JP2005348742A - 核酸解析方法 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】解析対象核酸の抽出工程、増幅工程、及び検出工程を含む核酸解析方法において、各工程毎に検出対象核酸とは識別検出可能な一種類以上の内部標準核酸を各工程の実施前に試料に添加した後に各工程を実施し、核酸検出工程における各内部標準核酸の検出結果から各工程の成否を判定し、さらには該判定結果に基づき再解析を実施する核酸解析方法。該各工程前に添加される内部標準核酸は相互に識別可能である。
【選択図】図2
Description
(b)上記工程(a)において抽出された核酸を含有する試料に、上記解析対象核酸及び抽出用内部標準核酸と識別して検出可能な1種類以上の検出用内部標準核酸を添加した後に核酸を検出する核酸検出工程、及び、
(c)核酸検出工程における上記の各内部標準核酸の検出結果から上記各工程の成否を判定する工程、
を含むことを特徴とする、核酸解析方法を提供する。
(a)解析対象核酸を含有する試料に、解析対象核酸と同時に増幅可能であるが、該解析対象核酸と識別して検出可能な1種類以上の抽出用内部標準核酸を添加した後に核酸を抽出する核酸抽出工程、
(b)上記工程(a)において抽出された核酸を含有する試料に、上記解析対象核酸及び上記抽出用内部標準核酸と同時に増幅可能であるが、上記解析対象核酸及び上記抽出用内部標準核酸と識別して検出可能な1種類以上の増幅用内部標準核酸を添加した後に核酸を増幅する核酸増幅工程、
(c)上記工程(b)において増幅された核酸を含有する試料に、上記解析対象核酸、抽出用内部標準核酸、及び検出用内部標準核酸のいずれとも互いに識別して検出可能な1種類以上の検出用内部標準核酸を添加した後に核酸を検出する核酸検出工程、及び
(d)核酸検出工程における上記の各内部標準核酸の検出結果から上記各工程の成否を判定する工程、
を含むことを特徴とする、核酸解析方法を提供する。
(i)抽出用内部標準核酸及び/又は抽出用内部標準核酸を含む抽出用試薬、及び
(ii)検出用内部標準核酸及び/又は検出用内部標準核酸を含む検出用試薬、を含むことを特徴とするキットを提供する。
(i)抽出用内部標準核酸及び/又は抽出用内部標準核酸を含む抽出用試薬、
(ii)検出用内部標準核酸及び/又は検出用内部標準核酸を含む検出用試薬、及び
(iii)増幅用内部標準核酸及び/又は増幅用内部標準核酸を含む増幅用試薬、
を含むことを特徴とするキットを提供する。
人の血液やその他の体液、組織または細胞、細菌、ウイルスなどの解析対象核酸を含む試料に、抽出用内部標準核酸及び/又は抽出用内部標準核酸を含む抽出用試薬を試料に添加した後、解析対象核酸および抽出用内部標準核酸を同時に抽出する工程を実施し、次に、検出用内部標準核酸及び/又は検出用内部標準核酸を含む検出用試薬を得られた核酸に添加した後、解析対象核酸、抽出用内部標準核酸、及び検出用内部標準核酸をそれぞれ識別して検出する工程を実施し、各内部標準核酸の検出結果から前述のケースに従って各工程の成否を判定し、判定結果に基づいて該抽出工程又は核酸検出工程から、再実施を行う。
図6は、解析対象核酸を含む試料に解析対象核酸と少なくとも一塩基以上配列が異なる一定量の抽出用内部標準核酸と、解析対象核酸及び抽出用内部標準核酸と少なくとも一塩基以上配列が異なる一定量の検出用内部標準核酸を用いて、一塩基以上配列の異なる核酸を識別検出可能な核酸検出工程としてゲル電気泳動を用いた一本鎖DNA高次構造多型(SSCP)を実施した時の電気泳動クロマトグラムの例である。SSCPはキャピラリー電気泳動装置を用いて、それぞれ蛍光標識した対象核酸、抽出用ICと検出用ICをレーザーで励起し、CCDカメラで蛍光スペクトルを測定した。
Claims (11)
- 解析対象核酸の抽出工程及び検出工程を含む核酸解析方法において、
解析対象核酸と識別して検出可能な1種類以上の抽出用内部標準核酸を添加した後に核酸を抽出すること、及び上記検出工程による上記内部標準核酸の検出結果から抽出工程の成否を判定することを含む、核酸解析方法。 - 解析対象核酸の抽出工程及び検出工程を含む核酸解析方法において、
解析対象核酸及び相互に識別して検出可能な1種類以上の抽出用内部標準核酸及び検出用内部標準核酸を添加した後に上記抽出工程及び検出工程を行うこと、そして上記検出工程による上記内部標準核酸の検出結果から抽出工程及び検出工程の成否を判定することを含む、核酸解析方法。 - 解析対象核酸の抽出工程、増幅工程及び検出工程を含む核酸解析方法において、
解析対象核酸及び相互に識別して検出可能な1種類以上の抽出用内部標準核酸、増幅用内部標準核酸及び検出用内部標準核酸を添加した後に上記抽出工程及び検出工程を行うこと、そして上記検出工程による上記内部標準核酸の検出結果から抽出工程及び検出工程の成否を判定することを含む、核酸解析方法。 - 解析対象核酸の抽出工程及び検出工程を含む核酸解析方法において、
(a)解析対象核酸を含有する試料に、該解析対象核酸と識別して検出可能な1種類以上の抽出用内部標準核酸を添加した後に核酸を抽出する核酸抽出工程、
(b)上記工程(a)において抽出された核酸を含有する試料に、上記解析対象核酸及び抽出用内部標準核酸と識別して検出可能な1種類以上の検出用内部標準核酸を添加した後に核酸を検出する核酸検出工程、及び
(c)核酸検出工程における上記の各内部標準核酸の検出結果から上記各工程の成否を判定する工程、
を含むことを特徴とする、核酸解析方法。 - 解析対象核酸の抽出工程、増幅工程及び検出工程を含む核酸解析方法において、
(a)解析対象核酸を含有する試料に、解析対象核酸と同時に増幅可能であるが、該解析対象核酸と識別して検出可能な1種類以上の抽出用内部標準核酸を添加した後に核酸を抽出する核酸抽出工程、
(b)上記工程(a)において抽出された核酸を含有する試料に、上記解析対象核酸及び上記抽出用内部標準核酸と同時に増幅可能であるが、上記解析対象核酸及び上記抽出用内部標準核酸と識別して検出可能な1種類以上の増幅用内部標準核酸を添加した後に核酸を増幅する核酸増幅工程、
(c)上記工程(b)において増幅された核酸を含有する試料に、上記解析対象核酸、抽出用内部標準核酸、及び検出用内部標準核酸のいずれとも互いに識別して検出可能な1種類以上の検出用内部標準核酸を添加した後に核酸を検出する核酸検出工程、及び
(d)核酸検出工程における上記の各内部標準核酸の検出結果から上記各工程の成否を判定する工程、
を含むことを特徴とする、核酸解析方法。 - 請求項4又は5に記載の核酸解析方法において、上記核酸抽出工程、核酸増幅工程、及び核酸検出工程の成否判定結果に基づき、いずれかの工程から再度解析を実施することを特徴とする、核酸解析方法。
- 請求項4又は5に記載の核酸解析方法において、解析対象核酸を含まない対照試料を同時に処理し、その検出結果に基づいて判定を行うことを特徴とする、核酸解析方法。
- 請求項4から7に記載の核酸解析方法を実施するためのキットであって、
(i)抽出用内部標準核酸及び/又は抽出用内部標準核酸を含む抽出用試薬、及び
(ii)検出用内部標準核酸及び/又は検出用内部標準核酸を含む検出用試薬、を含むことを特徴とするキット。 - 請求項4から7記載の核酸解析方法を実施するためのキットであって、
(i)抽出用内部標準核酸及び/又は抽出用内部標準核酸を含む抽出用試薬、
(ii)検出用内部標準核酸及び/又は検出用内部標準核酸を含む検出用試薬、及び
(iii)増幅用内部標準核酸及び/又は増幅用内部標準核酸を含む増幅用試薬、
を含むことを特徴とするキット。 - 上記抽出用内部標準核酸が解析対象核酸と少なくとも1塩基以上配列の異なる一定量の核酸であり、上記検出用内部標準核酸が該解析対象核酸及び上記抽出用内部標準核酸のいずれとも少なくとも1塩基以上配列の異なる一定量の核酸であることを特徴とする、請求項8又は9に記載のキット。
- 上記抽出用内部標準核酸が解析対象核酸と同時に増幅可能であるが、該解析対象核酸と少なくとも1塩基以上配列が異なる一定量の核酸であり、上記増幅用内部標準核酸が該解析対象核酸と同時に増幅可能であるが該解析対象核酸及び上記抽出用内部標準核酸と少なくとも1塩基以上配列が異なる一定量の核酸であり、上記検出用内部標準核酸が解析対象核酸、上記抽出用内部標準核酸及び上記増幅用内部標準核酸のいずれとも互いに少なくとも1塩基以上配列が異なる一定量の核酸である、請求項9に記載のキット。
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JP2005214419A JP2005348742A (ja) | 2005-07-25 | 2005-07-25 | 核酸解析方法 |
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JP2005214419A Pending JP2005348742A (ja) | 2005-07-25 | 2005-07-25 | 核酸解析方法 |
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Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2019509051A (ja) * | 2016-03-24 | 2019-04-04 | バイオファイア・ダイアグノスティクス,リミテッド・ライアビリティ・カンパニー | 定量的増幅方法 |
CN112941146A (zh) * | 2021-02-08 | 2021-06-11 | 电子科技大学成都学院 | 一种基于图像识别核酸检测方法 |
-
2005
- 2005-07-25 JP JP2005214419A patent/JP2005348742A/ja active Pending
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