはオーシストを含む、請求項20に記載の方法。
- 前記生存可能な生物が、経口投与、羽の粉付けもしくは噴霧、インオボ注射およびそれらの組み合わせからなる群から選択される方法によって投与される、メロゾイト、オーシストまたはそれらの組み合わせを含む、請求項16に記載の方法。
- 細胞培養系であって、Sporozoea種を増殖するのに適した不死化食宿主細胞、および還元剤なしで培養されたSporozoea種の生存と比較して無期限細胞培養において、ライフステージを無性生殖的に生殖するSporozoea種の生存を増強するのに有効な量の還元剤を含む細胞培地を含む、細胞培養系。
- 薬学的に受容可能なアジュバントを含む、請求項14に記載のワクチン組成物。
- 混合された食品組成物をさらに含む、請求項24に記載のワクチン組成物。
- スクリーニングされる因子との接触が有りおよび無しで、請求項1に記載の方法によって、目的のSporozoea種を培養する工程、および目的の因子の非存在下において増殖の阻害または増殖に関する生存度を検出する工程を包含する、Sporozoea網の原虫の増殖を破壊するかまたは阻害する因子をスクリーニングする方法。
- 請求項1に記載の、無性発生段階における偏性細胞内原虫の連続培養のための方法であって、該方法は、以下:
(a)不死化ウシ単球を含む細胞培養系を提供する工程であって、ここで、該不死化ウシ単球細胞は、食作用によって原虫を取り込み得;
ここで、該細胞培養系は、該不死化ウシ単球の増殖に適切な培地および約0.01mM〜約0.5mMにわたる濃度のβ−メルカプトエタノールを含む、工程;
(b)宿主細胞においてメロゾイトの増殖を生じる、該宿主細胞の感染に有効な条件下で、感染段階の原虫と該宿主細胞を接触させる工程;および
(c)無性生殖の分裂形態において、メロゾイト集団を繁殖させる工程、
を包含する、方法。 - 前記原虫は、Eimeria tenella、Eimeria acervulina、Eimeria maxima、Eimeria necatrix、Eimeria mitis、Eimeria praecoxおよびEimeria brunetti、Eimeria meleagrimitis、Eimeria adenoeides、Eimeria gallopavonis、Eimeria dispersa、Eimeria meleagridis、Eimeria innocua、Eimeria subrotundaおよびそれらの組み合わせからなる群から選択されるEimeria種である、請求項27に記載の方法。
- 前記方法はさらに、増殖が少なくとも80%のコンフルーエンシーに達する時はいつでも、前記培養系における宿主細胞の濃度を減少させる工程を包含する、請求項27に記載の方法。
- 原虫の一つ以上のEimeria種に対してニワトリまたはシチメンチョウを免疫するためのワクチンであって、トリEimeria種のメロゾイト;メロゾイトから発生したオーシスト、またはそれらの混合物を含み;ここで、該メロゾイトは、不死化哺乳類食細胞の連続培養で増殖された、ワクチン。
- 前記哺乳類食細胞が単球である、請求項30に記載のワクチン。
- 前記単球がウシ単球である、請求項31に記載のワクチン。
- 前記Sporozoea網の偏性細胞内原虫の前記感染段階が、オーシストである、請求項1に記載の方法。
- 請求項1に記載の方法であって、
(d)オーシストおよびスポロシストが培地中に放出されるように、前記培養物の密度を増やす工程
をさらに包含する、方法。 - (e)スポロシストを回収する工程
をさらに包含する、請求項34に記載の方法。 - (d)メロゾイトを回収する工程
をさらに包含する、請求項1に記載の方法。 - 請求項15に記載の原虫メロゾイトまたはオーシストを伴うメロゾイトの単離された集団を含む、抗原虫ワクチン組成物。
- 保護性の抗原虫免疫を誘発するために、トリにワクチン接種する方法であって、該方法が、請求項37に記載の抗原虫ワクチン組成物を、それを必要とするトリに投与する工程を包含し、ここで、前記メロゾイトまたは前記オーシストを伴うメロゾイトの数がトリに保護免疫を誘発するのに有効である、方法。
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