JP2005527224A5 - - Google Patents
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Claims (31)
- 複数の機能的成熟β細胞を含む哺乳動物膵臓細胞を得るための方法であって、該方法は、以下:
少なくとも1つのガストリンレセプターリガンドを、該前駆体哺乳動物膵臓細胞の分化を達成するために十分な量で有する、該前駆体哺乳動物膵臓細胞の集団を提供する工程であって、該前駆体哺乳動物膵臓細胞の集団は、前駆体哺乳動物膵臓細胞に関連する少なくとも1つのマーカーを発現する細胞において富化され、それにより、複数の機能的成熟β細胞が得られる工程、
を包含する、方法。 - 前記マーカーがCK19である、請求項1に記載の方法。
- 前記前駆体哺乳動物膵臓細胞の集団が、前駆体哺乳動物膵臓細胞に関連する少なくとも1つのマーカーを発現する細胞において、FACSによって富化される、請求項1に記載の方法。
- 前記前駆体哺乳動物膵臓細胞の集団が、複数の幹細胞または管上皮細胞を含む、請求項1に記載の方法。
- 前記幹細胞が、臍帯、胚、および樹立幹細胞株からなる群から選択される1つ以上の供給源由来である細胞を含む、請求項4に記載の方法。
- 1つ以上の膵島が、前記管上皮細胞を含む、請求項4に記載の方法。
- 前記前駆体哺乳動物膵臓細胞の集団が、不死化されている、請求項1に記載の方法。
- 前記前駆体哺乳動物膵臓細胞の集団が、前記前駆体哺乳動物膵臓細胞の集団の増殖を達成するために十分な量の少なくとも1つのEGFレセプターリガンドと共に提供される、請求項1に記載の方法。
- 複数の機能的成熟β細胞を含む哺乳動物膵臓細胞集団を得るための方法であって、該方法は、以下:
前駆体哺乳動物膵臓細胞に関連する少なくとも1つのマーカーを発現する前駆体哺乳動物膵臓細胞の集団を、該前駆体哺乳動物膵臓細胞の分化を達成するために十分な量の、少なくとも1つのガストリンレセプターリガンドと共に提供する工程であって、該細胞の約10%〜約20%が、該マーカーを発現し、それにより、複数の機能的成熟β細胞が得られる工程、
を包含する、方法。 - 前記細胞が、機能的成熟β細胞の前記集団の、約2倍〜約5倍までの増殖を誘導するために十分な量の、少なくとも1つのEGFレセプターリガンドと共に提供される、請求項9に記載の方法。
- 増殖が、約3倍〜約4倍である、請求項10に記載の方法。
- 前記提供が、インビトロであり、前記EGFレセプターリガンドの前記量が、約0.1μg/ml〜約1.0μg/mlであり、そして前記ガストリンレセプターリガンドの前記量が、約0.5μg/ml〜3μg/mlである、請求項9に記載の方法。
- 前記提供が、インビトロであり、前記EGFレセプターリガンドの前記量が、約0.2μg/ml〜約0.5μg/mlであり、そして前記ガストリンレセプターリガンドの前記量が、約0.6μg/ml〜約1.5μg/mlである、請求項9に記載の方法。
- 前記複数の機能的成熟β細胞が、PDX−1を発現する、請求項9に記載の方法。
- 前駆体哺乳動物膵臓細胞が、ヒト細胞またはブタ細胞である、請求項9に記載の方法。
- 前記ガストリンレセプターリガンドが、ヒトガストリン1−17/Leu15である、請求項9に記載の方法。
- 前記EGFレセプターリガンドが、ヒトEGF51Nである、請求項10に記載の方法。
- 以下:
複数の増殖性成熟膵臓β細胞を含む細胞培養物であって、該増殖性膵臓β細胞が、少なくとも1つのガストリンレセプターリガンドおよび少なくとも1つのEGFレセプターリガンドを提供する方法によって得られ、ここで、該細胞培養物は、CK19管細胞において富化され、そしてガストリンレセプターリガンドおよびEGFレセプターリガンドと共に提供されない細胞と比較した場合、PDX−1の発現が増加する、細胞培養物
を、含有する組成物。 - CK19を発現する前駆体細胞を、少なくとも20%含むように富化された、哺乳動物膵臓前駆体細胞の集団。
- 膵島細胞分化を刺激する化合物をスクリーニングするための方法であって、該方法は、以下:
哺乳動物膵臓前駆体細胞の集団を、該化合物および必要に応じて少なくとも1つのEGFレセプターリガンドと共に提供する工程;および
PDX−1の発現を、該化合物が膵島細胞分化を達成する指標として検出する工程、
を、包含する、方法。 - 前記ガストリンレセプターリガンドは、ヒトガストリン1−17/Leu15である、請求項1に記載の方法。
- 患者における1型糖尿病を処置するための方法において使用するためのガストリンとEGFとの組み合わせであって、該方法は、該患者へ1つ以上のドナー膵臓から膵島を移植する工程を包含し、ここで改善は、移植のための機能的膵島の数を増大させるに十分な量において、移植する前の該膵島を、ガストリンとEGFとの組み合わせと接触させることを包含する、組み合わせ。
- 1型糖尿病を有する患者への膵島移植に必要とされるドナー膵臓の数を減少させるためのエキソビボでの方法であって、該方法は、ドナー膵臓由来の膵島と、ガストリンとEGFとの組み合わせとを、移植のための機能的膵島の数を増大させるに十分な量において接触させ、それによって、各移植に必要とされるドナー膵臓の数を減少させる工程、を包含する方法。
- 請求項1〜17、21および22のいずれか1項に記載の方法によって得られる複数の増殖性成熟膵臓β細胞を含む細胞培養物を含む、組成物。
- 被験体への移植によって1型糖尿病を処置するための医薬品の製造における、請求項18〜24のいずれか1項に記載の組成物の使用。
- 機能的成熟膵臓β細胞の組成物を得るためのエキソビボ方法であって、
(a)臍帯、胚または樹立培養幹細胞株から哺乳動物前駆体膵臓β細胞を得る工程;
(b)CK19、ネスチン、CK7、CK8、CK18、炭酸脱水酵素II、DU−PAN2、炭水化物抗原19−9およびムチンMUC1のうちの1種以上を発現する前駆体膵臓β細胞の集団を単離する工程;
(c)該前駆体膵臓β細胞を、前駆体膵臓β細胞の数を増大させるに十分な量において、EGFレセプターリガンド単独でかまたはガストリン/CCKレセプターリガンドと組み合わせて処理する工程;ならびに
(d)該増大させた数の前駆体膵臓β細胞を、機能的成熟膵臓β細胞の組成物を得るために該前駆体膵臓β細胞を機能的成熟膵臓β細胞へ分化させる量において、ガストリンレセプターリガンドおよび/またはEGFレセプターリガンドで処理する工程;
を包含する、方法。 - 前記ガストリン/CCKレセプターリガンドが、ガストリンもしくはコレシストキニン、またはこれらに対する活性なアナログもしくはフラグメント、あるいは内因性ガストリンの分泌を増大させる化合物のうちの1種以上である、請求項1または2に記載のエキソビボ方法。
- 前記ガストリンは、ガストリン34、ガストリン17、ガストリン8またはそれらのアナログ、フラグメントもしくは改変物である、請求項27に記載のエキソビボ方法。
- 前記ガストリン/CCKレセプターリガンドは、内因性ガストリンの分泌を増大させる化合物である、請求項26、27または28に記載のエキソビボ方法。
- 前記EGFレセプターリガンドは、EGF1−53、EGF1−48、EGF1−49、EGF1−52、またはそれらのフラグメントもしくは活性なアナログ、あるいはTGFα 1〜48、TGFα 1〜47、TGFα 1−51、アンフィレグリンまたはポックスウイルス増殖因子である、請求項26、27、28または29に記載のエキソビボ方法。
- 請求項26〜30のいずれか1項に記載のプロセスによって得られる機能的成熟膵臓β細胞の組成物。
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