JP2004517034A

JP2004517034A - （神経）ペプチド結合ｒｇｄ（ａｒｇ−ｇｌｙ−ａｓｐ）

Info

Publication number: JP2004517034A
Application number: JP2001578513A
Authority: JP
Inventors: ヤン，マリオンデ; エリック，ポールクレニン，; ハーヘン，ペトラス，マルティナスファン
Original assignee: バイオシンセマインコーポレーテッド
Priority date: 2000-04-26
Filing date: 2001-04-26
Publication date: 2004-06-10
Also published as: PL357246A1; EP1452543A3; WO2001081426A3; ATE272074T1; CZ20023539A3; EP1301540A2; NZ522200A; EP1301540B1; IL152466A0; AU2001268982B8; AU6898201A; NO20025064L; EP1452543A2; NO20025064D0; DE60104552D1; AU2001268982B2; WO2001081426A2; US20040136907A1; CA2407514C; DE60104552T2

Abstract

本発明は、αＶβ３レセプター、および（神経）ペプチドレセプター特にソマトスタチンレセプター、の両者に対して結合アフィニティを有する化合物であって、当該化合物は、少なくとも１回のアミノ酸配列Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐを含む第１ペプチド部と、それに対して任意にリンカーを介して結合した第２ペプチド部とを含み、当該第２ペプチド部は（神経）ペプチドである。

Description

【０００１】
【技術分野】
本発明は、αｖβ３レセプター、および（神経）ペプチドレセプター特にソマトスタチンレセプター、の両者に対して結合アフィニティを有する化合物に関する。
【０００２】
【発明の背景】
インテグリンαｖβ３レセプターは、成長中でかつ遊走中の内皮細胞中で主に発現され、たとえば腫瘍血管形成時における血管細胞の血管形成表現型のマーカーとして同定されている。このαｖβ３インテグリンはそれ自体、腫瘍細胞によっても発現される。このαｖβ３レセプターは、したがって、腫瘍探索性分子の潜在的標的である。
【０００３】
腫瘍中に発生する別種のレセプターは、ソマトスタチンレセプターである。この存在は、種々の腫瘍中でおよび免疫細胞上で旧来の生化学結合法、オートラジオグラフィ、インサイチュハイブリッド形成およびＲＴ−ＰＣＲによって明らかとなっている。リガンドをソマトスタチンレセプターに結合させると、リガンド／ソマトスタチンレセプター複合体のインターナライゼーションが結果として起こることが極めて多い。
【０００４】
ソマトスタチンレセプターに対する天然のリガンドは、ソマトスタチン、５種のソマトスタチンレセプターサブタイプ（亜型）（ｓｓｔ）全てに高いアフィニィティで結合する１４または２８個のアミノ酸の神経ペプチドである。ソマトスタチンはプラズマ中で容易に分解されるが、酵素分解に対して安定なソマトスタチンアナログが開発されている。臨床的に極めて広く使用されているアナログはオクトレオチドおよびランレオチドであり、これらの化合物は、ｓｓｔ２，３，および５に対して高いアフィニティで結合する。
【０００５】
【発明の開示】
本発明によって、腫瘍に対するある化合物の総体的アフィニティを向上させるため、前記化合物中において両レセプターに対してアフィニティを有するリガンドを組み合わせることを検討した。
【０００６】
この目的のため、本発明は、αｖβ３レセプター、および（神経）ペプチドレセプター特にソマトスタチンレセプター、の両者に対して結合アフィニティを有する化合物に関し、この化合物は、少なくとも１回のアミノ酸配列Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐを含む第１ペプチド部とそれに対して任意にリンカーを介して結合した第２ペプチド部を含み、この第２ペプチド部は（神経）ペプチドである。
【０００７】
本発明は、ソマトスタチンに対してのみではなく他の（神経）ペプチドに対しても適用可能である。その結果、前記第２ペプチド部は、好適には、ＣＣＫ、ガストリン、サブスタンスＰ、ボンベシン、ＶＩＰ（血管作動性腸ペプチド）、ＰＡＣＡＰ（下垂体アデニレートシクレート活性化ペプチド）、ソマトスタチンおよびこれらのアナログから構成される群から選択される。アナログは、安定性または活性を向上させるため原ペプチドの修飾型であってもよいしまたはその生物活性をいまだ保持しているペプチドの部分であってもよい。
【０００８】
好適な態様において、前記第２ペプチド部は、好適にはオクトレオテート、オクトレオチド、ラントレオチド、バプレオチドまたはその誘導体から構成される群から選択されたソマトスタチンアナログである。
【０００９】
前記第１ペプチド部はいわゆるＲＧＤ−ペプチドであり、それは、Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐモチーフを少なくとも１回有するペプチドである。原ＲＧＤ−ペプチドのアナログは、ヨード化用のチロシンのような付加的アミノ酸を含むことができる。ＲＧＤ−アナログの好適な態様において、前記Ｔｙｒとリンカーの間にさらにＡｓｐが存在する。このＡｓｐは、ＲＧＤ−ペプチド部を環化してそれをより安定にするように作用する。
【００１０】
適切なリンカーは、たとえば、ＮＨ_２基を２個有するリシンである。これらのうちの１個はＲＧＤ−ペプチドに結合するために使用でき、一方、そのＣＯＯＨ基は、前記（神経）ペプチドに結合するために使用される。その際、残りのＮＨ_２基は、キレート剤に結合するために使用できる。前記キレート剤は、（放射性）標識を複合体化するために使用される。
【００１１】
これらの神経ペプチド−ＲＧＤ化合物の直接または（スペーサーを有することも有さないこともある）キレート剤による放射性標識は、これらの化合物を放射線診断または放射性医薬品として適切にする。放射性標識のための適切な同位体は、下記の^２１３Ｂｉ，^１８６Ｒｅ，^１８８Ｒｅ，^７７Ａｓ，^９０Ｙ，^６６Ｇａ，^６７Ｃｕ，^１６９Ｅｒ，^１１４ｍＩｎ，^１１７ｍＳｎ，^１２１Ｓｎ，^１２７Ｔｅ，^１４２Ｐｒ、^１４３Ｐｒ，^１９８Ａｕ，^１９９Ａｕ，^１４９Ｔｂ，^１６１Ｔｂ，^１０９Ｐｄ，^１６５Ｄｙ，^１４９Ｐｍ，^１５１Ｐｍ，^１５３Ｓｍ，^１５７Ｇｄ，^１５９Ｇｄ，^１６６Ｈｏ，^１７２Ｔｍ，^１６９Ｙｂ，^１７５Ｙｂ、^１７７Ｌｕ，^１０５Ｒｈ，^１０３ｍＲｈ，^１９５ｍＰｔ，^１１１Ａｇ，^１２４Ｉ，^１３１Ｉおよび^２１１Ａｔ，^９９ｍＴｃ，^２０３Ｐｂ，^６７Ｇａ，^６８Ｇａ，^７２Ａｓ，^１１１Ｉｎ，^１１３ｍＩｎ，^９７Ｒｕ，^６２Ｃｕ，^６４Ｃｕ，^５２Ｆｅ，^５２ｍＭｎ、^５１Ｃｒ，^１２３Ｉ，^１３１Ｉ、^７５Ｂｒ，^７６Ｂｒ，^７７Ｂｒおよび^８２Ｂｒである。このような放射性標識化合物の例は、^１１１Ｉｎ−ＤＴＰＡ−ソマトスタチンアナログ−ＲＧＤ化合物である。
【００１２】
ソマトスタチンアナログ（または他の（神経）−ペプチドおよびそれらのアナログ）に結合したＲＧＤ−ペプチドは、前記ＲＧＤ−レセプター（αｖβ３）または前記ソマトスタチンレセプターのひとつのいずれかにより、細胞に結合しかつ細胞に入る。異なる２種のレセプター、すなわち（神経）ペプチドレセプターおよびαｖβ３インテグリンの化合物結合により、腫瘍細胞のような異なる標的細胞上ならびに腫瘍血管形成細胞上で前記化合物を見いだすことが期待できる。このことは、高い標的−バックグランド比に寄与できる。
【００１３】
本発明の化合物のプロトタイプは、ＲＧＤ−オクトレオチドである。オクトレオチドは、ソマトスタチンレセプター（ｓｓｔ）２、３、および５型サブタイプに結合する安定ペプチド（プラズマ分解に対して耐性）である。他の化合物については、実施例に述べたとおりである。
【００１４】
ｓｓｔ−レセプターまたはαｖβ３−レセプターを有する組織によるオートラジオグラフィ実験において、原ペプチドは両者とも１個の新規化合物に組み合わされるが、それらは両者共にそれら自体のレセプターに対して結合アフィニティを保持していることが見出された。それぞれのレセプターに対する前記新規化合物の結合は、過剰の異なる競合的アナログによってブロックできた。
【００１５】
本発明をさらに下記の実施例で例示するが、それらは本発明を限定することを意図していない。
【００１６】
【実施例】
（実施例１）
ＲＧＤ−（神経）ペプチド結合体およびそれらの対応するＤＴＰＡ−またはＤＯＴＡ−誘導体合成の一般的方法
下記は、本発明の化合物調製の一般的方法である。
【００１７】
固相ペプチド合成（ＳＰＰＳ）は、Ｆｍｏｃ法を用いて、ＰＥバイオシステムズ“パイオニア”（ＰＥＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ “Ｐｉｏｎｅｅｒ”）シンセサイザーを用いて実施する。前記化合物の全アミノ酸から構成される線状ペプチドを、出発レジンとしてのＦｍｏｃ−ＡＡ_１（ＯｔＢｕ）−ＰＥＧ−ＰＳ（ＰＥバイオシステムズ、０．１８ｍｍｏｌ／ｇを載せる）により、０．１ｍｍｏｌスケールで調製する。ここで、開始レジンとしてＡＡ_１は、Ｃ末アミノ酸である。Ｆｍｏｃ保護アミノ酸（０．４ｍｍｏｌ）をＮ−［（ジメチルアミノ）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾロ［４，５−ｂ］ピリジン−１−イルメチレン］−Ｎ−メチルメタンアミニウムヘキサフルオロホスフェートＮ−オキサイド（ＨＡＴＵ）によって活性化する。全アミノ酸およびペプチド合成試薬は、市販のものを購入した。
【００１８】
前記ペプチドのオンボードアミド結晶化は、“アリルデブロック（ＡｌｌｙｌＤｅｂｌｏｃｋ）”プロトコール（Ｐｄ（ＰＰｈ_３）_４、Ｎ−メチルモルホリン、酢酸、クロロホルム）を用いて行い、その後、７−アザベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリス（ピロリジノ）−ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（ＰｙＡＯＰ）活性化を行う。保護環化ペプチドを含むレジンを、その後、機器から取り出す。
【００１９】
前記レジンを、タリウムトリフルオロアセテート９２ｍｇ含有ジメチルホルムアミド８ｍｌ中に懸濁させる。前記混合物を２−３時間振とうさせ、ろ過し、ＤＭＦ１０ｍＬ、ＤＭＧ−水（１：１）１０ｍＬ、ＤＭＦおよびＴＨＦ１０ｍＬによって連続的に洗浄し、前記レジンに付着した保護ペプチド（ＩＩＩ）を得る。その後、このレジンを２個の部分に分ける。
【００２０】
前記ペプチドをレジンから切断し、８５％ＴＦＡ／５％水／５％フェノール／５％チアニソールを用いて１０−１２時間脱保護する。粗ペプチドを、ｔ−ブチルメチルエーテルによる沈殿により単離し、その後遠心し、０．１％ＴＦＡを含むアセトニトリル／水勾配（溶媒Ａ：０．１％ＴＦＡ／Ｈ_２Ｏ、溶媒Ｂ：０．１％ＴＦＡ／１０％Ｈ_２Ｏ／ＣＨ_３ＣＮ；勾配：９５％Ａ／５％Ｂに２．０分間保持した後、溶媒Ａ（１００％）から５０％Ａ／５０％Ｂまで２０分かける）を用いて逆相ＨＰＣＬによって精製する。
【００２１】
リシンのＭｔｔ保護基は、５％ＴＦＡ／５％トリイソプロピルシラン（ＴＩＰＳ）／９０％ジクロロメタン（２×３０分）処理により除去する。このレジンをジクロロメタンおよびテトラハイドロフランによって洗浄し、ＤＩＥＡ（３５μｌ、０．２ｍｍｏｌ）含有ＤＭＦ（２．５ｍＬ）中に懸濁させる。別の容器では、ＨＢＴＵ／ＨＯＢｔ（０．２ｍｍｏｌ、０．２ｍｍｏｌ／ｍＬ溶液を１．０ｍＬ）を含有するＤＭＦ中にトリ−ｔ−ブチルＤＴＰＡ無水物またはＤＯＴＡ（１１２ｍｇ，０．２ｍｍｏｌ）を溶解させ、５ｍＬ溶液を得る。１時間攪拌後、活性化ＤＴＰＡ誘導体を先に懸濁させたレジンに添加する。
【００２２】
反応を一晩連続させ、レジンをＤＭＦおよびＴＨＦで洗浄する。
【００２３】
前記ペプチドをレジンから切断し、１０−１２時間、８５％ＴＦＡ／５％水／５％フェノール／５％チアニソールを用いて脱保護した。粗ペプチドをｔ−ブチルメチルエーテルによる沈殿により単離し、その後遠心し、０．１％ＴＦＡを含むアセトニトリル／水勾配（溶媒Ａ：０．１％ＴＦＡ／Ｈ_２Ｏ、溶媒Ｂ：０．１％ＴＦＡ／１０％Ｈ_２Ｏ／ＣＨ_３ＣＮ；勾配：９５％Ａ／５％Ｂに２．０分間保持した後、溶媒ＡからＢまで２０分かける）を用いて逆相ＨＰＣＬによって精製する。
【００２４】
（実施例２）
ＲＧＤ−オクトレオテート（ＩＶ）および対応するＤＴＰＡ−誘導体（Ｖ）の合成
実施例１に記載の方法により、ＲＧＤ−オクトレオテートおよびその対応するＤＴＰＡ誘導体を、下記の反応図に従って調製した：
【化１】

ＲＧＤ−オクトレオテート結合体（ＩＶ）のマススペクトルデータは、下記のようである。理論値：１７６６．６．実験値：８８４．８（（Ｍ＋２）／２）。
【００２５】
前記ＲＧＤ−オクトレオテート結合体（Ｖ）という前記ＤＴＰＡ−誘導体のマススペクトルデータは、下記のようである。理論値：２１３９．９．実験値：１０７１．２（（Ｍ＋２）／２）。
【００２６】
（実施例３）
ＲＧＤ−オクトレオチド（ｉｖ）および対応するＤＯＴＡ−誘導体（Ｖ）の合成実施例１に記載の方法により、ＲＧＤ−オクトレオチドおよびその対応するＤＴＰＡ−誘導体を、下記の反応図に従って調製した：
【化２】

Claims

αｖβ３レセプター、および（神経）ペプチドレセプター特にソマトスタチンレセプター、の両者に対して結合アフィニティを有する化合物であって、当該化合物は、少なくとも１回のアミノ酸配列Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐを含む第１ペプチド部と、それに対して任意にリンカーを介して結合した第２ペプチド部とを含み、当該第２ペプチド部は（神経）ペプチドであることを特徴とする化合物。
前記第２ペプチド部は、好適には、ＣＣＫ、ガストリン、サブスタンスＰ、ボンベシン、ＶＩＰ（血管作動性腸ペプチド）、ＰＡＣＡＰ（下垂体アデニレートシクラーゼ活性化ペプチド）、ソマトスタチンおよびこれらのアナログから構成される群から選択される請求項１記載の化合物。
前記第２ペプチド部がソマトスタチンアナログである請求項２記載の化合物。
前記ソマトスタチンアナログが、オクトレオテート、オクトレオチド、ラントレオチド、バプレオチドまたはその誘導体から構成される群から選択される請求項３記載の化合物。
前記リンカーが少なくとも１個のリシンを含む請求項１乃至４のいずれかに記載の化合物。
前記化合物が放射性標識されている請求項１乃至５のいずれかに記載の化合物。
前記放射性標識が、^２１３Ｂｉ，^１８６Ｒｅ，^１８８Ｒｅ，^７７Ａｓ，^９０Ｙ，^６６Ｇａ，^６７Ｃｕ，^１６９Ｅｒ，^１１４ｍＩｎ，^１１７ｍＳｎ，^１２１Ｓｎ，^１２７Ｔｅ，^１４２Ｐｒ、^１４３Ｐｒ，^１９８Ａｕ，^１９９Ａｕ，^１４９Ｔｂ，^１６１Ｔｂ，^１０９Ｐｄ，^１６５Ｄｙ，^１４９Ｐｍ，^１５１Ｐｍ，^１５３Ｓｍ，^１５７Ｇｄ，^１５９Ｇｄ，^１６６Ｈｏ，^１７２Ｔｍ，^１６９Ｙｂ，^１７５Ｙｂ、^１７７Ｌｕ，^１０５Ｒｈ，^１０３ｍＲｈ，^１９５ｍＰｔ，^１１１Ａｇ，^１２４Ｉ，^１３１Ｉおよび^２１１Ａｔ，^９９ｍＴｃ，^２０３Ｐｂ，^６７Ｇａ，^６８Ｇａ，^７２Ａｓ，^１１１Ｉｎ，^１１３ｍＩｎ，^９７Ｒｕ，^６２Ｃｕ，^６４Ｃｕ，^５２Ｆｅ，^５２ｍＭｎ、^５１Ｃｒ，^１２３Ｉ，^１３１Ｉ、^７５Ｂｒ，^７６Ｂｒ，^７７Ｂｒおよび^８２Ｂｒから構成される群から選択された放射性同位元素による請求項６記載の化合物。
生物活性分子としての用途のためである請求項１乃至７のいずれかに記載の化合物。