JP2005510573A

JP2005510573A - 抗生物質ｇｅ８１１１２ファクターａ、ｂ、ｂ１、その製薬学的に許容され得る塩および組成物および使用

Info

Publication number: JP2005510573A
Application number: JP2003547624A
Authority: JP
Inventors: セルバ，エンリコ; マリネリ，フラビア; ロツシ，ダニエル; カバレツテイ，リンダ; ラザリニ，アメリガ; マラツツイ，アレツサンドラ
Original assignee: ビクロン・フアーマシユーチカルズ・インコーポレーテツド
Priority date: 2001-11-28
Filing date: 2002-10-04
Publication date: 2005-04-21
Anticipated expiration: 2022-10-04
Also published as: AU2008255202A1; HUP0402383A3; CA2468400A1; US7407654B2; DE60225834T2; RU2004119432A; YU46804A; US20050020514A1; JP4452505B2; EP1448784A1; ES2299635T3; BR0214494A; PL370451A1; IL161896A0; DE60225834D1; US8007789B2; NO20042181L; US20090023665A1; AU2002365433A1; EP1448784B1

Abstract

本発明は、ストレプトミセス種（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｓｐ．）ＤＳＭＺ１４３８６の発酵により生産される微生物起源の抗生物質、任意に命名したＧＥ８１１１２ファクターＡ、ファクターＢ１およびファクターＢ、それらの製薬学的に許容され得る塩および組成物、ならびに感受性微生物に対して阻害活性を有する抗バクテリア剤としてのそれらの使用に関する。

Description

本発明は、微生物起源の抗生物質、任意に命名したＧＥ８１１１２ファクターＡ、ＧＥ８１１１２ファクターＢおよびＧＥ８１１１２ファクターＢ１、任意の比率の該ファクターの混合物、それらの製薬学的に許容され得る塩および組成物およびそれらの抗バクテリア剤としての使用に関する。

本発明の別の目的は、今後ＧＥ８１１１２化合物またはＧＥ８１１１２抗生物質と報告するＧＥ８１１１２ファクターＡ、ＧＥ８１１１２ファクターＢおよびＧＥ８１１１２ファクターＢ１、任意の比率の該ファクターの混合物の調製法である。

菌株および発酵
元々、内部コードＧＥ８１１１２と命名されたストレプトミセス種（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｓｐ．）ＤＳＭＺ１４３８６は土壌サンプルから単離され、そして２００１年７月１６日にＤＳＭＺ（ドイツ国、Ｄ−３８１２４ブラウンシュヴァイグ、マッシェルオーダー通り１ｂのドイチェザムルングフォンミクロオーガニズメンウントゼルカルチュレン社（ＤｅｕｔｓｃｈｅＳａｍｍｌｕｎｇｖｏｎＭｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎｕｎｄＺｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎＧｍｂＨ））にブタペスト条約の規定に基づき寄託された。この菌株は寄託番号ＤＳＭＺ１４３８６を付与された。

ＧＥ８１１１２化合物の生産は、それらを生産できるストレプトミセス株（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）、すなわちストレプトミセス種（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｓｐ．）ＤＳＭＺ１４３８６または該ＧＥ８１１１２化合物を生産する遺伝的能力を維持しているそれらの変種もしくは突然変異体を培養し；生成した抗生物質を培養ブロスから単離し；単離した抗生物質を精製し；そして３種の抗生物質ファクターＡ、ＢおよびＢ１またはそれらの混合物をクロマトグラフィー的手段により分離することにより達成される。いずれの場合でも化合物ＧＥ８１１１２は、炭素、窒素および無機塩の同化可能な供給源を含有する水性栄養培地中で好気的条件下で生産し、生成した化合物をクロマトグラフィー的手段により精製することが好ましい。発酵分野で通常使用されている多くの栄養培地を使用することができるが、特定の培地が好適である。

好適な炭素源はグルコース、キシロース、澱粉、フルクトース、グリセロール等である。好適な窒素源はダイズ粉、ペプトン、肉エキス、酵母エキス、トリプトン、アミノ酸、加水分解カゼイン等である。培養基に包含できる無機塩の中にはナトリウム、カリウム、鉄、亜鉛、コバルト、マグネシウム、カルシウム、アンモニウム、塩酸塩、炭酸塩、硫酸塩、リン酸塩、硝酸塩等のイオンを生じることができる通常の可溶性塩がある。

好ましくはＧＥ８１１１２化合物を生産する菌株は、発酵試験管または振盪フラスコ中で前培養され、次いでこのカルチャーを使用して実質的な量の物質を生産するためにジャー発酵槽に接種する。前培養に使用する培地は、大規模発酵に使用する培養と同じでよいが、他の培地も使用することができる。ＧＥ８１１１２化合物を生産する菌株は、２０℃から４０℃の間、好ましくは２２℃から３７℃の間の温度で成長させることができる。４４℃より高温では成長は観察されない。

発酵中、ＧＥ８１１１２ファクターは感受性（ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｌｅ）微生物に関するバイオアッセイかつ／またはＨＰＬＣ分析により監視することができる。ＧＥ８１１１２化合物の最大の生産は一般に発酵の約２０時間後、そして８０時間前に起こる。

化合物ＧＥ８１１１２はストレプトミセス種（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｓｐ．）ＤＳＭＺ１４３８６または化合物ＧＥ８１１１２を生産するそれらの変種もしくは突然変異体を培養することにより生産され、そして培養ブロス中に見いだされる。
ストレプトミセス種（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｓｐ．）ＤＳＭＺ１４３８６の形態学的特徴
ストレプトミセス種（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｓｐ．）ＤＳＭＺ１４３８６は、多くの標準的な固体培地でよく成長する。微生物学的調査および細胞の寸法は、１／１０濃度のフミン酸培地で成長させたカルチャーを使用して測定した（Ｈ．Ｎｏｎｏｍｕｒａ、１９８４−土壌放線菌の単離用の新規培地の設計（Ｄｅｓｉｇｎｏｆａｎｅｗｍｅｄｉｕｍｆｏｒｉｓｏｌａｔｉｏｎｏｆｓｏｉｌａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｓ）。ＴｈｅＡｃｔｉｏｎｏｍｙｃｅｔｅｓ１８，２０６−２０９）。

液体培養では（Ｖ６培地、組成については実施例１を参照にされたい）、２８℃で２日間成長させた後に菌糸体の断片化は観察されなかった。

２８℃で１５日間インキューベーションした後のＨＶ／２寒天に関する顕微鏡調査では、断片化も過剰に分岐した栄養菌糸体も見られなかった。気中菌糸が過剰に分岐することもなかった。気中菌糸は１０以上（ほとんどが＞２０）の胞子の鎖を生じ；それほど緻密ではない３〜５ループの単純に並んだスパイラルであった。胞子の形状は球状（約０．９μｍの平均直径）から卵形または円筒状の範囲であった（０．８〜０．９×１．１〜１．３μｍ）。
ストレプトミセス種（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｓｐ．）ＤＳＭＺ１４３８６の培養特性
ストレプトミセス種（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｓｐ．）ＤＳＭＺ１４３８６は、Ｖ６液体培地で２日間成長させた（培地組成については実施例１を参照されたい）。菌糸体を遠心により回収し、そして滅菌塩溶液で３回洗浄し、そして次いで希釈して安定な菌種を提供した。懸濁液のアリコートをＳｈｉｒｌｉｎｇａｎｄＧｏｔｔｌｉｅｂ（Ｅ．Ｂ．ＳｈｉｒｌｉｎｇａｎｄＧｏｔｔｌｉｅｂ、１９６６−放線菌種の特性決定法（ＭｅｔｈｏｄｆｏｒＣｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｓｐｅｃｉｅｓ）−．Ｉｎｔ．Ｊ．Ｓｙｓｔ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．，１６，３１３−３４０）により推薦された種々の培地上、およびＷａｋｓｍａｎ（ＷａｋｓｍａｎＳ．Ａ．、１９６１−放線菌（ＴｈｅＡｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｓ）−ウイリアムズアンドウィルキンス社（ＷｉｌｌｉａｍｓａｎｄＷｉｌｋｉｎｓＣｏ．）、ボルチモア、第２巻、第３２８−３３４）により推薦される数種の培地上に斜交平行様式で画線した。

炭素およびエネルギー源として種々の炭水化物の使用する能力は、１（重量／容量）％の最終濃度で炭素源を含むＩＳＰ８培地（ＳｈｉｒｌｉｎｇａｎｄＧｏｔｔｌｉｅｂ、同上）で測定した。ＮａＣｌ耐性ならびに異なる温度で成長する能力は、ＩＳＰ２培地で測定した。すべての培地は２８℃で２１日間インキューベーションされ；説明では特定しない限り１４日を指す。色はＭａｅｒｚａｎｄＰａｕｌのカラーアトラス（Ａ．ＭａｅｒｚａｎｄＭ．Ｒ．Ｐａｕｌ，１９５０−色の辞典（ＡＤｉｃｔｉｏｎａｒｙｏｆＣｏｌｏｕｒ）、第２版、マグロー−ヒル書店、ニューヨーク）を使用して自然な昼光で評価した。硝酸塩を亜硝酸塩に還元する能力は、製造元により推薦されるプロトコールに従い、バクト−ニトリット試験ストリップ（Ｂａｃｔｏ−ＮｉｔｒｉｔｅＴｅｓｔＳｔｒｉｐｓ）（ディフコ：Ｄｉｆｃｏ）を使用した好気的条件下で、２８℃で一晩インキューベーションした後、硝酸塩ブロス（ＩＳＰ８培地）で評価した。

ストレプトミセス種（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｓｐ．）ＤＳＭＺ１４３８６株に関する成長、コロニーの外観、物質および気中菌糸の色および色素生産を表Ｉに記録する。成長は、唯一の無機窒素源を有するＧ１寒天を除き、使用したすべての培地で存在した。使用した培地で特徴的な着色は示されなかった。菌株の生理学的特徴を表ＩＩに与える。ストレプトミセス種（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｓｐ．）ＤＳＭＺ１４３８６は、７（重量／容量）％までのＮａＣｌで成長する能力を示し；１（重量／容量）％以上のＮａＣｌの濃度で菌株は気中菌糸を分化しなかった。ゼラチン液化およびミルクのペプトン化は、７日間の成長後に弱く検出された。成長に種々の炭水化物を利用する能力を表ＩＩＩに示す。炭素源添加無しの基本培地では、栄養および気中菌糸のわずかな成長が観察された。白色の気中菌糸がグルコースを除き使用したすべての炭素源で生産された。
表Ｉ：ストレプトミセス種（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｓｐ．）ＤＳＭＺ１４３８６の成長特性
培地成長および形態反転の
色コード
ＩＳＰ２豊富な成長、回旋状、画線のほぼ末端まで１２Ｌ９
酵母エキス− 厚くなる；オレンジ／茶色；成長の限界で
麦芽エキス退色。白色の気中菌糸のふさ状分岐。
寒天可溶性の色素は生産しない。深い土壌の匂い。
ＩＳＰ３滑らかな表面の豊富な成長；クリームから１１Ｈ３
オートミール帯黄色。成長の限界に近い所でのみ白色の
寒天気中菌糸の薄層。可溶性の色素は生産しない。
ＩＳＰ４豊富な成長、回旋状、画線のほぼ末端まで１０Ｆ３
無機塩− 厚くなる；帯黄色。白色の気中菌糸の
澱粉存在、綿状。可溶性の色素は生産しない。
寒天深い土壌の匂い。
ＩＳＰ５分かれて良好に成長；無色から明黄色；１０Ｇ２
グリセロール羽状化および縁で退色。薄い、白色の
−アスパラギン気中菌糸の存在、古くなる（ａｇｉｎｇ）とピンクになる
寒天（１０Ａ２）。可溶性の色素は生産しない。
ＩＳＰ６分かれて成長、画線の末端付近で皺化；１１Ｊ３
ペプトン− コロニーの直径は小さい；画線の領域から
酵母エキス少し広がる；にかわ質；明茶色。気中菌糸は
−鉄寒天生産しない。培地がわずかに暗化。
ＩＳＰ７豊富な成長、回旋状、画線のほぼ末端まで１４Ｌ９
チロシン寒天厚くなる；茶色；羽状化および退色した縁。
白色の気中菌糸の良好な生産、粉末状。
茶色い可溶性色素が生産される。わずかに
土壌の匂い。
ＳＹＥ豊富な成長、回旋状、画線のほぼ末端まで１０Ｌ７
澱粉− 厚くなる；黄色／茶色；広く、羽状化し、
酵母エキスそして縁で退色。白色の薄い気中菌糸
寒天のわずかな生産。可溶性色素は生産しない。
わずかに土壌の匂い。
ＣＺ−ＧＬＵ分かれて良好に成長、画線のほぼ末端まで厚い；１２Ｈ６
Ｃｚａｐｅｃｋ− コロニーは直径が小さい；クリーム−明茶色；
グルコース羽状化した縁。白色の薄い気中菌糸
寒天のわずかな生産。可溶性色素は生産しない。
わずかに土壌の匂い
ＧＡＵＺＥ１成長なし −
寒天
ＧＡＵＺＥ２良好な成長、画線のほぼ末端で薄く、皺がより、１１Ｌ６
寒天そして厚く、画線の交差付近で平ら；帯黄色／
茶色。平坦領域に薄い白色の気中菌糸の
わずかな存在。培地のわずかな暗化。
ＮＡ分かれて良好に成長、滑らか；１１Ｌ２
栄養クリーム／帯黄色。気中菌糸は生産しない。
観点可溶性色素は生産しない。
ＳＥわずかに見える栄養菌糸体；無色；画線のＮＤ
土壌エキス領域からわずかに広がる。気中菌糸は
寒天生産しない。可溶性色素は生産しない。
ＨＶ／２栄養菌糸体が深く寒天に浸透した良好な成長；ＮＤ
フミン酸− 暗茶色；羽状化した縁。白色の気中菌糸
ビタミン寒天の存在、粉末状。

表ＩＩ：ストレプトミセス種（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｓｐ．）ＤＳＭＺ１４３８６の生理学的特性
試験反応
澱粉加水分解陽性
カゼイン加水分解陰性
マレイン酸カルシウム消化陽性
リトマスミルクペプトン化陽性（弱い）
リトマスミルク凝固陰性
ゼラチン液化陽性（弱い）
チロシン反応陽性
Ｈ_２Ｓ生産（４日）：陰性
ＩＳＰ６
＋酢酸鉛片についてわずかに陽性
硝酸塩還元陰性
ＮａＣｌ耐性＜７％

表ＩＩＩ．ストレプトミセス種（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｓｐ．）ＤＳＭＺ１４３８６による炭素源の利用
炭素源栄養菌糸体気中菌糸
の成長の成長
アラビノース＋＋／−
フルクトース＋＋＋＋
イノシトール＋＋／−
マンニトール＋＋＋
ラフィノース＋＋＋＋
ラムノース＋＋＋＋
シュクロース − ＋／−
キシロース＋＋＋＋
グルコース＋＋ −
＋＋良好な成長；＋中程度の成長；−わずか／成長なし；

ストレプトミセス種（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｓｐ．）ＤＳＭＺ１４３８６の化学分類的特性
ストレプトミセス種（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｓｐ．）ＤＳＭＺ１４３８６をＳａｕｔｏｎの培地で４週間成長させ、次いで菌糸体を収穫し、滅菌蒸留水で３回洗浄し、そして続いて凍結乾燥した。ジアミノピメリン酸（ＤＡＰ）の立体異性体を、ＳｔａｎｅｃｋａｎｄＲｏｂｅｒｔｓの方法（Ｊ．Ｌ．ＳｔａｎｅｃｋａｎｄＧ．Ｄ．Ｒｏｂｅｒｔｓ、薄層クロマトグラフィーによる好気性放線菌の同定に対する簡略された取り組み（Ｓｉｍｐｌｉｆｉｅｄａｐｐｒｏａｃｈｔｏｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆａｅｒｏｂｉｃａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｓｂｙｔｈｉｎ−ｌａｙｅｒｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）、Ａｐｐｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．２８，２２６−２３１，１９７４）に従い測定した。

脂肪酸の抽出については、湿ったバイオマスをＭｉｌｌｅｒの方法（Ｌ．Ｔ．Ｍｉｌｌｅｒ、ヒドロキシ酸を含む細菌の脂肪酸メチルエステルの１回の誘導化法（Ａｓｉｎｇｌｅｄｅｒｉｖａｔｉｚａｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｆｏｒｂａｃｔｅｒｉａｌｆａｔｔｙａｃｉｄｍｅｔｈｙｌｅｓｔｅｒｉｎｃｌｕｄｉｎｇｈｙｄｒｏｘｙａｃｉｄｓ）、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．１６，５８４−５８６，１９８２）をわずかに変更して使用して（Ｌ．Ｄ．Ｋｕｙｋｅｎｄａｌｌ，Ｍ．Ａ．Ｒｏｙ，Ｊ．Ｊ．Ｏ’ＮｅｉｌｌａｎｄＴ．Ｅ．Ｄｅｖｉｎｅ、ブラジリゾビウムジャポニシウムの脂肪酸、抗生物質耐性およびデオキシリボ核酸相同体群（Ｆａｔｔｙａｃｉｄ，ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ，ａｎｄｄｅｏｘｙｒｉｂｏｎｕｃｌｅｉｃａｃｉｄｈｏｍｏｌｏｇｙｇｒｏｕｐｓｏｆＢｒａｄｙｒｈｉｚｏｂｉｕｍｊａｐｏｎｉｃｉｕｍ）、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｓｙｓｔｅｍ．Ｂａｃｔ．３８，３５１−３６１，１９８８）抽出した。分析はＲ．Ｍ．Ｋｒｏｐｐｅｎｓｔｅｄｔ（Ｒ．Ｍ．Ｋｒｏｐｐｅｎｓｔｅｄｔ，Ｅ．ＳｔａｃｋｅｂｒａｎｄｔａｎｄＭ．Ｇｏｏｄｆｅｌｌｏｗ）、放線菌アクチノマジュラおよびミクロテトラスポーラ属の系統の修正（ＴａｘｏｎｏｍｉｃｒｅｖｉｓｉｏｎｏｆｔｈｅａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｇｅｎｅｒａＡｃｔｉｎｏｍａｄｕｒａａｎｄＭｉｃｒｏｔｅｔｒａｓｐｏｒａ）、Ｓｙｓｔｅｍ．Ａｐｐｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．１３，１４８−１６０，１９９０）に記載されているように行い、そしてデータは微生物の同定システム（Ｌ．Ｔ．Ｍｉｌｌｅｒ、同上）を使用して調査した。

ストレプトミセス種（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｓｐ．）ＤＳＭＺ１４３８６株はＬＬ−ジアミノピメリン酸をペプチドグルカゴンに含有する。ミコール酸は存在しない。イソ−およびアンテイソ−分岐型の脂肪酸は存在するが、ヒドロキシ脂肪酸または１０−メチル−分岐脂肪酸、すなわち脂肪酸２ｃ型ストレプトミセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）型は検出できない。
ストレプトミセス種（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｓｐ．）ＤＳＭＺ１４３８６株の同一性
化合物ＧＥ８１１１２を生産する菌株は、以下の形態学的および化学的特性からストレプトミセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）属に割り当てられる：
−分岐化されているが断片化されていない栄養菌糸体の形成。気中菌糸は１０より多くの（ほとんどが２０より多く）の分節胞子を生じる；
−Ｋｒｏｐｐｅｎｓｔｅｄｔ（Ｒ．Ｍ．Ｋｒｏｐｐｅｎｓｔｅｄｔ、放線菌および関連微生物の脂肪酸およびメナキノン分析（Ｆａｔｔｙａｃｉｄａｎｄｍｅｎａｑｕｉｎｏｎｅａｎａｌｙｓｉｓｏｆａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｓａｎｄｒｅｌａｔｅｄｏｒｇａｎｉｓｍ）、ｐｐ．１７３−１９９：細菌系統における化学的方法（ＣｈｅｍｉｃａｌＭｅｔｈｏｄｓｉｎｂａｃｔｅｒｉａｌＳｙｓｔｅｍａｔｉｃｓ）で、Ｍ．ＧｏｏｄｆｅｌｌｏｗａｎｄＤ．Ｅ．Ｍｉｎｎｉｋｉｎ編集；ロンドン、アカデミック出版、１９８５）に従う細胞壁中のＬＬ−ジアミノピペリン酸の存在および２ｃ型の脂肪酸プロフィール。

他の微生物のように、ＧＥ８１１１２化合物を生産する特徴の菌株は変異に供される。例えばこの菌株の人工的変異体および突然変異体は、Ｕ．Ｖ．線および亜硝酸、Ｎ−メチル−Ｎ’−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジンのような化学物質およびその他の多くの様々な既知の変異原物質での処理により得ることができる。ＧＥ８１１１２化合物を生産する遺伝的能力を維持するストレプトミセス種（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｓｐ．）ＤＳＭＺ１４３８６株のすべての天然および人工変異体および突然変異体は、本発明の目的についてそれと均等であると見なし、したがって本発明の範囲内にある。

抗生物質は発酵ブロスの上清画分から回収することができる。
ＧＥ８１１１２化合物の抽出および精製
生産微生物の発酵ブロスからのＧＥ８１１１２化合物の回収は、補助剤の存在下で溶媒を用いた抽出、非溶媒、塩を加えることによる沈殿のようなそれ自体は既知の技術に従い、あるいは溶液のｐＨを変えること、分配クロマトグラフィー、逆相分配クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、分子排除クロマトグラフィー等により行う。

発酵ブロスからの本発明の抗菌物質の回収手順には、イオン交換クロマトグラフィーによるＧＥ８１１１２混合物の抽出を含む。この手順に従い、濾過した発酵ブロスをイオン交換樹脂と接触させる。溶出はｐＨまたはイオン強度の変化により行うことができる。本発明の化合物の回収に都合よく使用できるイオン交換樹脂の例には、アニオン性およびカチオン性イオン交換樹脂の両方、すなわち例えば酸（例えばＣＯＯＨ、−ＳＯ_３Ｈ）または塩基性（例えば−Ｎ（ＣＨ_３）_２、−Ｎ^＋（ＣＨ_３）_３）官能基を導入することにより誘導化された合成ポリマー（例えばスポリスチレン、アクリル酸ポリマー）または天然ポリマー（例えばセルロース、セファロースポリマー、シリカ）の支持体からなる樹脂である。

上記樹脂の例は：Ｄｏｗｅｘ５０Ｗ樹脂（ダウケミカル社：ＤｏｗＣｈｅｍｉｃａｌＣｏ．）、ＡｍｂｅｒｉｔｅＩＲ−２００およびＩＲ−１２０（ロームアンドハース：Ｒｏｈｍ＆Ｈａａｓ）、ＰＬ−ＳＣＸ１０００およびＡＰＬ−ＳＣＸ４０００Ａ（ポリマーラボラトリーズ：ＰｏｌｙｍｅｒＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）、ＩｓｏｌｕｔｅＳＣＸＩＳＴ（インターナショナルソルベントテクノロジー：ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌｓｏｒｂｅｎｔｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）、ＳＰＳｅｐｈａｒｏｓｅｆａｓｔｆｌｏｗおよびＳＰＳｅｐｈａｄｅｘＧ２５（ファルマシアバイオテック：ＰｈａｒｍａｃｉａＢｉｏｔｅｃｈ）である。

抗生物質を回収する別の手順には適切な支持体上での吸着、続いて極性の水混和性溶媒またはその混合物での溶出、減圧下での水残渣への濃縮、そしてすでに上に挙げた種類の沈殿剤を用いた沈殿を含む。ｐＨは適切な値に調整することができる。本発明の化合物の回収に都合よく使用することができる吸着マトリックスの例は、活性炭（例えばＤａｒｃｏＧ６０、ＮｏｒｉｔＣＧ１）、ポリスチレンまたは混合ポリスチレン−ジビニルベンゼン樹脂、（たとえばＤｉａｉｏｎＨＰ２０、三菱化学（ＭｉｔｓｕｂｉｓｈｉＣｈｅｍｉｃａｌｓ）、Ｍ１１２またはＳ１１２ダウケミカルズ社；ＡｍｂｅｒｉｔｅＸＡＤ２またはＸＡＤ４、ロームアンドハース）、アクリル酸樹脂（例えばＸＡＤ７またはＸＡＤ８、ロームアンドハース）、フェノール性吸着剤（例えばＤｕｏｌｉｔｅＸＡＤ７６１、ロームアンドハース）、ポリカプロラクタム、ナイロンおよび架橋結合ポリビニルピロリドンのようなポリアミド樹脂（例えばポリアミド−ＣＣ６、ポリアミド−ＳＣ６、ポリアミド−ＣＣ６．６、ポリアミド−ＣＣ６ＡＣおよびポリアミド−ＳＣ６ＡＣ、マシェリー−ナゲル社（ＭａｃｈｅｒｅｙＮａｇｅｌ＆Ｃｏ．）、西ドイツ；ＰＡ４００、エム．ヴォエルム社（Ｍ．ＷｏｅｌｍＡＧ）、西ドイツＰＶＰ−ＣＬ、アルドリッチケミカル社（ＡｌｄｒｉｃｈＣｈｅｍｉｅＧｍｂＨ＆Ｃｏ．）、ＫＧ、西ドイツ）、孔が制御された架橋結合デキストラン（例えばＳｅｐｈａｄｅｘＬＨ−２０、ファルマシアファインケミカルズ社：ＰｈａｒｍａｃｉａＦｉｎｅＣｈｅｍｉｃａｌｓＡＢ）を含む。活性炭および／またはポリスチレン樹脂がよく使用され、特に好適であるのは樹脂ＤｉａｉｏｎＨＰ２０（三菱化学）である。

上に挙げた種類の吸着支持体での吸収は、例えばイオン（例えばカチオン）交換クロマトグラフィーにより発酵ブロスから回収した粗生成物を精製する手順としても使用することができる。

ＧＥ８１１１２化合物を吸着支持体から溶出するために好適な溶媒は、具体的な固定相に依存する。活性炭の場合、溶出は溶出バッファーを酸性ｐＨに変えることにより成され、バッファーは典型的には水混和性溶媒、例えばアセトンのような低級ケトンまたはメタノールのような低級アルコールを含む。したがって水性混合物は適切なｐＨ値に調整される。ポリスチレン樹脂、ポリスチレンジビニルベンゼン樹脂、アクリル酸樹脂またはポリアミド樹脂の場合、好適な溶出液は水混和性溶媒またはその水性混合物、例えば水と（Ｃ_１−Ｃ_３）アルカノールとの混合物である。

本出願で使用する用語「水混和性溶媒」は他に特定しない限り、当該技術分野で現在それに与えられている意味を有し、そして使用条件下で、意図する使用に適当な合理的な広い濃度範囲で水と混和性である溶媒を称する。本発明の化合物の溶出に使用できる水混和性溶媒の有機溶媒の例には：低級アルカノール、例えばメタノール、エタノールおよびプロパノールのような（Ｃ_１−Ｃ_３）アルカノール；ベンジルアルコールのようなフェニル（Ｃ_１−Ｃ_３）アルカノール；低級ケトン、例えばアセトンおよびエチルメチルケトンのような（Ｃ_３−Ｃ_４）ケトン；ジオキサンおよびテトラヒドロフランのような環式エーテル；エチレングリコール、プロピレングリコールおよびエチレングリコール、モノメチルエーテルのようなグリコールおよびそれらの部分エステル化生成物、ジメチルホルムアミドおよびジエチルホルムアミドのような低級アミド；酢酸、ジメチルスルフォキシドおよびアセトニトリルである。

発酵ブロスからＧＥ８１１１２化合物を回収するための別の方法は、ＧＥ８１１１２化合物またはそれらの塩を、水非混和性有機溶媒を用いた、ｐＨを適当な値に調整することによる、かつ／または塩の使用による、かつ／または抽出溶媒中で可溶性の抗生物質とイオン対を形成する適切な有機塩を加えることによる抽出である。次いで抗生物質は例えば沈殿剤を加えることにより濃縮された抽出物から沈殿させることができる。

本出願で使用する用語「水非混和性溶媒」とは当該技術分野で現在それに与えられている意味を有し、そして使用条件下で、水にわずかに混和性であるか、または実際には非混和性である溶媒を称するものとする。発酵ブロスから本発明の化合物の抽出に使用することができる水非混和性有機溶媒の例は：ｎ−ブタノール、１−ペンタノール、２−ペンタノール、３−ペンタノール、１−ヘキサノール、２−ヘキサノール、３−ヘキサノール、３，３−ジメチル−１−ブタノール、４−メチル−１−ペンタノール、３−メチル−１−ペンタノール、２，２−ジメチル−３−ペンタノール、２，４−ジメチル−３−ペンタノール、４，４−ジメチル−２−ペンタノール、５−メチル−２−ヘキサノール、１−ヘプタノール、２−ヘプタノール、５−メチル−１−ヘキサノール、２−エチル−１−ヘキサノール、２−メチル−３−ヘキサノール、１−オクタノール、２−オクタノール、シクロペンタノール、２−シクロペンチルエタノール、３−シクロペンチル−１−プロパノール、シクロヘキサノール、シクロヘプタノール、シクロオクタノール、２，３−ジメチルシクロヘキサノール、４−エチルシクロヘキサノール、シクロオクチルメタノール、６−メチル−５−ヘプテン−２−オール、１−ノナノール、２−ノナノール、１−デカノール、２−デカノールおよび３−デカノールのような直鎖状、分岐状または環状であり得る少なくとも４個の炭素原子のアルカノール；メチルイソプロピルケトン、メチルイソブチルケトン、メチル−ｎ−アミルケトン、メチルイソアミルケトンおよびそれらの混合物のような少なくとも５個の炭素原子のケトンである。

ＧＥ８１１１２化合物との都合の良いイオン対の例は、ｐ−トルエンスルホン酸、ペンタン−、エサン（ｅｓａｎ）−、エプタン（ｅｐｔａｎ）−スルホン酸等により表されるスルホン酸、またはエサン酸（ｅｓａｎｏｉｃ）、エプタン酸（ｅｐｔａｎｏｉｃ）、安息香酸等により表されるカルボン酸のような酸を適切なｐＨで加えることにより得る。あるいはイオン対はトリエチルアンモニウム、テトラブチルアンモニウム等のようなカチオンを適切なｐＨで加えることにより生成することができる。

粗ＧＥ８１１１２化合物の精製は、それ自体は既知の任意の技術により行うことができるが、好ましくはクロマトグラフィー手法により行う。またいわゆる立体排除クロマトグラフィー技法も都合良く使用して、良好な結果を得ることができる。特にほとんどのヒドロキシル基がアルキル化されている孔が制御された架橋結合デキストラン、例えばＳｅｐｈａｄｅｘＬＨ−２０（ファルマシアファインケミカルズ社）は、この技法に有用に使用される。

例えば中圧液体クロマトグラフィー分離システムは、ＲＰ−８またはＲＰ−１８官能化シリカゲルでの逆相クロマトグラフィーを使用し、そしてギ酸アンモニウム溶液で溶出することにより採用することができる。発酵ブロスから単離した粗生成物、ならびに精製した生成物は通常、発酵および精製条件の両方に依存して個々のＧＥ８１１１２ファクターＡ、Ｂ１およびＢの混合物を変動する比で含む。

個々のファクターＡ、ＢおよびＢ１の分離および精製は、ＧＥ８１１１２化合物の混合物を含む調製物の半調製用ＨＰＬＣにより都合よく行うことができる。

純粋なＧＥ８１１１２ファクターＡ、Ｂ１およびＢの単離に関する好適な調製用ＨＰＬＣ技法は、ＨｉｂａｒＬｉｃｈｒｏｓｏｒｂ（メルク：Ｍｅｒｃｋ）２５×２５０ｍｍカラムＲＰ８（７μｍ粒子サイズ）を備えた半調製用ＨＰＬＣ装置（島津（Ｓｈｉｍａｄｚｕ）−ＬＣ８Ａ）で行い、これは３５ｍｌ／分の流速にてギ酸でｐＨを４．５にした４０ｍＭのギ酸アンモニウムで溶出される。分離されたＧＥ８１１１２ファクターを含む繰り返したクロマトグラフィー操作の溶出物をそれらの内容物に従いプールし、そして減圧下で水溶液に対して濃縮し、これを凍結乾燥して精製されたＧＥ８１１１２ファクターＡ、Ｂ１およびＢを得る。

この分野で通常であるように、生産ならびに回収および精製工程は、感受性の微生物および／またはＨＰＬＣ手順を用いたバイオアッセイを含む様々な分析的手順により監視することができる。好適な分析用ＨＰＬＣ技法はＳｙｍｍｅｔｒｙ（ウォーターズ：Ｗａｔｅｒｓ）またはＡｌｔｉｍａ（オールテク：Ａｌｌｔｅｃｈ）の５μｍ粒子サイズのＣ１８固定相を充填した２５０×４．６ｍｍカラムを装備した島津のＬＣ１０装置で行い、１ｍｌ／分の流速、ギ酸でｐＨを４．５にした４０ｍＭのギ酸アンモニウムで溶出する。検出は２３０ｎｍであった。これらの条件下で、ファクターＡ、Ｂ１およびＢは典型的にはそれぞれ１３、１８、２１分の保持時間を示した。

本発明の抗生物質は酸および塩基性官能基を有するので、それらは適当なｐＨ値で内部塩または双性イオンの状態でも存在することができる。さらにそれらは通例の手順に従い塩を形成することができる。本発明の化合物の代表的および適当な酸付加塩には、例えば塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、トリクロロ酢酸、コハク酸、クエン酸、アスコルビン酸、乳酸、マレイン酸、フマル酸、パルミチン酸、コール酸、パーム酸、粘液酸、グルタミン酸、樟脳酸、グルタル酸、グリコール酸、フタル酸、酒石酸、ラウリン酸、ステアリン酸、サリチル酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ソルビン酸、ピクリン酸、安息香酸、桂皮酸等の酸のような有機および無機酸の両方との標準的反応により形成されるそれらの塩を含む。

ＧＥ８１１１２化合物と付加塩を形成することができる塩基の代表的な例は：水酸化ナトリウム、カリウムおよびカルシウムのようなアルカリ金属またはアルカリ土類金属水酸化物；メチルアミン、ジメチルアミン、トリメチルアミンおよびピコリンのようなアンモニアおよび有機脂肪族、脂環式または芳香族アミンである。

本発明の遊離または双性イオン性化合物の対応する塩への変換および逆、すなわち本発明の化合物の塩の双性イオン性または遊離化合物形への変換は、当業者の通常の技術内であり、そして本発明に包含される。

例えば本発明の化合物は、非付加塩形を水性溶媒に溶解し、そしてわずかにモル過剰の選択された酸または塩基を加えることにより、対応する酸または塩基付加塩に変換することができる。生成した溶液または懸濁液は次いで凍結乾燥して所望の塩を回収する。

非塩形が可溶性である最終的な塩形が溶媒中で不安定な場合、溶液から濾過により回収する。

非塩形は、水性溶媒中に溶解した対応する酸または塩基の塩から調製することができ、これを次いで中和して非塩形を遊離する。

続いて中和脱塩が必要である時、通例の脱塩手順を使用することができる。例えばシラン化シリカゲル、非官能化ポリスチレン、アクリル酸および制御した孔のポリデキストラン樹脂（ＳｅｐｈａｄｅｘＬＨ２０のような）または活性炭でのカラムクロマトグラフィーを都合よく使用することができる。望まない塩を水溶液で溶出した後、所望する生成物を５０：５０のアセトニトリル／水から約１００％のアセトニトリルへのような、水および極性もしくは非極性有機溶媒の混合物で直線勾配または段階的勾配により溶出する。

当該技術分野で知られているように、製薬学的に許容され得る酸（もしくは塩基）または製薬学的には許容されていない酸（もしくは塩基）のいずれかとの付加塩の形成は、都合良く精製技法として使用することができる。形成および単離後、ＧＥ８１１１２化合物の付加塩形を、対応する遊離の双性イオン性に、または異なる製薬学的に許容され得る付加塩に変換することができる。
ＧＥ８１１１２ファクターＡの物理化学的特性
Ａ）質量分析法
ＧＥ８１１１２ファクターＡは、Ｔｈｅｒｍｏｆｉｎｎｉｇａｎのカリブレーションミックスを使用して、エレクトロスプレー供給源を付けたＴｈｅｒｍｏｆｉｎｎｉｇａｎＬＣＱデカ装置でのＭＳ実験において、ｍ／ｚ＝６４４にモノプロトン化イオンを与える。エレクトロスプレー条件は：スプレー電圧：４．７ｋＶ；キャピラリー温度：２５０℃；キャピラリー電圧：９Ｖ；注入様式５μｌ／分であった。スペクトルはアセトニトリル：水５０：５０（容量／容量）の０．０１ｍｇ／ｍｌ溶液から記録した。

図１は、２５％の標準化衝突エネルギーを用いたｍ／ｚ＝６４４のモノプロトン化されたイオンのフラグメンテーション後のＧＥ８１１１２ファクターＡの典型的なＭＳ−ＭＳスペクトルを示す。ＧＥ８１１１２ファクターＡは、エレクトロスプレー供給源を付けたブルカーダルトニックス（ＢｒｕｋｅｒＤａｌｔｏｎｉｃｓ）のＡＰＥＸＩＩ、４．７Ｔｅｓｌａ分光計での実験において、ｍ／ｚ＝６４４．２１８６でモノプロトン化イオンの正確な質量を与える。ＦＴＭＳ条件は：エレクトロスプレー：分析源（ＡｎａｌｙｔｉｃａＳｏｕｒｃｅ）、オフ軸スプレー（ｏｆｆＡｘｉｓＳｐｒａｙ）、６０μｌ／時間；乾燥ガス２００℃；キャピラリー電圧：７０Ｖ；スキマー（Ｓｋｉｍｍｅｒ）電圧：１０Ｖ；蓄積（Ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ）：４０スキャン；ブロードバンド様式（ＢｒｏａｄＢａｎｄＭｏｄｅ）：解像（Ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ）２０’０００。
Ｂ）赤外分光学
ＧＥ８１１１２ファクターＡの赤外スペクトルを図２に示す。スペクトルはＩＦＳ−４８フーリエ変換分光計を用いてヌジョール（ｎｕｊｏｌｍｕｌｌ）として記録した。以下の吸収主要バンド（ｃｍ^−１）が観察された：３３５６；２９５６；２８５５；２２５６；２１２８；１６６３；１５９６；１４５５；１３７８；１３４５；１１２３；１０５０；１０２６；１００２；８２５；７６４。
Ｃ）^１Ｈ−ＮＭＲおよび^１３Ｃ−ＮＭＲ
ＧＥ８１１１２ファクターＡの６００ＭＨｚの^１Ｈ−ＮＭＲスペクトル（図３）および１５０ＭＨｚの^１３Ｃ−ＮＭＲ（図４）を、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）添加後にＤＭＳＯ−ｄ_６中で２５℃にて記録した。両スペクトルで、精製工程に由来するギ酸によるシグナルが検出された（^１Ｈ化学シフト８．１３および７．０７−７．２５ｐｐｍ；^１３Ｃ化学シフト１６３．０ｐｐｍ）
表ＩＶおよび表ＶはファクターＡについて観察された^１Ｈおよび^１３ＣＮＭＲシグナルを報告する。

ＧＥ８１１１２ファクターＢの物理化学的特性
Ａ）質量分析法
ＧＥ８１１１２ファクターＢは、Ｔｈｅｒｍｏｆｉｎｎｉｇａｎのカリブレーションミックスを使用して、エレクトロスプレー供給源を付けたＴｈｅｒｍｏｆｉｎｎｉｇａｎＬＣＱデカ装置でのＭＳ実験において、ｍ／ｚ＝６５９にモノプロトン化イオンを与える。エレクトロスプレー条件は：スプレー電圧：４．７ｋＶ；キャピラリー温度：２５０℃；キャピラリー電圧：９Ｖ；注入様式５μｌ／分であった。スペクトルはアセトニトリル：水５０：５０（容量／容量）の０．０１ｍｇ／ｍｌ溶液から記録した。

図５は、２８％の標準化衝突エネルギーを用いたｍ／ｚ＝６５９のモノプロトン化されたイオンのフラグメンテーション後のＧＥ８１１１２ファクターＢの典型的なＭＳ−ＭＳスペクトルを示す。ＧＥ８１１１２ファクターＢは、エレクトロスプレー供給源を付けたブルカーダルトニックスのＡＰＥＸＩＩ、４．７Ｔｅｓｌａ分光計での実験において、ｍ／ｚ＝６５９．２２９５でモノプロトン化イオンの正確な質量を与える。ＦＴＭＳ条件は：エレクトロスプレー：分析源、オフ軸スプレー、６０μｌ／時間；乾燥ガス２００℃；キャピラリー電圧：７０Ｖ；スキマー電圧：１０Ｖ；蓄積：４０スキャン；ブロードバンド様式；解像２０’０００。
Ｂ）赤外分光学
ＧＥ８１１１２ファクターＢの赤外スペクトルを図６に示す。スペクトルはＩＦＳ−４８フーリエ変換分光計を用いてＫＢｒで記録した。以下の吸収主要バンド（ｃｍ^−１）が観察された：３３５９；２９５８；２８５２；２２５８；２１２９；１６８１；１５９１；１４５０；１３８５；１３４７；１１２２；１０７２；１０２５；９９８；７６５。
Ｃ）^１Ｈ−ＮＭＲおよび^１３Ｃ−ＮＭＲ
ＧＥ８１１１２ファクターＢの６００ＭＨｚの^１Ｈ−ＮＭＲスペクトル（図７）および１５０ＭＨｚの^１３Ｃ−ＮＭＲスペクトル（図８）を、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）添加後にＤＭＳＯ−ｄ_６中で２５℃にて記録した。両スペクトルで、精製工程に由来するギ酸によるシグナルが検出された（^１Ｈ化学シフト８．１３および７．０７−７．２５ｐｐｍ；^１３Ｃ化学シフト１６３．０ｐｐｍ）
表ＶＩおよび表ＶＩＩはファクターＢについて観察された^１Ｈおよび^１３ＣＮＭＲシグナルを報告する。

ＧＥ８１１１２ファクターＢ１の物理化学的特性
Ａ）質量分析法
ＧＥ８１１１２ファクターＢ１は、Ｔｈｅｒｍｏｆｉｎｎｉｇａｎのカリブレーションミックスを使用して、エレクトロスプレー供給源を付けたＴｈｅｒｍｏｆｉｎｎｉｇａｎＬＣＱデカ装置でのＭＳ実験において、ｍ／ｚ＝６５８にモノプロトン化イオンを与える。エレクトロスプレー条件は：スプレー電圧：４．７ｋＶ；キャピラリー温度：２５０℃；キャピラリー電圧：９Ｖ；注入様式５μｌ／分であった。スペクトルはアセトニトリル：水５０：５０（容量／容量）の０．０１ｍｇ／ｍｌ溶液から記録した。

図９は、２５％の標準化衝突エネルギーを用いたｍ／ｚ＝６５８のモノプロトン化されたイオンのフラグメンテーション後のＧＥ８１１１２ファクターＢ１の典型的なＭＳ−ＭＳスペクトルを示す。

ＧＥ８１１１２ファクターＢ１は、エレクトロスプレー供給源を付けたブルカーダルトニックスのＡＰＥＸＩＩ、４．７Ｔｅｓｌａ分光計での実験において、ｍ／ｚ＝６５８．２４５９にモノプロトン化イオンの正確な質量を与える。ＦＴＭＳ条件は：エレクトロスプレー：分析源、オフ軸スプレー、６０μｌ／時間；乾燥ガス２００℃；キャピラリー電圧：７０Ｖ；スキマー電圧：１０Ｖ；蓄積：４０スキャン；ブロードバンド様式；解像２０’０００。
Ｂ）^１Ｈ−ＮＭＲおよび^１３Ｃ−ＮＭＲ
ＧＥ８１１１２ファクターＢ１の６００ＭＨｚの^１Ｈ−ＮＭＲスペクトル（図１０）および１５０ＭＨｚの^１３Ｃ−ＮＭＲスペクトル（図１１）を２５℃にてＤＭＳＯ−ｄ_６中で記録した。両スペクトルで、精製工程に由来するギ酸によるシグナルが検出された（^１Ｈ化学シフト８．３２ｐｐｍ；^１３Ｃ化学シフト１６５．２８ｐｐｍ）
表ＶＩＩＩおよび表ＩＸはファクターＢ１について観察された^１Ｈおよび^１３ＣＮＭＲシグナルを報告する。

生物学的活性
ＧＥ８１１１２ファクターＡ、ＢおよびＢ１の抗微生物活性は、クリニカルラボラトリースタンダードのための国家委員会（ＴｈｅＮａｔｉｏｎａｌＣｏｍｍｉｔｔｅｅｆｏｒＣｌｉｎｉｃａｌＬａｂｏｒａｔｏｒｙＳｔａｎｄａｒｄｓ）（好気的に成長する細菌の抗微生物感受性試験の希釈法（ＭｅｔｈｏｄｓｆｏｒＤｉｌｕｔｉｏｎＡｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌＳｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙＴｅｓｔｆｏｒＢａｃｔｅｒｉａｔｈａｔＧｒｏｗＡｅｒｏｂｉｃａｌｌｙ）−第３版；認可された標準。ＮＣＣＬＳ文書Ｍ７−Ａ３第１３巻２５号）に従い標準型のＵ底９６ウェルプレートを用いたミクロ希釈法を使用することにより測定した。結果を表１０に報告する。

使用した菌株は臨床的な単離物またはアメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ）からのものであった。ＧＥ８１１１２ファクターをＤＭＳＯに溶解した；この溶液をさらに蒸留水で希釈した。

使用した培地は、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ）、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓａｕｒｅｕｓ）、モラクセーラカタラーリス（Ｍｏｒａｘｅｌｌａｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ）、エンテロコッカスフェカリス（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓｆａｅｃａｌｉｓ）にはカチオン調整ＭｕｅｌｌｅｒＨｉｎｔｏｎブロス（ＣＡＭＨＢ）；Ａ型溶連菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓｐｙｏｇｅｎｅｓ）、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）にはＴｏｄｄＨｅｗｉｔｔブロス（ＴＨＢ）；抗生物質培地Ｎ゜３（ＡＭ３）および基本培地ＤａｖｉｓＭｉｎｇｉｏｌｉブロス＋２（重量／容量）％グルコース＋１００μｇ／ｍｌのアスパラギン（ＭＭ）、枯草菌（Ｂａｃｈｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓ）；大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ）にはＤａｖｉｓＭｉｎｇｉｏｌｉブロス＋２（重量／容量）％グルコース（ＭＭ）；カンジダアルビカンス（Ｃｎｄｉｄａａｌｂｉｃａｎｓ）にはＲＰＭＩ１６４０（ＲＰＭＩ）および最少４０＋０．１％ビタミン（ＭＭ）であった。他に示さない限り、示した接種は１０^４ＣＦＵ／ｍｌであった。すべての菌株を３５℃にて空気中でインキューベーションした。インキューベーション時間は１８〜２４時間であった。視覚による読み取りをインキューベーション後に行い、そしてＭＩＣは試験した微生物の成長を完全に阻害したより低い濃度と定めた。

ＧＥ８１１１２ファクターＡ、ＢおよびＢ１は１〜２μｇ／ｍｌの範囲のＭＩＣでモラクセーラカタラーリス（Ｍｏｒａｘｅｌｌａｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ）の成長を阻害する。使用した菌株は臨床的単離物である。

ＧＥ８１１１２ファクターＡ、ＢおよびＢ１は、臨床的単離物である肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）に対して周辺活性（ＭＩＣ６４μｇ／ｍｌ）も示す。さらにファクターＡおよびＢはバンコマイシン（ＶａｎＡ）に耐性のエンテロコッカスフェカリス（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓｆａｅｃａｌｉｓ）に対して３２μｇ／ｍｌのＭＩＣを有する一方、ファクターＢ１は５１２μｇ／ｍｌの濃度まで活性ではない。

Ｍ．カタラーリス（ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ）および肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）はヒトの重要な病原菌であると認識されている。それらは呼吸器感染、特に小児においては中耳炎そして老人には下部呼吸器感染の一般的原因である。最近、Ｍ．カタラーリス（ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ）および肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）は呼吸器の最も多い病原菌として認められた（Ｍ．Ｃ．ＥｎｒｉｇｈｔａｎｄＨ．Ｍｃｋｅｎｚｙ、モラクセーラ（ブランハメーラ）カタラーリス−再発見された病原菌の臨床および分子的観点（Ｍｏｒａｘｅｌｌａ（Ｂｒａｎｈａｍｅｌｌａ）ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ−Ｃｌｉｎｉｃａｌａｎｄｍｏｌｅｃｕｌａｒａｓｐｅｃｔｏｆａｒｅｄｉｓｃｏｖｅｒｅｄｐａｔｈｏｇｅｎ）、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．４６，３６０−７１，１９９７）。

バンコマイシン耐性腸球菌（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｉ）（ＶＲＥ）は、重篤なヒト感染（心内膜炎、髄膜炎および敗血症のような）の原因である病院で獲得される重要な病原菌として出現しており、増加している治療的難題を提示している（Ｙ．Ｃｅｔｉｎｋａｙａ、，Ｐ．Ｆａｌｋ、Ｃ．Ｇ．Ｍａｙｈａｌｌ、バンコマイシン耐性腸球菌（Ｖａｎｃｏｍｙｃｉｎ−ｒｅｓｉｓｔａｎｔｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｉ）、Ｃｌｉｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｒｅｖ．１３，６８６−７０７，２０００；Ｌ．Ｂ．Ｒｉｃｅバンコマイシン耐性腸球菌の出現（Ｅｍｅｒｇｅｎｃｅｏｆｖａｎｃｏｍｙｃｉｎ−ｒｅｓｉｓｔａｎｔｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｉ）、Ｅｍｅｒｇ．Ｉｎｆｅｃ．Ｄｉｓ．７，１８３−７，２００１）。

ＧＥ８１１１２ファクターＡ、ＢおよびＢ１は、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）および枯草菌（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）が最少培地（ＭＭ）で培養された時、最終的にわずか１μｇ／ｍｌの大変低濃度でこれらの成長も阻害する。ファクターＡ、ＢおよびＢ１のＭＩＣは２５６〜５１２μｇ／ｍｌの範囲であるか、または同じ細菌がリッチ培地で成長した時よりも高い。

ＧＥ８１１１２ファクターＡ、ＢおよびＢ１はカンジダアルビカンス（Ｃｎｄｉｄａａｌｂｉｃａｎｓ）の成長を最少培養またはリッチ培地でも阻害しなかった。

ＧＥ８１１１２ファクターＡ、ＢおよびＢ１の大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）および枯草菌（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）のような細菌対Ｃ．アルビカンス（ａｌｂｉｃａｎｓ）のような真核生物に対する異なる挙動は、ＧＥ８１１１２化合物の作用メカニズムが原核生物に特異的であることを示唆している。

抗微生物療法の最近の傾向に従い、広いスペクトル活性をもつ作用物質を、単離された病原体（１種または複数）に対して選択的に活性であるより狭い抗微生物スペクトルの作用物質（１つまたは複数）に代えることは、耐性を発生させるための選択圧を下げるので好ましい（Ｊ．Ｃ．Ｇｙｓｓｅｎｓ：「抗微生物剤使用の品質尺度（ＱｕａｌｉｔｙＭｅａｓｕｒｅｏｆＡｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌＤｒｕｇＵｓｅ）」、Ｉｎｔ．Ｊ．ＡｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉｏｌＡｇｅｎｔｓ，１７，２００１，９−１９で；Ｊ．Ｃｈｏｐｒａ「抗バクテリア剤の調査および開発（ＲｅｓｅａｒｃｈａｎｄＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆＡｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌＡｇｅｎｔｓ）」、ＣｕｒｒｅｎｔＯｐｉｎｉｏｎｉｎＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，１９８８，１，４９５−５０１）。したがって本発明のＧＥ８１１１２化合物はＭ．カタラーリス（ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ）の呼吸器感染の処置に選択的な薬剤として使用するために特に適している。

本発明の化合物は製薬学的に許容され得る組成物として、そのままで、または製薬学的に許容され得る担体との混合物として投与することができ、そしてまたペニシリン、セファロスポリン、アミノグリコシドおよび糖ペプチドのような他の抗微生物剤と一緒に投与することもできる。このような併用療法（ｃｏｎｊｕｎｃｔｉｖｅｔｈｅｒａｐｙ）には、最初に投与した化合物の治療効果が完全に消失しないうちに続いて投与するように、活性化合物の順次、同時および別れた投与を含む。

したがって本発明の化合物は薬剤として使用することができ；個々のファクターＡ、ＢおよびＢ１を単独で、または任意の比率のそれら２以上の混合物として使用することができる。該混合物は予め定めた量の２以上のファクターを混合することにより得ることができる。あるいはファクターの混合物は、上記の方法によるストレプトミセス種（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｓｐ．）ＤＳＭＺ１４３８６の発酵産物の単離から直接得ることができる。

好ましくは本発明の化合物を、当該技術分野でそれ自体は知られている、および参考書に報告されている手順に従い非経口および／または経口および／または局所投与に適する製剤に配合する。

抗生物質に感受性の微生物が関与する任意の感染の処置におけるｉ．ｖ．投与については、例えば製薬学的製剤は注入用の滅菌水中のポリプロピレングリコールまたはジメチルアセトアミドのような適当な可溶化剤、およびポリオキシエチレンソルビタンモノ−オレートまたはポリエトキシル化ヒマシ油のような表面活性剤を含む水中にある。好ましくは注入用の製剤は７±０．５の範囲のｐＨを有するべきである。必要ならば、適当な緩衝化剤を用いて調製物のｐＨを調整することが薦められる。リン酸塩は緩衝化剤として都合よく使用することができる。

あるいは有効成分を再構成のための凍結乾燥粉末として調製してもよい。任意に必要ならば通常の凍結乾燥補助剤を加えて、粉末状態の凍結乾燥物質を得ることができる。

抗生物質は経口投与用にカプセル、錠剤または水溶液もしくは懸濁液（例えばシロップ）のような適切な製薬学的形態で使用され、あるいは局所適用のために通常のクリームまたはゼリーに、あるいは吸入療法に適する液体製剤に包含され得る。

有効成分の投薬用量は患者の種類、年齢および状態、投与に選択された具体的な有効成分および製剤、投与計画等を含む多くの因子に依存する。一般に、有効な抗微生物投薬用量は、単回の単位剤形で使用される。反復適用／投与、例えば１日に２〜６回が一般に好適である。有効な投薬用量は一般に０．５〜５０ｍｇ／ｋｇ体重／日の範囲である。好適な局所調製物は、１％〜１０％の本発明の化合物を含有する軟膏である。

いずれにしても担当医師が所定の状況にある所定の患者に最適な投薬用量を決定することができる。

以下の実施例は、本発明を限定することなくさらに具体的に説明する。

ストレプトミセス種（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｓｐ．）ＤＳＭＺ１４３８６の発酵および収穫したブロスからのＧＥ８１１１２化合物の回収
バイアル中に−８０℃で保存した種培養物を、以下の組成（ｇ／リットル）；グルコース２０、肉エキス５、酵母エキス５、ペプトン５、加水分解カゼイン３およびＮａＣｌ１．５を有する１００ｍｌのＶ６培地（Ｖ６）を含む５００ｍｌのエルレンマイヤーフラスコに接種するために使用した。培地は蒸留水で調製し、そしてｐＨをＮａＯＨで７．５に調整した後、１２０℃で２０分間滅菌した。接種したフラスコは４０〜４８時間、２８℃で２００ｒｐｍのロータリーシェーカー上でインキューベーションし、そして次いで３リットルのＶ６培地を含有する４リットルのバイオリアクターに接種するために使用した。培養は最初の３０時間は２７℃の温度で成長させ、そして次に後の１８時間を２４℃で接種時間まで成長させた。撹拌は０．５容量／容量／分の通気で７００ｒｐｍに維持した。培養物（１．５リットル）は、以下の組成（ｇ／リットル）；グリセロール３０、ダイズ粉１５、炭酸カルシウム５および塩化ナトリウム２を有する２００リットルの生産培地を含有する３００リットルの発酵槽に接種した。培地は脱イオン水で調製し、そしてｐＨはＮａＯＨで７．３に調整した。３０ｍｌのＨｏｄａｇＡＦＭ−５を消泡剤として加えた。この培養物を２８℃にて６２時間発酵し、最初の１８時間は６０リットル／分の通気で、そして次いで１００リットル／分（０．５容量／容量／分）に収穫時間まで上げた。撹拌は１８０ｒｐｍであった。

次いで収穫したブロスは２００リットルに蒸留水で希釈し、そしてＨｙｆｌｏ濾過剤（ａｉｄ）を加えた後に濾過した。菌糸を捨て、そして濾液は約６００ｍｌの３．２５ＭＨＣｌを加えることによりｐＨ３．５とした。次いでＧＥ８１１１２抗生物質混合物は２．５リットルのＤｏｗｅｘ５０Ｗｘ２カチオン交換樹脂に酸形で吸着させた（ダウケミカル社）。バッチ式で一晩撹拌した後、樹脂を濾過により回収し、そしてブロスを捨てた。２回の発酵物を上記のように平行して処理し、そして次に個々の処理からのＤｏｗｅｘ樹脂をプールした。樹脂（５リットル）をカラム（１２．５ｃｍ直径；４５ｃｍベット高）に乗せ、そして９０ｍｌ／分の流速で６リットルの２０ｍＭリン酸ナトリウムｐＨ３．５バッファー；次いで１０リットルの２０ｍＭリン酸ナトリウムｐＨ３．５バッファー：メタノール８：２（容量／容量）混合物で洗浄した。次いで溶出はリン酸でｐＨ１０に緩衝化した２５７ｍＭのアンモニアで行った。１リットルの画分を集め、これをリン酸を添加することにより即座に約ｐＨ６とした。各画分の抗生物質の含量はバイオアッセイ、すなわち最少培地（ＭＭ）で培養した大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）および枯草菌（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）の成長に対する阻害、および実施例２に記載する方法に従う分析用ＨＰＬＣにより評価した。Ｄｏｗｅｘ樹脂から溶出した画分５〜１０をプールして、ＧＥ８１１１２化合物混合物が濃縮された５．８リットルの溶液を得た。この溶液のサンプル（５０ｍｌ）を真空下で濃縮し、そして次いで凍結乾燥させて１．４８ｇｒの粗ＧＥ８１１１２化合物調製物を得た。

ＧＥ８１１１２ファクターＡ、Ｂ１およびＢの単離および精製
実施例１で得た溶液を、１．２リットルのポリスチレン樹脂ＨＰ２０（三菱化学社）とバッチ様式で一晩撹拌した。次いで樹脂を濾過により回収し、そして７．５ｃｍ直径／２７ｃｍのベット高カラムに乗せた。次いでカラムは４０ｍｌ／分の流速で６リットルの１：９（容量／容量）メタノール：蒸留水で、次いで４リットルの３：７（容量／容量）混合物で溶出した。１リットルの画分を集め、そしてＨＰＬＣにより分析した。最初の３つの画分はＧＥ８１１１２ファクターＡが濃縮されたＧＥ８１１１２ファクターの混合物が含まれ、そしてこれをプールした。以下の３つの画分はファクターＢ１およびＢが濃縮され、そしてこれらもプールした。２つのプールを真空下で濃縮して小容量とし、そして次に凍結乾燥させてファクターＡおよびファクターＢ１に加えてＢが濃縮されたそれぞれ３．８ｇｒおよび１．７ｇｒの固体を得た。

次いで個々の純粋なファクターは、調製用ＨＰＬＣ（島津−ＬＣ８Ａ）によりＨｉｂａｒＬｉｃｈｒｏｓｏｒｂ（メルク）２５×２５０ｍｍカラムＲＰ８（７μｍ粒子サイズ）で得、これは３．５ｍｌ／分の流速で４０ｍＭギ酸アンモニウム（ギ酸でｐＨ４．５にした）で溶出した。約１００ｍｇの上記の抗生物質調製物を３５０μｍの溶出相に溶解し、そして１回のクロマトグラフィー実験毎に処理した。ファクターＡ、Ｂ１およびＢは典型的にはそれぞれ約９．５、１２．４および１３．４分後に溶出した。均一な抗生物質の内容物を示す反復クロマトグラフィー実験の画分をプールし、そして真空下で濃縮して水残渣を得た。次いで溶液を凍結乾燥させ、４０ｍｌの蒸留水に再溶解し、そして再度、凍結乾燥させてそれぞれ１１６、１３、１０ｍｇの抗生物質ＧＥ８１１１２ファクターＡ、Ｂ１およびＢを得た。

ＨＰＬＣ分析は、ＳＰＤ−Ｍ１０Ａダイオードアレイ検出器およびＳｉｌ−９Ａ自動注入器を備えた島津ＬＣ１０−ＡＳ装置で行った。クロマトグラフィーカラムはオールテックから購入した“Ａｌｔｉｍａ”ＲＰ１８、５μｍ、２５０ｘ４．６ｍｍｉ．ｄ．であった。イソクラティック溶出は１ｍｌ／分の流速で４０ｍＭギ酸アンモニウムバッファー（ギ酸の添加によりｐＨ４．５にした）で行った。ＵＶ検出は２３０ｎｍであった。

３つの画分を上記の分析用ＨＰＬＣ条件下で試験し、そして以下の保持時間を示した：ファクターＡ、１４．１分、ファクターＢ１、１８．４分およびファクターＢ２１．６分。

２５％の標準化衝突エネルギーを用いたｍ／ｚ＝６４４のモノプロトン化したイオンのフラグメント化後の抗生物質ＧＥ８１１１２ファクターＡのＭＳＭＳスペクトルを表す。ヌジョール（ｎｕｊｏｌｍｕｌｌ）における抗生物質ＧＥ８１１１２ファクターＡのＩ．Ｒ．吸収スペクトルを表す。ＤＭＳＯ−ｄ_６およびＴＦＡ（数滴）中で６００ＭＨｚで測定した抗生物質ＧＥ８１１１２ファクターＡの^１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを表す。ＤＭＳＯ−ｄ_６およびＴＦＡ（数滴）中で１５０ＭＨｚでの抗生物質ＧＥ８１１１２ファクターＡのプロトン分断^１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルを表す。２８％の標準化衝突エネルギーを用いたｍ／ｚ＝６５９のモノプロトン化したイオンのフラグメント化後の抗生物質ＧＥ８１１１２ファクターＢのＭｓＭｓスペクトルを表す。ＫＢｒ中で抗生物質ＧＥ８１１１２ファクターＢのＩ．Ｒ．吸収スペクトルを表す。ＤＭＳＯ−ｄ_６およびＴＦＡ（数滴）中で６００ＭＨｚで測定した抗生物質ＧＥ８１１１２ファクターＢの^１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを表す。ＤＭＳＯ−ｄ_６およびＴＦＡ（数滴）中で１５０ＭＨｚでの抗生物質ＧＥ８１１１２ファクターＢのプロトン分断^１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルを表す。２５％の標準化衝突エネルギーを用いたｍ／ｚ＝６５８のモノプロトン化したイオンのフラグメント化後の抗生物質ＧＥ８１１１２ファクターＢ１のＭｓＭｓスペクトルを表す。ＤＭＳＯ−ｄ_６中で６００ＭＨｚで測定した抗生物質ＧＥ８１１１２ファクターＢ１の^１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを表す。ＤＭＳＯ−ｄ_６中で１５０ＭＨｚでの抗生物質ＧＥ８１１１２ファクターＢ１のプロトン分断^１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルを表す。

Claims

Ａ）スプレー電圧：４．７ｋＶ；キャピラリー温度：２５０℃；キャピラリー電圧：９Ｖ；注入様式５μｌ／分のエレクトロスプレー条件下にて、ＴｈｅｒｍｏｆｉｎｎｉｇａｎＬＣＱデカ装置上でアセトニトリル：水５０：５０中の０．０１ｍｇ／ｍｌ溶液から記録される６４４ｍ／ｚにモノプロトン化イオンを与える質量スペクトル
Ｂ）３３５６；２９５６；２８５５；２２５６；２１２８；１６６３；１５９６；１４５５；１３７８；１３４５；１１２３；１０５０；１０２６；１００２；８２５；７６４の主バンド（ｃｍ^−１）を示すＩＦＳ−４８フーリエ変換分光計を用いてヌジョールとして記録される赤外スペクトル（図２）
Ｃ）ＤＭＳＯ−ｄ_６およびトリフルオロ酢酸（数滴）中にて２５℃で６００ＭＨｚで記録される以下の^１Ｈシグナル：

を示す^１Ｈ−ＮＭＲスペクトル（図３）
Ｄ）ＤＭＳＯ−ｄ_６およびトリフルオロ酢酸（数滴）中にて５℃で１５０ＭＨｚで記録される以下の^１３Ｃシグナル

を示す^１３Ｃ−ＮＭＲスペクトル（図４）
Ｅ）“Ａｌｔｉｍａ”ＲＰ１８、５μｍ、２５０×４．６ｍｍｉ．ｄカラムを備えた分析用ＨＰＬＣ島津ＬＣ１０−ＡＳ；１ｍｌ／分流速、ギ酸の添加によりｐＨ４．５とした４０ｍＭギ酸アンモニウムバッファーを用いて行うイソクラティック溶出；２３０ｎｍでのＵＶ検出を使用することにより測定される保持時間１４．１分
の特性を有する抗生物質ＧＥ８１１１２ファクターＡ。
Ａ）スプレー電圧：４．７ｋＶ；キャピラリー温度：２５０℃；キャピラリー電圧：９Ｖ；注入様式５μｌ／分のエレクトロスプレー条件下にて、ＴｈｅｒｍｏｆｉｎｎｉｇａｎＬＣＱデカ装置上でアセトニトリル：水５０：５０中の０．０１ｍｇ／ｍｌ溶液から記録される６５９ｍ／ｚにモノプロトン化イオンを与える質量スペクトル
Ｂ）３３５９；２９５８；２８５２；２２５８；２１２９；１６８１；１５９１；１４５０；１３８５；１３４７；１１２２；１０７２；１０２５；９９８；７６５の主バンド（ｃｍ^−１）を示すＩＦＳ−４８フーリエ変換分光計を用いて記録されるＫＢｒ中での赤外スペクトル（図６）
Ｃ）ＤＭＳＯ−ｄ_６およびトリフルオロ酢酸（数滴）中にて２５℃で６００ＭＨｚで記録される以下の^１Ｈシグナル：

を示す^１Ｈ−ＮＭＲスペクトル（図７）
Ｄ）ＤＭＳＯ−ｄ６およびトリフルオロ酢酸（数滴）中にて２５℃で１５０ＭＨｚで記録される以下の^１３Ｃシグナル

を示す^１３Ｃ−ＮＭＲスペクトル（図８）
Ｅ）“Ａｌｔｉｍａ”ＲＰ１８、５μｍ、２５０×４．６ｍｍｉ．ｄカラムを備えた分析用ＨＰＬＣ島津ＬＣ１０−ＡＳ；１ｍｌ／分流速、ギ酸の添加によりｐＨ４．５とした４０ｍＭギ酸アンモニウムバッファーを用いて行うイソクラティック溶出；２３０ｎｍでのＵＶ検出を使用することにより測定される保持時間２１．６分
の特性を有する抗生物質ＧＥ８１１１２ファクターＢ。
Ａ）スプレー電圧：４７ｋＶ；キャピラリー温度：２５０℃；キャピラリー電圧：９Ｖ；注入様式５ｌ／分のエレクトロスプレー条件下にて、ＴｈｅｒｍｏｆｉｎｎｉｇａｎＬＣＱデカ装置上でアセトニトリル：水５０：５０中の０．０１ｍｇ／ｍｌ溶液から記録される６５８ｍ／ｚにモノプロトン化イオンを与える質量スペクトル
Ｂ）ＤＭＳＯ−ｄ_６中にて２５℃で６００ＭＨで記録される以下の^１Ｈシグナル：

を示すＨ−ＮＭＲスペクトル（図１０）
Ｃ）ＤＭＳＯ−ｄ_６中にて２５℃で１５０ＭＨｚで記録される以下の^１３Ｃシグナル：

を示す^１３Ｃ−ＮＭＲスペクトル（図１１）
Ｄ）“Ａｌｔｉｍａ”ＲＰ１８、５μｍ、２５０×４．６ｍｍｉ．ｄカラムを備えた分析用ＨＰＬＣ島津ＬＣ１０−ＡＳ；１ｍｌ／分流速、ギ酸の添加によりｐＨ４．５とした４０ｍＭギ酸アンモニウムバッファーを用いて行うイソクラティック溶出；２３０ｎｍでのＵＶ検出を使用することにより測定される保持時間１８．４分、
の特性を有する抗生物質ＧＥ８１１１２ファクターＢ１。
請求項１ないし３のいずれかに記載のＧＥ８１１１２抗生物質を生産する方法であって；
−炭素、窒素および無機塩の同化可能な供給源を含んでなる水性栄養培地中で好気的条件下で、ストレプトミセス種（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｓｐ．）ＤＳＭＺ１４３８６またはＧＥ８１１１２抗生物質を生産する遺伝的能力を維持しているその変種もしくは突然変異体を培養し；
−生成した抗生物質混合物を発酵ブロスから回収し；
−回収した抗生物質混合物を精製し、そして３種の抗生物質ＧＥ８１１１２ファクターＡ、ＢおよびＢ１を分離する、
ことを含んでなる上記生産方法。
任意の比率の請求項１ないし３に記載の２以上の抗生物質ＧＥ８１１１２ファクターおよび製薬学的に許容され得るそれらの塩の混合物。
上記の抗生物質ＧＥ８１１１２ファクター混合物がストレプトミセス種（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｓｐ．）ＤＳＭＺ１４３８６または該ＧＥ８１１１２抗生物質を生産する遺伝的能力を維持するそのＧＥ８１１１２抗生物質生産変種もしくは突然変異体の発酵ブロスから単離されたものである、請求項５に記載の任意の比率の抗生物質ＧＥ８１１１２ファクターの混合物。
請求項６に記載の抗生物質ＧＥ８１１１２ファクターの混合物を生産する方法であって：
−ストレプトミセス種（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｓｐ．）ＤＳＭＺ１４３８６または該ＧＥ８１１１２抗生物質を生産する遺伝的能力を維持しているその変種もしくは突然変異体を培養し；
−生成したＧＥ８１１１２ファクターの抗生物質混合物を培養ブロスから回収し；そして−抗生物質ＧＥ８１１１２ファクターの該混合物を精製する、
ことを含んでなる上記生産方法。
ストレプトミセス種（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｓｐ．）ＤＳＭＺ１４３８６、またはＧＥ８１１１２抗生物質を生産する遺伝的能力を維持しているその変種もしくは突然変異体を前培養する、請求項４および７のいずれかに記載する方法。
回収がイオン交換樹脂で行われ、そして精製が吸着支持体、好ましくはポリスチレンまたは混合ポリスチレン−ジビニルベンゼン樹脂で行われる、請求項４および７のいずれかに記載の方法。
抗生物質ＧＥ８１１１２ファクターＡ、ＢおよびＢ１の分離がクロマトグラフィー技法により行われる、請求項４に記載の方法。
クロマトグラフィー技法が調製用ＨＰＬＣ技法である、請求項１０に記載の方法。
請求項１ないし３および５のいずれかに記載の抗生物質を含んでなる製薬学的組成物。
製薬学的に許容されうる担体を含んでなる請求項１２に記載の製薬学的組成物。
バクテリアの感染を処置する薬剤を製造するための請求項１ないし３および５のいずれかに記載の抗生物質の使用。