JP2004533259A5 - - Google Patents
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Claims (7)
- ａ）少なくとも１つのプライマー、核酸合成活性を有する酵素、および核酸鎖終結分子および核酸鎖伸長分子の混合物、ならびにテンプレートポリヌクレオチドを含有する反応混合物の存在下で行われる核酸合成により核酸フラグメントラダーを作製する工程、
ｂ）鎖終結分子を除去するか、または鎖終結分子を非終結分子に変化させる工程、
ｃ）核酸合成活性を有する熱安定性酵素および少なくとも２つのプライマーの存在下でこれらのフラグメントを互いに、またはテンプレートポリヌクレオチドにハイブリダイズさせること、ならびに
ｉ）核酸鎖終結分子および核酸鎖伸長分子の混合物の存在下、または
ii）鎖終結分子を含まない核酸鎖伸長分子の反応混合物の存在下
のいずれかで核酸合成を行うことによるポリヌクレオチドの再構築、
ここで、ｉ）の場合には、工程ｂ）およびｃ）を続いて繰り返す、
を含むポリヌクレオチド配列の形成方法。 - 工程ａ）および／またはｃ）のテンプレートポリヌクレオチドが、種々のテンプレートポリヌクレオチドからなる混合物である請求項１記載のポリヌクレオチド配列の形成方法。
- 核酸鎖終結分子がddNTP であり、核酸伸長分子がdNTPである請求項１または２記載のポリヌクレオチド配列の形成方法。
- ベクターへの増幅産物のクローニングおよびコードされるタンパク質の発現のようなクローニング手順、
スクリーニングまたは選択手順
の工程をさらに含む請求項１〜３いずれか記載の工程を含む変異体ポリペプチドまたはタンパク質の提供方法。 - 再構築産物の増幅工程をさらに含む請求項４記載の工程を含む変異体ポリペプチドまたはタンパク質の提供方法。
- 生体分子の最適化のための請求項１〜５いずれか記載の方法の使用。
- 酵素の最適化のための請求項１〜５いずれか記載の方法の使用。
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