JP2004520379A

JP2004520379A - 高眼圧治療用眼薬組成物

Info

Publication number: JP2004520379A
Application number: JP2002560536A
Authority: JP
Inventors: ステルマツク，クリステイン
Original assignee: Merck and Co Inc
Current assignee: Merck and Co Inc
Priority date: 2001-01-30
Filing date: 2002-01-25
Publication date: 2004-07-08
Also published as: CA2434485A1; WO2002060339A3; EP1357855A2; WO2002060339A2

Abstract

本発明は、患者の眼球において高眼内圧を生じる緑内障および他の状態を治療するための、落花生油と組み合わせて強力なカリウムチャンネル遮断薬またはそれの製薬上許容される塩を含む製剤に関する。本発明はまた、哺乳動物、特にはヒトの眼球に対して神経保護効果を提供する上でのそのような化合物の使用に関するものでもある。

Description

【技術分野】
【０００１】
現在、カリウムチャンネル遮断薬が眼球における眼内圧を低下させることが認められていることから、それは高眼圧およびそれに関連する変性性眼球状態の治療に対してさらなる方途を提供するものである。
【背景技術】
【０００２】
カリウムチャンネルの遮断は、体液分泌を低減させ、状況によっては平滑筋収縮を増加させることができ、ＩＯＰを低下させ、眼球における神経保護効果を有することが期待されるものと考えられる（米国特許第５５７３７５８号および同５９２５３４２号；Moore, et al., Invest. Ophthalmol. Vis. Sci 38, 1997；ＷＯ８９／１０７５７、ＷＯ９４／２８９００およびＷＯ９６／３３７１９参照）。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
本発明は、カリウムチャンネル遮断薬組成物およびそれの製造方法に関するものである。その組成物は、緑内障および／または高眼圧の治療に用いることができる。その組成物は、溶液での眼球投与を容易にし、好ましい治療効力および作用期間を提供する。
【０００４】
従来、水系媒体に不溶であった化合物は、眼球投与用にヒドロキシセルロースに懸濁させていた。懸濁液の眼球投与の欠点は、薬剤を溶解させ、患者に不快感を与えないようにするために、粒子径を制御しなければならず、治療効果が薬剤粒子の溶解速度によって決まるという点である。
【０００５】
本特許請求の発明は、水系溶液に溶けない化合物を溶液で投与できるようにすることで、懸濁液の眼球投与に関連する問題を回避する落花生油と組み合わせて、カリウムチャンネル遮断薬を含む組成物に関する。インシュリン懸濁液投与用の媒体としての落花生油の使用についての議論に関しては、ヤマモトらの報告（Yamamoto et al., S. T. P. Pharma Sciences 4 (2) 133-138, 1994；参照によって本明細書に組み込まれる）を参照する。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は、落花生油と組み合わせて強力なカリウムチャンネル遮断薬を含む新規な眼科組成物に関する。本発明はさらに、落花生油と組み合わせて、下記構造式の強力なカリウムチャンネル遮断薬またはその化合物の製薬上許容される塩、エナンチオマー、ジアステレオマーもしくは混合物を含む新規な眼科組成物に関するものでもある。
【０００７】
【化１】
式中、
ＲおよびＲ^ｘは独立に、Ｃ_１−６アルキル、（ＣＨ_２）_ｎアリール、（ＣＨ_２）_ｎヘテロアリール、（ＣＨ_２）_ｎ複素環アルキルを表し；前記アルキル、アリールまたはヘテロアリールは１〜３個のＲ^ｙ基で置換されていても良く；
Ｙは、−（ＣＨ_２）_ｎＳＣＯＲ^ｚを表し；
Ｘは、ＣＨ_２またはＯ（ｍが非存在である場合）を表し；
Ｒ^ｙは、水素、Ｃ_１−６アルコキシ、Ｃ_１−６アルキル、ＣＦ_３、ニトロ、アミノ、シアノ、Ｃ_１−６アルキルアミノまたはハロゲンを表し；
Ｒ^ｚは、Ｃ_１−６アルコキシまたはＣ_１−６アルキルを表し；
ｍは、１〜３を表し；
ｎは０〜３を表し；
Ｒ^１は水素またはＣ_１−６アルキルを表し；
Ｒ^２、Ｒ^３ａおよびＲ^３ｂは独立に、水素、Ｃ_１−１０アルキル、Ｃ_３−１０シクロアルキル、Ｃ_４−１０複素環アルキル、Ｃ_４−１０ヘテロアリールまたはＣ_６−１０アリールを表し；
Ｒ^４は、水素、Ｃ_１−６アルコキシ、Ｃ_１−６アルキル、ＣＦ_３またはハロゲンを表し；
Ｒ^５は、水素、Ｃ_１−６アルコキシ、Ｃ_１−６アルキル、ＣＦ_３、ニトロ、アミノ、シアノ、Ｃ_１−６アルキルアミノまたはハロゲンを表し；
Ｒ^６は、水素、ハロゲンまたはＣ_１−６アルキルを表し；
Ｒ^７は、Ｈ、ハロ、ＯＨ、ＮＯ_２、ＮＨ_２、ＣＮ、アルコキシ、−ＣＯＯ−、アルコキシカルボニル、ハロアルキル、アルコキシカルボニルアルキルまたはアルキルスルホニルを表す。
【０００８】
本発明はさらに、本願と同時に出願されたＵ．Ｓ．Ｓ．Ｎ６０／２６４９５４、２０００年１月１８日出願のＵ．Ｓ．Ｓ．Ｎ．６０／１７６６９５および２０００年１月１９日出願のＵ．Ｓ．Ｓ．Ｎ６０／１７６６９４（これらはいずれも参照によって本明細書に組み込まれる）下にメルク社（Merck & Co., Inc.）代理人整理番号２０７９８ＰＶにおいて開示されているカリウムチャンネル遮断薬と組み合わせて落花生油を含む組成物に関するものでもある。
【０００９】
これらの組成物は、患者の眼球における高眼内圧に関係する緑内障および他の状態の治療において有用である。本発明はまた、哺乳動物、特にはヒトの眼球に対して神経保護効果を提供する上でのそのような組成物の使用に関するものである。
【００１０】
本発明の上記および他の態様は、本発明を全体として検討することで明らかになろう。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１１】
本明細書においては、別段の断りがない限り、以下に定義の用語を用いて本発明を詳細に説明する。
【００１２】
「アルキル」という用語は、別段の定義がない限り、１〜１０個の炭素原子を有する１価アルカン（炭化水素）由来の基を指す。それは、直鎖、分岐または環状であることができる。好ましいアルキル基には、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｔ−ブチル、シクロペンチルおよびシクロヘキシルなどがある。アルキル基がアルキル基で置換されているという場合、それは「分岐アルキル基」と互換的に使用される。
【００１３】
シクロアルキルは、炭素原子間に交互および共鳴する二重結合を持たない、３〜１５個の炭素原子を有するアルキル類である。それは、縮合した１〜４個の環を有することができる。
【００１４】
アルコキシはＣ_１〜Ｃ_６アルキル−Ｏ−を指し、そのアルキル基は本明細書に記載のように置換されていても良い。
【００１５】
ハロゲン（ハロ）は、塩素、フッ素、ヨウ素または臭素を指す。
【００１６】
アリールは、フェニル、置換フェニルなどの芳香環、ならびにナフチル、フェナントレニルなどの縮合した環を指す。従ってアリール基は、少なくとも６個の原子を有する少なくとも１個の環を有し、そのような環は５個まで存在し、そこで２２個以下の原子が含まれ、隣接する炭素原子間または好適なヘテロ原子間で交互（共鳴）二重結合がある。好ましいアリール基は、フェニル、ナフチルおよびフェナントレニルである。アリール基も同様に、上記で定義のように置換されていても良い。好ましい置換アリールには、フェニルおよびナフチルなどがある。
【００１７】
「複素環アルキル」という用語は、環中の炭素原子のうちの１個がＯ、ＳまたはＮから選択されるヘテロ原子によって置き換わっており、３個以下の別の炭素原子がヘテロ原子によって置き換わっていても良いシクロアルキル基（非芳香族）を指す。
【００１８】
「ヘテロ原子」という用語は、独立に選択されるＯ、ＳまたはＮを意味する。
【００１９】
「ヘテロアリール」という用語は、５個または６個の環原子を有する単環式芳香族炭化水素基、あるいは８〜１０個の原子を有する二環式芳香族基であって、少なくとも１個のヘテロ原子、すなわちＯ、ＳもしくはＮを有し、炭素原子または窒素原子が結合箇所であり、１個もしくは２個の別の炭素原子がＯもしくはＳから選択されるヘテロ原子によって置き換わっていても良く、１〜３個の別の炭素原子が窒素ヘテロ原子によって置き換わっていても良いものを指し、そのヘテロアリール基は本明細書に記載のように置換されていても良い。その種のものの例には、ピロール、ピリジン、オキサゾール、チアゾールおよびオキサジンがある。最初の窒素および酸素もしくは硫黄とともに別の窒素原子が存在して、例えばチアジアゾールを与えるものであっても良い。
【００２０】
本発明の１実施形態は、式Ｉの化合物においてＲ^２がＣ_１−６アルキルまたはＣ_３−１０シクロアルキルであり；他の可変因子がいずれも最初に記載の通りである場合に実現される。
【００２１】
本発明の別の実施形態は、式Ｉの化合物においてＲ^３ｂがＣ_１−６アルキルまたはＣ_３−１０シクロアルキルであり；他の可変因子がいずれも最初に記載の通りである場合に実現される。
【００２２】
本発明の好ましい実施形態は、式Ｉの化合物においてＲ^１がＣ_１−６アルキルであり；Ｒ^２およびＲ^３ｂが独立にＣ_１−６アルキルまたはＣ_３−１０シクロアルキルであり；Ｒ^４が水素であり；Ｒ^５がＣ_１−６アルコキシ、Ｃ_１−６アルキルであり；Ｒ^３ａが水素であり；Ｒ^６がハロゲンまたはＣ_１−６アルキルである場合に実現される。
【００２３】
本発明のより好ましい実施形態は、式Ｉの化合物においてＲ^１がＣ_１−３アルキルであり；Ｒ^２およびＲ^３ｂが独立にＣ_１−４アルキルまたはＣ_５−１０シクロアルキルであり；Ｒ^４が水素であり；Ｒ^５がＣ_１−３アルコキシであり；Ｒ^６がハロゲンである場合に実現される。
【００２４】
本発明の１実施形態は、式ＩＩの化合物においてＲがＣ_１−６アルキルまたは（ＣＨ_２）_ｎアリールであり；他の可変因子がいずれも最初に記載の通りである場合に実現される。
【００２５】
本発明の別の実施形態は、式ＩＩの化合物においてＲ^ｘがＣ_１−６アルキルまたは（ＣＨ_２）_ｎアリールであり；他の可変因子がいずれも最初に記載の通りである場合に実現される。
【００２６】
本発明のさらに別の実施形態は、式ＩＩの化合物においてＸがＣＨ_２であり；他の可変因子がいずれも最初に記載の通りである場合に実現される。
【００２７】
本発明のさらに別の実施形態は、式ＩＩの化合物においてＹが（ＣＨ_２）_ｎＳＣＯＲ^ｚであり、ｎ＝０であり；他の可変因子がいずれも最初に記載の通りである場合に実現される。
【００２８】
本発明のさらに別の実施形態は、式ＩＩの化合物においてＹが（ＣＨ_２）_ｎＳＣＯＲ^ｚであり、ｎ＝１〜３であり；他の可変因子がいずれも最初に記載の通りである場合に実現される。
【００２９】
本発明の好ましい実施形態は、式ＩＩの化合物においてＲが（ＣＨ_２）_ｎアリールであり；Ｒ^ｘがＣ_１−６アルキルであり；Ｙが（ＣＨ_２）_ｎＳＣＯＲ^ｚであり；ＸがＣＨ_２であり；ｍ＝１である場合に実現される。
【００３０】
本発明の別の好ましい実施形態は、式ＩＩの化合物においてＲが（ＣＨ_２）_ｎアリールであり；Ｒ^ｘがＣ_１−６アルキルであり；Ｙが（ＣＨ_２）_ｎＳＣＯＲ^ｚであり；ＸがＣＨ_２であり；ｍ＝２である場合に実現される。
【００３１】
本発明のさらに別の好ましい実施形態は、式ＩＩの化合物においてＲがＣ_１−６アルキルであり；Ｒ^ｘが（ＣＨ_２）_ｎアリールであり；Ｙが（ＣＨ_２）_ｎＳＣＯＲ^ｚであり；ＸがＣＨ_２であり；ｍ＝２である場合に実現される。
【００３２】
本発明のさらに別の好ましい実施形態は、式ＩＩの化合物においてＲが（ＣＨ_２）_ｎアリールであり；Ｒ^ｘが（ＣＨ_２）_ｎアリールであり；Ｙが（ＣＨ_２）_ｎＳＣＯＲ^ｚであり；ＸがＣＨ_２であり；ｍ＝２である場合に実現される。
【００３３】
特許請求の組成物の好ましいｍａｘｉ−Ｋチャンネル遮断薬は下記のものから選択される。
【００３４】
【化２】
【００３５】
本発明はまた、単独または落花生油との組み合わせで、ペニトレム−Ａ、パキシレン（paxillene）、β−アドレナリン遮断薬（ベタキソロール、ブフェノロール（bufenolol）、カルテオロール、レボブノロール、メチプラノロールもしくはチモロールまたはそれらの製薬上許容される塩）、ピロカルピンなどの副交感神経興奮様薬、炭酸脱水素酵素阻害薬（ドルゾールアミド（dorzolamide）、アセタゾールアミド、メタゾールアミド（metazolamide）もしくはブリンゾールアミド（brinzolamide）またはそれらの製薬上許容される塩）、プロスタグランジン（ラタノプロスト（latanoprost）、レクラ（recula）、Ｓ１０３３またはプロスタミド（prostamide）（ＡＧＮ１９２０２４）などのＰＧＦ２αプロスタグランジン類由来の血圧降下性脂質）などの他の眼球治療薬を含む組成物に関するものでもある。血圧降下性脂質（基本的なプロスタグランジン構造のα−鎖連結上のカルボン酸基が電気化学的に中性の置換基で置き換わっている）の例は、そのカルボン酸基がＯＣＨ_３（ＰＧＦ_２ａ１−ＯＣＨ_３）などのＣ_１−６アルコキシ基または水酸基（ＰＧＦ_２ａ１−ＯＨ）で置き換わったものである。これら眼球治療薬の１以上を、特許請求の組成物のカリウムチャンネル遮断薬および落花生油と組み合わせることができる。
【００３６】
好ましいカリウムチャンネル遮断薬は、カルシウム活性化カリウムチャンネル遮断薬である。より好ましいカリウムチャンネル遮断薬は、高伝導性のカルシウム活性化カリウム（ｍａｘｉ−Ｋ）チャンネル遮断薬である。ｍａｘｉ−Ｋチャンネルは、ニューロン、平滑筋および上皮組織に広くあり、膜電位および細胞内Ｃａ^２＋依存性であるイオンチャンネル類である。
【００３７】
眼内圧（ＩＯＰ）は、房水の力学によって制御される。房水は、非色素毛様体上皮のレベルで産生され、主として強角膜線維柱帯からの流出によって除去される。房水流入は、イオン輸送プロセスによって制御される。非色素毛様体上皮細胞でのｍａｘｉ−Ｋチャンネルが、２つの機序によって間接的に塩化物分泌を制御すると考えられる。これらのチャンネルは、細胞からの塩化物流出の駆動力を提供する過分極膜電位（内部が負）を維持し、さらにそのチャンネルは塩化物イオンの移動のための対イオン（Ｋ^＋）も提供する。水がＫＣｌとともに受動的に移動して、房水の産生を可能とする。この組織におけるｍａｘｉ−Ｋチャンネルの阻害が、流入を低下させると考えられる。ｍａｘｉ−Ｋチャンネルが、ある種の平滑筋組織の収縮性を制御することも明らかになっており、場合によっては、チャンネル遮断薬が休止筋肉を収縮させたり、あるいは自発活動性組織の筋原性活動を増加させることができる。毛様体筋の収縮は、ピロカルピンで起こるように、強角膜線維柱帯を開放し、房水流出を刺激するものと考えられる。従ってｍａｘｉ−Ｋチャンネルは、いくつかの形で房水力学に大きく影響するものと考えられる。このチャンネルの遮断は、流入もしくは流出プロセスに影響することで、あるいは流入／流出プロセスの両方への影響の組み合わせによってＩＯＰを低下させるものと考えられる。
【００３８】
本発明は、ｍａｘｉ−Ｋチャンネルが、遮断されると、正味溶質およびＨ_２Ｏの流出を阻害することで房水産生を阻害し、従ってＩＯＰを低下させるという知見に基づいたものである。この知見は、ｍａｘｉ−Ｋチャンネル遮断薬が黄斑浮腫および黄斑変性などの他の眼科的機能障害の治療において有用であることを示唆している。ＩＯＰの低下が網膜および視神経への血流を促進することが知られている。従って本発明の化合物は、黄斑浮腫および／または黄斑変性の治療において有用である。
【００３９】
黄斑浮腫は、眼球の後極における非常に重要な中心視覚領域内にある網膜内での腫脹である。網膜内での液の蓄積は、神経要素を互いに分離し、その局所血液供給から分離することで、その領域での視覚機能の休止を生じる傾向がある。
【００４０】
緑内障は、視神経の進行性萎縮を特徴とし、高眼内圧（ＩＯＰ）を伴う場合が非常に多い。しかしながら、神経保護効果を与える薬剤を用いることで、必ずしもＩＯＰに影響を与えることなく、緑内障を治療することが可能である（Arch. Ophthalmol. Vol. 112, Jan 1994, pp. 3744; Investigative Ophthamol. & Visual Science, 32,5, April 1991, pp. 1593-99参照）。ＩＯＰを低下させるｍａｘｉ−Ｋチャンネル遮断薬が神経保護効果を提供する上で有用であると考えられている。それらの薬剤は、ＩＯＰを低下させることで網膜および視神経頭血液速度を高め、網膜および視神経の酸素を増加させる上で有効であるとも考えられており、それらが組み合わされると視神経の健康に有効である。その結果、特許請求の組成物は、網膜および視神経頭血液速度を高め、網膜および視神経酸素分圧を高め、神経保護効果を与え、またはそれらの組み合わせを実現する上で有用なものとなり得る。
【００４１】
本明細書における例は、特許請求される発明を説明するものであって、それを限定するものではない。特許請求される製剤は落花生油と組み合わせたカリウムチャンネル拮抗薬であることから、細胞を脱分極状態に維持して神経伝達物質放出を最大とすることが望ましい前述の神経障害において有用である。本発明で製造される化合物を、好適かつ公知の製薬上許容される賦形剤と容易に組み合わせて、ヒトなどの哺乳動物に投与して効果的なカリウムチャンネル遮断を行うことができる組成物が製造される。
【００４２】
本発明のｍａｘｉ−Ｋチャンネル遮断薬製剤は、治療上有効量で、静脈投与、皮下投与、局所投与、経皮投与、非経口投与その他の当業者には公知の方法で投与することができる。眼科医薬組成物は好ましくは、液剤、懸濁液、軟膏、クリームの形態でまたは固体挿入物として眼球に局所投与するように製造する。
【００４３】
本発明の新規な眼科製剤は、０．０１〜５重量％のｍａｘｉ−Ｋチャンネル遮断薬／落花生油および特に落花生油中０．１〜２％の医薬を含む。例えば約１０％などのそれより高い用量またはそれより低い用量を、その用量が眼内圧を低下させ、緑内障を治療し、血流速度を上昇させ、あるいは酸素分圧を上昇させる上で有効である場合には用いることができる。単回投与の場合、０．００１〜５．０ｍｇ、好ましくは０．００５〜２．０ｍｇ、特には０．００５〜１．０ｍｇの落花生油中ｍａｘｉ−Ｋチャンネル遮断薬を、ヒトの眼球に投与することができる。
【００４４】
本発明の新規な方法は、各眼球に対して、約０．００１〜５ｍｇ／日、好ましくは約０．２５〜３ｍｇ／日の落花生油中に含有されたｍａｘｉ−Ｋチャンネル遮断薬を局所眼球投与する段階を有する。
【００４５】
組み合わせに関して特許請求の発明の眼科製剤は、例えば約０．０５〜５重量％の炭酸脱水素酵素阻害薬もしくはプロスタグランジン、通常は約０．５〜３重量％または約０．０１〜１重量％のβ−アドレナリン拮抗薬、好ましくは約０．１〜０．５重量％のｍａｘｉ−Ｋチャンネル遮断薬および落花生油の組み合わせを含み、それは１日１回〜２回の投与計画で投与することができる。別の形態では前記眼科製剤は、０．０１〜５％の落花生油と組み合わせて、例えば０．０５〜５重量％の炭酸脱水素酵素阻害薬、０．０１〜１重量％のβ−アドレナリン拮抗薬および０．０１〜５重量％のｍａｘｉ−Ｋチャンネル遮断薬を含むことができる。
【００４６】
前記化合物を含む医薬製剤は簡便には、他の無毒性の医薬有機担体と、あるいは他の無毒性の医薬無機担体と混合することができる。他の製薬上許容される担体の代表的なものには、例えば水、水と低級アルカノール類もしくはアラルカノール類などの水混和性溶媒との混合物、植物油、ポリアルキレングリコール類、石油系ゼリー、エチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、オレイン酸エチル、カルボキシメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、ミリスチン酸イソプロピルおよび他の従来使用されている許容される担体がある。医薬製剤は、乳化剤、保存剤、湿展剤、増ちょう剤などの無毒性の補助物質を含有することもでき、それには例えばポリエチレングリコール２００、３００、４００および６００、カーボワックス１０００、１５００、４０００、６０００および１００００などがある。落花生油媒体は、ｍａｘｉ−Ｋチャンネル遮断薬と組み合わせて落花生油を含む製剤である。
【００４７】
本発明の製剤を投与するのに好適な被験者には、霊長類、ヒトおよび他の動物、特にはヒトならびにネコおよびイヌなどの家畜などがある。
【００４８】
眼科液剤または懸濁液は、眼球において許容されるＩＯＰレベルを維持する上で必要な回数で投与することができる。哺乳動物眼球への投与を１日約１回または２回とすることが想到される。
【００４９】
局所眼球投与の場合、本発明の新規製剤は液剤、ゲル、軟膏、懸濁液または固体挿入物の剤型を取ることができ、単位製剤が治療上有効量の活性成分または併用療法の場合にはそれの数倍分を含むように製剤することができる。
【００５０】
前記医薬製剤は、米国特許第第４２５６１０８号；同４１６０４５２号；および同４２６５８７４号に記載のような薬剤投薬後に実質的に無変化のままである固体挿入物の形態；あるいは米国特許第４２８７１７５号もしくはＥＰＯ公開００７７２６１に記載のような涙液中に可溶であるか他の形態で崩壊する生体侵食性挿入物の形態であることもできる。
【００５１】
有効成分が落花生油に溶解している眼科製剤の下記の例を、例示として挙げる。
【００５２】
【表１】
【００５３】
製剤の溶解度は、ＨＰＬＣ（ゾルバックス（Zorbax）ＲｘＣ８１５ｃｍ×４．６ｍｍカラム；８５％アセトニトリル／１５％０．１％酢酸トリエチルアンモニウム、ｐＨ６．３；流量１ｍＬ／分；波長２６５ｎｍ；走査時間１２分）を用いて求める。
【実施例１】
【００５４】
非麻酔成体有色ダッチベルテッドウサギ（２〜４ｋｇ）で眼内圧測定（ＩＯＰ）を行った。動物には標準的な実験飼料および水道水を自由に摂取させ、１２時間明／暗周期で飼育した。ＩＯＰへの局所投与処理の効果評価間で、７日間の休止またはウォッシュアウト期間を設けた。ＩＯＰを測定するため、ウサギを市販の拘束ボックスに入れた。初回の試験に先だってウサギは、６時間以内の期間にわたって少なくとも２回、拘束ボックスに馴致させた。各実験の朝に、ウサギを１時間拘束ボックスに入れてから、初回のＩＯＰ測定を行った。ＩＯＰは気動眼圧計（Alcon Applanation Pneumatonograph）を用いて記録した。眼瞼を手で優しく開き、オペレータの指は眼球から十分に離して、眼球および周囲組織に直接圧力が加わらないようにした。眼圧計の膜を角膜の中央部分に置いた。ＩＯＰの各測定は３〜５秒間続け、その間に動物は完全に弛緩していた。通常は各眼２回の測定で十分であり、初回の測定値は廃棄する場合が非常に多かった。眼圧計追跡は、眼球搏動に相当する振動を表す。振動の平均値が、ｍｍＨｇ単位でのＩＯＰレベルに相当するものであった。
【００５５】
対照ＩＯＰの初回測定を多くのウサギで行い、対照ＩＯＰが１７〜２５ｍｍＨｇ（正常と考えられるＩＯＰ値）であるウサギ１２匹を試験に選択した。各試験においてウサギを、実質的に同等の対照ＩＯＰ値を有するそれぞれウサギ６匹の等しい２つの小群に分けた。各試験は、ウサギ６匹の１小群（眼球１２個）に対する活性被験物質およびウサギ６匹の１小群（眼球１２個）への媒体の局所投与からなるものとした。試験当たりで調べた眼球の総数は２４個であった。各試験においては、活性被験物質１滴（容量５０μＬ）／媒体を、時間（Ｔ_０）に各ウサギの両眼にハミルトン（Hamilton）シリンジによって滴下した。滴下から３０分後、１時間後、２時間後、３時間後および４時間後に、ＩＯＰを再度測定した。結果は、活性被験薬剤または媒体の滴下の直前に測定した基底線Ｔ_０レベルからのＩＯＰ（ｍｍＨｇ）における変化の平均±標準偏差として表した。ダネットのｔ検定を用い、さらには一致させた時間点での被験物質と媒体との間のＩＯＰにおける変化を比較するための対応のないスチュデントのｔ検定を用いて、データの有意性をＴ_０値からの差として求めた。
【００５６】
媒体は、０．５％落花生油水溶液からなるものであった。落花生油中での被験薬剤の製剤は、次のように行った。０．５％、０．２％、０．１％、０．０５％、０．０２５％または０．０１％（重量基準）の被験化合物を落花生油に溶かすことで、落花生油製剤を製造した。超音波処理を用いて、化合物を完全に溶解させた。
【００５７】
表１では、落花生油中で製剤した０．５％チモロール（遊離塩基相当）の効果を評価しており、落花生油媒体中のチモロールによって有意なＩＯＰ低下が示されている。表２および表３はそれぞれ、落花生油中で製剤した０．１％パキシリンおよびペニトレムＡ（両薬剤とも公知のｍａｘｉ−Ｋチャンネル遮断薬）の投与によって有意なＩＯＰ低下のあることを示している。表４は、落花生油中で製剤した０．２％の化合物１の投与によって有意なＩＯＰ低下のあることを示している。表５は、落花生油中で製剤した０．１％アフレトレム（公知のｍａｘｉ−Ｋチャンネル遮断薬）のＩＯＰに対する効果を評価している。
【００５８】
【表２】
【００５９】
【表３】
【００６０】
【表４】
【００６１】
【表５】
【００６２】
【表６】
【００６３】
機能アッセイ
Ａ．ｍａｘｉ−Ｋチャンネル
オーロラ・バイオサイエンス（Aurora Biosciences）の技術を用いて、ｍａｘｉ−Ｋチャンネルの阻害薬の確認を行われ、それはＴｓＡ−２０１細胞におけるそのチャンネルのαおよびβ１の両方のサブユニットの一時的トランスフェクション後にｍａｘｉ−Ｋチャンネルが細胞休止電位を決定する能力に基づいたものである。阻害薬非存在下では細胞は、ｍａｘｉ−Ｋチャンネルの活動の結果であるＥ_Ｋ（−８０ｍＶ）に近い、内側が負である過分極膜電位を示す。ｍａｘｉ−Ｋチャンネルの遮断は、細胞脱分極を引き起こす。膜電位における変化は、供与体であるクマリン（ＣＣ_２ＤＭＰＥ）および受容体であるオキサノール（oxanol）（ＤｉＳＢＡＣ_２（３））という２つの成分を用いる電圧感受性蛍光共鳴エネルギー伝達（ＦＲＥＴ）色素対を用いて測定することができる。オキサノールは、親油性アニオンであり、膜電位に応じて膜の横断方向に分布する。通常の条件下では、細胞内部が外部に関して負である場合には、オキサノールは膜の外側小葉部に蓄積し、クマリンの励起がＦＲＥＴを発生させる。膜脱分極を生じる条件によって、オキサノールが細胞内部に再分布し、その結果としてＦＲＥＴが低下する。そうして、膜の脱分極後に、比の変化（供与体／受容体）が大きくなる。
【００６４】
ＴｓＡ−２０１細胞におけるｍａｘｉ−Ｋチャンネルの一時的トランスフェクションは、トランスフェクション試薬としてＦＵＧＥＮＥを用いて既報の方法に従って行った（Hanner et al. (1998) J. Biol. Chem. 273, 16289-16296）。トランスフェクションから２４時間後、細胞をＣａ^２＋−Ｍｇ^２＋を含まないダルベッコのリン酸緩衝生理食塩水（Ｄ−ＰＢＳ）に回収し、遠心し、９６ウェルのポリ−ｄ−リジンコーティングプレートに細胞５００００個／ウェルの密度で入れ、終夜インキュベートする。細胞をＤ−ＰＢＳで１回洗浄し、４ｍＭＣＣ_２ＤＭＰＥ−０．０２％プルロニック（pluronic）１２７のＤ−ＰＢＳ溶液１００μＬを加える。細胞を暗所で室温にて３０分間インキュベートする。その後、細胞をＤ−ＰＢＳで２回洗浄し、５ｍＭＤｉＳＢＡＣ_２（３）の（ｍＭ）：１４０ＮａＣｌ、０．１ＫＣｌ、２ＣａＣｌ_２、１ＭｇＣｌ_２、２０Ｈｅｐｅｓ−Ｔｒｉｓ、ｐＨ７．４、１０グルコース中溶液１００μＬを加える。被験化合物をその溶液に希釈し、同時に加える。細胞を暗所にて室温で３０分間インキュベートする。
【００６５】
プレートを電圧／イオンプローブ読取（ＶＩＰＲ）装置に入れ、ＣＣ_２ＤＭＰＥおよびＤｉＳＢＡＣ_２（３）の両方の蛍光発光を１０秒間記録する。その時点で高カリウム溶液（ｍＭ）：１４０ＫＣｌ、１ＣａＣｌ_２、０．５ＭｇＣｌ_２、２０Ｈｅｐｅｓ−Ｔｒｉｓ、ｐＨ７．４、１０グルコース１００μＬを加え、両方の色素の蛍光発光をさらに１０秒間記録する。高カリウム溶液添加前のＣＣ_２ＤＭＰＥ／ＤｉＳＢＡＣ_２（３）の比は１である。阻害薬非存在下では、高カリウム溶液添加後の比は１．６５〜２．０で変動する。既知の標準または被験化合物によってｍａｘｉ−Ｋチャンネルが完全に阻害されると、その比は１のままである。従って、蛍光比の濃度依存的変化をモニタリングすることで、ｍａｘｉ−Ｋチャンネル阻害薬の活性についての力価測定を行うことが可能である。
【００６６】
本発明の化合物は、約１ｎＭ〜約１μＭ、より好ましくは約１０ｎＭ〜約２００ｎＭの範囲のＩＣ_５０値で、前記蛍光比の濃度依存的阻害を引き起こすことが認められた。
【００６７】
Ｂ．高伝導性カルシウム活性化カリウムチャンネルに対する化合物の効果の電気生理学的アッセイ
ヒト非色素毛様体上皮細胞
高伝導性カルシウム活性化カリウム（ｍａｘｉ−Ｋ）チャンネルのヒト非色素毛様体上皮細胞における活性を、電気生理学的方法を用いて求めた。ｍａｘｉ−Ｋチャンネルを通る電流を、ピペット溶液がチャンネルの細胞外側に当たっており、浴溶液が細胞内側に当たっているパッチクランプ法の裏返し配置で記録した。切除パッチは、１〜約５０個のｍａｘｉ−Ｋチャンネルを有していた。それらの大きい単一チャンネル伝導率（２５０〜３００ｐＳ）と、膜電位および細胞内カルシウム濃度に対するチャンネル開閉の感受性によって、ｍａｘｉ−Ｋチャンネルを確認した。標準的な電気生理学的方法を用いて、膜電流を記録した。ガラス製ピペット（Garner 7052）をＫｏｐｆ引上げ装置（７５０型）を用いて２段階で引き上げ、生理食塩水充填時に電極抵抗は１〜３ＭΩであった。ＥＰＣ９（HEKA Instruments）またはアキソパッチ（Axopatch 1D; Axon Instruments）増幅装置を用いて膜電流を記録し、ＩＴＣ−１６インターフェース（Instrutech Corp）を用いてデジタル変換を行った。ピペットに、（ｍＭ）；１５０ＫＣｌ、１０Ｈｅｐｅｓ、１ＭｇＣｌ_２、０．０１ＣａＣｌ_２、３．６５ＫＯＨ、ｐＨ７．２０を入れた。場合によってカルシウムを除去し、１ｍＭＥＧＴＡを加え、２０ｍＭＫＣｌに代えて２０ｍＭＫＦを用いてカルシウムを排除することでチャンネル開閉のカルシウム感受性を調べた以外、浴（細胞内）溶液は同一とした。浴潅流によって、チャンネルの細胞内側に薬剤を施した。
【００６８】
ヒト非色素毛様体上皮細胞は、既報の方法に従って組織培地で増殖させ（Martin-Vasallo, P., Ghosh, S., and Coca-Prados, M., 1989, J. Cell. Physiol. 141, 243-252）、カバーグラスに乗せてから使用に供した。高抵抗シール（＞１ＧΩ）をピペットと細胞表面の間に形成し、裏返しのパッチを切除した。パッチにおけるｍａｘｉ−Ｋチャンネルをその開閉特性によって確認した。チャンネル開放の確率は、膜脱分極および細胞内カルシウム増加に応じて高くなった。薬理分析に使用されたパッチでは、細胞内カルシウムを除去することで、電圧依存性電流がなくなった。ｍａｘｉ−Ｋ電流を測定した。チャンネル開放を生じた脱分極電圧段階または傾斜後に、電流を測定した。
【００６９】
本発明の化合物を、適切な濃度で（０．００１〜１０μＭ）、チャンネルの細胞内側に施した。その化合物によってチャンネル開放の確率が低下し、その効果は実験チャンバからの化合物の洗い流しで逆転した。本発明の化合物についてのこの条件下でのｍａｘｉ−Ｋチャンネル遮断におけるＩＣ_５０値は、約０．５ｎＭ〜約３００ｎＭの範囲であった。

Claims

製薬上許容される落花生油媒体と組み合わせてカリウムチャンネル遮断薬を含む、高眼圧または緑内障の治療を必要とする被験者での高眼圧または緑内障の治療用の眼科製剤。
製薬上許容される落花生油媒体と組み合わせて０．０１〜５重量％の下記構造式のカリウムチャンネル遮断薬または該化合物の製薬上許容される塩、エナンチオマー、ジアステレオマーもしくは混合物を含む、高眼圧または緑内障の治療を必要とする被験者での高眼圧または緑内障の治療用の眼科製剤。
［式中、
ＲおよびＲ^ｘは独立に、Ｃ_１−６アルキル、（ＣＨ_２）_ｎアリール、（ＣＨ_２）_ｎヘテロアリール、（ＣＨ_２）_ｎ複素環アルキルを表し；前記アルキル、アリールまたはヘテロアリールは１〜３個のＲ^ｙ基で置換されていても良く；
Ｙは、−（ＣＨ_２）_ｎＳＣＯＲ^ｚを表し；
Ｘは、ＣＨ_２またはＯ（ｍが非存在である場合）を表し；
Ｒ^ｙは、水素、Ｃ_１−６アルコキシ、Ｃ_１−６アルキル、ＣＦ_３、ニトロ、アミノ、シアノ、Ｃ_１−６アルキルアミノまたはハロゲンを表し；
Ｒ^ｚは、Ｃ_１−６アルコキシまたはＣ_１−６アルキルを表し；
ｍは、１〜３を表し；
ｎは０〜３を表し；
Ｒ^１は水素またはＣ_１−６アルキルを表し；
Ｒ^２、Ｒ^３ａおよびＲ^３ｂは独立に、水素、Ｃ_１−１０アルキル、Ｃ_３−１０シクロアルキル、Ｃ_４−１０複素環アルキル、Ｃ_４−１０ヘテロアリールまたはＣ_６−１０アリールを表し；
Ｒ^４は、水素、Ｃ_１−６アルコキシ、Ｃ_１−６アルキル、ＣＦ_３またはハロゲンを表し；
Ｒ^５は、水素、Ｃ_１−６アルコキシ、Ｃ_１−６アルキル、ＣＦ_３、ニトロ、アミノ、シアノ、Ｃ_１−６アルキルアミノまたはハロゲンを表し；
Ｒ^６は、水素、ハロゲンまたはＣ_１−６アルキルを表し；
Ｒ^７は、Ｈ、ハロ、ＯＨ、ＮＯ_２、ＮＨ_２、ＣＮ、アルコキシ、−ＣＯＯ−、アルコキシカルボニル、ハロアルキル、アルコキシカルボニルアルキルまたはアルキルスルホニルを表す。］
ｍａｘｉ−Ｋチャンネル遮断薬の濃度が０．２〜２％である請求項２記載の製剤。
前記ｍａｘｉ−Ｋチャンネル遮断薬が下記式Ｉによって表される請求項２に記載の製剤。
［式中、
Ｒ^２およびＲ^３ｂは独立に、Ｃ_１−６アルキルまたはＣ_３−１０シクロアルキルを表し；他の可変因子はいずれも式Ｉの化合物について最初に記載の通りである。］
Ｒ^１がＣ_１−６アルキルであり；Ｒ^２およびＲ^３ｂが独立にＣ_１−６アルキルまたはＣ_３−１０シクロアルキルであり；Ｒ^４が水素であり；Ｒ^５がＣ_１−６アルコキシまたはＣ_１−６アルキルであり；Ｒ^３ａが水素であり；Ｒ^６がハロゲンまたはＣ_１−６アルキルである請求項４に記載の製剤。
Ｒ^１がＣ_１−３アルキルであり；Ｒ^２およびＲ^３ｂが独立にＣ_１−４アルキルまたはＣ_５−１０シクロアルキルであり；Ｒ^４が水素であり；Ｒ^５がＣ_１−３アルコキシであり；Ｒ^６がハロゲンである請求項５に記載の製剤。
前記ｍａｘｉ−Ｋチャンネル遮断薬が下記式ＩＩによって表される化合物である請求項２に記載の製剤。
［式中、
ＲおよびＲ^ｘは独立に、Ｃ_１−６アルキルまたは（ＣＨ_２）_ｎアリールであり；ＸはＣＨ_２であり；Ｒ^７はＨであり；Ｙは（ＣＨ_２）_ｎＳＣＯＲ^ｚであり、ｎ＝０であり；他の可変因子はいずれも式ＩＩの化合物について最初に記載の通りである。］
Ｙが（ＣＨ_２）_ｎＳＣＯＲ^ｚであり、ｎ＝１〜３であり；他の可変因子がいずれも式ＩＩの化合物について最初に記載の通りである請求項２に記載の製剤。
式ＩＩの化合物においてＲが（ＣＨ_２）_ｎアリールであり；Ｒ^ｘがＣ_１−６アルキルであり；Ｙが（ＣＨ_２）_ｎＳＣＯＲ^ｚであり；ＸがＣＨ_２であり；ｍ＝１である請求項２に記載の製剤。
式ＩＩの化合物においてＲが（ＣＨ_２）_ｎアリールであり；Ｒ^ｘがＣ_１−６アルキルであり；Ｙが（ＣＨ_２）_ｎＳＣＯＲ^ｚであり；ＸがＣＨ_２であり；ｍ＝２である請求項２に記載の製剤。
式ＩＩの化合物においてＲがＣ_１−６アルキルであり；Ｒ^ｘが（ＣＨ_２）_ｎアリールであり；Ｙが（ＣＨ_２）_ｎＳＣＯＲ^ｚであり；ＸがＣＨ_２であり；ｍ＝２である請求項２に記載の製剤。
式ＩＩの化合物においてＲが（ＣＨ_２）_ｎアリールであり；Ｒ^ｘが（ＣＨ_２）_ｎアリールであり；Ｙが（ＣＨ_２）_ｎＳＣＯＲ^ｚであり；ＸがＣＨ_２であり；ｍ＝２である請求項２に記載の製剤。
前記ｍａｘｉ−Ｋチャンネル遮断薬が下記のものである請求項２に記載の製剤。
０．０１〜１％のβ−アドレナリン拮抗薬をさらに含む請求項２に記載の製剤。
前記β−アドレナリン拮抗薬がベタキソロール、ブフェノロール、カルテオロール、レボブノロール、メチプラノロール、チモロールまたはそれらの製薬上許容される塩である請求項１４に記載の製剤。
前記β−アドレナリン拮抗薬がチモロールである請求項１５に記載の製剤。
０．０５〜５％の炭酸脱水素酵素阻害薬をさらに含む請求項２に記載の製剤。
前記炭酸脱水素酵素阻害薬がドルゾールアミド、ブリンゾールアミドまたはそれらの製薬上許容される塩である請求項１７に記載の製剤。
炭酸脱水素酵素阻害薬をさらに含む請求項１６に記載の製剤。
前記炭酸脱水素酵素阻害薬がドルゾールアミドまたはブリンゾールアミドである請求項１９に記載の製剤。
０．０５〜５重量％のプロスタグランジンをさらに含む請求項２に記載の製剤。
前記プロスタグランジンが、ラタノプロスト、レクラ、Ｓ１０３３もしくはプロスタミドなどのＰＧＦ２αプロスタグランジン類由来の血圧降下性脂質またはそれらの製薬上許容される塩である請求項２１に記載の製剤。
眼球挿入物の形態での請求項１に記載の製剤。