JP2005024483A - バイオセンサー - Google Patents
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Abstract
【解決手段】 生体分子の特異的結合に関与する分子を検出するバイオセンサーであって、(i)a)特異的結合反応と、b)酵素反応とを行う反応部と、(ii)反応a)およびb)によって生じた酸化還元性反応生成物と酸化還元物質膜が反応する検出部と、(iii)酸化還元反応生成物との反応による酸化還元物質膜の状態の変化を測定し、誘電率の変化を求める測定部とを含むことを特徴とするバイオセンサー。
【選択図】 図1
Description
(競合法EIAを用いた本発明のバイオセンサー(微小流路SPR測定装置)によるhIgGの測定方法)
競合法によってhIgGを検出する場合の微小流路内部の一連の反応を本発明の一測定例として、図3および図4に従って説明する。図3は、図2の点線7で縦断した縦横の縮尺を考慮しない断面模式図である。検出分子30として、抗原であるhIgG(コスモバイ社製)、この認識分子28として、抗体である抗hIgG(シグマ社製)を使って検出する競合法EIAを微小流路で行う測定例1の反応を示している。本測定例では、以上の抗原および抗体を用いて抗原抗体反応を利用することができるが、必ずしもこれに限る必要はなく、例えば生体分子としてDNAおよびタンパク質、特異的に結合する分子としてこれらに特異的に結合する物質を用いることができる。本測定例のEIAで増幅に用いる酵素はグルコース酸化酵素(GOD)、その酵素反応生成物である酸化還元反応生成物は過酸化水素であり、過酸化水素を捕捉する膜(酸化還元物質膜)はHRP−OSポリマー膜(BAS社製)である。用いられる酵素は、従来から周知の酵素を用いてよく、例えば、ペルオキシダーゼ、グルコース酸化酵素、酪酸酸化酵素、グルタミン酸化酵素、ヒスタミン酸化酵素、コリン酸化酵素およびコレステロール酸化酵素を挙げることができる(非特許文献6、7を参照)。グルコース酸化酵素によるグルコースの酸化還元反応生成物である過酸化水素が検出部のHRP−OSポリマーに捕捉される結果、OSポリマーの酸化還元状態が変化する(図4(b))。この酸化還元状態の変化を、金薄膜を通して光を照射してSPR測定装置(DKK社製)で測定する。
(非競合法を用いた本発明のバイオセンサー(微小流路SPR測定装置)によるhIgG測定方法)
測定例1と同様に、図2の微小流路を用いて、サンドイッチイムノアセイを行った。測定例1の抗hIgG−G−GODと同時にhIgG結合可能なFc部分を認識する抗hIgG−Fc(American Qualex Antibodies社製)でhIgGを検出する。抗hIgG−Fcを図3の符号23にSAM法で固定し、ポートA(図2の符号8)からサンプル(hIgG)を送液した。抗hIgG−Fcの一部には、hIgGが結合する。次に送液ポートB(図2の符号9)から抗hIgG−G−GODを送液する。抗hIgG−G−GODは、すでにhIgGが結合している部分に結合する。次に送液ポートC(図2の符号10)から、グルコースを100μM含む緩衝溶液を送液した。抗hIgG−Fc固定部分(図2の符号15および図3の符号23)に結合した抗hIgG−G−GODのグルコース酸化酵素の活性によって、その場で過酸化水素が発生する。この過酸化水素を、酸化還元物質膜であるHRP−OSポリマー膜部分(図3の符号24)で、測定例1と同様に測定した。流路が薄層であるために、ほとんどの過酸化水素が、HRP−OSポリマー膜部分で反応し、さらにHRP−OSポリマー膜の酸化反応として積算される。時間をかけて酸化還元物質膜の酸化状態をSPRで測定すると、HRP−OSポリマー膜に結合したhIgGの濃度に比例した速度で、酸化速度が変化した。さらに、hIgGの濃度が近くても微小流路を使った測定で、サンドイッチイムノアセイを使って効果的に酵素増幅することができた。
1.微小流路では効果が低かった、酵素抗体測定法による免疫センサーの感度を向上することができる。
2.酵素抗体法による増幅に加えて、酸化還元状態変化による酵素反応生成物の局所的蓄積により高感度化することができる。
3.酵素抗体法の最終的検出手段として、ELISAや種々の高感度手法と組み合わせてセンサーの高機能化を図ることができる。
2 金薄膜基板
3 SPR測定装置のプリズム
4 SPR測定装置本体
5 金薄膜マスクパターン
6 微小流路マスクパターン
7 図3で示す断面を表す補助線
8 送液ポートA
9 送液ポートB
10 送液ポートC
11 出液ポート
12 電極パッドA
13 電極パッドB
14 電極パッドC
15 反応部
16 検出部
17 基板
18 微小流路の天井
19 金薄膜
20 電極パッドAにつながる金薄膜(参照極)
21 電極パッドCにつながる金薄膜(作用極)
22 電極パッドBにつながる金薄膜(対極)
23 認識分子固定膜
24 検出部
25 微小流路の深さ
26 流れる方向
27 金薄膜
28 認識分子(抗hIgG)
29 酵素結合コンジュゲート(抗hIgG−G−GOD)
30 検出分子(被認識分子・hIgG)
31 酸化還元物質膜(HRP−Osポリマー複合膜)
32 センサー(検出部)
Claims (5)
- 生体分子の特異的結合に関与する分子を検出するバイオセンサーであって、
(i)a)特異的結合反応と、b)酵素反応とを行う反応部と、
(ii)反応a)およびb)によって生じた酸化還元性反応生成物と酸化還元物質膜が反応する検出部と、
(iii)酸化還元反応生成物との反応による酸化還元物質膜の状態の変化を測定し、誘電率の変化を求める測定部と
を含むことを特徴とするバイオセンサー。 - 生体分子の特異的結合に関与する分子を検出する際に用いられる微小流路であって、
(i)a)特異的結合反応と、b)酵素反応とを行う反応部、および
(ii)反応a)およびb)によって生じた酸化還元性反応生成物と酸化還元物質膜が反応する検出部
を含むことを特徴とする微小流路。 - 生体分子の特異的結合に関与する分子を検出するバイオセンサーであって、
(i)a)特異的結合反応と、b)酵素反応とを行う反応部、および
(ii)反応a)およびb)によって生じた酸化還元性反応生成物と酸化還元物質膜が反応する検出部
を含む微小流路と、
(iii) 酸化還元反応生成物との反応による酸化還元物質膜の状態の変化を測定し、誘電率の変化を求める測定部と
を含むことを特徴とするバイオセンサー。 - 誘電率の変化の測定方法が表面プラズモン共鳴を用いる測定方法であることを特徴とする請求項1または3に記載のバイオセンサー。
- 特異的結合が抗原と抗体との結合であることを特徴とする請求項1、3または4に記載のバイオセンサー。
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