JP2005132768A - Composition for oral cavity - Google Patents
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本発明は、デヒドロアビエチン酸、ヒドロキシアビエチン酸、テトラヒドロキシアビエチン酸及びそれらの塩類から選ばれる１種又は２種以上を含有してなる口腔用組成物に関する。さらに詳しくは、デヒドロアビエチン酸、ヒドロキシアビエチン酸、テトラヒドロキシアビエチン酸及びそれらの塩類から選ばれる１種又は２種以上がマトリックスメタロプロテアーゼ活性を有効に阻害することによる歯周病の予防、治療用の口腔用組成物に関する。 The present invention relates to an oral composition containing one or more selected from dehydroabietic acid, hydroxyabietic acid, tetrahydroxyabietic acid and salts thereof. More specifically, one or more selected from dehydroabietic acid, hydroxyabietic acid, tetrahydroxyabietic acid and salts thereof effectively prevent matrix metalloprotease activity, thereby preventing or treating periodontal disease. The present invention relates to an oral composition.
マトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）は、細胞外マトリックスを分解する金属酵素の総称である。細胞外マトリックスは、哺乳動物の組織において細胞間のすきまを埋めている生体高分子であり、コラーゲンやプロテオグリカン、エラスチンなどを成分とする。この細胞外マトリックスの代謝は、マトリックスメタロプロテアーゼと、マトリックスメタロプロテアーゼに特異的な組織由来メタロプロテアーゼインヒビター（ＴＩＭＰ）とのバランスにより、主に調節されている。細胞外マトリックス成分の構造異常や、合成・分解の代謝バランスの崩れは、変形性関節症や慢性関節リウマチ等の関節疾患や癌の浸潤・転移と関連し、歯周病においても、病態の進行と種々のマトリックスメタロプロテアーゼ活性の上昇は関連していることが知られている。 Matrix metalloprotease (MMP) is a general term for metalloenzymes that degrade extracellular matrix. The extracellular matrix is a biopolymer that fills gaps between cells in mammalian tissue, and contains collagen, proteoglycan, elastin, and the like as components. The metabolism of this extracellular matrix is mainly regulated by the balance between matrix metalloprotease and tissue-derived metalloprotease inhibitor (TIMP) specific for matrix metalloprotease. Abnormal structure of extracellular matrix components and disruption of synthesis / degradation metabolic balance are associated with joint diseases such as osteoarthritis and rheumatoid arthritis, as well as cancer invasion and metastasis. And increased matrix metalloprotease activity are known to be related.
マトリックスメタロプロテアーゼとしては、コラゲナーゼ（MMP-1および8）、ストロメライシン（MMP-3）、ゼラチナーゼ（MMP-2および9）など１０種類以上の酵素分子種が知られ（吉原, 新名：炎症と免疫，2，177-185，1994）、これらは多種の細胞によって産生される。コラゲナーゼは通常上皮系の細胞からは産生されないが、歯周組織においては付着上皮およびポケット上皮周辺においてしばしば発現が認められている（M．Kylmaniemi et al： J．Dent Res．，75：919-926，1996）。また、基底膜の構成成分であるＩＶ型コラーゲンを分解するゼラチナーゼは、歯周病原因菌由来のリポ多糖等の因子の刺激により上皮細胞から産生されることが報告されており、これらのことから、マトリックスメタロプロテアーゼは、歯周病の進行と深く関っていると考えられる。 As matrix metalloproteases, more than 10 types of enzyme molecules such as collagenase (MMP-1 and 8), stromelysin (MMP-3), gelatinase (MMP-2 and 9) are known (Yoshihara, new name: inflammation) And immunization, 2, 177-185, 1994), these are produced by a variety of cells. Collagenase is not normally produced from epithelial cells, but in periodontal tissues it is frequently expressed around the adherent and pocket epithelium (M. Kylmaniemi et al: J. Dent Res., 75: 919-926). 1996). In addition, gelatinase that degrades type IV collagen, which is a component of the basement membrane, has been reported to be produced from epithelial cells by stimulation of factors such as lipopolysaccharide derived from periodontal disease-causing bacteria. Matrix metalloproteinases are thought to be deeply involved in the progression of periodontal disease.
さらに、歯周病患者の口腔洗浄液、歯肉溝滲出液および唾液中のマトリックスメタロプロテアーゼ量は、患者の病態を反映し、治療行為によりマトリックスメタロプロテアーゼ量が減少することが報告されている（M.．Makela et al：J．Dent Res．，73：1397−1406，1994）。また、マトリックスメタロプロテアーゼとＴＩＭＰの量を健常者と比較した場合、歯肉炎患者においてかなり高く、歯周炎患者はさらに高かったことが報告されている（A．Haerian et al：J．Clin Periodontol．，22：505-509，1995）。 In addition, the amount of matrix metalloprotease in oral irrigation fluid, gingival crevicular fluid and saliva of periodontal disease patients has been reported to reflect the patient's pathology, and the amount of matrix metalloprotease decreases with treatment (M. Makela et al: J. Dent Res., 73: 1397-1406, 1994). It has also been reported that when the amounts of matrix metalloprotease and TIMP are compared with those in healthy subjects, it is considerably higher in patients with gingivitis and higher in patients with periodontitis (A. Haerian et al: J. Clin Periodontol. 22: 505-509, 1995).
これまでに、テトラサイクリンおよびこの修飾体が、線維芽細胞と上皮細胞のマトリックスメタロプロテアーゼ活性を阻害することが報告されている（L．H．Nip et al：J．Periodont Res．，28：379-385，1993）。また、マトリックスメタロプロテアーゼに対する阻害剤として、多数のヒドロキサム酸誘導体（特表平7-505387号公報、特開平08-81443号公報）、エスクレチン誘導体（特開平08-183785号公報）等が合成され、天然物を由来とするフラボン類またはアントシアニジン類を有効成分とするものも報告されている（特開平08-104628号公報）。また、天然物由来のキノン、三環式ジテルペンおよび五環式トリテルペンが、マトリックスメタロプロテアーゼ活性に対する阻害効果、および／または、細胞のマトリックスメタロプロテアーゼ産生に対する阻害効果を有するとの報告がある。（特開平１１−１３９９４７号公報） To date, tetracycline and its modifications have been reported to inhibit matrix metalloprotease activity in fibroblasts and epithelial cells (L. H. Nip et al: J. Periodont Res., 28: 379-). 385, 1993). In addition, as inhibitors for matrix metalloproteases, a number of hydroxamic acid derivatives (JP 7-505387 A, JP 08-81443 A), esculetin derivatives (JP 08-183785 A) and the like are synthesized, A flavone derived from a natural product or an anthocyanidin as an active ingredient has also been reported (Japanese Patent Laid-Open No. 08-104628). In addition, it has been reported that quinones derived from natural products, tricyclic diterpenes and pentacyclic triterpenes have an inhibitory effect on matrix metalloprotease activity and / or an inhibitory effect on cellular matrix metalloprotease production. (JP-A-11-139947)
本発明の目的は、マトリックスメタロプロテアーゼ活性を阻害して歯周病の予防や治療効果に優れた口腔用組成物を提供することにある。 An object of the present invention is to provide a composition for oral cavity that inhibits matrix metalloprotease activity and is excellent in preventing and treating periodontal disease.
上記目的を達成するため、本発明者らは、鋭意研究を重ねた結果、デヒドロアビエチン酸、ヒドロキシアビエチン酸、テトラヒドロキシアビエチン酸及びそれらの塩類がマトリックスメタロプロテアーゼの活性に対して阻害効果を有し、これを配合した口腔用組成物が歯周病の予防、治療に有効であることを見出し、本発明を完成するに至った。 In order to achieve the above object, the present inventors have conducted intensive research, and as a result, dehydroabietic acid, hydroxyabietic acid, tetrahydroxyabietic acid and salts thereof have an inhibitory effect on the activity of matrix metalloprotease. The present inventors have found that an oral composition containing this composition is effective for the prevention and treatment of periodontal disease, and has completed the present invention.
すなわち、本発明は、マトリックスメタロプロテアーゼの活性を阻害する口腔用組成物を提供するものである。本発明によれば、安全、かつ歯周病の予防および治療に有効な口腔用組成物が提供できる。 That is, this invention provides the composition for oral cavity which inhibits the activity of a matrix metalloprotease. ADVANTAGE OF THE INVENTION According to this invention, the composition for oral cavity which is safe and effective in prevention and treatment of periodontal disease can be provided.
本発明は、
項１ デヒドロアビエチン酸、ヒドロキシアビエチン酸、テトラヒドロキシアビエチン酸及びそれらの塩類から選ばれる１種又は２種以上を含有してなる口腔用組成物。
項２ 口腔用組成物が洗口剤であることを特徴とする項１に記載の口腔用組成物。
項３ 口腔用組成物が歯周疾患予防用であることを特徴とする項１、項２の何れか１項に記載の口腔用組成物。
The present invention
Item 1 An oral composition comprising one or more selected from dehydroabietic acid, hydroxyabietic acid, tetrahydroxyabietic acid, and salts thereof.
Item 2. The oral composition according to Item 1, wherein the oral composition is a mouthwash.
Item 3. The oral composition according to any one of Items 1 and 2, wherein the oral composition is used for preventing periodontal disease.
以下に、本発明を詳細に説明する。
本発明に用いるマトリックスメタロプロテアーゼの活性を阻害する成分は、デヒドロアビエチン酸、ヒドロキシアビエチン酸、テトラヒドロキシアビエチン酸などのアビエチン酸誘導体とその塩類・等であり、特にデヒドロアビエチン酸が好ましい。デヒドロアビエチン酸は、松に含まれる樹脂を精製して得られる成分であり、例えばKE-604（荒川化学株式会社製）として商業的に入手できる。
本発明のデヒドロアビエチン酸などのマトリックスメタロプロテアーゼの活性を阻害する成分の配合量は０．００１〜１０重量％であり、特に０．０１〜３．０重量％が好ましい。配合量が０．００１重量％に満たないときは、十分な効果が得られず、１０重量％を超えると口腔用組成物として製剤化が困難となる。
The present invention is described in detail below.
Components that inhibit the activity of the matrix metalloprotease used in the present invention are abietic acid derivatives such as dehydroabietic acid, hydroxyabietic acid, and tetrahydroxyabietic acid, and salts thereof, and the like, and dehydroabietic acid is particularly preferable. Dehydroabietic acid is a component obtained by purifying a resin contained in pine, and is commercially available, for example, as KE-604 (manufactured by Arakawa Chemical Co., Ltd.).
The amount of the component that inhibits the activity of the matrix metalloprotease such as dehydroabietic acid of the present invention is 0.001 to 10% by weight, and particularly preferably 0.01 to 3.0% by weight. When the blending amount is less than 0.001% by weight, a sufficient effect cannot be obtained, and when the blending amount exceeds 10% by weight, it becomes difficult to formulate as an oral composition.
本発明における、マトリックスメタロプロテアーゼの活性阻害効果とは、歯周病等に罹患した歯周組織細胞が産生したマトリックスメタロプロテアーゼが、組織間の細胞外マトリックスを分解し、組織の破壊を増悪させるのを阻害することである。マトリックスメタロプロテアーゼの産生阻害効果は、歯周炎、歯肉炎、歯根膜炎、智歯周囲炎、インプラント周囲炎等の歯周疾患等の症状、疾患の予防、治療に有効である。
さらに本発明の成分に加えて、従来公知の殺菌剤を配合すると歯周疾患の諸症状、あるいは疾患の予防及び治療効果が向上することが期待される。具体的には、第４級アンモニウム塩、ビスビグアニド系、フェノール系が考えられるが、カチオン系の殺菌剤である第４級アンモニウム塩系、ビスビグアニド系殺菌剤が好ましく、特に塩化セチルピリジニウム、が好ましい。これら殺菌剤の配合量は、０．００１〜０．５重量％であり、特に０．０１〜０．１重量％が好ましい。
In the present invention, the activity inhibiting effect of matrix metalloproteinase means that matrix metalloprotease produced by periodontal tissue cells affected by periodontal disease etc. degrades extracellular matrix between tissues and worsens tissue destruction. Is to inhibit. The production inhibitory effect of matrix metalloprotease is effective for the prevention and treatment of symptoms such as periodontitis, gingivitis, periodontitis, periodontitis, periodontal disease such as peri-implantitis, and the like.
Furthermore, in addition to the components of the present invention, it is expected that various symptoms of periodontal disease or the prevention and treatment effect of the disease will be improved when a conventionally known disinfectant is added. Specifically, quaternary ammonium salts, bisbiguanides, and phenols may be considered, but quaternary ammonium salts and bisbiguanides that are cationic fungicides are preferred, and cetylpyridinium chloride is particularly preferred. preferable. The blending amount of these bactericides is 0.001 to 0.5% by weight, particularly 0.01 to 0.1% by weight.
本発明の口腔用組成物は、その形態に応じて種々の公知成分を配合し、練歯磨、液体歯磨、洗口剤、口腔用ゲル剤等として提供でき、特に洗口剤が最適の形態である。これらの口腔用組成物の形態にあっては、通常の製造方法によって製造することができ、特に洗口剤にあっては多孔質の材料を用い高圧下で製造する方法も有効とされる。
本発明では上記必須の成分以外にそれぞれの形態に応じ、その他の成分、例えば研磨剤、湿潤剤、１価アルコール、粘結剤、香料、甘味剤、ｐＨ調整剤、防腐剤、色素等を、本発明の効果を損なわない範囲で適宜配合することができる。
The oral composition of the present invention can be provided as a toothpaste, a liquid toothpaste, a mouthwash, a mouth gel, etc., particularly in the optimal form of a mouthwash, depending on its form. is there. In the form of these oral compositions, it can be produced by a normal production method. In particular, in the case of a mouthwash, a method of producing a porous material under high pressure is also effective.
In the present invention, in addition to the essential components described above, other components such as abrasives, wetting agents, monohydric alcohols, binders, fragrances, sweeteners, pH adjusters, preservatives, dyes, etc. It can mix | blend suitably in the range which does not impair the effect of this invention.
研磨剤として、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、第２リン酸カルシウム、ピロリン酸カルシウム、不溶性メタリン酸ナトリウム、酸化チタン、非晶質シリカ、結晶質シリカ、アルミノシリケート、酸化アルミニウム、水酸化アルミニウム、レジンなどを、単独または２種以上を組合わせて配合することができる。これらの配合量は、通常、組成物全量に対して１０〜６０重量％である。 As an abrasive, calcium carbonate, calcium phosphate, dicalcium phosphate, calcium pyrophosphate, insoluble sodium metaphosphate, titanium oxide, amorphous silica, crystalline silica, aluminosilicate, aluminum oxide, aluminum hydroxide, resin, etc. alone or 2 It can mix | blend combining a seed | species or more. These compounding quantities are 10-60 weight% normally with respect to the composition whole quantity.
湿潤剤としては、例えば、グリセリン、ソルビトール、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、エチレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ポリプロピレングリコール、キシリトール、マルチトール、ラクチトールなどの多価アルコールを、単独または２種以上を組み合わせて配合することができ、その配合量は、通常、組成物全体に対して３〜２０重量％である。 As the wetting agent, for example, polyhydric alcohols such as glycerin, sorbitol, polyethylene glycol, propylene glycol, ethylene glycol, 1,3-butylene glycol, polypropylene glycol, xylitol, maltitol, lactitol, alone or in combination of two or more. The blending amount is usually 3 to 20% by weight based on the entire composition.
１価アルコールとしては、例えば、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコールなどが挙げられ、特にエタノールが好ましい。これら１価アルコールは単独または２種以上を組み合わせて配合することができ、その配合量は、通常、組成物全体に対して０〜１５重量％である。 Examples of the monohydric alcohol include ethanol, propyl alcohol, and isopropyl alcohol, and ethanol is particularly preferable. These monohydric alcohols can be blended singly or in combination of two or more, and the blending amount is usually 0 to 15% by weight with respect to the whole composition.
粘結剤としては、例えば、カラギーナン、カルボキシメチルセルロース等のセルロース誘導体、アルギン酸ナトリウム等のアルカリ金属アルギネート、キサンタンガム、トラガカントガム、アラビアガム等のガム類、ポリビニルアルコール、ポリアクリル酸ナトリウム等の合成粘結剤、シリカゲル、アルミニウムシリカゲル、ビーガム等の無機粘結剤などが挙げられ、これら粘結剤の配合量は、通常、組成物全量に対して０．０１〜５重量％である。 Examples of the binder include cellulose derivatives such as carrageenan and carboxymethyl cellulose, alkali metal alginates such as sodium alginate, gums such as xanthan gum, tragacanth gum and gum arabic, and synthetic binders such as polyvinyl alcohol and sodium polyacrylate. Examples thereof include inorganic binders such as silica gel, aluminum silica gel, and bee gum. The amount of these binders is usually 0.01 to 5% by weight based on the total amount of the composition.
香味剤としては、例えば、アネトール、メントール、ペパーミント油、スペアミント油、レモン油、オレンジ油、セージ油、ローズマリー油、珪皮油、シソ油、冬緑油、丁子油、ユーカリ油、ピメント油、カルボン、シンナミックアルデヒド、シネオール、メントン、リモネン、サリチル酸メチルなどを本発明の効果を損なわない範囲で、単独または２種以上を組み合わせて配合することができる。その配合量は通常組成物全量に対して０．０００１〜１．０重量％である。 Examples of flavoring agents include anethole, menthol, peppermint oil, spearmint oil, lemon oil, orange oil, sage oil, rosemary oil, cinnamon oil, perilla oil, winter green oil, clove oil, eucalyptus oil, pimento oil, Carvone, cinnamic aldehyde, cineol, menthone, limonene, methyl salicylate and the like can be blended alone or in combination of two or more thereof within a range not impairing the effects of the present invention. The amount is usually 0.0001 to 1.0% by weight based on the total amount of the composition.
甘味剤としては、例えば、パラチニット、サッカリンナトリウム、アセスルファームカリウム、ステビオサイド、ネオヘスペリジルジヒドロカルコン、グリチルリチン、ペリラルチン、タウマチン、アスパラチルフェニルアラニルメチルエステル、ρ−メトキシシンナミックアルデヒドなどが挙げられ、これらは単独または２種以上を組み合わせて配合することができる。その配合量は、通常、組成物全体に対して０．０１〜１重量％、好ましくは０．０５〜０．５重量％である。 Examples of the sweetening agent include palatinit, saccharin sodium, acesulfame potassium, stevioside, neohesperidyl dihydrochalcone, glycyrrhizin, perilartine, thaumatin, asparatylphenylalanyl methyl ester, ρ-methoxycinnamic aldehyde, and the like. Can be blended alone or in combination of two or more. The compounding quantity is 0.01 to 1 weight% normally with respect to the whole composition, Preferably it is 0.05 to 0.5 weight%.
ｐＨ調整剤としては、例えば、クエン酸、リン酸、リンゴ酸、ピロリン酸、乳酸、酒石酸、グリセロリン酸、酢酸、硝酸、またはこれらの化学的に可能な塩や水酸化ナトリウムなどが挙げられ、これらは、組成物のｐＨが５〜９の範囲となるよう、単独または２種以上を組み合わせて配合することができる。その配合量は、通常、組成物全体に対して０．０１〜２重量％である。 Examples of the pH adjuster include citric acid, phosphoric acid, malic acid, pyrophosphoric acid, lactic acid, tartaric acid, glycerophosphoric acid, acetic acid, nitric acid, or a chemically possible salt thereof, sodium hydroxide, and the like. Can be blended alone or in combination of two or more so that the pH of the composition is in the range of 5-9. The amount is usually 0.01 to 2% by weight based on the entire composition.
さらに、本発明の口腔用組成物には、酢酸ｄｌ−α−トコフェロール、コハク酸トコフェロール、またはニコチン酸トコフェロールなどのビタミンＥ類、デキストラナーゼ、アミラーゼ、プロテアーゼ、ムタナーゼ、リゾチーム、溶菌酵素（リテックエンザイム）などの酵素、トラネキサム酸やイプシロンアミノカプロン酸の抗プラスミン剤、アルミニウムクロルヒドロキシルアラントイン、ジヒドロコレステロール、グリチルリチン塩類、グリチルレチン酸、グリセロフォスフェート、クロロフィル、塩化ナトリウム、カロペプタイド、水溶性無機リン酸化合物などを、単独または２種以上を組み合わせて配合することができる。本発明の口腔用組成物は、これらの成分を混合し、通常の方法に従って製造することができる。 Furthermore, the oral composition of the present invention includes vitamin Es such as dl-α-tocopherol acetate, tocopherol succinate, or tocopherol nicotinate, dextranase, amylase, protease, mutanase, lysozyme, lytic enzyme (lytech enzyme). ), Enzymes such as tranexamic acid and epsilon aminocaproic acid, aluminum chlorohydroxyl allantoin, dihydrocholesterol, glycyrrhizin salts, glycyrrhetinic acid, glycerophosphate, chlorophyll, sodium chloride, caropeptide, water-soluble inorganic phosphate compounds, It can mix | blend individually or in combination of 2 or more types. The composition for oral cavity of this invention can mix these components and can manufacture it according to a normal method.
以下に試験例および実施例により本発明をさらに具体的に説明するが，本発明は下記の試験例および実施例に制限されるものではない。また、特に断らない限り［％］は［重量％］である。 Hereinafter, the present invention will be described more specifically with reference to test examples and examples. However, the present invention is not limited to the following test examples and examples. Further, unless otherwise specified, [%] is [% by weight].
試験例１ マトリックスメタロプロテアーゼに対する阻害活性の測定
１．材料
１−１
被験化合物：デヒドロアビエチン酸
１−２
反応液の準備
被験化合物はメタノールで溶解し、基質緩衝液（５ｍＭ ＣａＣｌ2、１ｍＭ ＺｎＣｌ2含有 ５０ｍＭ トリス緩衝液、ｐＨ７．４）で１００倍以上に希釈し調製した。このとき、各化合物あたり３濃度（１０μｇ／ｍｌ、３０μｇ／ｍｌ、１００μｇ／ｍｌ）において試験を実施した。
Test Example 1 Measurement of inhibitory activity against matrix metalloprotease Material 1-1
Test compound: dehydroabietic acid 1-2
Preparation of reaction solution The test compound was dissolved in methanol and diluted 100-fold or more with a substrate buffer (5 mM CaCl 2 , 50 mM Tris buffer containing 1 mM ZnCl 2 , pH 7.4). At this time, the test was carried out at 3 concentrations (10 μg / ml, 30 μg / ml, 100 μg / ml) for each compound.
１−３
細胞および培養条件
歯肉繊維芽細胞（ＨＧＦ細胞）は初代培養し、１０％牛胎児血清（ＦＢＳ）を含むダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ）で継代した。
1-3
Cells and culture conditions Gingival fibroblasts (HGF cells) were primary cultured and passaged in Dulbecco's modified Eagle medium (DMEM) containing 10% fetal bovine serum (FBS).
１−４
細胞処理
ＨＧＦ 細胞を直径１０ｃｍのディッシュに撒き、１０％血清添加ＤＭＥＭ培地でコンフルエントになるまで培養した後、細胞表面を無血清 ＤＭＥＭ で洗浄した。洗浄後、無血清 ＤＭＥＭ で４８時間培養し、培養液上清をフィルターに移し、遠心・濃縮した。濃縮液を実験に供した。
1-4
Cell-treated HGF cells were seeded in a 10 cm diameter dish and cultured in DMEM medium supplemented with 10% serum until confluent, and then the cell surface was washed with serum-free DMEM. After washing, the cells were cultured in serum-free DMEM for 48 hours, the culture supernatant was transferred to a filter, and centrifuged and concentrated. The concentrated solution was used for the experiment.
２．コラゲナーゼ活性に対する阻害効果の測定
ＨＧＦ細胞由来コラゲナーゼに対する各被験化合物の阻害効果の測定は、ゼラチンを基質としたゼラチンザイモグラフィー法により行った。 酵素蛋白質をスラブ SDS-PAGE で分離後、ゲル内に共存する基質と酵素反応させる方法で、コラゲナーゼは青色の背景（ゼラチンゲル）に無色に抜けたバンドとして観察される。 スラブ電気泳動はＬａｅｍｌｉの方法に準じて行い、アクリルアミド１０％の分離用ゲルに終濃度０．３ｍｇ／ｍｌになるようにゼラチンを加えた。細胞上清をアプライし、泳動した。
泳動後、ゲルをＴｒｉｔｏｎ緩衝液（２．５％、Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００含有 ５０ｍＭトリス緩衝液、ｐＨ７．５）に浸し、２０分間振とうさせながらＳＤＳを除去した。次に、被験化合物を含む基質緩衝液に浸して３７℃で２０時間反応させた。ネガティブコントロールとしては被験化合物を添加しないものを用いた。酵素反応後、０．０２％クマジーブリリアントブルーＲ２５０で染色し、酢酸・メタノール水溶液でバンドが観察できるようになるまで脱色した。
2. Measurement of inhibitory effect on collagenase activity The inhibitory effect of each test compound on HGF cell-derived collagenase was measured by gelatin zymography using gelatin as a substrate. After separating the enzyme protein by slab SDS-PAGE, collagenase is observed as a colorless band on a blue background (gelatin gel) by reacting with a substrate coexisting in the gel. Slab electrophoresis was performed according to the Laemli method, and gelatin was added to a separation gel of 10% acrylamide to a final concentration of 0.3 mg / ml. Cell supernatant was applied and run.
After electrophoresis, the gel was immersed in Triton buffer (2.5%, Triton X-100-containing 50 mM Tris buffer, pH 7.5), and SDS was removed while shaking for 20 minutes. Next, it was immersed in a substrate buffer containing the test compound and reacted at 37 ° C. for 20 hours. As a negative control, a test compound to which no test compound was added was used. After the enzyme reaction, it was stained with 0.02% Coomassie brilliant blue R250 and decolorized until a band could be observed with an acetic acid / methanol aqueous solution.
被験化合物添加時のＭＭＰ活性バンドの面積を、無添加時（ネガティブコントロール）の面積と比較して以下の基準によって分類し、ＭＭＰ 活性阻害効果を評価した。酵素阻害活性の測定結果を表１に示す。 The area of the MMP activity band when the test compound was added was classified according to the following criteria in comparison with the area when no test compound was added (negative control), and the MMP activity inhibitory effect was evaluated. The measurement results of enzyme inhibitory activity are shown in Table 1.
評価基準
◎・・・阻害活性：強（バンドが全く視認できない）
○・・・阻害活性：中（バンドの幅が1/2程度となる）
△・・・阻害活性：弱（バンドの幅が2/3〜3/4程度となる）
×・・・阻害活性：なし（バンドの幅が全く変化しない）
Evaluation criteria ◎ ・ ・ ・ Inhibitory activity: Strong (no band visible at all)
○ ... Inhibitory activity: Medium (band width is about 1/2)
Δ: Inhibitory activity: weak (band width is about 2/3 to 3/4)
X: Inhibitory activity: None (the band width does not change at all)
更に、以下の処方により、常法に従って夫々製剤を調製した。
実施例１ 練歯磨
成分 配合量％
デヒドロアビエチン酸 １．０
酢酸dl・a−トコフェロール ０．０５
塩酸クロルヘキシジン ０．０５
ソルビット ４０．０
無水ケイ酸 ２０．０
カルボキシメチルセルロースナトリウム １．３
ラウリル硫酸ナトリウム １．０
パラオキシ安息香酸メチル ０．１
サッカリンナトリウム ０．１
アネトール ０．１
メントール ０．２
ペパーミント油 ０．４
グリセリン ５．０
精製水 残量
合計 １００．０
Furthermore, preparations were prepared according to the following formulas according to a conventional method.
Example 1 Toothpaste
Ingredient amount%
Dehydroabietic acid 1.0
Dl-a-tocopherol acetate 0.05
Chlorhexidine hydrochloride 0.05
Sorbit 40.0
Silicic anhydride 20.0
Sodium carboxymethylcellulose 1.3
Sodium lauryl sulfate 1.0
Methyl paraoxybenzoate 0.1
Saccharin sodium 0.1
Anethole 0.1
Menthol 0.2
Peppermint oil 0.4
Glycerin 5.0
Purified water remaining
Total 100.0
実施例２ 練歯磨
成分 配合量％
デヒドロアビエチン酸 ０．１
塩化セチルピリジニウム ０．０５
モノフルオロリン酸ナトリウム ０．７０
リン酸水素カルシウム ３５．０
ソルビット液 ２５．０
アルキルグルコシド １．０
ヒドロキシエチルセルロース １．０
パラオキシ安息香酸エステル ０．１
プロピレングリコール ２．０
サッカリンナトリウム ０．３
ペパーミント ０．２
サリチル酸メチル ０．１
アネトール ０．２
メントール ０．３
シネオール ０．１
精製水 残量
合計 １００．０
Example 2 Toothpaste
Ingredient amount%
Dehydroabietic acid 0.1
Cetylpyridinium chloride 0.05
Sodium monofluorophosphate 0.70
Calcium hydrogen phosphate 35.0
Sorbit liquid 25.0
Alkyl glucoside 1.0
Hydroxyethyl cellulose 1.0
Paraoxybenzoic acid ester 0.1
Propylene glycol 2.0
Saccharin sodium 0.3
Peppermint 0.2
Methyl salicylate 0.1
Anethole 0.2
Menthol 0.3
Cineol 0.1
Purified water remaining
Total 100.0
実施例３ 洗口剤
成分 配合量％
デヒドロアビエチン酸 ０．２
パラチニット ３０．０
プルロニック １．０
クエン酸 ０．１
クエン酸ナトリウム ０．３
ステビアエキス ０．２
アネトール ０．２
ペパーミント ０．５
スペアミント ０．０５
エタノール １０．０
ソルビトール １０．０
精製水 残量
合計 １００．０
Example 3 Mouthwash
Ingredient amount%
Dehydroabietic acid 0.2
Palatinit 30.0
Pluronic 1.0
Citric acid 0.1
Sodium citrate 0.3
Stevia extract 0.2
Anethole 0.2
Peppermint 0.5
Spearmint 0.05
Ethanol 10.0
Sorbitol 10.0
Purified water remaining
Total 100.0
実施例４ 練歯磨
成分 配合量％
第２リン酸カルシウム ３０．０
グリセリン １０．０
ソルビトール ２０．０
カルボキシメチルセルロースナトリウム １．０
ラウリル硫酸ナトリウム １．５
カラギーナン ０．５
サッカリンナトリウム ０．１
香料 １．０
安息香酸ナトリウム ０．３
ヒドロキシアビエチン酸 ０．２
グリチルリチン酸ジカリウム ０．０５
精製水 残量
合計 １００．０
Example 4 Toothpaste
Ingredient amount%
Dicalcium phosphate 30.0
Glycerin 10.0
Sorbitol 20.0
Sodium carboxymethylcellulose 1.0
Sodium lauryl sulfate 1.5
Carrageenan 0.5
Saccharin sodium 0.1
Fragrance 1.0
Sodium benzoate 0.3
Hydroxyabietic acid 0.2
Dipotassium glycyrrhizinate 0.05
Purified water remaining
Total 100.0
実施例５ 洗口剤
成分 配合量％
エタノール １０．０
グリセリン ５．０
クエン酸 ０．０１
クエン酸ナトリウム ０．１
ポリオキシエチレン(６０ＥＯ)硬化ヒマシ油 ０．５
パラオキシ安息香酸メチル ０．１
香料 ０．２
デヒドロアビエチン酸 ０．０５
トリクロサン ０．２
精製水 残量
合計 １００．０
Example 5 Mouthwash
Ingredient amount%
Ethanol 10.0
Glycerin 5.0
Citric acid 0.01
Sodium citrate 0.1
Polyoxyethylene (60EO) hydrogenated castor oil 0.5
Methyl paraoxybenzoate 0.1
Fragrance 0.2
Dehydroabietic acid 0.05
Triclosan 0.2
Purified water remaining
Total 100.0
実施例６ 洗口剤
成分 配合量％
エタノール １０．０
トラネキサム酸 ０．０５
グリセリン ５．０
クエン酸 ０．０１
クエン酸ナトリウム ０．１
ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油 ０．５
パラオキシ安息香酸メチル ０．１
テトラヒドロキシアビエチン酸 ０．１
シラカバエキス ０．５
精製水 残量
合計 １００．０
Example 6 Mouthwash
Ingredient amount%
Ethanol 10.0
Tranexamic acid 0.05
Glycerin 5.0
Citric acid 0.01
Sodium citrate 0.1
Polyoxyethylene hydrogenated castor oil 0.5
Methyl paraoxybenzoate 0.1
Tetrahydroxyabietic acid 0.1
Birch extract 0.5
Purified water remaining
Total 100.0
実施例７ 口腔用パスタ
成分 配合量％
流動パラフィン １３．０
セタノール １０．０
グリセリン ２５．０
ソルビタンモノパルミテート ０．６
ポリオキシエチレンソルビタンモノステアレート ５．０
ラウリル硫酸ナトリウム ０．１
塩化ベンゼトニウム ０．１
ニコチン酸トコフェロール ０．２
塩化セチルベンゼトニウム ０．０５
サリチル酸メチル ０．１
サッカリン ０．２
香料 ０．２５
ローズマリーエキス ０．２
α−アミリン ０．０５
デヒドロアビエチン酸 ０．５
精製水 残量
合計 １００．０
Example 7 Oral Pasta
Ingredient amount%
Liquid paraffin 13.0
Cetanol 10.0
Glycerin 25.0
Sorbitan monopalmitate 0.6
Polyoxyethylene sorbitan monostearate 5.0
Sodium lauryl sulfate 0.1
Benzethonium chloride 0.1
Tocopherol nicotinate 0.2
Cetylbenzethonium chloride 0.05
Methyl salicylate 0.1
Saccharin 0.2
Fragrance 0.25
Rosemary extract 0.2
α-Amylin 0.05
Dehydroabietic acid 0.5
Purified water remaining
Total 100.0
実施例８ 口腔用パスタ
成分 配合量％
カルボキシメチルセルロース ０．２
グリセリン ４０．０
デヒドロアビエチン酸 １．０
精製水 残量
合計 １００．０
Example 8 Oral Pasta
Ingredient amount%
Carboxymethylcellulose 0.2
Glycerin 40.0
Dehydroabietic acid 1.0
Purified water remaining
Total 100.0
実施例９ 洗口液
成分 配合量％
エタノール １０．０
グリセリン ５．０
クエン酸 ０．０１
クエン酸ナトリウム ０．１
ポリオキシエチレン（６０ＥＯ）硬化ヒマシ油 ０．５
パラオキシ安息香酸メチル ０．１
ヒドロキシアビエチン酸 ０．１
塩化セチルピリジニウム ０．５
精製水 残量
合計 １００．０
Example 9 Mouthwash
Ingredient amount%
Ethanol 10.0
Glycerin 5.0
Citric acid 0.01
Sodium citrate 0.1
Polyoxyethylene (60EO) hydrogenated castor oil 0.5
Methyl paraoxybenzoate 0.1
Hydroxyabietic acid 0.1
Cetylpyridinium chloride 0.5
Purified water remaining
Total 100.0
Claims (3)
The composition for oral cavity according to any one of claims 1 and 2, wherein the composition for oral cavity is for preventing periodontal disease.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2003370111A JP2005132768A (en) | 2003-10-30 | 2003-10-30 | Composition for oral cavity |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2003370111A JP2005132768A (en) | 2003-10-30 | 2003-10-30 | Composition for oral cavity |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2005132768A true JP2005132768A (en) | 2005-05-26 |
Family
ID=34647218
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2003370111A Withdrawn JP2005132768A (en) | 2003-10-30 | 2003-10-30 | Composition for oral cavity |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2005132768A (en) |
Cited By (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2008115174A (en) * | 2006-10-13 | 2008-05-22 | Sunstar Inc | Matrix metalloproteinase-8 inhibitor containing cysteine as active ingredients and prophylactic or therapeutic composition for periodontal disease in diabetic patient or person with impaired glucose tolerance |
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-
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- 2003-10-30 JP JP2003370111A patent/JP2005132768A/en not_active Withdrawn
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