JP2005505588A - テトラサイクリン誘導体、及びそれを使用する方法 - Google Patents

テトラサイクリン誘導体、及びそれを使用する方法 Download PDF

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Abstract

１又はそれ以上のテトラサクイリン誘導体を効果的な量だけ治療を必要とする対象物に投与することからなる、微生物や腫瘍の成長を抑制するための治療方法が開示される。

Description

【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規なテトラサイクリン誘導体、該新規な誘導体の製造方法、及び該誘導体の使用方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
テトラサイクリンは次のような一般的な構造を示す。
【化１１】
Figure 2005505588
【０００３】
円環の番号付けは次の通りである。
【化１２】
Figure 2005505588
【０００４】
テトラサイクリンは、５−ＯＨ（テラマイシン）や７−Ｃｌ（オーレオマイシン）誘導体と同様に自然界に存在し、良く知られた抗生物質である。天然のテトラサイクリンは、抗生物質としての特質を失わずに改良されるかも知れない。基本的なテトラサイクリン・ストラクチャを構成するかもしないかも知れない変形は、Ｍｉｔｃｈｅｒにより、Ｔｈｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｔｅｔｒａｃｙｃｌｉｎｅｓ，６章、Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、ニューヨーク（１９７８）にて研究されてきた。Ｍｉｔｃｈｅｒによれば、テトラサイクリンの円環の５−９の位置で置換基は、抗生物質としての特質を失わずに改良されるかも知れない。しかしながら、基本的な円環に対する変更や、１−４や１０−１２の位置での置換基の入れ換えは、一般的には、抗菌力が全く無いか、実質的にほとんど無い合成のテトラサイクリンをもたらすこととなる。化学的に改質された非抗菌性（ｎｏｎ−ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ）のテトラサイクリン（ＣＭＴの後）の幾つかの例は、４−ｄｅｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏｔｅｔｒａｃｙｃｌｉｎｅ、４−ｄｅｄｉｍｅｔｈｙｌ−ａｍｉｎｏｓａｎｃｙｃｌｉｎｅ（６−ｄｅｍｅｔｈｙｌ−６−ｄｅｏｘｙ−４−ｄｅｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏｔｅｔｒａｃｙｃｌｉｎｅ），４−ｄｅｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏｍｉｎｏｃｙｃｌｉｎｅ（７−ｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏ−４−ｄｅｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏｔｅｔｒａｃｙｃｌｉｎｅ），そして、４−ｄｅｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏｄｏｘｙｃｙｃｌｉｎｅ（５−ｈｙｄｒｏｘｙ−６−ｄｅｏｘｙ−４−ｄｅｄｉｍｅｔｈｙａｍｉｎｏｔｅｔｒａｃｙｃｌｉｎｅ）である。
【０００５】
幾つかの４−ｄｅｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏｔｅｔｒａｃｙｃｌｉｎｅの誘導体は、米国特許第３，０２９，２８４号明細書や第５，１２２，５１９号明細書に開示されている。それらは、Ｄ環のＣ７やＣ９の位置に、水素を伴う６−ｄｅｍｅｔｈｙｌ−６−ｄｅｏｘｙ−４−ｄｅｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏｔｅｔｒａｃｙｃｌｉｎｅ及び５−ｈｙｄｒｏｘｙ−６−ｄｅｏｘｙ−４−ｄｅｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏｔｅｔｒａｃｙｃｌｉｎｅや、他の置換基を含んでいる。これらの置換基は、アミノや、ニトロや、ジ（低級アルキル）アミノや、モノ（低級アルキル）アミノ、又はハロゲンを含む。６−ｄｅｍｅｔｈｙｌ−６−ｄｅｏｘｙ−４−ｄｅｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏｔｅｔｒａｃｙｃｌｉｎｅ誘導体や５−ｈｙｄｒｏｘｙ−６−ｄｅｏｘｙ−４−ｄｅｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏｔｅｔｒａｃｙｃｌｉｎｅ誘導体は、抗菌剤として役に立つと言われている。
【０００６】
Ａ環のＣ４位置にオキシム基を伴う、他の４−ｄｅｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏｔｅｔｒａｃｙｃｌｉｎｅの誘導体は、米国特許第３，６２２，６２７号明細書や第３，８２４，２８５号明細書に開示されている。これらのオキシム誘導体は、Ｃ７位置に置換基としての水素やハロゲンを有し、７−ｈａｌｏ−６−ｄｅｍｅｔｈｙｌ−６−ｄｅｏｘｙ−４−ｄｅｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏ−４−ｏｘｉｍｉｎｏｔｅｔｒａｃｙｃｌｉｎｅや、７−ｈａｌｏ−５−ｈｙｄｒｏｘｙ−６−ｄｅｏｃｙ−４−ｄｅｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏ−４−ｏｘｉｍｉｎｏｔｅｔｒａｃｙｃｌｉｎｅを含んでいる。
【０００７】
アルキルアミノ基（ＮＨ−ａｌｋｙｌ）やアルキルヒドラゾン基（Ｎ−ＮＨ−ａｌｋｙｌ）は、４−ｄｅｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏｔｅｔｒａｃｙｃｌｉｎｅのＣ４位置でＡ環に置換される。これらの化合物はその抗菌特性で知られている。米国特許第３，３４５，３７０号、第３，６０９，１８８号、第３，６２２，６２７号、第３，５０２，６６０号、第３，５０９，１８４号、第３，５０２，６９６号、第３，５１５，７３１号、第３，２６５，７３２号、第５，１２２，５１９号、第３，８４９，４９３号、第３，７７２，３６３号、第３，８２９，４５３号を参照のこと。
【０００８】
テトラサイクリンは、その抗菌の特質に加え、多くの他の用途を持っていると述べられてきている。例えば、テトラサイクリンは、コラゲナーゼ（ＭＭＰ−１）やゼラチナーゼ（ＭＭＰ−２）やストロムライシン（ＭＭＰ−３）を含むマトリックス・メタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）のように、酵素を分解するコラーゲンの活動を抑制することが知られている。ゴルブ（Ｇｏｌｕｂ）ら、Ｊ．Ｐｅｒｉｏｄｏｎｔ．Ｒｅｓ．２０：１２−２３（１９８５）；ゴルブ（Ｇｏｌｕｂ）ら、Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖｓ．Ｏｒａｌ Ｂｉｏｌ．Ｍｅｄ．２：２９７−３２２（１９９１）；米国特許第４，６６６，８９７号、第４，７０４，３８３号、第４，９３５，４１１号、第４，９３５，４１２号。また、テトラサイクリンは、哺乳類骨格筋における消耗（ｗａｓｔｉｎｇ）や蛋白質分解を抑制すること（米国特許第５，０４５，５３８号）や、哺乳類細胞におけるＩＬ−１０の産生を増進することが知られてきている。
【０００９】
さらに、テトラサイクリンが骨の蛋白質合成を高めることはＵ．Ｓ．Ｐａｔ．Ｎｏ．Ｒｅ．３４，６５６に報告されており、器官培養における骨吸収を減少させることは米国特許第４，７０４，３８３号にて報告されている。
【００１０】
同様に、米国特許第５，５３２，２２７号は、ゴルブ（Ｇｏｌｕｂ）らに、テトラサイクリンは、蛋白質の過度のグリコシル化を軽減できることを開示している。特に、テトラサイクリンは、糖尿病での、コラーゲンのグリコシル化に起因するところの、過度のコラーゲンの架橋を抑制する。
【００１１】
テトラサイクリンは、米国特許第５，５３２，２２７号に開示されているように、乾癬のように、炎症状態に関わる、過度のホスホリパーゼＡ２活性を抑制することが知られている。加えて、テトラサイクリンが、シクロオキシゲナーゼ−（ＣＯＸ−２）や、腫瘍怪死因子（ＴＮＦ）や、一酸化窒素や、ＩＬ−１（インターロイキン−１）を抑制することが知られている。
【００１２】
これらの特質は、テトラサイクリンが多くの病気を治療するのに役立つように仕向けている。例えば、非抗菌性（ｎｏｎ−ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ）テトラサイクリンを含むテトラサイクリンが関節炎の治療に効果があるという提唱が数多くなされてきている。例えば、グリーンワルド（Ｇｒｅｅｎｗａｌｄ）ら、“アジュバント関節炎やＦｌｕｒｂｉｏｐｒｏｆｅｎにおける、テトラサイクリンの金属プロテアーゼの阻害活性、骨損傷の軽減”、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ １９：９２７−９３８（１９９２）；
グリーンワルド（Ｇｒｅｅｎｗａｌｄ）ら、“ＭＭＰ抑制剤での破壊的関節炎の治療；マトリックス・メタロプロテーゼの抑制におけるテトラサイクリンの潜在的役割：治療の可能性”ニューヨーク科学アカデミー年報、７３２：１８１−１９８（１９９４）；
クロッペンバーグ（Ｋｌｏｐｐｅｎｂｕｒｇ）ら、“慢性関節リウマチにおけるミノサイクリン”、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍ ３７：６２９−６３６（１９９４）；ライアンら、“変形性関節炎における軟骨破壊を改善するためのテトラサイクリンの可能性”Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ ８：２３８−２４７（１９９６）；Ｏ’Ｄｅｌｌら、“ミノサイクリンやプラセボによる早期関節リウマチの治療”、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍ ４０：８４２−８４８（１９９７）
【００１３】
テトラサイクリンは、皮膚病の治療への使用が提案されてきた。例えば、ホワイトら、Ｌａｎｃｅｔ，Ａｐｒ．２９，ｐ．９６６（１９８９）は、テトラサイクリン ミノサイクリンがジストロフィー型表皮水疱症（コラゲナーゼに関係があると信じられている、生命にかかわる皮膚の状態）の治療に効果があることを報告している。
【００１４】
さらに、テトラサイクリン及び金属プロテアーゼ・インヒビターが腫瘍の進行を抑制することや、抗炎症特性を持つことは、研究により示唆されてきている。
デクラーク（ＤｅＣｌｅｒｃｋ）ら、ニューヨーク科学アカデミー年報(Annals
of the New York Academy of Sciences)、７３２：２２２−２３２（１９９４）、骨吸収
リフキン（Ｒｉｆｋｉｎ）ら、ニューヨーク科学アカデミー年報(Annals
of the New York Academy of Sciences)、７３２：１６５−１８０（１９９４）、血管新生
マラゴウダキス（Ｍａｒａｇｏｕｄａｋｉｓ）ら、Ｂｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ、１１１：８９４−９０２（１９９４）
Ｒａｍａｍｕｒｔｈｙら、Ａｎｎａｌｓ Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，７３２，４２７−４３０（１９９４）
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１５】
前述に基づき、テトラサイクリンが数多くの病気に効果があることは見出されてきている。それ故、新しく、より役に立つ誘導体が必要とされている。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１６】
ここで開示される化合物は、抗細菌、及び／又は抗癌の活性を示すテトラサイクリンの誘導体である。
【００１７】
好ましい実施形態では、本発明は、細菌や腫瘍の成長を抑制する治療方法、つまり、
一般的な化学式、すなわち、
【化１３】
Figure 2005505588
からなるテトラサイクリン合成物又はその塩を効果的な量だけ、治療を必要とされる対象物に投与することからなる治療方法に関する。
Ｒは、ＣＨ２Ｎ（ＲａＲｂ）か、
【化１４】
Figure 2005505588
から選択される。
ＲａＲｂはＣ１〜Ｃ６のアルキル；
ＲＣ及びＲｄは（ＣＨ２）ｎＣＨＲｅ、ｎは０又は１、Ｒｅは、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６のアルキル、又はＮＨ２、そしてＸは、ＮＨ、Ｓ又はＣＨ２；
Ｒ１はＨ又はＯＨ；
Ｒ２はＨ、ＯＨ，＝Ｏ、又はＯＣＯＲ８、ここで、Ｒ８はＣ１〜Ｃ６のアルキル、
或いは、Ｒ２はＮ（Ｒ９）２、ここで、Ｒ９は水素、又はＣ１〜Ｃ６の低級アルキル、又は、
Ｒ２がケト（ｋｅｔｏ）又はＮ（Ｒ９）２のときに、Ｒ３及びＲ４はＨ又はＣＨ３であり、Ｒ３及びＲ４が共にＣＨ３又はＨでないという条件付きでＲ９ＣＯである。
５ａ水素はαかβである。
Ｒ３及びＲ４はＨ、ＣＨ３又はＦである。ただし、Ｒ３がＣＨ３のときＲ４はＨ又はＦであり、Ｒ４がＣＨ３のときＲ３はＨ又はＦであり、Ｒ４及びＲ５の両方がＦでないという条件が付く。
Ｒ５及びＲ７はハロゲン、Ｈ、ＮＯ２、Ｎ３、Ｎ２ ＋、Ｃ２Ｈ５ＯＣ（Ｓ）Ｓ−、ＣＮ、ＮＲ１０Ｒ１１である。ここで、Ｒ１０及びＲ１１はＨ、Ｃ１〜Ｃ１０のアルキル、及びＲ１２（ＣＨ２）ｎＣＯ−である。ここで、ｎは０〜５であり、Ｒ９はＨ、ＮＨ２、直鎖、分枝、又は環化されたＣ１〜Ｃ１０のアルキル基から選ばれたモノ又は二置換のアミノ。Ｒ１０及びＲ１１の両方がＲ１２（ＣＨ２）ｎＣＯ−でないという条件付きで。
Ｒ７は第３ブチル（ｔｅｒｔｉａｒｙ ｂｕｔｙｌ）とすることもできる。Ｒ６はハロゲン、アセチレン、Ｒ１３−Ｃ６Ｈ５である。ここで、Ｒ１３はＮＯ２、ハロゲン、アセチルアミノ、アミノ、フェニル、アルキル又はアルコキシである。
【００１８】
より好ましい実施形態において、本発明は、細菌や腫瘍の成長を抑制する治療方法、つまり、
一般的な化学式、すなわち、
【化１５】
Figure 2005505588
からなるテトラサイクリン合成物又はその塩を効果的な量だけ、治療を必要とされる対象物に投与することからなる治療方法に関する。
Ｒは、ＣＨ２Ｎ（ＲａＲｂ）か、
【化１６】
Figure 2005505588
から選択される。
ＲａＲｂはＣ１〜Ｃ６のアルキル；
ＲＣ及びＲｄは（ＣＨ２）ｎＣＨＲｅ、ｎは０又は１、Ｒｅは、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６のアルキル、又はＮＨ２、そしてＸは、ＮＨ、Ｓ又はＣＨ２
Ｒ１はＨ又はＯＨ；
Ｒ２はＨ又はＯＨ；
Ｒ３はＨ又はＣＨ３；
Ｒ４及びＲ６はハロゲン、Ｈ、ＮＯ２、Ｎ３、Ｎ２ ＋、Ｃ２Ｈ５ＯＣ（Ｓ）Ｓ−、ＣＮ、ＮＲ７Ｒ８である。ここで、Ｒ７及びＲ８はＨ、Ｃ１〜Ｃ１０のアルキル、及びＲ９（ＣＨ２）ｎＣＯ−である。ここで、ｎは０〜５であり、Ｒ９はＨ、ＮＨ２、直鎖、分枝、又は環化されたＣ１〜Ｃ１０のアルキル基から選ばれたモノ又は二置換のアミノ。Ｒ７及びＲ８の両方がＲ９（ＣＨ２）ｎＣＯ−でないという条件付きで。
Ｒ６はＨ、ハロゲン、アセチレン、Ｒ１０−Ｃ６Ｈ５である。ここで、Ｒ１０はＮＯ２、ハロゲン、アセチルアミノ、アミノ、フェニル、アルキル又はアルコキシである。
【００１９】
より好ましい実施形態において、本発明は、細菌や腫瘍の成長を抑制する治療方法、つまり、
一般的な化学式、すなわち、
【化１７】
Figure 2005505588
からなるテトラサイクリン合成物又はその塩を効果的な量だけ、治療を必要とされる対象物に投与することからなる治療方法に関する。
Ｒは、ＣＨ２Ｎ（ＲａＲｂ）か、
【化１８】
Figure 2005505588
から選択される。
ＲａＲｂはＣ１〜Ｃ６のアルキル；
ＲＣ及びＲｄは（ＣＨ２）ｎＣＨＲｅ、ｎは０又は１、Ｒｅは、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６のアルキル、又はＮＨ２、そしてＸは、ＮＨ、Ｓ又はＣＨ２
Ｒ１及びＲ２はＨ又はＮ（Ｒ９）２である。ここで、Ｒ１及びＲ２の両方がＮ（Ｒ９）２でないという条件付きで、Ｒ９はＨ、又はＣ１〜Ｃ６のアルキルである。Ｒ１及びＲ２はＮ（Ｒ１０）３Ｉでも良い。また、Ｒ１及びＲ２が共にＮ（Ｒ１０）３Ｉでないという条件付きでＲ１０がＣ１〜Ｃ６のアルキルである。
Ｒ３はＨである；
Ｒ４及びＲ５はＨ、ＣＨ３又はＦであり、Ｒ４がＣＨ３のときＲ５はＨ又はＦであり、Ｒ５がＣＨ３のときＲ４はＨ又はＦであり、Ｒ４及びＲ５の両方がＦでないという条件が付く。
Ｒ６及びＲ８はハロゲン、Ｈ、ＮＯ２、Ｎ３、Ｎ２ ＋、Ｃ２Ｈ５ＯＣ（Ｓ）Ｓ−、ＣＮ、ＮＲ１１Ｒ１２である。ここで、Ｒ１１及びＲ１２はＨ、Ｃ１〜Ｃ１０のアルキル、及びＲ１３（ＣＨ２）ｎＣＯ−である。ここで、ｎは０〜５であり、Ｒ１３はＨ、ＮＨ２、直鎖、分枝、又は環化されたＣ１〜Ｃ１０のアルキル基から選ばれたモノ又は二置換のアミノ。Ｒ１０及びＲ１１の両方がＲ１２（ＣＨ２）ｎＣＯ−でないという条件付きで。
Ｒ８は第３ブチル（ｔｅｒｔｉａｒｙ ｂｕｔｙｌ）でも良く、Ｒ７は水素かハロゲンである。
【００２０】
より好ましい実施形態において、本発明は、細菌や腫瘍の成長を抑制する治療方法、つまり、
一般的な化学式、すなわち、
【化１９】
Figure 2005505588
からなるテトラサイクリン合成物又はその塩を効果的な量だけ、治療を必要とされる対象物に投与することからなる治療方法に関する。
Ｒは、ＣＨ２Ｎ（ＲａＲｂ）か、
【化２０】
Figure 2005505588
から選択される。
ＲａＲｂはＣ１〜Ｃ６；
ＲＣ及びＲｄは（ＣＨ２）ｎＣＨＲｅ、ｎは０又は１、Ｒｅは、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６のアルキル、又はＮＨ２、そしてＸは、ＮＨ、Ｓ又はＣＨ２
Ｒ１及びＲ２はＨ又はＮ（Ｒ９）２である。ここで、Ｒ９は水素、又はＣ１〜Ｃ６の低級アルキルであり、Ｒ１及びＲ２の両方をＮ（Ｒ９）２にできないという条件が付く。
Ｒ３はＨ、ＯＨ，＝Ｏ、又はＯＣＯＲ１０、ここで、Ｒ１０はＣ１〜Ｃ６のアルキル、
或いは、Ｒ３はＮ（Ｒ９）２、ここで、Ｒ９は水素、又はＣ１〜Ｃ６、
Ｒ２３が＝Ｏ又はＮ（Ｒ９）２のとき、Ｒ４及びＲ５はＨ又はＣＨ３であり、Ｒ４及びＲ５が両方ＣＨ３又はＨでないという条件が付く。
５ａ水素はα又はβである。
Ｒ４及びＲ５はＨ、ＣＨ３又はＦである。この時、Ｒ４がＣＨ３のときＲ５はＨ又はＦであり、Ｒ５がＣＨ３のときＲ４はＨ又はＦであり、Ｒ４及びＲ５の両方がＦでないという条件が付く。
Ｒ６及びＲ８はハロゲン、Ｈ、ＮＯ２、Ｎ３、Ｎ２ ＋、Ｃ２Ｈ５ＯＣ（Ｓ）Ｓ−、ＣＮ、ＮＲ１０Ｒ１１である。ここで、Ｒ１０及びＲ１１はＨ、Ｃ１〜Ｃ１０のアルキル、及びＲ１２（ＣＨ２）ｎＣＯ−である。ここで、ｎは０〜５であり、Ｒ１２はＨ、ＮＨ２、直鎖、分枝、又は環化されたＣ１〜Ｃ１０の基から選ばれたモノ又は二置換のアミノ。Ｒ１０及びＲ１１の両方がＲ１２（ＣＨ２）ｎＣＯ−であるか、又はＲ８が第３ブチル（ｔｅｒｔｉａｒｙ ｂｕｔｙｌ）であるという条件付きで。
Ｒ７はＨ、ハロゲン、アセチレン、Ｒ１２−Ｃ６Ｈ５である。ここで、Ｒ１２はＮＯ２、ハロゲン、アセチルアミノ、アミノ、フェニル、アルキル又はアルコキシである。
【００２１】
より好ましい実施形態において、本発明は、細菌や腫瘍の成長を抑制する治療方法、つまり、
一般的な化学式、すなわち、
【化２１】
Figure 2005505588
からなるテトラサイクリン合成物又はその塩を効果的な量だけ、治療を必要とされる対象物に投与することからなる治療方法に関する。
ここで、Ｒ１はＨ又はＮ（ＣＨ３）２；Ｒ２はＨ、ＣＨ３、又はＯＣＯＣＨ３；Ｒ３はＨ又はＣＨ３；Ｒ４はＨ；Ｒ５はＨ、Ｎ（ＣＨ３）２、ＮＨ２、Ｎ（Ｃ４Ｈ９）２、Ｎ（Ｃ６Ｈ１３）２、Ｎ（３，３−ｄｉｍｅｔｈｙｌｂｕｔｙｌ）２、Ｎ３、Ｎ２ ＋、ＮＯ２、ＮＨＣＯＣＨ３、ＮＨ（ｎ−ｐｒｐｙｌ）２、ＮＨ−ｉｓｏｂｕｔｙｌ、ＮＨ−ｉｓｏｂｕｔｙｌｍｅｔｈｙｌ，ＮＨ（ｃｙｃｌｏｂｕｔｙｌ），ＮＨ（ｃｙｃｌｏｂｕｔｙｌ ｍｅｔｈｙｌ）；そして、Ｒ６はＨ，ＮＯ２，ＮＨ２，（ＣＨ３）２ＣＨＮＨ，Ｎ３，ＮＨＣＯＣＨ３，Ｎ２ ＋，Ｎ３，又は（ＣＨ３）３Ｃである。
【００２２】
より好ましい実施形態において、本発明は、細菌や腫瘍の成長を抑制する治療方法、つまり、
一般的な化学式、すなわち、
【化２２】
Figure 2005505588
からなるテトラサイクリン合成物又はその塩を効果的な量だけ、治療を必要とされる対象物に投与することからなる治療方法に関する。
ここで、Ｒ１はＨ又はＮ（ＣＨ３）２；Ｒ２はＨ、ＯＨ、又はＯＣＯＣＨ３；Ｒ３はＨ又はＣＨ３；Ｒ４はＨ；Ｒ５はＨ、Ｎ（ＣＨ３）２、Ｎ（Ｃ４Ｈ９）２、Ｎ（Ｃ６Ｈ１３）２、Ｎ（３，３−ｄｉｍｅｔｈｙｌｂｕｔｙｌ）２；Ｎ３，Ｎ２ ＋，ＮＯ２，ＮＨＣＯＣＨ３，ＮＨ（ｎ−ｐｒｏｐｙｌ）２，ＮＨ−ｉｓｏｂｕｔｙｌ，ＮＨ−ｉｓｏｂｕｔｙｌｍｅｔｈｙｌ，Ｎ（ＣＨ３ＣＯ）（ｉｓｏｂｕｔｙｌ），ＮＨ（ｃｙｃｌｏｂｕｔｙｌ），ＮＨ（ｃｙｃｌｏｂｕｔｙｌ ｍｅｔｈｙｌ），又はＮＨ２；そして、Ｒ６はＨ，ＮＯ２，ＮＨ２，（ＣＨ３）２ＣＨＮＨ，Ｎ３，ＮＨＣＯＣＨ３，Ｎ２ ＋，又は（ＣＨ３）３Ｃである。
【００２３】
本発明に従った種々の物質の製法を以下に述べる。
【００２４】
ＨＰＬＣ分析は、水（０．１％のＴＦＡを含む）と、溶離液としてのアセトニトリルとを用い、Ｗａｔｅｒｓの逆相Ｃ１８−ｓｙｍｍｅｔｒｙカラムで行った。
【００２５】
分析的なＬＣ／ＭＳは、シリーズ１１００ＭＳＤディテクターを装備したヒューレット・パッカード・シリーズ１１００ 液体クロマトグラフィ装置で行った。それは、流速が０．４ｍＬ／ｍｉｎで４．６×１００ｍｍのカラムを使用し、ＥＳイオン化モードと、２７０ｎｍのＵＶ検出を備えている。予備のＨＰＬＣは、流速が１５ｍＬ／ｍｉｎで１９×１５０ｍｍのカラムを使用し、２７０ｎｍのＵＶ検出を備えたギルソンのｓｅｒｉａｌ ＨＰＬＣで行った。１Ｈ ＮＭＲは Ｂｒｕｋｅｒ ３００ＭＨｚ 分光計で重水素化メタノール中で記録された。
９−ニトロ−ドキシサイクリン 硫酸塩
【００２６】
３０ｍＬの０℃の濃硫酸に塩酸ドキシサイクリン（１ｇ、２．０８ｍｏｌ）を攪拌した溶液に、硝酸カリウム（２５２ｍｇ、２．４９ｍｍｏｌ）が加えられた。生成された混合物が０℃で２０分間攪拌され、その後、攪拌しながら、１．２Ｌの冷たいエーテルの中に注入された。沈殿した固形物がフィルタにより抽出され、冷たいエーテルで洗浄され、真空下で乾燥された。そして、１．２２ｇのクリーム色の生成物が得られた。必要ならば、その生成物は、メタノールに溶かし、フィルタ処理し、その濾過液をエーテルに注入することによって精製される。分離された、その固形物は、フィルタにより抽出され、乾かされた。
９−アミノ−ドキシサイクリン 硫酸塩
【００２７】
３５ｍＬのエチレン・グリコール・モノメチル・エーテルと５ｍＬのメタノールの中に ９−ニトロ−ドキシサイクリン硫酸塩（１ｇ、１．７ｍｍｏｌ）を攪拌した溶液に、７００ｍｇの１０％Ｐｄ／Ｃが加えられた。その生成された混合物（ｒｅａｃｔｉｏｎ ｍｉｘｔｕｒｅ）は大気圧下で６時間 水素添加（ｈｙｄｒｏｇｅｎａｔｅｄ）された。その後、触媒がセライトにより濾別され、メタノールで洗浄された。その濾過液が集められ、８００ｍＬの冷たいエーテルの中に掻き混ぜながら滴下された。分離された固形物がフィルタにより抽出され、冷たいエーテルで洗浄され、真空下で乾燥された。そして、８４３ｍｇのクリーム色の生成物が得られた。
９−イソプロピルアミノ−ドキシサイクリン 硫酸塩
【００２８】
１０ｍＬのエチレングリコール＝モノメチル＝エーテルに９−アミノ−ドキシサイクリン硫酸塩（１００ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）を攪拌した溶液に、０．０５ｍｌの濃硫酸、０．５ｍＬのアセトン、及び１００ｍｇの１０％ Ｐｄ／Ｃが加えられた。生成された混合物は大気圧下で１時間１５分水素添加（ｈｙｄｒｏｇｅｎａｔｅｄ）された。その後、触媒はセライトで濾別され、メタノールで洗浄された。その濾過液が集められ、１５０ｍＬの冷たいエーテルの中に掻き混ぜながら滴下された。分離された固形物がフィルタにより抽出され、冷たいエーテルで洗浄され、真空下で乾燥された。そして、１０９ｍｇのクリーム色の生成物が得られた。その生成物は、メタノールに溶かし、フィルタ処理し、その濾過液をエーテルに注入することによって精製された。生成された、その固形物は、フィルタにより抽出され、乾かされた。
９−アセトアミド−ドキシサイクリン 硫酸塩
【００２９】
１．５ｍＬの１，３−ジメチル−２−イミダゾリジノンに９−アセトアミド−ドキシサイクリン硫酸塩（７２ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）を攪拌した溶液に、０．０５ｍＬの塩化アセチル（ａｃｅｔｙｌ ｃｈｌｏｒｉｄｅ）を伴った７０ｍｇの重炭酸ナトリウム（ｓｏｄｉｕｍ ｂｉｃａｒｂｏｎａｔｅ）が加えられた。その混合物は室温で１時間攪拌され、その後、フィルタ処理された。その濾過液が集められ、攪拌しながら、１００ｍｌの冷たいエーテルの中に注入された。分離された、その固形物が、フィルタにより抽出され、真空下で乾燥され、そして、９２ｍｇが得られた。
９−ジアゾニウム−ドキシサイクリン 硫酸 塩酸
【００３０】
アイス・バス（ｉｃｅ ｂａｔｈ）にて冷却された、０．１Ｎ塩酸を含むメタノール（９ｍＬ）に９−アミノ−ドキシサイクリン硫酸（３００ｍｇ、０．５４ｍｍｏｌ）を攪拌した溶液に、０．３ｍＬの亜硝酸ｎ−ブチル（ｎ−ｂｕｔｙｌ ｎｉｔｒｉｔｅ）が加えられた。その溶液は０℃で３０分間攪拌された後、３００ｍＬの冷たいエーテルの中に攪拌しながら注入された。分離された固形物がフィルタにより抽出され、真空下で乾燥され、そして、２５６ｍｇのオレンジ−ブラウンの生成物が得られた。
９−アジド−ドキシサイクリン 硫酸塩
【００３１】
０．１Ｎ塩酸を含むメタノール（４．５ｍＬ）に９−ジアゾニウム−ドキシサイクリン 硫酸 塩酸（８０ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）を攪拌した溶液に、１０ｍｇのアジ化ナトリウム（ｓｏｄｉｕｍ ａｚｉｄｅ）が加えられた。その溶液は室温で２時間攪拌された後、１００ｍＬの冷たいエーテルの中に攪拌しながら注入された。分離された固形物がフィルタにより抽出され、真空下で乾燥され、そして、４３ｍｇの生成物が得られた。
９−（４−フルオロフェニル）−ドキシサイクリン
【００３２】
４ｍＬのメタノールに、９−ジアゾニウム−ドキシサイクリン 硫酸 塩酸（３５８ｍｇ、０．５９ｍｍｏｌ）と４−フルオロフェニル ボロン酸（１０７ｍｇ、０．７６ｍｍｏｌ）を攪拌した溶液に、１８ｍｇの酢酸パラジウム（ＩＩ）（ｐａｌｌａｄｉｕｍ（ＩＩ） ａｃｅｔａｔｅ）が加えられた。生成された混合物は室温で１６時間攪拌された。触媒は濾別され、そして、残渣が集められて、分取用ＨＰＬＣにより精製された。ＨＰＬＣから採取されたフラクションが集められ、２０ｍｌの冷たいエーテルの中に注入された。分離された固形物は、フィルタにより抽出され、真空下で乾燥され、そして、３２ｍｇの生成物が得られた。
７−［１，２−ビス（カルボベンジルオキシ）ヒドラジノ］−ドキシサイクリン
【００３３】
０℃の２．５ｍＬのＴＨＦ及び３．２ｍＬのメタスルホン酸にドキシサイクリン塩酸塩（３００ｍｇ、０．６２ｍｍｏｌ）を攪拌した溶液に、２３０ｍｇのｄｉｂｅｎｚｙａｚｏｄｉｃａｒｂｏｘｙｌａｔｅが加えられた。生成された混合物は０℃で２時間攪拌された後、４００ｍＬの冷たいエーテルの中に注入された。分離された固形物は、フィルタにより抽出され、真空下で乾燥され、そして、４７９ｍｇのオフ・ホワイトの生成物が得られた。
７−アミノ−ドキシサイクリン
【００３４】
３０ｍＬのエチレン・グリコール・モノメチル・エーテルに ７−［１，２−ビス（カルボベンジルオキシ）ヒドラジノ］−ドキシサイクリン（４７８ｍｇ）を入れた溶液に、２００ｍｇの１０％Ｐｄ／Ｃが加えられた。その生成された混合物（ｒｅａｃｔｉｏｎ ｍｉｘｔｕｒｅ）は室温で３時間 水素添加（ｈｙｄｒｏｇｅｎａｔｅｄ）された。触媒はセライトで濾過され、メタノールで洗浄された。その濾過液が集められ、５００ｍＬの冷たいエーテルの中に注入された。分離された固形物がフィルタにより抽出され、真空下で乾燥された。そして、２６８ｍｇの生成物が得られた。
７−ジメチルアミノ−ドキシサイクリン 硫酸塩
【００３５】
８ｍＬのエチレン・グリコール・モノメチル・エーテルに７−アミノ−ドキシサイクリン（１００ｍｇ）を入れた溶液に、１ｍＬの３７％ホルムアルデヒド水溶液、０．０５ｍＬの濃硫酸、及び１００ｍｇの１０％ Ｐｄ／Ｃが加えられた。生成された混合物は、大気圧下で６時間水素添加された。触媒はセライトで濾過され、メタノールで洗浄された。その残渣が集められ、１００ｍＬの冷たいエーテルの中に掻き混ぜながら注入された。よく粘り着く、分離された固形物がかろうじてフィルタにより抽出された。その固形物は、直ぐにメタノールに溶かされ、１００ｍｌの冷たいエーテルに掻き混ぜながら注入された。分離された、その固形物は、フィルタにより抽出され、真空下で乾燥され、８９ｍｇの生成物が得られた。
７−ジプロピル−ドキシサイクリン硫酸塩
【００３６】
８ｍＬのエチレン・グリコール・モノメチル・エーテルに７−アミノ−ドキシサイクリン（９０ｍｇ）を入れた溶液に、０．５ｍＬのプロピオンアルデヒド、０．０５ｍＬの濃硫酸、及び８０ｍｇの１０％ Ｐｄ／Ｃが加えられた。生成された混合物は、大気圧下で５時間水素添加され、触媒はセライトで濾過され、メタノールで洗浄された。その残渣が集められ、１００ｍＬの冷たいエーテルの中に掻き混ぜながら注入された。分離された固形物は、フィルタにより抽出され、真空下で乾燥され、４１５ｍｇの生成物が得られた。
７−ジブチルアミノ−ドキシサイクリン 硫酸塩
【００３７】
６ｍＬのエチレン・グリコール・モノメチル・エーテルに７−アミノ−ドキシサイクリン（１００ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）を入れた溶液に、０．６ｍＬのブチルアルデヒド、０．０５ｍＬの濃硫酸、及び１００ｍｇの１０％ Ｐｄ／Ｃが加えられた。生成された混合物は、大気圧下で４時間水素添加され、触媒はセライトで濾過され、メタノールで洗浄された。その残渣が集められ、１００ｍＬの冷たいエーテルの中に掻き混ぜながら注入された。分離された固形物は、フィルタにより抽出され、真空下で乾燥され、１０３ｍｇの生成物が得られた。
７−ジ（３，３−ジメチル）ブチルアミノ−ドキシサイクリン 硫酸塩
【００３８】
６ｍＬのエチレン・グリコール・モノメチル・エーテルに７−アミノ−ドキシサイクリン（１００ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）を入れた溶液に、０．５ｍＬの３，３−ジメチル ブチルアルデヒド、０．０５ｍＬの濃硫酸、及び１００ｍｇの１０％ Ｐｄ／Ｃが加えられた。生成された混合物は、大気圧下で４時間水素添加され、触媒はセライトで濾過され、メタノールで洗浄された。その残渣が集められ、１００ｍＬの冷たいエーテルの中に掻き混ぜながら注入された。分離された固形物は、フィルタにより抽出され、真空下で乾燥され、１２２ｍｇの生成物が得られた。
７−ジヘキシルアミノ−ドクシサイクリン 硫酸塩
【００３９】
６ｍＬのエチレン・グリコール・モノメチル・エーテルに７−アミノ−ドキシサイクリン（１００ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）を入れた溶液に、０．６ｍＬのヘキサナール、０．０５ｍＬの濃硫酸、及び１００ｍｇの１０％ Ｐｄ／Ｃが加えられた。生成された混合物は、大気圧下で４時間水素添加され、触媒はセライトで濾過され、メタノールで洗浄された。その残渣が集められ、１００ｍＬの冷たいエーテルの中に掻き混ぜながら注入された。分離された固形物は、フィルタにより抽出され、真空下で乾燥され、１２９ｍｇの生成物が得られた。
７−イソプロピルアミノ−ドキシサイクリン 硫酸塩
【００４０】
８ｍＬのエチレン・グリコール・モノメチル・エーテルに７−アミノ−ドキシサイクリン（９０ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）を入れた溶液に、０．５ｍＬのイソブチルアルデヒド、０．０５ｍＬの濃硫酸、及び９０ｍｇの１０％ Ｐｄ／Ｃが加えられた。生成された混合物は、大気圧下で６時間水素添加され、触媒はセライトで濾過され、メタノールで洗浄された。その残渣が集められ、１００ｍＬの冷たいエーテルの中に掻き混ぜながら注入された。分離された固形物は、フィルタにより抽出され、真空下で乾燥され、１４２ｍｇの生成物が得られた。
７−メチル−７−イソプロピルアミノ−ドキシサイクリン 硫酸塩
【００４１】
４ｍＬのエチレン・グリコール・モノメチル・エーテルに７−イソプロピルアミノ−ドキシサイクリン（６０ｍｇ）を入れた溶液に、０．４ｍＬの３７％ホルムアルデヒド水溶液、０．０５ｍＬの濃硫酸、及び５０ｍｇの１０％ Ｐｄ／Ｃが加えられた。生成された混合物は、大気圧下で２時間水素添加され、その後、触媒はセライトで濾過され、メタノールで洗浄された。その残渣が集められ、８０ｍＬの冷たいエーテルの中に掻き混ぜながら注入された。分離された固形物は、フィルタにより抽出され、真空下で乾燥され、５２ｍｇの生成物が得られた。
７−シクロブチルアミノ−ドキシサイクリン 硫酸塩
【００４２】
７ｍＬのエチレン・グリコール・モノメチル・エーテルに７−アミノ−ドキシサイクリン（８０ｍｇ）を入れた溶液に、０．３ｍＬのシクロブタノン、０．０４ｍＬの濃硫酸、及び６０ｍｇの１０％ Ｐｄ／Ｃが加えられた。生成された混合物は、大気圧下で２４時間水素添加され、触媒はセライトで濾過され、メタノールで洗浄された。その残渣が集められ、１００ｍＬの冷たいエーテルの中に掻き混ぜながら注入された。分離された固形物は、フィルタにより抽出され、真空下で乾燥され、８５ｍｇの生成物が得られた。
７−メチル−７−シクロブチルアミノ−ドキシサイクリン 硫酸塩
【００４３】
３．５ｍＬのエチレン・グリコール・モノメチル・エーテルに７−シクロブチルアミノ−ドキシサイクリン（４０ｍｇ）を入れた溶液に、０．３ｍＬの３７％ホルムアルデヒド水溶液、０．０３ｍＬの濃硫酸、及び４０ｍｇの１０％ Ｐｄ／Ｃが加えられた。生成された混合物は、大気圧下で６時間水素添加され、触媒はセライトで濾過され、メタノールで洗浄された。その残渣が集められ、８０ｍＬの冷たいエーテルの中に掻き混ぜながら注入された。分離された固形物は、フィルタにより抽出され、真空下で乾燥され、３５ｍｇの生成物が得られた。
７−アセトアミド−ドキシサイクリン 硫酸塩
【００４４】
３ｍＬの１，３−ジメチル−２−イミダゾリジノンに７−アミノ−ドキシサイクリン（２００ｍｇ）を入れた溶液に、０．０９ｍＬの塩化アセチル（ａｃｅｔｙｌ ｃｈｌｏｒｉｄｅ）を伴った２００ｍｇの重炭酸ナトリウム（ｓｏｄｉｕｍ ｂｉｃａｒｂｏｎａｔｅ）が加えられた。その混合物は室温で１時間攪拌され、その後、フィルタ処理された。その濾過液が集められ、攪拌しながら、２００ｍｌの冷たいエーテルの中に注入された。沈殿した生成物がフィルタにより抽出され、真空下で乾燥された。２０２ｍｇの生成物が得られた。
７−アセトアミド−７−イソプロピル−ドキシサイクリン 硫酸塩
【００４５】
１．５ｍＬの１，３−ジメチル−２−イミダゾリジノンに７−イソブチルアミノ−ドキシサイクリン（６０ｍｇ）を攪拌した溶液に、０．０５ｍＬの塩化アセチル（ａｃｅｔｙｌ ｃｈｌｏｒｉｄｅ）を伴った６０ｍｇの重炭酸ナトリウム（ｓｏｄｉｕｍ ｂｉｃａｒｂｏｎａｔｅ）が加えられた。その混合物は室温で１時間半攪拌され、その後、フィルタ処理された。その濾過液が集められ、攪拌しながら、８０ｍｌの冷たいエーテルの中に注入された。沈殿した生成物がフィルタにより抽出され、真空下で乾燥された。
７−ジアゾニウム−ドキシサイクリン 塩酸 又は テトラフルオロほう酸
【００４６】
アイス・バス（ｉｃｅ ｂａｔｈ）にて冷却された、０．１Ｎ塩酸を含むメタノール（４ｍＬ）に７−アミノ−ドキシサイクリン（２００ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）を攪拌した溶液に、０．２ｍＬの亜硝酸ｎ−ブチル（ｎ−ｂｕｔｙｌ ｎｉｔｒｉｔｅ）が加えられた。その溶液は０℃で３０分間攪拌された後、２００ｍＬの冷たいエーテルの中に攪拌しながら注入された。分離された固形物がフィルタにより抽出され、真空下で乾燥され、そして、１７３ｍｇの生成物が得られた。塩酸の代わりにテトラフルオロほう酸（ｔｅｔｒａｆｌｕｏｒｏｂｏｒａｔｅ ａｃｉｄ；エーテルに５４％溶液）を用いることにより、テトラフルオロほう酸ジアゾニウム塩（ｄｉａｚｏｎｉｕｍｕ ｔｅｔｒａｆｌｕｏｒｏｂｏｒａｔｅ ｓａｌｔ）が調製された。
７−アジド−ドキシサイクリン
【００４７】
アイス・バス（ｉｃｅ ｂａｔｈ）にて冷却された、０．１Ｎ塩酸を含むメタノール（４．５ｍＬ）に７−ジアゾニウム−ドキシサイクリン 塩酸（８０ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）を攪拌した溶液に、１２ｍｇのアジ化ナトリウム（ｓｏｄｉｕｍ ａｚｉｄｅ）が加えられた。その溶液は室温で２時間攪拌された後、１００ｍＬの冷たいエーテルの中に攪拌しながら注入された。分離された固形物がフィルタにより抽出され、真空下で乾燥された。４３ｍｇの生成物が得られた。
７−アミノ−ニトロ−ドキシサイクリン 硫酸塩
【００４８】
４ｍＬの濃硫酸に０℃で７−アミノ−ドキシサイクリン（２２０ｇ、０．４４ｍｍｏｌ）を攪拌した溶液に、硝酸カリウム（５２ｍｇ、０．５１ｍｍｏｌ）が加えられた。生成された混合物が０℃で１５分間攪拌され、その後、攪拌しながら、３００ｍＬの冷たいエーテルの中に注入された。分離された固形物がフィルタにより抽出され、冷たいエーテルで洗浄され、真空下で乾燥された。その生成物は、メタノールに溶かし、フィルタ処理され、その濾過液はエーテルに注入された。分離された、その固形物は、フィルタにより抽出され、乾かされた。そして、２２２ｇの生成物が得られた。
７−ジメチルアミノ−９−ニトロ−ドキシサイクリン 硫酸塩
【００４９】
１．５ｍＬの０℃の濃硫酸に７−ジメチルアミノ−ドキシサイクリン（４０ｇ、０．０７ｍｍｏｌ）が攪拌された溶液に、硝酸カリウム（１２ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）が加えられた。生成された混合物が０℃で３０分間攪拌され、その後、攪拌しながら、６０ｍＬの冷たいエーテルの中に注入された。分離された固形物がフィルタにより抽出され、冷たいエーテルで洗浄され、真空下で乾燥された。ＬＣ／ＭＳは、大体において、２つのニトロ基（多分、望まれる生成物の硝酸エステル）を含む１つの生成物を示す。
７−ジメチルアミノ−９−ジアゾニウム−ドキシサイクリン 硫酸 塩酸
【００５０】
アイス・バス（ｉｃｅ ｂａｔｈ）にて冷却された、０．１Ｎ塩酸を含むメタノール（１．５ｍＬ）に７−ジメチルアミノ−９−アミノ−ドキシサイクリン（５０ｍｇ）を攪拌した溶液に、０．０５ｍＬの亜硝酸ｎ−ブチル（ｎ−ｂｕｔｙｌ ｎｉｔｒｉｔｅ）が加えられた。その溶液は０℃で３０分間攪拌された後、８０ｍＬの冷たいエーテルの中に攪拌しながら注入された。分離された固形物はフィルタにより抽出され、真空下で乾燥され、そして、３８ｍｇの生成物が得られた。
７−アセトアミド−９−ニトロ−ドキシサイクリン 硫酸塩
【００５１】
２ｍＬの０℃の濃硫酸に７−アセトアミノ−ドキシサイクリン（６０ｇ、０．０９５ｍｍｏｌ）を攪拌した溶液に、硝酸カリウム（１１ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ）が加えられた。生成された混合物が０℃で５分間攪拌され、その後、攪拌しながら、８０ｍＬの冷たいエーテルの中に注入された。分離された固形物がフィルタにより抽出され、冷たいエーテルで洗浄され、真空下で乾燥された。
７−アセトアミド−９−アミノ−ドキシサイクリン 硫酸塩
【００５２】
７ｍＬのエチレン・グリコール・モノメチル・エーテルに７−アセトアミド−９−ニトロ−ドキシサイクリン 硫酸（７７ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）を入れた溶液に、６０ｍｇの１０％ Ｐｄ／Ｃが加えられた。生成された混合物は、大気圧下で７時間水素添加され、触媒はセライトにより濾過され、メタノールで洗浄された。その濾過液が集められ、１００ｍＬの冷たいエーテルの中に掻き混ぜながら滴下された。分離された固形物がフィルタにより抽出され、冷たいエーテルで洗浄され、真空下で乾燥された。そして、６２ｍｇの生成物が得られた。
７−アセトアミド−９−ジアゾニウム−ドキシサイクリン 硫酸 塩酸
【００５３】
アイス・バス（ｉｃｅ ｂａｔｈ）にて冷却された、０．１Ｎ塩酸を含むメタノール（３ｍＬ）に７−アセトアミド−９−アミノ−ドキシサイクリン（１００ｍｇ）を攪拌した溶液に、０．１ｍＬの亜硝酸ｎ−ブチル（ｎ−ｂｕｔｙｌ ｎｉｔｒｉｔｅ）が加えられた。その溶液は０℃で３０分間攪拌された後、１００ｍＬの冷たいエーテルの中に攪拌しながら注入された。分離された固形物はフィルタにより抽出され、真空下で乾燥され、そして、９２ｍｇの生成物が得られた。
７−アセトアミド−９−アジド−ドキシサイクリン 硫酸塩
【００５４】
アイス・バス（ｉｃｅ ｂａｔｈ）にて冷却された、０．１Ｎ塩酸を含むメタノール（６ｍＬ）に７−アセトアミド−９−ジアゾニウム−ドキシサイクリン（１１２ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ）を攪拌した溶液に、１４ｍｇ（０．２１ｍｍｏｌ）のアジ化ナトリウム（ｓｏｄｉｕｍ ａｚｉｄｅ）が加えられた。その溶液は０℃で３５分間攪拌された後、１５０ｍＬの冷たいエーテルの中に攪拌しながら注入された。分離された固形物はフィルタにより抽出され、真空下で乾燥され、そして、９４ｍｇの生成物が得られた。
ドキシサイクリン ヨウ化メチル
【００５５】
高純度のドキシサイクリン（３１５ｍｇ）は、２ｍＬのメタノール及び１０ｍＬのＴＨＦの中に溶かされ、その後、１ｍＬのヨウ化メチルが加えられた。生成された混合物は５日間放置された。生成物には結晶は生じなかった。その生成された混合物は集められ、３００ｍＬの冷たいエーテルの中に攪拌しながら注入された。分離された生成物はフィルタにより抽出され、真空下で乾燥され、そして、２６９ｍｇが得られた。ＬＣ／ＭＳは純粋な生成物を示す。
５−アセトキシ−ドキシサイクリン
【００５６】
３ｍＬの３０％ＨＢｒ／酢酸溶液（ａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ ｓｏｌｕｔｉｏｎ）中にドキシサイクリン（１００ｍｇ）を入れた溶液が室温で３．５日間攪拌された。その生成された混合物は、１００ｍＬの冷たいエーテルの中に攪拌しながら注入された。そして、その分離された生成物はフィルタにより抽出された。ＬＣ／ＭＳは出発物質の不完全なｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎを示す。そして、生成物（８６ｍｇ）は反応状態に９時間置かれ、そして、同様の方法で分離された。
９−ｔｅｒｔブチル−ドキシサイクリン
【００５７】
２ｍＬのｔｅｒｔ−ブタノールと３ｍＬのメタンスルホン酸にドキシサイクリン（１００ｍｇ）を入れた溶液が室温で１８時間攪拌され、その後、１００ｍＬの冷たいエーテルの中に攪拌しながら注入され、ｎ−ブタノールで抽出された。有機抽出物（ｏｒｇａｎｉｃ ｅｘｔｒａｃｔｓ）は、１Ｎ 水酸化ナトリウム溶液でｂａｓｉｆｉｅｄされた。そして、ｐＨは、濃塩酸により直ぐに６．５−７に調整された。沈殿した固形物がフィルタにより抽出され、その後、メタノールに溶かされ、集められ、エーテル／石油エーテルの冷たい溶液（３０ｍＬ）に攪拌しながら滴下された。分離された固形物は、フィルタにより抽出され、真空下で乾燥された。
９−ｔｅｒｔブチル−７−ニトロ−ドキシサイクリン
【００５８】
１０ｍＬのｔｅｒｔ−ブタノールと３０ｍＬのメタンスルホン酸に塩酸ドキシサイクリン（２ｇ）を入れた溶液が室温で３時間攪拌され、その後、５００ｍｇの硝酸カリウムが加えられ、生成された混合物はさらに攪拌された。その生成された混合物は、１００ｍｌの冷たい溶液（２３ｍｇの水酸化ナトリウムを含む水）に注入された。さらに、その生成混合物がアルカリ性になるまで、希ＮａＯＨ溶液が滴下された。ｐＨは、濃塩酸により直ぐに６．５−７に調整された。分離された、粘り気のある黒っぽい固形物がフィルタにより抽出された。液状の濾液（ａｑｕｅｏｕｓ ｆｉｌｔｒａｔｅ）がｎ−ブタノールで抽出された。粗生成物（ｃｒｕｄｅ ｐｒｏｄｕｃｔ）は最小限の量のメタノールに溶かされ、ＨＰＬＣにより精製された。ＨＰＬＣからのフラクションが濃縮され、メタノールに溶かされ、エーテル／石油エーテル（ＰＥＴ ｅｔｈｅｒ）の３：１の混合物（５０ｍＬ）に滴下された。分離された固形物は、フィルタにより抽出され、そして、７８８ｍｇの淡黄（ｐａｌｅ ｙｅｌｌｏｗ）の生成物が得られた。
９−ｔｅｒｔブチル−７−アミノ−ドキシサイクリン
【００５９】
２５ｍＬのエチレン・グリコール・モノメチル・エーテルに９−ｔｅｒｔブチル−７−ドキシサイクリン（５００ｍｇ）を入れた溶液に、３５０ｍｇの１０％ Ｐｄ／Ｃが加えられた。生成された混合物は、大気圧下で１７時間水素添加され、触媒はセライトで濾過され、メタノールで洗浄された。その残渣が集められ、ＴＨＦに溶かされ、エーテル／石油エーテル（ＰＥＴ ｅｔｈｅｒ）の冷たい１：１の溶液の中に掻き混ぜながら滴下された。沈殿した固形物がフィルタにより抽出され、真空下で乾燥された。そして、４５２ｍｇの生成物が得られた。
９−ｔｅｒｔブチル−７−ジアゾニウム−ドキシサイクリン
【００６０】
アイス・バス（ｉｃｅ ｂａｔｈ）にて冷却された、０．１Ｎ塩酸を含むメタノール（２．５ｍＬ）に９−ｔｅｒｔブチル−７−アミノ−ドキシサイクリン（９３ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）を攪拌した溶液に、０．１ｍＬの亜硝酸ｎ−ブチル（ｎ−ｂｕｔｙｌ ｎｉｔｒｉｔｅ）が加えられた。その溶液は０℃で３０分間攪拌された後、半分が、エーテル／石油エーテル（ＰＥＴ ｅｔｈｅｒ）の３：１の冷たい混合物（３０ｍＬ）の中に攪拌しながら注入された。生成物は、ガムのように、ビーカの底にこびり付いた。それが、メタノールに溶かされると共に集められ、残渣が２０ｍＬの冷たいエーテルの中に注入された。分離された固形物は直ちにフィルタにより抽出され、真空下で乾燥され、そして、４２ｍｇの生成物が得られた。
９−ｔｅｒｔブチル−７−アジド−ドキシサイクリン
【００６１】
９−ｔｅｒｔブチル−７−ジアゾニウム−ドキシサイクリン生成混合物（１．５ｍＬ）が０℃で攪拌された溶液に、８ｍｇ（０．１２ｍｍｏｌ）のアジ化ナトリウムが加えられた。その溶液は、室温まで加温される３時間の間、攪拌された。その生成された混合物を集めた後、残渣は、エーテル／石油エーテル（ＰＥＴ ｅｔｈｅｒ）の３：１の冷たい混合物の中に攪拌しながら注入された。固形物は一切分離されなかったので、乾燥させて３５ｍｇの生成物を得るために溶液が集められた。
９−ｔｅｒｔブチル−７−ジメチルアミノ−ドキシサイクリン
【００６２】
１０ｍＬのエチレン・グリコール・モノメチル・エーテルと１１５ｍｇの１０％ＰＤ／Ｃで１６７ｍｇの９−ｔｅｒｔブチル−７−アミノ−ドキシサイクリンを含む９−ｔｅｒｔブチル−７−アミノ−ドキシサイクリンから攪拌されて生成された混合物に、１．２ｍｌの３７％ホルムアルデヒド水溶液が加えられた。生成された混合物は大気圧下で３．５時間 水素添加（ｈｙｄｒｏｇｅｎａｔｅｄ）された。触媒はセライトで濾過され、メタノールで洗浄された。その濾過液が集められ、残渣が１０ｍＬの冷たいエーテルの中に掻き混ぜながら注入された。分離された固形物がフィルタにより抽出され、真空下で乾燥された。ＬＣ／ＭＳは期待した生成物を示したが、ｂａｓｅｌｉｎｅ不純物で汚染されていた。
９−ｔｅｒｔブチル−７−アセトアミノ−ドキシサイクリン
【００６３】
２ｍＬの１，３−ジメチル−２−イミダゾリジノンに９−ｔｅｒｔブチル−７−アミノ−ドキシサイクリン（１００ｍｇ）が攪拌された溶液に、０．０７ｍＬのアセチル＝クロリドを伴った１００ｍｇの重炭酸ナトリウムが加えられた。その混合物は室温で１．５時間攪拌され、その後、フィルタ処理された。その濾過液が集められ、１００ｍＬの冷たいエーテルの中に掻き混ぜながら注入された。分離された生成物がフィルタにより抽出された。粗生成物（ｃｒｕｄｅ ｐｒｏｄｕｃｔ）はメタノールに溶かされ、フィルタにより抽出され、エーテル／石油エーテル（ＰＥＴ ｅｔｈｅｒ）の３：１の冷たい混合物に、攪拌されながら滴下された。その生成物は、濾過により集められ、真空下で乾燥され、７６ｍｇの生成物が得られた。
４−ｄｅｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏ−ドキシサイクリン
【００６４】
１２ｍＬの酢酸と１２ｍＬの水の中に、テトラサイクリン＝ヨウ化メチル（８６０ｍｇ）が攪拌された溶液に、４３２ｍｇの亜鉛ダストが加えられた。１５分間攪拌した後、その亜鉛粉がフィルタにより抽出された。濾過液は、０．８６ｍＬの濃塩酸溶液を含む８６ｍＬの水で希釈された。分離された生成物はフィルタにより抽出され、真空下で乾燥され、４１９ｍｇの生成物が得られた。
４−ｄｅｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏ−９−ニトロ−ドキシサイクリン
【００６５】
２０ｍＬの０℃の濃硫酸に４−ｄｅｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏ−ドキシサイクリン（４０２ｍｇ、１ｍｍｏｌ）を攪拌した溶液に、１１１ｍｇの硝酸カリウムが加えられた。２０分間攪拌された後、生成された混合物は、１００ｍＬの冷たい水の中に注入された。その生成物を含む水にｎ−ブタノールが加えられ、有機層が分離された。ｎ−ブタノールを用いての抽出は２度繰り返された。その有機抽出物は集められ、冷たい水に攪拌しながら加えられた。分離された生成物はフィルタにより抽出された。ｎ−ブタノールや、冷たい水への注入や、フィルタを用いた再抽出により、さらなる生成物が取り出された。真空乾燥により、３５３ｍｇの生成物が得られた。
４−ｄｅｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏ−９−アミノ−ドキシサイクリン
【００６６】
１７ｍＬのエチレン・グリコール・モノメチル・エーテルに４−ｄｅｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏ−９−ニトロ−ドキシサイクリン（３５３ｍｇ）を攪拌した溶液に、０．１ｍｌの濃硫酸、及び２００ｍｇの１０％ Ｐｄ／Ｃが加えられた。そして、生成された混合物は、大気圧下で１０時間水素添加（ｈｙｄｒｏｇｅｎａｔｅｄ）された。触媒はセライトで濾過され、メタノールで洗浄された。その濾過液が集められ、１００ｍＬのエーテルの中に注入された。分離された固形物がフィルタにより抽出され、真空下で乾燥され、２９２ｍｇの生成物が得られた。
４−ｄｅｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏ−９−ジアゾニウム−ドキシサイクリン 塩酸
【００６７】
アイス・バス（ｉｃｅ ｂａｔｈ）にて冷却された、０．１Ｎ塩酸を含むメタノール（５ｍＬ）に４−ｄｅｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏ−９−アミノ−ドキシサイクリン（２２０ｍｇ）を攪拌した溶液に、０．２ｍＬの亜硝酸ｎ−ブチル（ｎ−ｂｕｔｙｌ ｎｉｔｒｉｔｅ）が加えられた。その溶液は０℃で３０分間攪拌された後、エーテル／石油エーテル（ＰＥＴ ｅｔｈｅｒ）の２：１の冷たい混合物（１５０ｍＬ）に、攪拌されながら注入された。分離された固形物は、フィルタにより抽出され、真空下で乾燥され、そして、１９１ｍｇの生成物が得られた。
４−ｄｅｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏ−９−アジド−ドキシサイクリン
【００６８】
アイス・バス（ｉｃｅ ｂａｔｈ）にて冷却された、０．１Ｎ塩酸を含むメタノール（６．５ｍＬ）に４−ｄｅｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏ−９−ジアゾニウム−ドキシサイクリン（１５０ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ）を攪拌した溶液に、２３ｍｇのアジ化ナトリウムが加えられた。そして、その溶液は０℃で１時間攪拌された。その後、その混合物は１２０ｍＬの冷たいエーテルの中に攪拌しながら注入された。いくらかの固形物が形成された。その固形物は、フィルタ処理されたが、取り出せなかった。その濾過液が濃縮され、メタノールが除去され、５０ｍＬの冷たい水の中に攪拌しながら注入された。分離された固形物はフィルタにより抽出され、真空下で乾燥された。さらなる生成物が、ｎ−ブタノールや、水への注入や、固形物のフィルタ処理で濾過液を抽出することにより得られた。そして、８４ｍｇの生成物が得られた。
４−ｄｅｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏ−７−ニトロ−９−ｔｅｒｔブチル−ドキシサイクリン
【００６９】
３ｍＬのｔｅｒｔ−ブタノールと１５ｍＬのメタンスルホン酸に４−ｄｅｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏ−ドキシサイクリン（５００ｍｇ、１．２５ｍｍｏｌ）を入れた溶液が、室温下で１５時間攪拌され、その後、１４０ｍｇの硝酸カリウムが加えられ、生成された混合物はさらに攪拌された。その生成された混合物は、２００ｍｌの冷たい水に注入された。分離された固形物がフィルタにより抽出され、空気乾燥された。粗生成物（ｃｒｕｄｅ ｐｒｏｄｕｃｔ）は最小限の量のメタノールに溶かされ、ＨＰＬＣにより精製された。ＨＰＬＣからのフラクションが濃縮され、メタノールに溶かされ、５０ｍＬの冷たい水の中に滴下された。分離された固形物は、フィルタにより抽出され、真空下で乾燥され、そして、２１７ｍｇの生成物が得られた。
４−ｄｅｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏ−７−アミノ−９−ｔｅｒｔブチル−ドキシサイクリン
【００７０】
１２ｍＬのエチレン・グリコール・モノメチル・エーテルに４−ｄｅｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏ−７−ニトロ−９−ｔｅｒｔブチル−ドキシサイクリン（２１７ｍｇ、０．４２ｍｍｏｌ）を攪拌した溶液に、１７０ｍｇの１０％ Ｐｄ／Ｃが加えられた。そして、生成された混合物は、大気圧下で１３時間水素添加（ｈｙｄｒｏｇｅｎａｔｅｄ）された。触媒はセライトで濾過され、メタノールで洗浄された。その濾過液が集められ、エーテル／石油エーテル（ＰＥＴ ｅｔｈｅｒ）の３：１の混合物（２０ｍＬ）に注入され、そして、４０ｍｇの生成物が得られた。オレンジの濾過液が乾燥のために集められ、１３８ｍｇの生成物が得られた。
４−ｄｅｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏ−７−ジアゾニウム−９−ｔｅｒｔブチル−ドキシサイクリン
【００７１】
アイス・バス（ｉｃｅ ｂａｔｈ）にて冷却された、０．１Ｎ塩酸を含むメタノール（５ｍＬ）に４−ｄｅｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏ−７−アミノ−９−ｔｅｒｔブチル−ドキシサイクリン（１６５ｍｇ）を攪拌した溶液に、０．１５ｍＬの亜硝酸ｎ−ブチル（ｎ−ｂｕｔｙｌ ｎｉｔｒｉｔｅ）が加えられた。その溶液は０℃で３０分間攪拌された。その半分が、５０ｍＬの冷たいエーテルの中に攪拌しながら注入された。分離された固形物は、フィルタにより抽出され、真空下で乾燥され、そして、５０ｍｇの生成物が得られた。
４−ｄｅｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏ−７−アミノ−ドキシサイクリン
【００７２】
４ｍＬのＴＨＦと４．５ｍＬのメタンスルホン酸に０℃で４−ｄｅｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏ−ドキシサイクリン（４００ｍｇ）を攪拌した溶液に、４１８ｍｇ（１．４ｍｍｏｌ）のジベンジル・azodicarboxylateが加えられた。そして、生成された混合物が、室温にまで暖められるまで４時間攪拌された。水とｎ−ブタノールが加えられて、２つの層が分離された。ａｑｕｅｏｕｓ Ｌａｙｅｒが、エーテル／ｎ−ブタノールの混合物で抽出された。有機抽出物が濃縮され、そして、１０ｍＬのエチレン・グリコール・モノメチル・エーテルが加えられた。その後、４３０ｍｇの１０％ Ｐｄ／Ｃが加えられ、生成された混合物が大気圧下で１２時間水素添加された。触媒はセライトで濾過され、メタノールで洗浄された。その濾過液が集められ、エーテル／石油エーテル（ＰＥＴ ｅｔｈｅｒ）の３：１の冷たい混合物に掻き混ぜながら注入された。分離された生成物がフィルタにより抽出され、真空下で乾燥され、そして、１１４ｍｇの生成物が得られた。
９−ニトロ−ミノサイクリン硫酸
【００７３】
３０ｍＬの濃硫酸に０℃で塩酸ミノサイクリン（１ｇ、２．０２ｍｍｏｌ）が攪拌された溶液に、硝酸カリウム（２４６ｍｇ）が加えられた。その生成された混合物は、４５分間０℃で攪拌され、その後、１．２Ｌの冷たいエーテルの中に攪拌されながら注入された。分離された固形物は、フィルタにより抽出され、冷たいエーテルで洗浄され、真空下で乾燥され、１．３３ｇの生成物が得られた。
９−アミノ−ミノサイクリン硫酸
【００７４】
１０ｍＬのエチレン・グリコール・モノメチル・エーテルと７ｍＬのメタノールに９−ニトロ−ミノサイクリン硫酸（５００ｇ、０．８３ｍｍｏｌ）が攪拌された溶液に、２５０ｍｇの１０％ Ｐｄ／Ｃが加えられた。その生成された混合物は、大気圧下で４時間水素添加された。触媒はセライトで濾過され、メタノールで洗浄された。その濾過液が集められ、６００ｍＬの冷たいエーテルに掻き混ぜながら注入された。分離された固形物がフィルタにより抽出され、冷たいエーテルで洗浄され、真空下で乾燥され、そして、４６５ｍｇの生成物が得られた。
９−ジアゾニウム−ミノサイクリン硫酸 塩酸
【００７５】
アイス・バス（ｉｃｅ ｂａｔｈ）にて冷却された、０．１Ｎ塩酸を含むメタノール（３ｍＬ）に９−アミノ−ミノサイクリン硫酸（１００ｍｇ）を攪拌した溶液に、０．１ｍＬの亜硝酸ｔｅｒｔ−ブチル（又は、亜硝酸ｎ−ブチル）が加えられた。その溶液は０℃で３０分間攪拌された後、１００ｍＬの冷たいエーテルの中に攪拌しながら注入された。分離された固形物がフィルタにより抽出され、真空下で乾燥され、そして、８７ｍｇのオレンジ−ブラウンの生成物が得られた。
９−アジド−ミノサイクリン硫酸
【００７６】
０．１Ｎ塩酸を含むメタノール（１８ｍＬ）に９−ジアゾニウム−ミノサイクリン硫酸 塩酸（４８５ｍｇ、０．８３ｍｍｏｌ）を攪拌した溶液に、５９ｍｇのアジ化ナトリウムが加えられた。その溶液は室温で２時間攪拌され、その後、フィルタ処理され、その濾過液が５００ｍＬの冷たいエーテルに攪拌しながら注入された。分離された固形物は、フィルタにより抽出され、真空下で乾燥され、そして、４８０ｍｇのベージュ色の生成物が得られた。
９−アセトアミド−ミノサイクリン
【００７７】
１．５ｍＬの１，３−ジメチル−２−イミダゾリジノンに９−アミノ−ミノサイクリン硫酸（１００ｍｇ、０．１７５ｍｍｏｌ）を攪拌した溶液に、０．０５ｍＬのアセチル・クロリドを伴う１００ｍｇの重炭酸ナトリウムが加えられた。その混合物は室温で４５分間攪拌され、その後、１５０ｍＬの冷たいエーテルの中に攪拌しながら注入された。分離された固形物がフィルターにより抽出され、真空下で乾燥され、そして、１６５ｍｇの生成物が得られた。
４−ｄｅｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏ−ミノサイクリン
【００７８】
高純度のミノサイクリン（１７５ｍｇ、０．３８ｍｍｏｌ）が２ｍＬのＴＨＦに溶かされ、その後、０．４３ｍＬのヨウ化メチルが加えられた。生成物の結晶は生じなかった。生成された混合物が集められ、そして、エーテル／石油エーテルの４０：６０の冷たい混合物（２００ｍＬ）に掻き混ぜながら注入された。分離された生成物がフィルタにより抽出され、真空下で乾燥され、その生成物は さらに３日間反応条件に置かれ、その後、前のようにエーテルに析出させ、そして、１２３ｍｇのミノサイクリン＝ヨウ化メチルが得られた。その粗生成物（ｃｒｕｄｅ ｐｒｏｄｕｃｔ）が２ｍＬの酢酸に溶かされ、そして、２ｍＬの水と６０ｍｇの亜鉛ダストが攪拌しながら加えられた。１５分後、その亜鉛粉がフィルタにより抽出された。濾過液は、濃塩酸溶液を含む１５ｍＬの水で希釈された。有機抽出物は硫酸マグネシウムで乾燥され、集められた。分離された固形物はフィルタにより抽出され、真空下で乾燥され、１５０ｍｇの黄色の生成物が得られた。
４−ｄｅｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏ−９−ニトロ−ミノサイクリン
【００７９】
４−ｄｅｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏ−ミノサイクリン（４１５ｍｇ、１ｍｍｏｌ）が３０ｍＬの濃硫酸に室温で溶かされた。その溶液はアイスバスで冷却され、硝酸カリウム（１１０ｍｇ、１．０９ｍｍｏｌ）が攪拌しながら加えられた。生成された混合物は、１５分間攪拌された後、３００ｍＬの冷たいエーテルに攪拌しながら注入された。分離された生成物がフィルタにより抽出され、冷たいエーテルで洗浄され、真空下で乾燥された。ＬＣ／ＭＳは出発物質の不完全なｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎを示す。そして、生成物は、１５ｍＬの濃硫酸に溶かされ、５０ｍｇの硝酸カリウムが０℃で加えられ、生成された混合物が４５分間攪拌された。生成物は前と同様に分離され、５４２ｍｇの生成物が得られた。
７，９−ジブロモ ｓａｎｃｙｃｌｉｎｅ
【００８０】
１．５ｍＬの濃硫酸に０℃でｓａｎｃｙｃｌｉｎｅ（５０ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）が攪拌された溶液に、４２ｍｇのＮ−ブロモサクシンイミド（Ｎ−ｂｒｏｍｏｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｅ）が加えられた。３０分後、生成された混合物は、６０ｍＬの冷たいエーテルの中に攪拌しながら注入された。分離された固形物がフィルタにより抽出され、真空下で乾燥され、そして、７０ｍｇの黄色の生成物が得られた。
７−ニトロと９−ニトロ−ｓａｎｃｙｃｌｉｎｅの混合
【００８１】
１．５ｍＬの濃硫酸に０℃でｓａｎｃｙｃｌｉｎｅ（４０ｍｇ、０．０９ｍｍｏｌ）が攪拌された溶液に、１０ｍｇの硝酸カリウムが加えられた。２０分後、生成された混合物は、５０ｍＬの冷たいエーテルの中に攪拌しながら注入された。分離された固形物がフィルタにより抽出され、真空下で乾燥され、そして、５９ｍｇの生成物が得られた。ＬＣ／ＭＳは、１．６：１の割合の２つのモノニトロ生成物を示す。
【００８２】
本発明のさらなるテストにおいて、異なる１０の微生物株により、５つのテスト生成物（プロダクト）の最小発育阻止濃度（ＭＩＣ）が評価された。その研究は、ＮＣＣＬＳドキュメントＭ７−Ａ５“Ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ Ｄｉｌｕｔｉｏｎ Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ Ｔｅｓｔｓ ｆｏｒ Ｂａｃｔｅｒｉａ ｔｈａｔ Ｇｒｏｗ Ａｅｒｏｂｉｃａｌｌｙ，Ｆｉｆｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ”に概略が述べられたＭａｃｒｏｄｉｌｕｔｉｏｎ Ｂｒｏｔｈ Ｍｅｔｈｏｄの改良版を使って行われた、５つのテスト生成物のためのＭＩＣ評価である。各テスト生成物は、１０の微生物株の試験用懸濁液試験用懸濁液を用いて２度づつ評価された。各生成物がテストに使用される前に、１０００μｇ／ｍｇ，１６０μｇ／ｍＬの初期濃度を実現するために、ｓｔｅｒｉｌｅ Ｍｕｅｌｌｅｒ−Ｈｉｎｔｏｎ Ｂｒｏｔｈ（ＭＨＢ）にて希釈された。
生成物１；
テトラサイクリン誘導体
ロット・ナンバー：INN01182(MW615)
１６０μｇ／ｍＬの初期濃度を実現するため、１４．８ｍｇの生成物が９２．５ｍＬのＭＨＢに溶かされた。
生成物２；
テトラサイクリン誘導体
ロットナンバー：INN01183(MW627)
１６０μｇ／ｍＬの初期濃度を実現するため、１３．６ｍｇの生成物が８５．０ｍＬのＭＨＢに溶かされた。
生成物３；
テトラサイクリン誘導体
ロットナンバー：INN01185(MW655)
１６０μｇ／ｍＬの初期濃度を実現するため、１１．９ｍｇの生成物が７４．４ｍＬのＭＨＢに溶かされた。
生成物４；
テトラサイクリン誘導体
ロットナンバー：INN01189(MW625)
１６０μｇ／ｍＬの初期濃度を実現するため、９．６ｍｇの生成物が６０．０ｍＬのＭＨＢに溶かされた。
生成物５；
テトラサイクリン誘導体
ロットナンバー：INN01195(MW643)
１６０μｇ／ｍＬの初期濃度を実現するため、１３．８ｍｇの生成物が８６．２５ｍＬのＭＨＢに溶かされた。
【００８３】
テストを行う約４８時間前に、トリプチック・ソイ・ブロス（Tryptic Soy Broth）の分離された無菌のチューブは、下の表１に示されるような感染微生物がそれぞれ入れられた凍結乾燥薬瓶から接種された。そのブロス培養は、３５°±２℃で約２４時間放置された。上述のようにして用意されたブロス培養は、ペトリ・プレートに入れられたトリプチック大豆培地の表面に接種され、３５°±２℃で約２４時間放置された。このようにして、培養プレートの表面には細菌の“芝地”が作られた。それは、試験用懸濁液を用意するために使われた。
【００８４】
テストを開始する前に、約１．０×１０９ＣＦＵ／ｍＬを含む、最初の試験用懸濁液が、各微生物のために用意された。その試験用懸濁液は、上述のように用意された、固形メディアのプレートから採取された細菌を塩化ナトリウムの流下されるテスト・チューブに混入することにより作成された。約１．０×１０６ＣＦＵ／ｍＬを含む、最後の試験用懸濁液が、各微生物種のために用意された。この懸濁液は、２００ｍＬのミューラー・ヒントン・ブロスが入れられた、滅菌された２５０ｍＬのポリプロピレン・ボトルに１．０×１０９ＣＦＵ／ｍＬの懸濁液の０．２ｍＬのアリコートを入れることにより作成された。最後の試験用懸濁液はテストに使用される前に攪拌された。最後のプレートにおける希釈度は１０−３，１０−４，及び１０−５であった。これらのプレートは、十分な成長が観察されるまで（表１）、３５°±２℃で培養された。
【００８５】
培養に続いて、プレートの上のコロニーが、手押し式のカウンタを使って手動でカウントされた。３０から３００ＣＦＵレンジの中の数が、計算に用いられた。
初期の細菌数（ＣＦＵ／ｍＬ）は、各試験用懸濁液について次のように計算された。
ＣＦＵ／ｍＬ＝（Ｃｉ×１０−Ｄ）
ここで、
Ｃｉ＝ カウントされた２プレートの平均
Ｄ ＝ 使用された培養菌数（プレートカウント）の希釈率
チューブの細菌数（ＣＦＵ／ｍＬ）、各試験用懸濁液について次のように計算された。
チューブの細菌数（ＣＦＵ／ｍＬ）＝（Ｃｉ×１０−Ｄ）／２
ここで、
Ｃｉ＝ カウントされた２プレートの平均
Ｄ ＝ 使用されたプレートカウントの希釈率
【００８６】
テストの手順は次の通りである。：３０ｍＬのミューラー・ヒントン・ブロスのアリコートが無菌のボトルに入れられた。３０ｍＬの生成物（１６０μｇ／ｍＬの初期濃度）のアリコートが、１１の一連の無菌ボトルの一番目に入れられた。それぞれは、３０ｍＬのミューラー・ヒントン・ブロスが入れられ、生成物の１：２（ｖ／ｖ）の希釈度を実現するために十分にかき混ぜられた。１本の３０ｍＬアリコートが上述のように用意されたボトルから取り除かれて、１：２（ｖ／ｖ）の希釈度に用いられ、残りの１０本のボトルが一連の希釈度のために使用された（製造時の希釈度が１：４，１：８，１：１６，１：３２，１：６４，１：１２８，１：２５６，１：５１２，１：１，０２４、及び１：２，０４８）。それぞれは３０ｍＬのミューラー・ヒントン・ブロスを含む。各ボトルは、次の一連の希釈度のために３０ｍＬアリコートが取り除かれる前に十分に混合された。用意された各製造時希釈度の１．０ｍＬアリコート、及び最初の製造調合剤（１６０μｇ／ｍＬの生成濃度）の１．０ｍＬアリコートは、分離された無菌のチューブに移された。それぞれが１．０ｍＬの製造時希釈度（１：４，１：８，１：１６，１：３２，１：６４，１：１２８，１：２５６，１：５１２，１：１，０２４、及び１：２，０４８）を含む１２のチューブが用意された。
【００８７】
最後の製造時希釈度が、１：２、１：４，１：８，１：１６，１：３２，１：６４，１：１２８，１：２５６，１：５１２，１：１，０２４、１：２，０４８及び１：４，０９６で、試験用微生物が約５．０×１０５ＣＦＵ／ｍＬをそれぞれ含む合成希釈試験管を得るために、約１．０×１０６ＣＦＵ／ｍＬを含む懸濁液の、１．０ｍＬアリコートが、各製造時希釈度の一連の試験管チューブに入れられた。これは、最後の生成濃度が８０μｇ／ｍＬから０．０３９μｇ／ｍＬの幅にあることを示している。上述した実験の手順は、各微生物（表１）のテストのために、各生成物につき２度実行された。１．０ｍＬのＭｕｅｌｌｅｒ−Ｈｉｎｔｏｎ Ｂｒｏｔｈ（ＭＨＢ）のアリコート、及び１．０ｍＬの試験用懸濁液のアリコートを含む積極的に成長制御を行う試験管が、各微生物（表１）のために用意された。また、微生物の接種が行われていない、無菌の、成長制御を行わない、ミューラー・ヒントン・ブロスの入った試験管も用意された。
【００８８】
各製造時希釈度の１．０ｍＬアリコートを、別に用意された無菌のテスト・チューブに移すことにより、各生成物について試験管の依存度を制御した。１．０ｍＬの無菌のＭｕｅｌｌｅｒ−Ｈｉｎｔｏｎ Ｂｒｏｔｈ（ＭＨＢ）のアリコートが、各製造時希釈度の試験管に入れられ、ボルテックミキサーを使用して十分に混合された。こうして、上述したものと同一の、最後の一連の製造時希釈度のものが出来た。試験用懸濁液／製造時希釈度の試験管、及び制御用試験管は、積極制御の試験管で良い成長が現れるまで、３５°±２℃で２０時間培養された。
【００８９】
培養に続いて、各チューブにおける微生物の成長が調べられた。濁り具合に基づいて目視で決定された。
【００９０】
各試験用微生物における各試料品の最小発育阻止濃度（ＭＩＣ）は、肉眼にて、微生物の成長を完全に抑制できた試料品の内、最高の希釈度が記録された。各試料品の各微生物に対する２つの結果は記録され、平均値が計算され、最終的な報告値が求められた。
【表１】
Figure 2005505588
【００９１】
表２は、各試料と１０の試験用微生物それぞれについて製造時希釈度として示された最小発育阻止濃度を示す。表３は、各試料と各１０の試験用微生物について製造時濃度（μｇ／ｍＬ）として示された最小発育阻止濃度を示す。各生成物の溶液の初期濃度は、１０００μｇ／ｍｇ、１６０μｇ／ｍＬの濃度を基準にしている。
【表２】
Figure 2005505588
【表３】
Figure 2005505588
【００９２】
さらなる研究で、悪性腫瘍の成長や転移に必要とされるマトリックス金属プロテアーゼ（ｍａｔｒｉｘ ｄｅｇｒａｄｉｎｇ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ，ＭＭＰｓ）の抑制剤としての、本発明におけるテトラサイクリンの誘導体の活性が調査された。その研究は、老齢の雄ラットの背部前立腺（ｄｏｓａｌ ｐｒｏｓｔａｔｅ）からのオリジナルな前立腺腫瘍から転移した、移植腫瘍からＣｏｐｅｎｈａｇｅｎラットに出来た、ＤｕｎｎｉｎｇのＭＡＴ ＬｙＬｕの腫瘍モデルを使用した。そのＭＡＴ ＬｙＬｕ腫瘍は、注入されるとリンパ節や肺に自然に転移し、受血動物の約８０−１００％で骨転移が生ずる。２％カルボキシメチルセルロースの中に１０ｍｇ／ｍｌの各テスト品を含有する、新鮮な服用液が毎日用意され、テストで使用された。
【００９３】
その研究は、最初は、腫瘍の無い５体の軟体動物のグループ２つ（２つのテトラサイクリン類似体（９−アミノ−ドキシサイクリンと、９−ニトロ−ドキシサイクリン）が、毎日４０ｍｇ／ｋｇの割合で７日間、それぞれに与えられた）について毒性を評価した。
【００９４】
３グループの動物（１グループ１０匹）は、３週間の間は毎日、そしてその後は、死ぬかsacrifice（犠牲になる）まで、毎週３度、基材か、又は前記２つの類似体の内の１つが、胃管栄養法（ｇａｖａｇｅ）により投薬された。投薬は、尾静脈への注入によりＭＡＴ ＬｙＬｕ腫瘍細胞の着床が見られるまでは７日間行った。約０．１ｍｌの腫瘍細胞懸濁液（ｔｕｍｏｒ ｃｅｌｌ ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ）が、外側尾静脈（ｌａｔｅｒａｌ ｔａｉｌ ｖｅｉｎｓ）の１つに注入された。選択される投薬は、２つの因子に基づく。（１）効き目、（２）前記類似体に関連のある病性。次の表（下の表４）は、非投与群及び投与群に関して生存時間と動物達の毎週の体重を示す。その表に示されるように、９−アミノ−ドキシサイクリン及び９−ニトロ−ドキシサイクリンは腫瘍着床後の生存数において著しい増加を示しているが、非投与群と比較しても体重の変化は見分けが付かないという結果になっている。
【表４】
Figure 2005505588
【００９５】
さらなる研究において、ＭＭＰｓの抑制活性が、種々のテトラサイクリン誘導体による種々の癌の阻害パーセントと同様に評価された。結果は、下記の表５−１〜７に示す。そして、本発明の治療の有効性を示す。その研究の１つの目的は、ＭＭＰ１，２，３，７，９，１４を含む、精製されたヒト・マトリックス・メタロプロテアーゼ（ｈｕｍａｎ ｍａｔｒｉｘ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ）の抑制剤として、一連のテトラサイクリン誘導体を評価することである。テトラサイクリン誘導体は、ｍＭ−μＭレンジにおいては効果的な抑制剤であった。
実験的プロトコル
１．テトラサイクリンによるＭＭＰ１（コラゲナーゼ−１）の抑制を測定するためのプロトコル
ＭＭＰ１活性は、１４Ｃアセチル化されたラット・スキンのＩ型コラーゲン（Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ ８０７１１，１９８１）からの、可溶性の１４Ｃで標識されたコラーゲン断片のリリースにより決定された。
分析成分；
１００μｇ １４Ｃで標識されたラット・スキンのＩ型コラーゲン（５−６０００ｄｐｍ）
５０ｍＭ トリス−塩酸（ｐＨ７．９）
１５ｍＭ ＣａＣｌ２，０．０２％ ａｚｉｄｅ
ヒト組換えＭＭＰ１，３−４ｎＭ
３００μｌのトータルボリュームの中の、±Ｔｅｔｒａｃｙｃｌｉｎｅ（１ｍＭ以上）
【００９６】
３５℃で５時間培養した。分解されていないコラーゲン線維（最初の１０分以内に形成される）が、１０，０００ｇ、４℃、１０分の遠心分離により取り除かれた。２００μｌの上澄みが、シンチレーション・カウンターを使ってパッカード・オプティ・フェーズ・スーパーミックス・シンチレーション液（Ｐａｃｋａｒｄ Ｏｐｔｉ Ｐｈａｓｅ Ｓｕｐｅｒｍｉｘ ｓｃｉｎｔｉｌｌａｔｉｏｎ ｆｌｕｉｄ）で測定された。分析の直線部分（１０−７０％ コラーゲン分解）から引き出したデータだけが使われた。ＭＭＰ１活性の抑制パーセントに基づき、各テトラサイクリンのためのＩＣ５０値が回帰分析により計算された。
２．ＭＭＰ２（Ｇｅｌａｔｉｎｅｓｅ Ａ）の抑制を測定するためのプロトコル
ＭＭＰ２活性は、１４Ｃアセチル化されたラット・スキンのＩ型ゼラチン（Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ ２４８，４７０，１９９５．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．１９５，１９８１）からの可溶性の断片、トリクロロ酢酸（ＴＣＡ）のリリースにより決定された。
分析成分；
１００μｇ １４Ｃで標識されたゼラチン（２０分間６０℃で変成されたＩ型コラーゲン）
５０ｍＭ トリス−塩酸（ｐＨ７．９）
１５ｍＭ ＣａＣｌ２，０．０２％ ａｚｉｄｅ
ヒト組換えＭＭＰ１，０．１−０．５ｎＭ
２５０μｌのトータルボリュームの中の、±Ｔｅｔｒａｃｙｃｌｉｎｅ（１ＭＭ以上）
【００９７】
３７℃で１６時間培養した。冷却すると共に、５０μｌの冷たい９０％（ｗ／ｖ）のトリクロロ酢酸を注意深くかき混ぜながら加えることにより反応を停止させた。４℃で１５分間のＴＣＡ沈殿（ＴＣＡ ｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｉｏｎ）が、１００００ｇ１０分４℃の遠心分離を行う前に行われた。２００μｌのＴＣＡの上澄みが、シンチレーション・カウンティング（パッカード・オプティ・フェーズ・スーパーミックス・シンチレーション液；Ｐａｃｋａｒｄ Ｏｐｔｉ Ｐｈａｓｅ Ｓｕｐｅｒｍｉｘ ｓｃｉｎｔｉｌｌａｔｉｏｎ ｆｌｕｉｄ）による放射能測定のために採取された。分析の直線部分（１０−７０％ コラーゲン分解）から引き出したデータだけが使われた。ＭＭＰ２活性の抑制パーセントが、回帰分析によりＩＣ５０値を引き出すためにプロットされた。
３．ＭＭＰ３（ストロメリシン１）の抑制を測定するためのプロトコル
ＭＭＰ３活性は、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ ２４８，４５１，（１９９５）にて説明されている、１４Ｃアセチル化されたβカゼイン（シグマ）からの可溶性の断片、トリクロロ酢酸（ＴＣＡ）のリリースにより決定された。
分析成分；
１００μｇ １４Ｃ カゼイン（７０００ｄｐｍ）
５０ｍＭ トリス−塩酸（ｐＨ７．９）
１５ｍＭ ＣａＣｌ２，０．０２％ ａｚｉｄｅ
ヒト組換えＭＭＰ３，０．２５−１．０ｎＭ
２５０μｌのトータルボリュームの中の、±Ｔｅｔｒａｃｙｃｌｉｎｅ（１ｍＭ以上）
【００９８】
３７℃で１６時間培養した。５００μｌの冷たい１８％ＴＣＡを加えて、氷に１５分間乗せることにより反応は停止した。ＴＣＡ沈殿（ＴＣＡ ｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｉｏｎ）が、１００００ｇ、４℃で１０分の遠心分離により取り除かれた。２００μｌの上澄みが、シンチレーション・カウンティングのために採取された。分析の直線部分（１０−６０％ コラーゲン分解）から引き出したデータだけが使われた。ＭＭＰ３活性の抑制パーセントが、回帰分析によりＩＣ５０値を引き出すためにプロットされた。
４．ＭＭＰ７（マトリライシン）の抑制を測定するためのプロトコル
ＭＭＰ７活性は、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ ２４８，４５１，（１９９５）にて説明されている、１４Ｃアセチル化されたβカゼイン（シグマ）からの可溶性の断片、トリクロロ酢酸（ＴＣＡ）のリリースにより決定された。
分析成分；
１００μｇ １４Ｃ カゼイン（７０００ｄｐｍ）
５０ｍＭ トリス−塩酸（ｐＨ７．９）
１５ｍＭ ＣａＣｌ２，０．０２％ ａｚｉｄｅ
ヒト組換えＭＭＰ７，１．５ｎＭ
２５０μｌのトータルボリュームの中の、±Ｔｅｔｒａｃｙｃｌｉｎｅ（１ｍＭ以上）
【００９９】
３７℃で１６時間培養した。５００μｌの冷たい１８％ＴＣＡを加えて、氷に１５分間乗せることにより反応は停止した。ＴＣＡ沈殿（ＴＣＡ ｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｉｏｎ）が、１００００ｇ、４℃で１０分の遠心分離により取り除かれた。２００μｌの上澄みが、シンチレーション・カウンティングのために採取された。分析の直線部分（１０−６０％ コラーゲン分解）から引き出したデータだけが使われた。ＭＭＰ７活性の抑制パーセントが、ＩＣ５０値を引き出すためにプロットされた。
５．ＭＭＰ９（ゼラチナーゼ Ｂ）の抑制を測定のためのプロトコル
ＭＭＰ９活性は、１４Ｃアセチル化されたラット・スキンのＩ型（Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ ２４８，４７０，１９９５．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．１９５，１９８１）からの可溶性の断片、トリクロロ酢酸（ＴＣＡ）のリリースにより決定された。
分析成分；
１００μｇ １４Ｃで標識されたゼラチン（２０分間６０℃で変成されたコラーゲン）
５０ｍＭ トリス−塩酸（ｐＨ７．９）
１５ｍＭ ＣａＣｌ２，０．０２％ ａｚｉｄｅ
ヒト組換えＭＭＰ９，１．２−２ｎＭ
２５０μｌのトータルボリュームの中の、±Ｔｅｔｒａｃｙｃｌｉｎｅ（１ＭＭ以上）
【０１００】
３７℃で１６時間培養した。その培養は、冷却しつつ、５０μｌの冷たい９０％（ｗ／ｖ）のトリクロロ酢酸を注意深くかき混ぜながら加えることにより停止した。１５分４℃のＴＣＡ沈殿（ＴＣＡ ｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｉｏｎ）が行われ、次に１００００ｇ１０分４℃の遠心分離を行った。２００μｌのＴＣＡの上澄みが、シンチレーション・カウンティング（パッカード・オプティ・フェーズ・スーパーミックス・シンチレーション液；Ｐａｃｋａｒｄ Ｏｐｔｉ Ｐｈａｓｅ Ｓｕｐｅｒｍｉｘ ｓｃｉｎｔｉｌｌａｔｉｏｎ ｆｌｕｉｄ）による放射能測定のために採取された。分析の直線部分（１０−７０％ コラーゲン分解）から引き出したデータだけが使われた。ＭＭＰ９活性の抑制パーセントが、ＩＣ５０値を引き出すためにプロットされた。
６．テトラサイクリン誘導体によるＭＭＰ１４（ＭＴＩ−ＭＭＰ）の抑制を測定するためのプロトコル
ＭＭＰ１４活性は、１４Ｃアセチル化されたラット・スキンのＩ型コラーゲン（Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ ８０，７１１，１９８１）からの可溶性の１４Ｃで標識されたコラーゲン断片のリリースにより決定された。
分析成分；
１００μｇ １４Ｃで標識されたコラーゲン（５−６０００ｄｐｍ）
５０ｍＭ トリス−塩酸（ｐＨ７．９）
１５ｍＭ ＣａＣｌ２，０．０２％ ａｚｉｄｅ
ヒト組換えＭＭＰ１４，５０−１００ｎＭ
２５０μｌのトータルボリュームの中の、±Ｔｅｔｒａｃｙｃｌｉｎｅ（１ＭＭ以上）
【０１０１】
３５℃で１５時間培養した。分解されていないコラーゲン線維（最初の１０分以内に形成される）が、１０，０００ｇ、４℃、１０分の遠心分離により取り除かれた。２００μｌの上澄みが、シンチレーション・カウンターを使ってパッカード・オプティ・フェーズ・スーパーミックス・シンチレーション液（Ｐａｃｋａｒｄ Ｏｐｔｉ Ｐｈａｓｅ Ｓｕｐｅｒｍｉｘ ｓｃｉｎｔｉｌｌａｔｉｏｎ ｆｌｕｉｄ）にて測定された。分析の直線部分（１０−７０％ コラーゲン分解）から引き出したデータだけが使われた。ＭＭＰ１活性の抑制パーセントに基づき、各テトラサイクリンのためのＩＣ５０値が計算された。
【０１０２】
別の目的は、テトラサイクリン誘導化合物（ｔｅｔｒａｃｙｃｌｉｎｅ ｄｅｒｉｖｅｄ ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ）の効果を、生体外での化学浸潤ポテンシャルにおいて分析することであった。
Ｃ８１６１ ヒトメラノーマ細胞
ＭＤＡ−ＭＢ−２３１ ヒト乳癌細胞
ＰＣ３ ヒト前立腺癌細胞
ＲＰＭ１８２２６ ヒト骨髄腫癌細胞
Ａｒｋ ヒト骨髄癌細胞
Ａｒｐ−１ ヒト骨髄癌細胞
【０１０３】
膜浸潤培養システム（Ｍｅｍｂｒａｎｅ Ｉｎｖａｓｉｏｎ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｓｙｓｔｅｍ；ＭＩＣＳ）の、生体外での化学浸潤分析（ｃｈｅｍｏ−ｉｎｖａｓｉｏｎ ａｓｓａｙ）は、テトラサイクリン誘導化合物（ｔｅｔｒａｃｙｃｌｉｎｅ ｄｅｒｉｖｅｄ ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ）に応答する、ヒト癌細胞の浸潤ポテンシャルの変化を測定するために選ばれた。各合成物の標準溶液（Ｓｔｏｃｋ ｓｏｌｕｔｉｏｎ）は、２％のＤＭＳＯを含むｐＨ１０．０の水に水和された。可溶化することにより、７．５−８．０のｐＨにするために、その溶液に塩酸が加えられた。この溶液は、ホイルでラップされて、分析の２４時間の間、４℃に保持された。各分析のために、フレッシュな合成物が用意された。腫瘍細胞侵襲性（ｔｕｍｏｒ ｃｅｌｌ ｉｎｖａｓｉｖｅｎｅｓｓ）のための生体外化学浸潤解析（ｃｈｅｍｏｉｎｖａｓｉｏｎ ａｎａｌｙｓｅｓ）が、上述したＭＩＣＳを使って行われる。
ＭＩＣＳシステムは、熱的に処理されたプラスチック・マニフォールド・システムであり、直径が１３ｍｍの、１４個のウェル（ｗｅｌｌｓ）を有するプレート２枚を合わせたものである。これらのプレートの間に挟まれるのはポリカーボネート・フィルターである。そのフィルターは、１０μｍの細孔を有し、ＭＩＣＳのウェル（ｗｅｌｌｓ）のトップとボトム・セクションとの間に３５μｍ厚さのバリアを形成するヒト・ラミニン／コラーゲンＩＶ／ゼラチンからなる所定の基質で被覆されている。このバリアを所々に配置する前に、下方のウェルを０．４５μｍの無菌フィルターにより濾過されるか、遠心分離されることにより、細胞及び細胞片が除去された人間の繊維芽細胞を、２日間培養することにより得られた培地に調整された、作られた５０％の無血清ＲＰＭＩ培地で満たす。その後、バリアは、下方のウェル上に配置され、フレッシュな無血清培地は、システムの組み立て後に上方のウェルに付加された。５万個の腫瘍細胞が合成物の存在する、又は、ＤＭＳＯ媒質（制御用）のウェル（ｗｅｌｌｓ）に加えられた。それぞれのマニフォールドの１２の組み合わせウェルの内、無作為に抽出されたいずれか３個のウェル（ｗｅｌｌｓ）は制御用として機能し、３個のウェル（ｗｅｌｌｓ）は合成物の１μｇ／ｍｌを受け取り、３個のウェル（ｗｅｌｌｓ）は１０μｇ／ｍｌを受け取り、３個のウェル（ｗｅｌｌｓ）は２５μｇ／ｍｌを受け取る。２４時間後、細胞と媒地は下方のウェルから取り除かれ、２ｍＭ ＥＤＴＡの付加されたリン酸塩により置き換えられた。この溶液は下方のウェルから全ての細胞を取り除くために使用された。この洗浄は、同じウエルから回収された細胞と培地に対しても行われる。これらのサンプルはＤｏｔ−Ｂｌｏｔマニフォルドシステムを使用する３μｍの細孔を含むポリカーボネイト薄膜を有するポリリシン（polylysine）上に集められる。これらの収集フィルターはメタノール内に固定され、現場でＷｒｉｇｈｔ染色（Leukostat staininig kit）を用いて染色される。これらのフィルターは（細孔からの光の反射を減少させる）顕微鏡浸潤オイルを用いて、顕微鏡のスライド上にマウントされ、５つの顕微鏡視野が集計され、２４時間以上の期間で薄膜を介して進入した細胞の数を計算する。これらの数は、以下に議論するように、統計的に分析された。
【表５−１】
Figure 2005505588
【表５−２】
Figure 2005505588
【表５−３】
Figure 2005505588
【表５−４】
Figure 2005505588
【表５−５】
Figure 2005505588
【表５−６】
Figure 2005505588
【表５−７】
Figure 2005505588
表５−１〜７の化合物
１； ９−ニトロ−６−デオキシ−５−ヒドロキシテトラサイクリン Ｈ２ＳＯ４
２； ９−アミノ−６−デオキシ−５−ヒドロキシテトラサイクリン Ｈ２ＳＯ４
３； ９−イソプロピルアミノ−６−デオキシ−５−ヒドロキシテトラサイクリン Ｈ２ＳＯ４
４； ７−ジメチルアミノ−６−ジメチル−６−デオキシ−９−ニトロテトラサイクリン Ｈ２ＳＯ４
５； ２と同じ
６； ９−アジド−６−デオキシ−５−ヒドロキシテトラサイクリン Ｈ２ＳＯ４
７； ９−アミノ−７−ジメチルアミノ−６−ジメチル−６−デオキシテトラサイクリン Ｈ２ＳＯ４
８； ９−アセトアミド−７−ジメチルアミノ−６−ジメチル−６−デオキシテトラサイクリン Ｈ２ＳＯ４
９； ７−ジメチルアミノ−６−ジメチル−６−デオキシテトラサイクリン−９−ジアゾニウム Ｈ２ＳＯ４ ＨＣｌ
１０； ９−アジド−７−ジメチルアミノ−６−ジメチル−６−デオキシテトラサイクリン Ｈ２ＳＯ４
１１； ６−デオキシ−５−ヒドロキシテトラサイクリン−９−ジアゾニウム Ｈ２ＳＯ４
１２； ７−アミノ−６−デオキシ−５−ヒドロキシテトラサイクリン Ｈ２ＳＯ４
１３； ７，９−ジブロモ−６−ジメチル−６−デオキシテトラサイクリン Ｈ２ＳＯ４
１４； ７−アミノ−６−デオキシ−５−ヒドロキシ−９−ニトロテトラサイクリン Ｈ２ＳＯ４
１５； ７−ジメチルアミノ−６−デオキシ−５−ヒドロキシ−テトラサイクリン Ｈ２ＳＯ４
１６； ９−アセトアミド−６−デオキシ−５−ヒドロキシテトラサイクリン Ｈ２ＳＯ４
１７； ７−ジ−ｎ−ブチルアミノ−６−デオキシ−５−ヒドロキシテトラサイクリン Ｈ２ＳＯ４
１８； ７−ジ−ｎ−ヘキシルアミノ−６−デオキシ−５−ヒドロキシテトラサイクリン Ｈ２ＳＯ４
１９； ７−ジ−（３，３−ジメチルブチル）アミノ−６−デオキシ−５−ヒドロキシテトラサイクリン Ｈ２ＳＯ４
２０； ７−アジド−６−デオキシ−５−ヒドロキシテトラサイクリン Ｈ２ＳＯ４
２１； ６−デオキシ−５−ヒドロキシテトラサイクリン−７−ジアゾニウム Ｈ２ＳＯ４
２２； ７−アセトアミド−９−ニトロ−６−デオキシ−５−ヒドロキシテトラサイクリン Ｈ２ＳＯ４
２３； ７−アセトアミド−６−デオキシ−５−ヒドロキシテトラサイクリン Ｈ２ＳＯ４
２４； ７−ジ−ｎ−プロピルアミノ−６−デオキシ−５−ヒドロキシテトラサイクリン Ｈ２ＳＯ４
２５； ７−イソブチルアミノ−６−デオキシ−５−ヒドロキシテトラサイクリン Ｈ２ＳＯ４
２６； ７−アセトアミド−９−アミノ−６−デオキシ−５−ヒドロキシテトラサイクリン Ｈ２ＳＯ４
２７； ７−イソブチルメチルアミノ−６−デオキシ−５−ヒドロキシテトラサイクリン Ｈ２ＳＯ４
２８； ６−デオキシ−５−アセトキシ−テトラサイクリン Ｈ２ＳＯ４
２９； ７−アセチルイソブチルアミノ−６−デオキシ−５−ヒドロキシテトラサイクリン Ｈ２ＳＯ４
３０； ７−アセトアミド−６−デオキシ−５−ヒドロキシテトラサイクリン−９−ジアゾニウム Ｈ２ＳＯ４
３１； ７−ジメチルアミノ−６−デオキシ−５−ヒドロキシテトラサイクリン−９−ジアゾニウム Ｈ２ＳＯ４
３２； ７−サイクロブチルアミノ−６−デオキシ−５−ヒドロキシテトラサイクリン Ｈ２ＳＯ４
３３； ７−サイクロブチルメチルアミノ−６−デオキシ−５−ヒドロキシテトラサイクリン Ｈ２ＳＯ４
３４； ４−Ｄｅｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏ−６−デオキシ−５−ヒドロキシテトラサイクリン
３５； ４−Ｄｅｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏ−６−デオキシ−５−ヒドロキシテトラサイクリン
３６； ９−アミノ−４−ｄｅｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏ−６−デオキシ−５−ヒドロキシテトラサイクリン 硫酸
３７； ４−Ｄｅｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏ−６−デオキシ−５−ヒドロキシテトラサイクリン−９−ジアソニウム 硫酸
３８； ７−ニトロ−９−ｔｅｒｔブチル−６−デオキシ−５−ヒドロキシテトラサイクリン Ｈ２ＳＯ４
３９； ９−ｔｅｒｔブチル−６−デオキシ−５−ヒドロキシテトラサイクリン Ｈ２ＳＯ４
４０； ７−ニトロ−９−ｔｅｒｔブチル−４−ｄｅｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏ−６−デオキシ−５−ヒドロキシテトラサイクリン Ｈ２ＳＯ４
４１； ４−Ｄｅｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏ−７−ジメチルアミノ−６−ジメチル−６−デオキシテトラサイクリン Ｈ２ＳＯ４
４２； ７−アセチルアミノ−９−アジド−６−デオキシ−５−ヒドロキシテトラサイクリン
４３； ９−ｔｅｒｔブチル−６−デオキシ−５−ヒドロキシテトラサイクリン−７−ジアゾニウム Ｈ２ＳＯ４
４４； ７−アミノ−９−ｔｅｒｔブチル−６−デオキシ−５−ヒドロキシテトラサイクリン Ｈ２ＳＯ４
４５； ７−アジド−ｔｅｒｔブチル−６−デオキシ−５−ヒドロキシテトラサイクリン Ｈ２ＳＯ４
４６； ６−デオキシ−５−ヒドロキシテトラサイクリン−４−ヨウ化メチル
４７； ７−（１，２−ｂｅｎｚｙｌｃａｒｂｏｘｙｈｙｄｒａｚｉｎｅ）−６−デオキシ−５−ヒドロキシテトラサイクリン ＨＣｌ
４８； ４−Ｄｅｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏ−７−アミノ−６−デオキシ−５−ヒドロキシテトラサイクリン Ｈ２ＳＯ４
４９； ７−アミノ−９−ｔｅｒｔブチル−４−ｄｅｄｉｍｅｔｈｙｌ−６−デオキシ−５−ヒドロキシテトラサイクリン Ｈ２ＳＯ４
５０； ４−Ｄｅｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏ−９−ｔｅｒｔブチル−６−デオキシ−５−ヒドロキシテトラサイクリン−７−ジアゾニウム Ｈ２ＳＯ４
５１； ９−（４−フルオロフェニル）−６−デオキシ−５−ヒドロキシテトラサイクリン
５２； ４−エピ−クロロテトラサイクリン 塩酸
５３； ６−Ｄｅｄｉｍｅｔｈｙｌ−６−デオキシテトラサイクリン ＨＣｌ
【０１０４】
一般的な実施例に関して本発明が述べられてきたが、その発明の多くの構成や変更は当業者にとって明白である。添付した特許請求の範囲や本発明は、そのような構成や変更の全てをカバーしていると解釈されるべきである。

Claims (6)

  1. 一般的な化学式、すなわち、
    Figure 2005505588
    からなるテトラサイクリン合成物又はその塩を効果的な量だけ治療を必要とする対象物に投与することを含む、細菌や腫瘍の成長を抑制する治療方法。
    Ｒは、ＣＨ２Ｎ（ＲａＲｂ）か、
    Figure 2005505588
    から選択される。
    ＲａＲｂはＣ１〜Ｃ６のアルキル；
    ＲＣ及びＲｄは（ＣＨ２）ｎＣＨＲｅ、ｎは０又は１、Ｒｅは、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６のアルキル、又はＮＨ２、そしてＸは、ＮＨ、Ｓ又はＣＨ２；
    Ｒ１はＨ又はＯＨ；
    Ｒ２はＨ、ＯＨ，＝Ｏ、又はＯＣＯＲ８、ここで、Ｒ８はＣ１〜Ｃ６のアルキル、
    或いは、Ｒ２はＮ（Ｒ９）２、ここで、Ｒ９は水素、又はＣ１〜Ｃ６の低級アルキル、又は、
    Ｒ２がケト（ｋｅｔｏ）又はＮ（Ｒ９）２のときに、Ｒ３及びＲ４はＨ又はＣＨ３であり、Ｒ３及びＲ４が両方ＣＨ３又はＨでないという条件付きでＲ９ＣＯである。
    ５ａ水素はαかβである。
    Ｒ３及びＲ４はＨ、ＣＨ３又はＦであり、Ｒ３がＣＨ３のときＲ４はＨ又はＦであり、Ｒ４がＣＨ３のときＲ３はＨ又はＦであり、Ｒ４及びＲ５の両方がＦでないという条件が付く。
    Ｒ５及びＲ７はハロゲン、Ｈ、ＮＯ２、Ｎ３、Ｎ２ ＋、Ｃ２Ｈ５ＯＣ（Ｓ）Ｓ−、ＣＮ、ＮＲ１０Ｒ１１である。ここで、Ｒ１０及びＲ１１はＨ、Ｃ１〜Ｃ１０のアルキル、及びＲ１２（ＣＨ２）ｎＣＯ−である。ここで、ｎは０〜５であり、Ｒ９はＨ、ＮＨ２、直鎖、分枝、又は環化されたＣ１〜Ｃ１０のアルキル基から選ばれたモノ又は二置換のアミノ。Ｒ１０及びＲ１１の両方がＲ１２（ＣＨ２）ｎＣＯ−でないという条件付きで。
    Ｒ７は第３ブチル（ｔｅｒｔｉａｒｙ ｂｕｔｙｌ）でもよく、Ｒ６はハロゲン、アセチレン、Ｒ１３−Ｃ６Ｈ５である。ここで、Ｒ１３はＮＯ２、ハロゲン、アセチルアミノ、アミノ、フェニル、アルキル又はアルコキシである。
  2. 一般的な化学式、すなわち、
    Figure 2005505588
    からなるテトラサイクリン合成物又はその塩を効果的な量だけ治療を必要とする対象物に投与することを含む、細菌や腫瘍の成長を抑制する治療方法。
    Ｒは、ＣＨ２Ｎ（ＲａＲｂ）か、
    Figure 2005505588
    から選択される。
    ＲａＲｂはＣ１〜Ｃ６のアルキル；
    ＲＣ及びＲｄは（ＣＨ２）ｎＣＨＲｅ、ｎは０又は１、Ｒｅは、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６のアルキル、又はＮＨ２、そしてＸは、ＮＨ、Ｓ又はＣＨ２
    Ｒ１はＨ又はＯＨ；
    Ｒ２はＨ又はＯＨ；
    Ｒ３はＨ又はＣＨ３；
    Ｒ４及びＲ６はハロゲン、Ｈ、ＮＯ２、Ｎ３、Ｎ２ ＋、Ｃ２Ｈ５ＯＣ（Ｓ）Ｓ−、ＣＮ、ＮＲ７Ｒ８である。ここで、Ｒ７及びＲ８はＨ、Ｃ１〜Ｃ１０のアルキル、及びＲ９（ＣＨ２）ｎＣＯ−である。ここで、ｎは０〜５であり、Ｒ９はＨ、ＮＨ２、直鎖、分枝、又は環化されたＣ１〜Ｃ１０のアルキル基から選ばれたモノ又は二置換のアミノ。Ｒ７及びＲ８の両方がＲ９（ＣＨ２）ｎＣＯ−でないという条件付きで。
    Ｒ６はＨ、ハロゲン、アセチレン、Ｒ１０−Ｃ６Ｈ５である。ここで、Ｒ１０はＮＯ２、ハロゲン、アセチルアミノ、アミノ、フェニル、アルキル又はアルコキシである。
  3. 一般的な化学式、すなわち、
    Figure 2005505588
    からなるテトラサイクリン合成物又はその塩を効果的な量だけ治療を必要とする対象物に投与することを含む、細菌や腫瘍の成長を抑制する治療方法。
    Ｒは、ＣＨ２Ｎ（ＲａＲｂ）か、
    Figure 2005505588
    から選択される。
    ＲａＲｂはＣ１〜Ｃ６のアルキル；
    ＲＣ及びＲｄは（ＣＨ２）ｎＣＨＲｅ、ｎは０又は１、Ｒｅは、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６のアルキル、又はＮＨ２、そしてＸは、ＮＨ、Ｓ又はＣＨ２
    Ｒ１及びＲ２はＨ又はＮ（Ｒ９）２である。ここで、Ｒ１及びＲ２の両方がＮ（Ｒ９）２でないという条件付きで、Ｒ９はＨ、又はＣ１〜Ｃ６のアルキルである。Ｒ１及びＲ２はＮ（Ｒ１０）３Ｉでも良い。また、Ｒ１及びＲ２が共にＮ（Ｒ１０）３Ｉでないという条件付きでＲ１０がＣ１〜Ｃ６のアルキルである。
    Ｒ３はＨである；
    Ｒ４及びＲ５はＨ、ＣＨ３又はＦであり、Ｒ４がＣＨ３のときＲ５はＨ又はＦであり、Ｒ５がＣＨ３のときＲ４はＨ又はＦであり、Ｒ４及びＲ５の両方がＦでないという条件が付く。
    Ｒ６及びＲ８はハロゲン、Ｈ、ＮＯ２、Ｎ３、Ｎ２ ＋、Ｃ２Ｈ５ＯＣ（Ｓ）Ｓ−、ＣＮ、ＮＲ１１Ｒ１２である。ここで、Ｒ１１及びＲ１２はＨ、Ｃ１〜Ｃ１０のアルキル、及びＲ１３（ＣＨ２）ｎＣＯ−である。ここで、ｎは０〜５であり、Ｒ１３はＨ、ＮＨ２、直鎖、分枝、又は環化されたＣ１〜Ｃ１０のアルキル基から選ばれたモノ又は二置換のアミノ。Ｒ１０及びＲ１１の両方がＲ１２（ＣＨ２）ｎＣＯ−でないという条件付きで。
    Ｒ８は第３ブチル（ｔｅｒｔｉａｒｙ ｂｕｔｙｌ）でも良く、Ｒ７は水素かハロゲンである。
  4. 一般的な化学式、すなわち、
    Figure 2005505588
    からなるテトラサイクリン合成物又はその塩を効果的な量だけ治療を必要とする対象物に投与することを含む、細菌や腫瘍の成長を抑制する治療方法。
    Ｒは、ＣＨ２Ｎ（ＲａＲｂ）か、
    Figure 2005505588
    から選択される。
    ＲａＲｂはＣ１〜Ｃ６；
    ＲＣ及びＲｄは（ＣＨ２）ｎＣＨＲｅ、ｎは０又は１、Ｒｅは、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６のアルキル、又はＮＨ２、そしてＸは、ＮＨ、Ｓ又はＣＨ２
    Ｒ１及びＲ２はＨ又はＮ（Ｒ９）２である。ここで、Ｒ９は水素、又はＣ１〜Ｃ６の低級アルキルであり、Ｒ１及びＲ２の両方をＮ（Ｒ９）２にできないという条件が付く。
    Ｒ３はＨ、ＯＨ，＝Ｏ、又はＯＣＯＲ１０、ここで、Ｒ１０はＣ１〜Ｃ６、
    或いは、Ｒ３はＮ（Ｒ９）２、ここで、Ｒ９は水素、又はＣ１〜Ｃ６、
    Ｒ２３が＝Ｏ又はＮ（Ｒ９）２のとき、Ｒ４及びＲ５はＨ又はＣＨ３であり、Ｒ４及びＲ５が共にＣＨ３又はＨでないという条件が付く。
    ５ａ水素はα又はβである。
    Ｒ４及びＲ５はＨ、ＣＨ３又はＦであり、Ｒ４がＣＨ３のときＲ５はＨ又はＦであり、Ｒ５がＣＨ３のときＲ４はＨ又はＦであり、Ｒ４及びＲ５の両方がＦでないという条件が付く。
    Ｒ６及びＲ８はハロゲン、Ｈ、ＮＯ２、Ｎ３、Ｎ２ ＋、Ｃ２Ｈ５ＯＣ（Ｓ）Ｓ−、ＣＮ、ＮＲ１０Ｒ１１である。ここで、Ｒ１０及びＲ１１はＨ、Ｃ１〜Ｃ１０のアルキル、及びＲ１２（ＣＨ２）ｎＣＯ−である。ここで、ｎは０〜５であり、Ｒ１２はＨ、ＮＨ２、直鎖、分枝、又は環化されたＣ１〜Ｃ１０の基から選ばれたモノ又は二置換のアミノ。Ｒ１０及びＲ１１の両方がＲ１２（ＣＨ２）ｎＣＯ−でなく、又はＲ８が第３ブチル（ｔｅｒｔｉａｒｙ ｂｕｔｙｌ）であるという条件付きで。
    Ｒ７はＨ、ハロゲン、アセチレン、Ｒ１２−Ｃ６Ｈ５である。ここで、Ｒ１２はＮＯ２、ハロゲン、アセチルアミノ、アミノ、フェニル、アルキル又はアルコキシである。
  5. 一般的な化学式、すなわち、
    Figure 2005505588
    からなるテトラサイクリン合成物又はその塩を効果的な量だけ治療を必要とする対象物に投与することを含む、細菌や腫瘍の成長を抑制する治療方法。
    ここで、Ｒ１はＨ又はＮ（ＣＨ３）２；Ｒ２はＨ、ＣＨ３、又はＯＣＯＣＨ３；Ｒ３はＨ又はＣＨ３；Ｒ４はＨ；Ｒ５はＨ、Ｎ（ＣＨ３）２、ＮＨ２、Ｎ（Ｃ４Ｈ９）２、Ｎ（Ｃ６Ｈ１３）２、Ｎ（３，３−ｄｉｍｅｔｈｙｌｂｕｔｙｌ）２、Ｎ３、Ｎ２ ＋、ＮＯ２、ＮＨＣＯＣＨ３、ＮＨ（ｎ−ｐｒｏｐｙｌ）２、ＮＨ−ｉｓｏｂｕｔｙｌ、ＮＨ−ｉｓｏｂｕｔｙｌｍｅｔｈｙｌ，ＮＨ（ｃｙｃｌｏｂｕｔｙｌ），ＮＨ（ｃｙｃｌｏｂｕｔｙｌ ｍｅｔｈｙｌ）；そして、Ｒ６はＨ，ＮＯ２，ＮＨ２，（ＣＨ３）２ＣＨＮＨ，Ｎ３，ＮＨＣＯＣＨ３，Ｎ２ ＋，Ｎ３，又は（ＣＨ３）３Ｃである。
  6. 一般的な化学式、すなわち、
    Figure 2005505588
    からなるテトラサイクリン合成物又はその塩を効果的な量だけ治療を必要とする対象物に投与することを含む、細菌や腫瘍の成長を抑制する治療方法。
    ここで、Ｒ１はＨ又はＮ（ＣＨ３）２；Ｒ２はＨ、ＯＨ、又はＯＣＯＣＨ３；Ｒ３はＨ又はＣＨ３；Ｒ４はＨ；Ｒ５はＨ、Ｎ（ＣＨ３）２、Ｎ（Ｃ４Ｈ９）２、Ｎ（Ｃ６Ｈ１３）２、Ｎ（３，３−ｄｉｍｅｔｈｙｌｂｕｔｙｌ）２；Ｎ３，Ｎ２ ＋，ＮＯ２，ＮＨＣＯＣＨ３，ＮＨ（ｎ−ｐｒｏｐｙｌ）２，ＮＨ−ｉｓｏｂｕｔｙｌ，ＮＨ−ｉｓｏｂｕｔｙｌｍｅｔｈｙｌ，Ｎ（ＣＨ３ＣＯ）（ｉｓｏｂｕｔｙｌ），ＮＨ（ｃｙｃｌｏｂｕｔｙｌ），ＮＨ（ｃｙｃｌｏｂｕｔｙｌ ｍｅｔｈｙｌ），又はＮＨ２；そして、Ｒ６はＨ，ＮＯ２，ＮＨ２，（ＣＨ３）２ＣＨＮＨ，Ｎ３，ＮＨＣＯＣＨ３，Ｎ２ ＋，又は（ＣＨ３）３Ｃである。
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