JP2004513953A - ジベンズオキサゼピンαＶインテグリン受容体アンタゴニスト - Google Patents

Abstract

本発明は、新規なジベンズオキサゼピン誘導体、その合成及びαＶインテグリン受容体アンタゴニストとしてのその使用に関する。より具体的には、本発明の化合物はインテグリン受容体αＶβ３及びαＶβ５のアンタゴニストであり、骨吸収の抑制、骨粗しょう症の治療及び／または予防、並びに血管再狭窄、糖尿病性網膜症、黄斑変性、血管形成、アテローム性動脈硬化症、炎症性関節炎、ガン及び転移性腫瘍増殖の抑制のために有用である。

Description

【０００１】
（発明の分野）
本発明は、ジベンズオキサゼピン誘導体、その合成及びαＶインテグリン受容体アンタゴニストとしてのその使用に関する。より具体的には、本発明の化合物はインテグリン受容体αＶβ３やαＶβ５、及び他のβ−サブユニットに関連するαＶインテグリン受容体のアンタゴニストであり、骨吸収の抑制、骨粗しょう症の治療及び／または予防、並びに血管再狭窄、糖尿病性網膜症、黄斑変性、血管形成、アテローム性動脈硬化症、炎症性関節炎、ガン及び転移性腫瘍増殖の抑制に有用である。
【０００２】
（発明の背景）
各種症状及び状態がインテグリン受容体に対する作用に調節され得ること及びインテグリン受容体アンタゴニストが有用な薬物類であることが認められている。インテグリン受容体はヘテロダイマー膜貫通受容体であり、その膜貫通受容体を介して細胞は細胞外マトリックス及び他の細胞と付着し、結合している（援用により本明細書に含まれるとするＳ．Ｂ．Ｒｏｄａｎ及びＧ．Ａ．Ｒｏｄａｎ，「破骨細胞におけるインテグリン機能（Ｉｎｔｅｇｒｉｎ Ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｉｎ Ｏｓｔｅｏｃｌａｓｔｓ）」，Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ，１５４：Ｓ４７−Ｓ５６（１９９７）参照）。
【０００３】
本発明の一態様で、本明細書に開示されている化合物は骨吸収を抑制するのに有用である。骨吸収は破骨細胞として公知の細胞の作用に媒介される。破骨細胞は脊椎動物中の、主として、炭酸カルシウム及びリン酸カルシウムであるミネラル化組織を吸収する直径が約４００ｍｍ以下の大きな多核細胞である。破骨細胞は、骨表面に沿って活発に遊走し、骨に結合し、必須の酸及びプロテアーゼを分泌し得、それにより活発に骨からミネラル化組織を吸収する運動性の細胞である。より具体的には、破骨細胞は少なくとも２つの生理学的状態、すなわち分泌型及び遊走もしくは運動型で存在すると認められる。分泌型では、破骨細胞はフラットであり、密接な結合ゾーン（シーリングゾーン）を介して骨マトリックスに付着し、高度に分極化し、波うち稜を形成し、そしてリソソーム酵素及びプロトンを分泌して骨を吸収する。破骨細胞の骨表面への付着は骨吸収における重要な初期ステップにおいて重要である。遊走もしくは運動型では、破骨細胞は骨マトリックスを通って遊走し、再び骨に付着するまで吸収に関与しない。
【０００４】
インテグリンは破骨細胞の付着、活性化及び遊走に関与している。破骨細胞、例えばラット、トリ、マウス及びヒト破骨細胞での最も豊富なインテグリンはαｖβ３として公知のインテグリン受容体であり、このαｖβ３は骨においてＲＧＤ配列を含むマトリックスタンパク質と相互作用すると考えられている。αｖβ３に対する抗体はインビトロで骨吸収を阻止することから、このインテグリンは吸収過程で重要な役割を担っていることが理解できる。αｖβ３リガンドが哺乳動物においてインビボで破骨細胞媒介骨吸収を抑制するために効果的に使用され得ることを示唆する証拠は多い。
【０００５】
現在関心が持たれている重要な骨疾患は骨粗しょう症、悪性疾患の高カルシウム血症、骨転移に起因する骨減少症、歯周病、副甲状腺亢進症、関節リウマチにおける関節周囲侵食、パジェット病、不動化誘因の骨減少症及びグルココルチコイド誘因の骨粗しょう症である。これらの状態はすべて骨吸収（すなわち、破壊）と骨形成のバランスが崩れたために生ずる骨損失を特徴とし、骨損失は平均で生涯を通して平均で約１４％／年の割合で続く。しかしながら、骨交替率は部位により異なり、例えば脊椎動物の小柱骨や顎の歯槽骨の骨交替率は長骨の皮質よりも高い。骨損失の可能性は骨交替に直接関連しており、骨折の危険が高くなる閉経期直後の脊椎動物では５％以上／年に達し得る。
【０００６】
米国において、骨粗しょう症による椎骨の骨折患者は現在約２千万人である。更に、骨粗しょう症に起因する股関節骨折患者は約２５０，０００人／年である。この臨床状況により最初の２年以内の死亡率は１２％となり、患者の３０％が骨折後在宅看護ケアを必要としている。
【０００７】
上記の症状を有する患者は骨吸収を抑制する薬剤での治療を受けている。
【０００８】
一方、αｖβ３リガンドが再狭窄（すなわち、心臓弁の矯正手術後の狭窄の再発）、アテローム性動脈硬化症、糖尿病性網膜症、黄斑変性及び血管形成（すなわち、新しい血管の形成）の治療及び／または抑制、並びにウイルス疾患の抑制において有用であることが判明している。更に、腫瘍の増殖が十分な血液供給がなされているかに依存しており、後者が新規血管の腫瘍への増殖に依存し、よって動物モデルにおいて血管形成を抑制すると腫瘍を退行させ得ると仮定されている（援用により本明細書に含まれるとするＨａｒｒｉｓｏｎ’ｓ　Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ　ｏｆ　Ｉｎｔｅｒｎａｌ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，第１２版（１９９１年）参照）。従って、血管形成を抑制するαｖβ３アンタゴニストは腫瘍増殖を抑制することによるガンの治療に有用であり得る（例えば、援用により本明細書に含まれるとするＢｒｏｏｋｓら，Ｃｅｌｌ，７９：１１５７−１１６４（１９９４）参照）。
【０００９】
血管形成が関節炎の発症及び持続における中心的因子であり、血管インテグリンαｖβ３が炎症性関節炎における好ましい標的であり得ることを示唆する証拠も提示されている。従って、血管形成を抑制するαｖβ３アンタゴニストは関節リウマチのような関節炎の治療に対する新規治療法となり得る（援用により本明細書に含まれるとするＣ．Ｍ．Ｓｔｏｒｇａｒｄら，「αｖβ３アンタゴニストで治療した家兎における低下した血管形成及び関節炎（Ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ ａｎｄ ａｒｔｈｒｉｔｉｃ ｄｉｓｅａｓｅ ｉｎ ｒａｂｂｉｔｓ ｔｒｅａｔｅｄ ｗｉｔｈ ａｎ αｖβ３ ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ）」，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，１０３：４７−５７（１９９９）参照）。
【００１０】
更に、本発明の化合物はインテグリン受容体αｖβ５のアンタゴニストとして作用することにより血管新生をも抑制し得る。αｖβ５に対するモノクローナル抗体が家兎角膜及び幼鶏絨毛尿膜モデルにおいてＶＥＧＦ誘発血管形成を抑制することは判明している（援用により本明細書に含まれるとするＭ．Ｃ．Ｆｒｉｅｄｌａｎｄｅｒら，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２７０：１５００−１５０２（１９９５）参照）。従って、αｖβ５を拮抗する化合物は黄斑変性、糖尿病性網膜症、ガン及び転移性腫瘍増殖を治療及び予防するのに有用である。
【００１１】
更に、本発明の化合物は、他のβサブユニットに関連するαｖインテグリン受容体（例えば、αｖβ６及びαｖβ８）のアンタゴニストとして作用することにより血管形成及び炎症を抑制し得る（例えば、援用により本明細書に含まれるとするＭｅｌｐｏ　Ｃｈｒｉｓｔｏｆｉｄｏｕ−Ｓｏｌｏｍｉｄｏｕら，「ヒト皮膚／ＳＣＩＤマウスキメラにおける創傷誘発ヒト血管形成における内皮細胞αｖインテグリン受容体の発現及び機能（Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ Ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ Ｃｅｌｌ αｖ Ｉｎｔｅｇｒｉｎ Ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ｉｎ Ｗｏｕｎｄ−Ｉｎｄｕｃｅｄ Ｈｕｍａｎ Ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ ｉｎ Ｈｕｍａｎ Ｓｋｉｎ／ＳＣＩＤ Ｍｉｃｅ Ｃｈｉｍｅｒａｓ）」，Ａｍｅｒｉｃａｎ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ，１５１：９７５−８３（１９９７）及びＸｉａｏ−Ｚｈｕ　Ｈｕａｎｇら，「インテグリンβ６サブユニット遺伝子の不活性化は肺及び皮膚の炎症の調節において上皮インテグリンの役割を示す（Ｉｎａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ Ｉｎｔｅｇｒｉｎ β６ Ｓｕｂｕｎｉｔ Ｇｅｎｅ Ｒｅｖｅａｌｓ ａ Ｒｏｌｅ ｏｆ Ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ Ｉｎｔｅｇｒｉｎｓ ｉｎ Ｒｅｇｕｌａｔｉｎｇ Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ Ｌｕｎｇｓ ａｎｄ Ｓｋｉｎ）」，Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｃｅｌｌ　Ｂｉｏｌｏｇｙ，１３３：９２１−９２８（１９９６）参照）。
【００１２】
加えて、本発明の化合物はαｖβ３受容体及びαｖβ５受容体の両方をも拮抗し得、従って骨吸収の抑制、骨粗しょう症の治療及び予防、並びに血管再狭窄、糖尿病性網膜症、黄斑変性、血管形成、アテローム性動脈硬化症、炎症性関節炎、ガン及び転移性腫瘍増殖の抑制のために有用である。
【００１３】
αｖβ３インテグリン受容体のペプチジル及び擬ペプチドアンタゴニストは科学文献及び特許文献に記載されている。例えば、Ｗ．Ｊ．Ｈｏｅｋｓｔｒａ及びＢ．Ｌ．Ｐｏｕｌｔｅｒ，Ｃｕｒｒ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，５：１９５−２０４（１９９８）及びここに引用されている参考文献、国際特許出願公開第９５／３２７１０号パンフレット、同第９５／３７６５５号パンフレット、同第９７／０１５４０号パンフレット、同第９７／３７６５５号パンフレット、同第９８／０８８４０号パンフレット、同第９８／１８４６０号パンフレット、同第９８／１８４６１号パンフレット、同第９８／２５８９２号パンフレット、同第９８／３１３５９号パンフレット、同第９８／３０５４２号パンフレット、同第９９／１５５０６号パンフレット、同第９９／１５５０７号パンフレット、同第００／０３９７３号パンフレット、欧州特許出願公開第８５３０８４号明細書、同第８５４１４０号明細書、同第８５４１４５号明細書、米国特許第５，２０４，３５０号明細書、同第５，２１７，９９４号明細書、同第５，６３９，７５４号明細書、同第５，７４１，７９６号明細書、同第５，７８０，４２６号明細書、同第５，９２９，１２０号明細書、同第５，９５２，３４１号明細書、同第６，０１７，９２５号明細書及び同第６，０４８，８６１号明細書参照。αｖβ３インテグリン受容体アンタゴニストのインビボ及びインビトロでの骨吸収防止能の証拠も提示されている（例えば、Ｖ．Ｗ．Ｅｎｇｌｅｍａｎら，「αｖβ３インテグリンの擬ペプチドアンタゴニストはインビトロで骨吸収を抑制し、インビボで骨粗しょう症を予防する（Ａ Ｐｅｐｔｉｄｏｍｉｍｅｔｉｃ Ａｎｔａｇｏｎｉｓ ｏｆ ｔｈｅ αｖβ３ Ｉｎｔｅｇｒｉｎ Ｉｎｈｉｂｉｔｓ Ｂｏｎｅ Ｒｅｓｏｒｐｔｉｏｎ Ｉｎ Ｖｉｔｒｏ ａｎｄ Ｐｒｅｖｅｎｔｓ Ｏｓｔｅｏｐｏｒｏｓｉｓ Ｉｎ Ｖｉｖｏ）」，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，９９：２２８４−２２９２（１９９７）；Ｓ．Ｂ．Ｒｏｄａｎら，「高親和性非ペプチドαｖβ３リガンドはインビトロ及びインビボにおいて破骨細胞活性を抑制する（Ａ Ｈｉｇｈ Ａｆｆｉｎｉｔｙ Ｎｏｎ−Ｐｅｐｔｉｄｅ αｖβ３ Ｌｉｇａｎｄ Ｉｎｈｉｂｉｔｓ Ｏｓｔｅｏｃｌａｓｔ Ａｃｔｉｖｉｔｙ Ｉｎ Ｖｉｔｒｏ ａｎｄ Ｉｎ Ｖｉｖｏ）」，Ｊ．Ｂｏｎｅ　Ｍｉｎｅｒ．Ｒｅｓ．，１１：Ｓ２８９（１９９６）；Ｊ．Ｆ．Ｇｏｕｒｖｅｓｔら，「αｖβ３ビトロネクチン受容体の非ペプチドリガンドによるＯＶＸ誘発骨損失の予防（Ｐｒｅｖｅｎｔａｔｉｏｎ ｏｆ ＯＶＸ−Ｉｎｄｕｃｅｄ Ｂｏｎｅ Ｌｏｓｓ Ｗｉｔｈ ａ Ｎｏｎ−ｐｅｐｔｉｄｉｃ Ｌｉｇａｎｄ ｏｆ ｔｈｅ αｖβ３ Ｖｉｔｒｏｎｅｃｔｉｎ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ）」，Ｂｏｎｅ，２３：Ｓ６１２（１９９８）；Ｍ．Ｗ．Ｌａｒｋら，「経口的に活性なビトロネクチン受容体αｖβ３アンタゴニストはインビトロ及び卵巣摘出ラットにおいてインビボで骨吸収を予防する（Ａｎ Ｏｒａｌｌｙ Ａｃｔｉｖｅ Ｖｉｔｒｏｎｅｃｔｉｎ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ αｖβ３ Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ Ｐｒｅｖｅｎｔｓ Ｂｏｎｅ Ｒｅｓｏｒｐｔｉｏｎ Ｉｎ Ｖｉｔｒｏ ａｎｄ Ｉｎ Ｖｉｖｏ ｉｎ ｔｈｅ Ｏｖａｒｉｅｃｔｏｍｉｚｅｄ Ｒａｔ）」，Ｂｏｎｅ，２３：Ｓ２１９（１９９８）参照）。
【００１４】
αｖβ３インテグリン受容体はその同族体マトリックス及び細胞表面グリコタンパク質中のＡｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ（ＲＧＤ）トリペプチド配列を認識する（Ｊ．Ｓａｍａｎｅｎら，「インテグリンαｖアンタゴニストに関する血管適応症（Ｖａｓｃｕｌａｒ Ｉｎｄｉｃａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ Ｉｎｔｅｇｒｉｎ αｖ Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｓ）」，Ｃｕｒｒ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔ．Ｄｅｓｉｇｎ，３：５４５−５８４（１９９７）参照）。特にＧｅｎｅｔｅｃｈ及びＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ　Ｂｅｅｃｈａｍは、Ｎ末端をヘテロ環式アルギニン模擬体で置換した非ペプチドαｖβ３インテグリン受容体を構築するために立体配置的に拘束させたＧｌｙ−Ａｓｐ模擬体としてベンザゼピン核を使用してきた（Ｒ．Ｍ．Ｋｅｅｎａｎら，「有力な非ペプチドビトロネクチン受容体（αｖβ３）アンタゴニストの発見（Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ ｏｆ Ｐｏｔｅｎｔ Ｎｏｎｐｅｐｔｉｄｅ Ｖｉｔｒｏｎｅｃｔｉｎ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ （αｖβ３） Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｓ）」，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，４０：２２８９−２２９２（１９９７）；Ｒ．Ｍ．Ｋｅｅｎａｎら，「１，４−ベンゾジアゼピン非ペプチドビトロネクチン受容体（αｖβ３）アンタゴニスト中のアルギニン模擬体としてのベンゾイミダゾール誘導体（Ｂｅｎｚｉｍｉｄａｚｏｌｅ Ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ Ａｓ Ａｒｇｉｎｉｎｅ Ｍｉｍｅｔｉｃｓ ｉｎ １，４−Ｂｅｎｚｏｄｉａｚｅｐｉｎｅ Ｎｏｎｐｅｐｔｉｄｅ Ｖｉｔｒｏｎｅｃｔｉｎ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ （αｖβ３） Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｓ）」，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．，８：３１６５−３１７０（１９９８）；及びＲ．Ｍ．Ｋｅｅｎａｎら，「再狭窄モデルにおいて有効なイミダゾピリジン含有１，４−ベンゾジアゼピン非ペプチドビトロネクチン受容体（αｖβ３）アンタゴニストの発見（Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ ｏｆ ａｎ Ｉｍｉｄａｚｏｐｙｒｉｄｉｎｅ−Ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ １，４−Ｂｅｎｚｏｄｉａｚｅｐｉｎｅ Ｎｏｎｐｅｐｔｉｄｅ Ｖｉｔｒｏｎｅｃｔｉｎ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ （αｖβ３） Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ Ｗｉｔｈ Ｅｆｆｉｃａｃｙ ｉｎ ａ Ｒｅｓｔｅｎｏｓｉｓ Ｍｏｄｅｌ）」，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．，８：３１７１−３１７６（１９９８）参照）。ベンゾアゼピン、関連ベンゾジアゼピン及びベンゾシクロヘプテン、αｖβ３インテグリン受容体アンタゴニストを開示しているＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ　Ｂｅｅｃｈａｍに付与された特許には国際特許出願公開第９６／００５７４号パンフレット、同第９６／００７３０号パンフレット、同第９６／０６０８７号パンフレット、同第９６／２６１９０号パンフレット、同第９７／２４１１９号パンフレット、同第９７／２４１２２号パンフレット、同第９７／２４１２４号パンフレット、同第９８／１４１９２号パンフレット、同第９８／１５２７８号パンフレット、同第９９／０５１０７号パンフレット、同第９９／０６０４９号パンフレット、同第９９／１５１７０号パンフレット、同第９９／１５１７８号パンフレット及び同第９９／１５５０６号パンフレットが含まれ、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈに付与された特許には国際特許出願公開第９７／３４８６５号パンフレットが含まれる。ジベンゾシクロヘプテン、ジベンゾシクロヘプタン及びジベンズオキサゼピン骨格もαｖβ３アンタゴニストを生成するためのＧｌｙ−Ａｓｐ模擬体として使用されてきた（いずれもＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ　Ｂｅｅｃｈａｍに付与された国際特許出願公開第９７／０１５４０号パンフレット、同第９８／３０５４２号パンフレット、同第９９／１１６２６号パンフレット、同第９９／１５５０８号パンフレット、同第００／３３８３８号パンフレット、米国特許第６，００８，２１３号明細書及び同第６，０６９，１５８号明細書参照）。
【００１５】
骨格立体配置的な環拘束を含む他のインテグリン受容体アンタゴニストも特許文献に記載されている。フェニル拘束を有するアンタゴニストを開示している公開特許明細書及び特許明細書には国際特許出願公開第９８／００３９５号パンフレット、同第９９／３２４５７号パンフレット、同第９９／３７６２１号パンフレット、同第９９／４４９９４号パンフレット、同第９９／４５９２７号パンフレット、同第９９／５２８７２号パンフレット、同第９９／５２８７９号パンフレット、同第９９／５２８９６号パンフレット、同第００／０６１６９号パンフレット、欧州特許出願公開第０　８２０，９８８号明細書、同第０　８２０，９９１号明細書、米国特許第５，７４１，７９６号明細書、同第５，７７３，６４４号明細書、同第５，７７３，６４６号明細書、同第５，８４３，９０６号明細書、同第５，８５２，２１０号明細書、同第５，９２９，１２０号明細書、同第５，９５２，３８１号明細書、同第６，０２８，２２３号明細書、同第６，０４０，３１１号明細書が含まれる。単環式環拘束を有するアンタゴニストを開示している公開特許明細書及び特許明細書には国際特許出願公開第９９／２６９４５号パンフレット、同第９９／３０７０９号パンフレット、同第９９／３０７１３号パンフレット、同第９９／３１０９９号パンフレット、同第９９／５９９９２号パンフレット、同第００／００４８６号パンフレット、同第００／０９５０３号パンフレット、欧州特許出願公開第０　７９６，８５５号明細書、同第０　９２８，７９０号明細書、同第０　９２８，７９３号明細書、米国特許第５，７１０，１５９号明細書、同第５，７２３，４８０号明細書、同第５，９８１，５４６号明細書、同第６，０１７，９２６号明細書及び同第６，０６６，６４８号明細書が含まれる。二環式環拘束を有するアンタゴニストを開示している公開特許明細書及び特許明細書には国際特許出願公開第９８／２３６０８号パンフレット、同第９８／３５９４９号パンフレット、同第９９／３３７９８号パンフレット、欧州特許出願公開第０　８５３，０８４号明細書、米国特許第５，７６０，０２８号明細書、同第５，９１９，７９２号明細書及び同第５，９２５，６５５号明細書が含まれる。
【００１６】
しかしながら、依然として公知の化合物よりも力価、薬力学的作用及び薬物動態学的特性（例えば、経口バイオアベイラビリティー及び作用期間）が改善された小分子の非ペプチド選択的αＶインテグリン受容体アンタゴニストが要望されている。前記化合物は、αＶインテグリン受容体結合や細胞付着及び活性化により媒介される上記した各種病態の治療、予防または抑制を促進するであろう。
【００１７】
本出願人の２０００年１月２５日出願の米国特許出願第９５／５０５，３８７２６号明細書には、αＶインテグリン受容体アンタゴニストであるジベンズアゼピン誘導体類が開示されている。本明細書には有力なαＶインテグリン受容体アンタゴニスト特性を有する新規なジベンズオキサゼピン誘導体が開示されている。
【００１８】
従って、本発明の目的は、αＶインテグリン受容体アンタゴニストとして有用な新規なジベンズオキサゼピン誘導体を提供することである。
【００１９】
本発明の別の目的は、αＶβ３受容体アンタゴニストとして有用な新規なジベンズオキサゼピン誘導体を提供することである。
【００２０】
本発明の別の目的は、αＶβ５受容体アンタゴニストとして有用な新規なジベンズオキサゼピン誘導体を提供することである。
【００２１】
本発明の別の目的は、二重αＶβ３／αＶβ５受容体アンタゴニストとして有用な新規なジベンズオキサゼピン誘導体を提供することである。
【００２２】
本発明の別の目的は、αＶインテグリン受容体アンタゴニストを含む医薬組成物を提供することである。
【００２３】
本発明の別の目的は、本発明の医薬組成物の製造方法を提供することである。
【００２４】
本発明の別の目的は、本発明の化合物及び本発明の化合物を含有する医薬組成物を投与することによる治療を要する哺乳動物におけるαＶインテグリン受容体拮抗作用の誘発方法を提供することである。
【００２５】
本発明の別の目的は、骨吸収、再狭窄、アテローム性動脈硬化症、炎症性関節炎、糖尿病性網膜症、黄斑変性、血管形成、ガン及び転移性腫瘍増殖を抑制するのに有用な化合物及び前記化合物を含有する医薬組成物を提供することである。
【００２６】
本発明の別の目的は、骨粗しょう症の治療に有用な化合物及び前記化合物を含有する医薬組成物を提供することである。
【００２７】
本発明の別の目的は、骨吸収、再狭窄、アテローム性動脈硬化症、炎症性関節炎、糖尿病性網膜症、黄斑変性、血管形成、ガン及び転移性腫瘍増殖の抑制方法を提供することである。
【００２８】
本発明の別の目的は、骨粗しょう症の治療方法を提供することである。
【００２９】
上記した目的及び他の目的は以下の詳細説明から容易に明らかであろう。
【００３０】
（発明の要旨）
本発明は、構造式（１）：
【００３１】
【化２】

を有する化合物、またはその医薬的に許容され得る塩またはエステルに関する。
【００３２】
本発明はまた、本発明化合物及び医薬的に許容され得る担体を含む医薬組成物に関する。
【００３３】
本発明はまた、本発明化合物を含有する医薬組成物の製造方法に関する。
【００３４】
本発明はまた、本発明化合物及び本発明化合物を含有する医薬組成物を投与することによる治療を要する哺乳動物においてαＶインテグリン受容体拮抗効果を誘導する方法に関する。
【００３５】
本発明はまた、本発明化合物及び本発明化合物を含有する医薬組成物を投与することによる骨吸収、再狭窄、アテローム性動脈硬化症、炎症性関節炎、糖尿病性網膜症、黄斑変性、血管形成、ガン及び転移性腫瘍増殖の抑制方法に関する。
【００３６】
本発明はまた、本発明化合物及び本発明化合物を含有する医薬組成物を投与することによる骨粗しょう症の治療方法に関する。
【００３７】
（発明の詳細説明）
本発明は、構造式（１）：
【００３８】
【化３】

を有する化合物、またはその医薬的に許容され得る塩またはエステルを包含する。
【００３９】
医薬品中に使用する場合、本発明化合物の塩は非毒性の医薬的に許容され得る塩を指す。しかしながら、本発明化合物またはその医薬的に許容され得る塩の製造の際には他の塩も使用し得る。「医薬的に許容され得る塩」の範囲内の塩基性化合物の塩は、通常遊離塩基と好適な有機酸もしくは無機酸を反応させることにより製造される本発明化合物の非毒性塩を指す。代表的な本発明の塩基性化合物の塩には、非限定的に酢酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、安息香酸塩、重炭酸塩、重硫酸塩、重酒石酸塩、ホウ酸塩、臭化物、ショウノウスルホン酸塩、炭酸塩、塩化物、クラブラン酸塩、クエン酸塩、ジ塩酸塩、エデト酸塩、エジシル酸塩、エストール酸塩、エシル酸塩、フマル酸塩、グルコヘプタン酸塩、グルコン酸塩、グルタミン酸塩、グリコリルアルサニル酸塩、ヘキシルレゾルシン酸塩、ヒドロバミン塩、臭化水素酸塩、塩酸塩、ヒドロキシナフトエ酸塩、ヨウ化物、イセチオン酸塩、乳酸塩、ラクトビオン酸塩、ラウリン酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マンデル酸塩、メシル酸塩、メチル臭化物、メチル硝酸塩、メチル硫酸塩、粘液酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、硝酸塩、Ｎ−メチルグルカミンアンモニウム塩、オレイン酸塩、シュウ酸塩、パモ酸塩（エンボン酸塩）、パルミチン酸塩、パントテン酸塩、リン酸塩／二リン酸塩、ポリガラクトウロン酸塩、サリチル酸塩、ステアリン酸塩、硫酸塩、サブ酢酸塩、スクシン酸塩、タンニン酸塩、酒石酸塩、テオクレン酸塩、トシル酸塩、トリエチオダイド及び吉草酸塩が含まれる。更に、本発明化合物が酸性部分を含む場合、その好適な医薬的に許容され得る塩には、非限定的にアルミニウム、アンモニウム、カルシウム、銅、第１及び第２鉄、リチウム、マグネシウム、第１及び第２マンガン、カリウム、ナトリウム、亜鉛等を含めた無機塩基から誘導される塩が含まれる。アンモニウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩、カリウム塩及びナトリウム塩が特に好ましい。医薬的に許容され得る有機非毒性塩基から誘導される塩には、第１級，第２級及び第３級アミン、環状アミン、及び塩基性イオン交換樹脂（例えば、アルギニン、ベタイン、カフェイン、コリン、Ｎ，Ｎ−ジベンジルエチレンジアミン、ジエチルアミン、２−ジエチルアミノエタノール、２−ジメチルアミノエタノール、２−メチル−２−アミノ−１−プロパノール、エタノールアミン、エチレンジアミン、Ｎ−エチルモルホリン、Ｎ−エチルピペリジン、グルカミン、グルコサミン、ヒスチジン、ヒドラバミン、イソプロピルアミン、リシン、メチルグルカミン、モルホリン、ピペラジン、ピペリジン、ポリアミン樹脂、プロカイン、プリン、テオブロミン、トリエチルアミン、トリメチルアミン、トリプロピルアミン、トロメタミン等）の塩が含まれる。
【００４０】
本発明化合物の多形物及び溶媒和物（例えば、水和物）も本発明の範囲に包含される。
【００４１】
本発明化合物のプロドラッグも本発明の範囲に包含される。通常、前記プロドラッグは、インビボで所望の化合物に容易に変換され得る本発明化合物の官能性誘導体である。従って、本発明の方法において「投与」は患者に投与後インビボで特定化合物に変換する本明細書に具体的に開示されているか、もしくはされていない化合物を用いる上記した各種状態の治療を包含する。好適なプロドラッグ誘導体の選択及び製造の一般的方法は、例えば援用により本明細書に含まれるとするＨ．Ｂｕｎｄｇａａｒｄ編，「プロドラッグの設計（Ｄｅｓｉｇｎ ｏｆ Ｐｒｏｄｒｕｇｓ）」，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ（１９８５年）発行に記載されている。本発明化合物の代謝物は本発明化合物の生物学的媒体に導入時に生ずる活性種を含む。
【００４２】
「治療有効量」は、研究者または臨床医が求めている組織、系、動物またはヒトの生物学的または医学的応答を誘発する薬物または薬剤の量を意味する。
【００４３】
本明細書中、「αｖインテグリン受容体アンタゴニスト」は、αｖβ３受容体またはαｖβ５受容体に結合し且つ拮抗する化合物または上記した両受容体に結合し且つ拮抗する化合物（例えば、二重αｖβ３／αｖβ５受容体アンタゴニスト）を指す。
【００４４】
本明細書中、「骨吸収」は破骨細胞が骨を破壊する過程を指す。
【００４５】
本発明化合物は、αｖインテグリン受容体、特にαｖβ３受容体及びαｖβ５受容体に対してサブマイクロモル親和性を示す。従って、本発明化合物は高い骨吸収により生起または媒介される骨状態を患っており、治療を要する哺乳動物を治療するのに有用である。医薬的に許容され得る塩を含めた本発明化合物の薬理学的有効量が哺乳動物の破骨細胞の活性を阻害するために哺乳動物に対して投与される。
【００４６】
本発明化合物は、例えば骨粗しょう症の予防または治療のように治療を要する場合にαｖβ３受容体を拮抗するのに有効な量で投与される。
【００４７】
本発明の態様は、αｖインテグリン受容体拮抗効果がαｖβ３拮抗効果である方法である。より具体的には、αｖβ３拮抗効果は骨吸収、再狭窄、血管形成、糖尿病性網膜症、黄斑変性、炎症性関節炎、ガン及び転移性腫瘍増殖の抑制から選択される。前記方法の１実施態様においてαｖβ３受容体拮抗効果は骨吸収の抑制である。
【００４８】
本発明の別の態様は、αｖインテグリン受容体拮抗効果がαｖβ５拮抗効果である方法である。より具体的には、αｖβ５拮抗効果は再狭窄、血管形成、糖尿病性網膜症、黄斑変性、炎症性関節炎、ガン及び転移性腫瘍増殖の抑制から選択される。
【００４９】
更に、本発明の態様は、αｖインテグリン受容体拮抗効果が二重αｖβ３／αｖβ５拮抗効果である方法である。より具体的には、二重αｖβ３／αｖβ５拮抗効果は骨吸収、再狭窄、血管形成、糖尿病性網膜症、黄斑変性、炎症性関節炎、ガン及び転移性腫瘍増殖の抑制から選択される。
【００５０】
より具体的な本発明の態様は、本発明化合物及び医薬的に許容され得る担体を含む医薬組成物である。本発明の別の例は、上記した本発明化合物を医薬的に許容され得る担体と混合して製造される医薬組成物である。本発明の別の例は、上記した本発明化合物及び医薬的に許容され得る担体を混合することを含む医薬組成物の製造方法である。
【００５１】
本発明の別の態様は、治療を要する哺乳動物に対して上記した本発明化合物を治療有効量投与することを含む前記哺乳動物においてαｖインテグリン受容体の拮抗作用により媒介される状態の治療及び／または予防方法である。好ましくは、前記状態は骨吸収、骨粗しょう症、再狭窄、糖尿病性網膜症、黄斑変性、血管形成、アテローム性動脈硬化症、炎症性関節炎、ガン、腫瘍増殖及び転移から選択される。より好ましくは、前記状態は骨粗しょう症及びガンから選択される。最も好ましくは、前記状態は骨粗しょう症である。
【００５２】
本発明のより具体的な態様は、治療を要する哺乳動物に対して上記した本発明化合物または医薬組成物を治療有効量投与することを含む前記哺乳動物におけるαｖインテグリン拮抗効果の誘発方法である。好ましくは、αｖインテグリン拮抗効果はαｖβ３拮抗効果である。より具体的には、αｖβ３拮抗効果は骨吸収の抑制、再狭窄の抑制、アテローム性動脈硬化症の抑制、血管形成の抑制、糖尿病性網膜症の抑制、黄斑変性の抑制、炎症性関節炎の抑制、及びガンまたは転移性腫瘍増殖の抑制から選択される。最も好ましくは、αｖβ３拮抗効果は骨吸収の抑制である。或いは、αｖインテグリン拮抗効果はαｖβ５拮抗効果または二重αｖβ３／αｖβ５拮抗効果である。αｖβ５拮抗効果の例は再狭窄、アテローム性動脈硬化症、血管形成、糖尿病性網膜症、黄斑変性、炎症性関節炎、ガン及び転移性腫瘍増殖の抑制である。
【００５３】
本発明の更なる態様は、治療を要する哺乳動物に対して上記した化合物または医薬組成物を治療有効量投与することを含む前記哺乳動物における骨吸収の抑制方法及び骨粗しょう症の治療及び／または予防方法である。
【００５４】
本発明の別の態様は、治療を要する哺乳動物に対して上記した化合物または医薬組成物を治療有効量投与することを含む前記哺乳動物における悪性疾患の高カルシウム血症、骨転移による骨減少症、歯周病、副甲状腺亢進症、関節リウマチにおける関節周囲侵食、パジェット病、不動化誘因の骨減少症及びグルココルチコイド治療誘因の骨粗しょう症の治療方法である。
【００５５】
より具体的には、本発明は治療を要する哺乳動物における骨粗しょう症の治療及び／または予防用医薬の製造における上記化合物の使用である。更には、本発明は骨吸収、転移性腫瘍増殖、ガン、再狭窄、アテローム性動脈硬化症、糖尿病性網膜症、黄斑変性、炎症性関節炎及び／または血管形成の治療及び／または予防用医薬の製造における上記化合物の使用である。
【００５６】
本発明の態様は、
ａ）有機ビスホスホネート、またはその医薬的に許容され得る塩またはエステル、
ｂ）エストロゲン受容体モジュレーター、
ｃ）アンドロゲン受容体モジュレーター、
ｄ）細胞毒性／抗増殖剤、
ｅ）マトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤、
ｆ）表皮由来、線維芽細胞由来または血小板由来増殖因子の阻害剤、
ｇ）ＶＥＧＦ受容体アンタゴニスト、
ｈ）増殖因子または増殖因子受容体に対する抗体、
ｉ）Ｆｌｋ−１／ＫＤＲ、Ｆｌｔ−１、Ｔｃｋ／Ｔｉｅ−２またはＴｉｅ−１阻害剤、
ｊ）カテプシンＫ阻害剤、
ｋ）成長ホルモン分泌促進剤、
ｌ）破骨細胞プロトンＡＴＰアーゼ阻害剤、
ｍ）ウロキナーゼプラスミノーゲンアクチベーター（ｕ−ＰＡ）阻害剤、
ｎ）腫瘍特異的抗体−インターロイキン−２融合タンパク質、
ｏ）ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤、
ｐ）ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤、ゲラニルゲラニルトランスフェラーゼ阻害剤または二重ファルネシル／ゲラニルゲラニルトランスフェラーゼ阻害剤、及び
その混合物
からなる群から選択される活性成分を更に含む組成物である（援用により本明細書に含まれるとするＢ．Ｍｉｌｌａｕｒｅｒら，「Ｆ１ｋ−１の優性ネガティブ抑制はインビボで多くの腫瘍タイプの増殖を抑制する（Ｄｏｍｉｎａｎｔ−Ｎｅｇａｔｉｖｅ Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ Ｆ１Ｋ−１ ｓｕｐｐｒｅｓｓｅｓ ｔｈｅ Ｇｒｏｗｔｈ ｏｆ Ｍａｎｙ Ｔｕｍｏｒ Ｔｙｐｅｓ ｉｎ Ｖｉｖｏ）」，Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ，５６，１６１５−１６２０（１９９６）参照）。
【００５７】
好ましくは、活性成分は、
ａ）有機ビスホスホネート、またはその医薬的に許容され得る塩またはエステル、
ｂ）エストロゲン受容体モジュレーター、
ｃ）アンドロゲン受容体モジュレーター、
ｄ）破骨細胞プロトンＡＴＰアーゼ阻害剤、
ｅ）ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤、
ｆ）カテプシンＫ阻害剤、及び
その混合物
からなる群から選択される。
【００５８】
ビスホスホネートの非限定例には、アレンドロネート、シマドロネート、クロドロネート、エチドロネート、イバンドロネート、パミドロネート、ピリドロネート、リセドロネート、チルドロネート及びゾレンドロネート、並びにその医薬的に許容され得る塩及びエステルが含まれる。特に好ましいビスホスホネートはアレンドロネート、特にアレンドロネートモノナトリウム３水和物である。
【００５９】
エストロゲン受容体モジュレーターの非限定例には、エストロゲン、プロゲステリン、エストラジオール、ドロロキシフェン、ラロキシフェン及びタモキシフェンが含まれる。
【００６０】
細胞毒性／抗増殖剤の非限定例には、タキソール、ビンクリスチン、ビンブラスチン及びドキソルビシンが含まれる。
【００６１】
以前カテプシンＯ２として知られていたカテプシンＫはシステインプロテアーゼであり、いずれも援用により本明細書に含まれるとする１９９６年５月９日に公開された国際特許出願公開第９６／１３５２３号パンフレット、１９９６年３月３日に付与された米国特許第５，５０１，９６９号明細書及び１９９８年４月７日に付与された米国特許第５，７３６，３５７号明細書に記載されている。システインプロテアーゼ、特にカテプシンは多数の病状、例えば腫瘍転移、炎症、関節炎及び骨再建に関連している。酸性ｐＨで、カテプシンはＩ型コラーゲンを分解し得る。カテプシンプロテアーゼ阻害剤は、コラーゲン繊維の分解を抑制することにより破骨細胞骨吸収を抑制し得、よって骨吸収疾患（例えば、骨粗しょう症）の治療に有用である。
【００６２】
「スタチン」として公知のＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤類が骨粗しょう症の結果、骨量が減少する代わりに新しい骨の成長を誘発することは判明している（１９９９年１２月３日（金）のＴｈｅ　Ｗａｌｌ　Ｓｔｒｅｅｔ　Ｊｏｕｒｎａｌ，ページＢ１参照）。従って、スタチンは骨吸収の治療のために有望である。スチタンの非限定例には、ロバスタチン、シンバスタチン、アトロバスタチン、プラバスチタン、フルバスチタン、セリバスタチン及びロスバスタチンが含まれる。
【００６３】
血管形成、腫瘍侵襲、炎症及び創傷治癒や発達中のマトリックス再構築においてウロキナーゼ−ウロキナーゼ受容体（ｕ−ＰＡ−ｕ−ＰＡＲ）が重要な役割を果たすことに関する証拠も提示された（Ｙ．Ｋｏｓｈｅｌｎｉｃｋら，「ウロキナーゼ受容体及び細胞応答を介するシグナル化のメカニズム（Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｏｆ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｔｈｒｏｕｇｈ Ｕｒｏｋｉｎａｓｅ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ ａｎｄ ｔｈｅ Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｒｅｓｐｏｎｓｅ）」，Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ　ａｎｄ　Ｈａｅｍｏｓｔａｓｉｓ，８２：３０５−３１１（１９９９）及びＦ．Ｂｌａｓｉ，「蛋白分解、細胞付着、細胞整復及び侵襲性はｕ−ＰＡ−ｕ−ＰＡＲ−ＰＡＩ−１系により調節される（Ｐｒｏｔｅｏｌｙｓｉｓ， Ｃｅｌｌ Ａｄｈｅｓｉｏｎ， Ｃｈｅｍｏｔａｘｉｓ， ａｎｄ Ｉｎｖａｓｉｖｅｎｅｓｓ Ａｒｅ Ｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｂｙ ｔｈｅ ｕ−ＰＡ−ｕ−ＰＡＲ−ＰＡＩ−１ ｓｙｓｔｅｍ））」，Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ　ａｎｄ　Ｈａｅｍｏｓｔａｓｉｓ，８２：２９８−３０４（１９９９）参照）。従って、ｕ−ＰＡのｕ−ＰＡＲへの結合の特異的アンタゴニストはインビトロ及びインビボの両モデルにおいて細胞表面プラスミノーゲン活性化、腫瘍増殖及び血管形成を抑制する。
【００６４】
Ｈ．Ｎ．Ｌｏｄｅらは，ＰＮＡＳ　ＵＳＡ，９６：１５９１−１５９６（１９９９）で、自発的腫瘍転移の除去における抗血管新生αＶインテグリンアンタゴニストと腫瘍特異的抗体−サイトカイン（インターロイキン−２）融合タンパク質間の相乗効果を知見した。この結果から、この組合せがガン及び転移性腫瘍増殖の治療のために有望であることが示唆された。
【００６５】
破骨細胞の先端膜上に存在するプロトンＡＴＰアーゼは骨吸収過程で重要な役割を果たすと報告されている。従って、このプロトンポンプは骨粗しょう症及び関連する代謝疾患の治療及び予防において有用であろう骨吸収抑制剤の設計のための標的として魅力的である（Ｃ．Ｆａｒｉｎａら，「新しい骨吸収防止剤としての破骨細胞空胞プロトンＡＴＰアーゼの選択的阻害剤（Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｏｆ ｔｈｅ ｏｓｔｅｏｃｌａｓｔ ｖａｃｕｏｌａｒ ｐｒｏｔｏｎ ＡＴＰａｓｅ ａｓ ａ ｎｏｖｅｌ ｂｏｎｅ ａｎｔｉｒｅｓｏｒｐｔｉｖｅ ａｇｅｎｔｓ）」，ＤＤＴ，４：１６３−１７２（１９９９）参照）。
【００６６】
アンドロゲンステロイドが男性及び女性の骨量の増加において生理学的役割を果たす証拠及びアンドロゲンが直接骨に作用する証拠が提示されている。アンドロゲン受容体はヒト破骨細胞様細胞系において認められ、アンドロゲンは骨細胞の増殖及び分化を直接刺激することが判明している。検討のために、Ｓ．Ｒ．Ｄａｖｉｓ，「女性におけるアンドロゲンの治療目的の使用（Ｔｈｅ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｕｓｅ ｏｆ ａｎｄｒｏｇｅｎｓ ｉｎ ｗｏｍｅｎ）」，Ｊ．Ｓｔｅｒｏｉｄ　Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，６９：１７７−１８４（１９９９）及びＫ．Ａ．Ｈａｎｓｅｎ及びＳ．Ｐ．Ｔ．Ｔｈｏ，「アンドロゲン及び骨の健康（Ａｎｄｒｏｇｅｎｓ ａｎｄ Ｂｏｎｅ Ｈｅａｌｔｈ）」，Ｓｅｍｉｎａｒｓ　ｉｎ　Ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅ　Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ，１６：１２９−１３４（１９９８）を参照されたい。従って、アンドロゲン受容体モジュレーターは女性の骨量減少の治療及び予防において有用であり得る。
【００６７】
血管形成因子ＶＥＧＦは破骨細胞上の受容体への結合により単離した成熟家兎破骨細胞の骨吸収活性を刺激することが判明している（Ｍ．Ｎａｋａｇａｗａら，「血管上皮増殖因子（ＶＥＧＦ）は破骨細胞骨吸収及び成熟破骨細胞の生存を直接高める（Ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ （ＶＥＧＦ） ｄｉｒｅｃｔｌｙ ｅｎｈａｎｃｅｓ ｏｓｔｅｏｃｌａｓｔｉｃ ｂｏｎｅ ｒｅｓｏｒｐｔｉｏｎ ａｎｄ ｓｕｒｖｉｖａｌ ｏｆ ｍａｔｕｒｅ ｏｓｔｅｏｃｌａｓｔ）」，ＦＥＢＳ　Ｌｅｔｔｅｒｓ，４７３：１６１−１６４（２０００）参照）。従って、破骨細胞受容体（例えば、ＫＤＲ／Ｆ１ｋ−１及びＦ１ｔ−１）に対するＶＥＧＦ結合のアンタゴニストを開発することは骨吸収の治療または予防に対する別のアプローチとなり得る。
【００６８】
ペルオキシソーム増殖剤−活性化受容体−γ（ＰＰＡＲγ）のアクチベーター、例えばチアゾリジンジオン類（ＴＺＤ）はインビトロで破骨細胞様の細胞形成及び骨吸収を抑制する。Ｒ．ＯｋａｚａｋｉらがＥｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ，１４０：５０６０−５０６５（１９９９）で報告した結果は、骨髄細胞に対する局所メカニズム及びグルコース代謝に対する全身的メカニズムを指摘している。ＰＰＡＲγアクチベーターの非限定例には、トログリタゾン、ピオグリタゾン、ロシグリタゾン及びＢＲＬ　４９６５３が含まれる。
【００６９】
本発明はまた、本発明化合物と骨粗しょう症の予防または治療において有用な１つ以上の成分の配合剤に関する。例えば、本発明化合物は有効量の他の成分（例えば、有機ビスホスホネート、エストロゲン受容体モジュレーター、アンドロゲン受容体モジュレーター、カテプシンＫ阻害剤、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤、ＰＰＡＲγアクチベーター、ＶＥＧＦ受容体アンタゴニストまたは破骨細胞プロトンＡＴＰアーゼ阻害剤）と組み合わせて効果的に投与され得る。
【００７０】
本発明の別の態様は、治療を要する哺乳動物に対して治療有効量の上記化合物及び１つ以上の公知の細胞毒性／抗増殖性成分を投与することを含む前記哺乳動物におけるガンまたは転移性腫瘍増殖の治療方法である。また、本発明化合物はガン及び転移性腫瘍増殖の治療のために放射線療法と組み合わせて投与され得る。
【００７１】
更に、本発明のインテグリンαｖβ３アンタゴニストはカルシウムまたはホスフェート代謝障害及び関連する疾患の治療または予防において成長ホルモン分泌促進物質と組み合わせて効果的に投与され得る。前記疾患には、骨吸収の減少から生じ得る状態が含まれる。骨吸収の減少は吸収と形成のバランスを改善し、骨損失を低下させ、骨増大を生じさせなければならない。骨吸収を減少させると破骨細胞病巣に関連する疼痛を緩和し、前記病巣の発現及び／または増殖を抑制すことができる。これらの疾患には、（エストロゲン欠乏、不動化、グルココルチコイド誘発及び老人性を含めた）骨粗しょう症、骨ジストロフィー、パジェット病、骨化性筋炎、ベヒテレフ病、悪性高カルシウム血症、転移性骨疾患、歯周病、胆石症、腎石症、尿石症、尿路結石、動脈硬化（硬化症）、関節炎、滑液包炎、神経炎及びテタニーが含まれる。骨吸収が増加していると血漿中のカルシウム及びホスフエート濃度も生理学的に高くなり得、これらは上記治療により軽減される。同様に、本発明は成長ホルモン欠乏患者において骨量を増加させるのに有用である。好ましい配合剤は本発明のαｖβ３受容体アンタゴニストと成長ホルモン分泌促進剤、場合により有機ビスホスホネート（好ましくは、アレンドロネートモノナトリウム３水和物）からなる第３成分の同時または交互投与である。
【００７２】
本発明の方法によれば、配合剤の各成分は治療中異なる時期に別々に投与してもよく、または分割または単一の配合剤の形態で同時に投与してもよい。従って、本発明は同時または交互治療のレジメを包含するものと理解されるべきであり、「投与」も同様に解釈されるべきである。本発明化合物とインテグリン媒介状態の治療用に有用な他の成分の配合剤の範囲には原則として骨粗しょう症の治療に有用な医薬組成物との組合せが含まれる。
【００７３】
本明細書中、「組成物」は特定成分を特定量含む製品及び特定成分を特定量配合することにより直接または間接的に得られる製品を包含することを意図する。
【００７４】
本発明化合物は、錠剤（持続放出性または徐放性製剤を含む）、カプセル剤（持続放出性または徐放性製剤を含む）、ピル剤、散剤、顆粒剤、エリキシル剤、チンキ剤、懸濁剤、シロップ剤及び乳剤のような経口剤型で投与され得る。同様に、いずれも製薬業界の当業者には公知の静注（ボーラスまたは注入）、腹腔内、局所（例えば、点眼）、皮下、筋肉内または経皮（例えば、パッチ）剤型でも投与され得る。所望する本発明化合物は有効であるが非毒性量でαｖβ３アンタゴニストとして使用され得る。
【００７５】
本発明化合物を用いる用量レジメは、患者のタイプ、種、年令、体重、性別及び医学的状態；治療対象の状態の重篤度；投与ルート；患者の腎及び肝機能；使用する特定化合物またはその塩を含めた各種要因に従って選択される。医者、獣医師は状態の進行を予防、対抗または阻止するのに必要な薬物の有効量を容易に決定、処方することができる。
【００７６】
所期効果のために使用する場合、本発明の経口用量は約０．０１〜約１００ｍｇ／ｋｇ体重／日（ｍｇ／ｋｇ／日）、好ましくは０．０１〜１０ｍｇ／ｋｇ／日、最も好ましくは０．１〜５．０ｍｇ／ｋｇ／日である。経口投与の場合、組成物は治療する患者に対する用量を症候的に調節するために活性成分を０．０１、０．０５、０．１、０．５、１．０、２．５、５．０、１０．０、１５．０、２５．０、５０．０、１００及び５００ｍｇ含有する錠剤の形態で提供することが好ましい。医薬品は通常約０．０１〜約５００ｍｇ、好ましくは約１〜約１００ｍｇの活性成分を含有している。静注する場合に最も好ましい用量は定速注入中約０．１〜約１０ｍｇ／ｋｇ／分である。有利には、本発明化合物は１日１回投与してもよく、または全１日用量を２〜４回に分けて投与してもよい。更に、本発明化合物は適当な鼻内ベヒクルを局所使用して鼻内形態で、または当業者に公知の経皮パッチの形態で経皮ルートで投与され得る。経皮デリバリーシステムの形態で投与する場合、投与レジメ中間断ではなく連続して投与される。
【００７７】
本発明の方法において、本明細書に詳記した化合物は活性成分を構成し、通常好適な医薬用希釈剤、賦形剤または担体（本明細書では、まとめて「担体」材料と称する）と混合して投与される。前記担体は意図する投与形態（すなわち、経口錠剤、エリキシル剤、シロップ剤等）にてらして、一般的な医薬プラクティスに一致するように適正に選択される。
【００７８】
例えば、錠剤またはカプセル剤の形態で経口投与する場合、活性薬物成分は経口用非毒性で医薬的に許容され得る不活性担体（例えば、ラクトース、スターチ、スクロース、グルコース、メチルセルロース、ステアリン酸マグネシウム、リン酸ジカルシウム、硫酸カルシウム、マンニトール、ソルビトール等）と混合され得る。液体形態で経口投与する場合、経口薬物成分は経口用非毒性で医薬的に許容され得る不活性担体（例えば、エタノール、グリセロール、水等）と混合され得る。更に、所望または所要により、好適な結合剤、滑沢剤、崩壊剤や着色剤を混合物に配合してもよい。好適な結合剤には、スターチ、ゼラチン、天然糖（例えば、グルコース、β−ラクトース、コーン甘味剤）、天然または合成ガム（例えば、アカシアガム、トラガカントガムまたはアルギン酸ナトリウム）、カルボキシメチルセルロース、ポリエチレングリコール、ワックス等が含まれる。前記剤型中に使用される滑沢剤には、オレイン酸ナトリウム、ステアリン酸ナトリウム、ステアリン酸マグネシウム、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウム等が含まれる。崩壊剤には、非限定的にスターチ、メチルセルロース、寒天、ベントナイト、キサンタンガム等が含まれる。
【００７９】
本発明化合物はリポソームデリバリーシステム、例えば単ラメラ小胞、大ラメラ小胞及び多重ラメラ小胞の形態でも投与され得る。リポソームは各種リン脂質（例えば、コレステロール、ステアリルアミンまたはホスファチジルコリン）から形成され得る。
【００８０】
本発明化合物はまた、該化合物分子を結合させる個々の担体としてモノクローナル抗体を用いてデリバリーしてもよい。本発明化合物は標的可能な薬物担体としての可溶性ポリマーと結合され得る。前記ポリマーには、ポリビニルピロリドン、ピランコポリマー、ポリヒドロキシプロピルメタクリルアミド−フェノール、ポリヒドロキシ−エチルアスパルタミド−フェノール、またはパルミトイル残基で置換したポリエチレンオキシド−ポリリシンが含まれ得る。更に、本発明化合物を薬物を徐放するのに有用な生分解性ポリマー（例えば、ポリアクチン酸、ポリグリコール酸、ポリアクチン酸−ポリグリコール酸コポリマー、ポリε−カプロラクトン、ポリヒドロキシ酪酸、ポリオルトエステル、ポリアセタール、ポリジヒドロピラン、ポリシアノアクリレート、及びヒドロゲルの架橋または両親媒性ブロックコポリマー）に結合させてもよい。
【００８１】
構造式（Ｉ）を有する化合物は下記スキーム１及び実施例に詳記する手順に従って製造され得る。当業者は、本発明化合物を製造するために下記製造手順の条件及び方法の公知の変更を使用できることを簡単に理解できるであろう。特記しない限り、すべての操作は室温または周囲温度で実施した。温度は℃である。
【００８２】
【化４】

【００８３】
（実施例）
｛３−［２１−（５，６，７，８−テトラヒドロ−［１，８］ナフチリジン−２−イル）−エトキシ］−１１Ｈ−ジベンゾ［１，４］オキサゼピン−１０−イル｝−酢酸（１−８）
４−メトキシ−２−（２−ニトロフェノキシ）安息香酸メチルエステル（１−１）
ＤＭＦ（３０ｍｌ）中に２−フルオロニトロベンゼン（３．９７８ｇ，２８．１９ミリモル）、４−メトキシサリチル酸メチル（５．１３１ｇ，２８．１５ミリモル）及び炭酸カリウム（７．８００ｇ，５６．４３ミリモル）を含む溶液を５０℃に一晩加温した。溶媒を真空下で除去し、残渣をジクロロメタンと水に分配した。水をジクロロメタンで２回以上抽出し、合わせた有機抽出物をブラインで洗浄し、乾燥した（Ｎａ_２ＳＯ_４）。溶媒を真空下で除去すると、標記化合物１−１が淡黄色油状物として得られた。
【００８４】
^１Ｈ　ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，４００ＭＨｚ）：δ　８．０１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．８Ｈｚ）、７．９７（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．６，８．１Ｈｚ）、７．４４（ｄｔ，１Ｈ，Ｊ＝１．６，７．８Ｈｚ）、７．１４（ｄｔ，１Ｈ，Ｊ＝１．１，７．８Ｈｚ）、６．８２（ｄｔ，２Ｈ，Ｊ＝２．６，８．８Ｈｚ）、６．６３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．６Ｈｚ）、３．８４（ｓ，３Ｈ）、３．７０（ｓ，３Ｈ）。
【００８５】
高速原子衝撃低分解能質量スペクトル（ＦＡＢＬＲＭＳ）：実測値　ｍ／ｅ＝３０４（Ｍ^＋＋Ｈ）。
【００８６】
２−（２−アミノフェノキシ）−４−メトキシ安息香酸メチルエステル（１−２）
メタノール（２００ｍｌ）中に１−１（７．３６０ｇ，２１．８７ミリモル）を含む溶液をエタノール中に１０％パラジウム／炭素を含む懸濁液（１００ｍｌ）に添加した。混合物を水素ガス圧力下室温で３時間撹拌した。反応混合物をセライトを介して濾過し、濾液を真空下で蒸発させると、標記化合物１−２が油状物として得られた。
ＦＡＢＬＲＭＳ：実測値　ｍ／ｅ＝２７３（Ｍ^＋）。
【００８７】
３−メトキシ−１０Ｈ−ジベンゾ［１，４］オキサゼピン−１１−オン（１−３）
ＴＨＦ（１Ｌ）中に１−２（４７．８０ｇ，１７４．９ミリモル）を含む溶液を水素化ナトリウム（油中６０％　７．４３０ｇ，１８５．７ミリモル）を用いて少しずつ処理し、室温で３日間撹拌した。反応物を水性塩化アンモニウムでクエンチし、ジエチルエーテルで３回抽出した。合わせた有機抽出物をブラインで洗浄し、乾燥した（Ｎａ_２ＳＯ_４）。溶媒を真空下で除去して、粗生成物１−３を得た。酢酸エチルから再結晶化すると、１−３が白色結晶として得られた。
【００８８】
^１Ｈ　ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，４００ＭＨｚ）：δ　８．１０（ｓ，１Ｈ）、７．９０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．８Ｈｚ）、７．２４（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．３，７．０Ｈｚ）、７．１２（ｍ，２Ｈ）、７．０２（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．６，７．０Ｈｚ）、６．７８（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．６，８．８Ｈｚ）、６．７４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．３Ｈｚ）、３．８６（ｓ，３Ｈ）。
ＦＡＢＬＲＭＳ：実測値　ｍ／ｅ＝２４２（Ｍ^＋＋Ｈ）。
【００８９】
３−メトキシ−１０，１１−ジヒドロ−ジベンゾ［１，４］オキサゼピン（１−４）
ＴＨＦ（５０ｍｌ）中に１−３（１．１６ｇ，４．８０ミリモル）を含む溶液をＴＨＦ中に１Ｍ　ＬｉＡｌＨ_４を含む溶液（１０．０ｍｌ，１０．０ミリモル）で処理し、５５℃に２時間加熱した。反応物を水性塩化アンモニウムでクエンチし、ジエチルエーテルで抽出した。溶媒を真空下で除去すると、１−４が得られた。
ＦＡＢＬＲＭＳ：実測値　ｍ／ｅ＝２２８（Ｍ^＋＋Ｈ）。
【００９０】
（３−メトキシ−１１Ｈ−ジベンゾ［１，４］オキサゼピン−１０−イル）−酢酸エチルエステル（１−５）
ＤＭＳＯ（１０ｍｌ）中に１−４（２．０４ｇ，８．９７ミリモル）を含む溶液を０℃に冷却し、水素化ナトリウム（油中６０％　４５０ｍｇ，１１．２ミリモル）で処理した。反応混合物を室温に１５分間加温した後ブロモ酢酸エチル（１．６７ｇ，１０．０ミリモル）を添加し、５０℃に一晩加温した。溶媒を真空下で除去し、残渣を水で希釈し、ジクロロメタンで３回抽出した。合わせた有機抽出物をブラインで洗浄し、乾燥した（Ｎａ_２ＳＯ_４）。溶媒を真空下で除去した。分取遠心クロマトグラフィー（ＳｉＯ_２，６ｍｍ；５０％　ＥｔＯＡｃ／５０％　ヘキサン）にかけると、１−５が得られた。
ＦＡＢＬＲＭＳ：実測値　ｍ／ｅ＝３１４（Ｍ^＋＋Ｈ）。
【００９１】
（３−ヒドロキシ−１１Ｈ−ジベンゾ［１，４］オキサゼピン−１０−イル）−酢酸エチルエステル（１−６）
ジクロロメタン（５ｍｌ）中に１−５（４００ｍｇ，１．２７ミリモル）を含む溶液を−５℃に冷却し、エタンチオール（４１９ｍｇ，６．７５ミリモル）及び塩化アルミニウム（８１５ｍｇ，６．１１ミリモル）で処理した。３０分後、反応物を塩化アンモニウム水溶液でクエンチした。溶媒を真空下で除去し、残渣を１Ｍ　ＨＣｌに溶解した。水性層をジクロロメタンで３回抽出し、合わせた有機抽出物をブラインで洗浄し、乾燥した（Ｎａ_２ＳＯ_４）。溶媒を真空下で除去した。分取遠心クロマトグラフィー（ＳｉＯ_２，４ｍｍ；１０％　ＥｔＯＨ／９０％　ＣＨ_２Ｃｌ_２）にかけると、１−６が得られた。
ＦＡＢＬＲＭＳ：実測値　ｍ／ｅ＝３００（Ｍ^＋＋Ｈ）。
【００９２】
｛３−［２１−（５，６，７，８−テトラヒドロ−［１，８］ナフチリジン−２−イル）−エトキシ］−１１Ｈ−ジベンゾ［１，４］オキサゼピン−１０−イル｝−酢酸エチルエステル（１−７）
ＴＨＦ（７ｍｌ）中に１−６（３６３ｍｇ，１．２１ミリモル）、２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−［１，８］ナフチリジン−２−イル）−エタノール（製造については国際特許出願公開第００／３３８３８号パンフレット参照）（３４０ｍｇ，１．９１ミリモル）及びトリフェニルホスフィン（５００ｍｇ，１．９１ミリモル）を含む溶液を０℃に冷却し、アゾジカルボン酸ジエチル（３３２ｍｇ，１．９１ミリモル）で処理し、室温に一晩加温した。溶媒を真空下で除去し、残渣を分取遠心クロマトグラフィー（ＳｉＯ_２，４ｍｍ；エーテル／ヘキサン勾配）により精製すると、１−７が得られた。
【００９３】
^１Ｈ　ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）：δ　７．０９−７．０７（ｍ，２Ｈ）、７．０３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．３Ｈｚ）、６．９３−６．９０（ｍ，１Ｈ）、６．７８−６．７５（ｍ，２Ｈ）、６．６９（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．５，８．１Ｈｚ）、６．６１（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．４，８．３Ｈｚ）、６．４４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．３Ｈｚ）、４．７６（ｓ，１Ｈ）、４．４６（ｓ，２Ｈ）、４．２６−４１９（ｍ，４Ｈ）、３．９２（ｓ，２Ｈ）、３．４１−３．３８（ｍ，２Ｈ）、３．００（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．０Ｈｚ）、２．６９（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝６．４Ｈｚ）、１．９３−１．８８（ｍ，２Ｈ）、１．２７（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７．２Ｈｚ）。
【００９４】
｛３−［２１−（５，６，７，８−テトラヒドロ−［１，８］ナフチリジン−２−イル）−エトキシ］−１１Ｈ−ジベンゾ［１，４］オキサゼピン−１０−イル｝−酢酸（１−８）
ＴＨＦ（２ｍｌ）及び１，４−ジオキサン（２ｍｌ）中に１−７（２３５ｍｇ，０．５１１ミリモル）を含む溶液を１Ｍ　水性ＮａＯＨ（１．５４ｍｌ）を用いて室温で一晩処理した。反応物を１Ｍ　水性ＨＣｌ（１．５４ｍｌ）で中和し、溶媒を真空下で除去した。分取遠心クロマトグラフィー（ＳｉＯ_２，２ｍｍ；１０％　ＭｅＯＨ／９０％　ＣＨ_２Ｃｌ_２）にかけると、１−８が得られた。
【００９５】
^１Ｈ　ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）：δ　ｌ０．７４（ｓ，１Ｈ）、７．５９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．３Ｈｚ）、７．０２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．３Ｈｚ）、６．９１−６．８７（ｍ，３Ｈ）、６．６９−６．６６（ｍ，２Ｈ）、６．５４（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．５，８．１Ｈｚ）、６．３６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．３Ｈｚ）、４．４４（ｓ，２Ｈ）、４．１６（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝６．６Ｈｚ）、３．８６（ｓ，２Ｈ）、３．４７（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝５．５Ｈｚ）、２．９８（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝６．６Ｈｚ）、２．７１（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝６．０Ｈｚ）、１．９３−１．８８（ｍ，，２Ｈ）。
【００９６】
電子スプレー低分解能質量スペクトル：実測値　ｍ／ｅ＝４３２（Ｍ^＋＋Ｈ）。
【００９７】
【化５】

【００９８】
Ｎ−（４−ヨードーフェニルスルホニルアミノ）−Ｌ−アスパラギン（Ａ−２）
０℃において酸Ａ−１（４．３９ｇ，３３．２ミリモル）、ＮａＯＨ（１．４９ｇ，３７．２ミリモル）、ジオキサン（３０ｍｌ）及びＨ_２Ｏ（３０ｍｌ）を含む溶液を撹拌し、ここに塩化ピプシル（１０．３４ｇ，３４．２ミリモル）を添加した。〜５分後、Ｈ_２Ｏ（１５ｍｌ）に溶解したＮａＯＨ（１．４９ｇ，３７．２ミリモル）を添加し、冷却浴を外した。２．０時間後、反応混合物を濃縮した。残渣をＨ_２Ｏ（３００ｍｌ）に溶解した後ＥｔＯＡｃで洗浄した。水性相を０℃に冷却した後濃ＨＣｌで酸性化した。固体を集めた後Ｅｔ_２Ｏで洗浄すると、酸Ａ−２が白色固体として得られた。
【００９９】
^１Ｈ　ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）：δ　７．８６（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ）、７．４８（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ）、３．７０（ｍ，１Ｈ）、２．３９（ｍ，２Ｈ）。
【０１００】
２（Ｓ）−（４−ヨード−フェニルスルホニルアミノ）−β−アラニン（Ａ−３）
０℃においてＮａＯＨ（７．１４ｇ，１８１．８ミリモル）及びＨ_２Ｏ（４０ｍｌ）を含む溶液を撹拌し、ここにＢｒ_２（１．３０ｍｌ，２４．９ミリモル）を１０分間かけて滴下した。〜５分後、酸Ａ−２（９．９ｇ，２４．９ミリモル）、ＮａＯＨ（２．００ｇ，４９．８ミリモル）及びＨ_２Ｏ（３５ｍｌ）を合わせ、０℃に冷却した後反応物に１回で添加した。０℃で２０分間撹拌したら、反応物を９０℃に３０分間加熱した後０℃に再冷却した。濃ＨＣｌを滴下してｐＨを〜７に調節した。固体を集め、ＥｔＯＡｃで洗浄した後真空下で乾燥すると、酸Ａ−３が白色固体として得られた。
【０１０１】
^１Ｈ　ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）：δ　８．０２（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ）、７．６３（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ）、４．３６（ｍ，１Ｈ）、３．５１（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝５Ｈｚ，１３Ｈｚ）、３．２１（ｍ，１Ｈ）。
【０１０２】
エチル２（Ｓ）−（４−ヨード−フェニルスルホニルアミノ）−β−アラニン塩酸塩（Ａ−４）
０℃においてＥｔＯＨ（５０ｍｌ）中に酸Ａ−３（４．０ｇ，１０．８１ミリル）を含む懸濁液にＨＣｌガスを１０分間迅速に通した。冷却浴を外し、反応物を６０℃に冷却した。１８時間後、反応物を濃縮すると、エステルＡ−４が白色固体として得られた。
【０１０３】
^１Ｈ　ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）：δ　７．９８（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ）、７．６３（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ）、４．２５（ｑ，１Ｈ，Ｊ＝５Ｈｚ）、３．９２（ｍ，２Ｈ）、３．３３（ｍ，１Ｈ）、３．０６（ｍ，１Ｈ）、１．０１（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７Ｈｚ）。
【０１０４】
４−［２−（２−アミノピリジン−６−イル）エチル］安息香酸エチル（Ａ− ５ａ）
エステルＡ−５（製造については１９９８年４月２１日発行の米国特許第５，７４１，７９６号明細書のスキーム２９（中間体２９−３）参照）（７００ｍｇ，２．６３ミリモル）、１０％　Ｐｄ／Ｃ（３５０ｍｇ）及びＥｔＯＨの混合物を１気圧Ｈ_２下で撹拌した。２０時間後、反応物をセライトパッドを介して濾過した後、濃縮すると、エステルＡ−５ａが褐色油状物として得られた。
【０１０５】
ＴＬＣ　Ｒ_ｆ＝０．２３（シリカ，４０％　ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）。
^１Ｈ　ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ　７．９５（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ）、７．２６（ｍ，３Ｈ）、６．４３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７Ｈｚ）、６．３５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ）、４．３７（ｍ，４Ｈ）、３．０５（ｍ，２Ｈ）、２．９１（ｍ，２Ｈ）、１．３９（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７Ｈｚ）。
【０１０６】
４−［２−（２−アミノピリジン−６−イル）エチル］安息香酸塩酸塩（Ａ−６）
６Ｎ　ＨＣｌ（１２ｍｌ）中にエステルＡ−５ａ（６２５ｍｇ，２．３１ミリモル）を含む懸濁液を６０℃に加熱した。〜２０時間後、反応物を濃縮すると、酸Ａ−６が褐色固体として得られた。
【０１０７】
^１Ｈ　ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）：δ　７．９６（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ）、７．８０（ｍ，１Ｈ）、７．３３（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ）、６．８４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝９Ｈｚ）、６．６９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７Ｈｚ）、３．０９（ｍ，４Ｈ）。
【０１０８】
エチル４−［２−（２−アミノピリジン−６−イル）エチル］ベンゾイル−２（Ｓ）−（４−ヨード−フェニルスルホニルアミノ）−β−アラニン（Ａ−７）
ＤＭＦ（１０ｍｌ）中に酸１５−６（４００ｍｇ，１．４３ミリモル）、アミンＡ−４（６８６ｍｇ，１．５７ミリモル）、ＥＤＣ（３５８ｍｇ，１．８６ミリモル）、ＨＯＢＴ（２５２ｍｇ，１．８６ミリモル）及びＮＭＭ（６３２μｌ，５．７２ミリモル）を含む溶液を〜２０時間撹拌した。反応物をＥｔＯＡｃで希釈した後飽和ＮａＨＣＯ_３、ブラインで洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ_４）、濃縮した。フラッシュクロマトグラフィー（シリカ；ＥｔＯＡｃ→５％　イソプロパノール／ＥｔＯＡｃ）にかけると、アミドＡ−７が白色固体として得られた。
【０１０９】
ＴＬＣ　Ｒ_ｆ＝０．４（シリカ，１０％　イソプロパノール／ＥｔＯＡｃ）。
^１Ｈ　ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）：δ　７．７９（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝９Ｈｚ）、７．６１（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ）、７．５２（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝９Ｈｚ）、７．２９（ｍ，１Ｈ）、７．２７（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ）、４．２０（ｍ，１Ｈ）、３．９５（ｑ，２Ｈ，Ｊ＝７Ｈｚ）、３．６６（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝６Ｈｚ，１４Ｈｚ）、３．４９（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ，１３Ｈｚ）、３．０１（ｍ，２Ｈ）、２．８６（ｍ，２Ｈ）、ｌ．０８（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７Ｈｚ）。
【０１１０】
４−［２−（２−アミノピリジン−６−イル）エチル］ベンゾイル−２（Ｓ）−（４−ヨードフェニル−スルホニルアミノ）−β−アラニン（Ａ−８）
エステルＡ−７（２００ｍｇ，０．３２１３ミリモル）及び６Ｎ　ＨＣｌ（３０ｍｌ）を含む溶液を６０℃に加熱した。〜２０時間後、反応混合物を濃縮した。フラッシュクロマトグラフィー（シリカ；２０：２０：１：１　ＥｔＯＡｃ／ＥｔＯＨ／ＮＨ_４ＯＨ／Ｈ_２Ｏ）にかけると、酸Ａ−８が白色固体として得られた。
【０１１１】
ＴＬＣ　Ｒ_ｆ＝０．４５（シリカ，２０：２０：１：１　ＥｔＯＡｃ／ＥｔＯＨ／ＮＨ_４ＯＨ／Ｈ_２Ｏ）。
^１Ｈ　ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）：δ　８．４０（ｍ，１Ｈ）、８．１４（Ｂｓ，１Ｈ）、７．８１（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ）、７．６２（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ）、７．４８（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ）、７．２７（ｍ，３Ｈ）、６．３４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７Ｈｚ）、６．２５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ）、５．８５（ｂｓ，２Ｈ）、３．８９（ｂｓ，１Ｈ）、３．３５（ｍ，２Ｈ）、２．９７（ｍ，２Ｈ）、２．７９（ｍ，２Ｈ）。
【０１１２】
４−［２−（２−アミノピリジン−６−イル）エチル］ベンゾイル−２（Ｓ）−（４−トリメチルスタンニル−フェニルスルホニルアミノ）−β−アラニン（Ａ−９）
ヨウ化物Ａ−８（７０ｍｇ，０．１１７８ミリモル）、［（ＣＨ_３）_３Ｓｎ］_２（４９μｌ，０．２３５６ミリモル）、Ｐｄ（ＰＰｈ_３）_４（５ｍｇ）及びジオキサン（７ｍｌ）を含む溶液を９０℃に加熱した。２時間後、反応物を濃縮し、分取ＨＰＬＣ（Ｄｅｌｔａ−Ｐａｋ　Ｃ_１８　１５μＭ　１００Å，４０×１００ｍｍ；９５：５→５：９５　Ｈ_２Ｏ／ＣＨ_３ＣＮ）により精製すると、トリフルオロ酢酸塩が得られた。この塩をＨ_２Ｏ（１０ｍｌ）に懸濁し、ＮＨ_４ＯＨ（５滴）で処理した後、凍結乾燥すると、アミドＡ−９が白色固体として得られた。
【０１１３】
^１Ｈ　ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）：δ　８．４０（ｍ，１Ｈ）、８．１８（ｄ，１Ｈ．Ｊ＝８Ｈｚ）、７．６７（ｍ，５Ｈ）、７．５６（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ）、７．２９（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ）、６．９５−７．５２（ｍ，２Ｈ）、６．４５（ｂｓ，２Ｈ）、４．００（ｍ，１Ｈ）、３．５０（ｍ，１Ｈ）、３．３３（ｍ，１Ｈ）、２．９７（ｍ，２Ｈ）、２．８６（ｍ，２Ｈ）。
【０１１４】
４−［２−（２−アミノピリジン−６−イル）エチル］ベンゾイル−２（Ｓ）−４− ^１２５ ヨード−フェニルスルホニルアミノ−β−アラニン（Ａ−１０）
ヨードビーズ（Ｐｉｅｒｃｅ）を５ｍＣｉのＮａ^１２５Ｉ（Ａｍｅｒｓｈａｍ，ＩＭＳ３０）のバイアルに添加し、室温で５分間撹拌した。１０％　Ｈ_２ＳＯ_４／ＭｅＯＨ（０．０５ｍｌ）中にＡ−９（０．１ｍｇ）を含む溶液を調製し、この溶液を直ちにＮａ^１２５Ｉ／ヨードビースバイアルに添加した。室温で３分間撹拌後、反応混合物のｐＨが６〜７になるようにＮＨ_４ＯＨ（約０．０４〜０．０５ｍｌ）を添加した。全反応混合物を精製のためにＨＰＬＣ［Ｖｙｄａｃペプチド−プロテインＣ−１８カラム，４．６×２５０ｍｍ，３０分間かけて１０％　アセトニトリル（０．１％　ＴＦＡ）：Ｈ_２Ｏ（０．１％　ＴＦＡ）から９０％　アセトニトリル（０．１％　ＴＦＡ）：Ｈ_２Ｏ（０．１％　ＴＦＡ）へ直線勾配，１ｍｌ／分］に注入した。Ａ−１０の保持時間は上記条件下で１７分であった。大部分の放射能を含むフラクションをプールし、凍結乾燥し、エタノールで希釈すると、約１ｍＣｉのＡ−１０が得られた。これをＨＰＬＣ分析でＡ−８の真性サンプルと共溶離させた。
【０１１５】
【化６】

【０１１６】
２（Ｓ）−（４−ヨード−ベンゼンスルホニルアミノ）−３−｛４−［２−（ ５，６，７，８−テトラヒドロ−［１，８］ナフチリジン−２−イル）−エチル］−ベンゾイルアミノ｝−プロピオン酸エチルエステル（Ｂ−２）
アセトニトリル（３ｍｌ）及びＤＭＦ（３ｍｌ）中にＢ−１（製造については米国特許第５，７４１，７９６号明細書参照）（０．２３ｇ，０．７２ミリモル）、Ａ−４（０．３４３ｇ，０．７９２ミリモル）、ＥＤＣ（０．１７９ｇ，０．９３ミリモル）、ＨＯＢＴ（０．１２６ｇ，０．９３ミリモル）及びＮＭＭ（０．３１６ｍｌ，２．８６ミリモル）を含む混合物を周囲温度で２時間撹拌した後、酢酸エチルで希釈し、水、飽和水性ＮａＨＣＯ_３及びブラインで洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ_４）、濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（７０：２５：５　ＣＨＣｌ_３／ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ）にかけると、Ｂ−２が白色固体として得られた。
【０１１７】
ＴＬＣ　Ｒ_ｆ＝０．２２（シリカ，７０：２５：５　ＣＨＣｌ_３／ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ）。
^１Ｈ　ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ　７．７９（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ）、７．６３（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ）、７．５４（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ）、７．２７（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ）、７．０４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７Ｈｚ）、６．６０（ｍ，１Ｈ）、６．２９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７Ｈｚ）、４．８３（ｂｒ　ｓ，１Ｈ）、４．０９（ｍ，３Ｈ）、３．８４（ｍ，１Ｈ）、３．６８（ｍ，１Ｈ）、３．４２（ｍ，２Ｈ）、３．０１（ｍ，４Ｈ）、２．８６（ｍ，４Ｈ）、２．６９（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝６Ｈｚ）、１．８８（ｍ，２Ｈ）。
【０１１８】
２（Ｓ）−（４−ヨード−ベンゼンスルホニルアミノ）−３−｛４−［２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−［１，８］ナフチリジン−２−イル）−エチル］−ベンゾイルアミノ｝−プロピオン酸（Ｂ−３）
Ｂ−２（０．３８ｇ，０．５７３ミリモル）及び６Ｎ　ＨＣｌ（５０ｍｌ）の混合物を６０℃で１４時間撹拌した。室温に冷却後、混合物を濃縮し、残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（２５：１０：１：１→１５：１０：１：１　ＥｔＯＡｃ／ＥｔＯＨ／ＮＨ_４ＯＨ／Ｈ_２Ｏ）にかけると、Ｂ−３が白色固体として得られた。
【０１１９】
ＴＬＣ　Ｒ_ｆ＝０．４３（シリカ，１０：１０：１：１　ＥｔＯＡｃ／ＥｔＯＨ／ＮＨ_４ＯＨ／Ｈ_２Ｏ）。
^１Ｈ　ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）：δ　８．４２（ｍ，１Ｈ）、７．７９（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ）、７．６３（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ）、７．４４（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ）、７．２７（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ）、７．１０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７Ｈｚ）、６．５８（ｂｒ　ｓ，１Ｈ）、６．３２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７Ｈｚ）、３．９６（ｍ，１Ｈ）、３．５１（ｍ，１Ｈ）、３．３０（ｍ，５Ｈ）、２．９６（ｍ，２Ｈ）、２．７８（ｍ，２Ｈ）、２．６２（ｍ，２Ｈ）、１．７７（ｍ，２Ｈ）。
【０１２０】
ＨＲＭＳ（Ｃ_２６Ｈ_２７ＩＮ_４Ｏ_５Ｓ）：
計算値　６３５．０８１８，
実測値　６３５．０８３１。
【０１２１】
３−｛４−［２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−［１，８］ナフチリジン−２−イル）−エチル］−ベンゾイルアミノ｝−２（Ｓ）−（４−トリメチルスタンナイル−ベンゼンスルホニルアミノ）−プロピオン酸（Ｂ−４）
Ｂ−３（０．１０ｇ，０．１６ミリモル）、ヘキサメチルジスタンナン（０．０６５ｍｌ，０．３２ミリモル）、Ｐｄ（ＰＰｈ_３）_４及びジオキサン（１０ｍｌ）の混合物を９０℃で１時間撹拌した。室温に冷却後、混合物を濃縮し、残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（５０：１０：１：１→２５：１０：１：１　ＥｔＯＡｃ／ＥｔＯＨ／ＮＨ_４ＯＨ／Ｈ_２Ｏ）にかけると、Ｂ−４が白色固体として得られた。
【０１２２】
ＴＬＣ　Ｒ_ｆ＝０．４８（シリカ，１５：１０：１：１　ＥｔＯＡｃ／ＥｔＯＨ／ＮＨ_４ＯＨ／Ｈ_２Ｏ）。
^１Ｈ　ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）：δ　８．３８（ｍ，１Ｈ）、８．１４（ｍ，１Ｈ）、７．６３（ｍ，４Ｈ）、７．２８（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ）、７．０８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７Ｈｚ）、６．５０（ｂｒ　ｓ，１Ｈ）、６．２８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７Ｈｚ）、３．９６（ｍ，１Ｈ）、３．４８（ｍ，１Ｈ）、３．３１（ｍ，５Ｈ）、２．９６（ｍ，２Ｈ）、２．７８（ｍ，２Ｈ）、２．６２（ｍ，２Ｈ）、１．７７（ｍ，２Ｈ）、０．２８（ｓ，９Ｈ）。
【０１２３】
高解像能質量スペクトル（Ｃ_２９Ｈ_３６Ｎ_４Ｏ_５ＳＳｎ）：
計算値　６６５．１５３３（^１１２Ｓｎ）及び６７３．１５０７（^１２０Ｓｎ），
実測値　６６５．１５１０及び６７３．１５０５。
【０１２４】
２（Ｓ）−（４− ^１２５ ヨード−ベンゼンスルホニルアミノ）−３−｛４−［２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−［１，８］ナフチリジン−２−イル）−エチル］−ベンゾイルアミノ｝−プロピオン酸（Ｂ−５）
Ｎａ^１２５Ｉ（１０ｍＣｉ，Ａｍｅｒｓｈａｍ，ＩＭＳ３００）のバイアルに撹拌棒、メタノール（０．０５ｍｌ）及びヨードビーズ（Ｐｉｅｒｃｅ）を添加し、室温で５分間撹拌した。メタノール（０．０４ｍｌ）中にＢ−４（〜０．１ｍｇ）を含む溶液を調製し、一部（０．０２ｍｌ）をメタノール（０．０２５ｍｌ）中Ｈ_２ＳＯ_４（０．００５ｍｌ）の混合物に添加し、この溶液を直ちにＮａ^１２５Ｉ／ヨードビーズバイアルに添加した。室温で２分間撹拌後、反応物をＮＨ_４ＯＨ（０．０４〜０．０５ｍｌ）でクエンチし、全反応混合物を精製のためにＨＰＬＣ［Ｖｙｄａｃペプチド−プロテインＣ−１８カラム，４．６×２５０ｍｍ，２０分間かけて１０％　アセトニトリル：Ｈ_２Ｏ（０．１％　ＴＦＡ）から９０％　アセトニトリル：Ｈ_２Ｏ（０．１％　ＴＦＡ）へ直線勾配，１ｍｌ／分］に注入した。Ｂ−５の保持時間は上記条件下で１６分であった。大部分の放射能を含むフラクションをプールし、凍結乾燥し、エタノールで希釈すると、約１ｍＣｉのＢ−５が得られた。これをＨＰＬＣ分析でＢ−３の真性サンプルと共溶離させた。
【０１２５】
計測
分析及び分取ＨＰＬＣは０．１ｍｌ　ヘッド及びＲｈｅｏｄｙｎｅ　７１２５インジェクターを有するＷａｔｅｒｓ　６００Ｅ　Ｐｏｗｅｒｌｉｎｅ　Ｍｕｌｔｉ　Ｓｏｌｖｅｎｔ　Ｄｅｌｉｖｅｒｙ　Ｓｙｓｔｅｍ及びＧｉｌｓｏｎ　ＦＣ２０３　Ｍｉｃｒｏｆｒａｃｔｉｏｎコレクターを有するＷａｔｅｒｓ　９９０　Ｐｈｏｔｏｄｉｏｄｅ　Ａｒｒａｙ　Ｄｅｔｅｃｔｏｒを用いて実施した。分析及び分取ＨＰＬＣのために、Ｖｙｄａｃペプチド−タンパク質Ｃ−１８カラム（４．６×２５０ｍｍ）をＣ−１８　Ｂｒｏｗｎｌｅｅモジュラーガードカラムと一緒に使用した。ＨＰＬＣ分析のために使用したアセトニトリルはＦｉｓｈｅｒ　Ｏｐｔｉｍａグレードであった。使用したＨＰＬＣ放射線デテクタはＢｅｃｋｍａｎ　１７０　Ｒａｄｉｏｉｓｏｔｏｐｅデテクタであった。分析及び分取ＨＰＬＣのために、Ｖｙｄａｃ　Ｃ−１８タンパク質・ペプチドカラム（３．９×２５０ｍｍ）を使用した。放射活性の溶液をＳｐｅｅｄｖａｃ真空遠心機を用いて濃縮した。検量曲線及び化学濃度はＨｅｗｌｅｔｔ　Ｐａｃｋａｒｄ　Ｍｏｄｅｌ　８４５２Ａ　ＵＶ／Ｖｉｓ　Ｄｉｏｄｅ　Ａｒｒａｙ　Ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｅｒを用いて測定した。サンプルの放射能はＰａｃｋａｒｄ　Ａ５５３０ガンマカウンターを用いて測定した。
【０１２６】
以下、本発明化合物のαｖβ３及びαｖβ５結合及び骨吸収抑制活性を測定するために使用した試験方法を説明する。
【０１２７】
骨吸収−ピットアッセイ
破骨細胞が骨吸収に関与すると、該細胞が作用している骨の表面にピットが形成される恐れがある。従って、試験化合物の破骨細胞を抑制する能力について試験する場合、抑制化合物が存在するときに破骨細胞が吸収ピットを陥凹させる能力を測定することが有用である。
【０１２８】
６ｍｍ円筒状のウシ大腿骨幹から連続２００ミクロン厚さの断面を低速ダイアモンド鋸（イリノイ州レークブルッフに所在のＩｓｏｍｅｔ，Ｂｅｕｌｅｒ，Ｌｔｄ．）を用いて切断する。骨スライスをプールし、１０％エタノール溶液中に入れ、次に使用するまで冷凍する。
【０１２９】
実験前に、ウシ骨スライスをＨ_２Ｏ中で２０分間×２回超音波処理する。洗浄したスライスを、２つの対照レーン及び各薬物用量につき１つのレーンが利用できるように９６ウェルプレートに置く。各レーンは３重または４重培養物である。９６ウェルプレート中の骨スライスをＵＶ照射により滅菌する。破骨細胞とインキュベートする前に、５％ウシ胎仔血清及び１％ペニシリン／ストレプトマイシンを含有するαＭＥＭ（ｐＨ６．９）（０．１ｍｌ）を添加して骨スライスを水和する。
【０１３０】
７〜１４日令の家兎（Ｎｅｗ　Ｚｅａｌａｎｄ　Ｗｈｉｔｅ　Ｈａｒｅ）の長骨を剥離し、軟組織を除き、２０ｍＭ　ＨＥＰＥＳ含有αＭＥＭ中に入れる。切片が＜１ｍｍとなるまで骨をはさみを用いて砕き、２５ｍｌ容量を５０ｍｌチューブに移す。チューブを手で優しく６０回揺らし、組織を１分間沈殿させ、上清を除去する。更に培地（２５ｍｌ）を組織に添加し、再び揺らす。第２の上清を第１の上清と合わせる。赤血球（通常〜２×１０^７細胞／ｍｌ）を除く細胞の数をカウントする。５％ウシ胎仔血清、１０ｎＭ　１，２５（ＯＨ）_２Ｄ_３及びペニシリン−ストレプトマイシンを含有するαＭＥＭ中に５×１０^６／ｍｌを含有する細胞懸濁液を作成する。２００ｍｌアリコートをウシ骨スライス（２００ｍｍ×６ｍｍ）に添加し、湿潤５％　ＣＯ_２雰囲気下３７℃で２時間インキュベートする。培地をマイクロピペッターを用いてやさしく除去し、試験化合物を含有する新鮮培地を添加する。培養物を４８時間インキュベートし、培地用Ｃｒｏｓｓｌａｐｓ（デンマークのＨｅｒｌｅｖ）を用いてｃ−テロペプチド（Ｉ型コラーゲンのａｌ鎖の断片）についてアッセイする。
【０１３１】
ウシ骨スライスを破骨細胞と２０〜２４時間接触させ、染色のために処理する。組織培地を各ウシ骨スライスから除去する。各ウェルをＨ_２Ｏ（２００ｍｌ）で洗浄した後、骨スライスを２．５％　グルタルアルデヒド、０．１Ｍ　カコダイレート（ｐＨ７．４）で２０分間固定する。固定後、残存する細胞破片を、０．２５Ｍ　ＮＨ_４ＯＨの存在下で２分間超音波処理し、次いでＨ_２Ｏ中で２×１５分間超音波処理することにより除去する。骨スライスを直ちに濾過１％トルイジンブルー及び１％ボラックスで６〜８分間染色する。
【０１３２】
骨スライスを乾燥した後、試験スライス及び対照スライス中の吸収ピットをカウントする。吸収ピットは偏向Ｎｉｋｏｎ　ＩＧＳフィルターキューブを用いてＭｉｃｒｏｐｈｏｔ　Ｆｘ（Ｎｉｋｏｎ）蛍光顕微鏡で観察する。試験用量の結果を対照と比較し、得られたＩＣ_５０値を各試験化合物について求める。
【０１３３】
本アッセイのデータを（ヒトを含めた）哺乳動物の病状に補外する適正さは、援用により本明細書に含まれるとするＳａｔｏ，Ｍら，Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｂｏｎｅ　ａｎｄ　Ｍｉｎａｒａｌ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｖｏｌ．５，Ｎｏ．１，ｐ．３１−４０（１９９０）の教示から裏付けられている。この文献は、特定のビスホスホネートを臨床的に使用し、パジェット病、悪性疾患の高カルシウム血症、骨転移により生ずる骨溶解病巣及び不動化または性ホルモン欠乏による骨損失の治療に有効であろうと教示している。次いで、同一のビスホスホネートを上記した骨吸収ピットアッセイで試験して、公知の有用性と本アッセイでのポジティブ結果の相関関係を確認している。
【０１３４】
ＥＩＢアッセイ
Ｄｕｏｎｇら，Ｊ．Ｂｏｎｅ　Ｍｉｎｅｒ．Ｒｅｓ．，８：Ｓ３７８（１９９３）は、ヒトインテグリンαｖβ３の発現系を記載している。インテグリンに対する抗体、すなわちＲＧＤ含有分子（例えば、欧州特許出願公開第３８２　４５１号明細書に記載されているエチスタチン）は骨吸収を効果的に阻止し得るのでインテグリンは破骨細胞の骨マトリックスへの結合を刺激すると示唆している。
【０１３５】
（反応混合物）
１．　１７５μｌのＴＢＳ緩衝液（５０ｍＭ　トリスＨＣｌ（ｐＨ７．２）、１５０ｍＭ　ＮａＣｌ、１％　ＢＳＡ、１ｍＭ　ＣａＣｌ_２、１ｍＭ　ＭｇＣｌ_２）、
２．　２５ｍｌの細胞抽出物（２０００ｃｐｍ／２５μｌとなるように１００ｍＭ　オクチルグルコシド緩衝液で希釈する）、
３．　^１２５Ｉ−エチスタチン（２５μｌ／５０，０００ｃｐｍ）（欧州特許第３８２　４５１号明細書参照）、
４．　２５μｌの緩衝液（総結合）または非標識エチスタチン（非特異的結合）。
【０１３６】
次いで、反応混合物を室温で１時間インキュベートした。非結合及び結合αｖβ３をＳｋａｔｒｏｎ細胞収集装置を用いる濾過により分離した。次いで、（予め１．５％エチレンイミンで１０分間濡らした）フィルターを洗浄緩衝液（５０ｍＭ　トリスＨＣｌ、１ｍＭ　ＣａＣｌ_２／ＭｇＣｌ_２，ｐＨ７．２）で洗浄した後、フィルターをガンマカウンターでカウントした。
【０１３７】
ＳＰＡＶ３アッセイ
（材料）
１．　小麦胚芽凝集素シンチレーション・プロキシミティー・ビーズ（Ｓｃｉｎｔｉｌｌａｔｉｏｎ ｐｒｏｘｉｍｉｔｙ ｂｅａｄｓ， ＳＰＡ）；Ａｍｅｒｓｈａｍ、
２．　オクチルグルコピラノシド；Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ、
３．　ＨＥＰＥＳ；Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ、
４．　ＮａＣｌ；Ｆｉｓｈｅｒ、
５．　ＣａＣｌ_２；Ｆｉｓｈｅｒ、
６．　ＭｇＣｌ_２；Ｆｉｓｈｅｒ、
７．　フェニルメチルスルホニルフロリド（ＰＭＳＦ）；ＳＩＧＭＡ、
８．　Ｏｐｔｉｐｌａｔｅ；ＰＡＣＫＡＲＤ、
９．　化合物Ａ−１０（比活性５００〜１０００Ｃｉ／ミリモル）、
１０．　試験化合物、
１１．　精製インテグリン受容体：Ｐｙｔｅｌａ（Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｉｎ　Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，１４４：４７５（１９８７））に従ってαｖβ３を過剰発現する２９３細胞（Ｄｕｏｎｇら，Ｊ．Ｂｏｎｅ　Ｍｉｎ．Ｒｅｓ．，８：Ｓ３７８（１９９３））からαｖβ３を精製した、
１２．　結合緩衝液；５０ｍＭ　ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．８）、１００ｍＭ　ＮａＣｌ、１ｍＭ　Ｃａ^２＋／Ｍｇ^２＋及び０．５ｍＭ　ＰＭＳＦ、
１３．　結合緩衝液中５０ｍＭ　オクチルグルコシド：５０−ＯＧ緩衝液。
【０１３８】
（手順）
１．　ＳＰＡビーズの予備処理
凍結乾燥ＳＰＡビーズ（５００ｍｇ）を５０−ＯＧ緩衝液（２００ｍｌ×４）及び結合緩衝液（１００ｍｌ×１）で洗浄した後、結合緩衝液（１２．５ｍｌ）中に再懸濁させた。
２．　ＳＰＡビーズ及び受容体混合物の調製
各アッセイチューブにおいいて、予備処理ビーズ（２．５μｌ，４０ｍｇ／ｍｌ）を結合緩衝液（９７．５μｌ）及び５０−ＯＧ緩衝液（２０ｍｌ）中に懸濁させた。精製受容体（５ｍｌ，〜３０ｎｇ／μｌ）を室温で撹拌しながら懸濁状態のビーズに３０分間かけて添加した。次いで、混合物を４℃でＢｅｃｋｍａｎ　ＧＰＲ　Ｂｅｎｃｈｔｏｐ遠心機を用いて２，５００ｒｐｍで１０分間遠心した。次いで、ペレットを結合緩衝液（５０μｌ）及び５０−ＯＧ緩衝液（２５μｌ）中に再懸濁させた。
３．　反応
Ｏｐｔｉｐｌａｔｅに（ｉ）受容体／ビーズ混合物（７５μｌ）、（ｉｉ）試験化合物、総結合のための結合緩衝液または非特異的結合のためのＡ−８（２５μｌ、最終濃度１μＭ）、（ｉｉｉ）結合緩衝液中Ａ−１０（２５μｌ、最終濃度４０ｐＭ）、（ｉｖ）結合緩衝液（１２５μｌ）を順次添加し、各プレートをＰＡＣＫＡＲＤ製プレートシーラーを用いて密封し、４℃で揺らしながら一晩インキュベートした。
４．　プレートをＰＡＣＫＡＲＤ　ＴＯＰＣＯＵＮＴを用いてカウントした。
５．　抑制％を下記式に従って算出した：
抑制％＝［｛（Ａ−Ｂ）−（Ｃ−Ｂ）｝／（Ａ−Ｂ）］／（Ａ−Ｂ）×１００
式中、Ａは総カウント、Ｂは非特異的カウント、Ｃは試料のカウントである。
【０１３９】
ＯＣＦＯＲＭアッセイ
元々マウス頭蓋冠由来の破骨細胞様細胞（１．８細胞）をＣＯＲＮＩＮＧ　２４ウェル組織培養プレート中リボ−及びデオキシリボヌクレオシド、１０％ウシ胎仔血清及びペニシリン−ストレプトマイシンを含有するαＭＥＭ培地において平板培養した。朝に４０，０００／ウェルの細胞を接種した。午後に、６週令の雄Ｂａｌｂ／Ｃマウスから骨髄細胞を次のようにして作成した。
【０１４０】
マウスを殺し、腓骨を取り出し、上記培地において平板培養した。端部を切断し、骨髄を２７．５ゲージ針を取り付けた１ｍｌ注射器を用いて腔からチューブに移した。ピペットを上下して骨髄を懸濁させた。懸濁液を＞１００ｍｍナイロン細胞ストレーナを通過させた。生じた懸濁液を３５０×ｇで数分間遠心した。ペレットを再懸濁し、サンプルを２％酢酸で希釈して赤血球を溶解させた。残りの細胞を血球計を用いてカウントした。細胞をペレット化し、１×１０^６細胞／ｍｌで再懸濁した。５０μｌを１．８細胞の各ウェルに添加して５０，０００細胞／ウェルとし、１，２５−ジヒドロキシ−ビタミンＤ_３（Ｄ_３）を各ウェルに添加して１０ｎＭの最終濃度とした。培養物を湿潤５％ＣＯ_２雰囲気下３７℃でインキュベートした。４８時間後、培地を交換した。骨髄を添加してから７２時間後、試験化合物をＤ３含有の新鮮培地と共に四重ウェルに添加した。４８時間後、試験化合物を再びＤ３含有の新鮮培地と共に添加した。更に４８時間後、培地を除去し、細胞をリン酸緩衝食塩液中１０％ホルムアルデヒドを用いて室温で１０分間固定した後エタノール／アセトン（１：１）で１〜２分間処理し、風乾した。次いで、細胞をタータレート耐性酸ホスファターゼのために以下のように染色した。
【０１４１】
細胞を、３０ｍＭ　酒石酸ナトリウム、０．３ｍｇ／ｍｌ　ＦａｓｔＲｅｄ　Ｖｉｏｌｅｔ　ＬＢ　Ｓａｌｔ及び０．１ｍｇ／ｍｌ　Ｎａｐｈｔｈｏｌ　ＡＳ−ＭＸホスフェートを含有する５０ｍＭ　アセテート緩衝液（ｐＨ５．０）を用いて室温で１０〜１５分間染色した。染色後、プレートを脱イオン水を用いて十分に洗浄し、風乾した。各ウェルでポジティブ染色された多核細胞の数をカウントした。
【０１４２】
ＳＰＡＶ５アッセイ
（材料）
１．　小麦胚芽凝集素シンチレーション・プロキシミティー・ビーズ（ＳＰＡ）；Ａｍｅｒｓｈａｍ、
２．　オクチルグルコピラノシド及びホルボ−１２−ミリステート−１３−アセテート（ＰＭＡ）；Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ、
３．　トリス−ＨＣｌ、ＮａＣｌ及びＣａＣｌ_２；Ｆｉｓｈｅｒ
４．　最少必須培地（ＭＥＭ）；Ｇｉｂｃｏ／ＢＲＬ、
５．　ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）；Ｈｙｃｌｏｎｅ、
６．　ＭｇＣｌ_２、ＭｎＣｌ_２及びフェニルメチルスルホニルフロリド（ＰＭＳＦ）；ＳＩＧＭＡ、
７．　プロテアーゼ阻害剤カクテル錠；Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ　Ｍａｎｎｈｅｉｍ、
８．　Ｏｐｔｉｐｌａｔｅ−９６ウェル；ＰＡＣＫＡＲＤ、
９．　Ｂ−５を放射線標識リガンド（比活性５００〜１０００Ｃｉ／ミリモル）として使用し、Ｂ−３（２．５μＭ）を１００％阻害を達成するために使用した、
１０．　試験化合物、
１１．　αｖβ５インテグリンを過剰発現するＨＥＫ２９３細胞（Ｓｉｍｏｎら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７２：２９３８０−２９３８９（１９９７））を１５０ｍｍ皿中で１０％　ＦＢＳ／ＭＥＭ培地（Ｇｉｂｃｏ／ＢＲＬ）において培養する、
１２．　溶解緩衝液：１００ｍＭ　オクチルグルコピラノシド、５０ｍＭ　トリス（ｐＨ７．５）、１００ｍＭ　ＮａＣｌ、１ｍＭ　ＣａＣｌ_２、１ｍＭ　ＭｇＣｌ_２　０．５ｍＭ　ＰＭＳＦ及びプロテアーゼ阻害剤（１錠／５０ｍｌ緩衝液）、
１３．　結合緩衝液：５０ｍＭ　トリス（ｐＨ７．５）、１００ｍＭ　ＮａＣｌ、１ｍＭ　ＣａＣｌ_２、１ｍＭ　ＭｇＣｌ_２及び１ｍＭ　ＭｎＣｌ_２、
１４．　結合緩衝液中５０ｍＭ　オクチルグルコピラノシド：５０−ＯＧ緩衝液。
【０１４３】
（手順）
１．　αｖβ５細胞溶解物
αｖβ５インテグリンを発現するＨＥＫ　２９３細胞を集密まで培養した。次いで、細胞を０．５％　ＦＢＳ含有培地で一晩飢餓状態とした後１００ｎＭ　ＰＭＡで２０分間処理した。細胞を冷（４℃）リン酸食塩緩衝液で２回洗浄し、氷上で溶解緩衝液中に３０分間溶解した。溶解物をＢｅｃｋｍａｎ　ＪＡ−２０を用いて２０，０００×ｇで清澄化した。清澄化した溶解物のタンパク質濃度をミクロＢＣＡキット（Ｐｉｅｒｃｅ）を用いて測定し、アリコートとして８０℃で保存した。
２．　ＳＰＡビーズの予備処理
凍結乾燥したＳＰＡビーズ（５００ｍｇ）を５０−ＯＧ緩衝液（２００ｍｌ×４）及び結合緩衝液（１００ｍｌ×１）で洗浄した後、結合緩衝液（１２．５ｍｌ）に再懸濁させた。
３．　ＳＰＡＶ５結合反応物の調製
各アッセイウェルで、Ｏｐｔｉｐｌａｔｅプレートに（ｉ）１２５μｌ／ウェルの最終容量になるまで結合緩衝液、（ｉｉ）５０−ＯＧ（２２μｌ）で希釈した予備処理ビーズ３μｌ（１２０μｇ／ウェル）、（ｉｉｉ）αｖβ５細胞溶解物タンパク質１５μｇ、（ｉｖ）５０，０００ｃｐｍのＢ−５、（ｖ）漸変濃度の試験化合物２５μｌを順次添加し、各プレートをＰＡＣＫＡＲＤ製プレートシーラーを用いて密封し、４℃で揺らしながら一晩インキュベートした。
４．　プレートをＰＡＣＫＡＲＤ　ＴＯＰＣＯＵＮＴミクロプレートシンチレーションカウンターを用いてカウントした。
５．　抑制％を下記式に従って算出した：
抑制％＝［｛（Ａ−Ｂ）−（Ｃ−Ｂ）｝／（Ａ−Ｂ）］／（Ａ−Ｂ）×１００
式中、Ａは総カウント（受容体のＢ−５に対する結合）、Ｂは非特異的カウント（２．５μＭの冷リガンドの存在下での受容体のＢ−５に対する結合）、Ｃは試験化合物に対する受容体結合由来のカウントである。
【０１４４】
試験化合物のＩＣ_５０は５０％の抑制として計算された。
【０１４５】
医薬組成物の例
経口組成物の特定具体例として、本発明化合物１００ｍｇを十分な微粉砕したラクトースと共に処方して、全量で５８０〜５９０ｍｇをサイズＯの硬質ゲルカプセルに充填する。
【０１４６】
本発明を特定の好ましい実施態様を参照して説明、例示してきたが、当業者には自明のように本発明の趣旨及び範囲を逸脱することなく様々な変化、修飾及び置換を加え得る。例えば、吸収に起因する重篤な骨疾患または上記した本発明化合物の他の適応症に対する治療対象の哺乳動物の応答が変化する結果として上記した好ましい用量外の有効用量も使用可能である。同様に、観察される特定の薬理学的応答は選択した特定活性化合物や医薬担体の存在の有無、または製剤のタイプ及び使用する投与モードに従って、応じて異なり得、結果の予測される違いは本発明の目的及び実施に従って考えられる。従って、本発明は請求の範囲によってのみ限定され、請求の範囲は合理的である限り包括的に解釈される。

Claims (15)

1. 構造式（Ｉ）：
   

   

   を有する化合物、またはその医薬的に許容され得る塩またはエステル。
2. 請求の範囲第１項に記載の化合物及び医薬的に許容され得る担体を含む医薬組成物。
3. 更に、
   ａ）有機ビスホスホネート、またはその医薬的に許容され得る塩またはエステル、
   ｂ）エストロゲン受容体モジュレーター、
   ｃ）細胞毒性／抗増殖剤、
   ｄ）マトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤、
   ｅ）表皮由来、線維芽細胞由来または血小板由来増殖因子の阻害剤、
   ｆ）ＶＥＧＦ阻害剤、
   ｇ）Ｆｌｋ−１／ＫＤＲ、Ｆｌｔ−１、Ｔｃｋ／Ｔｉｅ−２またはＴｉｅ−１阻害剤、
   ｈ）カテプシンＫ阻害剤、
   ｉ）ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤、ゲラニルゲラニルトランスフェラーゼ阻害剤または二重ファルネシル／ゲラニルゲラニルトランスフェラーゼ阻害剤のようなプレニル化阻害剤、及び
   その混合物
   からなる群から選択される活性成分を含む請求の範囲第２項に記載の組成物。
4. 活性成分が
   ａ）有機ビスホスホネート、またはその医薬的に許容され得る塩またはエステル、
   ｂ）エストロゲン受容体モジュレーター、
   ｃ）カテプシンＫ阻害剤、及び
   その混合物
   からなる群から選択される請求の範囲第３項に記載の組成物。
5. 有機ビスホスホネート、またはその医薬的に許容され得る塩またはエステルがアレンドロネートモノナトリウム３水和物である請求の範囲第４項に記載の組成物。
6. 活性成分が
   ａ）細胞毒性／抗増殖剤、
   ｂ）マトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤、
   ｃ）表皮由来、線維芽細胞由来または血小板由来増殖因子の阻害剤、
   ｄ）ＶＥＧＦ阻害剤、
   ｅ）Ｆｌｋ−１／ＫＤＲ、Ｆｌｔ−１、Ｔｃｋ／Ｔｉｅ−２またはＴｉｅ−１阻害剤、及び
   その混合物
   からなる群から選択される請求の範囲第３項に記載の組成物。
7. 治療を要する哺乳動物に対して治療有効量の請求の範囲第１項に記載の化合物を投与することを含む骨吸収、再狭窄、血管形成、糖尿病性網膜症、黄斑変性、炎症性関節炎及び腫瘍増殖から選択される状態の抑制方法。
8. 抑制すべき状態が骨吸収である請求の範囲第７項に記載の方法。
9. 治療を要する哺乳動物における骨吸収の抑制方法であって、前記哺乳動物に対して治療有効量の請求の範囲第２項に記載の組成物を投与することを含む前記方法。
10. 治療を要する哺乳動物における骨吸収の抑制方法であって、前記哺乳動物に対して治療有効量の請求の範囲第３項に記載の組成物を投与することを含む前記方法。
11. 骨粗しょう症の治療または予防方法であって、治療または予防を要する哺乳動物に対して治療または予防有効量の請求の範囲第１項に記載の化合物を投与することを含む前記方法。
12. 骨粗しょう症の治療または予防方法であって、治療または予防を要する哺乳動物に対して治療または予防有効量の請求の範囲第１項に記載の化合物を有効量の有機ビスホスホネート、またはその医薬的に許容され得る塩またはエステルと共に投与することを含む前記方法。
13. 有機ビスホスホネート、またはその医薬的に許容され得る塩またはエステルはアレンドロネートモノナトリウム３水和物である請求の範囲第１２項に記載の組成物。
14. 治療を要する哺乳動物における腫瘍増殖の治療方法であって、前記哺乳動物に対して治療有効量の請求の範囲第６項に記載の組成物を投与することを含む前記方法。
15. 治療を要する哺乳動物における腫瘍増殖の治療方法であって、前記哺乳動物に対して治療有効量の請求の範囲第１項に記載の化合物を放射線療法と組み合わせて投与することを含む前記方法。