JP2005522998A - 毒性および病原体が媒介する疾患を治療しかつ予防するための新規イムノアドヘシン - Google Patents
毒性および病原体が媒介する疾患を治療しかつ予防するための新規イムノアドヘシン Download PDFInfo
- Publication number
- JP2005522998A JP2005522998A JP2003564542A JP2003564542A JP2005522998A JP 2005522998 A JP2005522998 A JP 2005522998A JP 2003564542 A JP2003564542 A JP 2003564542A JP 2003564542 A JP2003564542 A JP 2003564542A JP 2005522998 A JP2005522998 A JP 2005522998A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- immunoadhesin
- receptor protein
- chimeric
- plant
- toxin receptor
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
- C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
- C12N15/8242—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with non-agronomic quality (output) traits, e.g. for industrial processing; Value added, non-agronomic traits
- C12N15/8257—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with non-agronomic quality (output) traits, e.g. for industrial processing; Value added, non-agronomic traits for the production of primary gene products, e.g. pharmaceutical products, interferon
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
- C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
- C12N15/8242—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with non-agronomic quality (output) traits, e.g. for industrial processing; Value added, non-agronomic traits
- C12N15/8257—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with non-agronomic quality (output) traits, e.g. for industrial processing; Value added, non-agronomic traits for the production of primary gene products, e.g. pharmaceutical products, interferon
- C12N15/8258—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with non-agronomic quality (output) traits, e.g. for industrial processing; Value added, non-agronomic traits for the production of primary gene products, e.g. pharmaceutical products, interferon for the production of oral vaccines (antigens) or immunoglobulins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/30—Non-immunoglobulin-derived peptide or protein having an immunoglobulin constant or Fc region, or a fragment thereof, attached thereto
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
- C12N2770/00011—Details
- C12N2770/32011—Picornaviridae
- C12N2770/32711—Rhinovirus
- C12N2770/32722—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
- C12N2770/00011—Details
- C12N2770/32011—Picornaviridae
- C12N2770/32711—Rhinovirus
- C12N2770/32734—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Virology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Description
本出願は、「NOVEL IMMUNOADHESIN FOR THE PREVENTION OF RHINOVIRUS INFECTION(ライノウイルス感染を予防するための新規イムノアドへシン)」の名称で2001年4月28日に出願されたLarrickおよびWycoff、国際特許出願第PCT/US01/13932号の一部継続出願(continuation-in-part application)としての優先権を主張し、かつ同出願は順に、同じ名称で2000年4月28日に出願された米国特許仮出願(Provisional Application)第60/200,298号に対する優先権を主張する。これらの特許出願はそれぞれ、全ての図(figures)、図面(drawings)、および配列表を含んでそのまま、本明細書に参照により組み入れられる。
連邦研究支援を、SBIR第I期認可(R43 AI43122)およびSBIR第II期認可(2R44 AI43122-02)の形で受けた。
本発明は、イムノアドヘシン、イムノアドヘシンの植物からの生産、ならびにイムノアドヘシンの炭疽および風邪(common cols)などの毒性および病原体が媒介する病気の治療および予防における使用に関する。
風邪は一般に比較的軽い疾患である。しかし、通常、風邪から中耳炎、副鼻腔炎および喘息悪化などの重要な合併症が起こる。ヒト・ライノウイルス(HRV)は全成人風邪の50%および小児風邪の25%までの病因である(BellaおよびRossmann, J Struct Biol. 128:69-74, 1999、ならびにSperberおよびHayden, Antimicrob Agents Chemother. 32:409-19, 1988)。社会的費用は毎年、数10億ドルに達する。これらの小さい、無エンベロープRNAウイルスはピコルナウイルスのサブグループに相当する(Rueckert, 「Virology(ウイルス学)」, pp. 507-548, Fieldsら編, Raven Press, Ltd. New York, 1990)。ライノウイルスのX線結晶学は、それぞれウイルスコートタンパク質VP1、VP2、およびVP3からなる60コピーから構築された正二十面体対称をもつ直径300Å(1Å=0.1nm)のカプシドの存在を確認している(Rossmann, Nature 317:145-153, 1985)。HRVの表面くぼみ、または「キャニオン(canyon)」が受容体結合部位として示唆された(Colonnoら, Proc Natl Acad Sci USA. 85:5449-5453, 1985;Rossmannら, Nature 317:145-153, 1985)。特性決定を行った102例のHRV血清型のうち、91例(主グループとして知られる)は、それらの受容体として細胞間接着分子-1(ICAM-1)として知られる細胞表面糖タンパク質を共有し(Greveら, Cell 56:839-847, 1989;Stauntonら, Cell 56:849-853, 1989);その結合部位はN末端ドメイン1内に位置する(Greveら, J Virol. 65:6015-6023, 1991;Stauntonら, Cell 61:243-254, 1990)。
Baumlein H, Wobus U,Pustell J, Kafatos FC (1986) 「The legumin gene family:structureof a B type gene of Vicia faba and a possible legumin gene specific regulatory element(レグミン遺伝子ファミリー:ソラマメ(Vicia faba)B型遺伝子の構造および可能なレグミン遺伝子特異的調節エレメント)」, Nucl. Acids Res. 14:2707-2713;
Becker D, Kemper E, Schell J, Masterson R (1992) 「New plant binary vectors with selectable markers located proximal to the left T-DNA border(左T-DNA境界の近位に位置する選択マーカーをもつ新しい植物2成分ベクター)」, Plant Mol. Biol. 20:1195-1197;
Bradley KA, Mogridge J, Mourez M, Collier RJ, Young JAT (2001) 「Identification of the cellular receptor for anthrax toxin(炭疽毒素に対する細胞受容体の同定)」, Nature 414: 出版前;
Chintalacharuvu KR, Raines M, Morrison SL (1994) 「Divergence of human alpha-chain constant region gene sequences. A novel recombinant alpha 2 gene(ヒトα鎖定常域遺伝子配列の分岐:新規組換えα2遺伝子)」, Journal of Immunology 152:5299-5304;
Crumpら, (1994) 「Comparative Antirhinoviral Activities of Soluble Intercellular Adhesion Molecule-1(sICAM-1) and Chimeric ICAM-l Immunoglobulin A Molecule. Antimicrobial Agents and Chemotherapy(可溶性細胞間接着分子-1(sICAM-1)とキメラICAM-1免疫グロブリンA分子の比較抗ライノウイルス活性:抗菌薬および化学療法)」, 38:6, p. 1425-1427;
Depicker A, Stachel S, Dhaese P, Zambryski P, Goodman HM (1982) 「Nopaline synthase:transcript mapping and DNA sequence(ノパリン合成酵素:転写物マッピングおよびDNA配列)」, J. Mol. Appl. Genet. 1:561-573;
Gielen J, De Beuckeleer M, Seurinck J, Deboeck F, De Greve H, Lemmers M, Van Montagu M, Schell J (1984) 「The complete nucleotide sequence of the TL-DNA of the Agrobacterium tumefaciens plasmid pTiAch5(アグロバクテリア・ツメファシエンスのプラスミドpTiAch5のTL-DNAの完全ヌクレオチド配列)」, Embo J 3:835-46;
Greveら, (1991) EP 0468257, 「Multimeric form of human rhinovirus receptor protein(ヒト・ライノウイルス受容体タンパク質の多量体型)」;
Horsch RB, Fry JE, Hoffmann NL, Eichholtz D, Rogers SG, Fraley RT (1985) 「A simple and general method for transferring genes into plants(遺伝子を植物中に導入するための簡単かつ一般的方法)」, Science 227:1229-1231;
IngelbrechtI, Breyne P, Vancompernolle K, Jacobs A, Van Montagu M, Depicker A (1991) 「Transcriptional interference in transgenic plants(トランスジェニック植物中の転写妨害)」, Gene 109:239-242;
MacDonald MH, Mogen BD, Hunt AG (1991) 「Characterization of the polyadenylation signal from the T-DNA-encoded octopine synthase gene(オクトピン合成酵素遺伝子をコードしたT-DNAからポリアデニル化シグナルの特性決定)」, Nucleic Acids Res 19:5575-81;
Martinら (1993), 「Efficient Neutralization and Disruption of Rhinoviurs by Chimeric ICAM-1/Immunoglobulin Molecules(キメラICAM-1/免疫グロブリン分子によるライノウイルスの効率的な中和化および破壊)」, J. of Virology, 67:6, p. 3561-3568;
Mogen BD, MacDonald MH, Leggewie G, Hunt AG (1992) 「Several distinct types of sequence elements are required for efficient mRNA 3'end formation in a pea rbcS gene(エンドウマメrbcS遺伝子における効率的なmRNA 3'末端形成には複数の異なる型の配列エレメントが必要である)」, Mol Cell Biol 12:5406-14;
Ni M, Cui D, Einstein J, Narasimhulu S, Vergara CE, Gelvin SB (1995) 「Strength and tissue specificity of chimeric promoters derived from the octopine and mannopine synthase genes(オクトピンおよびマンノピン合成酵素遺伝子由来のキメラプロモーターの強度および組織特異性)」, Plant Journal 7:661-676;
Sawant SV, Singh PK, Gupta SK, Madnala R, Tuli R (1999) 「Conserved nucleotide sequences in highly expressed genes in plants(植物において高度に発現される遺伝子中の保存ヌクレオチド配列)」, Journal of Genetics 78:123-131;
St Croix B, Rago C, Velculescu V, Traverso G, Romans KE, Montgomery E, Lal A, RIgG1ns GJ, Lengauer C, Vogelstein B, Kinzler KW (2000) 「Genes expressed in human tumor endothelium(ヒト腫瘍内皮に発現される遺伝子)」, Science 289:1197-202;
Yamamoto YY, Tsuji H, Obokata J (1995) 「5'-leader of a photosystem I gene in Nicotiana sylvestris,psaDb, contains a translational enhancer(ニコチアナ・シルベストリスの光系I遺伝子の5'-リーダー,psaDbは翻訳エンハンサーを含有する)」, J Biol Chem 270:12466-70。
本発明は、免疫グロブリン重鎖の少なくとも一部分と連結した毒素受容体タンパク質を有するキメラ分子を含んでなるイムノアドヘシンであって、J鎖と分泌成分が上記キメラ分子と結合(associate)している上記イムノアドヘシンを意図する。本明細書に使われる毒素受容体は、受容体分子または受容体分子の一部であって、少なくともその一部分は、毒物、例えば毒、またはウイルス、細菌、真菌、寄生虫などの病原生物(またはかかる病原生物が産生する分子)その他が、発病過程の一部として付着する生物宿主生物の細胞の表面上または内部に見出されるタンパク質またはペプチドである。好ましい実施形態においては、毒素受容体は受容体分子の細胞外ドメインでありうる。毒素受容体はグリコシル化されていてもグリコシル化されていなくてもよい。受容体タンパク質またはその部分に対する改変および修飾も意図するが、かかる修飾が毒素、毒物、病原体、または病原成分と結合する受容体の能力を破壊しないことを条件とする。
A.定義
本明細書に使用される、以下の省略および用語は、必ずしも限定されるものでないが、以下の定義を含むものである。
本発明は、キメラ受容体タンパク質、例えばICAM-1受容体タンパク質を含有するイムノアドヘシン分子を生産する新規の方法を提供する。ICAM-1イムノアドヘシンは、例えば、免疫グロブリン重鎖分子の一部分と連結したライノウイルス受容体タンパク質から作られたキメラICAM-1分子を含有し、J鎖および分泌成分と関連している。本発明のかかる態様のキメラICAM-1分子は、異なる供給源:すなわち、ライノウイルス受容体タンパク質部分および免疫グロブリン鎖部分から誘導される。ライノウイルス受容体タンパク質は細胞間接着分子1(ICAM-1)から誘導される。ヒト・ライノウイルス受容体ICAM-1のヌクレオチド配列は、Stauntonら, Cell 52:925-933 (1988);Greveら, Cell 56:839-847 (1989);Greveら, J. Virology 65:6015-6023 (1991);Stauntonら, Cell, 61:243-254 (1990)により確認されかつ特性決定が行われていて、配列番号3およびGenBank受託番号M24283に記載されている。
本発明はまた、本発明のイムノアドヘシンを含有する発現およびクローニングベクター、細胞および植物も意図する。イムノアドヘシンの様々な部分をコードする遺伝子を単離する技術は当業者によく知られていて、これを応用し、様々な所要の遺伝子を発現ベクターおよびクローニングベクター中に挿入し、これらのベクターを細胞およびトランスジェニック植物中に導入することができる。
本発明はまた、本発明のイムノアドヘシンと一緒に、植物巨大分子または材料を含有する組成物も意図する。典型的には、これらの植物巨大分子または植物材料は本発明に有用ないずれかの植物から誘導される。植物巨大分子は本発明のイムノアドヘシンと一緒に、例えば、植物細胞中に、植物細胞の抽出物中に、または植物中に存在する。組成物中で本発明のイムノアドヘシンと関連した典型的な植物巨大分子は、リブロース二リン酸カルボキシラーゼ、集光性複合体色素(LHCP)、二次代謝物またはクロロフィルである。本発明の組成物は、水を除くマス(mass)基準で0.01%〜99%の濃度の植物材料または植物巨大分子を有する。他の組成物は、水を除くマス基準で1%〜99%の濃度で存在する本発明のイムノアドヘシンを有する組成物を含む。他の組成物は水を除くマス基準で50%〜90%の濃度のイムノアドヘシンを含む。
本明細書に記載のイムノアドヘシンは、好ましくは適当な医薬組成物の剤形で患者に投与することができる。かかる組成物は、上記の成分に追加の成分、または上記の成分の代わりの成分を含んでもよい。組成物は、好ましくは、投与したときに治療および予防のいずれかまたは両方の特性を示す。かかる組成物の調製は、当技術分野の日常的手法によって行うことができ、様々な剤形、例えば、溶液、懸濁液または乳化液、および摂取前に液中に包含されるのに適した固体の剤形が考えられる。ポリペプチドおよびタンパク質の製剤と投与の技術は、「Remington's Pharmaceutical Sciences(レミントンの製薬科学)」, Mack Publishing Co., Easton, PAの最新版に見出すことができる。これらの方法を用いると、当業者は、本発明のイムノアドヘシンを利用して無駄な実験なしに成功することができる。
本発明を投与するための適当な経路としては、例えば、経口、経鼻、吸入、眼内、咽頭、気管支、経粘膜、または腸投与が挙げられる。あるいは、該化合物を局所的方法で、例えば該化合物の注射またはその他の適用を経由して、好ましい作用部位へ投与してもよい。
本発明の医薬組成物は公知の方法で、例えば、通常の混合、溶解、造粒、糖衣製剤、水簸、乳化、カプセル化、封入または凍結乾燥プロセスの方法により、製造することができる。賦形剤および/または他の助剤を含む1以上の生理学的に許容される担体を利用して、活性化合物の医薬調製物への加工を容易にすることができる。適当な製剤は、選択する特定の投与経路に依存する。
本発明に使用するのに適当な医薬組成物は、意図する目的、例えば、治療および/または予防上の用途を達成するために有効な量の活性成分を含有する組成物を含む。製薬上有効な量は、治療する被験者の疾患の症候群を防止し、軽減しもしくは寛解するかまたは延命するために有効な化合物の量を意味する。製薬上有効な量の決定は十分、当業者の能力の範囲内にあり、典型的にはほぼ0.5μg/kg/日〜ほぼ500g/kg/日を、そして個々の投与量は典型的にはほぼ1ナノグラム〜数グラムのイムノアドヘシンを含むことを想定するであろう。
投与量および頻度は、医薬上の、例えば治療および/または予防効果を維持するかあるいは与えるために十分なイムノアドヘシンの粘膜レベルを提供するように調節する。最小有効濃度(MEC)はそれぞれのイムノアドヘシンおよびイムノアドヘシン製剤に対して変化しうるが、in vitroおよび/またはin vivoデータから計算することができる。MECを達成するために必要な投与量は個々の特性および投与経路に依存しうる。しかし、本明細書に記載のアッセイを利用して粘膜濃度を決定することができ、次いでさらに量および正確な処方を最適化することができる。
例えば、ライノウイルス感染および/または風邪とともに起こる症候群に対抗するために、本発明の治療および/または予防用イムノアドヘシンキメラを必要とする患者に、所望のイムノアドヘシンの医薬上有効な量を、好ましくは医薬組成物の部分として上記のように決定し、生産し、そして投与することができる。これらの製剤および送達様式は広く変化しうる。以下に記載したのは、ヒトおよび他の動物の両方において、有効量および毒性を推論するために利用することができ、次いで治療および予防のパラメーターおよび体制を決定するのに好都合に利用しうる予備的方法である。これらの方法は単に説明であり、本発明を限定することを意図するものでない。さらに、これらの方法は当業者にとって日常的なものである。
本発明のイムノアドヘシンは、例えば、感染に対するイムノアドヘシンの投与、例えば鼻内投与の効果を決定する無作為管理下試験(randomized contolled trial)を用いて試験することができる。他の投与経路を利用してもよい。効果をモニターするために利用しうる様々なアッセイが存在し、例えば病気症候群、例えばライノウイルス感染により発症する風邪症候群を評価するアッセイであるIL-8応答アッセイが挙げられる。これらの研究は、患者が摂取したイムノアドヘシンがライノウイルス感染を予防または治療しうる程度を評価してもよい。例えば、健康なまたは非健康な被験者に、例えば、ライノウイルス接種および/または病気進行の前後にイムノアドヘシンを投与して、ある時間経過にわたって評価してもよい。使用する臨床プロトコルは、組換え可溶性ICAM-1分子のライノウイルス感染に対する効果を評価するために先に使用したプロトコル、またはその改変プロトコルに基づいてもよい(Turnerら, JAMA 281:1797-804, 1999)。
1.ICAM-1イムノアドヘシン発現カセットの構築
ICAM-1細胞外ドメインDl〜D5の全体をコードするカセットを、PCRクローニングにより調製した。具体的には、ICAM-1の全ての5つの細胞外Ig様ドメインを含有する断片を、次
のオリゴヌクレオチドプライマー:
5'-TCTGTTCCCAGGAACTAGTTTGGCACAGACATCTGTGTCCCCCTCAAAAGTC-3'(配列番号6)
5'-CATACCGGGGACTAGTCACATTCACGGTCACCTCGCGG-3'(配列番号7)
を用いて、プラスミドpCDIC1-5D/IgA(Martinら, J. Virol. 67:3561-8, 1993)から増幅した。
A.イムノアドヘシン発現ベクター
プラスミドpSSPICAMHuA2[配列番号9および図8A]は長さが6313bpである。ヌクレオチド49-1165はSuperプロモーター(Niら, Plant Journal 7:661-676, 1995)を表す。ヌクレオチド1166-3662はリンカー配列をもつヒトICAM-1/ヒトIgA2m(2)定常域ハイブリッドをコードする配列を含んでなる。翻訳開始を増強するコンセンサスKozak配列(Kozak, Cell 44 (2):283-92, 1986)(nt 1186-1192)ならびにソラマメ(V. faba)レグミン由来のシグナルペプチド(nt 1189-1257;Baumleinら, Nucleic Acids Reg. 14(6):2707-2720 (1986))が含まれる。ヒトIgA2m(2)定常域(nt 3663-3633)の配列は、先に開示されている(Chintalacharuvuら, J. Imm. 152:5299-5304, 1994)。小胞体保持シグナルSEKDEL[配列番号4]をコードする配列が重鎖の末端(nt 3634-3654)に加えられている。ヌクレオチド3663-3933はノパリン合成酵素3'末端(転写終結およびポリアデニル化シグナル;Depickerら, 1982)由来であり、プラスミドの残部はベクターpSP72(Promega)由来である。
上記の発現カセットを用いて植物中でアセンブルしたイムノアドヘシンを作った。プラスミドpSSPICAMHuA2、pSHuJ、pSHuSCおよびpBMSP-1をタバコ葉組織(N. tabacum cultivar Xanthi)中に同時ボンバードメントして、形質転換したミクロカルスを栄養寒天上でカナマイシンの存在のもとで選択した。独立形質転換事象を示す個々のミクロカルスを、親組織から解剖し、カナマイシンを含む栄養寒天上で増殖した。
実施例3により発現したイムノアドヘシンを精製した。抽出方法の開発を容易にするため、カルスを大量に増殖した。イムノアドヘシンのさらなる精製のための次のクロマトグラフィ技術研究用に、部分精製スケジュールにより、様々なバッファー条件で利用しうる安定な濃縮物を得た(図3を参照)。カルスは、クエン酸ナトリウム(0.6M、pH7.4)および尿素(最終濃度2M)を含有するバッファー浴に入れて2個のステンレス鋼ギア間で組織を粉砕するジューサー中で抽出した。ジュース(〜1ml/g新鮮重量)をチーズクロスを通して濾過した後に、0.67容の飽和硫酸アンモニウム水溶液を用いて沈降させた。遠心分離後に、緑色ペレットを採集して、ダウンス(Dounce)ホモジナイザーを用いて小容積の50mMクエン酸ナトリウム(pH 6.6)水溶液中で完全に抽出した。さらなる遠心分離の後に、透明褐色の上清を採集して、脱塩のためのバッファー交換中にセファデックス(Sephadex)G-100カラムを通過させることにより、部分精製した。脱塩/バッファー交換ステップにより、所望のバッファー中での部分精製濃縮物(〜0.2ml/g新鮮重量カルス)の調製が可能であった;G-100カラムは0.25Xリン酸バッファー生理食塩水を用いて溶出した。この溶出液は2-8℃で少なくとも10日間安定であると思われた。
ヒト・ライノウイルスによる細胞の感染性は実施例3により調製したイムノアドヘシンにより抑制されることを実証した。実施例3により調製したカルス抽出物は、可溶性ICAM-1に対する抗ICAMモノクローナル抗体の結合と成功裏に競合した。図4は、酵素結合免疫吸着アッセイ(ELISA)から得たデータを示す。このアッセイ用の96ウエルプレートは可溶性ICAM-1 0.25μg/mlを用いてコーティングした。正方形は、増加する濃度のsICAMを表し、円は、マウス(抗ヒトICAM)抗体の一定量に接着したICAMと競合するために用いた増加する量のカルス抽出物(G-100からの無菌濾過した画分)を表す。ウエルを洗浄後、接着したマウス抗体を、西洋わさびペルオキシダーゼ(horseradish peroxidase)と結合した抗マウス抗体を用いて検出した。接着酵素活性は、490nmにて、ortho-フェニレンジアミンを基質として用いて測定した。データ(正方形、sICAM;円、抽出物)は、OD490=y=y0+a/[1+e^-(x-x0)/b]、(式中、a=ymax、y0=ymin、b=曲線の急速に変化する部分の勾配、およびx0=50%応答レベルの勾配)のS字型曲線によってよく記述される。可溶性ICAM-1と比較して、本実施例で試験したイムノアドヘシン抽出物は〜250μg ICAM/mlの当量を含有し;この結果は、予想されるICAM-1重鎖融合の2量体および4量体アセンブリーのアビディティ効果により過大に見積もられている。このように、このELISA結果はイムノアドヘシンは抗ICAM mAbとの結合について可溶性ICAM-1と競合することを実証した。
提案した臨床および毒性学的必要性に対する十分なイムノアドヘシンの生産は、トランスジェニックタバコ植物を作ることにより実施する。イムノアドヘシンを発現するトランスジェニック植物(ER保持シグナルなしに)をアグロバクテリア媒介形質転換により作出する。パルス-チェース(pulse-chase)実験(ChintalacharuvuおよびMorrison, Immunotechnology 4:165-174, 1999)が示唆するように、新生SIgAは、特にSCがdIgAと共有結合で連結されるトランスゴルジ(trans-Golgi)を含む全ゴルジ装置を通してプロセシングを受けるので、ER保持シグナルの不在はアセンブリーを増強することが期待される。アグロバクテリア媒介形質転換は一定レベルのトランスジーン発現をもつ植物を作出する確率がはるかに高いので、これらの植物の子孫は臨床グレードのイムノアドヘシンの生産に利用しうる確率が高い。
生産したイムノアドヘシンを分析して存在するグルコシル化パターンを決定する。Cabanes-Macheteauら, Glycobiology 9 (4):365-372 (1999)は、植物特異的に発現した抗体構築物上に、植物に典型的な、複数のグリコシル部分の存在を実証した。彼らの方法を用いて、実施例1、2および3により生産したイムノアドヘシンは植物特異的グリコシル化パターンを有することを実証した。本発明者らは、この多様性もイムノアドヘシンの可変性の源でありうると予想する。粗抽出物はin vitroで抗ウイルス活性を有することが示されている(データは示してない)ので、かかるグリコシル化は効能に影響しないと思われる。N連結グリコシル化(図2はキメラICAM-1の分子だけで15個の潜在部位があることを示す)は恐らく免疫ブロットに見られるバンドの多様性に寄与する。イムノアドヘシン調製物をブロットする前にNグリコシダーゼを用いて消化すると、バンドパターンの相違が崩れてより少数の区切られたバンドになることを示した。この方法で、還元および非還元ポリアクリルアミドゲルを用いて最初に糖形態(glycoform)の特徴を決定する。さらに、消化および偽消化した画分をCPEアッセイおよび競合ELISAで試験し、in vitroでの効能および力価に対するN連結グリコシル化の効果を実証する。
実施例1、2および3により調製したイムノアドヘシンを、ウイルスと結合し、ウイルス進入を遮断し、かつ空ウイルスカプシドの形成を誘導することによりHRVを不活性化する能力についてアッセイする。イムノアドヘシンのHRVとの結合を測定するために、イムノアドヘシンを[3H]ロイシンで標識したHRV-39とともに30分間インキュベートし、次いでHeLa細胞に加えて1時間置いた。洗浄後、細胞と結合ウイルスをTriton X-100を用いて剥離し、[3H]をシンチレーションカウンターで測定した。
本発明のイムノアドヘシンを2つの無作為化管理下試験において試験して、実験的ライノウイルス風邪の感染、IL-8応答、および病気に対するイムノアドヘシン鼻腔内投与の効果を確認する。これらの2つの研究は、ライノウイルス接種の前後に被験者に投与したイムノアドヘシンを評価する。この試験で用いた臨床プロトコルは、先にライノウイルス感染に対する組換え可溶性ICAM-1分子の効能を評価する際に用いたプロトコルに基づく(Turnerら, JAMA 281:1797-804, 1999)。
被験者はバージニア大学(the University of Virginia, Charlottesville)の大学共同体から補充する。被験者は健康で、非喫煙者で、18〜60歳であることを必要とする。最近2週間にアレルギー疾患または非アレルギー鼻炎、異常な鼻構造もしくは粘膜、または気道感染の病歴がある被験者は排除する。妊娠もしくは授乳中女性または医療的に許容されない避妊をした女性も排除する。実験ウイルスチャレンジ研究(フェーズI/II、以下参照)において、被験者は研究ウイルスに感受性であることが必要であり、これはウイルスに対する血清中和化抗体力価が、試験開始90日内に測定して1:4以下であることにより証明される。
本発明のイムノアドヘシンは、2.6mg/mlを含有するリン酸緩衝化生理食塩水(PBS)スプレー溶液として製剤する。プラセボはPBSからなり、外見は活性調製物と同一である。溶液は計量鼻スプレーポンプを備えた医薬用ボトルを用いて投与する。ポンプは各スプレーとともにイムノアドヘシン183μgを含有する溶液70μlを送達する。投薬は鼻孔当たり2スプレーで、毎日6回(3時間間隔)、全日用量4.4mgを投与する。これは、トレマカムラ(tremacamra)研究感染(Turnerら, JAMA 281:1797-804, 1999)において可溶性ICAM-1に対して用いられたのと、mgタンパク質/日で、同じ用量である。イムノアドヘシンの1モルはsICAM-1の1モルのほぼ2倍の質量である。しかし、sICAM-1とICAM/IgA融合物との間にはin vitro活性の差があるので、該イムノアドヘシンはsICAM-1よりモル基準で数倍さらに有効である。従って、この量は必要量の保守的な計算値である。用量エスカレーション研究がこの用量で問題ありとする場合を除いて、この量を使用する。
単一増加用量(single ascending dose)と多重増加用量(multiple ascending dose)研究を用いて、イムノアドヘシンの安全性を評価する。それぞの事例において、3人の被験者をそれぞれの用量レベルで評価し、2人はイムノアドヘシン、1人はプラセボを受けた。単一増加用量研究においては、4投与レベルを評価する。最低個別用量は、チャレンジ研究で使用する予定用量の半分であり、かつ最高個別用量は、チャレンジ研究で使用する予定用量の2倍である。投与レベルは次の通り:それぞれの鼻孔に1スプレー(全366μg)、2スプレー(全732μg)、3スプレー(全1098μg)、4スプレー(全1464μg)。
日常の副作用事象記録に加えて、イムノアドヘシンの安全性を3つの方法で評価する。第1に、最初の用量前および最後の用量後に、研究者は鼻粘膜の目視試験、特に刺激または炎症徴候の外見を実施する。いずれの目視変化も記載する。第2に、治療前および研究日1、4、および8(および多重上昇研究では21日)の最終投与後に採集したサンプルの標準血液安全性評価を実施する。第3に、血清サンプルを保存し、凍結し、そしてこれを用いてイムノアドヘシンが血液中に鼻粘膜を通過しうるかどうかを確認する。これは2つの方法で達成する。第1に、血清サンプル中のイムノアドヘシンの存在をELISAにより測定する。このアッセイでは、マイクロタイタープレートに吸着された抗ヒトIgA抗体血清中のいずれかがイムノアドヘシンを捕捉するので、それを抗ICAM抗体により検出する。このアッセイの感度は、既知濃度のイムノアドヘシンを用いてスパイクした正常なヒト血清サンプルを用いて決定する。あるいは、抗ICAM抗体をプレートに吸着させて血清中のイムノアドヘシンを捕捉すると、抗IgAにより検出しうる。第2に、イムノアドヘシンに対する免疫応答の存在を、マイクロタイタープレートに吸着させたイムノアドヘシンを用いるELISA法によりアッセイする。血清中のいずれかの抗イムノアドヘシン抗体が結合し、抗ヒトIgGまたは抗ヒトIgMにより検出される。処理前後の血清サンプルを比較し、力価のいずれかの変化はイムノアドヘシンの取込みの確証と考えられる。もし抗イムノアドヘシン抗体のいずれかの陽性確証があれば、さらなるアッセイを実施して抗ICAM-1と抗IgA活性の間の識別をする。
これらの研究用のサンプルサイズは、ライノウイルスチャレンジモデルを用いる先の研究に基づく。保護研究用に計画したサンプルサイズは、α=.05および1-β=.80の片側レベルで、プラセボグループ中の75%から活性治療グループの25%まで臨床風邪の発症の軽減を検出するのに十分でなければならない。さらに、サンプルサイズは5.8ユニットのSDを仮定して5ユニットの全症候スコアにおける変化を検出するのに十分でなければならない。
チャレンジ研究を用いて、本発明のイムノアドヘシンにより治療が臨床風邪に対して保護しまたはウイルスチャレンジ後の風邪症候群を低下することを実証する。
本研究に用いたチャレンジウイルスはライノウイルス39(HRV-39)である。ライノウイルス39型は、細胞への接着にICAM-1を必要とする主要(major)ライノウイルスグループである。チャレンジウイルスプールを、共通ガイドライン(Gwaltneyら, Prog. Med. Virol. 39:256-263, 1992)により安全性試験した。全ての被験者をほぼ200メジアン組織培養感染用量(TCID50)を用いて接種する。ウイルスを1鼻孔当たり250μl接種2回の液滴として、ほぼ15分間隔で仰臥位の被験者に投与する。
2つの無作為ライノウイルスチャレンジ研究を実施した(表4参照)。本発明のイムノアドヘシンの同じ製剤を、接種前(pre-inoculation)および接種後研究(post-inoculation)で評価する。両方の研究において、医薬を毎日6用量として5日間投与する。被験者は、それぞれの研究の登録時点でイムノアドヘシンまたは対応するプラセボのいずれを受けるかを無作為に割当てる。研究はブラインドで行われ、全ての臨床試験員、被験者、およびPanorama Researchの雇用者に対して、全データが回収されるまでブラインドに保たれる。
ウイルス出芽は、細胞培養におけるウイルス単離により検出する。0.9%生理食塩水5mlをそれぞれの鼻孔中に滴下して、鼻洗浄液標本を回収する。次いでこの洗浄液をプラスチックカップ中に排出し、ウイルス培養の処理をするまで冷却保存する。イムノアドヘシンを、アガロース支持体(Affi-Gel 10, Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA)上に吸着した抗ICAM-1抗体を用いる処理により、該標本から除去する。処理した標本の一部分をそれぞれ-80℃にて保存し、そして他の部分をHeLa-1細胞、ICAM-1の生産を強化したHeLa細胞系の2つのチューブ中に接種する(Arrudaら, J. Clin. Microb. 34:1277-1279, 1996)。ライノウイルスを、典型的な細胞変性効果の発生により同定する。チャレンジ後研究日のいずれかで陽性ウイルス培養の被験者は感染したと考えられる。-80℃で保存した標本のウイルス力価を、HeLa-1細胞のマイクロタイタープレート中に連続10倍希釈物を培養することにより決定する。
病気重篤度は、先に記載(Turnerら, JAMA 281:1797-804, 1999)のように評価する。症候スコアをウイルスチャレンジ前(基線)および毎日2回、ほぼ12時間間隔で次の6日間、記録する。研究日7〜14には、各被験者は自分の症候スコアを毎日、夕方に記録する。それぞれの評価に当たり、被験者は前の症候評価以後の期間における次の8症候の最大重篤度を判断するよう求められる:くしゃみ、鼻漏、鼻つまり、咽頭炎、咳、頭痛、倦怠感、および寒気。各症候を、なし、軽度、中度、または重度の症候重篤度の報告に対応する0〜3の重篤度スコアに割当てる。もし症候群が基線にあれば、基線症候スコアを報告された症候スコアから差引きうる。2つの日評価値の高い方を各症候に対する日症候スコア(daily symptom score)とする。8つの個々の症候群に対する日症候スコアを合計して全日症候スコア(total daily symptom score)を得る。ウイルスチャレンジ後の最初の5日に対する全日症候スコア(研究日1-5)を合計し、研究日5の夕方に、全被験者に「自分が風邪を引いていると感じますか?」と質問する。少なくとも6の全症候スコア(total symptom score)および少なくとも3日の鼻漏または風邪を引いたという自覚のいずれかを有する被験者を、臨床上風邪を引いていると定義する。
最近の研究は、宿主炎症応答、特にインターロイキン8(IL-8)はライノウイルス感染による風邪症候の病原性にある役割を果たしうることを示唆している。鼻洗浄液中のIL-8の濃度を、市販のELISA(R & D Systems, Minneapolis, Minn)を用いて先に記載(Turnerら, JAMA 281:1797-804, 1999)の通り測定する。
実施例8に記載の用量エスカレーション研究アッセイと同じ評価を、チャレンジ研究において行う。
統計解析を、実施例8に記載の用量エスカレーション研究について記述したのと同様に実施する。
ヒト炭疽毒素受容体(ATR)の細胞外ドメインの一部分をコードするカセットを、PCRクローニングにより調製する。具体的には、アミノ酸44-216(いわゆるvon Willebrand因子A型ドメイン)をコードする523bpの断片は、プラスミドATR(Bradleyら, 2001)からまたはプラスミドTEM8(St Croixら, 2000)から、次のオリゴヌクレオチドプライマー:
を用いて増幅する。
を用いて増幅する。
上記の発現カセットを利用して、アセンブルしたイムノアドヘシンを、アグロバクテリア媒介形質転換を経由して植物中で生産する。プラスミドspGPTV-hpt-ocs-35SJ/SCとpGPTV-kan-ocs-ATR-IgA2を、別々にA・ツメファシエンス(A. tumefactions)株LBA4404中に導入する。標準プロトコル(Horschら, 1985)によって、両株の一夜培養物を使用しタバコ葉片を用いて同時「共培養」を実施する。形質転換した植物組織をカナマイシン(100μg/mL)およびハイグロマイシン(25μg/mL)の両方を含有する再生培地上で選択する。
12.アセンブルしたATRイムノアドヘシンの精製
アセンブルしたATRイムノアドヘシンの精製は、本質的に、前掲の実施例3のICAM-1イムノアドヘシンについて記載した通り実施することができる。
上記の発現カセットを利用してアセンブルしたイムノアドヘシンを生産し、それを植物抽出物から精製する。精製したイムノアドヘシンを、簡単なバイオアッセイでCHO-K1細胞を死滅から保護するために使用する。CHO-K1細胞は、その細胞表面上にPAが結合する受容体を有するが、毒素に感受性はない。該細胞は、PAおよびLFN-DTA(ジフテリア毒素の触媒性A鎖と連結したLFのN末端255アミノ酸から成る融合タンパク質)を用いてチャレンジすると死滅する。この組換え毒素は、自然のLFおよびOFタンパク質の結合と進入に必要である、同LF-PA受容体相互作用を利用する。イムノアドヘシンの保護作用を試験するために、CHO-K1細胞を、一定(毒性の)量のPAおよびLFN-DTAの存在のもとで増加する量のATR-IgA2と混合し、そしてその後のタンパク質合成に対する効果を測定する。ATR-IgA2は毒素作用の有効なインヒビターであり、可溶ATRより低いモル濃度で毒素作用を抑制する。
精製イムノアドヘシンを製薬上許容されるバッファー中で調製し、炭疽に感染したヒト被験者に投与する。投与経路は吸入エーロゾルとしてまたは注射としてのいずれであってもよい。通常なら死に至るであろう感染後期段階の被験者がイムノアドヘシンによって毒素作用から保護される。
ヒトATR(アミノ酸24-320)の全細胞外部分をコードするカセットをPCRクローニングにより調製する。具体的には、878bpの断片をプラスミドATR(Bradleyら, 2001)、またはプラスミドTEM8(St Croixら, 2000)のいずれかから, 次のオリゴヌクレオチドプライマー:
を用いて増幅する。
を用いて増幅する。
以上の実施例は本発明の態様および実施形態を限定するものでなく単に代表するものである。引用した全ての文献は本発明が関係する技術分野の技術レベルを示す。それぞれの文献の開示は参照により本明細書に、それぞれが参照によりその全文が個々に組み入れられたのと同じ程度に組み入れられるが、いずれの文献も先行技術として認めるものではない。
Claims (42)
- キメラ毒素受容体タンパク質を含んでなるイムノアドヘシンであって、上記キメラ毒素受容体タンパク質が、免疫グロブリン重鎖の少なくとも一部分と連結した毒素受容体タンパク質;ならびに上記キメラ毒素受容体タンパク質と結合したJ鎖および分泌成分を含んでなる上記イムノアドヘシン。
- 上記毒素受容体タンパク質が炭疽毒素受容体の細胞外ドメインまたはそのいずれかの部分を含んでなる炭疽毒素受容体タンパク質である、請求項1に記載のイムノアドヘシン。
- 上記免疫グロブリン重鎖がIgA、IgA1、IgA2、IgM、およびキメラ免疫グロブリン重鎖からなる群から選択される、請求項1に記載のイムノアドヘシン。
- 少なくとも1つのさらなるキメラ炭疽毒素受容体タンパク質を含んでなる、請求項2に記載のイムノアドヘシン。
- 上記炭疽毒素受容体タンパク質が炭疽毒素受容体タンパク質の細胞外ドメインのいずれかの部分を含んでなり;そして上記免疫グロブリン重鎖がIgA2重鎖の少なくとも一部分を含んでなる、請求項2に記載のイムノアドヘシン。
- トランスジェニック植物に発現した、請求項1に記載のイムノアドヘシン。
- 単子葉類植物に発現した、請求項1に記載のイムノアドヘシン。
- 双子葉類植物に発現した、請求項1に記載のイムノアドヘシン。
- 全てのタンパク質がヒトのタンパク質である、請求項1に記載のイムノアドヘシン。
- 植物、脊椎動物、または無脊椎動物から誘導された異種細胞に発現した、請求項1に記載のイムノアドヘシン。
- 哺乳類動物細胞に発現した、請求項1に記載のイムノアドヘシン。
- 毛状根培養物に発現した、請求項1に記載のイムノアドヘシン。
- 組織培養物の植物細胞に発現した、請求項1に記載のイムノアドヘシン。
- キメラ細菌またはウイルス毒素受容体タンパク質を含んでなるイムノアドヘシンであって、上記キメラ毒素受容体タンパク質が免疫グロブリン重鎖の少なくとも一部分と連結した毒素受容体タンパク質を含んでなり、上記イムノアドヘシンが植物特異的グルコシル化を有する、上記イムノアドヘシン。
- 上記毒素受容体タンパク質が炭疽毒素受容体タンパク質である、請求項14に記載のイムノアドヘシン。
- 上記イムノアドヘシンがさらに上記キメラ炭疽毒素受容体タンパク質と結合したJ鎖および分泌成分を含んでなる、請求項15に記載のイムノアドヘシン。
- 上記炭疽毒素受容体タンパク質が炭疽毒素受容体の細胞外ドメインまたはそのいずれかの部分を含んでなる、請求項15に記載のイムノアドヘシン。
- 上記免疫グロブリン重鎖がIgA、IgA1、IgA2、IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgD、IgE、IgM、およびキメラ免疫グロブリン重鎖からなる群から選択される、請求項14に記載のイムノアドヘシン。
- 少なくとも1つのさらなるキメラ毒素受容体タンパク質を含んでなる、請求項14または15に記載のイムノアドヘシン。
- 上記毒素受容体タンパク質が上記毒素受容体タンパク質の細胞外ドメインのいずれかの部分を含んでなり;そして上記免疫グロブリン重鎖がIgA2重鎖の少なくとも一部分を含んでなる、請求項14または15に記載のイムノアドヘシン。
- 全てのタンパク質がヒトのまたは感染および/または発病中のヒト宿主に関連した、請求項14に記載のイムノアドヘシン。
- 植物、脊椎動物、または無脊椎動物から誘導された異種細胞中に発現した、請求項14に記載のイムノアドヘシン。
- 毛状根培養物に発現した、請求項14に記載のイムノアドヘシン。
- 組織培養物の植物細胞に発現した、請求項14に記載のイムノアドヘシン。
- トランスジェニック植物に発現した、請求項14に記載のイムノアドヘシン。
- 単子葉類植物に発現した、請求項14に記載のイムノアドヘシン。
- 双子葉類植物に発現した、請求項14に記載のイムノアドヘシン。
- イムノアドヘシンおよび植物材料を含んでなる組成物であって、上記イムノアドヘシンがキメラ毒素受容体タンパク質を含んでなり、上記キメラ毒素受容体タンパク質が免疫グロブリン重鎖の少なくとも一部分と連結している、上記組成物。
- さらに上記キメラ毒素受容体タンパク質とともにJ鎖および分泌成分を含んでなる、請求項28の組成物。
- 上記キメラ毒素受容体タンパク質が上記毒素受容体タンパク質の細胞外ドメインのいずれかの部分を含んでなり;そして上記イムノアドヘシンが植物特異的グリコシル化を有する、請求項28の組成物。
- 上記免疫グロブリン重鎖がIgA、IgA1、IgA2、IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgD、IgE、IgM、およびキメラ免疫グロブリン重鎖からなる群から選択される、請求項27の組成物。
- 少なくとも1つのさらなるキメラ毒素受容体タンパク質を含んでなる、請求項27の組成物。
- 上記毒素受容体タンパク質が上記毒素受容体タンパク質の細胞外ドメインのいずれかの部分を含んでなり;そして上記免疫グロブリン重鎖がIgA2重鎖の少なくとも一部分を含んでなる、請求項27の組成物。
- 上記毒素受容体タンパク質が炭疽毒素受容体タンパク質である、請求項28〜33のいずれか1項に記載の組成物。
- ウイルスまたは細菌抗原の宿主細胞との結合を低下させる方法であって、上記抗原を請求項1、14または27に記載のイムノアドヘシンと接触させ、上記イムノアドヘシンを上記抗原と結合させ、そしてそれらの毒性活性を低下させることを含んでなる上記方法。
- ウイルスまたは細菌病原体の死亡率および罹患率を低下させる方法であって、上記ウイルスまたは細菌病原体の抗原を請求項1、14または27に記載のイムノアドヘシンと接触させ、上記イムノアドヘシンを上記抗原と結合させ、そしてそれらの毒性活性を低下させることを含んでなる上記方法。
- ヒト被験者における細菌またはウイルス毒素による死亡率および罹患率を低下させる方法であって、上記被験者に請求項1、14または27に記載のイムノアドヘシンの有効量を投与し、上記イムノアドヘシンを上記抗原と結合させ、そしてそれらの毒性活性を低下させることを含んでなる上記方法。
- 上記毒素が炭疽PA毒素である、請求項35〜37のいずれか1項に記載の方法。
- 請求項1、14または27に記載のイムノアドヘシンを製薬上許容されるバッファー中に含んでなる医薬組成物。
- 植物プロモーターと機能しうる形で連結されたキメラ毒素受容体タンパク質をコードする遺伝子を含んでなる発現ベクターであって、上記キメラ毒素受容体タンパク質が免疫グロブリン重鎖の少なくとも一部分と連結している上記発現ベクター。
- 上記毒素受容体タンパク質が炭疽毒素受容体タンパク質である、請求項40に記載の発現ベクター。
- 上記キメラ受容体タンパク質がICAM-1を含んでなる、請求項1、14、19、20、28、35、36、37、39および40のいずれか1項に記載のイムノアドヘシン、組成物、または方法。
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US10/047,542 US20020168367A1 (en) | 2000-04-28 | 2001-10-26 | Novel immunoadhesins for treating and preventing viral and bacterial diseases |
PCT/US2002/034197 WO2003064992A2 (en) | 2001-10-26 | 2002-10-25 | Novel immunoadhesins for treating and preventing toxicity and pathogen-mediated diseases |
Related Child Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2010126596A Division JP2010241817A (ja) | 2001-10-26 | 2010-06-02 | 毒性および病原体が媒介する疾患を治療しかつ予防するための新規イムノアドヘシン |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2005522998A true JP2005522998A (ja) | 2005-08-04 |
JP2005522998A5 JP2005522998A5 (ja) | 2005-12-22 |
Family
ID=27658137
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2003564542A Pending JP2005522998A (ja) | 2001-10-26 | 2002-10-25 | 毒性および病原体が媒介する疾患を治療しかつ予防するための新規イムノアドヘシン |
JP2010126596A Pending JP2010241817A (ja) | 2001-10-26 | 2010-06-02 | 毒性および病原体が媒介する疾患を治療しかつ予防するための新規イムノアドヘシン |
Family Applications After (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2010126596A Pending JP2010241817A (ja) | 2001-10-26 | 2010-06-02 | 毒性および病原体が媒介する疾患を治療しかつ予防するための新規イムノアドヘシン |
Country Status (8)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20020168367A1 (ja) |
EP (2) | EP2292658A3 (ja) |
JP (2) | JP2005522998A (ja) |
CN (1) | CN1717417B (ja) |
AU (1) | AU2002365222A1 (ja) |
CA (1) | CA2464869A1 (ja) |
HK (1) | HK1087416A1 (ja) |
WO (1) | WO2003064992A2 (ja) |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2017512815A (ja) * | 2014-04-03 | 2017-05-25 | アイジーエム バイオサイエンス, インコーポレイテッド | 修飾j鎖 |
US11542342B2 (en) | 2015-09-30 | 2023-01-03 | Igm Biosciences, Inc. | Binding molecules with modified J-chain |
US11639389B2 (en) | 2015-09-30 | 2023-05-02 | Igm Biosciences, Inc. | Binding molecules with modified J-chain |
Families Citing this family (15)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US7951378B2 (en) * | 2000-04-28 | 2011-05-31 | Planet Biotechnology Inc. | Immunoadhesin comprising a chimeric ICAM-1 molecule produced in a plant |
US20060015969A1 (en) * | 2000-04-28 | 2006-01-19 | Planet Biotechnology, Inc. | Novel immunoadhesins for treating and prventing toxicity and pathogen-mediated diseases |
US20070118934A1 (en) * | 2001-10-26 | 2007-05-24 | Planet Biotechnology, Inc. | Chimeric toxin receptor proteins and chimeric toxin receptor proteins for treatment and prevention of anthrax |
CN103212084B (zh) | 2003-11-13 | 2018-07-13 | 韩美科学株式会社 | 含有免疫球蛋白fc区作为载体的药物组合物 |
US7501119B2 (en) | 2004-06-30 | 2009-03-10 | Mayo Foundation For Medical Education And Research | Methods and molecules for modulating an immune response |
US20060099203A1 (en) | 2004-11-05 | 2006-05-11 | Pease Larry R | B7-DC binding antibody |
CA2572098C (en) * | 2004-06-30 | 2015-01-27 | Mayo Foundation For Medical Education And Research | B7-dc binding antibody |
WO2008063147A2 (en) * | 2005-03-31 | 2008-05-29 | The General Hospital Corporation | Anthrax polypeptide binding |
CN101277970B (zh) * | 2005-08-02 | 2014-05-07 | 行星生物技术有限公司 | 改良的嵌合毒素受体蛋白和用于治疗和预防炭疽的嵌合毒素受体蛋白 |
US20090148904A1 (en) * | 2007-11-13 | 2009-06-11 | Mayfield Stephen P | Production of cytotoxic antibody-toxin fusion in eukaryotic algae |
BRPI0822328A2 (pt) * | 2008-02-29 | 2015-07-14 | Signalomics Gmbh | Fragmentos de adesina otimizada e nanopartículas correspondentes |
US9752199B2 (en) | 2015-03-31 | 2017-09-05 | Fundamental Solutions Corporation | Biosensor system for the rapid detection of analytes |
EP3470527A1 (en) * | 2015-03-31 | 2019-04-17 | Fundamental Solutions Corporation | Chimeric fusion protein fcgammari-igm |
CN106554418B (zh) * | 2016-10-21 | 2020-06-23 | 中国人民解放军第三军医大学第一附属医院 | 炭疽毒素受体2单克隆抗体及制备方法和应用 |
US10613083B2 (en) | 2016-12-22 | 2020-04-07 | Fundamental Solutions Corporation | Universal biosensor system for analyte detection |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH02500329A (ja) * | 1987-05-21 | 1990-02-08 | クリエイテイブ・バイオマリキユールズ・インコーポレーテツド | ターゲット化多機能蛋白質 |
WO2001064929A1 (en) * | 2000-02-29 | 2001-09-07 | Auburn University | Production of antibodies in transgenic plastids |
JP2003531633A (ja) * | 2000-04-28 | 2003-10-28 | プラネット・バイオテクノロジー・インコーポレイテッド | ライノウイルス感染を防止するための免疫接着物 |
Family Cites Families (10)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5352605A (en) | 1983-01-17 | 1994-10-04 | Monsanto Company | Chimeric genes for transforming plant cells using viral promoters |
US5034322A (en) | 1983-01-17 | 1991-07-23 | Monsanto Company | Chimeric genes suitable for expression in plant cells |
EP0229174A1 (en) | 1985-07-16 | 1987-07-22 | The Salk Institute For Biological Studies | Genetic alteration of plants with retroviruses |
EP0218571B1 (en) | 1985-08-07 | 1993-02-03 | Monsanto Company | Glyphosate-resistant plants |
ES2077589T3 (es) | 1988-04-25 | 1995-12-01 | Monsanto Co | Plantas de lechuga resistentes a insectos. |
DE69131564T2 (de) | 1990-07-20 | 2000-01-13 | Bayer Ag | Multimere Formen des menschlichen Rhinovirus-Rezeptorproteins |
US6046037A (en) | 1994-12-30 | 2000-04-04 | Hiatt; Andrew C. | Method for producing immunoglobulins containing protection proteins in plants and their use |
AU3115299A (en) * | 1998-03-25 | 1999-10-18 | Planet Biotechnology, Inc. | Methods and compositions for production of multimeric proteins in transgenic plants |
TR200504220T2 (tr) * | 1998-12-17 | 2007-04-24 | Biogen Idec Ma Inc. | Aktif limfotoksin-beta reseptör imunoglobülin şimeAktif limfotoksin-beta reseptör imunoglobülin şimerik proteinlerinin yüksek düzey ifadesi ve saflaştrik proteinlerinin yüksek düzey ifadesi ve saflaştırılması için bir yöntem.ırılması için bir yöntem. |
US7074913B2 (en) * | 2000-12-05 | 2006-07-11 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Receptor for B anthracis toxin |
-
2001
- 2001-10-26 US US10/047,542 patent/US20020168367A1/en not_active Abandoned
-
2002
- 2002-10-25 JP JP2003564542A patent/JP2005522998A/ja active Pending
- 2002-10-25 WO PCT/US2002/034197 patent/WO2003064992A2/en active Application Filing
- 2002-10-25 AU AU2002365222A patent/AU2002365222A1/en not_active Abandoned
- 2002-10-25 CA CA002464869A patent/CA2464869A1/en not_active Abandoned
- 2002-10-25 EP EP10182001A patent/EP2292658A3/en not_active Withdrawn
- 2002-10-25 CN CN028263154A patent/CN1717417B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2002-10-25 EP EP02804821A patent/EP1453862A4/en not_active Withdrawn
-
2006
- 2006-07-04 HK HK06107558.3A patent/HK1087416A1/xx not_active IP Right Cessation
-
2010
- 2010-06-02 JP JP2010126596A patent/JP2010241817A/ja active Pending
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH02500329A (ja) * | 1987-05-21 | 1990-02-08 | クリエイテイブ・バイオマリキユールズ・インコーポレーテツド | ターゲット化多機能蛋白質 |
WO2001064929A1 (en) * | 2000-02-29 | 2001-09-07 | Auburn University | Production of antibodies in transgenic plastids |
JP2003531633A (ja) * | 2000-04-28 | 2003-10-28 | プラネット・バイオテクノロジー・インコーポレイテッド | ライノウイルス感染を防止するための免疫接着物 |
Non-Patent Citations (8)
Title |
---|
JPN6008049603, TIBTECH, 1996, Vol.14, p.52−60 * |
JPN6008049606, J.Virol., 1993, Vol.67, No.6, p.3561−3568 * |
JPN6008049608, Biomol.Engineer., 20011015, Vol.18, p.87−94 * |
JPN6008049611, Nature, 20011023, Vol.414, p.225−229 * |
JPN6008049612, Proc.Natl.Acad.Sci.USA, 1999, Vol.96, p.3029−3034 * |
JPN6010004276, Neuron, 1999, Vol.22, p.489−496 * |
JPN6010004279, Life Sci., 200104, Vol.68, p.2541−2547 * |
JPN6010004283, Biochem.Biophys.Res.Commun., 1999, Vol.254, p.325−329 * |
Cited By (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2017512815A (ja) * | 2014-04-03 | 2017-05-25 | アイジーエム バイオサイエンス, インコーポレイテッド | 修飾j鎖 |
JP2020114828A (ja) * | 2014-04-03 | 2020-07-30 | アイジーエム バイオサイエンシズ インコーポレイテッド | 修飾j鎖 |
JP7062025B2 (ja) | 2014-04-03 | 2022-05-02 | アイジーエム バイオサイエンシズ インコーポレイテッド | 修飾j鎖 |
US11555075B2 (en) | 2014-04-03 | 2023-01-17 | Igm Biosciences, Inc. | Modified J-chain |
US11542342B2 (en) | 2015-09-30 | 2023-01-03 | Igm Biosciences, Inc. | Binding molecules with modified J-chain |
US11639389B2 (en) | 2015-09-30 | 2023-05-02 | Igm Biosciences, Inc. | Binding molecules with modified J-chain |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN1717417A (zh) | 2006-01-04 |
EP2292658A3 (en) | 2012-03-21 |
HK1087416A1 (en) | 2006-10-13 |
AU2002365222A1 (en) | 2003-09-02 |
CN1717417B (zh) | 2012-11-14 |
WO2003064992A3 (en) | 2004-06-17 |
EP1453862A4 (en) | 2007-10-17 |
EP2292658A2 (en) | 2011-03-09 |
WO2003064992A2 (en) | 2003-08-07 |
CA2464869A1 (en) | 2003-08-07 |
EP1453862A2 (en) | 2004-09-08 |
US20020168367A1 (en) | 2002-11-14 |
JP2010241817A (ja) | 2010-10-28 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP2010241817A (ja) | 毒性および病原体が媒介する疾患を治療しかつ予防するための新規イムノアドヘシン | |
US20070118934A1 (en) | Chimeric toxin receptor proteins and chimeric toxin receptor proteins for treatment and prevention of anthrax | |
CA2208783C (en) | Methods for producing immunoglobulins containing protection proteins in plants and their use | |
JP2009501784A (ja) | 生物学的に活性な高分子の粘膜投与または経腸投与 | |
US20080115244A1 (en) | Method for producing immunoglobulins containing protection proteins and their use | |
JP5008811B2 (ja) | ライノウイルス感染を防止するための免疫接着物 | |
AU2001257445A1 (en) | Immunoadhesin for the prevention of rhinovirus infection | |
US11566255B2 (en) | Expression of PEDV sequences in plants and plant produced vaccine for same | |
US20060015969A1 (en) | Novel immunoadhesins for treating and prventing toxicity and pathogen-mediated diseases | |
JP2014155484A (ja) | 炭疽菌の処置および予防のための改良されたキメラ毒素受容体タンパクおよびキメラ毒素受容体タンパク質 | |
EP1290201B1 (en) | Recombinant subunit proteins from porcine parvovirus produced in plants | |
US20220387581A1 (en) | Oral administration of coronavirus spike protein for altering cytokine levels and providing passive immunity to newborn pigs | |
US20100003269A1 (en) | Methods and uses of cauliflower and collard for recombinant protein production | |
CA2221843A1 (en) | Porcine reproductive and respiratory syndrome oral vaccine production in plants | |
AU2012261788A1 (en) | Improved chimeric toxin receptor proteins and chimeric toxin receptor proteins for treatment and prevention of anthrax | |
CA2319141A1 (en) | Porcine reproductive and respiratory syndrome oral vaccine production in plants | |
AU2004201094A1 (en) | Methods for Producing Immunoglobulins Containing Protection Proteins in Plants and Their Use |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20051020 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20080930 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20081219 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20090105 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20090330 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20100202 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20100602 |
|
A911 | Transfer to examiner for re-examination before appeal (zenchi) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A911 Effective date: 20100721 |
|
A912 | Re-examination (zenchi) completed and case transferred to appeal board |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A912 Effective date: 20101105 |