JP2005281228A - Whitening cosmetic - Google Patents
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Abstract
Description
本発明はヒトの肌を美白化し、肌を滑らかにする効果があり、且つ安全性の高い化粧料に関する。 The present invention relates to a cosmetic that has an effect of whitening human skin and smoothing the skin, and has high safety.
肌は、日光や様々な化学物質、あるいは掻破などの物理的刺激によって、メラニンの生成が進み、メラニンが皮膚に沈着し黒くなる。メラニン沈着によるしみやそばかす、アトピー性皮膚炎患者などに多く見られる強い色素沈着や黒皮病などは、美容上の問題だけでなく、精神的な苦痛を与え、日常の生活に影響を及ぼすこともある。メラニン色素は、表皮と真皮の間にあるメラニン細胞（メラノサイト）で生成され、生成したメラニンは、浸透作用により隣接細胞へと拡散する。このメラノサイト内における生化学的メラニン生成反応は、必須アミノ酸の一つであるチロシンが酵素チロシナーゼの作用によりドーパキノンとなり、ドーパキノンから継続的な酸化反応の後、ドーパクロム（Ｄｏｐａｃｈｒｏｍｅ）の生成を経て、メラニンの単量体である５，６−ジヒドロキシインドール（ＤＨＩ）と５，６−ジヒドロキシインドール−２−カルボン酸（ＤＨＩＣＡ）が生成され、これらが互いに重合して最終的に共重合体の黒色色素のメラニンが生成される。したがって、反応の第一段階であるチロシナーゼの作用を抑制することができれば、メラニン生成を有効に抑制できることになる。 In the skin, the production of melanin proceeds by sunlight, various chemical substances, or physical stimulation such as scratching, and melanin is deposited on the skin and becomes black. Severe pigmentation and black skin disease often seen in melanin spots, freckles, atopic dermatitis patients, etc. cause not only cosmetic problems but also mental distress and affect daily life. There is also. Melanin pigments are produced in melanocytes (melanocytes) between the epidermis and dermis, and the produced melanin diffuses to neighboring cells by osmotic action. In the biochemical melanogenesis reaction in this melanocyte, tyrosine, which is one of the essential amino acids, becomes dopaquinone by the action of the enzyme tyrosinase. After continuous oxidation reaction from dopaquinone, dopachrome is generated, and then melanin is produced. Monomers 5,6-dihydroxyindole (DHI) and 5,6-dihydroxyindole-2-carboxylic acid (DHICA) are produced and polymerized with each other, and finally, the black pigment melanin of the copolymer Is generated. Therefore, if the action of tyrosinase, which is the first stage of the reaction, can be suppressed, melanin production can be effectively suppressed.
現在、チロシナーゼ阻害活性を有する美白化合物としては、コウジ酸、アルブチン（Ａｒｂｕｔｉｎ）、ヒドロキノン、ビタミンＣ、牛胎盤エキス、桑白皮抽出物及び甘草抽出物などが知られている（例えば、特許文献１参照）。これら美白化合物を配合した多くの化粧品や医薬品が販売されている。しかし、長年美白化粧品に利用されてきた牛プラセンタエキスが狂牛病の問題で配合禁止となり、さらに、コウジ酸が発ガン性を指摘されたことで使用禁止になった。また、ビタミンＣ及びその誘導体のチロシナーゼ活性阻害効果は比較的低い。ヒドロキノンは美白作用が非可逆的で皮膚に対する刺激性が強く、安全性の問題でその使用が制限されており、最近では発癌性が判明し、化粧品原料には使用が禁止されている。また大部分の植物抽出物は、高農度の場合にのみ、比較的高いチロシナーゼ活性阻害効果を示し、低濃度においては阻害効果をほとんど示さない。このような状況下、安全で有用な美白剤の開発が待たれている。 Currently, kojic acid, arbutin, hydroquinone, vitamin C, bovine placenta extract, mulberry bark extract, licorice extract and the like are known as whitening compounds having tyrosinase inhibitory activity (for example, Patent Document 1). reference). Many cosmetics and pharmaceuticals containing these whitening compounds are on the market. However, beef placenta extract, which has been used for whitening cosmetics for many years, was banned due to the problem of mad cow disease, and was further banned because kojic acid was pointed out to be carcinogenic. In addition, the inhibitory effect of vitamin C and its derivatives on tyrosinase activity is relatively low. Hydroquinone has an irreversible whitening effect and strong skin irritation, and its use has been restricted due to safety problems. Recently, it has been found to be carcinogenic, and its use as a cosmetic ingredient is prohibited. Most plant extracts show a relatively high tyrosinase activity inhibitory effect only at high farming levels, and hardly show an inhibitory effect at low concentrations. Under such circumstances, development of a safe and useful whitening agent is awaited.
近年、パラオ共和国のウルクターブル島のミルキー方面にある白色の海泥の熱水、熱アルコールあるいは熱水と熱アルコールの混液抽出物には、チロシナーゼ阻害活性の認められることが報告され、皮膚外用剤への応用が試みられている（特許文献２参照）。しかし、この抽出物の美白効果はいずれも未だ満足すべきものではない。
本発明の目的は、パラオ共和国のウルクターブル島のミルキー方面にある白色の海泥の抽出物を精製して得られる高活性のチロシナーゼ阻害活性を示す海泥エキスを含有する美白化粧料を提供することである。 An object of the present invention is to provide a whitening cosmetic containing a sea mud extract having a highly active tyrosinase inhibitory activity obtained by refining an extract of white sea mud in the direction of Milky Island in the island of Urkutaburu, Palau. That is.
本発明らは、海泥熱水抽出物の美白活性成分の分離精製を目的に、精製を試みたところ、水溶液濃度１００μｇ／ｍＬで８０％以上の高いチロシナーゼ阻害活性を有する海泥エキス画分を得て、この画分が美白効果に従来品に比較して顕著に優れていることを知見した。本発明者らは、さらに研究を進め、本発明を完成した。
すなわち、本発明は
（１） パラオ共和国のウルクターブル島の海泥熱水抽出物を精製して得られ、水溶液濃度１００μｇ／ｍＬで８０％以上のチロシナーゼ阻害活性を示す海泥エキスを含有することを特徴とする美白化粧料、
（２） 海泥エキスを０．００１〜５．０質量％含有することを特徴とする、前記（１）記載の美白化粧料、及び
（３） パラオ共和国のウルクターブル島の海泥熱水抽出物を精製して得られ、水溶液濃度１００μｇ／ｍＬで８０％以上のチロシナーゼ阻害活性を示す海泥エキスを含有することを特徴とするチロシナーゼ阻害剤、
に関する。
The present inventors attempted purification for the purpose of separating and refining the whitening active ingredient of the sea mud hot water extract. As a result, it was found that this fraction was remarkably superior to the conventional product in the whitening effect. The inventors have further studied and completed the present invention.
That is, the present invention includes (1) a sea mud extract obtained by purifying a sea mud hot water extract of Urkturbul Island in the Republic of Palau, and exhibiting a tyrosinase inhibitory activity of 80% or more at an aqueous solution concentration of 100 μg / mL. Whitening cosmetics, characterized by
(2) Whitening cosmetics according to (1) above, characterized by containing 0.001 to 5.0% by weight of a sea mud extract, and (3) Sea mud hot water extraction of Urkutaburu Island in the Republic of Palau A tyrosinase inhibitor characterized by containing a sea mud extract obtained by purifying a product and exhibiting tyrosinase inhibitory activity of 80% or more at an aqueous solution concentration of 100 μg / mL,
About.
本発明の美白化粧料に配合される海泥エキスは海泥の熱水抽出物に比較してチロシナーゼ阻害活性が著しく向上しているため、メラニン産生も著しく抑制できる。
本発明の美白化粧料は、高活性のチロシナーゼ阻害活性成分を含有するので、メラニン産生による色素沈着、例えば日焼け後の色素沈着、ホルモンバランスの変化によりおこる色素沈着、扁平母斑、そばかす、あるいは化粧品かぶれ、ニキビ、ヤケド、アトピー性皮膚炎又は体を洗う際に使うナイロンタオルやブラシ等の外的刺激による炎症後に生じる色素沈着、老人性色素斑、又はレーザー治療等の後に起こる色素沈着等を予防、抑制できる。また、本発明の美白化粧料は、従来品に比べてメラニン産生阻害効果において著しく優れているのみならず、海泥が有する美白、肌荒れ防止、クスミの予防等、肌の美白効果を保持している。
本発明の美白化粧料に配合される海泥エキスは、パラオ共和国のウルクターブル島の海泥熱水抽出物とは異なり、例えば塩化ナトリウム等の塩を含有していないため、エマルジョンやクリーム等の製剤が塩により分離等しないので、製剤化が容易となり、かつ経時的に安定な美白化粧料を製造できる。
Since the sea mud extract blended in the whitening cosmetic composition of the present invention has a markedly improved tyrosinase inhibitory activity compared to the hot water extract of sea mud, melanin production can also be significantly suppressed.
Since the whitening cosmetic composition of the present invention contains a highly active tyrosinase inhibitory active ingredient, pigmentation due to melanin production, for example, pigmentation after sunburn, pigmentation caused by changes in hormone balance, flat nevus, freckles, or cosmetics Prevents rashes, acne, burns, atopic dermatitis or pigmentation that occurs after inflammation due to external stimuli such as nylon towels and brushes used to wash the body, senile pigmentation, or pigmentation that occurs after laser treatment, etc. Can be suppressed. In addition, the whitening cosmetic of the present invention is not only excellent in the melanin production inhibitory effect compared to the conventional products, but also retains the whitening effect of skin such as whitening, prevention of rough skin, prevention of skin, etc. possessed by sea mud. Yes.
The sea mud extract blended in the whitening cosmetic composition of the present invention is different from the sea mud hot water extract of Urkutaburu Island of the Republic of Palau. Since the preparation is not separated by a salt, it is easy to make a preparation and a whitening cosmetic that is stable over time can be produced.
パラオ共和国のウルクターブル島の海泥（本明細書において、単に「海泥」と略称することもある。）とは、パラオ共和国のウルクターブル島のミルキー方面にある白色の海泥を採取し、必要により水で洗浄し、不要物を除き、また、必要により加熱滅菌等を行ったものをいう。なお、該海泥は、サンゴ等が化石化して堆積されたものと考えられている。
本発明の美白化粧料に使用される海泥エキスは、海泥から抽出、精製又は分離等の手段により採取されたエキスであり、水溶液濃度１００μｇ／ｍＬで８０％以上のチロシナーゼ阻害活性を示すものであれば、その精製又は分離、あるいは抽出方法の如何に関わらず、いずれも本発明の海泥エキスとして使用できる。なお、上記水溶液濃度とは、チロシナーゼ阻害活性を測定する反応液中における海泥エキスの濃度をいうが、該反応液には、測定に影響を与えない範囲であれば、必要に応じてジメチルスルホキシドやエタノール等の溶解補助剤等が含有してもよい。本発明において、「精製」というときは、海泥熱水抽出物にさらに手段を加えてチロシナーゼ阻害活性を高めたものにすることをいう。精製の程度は、精製前の海泥熱水抽出物と同等のチロシナーゼ阻害率を示す被検物の水溶液濃度が通常約１／１０以下、好ましくは約１／１０〜１／１００００程度に減少されていることが好ましい。また、本明細書において「画分」とは、熱水抽出物の成分を種々の分離手段で溶出し、溶媒を除去して得られる乾固物（例えば減圧乾固物又は凍結乾燥物等）をいう。
The sea mud on the island of Urkutaburu in Palau (sometimes abbreviated simply as “sea mud” in this specification) is the white sea mud in the direction of Milky on the island of Urkutaburu in Palau, Washed with water if necessary, removed unnecessary materials, and heat-sterilized if necessary. The sea mud is considered to have been deposited by fossilizing corals and the like.
The sea mud extract used in the whitening cosmetic composition of the present invention is an extract collected from the sea mud by means such as extraction, purification or separation, and exhibits an tyrosinase inhibitory activity of 80% or more at an aqueous solution concentration of 100 μg / mL. If so, regardless of the purification or separation or extraction method, any of them can be used as the sea mud extract of the present invention. The aqueous solution concentration refers to the concentration of the sea mud extract in the reaction solution for measuring tyrosinase inhibitory activity, and dimethyl sulfoxide can be added to the reaction solution as long as it does not affect the measurement. Or a solubilizing agent such as ethanol may be contained. In the present invention, the term “purification” means that the tyrosinase inhibitory activity is increased by further adding means to the sea mud hot water extract. The degree of purification is such that the concentration of an aqueous solution of a test substance exhibiting a tyrosinase inhibition rate equivalent to that of a sea mud hot water extract before purification is usually reduced to about 1/10 or less, preferably about 1/10 to 1 / 10,000. It is preferable. In the present specification, the “fraction” means a dried product obtained by eluting the components of the hot water extract with various separation means and removing the solvent (for example, a vacuum dried product or a freeze-dried product). Say.
海泥エキスの精製は、海泥の熱水抽出物を、チロシナーゼ阻害活性を指標に、公知の精製手段、例えば、種々のクロマトグラフィー（分子篩クロマトグラフィー、吸着クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィー、分配クロマトグラフィー等）、限外ろ過又は電気泳動、又はそれらの組み合わせで行うことができる。例えば図１に示されるように、シリカゲル（吸着）カラムクロマトグラフィー及び分子篩カラムクラマトグラフィーを組み合わせ精製することができる。クロマトグラフィーにおける溶出液から溶出溶媒を減圧濃縮又は／及び凍結乾燥、又は／及びスプレードライ等して一部又は全部を除去して得られ、上記チロシナーゼ阻害活性を有するものを本発明に使用する海泥エキスとすることができる。原料物として使用する熱水抽出物は、海泥に水、例えば精製水、蒸留水又は水道水を加え、約７０〜１００℃程度、好ましくは約１００℃に加熱し、約１時間以上、好ましくは約１時間加熱抽出することによって得られる。海泥と水の割合は、海泥１重量部に対し約２〜１０重量部程度、好ましくは約３〜５重量部程度である。このようにして得られる熱水抽出液をろ過し、ろ液の溶媒を減圧濃縮又は／及び凍結乾燥、又は／及びスプレードライ法等により除去し海泥熱水抽出物とする。該海泥熱水抽出物のチロシナーゼ阻害活性は２ｍｇ／ｍＬの濃度で、阻害率は約７０〜８０％程度である。 The purification of the sea mud extract is carried out by using a hot water extract of the sea mud as an indicator of tyrosinase inhibitory activity, for example, various types of chromatography (molecular sieve chromatography, adsorption chromatography, ion exchange chromatography, affinity chromatography). Chromatography, high performance liquid chromatography, partition chromatography, etc.), ultrafiltration or electrophoresis, or a combination thereof. For example, as shown in FIG. 1, silica gel (adsorption) column chromatography and molecular sieve column chromatography can be combined and purified. The seam used in the present invention is obtained by removing a part or all of the elution solvent from the eluate in chromatography by vacuum concentration or / and freeze-drying or / and spray-drying, etc., and having the tyrosinase inhibitory activity. Can be mud extract. The hot water extract used as a raw material is added to sea mud with water, such as purified water, distilled water or tap water, and heated to about 70 to 100 ° C., preferably about 100 ° C. for about 1 hour or more, preferably Is obtained by heat extraction for about 1 hour. The ratio of sea mud to water is about 2 to 10 parts by weight, preferably about 3 to 5 parts by weight, with respect to 1 part by weight of sea mud. The hot water extract thus obtained is filtered, and the solvent of the filtrate is removed by vacuum concentration or / and freeze-drying, and / or spray drying, etc. to obtain a sea mud hot water extract. The tyrosinase inhibitory activity of the sea mud hot water extract is 2 mg / mL, and the inhibition rate is about 70 to 80%.
上記海泥熱水抽出物を水で溶解したものを、例えばシリカゲルカラムクロマトグラフィーにて、クロロホルム／メタノール／水〔６：４：１（Ｖ／Ｖ）〕混合溶媒を用いてまず溶出し、次いでメタノールで溶出する。該メタノールで溶出される画分ｄを回収する。前記シリカゲルとしては、例えばシリカゲル６０Ｎ（６３−２１０μｍ；関東化学株式会社製）等を用いることができる。該画分ｄのチロシナーゼ阻害活性は海泥熱水抽出物の１／２の濃度（１ｍｇ／ｍＬ）で、阻害率約９０％程度である。
次いで、画分ｄを、分子篩クロマトグラフィーにて、メタノール／水〔１：１（Ｖ／Ｖ）〕混合溶媒を用いて溶出する。分子篩クロマトグラフィーに用いる樹脂としては、例えばセファデックスＬＨ−２０（東ソー株式会社製）等を用いることができる。溶出液の一部は、シリカゲル薄層クロマトグラフィー（以下、ＴＬＣと略記する。）で、クロロホルム／メタノール／水／酢酸〔３：３：１：０．１（Ｖ／Ｖ）〕混合溶媒を用いて展開し、ニンヒドリン試薬で呈色及びＵＶ２５４ｍｍでの発光を指標にしながら溶出液を分画する。
チロシナーゼ阻害活性の高い画分ｄ３は、さらにシリカゲルクロマトグラフィーにて、クロロホルム／メタノール／水〔５：４：１（Ｖ／Ｖ）〕混合溶媒を用いて溶出し、溶出液の一部を、ＴＬＣでクロロホルム／メタノール／水〔２：４：１（Ｖ／Ｖ）〕混合溶媒を用いて展開し、ニンヒドリン試薬による呈色を指標にして溶出液を分画する。ニンヒドリン試薬で呈色しない画分ｄ３−１、Ｒｆ値０．３に呈色スポットを示す画分ｄ３−２、Ｒｆ値が０．２及び０．４に呈色スポットを示す画分ｄ３−３を分取後、溶出液をクロロホルム／メタノール／水〔４：４：１（Ｖ／Ｖ）〕混合溶媒に換えさらに溶出する。クロロホルム／メタノール／水〔４：４：１（Ｖ／Ｖ）〕混合溶媒で溶出される画分ｄ３−４を回収する。シリカゲルとしては、例えばシリカゲル６０Ｎ（６３−２１０μｍ；関東化学株式会社製）等を用いることができる。画分ｄ３−３及び画分ｄ３−４のチロシナーゼ阻害活性は、共に１００μｇ／ｍＬの水溶液濃度で、阻害率は８０％以上であり、本発明に使用する海泥エキスとすることができる。
The above-mentioned sea mud hot water extract dissolved in water is first eluted using a mixed solvent of chloroform / methanol / water [6: 4: 1 (V / V)], for example, by silica gel column chromatography, Elute with methanol. The fraction d eluted with methanol is collected. As the silica gel, for example, silica gel 60N (63-210 μm; manufactured by Kanto Chemical Co., Inc.) can be used. The tyrosinase inhibitory activity of the fraction d is about 90% of the inhibition rate at half the concentration (1 mg / mL) of the sea mud hot water extract.
Next, the fraction d is eluted by molecular sieve chromatography using a methanol / water [1: 1 (V / V)] mixed solvent. As resin used for molecular sieve chromatography, Sephadex LH-20 (made by Tosoh Corporation) etc. can be used, for example. A part of the eluate is silica gel thin layer chromatography (hereinafter abbreviated as TLC), using a mixed solvent of chloroform / methanol / water / acetic acid [3: 3: 1: 0.1 (V / V)]. The eluate is fractionated while coloring with ninhydrin reagent and luminescence at UV254 mm as indicators.
Fraction d3 having a high tyrosinase inhibitory activity is further eluted by silica gel chromatography using a mixed solvent of chloroform / methanol / water [5: 4: 1 (V / V)]. The mixture is developed using a mixed solvent of chloroform / methanol / water [2: 4: 1 (V / V)], and the eluate is fractionated using coloration by the ninhydrin reagent as an index. Fraction d3-1 not colored with ninhydrin reagent, fraction d3-2 showing a colored spot at Rf value 0.3, fraction d3-3 showing a colored spot at Rf values 0.2 and 0.4 After elution, the eluate is changed to a chloroform / methanol / water [4: 4: 1 (V / V)] mixed solvent and further eluted. Fraction d3-4 eluted with chloroform / methanol / water [4: 4: 1 (V / V)] mixed solvent is collected. As silica gel, for example, silica gel 60N (63-210 μm; manufactured by Kanto Chemical Co., Inc.) can be used. The tyrosinase inhibitory activities of fractions d3-3 and d3-4 are both 100 μg / mL in aqueous solution and the inhibition rate is 80% or more, and can be used as a sea mud extract used in the present invention.
チロシナーゼは、メラニン生成の最初の段階であるチロシンからＤＯＰＡ（Ｌ−ｄｏｐａ）への水酸化反応と、次の段階であるＤＯＰＡからＤＯＰＡキノンへの酸化反応を触媒する。チロシナーゼ阻害活性は、自体公知の方法で測定することができる。すなわち、ＤＯＰＡ溶液にチロシナーゼ溶液を加え反応が進むと、無色透明の溶液がオレンジ色に変化する。チロシナーゼ阻害活性測定においては、被検物質を加えることによるこの色の変化の現象を吸光度で測定することにより、チロシナーゼ阻害活性を定量できる。ＤＯＰＡの濃度は、通常０．０３質量％程度が好ましい。反応は、緩衝液（例えばリン酸緩衝液等、ｐＨ約６程度）の存在下、約２５℃の加温下で行われることが好ましい。チロシナーゼの濃度は、約０．０５ｍｇ／ｍＬ程度（約１００Ｕ／ｍＬ程度）が好ましい。反応時間は５分程度である。吸光度は、４７５ｎｍで測定するのが好ましい。 Tyrosinase catalyzes the hydroxylation reaction from tyrosine to DOPA (L-dopa), which is the first stage of melanin production, and the oxidation reaction from DOPA to DOPAquinone, which is the next stage. The tyrosinase inhibitory activity can be measured by a method known per se. That is, when the tyrosinase solution is added to the DOPA solution and the reaction proceeds, the colorless and transparent solution turns orange. In tyrosinase inhibitory activity measurement, tyrosinase inhibitory activity can be quantified by measuring the phenomenon of this color change by adding a test substance by absorbance. The concentration of DOPA is usually preferably about 0.03% by mass. The reaction is preferably performed in the presence of a buffer solution (for example, a phosphate buffer solution, pH of about 6) and heated at about 25 ° C. The concentration of tyrosinase is preferably about 0.05 mg / mL (about 100 U / mL). The reaction time is about 5 minutes. Absorbance is preferably measured at 475 nm.
上記海泥エキスは、チロシナーゼ阻害活性が高いため、チロシナーゼ阻害剤として皮膚外用剤、特に美白化粧料等に適用できる。
上記海泥エキスは、ローション剤、乳剤、ゲル剤、クリーム剤、軟膏剤等の剤型で提供することができる。また、化粧水、乳液、クリーム、パック等の皮膚化粧料、メイクアップベースローション、メイクアップベースクリーム、乳液状又はクリーム状或いは軟膏型のファンデーション、アイカラー、チークカラーといったメイクアップ化粧料、ハンドクリーム、レッグクリーム、ボディローション等の身体用化粧料などとしても提供することができる。また、入浴剤等として提供することもできる。
本発明の美白化粧料は、自体公知の化粧料の製造方法に従い、例えば海泥エキスを水又は／及び化粧品基剤に溶解又は攪拌し製造し得る。攪拌は自体公知の方法、例えばキルンやミキサーによる攪拌、パドル攪拌、超音波による攪拌、磁気力を利用する攪拌等いずれの方法も適宜に使用しうる。美白化粧料中における海泥エキスの配合量としては、化粧料の全質量に対し、約０．００１〜５質量％程度が好ましく、特に好ましくは約０．００５〜２質量％程度である。
Since the sea mud extract has high tyrosinase inhibitory activity, it can be applied as a tyrosinase inhibitor to an external preparation for skin, particularly whitening cosmetics.
The sea mud extract can be provided in dosage forms such as lotions, emulsions, gels, creams, ointments and the like. Also, skin cosmetics such as lotion, milky lotion, cream and pack, makeup base lotion, makeup base cream, makeup cosmetics such as emulsion, cream or ointment type foundation, eye color and teak color, hand cream It can also be provided as body cosmetics such as leg creams and body lotions. Moreover, it can also provide as a bath agent etc.
The whitening cosmetic composition of the present invention can be produced by, for example, dissolving or stirring a sea mud extract in water or / and a cosmetic base according to a cosmetic production method known per se. For the stirring, any method known per se, for example, stirring with a kiln or mixer, paddle stirring, stirring with ultrasonic waves, stirring using magnetic force, or the like can be used as appropriate. As a compounding quantity of the sea mud extract in whitening cosmetics, about 0.001-5 mass% is preferable with respect to the total mass of cosmetics, Most preferably, it is about 0.005-2 mass%.
本発明の美白化粧料の化粧品基剤としては、例えば陰イオン性界面活性剤、両性界面活性剤、非イオン性界面活性剤、増粘剤、油剤、粉体（色素、樹脂、顔料）、香料、保湿剤、生理活性成分、紫外線吸収剤、溶媒、酸化防止剤、キレート剤、防腐剤、中和剤・ｐＨ調整剤、昆虫忌避剤、酵素等を配合することができる。 Examples of the cosmetic base of the whitening cosmetic of the present invention include, for example, anionic surfactants, amphoteric surfactants, nonionic surfactants, thickeners, oils, powders (pigments, resins, pigments), and fragrances. , Moisturizers, physiologically active ingredients, ultraviolet absorbers, solvents, antioxidants, chelating agents, preservatives, neutralizers / pH adjusters, insect repellents, enzymes, and the like.
陰イオン性界面活性剤としては、例えばアルキル硫酸塩、ココイルメチルタウリン塩、脂肪酸塩、ヤシ油脂肪酸その塩、アルキルリン酸塩及びポリオキシエチレンアルキルエーテルのリン酸塩や硫酸塩等が挙げられる。
両性界面活性剤としては、例えばアルキルベタイン、ホスホベタイン、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルイノシトール及びこれらのリゾ体の他、ホスホファチジン酸とその塩等が挙げられる。
非イオン性界面活性剤としては、例えばグリセリン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレンセチルエーテル、ソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油及びポリグリセリン脂肪酸エステル等が挙げられる。
Examples of the anionic surfactant include alkyl sulfates, cocoyl methyl taurine salts, fatty acid salts, coconut oil fatty acid salts thereof, alkyl phosphates, and phosphates and sulfates of polyoxyethylene alkyl ethers.
Examples of amphoteric surfactants include alkylbetaines, phosphobetaines, phosphatidylcholines, phosphatidylethanolamines, phosphatidylserine, phosphatidylglycerol, phosphatidylinositol, and their lysates, as well as phosphophatidic acid and its salts.
Nonionic surfactants include, for example, glycerin fatty acid ester, polyoxyethylene sorbitan fatty acid ester, polyoxyethylene alkyl ether, polyoxyethylene cetyl ether, sorbitan fatty acid ester, polyoxyethylene hydrogenated castor oil and polyglycerin fatty acid ester. Can be mentioned.
増粘剤としては、例えばアクリル酸アミド及びその誘導体、カルボキシビニルポリマー、アルキル変性カルボキシビニルポリマー、セルロース、ケラチン及びコラーゲン又はその誘導体、アルギン酸カルシウム、プルラン、寒天、ゼラチン、タマリンド種子多糖類、キサンタンガム、カラギーナン、ハイメトキシルペクチン、ポリビニルアルコール、ローメトキシルペクチン、グァーガム、アラビアゴム、結晶セルロース、天然ゴムラテックス、アラビノガラクタン、カラヤガム、トラガカントガム、アルギン酸、アルブミン、カゼイン、カードラン、ジェランガム及びデキストラン等が挙げられる。 Examples of the thickener include acrylic amide and derivatives thereof, carboxyvinyl polymer, alkyl-modified carboxyvinyl polymer, cellulose, keratin and collagen or derivatives thereof, calcium alginate, pullulan, agar, gelatin, tamarind seed polysaccharide, xanthan gum, carrageenan , High methoxyl pectin, polyvinyl alcohol, low methoxyl pectin, guar gum, gum arabic, crystalline cellulose, natural rubber latex, arabinogalactan, karaya gum, tragacanth gum, alginic acid, albumin, casein, curdlan, gellan gum and dextran.
油剤としては、例えばセタノール、イソステアリルアルコール、ラウリルアルコール、ヘキサデシルアルコール、ベヘニルアルコール及びオクチルドデカノール等の高級アルコール、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、ウンデシレン酸及びオレイン酸等の脂肪酸、ミリスチン酸ミリスチル、ラウリン酸ヘキシル、ミリスチン酸オクチルドデシル、エチルヘキサン酸セチル、トリ２−エチルヘキサン酸グリセリル、オレイン酸デシル、ミリスチン酸イソプロピル、ジメチルオクタン酸へキシルデシル、モノステアリン酸グリセリン、トリオクタン酸グリセリン、パルミチン酸セチル、フタル酸ジエチル、モノステアリン酸エチレングリコール及びオキシステアリン酸オクチル等のエステル類、ステアリン酸コレステリル、オレイン酸コレステリル及び分岐脂肪酸コレステリル等のコレステロールエステル、流動パラフィン、ワセリン、スクワラン等の炭化水素、ラノリン、還元ラノリン、水素添加大豆リン脂質等のリン脂質、ミツロウ及びカルナバロウ等のロウ、ホホバ油、ミンク油、カカオ脂、ヤシ油、パーム核油、ツバキ油、ゴマ油、ヒマシ油及びオリーブ油等の油脂、ジメチルポリシロキサン、環状ジメチルポリシロキサン及びメチルフェニルポリシロキサン等のシリコーン油等が挙げられる。 Examples of the oil include higher alcohols such as cetanol, isostearyl alcohol, lauryl alcohol, hexadecyl alcohol, behenyl alcohol and octyldodecanol, fatty acids such as lauric acid, myristic acid, palmitic acid, stearic acid, undecylenic acid and oleic acid, myristic Myristyl acid, hexyl laurate, octyldodecyl myristate, cetyl ethylhexanoate, glyceryl tri-2-ethylhexanoate, decyl oleate, isopropyl myristate, hexyldecyl dimethyloctanoate, glyceryl monostearate, glyceryl trioctanoate, palmitic acid Esters such as cetyl, diethyl phthalate, ethylene glycol monostearate and octyl oxystearate, cholesteryl stearate Cholesterol esters such as cholesteryl oleate and branched fatty acid cholesteryl, hydrocarbons such as liquid paraffin, petrolatum, squalane, phospholipids such as lanolin, reduced lanolin, hydrogenated soybean phospholipid, wax such as beeswax and carnauba wax, jojoba oil, mink oil And oils such as cacao butter, palm oil, palm kernel oil, camellia oil, sesame oil, castor oil and olive oil, and silicone oils such as dimethylpolysiloxane, cyclic dimethylpolysiloxane and methylphenylpolysiloxane.
粉体としては、例えば赤色２０１号、黄色４号、青色１号、黒色４０１号等の色素、黄色４号Ａｌレーキ、黄色２０３号Ｂａレーキ等のレーキ色素、ナイロンパウダー、シルクパウダー、シリコーンパウダー、セルロースパウダー、シリコーンエラストマー球状粉体、ポリエチレン末等の樹脂、黄酸化鉄、赤色酸化鉄、酸化クロム、カーボンブラック、群青、紺青等の有色顔料、酸化亜鉛、酸化チタン等の白色顔料、タルク、マイカ、セリサイト、カオリン等の体質顔料、雲母チタン等のパール顔料の顔料、硫酸バリウム、炭酸カルシウム、炭酸マグネシウム、珪酸マグネシウム等の金属塩、シリカ、アルミナ等の無機粉体、ベントナイト、スメクタイト及び窒化ホウ素等が挙げられる。これらの粉体の形状（球状、棒状、針状、板状、不定形状、燐片状、紡錘状等）に特に制限はない。 Examples of the powder include red 201, yellow 4, blue 1, black 401 and other dyes, yellow 4 Al lake, yellow 203 Ba lake and other lake dyes, nylon powder, silk powder, silicone powder, Cellulose powder, silicone elastomer spherical powder, resin such as polyethylene powder, yellow iron oxide, red iron oxide, chromium oxide, carbon black, colored pigments such as ultramarine and bitumen, white pigments such as zinc oxide and titanium oxide, talc, mica Body pigments such as sericite and kaolin, pearl pigment pigments such as titanium mica, metal salts such as barium sulfate, calcium carbonate, magnesium carbonate and magnesium silicate, inorganic powders such as silica and alumina, bentonite, smectite and boron nitride Etc. There are no particular restrictions on the shape of these powders (spherical, rod-like, needle-like, plate-like, indeterminate, flake-like, spindle-like, etc.).
保湿剤としては、例えばグリセリン、キシリトール、ソルビトール、ジプロピレングリコール、ブチレングリコール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール２００〜６００、ポリオキシエチレンメチルグルコシド、マルチトール及びマンニトール等が挙げられる。
生理活性成分としては、例えばグリチルリチン酸及びその塩、塩酸ジフェンヒドラミン、胎盤抽出物、アルブチン、コラーゲン、アラントイン及びｄｌ−α−トコフェロール等が挙げられる。溶媒としては、例えばポリオキシエチレンセチルエーテル、精製水及び低級アルコール等が挙げられる。
紫外線吸収剤としては、例えばオキシベンゾン、サリチル酸フェニル、シノキサート及び２−（２−ヒドロキシ−５−メチルフェニル）ベンゾトリアゾール等が挙げられる。
Examples of the humectant include glycerin, xylitol, sorbitol, dipropylene glycol, butylene glycol, propylene glycol, polyethylene glycol 200 to 600, polyoxyethylene methyl glucoside, maltitol and mannitol.
Examples of the physiologically active component include glycyrrhizic acid and its salt, diphenhydramine hydrochloride, placental extract, arbutin, collagen, allantoin, and dl-α-tocopherol. Examples of the solvent include polyoxyethylene cetyl ether, purified water and lower alcohol.
Examples of the ultraviolet absorber include oxybenzone, phenyl salicylate, sinoxate and 2- (2-hydroxy-5-methylphenyl) benzotriazole.
酸化防止剤としては、例えばカテコール、酢酸ｄｌ−α−トコフェロール、ジブチルヒドロキシトルエン及びブチルヒドロキシアニソール等が挙げられる。
キレート剤としては、例えばエデト酸及びその塩類、並びにクエン酸及びその塩等が挙げられる。
防腐剤としては、例えば安息香酸及びその塩類、イソプロピルメチルフェノール、塩酸クロルヘキシジン、オルトフェニルフェノール、グルコン酸クロルヘキシジン、クロルクレゾール、クロルフェネシン、クロロブタノール、ソルビン酸及びその塩類、デヒドロ酢酸及びその塩類、パラオキシエチレン安息香酸エステル及びハロカルバン等が挙げられる。
中和剤・ｐＨ調整剤としては、例えば水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、塩酸、ジエタノールアミン及びジイソプロパノールアミン等が挙げられる。
昆虫忌避剤としては、例えばジエチルトルアミド等が挙げられる。
酵素としては、例えば、塩化リゾチーム等が挙げられる。
Examples of the antioxidant include catechol, dl-α-tocopherol acetate, dibutylhydroxytoluene and butylhydroxyanisole.
Examples of the chelating agent include edetic acid and its salts, citric acid and its salts, and the like.
Examples of preservatives include benzoic acid and its salts, isopropylmethylphenol, chlorhexidine hydrochloride, orthophenylphenol, chlorhexidine gluconate, chlorcresol, chlorphenesin, chlorobutanol, sorbic acid and its salts, dehydroacetic acid and its salts, paraoxy And ethylene benzoate and halocarban.
Examples of the neutralizing agent / pH adjusting agent include sodium hydroxide, potassium hydroxide, hydrochloric acid, diethanolamine and diisopropanolamine.
Examples of insect repellents include diethyl toluamide.
Examples of the enzyme include lysozyme chloride.
また、本発明の美白化粧料には、他の美白成分を添加することもできる。美白成分としては、例えばアスコルビン酸及びその塩類、システイン、グルタチオン及びその塩類又はそのエステル類、Ｎ−アシル化グルタチオン、ハイドロキノン及びその塩類、フェルラ酸及びその塩類、イソフェルラ酸及びその塩類、カフェー酸及びその塩類、４−ｎ−ブチルレゾルシノール等のレゾルシノール類、エルゴ酸及びその塩類、プラセンタエキス、カフェイン、タンニン、べラパミル、トラネキサム酸、甘草抽出物、グラブリジン、酢酸トコフェロール、グリチルリチン酸、アルブチン、コウジ酸、エラグ酸、カミツレ抽出物、リノール酸、オレイン酸、リノレン酸等が挙げられる。
以下に実施例、試験例によって、更に具体的に説明するが、本発明は、これら実施例等によって、限定されるものでないことは云うまでもない。
In addition, other whitening components can be added to the whitening cosmetic of the present invention. Examples of the whitening component include ascorbic acid and its salts, cysteine, glutathione and its salts or esters thereof, N-acylated glutathione, hydroquinone and its salts, ferulic acid and its salts, isoferulic acid and its salts, caffeic acid and its Salts, resorcinols such as 4-n-butylresorcinol, ergoic acid and its salts, placenta extract, caffeine, tannin, verapamil, tranexamic acid, licorice extract, glabrizine, tocopherol acetate, glycyrrhizic acid, arbutin, kojic acid, Examples include ellagic acid, chamomile extract, linoleic acid, oleic acid, linolenic acid and the like.
Hereinafter, the present invention will be described more specifically with reference to examples and test examples. However, it goes without saying that the present invention is not limited to these examples and the like.
美白パック
Ａ：
海泥エキス ３．０重量部
酸化チタン ２．０重量部
ポリオキシエチレン（２０Ｅ．０）セチルエーテル １．０重量部
１，３ブチレングリコール １０．０重量部
グリセリン １０．０重量部
パラオキシ安息香酸メチル ０．１重量部
Ｂ：
ポリビニルアルコール １．０重量部
精製水 ７２．９重量部
調製方法：Ａを５０℃で加温し、均一に混合する。Ｂは常温で均一に溶解する。Ａを撹拌しながらＢを徐々に加え均一に混合する。撹拌しながら冷却し、３５℃で撹拌を止め放置し、パック剤とする。
Whitening pack
A:
Sea mud extract 3.0 parts by weight Titanium oxide 2.0 parts by weight Polyoxyethylene (20E.0) cetyl ether 1.0 part by
Polyvinyl alcohol 1.0 part by weight Purified water 72.9 parts by weight Preparation method: A is heated at 50 ° C. and mixed uniformly. B dissolves uniformly at room temperature. While stirring A, gradually add B and mix uniformly. Cool with stirring, stop stirring at 35 ° C. and leave to stand as a pack agent.
美白クリーム
Ａ：
スクワラン ２５．０重量部
ホホバ油 ５．０重量部
ミツロウ ５．０重量部
セタノール ３．０重量部
ステアリン酸モノグリセリン ２．０重量部
Ｂ：
ポリオキシエチレン（２０モル）ソルビタン
モノステアリン酸エステル ３．０重量部
海泥エキス １．０重量部
グリセリン ７．０重量部
１，３ブチレングリコール ７．０重量部
パラオキシ安息香酸メチル ０．３重量部
精製水 ４１．７重量部
製法：Ａ，Ｂそれぞれに加温し、攪拌しつつ、Ａに徐々にＢを加え、冷却する。
Whitening cream A:
Squalane 25.0 parts by weight Jojoba oil 5.0 parts by weight Beeswax 5.0 parts by weight Cetanol 3.0 parts by weight Monoglyceryl stearate 2.0 parts by weight B:
Polyoxyethylene (20 mol) sorbitan monostearate 3.0 parts by weight Sea mud extract 1.0 part by weight Glycerol 7.0 parts by
美白乳液
Ａ：
モノミリスチン酸デカグリセリル ２．１重量部
水素添加大豆リン脂質 ０．６重量部
ステアリン酸 ０．５重量部
ベヘニルアルコール １．６重量部
パルミチン酸セチル ０．６重量部
α−オレフィンオリゴマー ６．０重量部
２−エチルヘキサン酸セチル ６．０重量部
トリ２−エチルヘキサン酸グリセリル ６．０重量部
海泥エキス ０．２重量部
グリセリン ５．０重量部
パラオキシ安息香酸 ０．３重量部
Ｂ：
精製水 ５４．２重量部
Ｃ：
カルボキシビニルポリマー ０．１重量部
精製水 １０．０重量部
Ｄ：
水酸化ナトリウム ０．０４重量部
精製水 ６．７６重量部
調製方法：Ａ、Ｂともに８０℃で加温溶解し、ＢをＡにホモミキサー撹拌しながら徐々に加え、５，０００ｒｐｍで５分間乳化する。パドル撹拌しながらＣ、Ｄを加え、冷却し、４０〜３５℃で撹拌を止め、放置する。
Whitening emulsion A:
Decaglyceryl monomyristate 2.1 parts by weight Hydrogenated soybean phospholipid 0.6 part by weight Stearic acid 0.5 part by weight Behenyl alcohol 1.6 part by weight Cetyl palmitate 0.6 part by weight α-olefin oligomer 6.0 part by weight Cetyl 2-ethylhexanoate 6.0 parts by weight Glyceryl tri-2-ethylhexanoate 6.0 parts by weight Sea mud extract 0.2 parts by weight Glycerin 5.0 parts by weight Paraoxybenzoic acid 0.3 parts by weight B:
Purified water 54.2 parts by weight C:
Carboxyvinyl polymer 0.1 parts by weight Purified water 10.0 parts by weight D:
Sodium hydroxide 0.04 parts by weight Purified water 6.76 parts by weight Preparation method: Both A and B are heated and dissolved at 80 ° C., B is gradually added to A while stirring with a homomixer, and emulsified at 5,000 rpm for 5 minutes. To do. Add C and D with paddle stirring, cool, stop stirring at 40-35 ° C., and let stand.
美白化粧水
Ａ：
グリチルリチン酸ジカリウム ０．２重量部
クエン酸 ０．１重量部
クエン酸ナトリウム ０．３重量部
精製水 ８２．９９重量部
Ｂ：
テトラオレイン酸Ｐ０Ｅ（６０）ソルビトール ０．９重量部
モノオレイン酸ソルビタン ０．１重量部
オリブ油 ０．１重量部
ジプロピレングリコール ５．０重量部
海泥エキス ０．０１重量部
エタノール １０．０重量部
パラオキシ安息香酸 ０．３重量部
調製方法：Ａ、Ｂともに５０℃で加温溶解し、ＢをＡに撹拌しながら徐々に加え可溶化する。撹拌しながら冷却し、３０℃で撹拌を止め、放置する。
Whitening lotion A:
Dipotassium glycyrrhizinate 0.2 parts by weight Citric acid 0.1 parts by weight Sodium citrate 0.3 parts by weight Purified water 82.99 parts by weight B:
Tetraoleic acid P0E (60) sorbitol 0.9 parts by weight Sorbitan monooleate 0.1 parts by weight Olive oil 0.1 parts by weight Dipropylene glycol 5.0 parts by weight Sea mud extract 0.01 parts by weight Ethanol 10.0 parts by weight Part 0.3 parts by weight of paraoxybenzoic acid Preparation method: Both A and B are heated and dissolved at 50 ° C., and B is gradually added to A while stirring and solubilized. Cool with stirring, stop stirring at 30 ° C. and let stand.
美白洗顔剤
Ａ：
ラウリン酸 ２．０重量部
ミリスチン酸 １７．０重量部
パルミチン酸 ４．０重量部
ステアリン酸 ４．０重量部
ヤシ油脂肪酸カリウム ８．０重量部
ヤシ油脂肪酸ジエタノールアミド ３．０重量部
Ｎ−ココイルメチルタウリンナトリウム １０．０重量部
濃グリセリン ５．０重量部
１，３−ブチレングリコール ５．０重量部
海泥エキス ０．５重量部
パラオキシ安息香酸 ０．３重量部
Ｂ：
水酸化カリウム ５．５重量部
エデト酸四ナトリウム ０．２重量部
精製水 ３５．５重量部
調製方法：Ａを８０℃に加温溶解する。Ｂは常温溶解する。ＢをＡに撹拌しながら徐々に加え均一溶解する。攪拌しながら冷却し、３５℃で撹拌を止め、放置する。
Whitening facial cleanser A:
Lauric acid 2.0 parts by weight Myristic acid 17.0 parts by weight Palmitic acid 4.0 parts by weight Stearic acid 4.0 parts by weight Palm oil fatty acid potassium 8.0 parts by weight Palm oil fatty acid diethanolamide 3.0 parts by weight N-cocoyl Methyl taurine sodium 10.0 parts by weight Concentrated glycerin 5.0 parts by
Potassium hydroxide 5.5 parts by weight Tesodium edetate 0.2 parts by weight Purified water 35.5 parts by weight Preparation method: A is heated and dissolved at 80 ° C. B dissolves at room temperature. Slowly add B to A while stirring and dissolve uniformly. Cool with stirring, stop stirring at 35 ° C. and let stand.
試験例１
チロシナーゼ阻害活性
チロシナーゼはきのこから分離及び精製したものを、シグマ（Ｓｉｇｍａ）社から購入して使用した。チロシナーゼを０．０５Ｍ燐酸ナトリウム緩衝溶液（ｐＨ６．８）に溶かし、０．１ｍｇ／ｍＬ（２００Ｕ／ｍＬ）溶液とし、チロシナーゼ溶液として使用した。試験管に被検液０．５ｍＬと、基質Ｌ−ｄｏｐａ溶液（０．０３質量％、１／１５Ｍリン酸緩衝液、ｐＨ６に溶解）を０．５ｍＬ加え、２５℃、１０分間加温した。次に、チロシナーゼ溶液０．５ｍＬを加え、２５℃、５分間加温した後、吸光度を４７５ｎｍで測定した（Ｄ１）。基質を加えず同様の操作をした吸光度をＤ２、被検液を添加せず同様の操作をした吸光度をＤ３とし、阻害率を以下の式で求めた。
阻害率（％）＝（（Ｄ３−Ｄ２）−（Ｄ１−Ｄ２））／（Ｄ３−Ｄ２）×１００
Test example 1
Tyrosinase inhibitory activity Tyrosinase separated and purified from mushrooms was purchased from Sigma and used. Tyrosinase was dissolved in 0.05 M sodium phosphate buffer solution (pH 6.8) to give a 0.1 mg / mL (200 U / mL) solution, which was used as the tyrosinase solution. To the test tube, 0.5 mL of the test solution and 0.5 mL of the substrate L-dopa solution (0.03% by mass, dissolved in 1/15 M phosphate buffer, pH 6) were added and heated at 25 ° C. for 10 minutes. Next, 0.5 mL of tyrosinase solution was added, and after heating at 25 ° C. for 5 minutes, the absorbance was measured at 475 nm (D1). The absorbance obtained by performing the same operation without adding a substrate was D2, and the absorbance obtained by performing the same operation without adding a test solution was D3, and the inhibition rate was determined by the following equation.
Inhibition rate (%) = ((D3-D2)-(D1-D2)) / (D3-D2) × 100
試験例２
海泥エキスの分離
（１） 海泥熱水抽出物
海泥１ｋｇに、精製水３Ｌを加え、１００℃で１時間加熱後、ろ過した。ろ液を、減圧濃縮後、凍結乾燥し、水を除去し、海泥熱水抽出物した。このときの海泥に対する収率は４％であった。また、海泥熱水抽出物のチロシナーゼ阻害活性は、２ｍｇ／ｍＬの濃度で７４％であった。
Test example 2
Separation of sea mud extract (1) Sea mud hot water extract 3 kg of purified water was added to 1 kg of sea mud, heated at 100 ° C. for 1 hour, and then filtered. The filtrate was concentrated under reduced pressure, freeze-dried, water was removed, and a sea mud hot water extract was extracted. The yield based on sea mud at this time was 4%. The tyrosinase inhibitory activity of the sea mud hot water extract was 74% at a concentration of 2 mg / mL.
（２）（１）で得た海泥熱水抽出物を水で溶解し、シリカゲル〔シリカゲル６０Ｎ（６３−２１０μｍ；関東化学株式会社製）〕カラムクロマトグラフィー（直径６ｃｍ、長さ５０ｃｍ）にて、クロロホルム／メタノール／水〔６：４：１（Ｖ／Ｖ）〕混合溶媒を用いてまず溶出し、各画分の溶出液は、これの一部をＴＬＣで、クロロホルム／メタノール／水〔６：４：１（Ｖ／Ｖ）〕混合溶媒を用いて展開した。ニンヒドリン試薬で呈色したときのＲｆ値が０．６〜１のものを画分ａ〔海泥熱水抽出物に対する収率（以下、単に収率と略称する。）：０．８％〕、Ｒｆ値が０．５〜０．６のものを画分ｂ（収率：６．５６％）及びＲｆ値が０．１〜０．２のものを画分ｃ（収率：４３．９％）として得た。各画分の１ｍｇ／ｍＬの水溶液濃度のチロシナーゼ阻害率は、それぞれ、４０．０％、５８．６％、６３．３％であった。次いで上記シリカゲルクロマトグラフィーをメタノールで溶出する。該メタノールで溶出される溶出液を回収し、画分ｄ（収率：２０．８％）とした。該画分ｄの１ｍｇ／ｍＬの濃度のチロシナーゼ阻害率は８９．％であった。なお、画分ａ及び画分ｂについて、さらにＯＤＳカラムクロマトグラフィー、及びシリカゲルカラムクロマトグラフィー〔溶出液：ヘキサン／酢酸エチレン＝１：２（Ｖ／Ｖ））で分離精製を試み、３−ヒドロキシブタン酸を分取した。３−ヒドロキシブタン酸１００μｇ／ｍＬのチロシナーゼ阻害率は約４０％であった。 (2) The sea mud hot water extract obtained in (1) is dissolved in water, and silica gel [silica gel 60N (63-210 μm; manufactured by Kanto Chemical Co., Ltd.)] column chromatography (diameter 6 cm, length 50 cm). First, elution was performed using a mixed solvent of chloroform / methanol / water [6: 4: 1 (V / V)], and a part of the eluate of each fraction was subjected to TLC with chloroform / methanol / water [6 : 4: 1 (V / V)] using a mixed solvent. A fraction having an Rf value of 0.6 to 1 when colored with a ninhydrin reagent is fraction a (yield based on sea mud hot water extract (hereinafter simply referred to as yield): 0.8%), Fraction b (yield: 6.56%) having an Rf value of 0.5 to 0.6 and Fraction c (yield: 43.9%) having an Rf value of 0.1 to 0.2 ). The tyrosinase inhibition rates at an aqueous solution concentration of 1 mg / mL for each fraction were 40.0%, 58.6%, and 63.3%, respectively. The silica gel chromatography is then eluted with methanol. The eluate eluted with the methanol was collected and used as fraction d (yield: 20.8%). The tyrosinase inhibition rate of the fraction d at a concentration of 1 mg / mL was 89. %Met. The fraction a and the fraction b were further separated and purified by ODS column chromatography and silica gel column chromatography [eluent: hexane / ethylene acetate = 1: 2 (V / V)] to obtain 3-hydroxybutane. The acid was collected. The tyrosinase inhibition rate of 3-hydroxybutanoic acid 100 μg / mL was about 40%.
（３）次いで、画分ｄ１０ｇを、セファデックスＬＨ−２０（東ソー株式会社製）を用い、分子篩クロマトグラフィー（直径３．５ｃｍ、長さ４２ｃｍ）により、メタノール／水〔１：１（Ｖ／Ｖ）〕混合溶媒を用いて溶出した。ｖｏｉｄ ｖｏｌｕｍｅ（約１５０ｍＬ）の溶出液を溶出後、約１５ｍＬずつ試験管に分取し、順次番号を付与し、溶出Ｎｏ．とした。分取した溶出液の一部はＴＬＣで、クロロホルム／メタノール／水／酢酸〔３：３：１：０．１（Ｖ／Ｖ）〕混合溶媒を用いて展開し、ニンヒドリン試薬で呈色及びＵＶ２５４ｍｍでの発光により表１に示す６つの画分に分画し、画分ｄ１〜ｄ６とした。各画分の収率と１００μｇ／ｍＬのチロシナーゼ阻害率は表１に示した。
（４） チロシナーゼ阻害活性の高い画分ｄ３は、さらにシリカゲルクロマトグラフィー（直径２ｃｍ、長さ１５ｃｍ）にて、クロロホルム／メタノール／水〔５：４：１（Ｖ／Ｖ）〕混合溶媒を用いて溶出した。溶出液は、ＴＬＣで、クロロホルム／メタノール／水〔２：４：１（Ｖ／Ｖ）〕混合溶媒を用いて展開し、ニンヒドリン試薬で呈色により３つの画分を得た。それぞれ画分ｄ３−１（ニンヒドリン試薬で呈色しない画分、収率：０．０４％）、ｄ３−２（Ｒｆ値０．３、収率：０．１１％）、ｄ３−３（Ｒｆ値０．２及び０．４、収率：０．０４６％）とした。各画分の１００μｇ／ｍＬのチロシナーゼ阻害率はそれぞれ、３３％、４５．２％及び９０．６％であった。
ついで、溶出液をクロロホルム／メタノール／水〔４：４：１（Ｖ／Ｖ）〕混合溶媒に換えさらに溶出する。クロロホルム／メタノール／水〔４：４：１（Ｖ／Ｖ）〕混合溶媒で溶出される画分を回収し、画分ｄ３−４とした。画分ｄ３−４の収率は０．７７％で、１００μｇ／ｍＬのチロシナーゼ阻害率は８４．８％であった。
海泥熱水抽出物を精製し、１００μｇ／ｍＬのチロシナーゼ阻害率が８０％以上である
海泥エキスである画分ｄ３−３及び画分ｄ３−４を得た。これら海泥エキスは、海泥熱水抽出物に比較して約１／２０の量で、海泥熱水抽出物と同等のチロシナーゼ阻害活性を有するまで精製されたことが分かった。
(4) Fraction d3 having high tyrosinase inhibitory activity was further purified by silica gel chromatography (diameter 2 cm, length 15 cm) using a chloroform / methanol / water [5: 4: 1 (V / V)] mixed solvent. Eluted. The eluate was developed by TLC using a mixed solvent of chloroform / methanol / water [2: 4: 1 (V / V)], and three fractions were obtained by coloring with a ninhydrin reagent. Fraction d3-1 (fraction not colored with ninhydrin reagent, yield: 0.04%), d3-2 (Rf value 0.3, yield: 0.11%), d3-3 (Rf value) 0.2 and 0.4, yield: 0.046%). The tyrosinase inhibition rate of 100 μg / mL of each fraction was 33%, 45.2%, and 90.6%, respectively.
Next, the eluate is replaced with a mixed solvent of chloroform / methanol / water [4: 4: 1 (V / V)] and further eluted. The fraction eluted with a mixed solvent of chloroform / methanol / water [4: 4: 1 (V / V)] was collected and used as fraction d3-4. The yield of fraction d3-4 was 0.77%, and the tyrosinase inhibition rate at 100 μg / mL was 84.8%.
The sea mud hot water extract was purified to obtain fraction d3-3 and fraction d3-4, which are sea mud extracts having a tyrosinase inhibition rate of 100% or more at 80% or more. It was found that these sea mud extracts were purified to have a tyrosinase inhibitory activity equivalent to that of the sea mud hot water extract in an amount of about 1/20 that of the sea mud hot water extract.
本発明の美白化粧料は、チロシナーゼ阻害活性の高い海泥エキスを含有するため、メラニン産生による色素沈着を予防、抑制できる化粧料として有用である。 Since the whitening cosmetic composition of the present invention contains a sea mud extract having a high tyrosinase inhibitory activity, it is useful as a cosmetic composition capable of preventing and suppressing pigmentation due to melanin production.
Claims (3)
A tyrosinase inhibitor characterized by containing a sea mud extract obtained by purifying a sea mud hot water extract from Urkturbul Island in the Republic of Palau, and exhibiting a tyrosinase inhibitory activity of 80% or more at an aqueous solution concentration of 100 μg / mL.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2004098914A JP2005281228A (en) | 2004-03-30 | 2004-03-30 | Whitening cosmetic |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
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Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
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-
2004
- 2004-03-30 JP JP2004098914A patent/JP2005281228A/en active Pending
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
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| CN103181869A (en) * | 2013-03-28 | 2013-07-03 | 浙江大学 | Multiple-effect skin care lotion prepared from all-natural sea mud extraction and preparation method thereof |
| CN113484437A (en) * | 2021-07-06 | 2021-10-08 | 云南中烟工业有限责任公司 | Method for determining ultra-trace halocarban in environmental water sample and application thereof |
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