JP2004537500A - 腫瘍の増殖の阻害および免疫応答の増強のための方法および組成物 - Google Patents

Abstract

被験体にＩＬ−１３のインヒビターまたはＮＫ−Ｔ細胞のインヒビターを投与することによって、被験体における免疫応答を増強する方法および組成物が提供される。この方法は、被験体において、腫瘍の増殖を予防する（例えば、腫瘍の再発または転移を阻害する）ために使用され得る。この方法はまた、被験体において、ワクチンに対する応答を増強するために使用され得る。本発明は、ＩＬ−１３のインヒビターの被験体への投与、または被験体におけるＮＫ−Ｔ細胞の機能の崩壊が、腫瘍の再発を阻害するという発見に一部基づいている。

Description

【０００１】
（発明の分野）
本発明は、一般に、免疫応答を増強するための方法および組成物に関し、そしてより具体的には、ＩＬ−１３の発現もしくは活性および／またはＮＫ−Ｔ細胞活性を阻害することによって、免疫応答を阻害するための方法および組成物に関する。
【０００２】
（発明の背景）
サイトカインＩＬ−１３は、数種の生物学的活性に関係している。これらの活性としては、例えば、ＩｇＧ_４およびＩｇＥスイッチングの誘導、生殖細胞系ＩｇＥ重鎖ε転写の誘導、正常なヒトＢ細胞におけるＣＤ２３の発現、ならびにＣＤ４０Ｌまたは抗ＣＤ４０ｍＡｂの存在下におけるＢ細胞増殖の誘導が挙げられる。
【０００３】
ＩＬ−１３は、サイトカインＩＬ−４と、いくつかの機能的な特性を共有する。ＩＬ−１３の多くの報告された活性は、ＩＬ−４の活性と類似しているが、ＩＬ−１３は、活性化されたＴ細胞またはＴ細胞クローンに対して、増殖を促進する効果を有さない。
【０００４】
ＩＬ−１３は、標的細胞の表面上で、ＩＬ−１３レセプター（「ＩＬ−１３Ｒ」）と相互作用することによって、特定の生物学的活性を示す。ＩＬ−１３ＲおよびＩＬ−４レセプター（「ＩＬ−４Ｒ」）は、共通の成分を共有し、この成分は、レセプターの活性化に必要とされる。しかし、ＩＬ−１３は、ＩＬ−４を用いてトランスフェトされた細胞に結合しない。
【０００５】
（発明の要旨）
本発明は、ＩＬ−１３のインヒビターの被験体への投与、または被験体におけるＮＫ−Ｔ細胞の機能の崩壊が、腫瘍の再発を阻害するという発見に一部基づいている。従って、本発明は、ＩＬ−１３インヒビターまたはＮＫ−Ｔ細胞インヒビターを被験体に投与することによって、被験体の腫瘍の増殖を阻害する方法を含む。
【０００６】
ＩＬ−１３インヒビターは、好ましくは、無毒のインヒビターである。例えば、このインヒビターは、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ体外毒素、リシン、アブリンおよびジフテリア毒素のような細胞傷害部分を欠失する。
【０００７】
いくつかの実施形態において、インヒビターは、ＩＬ−１３ポリペプチドに対するリガンドである。適切なＩＬ−１３リガンドの１例は、ＩＬ−１３レセプターのＩＬ−１３結合領域を含むポリペプチドである。
【０００８】
好ましくは、このポリペプチドはまた、免疫グロブリンポリペプチドを含む。いくつかの実施形態において、インヒビターは、可溶性哺乳動物（例えば、マウスまたはヒト）ＩＬ−１３レセプター部分およびヒトＩｇＧ_１ポリペプチドの領域を含む、融合タンパク質である。好ましいＩＬ−１３リガンドは、ｓＩＬ−１３Ｒα２．Ｆｃであり、これは、Ｄｏｎａｌｄｓｏｎら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６１：２３１７−２４，１９９８に記載されている。
【０００９】
別の適切なインヒビターは、ＩＬ−１３アンタゴニスト（例えば、ＩＬ−１３ポリペプチドに結合するアンタゴニスト抗体）である。この抗体は、ポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体のいずれかであり得る。ＩＬ−１３に対する抗体は、当該分野で公知の技術を使用して作製され得る。例えば、ＩＬ−１３ポリペプチドを、動物を免疫するために使用して、ＩＬ−１３タンパク質と特異的に反応し、そしてＩＬ−１３、またはそのフラグメントがそのレセプターに結合するのを阻害し得る、ポリクローナル抗体およびモノクローナル抗体を得ることができる。このような抗体は、免疫原としてＩＬ−１３全体を使用して、またはＩＬ−１３のフラグメント（例えば、可溶性成熟ＩＬ−１３）を使用することによって得られ得る。ＩＬ−１３のより小さなフラグメントをまた使用して、動物を免疫化し得る。このペプチドの免疫原はさらに、カルボキシル末端にシステイン残基を含み得、そしてハプテン（例えば、キーホールカサガイヘモシアニン（ｋｅｙｈｏｌｅ ｌｉｍｐｅｔ ｈｅｍｏｃｙａｎｉｎ）（ＫＬＨ））に結合体化される。さらなるペプチド免疫原は、チロシン残基を硫酸化したチロシン残基と置換することによって生成され得る。このようなペプチドを合成する方法は、当該分野において公知である（例えば、Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ，Ｊ．Ａｍｅｒ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．８５，２１４９−２１５４，１９６３に記載される）。
【００１０】
腫瘍の増殖または発生はまた、ＣＤ１制限ＮＫ−Ｔ細胞の活性をブロックすることによって阻害される。好ましくは、インヒビターは、ＣＤ−１分子に結合する。ＣＤ−１結合インヒビターの例としては、抗ＣＤ−１抗体または他の可溶性抗ＣＤ１リガンドが挙げられる。抗ＣＤ１抗体は、当該分野で公知であり、例えば、Ｒｏａｒｋら、Ｊ．Ｉｍｍ．１６０：３１２１−２７，１９９８に記載されている。
【００１１】
別の実施形態において、インヒビターは、ＮＫ−Ｔ細胞特異的マーカーに結合する。ＮＫ−Ｔ細胞特異的マーカーの例は、Ｖα２４ポリペプチドである。このインヒビターの例は、Ｖα２４ポリペプチドに対する抗体である。この抗体は、モノクローナル抗体またはポリクローナル抗体のいずれかであり、そして上記の方法を使用して生成され得る。Ｖα２４ポリペプチドを認識する抗体は、例えば、Ｐｒｕｓｓｉｎら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５９，５８６２−７０，１９９７に記載されている。
【００１２】
このインヒビターは、一次腫瘍、転移性腫瘍、またはその両方のいずれかの増殖を阻害するために、投与され得る。従って、いくつかの実施形態において、このインヒビターは、被験体において一次腫瘍を検出する前に、例えば、一次腫瘍の増殖を阻害するために、投与される。他の実施形態において、インヒビターは、被験体において一次腫瘍を検出した後に、例えば、一次腫瘍の再発を阻害するため、または転移を阻害するために、投与される。
【００１３】
好ましい実施形態において、このインヒビターは、被験体において腫瘍の増殖を阻害するのに十分な量で投与される。例えば、このインヒビターは、治療有効量で投与され得る。「治療有効量」とは、患者の意義ある利益（例えば、腫瘍の症状の緩和、腫瘍の治癒、または腫瘍のサイズもしくは他の特性の減少）を示すのに十分である、薬学的組成物または方法の各活性成分の総量を意味する。
【００１４】
被験体は、例えば、動物（例えば、ヒト、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、ブタ、またはげっ歯類）（例えば、マウスもしくはラット）であり得る。
【００１５】
被験体は、腫瘍の発達について増加したリスクが存在し得る。「増加したリスク」は、被験体が、１以上の遺伝因子もしくは環境因子、またはその両方が異なる、年齢が一致するコントロールよりも、腫瘍をより発達しそうであることを意味する。例えば、被験体は、被験体に腫瘍の増加したリスクに対する素因を与える遺伝子の対立遺伝子を有し得る。この被験体は、対立遺伝子を遺伝し得、すなわち、被験体は、腫瘍の発達について増加したリスクの家族性の病歴を有し得る。この対立遺伝子は、被験体のプロトオンコジーンまたは腫瘍サプレッサ遺伝子において見出され得る。プロトオンコジーンの例としては、例えば、ｒａｓ遺伝子およびｍｙｃ遺伝子が挙げられる。腫瘍サプレッサ遺伝子の例としては、例えば、網膜芽細胞腫遺伝子、ｐ５３遺伝子、ＢＲＣＡ遺伝子、ＡＰＣ、およびＤＣＣ遺伝子が挙げられる。環境状態は、公知の発癌物質または疑わしい発癌物質に被験体を曝す状態を含み得る。
【００１６】
一般的に、任意のタイプの腫瘍は、インヒビターで処置され得る。好ましくは、この腫瘍は、再発する腫瘍（すなわち、免疫学的監視に供される腫瘍）である。適切な腫瘍の型の例としては、癌腫、肉腫、または血液細胞の癌が挙げられる。従って、腫瘍は、肝臓癌、黒色腫、子宮癌、精巣癌、乳癌、直腸結腸癌、肺癌、前立腺癌、腎細胞癌、頚部癌、膵臓癌、卵巣癌、甲状腺癌、鼻咽頭腫瘍、白血病、およびリンパ腫（例えば、バーキットリンパ腫）であり得る。
【００１７】
所望の場合、このインヒビターは、腫瘍の増殖を阻害することが意図される更なる処置レジメンに沿って投与され得る。例えば、さらなる処置レジメンは、腫瘍の増殖を阻害する第２の因子の投与を含み得る。適切な第２の因子は、被験体において、インターフェロンγのレベルを増加させる因子である。この第２の因子は、インターフェロンγ自体であり得る。
【００１８】
このインヒビターおよび第２の因子（所望の場合）は、薬学的組成物の形態で提供され得る。任意の適切な投与経路および投薬スケジュールは、インヒビター、またはこのインヒビターを含む薬学的組成物を送達するために使用され得る。このインヒビターが経口投与される場合、インヒビターは、錠剤、カプセル、粉末、溶液、またはエリキシルの形態であり得る。錠剤形態で投与した場合、本発明の薬学的組成物は、固体キャリア（例えば、ゼラチンまたはアジュバント）をさらに含み得る。錠剤、カプセル、および粉末は、５〜９５％のインヒビター、そして好ましくは、約２５〜９０％のインヒビターを含む。液体形状で投与される場合、液体キャリア（例えば、水、石油、動物または植物由来の油（例えば、ピーナッツ油、鉱油、もしくは大豆油、ゴマ油、または合成油））が添加され得る。薬学的組成物の液体形態は、生理学的生理食塩水溶液、デキストロースもしくは他のサッカリド溶液、またはグリコール（例えば、エチレングリコール、プロピレングリコール、またはポリエチレングリコール）をさらに含み得る。液体形態で投与された場合、薬学的組成物は、約０．５〜９０重量％のインヒビター、そして好ましくは約１〜５０重量％のインヒビターを含む。
【００１９】
治療学的に有効量のインヒビターが、静脈内、皮膚、または皮下に注射することによって投与される場合、このインヒビターは、発熱物質を含まない非経口的に受容可能な水溶液の形態である。このような非経口的に受容可能なタンパク質溶液（ｐＨ、等張性、安定性などに関するデュー（ｄｕｅ）を有する）は、当該分野の技術範囲内である。静脈内、皮膚、または皮下への注射のために、好ましい薬学的組成物は、インヒビターに加えて、等張性ビヒクル（例えば、塩化ナトリウム注射液、リンガー注射液、デキストロース注射液、デキストロースおよび塩化ナトリウム注射液、乳酸リンガー注射液、または他の当該分野で公知のビヒクル）を含む。本発明の薬学的組成物は、安定剤、保存剤、緩衝剤、抗酸化剤、または当業者に公知の添加剤を含み得る。
【００２０】
本発明の薬学的組成物中のインヒビターの量は、処置されるべき状態の性質および重篤度、および患者が受けた前処置の性質に依存する。
【００２１】
本発明の薬学的組成物を使用する静脈内治療の期間は、処置されるべき疾患の重篤度状態、および各個々の患者の潜在的な特有の応答に依存して変化する。
【００２２】
究極的に、担当医は、本発明の薬学的組成物を使用した、静脈治療の適切な期間を決定する。いくつかの実施形態において、インヒビターが、徐放組成物中に提供される。時限放出（ｔｉｍｅ−ｒｅｌｅａｓｅ）組成物は、マイクロ粒子中に含まれる。
【００２３】
マイクロ粒子は、当該分野で公知であり、そして米国特許第６，０１３，２５８号において記載されるマイクロ粒子を含む。マイクロ粒子中に含むために適切な材料としては、ポリ−乳酸−ｃｏ−グリコール酸（ＰＬＧＡ）のようなポリマー材料が挙げられる。
【００２４】
ＩＬ−１３インヒビターまたはＮＫ−Ｔ細胞インヒビターを被験体に投与することによって、被験体中でのウイルスの増殖を阻害する方法がまた、本発明の範囲内である。ＩＬ−１３インヒビターまたはＮＫ−Ｔ細胞インヒビターは、本明細書中に記載される、ＩＬ−１３インヒビターまたはＮＫ−Ｔ細胞インヒビターのうちのいずれかであり得る。
【００２５】
いくつかの実施形態において、このインヒビターは、ウイルスによって、哺乳動物の慢性的な感染を阻害するのに使用される。このインヒビターは、ウイルスによる急性感染を受けていると診断された哺乳動物被験体に投与される。
【００２６】
好ましくは、このインヒビターは、被験体のウイルスへの最初の曝露の前または曝露の間に、投与される。いくつかの実施形態において、ウイルスは、被験体において慢性的な感染を引き起こすか、または引き起こし得る。これらのウイルスとしては、例えば、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、エプスタイン−バーウイルス（ＥＢＶ）、ヒトＴ細胞白血病ウイルス（ＨＴＬＶ）、およびヒト乳頭腫ウイルス（ＨＰＶ）（例えば、ＨＰＶ株１６）が挙げられ得る。
【００２７】
本発明はまた、ＩＬ−１３またはＮＫ−Ｔ細胞を被験体に投与することによって、被験体における免疫応答を増強する方法を含む。このインヒビターは、ＩＬ−１３ポリペプチドに対するリガンドを含み得る。いくつかの実施形態において、このインヒビターは、ワクチンに対する応答を増強するように添加される。このインヒビターは、ワクチン接種の前、ワクチン接種と同時に、またはワクチン接種の後に、投与され得る。例えば、このインヒビターは、ワクチンを被験体に導入する前約３０日以内と導入後約３０日以内との間に投与され得る。
【００２８】
このワクチンが、例えば、腫瘍（例えば、本明細書中に列挙される腫瘍型）または病原体に指向され得る。いくつかの実施形態において、この病原体は、ウイルス、細菌、または真核生物細胞である。
【００２９】
ウイルスは、例えば、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）であり得る。本明細書中に記載される方法において使用されるＨＩＶウイルスは、米国特許第５，９３２，３１８号；Ａｈｌｅｒｓら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５０：５６４７−６５，１９９３（構築物ＰＣＬＵＳ６−１８ＩＩＩＢを記載する）；およびＡｈｌｅｒｓら、ＡＩＤＳ Ｒｅｓ．Ｈｕｍ．Ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓｅｓ １２：２５９−２７２，１９９６に記載されるワクチンを含み得る。このペプチドワクチンは、好ましくは、複数の免疫決定因子を提示するＨＩＶ−１エンベロープタンパク質のペプチドを含む。このペプチドワクチンは、好ましくは、種々のＭＨＣ型を有するマウスにおける、体液性免疫応答と細胞媒介免疫応答との両方を惹起する。このようなペプチドの例は、ＰＣＬＵＳ６．１−１８ＩＩＩＢ（例えば、米国特許第６，２１４，３４７号に記載されている）である。
【００３０】
このインヒビターは、予防的または治療的に投与され得、そしてワクチンの予防的送達または治療的送達と組み合わせて投与され得る。
【００３１】
所望の場合、このインヒビターは、免疫応答を増強する第２の因子またはさらなる因子と組み合わせて投与され得る。さらなる因子としては、例えば、アジュバント、サイトカイン（例えば、ＩＬ−１２）、およびＧＭ−ＣＳＦが挙げられる。
【００３２】
このインヒビターは、さらに、ＩＬ−１３インヒビターをコードする核酸であり得る。ＩＬ−１３インヒビターをコードする核酸は、標準的な方法（例えば、Ｆｅｌｇｎｅｒら、米国特許第５，５８０，８５９号に記載される方法）を使用して投与され得る。約１〜２００μｇのＤＮＡの投薬量が、体重１ｋｇあたりに投与されることが予想される。患者がヒト成人である場合、ワクチン接種のレジメンは、例えば、マイクロ粒子内で送達される場合、１０〜１００μｇの核酸、または１００〜１０００μｇの裸のＤＮＡを、数回（例えば、３〜６回）繰り返して筋肉内投与または皮下投与することを含み得る。
【００３３】
他の標準的な送達方法（例えば、微粒子銃による移入、またはエキソビボ処置）がまた使用され得る。エキソビボ処置において、例えば、抗原提示細胞（ＡＰＣ）、樹状細胞、末梢血単核細胞、または骨髄細胞は、患者または適切なドナーから得られ得、そして免疫原組成物を用いてエキソビボで活性化され得、次いで患者に戻される。
【００３４】
他に規定されない場合、本明細書中で使用される全ての技術用語および科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般に理解されるのと同一の意味を有する。本明細書に記載されるのと類似または等しい方法および材料が、本発明の実施または試験において使用され得、適切な方法および材料が、以下に記載されている。全ての刊行物、特許出願、特許、および本明細書中に記載される他の参考文献は、その全体が本明細書中で参考として援用されている。競合する場合、本発明の明細書（定義を含む）が、制御する。さらに、材料、方法および例は、例示のためのみであり、限定することを意図するものではない。
【００３５】
本発明の他の特徴および利点は、以下の詳細の説明および特許請求の範囲から明らかである。
【００３６】
（発明の詳細な説明）
本発明は、被験体における腫瘍増殖を阻害するための組成物および方法を提供する。ウイルス感染を処置するための方法および組成物、ならびに被験体において免疫応答を増強するための方法および組成物もまた提供する。
【００３７】
ＩＬ−１３レセプターの可溶性形態の投与は、マウスモデル系における腫瘍再発を阻害することが見出された。ＮＫ−Ｔ細胞活性の阻害は、同様に、モデル系における腫瘍再発を阻害することが見出された。これらの結果は、ＩＬ−１３ポリペプチドおよびＮＫ−Ｔ細胞に対するリガンドが免疫応答（腫瘍監視に関係するもの）を阻害するように作用することを示唆する。免疫応答は、ＩＬ−１３機能および／またはＮＫ−Ｔ細胞機能を阻害することによって増強された。
【００３８】
この方法および組成物は、被験体において、原発腫瘍増殖または２次腫瘍増殖（転移）のいずれかを阻害するために使用され得る。例えば、この方法および組成物は、原発腫瘍のさらなる増殖を阻害するために、原発腫瘍を診断された被験体での使用に適切である。あるいは、またはさらに、本明細書中で開示される方法および組成物はまた、原発腫瘍の転移の発達を阻害するために使用され得る。
【００３９】
本発明は、以下の実施例にさらに説明され、これらの実施例は、添付の特許請求の範囲を制限しない。
【００４０】
（実施例１．腫瘍再発のＩＬ−１３インヒビター媒介阻害の同定）
この実施例は、腫瘍免疫監視の重要なインヒビターとしてＩＬ−１３を同定する研究を説明する。ＣＤ４分子に対する抗体を用いたマウスの処置が、腫瘍細胞の注射の１０日以内に投与された場合、細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）媒介腫瘍監視を阻害することを示す研究を最初に提示する。次に、その腫瘍再発が、ＩＬ−４ ＫＯマウスにおいて生じるが、ＩＬ−４Ｒ ＫＯマウスでもシグナルトランスデュサーおよび転写のアクチベーター（ＳＴＡＴ）６ ＫＯマウスにおいても生じないことを示す研究が提示される。これらの結果は、ＩＬ−１３が免疫再発に関係することを示唆する。これらの結果は、ＣＤ−４欠損マウスがより低いレベルのＩＬ−１３を産生したことを示すこと、ならびに（ｓＩＬ−１３Ｒα２．Ｆｃ）、ＩＬ−１３インヒビターの投与が腫瘍再発を阻害することを示すデータによって実証される。
【００４１】
本明細書中に記載される研究について、雌性ＢＡＬＢ／ｃマウスを、Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｂｒｅｅｄｉｎｇ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｆｒｅｄｅｒｉｃｋ，ＭＤ）から購入した。ＢＡＬＢ／ｃバックグラウンドにおける、ＩＬ−４ノックアウト（ＫＯ）マウス（Ｎｏｂｅｎ−Ｔｒａｕｔｈら、Ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ Ｒｅｓ５：４８７〜９１、１９９６）を、Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（Ｂａｒ Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ）から得た。Ｃ５７ＢＬ／６ＮＫ１．１遺伝子座に類遺伝子性のＢＡＬＢ／ｃマウス系統は、Ｄｒｓ．Ａｎｔｈｏｎｙ Ｓｃａｌｚｏ ａｎｄ Ｗａｙｎｅ Ｙｏｋａｙａｍａ（Ｓｃａｌｚｏら、Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ ４１：１４８〜５１，１９９５）によって提供された。Ｃ５７ＢＬ／６マウス、ＩＬ−４Ｒ ＫＯ（Ｎｏｂｅｎ−Ｔｒａｕｔｈら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９４；１０８３８〜４３，１９９７）、シグナルトランスデュサーおよび転写のアクチベーター（ＳＴＡＴ）６ ＫＯマウス（Ｋａｐｌａｎら、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ４：３１３〜９、１９９６）およびＢＡＬＢ／ｃバックグラウンドを有するＣＤ１ ＫＯ（Ｓｍｉｌｅｙら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２７５：９７７〜９、１９９７）マウスを、病原体を含まない条件下で飼育した。全てのマウスを病原体を含まない動物設備で維持し、そして６〜１０週齢で使用した。動物実験は、全て、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（ＮＣＩ）Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅによって承認された。
【００４２】
１５−１２ＲＭ腫瘍細胞を、ＢＡＬＢ／ｃ ３Ｔ３線維芽細胞に最初にＨＩＶ−１ ＩＩＩＢ ｇｐ１６０をトランスフェクトし、次いで、変異ｒａｓおよびｍｙｃ遺伝子をトランスフェクトして、これを腫瘍形成性にすることによって作製した（Ｍａｔｓｕｉら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６３：１８４〜１９３、１９９９）。この細胞およびＮｅｏのみ（１８Ｎｅｏ）をトランスフェクトしたコントロールＢＡＬＢ／ｃ ３Ｔ３細胞（Ｔａｋａｈａｓｈｉら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：３１０５〜０９、１９８８）を、１０％ＦＣＳ、Ｌ−グルタミン、ピルビン酸ナトリウム、非必須アミノ酸、ペニシリン、ストレプトマイシンおよび５×１０^−５Ｍ ２−メルカプトエタノール（ジェネティシン（２００μｇ／ｍｌ）（Ｓｉｇｍａ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）を含む）を有するＲＰＭＩ１６４０からなる完全Ｔ細胞培地（ＣＴＭ）中で維持した。
【００４３】
精製ラット抗マウスＣＤ４ ｍＡＢ（ＧＫ１．５（Ｗｉｌｄｅら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３１：２１７８〜２１８３、１９８３））を、Ｆｒｅｄｅｒｉｃｋ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅｒｃｈ ａｎｄ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ Ｃｅｎｔｅｒ、ＮＣＩ（Ｆｒｅｄｅｒｉｃｋ、ＭＤ）から得た。ＩＬ−１３インヒビター、マウスＩＬ−１３Ｒα２およびヒトＩｇＧ１の融合タンパク質（ｓＩＬ−１３Ｒα２．Ｆｃ）を、以前に記載（Ｄｏｎａｌｄｓｏｎら、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １６１：２３１７〜２４、１９９８）のように作製し、そしてＲｅｓｅａｒｃｈ Ｓｕｐｐｏｒｔ Ｔｅａｍ ａｔ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＭＡから得た。抗ＣＤ３（２Ｃ１１（Ｌｅｏら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８４：１３７４〜７８、１９８７））、抗ＣＤ２８（３７．５１）、ＦＩＴＣ結合抗ＣＤ４（ＧＫ１．５）およびＰＥ結合抗ＮＫ１．１（ＰＫ１３６）を、Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ（Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）から得た。抗Ｉａ磁性ビーズ、抗ＣＤ１１ｂ磁性ビーズ、抗ＣＤ１１ｃ磁性ビーズ、抗ＤＸ５磁性ビーズ、抗ＣＤ４磁性ビーズおよび抗ＣＤ８磁性ビーズを、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ Ｉｎｃ（Ａｕｂｕｒｎ、ＣＡ）から購入した。組換えマウスＩＬ−２を、Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎから得た。Ｔｒｉｚｏｌ、ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ ｃＤＮＡ合成キット、およびＰＣＲ ＳｕｐｅｒＭｉｘｔｕｒｅを、Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ、ＭＤ）から購入した。
【００４４】
２００μｌのＰＢＳ中の１００万個の１５−１２ＲＭ細胞を、マウスの右側腹部に皮下で注射した。インビボでＣＤ４^＋細胞を欠失させるために、マウスを、示されるように、０．５ｍｇの抗ＣＤ４またはコントロールのラットＩｇＧ（Ｓｉｇｍａ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）を含む０．２ｍｌのＰＢＳを腹腔内に接種した。いくつかの実験において、マウスを、０．１ｍｌ ＰＢＳの腹腔内注射によって、０．２ｍｇのＩＬ−１３インヒビター（ｓＩＬ−１３Ｒα２．Ｆｃ）を用いて、８日間、１日おきに処置した。
【００４５】
Ｔ細胞、ＣＤ４^＋Ｔ細胞およびＣＤ４^＋ＮＫ−Ｔ細胞のインビトロ活性化について、９６ウェルプレートを、４℃で一晩、抗ＣＤ３（１０μｌ／ｍｌ）でコーティングした。プレートを、使用の前にＰＢＳで３回洗浄した。１５−１２ＲＭ注射されたマウス由来の脾細胞の単細胞懸濁物を、注射後に、異なる時点で調製した。Ｔ細胞を、Ｉａ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃおよびＤＸ５に対する抗体でコーティングされた磁性ビーズを使用することによって、脾細胞からネガティブに選択された。ＣＤ４^＋Ｔ細胞を、抗ＣＤ８磁性ビーズを使用することによって、Ｔ細胞からＣＤ８^＋細胞を欠失させることによって得た。細胞を、２００μｌ ＣＴＭ中の９６ウェルプレートの１×１０^５／ウェルの密度で培養した。刺激の２日後、１００μｌの培養培地を各ウェルから獲得し、そしてサイトカイン測定まで、−７０℃で保存した。いくつの実施形態において、ＣＤ４^＋Ｔ細胞（１×１０^６／ウェル）を、ＣＤ１トランスフェクトＬ細胞（Ｃｈｅｎら、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １５９：２２４０〜９、１９９７）、またはＬ細胞（２×１０^４／ウェル）を、抗ＣＤ２８（１０μｇ／ｍｌ）およびＩＬ−２（２０単位／ｍｌ）を用いて刺激した。１週間後、細胞培養物を収穫し、そしてサイトカイン測定まで、−７０℃で保存した。
【００４６】
Ｃ５７ＢＬ／６マウスまたはＮＫ１．１遺伝子座について類遺伝子性のＢＡＬＢ／ｃマウスの脾細胞を、ＣＤ４濃縮カラム（Ｃｅｄａｒ Ｌａｎｅ、Ｗｅｓｔｂｕｒｙ、ＮＹ）を通過させ、次いで、ＦＡＣＳｔａｒ（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｅｎｓｏｎ、Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ、ＣＡ）を使用することによって、ＣＤ４^＋ ＮＫ１．１^＋細胞またはＣＤ４^＋ ＮＫ１．１⁻Ｔ細胞について分類した。サイトカインｍＲＮＡを検出するために、細胞を、２００μｌ ＣＴＭ中、９６ウェルプレートの、１×１０^５ウェルの密度で培養した。刺激の８時間後、細胞をそれぞれのウェルから回収し、そしてＲＮＡ抽出まで−７０℃で保存した。サイトカイン測定について、２×１０^４個の精製した細胞を、抗ＣＤ３ｍＡｂおよび抗ＣＤ２８ｍＡｂのそれぞれ１０μｇ／ｍｌでコーティングした９６ウェルプレート中で、刺激した。上清を４８時間で回収し、そしてＩＬ−４、ＩＬ−１３およびＩＦＮ−γについてアッセイした。
【００４７】
培養上清中のＩＬ−４、ＩＬ−１３（Ｒ＆Ｄ、Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ、ＭＡまたはＥｎｄｏｇｅｎ、Ｗｏｂｕｒｎ、ＭＡ）、ＩＦＮ−γ（Ｒ＆Ｄ）の濃度は、製造業者の指示に従って、ＥＬＩＳＡキットによって決定した。全てのサンプルを、３連でアッセイした。
【００４８】
いくつかの標的細胞に対するＣＤ８^＋Ｔ細胞の細胞傷害性活性を、４ｈ−^５１Ｃｒ放出アッセイによって測定した。ＣＤ８^＋Ｔ細胞を、磁性ビーズ（Ｍｉｌｔｅｎｙ Ｂｉｏｔｅｃ Ｉｎｃ．）を使用して、Ｂ細胞、マクロファージ、ＤＣ、ＮＫ細胞およびＣＤ４^＋細胞の枯渇によって、脾細胞から精製した。特異的^５１Ｃｒ放出のパーセンテージを、以下のように計算した：
１００×（実験的放出−自発的放出）／（最大放出−自発的放出）。
【００４９】
最大放出を、５％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００の添加によって溶解された細胞の上清から決定した。自発的放出を、添加した効果器細胞なしでインキュベートされた標的細胞から決定した。
【００５０】
総ＲＮＡを、Ｔｒｉｚｏｌ試薬を用いて、分類されたＣＤ４^＋ＮＫ−Ｔ細胞から抽出した。ｃＤＮＡを、製造業者の指示に従って、Ｓｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔ ｃＤＮＡ合成キットを使用することによって合成した。ＰＣＲを、ＧｅｎｅＡｍｐ ９７００ ＰＣＲシステム（Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ、Ｎｏｒｗａｌｋ、ＣＴ）によって、０．２μＭプライマーを含むＳｕｐｅｒｍｉｘｔｕｒｅを用いて行った。ＰＣＲを、９４℃で３０秒間、５５℃で１分間、７４℃で１分間の２８サイクルで行った。ＩＬ−４に対するプライマーを、Ｐｒｏｍｅｇａ（Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）から購入した。使用されたプライマーの配列は、以下の通りであった：ＩＬ−１３（センス）５’−ＧＡＣＣＣＡＧＡＧＧＡＴＡＴＴＧＣＡＴＧ−３’（配列番号１）；ＩＬ−１３（アンチセンス）５’−ＣＣＡＧＣＡＡＡＧＴＣＴＧＡＴＧＴＧＡＧ−３’（配列番号２）；ＨＰＲＴ（センス）５’−ＧＴＴＧＧＡＴＡＣＡＧＧＣＣＡＧＡＣＴＴＴＧＴＴＧ−３’（配列番号３）；ＨＰＲＴ（アンチセンス）５’−ＴＣＧＧＴＡＴＣＣＧＧＴＣＧＧＡＴＧＧＧＡＧ−３’（配列番号４）。
【００５１】
このデータを、Ｌｏｇ−Ｒａｎｋ試験を使用して、統計的有意性について分析した。このデータはＰ＜０．０５の有意性であるとみなされた。
【００５２】
（腫瘍再発に影響する、抗ＣＤ４処置のタイミング）
腫瘍再発に対する抗ＣＤ４処置のタイミングの効果を、１５−１２ＲＭマウスモデルにおいて試験した。
【００５３】
１５−１２ＲＭ腫瘍細胞を、０日目に、異なる群のＢＡＬＢ／ｃマウスの右側腹部に、皮下で（ｓ．ｃ．）注射した。抗ＣＤ４を、移植の前または移植に続いて、この群の異なるマウスに様々な回数で投与した。抗ＣＤ４の投与に続いて腫瘍を発生するマウスのパーセンテージを調べた。
【００５４】
結果は、図１Ａおよび図１Ｂに提示される。図１Ａは、抗ＣＤ４が投与されなかった（コントロール）マウスの群、−３日目〜５０日目に投与されたマウスの群、−３日目〜３０日目に投与されたマウスの群、または−３日目〜１０日目に投与されたマウスの群における腫瘍増殖を示す。図１Ｂは、抗ＣＤ４が、１日目〜５０日目に投与されたマウス、１０日目〜５０日目に投与されたマウス、および２０日目〜５０日目に投与されたマウスにおける腫瘍増殖を示す。
【００５５】
各群のマウスを、１５−１２ＲＭ注射後の示された期間の間に、０．５ｍｇの抗ＣＤ４ｍＡｂ（ＧＫ１．５）を用いて腹腔内に接種した。この抗体を、最初の３日間、毎日、次いで週に２回接種した。５匹のマウスを、各群について使用した。−３日目〜１０日目、２０日目または１日目〜５０日目に、コントロールと抗ＣＤ４との間で、Ｌｏｇ−Ｒａｎｋ試験がＰ＜０．０２であった。同様の結果が別の実験において得られた。
【００５６】
腫瘍は、５日以内に検出可能であった（Ｍａｔｓｕｉら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６３：１８４〜１９３、１９９９）（図１Ａ、コントロール群）。腫瘍は、１０〜１５日後に退行し、そして消失した。しかし、腫瘍の再発は、接種の２０日〜４０日後に観測され、そして再発の腫瘍は、退行しなかった（図１Ａ）。コントロールマウスにおいて観測された腫瘍再発は、腫瘍退行期の間のＣＤ８^＋ＣＴＬによる腫瘍細胞の除去が不完全であるので、生じた。逆に、抗ＣＤ４処置マウスにおいて、腫瘍細胞は、最初の増殖の後に完全に除去されて、再発しなかった（図１ＡおよびＭａｔｓｕｉら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６３：１８４〜１９３、１９９９）。これらの結果は、ＣＤ４^＋Ｔ細胞がＣＴＬによる腫瘍細胞に対する免疫監視をネガティブに制御したことを示唆する。
【００５７】
ＣＤ４^＋Ｔ細胞が腫瘍細胞に特異的なＣＴＬを制御するときを調べるために、マウスを、１５−１２ＲＭ注射の後、異なる間隔で、ＣＤ４抗体で処置した（図１Ａ）。１５−１２ＲＭ注射の３日前にＣＤ４抗体を受容することから開始し、そして１０日目または２０日目に抗体を受容して停止した群のマウスは全て、−３日目〜実験の終了まで処置されたマウスと類似の様式で腫瘍再発に対して耐性であった。抗ＣＤ４処置の開始は、１日目まで遅れることができるが、１０日目に開始する処置は、後の再発に対して任意の影響を有するには遅すぎた（図１Ｂ）。これは、腫瘍細胞に対するＣＴＬの免疫監視が、初期の腫瘍増殖期においてＣＤ４^＋Ｔ細胞によって制御されることを示唆する。最初の１０日間のＣＤ４^＋Ｔ細胞の枯渇は、この制御を妨げるのに必要でありそして十分であった。
【００５８】
（ＩＬ−４Ｒ−ＳＴＡＴ６によるＣＴＬ免疫監視のダウンレギュレーション）
ＩＬ−４ ＫＯマウスおよびＩＬ−４Ｒ ＫＯマウスを、ＩＬ−４およびそのシグナル伝達経路が、ＣＴＬによる免疫監視のダウンレギュレーションに関係するか否かを明確にするために使用した。この結果は、図２Ａおよび図２Ｂに示される。図２Ａは、コントロールマウス、または抗ＣＤ４抗体で処置されたマウスまたはＢＡＬＢ／ｃバックグラウンドＩＬ−４ ＫＯ、ＩＬ−４Ｒ ＫＯ、またはヘテロ接合同腹仔マウスにおいて得られた結果を示し、これらは、１×１０^６個の１５−１２ＲＭ細胞を皮下的に注射された。抗ＣＤ４処置された群におけるマウスを、抗ＣＤ４ ｍＡｂを用いて、１５−１２ＲＭ注射の３日前から注射の日まで毎日処置し、その後、週に２回処置した。７匹のマウスを使用したＩＬ−４Ｒ＋／−群を除いて、各群について５匹のマウスを使用した。コントロール群とＩＬ−４Ｒ−／−群との間のＬｏｇ−Ｒａｎｋ試験は、Ｐ＜０．０５である。示されるこの結果は、類似の結果を有する２つの実験の代表である。
【００５９】
図２Ｂに示される結果について、処置されていないかまたは抗ＣＤ４で処置されたかのいずれかである、ＢＡＬＢ／ｃ−ＳＴＡＴ６ ＫＯマウスまたは野生型ＢＡＬＢ／ｃマウスを、１×１０^６ １５−１２ＲＭ細胞で皮下的に注射した。抗ＣＤ４処置された群におけるマウスを、１５−１２ＲＭ注射の３日前から毎日抗ＣＤ４ｍＡｂで処置し、その後週２回処置した。５匹のマウスを各群について使用した。コントロール群とＳＴＡＴ６ ＫＯ群との間のＬｏｇ−Ｒａｎｋ試験は、Ｐ＜０．０２である。３つの実験のうちの１つの代表的な実験を示す。
【００６０】
腫瘍再発は、ＩＬ−４ ＫＯマウスにおいて生じた；実際、腫瘍増殖パターンは、コントロールマウスのパターンとは有意に異ならなかった（図２ＡおよびＭａｔｓｕｉら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６３：１８４〜１９３、１９９９）。対照的に、ＩＬ−４Ｒ ＫＯマウスにおいて、腫瘍は、最初の増殖および退行の後に再発しなかったが、ヘテロ接合型同腹仔において、腫瘍は、野生型マウスのように再発した（図２Ａ）。
【００６１】
ＳＴＡＴ６活性化は、ＩＬ−４Ｒシグナル経路を介したシグナル伝達を必要とすることが公知である（Ｓｈｉｍｏｄａら，Ｎａｔｕｒｅ ３８０：６３０−３ １９９６；Ｔａｋｅｄａら，Ｎａｔｕｒｅ ３８０：６２７−３０，１９９６；およびＫａｐｌａｎら，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ４：３１３−９，１９９６）。従って、ＩＬ−４Ｒ ＫＯマウスで観察されたがＩＬ−４ ＫＯマウスでは観察されなかった保護が、ＩＬ−４Ｒシグナル経路に依存したか否かを調べるために、ＳＴＡＴ６ ＫＯマウスを、１５−１２ＲＭで接種した（図２ｂ）。ＳＴＡＴ６ ＫＯマウスは、ＣＤ４−涸渇マウスと同様に腫瘍再発に対して耐性であった。このことは、ＣＴＬによる免疫学的監視がＩＬ−４Ｒ−ＳＴＡＴ６シグナル伝達経路を介して制限されるが、この調節はＩＬ−４自体を必要としないことを示唆した。従って、ＩＬ−４Ｒ−ＳＴＡＴ６シグナル伝達経路を介してシグナルを伝達することが公知である唯一の他のサイトカインであるＩＬ−１３は、おそらくこの制限にて重要な役割をはたすようである。
【００６２】
（ＣＤ４涸渇マウスにおけるサイトカイン産生）
Ｔ細胞はＩＬ−１３およびＩＬ−４の主要な産生者なので、１５−１２ＲＭを注射したマウス由来のＴ細胞による両方のサイトカインのインビトロ産生を、抗ＣＤ３刺激後にＥＬＩＳＡによって測定した。結果を図３に示す。１５−１２ＲＭ細胞の注射の０日後、２日後、４日後、６日後、１０日後に、１群あたり２匹のマウスを屠殺し、そしてそれらの脾細胞を収集した。細胞の画分を使用して、Ｔ細胞を精製した。１５−１２ＲＭを注射したマウス由来の１００，０００個の新しく単離したＴ細胞を、抗ＣＤ３でコーティングしたプレート中で４８時間培養した。培養上清を収集し、そして各サイトカインの濃度をＥＬＩＳＡによって決定した。この図は、２匹のマウスの平均値を示す。同様の結果がさらなる実験において得られた。
【００６３】
コントロールマウス由来のＴ細胞におけるＩＬ−１３およびＩＬ−４両方の産生は、１５−１２ＲＭ注射の２日後という早さで上昇する。ＩＬ−１３産生およびＩＬ−４産生は、それぞれ、２日目および４日目に最大に達し、次いで、注射の６日後までにベースラインに低下した。ＣＤ４涸渇マウス由来のＴ細胞において、ＩＬ−１３の産生は２日目にアップレギュレートしたが、そのＩＬ−１３の絶対量は１５−１２ＲＭを注射したコントロールマウス由来の細胞の絶対量よりも５０〜７５％低かった。さらに、ＩＬ−４産生は、１５−１２ＲＭ注射後であってもアップレギュレートされなかった。従って、ＣＤ４涸渇マウス由来の脾臓Ｔ細胞（これは、腫瘍再発に対して耐性である）は、ＩＬ−１３およびＩＬ−４の産生が少ない。
【００６４】
ＩＦＮ−γ（これは、この系において腫瘍増殖に対して保護的な役割を果たす（Ｍａｔｓｕｉら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６３：１８４−１９３，１９９９））の産生を測定した。ＩＬ−１３産生およびＩＬ−４産生と対照的に、抗ＣＤ４処置したマウス由来のＴ細胞は、コントロールマウス由来の細胞よりも２５〜１００％多いＩＦＮ−γを産生した。これらの結果は、ＣＤ４^＋Ｔ細胞の除去が、ＩＬ−１３およびＩＬ−４の産生を抑制するが、より多くのＩＦＮ−γの産生を可能にすることを示唆し、ＩＦＮ−γは、免疫学的監視に対して必要であることが以前に示されている（Ｍａｔｓｕｉら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６３：１８４−１９３，１９９９）。
【００６５】
（ＩＬ−１３インヒビター（ｓＩＬ−１３Ｐα２．Ｆｃ）は、腫瘍再発を阻害する）
上記で得られた結果は、ＩＬ−１３単独が免疫学的監視のダウンレギュレーションに必要であるか、またはＩＬ−４もしくはＩＬ−１３のいずれかが再発を予防するのに十分であり、そして両方を排除することが再発を予防するのに必要であるという可能性のいずれかと、適合する。これらの可能性を見分けるために、野生型マウスおよびＩＬ−４ ＫＯマウスの両方においてＩＬ−１３インヒビター（ｓＩＬ−１３Ｒα２．Ｆｃ）の効果を試験した。結果を図４Ａおよび４Ｂに示す。コントロールＢＡＬＢ／ｃマウス、抗ＣＤ４もしくはＩＬ−１３インヒビター（ｓＩＬ−１３Ｒα２．Ｆｃ）のいずれかを用いて処置したマウス（図４Ａ）、または処置しないかもしくはＩＬ−１３インヒビターで処置するかのいずれかのＢＡＬＢ／ｃ−ＩＬ−４ ＫＯマウス（図４Ｂ）を、１×１０^６個の１５−１２ＲＭ細胞で皮下注射した。抗ＣＤ４（０．５ｍｇ）を、１５−１２ＲＭの０日後、１日後、２日後、６日後、および１０日後に接種した。ＩＬ−１３インヒビターで処置した群のマウスを、０日目〜８日目に１日おきにｓＩＬ−１３Ｒα２．Ｆｃ（０．２ｍｇ）で処置した。各群について５匹のマウスを使用した。コントロール群とＩＬ−１３インヒビター群との間で、Ｌｏｇ−Ｒａｎｋ検定によって、ｐ＜０．０１。ＩＬ−４ ＫＯ群とＩＬ−４ ＫＯ＋ＩＬ−１３インヒビター群との間で、Ｌｏｇ−Ｒａｎｋ検定によって、ｐ＜０．０２。これら２つの代表的な１つの実験を示す。
【００６６】
ＩＬ−１３インヒビターを１５−１２ＲＭ注射の０日目後〜８日目後に１日おきに接種したが、腫瘍の初期の増殖および退行を妨げなかった。しかし、ＩＬ−４ ＫＯマウス（これは、腫瘍再発に対して抵抗性ではない）をＩＬ−１３インヒビターで処置した場合、これらは再発から完全に保護された。野生型マウスをＩＬ−１３インヒビターで処置した場合、これらもまた、ＣＤ４涸渇マウスおよびＩＬ−１３インヒビターで処置したＩＬ−４ ＫＯマウスと同様にふるまった。これらの結果は、この二相性の腫瘍モデルにおいて、ＩＬ−４を生成するマウスの能力にかかわらず、ＩＬ−１３が腫瘍再発に必須であることを示した。
【００６７】
（実施例２．ＮＫ−Ｔ細胞機能を破壊することによる、腫瘍増殖の阻害）
本実施例は、ＩＬ−１３がＮＫ−Ｔ細胞によって産生されること、およびＮＫ−Ｔ細胞を欠くＣＤ１ ＫＯマウスが低いレベルのＩＬ−１３を産生することを示すデータを示す。本実施例において、ＣＤ１ ＫＯマウスにおける腫瘍増殖の阻害もまた示す。
【００６８】
（ＮＫＴ細胞は、ＩＬ−１３を産生し得る）
ＩＬ−１３インヒビターを用いた最初の８日間の処置によって、マウスは腫瘍再発から保護された（図４Ａおよび４Ｂ）。ＣＤ４^＋ＮＫ１．１^＋ Ｔ細胞は、ＴＣＲ活性化の際に大量のＩＬ−４を産生するための最初期細胞の中にある（Ｃｈｅｎら，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １５９：２２４０−９，１９９７）。
【００６９】
従って、ＣＤ４^＋ ＮＫＴ細胞がＩＬ−１３を産生する能力を調べた。ＢＡＬＢ／ｃマウスは利用可能なｍＡｂによって認識されるＮＫ１．１対立遺伝子を発現しないので、ＮＫ１．１座位について類遺伝子性であるＣ５７ＢＬ／６マウスまたはＢＡＬＢ／ｃマウス由来のＣＤ４^＋ ＮＫＴ細胞を、ＣＤ４^＋ Ｔ細胞を精製し、そしてＣＤ４^＋ ＮＫ１．１^＋集団およびＣＤ４^＋ ＮＫ１．１⁻集団について分類することによって分類し、そしてこれらを抗ＣＤ３抗体で刺激した。
【００７０】
ＩＬ−１３ ｍＲＮＡおよびＩＬ−１３タンパク質の産生を測定した。結果を図５Ａ〜５Ｃに示す。Ｃ５７ＢＬ／６マウス由来の新しく分類した脾臓ＣＤ４^＋ ＮＫ−Ｔ細胞を、プレートに結合した抗ＣＤ３（２Ｃ１１）を用いて８時間刺激した。これらの細胞を収集し、そしてＩＬ−１３およびＩＬ−４に対するｍＲＮＡを、ＲＴ−ＰＣＲによって検出した。図５Ａは、抗ＣＤ３刺激後のＣＤ４^＋ ＮＫ−Ｔ細胞におけるＩＬ−１３およびＩＬ−４のｍＲＮＡ発現を示す。
【００７１】
図５Ｂは、ＣＤ４^＋ ＮＫ１．１^＋ Ｔ細胞およびＣＤ４^＋ ＮＫ１．１⁻ Ｔ細胞によるＩＬ−１３およびＩＬ−４の産生を実証する。ＮＫ１．１座位について類遺伝子性であるＢＡＬＢ／ｃマウス由来の新しく分類した脾臓ＣＤ４^＋ ＮＫ１．１^＋ Ｔ細胞およびＣＤ４^＋ ＮＫ１．１⁻ Ｔ細胞を、プレートに結合した抗ＣＤ３（２Ｃ１１）および抗ＣＤ２８（３７．５１）を用いて４８時間刺激した。上清を４８時間目に収集し、そしてＥＬＩＳＡによってＩＬ−４およびＩＬ−１３についてアッセイした。
【００７２】
ＣＤ１トランスフェクトしたＬ細胞で刺激した、１５−１２ＲＭを注射したマウス由来のＣＤ４^＋ Ｔ細胞による、ＩＬ−１３およびＩＬ−４の産生を、図５Ｃに示す。正常なＢＡＬＢ／ｃマウスおよび１５−１２ＲＭを注射したＢＡＬＢ／ｃマウス（の注射３日後）の脾細胞から精製したＣＤ４^＋Ｔ細胞を、ＣＤ１トランスフェクトしたＬ細胞またはトランスフェクトしていないＬ細胞を用いて１週間刺激した。抗ＣＤ２８ ｍＡｂ（１０μｇ／ｍｌ）およびＩＬ−２（２０単位／ｍｌ）もまた、培養物に添加した。培養上清を収集し、そしてＩＬ−１３およびＩＬ−４の濃度をＥＬＩＳＡによって決定した。アステリスクは、検出限界より下のレベル（＜１５．６ｐｇ／ｍｌ）を示す。
【００７３】
ＩＬ−１３は、抗ＣＤ３刺激によってＣＤ４^＋ ＮＫ１．１^＋Ｔ細胞を明瞭に誘導し、一方、ＣＤ４^＋ ＮＫ１．１⁻Ｔ細胞はわずかであった（図５Ａおよび５Ｂ）。さらに、１５−１２ＲＭを注射したＢＡＬＢ／ｃマウス由来のＣＤ４^＋ Ｔ細胞をＣＤ１トランスフェクトしたＬ細胞で刺激した場合、これらは、腫瘍を保有しないマウス由来の細胞よりも、より多くのＩＬ−１３およびＩＬ−４を産生した（図５Ｃ）が、検出可能なＩＦＮ−γは産生しなかった（データは示さず）。図５Ｃにおける図５Ｂよりも低いＩＬ−４のレベルは、前者では７日間の培養の間の消費に起因し、一方、後者では４８時間での消費に起因し得る。対照的に、精製されたＣＤ４^＋Ｔ細胞はＩＬ−１３レセプターを有さないので、サイトカインは消費されないはずである。従って、ＣＤ４^＋ＮＫＴ細胞は、実際にＩＬ−１３を産生し得、そしてこのサイトカインの主要な供給源である。さらに、この活性は、腫瘍保有動物において増強されるようである。
【００７４】
（ＩＬ−１３産生は、ＣＤ１ ＫＯマウスにおいて顕著に低下する）
ＮＫＴ細胞がＩＬ−１３の主要な供給源である場合、ＣＤ１ ＫＯマウスにおけるその非存在は、ＩＬ−１３産生を顕著に低下するはずである。従って、１５−１２ＲＭを注射したＣＤ１ ＫＯマウスのＣＤ４^＋Ｔ細胞におけるＩＬ−１３、ＩＬ−４およびＩＦＮ−γのインビトロ産生を調べた。これらのマウスは、ＣＤ１制限されたＮＫＴ細胞（ＣＤ４^＋ＮＫＴ細胞を含む）を欠くが、従来のＭＨＣ クラスＩＩ制限されたＣＤ４^＋Ｔ細胞は保持する。
【００７５】
結果を図６に示す。１群あたり２匹のマウスを屠殺し、そしてその脾細胞を、１５−１２ＲＭ細胞の注射の０日後、２日後、４日後、６日後、１０日後に収集した。細胞の画分を使用してＣＤ４^＋Ｔ細胞を精製した。１５−１２ＲＭを注射したマウス由来の１００，０００個の新しく単離したＴ細胞を、抗ＣＤ３でコーティングしたプレート中で４８時間培養した。培養上清を収集し、そして各サイトカインの濃度をＥＬＩＳＡによって決定した。各値は、２匹のマウスの平均を示す。結果は、２つの独立した実験のものを表す。アステリスクは検出限界より下のレベル（＜７．８ｐｇ／ｍｌ）を示す。
【００７６】
ＣＤ１ ＫＯマウスの脾細胞から精製したＣＤ４^＋Ｔ細胞は、１５−１２ＲＭ注射後にわずかな量のＩＬ−１３およびＩＬ−４しか産生せず、一方、野生型マウス由来のＣＤ４^＋Ｔ細胞は、腫瘍接種の２日後、４日後、および１０日後に、これらのサイトカインの産生をアップレギュレートした。このことは、大多数のＩＬ−１３産生がＮＫＴ細胞由来であるかまたはＮＫＴ細胞に依存することを示す。逆に言えば、産生されたＩＦＮ−γは、野生型マウスの細胞よりもＣＤ１ ＫＯマウスの細胞においてかなり高かった。
【００７７】
（ＣＤ１ ＫＯマウスは、低いレベルの腫瘍再発を示す）
ＣＤ４^＋ＮＫＴ細胞がＩＬ−１３を産生し得、そして実際に多くのＩＬ−１３産生を担い、そしてこれらの細胞が従来のＣＤ４^＋Ｔ細胞に加えて抗ＣＤ４処置によって涸渇するので、ＮＫＴ細胞がＣＴＬによる腫瘍免疫学的監視のダウンレギュレーションに重要な役割を果たすと仮説を立てた。この仮説を試験するために、ＣＤ１ ＫＯマウスを、１５−１２ＲＭで接種し、そして抗ＣＤ４処置の有りまたは無しで腫瘍増殖の影響を測定した。
【００７８】
結果を図７に示す。未処置または抗ＣＤ４で処置のいずれかの、ＢＡＬＢ／ｃバックグラウンドのＣＤ１ ＫＯマウスおよび野生型ＢＡＬＢ／ｃマウスを、１×１０^６個の１５−１２ＲＭ細胞を用いて皮下注射した。抗ＣＤ４処置群のマウスを、１５−１２ＲＭ注射の３日前から始めてその後１週間に２回、抗ＣＤ４（０．５ｍｇ）を用いて処置した。５匹のマウスを各群について使用した。コントロール群とＣＤ１ ＫＯ群との間で、Ｌｏｇ−Ｒａｎｋ検定によって、ｐ＜０．０２。これら４つの代表的な１つの実験を示す。ＣＤ１ ＫＯマウスにおいて、腫瘍が最初に増殖し、そして野生型マウスと同じ期間に退行した。しかし、ＣＤ１ ＫＯマウスは、抗ＣＤ４で処置した野生型マウスと同様に腫瘍再発に対して抵抗性であった。従って、ＣＤ１制限されたＮＫＴ細胞は免疫学的監視のダウンレギュレーションに必要なようである。
【００７９】
抗ＣＤ４で処置したマウス（図８Ａ）、ＣＤ１ ＫＯマウス（図８Ｂ）およびコントロールマウス（図８Ｃ）の脾細胞から精製したＣＤ８^＋Ｔ細胞の活性を、いかなるインビトロ刺激も無しで、１μＭのＰ１８ＩＩＩＢでパルスしたか、またはパルスしていない１８Ｎｅｏ標的に対して、１５−１２ＲＭ注射の１２日後にＣＴＬ活性について調べた。これら３つの代表的な１つの実験を、それぞれ図８Ａ〜８Ｃに示す。
【００８０】
ＣＤ４涸渇マウスにおいて、腫瘍再発に対する保護は、コントロールマウスの場合よりも、再刺激を伴なわない即座のエキソビボでの、ＣＤ８^＋Ｔ細胞のより高いＣＴＬ活性と関連するようであった（図８ＡおよびＭａｔｓｕｉら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６３：１８４−１９３，１９９９）。同じことがＣＤ１ ＫＯマウスに対して適用されるか否かを決定するために、１５−１２ＲＭを注射したＣＤ１ ＫＯマウス由来の精製されたＣＤ８^＋Ｔ細胞のＣＴＬ活性を、腫瘍を注射したコントロールマウスおよび抗ＣＤ４で処置したマウス由来のＣＤ８^＋Ｔ細胞のＣＴＬ活性と比較した（図８Ｂ）。ＣＤ１ ＫＯ由来の新しく単離したＣＤ８^＋Ｔ細胞（図８Ｂ）は、インビトロ刺激無しで、Ｐ１８ＩＩＩＢパルスした１８Ｎｅｏを低いレベルで溶解し、一方、インタクトな腫瘍保有マウス由来のＣＤ８^＋Ｔ細胞は、再刺激無しでＰ１８ＩＩＩＢパルスした１８Ｎｅｏを殺傷しなかった（図８Ｃ）。従って、ＮＫＴ細胞の存在は、エキソビボにおいて即座に、ＣＴＬ活性の低下を導く。
【００８１】
これらを考え合わせると、これらの結果は、腫瘍の初期増殖期（１０日以内）における、ＣＤ１制限されたＣＤ４^＋ＮＫＴ細胞あるいはＮＫＴ細胞に依存する他の細胞のいずれかによって産生されるＩＬ−１３が、ＣＴＬ免疫学的監視のネガティブな調節を誘発すること、ならびにこのネイティブな調節がＩＬ−４Ｒα−ＳＴＡＴ６経路を介して媒介されることを実証する。
【００８２】
（実施例３．ＩＬ−１３インヒビターは、合成ペプチドＨＩＶワクチンに対するＣＴＬ応答を増強する）
細胞傷害性Ｔ細胞リンパ球（ＣＴＬ）応答の増強に対するＩＬ−１３インヒビターの能力を調べた。
【００８３】
ＢＡＬＢ／ｃマウスを、エマルジョンアジュバント（Ｍｏｎｔａｎｉｄｅ ＩＳＡ−５１）中でＧＭ−ＣＳＦ（５μｇ）と混合した合成ペプチドワクチンＰＣＬＵＳ６．１−１８ＩＩＩＢ（２０ｎｍｏｌｅ）（米国特許第５，９３２，２１８号）を用いて、０日目に皮下免疫した。０日目、１日目、２日目、４日目、および６日目の各日に、２００μｇのＩＬ−１３インヒビターＩＬ−１３Ｒａ２−Ｆｃを、腹腔内投与した。コントロールは、ＩＬ−１３インヒビターの代わりにコントロールＩｇＧを受けた。
【００８４】
試験マウスおよびコントロールマウスの脾臓（１４日後に収集し、そして培養物中で１週間刺激した）におけるその後のＣＴＬ応答を測定し、そして図９に示されるグラフにプロットする。標的細胞を、Ｐ１８ＩＩＩＢペプチドでコーティングした。
【００８５】
有意に高いＣＴＬ媒介溶解が、ＩＬ−１３インヒビターを合成ペプチドＨＩＶワクチンと共にマウスに投与した場合に観察された。これらの結果は、ＩＬ−１３インヒビター無しでのワクチンと比較した、インヒビターの存在下での細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）応答の増大を実証する。
【００８６】
（他の実施形態）
本発明は本発明の詳細な説明と共に記載してきたが、上記の説明が、例示することを意図し、そして本発明の範囲を限定せず、本発明の範囲は、添付の特許請求の範囲の範囲によって規定されることが、理解される。他の局面、利点、および改変が、上記の特許請求の範囲の範囲内である。
【図面の簡単な説明】
【図１】
図１Ａおよび図１Ｂは、異なる時間間隔で抗ＣＤ４を用いて処置したマウスにおける腫瘍の発生を示すグラフである。
【図２】
図２Ａおよび図２Ｂは、ＩＬ−４ ＫＯ、ＩＬ−４Ｒ、およびＳＴＡＴ６ ＫＯマウスにおける腫瘍の発生を示すグラフである。
【図３】
図３Ａ〜３Ｃは、抗ＣＤ３刺激を用いた、５−１２ＲＭ−注射ＢＡＬＢ／ｃマウス由来のＴ細胞のサイトカイン産生を示すグラフである。
【図４】
図４Ａおよび図４Ｂは、腫瘍再発に対する、ＩＬ−１３インヒビターの効果を示すグラフである。
【図５Ａ】
図５Ａは、ＣＤ４^＋細胞におけるＩＬ−１３およびＩＬ４ ｍＲＮＡの発現を示す電気泳動図の表示である。
【図５Ｂ】
図５Ｂおよび図５Ｃは、ＣＤ４^＋ＮＫ１．１^＋およびＣＤ４^＋ＮＫ１．１⁻Ｔ細胞による、ＩＬ−１３およびＩＬ−４の産生を示すヒストグラムである。
【図５Ｃ】
図５Ｂおよび図５Ｃは、ＣＤ４^＋ＮＫ１．１^＋およびＣＤ４^＋ＮＫ１．１⁻Ｔ細胞による、ＩＬ−１３およびＩＬ−４の産生を示すヒストグラムである。
【図６】
図６Ａ〜図６Ｃは、抗ＣＤ３刺激を用いた、１５−１２ＲＭ注射野生型ＢＡＬＢ／ｃマウスおよびＣＤ１ ＫＯマウスからのＣＤ４^＋Ｔ細胞のサイトカイン産生を示すヒストグラムである。
【図７】
図７は、ＣＤ１ ＫＯマウスにおける腫瘍の発生を示すグラフである。
【図８】
図８Ａ〜８Ｃは、１５−１２ＲＭを注射されたＣＤ１ ＫＯマウスのＣＴＬ活性を示すグラフである。
【図９】
図９は、ＨＩＶペプチドワクチン、ＧＭ−ＣＳＦ、およびＩＬ−１３インヒビターまたはコントロールペプチドのいずれかに曝露された細胞におけるＣＴＬ応答を示すグラフである。

Claims (85)

1. 被験体において、腫瘍の増殖を阻害する方法であって、該方法はＩＬ−１３インヒビターを該被験体に投与する工程を包含し、ここで、該インヒビターがＩＬ−１３リガンドを含む、方法。
2. 前記インヒビターが、前記被験体において、腫瘍の増殖を阻害するのに十分な量で投与される、請求項１に記載の方法。
3. 前記インヒビターが、前記被験体において原発性腫瘍の検出前に投与される、請求項１に記載の方法。
4. 前記インヒビターが、前記被験体において原発性腫瘍の検出後に投与される、請求項１に記載の方法。
5. 前記被験体が前記腫瘍を発症する高い危険を有する、請求項１に記載の方法。
6. 前記被験体が、該被験体において、前記腫瘍を発症する危険性を高める遺伝子の対立遺伝子を有する、請求項１に記載の方法。
7. 前記遺伝子が、網膜芽腫遺伝子、ｐ５３遺伝子、ＢＲＣＡ遺伝子、ＡＰＣおよびＤＣＣ遺伝子からなる群から選択される癌抑制遺伝子である、請求項６に記載の方法。
8. 前記インヒビターが、前記被験体において腫瘍の処置前に投与される、請求項１に記載の方法。
9. 前記インヒビターが、前記被験体において腫瘍の外科的切除前、２週間以内に該被験体に投与される、請求項１に記載の方法。
10. 前記インヒビターが、前記被験体において腫瘍の外科的切除後、２週間以内に該被験体に投与される、請求項９に記載の方法。
11. 前記インヒビターが、前記被験体において腫瘍の処置と同時に投与される、請求項１０に記載の方法。
12. 前記インヒビターが、前記被験体において腫瘍の処置後に投与される、請求項１に記載の方法。
13. 前記インヒビターが、ＩＬ−１３レセプターのＩＬ−１３結合領域を含む、請求項１に記載の方法。
14. 前記インヒビターが、免疫グロブリンポリペプチドをさらに含む、請求項１３に記載の方法。
15. 請求項１に記載の方法であって、ここで、前記インヒビターが、マウスＩＬ−１３α２ポリペプチドおよびＩｇＧ_１ポリペプチドのＦｃ領域を含む融合タンパク質またはヒトＩＬ−１３α２ポリペプチドおよびＩｇＧ_１ポリペプチドのＦｃ領域を含む融合タンパク質である、方法。
16. 前記インヒビターが、ＩＬ−１３に結合する抗体である、請求項１に記載の方法。
17. 前記抗体がポリクローナル抗体である、請求項１６に記載の方法。
18. 前記抗体がモノクローナル抗体である、請求項１６に記載の方法。
19. 前記インヒビターがＩＬ−１３アンタゴニストである、請求項１に記載の方法。
20. 前記被験体がヒトである、請求項１に記載の方法。
21. 前記腫瘍が、癌腫、肉腫または血球の癌である、請求項１に記載の方法。
22. 前記腫瘍が再発性腫瘍である、請求項１に記載の方法。
23. 請求項１に記載の方法であって、前記腫瘍が、乳癌、肝臓癌、黒色腫、子宮癌、結腸直腸癌、肺癌、前立腺癌、腎細胞癌、頸部の癌、腎細胞癌腫、膵臓癌、卵巣癌、甲状腺癌、鼻咽頭癌、白血病およびリンパ腫からなる群より選択される、方法。
24. 請求項１に記載の方法であって、前記腫瘍が、腎細胞癌腫、黒色腫、精巣癌、白血病およびリンパ腫からなる群より選択される、方法。
25. 前記被験体に、腫瘍増殖を阻害する第２の薬剤を投与する工程をさらに包含する、請求項１に記載の方法。
26. 前記第２の薬剤が、前記被験体においてインターフェロンγレベルを増大させる、請求項２５に記載の方法。
27. 前記インヒビターが、前記被験体に全身投与される、請求項１に記載の方法。
28. 前記インヒビターが、前記被験体に局所投与される、請求項１に記載の方法。
29. 前記インヒビターが、静脈内送達、皮下送達および筋内送達から選択される経路により投与される、請求項１に記載の方法。
30. 前記インヒビターが、皮下送達によって投与される、請求項１に記載の方法。
31. 前記インヒビターが、遅延放出組成物で投与される、請求項１に記載の方法。
32. 前記遅延放出組成物が微粒子を含む、請求項３１に記載の方法。
33. 前記微粒子がポリ乳酸−ｃｏ−グリコール酸（ＰＬＧＡ）である、請求項３２に記載の方法。
34. 被験体において、腫瘍の増殖を阻害する方法であって、該方法はＩＬ−１３の非細胞毒性インヒビターを投与する工程を包含する、方法。
35. 前記インヒビターが、前記被験体において、ＩＬ−１３遺伝子の発現を阻害する、請求項３４に記載の方法。
36. 前記インヒビターが、アンチセンスＩＬ−１３核酸またはＩＬ−１３リボザイムである、請求項３４に記載の方法。
37. 前記インヒビターが、前記被験体において、ＩＬ−１３活性を阻害する、請求項３４に記載の方法。
38. 前記インヒビターがＩＬ−１３レセプターアンタゴニストである、請求項３４に記載の方法。
39. 前記アンタゴニストが、ＩＬ−１３レセプターに結合する抗体である、請求項３８に記載の方法。
40. 前記インヒビターがＩＬ−１３レセプターのＩＬ−１３結合領域を含む、請求項３４に記載の方法。
41. 前記インヒビターが免疫グロブリンポリペプチドをさらに含む、請求項３４に記載の方法。
42. 前記インヒビターがＩＬ−１３に結合する抗体である、請求項３４に記載の方法。
43. 前記抗体がポリクローナル抗体である、請求項４２に記載の方法。
44. 前記抗体がモノクローナル抗体である、請求項４２に記載の方法。
45. 被験体において、腫瘍の増殖を阻害する方法であって、該方法は、該被験体において、腫瘍の増殖を阻害するのに十分な量で、ＮＫ−Ｔ細胞インヒビターを該被験体に投与する工程を包含する、方法。
46. 前記細胞が、ＣＤ１ポリペプチドを発現する抗原提示細胞に結合する、請求項４５に記載の方法。
47. 前記インヒビターがＣＤ１分子に結合する、請求項４６に記載の方法。
48. 前記インヒビターが、Ｖα２４に対するリガンドポリペプチドを含む、請求項４５に記載の方法。
49. 被験体において、ウイルスの増殖を阻害する方法であって、該方法が、該被験体にＩＬ−１３インヒビターを投与する工程を包含し、ここで該インヒビターが、ＩＬ−１３リガンドを含む、方法。
50. 前記インヒビターが、前記ウイルスに対する前記被験体の第一の曝露の前またはその間に投与される、請求項４９に記載の方法。
51. 請求項４９に記載の方法であって、前記ウイルスが、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）、ヒトＴ細胞白血病ウイルス（ＨＴＬＶ）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）およびエプスタイン−バーウイルス（ＥＢＶ）からなる群より選択される、方法。
52. ウイルスによる哺乳動物の慢性感染を阻害する方法であって、該方法は、該哺乳動物にＩＬ−１３インヒビターを投与する工程を包含し、該インヒビターは、ＩＬ−１３リガンドを含み、ここで、該インヒビターは、該ウイルスによる急性感染を患っていると診断される哺乳動物に投与される、方法。
53. 請求項５２に記載の方法であって、前記ウイルスが、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）、ヒトＴ細胞白血病ウイルス（ＨＴＬＶ）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）およびエプスタイン−バーウイルス（ＥＢＶ）からなる群より選択される、方法。
54. 被験体において、ウイルスの増殖を阻害する方法であって、該方法は、ＮＫ−Ｔ細胞の活性を阻害する薬剤を、該被験体に投与する工程を包含する、方法。
55. 前記細胞がＣＤ−１制限細胞である、請求項５４に記載の方法。
56. 前記インヒビターがＣＤ１に結合する、請求項５５に記載の方法。
57. 前記インヒビターがＶα２４ポリペプチドに対するリガンドを含む、請求項５４に記載の方法。
58. 請求項５４に記載の方法であって、前記ウイルスが、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）、ヒトＴ細胞白血病ウイルス（ＨＴＬＶ）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）およびエプスタイン−バーウイルス（ＥＢＶ）からなる群より選択される、方法。
59. 被験体において、免疫応答を増強させる方法であって、該方法は、該被験体にＩＬ−１３インヒビターを投与する工程を包含し、該インヒビターは、ＩＬ−１３ポリペプチドに対するリガンドを含む、方法。
60. 前記被験体にワクチンを導入する工程をさらに包含する、請求項５９に記載の方法。
61. 前記インヒビターが、前記被験体にワクチンを導入する前、３０日以内に投与される、請求項６０に記載の方法。
62. 前記インヒビターが、前記被験体にワクチンを導入した後、３０日以内に投与される、請求項６０に記載の方法。
63. 前記ワクチンが腫瘍に指向される、請求項６０に記載の方法。
64. 前記ワクチンが病原に指向される、請求項６０に記載の方法。
65. 前記病原が、ウイルス、細菌および真核生物細胞からなる群より選択される、請求項６４に記載の方法。
66. 前記ワクチンが、前記被験体に予防的に投与される、請求項６０に記載の方法。
67. 前記ワクチンが、前記被験体に治療的に投与される、請求項６０に記載の方法。
68. 前記ウイルスが、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）である、請求項６０に記載の方法。
69. 前記ワクチンが、前記宿主において細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）応答を誘発する、請求項６８に記載の方法。
70. 前記ワクチンがＰＣＬＵＳ６．１−１８ＩＩＩＢペプチドである、請求項６０に記載の方法。
71. 前記ワクチンがＰＣＬＵＳ６．１−１８ＩＩＩＢペプチドである、請求項６９に記載の方法。
72. 前記被験体に、免疫応答を増強する第２の薬剤を投与する工程をさらに包含する、請求項６０に記載の方法。
73. 前記薬剤がＩＬ−１２を含む、請求項７２に記載の方法。
74. 前記被験体において、免疫応答を増強する方法であって、該方法は、該被験体にＮＫ−Ｔ細胞のインヒビターを投与する工程を包含する、方法。
75. 前記被験体にワクチンを導入する工程をさらに包含する、請求項７４に記載の方法。
76. 前記インヒビターが、前記被験体にワクチンを導入する前、３０日以内に投与される、請求項７５に記載の方法。
77. 前記インヒビターが、前記被験体にワクチンを導入した後、３０日以内に投与される、請求項７５に記載の方法。
78. 前記ワクチンが腫瘍に指向される、請求項７５に記載の方法。
79. 前記ワクチンが病原に指向される、請求項７５に記載の方法。
80. 前記病原が、ウイルス、細菌および真核生物細胞からなる群より選択される、請求項７９に記載の方法。
81. 前記ワクチンが予防的である、請求項７５に記載の方法。
82. 前記ワクチンが治療的である、請求項７５に記載の方法。
83. 前記被験体に、免疫応答を増強する第２の薬剤を投与する工程をさらに包含する、請求項７５に記載の方法。
84. 前記薬剤がＩＬ−１２を含む、請求項８３に記載の方法。
85. 被験体において、腫瘍の増殖を阻害する方法であって、該方法が、ＩＬ−１３リガンドをコードする核酸を、該被験体に投与する工程を包含する、方法。

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