JP2005508173A - ２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４を使用する血液障害を処置するための方法および組成物 - Google Patents

２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４を使用する血液障害を処置するための方法および組成物 Download PDF

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Abstract

本発明は、血液障害の診断および処置のための方法に関する。特に、本発明は、血液障害感覚に関連する組織において、正常でのそれらの発現もしくは非血液障害状態での発現に対して、および／または血液障害に関連する処置に対して、２３２遺伝子、２０５９遺伝子、１０６３０遺伝子、１２８４８遺伝子、１３８７５遺伝子、１４３９５遺伝子、１４６１８遺伝子、１７６９２遺伝子または５８８７４遺伝子の差示的な発現を同定する。本発明は、種々の血液障害の診断的評価および予後診断、ならびにこのような状態についての素因を示す被験体を同定するための方法を記載する。本発明はまた、血液障害を調節し得る化合物を同定するための方法を提供する。本発明はまた、血液障害の処置として化合物を同定するための方法およびその化合物の治療用途を提供する。

Description

【技術分野】
【０００１】
本出願は、米国仮特許出願番号６０／３４７，９４９（２００１年１１月７日に出願）に対する優先権を主張し、この全体の内容は、本明細書中で参考として援用される。
【背景技術】
【０００２】
骨髄発達の調節に関与する標的は、主に、骨髄不全および骨髄機能不全、第２に毒性障害（ｔｏｘｉｃ ｉｎｓｕｌｔ）（最も特に化学治療誘導性血球減少症）の処置のための新規の治療アプローチを提供する。重篤なまだ対処されていないこの領域において必要な医療が存在し、現在利用可能なわずかな治療は組換えタンパク質であり、この組換えタンパク質は、系統分化の比較的後期で作用する。
【０００３】
造血（ｈｅｍａｔｏｐｏｅｔｉｃ）幹細胞が富化されたヒト起源およびマウス起源の骨髄集団ならびに骨髄ストローマ細胞集団は、前駆体集団の増殖および成熟に関与する遺伝子送達および標的に注釈のための物質の有用な供給源を提供する。種々の境遇下で培養され、インビボでヒトからか、またはインビボで動物モデルから単離された造血細胞は、血液障害に有用な新規な治療剤の同定を導く遺伝子発現分析のための原料物質の豊富な供給源を提供する。
【０００４】
本発明は、血液障害を有する患者の診断および処置のための方法および組成物を提供する。
【０００５】
本明細書中で使用される場合、「処置」は、疾患または障害、少なくとも１つの疾患または障害の症状あるいは疾患または障害に向かう素因を治癒（ｃｕｒｉｎｇ）する、治癒（ｈｅａｌｉｎｇ）する、緩和する、軽減する、変化させる、軽減する、回復する、改善するまたは影響する目的で、患者への治療剤の適用または投与、あるいは患者から単離された組織または細胞株への治療剤の適用または投与として規定され、患者は、疾患または障害、疾患または障害の症状あるいは疾患または障害に向かう素因を有する。治療剤としては、低分子、ペプチド、抗体、リボザイム、およびアンチセンスオリゴヌクレオチドが挙げられるが、これらに限定されない。代表的な分子は、本明細書中に記載される。
【０００６】
本明細書中で使用される場合、血液障害としては、赤血球関連障害が挙げられるが、これに限定されない。本明細書中で使用される場合、用語「赤血球関連障害」は、異常な（増大したかまたは欠損した）赤芽球増殖（例えば、赤白血病）および異常な（増大したかまたは欠損した）赤芽球分化（例えば、貧血）を含む障害を含む。赤血球関連障害としては、以下が挙げられる：貧血（例えば、薬物（化学療法）誘導性貧血、遺伝的な細胞膜異常に起因する溶血性貧血（例えば、遺伝性球状赤血球症、遺伝性楕円赤血球症および遺伝性熱変形赤血球症）；後天的な細胞膜欠損に起因する溶血性貧血（例えば、発作性夜間血色素尿症および有棘細胞貧血）；抗体反応によって引き起こされる溶血性貧血（例えば、ＲＢＣ抗原に対する抗体、またはＡＢＯ系、Ｌｅｗｉｓ系、Ｉｉ系、Ｒｈ系、Ｋｉｄｄ系、Ｄｕｆｆｙ系およびＫｅｌｌ系の抗原に対する抗体）；メトヘモグロビン血症；赤血球生成の不全（例えば、再生不良性貧血、赤芽球ろう、骨髄異形成症候群、鉄芽球性貧血および先天性異常赤血球生成貧血の結果としてのもの）；非溶血性障害における二次的貧血（例えば、化学療法、アルコール中毒症または肝臓疾患の結果としてのもの）；慢性疾患の貧血（例えば、慢性腎不全）；ならびに内分泌欠損疾患。
【０００７】
本発明のポリペプチドまたは核酸の活性または発現を調節する薬剤を使用して、貧血、特に、薬物誘導性貧血または癌治療、慢性腎不全、悪性疾患、成人性または若年性の慢性関節リウマチ、ヘモウロビン合成の障害、早熟およびＨＩＶ感染のジドブジン処置に関連する貧血を処置し得る。処置を受ける被験体は、さらに二次薬剤（例えば、エリスロポイエチン）でさらなる少なくとも１つの状態の症状まで処置される。処置のオーダーは、逆にされ得る。この２つの処置は、同時に投与され得る。処置の間のタイミングは、変化され得る。
【０００８】
本明細書中で使用される場合、用語「エリスロポイエチン」または「ＥＰＯ」は、腎臓において生産される糖タンパク質をいい、これは、赤血球生成（赤血球生成：ｅｒｙｔｈｒｏｇｅｎｅｓｉｓ）を刺激するのに原因である主要なホルモンである。ＥＰＯは、骨髄における拘束された（ｃｏｍｍｉｔｔｅｄ）赤血球先祖の分裂および分化を刺激する。正常な血漿エリスロポイエチンレベルは、０．０１〜０．０３単位／ｍＬの範囲であり、そして低酸素症または貧血の間、１００〜１，０００倍まで上昇する。ＧｒａｂｅｒおよびＫｒａｎｔｚ，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｍｅｄ．２９：５１（１９７８）；ＥｓｃｈｂａｃｈおよびＡｄａｍｓｏｎ，Ｋｉｄｎｅｙ Ｉｎｔｌ．２８：１（１９８５）。組換えヒトエリスロポイエチン（ｒＨｕＥｐｏまたはエポテイン（ｅｐｏｉｅｔｉｎ）α）は、ＥＰＯＧＥＮＲ．ＲＴＭ．（エポテインα、組換えヒトエリスロポイエチン）（Ａｍｇｅｎ Ｉｎｃ．，Ｔｈｏｕｓａｎｄ Ｏａｋｓ，Ｃａｌｉｆ．）またはＰＲＯＣＲＩＴ．ＲＴＭ．（エポテインα、組換えヒトエリスロポイエチン）（Ｏｒｔｈｏ Ｂｉｏｔｅｃｈ Ｉｎｃ．，Ｒａｒｉｔａｎ，Ｎ．Ｊ．）として市販される。
【０００９】
赤血球関連障害の別の例は、赤血球増加症である。赤血球造血症（過剰および／または異所性のエリスロポイエチン生成によって引き起こされる赤血球過剰生産の障害）は、癌（例えば、腎細胞癌、悪性肝細胞癌および中枢神経系癌）によって引き起こされ得る。赤血球増加症に関連する疾患はとしては、真性赤血球増加症、二次赤血球増加症および相対的赤血球増加症が挙げられる。
【００１０】
本明細書中で使用される場合、血液障害は、Ｂ細胞に関与する障害を含み、これらとしては、前駆体Ｂ細胞新生物（例えば、リンパ芽球性白血病／リンパ芽球性リンパ腫）が挙げられるが、これに限定されない。末梢Ｂ細胞新生物としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：慢性リンパ性白血病／小リンパ球性リンパ種、濾胞性リンパ腫、びまん性大Ｂ細胞リンパ腫（ｄｉｆｆｕｓｅ ｌａｒｇｅ Ｂ−ｃｅｌｌ ｌｙｍｐｈｏｍａ）、バーキットリンパ腫、プラスマ細胞新生物、多発性骨髄腫および関連要素、リンパプラスマ細胞リンパ腫（ｌｙｍｐｈｏｐｌａｓｍａｃｙｔｉｃ ｌｙｍｐｈｏｍａ）（ヴァルデンストレームマクログロブリン血症）、成熟細胞性リンパ腫、辺縁層リンパ腫（ＭＡＬＴｏｍａ）およびヘアリーセル白血病。
【００１１】
本明細書中で使用される場合、血液障害は、骨髄の障害を含み、これらとしては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：造血性（ｈｅｍａｔｏｐｏｅｉｔｉｃ）幹細胞に関与する疾患；拘束されたリンパ先祖細胞；Ｂ細胞およびＴ細胞を含むリンパ細胞；拘束された骨髄様先祖（単球、顆粒球および巨核球を含む）；および拘束された赤血球先祖。これらとしては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：白血病（Ｂ−リンパ性白血病、Ｔ−リンパ性白血病、未分化型白血病を含む）；赤白血病、巨核芽球白血病、単球［白血病は、分化状態であるか分化状態でない］；慢性および急性リンパ芽球性白血病、慢性および急性リンパ性白血病、慢性および急性骨髄性白血病、リンパ腫、骨髄異形成症候群、慢性および急性骨髄性白血病、骨髄単球性白血病；慢性および急性骨髄芽球性白血病、慢性および急性骨髄性白血病、慢性および急性の前骨髄性白血病、慢性および急性の骨髄球白血病、単球マクロファージ直系の血液悪性疾患（例えば、若年性慢性骨髄性白血病）；二次ＡＭＬ、前駆体血液障害；不応性貧血；再生不良性貧血、反応性皮膚（ｒｅａｃｔｉｖｅ ｃｕｔａｎｅｏｕｓ）血管内皮細胞腫症、樹状細胞における改変された発現に関与する線維性障害、全身性硬化症、Ｅ−Ｍ症候群、流行性毒性油症候群（ｅｐｉｄｅｍｉｃ ｔｏｘｉｃ ｏｉｌｓｙｎｄｒｏｍｅ）；強皮症の好酸球性筋膜炎の限局性形態、ケロイドおよび線維性大腸症を含む障害；血管腫様悪性線維性組織球腫、癌（原発性の頭部および頚部の扁平上皮細胞癌を含む）；肉腫（カポージ肉腫を含む）；線維腺腫および葉状腫瘍（乳房線維腺腫を含む）；間質腫瘍；葉状腫瘍（組織球腫を含む）；赤芽球症；神経線維腫症；血管内皮の疾患；古い外傷における粒状の脱髄；神経膠症、血管原性水腫、脈管性疾患、アルツハイマー病およびパーキンソン病；Ｔ細胞リンパ腫；Ｂ細胞リンパ腫。
【００１２】
本明細書中で使用される場合、血液障害は、血小板障害を含み得、これらとしては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：減少した血小板の数に関する障害、血小板減少症（特発性血小板減少性紫斑病（急性特発性血小板減少性紫斑病を含む）、薬物誘導性血小板減少症、ＨＩＶ関連血小板減少症および血栓性細小血管症を含む）；血栓性血小板減少性紫斑病および溶血性尿毒症症候群。
【００１３】
血液障害はまた、血栓症を含み得る。血栓症は、血小板機能不全を生じ得る（例えば、心筋梗塞において見られる）、アンギナ、ハイパーテンシン、脂質障害；真性糖尿病；骨髄異形成症候群；骨髄増殖性症候群（真性赤血球増加症および血小板血症（ｔｈｏｍｂｏｃｙｔｈｅｍｉａ）を含む）；血栓性血小板減少性紫斑病；ＨＩＶ誘導性血小板障害（ＡＩＤＳ血小板減少症）；ヘパリン誘導性血小板減少症；血小板凝集／脱顆粒をもたらす壁細胞の改変／相互作用、血管内皮細胞活性化／損傷、単球／マクロファージの溢血および平滑筋細胞の増殖；自己免疫疾患（例えば、これらに限定されないが、脈管炎、抗リン脂質症候群、全身性エリテマトーデス）、炎症性疾患（例えば、これらに限定されないが、免疫活性化）；対宿主性移植片病、放射線誘導性過剰凝固（ｈｙｐｅｒｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎ）；遺伝性（常染色体優性または劣性）（例えば、限定されないが、タンパク質Ｃ／Ｓ、抗トロンビンＩＩＩ欠損およびＬｅｉｄｅｎ変異第Ｖ因子を含む凝固因子の経路）または後天性（例えば、限定されないが、凝固因子の自己免疫、癌関連異常調節（ｄｙｓｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ）および薬物誘導性異常調節）のいずれかの凝固因子の異常調節。
【００１４】
本明細書中で使用される場合、血液障害は、赤血球障害を含み得、これらとしては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：貧血（例えば、溶血性貧血（遺伝性球状赤血球症、赤血球酵素欠損：グルコース−６−ホスフェートデヒドロゲナーゼに起因する溶血性疾患を含む））欠損、鎌状赤血球疾患、セラサミア症候群、発作性夜間血色素尿症、免疫溶血性貧血、および外傷から赤血球を生じる溶血性貧血；ならびに減少した赤血球生成の貧血（巨赤芽球性貧血を含む）（例えば、ビタミンＢ１２欠損の貧血）：悪性貧血および葉酸欠損の貧血、鉄欠損貧血、慢性疾患の貧血、再生不良性貧血、赤芽球ろうおよび骨髄不全の他の形態。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【００１５】
本明細書中で使用される場合、血液学的障害としては、Ｔ細胞の障害が挙げられ得、これには、以下が挙げられるが、これらに限定されない：細胞媒介性過敏症（例えば、遅延型過敏症およびＴ細胞媒介性細胞傷害性）および移植拒絶；自己免疫疾患（例えば、全身性エリテマトーデス、シェーグレン症候群、全身性硬化症、炎症性ミオパシー、混合型結合組織疾患および結節性多発性動脈炎）および他の脈管炎（ｖａｓｃｕｌｉｔｉｄｅｓ）；免疫欠損症候群（原発性免疫欠損（例えば、胸腺発育不全、重症複合型免疫不全疾患およびＡＩＤＳ）が挙げられるが、これらに限定されない）；白血球減少症；白血球の反応性（炎症性）増殖（白血球増加症、急性非特異的リンパ節炎および慢性非特異的リンパ節炎が挙げられるが、これらに限定されない）；白血球の腫瘍性増殖（リンパ新生物（例えば、前駆体Ｔ細胞新生物（例えば、急性リンパ芽球性白血病／リンパ腫、末梢Ｔ細胞およびナチュラルキラー細胞の新生物）（これには、末梢Ｔ細胞リンパ腫、不特定の成体成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫、菌状息肉腫およびセザリー症候群が挙げられる））ならびにホジキン病が挙げられるが、これらに限定されない）。
【００１６】
本発明の１つの局面は、例えば、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４媒介性障害または２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４関連障害（例えば、造血障害（例えば、赤血球関連障害））を処置および診断するために適用可能なアッセイにおける試薬もしくは標的として有用である２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４のポリペプチドおよびその生物学的に活性なフラグメントまたは抗原性フラグメントを特徴とする。別の実施形態において、本発明は、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４の活性を有する２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４ポリペプチドを提供する。好ましいポリペプチドは、少なくとも１つの二重特異的ホスファターゼ触媒ドメインを含む、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４のタンパク質であり、好ましくは、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４の活性（例えば、本明細書中に記載されるような２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４の活性）を有する２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４のタンパク質である。
【００１７】
関連する局面において、本発明は、融合タンパク質を形成するために非２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４のポリペプチドに作動可能に連結される２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４のポリペプチドまたはフラグメントを提供する。
【００１８】
別の局面において、本発明は、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２もしくは５８８７４のポリペプチドと反応する、より好ましくはそれらを特異的に結合する、抗体およびそれらの抗原結合フラグメントを特徴とする。
【００１９】
別の局面において、本発明は、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４のポリペプチドまたは核酸の発現または活性を調節する化合物をスクリーニングする方法を提供する。
【００２０】
さらに別の局面において、本発明は、例えば、スクリーニングされた化合物を用いて、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４のポリペプチドまたは核酸の発現または活性を調節するためのプロセスを提供する。特定の実施形態において、本方法は、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４のポリペプチドまたは核酸の減少した活性または発現に関連する状態（例えば、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４を発現する細胞（例えば、造血細胞（例えば、骨髄（好中球）細胞、単球、赤血球、骨髄細胞、ＣＤ３４発現細胞、巨核球））の異常な増殖の処置を含む。状態としては、白血病（例えば、赤白血病）の場合のような造血細胞の活性または増殖の増加；または例えば、貧血の場合のような、造血細胞の分化の減少が挙げられ得る。
【００２１】
さらに別の局面において、本発明は、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４を発現する細胞（例えば、造血細胞（例えば、骨髄（好中球）細胞、単球、赤血球、骨髄細胞、ＣＤ３４発現細胞、巨核球））の増殖、生存および／または分化を調節（例えば、増強または阻害）するための方法を提供する。本方法は、その細胞を、細胞の増殖および／または分化を調節するのに有効な量の薬剤（例えば、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４のポリペプチドまたは核酸の活性または発現を調節する）と接触させる工程を包含する。
【００２２】
好ましい実施形態において、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４のポリペプチドは、配列番号３、６、９、１２、１５、１８、２１、２４または２７と同一または実質的に同一なアミノ酸配列を有する。他の実施形態において、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４のポリペプチドは、配列番号３、６、９、１２、１５、１８、２１、２４または２７の、少なくとも１５、２０、５０、１００、１５０、１８０、２００またはそれ以上連続するアミノ酸のフラグメントである。
【００２３】
好ましい実施形態において、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４の核酸は、配列番号１、２、４、５、７、８、１０、１１、１３、１４、１６、１７、１９、２０、２２、２３、２５または２６と同一または実質的に同一なヌクレオチド配列を有する。他の実施形態において、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４の核酸は、配列番号１、２、４、５、７、８、１０、１１、１３、１４、１６、１７、１９、２０、２２、２３、２５または２６の、少なくとも５０、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、５５０、６００またはそれ以上連続するヌクレオチドのフラグメントである。
【００２４】
好ましい実施形態において、薬剤は、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４の核酸の発現を、例えば、転写、ｍＲＮＡ安定性などを調節することによって、調節（例えば、増大または減少）する。
【００２５】
好ましい実施形態において、この薬剤は、ペプチド、ホスホペプチド、低分子（例えば、コンビナトリアルライブラリーのメンバー）または抗体、あるいはこれらの任意の組み合わせである。この抗体は、細胞毒、細胞傷害性剤および反応性金属イオンからなる群より選択される治療部分に結合体化され得る。
【００２６】
さらなる好ましい実施形態において、この薬剤は、アンチセンス、リボザイムまたは三重らせん分子、あるいは、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４の核酸、あるいはこれらの任意の組み合わせである。
【００２７】
好ましい実施形態において、この薬剤は、細胞傷害性剤と合わせて投与される。
【００２８】
好ましい実施形態において、細胞（例えば、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４を発現する細胞）は、造血細胞（例えば、骨髄細胞、リンパ細胞または赤血球細胞、あるいはその前駆細胞）である。このような細胞の例としては、骨髄細胞（多形核細胞）、赤血球細胞、リンパ球、単球、細網細胞、プラスマ細胞および巨核球、ならびに異なる系統への幹細胞、そして約束された先祖細胞への前駆体（例えば、赤血球細胞の前駆体（赤芽球）、マクロファージの前駆体（単芽球）、血小板の前駆体（巨核球）、多形核白血球の前駆体（骨髄芽球）およびリンパ球の前駆体（リンパ芽球））が挙げられる。
【００２９】
好ましい実施形態において、細胞（例えば、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４を発現する細胞）は、骨髄細胞（例えば、骨髄ＣＤ３４発現細胞）である。ＣＤ３４発現細胞の例としては、未成熟造血前駆細胞、骨髄中の造血コロニー形成細胞（単能性（ＣＦＵ−ＧＭ、ＢＦＵ−Ｅ）および多能性祖先細胞（ＣＦＵ−ＧＥＭＭ、ＣＦＵ−ＭｉｘおよびＣＦＵ−芽細胞））；ならびに間質細胞前駆体、末端デオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼ（ＴｄＴ）発現Ｂリンパ前駆体およびＴリンパ前駆体、初期骨髄細胞および初期赤血球細胞、が挙げられる。
【００３０】
好ましい実施形態において、細胞（例えば、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４を発現する細胞）は、骨髄赤血球系細胞（例えば、赤血球祖先細胞（例えば、ＧＰＡ（低）ＣＤ７１＋細胞）または分化した細胞（例えば、赤血球または巨核球））である。
【００３１】
好ましい実施形態において、細胞（例えば、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４を発現する細胞）は、タンパク質（例えば、サイトカイン）と、さらに接触される。好ましくは、このタンパク質は、Ｇ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、幹細胞因子および好ましくはエリトロポイエチンからなる群より選択される。このタンパク質接触工程は、薬剤が接触される前か、それと同時か、またはその後で、生じ得る。例えば、細胞（例えば、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４を発現する細胞）は、被験体（例えば、患者）から獲得され、そしてタンパク質とエキソビボで接触される。処理された細胞は、被験体に戻し導入され得る。あるいは、このタンパク質接触工程は、インビボで生じ得る。
【００３２】
好ましい実施形態において、この薬剤と、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４のポリペプチドまたは核酸とは、インビトロまたはエキソビボで接触される。
【００３３】
好ましい実施形態において、この接触工程は、例えば、治療プロトコルまたは予防プロトコルの一部として、被験体においてインビボでもたらされる。好ましくは、被験体は、ヒト（例えば、造血障害（例えば、白血病または赤血球関連障害）を有する患者）である。例えば、この被験体は、貧血（例えば、溶血性貧血、異常な赤血球生成、非造血障害における二次的貧血、慢性疾患（例えば、慢性腎不全）の貧血）；内分泌欠損疾患；および／または赤血球増加症（例えば、多血症）を有する患者であり得る。あるいは、被験体は、癌患者（例えば、白血病性の癌（例えば、赤血球白血病）または癌腫（例えば、腎臓癌腫）を有する患者）であり得る。他の実施形態において、この被験体は、非ヒト動物（例えば、実験動物）である。
【００３４】
接触工程は、反復され得る。
【００３５】
好ましい実施形態において、この薬剤は、細胞（例えば、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４を発現する細胞（例えば、造血細胞（例えば、骨髄（好中球）細胞、単球、赤血球系細胞、骨髄細胞、ＣＤ３４発現細胞、巨核球）））の増殖を減少し、そして／またはこれらの分化を増強する。このような薬剤は、癌（例えば、白血病性癌）を処置または予防するために使用され得る。
【００３６】
好ましい実施形態において、この薬剤は、造血細胞（例えば、骨髄（好中球）細胞、単球、赤血球系細胞、骨髄細胞、ＣＤ３４発現細胞、巨核球）の数を、祖先細胞の増殖、生存を増大すること、そして／またはその分化を刺激することによって、増大させる。このような薬剤は、造血障害（例えば、貧血（例えば、溶血性貧血、異常な赤血球生成、非造血障害における二次的貧血、慢性疾患（例えば、慢性腎不全）の貧血）；内分泌欠損疾患；および／または赤血球増加症（例えば、多血症））を処置または予防するために使用され得る。
【００３７】
別の局面において、本発明は、造血（例えば、赤血球生成）を調節する方法を特徴とし、この方法は、２３２発現細胞、２０５９発現細胞、１０６３０発現細胞、１２８４８発現細胞、１３８７５発現細胞、１４３９５発現細胞、１４６１８発現細胞、１７６９２発現細胞または５８８７４発現細胞（例えば、造血細胞（例えば、骨髄性（好中球）細胞、単球、赤血球、骨髄細胞、ＣＤ３４発現細胞、巨核球）と、２３２ポリペプチド、２０５９ポリペプチド、１０６３０ポリペプチド、１２８４８ポリペプチド、１３８７５ポリペプチド、１４３９５ポリペプチド、１４６１８ポリペプチド、１７６９２もしくは５８８７４ポリペプチド、または２３２核酸、２０５９核酸、１０６３０核酸、１２８４８核酸、１３８７５核酸、１４３９５核酸、１４６１８核酸、１７６９２核酸もしくは５８８７４核酸の活性または発現を増大または減少させる薬剤とを接触させ、それにより、造血細胞の分化を調節する工程を包含する。
【００３８】
なお別の局面において、本発明は、被験体における造血障害（例えば、赤血球関連障害）を処置または予防する方法を特徴とする。この方法は、２３２ポリペプチド、２０５９ポリペプチド、１０６３０ポリペプチド、１２８４８ポリペプチド、１３８７５ポリペプチド、１４３９５ポリペプチド、１４６１８ポリペプチド、１７６９２ポリペプチドもしくは５８８７４ポリペプチド、または２３２核酸、２０５９核酸、１０６３０核酸、１２８４８核酸、１３８７５核酸、１４３９５核酸、１４６１８核酸、１７６９２核酸もしくは５８８７４核酸の活性または発現を調節する薬剤の有効量を、その被験体に投与し、その結果、この造血障害が緩和されるか、または血液学的障害の少なくとも１つの症状を低減させる工程を包含する。
【００３９】
（本発明の分子）
（遺伝子ＩＤ ２３２）
非翻訳領域を含む、約１７９０ヌクレオチド長のヒト２３２配列（配列番号１）、（ＧＩ：４０７８０６、カンナビノイドレセプター２（ＣＢ２）としても公知）は、終止コドンを含む約１０８３ヌクレオチドの推定メチオニン開始コード配列（配列番号１、配列番号２のコードとして示されるヌクレオチド）を含む。このコード配列は、３６０アミノ酸のタンパク質（配列番号３）（ＧＩ：４０７８０７）をコードする。
【００４０】
ＴａｑＭａｎ分析により評価されるように、２３２ ｍＲＮＡは、赤血球分化の初期段階の間に、後に、骨髄様および巨核球分化の間にも発現した。インビボでは、２３２ ｍＲＮＡの低レベルの発現が、インビボで、Ｃｄ６１＋ 巨核球ならびにＧＰＡ ｈｉ細胞およびＧＰＡ ｌｏｗ細胞において認められた。２３２ ｍＲＮＡはまた、骨髄様および巨核球分化の後期段階の間にアップレギュレートされた。２３２についてのリガンドは、増殖因子と相乗作用を示して、造血を促進することにおいて重要な役割を果たすことが公知である、アナダミド（ａｎａｄａｍｉｄｅ）である。このリガンドの発現パターンおよび同定に起因して、２３２活性を調節する薬剤は、本明細書中で開示されるように、造血障害に有用な治療剤である。
【００４１】
（遺伝子ＩＤ ２０５９）
非翻訳領域を含む、約１６１０ヌクレオチド長のヒト２０５９配列（配列番号４）、（ＧＩ：１４６９９１３）、Ｐ２Ｙプリノレセプター（ｐｕｒｉｎｏｃｅｐｔｏｒ）７（Ｐ２Ｙ７）としても公知）は、終止コドンを含む約１０６２ヌクレオチドの推定メチオニン開始コード配列（配列番号４、配列番号５のコードとして示されるヌクレオチド）を含む。このコード配列は、３５３アミノ酸のタンパク質（配列番号６）（ＧＩ：１４６９９１４）をコードする。
【００４２】
ＴａｑＭａｎ分析により評価されるように、２０５９ ｍＲＮＡの発現は、インビトロおよびインビボで、前駆（ＣＤ３４＋）造血細胞、ならびに赤血球および骨髄細胞において高かった。インビボでは、発現は、赤血球分化（０日目〜１２日目まで）の間に維持され、好中球分化（０日目〜１２日目）の間にも維持された。インビボにおいて、高レベルの発現がＣＤ１５＋好中球において、ならびにＧＰＡ ｈｉｇｈ赤血球およびＧＰＡ ｌｏｗ赤血球細胞において認められた。２０５９ ｍＲＮＡは、低レベルで遍在的に発現された。２０５９ポリペプチドは、アデノシン三リン酸（ＡＴＰ）およびロイコトリエンＢ４（ＬＴＢ４）についてのレセプターである。２０５９ポリペプチドのＬＴＢ４に対する親和性は、ＡＴＰに対する親和性より大きく、このことは、造血における２０５９についての多数の役割を示す。ロイコトリエンは、骨髄造血を（ＧＭ−ＣＳＦと協同して）刺激することが公知であるが、赤血球生成を阻害する。２０５９のアンタゴナイズは、赤血球生成を増大させ、このことは、２０５９活性を調節する薬剤が、貧血のような造血障害を処置するにあたって治療利益を有することを示す。この分子のアゴナイズは、骨髄造血を刺激し、化学療法または照射によって誘導される好中球減少を処置するにあたって有用である。
【００４３】
（遺伝子ＩＤ １０６３０）
非翻訳領域を含む、約２６１９ヌクレオチド長のヒト１０６３０配列（配列番号７）、（ＧＩ：３０７５０３、トランスグルタミナーゼＥ３（ＴＧＡＳＥ３）としても公知）は、終止コドンを含む約２０８２ヌクレオチドの推定メチオニン開始コード配列（配列番号７、配列番号８のコードとして示されるヌクレオチド）を含む。このコード配列は、６９３アミノ酸のタンパク質（配列番号９）（ＧＩ：３０７５０４）をコードする。
【００４４】
（遺伝子ＩＤ １２８４８）
非翻訳領域を含む、約１８２１ヌクレオチド長のヒト１２８４８配列（配列番号１０）、（ＧＩ：２３６７６６８、チェックポイントキナーゼ（ｃｈｅｃｋｐｏｉｎｔ ｋｉｎａｓｅ）１（ＣＨＫ１）としても公知）は、終止コドンを含む約１４３１ヌクレオチドの推定メチオニン開始コード配列（配列番号１０、配列番号１１のコードとして示されるヌクレオチド）を含む。このコード配列は、４７６アミノ酸のタンパク質（配列番号１２）（ＧＩ：２３６７６６９）をコードする。
【００４５】
ＴａｑＭａｎ分析により評価されるように、１２８４８ ｍＲＮＡは、赤血球系統の造血細胞において制限された発現を示す。１２８４８ ｍＲＮＡの発現は、ヒト臍静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）、肺腫瘍および赤血球（ならびに混合前駆細胞）においてのみ認められた。１２８４８ ｍＲＮＡはまた、ＣＤ３４＋細胞において低レベルで発現され、赤血球系統の分化の間を除いて、全ての系統の分化の間でダウンレギュレートされた。１２８４８は、細胞周期の調節に関与することが公知のキナーゼである。具体的には、このキナーゼは、ｃｄｃ２５をリン酸化し、それによって、サイクリンＢ（これはＧ２細胞周期停止をもたらす）とｃｄｃ２５との相互作用を防止する。１２８４８遺伝子の除去により、細胞増殖が刺激される。１２８４８ ｍＲＮＡは、制限された様式で（すなわち、赤血球およびＣＤ３４＋前駆細胞において）発現されるので、その発現をブロックすることは、ある程度、全ての血球系統の前駆細胞の増殖を刺激し、赤血球系統の細胞の増殖に対して特定の効果を有する。１２８４８活性をアンタゴナイズする薬剤は、特に、造血発生の間の赤血球系統を除いて、全ての血球系統の増殖を引き起こす。
【００４６】
（遺伝子ＩＤ １３８７５）
非翻訳領域を含む、約１２３９ヌクレオチド長のヒト１３８７５配列（配列番号１３）、（ＧＩ：２６５４１５８、Ｇタンパク質共役レセプター３８（ＧＰＲ３８）としても公知）は、終止コドンを含む約１２３９ヌクレオチドの推定メチオニン開始コード配列（配列番号１３、配列番号１４のコードとして示されるヌクレオチド）を含む。このコード配列は、４１２アミノ酸のタンパク質（配列番号１５）（ＧＩ：２６５４１５９）をコードする。
【００４７】
ＴａｑＭａｎ分析により評価されるように、１３８７５ ｍＲＮＡは、胎児肝臓、脾臓、顆粒球およびＣＤ１４−／ＣＤ１５＋好中球において発現された。この発現パターンに起因して、１３８７５活性を調節する薬剤は、本明細書中に記事される血液学的障害に有用な治療剤である。
【００４８】
（遺伝子ＩＤ １４３９５）
非翻訳領域を含む、約１２１２ヌクレオチド長のヒト１４３９５配列（配列番号１６）、（ＧＩ：２８６５４６８、ニューロメジンＵレセプター、ＦＭ３としても公知）は、終止コドンを含む約１２１２ヌクレオチドの推定メチオニン開始コード配列（配列番号１６、配列番号１７のコードとして示されるヌクレオチド）を含む。このコード配列は、４０３アミノ酸のタンパク質（配列番号１８）（ＧＩ：２８６５４７０）をコードする。
【００４９】
ＴａｑＭａｎ分析により評価されるように、１４３９５ ｍＲＮＡは、ＣＤ１ ｌｂ−／ＣＤ１５＋好中球において発現された。この発現パターンに起因して、１４３９５は、１４３９５（ニューロメジンＵ）についてのリガンドを介するシグナル伝達を通じた骨髄生成の加速に関与する。
【００５０】
（遺伝子ＩＤ １４６１８）
非翻訳領域を含む、約１３５９ヌクレオチド長のヒト１４６１８配列（配列番号１９）、（ＧＩ：５３５３８８６、ｃｙｓＬＴｌ ＬＴＤ４レセプター（ＣＹＳＴ１）としても公知）は、終止コドンを含む約１０１４ヌクレオチドの推定メチオニン開始コード配列（配列番号１９、配列番号２０のコードとして示されるヌクレオチド）を含む。このコード配列は、３３７アミノ酸のタンパク質（配列番号２１）（ＧＩ：５３５３８８７）をコードする。
【００５１】
ＴａｑＭａｎ分析により評価されるように、１４６１８ ｍＲＮＡは、好中球、リンパ節および扁桃組織に制限された。さらなるＴａｑＭａｎ分析は、インビボでＣＤ３４＋前駆細胞およびＣＤ１５＋好中球において高レベルの１４６１８ ｍＲＮＡを示す。１４６１８ ｍＲＮＡの高レベルの発現は、骨髄生成の間に維持される。１４６１８ポリペプチドレセプターは、細胞の化学走性、移動および活性化に関与する。内皮血管を横断するＣＤ３４＋移動を調節し、従って、造血細胞の管外遊出および移動において役割を果たし得ることは公知である。この経路を介するシグナル伝達はまた、コロニー刺激因子（ＣＳＦ）によって刺激された骨髄細胞の増殖に影響を及ぼすことが公知である。
【００５２】
この遺伝子のアンタゴナイズは、骨髄生成を刺激し、増殖因子経路を通じた前駆細胞におけるシグナル伝達を増大させることにより、骨髄性前駆細胞を増加させる。
【００５３】
（遺伝子ＩＤ １７６９２）
非翻訳領域を含む、約２４５２ヌクレオチド長のヒト１７６９２配列（配列番号２２）、（ＧＩ：７３２１１６６、亜鉛カルボキシペプチダーゼ（ｅｐｔｉｄａｓｅ）としても公知）は、終止コドンを含む約２２０５ヌクレオチドの推定メチオニン開始コード配列（配列番号２２、配列番号２３のコードとして示されるヌクレオチド）を含む。このコード配列は、７３４アミノ酸のタンパク質（配列番号２４）をコードする。
【００５４】
ＴａｑＭａｎ分析によって評価されるように、１７６９２ｍＲＮＡは、造血組織に限定される。高レベルの１７６９２ｍＲＮＡが、血液または骨髄由来のＣＤ３４＋前駆細胞に存在し、種々の造血直系における分化した細胞では低い発現であった。またＴａｑＭａｎにより、１７６９２ｍＲＮＡは、全ての直系の初期培養物において高度に発現し（ＣＤ３４＋開始培養物における発現を表す）、そして細胞が終末に分化するにつれて全ての直系（例えば、赤血球、巨核球、骨髄細胞／好中球）において強く下方調節された。ヒト器官サンプル由来の種々の組織における１７６９２ｍＲＮＡのＴａｑＭａｎ分析は、１７６９２は、正常皮膚および卵巣だけには低レベルである。１７６９２ｍＲＮＡの発現のこの限定されたパターンは、ＣＤ３４＋幹細胞の原始的特徴を維持する際のこの分子についての重大な役割を示す。
【００５５】
亜鉛−カルボキシペプチダーゼは、多数の組織において細胞挙動を（増殖因子活性を調節することにより）調節することが公知のメタロペプチダーゼのサブファミリーである。１７６９２（カルボキシペプチダーゼＸ１（ＣＰＸ１）としても公知）は、活性に必要な、このファミリーにおけるいくつかのキーモチーフ（亜鉛および基質結合部位を含む）を有する。
【００５６】
その限定された発現および細胞活性に関与する分子のクラスとの構造的相同性を考慮して、１７６９２は、癌処置の間の化学療法または放射線照射後の調節（例えば、造血）の標的である。１７６９２の活性を調節する薬剤は、誘導されたかまたは遺伝的な血液学的障害（貧血、血小板減少症または好中球減少症が挙げられるが、これらに限定されない）における治療的利点を有する。
【００５７】
（遺伝子ＩＤ５８８７４）
ヒト５８８７４配列（配列番号２５）（ＧＩ：１０２４１８４６、ヒスタミンＨ４レセプター（Ｈ４Ｒ）としても公知）は、非翻訳領域を含む約１２６５ヌクレオチド長であり、終結コドンを含む約１１７３ヌクレオチドの推定メチオニン開始コード配列を含む（配列番号２５のコードとして示されるヌクレオチド、配列番号２６）。このコード配列は、３９０アミノ酸のタンパク質をコードする（配列番号２７）（ＧＩ：１０２４１８４７）。
【００５８】
ＴａｑＭａｎ分析によって評価されるように、５８８７４ｍＲＮＡは、臍帯血から単離されたＣＤ３４＋細胞、好中球、肥胖細胞およびＣＤ１４−骨髄細胞において発現された。５８８７４活性を調節する因子は、本明細書中に開示されるような血液学的障害に有用な治療剤である。
【００５９】
本発明の種々の局面は、以下のサブセクションにおいてさらに詳細に記載される：
（Ｉ．スクリーニングアッセイ）
本発明は、２３２タンパク質、２０５９タンパク質、１０６３０タンパク質、１２８４８タンパク質、１３８７５タンパク質、１４３９５タンパク質、１４６１８タンパク質、１７６９２タンパク質または５８８７４タンパク質に結合するか、例えば、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４の発現または２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２もしくは５８８７４の活性に対して刺激効果または阻害効果を有するか、あるいは例えば、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４の基質の発現または活性に対して刺激効果または阻害効果を有する、モジュレーター（すなわち、候補化合物もしくは試験化合物または候補薬剤もしくは試験薬剤（例えば、ペプチド、ペプチドミメティック、低分子（有機または無機）または他の薬物））を同定するための方法（これは、本明細書中で「スクリーニングアッセイ」とも呼ばれる）を提供する。本明細書中に記載のアッセイを使用して同定される化合物は、血液学的障害を処置するのに有用であり得る。
【００６０】
これらのアッセイは、２３２タンパク質、２０５９タンパク質、１０６３０タンパク質、１２８４８タンパク質、１３８７５タンパク質、１４３９５タンパク質、１４６１８タンパク質、１７６９２タンパク質または５８８７４タンパク質に結合する化合物、２３２タンパク質、２０５９タンパク質、１０６３０タンパク質、１２８４８タンパク質、１３８７５タンパク質、１４３９５タンパク質、１４６１８タンパク質、１７６９２タンパク質または５８８７４タンパク質と相互作用する他の細胞内タンパク質または細胞外タンパク質に結合する化合物、および他の細胞内タンパク質または細胞外タンパク質と２３２タンパク質、２０５９タンパク質、１０６３０タンパク質、１２８４８タンパク質、１３８７５タンパク質、１４３９５タンパク質、１４６１８タンパク質、１７６９２タンパク質または５８８７４タンパク質との相互作用を妨害する化合物を同定するように設計されている。例えば、２３２タンパク質、２０５９タンパク質、１０６３０タンパク質、１２８４８タンパク質、１３８７５タンパク質、１４３９５タンパク質、１４６１８タンパク質、１７６９２タンパク質または５８８７４タンパク質（これは、膜貫通レセプター型タンパク質である）の場合、このような技術は、このようなレセプターのためのリガンドを同定し得る。２３２タンパク質、２０５９タンパク質、１０６３０タンパク質、１２８４８タンパク質、１３８７５タンパク質、１４３９５タンパク質、１４６１８タンパク質、１７６９２タンパク質または５８８７４タンパク質のリガンドまたは基質は、例えば、血液学的障害の少なくとも１つの症状に対して使用され得る。このような化合物としては、ペプチド、抗体、または有機低分子もしくは無機低分子が挙げられ得るがこれらに限定されない。このような化合物はまた、他の細胞性タンパク質を含み得る。
【００６１】
アッセイによって同定される化合物（例えば、本明細書に記載の化合物）は、例えば、血液学的障害を処置するのに有用であり得る。血液学的障害状態が、細胞または組織における、全体的に低いレベルの２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４の遺伝子発現および／または２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４のタンパク質により生じる場合、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４のタンパク質と相互作用する化合物は、結合した２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４のタンパク質の活性を強調するかまたは増幅する化合物を含み得る。このような化合物は、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４のタンパク質活性のレベルの効果的な増大を引き起し、したがって、症状を改善する。
【００６２】
他の例において、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４の遺伝子における変異は、血液学的障害にいたる有害な効果を有する、異常型または過剰量の、２３２タンパク質、２０５９タンパク質、１０６３０タンパク質、１２８４８タンパク質、１３８７５タンパク質、１４３９５タンパク質、１４６１８タンパク質、１７６９２タンパク質または５８８７４タンパク質を生じ得る。同様に、生理学的状態は、血液学的障害に至る、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４の遺伝子発現の過剰な増大を引き起こし得る。このような場合、２３２タンパク質、２０５９タンパク質、１０６３０タンパク質、１２８４８タンパク質、１３８７５タンパク質、１４３９５タンパク質、１４６１８タンパク質、１７６９２タンパク質または５８８７４タンパク質に結合する化合物は、２３２タンパク質、２０５９タンパク質、１０６３０タンパク質、１２８４８タンパク質、１３８７５タンパク質、１４３９５タンパク質、１４６１８タンパク質、１７６９２タンパク質または５８８７４タンパク質の活性を阻害するタンパク質として同定され得る。本節で記載されるような技術によって同定される化合物の有効性を試験するためのアッセイは、本明細書中に議論されている。
【００６３】
１つの実施形態において、本発明は、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４のタンパク質またはポリペプチドあるいはそれらの生物学的に活性な部分の基質である候補化合物または試験化合物をスクリーニングするためのアッセイを提供する。別の実施形態において、本発明は、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２もしくは５８８７４のタンパク質もしくはポリペプチドまたはその生物学的活性な部分に結合するかまたはその活性を調節する候補化合物または試験化合物をスクリーニングするためのアッセイを提供する。本発明の試験化合物は、以下に挙げられる当該分野で公知のコンビナトリアルライブラリー法における多くのアプローチのうちの任意のものを使用して得られ得る：生物学的ライブラリー；空間的にアドレス可能な並列固相ライブラリーまたは液相ライブラリー；デコンボルーション処理を必要とする合成ライブラリー法；「１ビーズ１化合物」ライブラリー法；およびアフィニティクロマトグラフィー選択法を使用する合成ライブラリー法。生物学的ライブラリーアプローチは、ペプチドライブラリーに限定されるが、他の４つのアプローチは、化合物の、ペプチドライブラリー、非ペプチドオリゴマーライブラリー、または低分子ライブラリーに利用可能である（Ｌａｍ、Ｋ．Ｓ．（１９９７）Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｄｒｕｇ Ｄｅｓ．１２：１４５）。
【００６４】
分子ライブラリーの合成のための方法の例は、例えば、以下において、当該分野で見出され得る：ＤｅＷｉｔｔら（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：６９０９；Ｅｒｂら（１９９４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９１：１１４２２；Ｚｕｃｋｅｒｍａｎｎら（１９９４）、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３７：２６７８；Ｃｈｏら（１９９３）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６１：１３０３；Ｃａｒｒｅｌｌら（１９９４）Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．３３：２０５９；Ｃａｒｅｌｌら（１９９４）Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．３３：２０６１；およびＧａｌｌｏｐら（１９９４）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３７：１２３３。
【００６５】
化合物のライブラリーは、溶液中（例えば、Ｈｏｕｇｈｔｅｎ（１９９２）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ １３：４１２〜４２１）、ビーズ上（Ｌａｍ（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ ３５４：８２〜８４）、チップ上（Ｆｏｄｏｒ（１９９３）Ｎａｔｕｒｅ ３６４：５５５〜５５６）、細菌上（Ｌａｄｎｅｒ、米国特許第５，２２３，４０９号）、芽胞上（Ｌａｄｎｅｒ、ＵＳＰ’４０９号）、プラスミド上（Ｃｕｌｌら（１９９２）ＰｒｏｃＮａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ８９：１８６５〜１８６９）またはファージ上（ＳｃｏｔｔおよびＳｍｉｔｈ（１９９０）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：３８６〜３９０）；（Ｄｅｖｌｉｎ（１９９０）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：４０４〜４０６）；（Ｃｗｉｒｌａら（１９９０）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８７：６３７８〜６３８２）；（Ｆｅｌｉｃｉ（１９９１）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：３０１〜３１０）；（Ｌａｄｎｅｒ 前出）に存在し得る。
【００６６】
１つの実施形態において、アッセイは、細胞ベースのアッセイであり、ここで２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２もしくは５８８７４タンパク質またはその生物学的に活性な部分を発現する細胞を、試験化合物と接触させ、そして試験化合物が２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２もしくは５８８７４活性を調節する能力を決定する。試験化合物が２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２もしくは５８８７４活性を調節する能力の決定を、例えば、細胞内カルシウム、ＩＰ３、ｃＡＭＰ、またはジアシルグリセロール濃度、細胞内タンパク質のリン酸化プロフィール、細胞増殖および／または移動、例えば、細胞表面接着分子もしくは造血に関連する遺伝子の遺伝子発現、または２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２もしくは５８８７４調節転写因子の活性をモニタリングすることによって達成し得る。この細胞は、哺乳動物由来（例えば、神経細胞由来）であり得る。１つの実施形態において、レセプタードメインと相互作用する化合物が、リガンドとして（すなわち、レセプターに結合し、シグナル伝達経路を調節するよう）機能するそれらの能力についてスクリーニングされ得る。リガンドの同定、およびリガンド−レセプター複合体の活性の測定は、この相互作用のモジュレーター（例えば、アンタゴニスト）の同定を導く。このようなモジュレーターは、血液学的障害の処置に有用であり得る。
【００６７】
基質への２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２もしくは５８８７４の結合を調節する試験化合物の能力、または２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２もしくは５８８７４に結合する試験化合物の能力もまた、決定され得る。基質への２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２もしくは５８８７４の結合を調節する試験化合物の能力の決定は、例えば、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２もしくは５８８７４基質を、放射性同位体または酵素標識とカップリングさせることによって達成され得、その結果、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２もしくは５８８７４への、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２もしくは５８８７４基質の結合は、複合体中の標識された２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２もしくは５８８７４基質を検出することによって、決定され得る。２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２もしくは５８８７４はまた、放射性同位体または酵素標識とカップリングされて、複合体中の２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２もしくは５８８７４基質への２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２もしくは５８８７４の結合を調節する試験化合物の能力をモニタリングし得る。２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２もしくは５８８７４と結合する試験化合物の能力の決定は、例えば、その化合物と、放射性同位体または酵素標識とをカップリングさせることによって達成され、その結果、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２もしくは５８８７４へのこの化合物の結合は、複合体中の標識された２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２もしくは５８８７４化合物を検出することによって決定され得る。例えば、化合物（例えば、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２もしくは５８８７４のリガンドまたは基質）を、１２５Ｉ、３５Ｓ、１４Ｃ、または３Ｈで、直接的または間接的のいずれかで標識し得、そしてこの放射性同位体が、放射線の直接的な計数によってか、またはシンチレーション計数によってかで検出され得る。化合物はさらに、例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、またはルシフェラーゼで酵素標識され得、そして適切な基質の産物への変換を測定することによって、この酵素標識を検出し得る。
【００６８】
相互作用するもののいずれも標識することなく、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４と相互作用する化合物（例えば、２３２リガンドもしくは基質、２０５９リガンドもしくは基質、１０６３０リガンドもしくは基質、１２８４８リガンドもしくは基質、１３８７５リガンドもしくは基質、１４３９５リガンドもしくは基質、１４６１８リガンドもしくは基質、１７６９２リガンドもしくは基質または５８８７４リガンドもしくは基質）の能力を決定することもまた、本発明の範囲内である。例えば、微視的生理機能測定器を使用して、化合物あるいは２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４のいずれも標識することなく、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４との化合物の相互作用を検出し得る（ＭｃＣｏｎｎｅｌｌ，Ｈ．Ｍ．ら（１９９２）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５７：１９０６−１９１２）。本明細書中で使用される場合、「微視的生理機能測定器（ｍｉｃｒｏｐｈｙｓｉｏｍｅｔｅｒ）」（例えば、細胞センサー（Ｃｙｔｏｓｅｎｓｏｒ））は、光アドレス可能な電位差計センサー（ＬＡＰＳ）を使用して、細胞がその環境を酸性化する速度を測定する分析機器である。この酸性化速度の変化を、化合物と２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４との間の相互作用の指標として使用し得る。
【００６９】
別の実施形態において、アッセイは、細胞ベースのアッセイであり、これは、２３２標的分子、２０５９標的分子、１０６３０標的分子、１２８４８標的分子、１３８７５標的分子、１４３９５標的分子、１４６１８標的分子、１７６９２標的分子または５８８７４標的分子（例えば、２３２基質、２０５９基質、１０６３０基質、１２８４８基質、１３８７５基質、１４３９５基質、１４６１８基質、１７６９２基質または５８８７４基質）を発現する細胞を、試験化合物と接触させる工程、ならびにこの試験化合物が、この２３２標的分子、２０５９標的分子、１０６３０標的分子、１２８４８標的分子、１３８７５標的分子、１４３９５標的分子、１４６１８標的分子、１７６９２標的分子または５８８７４標的分子の活性を調節（例えば、刺激または阻害）する能力を決定する工程を包含する。この試験化合物が、２３２標的分子、２０５９標的分子、１０６３０標的分子、１２８４８標的分子、１３８７５標的分子、１４３９５標的分子、１４６１８標的分子、１７６９２標的分子または５８８７４標的分子の活性を調節する能力の決定は、例えば、２３２タンパク質、２０５９タンパク質、１０６３０タンパク質、１２８４８タンパク質、１３８７５タンパク質、１４３９５タンパク質、１４６１８タンパク質、１７６９２タンパク質または５８８７４タンパク質が、２３２標的分子、２０５９標的分子、１０６３０標的分子、１２８４８標的分子、１３８７５標的分子、１４３９５標的分子、１４６１８標的分子、１７６９２標的分子または５８８７４標的分子と結合または相互作用する能力を決定することによって、達成され得る。
【００７０】
２３２タンパク質、２０５９タンパク質、１０６３０タンパク質、１２８４８タンパク質、１３８７５タンパク質、１４３９５タンパク質、１４６１８タンパク質、１７６９２タンパク質または５８８７４タンパク質あるいはこれらの生物学的に活性なフラグメントが、２３２標的分子、２０５９標的分子、１０６３０標的分子、１２８４８標的分子、１３８７５標的分子、１４３９５標的分子、１４６１８標的分子、１７６９２標的分子または５８８７４標的分子と結合または相互作用する能力の決定は、直接結合の決定に関して上記の方法の１つによって、達成され得る。好ましい実施形態において、２３２タンパク質、２０５９タンパク質、１０６３０タンパク質、１２８４８タンパク質、１３８７５タンパク質、１４３９５タンパク質、１４６１８タンパク質、１７６９２タンパク質または５８８７４タンパク質が２３２標的分子、２０５９標的分子、１０６３０標的分子、１２８４８標的分子、１３８７５標的分子、１４３９５標的分子、１４６１８標的分子、１７６９２標的分子または５８８７４標的分子と結合または相互作用する能力の決定は、その標的分子の活性を決定することによって、達成され得る。例えば、この標的分子の活性は、その標的の細胞セカンドメッセンジャー（すなわち、細胞内Ｃａ２＋、ジアシルグリセロール、ＩＰ３、ｃＡＭＰ）の誘導を検出すること、適切な基質への標的の触媒活性／酵素活性を検出すること、レポーター遺伝子（検出可能なマーカー（例えば、ルシフェラーゼ）をコードする核酸に作動的に連結された標的応答性調節エレメントを含む）の誘導を検出すること、または標的で調節された細胞応答（例えば、遺伝子発現）を検出することにより、決定され得る。
【００７１】
なお別の実施形態において、本発明のアッセイは無細胞アッセイであり、ここで、２３２タンパク質、２０５９タンパク質、１０６３０タンパク質、１２８４８タンパク質、１３８７５タンパク質、１４３９５タンパク質、１４６１８タンパク質、１７６９２タンパク質もしくは５８８７４タンパク質またはこれらの生物学的に活性な部分は、試験化合物と接触され、そして試験化合物が、２３２タンパク質、２０５９タンパク質、１０６３０タンパク質、１２８４８タンパク質、１３８７５タンパク質、１４３９５タンパク質、１４６１８タンパク質、１７６９２タンパク質もしくは５８８７４タンパク質またはこれらの生物学的に活性な部分に結合する能力が決定される。本発明のアッセイにおいて使用される２３２タンパク質、２０５９タンパク質、１０６３０タンパク質、１２８４８タンパク質、１３８７５タンパク質、１４３９５タンパク質、１４６１８タンパク質、１７６９２タンパク質もしくは５８８７４タンパク質の好ましい生物学的に活性な部分は、非２３２分子、非２０５９分子、非１０６３０分子、非１２８４８分子、非１３８７５分子、非１４３９５分子、非１４６１８分子、非１７６９２分子または非５８８７４分子との相互作用に関与するフラグメント（例えば、高い表面確立スコアを有するフラグメント）を含む。試験化合物の、２３２タンパク質、２０５９タンパク質、１０６３０タンパク質、１２８４８タンパク質、１３８７５タンパク質、１４３９５タンパク質、１４６１８タンパク質、１７６９２タンパク質もしくは５８８７４タンパク質への結合は、上記のように直接的にかまたは間接的に測定され得る。好ましい実施形態において、このアッセイは、２３２タンパク質、２０５９タンパク質、１０６３０タンパク質、１２８４８タンパク質、１３８７５タンパク質、１４３９５タンパク質、１４６１８タンパク質、１７６９２タンパク質もしくは５８８７４タンパク質またはこれらの生物学的に活性な部分を、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４に結合する既知の化合物と接触させ、アッセイ混合物を形成する工程、このアッセイ混合物を試験化合物と接触させる工程、および試験化合物が２３２タンパク質、２０５９タンパク質、１０６３０タンパク質、１２８４８タンパク質、１３８７５タンパク質、１４３９５タンパク質、１４６１８タンパク質、１７６９２タンパク質もしくは５８８７４タンパク質と相互作用する能力を決定する工程を含み、ここで、試験化合物が２３２タンパク質、２０５９タンパク質、１０６３０タンパク質、１２８４８タンパク質、１３８７５タンパク質、１４３９５タンパク質、１４６１８タンパク質、１７６９２タンパク質もしくは５８８７４タンパク質と相互作用する能力を決定する工程は、試験化合物が、既知の化合物と比較して優先的に２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４またはこれら生物学的に活性な部分に結合する能力を決定する工程を含む。２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４の、既知の標的タンパク質との相互作用を調節する化合物は、２３２タンパク質、２０５９タンパク質、１０６３０タンパク質、１２８４８タンパク質、１３８７５タンパク質、１４３９５タンパク質、１４６１８タンパク質、１７６９２タンパク質もしくは５８８７４タンパク質（特に、変異体２３２タンパク質、変異体２０５９タンパク質、変異体１０６３０タンパク質、変異体１２８４８タンパク質、変異体１３８７５タンパク質、変異体１４３９５タンパク質、変異体１４６１８タンパク質、変異体１７６９２タンパク質もしくは変異体５８８７４タンパク質）の活性を調節するのに有用であり得る。
【００７２】
別の実施形態において、アッセイは、無細胞アッセイであり、ここで、２３２タンパク質、２０５９タンパク質、１０６３０タンパク質、１２８４８タンパク質、１３８７５タンパク質、１４３９５タンパク質、１４６１８タンパク質、１７６９２タンパク質もしくは５８８７４タンパク質またはその生物学的に活性な部分が試験化合物と接触され、そしてその試験化合物が２３２タンパク質、２０５９タンパク質、１０６３０タンパク質、１２８４８タンパク質、１３８７５タンパク質、１４３９５タンパク質、１４６１８タンパク質、１７６９２タンパク質もしくは５８８７４タンパクまたはその生物学的に活性な部分の活性を調節（例えば、刺激または阻害）する能力が決定される。この試験化合物が２３２タンパク質、２０５９タンパク質、１０６３０タンパク質、１２８４８タンパク質、１３８７５タンパク質、１４３９５タンパク質、１４６１８タンパク質、１７６９２タンパク質もしくは５８８７４タンパク質の活性を調節する能力の決定は、例えば、２３２タンパク質、２０５９タンパク質、１０６３０タンパク質、１２８４８タンパク質、１３８７５タンパク質、１４３９５タンパク質、１４６１８タンパク質、１７６９２タンパク質もしくは５８８７４タンパク質が、２３２標的分子、２０５９標的分子、１０６３０標的分子、１２８４８標的分子、１３８７５標的分子、１４３９５標的分子、１４６１８標的分子、１７６９２標的分子または５８８７４標的分子に結合する能力を、直接的結合の決定のための上記方法の１つによって決定することにより、達成され得る。２３２タンパク質、２０５９タンパク質、１０６３０タンパク質、１２８４８タンパク質、１３８７５タンパク質、１４３９５タンパク質、１４６１８タンパク質、１７６９２タンパク質もしくは５８８７４タンパク質が２３２標的分子、２０５９標的分子、１０６３０標的分子、１２８４８標的分子、１３８７５標的分子、１４３９５標的分子、１４６１８標的分子、１７６９２標的分子または５８８７４標的分子に結合する能力を決定することはまた、リアルタイムのＢｉｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ Ａｎａｌｙｓｉｓ（ＢＩＡ）のような技術を用いて達成され得る（Ｓｊｏｌａｎｄｅｒ，Ｓ．およびＵｒｂａｎｉｃｚｋｙ，Ｃ．（１９９１）Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ．６３：２３３８〜２３４５およびＳｚａｂｏら（１９９５）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．５：６９９〜７０５）。本明細書において用いる場合、「ＢＩＡ」は、いずれの相互作用物（例えば、ＢＩＡｃｏｒｅ）も標識することなく、リアルタイムで生体特異的相互作用を研究するための技術である。光学的現象（ｏｐｔｉｃａｌ ｐｈｅｎｏｍｅｎｏｎ）表面プラズモン共鳴（ｓｕｒｆａｃｅ ｐｌａｓｍｏｎ ｒｅｓｏｒｎａｎｃｅ）（ＳＰＲ）における変化は、生物学的分子の間のリアルタイム反応の指標として用いられ得る。
【００７３】
別の実施形態において、この試験化合物が２３２タンパク質、２０５９タンパク質、１０６３０タンパク質、１２８４８タンパク質、１３８７５タンパク質、１４３９５タンパク質、１４６１８タンパク質、１７６９２タンパク質もしくは５８８７４タンパク質の活性を調節する能力の決定は、２３２タンパク質、２０５９タンパク質、１０６３０タンパク質、１２８４８タンパク質、１３８７５タンパク質、１４３９５タンパク質、１４６１８タンパク質、１７６９２タンパク質もしくは５８８７４タンパク質が、２３２標的分子、２０５９標的分子、１０６３０標的分子、１２８４８標的分子、１３８７５標的分子、１４３９５標的分子、１４６１８標的分子、１７６９２標的分子または５８８７４標的分子の下流エフェクター活性をさらに調節する能力を決定することにより、達成され得る。例えば、このエフェクター分子の適切な基質に対する活性が決定され得るかまたはこのエフェクターの適切な標的に対する結合が、上に記載のように決定され得る。
【００７４】
なお別の実施形態において、無細胞アッセイは、２３２タンパク質、２０５９タンパク質、１０６３０タンパク質、１２８４８タンパク質、１３８７５タンパク質、１４３９５タンパク質、１４６１８タンパク質、１７６９２タンパク質もしくは５８８７４タンパク質またはその生物学的に活性な部分に、この２３２タンパク質、２０５９タンパク質、１０６３０タンパク質、１２８４８タンパク質、１３８７５タンパク質、１４３９５タンパク質、１４６１８タンパク質、１７６９２タンパク質もしくは５８８７４タンパク質に結合する既知の化合物を接触させてアッセイ混合物を形成させる工程、このアッセイ混合物を、試験化合物と接触させる工程、およびこの試験化合物が２３２タンパク質、２０５９タンパク質、１０６３０タンパク質、１２８４８タンパク質、１３８７５タンパク質、１４３９５タンパク質、１４６１８タンパク質、１７６９２タンパク質もしくは５８８７４タンパク質と相互作用する能力を決定する工程を包含し、ここで、この試験化合物が２３２タンパク質、２０５９タンパク質、１０６３０タンパク質、１２８４８タンパク質、１３８７５タンパク質、１４３９５タンパク質、１４６１８タンパク質、１７６９２タンパク質もしくは５８８７４タンパク質と相互作用する能力を決定する工程は、２３２タンパク質、２０５９タンパク質、１０６３０タンパク質、１２８４８タンパク質、１３８７５タンパク質、１４３９５タンパク質、１４６１８タンパク質、１７６９２タンパク質もしくは５８８７４タンパク質が、２３２標的分子、２０５９標的分子、１０６３０標的分子、１２８４８標的分子、１３８７５標的分子、１４３９５標的分子、１４６１８標的分子、１７６９２標的分子または５８８７４標的分子と優先的に結合するか、またはその２３２標的分子、２０５９標的分子、１０６３０標的分子、１２８４８標的分子、１３８７５標的分子、１４３９５標的分子、１４６１８標的分子、１７６９２標的分子または５８８７４標的分子の活性を優先的に調節する能力を決定する工程を包含する。
【００７５】
本発明の上記アッセイ方法の１つより多い実施形態において、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４またはその標的分子のいずれかを固定して、そのタンパク質の一方または両方の非複合体化形態からの複合体化形態の分離を促進し、そしてそのアッセイの自動化に適用させることが、望ましくあり得る。試験化合物の２３２タンパク質、２０５９タンパク質、１０６３０タンパク質、１２８４８タンパク質、１３８７５タンパク質、１４３９５タンパク質、１４６１８タンパク質、１７６９２タンパク質もしくは５８８７４タンパク質への結合、または候補化合物の存在下および非存在下での２３２タンパク質、２０５９タンパク質、１０６３０タンパク質、１２８４８タンパク質、１３８７５タンパク質、１４３９５タンパク質、１４６１８タンパク質、１７６９２タンパク質もしくは５８８７４タンパク質の標的分子との相互作用は、これらの反応物を収容するために適切な任意の容器内で、達成され得る。このような容器の例には、マイクロタイタープレート、試験管、および微小遠心管が挙げられる。１つの実施形態において、そのタンパク質の一方または両方がマトリックスに結合することを可能にするドメインを付加する融合タンパク質が、提供され得る。例えば、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ／２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４融合タンパク質またはグルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ／標的融合タンパク質は、グルタチオンセファロースビーズ（Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）またはグルタチオン誘導体化マイクロタイタープレート上に吸着され得、次いで、これらは、試験化合物と合わせられるか、あるいは試験化合物および非吸着の標的タンパク質または２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４タンパク質のいずれかと合わせられ、そしてこの混合物が、複合体形成に貢献する条件下（例えば、塩およびｐＨに関して生理学的条件）でインキュベートされる。インキュベーションに続いて、ビーズまたはマイクロタイタープレートウェルを洗浄して、結合していないあらゆる成分を除去し、ビーズの場合にはマトリックスを固定し、例えば、上記のように、複合体を直接的または間接的のいずれかで決定する。あるいは、複合体がマトリックスから解離され得、そして２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４結合レベルまたは活性レベルを、標準的な技術を使用して決定し得る。
【００７６】
タンパク質をマトリックス上に固定するための他の技術もまた、本発明のスクリーニングアッセイにおいて使用され得る。例えば、２３２タンパク質、２０５９タンパク質、１０６３０タンパク質、１２８４８タンパク質、１３８７５タンパク質、１４３９５タンパク質、１４６１８タンパク質、１７６９２タンパク質もしくは５８８７４タンパク質または２３２標的分子、２０５９標的分子、１０６３０標的分子、１２８４８標的分子、１３８７５標的分子、１４３９５標的分子、１４６１８標的分子、１７６９２標的分子または５８８７４標的分子のいずれかが、ビオチンとストレプトアビジンとの結合体化を利用して固定され得る。ビオチン化された２３２タンパク質、２０５９タンパク質、１０６３０タンパク質、１２８４８タンパク質、１３８７５タンパク質、１４３９５タンパク質、１４６１８タンパク質、１７６９２タンパク質もしくは５８８７４タンパク質または標的分子は、当該分野において公知の技術を使用して、ビオチンＮＨＳ（Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド）から調製され得（例えば、ビオチン化キット、Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、ＩＬ）、そしてストレプトアビジン被覆した９６ウェルのプレート（Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ）のウェルに固定され得る。あるいは、２３２タンパク質、２０５９タンパク質、１０６３０タンパク質、１２８４８タンパク質、１３８７５タンパク質、１４３９５タンパク質、１４６１８タンパク質、１７６９２タンパク質もしくは５８８７４タンパク質または標的分子と反応性であるが、２３２タンパク質、２０５９タンパク質、１０６３０タンパク質、１２８４８タンパク質、１３８７５タンパク質、１４３９５タンパク質、１４６１８タンパク質、１７６９２タンパク質もしくは５８８７４タンパク質の標的分子への結合を妨害しない抗体が、そのプレートのウェルに誘導体化され得、そして結合していない標的またはタンパク質が、抗体の結合体化によってウェル内にトラップされ得る。このような複合体を検出するための方法には、ＧＳＴ固定複合体に関しての上記のものに加えて、２３２タンパク質、２０５９タンパク質、１０６３０タンパク質、１２８４８タンパク質、１３８７５タンパク質、１４３９５タンパク質、１４６１８タンパク質、１７６９２タンパク質もしくは５８８７４タンパク質または標的分子と反応性の抗体を使用する複合体の免疫検出、ならびに２３２タンパク質、２０５９タンパク質、１０６３０タンパク質、１２８４８タンパク質、１３８７５タンパク質、１４３９５タンパク質、１４６１８タンパク質、１７６９２タンパク質もしくは５８８７４タンパク質または標的分子に関する酵素活性の検出に依存する酵素結合アッセイが挙げられる。
【００７７】
別の実施形態において、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２、もしくは５８８７４発現のモジュレーターは、細胞が候補化合物と接触され、そして細胞中での２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２、もしくは５８８７４のｍＲＮＡまたはタンパク質の発現が決定される方法において同定される。候補化合物の存在下での２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２、もしくは５８８７４のｍＲＮＡまたはタンパク質の発現のレベルは、候補化合物の非存在下での２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２、もしくは５８８７４のｍＲＮＡまたはタンパク質の発現のレベルと比較される。次いで、候補化合物は、この比較に基づき、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２、もしくは５８８７４発現のモジュレーターとして同定され得る。例えば、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２、もしくは５８８７４のｍＲＮＡまたはタンパク質の発現が、候補化合物の非存在下よりも存在下で多い（統計的に有意に多い）場合、候補化合物は、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２、もしくは５８８７４のｍＲＮＡまたはタンパク質発現の刺激物質として同定される。あるいは、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２、もしくは５８８７４のｍＲＮＡまたはタンパク質の発現が、候補化合物の非存在下よりも存在下でより低い（統計学的に有意に低い）場合、候補化合物は、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２、もしくは５８８７４のｍＲＮＡまたはタンパク質発現のインヒビターとして同定される。細胞中での２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２、もしくは５８８７４のｍＲＮＡ発現またはタンパク質発現のレベルは、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２、もしくは５８８７４のｍＲＮＡまたはタンパク質の検出について本明細書中に記載される方法により決定され得る。
【００７８】
本発明のなお別の局面において、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２、もしくは５８８７４のタンパク質は、ツーハイブリッドアッセイまたはスリーハイブリッドアッセイ（例えば、米国特許第５，２８３，３１７号；Ｚｅｒｖｏｓら、（１９９３）Ｃｅｌｌ ７２：２２３〜２３２；Ｍａｄｕｒａら（１９９３）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６８：１２０４６〜１２０５４；Ｂａｒｔｅｌら（１９９３）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ １４：９２０〜９２４；Ｉｗａｂｕｃｈｉら（１９９３）Ｏｎｃｏｇｅｎｅ ８：１６９３−１６９６；およびＢｒｅｎｔ ＷＯ９４／１０３００を参照のこと）において「ベイト（ｂａｉｔ）タンパク質」として使用されて、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２、もしくは５８８７４（「２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２、もしくは５８８７４結合のタンパク質」または「２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２、もしくは５８８７４−ｂｐ」）と結合または相互作用し、そして２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２、もしくは５８８７４の活性に関与する他のタンパク質を同定し得る。このような２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２、もしくは５８８７４の結合タンパク質はまた、例えば、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２、もしくは５８８７４の媒介性シグナル伝達経路の下流エレメントのような、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２、もしくは５８８７４のタンパク質または２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２、もしくは５８８７４の標的によるシグナル伝達に関与する可能性がある。あるいは、このような２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２、もしくは５８８７４の結合タンパク質は、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２、もしくは５８８７４のインヒビターである可能性がある。
【００７９】
ツーハイブリッドシステムは、別個のＤＮＡ結合ドメインおよび活性化ドメインからなる大半の転写因子のモジュラー性質に基づく。手短には、このアッセイは、２つの異なるＤＮＡ構築物を利用する。１つの構築物において、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２、もしくは５８８７４のタンパク質をコードする遺伝子は、公知の転写因子（例えば、ＧＡＬ−４）のＤＮＡ結合ドメインをコードする遺伝子に融合される。もう一方の構築物において、同定されていないタンパク質（「プレイ（ｐｒｅｙ）」または「サンプル」）をコードするＤＮＡ配列のライブラリー由来のＤＮＡ配列は、公知の転写因子の活性化ドメインをコードする遺伝子に融合される。「ベイト」タンパク質および「プレイ」タンパク質がインビボで相互作用して２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２、もしくは５８８７４に依存性の複合体を形成し得る場合、転写因子のＤＮＡ結合ドメインおよび活性化ドメインは、近接する。このように近接することにより、転写因子に応答性の転写調節部位に作動可能に連結したレポーター遺伝子（例えば、ＬａｃＺ）の転写が可能になる。レポーター遺伝子の発現が、検出され得、そして機能的転写因子を含む細胞コロニーは、単離され得、そして２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２、もしくは５８８７４のタンパク質と相互作用するタンパク質をコードするクローン化遺伝子を得るために使用され得る。
【００８０】
別の局面において、本発明は、本明細書中に記載されるアッセイの２つ以上の組み合わせに関する。例えば、調節剤は、細胞ベースのアッセイまたは無細胞アッセイを用いて同定され得、そして２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２、もしくは５８８７４のタンパク質の活性を調節する因子の能力は、例えば、動物（例えば、本明細書中に記載される、血液学的障害の動物モデル）においてインビボで確認され得る。
【００８１】
本発明はさらに、上記のスクリーニングアッセイによって同定される新規薬剤に関する。従って、適切な動物モデルにおいて、本明細書中で記載されるように同定された薬剤をさらに使用することは本発明の範囲内である。例えば、本明細書中に記載されるように同定された薬剤（例えば、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２、もしくは５８８７４の調節剤、アンチセンスの２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２、もしくは５８８７４の核酸分子、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２、もしくは５８８７４に特異的な抗体、または２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２、もしくは５８８７４の結合パートナー）は、このような薬剤を用いる処置の効果、毒性、または副作用を決定するために、動物モデルにおいて使用され得る。あるいは、本明細書中に記載されるように同定される薬剤は、このような薬剤の作用の機構を決定するために、動物モデルにおいて使用され得る。さらに、本発明は、本明細書中に記載されるような処置についての上記スクリーニングアッセイによって同定された新規薬剤の使用に関する。
【００８２】
任意の化合物（上記アッセイ系において同定されるような化合物が挙げられるがこれらに限定されない）が、血液学的障害を処置する能力について試験され得る。血液学的障害の少なくとも１つの徴候に対するこのような能力を示す化合物の同定のための細胞ベースのアッセイおよび動物モデルベースのアッセイは、本明細書中に記載される。
【００８３】
さらに、血液学的障害の動物ベースのモデル（例えば、本明細書中に記載されるようなモデル）は、血液学的障害を処置し得る化合物を同定するために使用され得る。このような動物モデルは、血液学的障害を処置する上で有効であり得る薬物、医薬品、治療、および介入の同定のための試験基質として使用され得る。例えば、動物モデルは、血液学的障害を処置する能力を示すことが予測される化合物に対して、曝露された動物における血液学的障害のこのような改善を導くのに十分な濃度および十分な時間、曝露され得る。この曝露に対する動物の応答は、処置の前および後の血液学的障害の徴候の逆転を評価することによりモニタリングされ得る。
【００８４】
本発明に関して、血液学的障害の任意の局面を逆転する任意の処置が、ヒト血液学的障害治療介入の候補として考慮されるべきである。試験薬剤の投薬量は、用量応答曲線を得ることによって決定され得る。
【００８５】
さらに、遺伝子発現パターンは、血液学的障害の少なくとも１つの徴候に対する化合物の能力を評価するために使用され得る。例えば、１つ以上の遺伝子の発現パターンは、「遺伝子発現プロフィール」または「転写プロフィール」の一部を形成し得、次いで、このような評価において使用され得る。本明細書中で使用される場合、「遺伝子発現プロフィール」または「転写プロフィール」は、所定のセットの条件下で、所定の組織または細胞型について獲得されるｍＲＮＡ発現のパターンを含む。遺伝子発現プロフィールは、例えば、ディファレンシャルディスプレイ手順、ノーザン分析、および／またはＲＴ−ＰＣＲを使用することによって、生成され得る。１つの実施形態において、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２、もしくは５８８７４の遺伝子配列は、このような遺伝子発現プロフィールの作製および確証のためのプローブおよび／またはＰＣＲプライマーとして使用され得る。
【００８６】
遺伝子発現プロフィールは、細胞および／または動物ベースのモデル系における、既知の状態（心臓血管疾患または正常のいずれか）について特徴付けられ得る。その後、これらの既知の遺伝子発現プロフィールは、効果を確認するために比較され得、試験化合物は、このような遺伝子発現プロフィールを改変する必要があり、そしてそのプロフィールをより望ましいプロフィールの化合物とより緊密に類似させる必要がある。
【００８７】
例えば、化合物の投与は、血液学的障害疾患モデル系の遺伝子発現プロフィールを、コントロール系とより緊密に類似させ得る。あるいは、化合物の投与は、コントロール系の遺伝子発現プロフィールに、血液学的障害または血液学的障害疾患状態を模倣させ始め得る。このような化合物は、例えば、目的の化合物のさらなる特徴付けにおいて使用され得るか、または、さらなる動物モデルの作製において使用され得る。
【００８８】
（ＩＩ．細胞ベースおよび動物ベースのモデル系）
血液学的障害のためのモデルとしての役割を果たす、細胞ベースおよび動物ベースの系が、本明細書中に記載される。これらの系は、種々の適用において使用され得る。例えば、細胞ベースおよび動物ベースのモデル系を使用して、心臓血管疾患に関連する、差次的に発現される遺伝子（例えば、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２、または５８８７４）をさらに特徴付けし得る。さらに動物ベースおよび細胞ベースのアッセイは、以下に記載されるような血液学的障害を回復させ得る化合物を同定するように設計された、スクリーニングストラテジーの一部として使用され得る。従って、動物ベースおよび細胞ベースのモデルを使用して、血液学的障害を処置する際に有効であり得る薬物、医薬品、治療および介入を同定し得る。さらに、このような動物モデルを使用して、動物被験体におけるＬＤ５０およびＥＤ５０を決定し得、そしてこのようなデータを使用して、潜在的な血液学的障害処置のインビボでの効力を決定し得る。
【００８９】
（Ａ．動物ベースの系）
血液学的障害の動物ベースのモデル系としては、非組換え動物および操作されたトランスジェニック動物が挙げられ得るがこれらに限定されない。
【００９０】
血液学的障害についての非組換え動物モデルとしては、例えば、遺伝的モデルが挙げられ得る。
【００９１】
さらに、血液学的障害を示す動物モデルは、例えば、当業者に周知であるトランスジェニック動物を作製するための技術とともに、上記の２３２遺伝子配列、２０５９遺伝子配列、１０６３０遺伝子配列、１２８４８遺伝子配列、１３８７５遺伝子配列、１４３９５遺伝子配列、１４６１８遺伝子配列、１７６９２遺伝子配列または５８８７４遺伝子配列を使用することによって、操作され得る。例えば、２３２遺伝子配列、２０５９遺伝子配列、１０６３０遺伝子配列、１２８４８遺伝子配列、１３８７５遺伝子配列、１４３９５遺伝子配列、１４６１８遺伝子配列、１７６９２遺伝子配列または５８８７４遺伝子配列が、目的の動物のゲノムに導入され得、そしてこの目的の動物のゲノムにおいて過剰発現され得るか、あるいは内因性の２３２遺伝子配列、２０５９遺伝子配列、１０６３０遺伝子配列、１２８４８遺伝子配列、１３８７５遺伝子配列、１４３９５遺伝子配列、１４６１８遺伝子配列、１７６９２遺伝子配列または５８８７４遺伝子配列が存在する場合、これらは、過剰発現され得るか、またはあるいは、２３２遺伝子発現、２０５９遺伝子発現、１０６３０遺伝子発現、１２８４８遺伝子発現、１３８７５遺伝子発現、１４３９５遺伝子発現、１４６１８遺伝子発現、１７６９２遺伝子発現または５８８７４遺伝子発現を過少発現させるかまたはこれらの遺伝子発現を不活化させるために破壊され得るかのいずれかであり得る。
【００９２】
本発明の宿主細胞をまた使用して、非ヒトトランスジェニック動物を作製し得る。例えば、１つの実施形態において、本発明の宿主細胞は、受精卵または胚性幹細胞であり、この細胞に、２３２コード配列、２０５９コード配列、１０６３０コード配列、１２８４８コード配列、１３８７５コード配列、１４３９５コード配列、１４６１８コード配列、１７６９２コード配列または５８８７４コード配列が導入されている。次いで、このような宿主細胞を使用して、非ヒトトランスジェニック動物を作製し得、ここにおいて、外因性の２３２配列、２０５９配列、１０６３０配列、１２８４８配列、１３８７５配列、１４３９５配列、１４６１８配列、１７６９２配列または５８８７４配列が、それらのゲノムまたは相同組換え動物に導入され、ここで、内因性の２３２配列、２０５９配列、１０６３０配列、１２８４８配列、１３８７５配列、１４３９５配列、１４６１８配列、１７６９２配列または５８８７４配列が、変更されている。このような動物は、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２もしくは５８８７４の機能および／または活性を研究するため、ならびに２３２活性、２０５９活性、１０６３０活性、１２８４８活性、１３８７５活性、１４３９５活性、１４６１８活性、１７６９２活性または５８８７４活性のモジュレーターを同定および／または評価するために、有用である。本明細書中で使用される場合、「トランスジェニック動物」は、非ヒト動物であり、好ましくは、哺乳動物であり、より好ましくは、ラットまたはマウスのようなげっ歯類であり、ここで、これらの動物の１つ以上の細胞が、導入遺伝子を含む。トランスジェニック動物の他の例としては、非ヒト霊長類、ヒツジ、イヌ、ウシ、ヤギ、ニワトリ、両生類などが挙げられる。導入遺伝子は、外因性ＤＮＡであり、この外因性ＤＮＡは、トランスジェニック動物が成長する細胞のゲノムに取り込まれ、かつ成熟動物のゲノムにおいて維持され、それによってこのトランスジェニック動物の１つ以上の細胞型または組織における、コードされた遺伝子産物の発現を指向する。本明細書中で使用される場合、「相同組換え動物」は、非ヒト動物であり、好ましくは、哺乳動物であり、より好ましくは、マウスであり、ここで、内因性の２３２遺伝子、２０５９遺伝子、１０６３０遺伝子、１２８４８遺伝子、１３８７５遺伝子、１４３９５遺伝子、１４６１８遺伝子、１７６９２遺伝子または５８８７４遺伝子は、この内因性遺伝子と、その動物の成長前にこの動物の細胞（例えば、動物の胚細胞）に導入された外因性ＤＮＡ分子との間の相同組換えによって変更されている。
【００９３】
本発明の方法において使用されるトランスジェニック動物は、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４のコード核酸を、受精卵の雄前核に、例えば、マイクロインジェクション、レトロウイルス感染によって導入し、そして卵母細胞を偽妊娠雌養母動物において成長させることによって作製され得る。２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４のｃＤＮＡ配列は、導入遺伝子として、非ヒト動物のゲノムに導入され得る。あるいは、ヒトの２３２遺伝子、２０５９遺伝子、１０６３０遺伝子、１２８４８遺伝子、１３８７５遺伝子、１４３９５遺伝子、１４６１８遺伝子、１７６９２遺伝子または５８８７４遺伝子の非ヒトホモログ（例えば、マウスまたはラットの２３２遺伝子、２０５９遺伝子、１０６３０遺伝子、１２８４８遺伝子、１３８７５遺伝子、１４３９５遺伝子、１４６１８遺伝子、１７６９２遺伝子または５８８７４遺伝子）が、導入遺伝子として使用され得る。あるいは、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４の遺伝子ホモログ（例えば、別の２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４のファミリーメンバー）は、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４のｃＤＮＡ配列へのハイブリダイゼーションに基づいて単離され得、そして導入遺伝子として使用され得る。イントロン配列およびポリアデニル化シグナルもまた、導入遺伝子の発現の効力を増加させるように、この導入遺伝子に含まれ得る。組織特異的調節配列は、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４の導入遺伝子に作動可能に連結されて、２３２タンパク質、２０５９タンパク質、１０６３０タンパク質、１２８４８タンパク質、１３８７５タンパク質、１４３９５タンパク質、１４６１８タンパク質、１７６９２タンパク質または５８８７４タンパク質の発現を特定の細胞に指向し得る。胚操作およびマイクロインジェクションを介して、トランスジェニック動物（特に、マウスのような動物）を作製するための方法は、当該分野において慣習的であり、例えば、以下に記載されている：米国特許第４，７３６，８６６号および同第４，８７０，００９号（両方が、Ｌｅｄｅｒらによる）、米国特許第４，８７３，１９１号（Ｗａｇｎｅｒらによる）、ならびにＨｏｇａｎ，Ｂ．，Ｍａｎｉｐｕｌａｔｉｎｇ ｔｈｅ Ｍｏｕｓｅ Ｅｍｂｒｙｏ（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，１９８６）。類似の方法が、他のトランスジェニック動物の作製のために使用される。トランスジェニック始原（ｆｏｕｎｄｅｒ）動物は、そのゲノムにおける２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４の導入遺伝子の存在、および／あるいは動物の組織または細胞における２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４のｍＲＮＡの発現に基づいて、同定され得る。次いで、トランスジェニック始原動物を使用して、導入遺伝子を保有するさらなる動物を育種し得る。さらに、２３２タンパク質、２０５９タンパク質、１０６３０タンパク質、１２８４８タンパク質、１３８７５タンパク質、１４３９５タンパク質、１４６１８タンパク質、１７６９２タンパク質または５８８７４タンパク質をコードする導入遺伝子を有するトランスジェニック動物はさらに、他の導入遺伝子を有する他のトランスジェニック動物を産出し得る。
【００９４】
相同組換え動物を作製するために、２３２遺伝子、２０５９遺伝子、１０６３０遺伝子、１２８４８遺伝子、１３８７５遺伝子、１４３９５遺伝子、１４６１８遺伝子、１７６９２遺伝子または５８８７４遺伝子の少なくとも一部を含むベクターが調製され、このベクターに、欠失、付加または置換が導入されて、それによって、２３２遺伝子、２０５９遺伝子、１０６３０遺伝子、１２８４８遺伝子、１３８７５遺伝子、１４３９５遺伝子、１４６１８遺伝子、１７６９２遺伝子または５８８７４遺伝子が変更される（例えば、機能的に破壊される）。この２３２遺伝子、２０５９遺伝子、１０６３０遺伝子、１２８４８遺伝子、１３８７５遺伝子、１４３９５遺伝子、１４６１８遺伝子、１７６９２遺伝子または５８８７４遺伝子は、ヒト遺伝子であり得るが、より好ましくは、ヒトの２３２遺伝子、２０５９遺伝子、１０６３０遺伝子、１２８４８遺伝子、１３８７５遺伝子、１４３９５遺伝子、１４６１８遺伝子、１７６９２遺伝子または５８８７４遺伝子の非ヒトホモログである。例えば、ラットの２３２遺伝子、２０５９遺伝子、１０６３０遺伝子、１２８４８遺伝子、１３８７５遺伝子、１４３９５遺伝子、１４６１８遺伝子、１７６９２遺伝子または５８８７４遺伝子を使用して、マウスゲノムにおいて内因性の２３２遺伝子、２０５９遺伝子、１０６３０遺伝子、１２８４８遺伝子、１３８７５遺伝子、１４３９５遺伝子、１４６１８遺伝子、１７６９２遺伝子または５８８７４遺伝子を変更するのに適切な、相同組換え核酸分子（例えば、ベクター）を構築し得る。好ましい実施形態において、相同組換え核酸分子は、相同組換えの際に、内因性の２３２遺伝子、２０５９遺伝子、１０６３０遺伝子、１２８４８遺伝子、１３８７５遺伝子、１４３９５遺伝子、１４６１８遺伝子、１７６９２遺伝子または５８８７４遺伝子が機能的に破壊される（すなわち、もはや機能的タンパク質をコードしない；「ノックアウト」ベクターとも呼ばれる）ように、設計される。あるいは、相同組換え核酸分子は、相同組換えの際に、内因性の２３２遺伝子、２０５９遺伝子、１０６３０遺伝子、１２８４８遺伝子、１３８７５遺伝子、１４３９５遺伝子、１４６１８遺伝子、１７６９２遺伝子または５８８７４遺伝子が変異されるか、さもなければ変更されるが依然として機能的タンパク質をコードする（例えば、上流の調節領域が変更され、それによって内因性の２３２タンパク質、２０５９タンパク質、１０６３０タンパク質、１２８４８タンパク質、１３８７５タンパク質、１４３９５タンパク質、１４６１８タンパク質、１７６９２タンパク質または５８８７４タンパク質の発現を変更し得る）ように、設計され得る。相同組換え核酸分子において、２３２遺伝子、２０５９遺伝子、１０６３０遺伝子、１２８４８遺伝子、１３８７５遺伝子、１４３９５遺伝子、１４６１８遺伝子、１７６９２遺伝子または５８８７４遺伝子の変更された部分は、２３２遺伝子、２０５９遺伝子、１０６３０遺伝子、１２８４８遺伝子、１３８７５遺伝子、１４３９５遺伝子、１４６１８遺伝子、１７６９２遺伝子または５８８７４遺伝子のさらなる核酸配列によって、その５’末端および３’末端に隣接され、相同組換え核酸分子によって保有される外因性の２３２遺伝子、２０５９遺伝子、１０６３０遺伝子、１２８４８遺伝子、１３８７５遺伝子、１４３９５遺伝子、１４６１８遺伝子、１７６９２遺伝子または５８８７４遺伝子と、細胞（例えば、胚性幹細胞）における内因性２３２遺伝子、２０５９遺伝子、１０６３０遺伝子、１２８４８遺伝子、１３８７５遺伝子、１４３９５遺伝子、１４６１８遺伝子、１７６９２遺伝子または５８８７４遺伝子との間に、相同組換えが生じることを可能にする。隣接するさらなる２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４の核酸配列は、内因性遺伝子との首尾よい相同組換えに十分な長さの核酸配列である。代表的には、隣接したＤＮＡ（５’末端と３’末端との両方）の数キロベースが、この相同組換え核酸分子に含まれる（例えば、相同組換えベクターの記載については、Ｔｈｏｍａｓ，Ｋ．Ｒ．およびＣａｐｅｃｃｈｉ，Ｍ．Ｒ．（１９８７）Ｃｅｌｌ ５１：５０３を参照のこと）。相同組換え核酸分子は、細胞（例えば、胚性幹細胞株）に（例えば、エレクトロポーションによって）導入され、そして導入された２３２遺伝子、２０５９遺伝子、１０６３０遺伝子、１２８４８遺伝子、１３８７５遺伝子、１４３９５遺伝子、１４６１８遺伝子、１７６９２遺伝子または５８８７４遺伝子が内因性の２３２遺伝子、２０５９遺伝子、１０６３０遺伝子、１２８４８遺伝子、１３８７５遺伝子、１４３９５遺伝子、１４６１８遺伝子、１７６９２遺伝子または５８８７４遺伝子と相同に組み換わる細胞が、選択される（例えば、Ｌｉ，Ｅ．ら（１９９２）Ｃｅｌｌ ６９：９１５を参照のこと）。次いで、この選択された細胞は、動物（例えば、マウス）の胚盤胞に注射され、凝集キメラを形成し得る。（例えば、Ｂｒａｄｌｅｙ，Ａ．Ｔｅｒａｔｏｃａｒｃｉｎｏｍａｓ ａｎｄ Ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌｓ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ，Ｅ．Ｊ．Ｒｏｂｅｒｔｓｏｎ編（ＩＲＬ，Ｏｘｆｏｒｄ，１９８７）１１３−１５２頁）を参照のこと）。次いで、キメラ胚は、適切な偽妊娠雌養母動物に移植され得、そしてこの胚は、生殖（ｔｅｒｍ）され得る。生殖細胞において相同組換えされたＤＮＡを含む子孫を使用して、動物を繁殖させ得、ここで、この動物の全ての細胞は、導入遺伝子の生殖系列伝達によって相同組換えされたＤＮＡを含む。相同組換え核酸分子（例えば、ベクター）または相同組換え動物を構築するための方法は、以下にさらに記載される：Ｂｒａｄｌｅｙ，Ａ．（１９９１）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２：８２３−８２９、およびＬｅ Ｍｏｕｅｌｌｅｃらによる、ＰＣＴ国際公開番号ＷＯ ９０／１１３５４；Ｓｍｉｔｈｉｅｓらによる、ＷＯ ９１／０１１４０；Ｚｉｊｌｓｔｒａらによる、ＷＯ ９２／０９６８；およびＢｅｒｎｓらによる、ＷＯ ９３／０４１６９。
【００９５】
別の実施形態において、本発明の方法において使用するためのトランスジェニック非ヒト動物が作製され得、この動物は、導入遺伝子の調節された発現を可能にする、選択された系を含む。このような系の１つの例は、バクテリオファージＰ１のｃｒｅ／ｌｏｘＰリコンビナーゼ系である。ｃｒｅ／ｌｏｘＰリコンビナーゼ系の記載については、例えば、Ｌａｋｓｏら（１９９２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：６２３２−６２３６を参照のこと。リコンビナーゼ系の別の例は、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅのＦＬＰリコンビナーゼ系である（Ｏ’Ｇｏｒｍａｎら（１９９１）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５１：１３５１−１３５５）。ｃｒｅ／ｌｏｘＰリコンビナーゼ系を使用して導入遺伝子の発現を調節する場合、Ｃｒｅリコンビナーゼおよび選択されたタンパク質の両方をコードする導入遺伝子を含む動物が、必要とされる。このような動物は、「二重」トランスジェニック動物の構築によって（例えば、２種のトランスジェニック動物（一方は、選択されたタンパク質をコードする導入遺伝子を含み、他方は、リコンビナーゼをコードする導入遺伝子を含む）を交配させることによって）提供され得る。
【００９６】
本明細書中に記載される非ヒトトランスジェニック動物のクローンはまた、以下に記載される方法に従って作製され得る：Ｗｉｌｍｕｔ，Ｉ．ら（１９９７）Ｎａｔｕｒｅ ３８５：８１０−８１３およびＰＣＴ国際公開番号ＷＯ ９７／０７６６８およびＷＯ ９７／０７６６９。簡潔には、トランスジェニック動物由来の細胞（例えば、体細胞）が単離され得、そして増殖周期を出てＧｏ期に入るように誘導され得る。次いで、休止細胞が、例えば、電気パルスの使用を介して、この休止細胞が単離される同じ種の動物由来の除核された卵母細胞に融合され得る。次いで、この再構築された卵母細胞は、桑実胚または未分化胚芽細胞が成長するように培養され、次いで、偽妊娠雌養母動物に移される。この雌養母動物の子孫は、細胞（例えば、体細胞）が単離される動物のクローンである。
【００９７】
次いで、容易に検出可能なレベルの２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４のｍＲＮＡあるいは２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４のペプチド（２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４のエピトープに対する抗体を使用して、免疫細胞化学的に検出される）を発現する、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４のトランスジェニック動物は、特徴的な血液学的障害を表示する動物を同定するために、さらに評価されるべきである。
【００９８】
（Ｂ．細胞ベースの系）
２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４タンパク質をコードする、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４遺伝子配列を含み、かつこれらを発現し、そしてさらに例えば、造血（ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｓｉｓ）に関連する細胞表現型を示す細胞を使用して、効果を示す化合物を同定し得る。このような細胞としては、以下が挙げられ得る：非組換え単球細胞株（例えば、Ｕ９３７（ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ−１５９３）、ＴＨＰ−１（ＡＴＣＣ番号ＴＩＢ−２０２）、およびＰ３８８Ｄ１（ＡＴＣＣ番号ＴＩＢ−６３））；内皮細胞（例えば、ヒト臍静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）、ヒト微小血管内皮細胞（ＨＭＶＥＣ）、およびウシ大動脈内皮細胞（ＢＡＥＣ））；ならびに、一般的な哺乳動物細胞株（例えば、ＨｅＬａ細胞およびＣＯＳ細胞（例えば、ＣＯＳ−７（ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ−１６５１）、血液学に関連する細胞を構成する上記の細胞））。さらに、このような細胞としては、組換え細胞株、トランスジェニック細胞株が挙げられ得る。例えば、上で議論される、本発明の血液学的障害の動物モデルを使用して、この障害に対する細胞培養モデルとして使用され得る細胞株（これは、例えば、造血に関与する１種以上の細胞型を含有する）を作製し得る。本発明の血液学的障害モデルのトランスジェニック動物由来の一次培養物が利用され得るが、連続した細胞株の作製が、好ましい。トランスジェニック動物から連続した細胞株を誘導するために使用され得る技術の例については、Ｓｍａｌｌら（１９８５）Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．５：６４２−６４８を参照のこと。
【００９９】
あるいは、例えば、造血に関与することが知られている細胞型の細胞は、細胞内での２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４遺伝子発現の量を増加または低下させ得る配列でトランスフェクトされ得る。例えば、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４遺伝子配列は、目的の細胞のゲノムに導入され得、そしてこの目的の細胞のゲノムにおいて過剰発現され得るか、あるいは内因性の２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４遺伝子配列が存在する場合、これらは、過剰発現され得るか、またはあるいは、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４遺伝子を過少発現させるかまたはこれらの遺伝子発現を不活化させるために破壊され得るかのいずれかであり得る。
【０１００】
２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４遺伝子を過剰発現させるために、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４遺伝子のコード部分は、目的の細胞型（例えば、内皮細胞）において遺伝子発現を駆動し得る調節配列に連結され得る。このような調節領域は、当業者に周知であり、そして過度な実験を行うことなく利用され得る。標的遺伝子を発現させるための組換え方法は、上に記載されている。
【０１０１】
内因性の２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４の遺伝子配列の過少発現のために、このような配列は、単離され得、そして目的の細胞型のゲノムに再導入された場合、内因性の２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４の対立遺伝子が不活性化されるように、操作され得る。好ましくは、この操作された２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４の配列は、遺伝子ターゲティングを介して導入され、その結果、内因性の２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４の配列は、操作された２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４の配列を、細胞のゲノムに組み込む際に破壊される。２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４遺伝子を用いた、宿主細胞のトランスフェクションは、上に記載されている。
【０１０２】
化合物で処置されたかあるいは２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４遺伝子を用いてトランスフェクトされた細胞は、例えば、造血に関連する表現型について試験され得る。
【０１０３】
２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４の核酸のトランスフェクションは、標準的な技術（例えば、Ａｕｓｕｂｅｌ（１９８９）前出、に記載される）を使用することによって、達成され得る。トランスフェクトされた細胞は、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４の組換え遺伝子配列の存在について、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４のｍＲＮＡの発現および蓄積について、ならびに２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４の組換えタンパク質産物の存在について、評価されるべきである。２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４の遺伝子発現の減少が望ましい例において、標準的な技術を使用して、内因性の２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４の遺伝子発現および／あるいは２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４のタンパク質産生の低下が達成されるか否かを、実証し得る。
【０１０４】
（ＩＩＩ．予測医学）
本発明はまた、予測医学の分野に関し、ここにおいて、診断アッセイ、予後アッセイ、モニタリング臨床試験が、診断（予測）目的のために使用され、それによって個体を予防的に処置する。従って、本発明の１つの局面は、生物学的サンプル（例えば、血液、血清、細胞（例えば、内皮細胞）、または組織（例えば、血管組織））の状況において、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４のタンパク質および／または核酸の発現、ならびに２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４の活性を決定し、それによって、個体が、血液学的障害の素因に罹患しているかまたは血液学的障害を被っているか否かを決定するための診断アッセイに関する。本発明はまた、個体が血液学的障害を発病する危険性があるか否かを決定するための、診断（または予測）アッセイを提供する。例えば、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４遺伝子における変異が、生物学的サンプルにおいてアッセイされ得る。このようなアッセイは、診断目的または予測目的のために使用され得、それによって個体は、血液学的障害の発症前に、予防的に（ｐｈｏｐｈｙｌａｃｔｉｃａｌｌｙ）処置される。
【０１０５】
本発明の別の局面は、臨床試験における、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４の発現または活性に対する、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４のモジュレーター（例えば、抗２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４抗体、あるいは２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４のリボザイム）の影響のモニタリングに関する。
【０１０６】
これらの因子および他の因子は、以下の節で、さらに詳細に記載される。
【０１０７】
（Ａ．診断アッセイ）
被験体が疾患に罹患しているか否かを決定するために、生物学的サンプルが被験体から得られ得、そしてこの生物学的サンプルは、この生物学的サンプル中で、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４のタンパク質、あるいは２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４のタンパク質をコードする核酸（例えば、ｍＲＮＡまたはゲノムＤＮＡ）を検出することができる、化合物または因子と接触され得る。２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４のｍＲＮＡまたはゲノムＤＮＡを検出するために好ましい因子は、標識核酸プローブであり、このプローブは、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４のｍＲＮＡまたはゲノムＤＮＡにハイブリダイズし得る。この核酸プローブは、例えば、配列番号１、配列番号４、配列番号７、配列番号１０、配列番号１３、配列番号１６、配列番号１９、配列番号２２もしくは配列番号２５に示される２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４の核酸またはそれらの一部（例えば、少なくとも１５ヌクレオチド長、２０ヌクレオチド長、２５ヌクレオチド長、３０ヌクレオチド長、２５ヌクレオチド長、４０ヌクレオチド長、４５ヌクレオチド長、５０ヌクレオチド長、１００ヌクレオチド長、２５０ヌクレオチド長または５００ヌクレオチド長であり、かつストリンジェントな条件下で、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４のｍＲＮＡまたはゲノムＤＮＡに特異的にハイブリダイズするに十分であるオリゴヌクレオチド）であり得る。本発明の診断アッセイにおいて使用するのに適切な他のプローブが、本明細書中に記載されている。
【０１０８】
サンプル中で、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４のタンパク質を検出するのに好ましい因子は、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４のタンパク質に結合し得る抗体であり、好ましくは、検出可能な標識を有する抗体である。抗体は、ポリクローナル抗体であり得、より好ましくは、モノクローナル抗体であり得る。インタクトな抗体、またはそのフラグメント（例えば、ＦａｂまたはＦ（ａｂ’）２）が、使用され得る。プローブまたは抗体に関して、用語「標識（された）」は、検出可能な物質をそのプローブまたは抗体にカップリング（すなわち、物理的に連結する）し、そして直接的に標識される別の試薬との反応性によってこのプローブまたは抗体を間接的に標識することによる、プローブまたは抗体の直接的な標識を含むことが意図される。間接的な標識の例は、蛍光標識された二次抗体を使用し、そして蛍光標識されたストレプトアビジンで検出され得るように、ビオチンでＤＮＡプローブを末端標識する、一次抗体の検出を含む。
【０１０９】
用語「生物学的サンプル」は、被験体から単離された組織、細胞、および生物学的流体、ならびに被験体内に存在する組織、細胞、および流体を含むことが意図される。すなわち、本発明の検出方法を使用して、インビトロおよびインビボで、生物学的サンプル中の２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４のｍＲＮＡ、タンパク質、またはゲノムＤＮＡを検出し得る。例えば、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４のｍＲＮＡを検出するためのインビトロ技術としては、ノーザンハイブリダイゼーションおよびインサイチュハイブリダイゼーションが挙げられる。２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４のタンパク質を検出するためのインビトロ技術としては、酵素結合イムノソルベント検定法（ＥＬＩＳＡ）、ウエスタンブロット、免疫沈降および免疫蛍光検査法が挙げられる。２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４のゲノムＤＮＡを検出するためのインビトロ技術としては、サザンハイブリダイゼーションが挙げられる。さらに、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４のタンパク質を検出するためのインビボ技術は、被験体に、標識された抗２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４抗体を導入することを含む。例えば、抗体は、被験体における存在および位置が、標準的な画像化技術によって検出され得る放射標識マーカーで、標識され得る。
【０１１０】
別の実施形態において、本方法はさらに、以下の工程を包含する：コントロール被験体から、コントロールの生物学的サンプルを得る工程；このコントロールサンプルを、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４のタンパク質、ｍＲＮＡまたはゲノムＤＮＡを検出することができる化合物または因子と接触させる工程であって、その結果、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４のタンパク質、ｍＲＮＡまたはゲノムＤＮＡの存在が、生物学的サンプル中で検出される、工程；ならびに、コントロールサンプルにおける２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４のタンパク質、ｍＲＮＡまたはゲノムＤＮＡの存在を、試験サンプルにおける２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４のタンパク質、ｍＲＮＡまたはゲノムＤＮＡの存在と比較する工程。
【０１１１】
（Ｂ．予後アッセイ）
本発明はさらに、異常な２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４の発現または活性に関連する疾患を有するかまたは発症する危険を有する被験体を同定するための方法に関する。
【０１１２】
本明細書中で使用される場合、用語「異常な」は、野生型の２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４の発現または活性から逸脱した、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４の発現または活性を含む。異常な発現または活性としては、発現または活性の増加または減少、ならびに野生型の発現の発生的パターンまたは細胞下の発現のパターンに従わない、発現または活性が挙げられる。例えば、異常な２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４の発現または活性は、２３２遺伝子、２０５９遺伝子、１０６３０遺伝子、１２８４８遺伝子、１３８７５遺伝子、１４３９５遺伝子、１４６１８遺伝子、１７６９２遺伝子または５８８７４遺伝子が、２３２遺伝子、２０５９遺伝子、１０６３０遺伝子、１２８４８遺伝子、１３８７５遺伝子、１４３９５遺伝子、１４６１８遺伝子、１７６９２遺伝子または５８８７４遺伝子における変異によって過少発現または過剰発現される場合、ならびにこのような変異によって、非機能的な２３２タンパク質、２０５９タンパク質、１０６３０タンパク質、１２８４８タンパク質、１３８７５タンパク質、１４３９５タンパク質、１４６１８タンパク質、１７６９２タンパク質または５８８７４タンパク質または野生型の様式で機能しないタンパク質（例えば、２３２基質、２０５９基質、１０６３０基質、１２８４８基質、１３８７５基質、１４３９５基質、１４６１８基質、１７６９２基質または５８８７４基質と相互作用しないタンパク質、または非２３２基質、非２０５９基質、非１０６３０基質、非１２８４８基質、非１３８７５基質、非１４３９５基質、非１４６１８基質、非１７６９２基質または非５８８７４基質と相互作用するタンパク質）を生じる場合を含むことが意図される。
【０１１３】
本明細書中で記載されるアッセイ（例えば、上述の診断アッセイまたは後述のアッセイ）は、疾患を有するかまたはそれを発症する危険を有する被験体を同定するために使用され得る。生物学的サンプルは、被験体から得られ得、そして遺伝子変更の存在または非存在について試験され得る。例えば、このような遺伝的変更は、以下のうちの少なくとも１つの存在を特定することによって検出され得る：１）２３２遺伝子、２０５９遺伝子、１０６３０遺伝子、１２８４８遺伝子、１３８７５遺伝子、１４３９５遺伝子、１４６１８遺伝子、１７６９２遺伝子または５８８７４遺伝子からの１つ以上のヌクレオチドの欠失、２）２３２遺伝子、２０５９遺伝子、１０６３０遺伝子、１２８４８遺伝子、１３８７５遺伝子、１４３９５遺伝子、１４６１８遺伝子、１７６９２遺伝子または５８８７４遺伝子への１つ以上のヌクレオチドの付加、３）２３２遺伝子、２０５９遺伝子、１０６３０遺伝子、１２８４８遺伝子、１３８７５遺伝子、１４３９５遺伝子、１４６１８遺伝子、１７６９２遺伝子または５８８７４遺伝子の１つ以上のヌクレオチドの置換、４）２３２遺伝子、２０５９遺伝子、１０６３０遺伝子、１２８４８遺伝子、１３８７５遺伝子、１４３９５遺伝子、１４６１８遺伝子、１７６９２遺伝子または５８８７４遺伝子の染色体再配置、５）２３２遺伝子、２０５９遺伝子、１０６３０遺伝子、１２８４８遺伝子、１３８７５遺伝子、１４３９５遺伝子、１４６１８遺伝子、１７６９２遺伝子または５８８７４遺伝子のメッセンジャーＲＮＡ転写のレベルの変更、６）２３２遺伝子、２０５９遺伝子、１０６３０遺伝子、１２８４８遺伝子、１３８７５遺伝子、１４３９５遺伝子、１４６１８遺伝子、１７６９２遺伝子または５８８７４遺伝子の異常な改変（例えば、ゲノムＤＮＡのメチル化パターン）、７）２３２遺伝子、２０５９遺伝子、１０６３０遺伝子、１２８４８遺伝子、１３８７５遺伝子、１４３９５遺伝子、１４６１８遺伝子、１７６９２遺伝子または５８８７４遺伝子のメッセンジャーＲＮＡ転写の非野生型スプラシングパターンの存在、８）２３２タンパク質、２０５９タンパク質、１０６３０タンパク質、１２８４８タンパク質、１３８７５タンパク質、１４３９５タンパク質、１４６１８タンパク質、１７６９２タンパク質または５８８７４タンパク質の非野生型レベル、９）２３２遺伝子、２０５９遺伝子、１０６３０遺伝子、１２８４８遺伝子、１３８７５遺伝子、１４３９５遺伝子、１４６１８遺伝子、１７６９２遺伝子または５８８７４遺伝子の対立遺伝子欠損、および１０）２３２タンパク質、２０５９タンパク質、１０６３０タンパク質、１２８４８タンパク質、１３８７５タンパク質、１４３９５タンパク質、１４６１８タンパク質、１７６９２タンパク質または５８８７４タンパク質の不適切な翻訳後改変。
【０１１４】
本明細書中に記載されるように、２３２遺伝子、２０５９遺伝子、１０６３０遺伝子、１２８４８遺伝子、１３８７５遺伝子、１４３９５遺伝子、１４６１８遺伝子、１７６９２遺伝子または５８８７４遺伝子における遺伝的変更を検出するために使用され得る当該分野において公知の多くのアッセイが、存在する。例えば、２３２遺伝子、２０５９遺伝子、１０６３０遺伝子、１２８４８遺伝子、１３８７５遺伝子、１４３９５遺伝子、１４６１８遺伝子、１７６９２遺伝子または５８８７４遺伝子における遺伝的変更は、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）（例えば、米国特許第４，６８３，１９５号および同第４，６８３，２０２号を参照のこと）（例えば、アンカーＰＣＲまたはＲＡＣＥ ＰＣＲ）、あるいは、ライゲーション連鎖反応（ＬＣＲ）（例えば、Ｌａｎｄｅｇｒａｎら（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４１：１０７７−１０８０；およびＮａｋａｚａｗａら（１９９４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９１：３６０−３６４を参照のこと）におけるプローブ／プライマーを使用して検出され得、これらのうちの後者は、２３２遺伝子、２０５９遺伝子、１０６３０遺伝子、１２８４８遺伝子、１３８７５遺伝子、１４３９５遺伝子、１４６１８遺伝子、１７６９２遺伝子または５８８７４遺伝子における点変異を検出するために特に有用であり得る（Ａｂｒａｖａｙａら（１９９５）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２３：６７５−６８２を参照のこと）。この方法は、被験体から生物学的サンプルを収集する工程、このサンプルの細胞から核酸（例えば、ゲノムＤＮＡ、ｍＲＮＡまたはこれらの両方）を単離する工程、（存在するならば）２３２遺伝子、２０５９遺伝子、１０６３０遺伝子、１２８４８遺伝子、１３８７５遺伝子、１４３９５遺伝子、１４６１８遺伝子、１７６９２遺伝子または５８８７４遺伝子のハイブリダイゼーションおよび増幅が生じるような条件下で、この核酸サンプルを、２３２遺伝子、２０５９遺伝子、１０６３０遺伝子、１２８４８遺伝子、１３８７５遺伝子、１４３９５遺伝子、１４６１８遺伝子、１７６９２遺伝子または５８８７４遺伝子に特異的にハイブリダイズする１つ以上のプライマーと接触させる工程、ならびに増幅産物の存在または非存在を検出するかあるいは増幅産物のサイズを検出しそしてコントロールサンプルと長さを比較する工程を包含する。ＰＣＲおよび／またはＬＣＲが、本明細書中に記載される変異を検出するために使用される任意の技術と組合わせて予備的増幅工程として使用するに好ましくあり得ることが、予測される。
【０１１５】
代替の増幅法としては以下が挙げられる：自己維持的配列複製（ｓｅｌｆ ｓｕｓｔａｉｎｅｄ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ）（Ｇｕａｔｅｌｌｉ，Ｊ．Ｃ．ら（１９９０）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８７：１８７４−１８７８）、転写増幅系（Ｋｗｏｈ，Ｄ．Ｙ．ら（１９８９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：１１７３−１１７７）、Ｑ−βレプリカーゼ（Ｌｉｚａｒｄｉ，Ｐ．Ｍ．ら（１９８８）Ｂｉｏ−Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ６：１１９７）、または他の核酸増幅法のいずれか、その後の当業者に周知の技術を使用する増幅分子の検出。これらの検出スキームは、このような分子が非常に少数で存在する場合に、核酸分子の検出に特に有用である。
【０１１６】
代替の実施形態において、生物学的サンプル由来の２３２遺伝子、２０５９遺伝子、１０６３０遺伝子、１２８４８遺伝子、１３８７５遺伝子、１４３９５遺伝子、１４６１８遺伝子、１７６９２遺伝子または５８８７４遺伝子における変異は、制限酵素切断パターンにおける変更によって同定され得る。例えば、サンプルおよびコントロールＤＮＡが、単離され、（必要に応じて）増幅され、１つ以上の制限エンドヌクレアーゼで消化され、そしてフラグメント長サイズが、ゲル電気泳動によって決定され、そして比較される。サンプルとコントロールＤＮＡとの間のフラグメント長サイズの差異は、サンプルＤＮＡ中の変異を示す。さらに、配列特異的リボザイム（例えば、米国特許第５，４９８，５３１号）の使用は、リボザイム切断部位の発生または喪失によって、特異的変異の存在についてスコア付けするために使用され得る。
【０１１７】
他の実施形態において、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４における遺伝的変異は、生物学的サンプル由来の核酸およびコントロール核酸（例えば、ＤＮＡまたはＲＮＡ）を、何百個または何千個のオリゴヌクレオチドプローブを含む高密度アレイにハイブリダイズさせることによって同定され得る（Ｃｒｏｎｉｎ，Ｍ．Ｔ．ら（１９９６）Ｈｕｍａｎ Ｍｕｔａｔｉｏｎ ７：２４４−２５５；Ｋｏｚａｌ，Ｍ．Ｊ．ら（１９９６）Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ２：７５３−７５９）。例えば、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４における遺伝的変異は、Ｃｒｏｎｉｎ，Ｍ．Ｔ．ら（１９９６）（上述）に記載されるような光生成ＤＮＡプローブを含む２次元アレイにおいて同定され得る。簡単には、プローブの第１のハイブリダイゼーションアレイを使用して、連続的で重複するプローブの線状アレイを作製することによって、サンプルおよびコントロールにおけるＤＮＡの長鎖を通して走査して配列間の塩基変化を同定し得る。この工程は、点変異の同定を可能にする。この工程の後、検出される全ての改変体または変異に相補的なより小さな特定化されたプローブアレイを使用することによって、特異的変異の特徴付けを可能にする第２のハイブリダイゼーションアレイが続く。各変異アレイは、パラレルプローブセット、野生型遺伝子に対するある相補体および変異遺伝子に対する他の相補体から構成される。
【０１１８】
なお別の実施形態において、当該分野において公知の種々の配列決定反応のいずれかを使用して、生物学的サンプル中の２３２遺伝子、２０５９遺伝子、１０６３０遺伝子、１２８４８遺伝子、１３８７５遺伝子、１４３９５遺伝子、１４６１８遺伝子、１７６９２遺伝子または５８８７４遺伝子を直接的に配列決定し得、そして生物学的サンプル中の２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４の配列を、対応する野生型（コントロール）配列と比較することによって変異を検出し得る。配列決定反応の例としては、ＭａｘａｍおよびＧｉｌｂｅｒｔ（１９７７）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７４：５６０またはＳａｎｇｅｒ（１９７７）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７４：５４６３によって開発された技術に基づく反応が挙げられる。種々の自動化配列決定手順のいずれかが、質量分析法による配列決定（例えば、ＰＣＴ国際公開番号ＷＯ９４／１６１０１；Ｃｏｈｅｎら（１９９６）Ａｄｖ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．３６：１２７−１６２；およびＧｒｉｆｆｉｎら（１９９３）Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．３８：１４７−１５９を参照のこと）を含む診断アッセイ（Ｎａｅｖｅ，Ｃ．Ｗ．（１９９５）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ １９：４４８−５３）を行う場合に利用され得ることもまた、企図される。
【０１１９】
２３２遺伝子、２０５９遺伝子、１０６３０遺伝子、１２８４８遺伝子、１３８７５遺伝子、１４３９５遺伝子、１４６１８遺伝子、１７６９２遺伝子または５８８７４遺伝子における変異を検出するための他の方法としては、切断剤からの保護がＲＮＡ／ＲＮＡヘテロ二重鎖またはＲＮＡ／ＤＮＡヘテロ二重鎖中でミスマッチした塩基を検出するために使用される方法が挙げられる（Ｍｙｅｒｓら（１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３０：１２４２）。一般に、「ミスマッチ切断」の分野の技術は、野生型２３２配列、２０５９配列、１０６３０配列、１２８４８配列、１３８７５配列、１４３９５配列、１４６１８配列、１７６９２配列または５８８７４配列を含む（標識された）ＲＮＡまたはＤＮＡを、組織サンプルより得られた潜在的変異ＲＮＡまたはＤＮＡとハイブリダイズさせることによって形成されるヘテロ二重鎖を提供することによって開始する。二本鎖二重鎖は、コントロール鎖とサンプル鎖との間の塩基対ミスマッチに起因して存在するような二重鎖の一本鎖領域を切断する因子で処理される。例えば、ミスマッチ領域を酵素的に消化するために、ＲＮＡ／ＤＮＡ二重鎖はＲＮａｓｅで処理され得、ＤＮＡ／ＤＮＡハイブリッドはＳ１ヌクレアーゼで処理され得る。他の実施形態において、ＤＮＡ／ＤＮＡ二重鎖またはＲＮＡ／ＤＮＡ二本鎖のいずれかが、ヒドロキシルアミンまたは四酸化オスミウムで処理され得、そして、ミスマッチ領域を消化するためにピペリジンで処理され得る。ミスマッチ領域の消化後、次いで生じた物質が、変異部位を決定するために変性ポリアクリルアミドゲル上でサイズで分けられる。例えば、Ｃｏｔｔｏｎら（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：４３９７およびＳａｌｅｅｂａら（１９９２）Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．２１７：２８６−２９５を参照のこと。好ましい実施形態において、コントロールＤＮＡまたはＲＮＡが、検出のために標識され得る。
【０１２０】
さらに別の実施形態において、ミスマッチ切断反応は、細胞のサンプルより得られた２３２ｃＤＮＡ、２０５９ｃＤＮＡ、１０６３０ｃＤＮＡ、１２８４８ｃＤＮＡ、１３８７５ｃＤＮＡ、１４３９５ｃＤＮＡ、１４６１８ｃＤＮＡ、１７６９２ｃＤＮＡまたは５８８７４ｃＤＮＡ中の点変異を検出およびマッピングするために規定された系において二本鎖ＤＮＡ中のミスマッチ塩基対を認識する１つ以上のタンパク質（「ＤＮＡミスマッチ修復」酵素と呼ばれる）を使用する。例えば、Ｅ．ｃｏｌｉのｍｕｔＹ酵素は、Ｇ／ＡミスマッチでＡを切断し、そしてＨｅＬａ細胞由来のチミジンＤＮＡグリコシラーゼは、Ｇ／ＴミスマッチでＴを切断する（Ｈｓｕら（１９９４）Ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ １５：１６５７−１６６２）。例示的実施形態に従って、２３２配列、２０５９配列、１０６３０配列、１２８４８配列、１３８７５配列、１４３９５配列、１４６１８配列、１７６９２配列または５８８７４配列（例えば、野生型の２３２配列、２０５９配列、１０６３０配列、１２８４８配列、１３８７５配列、１４３９５配列、１４６１８配列、１７６９２配列または５８８７４配列）に基づくプローブは、試験細胞からのｃＤＮＡ産物または他のＤＮＡ産物にハイブリダイズされる。二重鎖は、ＤＮＡミスマッチ修復酵素で処理され、そして存在する場合、切断産物は、電気泳動的プロトコルなどから検出され得る。例えば、米国特許第５，４５９，０３９号を参照のこと。
【０１２１】
他の実施形態において、電気泳動移動度における変化を使用して、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４の遺伝子における変異を同定する。例えば、一本鎖コンフォメーション多型（ＳＳＣＰ）を使用して、変異体核酸と野生型核酸との間の電気泳動移動度における差異を検出し得る（Ｏｒｉｔａら、（１９８９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：２７６６；Ｃｏｔｔｏｎ（１９９３）Ｍｕｔａｔ．Ｒｅｓ．２８５：１２５−１４４およびＨａｙａｓｈｉ（１９９２）Ｇｅｎｅｔ．Ａｎａｌ．Ｔｅｃｈ．Ａｐｐｌ．９：７３−７９のもまた、参照のこと）。サンプルおよびコントロールの２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４の核酸の一本鎖ＤＮＡフラグメントは変性され、そして再生が可能である。一本鎖核酸の二次構造は、配列に従って変動し、そして電気泳動移動度において得られた変化は、単一の塩基変化さえ検出することを可能とする。ＤＮＡフラグメントは、標識され得るか、または標識したプローブを用いて検出され得る。アッセイの感度は、（ＤＮＡよりはむしろ）ＲＮＡを用いることによって増強され得、ここで二次構造は、配列における変化に対してより感受性である。好ましい実施形態において、本発明の方法は、ヘテロ二重鎖分析を利用して、電気泳動移動度における変化に基づいて二本鎖ヘテロ二重鎖分子を分離する（Ｋｅｅｎら、（１９９１）Ｔｒｅｎｄｓ Ｇｅｎｅｔ ７：５）。
【０１２２】
なお別の実施形態において、変性剤の勾配を含むポリアクリルアミドにおける変異体または野生型フラグメントの移動は、変性勾配ゲル電気泳動（ＤＧＧＥ）を使用してアッセイされる（Ｍｙｅｒｓら（１９８５）Ｎａｔｕｒｅ ３１３：４９５）。ＤＧＧＥが分析の方法として使用される場合、ＤＮＡは、例えば、ＰＣＲによって約４０ｂｐの高融解ＧＣリッチＤＮＡのＧＣクランプを付加することによって、完全には変性しないことを保証するために改変される。さらなる実施形態において、温度勾配は、コントロールＤＮＡおよびサンプルＤＮＡの移動度における差異を同定するために、変性勾配の代わりに使用される（ＲｏｓｅｎｂａｕｍおよびＲｅｉｓｓｎｅｒ（１９８７）Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｃｈｅｍ ２６５：１２７５３）。
【０１２３】
点変異を検出するための他の技術の例としては、選択的オリゴヌクレオチドハイブリダイゼーション、選択的増幅、または選択的プライマー伸張が挙げられるがこれらに限定されない。例えば、オリゴヌクレオチドプライマーが調製され得、ここで、公知の変異が中心的におきかえられ、次いで完全な一致が見出される場合のみハイブリダイゼーションが可能となる条件下で標的ＤＮＡにハイブリダイズされる（Ｓａｉｋｉら（１９８６）Ｎａｔｕｒｅ ３２４：１６３；Ｓａｉｋｉら（１９８９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：６２３０）。このような対立遺伝子特異的オリゴヌクレオチドは、このオリゴヌクレオチドがハイブリダイズする膜に結合され、標識された標的ＤＮＡとハイブリダイズされる場合に、ＰＣＲ増幅した標的ＤＮＡまたは多数の異なる変異にハイブリダイズされる。
【０１２４】
あるいは、選択的ＰＣＲ増幅に依存する対立遺伝子（ａｌｌｅｌｅｃ）特異的増幅技術は、本発明と組み合わせて使用され得る。特異的増幅のためのプライマーとして使用されるオリゴヌクレオチドは、分子の中心において（Ｇｉｂｂｓら、（１９８９）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１７：２４３７−２４４８）、または適切な条件下でミスマッチがポリメラーゼ伸張を防ぐかまたは減少し得る１つのプライマーの最も３’末端にて（Ｐｒｏｓｓｎｅｒ（１９９３）Ｔｉｂｔｅｃｈ １１：２３８）目的の変異をもたらし得る（その結果、増幅は差次的ハイブリダイゼーションに依存する）。さらに、変異の領域に新規な制限部位を導入して、切断に基づく検出をおこすことが望ましくあり得る（Ｇａｓｐａｒｉｎｉら、（１９９２）Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｐｒｏｂｅｓ ６：１）。特定の実施形態において、増幅はまた、増幅のためのＴａｑリガーゼを使用して行われ得ることが予期される（Ｂａｒａｎｙ（１９９１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８８：１８９）。このような場合において、連結は、増幅の存在または非存在について探索することによって特定の部位での公知の変異の存在を検出し得る５’配列の３’末端にて、完全な一致が存在する場合にのみ生じる。
【０１２５】
さらに、本明細書中に記載される予後アッセイは、被験体が疾患を有効に処置するために２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４のモジュレーター（例えば、アゴニスト、アンタゴニスト、ペプチド模倣物、タンパク質、ペプチド、核酸、または低分子）を投与され得るか否かを決定するために使用され得る。
【０１２６】
（Ｃ．臨床試験の間の効果のモニタリング）
本発明はさらに、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４のモジュレーター（例えば、本明細書中において同定された２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４のモジュレーター）の、疾患の処置に対する有効性を決定するための方法を提供する。例えば、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４の遺伝子の発現増加、タンパク質レベル増加、または２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２もしくは５８８７４の活性のアップレギュレートにおける、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４のモジュレーターの有効性は、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４の遺伝子の発現減少、タンパク質レベル減少、または２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２もしくは５８８７４の活性のダウンレギュレートを示す被験体の臨床試験においてモニタリングされ得る。あるいは、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４の遺伝子の発現減少、タンパク質レベル減少、あるいは２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４の活性のダウンレギュレートにおける２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４のモジュレーターの有効性は、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４の発現増加、タンパク質レベル増加、あるいは２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４の活性の増加を示す被験体の臨床試験においてモニタリングされ得る。このような臨床試験において、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４の遺伝子、および好ましくは、例えば、造血に関与する他の遺伝子の発現または活性が、「読み出し」すなわち特定の細胞の表現型のマーカーとして使用され得る。
【０１２７】
例えば（限定のためではなく）、（例えば、本明細書中に記載されるようなスクリーニングアッセイにおいて同定される）２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４の活性を調節する因子での処置によって細胞において調節される、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４を含む遺伝子が、同定され得る。従って、血液障害を罹患する被験体に対する２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４の活性を調節する因子の効果を（例えば、臨床試験において）研究するために、細胞が単離され得、そしてＲＮＡが調製され得、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４、および血液障害に関連する他の遺伝子の発現レベルについて分析され得る。遺伝子発現レベル（例えば、遺伝子発現パターン）は、本明細書中に記載されるようなノザンブロット分析またはＲＴ−ＰＣＲによって、あるいは本明細書中に記載される方法の１つによって生成されるタンパク質の量を測定することによって、または２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２もしくは５８８７４、または他の遺伝子の活性レベルを測定することによって、定量され得る。この方法において、遺伝子発現パターンは、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４の活性を調節する因子に対する細胞の生理学的応答を示すマーカーとして作用し得る。この応答状態は、個体を２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４の活性を調節する因子で処置する前、あるいはその間の種々の時点で決定され得る。
【０１２８】
好ましい実施形態において、本発明は、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４の活性を調節する因子（例えば、アゴニスト、アンタゴニスト、ペプチド模倣物、タンパク質、ペプチド、核酸、または本明細書中に記載されるスクリーニングアッセイによって同定される低分子）での被験体の処置の有効性をモニタリングするための方法を提供し、以下の工程を包含する：（ｉ）この因子の投与前に予め投与するサンプルを被験体から得る工程；（ｉｉ）この投与前サンプル中の２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２もしくは５８８７４のタンパク質、ｍＲＮＡ、またはゲノムＤＮＡの発現レベルを検出する工程；（ｉｉｉ）投与後の１つ以上のするサンプルを被験体から得る工程；（ｉｖ）これらの投与後のサンプル中の２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２もしくは５８８７４のタンパク質、ｍＲＮＡ、またはゲノムＤＮＡの発現レベルまたは活性レベルを検出する工程；（ｖ）投与前サンプル中の２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２もしくは５８８７４のタンパク質、ｍＲＮＡ、またはゲノムＤＮＡの発現レベルまたは活性レベルを、投与後サンプル中の２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２もしくは５８８７４のタンパク質、ｍＲＮＡ、またはゲノムＤＮＡの発現レベルまたは活性レベルと比較する工程；ならびに（ｖｉ）被験体に対する因子の投与を適宜変更する工程。例えば、因子の投与増加は、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２もしくは５８８７４の発現または活性を、検出された（すなわち、因子の有効性を増加させる）レベルよりも高いレベルに増加することが、好ましくあり得る。あるいは、因子の投与減少は、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２もしくは５８８７４の発現または活性を、検出された（すなわち、因子の有効性を減少させる）レベルよりも低いレベルに減少することが、望ましくあり得る。このような実施形態に従って、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２もしくは５８８７４の発現または活性は、観察可能な表現型応答の非存在下ですら、因子の有効性の指標として使用され得る。
【０１２９】
（ＩＶ．処置方法）
本発明は、被験体（例えば、疾患の危険性のある（または疾患に罹患している疑いのある）ヒト）を処置する予防法および治療法の両方を提供する。処置の予防法および治療法の両方の観点で、このような処置は、薬理ゲノム学（ｐｈａｒｍａｃｏｇｅｎｏｍｉｃｓ）の分野から得られる知識に基づいて、特異的に仕立てられ（ｔａｉｌｏｒｅ）得るかまたは改変され得る。「薬理ゲノム学」は、本明細書中で使用される場合、遺伝子配列決定、統計的遺伝学および遺伝子発現分析のようなゲノム技術の、臨床開発および市場での薬物に対する適用をいう。より詳細には、この用語は、患者の遺伝子がどのように薬物に対する患者の応答（例えば、患者の「薬物応答表現型」または「薬物応答遺伝子型」）を決定するのかについての研究をいう。
【０１３０】
従って、本発明の別の局面は、個々の薬物応答遺伝子型に従って、本発明の２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２もしくは５８８７４の分子、または、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２もしくは５８８７４のモジュレーターのいずれかを用いる被験体の予防処置または治療処置を仕立てるための方法を提供する。薬理ゲノム学によって、臨床医（ｃｌｉｎｉｃｉａｎ）または内科医（ｐｈｙｓｉｃｉａｎ）は、この処置から最も利益を得る患者に対して予防処置または治療処置を標的化することが可能になり、そして毒性薬物関連副作用を被る患者の処置を避けることが可能になる。
【０１３１】
（Ａ．予防方法）
一局面において、本発明は２３２発現、２０５９発現、１０６３０発現、１２８４８発現、１３８７５発現、１４３９５発現、１４６１８発現、１７６９２発現、または５８８７４発現あるいは２３２活性、２０５９活性、１０６３０活性、１２８４８活性、１３８７５活性、１４３９５活性、１４６１８活性、１７６９２活性、または５８８７４活性を調節する薬剤を患者に投与することによって、患者における疾患を防ぐ方法を提供する。血液学的な障害に対する危険性のある患者は、例えば、本明細書中に記載の任意の診断的または予後的なアッセイまたはそれらの組み合わせによって同定され得る。予防薬の投与は、異常な２３２発現、２０５９発現、１０６３０発現、１２８４８発現、１３８７５発現、１４３９５発現、１４６１８発現、１７６９２発現、または５８８７４発現あるいは異常な２３２活性、２０５９活性、１０６３０活性、１２８４８活性、１３８７５活性、１４３９５活性、１４６１８活性、１７６９２活性、または５８８７４活性の特徴的症状の発生に先立って生じ得、これのよって疾患が予防されるか、あるいは、その進行が遅延される。２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２、または５８８７４の起始異常の型に依存して、例えば、２３２アゴニスト、２０５９アゴニスト、１０６３０アゴニスト、１２８４８アゴニスト、１３８７５アゴニスト、１４３９５アゴニスト、１４６１８アゴニスト、１７６９２アゴニスト、または５８８７４アゴニストあるいは２３２アンタゴニスト薬剤、２０５９アンタゴニスト薬剤、１０６３０アンタゴニスト薬剤、１２８４８アンタゴニスト薬剤、１３８７５アンタゴニスト薬剤、１４３９５アンタゴニスト薬剤、１４６１８アンタゴニスト薬剤、１７６９２アンタゴニスト薬剤、または５８８７４アンタゴニスト薬剤が、患者の処置に関して使用され得る。適切な薬剤は、本明細書中に記載のスクリーニングアッセイに基づいて決定され得る。
【０１３２】
（Ｂ．治療的方法）
本明細書中に記載したのは、血液学的な障害を回復し得る方法および組成物である。特定の血液学的な障害は、少なくとも部分的に遺伝子産物の過度のレベルによって、あるいは異常または過剰な活性を示す遺伝子産物の存在によってもたらされる。このように、このような遺伝子産物のレベルおよび／または活性の減少は、血液学的疾患の回復をもたらす。遺伝子発現のレベルまたはタンパク質の活性の減少に関する技術は、以下に議論される。
【０１３３】
あるいは、特定の他の血液学的な障害は、少なくとも一部、遺伝子発現のレベルの欠損または減少、もしくはタンパク質の活性のレベルの減少によってもたらされる。このように、遺伝子の発現および／またはこのようなタンパク質の活性の増加は、血液学的な生涯の回復をもたらす。
【０１３４】
いくつかの場合において、疾患状態における遺伝子の上方調節は、疾患状態に対しての応答において、その遺伝子産物に対する保護的な役割を反映する。このような遺伝子または遺伝子産物の活性の発現の促進は、それが影響する保護的な効果を強固にする。いくつかの血液学的な障害の状態は、このような保護的遺伝子の活性のレベルの異常に低い値に起因し得る。これらの場合において、また、遺伝発現のレベルおよび／またはこのような遺伝子産物の活性の増加は、血液学的な生涯の回復をもたらす。標的遺伝子発現レベルまたは標的遺伝子産物活性レベルを増加させるための技術は本明細書中に議論される。
【０１３５】
従って、本発明の別の局面は、治療的目的での２３２発現、２０５９発現、１０６３０発現、１２８４８発現、１３８７５発現、１４３９５発現、１４６１８発現、１７６９２発現、または５８８７４発現あるいは２３２活性、２０５９活性、１０６３０活性、１２８４８活性、１３８７５活性、１４３９５活性、１４６１８活性、１７６９２活性、または５８８７４活性の調節方法に関する。従って、例示的な実施形態において、本発明の調節的な方法は、細胞に、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２、あるいは５８８７４または細胞（例えば、内皮細胞または卵巣細胞）に関連し得る２３２タンパク質活性、２０５９タンパク質活性、１０６３０タンパク質活性、１２８４８タンパク質活性、１３８７５タンパク質活性、１４３９５タンパク質活性、１４６１８タンパク質活性、１７６９２タンパク質活性、または５８８７４のタンパク質活性の１つ以上の活性を調節する薬剤を接触させることを包含する。２３２タンパク質活性、２０５９タンパク質活性、１０６３０タンパク質活性、１２８４８タンパク質活性、１３８７５タンパク質活性、１４３９５タンパク質活性、１４６１８タンパク質活性、１７６９２タンパク質活性、または５８８７４タンパク質活性を調節する薬剤は、本明細書中に記載されるような薬剤であり得、例えば、核酸またはタンパク質、２３２タンパク質、２０５９タンパク質、１０６３０タンパク質、１２８４８タンパク質、１３８７５タンパク質、１４３９５タンパク質、１４６１８タンパク質、１７６９２タンパク質、または５８８７４タンパク質の天然に存在する標的分子（例えば、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２、または５８８７４のリガンドまたは基質）、２３２抗体、２０５９抗体、１０６３０抗体、１２８４８抗体、１３８７５抗体、１４３９５抗体、１４６１８抗体、１７６９２抗体、または５８８７４抗体、２３２アゴニスト、２０５９アゴニスト、１０６３０アゴニスト、１２８４８アゴニスト、１３８７５アゴニスト、１４３９５アゴニスト、１４６１８アゴニスト、１７６９２アゴニスト、または５８８７４アゴニストまたは２３２アンタゴニスト、２０５９アンタゴニスト、１０６３０アンタゴニスト、１２８４８アンタゴニスト、１３８７５アンタゴニスト、１４３９５アンタゴニスト、１４６１８アンタゴニスト、１７６９２アンタゴニスト、または５８８７４アンタゴニスト、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２、または５８８７４のアゴニストまたはアンタゴニストのペプチド模倣物、または他の低分子であり得る。一実施形態において、薬剤は１つ以上の２３２活性、２０５９活性、１０６３０活性、１２８４８活性、１３８７５活性、１４３９５活性、１４６１８活性、１７６９２活性、または５８８７４活性を刺激する。このような刺激薬剤の例として、活性な２３２タンパク質、２０５９タンパク質、１０６３０タンパク質、１２８４８タンパク質、１３８７５タンパク質、１４３９５タンパク質、１４６１８タンパク質、１７６９２タンパク質、または５８８７４タンパク質および細胞内に導入されている２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２、または５８８７４をコードする核酸分子が挙げられる。別の実施形態において、薬剤は、１つ以上の２３２活性、２０５９活性、１０６３０活性、１２８４８活性、１３８７５活性、１４３９５活性、１４６１８活性、１７６９２活性、または５８８７４活性を阻害する。このような阻害薬剤の例としては、アンチセンス２３２核酸分子、アンチセンス２０５９核酸分子、アンチセンス１０６３０核酸分子、アンチセンス１２８４８核酸分子、アンチセンス１３８７５核酸分子、アンチセンス１４３９５核酸分子、アンチセンス１４６１８核酸分子、アンチセンス１７６９２核酸分子、またはアンチセンス５８８７４核酸分子、抗２３２抗体、抗２０５９抗体、抗１０６３０抗体、抗１２８４８抗体、抗１３８７５抗体、抗１４３９５抗体、抗１４６１８抗体、抗１７６９２抗体、または抗５８８７４抗体、２３２インヒビター、２０５９インヒビター、１０６３０インヒビター、１２８４８インヒビター、１３８７５インヒビター、１４３９５インヒビター、１４６１８インヒビター、１７６９２インヒビター、または５８８７４インヒビターが挙げられる。これらの調節方法は、インビトロで（例えば、細胞を薬剤と共に培養することによって）、あるいは、インビボで（例えば、被験体に薬剤を投与することによって）実行され得る。このように、本発明は、異常なまたは望まない２３２タンパク質、２０５９タンパク質、１０６３０タンパク質、１２８４８タンパク質、１３８７５タンパク質、１４３９５タンパク質、１４６１８タンパク質、１７６９２タンパク質、あるいは５８８７４タンパク質あるいは２３２核酸分子、２０５９核酸分子、１０６３０核酸分子、１２８４８核酸分子、１３８７５核酸分子、１４３９５核酸分子、１４６１８核酸分子、１７６９２核酸分子、または５８８７４核酸分子の発現または活性によって特徴付けられる、疾患または障害で悩む個体を処置する方法を提供する。一実施形態において、この方法は、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２、または５８８７４の発現または活性を調節（例えば、上方調節または下方調節）する薬剤（例えば、本明細書中に記載されるスクリーニングアッセイによって同定される薬剤）または薬剤の組み合わせの投与を含む。別の実施形態において、この方法は、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２、または５８８７４が減少したか、異常であるかまたは望まない発現または活性の補償のための治療としての２３２タンパク質、２０５９タンパク質、１０６３０タンパク質、１２８４８タンパク質、１３８７５タンパク質、１４３９５タンパク質、１４６１８タンパク質、１７６９２タンパク質、または５８８７４タンパク質あるいは２３２核酸分子、２０５９核酸分子、１０６３０核酸分子、１２８４８核酸分子、１３８７５核酸分子、１４３９５核酸分子、１４６１８核酸分子、１７６９２核酸分子、または５８８７４核酸分子の投与を包含する。
【０１３６】
２３２活性、２０５９活性、１０６３０活性、１２８４８活性、１３８７５活性、１４３９５活性、１４６１８活性、１７６９２活性、または５８８７４活性の刺激は、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２、または５８８７４が異常に下方調節され、および／または増加した２３２活性、２０５９活性、１０６３０活性、１２８４８活性、１３８７５活性、１４３９５活性、１４６１８活性、１７６９２活性、または５８８７４活性が利益的な効果を有するようである状況において所望される。同様に、２３２活性、２０５９活性、１０６３０活性、１２８４８活性、１３８７５活性、１４３９５活性、１４６１８活性、１７６９２活性、または５８８７４活性の阻害は、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２、または５８８７４が異常に上方調節される状況においておよび／または減少した２３２活性、２０５９活性、１０６３０活性、１２８４８活性、１３８７５活性、１４３９５活性、１４６１８活性、１７６９２活性、または５８８７４活性が、利益的な効果を有するようである状況において所望される。
【０１３７】
（ｉ）標的遺伝子の発現、合成、または活性を阻害する方法
上記のように、心臓血管の障害に関与する遺伝子は、遺伝子活性のレベルの上昇を介して、このような障害を起こし得る。いくつかの場合において、このような上方調節は、疾患の状態に対する原因または悪化効果を有し得る。種々の技術が、このような遺伝子および／またはタンパク質の発現、合成、または活性を阻害するために使用され得る。
【０１３８】
例えば、上記のアッセイを通して同定したものような化合物は、阻害的活性を示し、本発明に従って、血液学的障害の少なくとも１つの症状に対して使用され得る。このような分子として、有機低分子、ペプチド、抗体など挙げられるが、それに限定されない。
【０１３９】
例えば、２３２タンパク質、２０５９タンパク質、１０６３０タンパク質、１２８４８タンパク質、１３８７５タンパク質、１４３９５タンパク質、１４６１８タンパク質、１７６９２タンパク質、または５８８７４タンパク質に対する内因性のリガンドに競合する化合物が、投与され得る。生じるリガンド結合性２３２タンパク質、２０５９タンパク質、１０６３０タンパク質、１２８４８タンパク質、１３８７５タンパク質、１４３９５タンパク質、１４６１８タンパク質、１７６９２タンパク質、または５８８７４タンパク質の量の減少は、内皮細胞の生理学を調節する。この目的に対して特に有用である化合物としては、例えば、２３２タンパク質、２０５９タンパク質、１０６３０タンパク質、１２８４８タンパク質、１３８７５タンパク質、１４３９５タンパク質、１４６１８タンパク質、１７６９２タンパク質、または５８８７４タンパク質の可溶性タンパク質またはペプチド（例えば、１つ以上の細胞外ドメインを含むペプチド）、あるいはそれらの部分および／またはアナログ（例えば、Ｉｇテイル融合タンパク質のような可溶性融合タンパク質が挙げられる）が挙げられる。（Ｉｇ−テールド融合タンパク質の産生についての考察について、例えば、米国特許第５，１１６，９６４号を参照のこと）。あるいは、２３２レセプター部位、２０５９レセプター部位、１０６３０レセプター部位、１２８４８レセプター部位、１３８７５レセプター部位、１４３９５レセプター部位、１４６１８レセプター部位、１７６９２レセプター部位、または５８８７４レセプター部位に結合するが、タンパク質を活性化しない、リガンドアナログまたは抗体のような化合物（例えば、レセプター−リガンドアンタゴニスト）は、２３２タンパク質活性、２０５９タンパク質活性、１０６３０タンパク質活性、１２８４８タンパク質活性、１３８７５タンパク質活性、１４３９５タンパク質活性、１４６１８タンパク質活性、１７６９２タンパク質活性、または５８８７４タンパク質活性を阻害するのに有効であり得る。
【０１４０】
さらに、２３２遺伝子、２０５９遺伝子、１０６３０遺伝子、１２８４８遺伝子、１３８７５遺伝子、１４３９５遺伝子、１４６１８遺伝子、１７６９２遺伝子、または５８８７４遺伝子の発現を阻害するアンチセンス分子およびリボザイム分子もまた、本発明に従って、異常な２３２遺伝子活性、２０５９遺伝子活性、１０６３０遺伝子活性、１２８４８遺伝子活性、１３８７５遺伝子活性、１４３９５遺伝子活性、１４６１８遺伝子活性、１７６９２遺伝子活性、または５８８７４遺伝子活性を阻害するために使用され得る。なおさらに、３重らせん分子は、異常な２３２遺伝子活性、２０５９遺伝子活性、１０６３０遺伝子活性、１２８４８遺伝子活性、１３８７５遺伝子活性、１４３９５遺伝子活性、１４６１８遺伝子活性、１７６９２遺伝子活性、または５８８７４遺伝子活性を阻害する際に利用され得る。
【０１４１】
本発明の方法において使用されるアンチセンスの核酸分子は、典型的に被験体に投与されるか、またはインサイチュで生成し、その結果、それらは、２３２タンパク質、２０５９タンパク質、１０６３０タンパク質、１２８４８タンパク質、１３８７５タンパク質、１４３９５タンパク質、１４６１８タンパク質、１７６９２タンパク質、または５８８７４タンパク質をコードする細胞ｍＲＮＡおよび／またはゲノムＤＮＡにハイブリダイズまたは結合し、それによってこれらのタンパク質の発現を阻害する（例えば、転写および／または翻訳を阻害することによって）。このハイブリダイゼーションは安定な二重鎖を形成するための従来のヌクレオチド相補性により得るか、あるいは、例えばＤＮＡ二重鎖と結合するアンチセンスの核酸分子の場合、二重らせんの主要な溝における特異的相互作用を介し得る。本発明のアンチセンス核酸分子の投与経路の例は、組織部位での直接的な注射を含む。あるいは、アンチセンス核酸分子は、選択された細胞を標的とするように改変され得、次いで、全身に投与され得る。例えば、全身の投与に関して、アンチセンス分子は、調節され得、そして、アンチセンス分子は、選択された細胞表面上に発現するレセプターまたは抗原に特異的に結合する（例えば、アンチセンス核酸分子を細胞表面レセプターまたは抗原に結合するペプチドまたは抗原に結合することによって）ように改変され得る。アンチセンス核酸分子は、また、本明細書中に記載のベクターを使用して細胞に送達され得る。アンチセンス分子の十分な細胞内濃度を達成するために、ベクター構築物が、強力なｐｏｌＩＩまたはｐｏｌＩＩＩプロモーターのコントロールの条件下に置かれるアンチセンス核酸分子が好ましい。
【０１４２】
さらに別の実施形態において、本発明の方法において使用されるアンチセンス核酸分子は、α−アノマー型核酸分子である。α−アノマー型核酸分子は、相補的なＲＮＡと特異的な二本鎖ハイブリッドを形成し、ここで、通常のβユニットに反して、鎖は各々平行になる（Ｇａｕｌｔｉｅｒら、（１９８７）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ．Ｒｅｓ．１５：６６２５−６６４１）。アンチセンス核酸分子はまた、２’−ｏ−メチルリボヌクレオチド（Ｉｎｏｕｅら、（１９８７）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１５：６１３１−６１４８）またはキメラＲＮＡ−ＤＮＡアナログ（Ｉｎｏｕｅら（１９８７）ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．２１５：３２７−３３０）を含み得る。
【０１４３】
なお別の実施形態において、本発明の方法に使用されるアンチセンス核酸は、リボザイムである。リボザイムは、これらのリボザイムが相補的領域を有する、一本鎖核酸（例えば、ｍＲＮＡ）を切断し得るリボヌクレアーゼ活性を有する触媒性ＲＮＡ分子である。従って、リボザイム（例えば、ハンマーヘッドリボザイム（ＨａｓｅｌｈｏｆｆおよびＧｅｒｌａｃｈ（１９８８）Ｎａｔｕｒｅ ３３４：５８５−５９１に記載される））は、２３２ｍＲＮＡ転写物、２０５９ｍＲＮＡ転写物、１０６３０ｍＲＮＡ転写物、１２８４８ｍＲＮＡ転写物、１３８７５ｍＲＮＡ転写物、１４３９５ｍＲＮＡ転写物、１４６１８ｍＲＮＡ転写物、１７６９２ｍＲＮＡ転写物または５８８７４ｍＲＮＡ転写物を触媒的に切断するために使用されて、それによって、２３２ｍＲＮＡ、２０５９ｍＲＮＡ、１０６３０ｍＲＮＡ、１２８４８ｍＲＮＡ、１３８７５ｍＲＮＡ、１４３９５ｍＲＮＡ、１４６１８ｍＲＮＡ、１７６９２ｍＲＮＡまたは５８８７４ｍＲＮＡの翻訳を阻害し得る。５７７コード核酸、２０７３９コード核酸または５７１４５コード核酸に対して特異性を有するリボザイムは、本明細書中に開示される２３２ｃＤＮＡ、２０５９ｃＤＮＡ、１０６３０ｃＤＮＡ、１２８４８ｃＤＮＡ、１３８７５ｃＤＮＡ、１４３９５ｃＤＮＡ、１４６１８ｃＤＮＡ、１７６９２ｃＤＮＡまたは５８８７４ｃＤＮＡ（すなわち、配列番号１または配列番号３）のヌクレオチド配列に基づいて設計され得る。例えば、Ｔｅｔｒａｈｙｍｅｎａ Ｌ−１９ ＩＶＳ ＲＮＡの誘導体は、活性部位のヌクレオチド配列が５７７コードｍＲＮＡ、２０７３９コードｍＲＮＡまたは５７１４５コードｍＲＮＡにおいて切断されるべきヌクレオチド配列に対して相補的であるように構築され得る（例えば、Ｃｅｃｈら、米国特許第４，９８７，０７１号；およびＣｅｃｈら、米国特許第５，１１６，７４２号を参照のこと）。あるいは、２３２ｍＲＮＡ、２０５９ｍＲＮＡ、１０６３０ｍＲＮＡ、１２８４８ｍＲＮＡ、１３８７５ｍＲＮＡ、１４３９５ｍＲＮＡ、１４６１８ｍＲＮＡ、１７６９２ｍＲＮＡまたは５８８７４ｍＲＮＡを使用して、ＲＮＡ分子のプールから特異的なリボヌクレアーゼ活性を有する触媒性ＲＮＡを選択し得る（例えば、Ｂａｒｔｅｌ，Ｄ．およびＳｚｏｓｔａｋ，Ｊ．Ｗ．（１９９３）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６１：１４１１−１４１８を参照のこと）。
【０１４４】
２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４の遺伝子の発現はまた、標的細胞中で２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４の遺伝子の転写を阻害する三重ヘリックス構造を形成するために、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４の調節領域（例えば、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４のプロモーターおよび／またはエンハンサー）に相補的なヌクレオチド配列を標的化することによって阻害され得る（例えば、Ｈｅｌｅｎｅ，Ｃ．（１９９１）Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｄｒｕｇ Ｄｅｓ．６（６）：５６９−８４；Ｈｅｌｅｎｅ，Ｃ．ら（１９９２）Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．６６０：２７−３６；およびＭａｈｅｒ，Ｌ．Ｊ．（１９９２）Ｂｉｏａｓｓａｙｓ １４（１２）：８０７−１５を参照のこと）。
【０１４５】
２３２タンパク質、２０５９タンパク質、１０６３０タンパク質、１２８４８タンパク質、１３８７５タンパク質、１４３９５タンパク質、１４６１８タンパク質、１７６９２タンパク質または５８８７４タンパク質に特異的であり、かつその活性を妨害する抗体もまた、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４のタンパク質機能を調節または阻害するために使用され得る。このような抗体は、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４のタンパク質自体、あるいはこのタンパク質の部分に対応するペプチドに対して、本明細書中に記載される標準的技術を使用して作製され得る。このような抗体としては、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、Ｆａｂフラグメント、単鎖抗体、またはキメラ抗体が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１４６】
標的遺伝子タンパク質が細胞内であり、かつ全抗体が使用される例において、内部移行（ｉｎｔｅｒｎａｌｉｚｉｎｇ）抗体が好ましくあり得る。リポフェクチンリポソームは、標的エピトープに結合するＦａｂ領域の抗体またはフラグメントを細胞内に送達するために使用され得る。抗体のフラグメントが使用される場合、標的タンパク質の結合ドメインに結合する最小の阻害性フラグメントが、好ましい。例えば、標的遺伝子タンパク質に結合する抗体の可変領域のドメインに対応するアミノ酸配列を有するペプチドが使用され得る。このようなペプチドは、当該分野で周知の方法を使用して、化学的に合成され得るかまたは組換えＤＮＡ技術を介して産生され得る（例えば、Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ（１９８３）、前出；およびＳａｍｂｒｏｏｋら、（１９８９）前出、に記載される）。細胞内標的遺伝子エピトープに結合する単鎖中和抗体もまた、投与され得る。このような単鎖抗体は、例えば、Ｍａｒａｓｃｏら、（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：７８８９−７８９３に記載されるような技術を利用することにより、例えば、標的細胞集団内で単鎖抗体をコードするヌクレオチド配列を発現させることによって、投与され得る。
【０１４７】
いくつかの例において、標的遺伝子タンパク質は、細胞外タンパク質であるか、または膜貫通タンパク質（例えば、２３２タンパク質、２０５９タンパク質、１０６３０タンパク質、１２８４８タンパク質、１３８７５タンパク質、１４３９５タンパク質、１４６１８タンパク質、１７６９２タンパク質または５８８７４タンパク質）である。例えば、２３２タンパク質、２０５９タンパク質、１０６３０タンパク質、１２８４８タンパク質、１３８７５タンパク質、１４３９５タンパク質、１４６１８タンパク質、１７６９２タンパク質または５８８７４タンパク質の１つ以上の細胞外ドメインに特異的であり、かつその活性を妨害する抗体は、血液学的障害（ｈｅｍａｎｔｏｌｏｇｉｃａｌ ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ）または血液学的障害（ａ ｈｅｍａｎｔｏｌｏｇｉｃａｌ ｄｉｓｏｒｄｅｒ）の処置に特に有用である。このような抗体は、特に効率的である。なぜなら、これらは、血流から直接的に標的ドメインにアクセスし得るからである。ペプチド投与に適切な、以下に記載される任意の投与技術が、阻害性標的遺伝子抗体をそれらの作用部位に効率的に投与するために利用され得る。
【０１４８】
（（ｉｉ）標的遺伝子活性を再生または増大させる方法）
血液学的障害を生じる遺伝子は、疾患状況内で過小発現され得る。あるいは、このような遺伝子のタンパク質産物の活性は、低下され得、血液学的障害の発症を導く。このような遺伝子発現のダウンレギュレートまたはタンパク質活性の低下は、疾患状態に対する原因的影響または悪化させる影響を有し得る。
【０１４９】
いくつかの場合、疾患状態においてアップレギュレートされる遺伝子は、予防効果を発揮し得る。種々の技術が、血液学的障害状態に対する予防効果を発揮する、遺伝子および／またはタンパク質の発現、合成、または活性を増大させるために用いられ得る。
【０１５０】
この節に記載されるものは、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４の活性のレベルを血液学的障害の症状が改善されるレベルまで、増大させ得る方法である。２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４の活性のレベルは、例えば、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４の遺伝子発現のレベルを増加させるか、または存在する活性な２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４のタンパク質のレベルを増加させることのいずれかによって、増加され得る。
【０１５１】
例えば、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４のタンパク質は、血液学的障害の少なくとも１つの症状を改善するのに十分なレベルで、このような症状を示す患者に投与され得る。以下で議論される技術のいずれかが、このような投与のために用いられ得る。当業者は、以下に記載されるような技術を利用して、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４のタンパク質の有効な、非毒性用量の濃度を決定する方法を容易に知る。
【０１５２】
さらに、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４のタンパク質をコードするＲＮＡ配列は、血液学的障害を示す患者に、血液学的障害が改善される２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４のタンパク質のレベルを生じるのに十分な濃度で、直接投与され得る。化合物の細胞内投与を達成する以下に記載される技術（例えば、リポソーム投与）のいずれかは、このようなＲＮＡ分子の投与のために用いられ得る。ＲＮＡ分子は、例えば、本明細書中に記載されるような組換え技術により作製され得る。
【０１５３】
さらに、被験体は、遺伝子置換治療により処置され得る。２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４の機能を有する、正常な２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４のタンパク質の産生を指向する、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４の遺伝子、あるいはその部分の１以上のコピーは、ＤＮＡを細胞へと導入する他の粒子（例えば、リポソーム）に加えて、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、およびレトロウイルスベクターを含むが、これらに限定されない、ベクターを用いて細胞へと挿入され得る。さらに、上記のような技術は、ヒト細胞への、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４の遺伝子配列の導入のために用いられ得る。
【０１５４】
次いで、細胞、好ましくは、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４発現遺伝子配列を含む自系の細胞は、血液学的障害の改善を可能にする位置で被験体へと導入または再導入され得る。このような細胞置換技術は、例えば、遺伝子産物が、分泌された、細胞外遺伝子産物である場合、好ましくあり得る。
【０１５５】
（Ｃ．薬学的組成物）
本発明の別の局面は、疾患に罹患した被験体を処置するための方法に関する。これらの方法は、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４の発現または活性を調節する因子（例えば、本明細書中に記載されるスクリーニングアッセイにより同定される因子）、またはこのような因子の組み合わせを、被験体に投与することを包含する。別の実施形態では、この方法は、低下した、異常な、または望ましくない、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４の発現または活性を補償するための治療として、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４のタンパク質または核酸分子を、被験体に投与することを包含する。
【０１５６】
２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４の活性の刺激は、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４が異常にダウンレギュレートされる、そして／あるいは上昇した２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４の活性が、有益な効果を有すると考えられる状況において好適である。同様に、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４の活性の阻害は、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４が、異常にアップレギュレートされる、そして／あるいは減少した２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４の活性が、有益な効果を有すると考えられる状況において好適である。
【０１５７】
２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４の活性を調節する因子は、このような投与に適切な薬学的組成物を用いて、被験体に投与され得る。このような組成物は、代表的には、因子（例えば、核酸分子、タンパク質、または抗体）および薬学的に受容可能なキャリアを含む。本明細書中で使用される場合、語「薬学的に受容可能なキャリア」は、薬学的投与に適合性の、任意および全ての溶媒、分散媒体、コーティング、抗菌性および抗真菌性の薬剤、等張剤および吸収遅延剤などを含むことが意図される。このような媒体および薬剤の、薬学的に活性な物質のための使用は、当該分野で周知である。この活性な化合物と非適合性である任意の従来の媒体または薬剤の範囲を除いて、本発明の組成物におけるこのような媒体および薬剤の使用が企図される。補助的な活性化合物もまた、この組成物に組み込まれ得る。
【０１５８】
本発明の治療方法において使用される薬学的組成物は、その意図される投与経路と適合性となるように処方される。投与経路の例としては、非経口的（例えば、静脈内、皮内、皮下）、経口（例えば、吸入）、経皮（局所的）、経粘膜、および直腸投与が挙げられる。非経口、皮内、または皮下適用のために使用される溶液または懸濁液は、以下の成分を含み得る：滅菌希釈剤（例えば、注射のための水、生理食塩水溶液、不揮発性油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコールまたは他の合成溶媒）；抗菌剤（例えば、ベンジルアルコールまたはメチルパラベン）；抗酸化剤（例えば、アスコルビン酸または亜硫酸水素ナトリウム）；キレート試薬（例えば、エチレンジアミン四酢酸）；緩衝液（例えば、酢酸塩、クエン酸塩、またはリン酸塩）、および張性を調整するための薬剤（例えば、塩化ナトリウムまたはブドウ糖）。ｐＨは、酸または塩基（例えば、塩酸または水酸化ナトリウム）を用いて調整され得る。非経口的調製物は、ガラスまたはプラスチックから作製されるアンプル、使い捨てシリンジ、または複数用量のバイアルに封入され得る。
【０１５９】
注入用途のために適切な薬学的組成物としては、滅菌水溶液（水溶性の場合）または分散体、および滅菌注射可能な溶液または分散体の即席調製のための滅菌粉末が挙げられる。静脈内投与のために適切なキャリアとしては、生理食塩水、静菌水、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ ＥＬＴＭ（ＢＡＳＦ，Ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ，ＮＪ）またはリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）が挙げられる。全ての場合において、この組成物は、無菌でなければならず、そして容易な注入性（ｓｙｒｉｎｇａｂｉｌｉｔｙ）が存在する程度に流動性であるべきである。この組成物は、製造および貯蔵の条件下で安定でなければならず、そして細菌および真菌のような微生物の混入作用に対して保護されなければならない。このキャリアは、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、および液体ポリエチレングリコールなど）、ならびにこれらの適切な混合物を含む溶媒または分散媒体であり得る。適切な流動性は、例えば、レシチンのようなコーティングの使用によって、分散体の場合において要求される粒子サイズを維持することによって、および界面活性剤の使用によって、維持され得る。微生物の作用の予防は、種々の抗菌剤および抗真菌剤（例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸、チメロサールなど）によって達成され得る。多くの場合、組成物中に等張剤（例えば、糖類、マンニトール、ソルビトールのようなポリアルコール、塩化ナトリウム）を含むことが好ましい。注入可能組成物の長期の吸収は、この組成物中に吸収を遅延する薬剤（例えば、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチン）を含むことによってもたらされ得る。
【０１６０】
滅菌の注入可能な溶液は、上記に列挙された成分のうちの１つまたは組み合わせと共に、必要とされる量の２３２活性、２０５９活性、１０６３０活性、１２８４８活性、１３８７５活性、１４３９５活性、１４６１８活性、１７６９２活性もしくは５８８７４活性（例えば、２３２タンパク質、２０５９タンパク質、１０６３０タンパク質、１２８４８タンパク質、１３８７５タンパク質、１４３９５タンパク質、１４６１８タンパク質、１７６９２タンパク質もしくは５８８７４タンパク質のフラグメントまたは抗２３２抗体、抗２０５９抗体、抗１０６３０抗体、抗１２８４８抗体、抗１３８７５抗体、抗１４３９５抗体、抗１４６１８抗体、抗１７６９２抗体もしくは抗５８８７４抗体）を調節する薬剤を適切な溶媒に取り込み、続いて、必要に応じて滅菌濾過することによって調製され得る。一般に、分散体は、基本分散媒体および上記に列挙される成分のうちの必要とされる他の成分を含む滅菌ビヒクルに、この活性化合物を取り込むことによって調製される。滅菌の注入可能な溶液の調製のための滅菌粉末の場合、好ましい調製方法は、活性成分の粉末および以前に滅菌濾過されたその溶液からの任意のさらなる所望の成分を得る、真空乾燥および凍結乾燥である。
【０１６１】
経口組成物は、一般に、不活性希釈剤または食用キャリアを含む。これらは、ゼラチンカプセルに封入され得るか、または錠剤に加圧され得る。経口治療投与の目的で、この活性化合物は、賦形剤と共に組み込まれ、そして錠剤、トローチ、またはカプセルの形態で使用される。経口組成物はまた、うがい薬としての使用のための流体キャリアを使用して調製され得、ここで、流体キャリア中の化合物は、経口的に適用され、そしてスウィッシュ（ｓｗｉｓｈ）され、そして吐き出されるかまたは飲み込まれる。薬学的に適合性の結合剤、および／またはアジュバント材料が、この組成物の一部として含まれ得る。錠剤、丸剤、カプセル剤、トローチ剤などが、以下の成分のいずれかまたは同様の性質を有する化合物を含み得る：結合剤（例えば、微結晶セルロース、ガムトラガントまたはゼラチン）；賦形剤（例えば、デンプンまたはラクトース）、崩壊剤（例えば、アルギン酸、Ｐｒｉｍｏｇｅｌ、またはコーンスターチ）；滑沢剤（例えば、ステアリン酸マグネシウムまたはＳｔｅｒｏｔｅｓ）；グライダント（ｇｌｉｄａｎｔ）（例えば、コロイド状二酸化ケイ素）；甘味剤（例えば、スクロースまたはサッカリン）；あるいは矯味矯臭剤（例えば、ペパーミント、サリチル酸メチル、またはオレンジフレーバー）。
【０１６２】
吸入による投与について、この化合物は、適切な噴霧剤（例えば、二酸化炭素のような気体）を含む圧縮容器またはディスペンサー、あるいは噴霧器から、エアロゾルスプレーの形態で送達される。
【０１６３】
全身的投与はまた、経粘膜手段または経皮手段により得る。経粘膜投与または経皮投与について、浸透されるバリアに対して適切な浸透剤が、処方物中で使用される。このような浸透剤は、一般的に、当該分野で公知であり、そして、例えば、経粘膜投与については、界面活性剤、胆汁酸塩、およびフシジン酸誘導体が挙げられる。経粘膜投与は、鼻スプレーまたは坐剤の使用によって達成され得る。経皮投与については、この活性化合物は、当該分野で一般的に公知である軟膏剤、軟膏、ゲル、またはクリーム剤へ処方される。
【０１６４】
２３２活性、２０５９活性、１０６３０活性、１２８４８活性、１３８７５活性、１４３９５活性、１４６１８活性、１７６９２活性もしくは５８８７４活性を調節する薬剤はまた、直腸送達のための坐剤（例えば、ココアバターおよび他のグリセリドのような従来の坐剤ベースと共に）または保持浣腸の形態で調製され得る。
【０１６５】
１つの実施形態において、この２３２活性、２０５９活性、１０６３０活性、１２８４８活性、１３８７５活性、１４３９５活性、１４６１８活性、１７６９２活性もしくは５８８７４活性を調節する薬剤は、身体からの迅速な排出に対してこの化合物を保護するキャリアを用いて調製され（例えば、制御放出処方物）、これには、移植片およびマイクロカプセル化された送達系が挙げられる。エチレン酢酸ビニル、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、およびポリ乳酸のような、生分解性、生体適合性ポリマーが使用され得る。このような処方物の調製のための方法は、当業者には明らかである。これらの材料はまた、Ａｌｚａ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｎｏｖａ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．から商業的に入手可能である。リポソーム懸濁液（ウイルス抗原に対するモノクローナル抗体を用いて、感染させた細胞へ標的化されるリポソームを含む）がまた、薬学的に受容可能なキャリアとして使用され得る。これらは、例えば、米国特許第４，５２２，８１１号に記載されるような、当業者に公知の方法に従って調製され得る。
【０１６６】
投与の容易さおよび投薬量の均一性のために、投薬単位形態で、経口組成物または非経口組成物を処方することが、特に有益である。本明細書で使用される場合、投薬単位形態は、処置される被験体のための単位投薬量として適切な、物理的に個々の単位をいい；各単位は、必要とされる薬学的キャリアと関連して、所望の治療的効果を生じるように計算された所定量の活性化合物を含む。本発明の投薬単位形態についての詳細は、２３２活性、２０５９活性、１０６３０活性、１２８４８活性、１３８７５活性、１４３９５活性、１４６１８活性、１７６９２活性もしくは５８８７４活性を調節する薬剤の固有の特性、および達成される特定の治療効果、ならびに被験体の処置のためのこのような薬剤を調合する当該分野に固有の制限によって決定され、これらに直接依存する。
【０１６７】
そのような薬剤の毒性および治療効力は、例えば、ＬＤ５０（集団の５０％に対して致死性である用量）およびＥＤ５０（集団のうちの５０％において治療上有効な用量）を決定するための、細胞培養物または実験動物における標準的薬学的手順によって決定され得る。毒性効果と治療効果との間の用量比は、治療指数であり、そしてそれは、比ＬＤ５０／ＥＤ５０として表され得る。大きな治療指数を示す薬剤が、好ましい。毒性副作用を示す薬剤が使用され得るが、非感染細胞に対して生じ得る損傷を最小にして副作用を低減するために、罹患した組織部位にそのような薬剤を標的化する送達システムを設計するために注意が払われるべきである。
【０１６８】
細胞培養アッセイおよび動物実験から得られるデータは、ヒトにおける使用のために一定範囲の投与量を処方する際に使用され得る。そのような２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２もしくは５８８７４調節剤の投薬量は、好ましくは、毒性をほとんど伴わないかまたは全く伴わない、ＥＤ５０を含む一定範囲の循環濃度内に入る。その投薬量は、使用される投薬形態および利用される投与経路に依存して、この範囲内で変動し得る。本発明の治療方法において使用されるどの薬剤についても、治療上有効な用量は、細胞培養アッセイからまず推定され得る。細胞培養において決定されるようなＩＣ５０（すなわち、症状の最大阻害半分を達成する試験化合物濃度）を含む循環血漿濃度範囲を達成するための用量が、動物モデルにおいて処方され得る。そのような情報は、ヒトにおいて有用な用量をより正確に決定するために、使用され得る。血漿中のレベルは、例えば、高速液体クロマトグラフィーによって測定され得る。
【０１６９】
本明細書中で規定される場合、タンパク質またはポリペプチドの治療上有効な量（すなわち、有効投薬量）は、約０．００１〜３０ｍｇ／ｋｇ体重、好ましくは、約０．０１〜２５ｍｇ／ｋｇ体重、より好ましくは、約０．１〜２０ｍｇ／ｋｇ体重、およびなおより好ましくは、約１〜１０ｍｇ／ｋｇ体重、２〜９ｍｇ／ｋｇ体重、３〜８ｍｇ／ｋｇ体重、４〜７ｍｇ／ｋｇ体重、または５〜６ｍｇ／ｋｇ体重の範囲である。特定の要因が、被験体を有効に処置するために必要な投薬量に影響し得ることを当業者は認識し、そのような要因としては、疾患もしくは障害の重篤度、以前の処置、被験体の全身の健康および／または年齢、ならびに存在する他の疾患が挙げられるが、これらに限定されない。さらに、治療上有効な量のタンパク質、ポリペプチド、または抗体を用いる被験体の処置は、単回処置を包含し得るか、または好ましくは、一連の処置を包含し得る。
【０１７０】
好ましい例において、被験体は、約０．１〜２０ｍｇ／ｋｇ体重の間の範囲にある抗体、タンパク質、またはポリペプチドを用いて、１週間に１回、約１〜１０週間の間、好ましくは２〜８週間の間、より好ましくは約３〜７週間の間、そしてなおより好ましくは約４週間、５週間、または６週間の間、処置される。処置に使用される抗体、タンパク質、またはポリペプチドの有効投薬量は、特定の処置経過にわたって増加または減少し得ることもまた、認識される。投薬量の変化は、本明細書中に記載される診断アッセイの結果から生じ得、そしてその結果から明らかになり得る。
【０１７１】
本発明は、発現または活性を調節する薬剤を包含する。薬剤は、例えば、低分子であり得る。例えば、そのような低分子としては、ペプチド、ペプチド模倣物、アミノ酸、アミノ酸アナログ、ポリヌクレオチド、ポリヌクレオチドアナログ、ヌクレオチド、ヌクレオチドアナログ、約１０，０００グラム／モル未満の分子量を有する有機化合物もしくは無機化合物（すなわち、ヘテロ有機化合物および有機金属化合物を含む）、約５，０００グラム／モル未満の分子量を有する有機化合物もしくは無機化合物、約１，０００グラム／モル未満の分子量を有する有機化合物もしくは無機化合物、約５００グラム／モル未満の分子量を有する有機化合物もしくは無機化合物、ならびにそのような化合物の塩、エステル、および他の薬学的に受容可能な形態が挙げられるが、これらに限定されない。低分子薬剤の適切な用量は、当業者である医師、獣医師、または研究者の知識内にある多数の要因に依存することが理解される。この低分子の用量は、例えば、処置される被験体またはサンプルの身元、サイズおよび状態に依存して変化し、さらに、該当する場合は、その組成物が投与される経路、ならびに本発明の核酸もしくはポリペプチドに対してその低分子が有することを実施者が望む効果に依存して変化する。
【０１７２】
例示的な用量としては、被験体またはサンプルの重量１ｋｇあたり、ミリグラム量またはマイクログラム量の低分子（例えば、約１μｇ／ｋｇ〜約５００ｍｇ／ｋｇ、約１００μｇ／ｋｇ〜約５ｍｇ／ｋｇ、または約１μｇ／ｋｇ〜約５０μｇ／ｋｇ）が挙げられる。低分子の適切な用量は、調節されるべき発現または活性に関するその低分子の能力に依存することが、さらに理解される。そのような適切な用量は、本明細書中に記載されるアッセイを使用して決定され得る。これらの低分子のうちの１つ以上が、本発明のポリペプチドまたは核酸の発現もしくは活性を調節するために動物（例えば、ヒト）に投与される場合、医師、獣医師、または研究者は、例えば、最初に比較的低用量を処方し、その後、適切な応答が得られるまでその用量を増加させ得る。さらに、特定の任意の動物被験体についての特定の用量レベルは、種々の要因（使用される特定の化合物の活性、被験体の年齢、被験体の体重、被験体の全身の健康、被験体の性別、および被験体の食餌、投与時期、投与経路、排出速度、任意の薬物組み合わせ、ならびに調節されるべき発現または活性の程度を含む）に依存することが、理解される。
【０１７３】
さらに、抗体（またはそのフラグメント）は、治療部分（例えば、細胞毒）、治療剤、または放射性金属イオンに結合体化され得る。細胞毒または細胞傷害性薬剤は、細胞に対して有害な任意の薬剤を包含する。例としては、タキソール、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、臭化エチジウム、エメチン、マイトマイシン、エトポシド、テノポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラシンジオン、ミトキサントロン、ミトラマイシン、アクチノマイシンＤ、１−デヒドロテストステロン、グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロパロノール、およびピューロマイシン、ならびにそれらのアナログまたはホモログが挙げられる。治療剤としては、代謝拮抗物質（例えば、メトトレキサート、６−メルカプトプリン、６−チオグアニン、シタラビン、５−フルオロウラシル、ダカルバジン（ｄｅｃａｒｂａｚｉｎｅ））、アルキル化剤（例えば、メクロレタミン、チオエパクロラムブシル、メルファラン、カルムスチン（ＢＳＮＵ）、およびロムスチン（ＣＣＮＵ）、シクロホスファミド（ｃｙｃｌｏｔｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）、ブスルファン、ジブロモマンニトール、ストレプトゾトシン、マイトマイシンＣ、およびｃｉｓ−ジクロロジアミン白金（ＩＩ）（ＤＤＰ）シスプラチン）、アントラサイクリン（例えば、ダウノルビシン（前名ダウノマイシン）およびドキソルビシン）、抗生物質（例えば、ダクチノマイシン（前名アクチノマイシン）、ブレオマイシン、ミトラマイシン、およびアントラマイシン（ＡＭＣ））、ならびに抗有糸分裂薬（例えば、ビンクリスチンおよびビンブラスチン）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１７４】
本発明の結合体は、所定の生物学的応答を改変するために使用され得、その薬物部分は、古典的な化学的治療剤に限定するように解釈されるべきではない。例えば、その薬物部分は、所望の生物学的活性を保有するタンパク質またはポリペプチドであり得る。そのようなタンパク質としては、例えば、トキシン（例えば、アブリン、リシンＡ、シュードモナス外毒素、またはジフテリアトキシン）；タンパク質（例えば、腫瘍壊死因子、α−インターフェロン、β−インターフェロン、神経成長因子、血小板由来増殖因子、組織プラスミノゲン活性化因子）；または生物学的応答改変因子（例えば、リンホカイン、インターロイキン−１（「ＩＬ−１」）、インターロイキン−２（「ＩＬ−２」）、インターロイキン−６（「ＩＬ−６」）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（「ＧＭ−ＣＳＦ」）、顆粒球コロニー刺激因子（「Ｇ−ＣＳＦ」）、あるいは他の増殖因子が挙げられ得る。
【０１７５】
そのような治療部分を抗体に結合体化するための技術は、周知である。例えば、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｒｅｉｓｆｅｌｄら編（Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．，１９８５）、ｐｐ．２４３〜５６のＡｒｎｏｎら、「Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｆｏｒ Ｉｍｍｕｎｏｔａｒｇｅｔｉｎｇ Ｏｆ Ｄｒｕｇｓ Ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ」；Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ（第２版）、Ｒｏｂｉｎｓｏｎら編（Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，１９８７）ｐｐ．６２３〜５３のＨｅｌｌｓｔｒｏｍら「Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｆｏｒ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ」；Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ’８４：Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｐｉｎｃｈｅｒａら編，ｐｐ．４７５〜５０６（１９８５）のＴｈｏｒｐｅ，「Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｃａｒｒｉｅｒｓ Ｏｆ Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ Ａｇｅｎｔｓ Ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ：Ａ Ｒｅｖｉｅｗ」Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｆｏｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｂａｌｄｗｉｎら編（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ １９８５）ｐｐ．３０３〜１６の「Ａｎａｌｙｓｉｓ，Ｒｅｓｕｌｔｓ，Ａｎｄ Ｆｕｔｕｒｅ Ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ Ｏｆ Ｔｈｅ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｕｓｅ Ｏｆ Ｒａｄｉｏｌａｂｅｌｅｄ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ」；ならびにＴｈｏｒｐｅら「Ｔｈｅ Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ Ａｎｄ Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ Ｏｆ Ａｎｔｉｂｏｄｙ−Ｔｏｘｉｎ Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ」Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．６２：１１９〜５８（１９８２）を参照のこと。あるいは、抗体は、Ｓｅｇａｌによって米国特許第４，６７６，９８０号中に記載されるように、抗体へテロ結合体を形成するために二次抗体と結合され得る。
【０１７６】
本発明の方法において使用される核酸分子は、ベクター中に挿入され得、そして遺伝子治療ベクターとして使用され得る。遺伝子治療ベクターは、例えば、静脈内注射、局所投与（米国特許第５，３２８，４７０号を参照のこと）または定位注射（例えば、Ｃｈｅｎら、（１９９４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９１：３０５４〜３０５７を参照のこと）によって、被験体に送達され得る。その遺伝子治療ベクターの薬学的調製物は、受容可能な希釈剤中に遺伝子治療ベクターを含み得るか、または遺伝子送達ビヒクルが組み込まれた徐放マトリクスを含み得る。あるいは、完全な遺伝子送達ベクター（例えば、レトロウイルスベクター）が組換え細胞からインタクトで産生され得る場合、その薬学的調製物は、遺伝子送達系を産生する１つ以上の細胞を含み得る。
【０１７７】
（Ｄ．薬理ゲノム学（ｐｈａｒｍａｃｏｇｅｎｏｍｉｃｓ））
本発明の治療法と組み合わせて、薬理ゲノム学（すなわち、被験体の遺伝子型と、外来化合物または外来薬物に対するその被験体の応答との間の関連性の研究）が、考慮され得る。治療剤の代謝における差異は、薬理学的に活性な薬物の用量と血液濃度との間の関係を変更することによって、重篤な毒性または治療の失敗をもたらし得る。従って、医師または臨床医は、２３２活性、２０５９活性、１０６３０活性、１２８４８活性、１３８７５活性、１４３９５活性、１４６１８活性、１７６９２活性、または５８８７４活性を調節する薬剤を投与するか否か、ならびに２３２活性、２０５９活性、１０６３０活性、１２８４８活性、１３８７５活性、１４３９５活性、１４６１８活性、１７６９２活性、または５８８７４活性を調節する薬剤を用いる処置の投与量および／もしくは治療レジメンを変更するか否かを決定する際に、適切な薬理ゲノム学研究において得られる知識を適用することを考慮し得る。
【０１７８】
薬理ゲノム学は、罹患した個人における変化した薬物の性質および異常な作用に起因する、薬物に対する応答における臨床学的に有意な遺伝的変動を取り扱う。例えば、Ｅｉｃｈｅｌｂａｕｍ，Ｍ．ら、（１９９６）Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．２３（１０〜１１）：９８３〜９８５およびＬｉｎｄｅｒ，Ｍ．Ｗ．ら、（１９９７）Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ．４３（２）：２５４〜２６６を参照のこと。一般に、２つの型の薬理ゲノム学的条件は、区別され得る。遺伝的条件は、薬物が身体に作用する様式を変更する（変化した薬物作用）単一因子として伝達したか、または遺伝的条件は、身体が薬物に作用する様式を変更する（変化した薬物代謝）単一因子として伝達した。これらの薬理ゲノム学的条件は、稀な遺伝子欠損または天然に存在する多型のいずれかとして、存在し得る。例えば、グルコース−６−リン酸アミノペプチダーゼ欠損（Ｇ６ＰＤ）は、一般的な遺伝性酵素病であり、ここで、主な臨床学的合併症は、酸化剤薬物（抗マラリア薬、スルホンアミド、鎮痛薬、ニトロフラン）の摂取およびソラマメの消費後の溶血である。
【０１７９】
「ゲノムワイド相関解析（ｇｅｎｏｍｅ−ｗｉｄｅ ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ）」として知られている、薬物応答を予測する遺伝子を同定するための１つの薬理ゲノム学的アプローチは、すでに知られている遺伝子関連マーカー（例えば、「二座対立遺伝子」マーカーマップ（これは、ヒトゲノム上の６０，０００〜１００，０００の多型部位または変動部位からなり、その部位の各々は、２つの改変体を有する））からなるヒトゲノムの高分解能マップに、主に依存する。このような高分解能ゲノムマップは、特定の観察された薬物応答または副作用に関連したマーカーを同定するために、フェーズＩＩ／フェーズＩＩＩの薬物試験に参加した統計学的に有意な数の患者の各々のゲノムのマップと比較され得る。あるいは、このような高分解能マップは、ヒトゲノムにおいて、数千万個の公知の一塩基多型（ＳＮＰ）の組み合わせから生じ得る。本明細書中で使用される場合、「ＳＮＰ」とは、ＤＮＡストレッチにおいて、単一のヌクレオチド塩基において生じる共通の変化である。例えば、ＳＮＰは、１０００塩基のＤＮＡごとに１回生じ得る。ＳＮＰは、疾患プロセスに関与し得るが、大部分は、疾患に関連していないかもしれない。このようなＳＮＰの発生に基づく遺伝地図を考慮すると、個体は、個々のゲノムにおける特定のＳＮＰパターンに依存して、複数の遺伝カテゴリーへと分類され得る。このような様式において、処置レジメンは、遺伝的に類似する個体の間で共通であり得る特性を考慮して、そのような遺伝的に類似する個体の群に合わせて変更され得る。
【０１８０】
あるいは、「候補遺伝子アプローチ」と呼ばれる方法が、薬物応答を予測する遺伝子を同定するために用いられ得る。この方法に従って、薬物標的をコードする遺伝子が既知である場合（例えば、本発明の方法において使用される２３２タンパク質、２０５９タンパク質、１０６３０タンパク質、１２８４８タンパク質、１３８７５タンパク質、１４３９５タンパク質、１４６１８タンパク質、１７６９２タンパク質、または５８８７４タンパク質）、その遺伝子の共通のすべての改変体は、その集団においてかなり容易に同定され得、そして別の遺伝子バージョンに対する１つの遺伝子バージョンを有することが特定の薬物応答に関連するか否かが決定され得る。
【０１８１】
例示的実施形態として、薬物代謝酵素の活性は、薬物作用の強度および持続時間の両方の主要な決定因子である。薬物代謝酵素（例えば、Ｎ−アセチルトランスフェラーゼ２（ＮＡＴ２）およびシトクロムＰ４５０酵素であるＣＹＰ２Ｄ６およびＣＹＰ２Ｃ１９）の遺伝子多型の発見は、標準的かつ安全な用量の薬物を摂取した後に、予測される薬物効果を得ることも過大な薬物応答および重篤な毒性を示すこともない患者が存在する理由に関する説明を提供した。これらの多型は、その集団中で２つの表現型（代謝が速い者（ＥＭ）および代謝が遅い者（ＰＭ））の状態で発現される。ＰＭの普及率は、種々の集団間で異なる。例えば、ＣＹＰ２Ｄ６をコードする遺伝子は、非常に多型性であり、いくつかの変異が、ＰＭにおいて同定されており、そのすべてが、機能的ＣＹＰ２Ｄ６の不在をもたらす。ＣＹＰ２Ｄ６およびＣＹＰ２Ｃ１９の代謝速度が遅い者は、標準的用量を受けたときに、過大な薬物応答および副作用を非常に頻繁に経験する。代謝物が活性な治療部分である場合、ＰＭは、ＣＹＰ２Ｄ６が形成した代謝物であるモルヒネにより媒介されるコデインの鎮痛効果について示されるような、治療応答を示さない。その他の極端な者は、標準的用量に対して応答しない、いわゆる代謝が著しく速い者である。最近、著しく速い代謝の分子的基礎が、ＣＹＰ２Ｄ６遺伝子増幅に起因することが同定された。
【０１８２】
あるいは、「遺伝子発現プロファイリング」と呼ばれる方法が、薬物応答を予測する遺伝子を同定するために用いられ得る。例えば、薬物（例えば、本発明の方法において使用される２３２分子、２０５９分子、１０６３０分子、１２８４８分子、１３８７５分子、１４３９５分子、１４６１８分子、１７６９２分子もしくは５８８７４分子または２３２モジュレーター、２０５９モジュレーター、１０６３０モジュレーター、１２８４８モジュレーター、１３８７５モジュレーター、１４３９５モジュレーター、１４６１８モジュレーター、１７６９２モジュレーターもしくは５８８７４モジュレーター）を投薬された動物の遺伝子発現は、毒性に関連する遺伝子経路が作動するかの指標を与え得る。
【０１８３】
上記薬理ゲノム学的アプローチのうちの１つより多くから得られる情報が、被験体の予防的処置または治療的処置のための、適切な投薬量および処置レジメンを決定するために使用され得る。この知識は、投薬または薬物選択に適用される場合、有害な反応または治療の失敗を回避し得、それによって、２３２活性、２０５９活性、１０６３０活性、１２８４８活性、１３８７５活性、１４３９５活性、１４６１８活性、１７６９２活性もしくは５８８７４活性を調節する薬剤で、心血管疾患（例えば、アテローム性動脈硬化症）に罹患している被験体を処置する場合、治療効果または予防効果を増強し得る。
【０１８４】
（Ｖ．本発明の方法において使用される、組換え発現ベクターおよび宿主細胞）
本発明の方法（例えば、本明細書中に記載されるスクリーニングアッセイ）は、２３２タンパク質、２０５９タンパク質、１０６３０タンパク質、１２８４８タンパク質、１３８７５タンパク質、１４３９５タンパク質、１４６１８タンパク質、１７６９２タンパク質もしくは５８８７４タンパク質（またはその一部）をコードする核酸を含むベクター（好ましくは発現ベクター）の使用を包含する。本明細書中で使用される場合、用語「ベクター」とは、連結された別の核酸を輸送可能である、核酸分子を指す。１つの型のベクターは、「プラスミド」であり、「プラスミド」とは、さらなるＤＮＡセグメントが連結され得る、環状の二本鎖ＤＮＡの輪を指す。別の型のベクターは、ウイルスベクターであり、そのベクターにおいて、さらなるＤＮＡセグメントが、ウイルスゲノム中に連結され得る。特定のベクターは、導入される宿主細胞中で自律複製可能である（例えば、細菌複製起点を有する細菌ベクター、およびエピソーム性哺乳動物ベクター）。他のベクター（例えば、非エピソーム性哺乳動物ベクター）は、宿主細胞中に導入された際に、宿主細胞のゲノム中に組み込まれ、それによって、その宿主ゲノムとともに複製される。さらに、特定のベクターは、作動可能に連結された遺伝子の発現を指向可能である。そのようなベクターは、本明細書中で「発現ベクター」と呼ばれる。一般に、組換えＤＮＡ技術において有用な発現ベクターは、しばしば、プラスミドの形態である。本明細書において、「プラスミド」と「ベクター」とは、互換可能に使用され得る。なぜなら、プラスミドは、ベクターの最も一般的に使用される形態であるからである。しかし、本発明は、等価な機能を提供する、そのような他の形態の発現ベクター（例えば、ウイルスベクター（例えば、複製欠損レトロウイルス、アデノウイルス、およびアデノ随伴ウイルス））を包含することが意図される。
【０１８５】
本発明の方法において使用される組換え発現ベクターは、宿主細胞中での核酸の発現に適切な形態にある本発明の核酸を含む。このことは、その組換え発現ベクターが、発現されるべき核酸配列に作動可能に連結された１つ以上の調節配列（発現のために使用される宿主細胞に基づいて選択される）を含むことを意味する。組換え発現ベクターにおいて、「作動可能に連結された」とは、目的のヌクレオチド配列が、（例えば、インビトロでの転写／翻訳系において、またはそのベクターが宿主細胞中に導入される場合は、その宿主細胞において）そのヌクレオチド配列の発現を可能にする様式で調節配列に連結されていることを意味することが意図される。用語「調節配列」は、プロモーター、エンハンサー、および他の発現制御エレメント（例えば、ポリアデニル化シグナル）を含むことが意図される。そのような調節配列は、例えば、Ｇｏｅｄｄｅｌ（１９９０）Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．１８５：３〜７に記載される。調節配列とは、多くの型の宿主細胞においてヌクレオチド配列の構成的発現を指向する配列、および特定の宿主細胞においてのみそのヌクレオチド配列の発現を指向する配列（例えば、組織特異的調節配列）を包含する。発現ベクターの設計は、形質転換される宿主細胞の選択、所望されるタンパク質発現レベルなどのような因子に依存し得ることが、当業者により認識される。本発明の発現ベクターは、宿主細胞内に導入され得、それにより本明細書中に記載されるような核酸によってコードされるタンパク質またはペプチド（融合タンパク質または融合ペプチドを含む）（例えば、２３２タンパク質、２０５９タンパク質、１０６３０タンパク質、１２８４８タンパク質、１３８７５タンパク質、１４３９５タンパク質、１４６１８タンパク質、１７６９２タンパク質もしくは５８８７４タンパク質、２３２タンパク質の変異体形態、２０５９タンパク質の変異体形態、１０６３０タンパク質の変異体形態、１２８４８タンパク質の変異体形態、１３８７５タンパク質の変異体形態、１４３９５タンパク質の変異体形態、１４６１８タンパク質の変異体形態、１７６９２タンパク質の変異体形態もしくは５８８７４タンパク質の変異体形態、融合タンパク質など）を産生し得る。
【０１８６】
本発明の方法において使用される組換え発現ベクターは、原核生物細胞または真核生物細胞における２３２タンパク質、２０５９タンパク質、１０６３０タンパク質、１２８４８タンパク質、１３８７５タンパク質、１４３９５タンパク質、１４６１８タンパク質、１７６９２タンパク質または５８８７４タンパク質の発現のために設計され得る。例えば、２３２タンパク質、２０５９タンパク質、１０６３０タンパク質、１２８４８タンパク質、１３８７５タンパク質、１４３９５タンパク質、１４６１８タンパク質、１７６９２タンパク質または５８８７４タンパク質は、Ｅ．ｃｏｌｉのような細菌細胞、昆虫細胞（バキュロウイルス発現ベクターを使用する）、酵母細胞、または哺乳動物細胞において発現され得る。適切な宿主細胞は、Ｇｏｅｄｄｅｌ（１９９０）前出においてさらに記載される。あるいは、組換え発現ベクターは、例えば、Ｔ７プロモーター調節配列およびＴ７ポリメラーゼを使用して、インビトロで転写および翻訳され得る。
【０１８７】
原核生物におけるタンパク質の発現は、融合タンパク質または非融合タンパク質のいずれかの発現を指向する構成性プロモーターまたは誘導性プロモーターを含むベクターを使用して、Ｅ．ｃｏｌｉにおいて最も頻繁に行われる。融合ベクターは、ベクター中にコードされるタンパク質に、通常は、組換えタンパク質のアミノ末端に、多くのアミノ酸を付加する。このような融合ベクターは、代表的には、３つの目的を果たす：１）組換えタンパク質の発現を増大させること；２）組換えタンパク質の可溶性を増大させること；および３）アフィニティー精製におけるリガンドとして作用することにより、組換えタンパク質の精製を補助すること。しばしば、融合発現ベクターにおいて、タンパク質分解性切断部位は、融合部分と組換えタンパク質の接合部に導入され、融合タンパク質の精製に続いて、組換えタンパク質を融合部分から分離することが可能になる。このような酵素、およびそれらのコグネイト認識配列は、第Ｘａ因子、トロンビンおよびエンテロキナーゼを含む。代表的な融合発現ベクターとしては、それぞれ、グルタチオンＳ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）、マルトースＥ結合タンパク質、またはプロテインＡを、標的組換えタンパク質に融合させる、ｐＧＥＸ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ Ｉｎｃ；Ｓｍｉｔｈ，Ｄ．Ｂ．およびＪｏｈｎｓｏｎ，Ｋ．Ｓ．（１９８８）Ｇｅｎｅ ６７：３１−４０）、ｐＭＡＬ（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂｓ，Ｂｅｖｅｒｌｙ，ＭＡ）およびｐＲＩＴ５（Ｐｈａｒｍａｃｉａ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）が挙げられる。
【０１８８】
精製融合タンパク質は、２３２活性アッセイ、２０５９活性アッセイ、１０６３０活性アッセイ、１２８４８活性アッセイ、１３８７５活性アッセイ、１４３９５活性アッセイ、１４６１８活性アッセイ、１７６９２活性アッセイまたは５８８７４活性アッセイ（例えば、以下に詳細に記載される直接的アッセイまたは競合アッセイ）において、または２３２タンパク質、２０５９タンパク質、１０６３０タンパク質、１２８４８タンパク質、１３８７５タンパク質、１４３９５タンパク質、１４６１８タンパク質、１７６９２タンパク質または５８８７４タンパク質に特異的な抗体を生成するために利用され得る。好ましい実施形態において、本発明のレトロウイルス発現ベクターにおいて発現される２３２融合タンパク質、２０５９融合タンパク質、１０６３０融合タンパク質、１２８４８融合タンパク質、１３８７５融合タンパク質、１４３９５融合タンパク質、１４６１８融合タンパク質、１７６９２融合タンパク質または５８８７４融合タンパク質は、骨髄細胞に感染させるために利用され得る。続いて、この骨髄細胞は、照射されたレシピエントに移植される。次いで、被験体レシピエントの病態は、十分な時間（例えば、６週間）が経過した後に試験される。
【０１８９】
別の実施形態において、本発明の核酸は、哺乳動物発現ベクターを使用して、哺乳動物細胞において発現される。哺乳動物発現ベクターの例としては、ｐＣＤＭ８（Ｓｅｅｄ，Ｂ．（１９８７）Ｎａｔｕｒｅ ３２９：８４０）およびｐＭＴ２ＰＣ（Ｋａｕｆｍａｎら（１９８７）ＥＭＢＯ Ｊ．６：１８７−１９５）が挙げられる。哺乳動物細胞において使用される場合、発現ベクターの制御機能は、しばしば、ウイルス調節エレメントにより提供される。例えば、一般に使用されるプロモーターは、ポリオーマウイルス、アデノウイルス２、サイトメガロウイルスおよびシミアンウイルス４０に由来する。原核生物細胞および真核生物細胞両方について適切な他の発現系については、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｊ．ら，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ．第２版、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ，１９８９の第１６章および第１７章を参照のこと。
【０１９０】
別の実施形態において、組換え哺乳動物発現ベクターは、特定の細胞型においてこの核酸の発現を優先的に指向し得る（例えば、組織特異的調節エレメントがこの核酸を発現させるために使用される）。
【０１９１】
本発明の方法は、本発明のＤＮＡ分子を含む組換え発現ベクター（このＤＮＡ分子は、この発現ベクターにアンチセンス方向にてクローニングされる）をさらに使用し得る。すなわち、このＤＮＡ分子は、（このＤＮＡ分子の転写による）２３２ｍＲＮＡ、２０５９ｍＲＮＡ、１０６３０ｍＲＮＡ、１２８４８ｍＲＮＡ、１３８７５ｍＲＮＡ、１４３９５ｍＲＮＡ、１４６１８ｍＲＮＡ、１７６９２ｍＲＮＡまたは５８８７４ｍＲＮＡに対してアンチセンスであるＲＮＡ分子の発現を可能にする様式にて、調節配列に作動可能に連結される。種々の細胞型（例えば、ウイルスプロモーターおよび／またはエンハンサー）におけるアンチセンスＲＮＡ分子の連続的発現を指向する、アンチセンス方向にクローニングされる核酸に作動可能に連結される調節配列が選択され得るか、またはアンチセンスＲＮＡの構成的発現、組織特異的発現、または細胞型特異的発現を指向する調節配列が、選択され得る。このアンチセンス発現ベクターは、組換えプラスミド、ファージミド、または弱毒化ウイルスの形態にあり得、この中でアンチセンス核酸は、高効率調節領域の制御下で生成され、その活性は、ベクターが導入される細胞型により決定され得る。アンチセンス遺伝子を使用する遺伝子発現の調節の議論については、Ｗｅｉｎｔｒａｕｂ，Ｈ．ら，Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ ＲＮＡ ａｓ ａ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｔｏｏｌ ｆｏｒ ｇｅｎｅｔｉｃ ａｎａｌｙｓｉｓ，Ｒｅｖｉｅｗｓ−Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，Ｖｏｌ．１（１）１９８６を参照のこと。
【０１９２】
本発明の別の局面は、本発明の２３２核酸分子、２０５９核酸分子、１０６３０核酸分子、１２８４８核酸分子、１３８７５核酸分子、１４３９５核酸分子、１４６１８核酸分子、１７６９２核酸分子または５８８７４核酸分子、あるいは宿主細胞ゲノムの特定の部位への相同組換えを可能にする配列を含む、２３２核酸分子、２０５９核酸分子、１０６３０核酸分子、１２８４８核酸分子、１３８７５核酸分子、１４３９５核酸分子、１４６１８核酸分子、１７６９２核酸分子または５８８７４核酸分子）が導入される宿主細胞の使用に関する。用語「宿主細胞」および「組換え宿主細胞」は、本明細書中で交換可能に使用される。このような用語は、特定の被験体細胞のみならず、このような細胞の子孫または潜在的子孫もまた言及することが理解される。特定の改変が、変異または環境的影響のいずれかに起因して、次の世代に生じ得るので、このような子孫は、実際に、親細胞と同一でなくてもよいが、本明細書中で使用される用語の範囲内になお含まれる。
【０１９３】
宿主細胞は、任意の原核生物細胞または真核生物細胞であり得る。例えば、２３２タンパク質、２０５９タンパク質、１０６３０タンパク質、１２８４８タンパク質、１３８７５タンパク質、１４３９５タンパク質、１４６１８タンパク質、１７６９２タンパク質または５８８７４タンパク質は、細菌細胞（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ）、昆虫細胞、酵母または哺乳動物細胞（例えば、チャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ）またはＣＯＳ細胞）で発現され得る。他の適切な宿主細胞は、当業者に公知である。
【０１９４】
ベクターＤＮＡは、従来の形質転換技術またはトランスフェクション技術を介して、原核生物細胞または真核生物細胞に導入され得る。本明細書中で使用される場合、用語「形質転換」および「トランスフェクション」とは、外来性の核酸（例えば、ＤＮＡ）を宿主細胞中に導入するための当該分野で認識される種々の技術をいうことを意図し、これらとしては、リン酸カルシウムまたは塩化カルシウムの共沈殿、ＤＥＡＥデキストラン媒介性トランスフェクション、リポフェクション、またはエレクトロポレーションが挙げられる。宿主細胞を形質転換またはトランスフェクトするための適切な方法は、Ｓａｍｂｒｏｏｋら（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，第２版，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ，１９８９）および他の実験室マニュアルに見出され得る。
【０１９５】
本発明の方法において使用される宿主細胞（例えば、培養物中の原核生物宿主細胞または真核生物宿主細胞）を使用して、２３２タンパク質、２０５９タンパク質、１０６３０タンパク質、１２８４８タンパク質、１３８７５タンパク質、１４３９５タンパク質、１４６１８タンパク質、１７６９２タンパク質または５８８７４タンパク質を生成（すなわち、発現）し得る。従って、本発明はさらに、本発明の宿主細胞を使用して２３２タンパク質、２０５９タンパク質、１０６３０タンパク質、１２８４８タンパク質、１３８７５タンパク質、１４３９５タンパク質、１４６１８タンパク質、１７６９２タンパク質または５８８７４タンパク質を生成するための方法を提供する。１つの実施形態において、本方法は、本発明の宿主細胞（この細胞中に２３２タンパク質、２０５９タンパク質、１０６３０タンパク質、１２８４８タンパク質、１３８７５タンパク質、１４３９５タンパク質、１４６１８タンパク質、１７６９２タンパク質または５８８７４タンパク質をコードする組換え発現ベクターが導入されている）を適切な培地中で培養する工程、その結果２３２タンパク質、２０５９タンパク質、１０６３０タンパク質、１２８４８タンパク質、１３８７５タンパク質、１４３９５タンパク質、１４６１８タンパク質、１７６９２タンパク質または５８８７４タンパク質を生成する工程を、包含する。別の実施形態において、本方法はさらに、培地または宿主細胞から２３２タンパク質、２０５９タンパク質、１０６３０タンパク質、１２８４８タンパク質、１３８７５タンパク質、１４３９５タンパク質、１４６１８タンパク質、１７６９２タンパク質または５８８７４タンパク質を単離する工程を包含する。
【０１９６】
（ＶＩ．本発明の方法において使用される、単離された核酸分子）
本発明の方法は、２３２タンパク質、２０５９タンパク質、１０６３０タンパク質、１２８４８タンパク質、１３８７５タンパク質、１４３９５タンパク質、１４６１８タンパク質、１７６９２タンパク質もしくは５８８７４タンパク質、またはその生物学的に活性な部分をコードする、単離された核酸分子、ならびに、２３２をコードする核酸分子、２０５９をコードする核酸分子、１０６３０をコードする核酸分子、１２８４８をコードする核酸分子、１３８７５をコードする核酸分子、１４３９５をコードする核酸分子、１４６１８をコードする核酸分子、１７６９２をコードする核酸分子または５８８７４をコードする核酸分子（例えば、２３２ ｍＲＮＡ、２０５９ ｍＲＮＡ、１０６３０ ｍＲＮＡ、１２８４８ ｍＲＮＡ、１３８７５ ｍＲＮＡ、１４３９５ ｍＲＮＡ、１４６１８ ｍＲＮＡ、１７６９２ ｍＲＮＡまたは５８８７４ ｍＲＮＡ）を同定するための、ハイブリダイゼーションプローブとしての使用に足りる核酸フラグメント、および２３２核酸分子、２０５９核酸分子、１０６３０核酸分子、１２８４８核酸分子、１３８７５核酸分子、１４３９５核酸分子、１４６１８核酸分子、１７６９２核酸分子または５８８７４核酸分子を増幅または変異誘発するためのＰＣＲプライマーとしての使用のためのフラグメントの使用を、包含する。本明細書中で使用される場合、用語「核酸分子」は、ＤＮＡ分子（例えば、ｃＤＮＡまたはゲノムＤＮＡ）およびＲＮＡ分子（例えば、ｍＲＮＡ）、ならびにヌクレオチドアナログを使用して作製されたＤＮＡアナログまたはＲＮＡアナログを含むことを意図される。この核酸分子は一本鎖または二本鎖であり得るが、好ましくは二本鎖ＤＮＡである。
【０１９７】
本発明の方法において使用される核酸分子（例えば、配列番号１、配列番号４、配列番号７、配列番号１０、配列番号１３、配列番号１６、配列番号１９、配列番号２２もしくは配列番号２５、またはその部分のヌクレオチド配列を有する核酸分子）を、標準的な分子生物学的技術および本明細書中に提供される配列情報を使用して単離し得る。ハイブリダイゼーションプローブとして、配列番号１、配列番号４、配列番号７、配列番号１０、配列番号１３、配列番号１６、配列番号１９、配列番号２２もしくは配列番号２５の核酸配列の全部または一部を使用して、２３２核酸分子、２０５９核酸分子、１０６３０核酸分子、１２８４８核酸分子、１３８７５核酸分子、１４３９５核酸分子、１４６１８核酸分子、１７６９２核酸分子または５８８７４核酸分子を、（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｊ．Ｆｒｉｔｓｈ，Ｅ．Ｆ．，およびＭａｎｉａｔｉｓ，Ｔ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，第２版，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ，１９８９に記載されるような）標準的なハイブリダイゼーション技術およびクローニング技術を使用して単離し得る。
【０１９８】
さらに、配列番号１、配列番号４、配列番号７、配列番号１０、配列番号１３、配列番号１６、配列番号１９、配列番号２２もしくは配列番号２５の全部または一部を含有する核酸分子を、配列番号１、配列番号４、配列番号７、配列番号１０、配列番号１３、配列番号１６、配列番号１９、配列番号２２または配列番号２５の配列に基づいて設計した合成オリゴヌクレオチドプライマーを使用するポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によって、単離し得る。
【０１９９】
本発明の方法において使用される核酸を、標準的なＰＣＲ増幅技術に従って、テンプレートとしてのｃＤＮＡ、ｍＲＮＡあるいはゲノムＤＮＡ、および適切なオリゴヌクレオチドプライマーを使用して、増幅し得る。さらに、２３２ヌクレオチド配列、２０５９ヌクレオチド配列、１０６３０ヌクレオチド配列、１２８４８ヌクレオチド配列、１３８７５ヌクレオチド配列、１４３９５ヌクレオチド配列、１４６１８ヌクレオチド配列、１７６９２ヌクレオチド配列または５８８７４ヌクレオチド配列に対応するオリゴヌクレオチドを、標準的な合成技術（例えば、自動ＤＮＡ合成機を使用すること）によって、調製し得る。
【０２００】
好ましい実施形態において、本発明の方法において使用される単離された核酸分子は、配列番号１、配列番号４、配列番号７、配列番号１０、配列番号１３、配列番号１６、配列番号１９、配列番号２２もしくは配列番号２５に示される核酸配列、配列番号１、配列番号４、配列番号７、配列番号１０、配列番号１３、配列番号１６、配列番号１９、配列番号２２もしくは配列番号２５に示される核酸配列の相補体、またはこれらのヌクレオチド配列の任意の部分を含む。配列番号１、配列番号４、配列番号７、配列番号１０、配列番号１３、配列番号１６、配列番号１９、配列番号２２または配列番号２５に示されるヌクレオチド配列に相補的である核酸分子とは、配列番号１、配列番号４、配列番号７、配列番号１０、配列番号１３、配列番号１６、配列番号１９、配列番号２２または配列番号２５に示されるヌクレオチド配列に十分に相補的である核酸分子であり、その結果、この核酸分子は配列番号１、配列番号４、配列番号７、配列番号１０、配列番号１３、配列番号１６、配列番号１９、配列番号２２または配列番号２５に示されるヌクレオチド配列にハイブリダイズし得、それによって安定な二重鎖を形成する。
【０２０１】
なお別の好ましい実施形態において、本発明の方法において使用される単離された核酸分子は、配列番号１、配列番号４、配列番号７、配列番号１０、配列番号１３、配列番号１６、配列番号１９、配列番号２２もしくは配列番号２５に示されるヌクレオチド配列の全長、またはこの核酸配列の任意の部分に、少なくとも約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％以上同一であるヌクレオチド配列を含有する。
【０２０２】
さらに、本発明の方法において使用される核酸分子は、配列番号１、配列番号４、配列番号７、配列番号１０、配列番号１３、配列番号１６、配列番号１９、配列番号２２または配列番号２５の核酸配列の部分（例えば、プローブもしくはプライマーとして使用され得るフラグメント）、または２３２タンパク質、２０５９タンパク質、１０６３０タンパク質、１２８４８タンパク質、１３８７５タンパク質、１４３９５タンパク質、１４６１８タンパク質、１７６９２タンパク質または５８８７４タンパク質の部分（例えば、２３２タンパク質、２０５９タンパク質、１０６３０タンパク質、１２８４８タンパク質、１３８７５タンパク質、１４３９５タンパク質、１４６１８タンパク質、１７６９２タンパク質または５８８７４タンパク質の生物学的に活性な部分）をコードするフラグメント）のみを含み得る。代表的に、プローブ／プライマーは、実質的に精製されたオリゴヌクレオチドを含む。代表的に、オリゴヌクレオチドは、配列番号１、配列番号４、配列番号７、配列番号１０、配列番号１３、配列番号１６、配列番号１９、配列番号２２または配列番号２５のセンス配列、配列番号１、配列番号４、配列番号７、配列番号１０、配列番号１３、配列番号１６、配列番号１９、配列番号２２または配列番号２５のアンチセンス配列、あるいは配列番号１、配列番号４、配列番号７、配列番号１０、配列番号１３、配列番号１６、配列番号１９、配列番号２２または配列番号２５の天然に存在する対立遺伝子の改変体または変異体の少なくとも約１２または１５、好ましくは約２０または２５、より好ましくは約３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５または７５個連続したヌクレオチドにストリンジェントな条件下で、ハイブリダイズするヌクレオチド配列の領域を含む。１つの実施形態において、本発明の方法において使用される核酸分子は、１００、１００〜２００、２００〜３００、３００〜４００、４００〜５００、５００〜６００、６００〜７００、７００〜８００、８００〜９００、９００〜１０００、１０００〜１１００、１１００〜１２００、１２００〜１３００以上のヌクレオチド長よりも長く、かつストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で、配列番号１、配列番号４、配列番号７、配列番号１０、配列番号１３、配列番号１６、配列番号１９、配列番号２２または配列番号２５の核酸分子にハイブリダイズするヌクレオチド配列を含む。
【０２０３】
本明細書中で使用される場合、用語「ストリンジェントな条件下でハイブリダイズする」は、お互いに有意に同一または相同であるヌクレオチ配列が、お互いにハイブリダイズされたままである状態でハイブリダイゼーションおよび洗浄するための条件を記載することを意図する。好ましくは、この条件は、少なくとも約７０％、より好ましくは少なくとも約８０％、なおより好ましくは少なくとも約８５％または９０％で、互いに同一な配列が、互いにハイブリダイズしたままであるような条件である。このようなストリンジェントな条件は、当業者に公知であり、そしてＣｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ａｕｓｕｂｅｌら編、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．（１９９５），２節，４節および６節に見出され得る。さらなストリンジェントな条件は、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｓａｍｂｒｏｏｋら、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ（１９８９），７節、９節および１１節に見出され得る。好ましい、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件の非限定的な例としては、約６５〜７０℃での、４×塩化ナトリウム／クエン酸ナトリウム（ＳＳＣ）中でハイブリダイゼーション（または約４２〜５０℃での、４×ＳＳＣ＋５０％ホルムアミド中でハイブリダイゼーション）、次いで約６５〜７０℃での、１×ＳＳＣで１回以上の洗浄が挙げられる。好ましい、高度にストリンジェントなハイブリダイゼーション条件の非限定的な例としては、約６５〜７０℃での、１×ＳＳＣ中でハイブリダイゼーション（または約４２〜５０℃での、１×ＳＳＣ＋５０％ホルムアミド中でハイブリダイゼーション）、次いで約６５〜７０℃での、０．３×ＳＳＣで１回以上の洗浄が挙げられる。好ましい、低いストリンジェンシーのハイブリダイゼーション条件の非限定的な例としては、約５０〜６０℃での、４×ＳＳＣ中でハイブリダイゼーション（または約４０〜４５℃での、６×ＳＳＣ＋５０％ホルムアミド中でハイブリダイゼーション）、次いで約５０〜６０℃での、２×ＳＳＣで１回以上の洗浄が挙げられる。上記の値の中間の範囲（例えば、６５〜７０℃または４２〜５０℃）もまた、本発明に含まれることが意図される。ＳＳＰＥ（１×ＳＳＰＥは、０．１５Ｍ ＮａＣｌ、１０ｍＭ ＮａＨ２ＰＯ４および１．２５ｍＭ ＥＤＴＡ、ｐＨ ７．４である）は、ハイブリダイゼーションおよび洗浄緩衝液中でＳＳＣ（１×ＳＳＣは、０．１５Ｍ ＮａＣｌおよび１５ｍＭクエン酸ナトリウムである）に置き換わり得る；洗浄は、各ハイブリダイゼーションが終了した後で、１５分間実行される。５０塩基対長未満であることが予測されるハイブリッドのハイブリダイゼーション温度は、ハイブリッドの融解温度（Ｔｍ）より５〜１０℃低くあるべきであり、ここでＴｍが以下の式に従って決定される。１８塩基対長未満であるハイブリッドについて、Ｔｍ（℃）＝２（Ａ塩基＋Ｔ塩基の数）＋４（Ｇ塩基＋Ｃ塩基の数）。１８塩基対長と４９塩基対長の間のであるハイブリッドについて、Ｔｍ（℃）＝８１．５＋１６．６（ｌｏｇ１０［Ｎａ＋］）＋０．４１（％Ｇ＋Ｃ）−（６００／Ｎ）、ここで、Ｎはハイブリッド中の塩基の数であり、そして［Ｎａ＋］は、ハイブリダイゼーション緩衝液中のナトリウムイオンの濃度である（１×ＳＳＣに対する［Ｎａ＋］＝０．１６５Ｍ）。膜（例えば、ニトロセルロース膜、またはナイロン膜）への核酸分子の非特異的ハイブリダイゼーションを減少させるために、さらなる試薬が、ハイブリダイゼーションおよび／または洗浄緩衝液に添加され得ることが当業者によってまた認識され、この試薬としては、限定されないが以下が挙げられる：ブロッキング剤（例えば、ＢＳＡ、もしくはサケまたはニシンの精子キャリアＤＮＡ）、界面活性剤（例えば、ＳＤＳ）、キレート剤（例えば、ＥＤＴＡ）、Ｆｉｃｏｌｌ、ＰＶＰなど。ナイロン膜が使用される場合、特にさらなる好ましい、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件の非限定的な例としては、約６５℃での、０．２５〜０．５Ｍ ＮａＨ２ＰＯ４、７％ ＳＤＳ中でハイブリダイゼーション、次いで６５℃での、０．０２Ｍ ＮａＨ２ＰＯ４、１％ ＳＤＳで１回以上の洗浄である（例えば、ＣｈｕｒｃｈおよびＧｉｌｂｅｒｔ（１９８４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８１：１９９１−１９９５，（または代替的に０．２×ＳＳＣ、１％ ＳＤＳ）。
【０２０４】
好ましい実施形態において、プローブは、プローブに結合した標識基をさらに含む（例えば、標識基は、放射性同位元素、蛍光化合物、酵素または酵素補因子であり得る）。このようなプローブは、２３２タンパク質、２０５９タンパク質、１０６３０タンパク質、１２８４８タンパク質、１３８７５タンパク質、１４３９５タンパク質、１４６１８タンパク質、１７６９２タンパク質または５８８７４タンパク質を誤発現する（ｍｉｓｅｘｐｒｅｓｓ）細胞または組織を同定するための診断的試験キットの一部として使用され得る（例えば、被験体由来の細胞サンプル中の２３２コード核酸、２０５９コード核酸、１０６３０コード核酸、１２８４８コード核酸、１３８７５コード核酸、１４３９５コード核酸、１４６１８コード核酸、１７６９２コード核酸または５８８７４コード核酸のレベルを測定すること、例えば、２３２ ｍＲＮＡレベル、２０５９ ｍＲＮＡレベル、１０６３０ ｍＲＮＡレベル、１２８４８ ｍＲＮＡレベル、１３８７５ ｍＲＮＡレベル、１４３９５ ｍＲＮＡレベル、１４６１８ ｍＲＮＡレベル、１７６９２ ｍＲＮＡレベルまたは５８８７４ ｍＲＮＡレベルを検出するか、またはゲノムの２３２遺伝子、２０５９遺伝子、１０６３０遺伝子、１２８４８遺伝子、１３８７５遺伝子、１４３９５遺伝子、１４６１８遺伝子、１７６９２遺伝子または５８８７４遺伝子が変異されているか除去されているかを測定することによって）。
【０２０５】
本発明の方法は、遺伝暗号の縮重に起因して、配列番号１、配列番号４、配列番号７、配列番号１０、配列番号１３、配列番号１６、配列番号１９、配列番号２２または配列番号２５に示されるヌクレオチド配列とは異なり従って、配列番号１、配列番号４、配列番号７、配列番号１０、配列番号１３、配列番号１６、配列番号１９、配列番号２２または配列番号２５に示されるヌクレオチド配列によってコードされるタンパク質と同じ２３２タンパク質、２０５９タンパク質、１０６３０タンパク質、１２８４８タンパク質、１３８７５タンパク質、１４３９５タンパク質、１４６１８タンパク質、１７６９２タンパク質または５８８７４タンパク質をコードする核酸分子の使用をさらに含む。別の実施形態において、本発明の方法に含まれる単離された核酸分子は、配列番号３、配列番号６、配列番号９、配列番号１２、配列番号１５、配列番号１８、配列番号２１、配列番号２４または配列番号２７に示されたアミノ酸配列を有するタンパク質をコードするヌクレオチド配列を有する。
【０２０６】
本発明の方法は、ヒト２３２、ヒト２０５９、ヒト１０６３０、ヒト１２８４８、ヒト１３８７５、ヒト１４３９５、ヒト１４６１８、ヒト１７６９２またはヒト５８８７４の対立遺伝子改変体（例えば、機能的対立遺伝子改変体および非機能的対立遺伝子改変体）の使用をさらに含む。機能的対立遺伝子改変体は、ヒト２３２タンパク質、ヒト２０５９タンパク質、ヒト１０６３０タンパク質、ヒト１２８４８タンパク質、ヒト１３８７５タンパク質、ヒト１４３９５タンパク質、ヒト１４６１８タンパク質、ヒト１７６９２タンパク質またはヒト５８８７４タンパク質の天然に存在するアミノ酸配列改変体であって、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４の活性を維持するアミノ酸配列改変体である。機能的対立遺伝子改変体は、代表的に、配列番号３、配列番号６、配列番号９、配列番号１２、配列番号１５、配列番号１８、配列番号２１、配列番号２４または配列番号２７の１つ以上のアミノ酸の保存的置換、またはそのタンパク質の非必須領域における非必須残基の置換、欠失、もしくは挿入のみを含む。非機能的対立遺伝子改変体は、ヒト２３２タンパク質、ヒト２０５９タンパク質、ヒト１０６３０タンパク質、ヒト１２８４８タンパク質、ヒト１３８７５タンパク質、ヒト１４３９５タンパク質、ヒト１４６１８タンパク質、ヒト１７６９２タンパク質またはヒト５８８７４タンパク質の天然に存在するアミノ酸配列改変体であって、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４の活性を有さないアミノ酸配列改変体である。非機能的対立遺伝子改変体は、代表的には、配列番号３、配列番号６、配列番号９、配列番号１２、配列番号１５、配列番号１８、配列番号２１、配列番号２４または配列番号２７のアミノ酸配列の非保存的な置換、欠失、もしくは挿入または未成熟短縮化（ｐｒｅｍａｔｕｒｅ ｔｒｕｎｃａｔｉｏｎ）、あるいはこのタンパク質の必須残基または必須領域の置換、挿入、または欠失を含む。
【０２０７】
本発明の方法は、ヒト２３２タンパク質、ヒト２０５９タンパク質、ヒト１０６３０タンパク質、ヒト１２８４８タンパク質、ヒト１３８７５タンパク質、ヒト１４３９５タンパク質、ヒト１４６１８タンパク質、ヒト１７６９２タンパク質またはヒト５８８７４タンパク質の非ヒトオルソログをさらに使用し得る。ヒト２３２タンパク質、ヒト２０５９タンパク質、ヒト１０６３０タンパク質、ヒト１２８４８タンパク質、ヒト１３８７５タンパク質、ヒト１４３９５タンパク質、ヒト１４６１８タンパク質、ヒト１７６９２タンパク質またはヒト５８８７４タンパク質のオルソログは、非ヒト生物から単離され、そして同じ２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４の活性を有するタンパク質である。
【０２０８】
本発明の方法は、配列番号１、配列番号４、配列番号７、配列番号１０、配列番号１３、配列番号１６、配列番号１９、配列番号２２もしくは配列番号２５のヌクレオチド配列またはそれらの一部を含む核酸分子であって、変異が導入されている核酸分子の使用をさらに包含する。変異は、「非必須」アミノ酸残基または「必須」アミノ酸残基でのアミノ酸置換を導き得る。「非必須」アミノ酸残基とは、その生物学的活性を変化することなく２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４の野生型配列（例えば、配列番号３、配列番号６、配列番号９、配列番号１２、配列番号１５、配列番号１８、配列番号２１、配列番号２４または配列番号２７の配列）から変化され得る残基であり、一方、「必須」アミノ酸残基は、生物学的活性のために必要とされる。例えば、本発明の２３２タンパク質、２０５９タンパク質、１０６３０タンパク質、１２８４８タンパク質、１３８７５タンパク質、１４３９５タンパク質、１４６１８タンパク質、１７６９２タンパク質または５８８７４タンパク質の間で保存されたアミノ酸残基は、変化を受容する可能性は低い。
【０２０９】
変異は、標準技術（例えば、部位特異的変異誘発およびＰＣＲ媒介変異誘発）により配列番号１、配列番号４、配列番号７、配列番号１０、配列番号１３、配列番号１６、配列番号１９、配列番号２２または配列番号２５に導入され得る。好ましくは、保存的アミノ酸置換が、１つ以上の予想される非必須アミノ酸残基でなされる。「保存的アミノ酸置換」とは、アミノ酸残基が類似の側鎖を有するアミノ酸残基で置換されるアミノ酸置換である。類似の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーが、当該分野において規定されている。これらのファミリーとしては、塩基性側鎖を有するアミノ酸（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖を有するアミノ酸（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電の極性側鎖を有するアミノ酸（例えば、アスパラギン、グルタミン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン）、非極性側鎖を有するアミノ酸（例えば、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、β−分枝鎖を有するアミノ酸（例えば、トレオニン、バリン、イソロイシン）および芳香族側鎖を有するアミノ酸（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）が挙げられる。従って、好ましくは、２３２タンパク質、２０５９タンパク質、１０６３０タンパク質、１２８４８タンパク質、１３８７５タンパク質、１４３９５タンパク質、１４６１８タンパク質、１７６９２タンパク質または５８８７４タンパク質において予想される非必須アミノ酸残基は、同じ側鎖のファミリーからの別のアミノ酸残基で置換される。あるいは、別の実施形態において、変異は、例えば、飽和変異誘発（ｓａｔｕｒａｔｉｏｎ ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ）によって、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４のコード配列の全てまたは一部に沿って、ランダムに導入され得、そして得られた変異体は、活性を保持する変異体を同定するために、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４の生物学的活性についてスクリーニングされ得る。配列番号１、配列番号４、配列番号７、配列番号１０、配列番号１３、配列番号１６、配列番号１９、配列番号２２または配列番号２５の変異誘発の後、コードされたタンパク質が、組換え発現され得、そしてそのタンパク質の活性が、本明細書中に規定されたアッセイを用いて決定され得る。
【０２１０】
本発明の別の局面は、配列番号１、配列番号４、配列番号７、配列番号１０、配列番号１３、配列番号１６、配列番号１９、配列番号２２または配列番号２５のヌクレオチド配列に対するアンチセンスである単離された核酸分子の使用に関する。「アンチセンス」核酸は、タンパク質をコードする「センス」核酸に相補的である（例えば、二本鎖ｃＤＮＡ分子のコード鎖に相補的であるかまたはｍＲＮＡ配列に相補的である）ヌクレオチド配列を含む。従って、アンチセンス核酸は、センス核酸に水素結合し得る。アンチセンス核酸は、全長２３２コード鎖、全長２０５９コード鎖、全長１０６３０コード鎖、全長１２８４８コード鎖、全長１３８７５コード鎖、全長１４３９５コード鎖、全長１４６１８コード鎖、全長１７６９２コード鎖もしくは全長５８８７４コード鎖または、それらの一部のみに相補的であり得る。１実施形態において、アンチセンス核酸分子は、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４をコードするヌクレオチド配列のコード鎖の「コード領域」に対するアンチセンスである。用語「コード領域」とは、アミノ酸残基に翻訳されるコドンを含むヌクレオチド配列の領域をいう。別の実施形態において、このアンチセンス核酸分子は、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４をコードするヌクレオチド配列のコード鎖の「非コード領域」に対するアンチセンスである。用語「非コード領域」とは、コード領域に隣接する５’配列および３’配列であって、アミノ酸に翻訳されない配列をいう（５’および３’の非翻訳領域ともいう）。
【０２１１】
本明細書中に開示される２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４をコードするコード鎖配列を考慮して、本発明のアンチセンス核酸は、ＷａｔｓｏｎおよびＣｒｉｃｋの塩基対形成の法則に従って、設計され得る。アンチセンス核酸分子は、２３２ｍＲＮＡ、２０５９ｍＲＮＡ、１０６３０ｍＲＮＡ、１２８４８ｍＲＮＡ、１３８７５ｍＲＮＡ、１４３９５ｍＲＮＡ、１４６１８ｍＲＮＡ、１７６９２ｍＲＮＡまたは５８８７４ｍＲＮＡの全コード領域に相補的であり得るが、より好ましくは、２３２ｍＲＮＡ、２０５９ｍＲＮＡ、１０６３０ｍＲＮＡ、１２８４８ｍＲＮＡ、１３８７５ｍＲＮＡ、１４３９５ｍＲＮＡ、１４６１８ｍＲＮＡ、１７６９２ｍＲＮＡまたは５８８７４ｍＲＮＡのコード領域または非コード領域の一部のみに対してアンチセンスであるオリゴヌクレオチドである。例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、２３２ｍＲＮＡ、２０５９ｍＲＮＡ、１０６３０ｍＲＮＡ、１２８４８ｍＲＮＡ、１３８７５ｍＲＮＡ、１４３９５ｍＲＮＡ、１４６１８ｍＲＮＡ、１７６９２ｍＲＮＡまたは５８８７４ｍＲＮＡの翻訳開始部位の周辺領域に相補的であり得る。アンチセンスオリゴヌクレオチドは、例えば、約５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５または５０ヌクレオチド長であり得る。本発明のアンチセンス核酸は、当該分野で公知の手順を使用して、化学的合成および酵素的連結反応を使用して構築され得る。例えば、アンチセンス核酸（例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチド）は、天然に存在するヌクレオチド、あるいは分子の生物学的安定性を増大するように、またはアンチセンス核酸とセンス核酸との間に形成される二重鎖の物理的安定性を増大するように設計された、種々に改変されたヌクレオチドを使用して、化学的に合成され得る。例えば、ホスホロチオエート誘導体およびアクリジン置換ヌクレオチドが使用され得る。アンチセンス核酸を生成するために使用され得る改変ヌクレオチドの例としては、以下が挙げられる：５−フルオロウラシル、５−ブロモウラシル、５−クロロウラシル、５−ヨードウラシル、ヒポキサンチン、キサンチン、４−アセチルシトシン、５−（カルボキシヒドロキシルメチル）ウラシル、５−カルボキシメチルアミノメチル−２−チオウリジン、５−カルボキシメチルアミノメチルウラシル、ジヒドロウラシル、β−Ｄ−ガラクトシルキューオシン、イノシン、Ｎ６−イソペンテニルアデニン、１−メチルグアニン、１−メチルイノシン、２，２−ジメチルグアニン、２−メチルアデニン、２−メチルグアニン、３−メチルシトシン、５−メチルシトシン、Ｎ６−アデニン、７−メチルグアニン、５−メチルアミノメチルウラシル、５−メトキシアミノメチル−２−チオウラシル、β−Ｄ−マンノシルキューオシン、５’−メトキシカルボキシメチルウラシル、５−メトキシウラシル、２−メチルチオ−Ｎ６−イソペンテニルアデニン、ウラシル−５−オキシ酢酸（ｖ）、ワイブトキソシン（ｗｙｂｕｔｏｘｏｓｉｎｅ）、プソイドウラシル、キューオシン、２−チオシトシン、５−メチル−２−チオウラシル、２−チオウラシル、４−チオウラシル、５−メチルウラシル、ウラシル−５−オキシ酢酸メチルエステル、ウラシル−５−オキシ酢酸（ｖ）、５−メチル−２−チオウラシル、３−（３−アミノ−３−Ｎ−２−カルボキシプロピル）ウラシル、（ａｃｐ３）および２，６−ジアミノプリン。あるいは、アンチセンス核酸は、核酸がアンチセンス方向でサブクローニングされた発現ベクターを使用して、生物学的に生成され得る（すなわち、挿入された核酸から転写されるＲＮＡは、目的の標的核酸に対してアンチセンス方向のＲＮＡである）。本発明の方法において使用されるアンチセンス核酸分子は、さらに、上記の第ＩＶ節において記載される。
【０２１２】
なお別の実施形態において、本発明の方法において使用される２３２核酸分子、２０５９核酸分子、１０６３０核酸分子、１２８４８核酸分子、１３８７５核酸分子、１４３９５核酸分子、１４６１８核酸分子、１７６９２核酸分子または５８８７４核酸分子は、塩基部分、糖部分またはリン酸骨格において改変されて、例えば、分子の安定性、ハイブリダイゼーションまたは可溶性を改善し得る。例えば、核酸分子のデオキシリボースリン酸骨格は、ペプチド核酸を生成するために改変され得る（Ｈｙｒｕｐ Ｂ．ら、（１９９６）Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ＆Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ４（１）：５−２３を参照のこと）。本明細書中で使用される場合、用語「ペプチド核酸」すなわち「ＰＮＡ」は、核酸模倣物（例えば、ＤＮＡ模倣物）をいい、ここで、デオキシリボースリン酸骨格は、偽ペプチド骨格によって置換され、そして４種の天然の核酸塩基だけが維持される。ＰＮＡの天然の骨格は、低イオン強度の条件下で、ＤＮＡおよびＲＮＡへの特異的ハイブリダイゼーションを可能にすることが示されている。ＰＮＡオリゴマーの合成は、標準的な固相ペプチド合成プロトコルを使用して、Ｈｙｒｕｐ Ｂ．ら、（１９９６）前出；Ｐｅｒｒｙ−Ｏ’Ｋｅｅｆｅら、（１９９６）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．９３：１４６７０−６７５に記載されるように実施され得る。
【０２１３】
２３２核酸分子、２０５９核酸分子、１０６３０核酸分子、１２８４８核酸分子、１３８７５核酸分子、１４３９５核酸分子、１４６１８核酸分子、１７６９２核酸分子または５８８７４核酸分子のＰＮＡは、本明細書中に記載される治療適用および診断適用において使用され得る。例えば、ＰＮＡは、例えば、転写もしくは翻訳の停止を誘導するか、または複製を阻害することによって、遺伝子発現の配列特異的調節のためのアンチセンス因子またはアンチ遺伝子（ａｎｔｉｇｅｎｅ）因子として使用され得る。２３２核酸分子、２０５９核酸分子、１０６３０核酸分子、１２８４８核酸分子、１３８７５核酸分子、１４３９５核酸分子、１４６１８核酸分子、１７６９２核酸分子または５８８７４核酸分子のＰＮＡはまた、遺伝子中の単一塩基対の変異の分析において（例えば、ＰＮＡ指向性のＰＣＲクランピングによって）；他の酵素と組み合わせて使用する場合には、「人工制限酵素」として（例えば、Ｓ１ヌクレアーゼ（Ｈｙｒｕｐ Ｂ．ら、（１９９６）前出））；またはＤＮＡ配列決定もしくはハイブリダイゼーションのためのプローブもしくはプライマーとして（Ｈｙｒｕｐ Ｂ．ら、（１９９６）前出；Ｐｅｒｒｙ−Ｏ’Ｋｅｅｆｅら、（１９９６）前出）、使用され得る。
【０２１４】
別の実施形態において、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４のＰＮＡは、（例えば、ＰＮＡの安定性または細胞取り込みを増強するために）、ＰＮＡに親油性もしくは他のヘルパー基を結合させることによってか、ＰＮＡ−ＤＮＡキメラの形成によってか、またはリポソームもしくは当該分野で公知の他の薬物送達技術の使用によって、改変され得る。例えば、ＰＮＡおよびＤＮＡの有利な特性を組み合わせ得る２３２核酸分子、２０５９核酸分子、１０６３０核酸分子、１２８４８核酸分子、１３８７５核酸分子、１４３９５核酸分子、１４６１８核酸分子、１７６９２核酸分子または５８８７４核酸分子のＰＮＡ−ＤＮＡキメラが、生成され得る。このようなキメラは、ＤＮＡ認識酵素（例えば、ＲＮＡｓｅ ＨおよびＤＮＡポリメラーゼ）に、ＤＮＡ部分と相互作用させ、一方、ＰＮＡ部分は、高い結合親和性および結合特異性を提供する。ＰＮＡ−ＤＮＡキメラは、塩基スタッキング、核酸塩基間の結合の数および方向に関して選択される、適切な長さのリンカーを使用して、連結され得る（Ｈｙｒｕｐ Ｂ．ら、（１９９６）前出）。ＰＮＡ−ＤＮＡキメラの合成は、Ｈｙｒｕｐ Ｂ．ら、（１９９６）前出およびＦｉｎｎ Ｐ．Ｊ．ら、（１９９６）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２４（１７）：３３５７−６３に記載されるように実施され得る。例えば、ＤＮＡ鎖は、標準的なホスホロアミダイトカップリング化学および改変ヌクレオシドアナログを使用して、固体支持体上で合成され得る。例えば、５’−（４−メトキシトリチル）アミノ−５’−デオキシ−チミジンホスホラミダイトが、ＰＮＡとＤＮＡの５’末端との間として使用され得る（Ｍａｇ、Ｍ．ら、（１９８９）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｒｅｓ．１７：５９７３−８８）。次いで、ＰＮＡモノマーは、段階的な様式でカップリングされて、５’ＰＮＡセグメントおよび３’ＤＮＡセグメントを有するキメラ分子を生成する（Ｆｉｎｎ Ｐ．Ｊ．ら、（１９９６）前出）。あるいは、キメラ分子は、５’ＤＮＡセグメントおよび３’ＰＮＡセグメントを用いて合成され得る（Ｐｅｔｅｒｓｅｒ、Ｋ．Ｈ．ら、（１９７５）Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．５：１１１９−１１１２４）。
【０２１５】
他の実施形態において、本発明の方法において使用されるオリゴヌクレオチドは、他の付随的な基（例えば、（例えば、インビボで宿主細胞レセプターを標的化するための）ペプチド、または細胞膜（例えば、Ｌｅｔｓｉｎｇｅｒら、（１９８９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：６５５３−６５５６；Ｌｅｍａｉｔｒｅら、（１９８７）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８４：６４８−６５２；ＰＣＴ公開番号ＷＯ８８／０９８１０を参照のこと）もしくは血液−脳関門（例えば、ＰＣＴ公開番号ＷＯ８９／１０１３４を参照のこと）を横切る輸送を促進するための因子を含み得る。さらに、オリゴヌクレオチドは、ハイブリダイゼーションが引き金を引く切断因子（例えば、Ｋｒｏｌら、（１９８８）Ｂｉｏ−Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ６：９５８−９７６を参照のこと）またはインターカレート因子を用いて改変され得る（例えば、Ｚｏｎ（１９８８）Ｐｈａｒｍ． Ｒｅｓ．５：５３９−５４９を参照のこと）。この目的で、オリゴヌクレオチドは、別の分子（例えば、ペプチドハイブリダイゼーションが引き金を引く架橋剤、輸送因子またはハイブリダイゼーションが引き金を引く切断因子）に結合体化され得る。
【０２１６】
（ＶＩＩ．本発明の方法において使用される、単離された２３２タンパク質、２０５９タンパク質、１０６３０タンパク質、１２８４８タンパク質、１３８７５タンパク質、１４３９５タンパク質、１４６１８タンパク質、１７６９２タンパク質または５８８７４タンパク質、および抗２３２抗体、抗２０５９抗体、抗１０６３０抗体、抗１２８４８抗体、抗１３８７５抗体、抗１４３９５抗体、抗１４６１８抗体、抗１７６９２抗体または抗５８８７４抗体）
本発明の方法は、単離された２３２タンパク質、２０５９タンパク質、１０６３０タンパク質、１２８４８タンパク質、１３８７５タンパク質、１４３９５タンパク質、１４６１８タンパク質、１７６９２タンパク質または５８８７４タンパク質およびこれらの生物学的に活性な部分、ならびに抗２３２抗体、抗２０５９抗体、抗１０６３０抗体、抗１２８４８抗体、抗１３８７５抗体、抗１４３９５抗体、抗１４６１８抗体、抗１７６９２抗体または抗５８８７４抗体を惹起するための免疫原として使用されるのに適切なポリペプチドフラグメントの使用を包含する。１つの実施形態において、ネイティブの２３２タンパク質、２０５９タンパク質、１０６３０タンパク質、１２８４８タンパク質、１３８７５タンパク質、１４３９５タンパク質、１４６１８タンパク質、１７６９２タンパク質または５８８７４タンパク質は、標準的なタンパク質精製技術を使用する、適切な精製スキームによって、細胞供給源または組織供給源から単離され得る。別の実施形態において、２３２タンパク質、２０５９タンパク質、１０６３０タンパク質、１２８４８タンパク質、１３８７５タンパク質、１４３９５タンパク質、１４６１８タンパク質、１７６９２タンパク質または５８８７４タンパク質は、組換えＤＮＡ技術によって生成される。組換え発現と代替的に、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４のタンパク質またはポリペプチドは、標準的なペプチド合成技術を使用して、化学的に合成され得る。
【０２１７】
本明細書中で使用する場合、２３２タンパク質、２０５９タンパク質、１０６３０タンパク質、１２８４８タンパク質、１３８７５タンパク質、１４３９５タンパク質、１４６１８タンパク質、１７６９２タンパク質または５８８７４タンパク質の「生物学的に活性な部分」は、２３２活性、２０５９活性、１０６３０活性、１２８４８活性、１３８７５活性、１４３９５活性、１４６１８活性、１７６９２活性または５８８７４活性を有する、２３２タンパク質、２０５９タンパク質、１０６３０タンパク質、１２８４８タンパク質、１３８７５タンパク質、１４３９５タンパク質、１４６１８タンパク質、１７６９２タンパク質または５８８７４タンパク質のフラグメントを含む。２３２タンパク質、２０５９タンパク質、１０６３０タンパク質、１２８４８タンパク質、１３８７５タンパク質、１４３９５タンパク質、１４６１８タンパク質、１７６９２タンパク質または５８８７４タンパク質の生物学的に活性な部分は、２３２タンパク質、２０５９タンパク質、１０６３０タンパク質、１２８４８タンパク質、１３８７５タンパク質、１４３９５タンパク質、１４６１８タンパク質、１７６９２タンパク質または５８８７４タンパク質のアミノ酸配列に十分に同一であるか、あるいはこれらに由来するアミノ酸配列（例えば、全長の２３２タンパク質、２０５９タンパク質、１０６３０タンパク質、１２８４８タンパク質、１３８７５タンパク質、１４３９５タンパク質、１４６１８タンパク質、１７６９２タンパク質または５８８７４タンパク質より少ないアミノ酸を含み、かつ２３２タンパク質、２０５９タンパク質、１０６３０タンパク質、１２８４８タンパク質、１３８７５タンパク質、１４３９５タンパク質、１４６１８タンパク質、１７６９２タンパク質または５８８７４タンパク質の少なくとも１つの活性を示す、配列番号３、６、９に示されるアミノ酸配列）を含むペプチドを含む。代表的には、生物学的に活性な部分は、２３２タンパク質、２０５９タンパク質、１０６３０タンパク質、１２８４８タンパク質、１３８７５タンパク質、１４３９５タンパク質、１４６１８タンパク質、１７６９２タンパク質または５８８７４タンパク質の少なくとも１つの活性を有するドメインまたはモチーフ（例えば、アポトーシス活性の調節に関与すると考えられている、２３２タンパク質、２０５９タンパク質、１０６３０タンパク質、１２８４８タンパク質、１３８７５タンパク質、１４３９５タンパク質、１４６１８タンパク質、１７６９２タンパク質または５８８７４タンパク質のＮ末端領域）を含む。２３２タンパク質、２０５９タンパク質、１０６３０タンパク質、１２８４８タンパク質、１３８７５タンパク質、１４３９５タンパク質、１４６１８タンパク質、１７６９２タンパク質または５８８７４タンパク質の生物学的に活性な部分は、例えば、２５、５０、７５、１００、１２５、１５０、１７５、２００、２５０、３００以上のアミノ酸長である、ポリペプチドであり得る。２３２タンパク質、２０５９タンパク質、１０６３０タンパク質、１２８４８タンパク質、１３８７５タンパク質、１４３９５タンパク質、１４６１８タンパク質、１７６９２タンパク質または５８８７４タンパク質の生物学的に活性な部分は、２３２活性、２０５９活性、１０６３０活性、１２８４８活性、１３８７５活性、１４３９５活性、１４６１８活性、１７６９２活性または５８８７４活性を調節する薬剤を開発するための標的として使用され得る。
【０２１８】
好ましい実施形態において、本発明の方法において使用される２３２タンパク質、２０５９タンパク質、１０６３０タンパク質、１２８４８タンパク質、１３８７５タンパク質、１４３９５タンパク質、１４６１８タンパク質、１７６９２タンパク質または５８８７４タンパク質は、配列番号３、６、９、１２、１５、１８、２１、２４、または２７に示されるアミノ酸配列を有する。他の実施形態において、２３２タンパク質、２０５９タンパク質、１０６３０タンパク質、１２８４８タンパク質、１３８７５タンパク質、１４３９５タンパク質、１４６１８タンパク質、１７６９２タンパク質または５８８７４タンパク質は、配列番号３、６、９、１２、１５、１８、２１、２４、または２７に対して実質的に同一であり、そして配列番号３、６、９、１２、１５、１８、２１、２４、または２７のタンパク質の機能的活性を保持するが、上記第Ｖ節において詳細に記載されるように、天然の対立遺伝子改変体または変異誘発に起因して、アミノ酸配列が異なる。従って、別の実施形態において、本発明の方法において使用される２３２タンパク質、２０５９タンパク質、１０６３０タンパク質、１２８４８タンパク質、１３８７５タンパク質、１４３９５タンパク質、１４６１８タンパク質、１７６９２タンパク質または５８８７４タンパク質は、配列番号３、６、９、１２、１５、１８、２１、２４、または２７に対して少なくとも約５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上同一なアミノ酸配列を含むタンパク質である。
【０２１９】
２つのアミノ酸配列、または２つの核酸配列のパーセント同一性を決定するために、これらの配列は、最適な比較目的で整列される（例えば、ギャップは、最適な整列のために、第１および第２のアミノ酸配列または核酸配列の一方または両方に導入され得、そして非相同配列は、比較目的で無視され得る）。好ましい実施形態において、比較目的で整列される参照配列の長さは、参照配列の少なくとも３０％、好ましくは少なくとも４０％、より好ましくは少なくとも５０％、なおより好ましくは少なくとも６０％、およびさらにより好ましくは、少なくとも７０％、８０％または９０％の長さである（例えば、５００アミノ酸残基を有する、配列番号３、６、９、１２、１５、１８、２１、２４、または２７の２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４の第二の配列を整列させる場合、少なくとも７５、好ましくは少なくとも１５０、より好ましくは少なくとも２２５、なおより好ましくは少なくとも３００およびなおより好ましくは少なくとも４００またはそれ以上のアミノ酸残基が整列される）。次いで、対応するアミノ酸位置またはヌクレオチド位置のアミノ酸残基またはヌクレオチドが、比較される。第１の配列における位置が、第２の配列の対応する位置と同じアミノ酸残基またはヌクレオチドで占められる場合、これらの分子は、その位置で同一である（本明細書中で使用される場合、アミノ酸または核酸の「同一性」は、アミノ酸または核酸の「相同性」と等しい）。２つの配列間のパーセント同一性は、それらの配列により共有される同一の位置の数の関数である（ギャップの数、および、２つの配列の最適なアラインメントのために導入される必要のある各ギャップの長さが考慮される）。
【０２２０】
配列の比較および２つの配列間のパーセント同一性の決定は、数学的アルゴリズムを用いて達成され得る。好ましい実施形態において、２つのアミノ酸配列間のパーセント同一性は、ＧＣＧソフトウェアパッケージ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｃｇ．ｃｏｍから入手可能）中のＧＡＰプログラムに組み込まれたＮｅｅｄｌｅｍａｎおよびＷｕｎｓｃｈ（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４４−４５３（１９７０））のアルゴリズムを用い、Ｂｌｏｓｕｍ ６２マトリクスまたはＰＡＭ２５０マトリクスのいずれか、ならびにギャップウェイト１６、１４、１２、１０、８、６、または４およびレングスウェイト（ｌｅｎｇｔｈ ｗｅｉｇｈｔ）１、２、３、４、５、または６を用いて決定される。さらに別の好ましい実施形態において、２つのヌクレオチド配列間のパーセント同一性は、ＧＣＧソフトウェアパッケージ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｃｇ．ｃｏｍから入手可能）中のＧＡＰプログラムを用い、ＮＷＳｇａｐｄｎａ．ＣＭＰマトリクスならびにギャップウェイト４０、５０、６０、７０、または８０およびレングスウェイト１、２、３、４、５、または６を用いて決定される。別の実施形態において、２つのアミノ酸配列間または２つのヌクレオチド配列間のパーセント同一性は、ＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０または２．０Ｕ）に組みこまれたＥ．ＭｅｙｅｒｓおよびＷ．Ｍｉｌｌｅｒ（Ｃｏｍｐｕｔ．Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｓｃｉ．４：１１−１７（１９８８））のアルゴリズムを使用し、ＰＡＭ１２０ウェイトレジデューテーブル（ｗｅｉｇｈｔ ｒｅｄｉｄｕｅ ｔａｂｌｅ）、ギャップレングスペナルティー１２、およびギャップペナルティー４を用いて決定され得る。
【０２２１】
本発明の方法はまた、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４のキメラタンパク質または融合タンパク質を使用し得る。本明細書中で使用される場合、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４の「キメラタンパク質」または「融合タンパク質」は、非２３２ポリペプチド、非２０５９ポリペプチド、非１０６３０ポリペプチド、非１２８４８ポリペプチド、非１３８７５ポリペプチド、非１４３９５ポリペプチド、非１４６１８ポリペプチド、非１７６９２ポリペプチド、または非５８８７４ポリペプチドに作動可能に連結された、２３２ポリペプチド、２０５９ポリペプチド、１０６３０ポリペプチド、１２８４８ポリペプチド、１３８７５ポリペプチド、１４３９５ポリペプチド、１４６１８ポリペプチド、１７６９２ポリペプチドまたは５８８７４ポリペプチドを含む。「２３２ポリペプチド、２０５９ポリペプチド、１０６３０ポリペプチド、１２８４８ポリペプチド、１３８７５ポリペプチド、１４３９５ポリペプチド、１４６１８ポリペプチド、１７６９２ポリペプチドまたは５８８７４ポリペプチド」は、２３２分子、２０５９分子、１０６３０分子、１２８４８分子、１３８７５分子、１４３９５分子、１４６１８分子、１７６９２分子または５８８７４分子に対応するアミノ酸配列を有するポリペプチドをいうが、一方、「非２３２ポリペプチド、非２０５９ポリペプチド、非１０６３０ポリペプチド、非１２８４８ポリペプチド、非１３８７５ポリペプチド、非１４３９５ポリペプチド、非１４６１８ポリペプチド、非１７６９２ポリペプチド、または非５８８７４ポリペプチド」は、２３２タンパク質、２０５９タンパク質、１０６３０タンパク質、１２８４８タンパク質、１３８７５タンパク質、１４３９５タンパク質、１４６１８タンパク質、１７６９２タンパク質または５８８７４タンパク質に実質的に相同でないタンパク質に対応するアミノ酸配列を有するポリペプチド（例えば、２３２タンパク質、２０５９タンパク質、１０６３０タンパク質、１２８４８タンパク質、１３８７５タンパク質、１４３９５タンパク質、１４６１８タンパク質、１７６９２タンパク質または５８８７４タンパク質とは異なり、かつ同じ生物または異なる生物由来のタンパク質）をいう。２３２融合タンパク質、２０５９融合タンパク質、１０６３０融合タンパク質、１２８４８融合タンパク質、１３８７５融合タンパク質、１４３９５融合タンパク質、１４６１８融合タンパク質、１７６９２融合タンパク質または５８８７４融合タンパク質において、２３２ポリペプチド、２０５９ポリペプチド、１０６３０ポリペプチド、１２８４８ポリペプチド、１３８７５ポリペプチド、１４３９５ポリペプチド、１４６１８ポリペプチド、１７６９２ポリペプチドまたは５８８７４ポリペプチドは、２３２タンパク質、２０５９タンパク質、１０６３０タンパク質、１２８４８タンパク質、１３８７５タンパク質、１４３９５タンパク質、１４６１８タンパク質、１７６９２タンパク質または５８８７４タンパク質の全てまたは一部に対応し得る。好ましい実施形態において、２３２融合タンパク質、２０５９融合タンパク質、１０６３０融合タンパク質、１２８４８融合タンパク質、１３８７５融合タンパク質、１４３９５融合タンパク質、１４６１８融合タンパク質、１７６９２融合タンパク質または５８８７４融合タンパク質は、２３２タンパク質、２０５９タンパク質、１０６３０タンパク質、１２８４８タンパク質、１３８７５タンパク質、１４３９５タンパク質、１４６１８タンパク質、１７６９２タンパク質または５８８７４タンパク質の生物学的に活性な部分のうち少なくとも１つを含む。別の好ましい実施形態において、２３２融合タンパク質、２０５９融合タンパク質、１０６３０融合タンパク質、１２８４８融合タンパク質、１３８７５融合タンパク質、１４３９５融合タンパク質、１４６１８融合タンパク質、１７６９２融合タンパク質または５８８７４融合タンパク質は、２３２タンパク質、２０５９タンパク質、１０６３０タンパク質、１２８４８タンパク質、１３８７５タンパク質、１４３９５タンパク質、１４６１８タンパク質、１７６９２タンパク質または５８８７４タンパク質の生物学的に活性な部分のうち少なくとも２つを含む。融合タンパク質において、用語「作動可能に連結した」は、２３２ポリペプチド、２０５９ポリペプチド、１０６３０ポリペプチド、１２８４８ポリペプチド、１３８７５ポリペプチド、１４３９５ポリペプチド、１４６１８ポリペプチド、１７６９２ポリペプチドまたは５８８７４ポリペプチドおよび非２３２ポリペプチド、非２０５９ポリペプチド、非１０６３０ポリペプチド、非１２８４８ポリペプチド、非１３８７５ポリペプチド、非１４３９５ポリペプチド、非１４６１８ポリペプチド、非１７６９２ポリペプチド、または非５８８７４ポリペプチドは、互いにインフレームで融合されることを意味することが意図される。非２３２ポリペプチド、非２０５９ポリペプチド、非１０６３０ポリペプチド、非１２８４８ポリペプチド、非１３８７５ポリペプチド、非１４３９５ポリペプチド、非１４６１８ポリペプチド、非１７６９２ポリペプチド、または非５８８７４ポリペプチドは、２３２ポリペプチド、２０５９ポリペプチド、１０６３０ポリペプチド、１２８４８ポリペプチド、１３８７５ポリペプチド、１４３９５ポリペプチド、１４６１８ポリペプチド、１７６９２ポリペプチドまたは５８８７４ポリペプチドのＮ末端またはＣ末端に融合され得る。
【０２２２】
例えば、１つの実施形態において、融合タンパク質は、ＧＳＴ−２３２融合タンパク質、ＧＳＴ−２０５９融合タンパク質、ＧＳＴ−１０６３０融合タンパク質、ＧＳＴ−１２８４８融合タンパク質、ＧＳＴ−１３８７５融合タンパク質、ＧＳＴ−１４３９５融合タンパク質、ＧＳＴ−１４６１８融合タンパク質、ＧＳＴ−１７６９２融合タンパク質またはＧＳＴ−５８８７４融合タンパク質であり、ここで、２３２配列、２０５９配列、１０６３０配列、１２８４８配列、１３８７５配列、１４３９５配列、１４６１８配列、１７６９２配列または５８８７４配列は、ＧＳＴ配列のＣ末端に融合されている。このような融合タンパク質は、組換え２３２、組換え２０５９、組換え１０６３０、組換え１２８４８、組換え１３８７５、組換え１４３９５、組換え１４６１８、組換え１７６９２または組換え５８８７４の精製を容易にし得る。
【０２２３】
別の実施形態において、この融合タンパク質は、そのＮ末端において異種シグナル配列を含む２３２タンパク質、２０５９タンパク質、１０６３０タンパク質、１２８４８タンパク質、１３８７５タンパク質、１４３９５タンパク質、１４６１８タンパク質、１７６９２タンパク質または５８８７４タンパク質である。特定の宿主細胞（例えば、哺乳動物宿主細胞）において、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２もしくは５８８７４の発現および／または分泌は、異種シグナル配列の使用によって増大され得る。
【０２２４】
本発明の方法において使用される２３２融合タンパク質、２０５９融合タンパク質、１０６３０融合タンパク質、１２８４８融合タンパク質、１３８７５融合タンパク質、１４３９５融合タンパク質、１４６１８融合タンパク質、１７６９２融合タンパク質または５８８７４融合タンパク質は、薬学的組成物中に組み込まれ得、そして被験体にインビボで投与され得る。２３２融合タンパク質、２０５９融合タンパク質、１０６３０融合タンパク質、１２８４８融合タンパク質、１３８７５融合タンパク質、１４３９５融合タンパク質、１４６１８融合タンパク質、１７６９２融合タンパク質または５８８７４融合タンパク質は、２３２基質、２０５９基質、１０６３０基質、１２８４８基質、１３８７５基質、１４３９５基質、１４６１８基質、１７６９２基質または５８８７４基質のバイオアベイラビリティーに影響を与えるために使用され得る。２３２融合タンパク質、２０５９融合タンパク質、１０６３０融合タンパク質、１２８４８融合タンパク質、１３８７５融合タンパク質、１４３９５融合タンパク質、１４６１８融合タンパク質、１７６９２融合タンパク質または５８８７４融合タンパク質の使用は、例えば、以下によって引き起こされる障害の処置のために治療的に有用であり得る：（ｉ）２３２タンパク質、２０５９タンパク質、１０６３０タンパク質、１２８４８タンパク質、１３８７５タンパク質、１４３９５タンパク質、１４６１８タンパク質、１７６９２タンパク質または５８８７４タンパク質をコードする遺伝子の異常な改変または変異；（ｉｉ）２３２遺伝子、２０５９遺伝子、１０６３０遺伝子、１２８４８遺伝子、１３８７５遺伝子、１４３９５遺伝子、１４６１８遺伝子、１７６９２遺伝子または５８８７４遺伝子の誤調節；ならびに（ｉｉｉ）２３２タンパク質、２０５９タンパク質、１０６３０タンパク質、１２８４８タンパク質、１３８７５タンパク質、１４３９５タンパク質、１４６１８タンパク質、１７６９２タンパク質または５８８７４タンパク質の異常な翻訳後修飾。
【０２２５】
さらに、本発明の方法において使用される２３２融合タンパク質、２０５９融合タンパク質、１０６３０融合タンパク質、１２８４８融合タンパク質、１３８７５融合タンパク質、１４３９５融合タンパク質、１４６１８融合タンパク質、１７６９２融合タンパク質または５８８７４融合タンパク質は、被験体において抗２３２抗体、抗２０５９抗体、抗１０６３０抗体、抗１２８４８抗体、抗１３８７５抗体、抗１４３９５抗体、抗１４６１８抗体、抗１７６９２抗体または抗５８８７４抗体を産生するための免疫原として、２３２リガンド、２０５９リガンド、１０６３０リガンド、１２８４８リガンド、１３８７５リガンド、１４３９５リガンド、１４６１８リガンド、１７６９２リガンドまたは５８８７４リガンドを精製するために、そして２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４の、２３２基質、２０５９基質、１０６３０基質、１２８４８基質、１３８７５基質、１４３９５基質、１４６１８基質、１７６９２基質または５８８７４基質との相互作用を阻害する分子を同定するためのスクリーニングアッセイにおいて、使用され得る。
【０２２６】
好ましくは、本発明の方法において使用される２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４のキメラタンパク質または融合タンパク質は、標準的な組換えＤＮＡ技術によって産生される。例えば、異なるポリペプチド配列をコードするＤＮＡフラグメントは、従来技術に従って、例えば、連結のために平滑末端または付着末端を使用し、適切な末端を提供するための制限酵素消化を使用し、適切な場合粘着末端をフィルインし、所望でない連結を回避するためのアルカリホスファターゼ処理を使用し、そして酵素的連結を使用することによって一緒にインフレームで連結される。別の実施形態において、融合遺伝子は、自動化ＤＮＡ合成機を含む従来技術によって合成され得る。あるいは、遺伝子フラグメントのＰＣＲ増幅は、引き続いてアニーリングおよび再増幅されてキメラ遺伝子配列を生成し得る２つの連続遺伝子フラグメント間の相補的オーバーハングを生じるアンカープライマーを使用して実施され得る（例えば、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ａｕｓｕｂｅｌら、編、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ：１９９２を参照のこと）。さらに、すでに融合部分（例えば、ＧＳＴポリペプチド）をコードしている多くの発現ベクターが市販されている。２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４をコードする核酸は、この融合部分が、２３２タンパク質、２０５９タンパク質、１０６３０タンパク質、１２８４８タンパク質、１３８７５タンパク質、１４３９５タンパク質、１４６１８タンパク質、１７６９２タンパク質または５８８７４タンパク質にインフレームで連結されるように、このような発現ベクター中にクローニングされ得る。
【０２２７】
本発明はまた、２３２アゴニスト、２０５９アゴニスト、１０６３０アゴニスト、１２８４８アゴニスト、１３８７５アゴニスト、１４３９５アゴニスト、１４６１８アゴニスト、１７６９２アゴニストまたは５８８７４アゴニスト（模倣物）、あるいは２３２アンタゴニスト、２０５９アンタゴニスト、１０６３０アンタゴニスト、１２８４８アンタゴニスト、１３８７５アンタゴニスト、１４３９５アンタゴニスト、１４６１８アンタゴニスト、１７６９２アンタゴニストまたは５８８７４アンタゴニストのいずれかとして機能する、２３２タンパク質、２０５９タンパク質、１０６３０タンパク質、１２８４８タンパク質、１３８７５タンパク質、１４３９５タンパク質、１４６１８タンパク質、１７６９２タンパク質または５８８７４タンパク質の改変体の使用に関する。２３２タンパク質、２０５９タンパク質、１０６３０タンパク質、１２８４８タンパク質、１３８７５タンパク質、１４３９５タンパク質、１４６１８タンパク質、１７６９２タンパク質または５８８７４タンパク質の改変体は、変異誘発（例えば、２３２タンパク質、２０５９タンパク質、１０６３０タンパク質、１２８４８タンパク質、１３８７５タンパク質、１４３９５タンパク質、１４６１８タンパク質、１７６９２タンパク質または５８８７４タンパク質の別個の点変異または短縮）によって生成され得る。２３２タンパク質、２０５９タンパク質、１０６３０タンパク質、１２８４８タンパク質、１３８７５タンパク質、１４３９５タンパク質、１４６１８タンパク質、１７６９２タンパク質または５８８７４タンパク質のアゴニストは、２３２タンパク質、２０５９タンパク質、１０６３０タンパク質、１２８４８タンパク質、１３８７５タンパク質、１４３９５タンパク質、１４６１８タンパク質、１７６９２タンパク質または５８８７４タンパク質の天然に存在する形態の生物学的活性と実質的に同じ生物学的活性またはそのサブセットを保持し得る。２３２タンパク質、２０５９タンパク質、１０６３０タンパク質、１２８４８タンパク質、１３８７５タンパク質、１４３９５タンパク質、１４６１８タンパク質、１７６９２タンパク質または５８８７４タンパク質のアンタゴニストは、例えば、２３２タンパク質、２０５９タンパク質、１０６３０タンパク質、１２８４８タンパク質、１３８７５タンパク質、１４３９５タンパク質、１４６１８タンパク質、１７６９２タンパク質または５８８７４タンパク質の、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４媒介性の活性を拮抗的に調節することによって、２３２タンパク質、２０５９タンパク質、１０６３０タンパク質、１２８４８タンパク質、１３８７５タンパク質、１４３９５タンパク質、１４６１８タンパク質、１７６９２タンパク質または５８８７４タンパク質の天然に存在する形態の活性の１以上を阻害し得る。従って、特定の生物学的効果は、機能が限定された改変体を用いる処置によって誘発され得る。１つの実施形態において、タンパク質の天然に存在する形態の生物学的活性のサブセットを有する改変体を用いる被験体の処置は、２３２タンパク質、２０５９タンパク質、１０６３０タンパク質、１２８４８タンパク質、１３８７５タンパク質、１４３９５タンパク質、１４６１８タンパク質、１７６９２タンパク質または５８８７４タンパク質の天然に存在する形態を用いた処置と比較して、被験体における副作用がより小さい。
【０２２８】
１つの実施形態において、２３２アゴニスト、２０５９アゴニスト、１０６３０アゴニスト、１２８４８アゴニスト、１３８７５アゴニスト、１４３９５アゴニスト、１４６１８アゴニスト、１７６９２アゴニストまたは５８８７４アゴニスト（模倣物）、あるいは２３２アンタゴニスト、２０５９アンタゴニスト、１０６３０アンタゴニスト、１２８４８アンタゴニスト、１３８７５アンタゴニスト、１４３９５アンタゴニスト、１４６１８アンタゴニスト、１７６９２アンタゴニストまたは５８８７４アンタゴニストのいずれかとして機能する、２３２タンパク質、２０５９タンパク質、１０６３０タンパク質、１２８４８タンパク質、１３８７５タンパク質、１４３９５タンパク質、１４６１８タンパク質、１７６９２タンパク質または５８８７４タンパク質の改変体は、２３２タンパク質、２０５９タンパク質、１０６３０タンパク質、１２８４８タンパク質、１３８７５タンパク質、１４３９５タンパク質、１４６１８タンパク質、１７６９２タンパク質または５８８７４タンパク質のアゴニスト活性またはアンタゴニスト活性について、２３２タンパク質、２０５９タンパク質、１０６３０タンパク質、１２８４８タンパク質、１３８７５タンパク質、１４３９５タンパク質、１４６１８タンパク質、１７６９２タンパク質または５８８７４タンパク質の変異体（例えば、短縮変異体）のコンビナトリアルライブラリーをスクリーニングすることによって、同定され得る。１つの実施形態において、２３２改変体、２０５９改変体、１０６３０改変体、１２８４８改変体、１３８７５改変体、１４３９５改変体、１４６１８改変体、１７６９２改変体または５８８７４改変体の多様なライブラリーは、核酸レベルでのコンビナトリアル変異誘発によって生成され、そして多様な遺伝子ライブラリーによってコードされる。２３２改変体、２０５９改変体、１０６３０改変体、１２８４８改変体、１３８７５改変体、１４３９５改変体、１４６１８改変体、１７６９２改変体または５８８７４改変体の多様なライブラリーは、例えば、合成オリゴヌクレオチドの混合物を遺伝子配列に酵素的に連結することによって生成され得、その結果、潜在的な２３２配列、２０５９配列、１０６３０配列、１２８４８配列、１３８７５配列、１４３９５配列、１４６１８配列、１７６９２配列または５８８７４配列の縮重セットは、個々のポリペプチドとしてか、あるいはその中に２３２配列、２０５９配列、１０６３０配列、１２８４８配列、１３８７５配列、１４３９５配列、１４６１８配列、１７６９２配列または５８８７４配列のセットを含むより大きい融合タンパク質のセットとして（例えば、ファージディスプレイについて）発現可能である。縮重オリゴヌクレオチド配列から潜在的な２３２改変体、２０５９改変体、１０６３０改変体、１２８４８改変体、１３８７５改変体、１４３９５改変体、１４６１８改変体、１７６９２改変体または５８８７４改変体のライブラリーを生成するために、種々の方法が使用され得る。縮重遺伝子配列の化学的合成は、自動化ＤＮＡ合成機において実施され得、次いで、この合成遺伝子は、適切な発現ベクター中に連結され得る。遺伝子の縮重セットの使用は、潜在的な２３２配列、２０５９配列、１０６３０配列、１２８４８配列、１３８７５配列、１４３９５配列、１４６１８配列、１７６９２配列または５８８７４配列の所望のセットをコードする全ての配列を１つの混合物中で準備することを可能にする。縮重オリゴヌクレオチドを合成するための方法は、当該分野で公知である（例えば、Ｎａｒａｎｇ、Ｓ．Ａ．（１９８３）Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ ３９：３；Ｉｔａｋｕｒａら、（１９８４）Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．５３：３２３；Ｉｔａｋｕｒａら、（１９８４）Ｓｃｉｅｎｃｅ １９８：１０５６；Ｉｋｅら、（１９８３）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｒｅｓ．１１：４７７を参照のこと）。
【０２２９】
さらに、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４のタンパク質コード配列のフラグメントのライブラリーは、２３２タンパク質、２０５９タンパク質、１０６３０タンパク質、１２８４８タンパク質、１３８７５タンパク質、１４３９５タンパク質、１４６１８タンパク質、１７６９２タンパク質または５８８７４タンパク質の改変体のスクリーニングおよび引き続く選択のために、２３２フラグメント、２０５９フラグメント、１０６３０フラグメント、１２８４８フラグメント、１３８７５フラグメント、１４３９５フラグメント、１４６１８フラグメント、１７６９２フラグメントまたは５８８７４フラグメントの多様な集団を生成するために使用され得る。１つの実施形態において、コード配列フラグメントのライブラリーは、２３２コード配列、２０５９コード配列、１０６３０コード配列、１２８４８コード配列、１３８７５コード配列、１４３９５コード配列、１４６１８コード配列、１７６９２コード配列または５８８７４コード配列の二本差ＰＣＲフラグメントを、ニック形成が１分子当たりほぼ１回だけ生じるような条件下でヌクレアーゼで処理し、二重鎖ＤＮＡを変性し、異なるニック形成産物由来のセンス／アンチセンス対を含み得る二重鎖ＤＮＡを形成するためにＤＮＡを再生し、Ｓ１ヌクレアーゼでの処理によって、再形成された二重鎖から一本鎖部分を除去し、そして得られたフラグメントライブラリーを発現ベクター中に連結することによって、生成され得る。この方法によって、種々のサイズの２３２タンパク質、２０５９タンパク質、１０６３０タンパク質、１２８４８タンパク質、１３８７５タンパク質、１４３９５タンパク質、１４６１８タンパク質、１７６９２タンパク質または５８８７４タンパク質のＮ末端フラグメント、Ｃ末端フラグメントおよび内部フラグメントをコードする、発現ライブラリーが誘導され得る。
【０２３０】
点変異または短縮によって作成されたコンビナトリアルライブラリーの遺伝子産物をスクリーニングするためのいくつかの技術、および選択された特性を有する遺伝子産物についてのｃＤＮＡライブラリーをスクリーニングするためのいくつかの技術が、当該分野で公知である。このような技術は、２３２タンパク質、２０５９タンパク質、１０６３０タンパク質、１２８４８タンパク質、１３８７５タンパク質、１４３９５タンパク質、１４６１８タンパク質、１７６９２タンパク質または５８８７４タンパク質のコンビナトリアル変異誘発によって生成された遺伝子ライブラリーの迅速なスクリーニングのために適合可能である。大きい遺伝子ライブラリーをスクリーニングするための高スループットの分析に使用されやすい、最も広く使用される技術は、代表的に、遺伝子ライブラリーを複製可能な発現ベクター中にクローニングする工程、ベクターの得られたライブラリーで適切な細胞を形質転換する工程、および所望の活性の検出が、産物が検出された遺伝子をコードするベクターの単離を容易にする条件下でコンビナトリアル遺伝子を発現する工程を包含する。再帰的アンサンブル変異誘発（ｒｅｃｕｒｓｉｖｅ ｅｎｓｅｍｂｌｅ ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ （ＲＥＭ））（これは、ライブラリー中の機能的変異体の頻度を増強する新たな技術である）は、２３２改変体、２０５９改変体、１０６３０改変体、１２８４８改変体、１３８７５改変体、１４３９５改変体、１４６１８改変体、１７６９２改変体または５８８７４改変体を同定するためのスクリーニングアッセイと組み合わせて使用され得る（ＡｒｋｉｎおよびＹｏｕｒｖａｎ（１９９２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：７８１１−７８１５；Ｄｅｌｇｒａｖｅら、（１９９３）Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ６（３）：３２７−３３１）。
【０２３１】
本発明の方法はさらに、抗２３２抗体、抗２０５９抗体、抗１０６３０抗体、抗１２８４８抗体、抗１３８７５抗体、抗１４３９５抗体、抗１４６１８抗体、抗１７６９２抗体または抗５８８７４抗体の使用を包含する。単離された２３２タンパク質、２０５９タンパク質、１０６３０タンパク質、１２８４８タンパク質、１３８７５タンパク質、１４３９５タンパク質、１４６１８タンパク質、１７６９２タンパク質または５８８７４タンパク質、またはその部分もしくはそのフラグメントは、ポリクローナル抗体およびモノクローナル抗体調製のための標準的技術を用いて、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４と結合する抗体を生成するための免疫原として使用され得る。全長２３２タンパク質、２０５９タンパク質、１０６３０タンパク質、１２８４８タンパク質、１３８７５タンパク質、１４３９５タンパク質、１４６１８タンパク質、１７６９２タンパク質または５８８７４タンパク質が使用され得るか、または、代わりに２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４の抗原性ペプチドフラグメントが、免疫原として使用され得る。２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４の抗原性ペプチドは、配列番号３，６，９に示されるアミノ酸配列の少なくとも８つのアミノ酸残基を含み、そしてそのペプチドに対して励起される抗体が、２３２タンパク質、２０５９タンパク質、１０６３０タンパク質、１２８４８タンパク質、１３８７５タンパク質、１４３９５タンパク質、１４６１８タンパク質、１７６９２タンパク質または５８８７４タンパク質と特異的免疫複合体を形成するように２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４のエピトープを含む。好ましくは、その抗原ペプチドは、少なくとも１０個のアミノ酸残基を包含し、より好ましくは、少なくとも１５個のアミノ酸残基を包含し、よりさらに好ましくは、少なくとも２０個のアミノ酸残基を包含し、そして、最も好ましくは、少なくとも３０個のアミノ酸残基を包含する。
【０２３２】
抗原性ペプチドによって含まれる好ましいエピトープは、タンパク質の表面（例えば、親水性領域、および高い免疫原性を有する領域）に位置する２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４の領域である。
【０２３３】
２３２免疫原、２０５９免疫原、１０６３０免疫原、１２８４８免疫原、１３８７５免疫原、１４３９５免疫原、１４６１８免疫原、１７６９２免疫原または５８８７４免疫原は、代表的には、適切な被験体（例えば、ウサギ、ヤギ、マウス、または他の哺乳動物）をその免疫原で免疫することによって抗体を調製するために使用される。適切な免疫原性製調製物は、例えば、組み換え法で発現される２３２タンパク質、２０５９タンパク質、１０６３０タンパク質、１２８４８タンパク質、１３８７５タンパク質、１４３９５タンパク質、１４６１８タンパク質、１７６９２タンパク質または５８８７４タンパク質または化学合成２３２ポリペプチド、２０５９ポリペプチド、１０６３０ポリペプチド、１２８４８ポリペプチド、１３８７５ポリペプチド、１４３９５ポリペプチド、１４６１８ポリペプチド、１７６９２ポリペプチドまたは５８８７４ポリペプチドを包含し得る。調製物はさらに、フロインドの完全アジュバントまたは不完全アジュバント、または同様な免疫刺激性試薬のようなアジュバントを包含し得る。適切な被験体を、免疫原性２３２調製物、２０５９調製物、１０６３０調製物、１２８４８調製物、１３８７５調製物、１４３９５調製物、１４６１８調製物、１７６９２調製物または５８８７４調製物で免疫することによって、ポリクローナル抗２３２抗体反応、ポリクローナル抗２０５９抗体反応、ポリクローナル抗１０６３０抗体反応、ポリクローナル抗１２８４８抗体反応、ポリクローナル抗１３８７５抗体反応、ポリクローナル抗１４３９５抗体反応、ポリクローナル抗１４６１８抗体反応、ポリクローナル抗１７６９２抗体反応またはポリクローナル抗５８８７４抗体反応が誘導される。
【０２３４】
本明細書中で使用される用語「抗体」は、免疫グロブリン分子および免疫グロブリン分子の免疫的に活性部位（例えば、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４のような抗原と特異的に結合する（免疫反応する）抗原結合部位を包含する分子）をいう。免疫グロブリン分子の免疫学的に活性な部位の例は、（例えば、ペプシンのような）酵素で、抗体を処理することによって生成され得るＦ（ａｂ）フラグメントおよびＦ（ａｂ’）２フラグメントを包含する。本発明は、２３２分子、２０５９分子、１０６３０分子、１２８４８分子、１３８７５分子、１４３９５分子、１４６１８分子、１７６９２分子または５８８７４分子と結合するポリクローナル抗体およびモノクローナル抗体を提供する。本明細書中で使用される場合、用語「モノクローナル抗体」または「モノクローナル抗体組成物」は、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４の特定エピトープと免疫反応することができる抗原結合部位の１つの種のみを含む抗体分子の集団をいう。従って、モノクローナル抗体組成物は、代表的には、それが免疫反応する特定の２３２タンパク質、２０５９タンパク質、１０６３０タンパク質、１２８４８タンパク質、１３８７５タンパク質、１４３９５タンパク質、１４６１８タンパク質、１７６９２タンパク質または５８８７４タンパク質に対して単一結合親和性を示す。
【０２３５】
ポリクローナル抗２３２抗体、ポリクローナル抗２０５９抗体、ポリクローナル抗１０６３０抗体、ポリクローナル抗１２８４８抗体、ポリクローナル抗１３８７５抗体、ポリクローナル抗１４３９５抗体、ポリクローナル抗１４６１８抗体、ポリクローナル抗１７６９２抗体またはポリクローナル抗５８８７４抗体は、上記に記載のように、適切な被験体を、２３２免疫原、２０５９免疫原、１０６３０免疫原、１２８４８免疫原、１３８７５免疫原、１４３９５免疫原、１４６１８免疫原、１７６９２免疫原または５８８７４免疫原で免疫することによって、調製され得る。免疫される被験体中における抗２３２抗体力価、抗２０５９抗体力価、抗１０６３０抗体力価、抗１２８４８抗体力価、抗１３８７５抗体力価、抗１４３９５抗体力価、抗１４６１８抗体力価、抗１７６９２抗体力価または抗５８８７４抗体力価は、標準的技術（例えば、免疫化２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４を用いる、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ））のような）によって経時的にモニターされ得る。所望であれば、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４に対して励起された抗体分子は、（例えば、血液から）哺乳動物から単離され得、さらに、ＩｇＧ画分を得るための、ｐｒｏｔｅｉｎ Ａ クロマトグラフィーのような、周知の技術によって精製され得る。免疫後の適切な時間で、例えば、抗２３２抗体力価、抗２０５９抗体力価、抗１０６３０抗体力価、抗１２８４８抗体力価、抗１３８７５抗体力価、抗１４３９５抗体力価、抗１４６１８抗体力価、抗１７６９２抗体力価または抗５８８７４抗体力価が最高のときに、抗体産生細胞は、被験体から得られ得、そして例えば、ＫｏｈｌｅｒおよびＭｉｌｓｔｅｉｎ（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ２５６；４９５−４９７に初めに記載されるハイブリドーマ技術のような標準的技術によって、モノクローナル抗体を調製するために使用され得る（Ｂｒｏｗｎら（１９８１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２７；５３９−４６；Ｂｒｏｗｎら（１９８０）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５５：４９８０−８３；Ｙｅｈら（１９７６）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７６：２９２７−３１；およびＹｅｈら（１９８２）Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ ２９：２６９−７５），より最近のヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術（Ｋｏｚｂｏｒら（１９８３）Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｔｏｄａｙ ４：７２），ＥＢＶハイブリドーマ技術（Ｃｏｌｅら（１９８５）Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ、Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．，７７−９６頁）またはトリオーマ技術もまた参照のこと）。モノクローナル抗体ハイブリドーマを産生するための技術は周知である（一般的に、Ｋｅｎｎｅｔｈ，Ｒ．Ｈ．ｉｎ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｎｅｗ Ｄｉｍｅｎｓｉｏｎ Ｉｎ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ａｎａｌｙｓｅｓ，Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｒｐ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８０）；Ｌｅｒｎｅｒ，Ｅ．Ａ．（１９８１）Ｙａｌｅ Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｍｅｄ．５４：３８７−４０２；Ｇｅｆｔｅｒ，Ｍ．Ｌ．ら（１９７７）Ｓｏｍａｔｉｃ Ｃｅｌｌ Ｇｅｎｔ．３：２３１−３６を参照のこと）。要するに、不死化細胞株（代表的には骨髄腫細胞）が、上記に記載のように、２３２免疫原、２０５９免疫原、１０６３０免疫原、１２８４８免疫原、１３８７５免疫原、１４３９５免疫原、１４６１８免疫原、１７６９２免疫原または５８８７４免疫原で免疫される哺乳動物からのリンパ球（代表的には脾臓細胞）と融合され、そして得られるハイブリドーマ細胞の培養上清は、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４と結合するモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマを同定するために、スクリーニングされる。
【０２３６】
リンパ球と不死化細胞株とを融合するために使用される任意の多くの周知のプロトコルが、抗２３２モノクローナル抗体、抗２０５９モノクローナル抗体、抗１０６３０モノクローナル抗体、抗１２８４８モノクローナル抗体、抗１３８７５モノクローナル抗体、抗１４３９５モノクローナル抗体、抗１４６１８モノクローナル抗体、抗１７６９２モノクローナル抗体または抗５８８７４抗モノクローナル抗体を生成する目的で使用され得る（例えば、Ｇ．Ｇａｌｆｒｅら（１９７７）Ｎａｔｕｒｅ ２６６：５５０５２；Ｇｅｆｔｅｒら（１９７７）前述；Ｌｅｒｎｅｒ（１９８１）前述；およびＫｅｎｎｅｔｈ（１９８０）前述を参照のこと）。さらに、当業者は、これもまた有用であるような方法の多くのバリエーションがあることを認識する。代表的には、不死化細胞株（例えば、骨髄腫細胞）は、リンパ求と同じ哺乳動物種に由来する。例えば、マウスハイブリドーマは、本発明の免疫原性調製物で免疫されたマウスからのリンパ球と、不死化マウス細胞株とを融合することによって作製され得る。好ましい不死化細胞株は、ヒポキサンチン、アミノプテリンおよびチミジン（を含む培養培地「ＨＡＴ培地］）に感受性であるマウス骨髄細胞株である。任意の多くの骨髄細胞株（例えば、Ｐ３−ＮＳ１／１−Ａｇ４−１，Ｐ３−ｘ６３−Ａｇ８．６５３またはＳｐ２／Ｏ−Ａｇ１４骨髄細胞株）は、標準的技術（に従って、融合パートナーとして使用され得る。このような骨髄細部株は、ＡＴＣＣから入手可能である。代表的に、ＨＡＴ感受性マウス骨髄細胞は、ポリエチレングリコール（「ＰＥＧ」）を用いて、マウス脾臓細胞と融合される。その融合から生じるハイブリドーマ細胞は、次にＨＡＴ培地を用いて選択され、その培地は、融合されない骨髄腫細胞および非増殖的に融合した骨髄細胞を殺す（融合しなかった脾臓細胞は、形質転換されていないので、数日後に死ぬ）。本発明のモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ細胞は、（例えば、標準的なＥＬＩＳＡアッセイを用いて）２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４と結合する抗体のハイブリドーマ培養上清をスクリーニングすることによって、検出される。
【０２３７】
モノクローナル抗体分泌ハイブリドーマを調製する代わりに、抗２３２モノクローナル抗体、抗２０５９モノクローナル抗体、抗１０６３０モノクローナル抗体、抗１２８４８モノクローナル抗体、抗１３８７５モノクローナル抗体、抗１４３９５モノクローナル抗体、抗１４６１８モノクローナル抗体、抗１７６９２モノクローナル抗体または抗５８８７４抗モノクローナル抗体は、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４を用いて組み換えコンビナトリアル免疫グロブリンライブラリー（例えば、抗体ファージディスプレイライブラリー）をスクリーニングすることによって、同定および単離され得、それによって２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４と結合する免疫グロブリンライブラリーメンバーを単離する。ファージディスプレイライブラリーを生成およびスクリーニングするためのキットは、市販されている（例えば、Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ Ｐｈａｇｅ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｓｙｓｔｅｍ，カタログ番号２７−９４００−０１；およびＳｔｒａｔａｇｅｎｅ ＳｕｒｆＺＡＰ（登録商標）Ｐｈａｇｅ Ｄｉｓｐｌａｙ Ｋｉｔ，カタログ番号２４０６１２）。さらに、抗体ディスプレイライブラリーを生成およびスクリーニングする使用のために特に適した方法および試薬の例は、例えば、Ｌａｄｎｅｒら、米国特許第５，２２３，４０９号；Ｋａｎｇら、ＰＣＴ国際公開番号ＷＯ９２／１８６１９；ＤｏｗｅｒらＰＣＴ国際公開番号ＷＯ９１／１７２７１；ＷｎｔｅｒらＰＣＴ国際公開番号ＷＯ９２／２０７９１；ＭａｒｋｌａｎｄらＰＣＴ国際公開番号ＷＯ９２／１５６７９；ＢｒｅｉｔｌｉｎｇらＰＣＴ国際公開番号ＷＯ９３／０１２８８；ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら，ＰＣＴ国際公開番号ＷＯ９２／０１０４７；ＧａｒｒａｒｄらＰＣＴ国際公開番号ＷＯ９２／０９６９０；ＬａｄｎｅｒらＰＣＴ国際公開番号ＷＯ９０／０２８０９；Ｆｕｃｈｓら（１９９１）Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ９：１３７０−１３７２；Ｈａｙら（１９９２）Ｈｕｍ．Ａｎｔｉｂｏｄ．Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ ３：８１−８５；Ｈｕｓｅら（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４６：１２７５−１２８１；Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓら（１９９３）ＥＭＢＯ Ｊ １２：７２５−７３４；Ｈａｗｋｉｎｓら（１９９２）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２６：８８９−８９６；Ｃｌａｒｋｓｏｎら（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ ３５２：６２４−６２８；Ｇｒａｍら（１９９２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：３５７６−３５８０；Ｇａｒｒａｄら（１９９１）Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ９：１３７３−１３７７；Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍら（１９９１）Ｎｕｃ．Ａｃｉｄ Ｒｅｓ．１９：４１３３−４１３７；Ｂａｒｂａｓら（１９９１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８８：７９７８−７９８２；およびＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら（１９９０）Ｎａｔｕｒｅ ３４８：５５２−５５４）において見られ得る。
【０２３８】
さらに、キメラ抗体およびヒト化モノクローナル抗体のような、ヒト部分および非ヒト部分の両方を包含し、標準的な組み換えＤＮＡ技術を用いて作製され得る、組み換え抗２３２抗体、抗２０５９抗体、抗１０６３０抗体、抗１２８４８抗体、抗１３８７５抗体、抗１４３９５抗体、抗１４６１８抗体、抗１７６９２抗体または抗５８８７４抗体は、本発明の方法の範囲内である。そのようなキメラ抗体およびヒト化モノクローナル抗体は、当該分野で公知の組み換えＤＮＡ技術、例えば、Ｒｏｂｉｎｓｏｎら、国際出願番号ＰＣＴ／ＵＳ８６／０２２６９；Ａｋｉｒａら、欧州特許出願第１８４，１８７号；Ｔａｎｉｇｕｃｈｉ，Ｍ．，欧州特許出願第１７１，４９６号；Ｍｏｒｒｉｓｏｎら，欧州特許出願第１７３，４９４号；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒら，ＰＣＴ国際公開番号ＷＯ８６／０１５３３；Ｃａｂｉｌｌｙら，米国特許第４，８１６，５６７号；Ｃａｂｉｌｌｙら，欧州特許出願第１２５，０２３号；Ｂｅｔｔｅｒら（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４０：１０４１−１０４３；Ｌｉｕら（１９８７）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８４：３４３９−３４４３；Ｌｉｕら（１９８７）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３９：３５２１−３５２６；Ｓｕｎら（１９８７）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８４：２１４−２１８；Ｎｉｓｈｉｍｕｒａら（１９８７）Ｃａｎｃ．Ｒｅｓ．４７：９９９−１００５；Ｗｏｏｄら（１９８５）Ｎａｔｕｒｅ ３１４：４４６−４４９；Ｓｈａｗら（１９８８）Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ．８０：１５５３−１５５９；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｓ．Ｌ．（１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２９：１２０２−１２０７；Ｏｉら（１９８６）ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ４：２１４；Ｗｉｎｔｅｒ米国特許第５，２２５，３３９号；Ｊｏｈｎｅｓら（１９８６）Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５５２−５２５；Ｖｅｒｈｏｅｙａｎら（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３９：１５３４；およびＢｅｉｄｌｅｒら（１９８８）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４１：４０５３−４０６０に記載される方法を用いて産生され得る。
【０２３９】
抗２３２抗体、抗２０５９抗体、抗１０６３０抗体、抗１２８４８抗体、抗１３８７５抗体、抗１４３９５抗体、抗１４６１８抗体、抗１７６９２抗体または抗５８８７４抗体は、２３２タンパク質、２０５９タンパク質、１０６３０タンパク質、１２８４８タンパク質、１３８７５タンパク質、１４３９５タンパク質、１４６１８タンパク質、１７６９２タンパク質または５８８７４タンパク質の存在量および発現パターンを評価するために、（例えば、細胞溶解物または細胞上清中の）２３２タンパク質、２０５９タンパク質、１０６３０タンパク質、１２８４８タンパク質、１３８７５タンパク質、１４３９５タンパク質、１４６１８タンパク質、１７６９２タンパク質または５８８７４タンパク質を検出するために使用され得る。抗２３２抗体、抗２０５９抗体、抗１０６３０抗体、抗１２８４８抗体、抗１３８７５抗体、抗１４３９５抗体、抗１４６１８抗体、抗１７６９２抗体または抗５８８７４抗体は、臨床試験手順（例えば、所定の処置レジメンの効率を決定するために）の一部として、組織におけるタンパク質のレベルをモニタリングするために診断的に使用され得る。検出は、検出可能な物質に抗体を結合させる（すなわち、物理的連結）ことによって促進され得る。検出可能な物質の例としては、種々の酵素、補欠分子族、蛍光物質、発光物質、生物発光物質、および放射性物質が挙げられる。適切な酵素の例としては、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、□−ガラクトシダーゼまたはアセチルコリンエステラーゼが挙げられ；適切な補欠分子団複合体の例としては、ストレプトアビジン／ビオチンおよびアビジン／ビオチンが挙げられ；適切な蛍光物質の例としては、ウンベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミンフルオレセイン、ダンシルクロリドまたはフィコエリトリンが挙げられ；発光物質の例としては、ルミノールが挙げられ；生物発光物質の例としては、ルシフェラーゼ、ルシフェリンおよびエクオリンが挙げられ；そして適切な放射活物質の例としては、１２５Ｉ、１３１Ｉ、３５Ｓまたは３Ｈが挙げられる。
【０２４０】
本発明はさらに、限定と解釈されるべきではない以下の実施例によって例示される。本願、ならびに図面および配列表を通して引用される全ての参考文献、特許および公開された特許出願の内容は、本明細書中に参考として援用される。
【実施例】
【０２４１】
（実施例１ ＴａｑＭａｎＴＭ分析を用いた組織の分布）
本実施例は、ＴａｑＭａｎＴＭ手順を記載する。ＴａｑｍａｎＴＭ手順は、ｍＲＮＡを検出するための、定量的な逆転写ＰＣＲベースのアプローチである。このＲＴ−ＰＣＲ反応は、ＰＣＲの間に、ＴａｑＭａｎＴＭプローブを切断するために、ＡｍｐｌｉＴａｑ ＧｏｌｄＴＭ ＤＮＡポリメラーゼの５’ヌクレアーゼ活性を活用する。簡単に言えば、ｃＤＮＡを目的のサンプル（例えば、心臓、腎臓、肝臓、骨格筋、および種々の管）から生成し、そしてＰＣＲ増幅のための出発物質として使用した。５’遺伝子特異的プライマーおよび３’遺伝子特異的プライマーに加えて、遺伝子特異的オリゴヌクレオチドプローブ（増幅されている領域に相補的である）を、この反応物（すなわち、ＴａｑｍａｎＴＭプローブ）に含めた。ＴａｑｍａｎＴＭプローブは、プローブの５’末端に共有結合した蛍光レポーター色素（例えば、ＦＡＭ（６−カルボキシフルオレセイン）、ＴＥＴ（６−カルボキシ−４，７，２’，７’−テトラクロロフルオレセイン）、ＪＯＥ（６−カルボキシ−４，５−ジクロロ−２，７−ジメトキシフルオレセイン）、もしくはＶＩＣ）、およびこのプローブの３’末端にクエンチャー色素（ＴＡＭＲＡ（６−カルボキシ−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルローダミン）を有するオリゴヌクレオチドを含む。
【０２４２】
ＰＣＲ反応の間、プローブの切断は、レポーター色素とクエンチャー色素とを分離し、結果としてレポーターの蛍光を増強する。ＰＣＲ産物の蓄積を、レポーター色素の蛍光増強をモニタリングすることによって直接検出する。プローブがインタクトな場合、クエンチャー色素に対してレポーター色素の近位にレポーター蛍光の抑制が生じる。ＰＣＲの間、目的の標的が存在する場合、このプローブは順方向プライマーと逆方向プライマーとの間の部位に特異的にアニールする。ＡｍｐｌｉＴａｑＴＭＧｏｌｄ ＤＮＡポリメラーゼの５’−３’ヌクレオチド分解性（ｎｕｃｌｅｏｌｙｔｉｃ）活性は、プローブが標的にハイブリダイズする場合のみ、レポーターとクエンチャーとの間でプローブを切断する。次いで、プローブフラグメントを、標的と置換し、そして鎖の重合を続ける。ＰＣＲの間、プローブの伸長を防ぐように、このプローブの３’末端をブロックする。このプロセスは全てのサイクルで生じ、そして産物の指数関数的な蓄積を妨害しない。ＲＮＡを、トリゾール方法を使用して調製し、そして汚染したゲノムＤＮＡを除去するためにＤＮａｓｅで処理した。標準的な方法を使用してｃＤＮＡを合成した。逆転写酵素の非存在下において、コントロール遺伝子の検出可能なＰＣＲ増幅を有さないサンプルに生じるＭｏｃｋ ｃＤＮＡ合成により、ゲノムＤＮＡ汚染の効率的な除去が確証される。
（等価物）
当業者は、本明細書中に記載される本発明の特定の実施形態の多くの等価物を認識するか、または慣用的にすぎない実験法を使用してこれらの等価物を確認し得る。このような等価物は、添付の特許請求の範囲に含まれるべきであることが意図される。

Claims (13)

  1. 血液障害を処置し得る化合物を同定するための方法であって、該方法は、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４の核酸発現あるいは２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４のペプチド活性を調節する化合物の能力をアッセイし、それによって、血液障害を処置し得る化合物を同定する工程を包含する、方法。
  2. 造血を調節し得る化合物を同定する方法であって、該方法は、以下の工程：
    ａ）２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４を発現する細胞と、試験化合物とを接触させる工程；および
    ｂ）２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４の核酸発現あるいは２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４のポリペプチド活性を調節する該試験化合物の能力を評価し、それによって、造血を調節し得る化合物を同定する工程、
    を包含する、方法。
  3. 細胞における造血を調節するための方法であって、細胞と、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４のモジュレーターとを接触させ、それによって、細胞における造血を調節する工程を包含する、方法。
  4. 前記細胞が、造血細胞である、請求項２に記載の方法。
  5. 前記２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４のモジュレーターが、有機低分子、ペプチド、抗体またアンチセンス核酸分子である、請求項３に記載の方法。
  6. 前記２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４のモジュレーターが、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４のポリペプチド活性を調節し得る、請求項３に記載の方法。
  7. 前記２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４のモジュレーターが、有機低分子、ペプチド、抗体またアンチセンス核酸分子である、請求項６に記載の方法。
  8. 前記２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４のモジュレーターが、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４の核酸発現を調節し得る、請求項６に記載の方法。
  9. 異常な２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４のポリペプチド活性、あるいは異常な２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４の核酸発現によって特徴付けられる血液障害を有する被験体を処置するための方法であって、該方法は、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４のモジュレーターを該被験体に投与し、それによって、血液障害を有する該被験体を処置する工程を包含する、方法。
  10. 請求項９に記載の方法であって、前記血液障害は、癌に対する骨髄照射または化学療法処置に起因する障害、悪性貧血、出血性貧血、溶血性貧血、再生不良性貧血、鎌状赤血球貧血、鉄芽球性貧血、慢性感染（例えば、マラリア）、トリパノソーマ症、ＨＩＶ、肝炎ウイルスまたは他のウイルスに関連する貧血、骨髄欠損よって引き起こされる骨髄ろう性貧血、貧血に起因する腎不全、貧血、赤血球増加症、伝染性単核球症（ＩＭ）、急性非リンパ球性白血病（ＡＮＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性前骨髄球性白血病（ＡＰＬ）、急性髄単球性白血病（ＡＭＭｏＬ）、真性赤血球増加症、リンパ腫、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ球性白血病、ウィルムス腫瘍、ユーイング肉腫、網膜芽細胞腫、血友病、血栓症の危険性の増大に関連した障害、疱疹、サラセミア、輸血反応および赤芽球症のような抗体媒介障害、赤血球に対する機械的外傷（例えば、細血管異常性溶血性貧血、血栓性血小板減少性紫斑病および汎発性血管内凝固症候群）、寄生生物（例えば、プラスモディウム属）による感染、例えば鉛中毒による化学的損傷、および脾機能亢進症からなる群より選択される、方法。
  11. 前記２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４のモジュレーターが薬学的に受容可能な処方物において投与される、請求項９に記載の方法。
  12. 前記２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４のモジュレーターが、有機低分子、ペプチド、抗体またアンチセンス核酸分子である、請求項９に記載の方法。
  13. 前記２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４のモジュレーターが、２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４のポリペプチド活性を調節し得る、請求項９に記載の方法。
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US20060078947A1 (en) Methods and compositions for treating hematological disorders using 9118, 990, 17662, 81982, 630, 21472, 17692, 19290, 21620, 21689, 28899, 53659, 64549, 9465, 23544, 7366, 27417, 57259, 21844, 943, 2061, 5891, 9137, 13908, 14310, 17600, 25584, 27824, 28469, 38947, 53003, 965, 56639, 9661, 16052, 1521, 6662, 13913, 12405 or 5014
US20060100152A1 (en) Methods and compositions in treating pain and painful disorders using 9949, 14230, 760, 62553, 12216, 17719, 41897, 47174, 33408, 10002, 16209, 314, 636, 27410, 33260, 619, 15985, 69112, 2158, 224, 615, 44373, 95431, 22245, 2387, 16658, 55054, 16314, 1613, 1675, 9569 or 13424 molecules
US7250262B2 (en) Methods for identifying compounds which modulate hematopoiests
US20060088881A1 (en) Methods and compositions for treating urological disorders using 1435, 559, 34021, 44099, 25278, 641, 260, 55089, 21407, 42032, 46656, 62553, 302, 323, 12303, 985, 13237, 13601, 18926, 318, 2058 or 6351 molecules
US20040180332A1 (en) Methods and compositions for treating aids and HIV-related disorders using 9145, 1725, 311, 837, 58305, 156, 14175, 50352, 32678, 5560, 7240, 8865, 12396, 12397, 13644, 19938, 2077, 1735, 1786, 10220, 17822, 33945, 43748, 47161, 81982 or 46777
US20030134314A1 (en) Methods and compositions for treating hematological disorders using 252, 304, 1980, 14717, 9941, 19310 and 17832
JP2005508173A (ja) ２３２、２０５９、１０６３０、１２８４８、１３８７５、１４３９５、１４６１８、１７６９２または５８８７４を使用する血液障害を処置するための方法および組成物
US20030153525A1 (en) Methods and compositions in treating pain and painful disorders using 1465, 1587, 2146, 2207, 32838, 336 and 52908
JP2006519983A (ja) １６３８６、１５４０２、２１１６５、１４２３、６３６、１２３０３、２１４２５、２７４１０、３８５５４、３８５５５、５５０６３、５７１４５、５９９１４、９４９２１、１６８５２、３３２６０、５８５７３、３０９１１、８５９１３、１４３０３、１６８１６、１７８２７、または３２６２０を使用する、疼痛および疼痛障害を処置する方法および組成物
US20060099656A1 (en) Methods and compositions for treating hematological disorders using 232, 2059, 10630, 12848, 13875, 14395, 14618, 17692, 58874, 252, 304, 1980, 14717, 9941, 1941, 19310, or 17832
US20030152970A1 (en) Methods and compositions to treat pain and painful disorders using 577, 20739 or 57145
US20020151480A1 (en) Methods and compositions for treating cardiovascular disease using 10218
JP2005507673A (ja) １３９、２５８、１２６１、１４８６、２３９８、２４１４、７６６０、８５８７、１０１８３、１０５５０、１２６８０、１７９２１、３２２４８、６０４８９または９３８０４を用いる心血管疾患を治療するための方法および組成物
US20030104455A1 (en) Methods and compositions for treating urological disorders using 313, 333, 5464, 18817 or 33524

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