JP2005106760A - 液体クロマトグラフィーによる分離方法。 - Google Patents
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Abstract
多糖誘導体を有効成分とする分離剤を用いた液体クロマトグラフィーによる有機混合物の分離方法において、特にアデニン誘導体のような塩基性化合物を確実に分離できる液体クロマトグラフィーによる有機混合物の分離方法を提供する。
【解決手段】
多糖誘導体を有効成分とする分離剤を用いる液体クロマトグラフィーによる分離方法であって、有機溶媒からなる順相移動相中に、500〜5000ppmの濃度となる水を添加することを特徴とする有機混合物の液体クロマトグラフィーによる分離方法。
【選択図】 なし。
Description
特許文献2には、多糖誘導体を有効成分とする分離剤を用いて液体クロマトグラフィーを行うとき、順相移動相中に各種の塩を添加することを特徴とする液体クロマトグラフィーによる分離方法が提案されている。
また、特許文献3には、多糖誘導体を有効成分とする分離剤を用いた液体クロマトグラフィーによる光学異性体の分離において、逆相条件下で塩基性移動相を用いる光学異性体分離方法が開示されている。
本発明の分離方法においては、前記有機混合物が、塩基性有機化合物の光学異性体混合物であるのが好ましい。
用いる多糖誘導体は、多糖の有する水酸基上の水素原子の一部あるいは全部、好ましくは85%以上を置換基で置換したものである。
前記多糖誘導体の原料となる多糖は、合成多糖、天然多糖、及び天然変性多糖のいずれかを問わず、光学活性であればいかなるものでもよいが、好ましいのは、高純度の多糖が容易に得られるセルロース、アミロース、β−1,4−キトサン、キチン、β−1,4−マンナン、β−1,4−キシラン、イヌリン、α−1,3−グルカン、β−1,3−グルカンである。これら多糖の数平均重合度(一分子中に含まれるピラノース環またはフラノース環の平均数)は5以上であり、特に上限はないが、取り扱い性の観点から、500以下であることが好ましい。
本発明に用いる多糖誘導体の好ましい具体例としては、下記に示すものが挙げられる。
有機溶媒成分に添加する水は特に制限されないが、不純物の少ない蒸留水や脱イオン水の使用が好ましい。
また、移動相へ添加しているのは微量な水であるため、分取などを行う際の後処理も有利である。
下記に示す(R)−9−(2’−ヒドロキシプロピル)アデニン(化合物(1R))、および(S)−9−(2’−ヒドロキシプロピル)アデニン(化合物(1S))の混合試料溶液を用いて分析を行った。試料は、化合物(1R)及び化合物(1S)のそれぞれを約0.5mgずつ量り取り、エタノール5mlに溶解させ、0.2μmミリポアフィルターにより濾過した後に、それぞれ約1mlを秤取し、混合して調製した。
キラルカラムについては、次のものを使用した。
・キラルカラム(A):セルローストリス(3,5−ジメチルフェニルカーバメート)(商品名:Opti−Pak XC、ダイセル化学(株)製)
・キラルカラム(B):セルローストリス(4−メチルベンゾエート)(商品名:CHRALCELOJ−H、ダイセル化学(株)製)
(i)分析用カラム:上記キラルカラム(A)または(B)
平均粒子径:10μm
カラムの大きさ:3.9mmφ×300mm(S/NC8420371)
(ii)流量:0.4ml/min
(iii)カラムオーブン:40℃
(iv)検出波長:UV254nm
(v)検出感度:0.032AUFS(検出器インティグレーダー出力:lV/AU)
キラルカラム(A)を使用し、移動相組成をn−ヘキサン/2−プロパノール=800/200(体積比)として移動相へ、濃度が1000ppmとなる量の水を添加した。相溶溶媒である2−プロパノールを添加することにより、n−ヘキサンと水の均一化を図った。移動相へ水を1000ppm添加した際の溶離曲線を図1に示す。図1中、横軸はリテンションタイム(分)、縦軸はピーク強度をそれぞれ示す(以下の図にて同じである。)。図1より、通常の順相移動相に水を添加したことにより、化合物(1R)と化合物(1S)とを分離することができた。
実施例1において、移動相組成をn−ヘキサン/エタノール=1000/100(体積比)とした以外は実施例1と同様に操作した。溶離曲線を図2に示す。
図2から明らかなように、水を添加しない通常の順相移動相では、化合物(1R)と化合物(1S)とを分離することができなかった。
比較例1において、順相移動相ヘジエチルアミンを0.1体積%添加してピーク形状の変化を観察した。溶離曲線を図3(a)、(b)に示す。図3(a)と(b)から明らかなように、比較例1の順相移動相へジエチルアミンを0.1体積%添加しても、溶離曲線のピーク形状はシャープにならなかった(ピーク形状は改善されなかった)。
実施例1において、キラルカラム(B)を使用し、移動相組成をn−ヘキサン/2−プロパノール/水=900/100/2(体積比)として、液体クロマトグラフィーによる分離を実施した。溶離曲線を図4に示す。
図4より、通常の順相移動相に水を添加したことにより、化合物(1R)と化合物(1S)とを分離することができた。
実施例2において、移動相組成をn−ヘキサン/2−プロパノール=900/100(体積比)とした以外は実施例2と同様に操作した。溶離曲線を図5に示す。
図5から明らかなように、水を添加しない通常の順相移動相では、化合物(1R)と化合物(1S)とを分離することができなかった。
実施例1及び2で、移動相へ水を添加することにより、溶離曲線のピーク形状を改善できることを見出し、化合物(1R)と化合物(1S)とを分離することができたが、本来順相系の分析用カラムの移動相中の水は分離状態の悪化や分析カラムヘダメージを与える可能性がある。そこで、移動相に水を添加したキラルカラム(A)及び(B)に、n−ヘキサン/2−プロパノール=800/200(体積比)の移動相を十分に通液し、充填剤表面の水を取り除いた後に、n−ヘキサン/2−プロパノール=900/150(体積比)の移動相へ切り替え、アデニン誘導体を分析し、キラルカラムのダメージ状況を確認した。
Claims (2)
- 多糖誘導体を有効成分とする分離剤を用いる液体クロマトグラフィーによる分離方法であって、有機溶媒からなる順相移動相中に、500〜5000ppmの濃度となる水を添加することを特徴とする液体クロマトグラフィーによる有機混合物の分離方法。
- 前記有機混合物が、塩基性有機化合物の光学異性体混合物であることを特徴とする請求項1記載の分離方法。
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