JP2004513064A - 癌の処置のためのアロマターゼインヒビターとしての、パクリタキセルおよびステロイド誘導体の使用 - Google Patents

Abstract

腫瘍壊死因子α（ＴＮＦα）によって刺激されるアロマターゼ活性の阻害のための医薬品の製造のための、（ｉ）微小管安定剤；（ｉｉ）微小管崩壊因子；（ｉｉｉ）式Ａ−Ｂの化合物（ここで、Ａはオキシヒドロカルビル基であり、そしてＢは環式基である）；および（ｉｖ）式Ｃ−Ｄの化合物（ここで、Ｃはスルファメート基であり、そしてＤは環式基である）から選択される材料の使用が提供される。乳房組織に由来する培養された線維芽細胞中のＴＮＦαによって刺激される活性と拮抗する、パクリタキセルおよび２−ｍｅＯＥ２の能力を試験した。

Description

【０００１】
本発明は、腫瘍壊死因子αによって刺激されるアロマターゼ活性の阻害に関する。
【０００２】
（序章）
アロマターゼ酵素複合体によるアンドロステンジオンからのエストロンの合成は、ホルモン依存性の腫瘍の増殖を支持するために利用可能なエストロンの重要な供給源である（１）。サイトカイン（例えば、インターロイキン６（ＩＬ−６）および腫瘍壊死因子α（ＴＮＦα）およびプロスタグランジンＥ_２（ＰＧＥ_２））は全て、アロマターゼ活性を刺激し得る（２〜４）。多くの乳房の腫瘍は、マクロファージおよびリンパ球によって浸潤され、そしてこれらの細胞がアロマターゼ活性を刺激し得る因子の重要な供給源であり得るという証拠が存在する（５〜６）。
【０００３】
免疫系が癌の発症において有する役割は、議論の余地がある（７）。しかし、長期間の免疫抑制治療を受けている女性においては、乳癌の発生率は低下する（８）。このことは、免疫系が乳癌の発症において免疫刺激の役割を有し得ることを示唆する。このような役割についての支持（おそらく、エストロゲン合成のサイトカイン刺激を通じて作用する）が、アロマターゼを刺激するために、免疫抑制された被験体または乳癌を有している女性の白血球細胞から回収した馴化培地（ＣＭ）の能力を比較することによって、得られた（９）。この酵素の活性の刺激は、免疫抑制された被験体の細胞から回収したＣＭによって大きく減少した。さらに、ＴＮＦαの濃度は、乳癌を有している女性の細胞に由来するＣＭ中に存在する高いレベルとは対照的に、免疫抑制された被験体の細胞に由来するＣＭにおいて、かろうじて検出可能であった。従って、おそらく、ＴＮＦαは、アロマターゼ活性を調節することにおいて重要な役割を有する。
【０００４】
ＴＮＦαは、他のサイトカインと同様に、細胞表面レセプターと相互作用することによって作用する（１０）。ヒトのマクロファージを使用して、パクリタキセル（微小管を安定化させる化合物）は、ＴＮＦαレセプターを迅速に下方制御させることが見出された（１１）。内因性のエストロゲン代謝物である、２−メトキシエストラジオール（２−ｍｅＯＥ２）は、微小管の安定化に対してパクリタキセルと同様の効果を有することが最近示された（１２、１３）。
【０００５】
本発明の局面は、添付の特許請求の範囲において規定される。
【０００６】
本発明の第１の局面においては、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦα）によって刺激されるアロマターゼ活性の阻害のための医薬品の製造のための、（ｉ）微小管安定剤；（ｉｉ）微小管崩壊因子（好ましくは、パクリタキセル）；（ｉｉｉ）式Ａ−Ｂの化合物（ここでは、Ａはオキシヒドロカルビル基であり、そしてＢは環式基である）、好ましくは、２−ｍｅＯＥ２；および（ｉｖ）式Ｃ−Ｄの化合物（ここでは、Ｃはスルファメート基であり、そしてＤは環式基である）、好ましくは、ＭｅＯＥＭＡＴＥから選択される材料の使用を提供する。
【０００７】
以下の考察において、および本発明の記載を通じて、以下のことが当業者によって理解される：
・２−ｍｅＯＥ２が好ましく、そしてこれは、Ａがオキシヒドロカルビル基であり、そしてＢが環式基である、式Ａ−Ｂの化合物の例である、
・２−ＭｅＯＥＭＡＴＥが好ましく、そしてこれは、Ｃがスルファメート基であり、そしてＤが環式基である、式Ｃ−Ｄの化合物の例である。好ましくは、２−ＭｅＯＥＭＡＴＥが、式Ｃ−Ｄ−Ｅの化合物の例である。ここでは、Ｃがスルファメート基であり、Ｄが環式基であり、そしてＥがオキシヒドロカルビル基である、
・パクリタキセルが好ましく、そしてこれは微小管崩壊因子の例である。
【０００８】
本研究においては、本発明者らは、乳房組織に由来する培養された線維芽細胞中のＴＮＦαによって刺激される活性と拮抗する、パクリタキセルおよび２−ｍｅＯＥ２の能力を試験した。
【０００９】
アロマターゼ酵素（これは、アンドロステンジオンをエストロゲンに転換する）は、ホルモンに依存する乳房の腫瘍の増殖を支持する、エストロゲンの能力を調節する。生物学的応答の改変因子（サイトカイン（例えば、インターロイキン６（ＩＬ−６）および腫瘍壊死因子α（ＴＮＦα）またはプロスタグランジンＥ_２（ＰＧＥ_２））を含む）は、アロマターゼ活性を刺激し得る。これらの因子は、乳房の腫瘍に浸潤する免疫系の細胞に起源し得る。パクリタキセル（これは、乳癌の処置において使用される）は、微小管を安定化させ、そしてヒトのマクロファージ上のＴＮＦ−レセプターを迅速に下方制御させることが以前に示されている。内因性のエストロゲン代謝物である２−メトキシエストラジオール（２−ｍｅＯＥ２）もまた、微小管を安定化させるように作用する。この研究においては、本発明者らは、パクリタキセル、２−ｍｅＯＥ２、および２−メトキシエストロン−３−Ｏ−スルファメート（２−ｍｅＯＥＭＡＴＥ）の、正常なまたは悪性の乳房組織に由来する間質の線維芽細胞中の、ＴＮＦαによって刺激されるアロマターゼ活性と拮抗する能力を試験した。パクリタキセルは、基底のおよびＴＮＦαによって刺激されるアロマターゼ活性を、それぞれ８８％および９１％にまで阻害した。２−ＭｅＯＥＭＡＴＥ２もまた、基底のおよびＴＮＦαによって刺激されるアロマターゼ活性を、それぞれ４６％および５６％にまで減少させた。２−ＭｅＯＥＭＡＴＥはまた、基底のおよびＴＮＦαによって刺激されるアロマターゼ活性を減少させた。パクリタキセル、２−ｍｅＯＥ２、および２−ＭｅＯＥＭＡＴＥもまた、ＩＬ−６＋その可溶性のレセプター、ならびにＰＧＥ_２によるアロマターゼ活性の刺激を阻害した。
【００１０】
２−ｍｅＯＥ２、２−メトキシエストリオール（２−ｍｅＯＥ３）の１６α−ヒドロキシル化誘導体（これは、微小管には結合しない）は、ＴＮＦαによって刺激されるアロマターゼ活性を阻害することにおいてあまり有効ではなかった。エストロゲンの増大した２−ヒドロキシル化、および続くそれらの２−メトキシ誘導体の形成は、乳癌の減少した危険性に関連し得る。エストロゲンの代謝の経路が、サイトカインの刺激に応答する間質の細胞の能力に影響を与え得る。
【００１１】
環式基は、単環であり得るか、または多環式環の構造である。ここでは、用語「多環式」は、縮合環、および縮合していない環構造（その組合せを含む）を含む。
【００１２】
１つの局面においては、環式基は、Ｃ、Ｈ、Ｏ、Ｎ、Ｐ、ハロゲン（Ｃｌ、Ｂｒ、およびＩを含む）、Ｓ、およびＰのうちのいずれか１つ以上を含み得る。
【００１３】
環式基の少なくとも１つは、複素環式基（複素環）または非複素環式基であり得る。
【００１４】
環式基の少なくとも１つは、飽和した環構造であり得るか、または不飽和の環構造（例えば、アリール基）であり得る。
【００１５】
好ましくは、環式基の少なくとも１つはアリール環である。
【００１６】
好ましくは、基Ａおよび／または基Ｃおよび／または基Ｅが、アリール環に連結するかまたは付着する。
【００１７】
環式基が多環式である場合には、化合物の環成分のいくつかまたは全てが互いに縮合され得るか、または１つ以上の適切なスペーサー基を通じて連結し得る。
【００１８】
多環式化合物は、多数の縮合された環を含み得る。この局面においては、縮合環は、異なる大きさの環の任意の組合せ（例えば、３個の６員環（６，６，６）、ならびに１つの６員環、１つの７員環、および１つの６員環（６，７，６）、ならびに１つの６員環および２つの８員環（６，８，８）など）を含み得る。
【００１９】
１つの局面においては、環式基が多環式である場合は、基Ａおよび／または基Ｃおよび／または基Ｅは、多環式化合物の同じ環に付着する。
【００２０】
従って、本発明の１つの局面に従うと、好ましくは、化合物は多環式化合物である。
【００２１】
好ましくは、多環式化合物は、約５０個を超えない炭素原子、より通常は、約３０個から４０個を超えない炭素原子の、全てを含んだ置換基を含む。
【００２２】
多環式化合物は、少なくとも２つの環成分、または少なくとも３個の環成分、または少なくとも４個の環成分を含み得る。
【００２３】
好ましくは、多環式化合物は、４個の環成分を含む。
【００２４】
好ましい多環式化合物は、ステロイド環成分−すなわち、シクロペンタノフェナンスレン骨格またはそのバイオアイソスターを含む。
【００２５】
当該分野で周知であるように、古典的なステロイド環構造は、以下の一般式を有する：
【００２６】
【化２】

上記の式においては、環は、従来の様式で標識されている。
【００２７】
バイオアイソスターの一例は、環Ａ、Ｂ、Ｃ、およびＤの任意の１つ以上が複素環式環である場合、ならびに／または環Ａ、Ｂ、Ｃ、およびＤの任意の１つ以上が置換されている場合、ならびに／または任意の１つ以上の環Ａ、Ｂ、Ｃ、およびＤが修飾されている場合である；しかし、ここでは、スルファメート基が存在していないバイオアイソスターがステロイド特性を有する。
【００２８】
これに関して、好ましい多環式化合物の構造は、以下のように示され得る：
【００２９】
【化３】

ここで、各環Ａ’、Ｂ’、Ｃ’、およびＤ’は独立して、複素環式環または非複素環式環を示し、これらの環は、独立して置換されても置換されなくてもよく、飽和されても飽和されなくてもよい。
【００３０】
一例として、環Ａ’、Ｂ’、Ｃ’、およびＤ’の任意の１つ以上が、適切な基−例えば、アルキル基、アリール基、ヒドロキシ基、ハロ基、ヒドロカルビル基、オキシヒドロカルビル基などで、独立して置換され得る。
【００３１】
Ｄ’の一例は、少なくとも１つの置換基を有している５員環または６員環の非複素環式環である。
【００３２】
１つの好ましい実施形態においては、環Ｄ’は、エチニル基で置換される。
【００３３】
環Ａ’、Ｂ’、Ｃ’、およびＤ’の任意の１つが複素環式環である場合は、好ましくは、この複素環式環は、Ｃ原子と少なくとも１つのＮ原子および／または少なくとも１つのＯ原子の組合せを含む。他の複素環原子が、環内に存在し得る。
【００３４】
本発明の適切な化合物の好ましいステロイド核環Ａ’〜Ｄ’の例として、デヒドロエピアンドロステロンおよびエストロゲン（エストロンを含む）の環Ａ〜Ｄを含む。
【００３５】
本発明の化合物の好ましいステロイド核環Ａ’〜Ｄ’は、以下の環Ａ〜Ｄを含む：
エストロンおよび置換されたエストロン、すなわち：
エストロン
４−ＯＨ−エストロン
６α−ＯＨ−エストロン
７α―ＯＨ−エストロン
１６α−ＯＨ−エストロン
１６β−ＯＨ−エストロン
１７−デオキシエストロン
エストロン。
エストラジオールおよび置換されたエストラジオール、すなわち：
４−ＯＨ−１７β−エストラジオール
６α−ＯＨ−１７β−エストラジオール
７α−ＯＨ−１７β−エストラジオール
４−ＯＨ−１７α−エストラジオール
６α−ＯＨ−１７α−エストラジオール
７α−ＯＨ−１７α−エストラジオール
１６α−ＯＨ−１７α−エストラジオール
１６α−ＯＨ−１７β−エストラジオール
１６β−ＯＨ−１７α−エストラジオール
１６β−ＯＨ−１７β−エストラジオール
１７α−エストラジオール
１７β−エストラジオール
１７α−エチニル−１７β−エストラジオール
１７β−エチニル−１７α−エストラジオール
１７−デオキシエストラジオール。
エストリオールおよび置換されたエストリオール、すなわち：
エストリオール
４−ＯＨ−エストリオール
６α−ＯＨ−エストリオール
７α−ＯＨ−エストリオール
１７−デオキシエストリオール。
デヒドロエピアンドロステロンおよび置換されたデヒドロエピアンドロステロン、すなわち：
デヒドロエピアンドロステロン
６α−ＯＨ−デヒドロエピアンドロステロン
７α−ＯＨ−デヒドロエピアンドロステロン
１６α−ＯＨ−デヒドロエピアンドロステロン
１６β−ＯＨ−デヒドロエピアンドロステロン。
【００３６】
一般的な意味においては、環系Ａ’Ｂ’Ｃ’Ｄ’は、種々の妨害しない置換基を含み得る。詳細には、環系Ａ’Ｂ’Ｃ’Ｄ’は、以下の１つ以上を含み得る：
ヒドロキシ、アルキル（特に、低級（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル、例えば、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、および他のペンチル異性体、ならびにｎ−ヘキシルおよび他のヘキシル異性体）、アルコキシ（特に、低級（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルコキシ（例えば、メトキシ、エトキシ、プロポキシなど））、アルキニル（例えば、エチニル）、またはハロゲン（例えば、フルオロ）置換基。
【００３７】
代替の実施形態においては、多環式化合物は、ステロイド核を含まない場合があるか、またはステロイド核に基づかない場合がある。これに関して、多環式化合物は、非ステロイド環系−例えば、ジエチルスチルベストロール、スチルベストロール、クマリン、フラボノイド、コンブレスタチン（ｃｏｍｂｒｅｓｔａｔｉｎ）、および他の環系を含み得るか、またはそれらに基づき得る。本発明における使用のため、または本発明の組成物として適切な他の非ステロイド化合物が、第ＵＳ−Ａ−５５６７８３１号に見出され得る。
【００３８】
好ましくは、基Ａもしくは基Ｃおよび／または基Ｅが、互いにオルト位で、本発明の環式化合物の同じ環に付着する。
【００３９】
好ましくは、多環式化合物は、ステロイド構造を有し、そして基Ａまたは基ＥはＡ環に付着する。
【００４０】
好ましくは、基Ａまたは基Ｅが、ステロイド構造のＡ環の２位に付着する。
【００４１】
好ましくは、多環式化合物はステロイド構造を有し、そして基ＣがＡ環に付着する。
【００４２】
好ましくは、基Ｃが、ステロイド構造のＡ環の３位に付着する。
【００４３】
基Ａは、オキシヒドロカルビル基である。
【００４４】
用語「オキシヒドロカルビル基」は、本明細書中で使用される場合は、少なくともＣ、Ｈ、およびＯを含有している基を意味し、そして必要に応じて、１つ以上の他の適切な置換基を含み得る。このような置換基の例としては、ハロ−、アルコキシ−、ニトロ−、アルキル基、環式基などが挙げられ得る。置換基が環式基である可能性に加えて、置換基の組合せが、環式基を形成し得る。オキシヒドロカルビル基が１つより多いＣを含む場合は、これらの炭素は、必ずしも互いに連結する必要はない。例えば、炭素の少なくとも２つが、適切な元素または基を通じて連結し得る。従って、オキシヒドロカルビル基は、ヘテロ原子を含み得る。適切なヘテロ原子が当業者に明らかであり、そして例えば、イオウおよび窒素が挙げられる。
【００４５】
本発明の１つの好ましい実施形態においては、オキシヒドロカルビル基は、オキシ炭化水素基である。
【００４６】
ここでは、用語「オキシ炭化水素」は、アルコキシ基、オキシアルケニル基、オキシアルキニル基の任意の１つを意味する。この基は、直鎖状、分枝、もしくは環式、またはオキシアリール基であり得る。しかし、用語オキシヒドロ炭素はまた、それらが必要に応じて置換されているものを含む。オキシヒドロキシ炭素がその上に置換基（単数または複数）を有している分枝した構造である場合には、置換基は、炭化水素骨格上であり得るか、または分枝であり得るかのいずれかである；あるいは、置換基は、炭化水素骨格上にあり得、そして分枝であり得る。
【００４７】
好ましくは、オキシヒドロカルビル基は、式Ｃ_１−６Ｏ（例えば、Ｃ_１−３Ｏ）である。
【００４８】
化合物がステロイド核を含む場合は、好ましくは、Ａ環はオキシヒドロカルビル基を２位に有する。
【００４９】
より好ましくは、基Ｃ_１−６Ｏは、ステロイド核のＡ環の２位に付着している。
【００５０】
好ましくは、オキシヒドロカルビル基はアルコキシである。
【００５１】
アルコキシ置換基のアルキル基は、好ましくは、１から５個の炭素原子を含有している低級アルキル基である。すなわち、メチル、エチル、プロピルなどである。好ましくは、アルキル基はメチルである。
【００５２】
従って、好ましい実施形態においては、化合物がステロイド核を含む場合は、Ａ環は２位にメトキシ置換基を有する。
【００５３】
本発明の好ましい化合物は以下の式を有する：
【００５４】
【化４】

ここで、環Ａ、Ｂ、Ｃ、およびＤは、独立に必要に応じて置換される。
【００５５】
好ましくは、基Ａまたは基Ｅは２位にある。
【００５６】
好ましくは、基Ｃは３位にある。
【００５７】
基Ｃは、「スルファメート基」である。「スルファメート基」は、以下の式の基である：
【００５８】
【化５】

ここで、Ｒ_１およびＲ_２のそれぞれは、Ｈまたはヒドロカルビル基から独立して選択される。
【００５９】
用語「ヒドロカルビル基」は、本明細書中で使用される場合は、少なくともＣおよびＨを含有している基を意味し、そして必要に応じて、１つ以上の他の適切な置換基を含み得る。このような置換基の例として、ハロ−、アルコキシ−、ニトロ−、炭化水素基、Ｎ−アシル基、環式基などが挙げられ得る。置換基が環式基である可能性に加えて、置換基の組合せが、環式基を形成し得る。ヒドロカルビル基が１つより多いＣを含む場合は、これらの炭素は、必ずしも互いに連結する必要はない。例えば、炭素の少なくとも２つが、適切な元素または基を通じて連結し得る。従って、ヒドロカルビル基は、ヘテロ原子を含み得る。適切なヘテロ原子が当業者に明らかであり、そして例えば、イオウ、窒素、および酸素が挙げられる。
【００６０】
好ましくは、Ｒ_１およびＲ_２は、Ｈまたはアルキル、シクロアルキル、アルケニル、またはアリールから独立して選択されるか、あるいはともにアルキレンを示す。ここで、あるいはそれぞれがアルキルもしくはシクロアルキルもしくはアルケニルであり、または必要に応じて１つ以上のヘテロ原子もしくは基を含む。
【００６１】
置換される場合は、Ｎ−置換されたスルファメート化合物は、１つまたは２つのＮ−アルキル、Ｎ−アルケニル、Ｎ−シクロアルキル、Ｎ−アシル、またはＮ−アリール置換基を含み得、好ましくは、最大１０個の炭素原子を含有しているかまたはそれぞれが含有している。Ｒ_１および／またはＲ_２がアルキルである場合は、好ましい値は、Ｒ_１およびＲ_２がそれぞれ、１から５個の炭素原子を含有している低級アルキル基（すなわち、メチル、エチル、プロピルなど）から独立して選択されるものである。好ましくは、Ｒ_１およびＲ_２は、両方ともがメチルである。Ｒ_１および／またはＲ_２がアリールである場合には、代表的な値はフェニルおよびトリル（−ＰｈＣＨ_３；ｏ−、ｍ−、またはｐ−）である。Ｒ_１およびＲ_２がシクロアルキルを示す場合は、代表的な値は、シクロプロピル、シクロペンチル、シクロヘキシルなどである。Ｒ_１およびＲ_２が互いに連結する場合は、代表的には、４から６個の炭素原子の鎖を提供するアルキレン基を示し、必要に応じて、１つ以上のヘテロ原子または基（例えば、−Ｏ−または−ＮＨ−）が介在して、５−、６−、または７−員環の複素環（例えば、モルホリノ、ピロリジノ、またはピペラジノ）を提供する。
【００６２】
アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アシル、およびアリールの範囲内に、本発明者らは、問題の化合物の活性を妨害しない１つ以上の基をその中に置換基として含有している置換された基を含める。例示的な妨害しない置換基として、ヒドロキシ、アミノ、ハロ、アルコキシ、アルキル、およびアリールが挙げられる。ヒドロカルビル基の限定的ではない例はアシル基である。
【００６３】
いくつかの好ましい実施形態においては、少なくとも１つのＲ_１およびＲ_２はＨである。
【００６４】
本発明での使用に適切なスルファメート化合物の例、または本発明での使用に適切なスルファメート化合物に転換され得る適切な化合物の例が、当該分野で見出され得る−例えば、第ＰＣＴ／ＧＢ９２／０１５８７号、第ＰＣＴ／ＧＢ９７／０３３５２号、第ＰＣＴ／ＧＢ９７／００４４４号、第ＧＢ９７２５７４９．７号、第ＧＢ９７２５７５０．５号、第ＵＳ−Ａ−５５６７８３１号、第ＵＳ−Ａ−５６７７２９２号、第ＵＳ−Ａ−５５６７８３１号、第ＷＯ−Ａ−９６／０５２１６号、および第ＷＯ−Ａ−９６／０５２１７号。
【００６５】
一例として、第ＰＣＴ／ＧＢ９２／０１５８７号は、新規のスルファメート化合物、およびエストロン依存性の腫瘍（特に、乳癌）の処置における使用のためにそれらを含有している薬学的組成物を教示する。これらのスルファメート化合物は、スルファメートエステルである。このようなインヒビターの例は、ステロイドのスルファメートエステル誘導体である。
【００６６】
本発明での使用に適切な別の化合物は、少なくとも以下の骨格構造を有する：
【００６７】
【化６】

Ｒ_１およびＲ_２の少なくとも１つがＨであることが好ましい。
【００６８】
本発明での使用に適切な別の化合物は、少なくとも以下の骨格構造を有する：
【００６９】
【化７】

ここで、環Ａ、Ｂ、Ｃ、およびＤは、独立して必要に応じて置換される。
【００７０】
本発明の好ましい化合物は、以下の式を有する：
【００７１】
【化８】

ここで、環Ａ、Ｂ、Ｃ、およびＤは、独立して必要に応じて置換される。
【００７２】
好ましくは、基Ｅは２位にある。
【００７３】
好ましくは、基Ｃは３位にある。
【００７４】
本発明については、好ましくはスルファメート化合物は、オキシヒドロカルビルステロイドスルファメート化合物であり、特に、２−メトキシエストロン−３−Ｏ−スルファメート、またはそれらのアナログを含むその薬学的に活性な塩である。
【００７５】
２−メトキシエストロン−３−Ｏ−スルファメートは、エストロン−３−Ｏ−スルファメート（一方で、「ＥＭＡＴＥ」として公知である）のアナログであり、以下の構造を有し：
【００７６】
【化９】

そして２−メトキシＥＭＡＴＥと呼ばれ得る。
【００７７】
２−メトキシＥＭＡＴＥは、本発明の天然に存在しているエストロゲン代謝物である２−メトキシエストロンのスルファモイル化誘導体である。この化合物は、２−ヒドロキシラーゼによるエストロンのヒドロキシル化、続くカテコールエストロゲンメチルトランスフェラーゼによるメトキシ誘導体への代謝によって肝臓で形成される。
【００７８】
２−メトキシＥＭＡＴＥは、以下の式として示される式を有する：
【００７９】
【化１０】

１つの実施形態においては、好ましくは、スルファメート化合物は、エストロン−３−Ｏ−スルファメートのオキシヒドロカルビル誘導体である。
【００８０】
１つの実施形態においては、好ましくは、スルファメート化合物は、エストロン−３−Ｏ−スルファメートのＣ_１−６（例えば、Ｃ_１−３）アルコキシ誘導体である。
【００８１】
１つの実施形態においては、好ましくは、スルファメート化合物は、エストロン−３−Ｏ−スルファメートの２−Ｃ_１−６（例えば、Ｃ_１−３）アルコキシ誘導体である。
【００８２】
１つの実施形態においては、好ましくは、スルファメート化合物は、２−メトキシエストロン−３−Ｏ−スルファメートである。
【００８３】
（実施例）
（材料および方法）
乳房の脂肪組織または腫瘍組織のサンプルを、患者のインフォームドコンセントを得た後に、縮小乳房形成術またはランペクトミーを受けている女性から得た。
【００８４】
線維芽細胞を、以前に記載されているように培養した（２）。簡潔には、線維芽細胞を、Ｈｅｐｅｓ緩衝液（２０ｍｍｏｌ／ｌ）、１０％のウシ胎仔血清（ＦＣＳ）、およびサプリメントを含有しているイーグル改変最少必須培地中で培養した。細胞を、２〜３回慣例的に継代培養し、その後、複製２５ｃｍ^２フラスコに、線維芽細胞を播種し、そしてコンフルエントに増殖させた。２−ＭｅＯＥＭＡＴＥを、付属Ｉに記載するように調製した。（実験のために、細胞を、２％の裸の（ｓｔｒｉｐｐｅｄ）ＦＣＳを含有しているフェノールレッドを含まない培地中で、パクリタキセル、２−ｍｅＯＥ２、または２−ＭｅＯＥＭＡＴＥの存在下で、ＴＮＦα、ＩＬ−６＋ＩＬ−６可溶性レセプター（ＩＬ−６ｓＲ）、またはＰＥＧ_２の添加の前に培養し、そしてこの培地中でさらに４８時間培養した。ＴＮＦα、ＩＬ−６＋ＩＬ−６ｓＲ（Ｒ＆Ｄ　Ｓｙｓｔｅｍｓ　Ｌｔｄ，Ａｂｉｎｇｄｏｎ，Ｏｘｆｏｒｄ，ＵＫ）またはＰＥＧ_２（Ｓｉｇｍａ、Ｐｏｏｌｅ，Ｄｏｒｓｅｔ，ＵＫ）を、デキサメタゾン（１００ｎｍｏｌ／ｌ、Ｓｉｇｍａ）の存在下で使用した。パクリタキセル、２−ｍｅＯＥ２、および他の化学薬品をもまた、Ｓｉｇｍａから入手した。
【００８５】
処置期間の終わりにアロマターゼ活性を、３〜２０時間の期間にわたって［１β−^３Ｈ］アンドロステンジオン（１５〜３０Ｃｉ／ｍｍｏｌ、ＮＥＮ−Ｄｕ　Ｐｏｎｔ，Ｓｔｅｖｅｎａｇｅ，Ｈｅｒｔｓ，ＵＫ）を使用してインタクトな単層中で測定した（２，３）。細胞の数を、Ｃｏｕｌｔｅｒ計数器を使用して細胞の核を計数することによって測定した。実験を３連で行い、そして示す結果は、２〜３の調査を表す。
【００８６】
（統計）
スチューデントｔ検定を、処理した細胞およびコントロールの細胞の平均値における差異の有意性を評価するために使用した。
【００８７】
（結果）
ＴＮＦαによって刺激されるアロマターゼ活性を阻害するパクリタキセルの能力を、縮小乳房形成術組織に由来する線維芽細胞を使用して最初に試験した（図１）。これらの細胞のＴＮＦαにおいては、デキサメタゾンの存在下では、アロマターゼ活性は３７５％まで刺激された。パクリタキセルおよび２−ｍｅＯＥ２の両方は、基底のアロマターゼ活性をそれぞれ８８％および４６％にまで阻害した。さらに、ＴＮＦαで刺激したアロマターゼ活性もまた、それぞれ９１％および５６％にまでこれらの化合物によって有意に減少させられた。この能力は、微小管を安定化させる薬剤に対して特異的であるようである。コルヒチン（これは、微小管の重合を阻害する）またはサイトカラシン（Ｃｙｔｏｃｈｏｌａｓｉｎ）Ｂ（これは、微小繊維に結合する）は影響を有さなかった（データは示さない）。
【００８８】
ＩＬ−６およびＰＧＥ_２のような他の因子もまた、細胞表面レセプターとの相互作用を介して作用するので、パクリタキセル、２−ｍｅＯＥ２、および２−ＭｅＯＥＭＡＴＥが、これらの因子およびＴＮＦαによるアロマターゼの刺激と拮抗する能力もまた、試験した（図２および図４）。ＴＮＦα、ＩＬ−６＋ＩＬ−６ｓＲ、またはＰＧＥ_２は全て、腫瘍に由来する線維芽細胞中のアロマターゼ活性を有意に増強した。パクリタキセル、２−ｍｅＯＥ２、および２−ＭｅＯＥＭＡＴＥは、基底のアロマターゼ活性およびＴＮＦαによって刺激される活性を阻害した。しかし、さらに、これらが、ＩＬ−６＋ＩＬ−６ｓＲ、またはＰＧＥ_２によるアロマターゼ活性の刺激ともまた拮抗することを見出した。
【００８９】
パクリタキセル、２−ｍｅＯＥ２、および２−ＭｅＯＥＭＡＴＥが、ＴＮＦαによって刺激されるアロマターゼ活性と拮抗する相対的な能力を、用量応答研究において比較した（図３および図５）。さらに、２−ｍｅＯＥ２、２−ｍｅＯＥ３の１６α−ヒドロキシ誘導体（これは、微小管には結合しないようである（１４））が、ＴＮＦαによって刺激されるアロマターゼ活性を阻害する能力もまた試験した。
【００９０】
パクリタキセル、２−ｍｅＯＥ２、および２−ＭｅＯＥＭＡＴＥは、ＴＮＦαによって刺激されるアロマターゼを阻害したが、パクリタキセルはより強力なアンタゴニストであることが明らかであった。０．１μＭのパクリタキセルは、９０％まで刺激を阻害したが、一方、この濃度で２−ｍｅＯＥ２は、５１％まで刺激をわずかに減少させた。２−ＭｅＯＥ３は、試験した最も高い濃度でいくらかの阻害効果を示したが、５μＭではアロマターゼ活性のＴＮＦα刺激を有意には減少させなかった。
【００９１】
（考察）
この研究による結果は、微小管の安定性を変更する薬剤を明らかにし、パクリタキセル、２−ｍｅＯＥ２、および２−ＭｅＯＥＭＡＴＥが、基底のアロマターゼ活性だけではなく、ＴＮＦαによって刺激される活性をも大きく減少させることを明らかにした。パクリタキセルは、乳癌の処置において使用されるが、本発明者らが知っている限りでは、これが、基底のアロマターゼ活性およびサイトカインによって刺激されるアロマターゼ活性を阻害するその能力を実証する最初の報告である。この特性は制限され、微小骨格に対して種々の影響を有する、コルヒチンまたはサイトカラシンＢのような微小管安定剤は、ＴＮＦαによって刺激されるアアロマターゼ活性を阻害することが不可能であった。
【００９２】
ＴＮＦα、ＩＬ−６＋ＩＬ−６ｓＲ、およびＰＧＥ２は、皮下脂肪または乳房組織に由来する線維芽細胞中のアロマターゼ活性を調節し得る限りは、同定された３つの主要な因子である。微小管は、サイトカインレセプターの合成のため、または血漿膜へのそれらの輸送のために必要とされ得る（１５）。従って、おそらく、パクリタキセル、２−ｍｅＯＥ２、および２−ＭｅＯＥＭＡＴＥが、ＴＮＦα、ＩＬ−６、またはＰＧＥ_２がアロマターゼ活性を刺激する能力に関して有する効果もまた、それらのシグナル伝達に関与しているレセプターの合成／輸送に関する効果から、生じ得る。パクリタキセル、２−ｍｅＯＥ２、および２−ＭｅＯＥＭＡＴＥの基底（すなわち、未刺激）のアロマターゼ活性を減少させる能力は、アロマターゼ活性に対する、サイトカインおよびＰＧＥ_２の自己分泌／パラ分泌作用（これは、これらの線維芽細胞によって産生されることが公知である）をブロックすることによって生じ得る。
【００９３】
パクリタキセルは、乳癌の処置のために使用されるが、その毒性が、その長期間の使用を防ぐ。２−ｍｅＯＥ２（内因性のエストロゲン代謝物）および２−ＭｅＯＥＭＡＴＥがパクリタキセルと同様の特性を有し得るという知見は、それらが、考慮される治療可能性を有し得ることを示唆する（１７）。マウスに対する２−ｍｅＯＥ２の経口投与は、Ｂ_１６黒色腫とともに接種され、Ｍｅｔｈ　Ａ肉腫またはＭＤＡ−ＭＢ−４３５乳癌細胞は、腫瘍の増殖を有意に減少させた（１８、１９）。
【００９４】
この研究による結果はまた、免疫系が免疫刺激の役割を発達し得る可能性のある機構を示唆する。２−ｍｅＯＥ２または２−ＭｅＯＥＭＡＴＥの適切な産生および／または投与の存在下では、乳房組織中のサイトカインレセプターを下方制御し、そしてそれによってアロマターゼ活性のサイトカインの刺激を阻害した。２−ｍｅＯＥ２または２−ＭｅＯＥＭＡＴＥの減少した産生および／または投与によって、サイトカインが乳房組織中でのエストロゲンの合成を刺激することを可能にする。Ｂｒａｄｌｏｗおよび彼の共同研究者らは、２−ヒドロキシエストロゲンの形成の減少、および１６α−ヒドロキシ代謝物の合成の増大が、乳癌の増大した危険性に関連するという説得力のある証拠を得た（２０、２１）。２−ｍｅＯＥ２の１６α−ヒドロキシ誘導体がＴＮＦαによって刺激されるアロマターゼ活性を抑制する制限された能力のみを有するという本研究における観察は、Ｂｒａｄｌｏｗの知見を支持するようである。
【００９５】
脂肪組織から培養した間質の線維芽細胞は、脂肪細胞に分化する能力を有する。ＴＮＦαは、線維芽細胞中のアロマターゼ活性を刺激するが、脂肪細胞へのそれらの分化を阻害する。高濃度のエストラジオール（１０〜１００μＭ）は、脂肪間質細胞中のＴＮＦαによって刺激されるアロマターゼ活性を阻害し、そしてフィードバックループがこれらの細胞中の過剰なエストロゲンの合成を妨げ得ると仮定されている（２２）。ペルオキシソームプロリエレーター（ｐｒｏｌｉｅｒａｔｏｒ）によって活性化されるレセプターγ（ＰＰＡＲγ）リガンド（例えば、チオゾリジネジオン（ｔｈｉｏｚｏｌｉｄｉｎｅｄｉｏｎｅ））もまた、脂肪細胞の分化を刺激し得、そしてまたＴＮＦαによって刺激されるアロマターゼ活性を阻害する。高濃度のエストラジオールが、ヒトの脂肪間質細胞中のＴＮＦαによって刺激されるアロマターゼ活性を阻害するために必要であるので、エストラジオールが２−ｍｅＯＥ２への変換後に作用し得るという推測が試みられている。
【００９６】
本発明の種々の改変およびバリエーションが、本発明の範囲および精神を逸脱することなく、当業者に明らかである。本発明は、特異的な好ましい実施形態と組合せて記載されているが、特許請求の範囲における本発明は、このような特異的な実施形態に過度に限定されるべきではないことが、理解されるはずである。実際、化学、生物学、または関連する分野の当業者に明らかである、本発明を実行するための記載されている様式の種々の改変が、以下の特許請求の範囲の範囲内にあることが意図される。
【００９７】
（参考文献）
【００９８】
【表１】

（付録Ｉ）
（２−メトキシエストロン−３−Ｏ−スルファメート（２−メトキシＥＭＡＴＥ）の合成）
無水ジメチルホルムアミド中の２メトキシエストロンの溶液を、塩化ナトリウムで０℃で処理することによって、２−メトキシＥＭＡＴＥを合成した。水素を発生させた後に、スルファモイルクロリド（２当量）を添加し、そして反応混合物を、一晩室温で暖めた。化合物を、シリカゲルフラッシュクロマトグラフィーによって精製し（これは、ＴＬＣにおいて単一の純粋なスポットであった）そして十分な分光学的データおよび微量分析データを示した。
【００９９】
これに関して、２−メトキシエストロン（７５ｍｇ、０．２５０ｍｍｏｌ）は、粗生成物（１０３ｍｇ）を生じ、これらをシリカ（５０ｇ）で、クロロホルム／アセトン（８：１）を使用して分画し、そして第２の画分のエバポレーションによって青白い白色の残渣（８３ｍｇ、８１％）を得た。これを酢酸エチル／ヘキサン（１：２）中で再結晶して、１を白色の結晶（６９ｍｇ）として得た。ｍ．ｐ．＝１７７〜１８０℃、クロロホルム／アセトン８：１および４：１のぞれぞれについてＲ_ｔ＝０．２９および０．５４、そして酢酸エチル／ヘキサン２：１および１：１のぞれぞれについてＲ_ｔ＝０．０．４６および０．３１。
【０１００】
【化１１】

本発明は、以下に示す図面を参照して、例示のみの目的で、さらに記載される。
【図面の簡単な説明】
【図１】
乳房組織の線維芽細胞中でのパクリタキセル（Ｐａｘ）による、基底のアロマターゼ活性およびＴＮＦαによって刺激されるの阻害。パクリタキセルを、２％の裸の（ｓｔｒｉｐｐｅｄ）ウシ胎仔血清中で２４時間培養した細胞に対して添加した。ＴＮＦαを、デキサメタゾン（１００ｎｍｏｌ／ｌ）の存在下で添加し、そして細胞を同じ培地中でさらに４８時間培養した。コントロールおよびパクリタキセルを伴うがＴＮＦαを伴わない細胞をまた、４８時間の間デキサメタゾンの存在下で培養した。アロマターゼ活性を、リン酸緩衝化生理食塩水で細胞を洗浄した後、インタクトな単層中で測定した。（平均±ＳＤ、ｎ＝３；ａ、ｐ＜０．００１の対コントロール；ｂ、ｐ＜０．００１対ＴＮＦαで刺激したアロマターゼ活性）。
【図２】
パクリタキセル（Ｐａｘ、１０μＭ）または２−メトキシエストラジオール（２−ｍｅＯＥ、１０μＭ）による、線維芽細胞における、ＴＮＦα（２０ｎｇ／ｍｌ）、ＩＬ−６＋ＩＬ−６ｓＲ（５０ｎｇ＋１００ｎｇ／ｍｌ）、またはＰＥＧ_２（１０μＭ）で刺激したアロマターゼ活性の阻害。（平均±ＳＤ、ｎ＝３）。使用した実験プロトコールは、図１の説明に記載したものである。ＴＮＦα、ＩＬ６＋ＩＬ−６ｓＲ、またはＰＥＧ_２で４８時間処理した細胞中のアロマターゼ活性は、コントロールの細胞中よりも有意に高かった（ｐ＜０．０１〜ｐ＜０．００１）。全てのインヒビターが、パクリタキセルまたは２−メトキシエストラジオールの非存在下でＴＮＦαで刺激した細胞中のアロマターゼ活性と比較して、有意（ｐ＜０．００１）であった。
【図３】
線維芽細胞中の、パクリタキセル（Ｐａｘ）、２−メトキシエストラジオール（２−ｍｅＯＥ２）、または２−メトキシエストリオール（２−ｍｅＯＥ３）による、ＴＮＦαによって刺激されるアロマターゼ活性の阻害についての用量応答（ＴＮＦαによって刺激される活性の％として表される）。（平均±ＳＤ、ｎ＝３）。使用した実験プロトコールは、図１の説明に記載した。２メトキシエストリオールを除いて、全ての化合物が、５μＭ（ＮＳ）で、アロマターゼ活性のＴＮＦα刺激を有意に阻害した（ｐ＜０．００１）。
【図４】
ＴＮＦα、ＩＬ−６＋ＩＬ−６ｓＲ、またはＰＥＧ２によるアロマターゼ活性の刺激をブロックする化合物の能力。
【図５】
ＴＮＦαによって刺激されるアロマターゼ活性の阻害についての用量応答。

Claims (20)

1. 腫瘍壊死因子α（ＴＮＦα）によって刺激されるアロマターゼ活性の阻害のための医薬品の製造のための、以下：
   （ｉ）微小管安定剤；
   （ｉｉ）微小管崩壊因子；
   （ｉｉｉ）式Ａ−Ｂの化合物であって、ここで、Ａがオキシヒドロカルビル基であり、そしてＢが環式基である、化合物；および
   （ｉｖ）式Ｃ−Ｄの化合物であって、ここで、Ｃがスルファメート基であり、そしてＤが環式基である、化合物、
   からなる群より選択される材料の、使用。
2. 前記（ｉｉｉ）が式Ｃ−Ｄ−Ｅの化合物である、請求項１に記載の使用であって、ここで、Ｃがスルファメート基であり、Ｄが環式基であり、そしてＥがオキシヒドロカルビル基である、使用。
3. 前記環式基が多環式環構造を有する、請求項１または２に記載の使用。
4. 前記基Ａおよび／または基Ｃおよび／または基Ｅが前記環に連結しているかまたは該環に付着している、請求項２または３に記載の使用。
5. 前記多環式環構造が３個の６員環を含む、請求項３または４の記載の使用。
6. 前記基Ａおよび／または基Ｃおよび／または基Ｅが、前記多環式環構造の同じ環に付着している、請求項３、４、または５に記載の使用。
7. 前記多環式環構造がステロイド環構造である、請求項３から６のいずれか１項に記載の使用。
8. 前記基Ａもしくは基Ｃおよび／または基Ｅが、互いにオルト位で本発明の環式化合物の同じ環に付着している、請求項２から７のいずれか１項に記載の使用。
9. 前記基Ａまたは基Ｅが、ステロイド構造のＡ環の２位に付着している、請求項７または８に記載の使用。
10. 前記基Ｃが、ステロイド構造のＡ環の３位に付着している、請求項７から９のいずれか１項に記載の使用。
11. 前記基Ａが式Ｃ_１−６Ｏ（例えば、Ｃ_１−３Ｏ）である、請求項１から１０のいずれか１項に記載の使用。
12. 前記基Ａがアルコキシである、請求項１から１１のいずれか１項に記載の使用。
13. 前記基Ａが、ステロイド環構造の２位のメトキシ置換基である、請求項７から１２のいずれか１項に記載の使用。
14. 前記基Ｃが以下の式：
    

    

    の基であって、ここで、Ｒ_１およびＲ_２のそれぞれが、Ｈまたはヒドロカルビル基から独立して選択される、請求項１から１３のいずれか１項に記載の使用。
15. 前記Ｒ_１およびＲ_２が、Ｈまたはアルキル、シクロアルキル、アルケニル、およびアリールから独立して選択されるか、あるいはともにアルキレンを示し、ここで、あるいは、それぞれのアルキルまたはシクロアルキルまたはアルケニルが、必要に応じて１つ以上のヘテロ原子または基を含む、請求項１４に記載の使用。
16. 前記Ｒ_１およびＲ_２の少なくとも１つがＨである、請求項１４または１５に記載の使用。
17. 前記（ｉｖ）が、エストロン−３−Ｏ−スルファメートのＣ_１−６（例えば、Ｃ_１−３）アルコキシ誘導体、好ましくは、エストロン−３−Ｏ−スルファメートの２−Ｃ_１−６アルコキシ誘導体である、請求項１から１６のいずれか１項に記載の使用。
18. 前記（ｉｖ）が２−メトキシエストロン−３−Ｏ−スルファメートである、請求項１から１７のいずれか１項に記載の使用。
19. 前記（ｉｉ）がパクリタキセルである、請求項１から１８のいずれか１項に記載の使用。
20. 前記（ｉｉｉ）が２−メトキシエストラジオールである、請求項１から１９のいずれか１項に記載の使用。

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