JP2004512345A - 受容体アンタゴニスト−脂質コンジュゲートおよびそれを含有するデリバリービヒクル - Google Patents

Abstract

疾患部位でアップレギュレートされる受容体に対する非生物学的で生体模倣性のアンタゴニストを含むターゲティング・リガンドを含んでなる、リポソームのような小胞性薬物デリバリービヒクルが開示される。

Description

【０００１】
発明の分野
本発明は、疾患部位にてアップレギュレートされる受容体に対する非生物学的で生体模倣性のアンタゴニストを含むターゲティング・リガンド（ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｌｉｇａｎｄ）を含んでなる、リポソームなどの小胞性薬物デリバリービヒクルに関する。
【０００２】
発明の背景
リポソーム、すなわち、両親媒性のベシクル形成脂質よりなる１以上の脂質二重層を含んでなる球形ベシクルは、種々の治療薬の生体内投与に用いられる。リポソーム投与形態は、特に、毒性副作用を有する傾向にある治療用物質、例えば、抗癌薬の送達に有用である。特に商業上有用なリポソームは、単核食細胞系による取りこみを回避する長期循環性リポソームである。かかるリポソームの例は、ＳＴＥＡＬＴＨ^Ｒ（登録商標）リポソームなどのリポソーム表面に親水性ポリマーを含むものである。
【０００３】
リポソームの部位特異的送達を提供するために研究が行われてきた。かかる研究において、ターゲティング・リガンドは、典型的にはリポソームの二重層を構成している脂質に結合することによって、リポソーム表面に接着させることができる。ターゲティング・リガンドとは、典型的に、抗体、抗体フラグメント、ペプチドおよび他の生物学的材料、例えば、ある種のビタミンおよび糖、特に抗体および抗体フラグメントを包含する。
【０００４】
しかしながら、かかる生物学的リガンドの使用はある種の不利益を有する。抗体および抗体フラグメントは、崩壊、リポソームの貯蔵寿命、製造および無欠性の問題を招きやすい。特に、一般的に、崩壊を最小限にするようにこれらの生物学的材料を特別に取り扱う必要がある。したがって、ターゲティング抗体または抗体フラグメントを含むリポソームは典型的に、リポソームの調製後にのみリポソーム外面に抗体材料を結合するので、付加的な製造工程を必要とする。さらに、このリガンドの後挿入がリポソーム二重層に欠陥をもたらし、その結果、ベシクルの漏れが生じ、許容可能な生産物の収量が減少し、または治療剤の投与がほとんど調節できなくなる可能性がある。さらに、抗体材料は潜在的に、免疫原性の問題を招く可能性がある。
【０００５】
ペプチドリガンドは他の問題を招く。例えば、ペプチドはしばしば、ペプチドと脂質のリポソーム表面での結合反応を調節するために、特別な化学的処理を必要とする。例えば、ペプチドは、脂質と反応可能ないくつかの遊離酸性アミノおよび／またはスルフヒドリル基を含んでいてもよい。ペプチドリガンドのリポソーム中への挿入の間にアミノ酸側鎖の保護、次いで脱保護工程が必要とされるか、または交差反応を回避するために他の化学作用が必要とされるかもしれない。さらに、ペプチドは費用がかさむ傾向にあり、同様に、抗体は免疫原性であることがあり、また、崩壊しやすく、特別な取り扱いを必要とする。
【０００６】
記載された他の生物学的リガンド材料、例えば、ある種のビタミンおよび糖は、同様な免疫原性の問題および複数の官能基を化学的に管理する必要性を招く可能性がある。
【０００７】
患者にとってより利用しやすいリポソーム治療物質を用いる治療を行うために、商業的規模において費用効率がよく、かつ、確実に生産できる標的化（ｔａｒｇｅｔｅｄ）リポソームを提供することが望まれた。特に、良好な貯蔵安定性および無欠性を有し、かつ、比較的単純なプロセスによって製造される標的化リポソームを提供することが望まれる。例えば、比較的簡単な製造プロセスを含むリポソームの調製の間のターゲティング・リガンドの挿入によって目標に導かれることのできるリポソームを提供することが望まれる。さらに、有意な免疫原性ポテンシャルを呈示せず、かつ、標的送達部位に対する良好な結合アフィニティーを有する標的化リポソームを提供することが望まれる。
【０００８】
また、ビトロネクチン（αｖβ_３）受容体などのインテグリンを包含するある種の受容体が、増殖中の内皮細胞の表面でアップレギュレートされることが知られている。また、癌性腫瘍の進行が新血管新生（脈管形成）によって特徴付けられる工程を含むこと、より詳細には、脈管形成が、突然変異細胞の小集団から悪性成長への腫瘍の遷移における決定的な段階であることが知られている。また、該脈管形成の阻害が、腫瘍進行および形成ならびに転移の進行を制限するであろうことが知られている。これに基づいて、抗−脈管形成剤が癌の治療に提案されてきた。例えば、αｖβ_３またはαｖβ_５受容体の遮断は増殖中の内皮細胞の死をもたらすので、αｖβ_３およびαｖβ_５受容体に結合するペプチド−薬物コンジュゲート（ｃｏｎｊｕｇａｔｅ）が非常に強力な抗−脈管形成化合物であることが明らかにされた。Ｐａｓｑｕａｌｉｎｉ， Ｒ．ら、Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ， Ｖｏｌ． １５， ｐｐ． ５４２−５４６ （１９９７）。
【０００９】
１以上のインテグリン、例えば、ビトロネクチン受容体（αｖβ_３）およびαｖβ_５受容体に選択的な非ペプチド受容体アンタゴニストもまた知られている。例えば、Ｎｉｃｏｌａｕ， Ｋ．Ｃ．ら、Ｄｅｓｉｇｎ， Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ａｎｄ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ Ｎｏｎｐｅｐｔｉｄｅ Ｉｎｔｅｇｒｉｎ ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｓ， Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ ＆ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ６ （１９９８） １１８５−１２０８を参照のこと。ＰＣＴ出願：１９９６年１月１１日に公開されたＷＯ９６／００７３０、１９９２年７月１０日に公開されたＷＯ９７／２４１１９、１９９８年４月９日に公開されたＷＯ９８／１４１９２、１９９８年７月１６日に公開されたＷＯ９８／３０５４２、１９９９年４月１日に公開されたＷＯ９９／１５５０８、１９９９年９月１６日に公開されたＷＯ９９／０５２３２、２０００年６月１５日に公開されたＷＯ００／３３８３８、１９９７年１月１６日に公開されたＷＯ９７／０１５４０、１９９９年４月１日に公開されたＷＯ９９／１５１７０、１９９９年４月１日に公開されたＷＯ９９／１５１７８、２０００年２月１７日に公開されたＷＯ００／０７５４４、１９９６年１月１１日に公開されたＷＯ９６／００５７４、１９９７年７月１０日に公開されたＷＯ９７／２４１２２、１９９７年７月１０日に公開されたＷＯ９７／２４１２４および１９９９年２月４日に公開されたＷＯ９９／０５１０７を包含する近年のＰＣＴ出願公開公報は、ビトロネクチン受容体を阻害し、炎症、癌、心血管障害、例えばアテローム性動脈硬化症および再狭窄、および／または骨再吸収が要因である疾患、例えば骨粗鬆症の治療に有用な医薬上活性な化合物を開示している。ビトロネクチン受容体の阻害剤もまた、２０００年６月２２日に公開されたＷＯ００／３５８８７に開示されている。
【００１０】
本発明は、治療用リポソームが、リポソーム中に組み込まれた非生物学的で生体模倣性のリガンドによって疾患部位へ導かれることができるということを見出したことを含む。非生物学的で生体模倣性のターゲティング・リガンドを含むかかるリポソームは、種々の生物学的リガンドを含むリポソームの製造に典型的に必要とされるプロセスと比べて、商業規模においてより経済的、かつ、確実に製造でき、良好な貯蔵寿命、無欠性および比較的低い免疫原性ポテンシャルを有する。
【００１１】
本発明は、また、疾患部位に存在する増殖中の内皮細胞の表面にてアップレギュレートされる受容体、例えば、αｖβ_３またはαｖβ_５受容体に対する非生物学的で生体模倣性のアンタゴニストを含むリポソームの投与によって、脈管形成によって特徴付けられる疾患を効果的に治療または診断できることを見出したことを含む。
【００１２】
発明の概要
本発明は、その脂質二重層にコンジュゲートを結合させたリポソームであって、ここに、該コンジュゲートが（ａ）極性頭部基および疎水性尾部を有するベシクル形成脂質および（ｂ）ベシクル形成脂質の極性頭部基に直接または間接的に化学結合した、疾患部位にてアップレギュレートされる受容体に対する非生物学的で生体模倣性のアンタゴニストを含むリポソームに関する。
アンタゴニストは好ましくは、炎症、感染または腫瘍部位の管内皮においてアップレギュレートされる受容体に結合し、より好ましくは、インテグリン受容体アンタゴニストであり、最も好ましくは、ビトロネクチン受容体アンタゴニストである。
【００１３】
コンジュゲートは、好ましくはさらに、近位末端および遠位末端を有する親水性ポリマーを含み、ここに、該ポリマーは、その近位末端にてベシクル形成脂質コンジュゲートの極性頭部基に化学結合しており、その遠位末端にてアンタゴニストに化学結合している。ポリアルキルエーテル、例えば、ポリオキシエチレングリコール、およびそのアルコキシ−キャップ付加した類似物が好ましい親水性ポリマーである。
リポソームは、好ましくは、治療的または診断的活性な薬剤を含み、より好ましくは、抗−新成物剤、抗−炎症剤、抗−感染剤、画像診断剤およびその組み合わせから選択される。本発明は、特に、カンプトセシンおよび特にトポテカン（ｔｏｐｏｔｅｃａｎ）のような抗−新成物剤の投与によく適する。
【００１４】
コンジュゲートは、有利には、リポソームの調製の間にリポソーム中に挿入される。コンジュゲートは、別法では、予め形成されたリポソーム中に挿入してもよい。どちらの具体例においても、コンジュゲートを予め形成させてもよく、またはその場で形成させてもよい。
本発明はまた、該コンジュゲートに関する。
【００１５】
本発明は、また、受容体のアップレギュレートによって特徴付けられる疾患の治療または診断方法であって、安全かつ有効量のかかるリポソーム（ここに、アンタゴニストはアップレギュレートされた受容体に対して結合アフィニティーを有する）をその必要のある患者に投与することを特徴とする方法に関する。好ましい具体例において、受容体は、炎症、感染または腫瘍部位の管内皮においてアップレギュレートされ、疾患は、骨関節炎、慢性関節リウマチ、糖尿病性網膜症、血管腫、乾癬、再狭窄または癌性腫瘍など、脈管形成によって特徴付けられる。好ましい受容体は、インテグリンであり、より好ましくはビトロネクチン受容体であり、好ましいアンタゴニストはインテグリンアンタゴニストであり、特にビトロネクチン受容体アンタゴニストである。
本発明は、また、かかるリポソームおよび医薬上許容される担体または希釈剤を含んでなる医薬組成物に関する。
【００１６】
詳細な記載
発行された特許、公開および未公開特許出願および他の出版物を包含する本明細書中に引用されたまたは言及された全ての文書は、これにより、あたかも完全に示されるかの如く、出典明示により本明細書の一部とされる。
本発明のある特定の構成要素、例えば、脂質および活性薬剤は、ある特定の分類にしたがって本明細書中で分類される。構成要素は１以上のクラスに属しうるので、特定のクラスにおけるそれらの一覧が限定を意図しないことは明らかであろう。
【００１７】
本発明の好ましい薬物デリバリービヒクルは、単層状および多重層状リポソームを包含するリポソームである。単層状または単一層状リポソームは、１つの閉じたコンパートメントを明確にする脂質二分子膜よりなる球形ベシクルである。二分子膜は、脂質の２つの層、すなわち、外部の水性環境に配向した親水性頭部およびリポソーム内部に配向した疎水性尾部を有する脂質分子の外部層；およびその頭部がリポソームの水性内部方向を向き、その尾部が外部脂質層の尾部方向を向くように脂質分子が配向された、外部層の真下に直接置かれる内部層より構成される。多重層リポソームは、１より多くの閉じたコンパートメントを明確にする１より多くの脂質二分子膜よりなる球形ベシクルである。該膜は、同一中心に配置されて、まるでタマネギのようにコンパートメントによって分離されている。
【００１８】
リポソームは、当該分野で知られているような、好ましくは２つの炭化水素鎖（例えば、アシル鎖）および極性または非極性頭部基、典型的には極性の頭部基を有する１以上のベシクル形成脂質材料を含む。適当なベシクル形成脂質は：
（１）リン脂質、例えば：
（ａ）ホスファチジルコリン［ＰＣ］（例えば、Ｌ−α−ジパルミトイルホスファチジルコリン［ＤＰＰＣ］、Ｌ−α−ジミリストイルホスファチジルコリン［ＤＭＰＣ］、１−パルミトイル−２−オレイルホスファチジルコリン［ＰＯＰＣ］、水素添加した大豆ホスファチジルコリン［ＨＳＰＣ］およびＬ−α−ジステアロイルホスファチジルコリン［ＤＳＰＣ］）；
（ｂ）ホスファチジルグリセロール（例えば、Ｌ−α−ジミリストイルホスファチジルグリセロール）；
（ｃ）ホスファチジル−エタノールアミン［ＰＥ］（例えば、ジステアリルホスファチジルエタノールアミン［ＤＳＰＥ］、ジミリストイルホスファチジルエタノールアミン［ＤＭＰＥ］）；
（ｄ）ホスファチジルイノシトール［ＰＩ］；
（ｅ）ホスファチジン酸［ＰＡ］；および
（ｆ）ホスファチジルセリン；
【００１９】
（２）ステロール（例えば、コレステロールおよび関連するステロール）；
（３）糖脂質（例えば、セレブロシド、ガングリオシド）；
（４）カチオン性脂質（例えば、１９９９年６月１７日に公開されたＰａｔｒｉｃｋ ＣａｍｉｌｌｅｒｉらのＷＯ９９／２９７１２に開示されるものを包含するジェミニ界面活性剤）；
（５）スフィンゴ脂質（例えば、スフィンゴミエリン［ＳＭ］およびセラミド）；
（６）グリセロ脂質（例えば、中性または非中性ジアシルグリセロール、トリアシルグリセロール）；および
（７）前記の脂質のいずれかの親水性ポリマー誘導体（例えば、後記のようなもの）
よりなる群から選択されうる。
【００２０】
ベシクル形成脂質は、例えば、より大きいまたはより小さい剛性、流動性、浸透性、機械的強度、血液循環半減期、血清安定性などを有するリポソームを提供するように、既知の原理にしたがって当業者によって選択されうる。
【００２１】
好ましい具体例において、リポソームは、親水性ポリマー、より好ましくは非抗原性の親水性ポリマーで誘導体化された少なくとも１つのベシクル形成脂質を含む。親水性ポリマーを含むリポソームは、血液循環時間が増加し、それにより、かかるポリマーを含有しないリポソームと比べて、標的部位へのリポソームの送達が改善される傾向にある。
【００２２】
適当な親水性ポリマーは、合成および天然のポリマーを包含する。合成ポリマーは、ホモポリマーおよびブロックまたはランダムコポリマーを包含する。適当な親水性合成ポリマーは、ポリアルキル（例えば、Ｃ１−４）エーテルおよびアルコキシ（例えば、Ｃ１−４）−キャップ付加したその類似体；ポリビニルピロリドン；ポリビニルアルキル（例えば、メチルなどのＣ１−４）エーテル；ポリアルキル（例えば、メチル、エチル、プロピルなどのＣ１−４）オキサゾリン；ポリヒドロキシアルキル（例えば、メチル、エチル、プロピルなどのＣ１−４）オキサゾリン；ポリアルキル（例えば、メト−、ジメト−などのＣ１−４）アクリルアミド；ポリヒドロキシアルキル（例えば、プロピルメト−などのＣ１−４）アクリルアミド；ポリヒドロキシアルキル（例えば、エチル−、プロピルメト−などのＣ１−４）アクリレート；ヒドロキシアルキル（例えば、メチル−、エチル−などのＣ１−４）セルロースを包含する。天然親水性ポリマーは、ポリシアル酸およびその類似体、ポリアスパルトアミドおよび親水性ペプチド配列を包含する。例えば、ポリシアル酸の使用は、１９９８年１２月８日に発行されたＧｒｅｇｏｒｙ Ｇｒｅｇｏｒｉａｄｉｓの米国特許第５，８４６，９５１号に記載されている。
【００２３】
好ましくは、ポリアルキルエーテルおよびそのアルコキシ−キャップ付加した類似体、例えば、ポリオキシエチレングリコール、ポリオキシプロピレングリコール、ポリオキシエチレン／プロピレングリコール、およびメトキシ−またはエトキシ−キャップ付加したその類似体である。ポリオキシエチレングリコールがより好ましく、分子量約３００−７０００を有するものがさらに好ましい。
【００２４】
適当な親水性ポリマー、その調製およびリポソームにおける使用は、例えば、１９９１年５月７日に発行されたＷｏｏｄｌｅらの米国特許第５，０１３，５５６号および米国特許第５，３９５，６１９号に記載されている。かかる親水性ポリマーを含むリポソームは当該分野でよく知られており、立体安定化させたまたはＳＴＥＡＬＴＨ^Ｒ（登録商標）リポソームとして既知のものを包含する。例えば、Ｌａｓｉｃ， Ｄ．Ｄ．， 「リポソームの医学的応用における近年の発展：癌治療および生体内遺伝子デリバリーにおける立体安定化されたリポソーム」（Ｒｅｃｅｎｔ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｓ ｉｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ： Ｓｔｅｒｉｃａｌｌｙ Ｓｔａｂｉｌｉｚｅｄ Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ ａｎｄ Ｇｅｎｅ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｉｎ Ｖｉｖｏ）， Ｊ． Ｃｏｎｔｒｏｌ Ｒｅｌｅａｓｅ， Ｖｏｌ ４８， Ｉｓｓｕｅ ２−３， ｐｐ． ２０３−２２２ （１９９７）を参照のこと。本発明における使用に適当な長期循環性リポソームおよびその成分もまた、Ｐａｐａｈａｄｊｏｐｏｕｌｏｓ Ｄ．ら、（１９９１）： 「立体安定化されたリポソーム：薬物動力学および抗腫瘍効力における改善」（Ｓｔｅｒｉｃａｌｌｙ ｓｔａｂｉｌｉｚｅｄ ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ： ｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔｓ ｉｎ ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ ａｎｄ ａｎｔｉｔｕｍｏｒ ｅｆｆｉｃａｃｙ．） Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ８８： １１４６０−１１４６４； Ｇａｂｉｚｏｎ Ａ．ら、（１９８８）： 「血中における長期循環時間を有し、腫瘍による取り込みが増加されたリポソーム処方」（Ｌｉｐｏｓｏｍｅ ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ ｗｉｔｈ ｐｒｏｌｏｎｇｅｄ ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ ｔｉｍｅ ｉｎ ｂｌｏｏｄ ａｎｄ ｅｎｈａｎｃｅ ｕｐｔａｋｅ ｂｙ ｔｕｍｏｒｓ．） Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ８５： ６９４９−６９５３； Ｈｕａｎｇ Ｓ．Ｋ．ら（１９９２）： 「Ｃ−２６結腸癌を有するマウスにおける立体安定化されたリポソームの薬物動力学および治療薬」（Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ ａｎｄ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ ｏｆ ｓｔｅｒｉｃａｌｌｙ ｓｔａｂｉｌｉｚｅｄ ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ ｉｎ ｍｉｃｅ ｂｅａｒｉｎｇ Ｃ−２６ ｃｏｌｏｎ ｃａｒｃｉｎｏｍａ． Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅａｓｅｒｃｈ ５２： ６７７４−６７８１； Ｗｅｂｂ Ｍ．Ｓ．ら（１９９５）： 「スフィンゴミエリン−コレステロールリポソームは、ネズミおよびヒト腫瘍モデルにおけるビンクリスチンの薬物動力学および治療特性を有意に増加する」（Ｓｐｈｉｎｇｏｍｙｅｌｉｎ−ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｅｎｈａｎｃｅ ｔｈｅ ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃ ａｎｄ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ ｖｉｎｃｒｉｓｔｉｎｅ ｉｎ ｍｕｒｉｎｅ ａｎｄ ｈｕｍａｎ ｔｕｍｏｕｒ ｍｏｄｅｌｓ．） Ｂｒｉｔｉｓｈ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ ７２： ８９５−９０４； Ｎｏｒｔｈｆｅｌｔ Ｄ．Ｗ．ら（１９９６）： 「表面結合ポリエチレングリコールを含有するリポソーム中に包まれたドキソルビシン：ＡＩＤＳ関連カポジ肉腫患者における薬物動力学、腫瘍局在化および安全性」（Ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ ｅｎｃａｐｓｕｌａｔｅｄ ｉｎ ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ｓｕｒｆａｃｅ−ｂｏｕｎｄ ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅ ｇｌｙｃｏｌ： ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ， ｔｕｍｏｕｒ ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ， ａｎｄ ｓａｆｅｔｙ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ＡＩＤＳ−ｒｅｌａｔｅｄ Ｋａｐｏｓｉ’ｓ Ｓａｒｃｏｍａ． Ｊ． Ｃｌｉｎ． Ｐｈａｒｍａｃｏｌ． ３６：５５−６３； Ｇｉｌｌ Ｐ．Ｓ．ら（１９９５）： 「リポソームダウノルビシンのＩ／ＩＩ相臨床および薬物動力学的評価」（Ｐｈａｓｅ Ｉ／ＩＩ ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｎｄ ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ｌｉｐｏｓｏｍａｌ ｄａｕｎｏｒｕｂｉｃｉｎ．） Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ １３： ９９６−１００３において記載されている。
【００２５】
好ましい具体例において、リポソームは、ＨＳＰＣ、ＤＳＰＣ、ＤＰＰＣ、ＤＭＰＣ、ＰＯＰＣ、スフィンゴミエリン、ＥｇｇＰＣ、所望によりコレステロール、および所望によりＰＥＧ修飾された（ＰＥＧｙｌａｔｅｄ）脂質、例えば、ＰＥＧ修飾されたＤＳＰＥまたはＰＥＧ修飾されたＤＭＰＥよりなる群から選択される脂質材料を含む。
本発明の薬物デリバリービヒクルは、疾患部位にてアップレギュレートされる受容体に対する１以上のアンタゴニストを含む。該アンタゴニストは、受容体に結合できる有機分子である。該アンタゴニストは非生物学的であり、生物学的供給源から単離されない、または由来しない合成材料である。かくして、本発明は、生物学的供給源から単離される、または由来するペプチド、抗体、抗体フラグメント、ビタミンおよび糖を除外する。該アンタゴニストは、生体模倣性であり、故に、それらは受容体に結合する。
【００２６】
好ましいアンタゴニストは、目的の受容体に対する高い選択性および高い結合アフィニティーを有する。適当なアンタゴニストは、本明細書に記載のコンジュゲートの形成において脂質、およびもし用いるならば、所望により、親水性ポリマーおよび／または他の結合部分に結合するための官能基を含む。したがって、該アンタゴニストは、受容体アンタゴニスト鋳型を含むと記載することができ、本明細書で使用される場合、これは、疾患部位にてアップレギュレートされる受容体に対するアンタゴニストのコア構造を示し、該コアは、本明細書に記載のコンジュゲートの形成において脂質およびもし用いるならば、所望により、親水性ポリマーおよび／または他の結合部分との結合のための官能基で置換されている。
【００２７】
本発明における使用に適当な非生物学的で生体模倣性のアンタゴニストは、炎症、感染または腫瘍部位の管内皮においてアップレギュレートされる受容体に結合するものを包含する。炎症、感染または腫瘍部位の管内皮においてアップレギュレートされる受容体に結合する受容体の例は、インテグリン受容体、例えば、αＶβ３、αＶβ５およびα５β１、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）受容体、ハーセプチン、Ｔｉｅ１受容体、Ｔｉｅ２受容体、ＩＣＡＭ１、葉酸（Ｆｏｌａｔｅ）受容体、塩基性繊維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦ）受容体、上皮細胞増殖因子（ＥＧＦ）受容体、管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）受容体、ラミニン（Ｌａｍｉｎｉｎ）受容体、エンドグリン（Ｅｎｄｏｇｌｉｎ）、管細胞接着分子ＶＣＡＭ−１、Ｅ−セレクチン、およびＰ−セレクチンである。
【００２８】
適当な非生物学的で生体模倣性のアンタゴニストは：
（１）ＹＩＧＳＲ−ＮＨ２の類似体（Ｚｈａｏ Ｍ．， Ｋｌｅｉｎｍａｎ ＨＫ， およびＭｏｋｏｔｏｆｆ Ｍ．， Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ａｎｄ Ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ Ｐａｒｔｉａｌ Ｒｅｔｒｏ−Ｉｎｖｅｒｓｏ Ａｎａｌｏｇｓ ｏｆ ｔｈｅ Ａｎｔｉｍｅｔａｓｔａｔｉｃ Ｌａｍｉｎｉｎ−Ｄｅｒｉｖｅｄ Ｐｅｐｔｉｄｅ， ＹＩＧＳＲ−ＮＨ２． Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｅｐｔｉｄｅ ＆ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ４９（３）：２４０−２５３， １９９７ Ｍａｒに記載のようなラミニン受容体のペプチド模倣性阻害剤）；
（２）ＰＤ１５６７０７およびその誘導体（例えば、Ｈａｒｌａｎｄ ＳＰ．， Ｋｕｃ ＲＥ．， Ｐｉｃｋａｒｄ ＪＤ．， Ｄａｖｅｎｐｏｒｔ ＡＰ． Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｎ （Ａ） Ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ｉｎ Ｈｕｍａｎ Ｇｌｉｏｍａｓ ａｎｄ Ｍｅｎｉｎｇｉｏｍａｓ， ｗｉｔｈ Ｈｉｇｈ Ａｆｆｉｎｉｔｙ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ ＰＤＩ１５６７０７． Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇｅｒｙ． ４３（４）：８９０−８９８， １９９８ Ｏｃｔ．に記載のようなもの）；
（３）受容体αＶβ３（ビトロネクチン受容体）、αＶβ５およびα５β１に対するアンタゴニストを包含するインテグリン受容体アンタゴニスト
を包含する。
【００２９】
適当なアンタゴニストは、前記のコンジュゲートを形成するために脂質または任意の親水性ポリマーもしくは結合部分に結合するための官能基を含むものであるか、または受容体アンタゴニスト鋳型を含み、かかる官能基を含むように既知の方法によって誘導体化できるものである。インテグリン受容体アンタゴニストが好ましく、受容体αＶβ３、αＶβ５およびα５β１、および特にαＶβ３に対するアンタゴニストがより好ましい。かかるアンタゴニストは、ＲＧＤ模倣物であり、前記のコンジュゲートの形成において脂質、およびもし用いられるならば、所望により、親水性ポリマーおよび／または他の結合部分に結合するための官能基を含むであろう。好ましい官能基は、第１級脂肪族（例えば、Ｃ３−Ｃ１８）アミン、カルボン酸、硫酸塩またはスルフヒドリル、より好ましくは、アミンまたはカルボン酸である。かかる官能基を有するＲＧＤ模倣物は、当該分野で既知であるか、または既知のＲＧＤ模倣物から通常の合成化学を用いて容易に調製される。当業者に理解されるように、かかる官能基の取り込みは、実質的に親化合物のＲＧＤ模倣特徴を保持するように設計されるであろう。
【００３０】
例えば、本発明における使用に適応できるＲＧＤ模倣物は、Ｎｉｃｏｌａｕ， Ｋ．Ｃ．ら、「非ペプチドインテグリンアンタゴニストの設計、合成および生物学的評価」（Ｄｅｓｉｇｎ， Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ａｎｄ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ Ｎｏｎｐｅｐｔｉｄｅ Ｉｎｔｅｇｒｉｎ Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｓ）， Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ ＆ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ６ （１９９８） １１８５−１２０８および１９９６年１月１１日に公開されたＰＣＴ出願ＷＯ９６／００７３０；１９９２年７月１０日に公開されたＷＯ９７／２４１１９；１９９８年４月９日に公開されたＷＯ９８／１４１９２；１９９８年７月１６日に公開されたＷＯ９８／３０５４２；１９９９年４月１日に公開されたＷＯ９９／１５５０８；１９９９年９月１６日に公開されたＷＯ９９／０５２３２；２０００年６月１５日に公開されたＷＯ００／３３８３８；１９９７年１月１６日に公開されたＷＯ９７／０１５４０；１９９９年４月１日に公開されたＷＯ９９／１５１７０；１９９９年４月１日に公開されたＷＯ９９／１５１７８；２０００年２月１７日に公開されたＷＯ００／０７５４４；１９９６年１月１１日に公開されたＷＯ９６／００５７４；１９９７年７月１０日に公開されたＷＯ９７／２４１２２；１９９７年７月１０日に公開されたＷＯ９７／２４１２４；１９９９年２月４日に公開されたＷＯ９９／０５１０７；２０００年９月７日に出願されたＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＵＳ００／２４５１４号；２０００年６月２２日に公開されたＷＯ００／３５８８７；米国特許第５，９２９，１２０号；およびＷ．Ｈ． Ｍｉｌｌｅｒら、「インテグリンαＶβ３（ビトロネクチン受容体）の小分子型アンタゴニストの同定および生体内での効力」（Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｎ ｖｉｖｏ Ｅｆｆｉｃａｃｙ ｏｆ Ｓｍａｌｌ−Ｍｏｌｅｃｕｌｅ Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｓ ｏｆ Ｉｎｔｅｇｒｉｎ αＶβ３（ｔｈｅ Ｖｉｔｒｏｎｅｃｔｉｎ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ））， Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ Ｔｏｄａｙ， Ｖｏｌ．５， ２０００年９月１日発行，ｐｐ３９７−４０８に記載されたインテグリン受容体アンタゴニストから選択されうる。
【００３１】
ビトロネクチン受容体アンタゴニスト（ＶＲＡ）の例は、構造式：
【化４】

【化５】

［構造式（Ｉ）−（ＶＩ）中、
ＲはＮＨ_２、ＣＯＯＨおよびＳＨから選択され、
Ｒ１は：
【化６】

で示される基から選択され、
Ｒ２はＨまたは１−４Ｃアルキル、特にＨまたはＣＨ３であり、および
ｎは０−２０、特に０−５、例えば、１−５の整数である］
によって示される化合物を包含する。
【００３２】
好ましい具体例において、ビトロネクチン受容体アンタゴニストは構造：
【化７】

を有する。
【００３３】
別の具体例において、アンタゴニストは、構造式：
【化８】

で示されるアミノ誘導体である。
【００３４】
該化合物およびその合成は、米国特許第５，９２９，１２０号に記載されている。アミノ誘導体は、当業者によって、フェニルスルホニルを水素で置換することによって調製できる。
【００３５】
好ましい具体例において、アンタゴニストは、極性頭部基および疎水性尾部を有する脂質材料に化学結合、好ましくは共有結合して、受容体アンタゴニスト−脂質コンジュゲートを形成する。好ましい具体例において、該コンジュゲートは、脂質材料、該脂質の極性頭部基に化学結合、好ましくは共有結合した親水性ポリマー、および該親水性ポリマーに化学結合、好ましくは共有結合したアンタゴニストを含む。該コンジュゲートは新規な化合物であり、本発明のリポソームの調製における中間体として有用である。したがって、該コンジュゲートは本発明の一部を構成する。
【００３６】
コンジュゲートの形成に適当な脂質は、受容体アンタゴニストに結合するための官能基、およびもし該コンジュゲートにおいて用いられるならば、本明細書に記載の親水性ポリマーまたは他の結合部分を含むか、またはそれらを含むように容易に誘導体化される前記のベシクル形成脂質材料を包含する。コンジュゲートにおいて使用されるベシクル形成脂質は、好ましくは、ジェミニ界面活性剤、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、他のグリセロ脂質およびスフィンゴ脂質（例えば、ＰＥＧ−セラミド）より選択される。
【００３７】
使用される場合、コンジュゲートを形成するのに適当な親水性ポリマーは、前記の親水性ポリマー、好ましくはポリアルキルエーテル、およびより好ましくはポリオキシエチレングリコールを包含する。親水性ポリマーは、リポソームの循環半減期の増加に役立つことのほか、リポソーム表面からアンタゴニストを離すスペーサーとして作用し、それにより、リポソームと標的部位との結合を増加させることになる。
【００３８】
親水性ポリマーに加えて、または親水性ポリマーに代えて、コンジュゲートは、例えば、リポソームと標的部位との結合の増加に役立つスペーサーとして作用するために、脂質およびアンタゴニストを化学結合している他の結合部分を含んでいてもよい。該結合部分は、脂質および受容体アンタゴニストを直接または間接的に結合しうる。すなわち、好ましいコンジュゲート構築物は、式：
脂質−Ｘ_ａ−（ポリマー）_ｂ−Ｙ_ｃ−アンタゴニスト
［式中、脂質は前記のような脂質材料であり、
Ｘは結合部分であり、
ポリマーは前記のような親水性ポリマーであり、
ＹはＸと同一または異なっていてもよい結合部分であり、
アンタゴニストは前記のような受容体アンタゴニストであり、
ａ、ｂおよびｃは独立して０または１であり、ここに、好ましくは、ａ、ｂおよびｃのうち少なくとも１つは１である］
で示されることができる。
【００３９】
適当な結合部分は、該部分を介して結合される成分と化学結合、好ましくは共有結合可能な官能基を有する。適当な結合部分は、ニトロフェニルカーボネート、コハク酸スクシンイミジル、オルトピリジル−ジスルフィド、ベンゾトリアゾールカーボネートおよびオキシカルボニルイミダゾールを包含する。コンジュゲートは、典型的に、該コンジュゲートの成分における酸、アルデヒド、ヒドロキシ、アミノ、チオまたはヒドラジド基間のアミド、チオエーテル、ヒドラゾンまたはイミノ基の形成を介する成分分子（すなわち、脂質、アンタゴニスト、任意の親水性ポリマー、および任意の結合部分）の共有結合によって形成される。アミド−結合は、生体安定性に好ましい。脂質、アンタゴニストおよび親水性ポリマーは、当該分野で既知の方法によって誘導体化でき、所望により、特定の反応基および結合を提供することができる。
【００４０】
親水性ポリマーと脂質を化学結合する方法、および選択されたリガンドとの反応のためにポリマーの遊離末端を活性化する方法は、当該分野で知られており、本発明において有用である。一般に、親水性ポリマーは、リガンドに存在する反応基、例えば、スルフヒドリル、アミン、アルデヒドまたはケトン基と結合可能な反応基を含有するように、その末端にて誘導体化される。親水性ポリマー末端反応基の例は、マレイミド、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）、ＮＨＳ−炭酸エステル、ヒドラジド、ヒドラジン、ヨードアセチルおよびジチオピリジンを包含する。適当なかかる技術および／または合成反応スキームは、米国特許第５，０１３，５５６号；第５，６３１，０１８号；第５，５２７，５２８号；および第５，３９５，６１９号およびＡｌｌｅｎ， Ｔ．Ｍ．ら、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａ ｅｔ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ Ａｃｔａ １２３７：９９−１０８ （１９９５）； Ｚａｌｉｐｓｋｙ， Ｓ．， Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ， ４（４）：２９６−２９９ （１９９３）； Ｚａｌｉｐｓｋｙ， Ｓ．ら、ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ． ３５３： ７１−７４ （１９９４）； Ｚａｌｉｐｓｋｙ， Ｓ．ら、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ， ７０５−７０８ （１９９５）； Ｚａｌｉｐｓｋｙ， Ｓ．， ＳＴＥＡＬＴＨ ＬＩＰＯＳＯＭＥＳ （Ｄ． ＬａｓｉｃおよびＦ． Ｍａｒｔｉｎｓ編）Ｃｈａｐｔｅｒ ９， ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ， Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ， ＦＬ （１９９５）に記載されている。
【００４１】
脂質および受容体アンタゴニストが直接結合している場合、一の具体例において、アンタゴニストは、当該分野で既知の方法、例えば、Ｂａｉｌｅｙ， Ａ．Ｌ．， Ｍｏｎｃｋ， Ｍ．Ａ．， Ｃｕｌｌｉｓ， Ｐ．Ｒ． ｐＨ−Ｉｎｄｕｃｅｄ Ｄｅｓｔａｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｌｉｐｉｄ Ｂｉｌａｙｅｒｓ Ｂｙ Ａ Ｌｉｐｏｐｅｐｔｉｄｅ Ｄｅｒｉｖｅｄ Ｆｒｏｍ Ｉｎｆｌｕｅｎｚａ Ｈｅｍａｇｇｌｕｔｉｎｉｎ． Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａ ｅｔ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ Ａｃｔａ． １３２４（２）： ２３２−４４， １９９７に記載のような方法にしたがって脂質上の遊離ヒドロキシル基と結合される遊離アミノ基を含む。
【００４２】
一の特定の具体例において、コンジュゲートは、近位末端および遠位末端を有する親水性ポリマーであって、その近位末端でベシクル形成脂質コンジュゲートの極性頭部基と化学結合しており、その遠位末端でアンタゴニストと化学結合しているポリマーを含む。かかるコンジュゲートのさらに特定の具体例において、親水性ポリマーは、ポリアルキルエーテルおよびアルコキシ−キャップ付加したその類似体（特にポリオキシエチレングリコールおよびメトキシ−またはエトキシ−キャップ付加したその類似体）、またはポリ（シアル酸）およびその類似体から選択される。
【００４３】
好ましいコンジュゲートは：
（１）ＰＥＧ修飾されたＤＳＰＥおよびビトロネクチン受容体アンタゴニスト（ＶＲＡ）（ここに、該ＰＥＧ基は該ＤＳＰＥおよび該アンタゴニストに結合する）または
（２）ＰＥＧ修飾されたジェミニ界面活性剤およびビトロネクチン受容体アンタゴニスト（ここに、該ＰＥＧ基は該ジェミニ界面活性剤および該アンタゴニストに結合する）、好ましくは、ＰＥＧ修飾されたＤＳＰＥおよびビトロネクチン受容体アンタゴニスト
を含む。
【００４４】
本発明の特に好ましいリポソームは：
・ＨＳＰＣ（１０−９０モル％）
コレステロール（０−６０モル％、また、約３０〜５０モル％）
ＰＥＧ−ＤＳＰＥ（０−２０モル％、また、０〜約５モル％）
ＶＲＡコンジュゲート（０．５−２０モル％）；
・ＤＳＰＣ（１０−９０モル％）
コレステロール（０−６０モル％、また、約３０〜５０モル％）
ＰＥＧ−ＤＳＰＥ（０−２０モル％、また、０〜約５モル％）
ＶＲＡコンジュゲート（０．５−２０モル％）；
・ＰＯＰＣ（１０−９０モル％）
コレステロール（０−６０モル％、また、約３０〜５０モル％）
ＰＥＧ−ＤＳＰＥ（０−２０モル％、また、０〜約５モル％）
ＶＲＡコンジュゲート（０．５−２０モル％）；
・スフィンゴミエリン（１０−９０モル％）
コレステロール（０−６０モル％、また、約３０〜５０モル％）
ＰＥＧ−ＤＳＰＥ（０−２０モル％、また、０〜約５モル％）
ＶＲＡコンジュゲート（０．５−２０モル％）；
・ＰＯＰＣ（８０−９９．５モル％）
ＰＥＧ−ＤＳＰＥ（０−２０モル％、また、０〜約５モル％）
ＶＲＡコンジュゲート（０．５−２０モル％）；または
・ＥｇｇＰＣ（８０−９９．５モル％）
ＰＥＧ−ＤＳＰＥ（０−２０モル％、また、０〜約５モル％）
ＶＲＡコンジュゲート（０．５−２０モル％）
を含む。
【００４５】
リポソームの調製は、当該分野でよく知られており、かかる既知の方法を本発明において使用してもよい。一般に、リポソーム形成は、粉末形態のベシクル形成脂質混合物を調製し、該混合物を有機溶媒中に溶解し、該溶液をフリーズドライ（凍結乾燥）し、痕跡溶媒を除去し、混合物をバッファーで復元して多重層状ベシクルを形成し、所望により、該溶液をフィルターを介して押出して大きいまたは小さい単層状小胞を形成することを含む。ｐＨ、温度および総脂質比は、脂質二重層を形成するように、当該分野でよく知られた原理にしたがって選択される。本発明における使用に適当な脂質を形成する方法の例は、Ｌ．Ｄ． Ｍａｙｅｒら、「高速押出法によって製造された種々の大きさのベシクル」（Ｖｅｓｉｃｌｅｓ ｏｆ Ｖａｒｉａｂｌｅ Ｓｉｚｅｓ Ｐｒｏｄｕｃｅｄ ｂｙ ａ Ｒａｐｉｄ Ｅｘｔｒｕｓｉｏｎ Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅ）、 Ｂ．Ｂ．Ａ． ８５８（１）； １６１−８， １９８６； Ｓｚｏｋａ， Ｆ．， Ｊｒ．ら、Ａｎｎ． Ｒｅｖ． Ｂｉｏｐｈｙｓ． Ｂｉｏｅｎｇ． ９：４６７ （１９８０）；および米国特許第５，０７７，０５６号；第５，０１３，５５６号；第５，６３１，０１８号および第５，３９５，６１９号によって記載されるものを包含する。
【００４６】
製造を容易にするために、受容体アンタゴニスト−脂質コンジュゲートは、好ましくは、リポソームの調製の間にリポソーム中に組み込まれる。すなわち、コンジュゲートは二重層の形成の間に存在する。該具体例において、コンジュゲートは、前記のようなリポソームを調製するために使用される粉末状の脂質材料の混合物中に含まれる。得られるリポソームは、受容体アンタゴニストを脂質二重層の内側および外側の両方に存在させることになる。
【００４７】
本発明は、また、リポソームの脂質二重層の形成の間にアンタゴニストを１以上のベシクル形成脂質と共に、アンタゴニストおよびベシクル形成脂質を化学結合するのに十分な条件下でインキュベートすることによって、その場でコンジュゲートを形成することを意図する。別法では、リポソームの形成後にコンジュゲートをリポソーム中に組み込むことができる。すなわち、二重層の形成後にコンジュゲートを二重層に挿入する。該具体例において、アンタゴニストは、脂質二重層の外表面にのみ存在することになる。該具体例において、コンジュゲートを適当な溶媒中に溶解し、得られた溶液を穏かな混合（例えば、攪拌）下で、コンジュゲートがリポソームの脂質二重層中で会合するのに十分な時間、リポソームと共にインキュベートする。該具体例において、ＳＴＥＡＬＴＨ^Ｒリポソームなどを包含する市販のリポソームを用いてもよい。別法では、当該分野でよく知られた方法によってリポソームを調製してもよい。例えば、ターゲティング・コンジュゲートを予め形成させたリポソーム中に組み込む方法は、２０００年５月２日に発行されたＡｌｌｅｎらの米国特許第６，０５６，９７３号に示される。
【００４８】
本発明は、また、アンタゴニストを、ベシクル形成脂質を含む予め形成させたリポソームと共に、アンタゴニストおよびベシクル形成脂質を化学結合するのに十分な条件下でインキュベートすることによって、その場でコンジュゲートを形成させることを意図する。
【００４９】
他の態様において、本発明は、また、コンジュゲートおよびリポソームに関して本明細書に記載された必要な成分および任意の成分を直接または間接的に化学結合する工程によって形成されるコンジュゲートおよびリポソームに関する。
リポソームは、好ましくは、標的とされる受容体を呈示している疾患部位への送達のためにリポソーム中に捕捉された治療または診断剤を含む。もちろん、特定の薬剤の選択は、治療または診断されるべき疾患に依存して行われるであろう。活性薬剤の選択は、疾患部位の性質および該部位に向けられた薬剤の活性に基づいて行われ、例えば、当該分野で既知の方法にしたがって試験している化学感受性、または歴史的情報および許容される臨床診療に基づいていてもよい。
【００５０】
治療剤は、例えば、下記の活性：抗−脈管形成、抗−関節炎、抗−不整脈、抗−細菌、抗−コリン作用性、抗−凝固、抗−利尿、抗−癲癇、抗−真菌、抗−炎症、抗−代謝、抗−偏頭痛、抗−新生物形成、抗−寄生虫、抗−発熱、抗−発作、抗−血清、抗−痙攣、鎮痛、麻酔、ベータ−遮断、生物学的応答修飾、骨代謝調節、心血管、利尿、酵素、生殖能力増大、成長促進、止血、ホルモン、ホルモン抑制、高カルシウム血症緩和、低カルシウム血症緩和、低血糖緩和、高血糖緩和、免疫抑制、免疫増大、筋弛緩、神経伝達、副交感神経作用、交感神経作用、血漿増量（ｐｌａｓｍａ ｅｘｔｅｎｄｉｎｇ、ｐｌａｓｍａ ｅｘｐａｎｄｉｎｇ）、向精神、血栓崩壊および血管拡張活性を有する天然または合成化合物から選択されうる。細胞毒治療剤が特に本発明において有用である。
【００５１】
送達されることのできる治療剤の例は、トポイソメラーゼＩ阻害剤、トポイソメラーゼＩ／ＩＩ阻害剤、アントラサイクリン、ビンカアルカロイド、白金化合物、抗微生物剤、キナゾリン抗葉酸剤チミジレートシンターゼ阻害剤、増殖因子受容体阻害剤、メチオニンアミノペプチダーゼ−２阻害剤、脈管形成阻害剤、凝固剤、細胞表面溶解剤、治療遺伝子、治療遺伝子を含むプラスミド、ＣｏｘＩＩ阻害剤、ＲＮＡ−ポリメラーゼ阻害剤、シクロオキシゲナーゼ阻害剤、ステロイド、およびＮＳＡＩＤ（非ステロイド性抗炎症剤）を包含する。
【００５２】
治療剤の特定の例は：
トポイソメラーゼＩ−阻害性カンプトセシンおよびその類似体または誘導体、例えば、ＳＮ−３８（（＋）−（４Ｓ）−４，１１−ジエチル−４，９−ジヒドロキシ−１Ｈ−ピラノ［３’，４’：６，７］−インドリジン［１，２−ｂ］キノリン−３，１４（４Ｈ，１２Ｈ）−ジオン）；９−アミノカンプトセシン；トポテカン（ハイカムチン（ｈｙｃａｍｔｉｎ）；９−ジメチル−アミノメチル−１０−ヒドロキシカンプトセシン）；イリノテカン（ｉｒｉｎｏｔｅｃａｎ）（ＣＰＴ−１１；７−エチル−１０−［４−（１−ピペリジノ）−１−ピペリジノ］−カルボニルオキシ−カンプトセシン）（イン・ビボでＳＮ−３８に加水分解される）；７−エチルカンプトセシンおよびその誘導体（Ｓａｗａｄａ， Ｓ．ら、Ｃｈｅｍ． Ｐｈａｒｍ． Ｂｕｌｌ．， ４１（２）：３１０−３１３ （１９９３））；７−クロロメチル−１０，１１−メチレン−ジオキシ−カンプトセシン；およびその他（ＳＮ−２２，Ｋｕｎｉｍｏｔｏ， Ｔ．ら、Ｊ． Ｐｈａｒｍａｃｏｂｉｏｄｙｎ．， １０（３）：１４８−１５１ （１９８７）；Ｎ−ホルミルアミノ−１２，１３，ジヒドロ−１，１１−ジヒドロキシ−１３−（ベータ−Ｄ−グルコピラノシル）−５Ｈ−インドロ［２，３−ａ］ピロロ［３，４−ｃ］カルバゾール−５，７（６Ｈ）−ジオン（ＮＢ−５０６，Ｋａｎａｚａｗａ， Ｇ．ら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．， ５５ （１３）：２８０６−２８１３ （１９９５）；ＤＸ−８９５１ｆおよびルロテカン（ｌｕｒｏｔｅｃａｎ）（ＧＧ−２１１または７−（４−メチルピペラジノ−メチレン）−１０，１１−エチレンジオキシ−２０（Ｓ）−カンプセテシン）（Ｒｏｔｈｅｎｂｅｒｇ， Ｍ．Ｌ．， Ａｎｎ． Ｏｎｃｏｌ．， ８（９）：８３７−８５５ （１９９７）；７−（２−（Ｎ−イソプロピルアミノ）エチル）−（２０Ｓ）−カンプトセシン（ＣＫＤ６０２，Ｃｈｏｎｇ Ｋｕｎ Ｄａｎｇ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ， Ｓｅｏｕｌ Ｋｏｒｅａ）；
【００５３】
トポイソメラーゼＩ／ＩＩ−阻害性化合物、例えば、６−［［２−ジメチルアミノ）−エチル］アミノ］−３−ヒドロキシ−７Ｈ−インデノ［２，１−ｃ］キノリン−７−オン二塩酸塩、（ＴＡＳ−１０３、Ｕｔｓｕｇｉ Ｔ．ら、Ｊｐｎ． Ｊ． Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．， ８８（１０）：９９２−１００２ （１９９７））；３−メトキシ−１１Ｈ−ピリド［３’，４’−４，５］ピロロ［３，２−ｃ］キノリン−１，４−ジオン（ＡｚａｌＱＤ， Ｒｉｏｕ， Ｊ．Ｆ．ら、Ｍｏｌ． Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．， ４０（５）：６９９−７０６ （１９９１））；
アントラサイクリン、例えば、ドキソルビシン（ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ）、ダウノルビシン（ｄａｕｎｏｒｕｂｉｃｉｎ）、エピルビシン（ｅｐｉｒｕｂｉｃｉｎ）、ピラルビシン（ｐｉｒａｒｕｂｉｃｉｎ）およびイダルビシン（ｉｄａｒｕｂｉｃｉｎ）；
【００５４】
ビンカアルカロイド、例えば、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンロイロシン（ｖｉｎｌｅｕｒｏｓｉｎｅ）、ビンロジシン（ｖｉｎｒｏｄｉｓｉｎｅ）、ビンオレルビン（ｖｉｎｏｒｅｌｂｉｎｅ）およびビンデシン（ｖｉｎｄｅｓｉｎｅ）；
白金化合物、例えば、シスプラチン、カルボプラチン、オルマプラチン（ｏｒｍａｐｌａｔｉｎ）、オキサリプラチン（ｏｘａｌｉｐｌａｔｉｎ）、ゼニプラチン（ｚｅｎｉｐｌａｔｉｎ）、エンロプラチン（ｅｎｌｏｐｌａｔｉｎ）、ロバプラチン（ｌｏｂａｐｌａｔｉｎ）、スピロプラチン（ｓｐｉｒｏｐｌａｔｉｎ）、（（−）−（Ｒ）−２−アミノメチルピロリジン（１，１−シクロブタンジカルボキシラート）白金）、（ＳＰ−４−３（Ｒ）−１，１−シクロブタン−ジカルボキシラート（２−）−（２−メチル−１，４−ブタンジアミン−Ｎ，Ｎ’）白金）、ネダプラチン（ｎｅｄａｐｌａｔｉｎ）、および（ビス−アセタート−アミン−ジクロロ−シクロヘキシルアミン−白金（ＩＶ））；
【００５５】
抗−微生物剤、例えば、ゲンタマイシンおよびナイスタチン；
Ｈｅｎｎｅｑｕｉｎら、Ｑｕｉｎａｚｏｌｉｎｅ Ａｎｔｉｆｏｌａｔｅｓ Ｔｈｙｍｉｄｙｌａｔｅ Ｓｙｎｔｈａｓｅ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ：「Ｃ２−メチル置換基を修飾した脂肪親和性類似体」（Ｌｉｐｏｐｈｉｌｉｃ Ａｎａｌｏｇｕｅｓ ｗｉｔｈ Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｔｏ ｔｈｅ Ｃ２−Ｍｅｔｈｙｌ Ｓｕｂｓｔｉｔｕｅｎｔ） （１９９６） Ｊ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ． ３９， ６９５−７０４に記載されているようなキナゾリン抗葉酸剤チミジレートシンターゼ阻害剤；
Ｓｕｎ Ｌ．ら、「ＶＥＧＦ−Ｒ２（Ｆｌｋ−１／ＫＤＲ）、 ＦＧＦ−Ｒ１および ＰＤＧＦ−Ｒベータチロシンキナーゼに対する増殖因子受容体阻害剤としての置換３−［（４，５，６，７−テトラヒドロ−１Ｈ−インドール−２−イル）メチレン］−１，３−ジヒドロインドール−２−オンの同定」（Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｅｄ ３−［（４，５，６，７−Ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏ−１Ｈ−ｉｎｄｏｌ−２−ｙｌ）ｍｅｔｈｙｌｅｎｅ］−１，３−ｄｉｈｙｄｒｏｉｎｄｏｌ−２−ｏｎｅｓ ａｓ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｆｏｒ ＶＥＧＦ−Ｒ２（Ｆｌｋ−１／ＫＤＲ）， ＦＧＦ−Ｒ１， ａｎｄ ＰＤＧＦ−Ｒｂｅｔａ Ｔｙｒｏｓｉｎｅ Ｋｉｎａｓｅｓ） （２０００） Ｊ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ． ４３：２６５５−２６６３；およびＢｒｉｄｇｅｓ Ａ．Ｊ．ら、「チロシンキナーゼ阻害剤８。上皮細胞増殖因子の強力な阻害剤である４−（３−ブロモアニリノ）−６，７−ジメトキシキナゾリン類似体（ＰＤ １５３０３５）に関する異常に急勾配の構造−活性関係」（Ｔｙｒｏｓｉｎｅ Ｋｉｎａｓｅ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ． ８． Ａｎ Ｕｎｕｓｕａｌｌｙ Ｓｔｅｅｐ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ−Ａｃｔｉｖｉｔｙ Ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｆｏｒ Ａｎａｌｏｇｕｅｓ ｏｆ ４−（３−Ｂｒｏｍｏａｎｉｌｉｎｏ）−６，７−ｄｉｍｅｔｈｏｘｙｑｕｉｎａｚｏｌｉｎｅ （ＰＤ １５３０３５）， ａ Ｐｏｔｅｎｔ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｏｆ ｔｈｅ Ｅｐｉｄｅｒｍａｌ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ） （１９９６） Ｊ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ． ３９：２６７−２７６に記載されているような増殖因子受容体阻害剤；
【００５６】
脈管形成の阻害剤、例えば、アンジオスタチン、エンドスタチン、エチスタチン（ｅｃｈｉｓｔａｔｉｎ）、トロンボスポンジン、抗−脈管形成タンパク質を発現する遺伝子を含有するプラスミド、およびメチオニンアミノペプチダーゼ−２阻害剤、例えば、フマギリン、ＴＮＰ−１４０およびその誘導体；
および他の治療化合物、例えば、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、ミトキサンスロン（ｍｉｔｏｘａｎｔｈｒｏｎｅ）、シクロホスファミド、ミトマイシン、ストレプトゾシン、メクロレタミン塩酸塩、メルファラン、シクロホスファミド、トリエチレンチオホスホルアミド、カルムスチン、ロムスチン、セムスチン、ヒドロキシ尿素、チオグアニン、デカルバジン、プロカルバジン、ミトキサントロン、ステロイド、シトシンアラビノシド、メトトレキサート、アミノプテリン、モトマイシンＣ（ｍｏｔｏｍｙｃｉｎ Ｃ）、デメコルシン、エトプシド、ミトラマイシン（ｍｉｔｈｒａｍｙｃｉｎ）、ラッセルクサリヘビ毒液、活性化因子ＩＸ、活性化因子Ｘ、トロンビン、ホスホリパーゼＣ、コブラ毒因子［ＣＶＦ］およびシクロホスファミド
を包含する。
【００５７】
好ましい治療剤は：抗新成物剤、例えば、トポテカン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ビンクリスチン、ミトキサントロン、カルボプラチン、ＲＮＡ−ポリメラーゼ阻害剤およびその組み合わせ；抗炎症剤、例えば、シクロオキシゲナーゼ阻害剤、ステロイド、およびＮＳＡＩＤ；抗脈管形成剤、例えば、フマギリン、ｔｎｐ−１４０、シクロオキシゲナーゼ阻害剤、アンジオスタチン、エンドスタチンおよびエチスタチン；抗感染剤；およびその組み合わせから選択される。特定の具体例において、治療活性剤は、トポテカン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ビンクリスチン、ミトキサトロン、ＲＮＡ−ポリメラーゼ阻害剤、およびその組み合わせよりなる群から選択され、特にトポテカンである。他のカンプトセシンおよびカンプトセシン類似体もまた、特に有用な治療活性剤である。
【００５８】
診断剤の例は、常磁性、放射性または蛍光発光性イオンを包含する画像化のための造影剤を包含する。かかる診断剤の特定の例は、１９９９年１月５日に発行されたＴｈｏｒｐｅらの米国特許第５，８５５，８６６号に開示されるものを包含する。
【００５９】
治療および診断剤をリポソーム中に組み込む方法は、当該分野でよく知られており、本願発明において有用である。適当な方法は、脂質フィルムを水溶性薬剤の水性溶液で水和することによるか、または脂肪親和性薬剤を含有する脂質フィルムを水和することによる受動的捕捉、ｐＨ／イオン勾配負荷／保持（例えば、硫酸アンモニウム勾配）、ポリマー勾配負荷／保持、および逆相蒸発リポソーム調製を包含する。例えば、かかる薬剤を負荷するのに有用な方法は、Ｈａｒａｎ， Ｇ．ら、「リポソームにおける膜貫通型硫酸アンモニウム勾配は、両親媒性弱塩基の有効且つ安定な捕捉を生じる」（Ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ Ａｍｍｏｎｉｕｍ Ｓｕｌｆａｔｅ Ｇｒａｄｉｅｎｔｓ ｉｎ Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ Ｐｒｏｄｕｃｅ Ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ａｎｄ Ｓｔａｂｌｅ Ｅｎｔｒａｐｍｅｎｔ ｏｆ Ａｍｐｈｉｐａｔｈｉｃ Ｗｅａｋ Ｂａｓｅｓ）， Ｂｉｏｃｈｉｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ａｃｔａ， Ｖｏｌ １５１， ｐｐ２０１−２１５ （１９９３）；１９９１年１２月３１日に発行されたＢａｌｌｙらの米国特許第５，０７７，０５６号；１９９８年４月３０日に公開されたＰＣＴ公報第ＷＯ９８／１７２５６号；Ｚｈｕら、「ＳＴＥＡＬＴＨリポソーム中のビンクリスチン−ポリアニオン複合体の薬物動力学、毒性および抗腫瘍活性に対する効果」（Ｔｈｅ Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ Ｖｉｎｃｒｉｓｔｉｎｅ−Ｐｏｌｙａｎｉｏｎ Ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ ＩＮ ＳＴＥＡＬＴＨ Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ ｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ， Ｔｏｘｉｃｉｔｙ ａｎｄ Ａｎｔｉ−Ｔｕｍｏｒ Ａｃｔｉｖｉｔｙ）， Ｃａｎｃｅｒ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ （１９９６） ３９：１３８−１４２；およびＰＣＴ公報第ＷＯ００／２３０５２号に記載されている。該薬剤は、１以上のリポソームのコンパートメント中に組み込むことができ、またはリポソーム膜に結合することができる。
【００６０】
本発明のリポソームを使用するために、それらは通常、標準的な製薬技術にしたがって、医薬組成物中に処方される。したがって、本発明はまた、（ａ）有用な非毒性量の本明細書に記載のリポソームおよび（ｂ）医薬上許容される担体または希釈剤を含んでなる医薬組成物に関する。
本発明のリポソームおよびそれを組み込んでいる医薬組成物は、都合のよいことには、薬剤投与に通常使用される経路、例えば、非経口、経口、局所、噴霧（例えば、気管内）、皮下、筋内、病変内（例えば、腫瘍へ）、鼻腔内、眼内、および器官および静脈内への直接的な注射のいずれかによって投与されうる。非経口、特に、静脈内投与が好ましい。リポソームが抗−脈管形成活性を提供するように設計されている場合、好ましくは、投与は、静脈内投与を包含するリポソームの血流中循環を含む経路によるであろう。
【００６１】
リポソームは、常法にしたがってリポソームを標準的な医薬担体と組み合わせることによって調製される通常の投与形態において投与されうる。リポソームはまた、１以上の他の治療上活性な化合物または診断的化合物と組み合わせた通常の投薬において投与されうる。これらの手法は、所望の調製物に適当な材料を混合、粉砕および圧縮または溶解することを含みうる。
【００６２】
医薬上許容される担体または希釈剤の形態および特徴が、リポソームおよび組み合わせられるべき他の活性な薬剤の量、投与経路および他のよく知られた可変事項によって指示されることは明らかであろう。担体は、処方の他の材料と相溶性であり、そのレシピエントにとって有害ではないという意味で「許容可能」でなければならない。リポソームは、典型的に、水性セーラインまたはバッファーのような液体担体中の懸濁形態において提供されるであろう。一般に、医薬形態は、リポソームまたは負荷された化合物を所望の投与量および方針において送達するのに十分な量でリポソームを含むであろう。
【００６３】
リポソームは、治療されている病態を緩和または予防するために、または診断もしくはモニターされている疾患部位を画像化するために、所望の方針にしたがってリポソームまたは負荷化合物を所望の投与量で送達するのに十分な量で投与される。
【００６４】
リポソームの個々の投薬の最適量および間隔が、治療、診断またはモニターされている病態の性質および程度、投与の形態、経路および部位、および治療されている特定の患者によって決定されるであろうこと、およびかかる最適条件が従来技術によって決定できることは、当業者によって認識されるであろう。また、当業者が、治療の最適なクール、すなわち、所定の日数について１日に服用されるリポソームの投与回数を治療決定試験の従来のクールを用いて確かめることができることは、当業者によって認められるであろう。
【００６５】
一旦投与したならば、リポソームは標的組織に結合するか、または循環系によって標的組織へ運ばれ、そこで、該組織に結合する。標的組織部位にて、受容体アンタゴニスト自体が臨床的効力を示してもよい。すなわち、リポソーム自体が標的とされる受容体を呈示している疾患の治療に有用であってもよい。当業者に明らかなように、リポソームの選択は、既知の方法によって決定できるか、または疾患の歴史的情報に基づきうる患者の病的細胞上でのコンジュゲートと同種の受容体の発現に基づく。
さらに、または別法では、リポソームに付随した治療または診断剤が標的組織へ放出または放散され、そこで、その目的の機能を果たす。
【００６６】
例えば、疾患部位、例えば、炎症、感染または腫瘍部位の管内皮においてアップレギュレートされる受容体（例えば、ビトロネクチン受容体）に対する受容体アンタゴニストを含むリポソームは、新血管新生（脈管形成）によって特徴付けられる疾患の治療に有用である。かかる疾患は、骨関節炎および慢性関節リウマチ、糖尿病性網膜症、血管腫、乾癬、再狭窄および癌性腫瘍（充実性原発性腫瘍ならびに転移疾患）を包含する。該受容体アンタゴニストは、該疾患部位に存在するビトロネクチン受容体に結合して、病態または症状を支持する脈管構造の形成を阻害する。かかる疾患を治療または診断するために、リポソームは、好ましくは、抗−炎症剤、抗−新生物剤、抗−感染剤、抗−脈管形成剤、および／または画像診断剤よりなる群から選択される治療剤および／または診断剤を含むであろう。活性な薬剤の選択は、疾患部位の性質（例えば、腫瘍、炎症または感染）および該薬剤のその部位に対する活性（例えば、各々、抗−新生物、抗−炎症、抗−感染）に基づいて行われるであろう。特定の薬剤の選択は、当該分野で既知の方法にしたがって試験している化学感受性に基づいていてもよく、または歴史的情報および許容される臨床診療に基づいてもよい。例えば、トポテカンは卵巣癌に対して活性な薬剤であることが知られており、したがって、許容される臨床診療に基づく卵巣癌の治療に有用である。
【００６７】
実施例
下記の略語は実験の段落において使用される。
ＶＲＡ−ビトロネクチン受容体アンタゴニスト
ＤＳＰＥ−ジステアリルホスファチジルエタノールアミン
ＰＥＧ−ポリエチレングリコール
【００６８】
実施例１
ＶＲＡ （Ｓ）−７［［Ｎ−（４−アミノブチル）−Ｎ−（ベンゾイミダゾール−２−イルメチル）］アミノ］カルボニル−４−メチル−３−オキソ−２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン−２−酢酸：
一般
プロトン核磁気共鳴（^１Ｈ ＮＭＲ）スペクトルは、３００または４００ＭＨｚのいずれかで記録され、化学シフトは内部標準テトラメチルシラン（ＴＭＳ）から低磁場側への百万分率（δ）で報告される。質量スペクトルは、エレクトロスプレー（ＥＳ）イオン化技術を用いて得られる。元素分析は、Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｉｎｃ．， Ｗｈｉｔｅｈｏｕｓｅ， ＮＪによって行われる。全ての温度は摂氏で報告される。Ａｎａｌｔｅｃｈ Ｓｉｌｉｃａ Ｇｅｌ ＧＦおよびＥ． Ｍｅｒｃｋ Ｓｉｌｉｃａ Ｇｅｌ ６０ Ｆ−２５４薄層プレートを薄層クロマトグラフィーに用いる。フラッシュクロマトグラフィーは、Ｅ． Ｍｅｒｃｋ Ｋｉｅｓｅｌｇｅｌ ６０（２３０−４００メッシュ）シリカゲルにおいて行われる。分析および分取ＨＰＬＣは、Ｂｅｃｋｍａｎ クロマトグラフィーシステムにおいて行われる。ＯＤＳは、オクタデシルシリル誘導体化シリカゲルクロマトグラフィー支持体をいう。ＹＭＣ ＯＤＳ−ＡＱ^Ｒは、ＯＤＳクロマトグラフィー支持体であり、ＹＭＣ Ｃｏ． Ｌｔｄ．， Ｋｙｏｔｏ， Ｊａｐａｎの登録商標である。ＰＲＰ−１^Ｒは、ポリマー（スチレン−ジビニルベンゼン）クロマトグラフィー支持体であり、Ｈａｍｉｌｔｏｎ Ｃｏ．， Ｒｅｎｏ， Ｎｅｖａｄａの登録商標である。Ｃｅｌｉｔｅ^Ｒは、酸洗浄した珪藻土シリカよりなるフィルター補助剤であり、Ｍａｎｖｉｌｌｅ Ｃｏｒｐ．， Ｄｅｎｖｅｒ， Ｃｏｌｏｒａｄｏの登録商標である。
【００６９】
標題ＶＲＡは、下記のスキーム１にしたがって合成される。
スキーム１
【化９】

（ａ）４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）酪酸、ＥＤＣ、ＨＯＢｔ・Ｈ_２Ｏ、Ｅｔ_３Ｎ、ＤＭＦ（７４％）；
（ｂ）ＢＨ_３・ＴＨＦ、ＴＨＦ（１７％）；
（ｃ）７−カルボキシ−４−メチル−３−オキソ−２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン−２−酢酸メチル、ＥＤＣ、ＨＯＢｔ・Ｈ_２Ｏ、Ｅｔ_３Ｎ、ＤＭＦ（７８％）；
（ｄ）ジオキサン中４Ｍ ＨＣｌ、ＭｅＯＨ；
（ｅ）１．０Ｎ ＬｉＯＨ、ＭｅＯＨ、Ｈ_２Ｏ（２段階にわたって７９％）
【００７０】
ａ）Ｎ−（ベンゾイミダゾール−２−イルメチル）−４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）ブチルアミド
４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）酪酸（５．０ｇ、２４．６ミリモル）、２−アミノメチルベンゾイミダゾール二塩酸塩水和物（６．５ｇ、２９．５ミリモル）、ＥＤＣ（５．７ｇ、２９．５ミリモル）、ＨＯＢｔ・Ｈ_２Ｏ（３．９９ｇ、２９．５ミリモル）およびＥｔ_３Ｎ（１７ｍＬ、１２３ミリモル）を室温にてＤＭＦ（１２０ｍＬ）中で合わせる。反応物を１８時間攪拌し、次いで、濃縮乾固する。残渣をシリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィーによって精製して標題化合物を得る（６．０４ｇ、７４％）。
^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ_３）δ７．４０−７．８０ （ｍ， ２Ｈ）， ７．２９−７．３８ （ｍ， １Ｈ）， ７．２０−７．２７ （ｍ， ２Ｈ）， ４．７７−４．９０ （ｍ， １Ｈ）， ４．６９ （ｄ， Ｊ＝５．８ Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．１１−３．２２ （ｍ， ２Ｈ）， ２２０−２．３９ （ｍ， ２Ｈ）， １．７７−１．８８ （ｍ， ２Ｈ）， １．４４ （ｓ， ９Ｈ）
【００７１】
ｂ）Ｎ−（ベンゾイミダゾール−２−イルメチル）−Ｎ−［４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）ブチル］アミン
ボラン−テトラヒドロフラン複合体（ＴＨＦ中１．０Ｍ、５５ｍＬ、５５ミリモル）を室温にてゆっくりと、Ｎ−（ベンゾイミダゾール−２−イルメチル）−４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）ブチルアミド（６．０４ｇ、１８．２ミリモル）のＴＨＦ（９０ｍＬ）中懸濁液へ加える。得られる均一溶液を１８時間熱還流し、次いで室温に冷却する。ＥｔＯＨ中における５％ＡｃＯＨの溶液を加え、該溶液を１８時間攪拌する。得られる溶液を濃縮乾固し、残渣を飽和ＮａＨＣＯ_３中に溶解する。混合物をＣＨ_２Ｃｌ_２（４ｘ）で抽出し、合わせた有機層を乾燥させ（ＭｇＳＯ_４）、濃縮する。シリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィー（１０％ＭｅＯＨ／ＣＨ_２Ｃｌ_２）により標題化合物を淡黄褐色のゴムとして得る（９８５ｍｇ、１７％）。
^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ_３） δ７．５３−７．６３ （ｍ， ２Ｈ）， ７．１８−７．３０ （ｍ， ２Ｈ）， ４．１２ （ｓ， ２Ｈ）， ３．００−３．１８ （ｍ， ２Ｈ）， ２．６５−２．７５ （ｍ， ２Ｈ）， １．３５−１．６３ （ｍ， １３Ｈ）
【００７２】
ｃ）（Ｓ）−７−［［Ｎ−（ベンゾイミダゾール−２−イルメチル）−Ｎ−［４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）ブチル］アミノ］カルボニル−４−メチル−３−オキソ−２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン−２−酢酸メチル
７−カルボキシ−４−メチル−３−オキソ−２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン−２−酢酸メチルをＷｉｌｌｉａｍ Ｈ Ｍｉｌｌｅｒら：Ｅｎａｎｔｉｏｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ ＳＢ ２１４８５７， ａ Ｐｏｔｅｎｔ， Ｏｒａｌｌｙ Ａｃｔｉｖｅ， Ｎｏｎｐｅｐｔｉｄｅ Ｆｉｂｒｉｎｏｇｅｎ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔｅｒｓ （１９９５） ３６（５２）： ９４３３−９４３６に記載の方法によって合成する。
７−カルボキシ−４−メチル−３−オキソ−２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン−２−酢酸メチル（７５３ｍｇ、２．６ミリモル）、Ｎ−（ベンゾイミダゾール−２−イルメチル）−Ｎ−［４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）ブチル］アミン（９８５ｍｇ、３．１ミリモル）、ＥＤＣ（５９４ｍｇ、３．１ミリモル）、ＨＯＢｔ・Ｈ_２Ｏ（４１９ｍｇ、３．１ミリモル）およびＥｔ_３Ｎ（０．９０ｍＬ、６．５ミリモル）を室温にてＤＭＦ（１５ｍＬ）中で合わせる。反応物を１８時間攪拌し、次いで、濃縮乾固する。残渣をシリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィー（５％ＭｅＯＨ／ＣＨ_２Ｃｌ_２）によって精製して標題化合物を淡黄褐色の固体として得る（１．２ｇ、７８％）。
^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ_３） δ１０．５５ （ｂｒ ｓ， １Ｈ）， ７．７５ （ｄ， Ｊ＝８．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．４５ （ｄ， Ｊ＝８．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．２０−７．３２ （ｍ， ２Ｈ）， ７．１０−７．２０ （ｍ， ２Ｈ）， ６．５２ （ｄ， Ｊ＝８．１ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．４３ （ｄ， Ｊ＝１６．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．０２−５．１２ （ｍ， １Ｈ）， ４．７３−４．８５ （ｍ， ２Ｈ）， ４．５５−４．６５ （ｍ， １Ｈ）， ４．４９ （ｄ， Ｊ＝４．７ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．７４ （ｓ， ３Ｈ）， ３．７０ （ｄ， Ｊ＝１６．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．３６−３．４６ （ｍ， ２Ｈ）， ３．０４ （ｓ， ３Ｈ）， ２．９０−３．１０ （ｍ， ３Ｈ）， ２．６７ （ｄｄ， Ｊ＝１６．０， ６．４ Ｈｚ， １Ｈ）， １．６０−１．７５ （ｍ， ２Ｈ）， １．４３ （ｓ， ９Ｈ）， １．１７−１．３２ （ｍ， ２Ｈ）； ＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｅ ５９３ （Ｍ＋Ｈ）^＋
【００７３】
ｄ）（Ｓ）−７−［［Ｎ−（４−アミノブチル）−Ｎ−（ベンゾイミダゾール−２−イルメチル）］アミノ］カルボニル−４−メチル−３−オキソ−２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン−２−酢酸
ジオキサン（３０ｍＬ、１２０ミリモル）中の４Ｍ ＨＣｌを室温にて、（Ｓ）−７−［［Ｎ−（ベンゾイミダゾール−２−イルメチル）−Ｎ−［４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）ブチル］アミノ］カルボニル−４−メチル−３−オキソ−２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン−２−酢酸メチル（１．２ｇ、２ミリモル）のＭｅＯＨ（１０ｍＬ）中溶液に加える。２時間後、溶液を濃縮乾固してオフホワイト色の粉末を得る（１．２４ｇ）。該粉末をＭｅＯＨ／Ｈ_２Ｏ（１０ｍＬ）中に溶解し、１．０Ｎ ＬｉＯＨ（１０ｍＬ、１０ミリモル）を加える。反応物を室温で１８時間攪拌し、次いで濃縮乾固する。残渣をＨ_２Ｏ中に溶解し、１０％ＨＣｌを用いてｐＨを約５に調整する。沈殿した固体を吸引ろ過により収集し、Ｈ_２Ｏで洗浄する。高真空中での乾燥により標題化合物を白色固体として得る（７６０ｍｇ、７９％）。
^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ_３） δ７．４８−７．６８ （ｍ， ２Ｈ）， ７．０５−７．３５ （ｍ， ４Ｈ）， ６．５７ （ｄ， Ｊ＝８．２ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．５１ （ｄ， Ｊ＝１６．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．１２ （ｔ， Ｊ＝６．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．７０−５．００ （ｍ， ２Ｈ， 残渣溶媒シグナルによって隠れる）， ３．６２−３．９０ （ｍ， １Ｈ）， ３．４０−３．６２ （ｍ， ２Ｈ）， ２．９５ （ｓ， ３Ｈ）， ２．６９−３．００ （ｍ， ３Ｈ）， ２．４５ （ｄｄ， Ｊ＝１５．６， ６．６ Ｈｚ， １Ｈ）， １．６０−１．８０ （ｍ， ２Ｈ）， １．３０−１．６０ （ｍ， ２Ｈ）； ＭＳ（ＥＳ） ｍ／ｅ ４７９ （Ｍ＋Ｈ）^＋
分析、Ｃ_２５Ｈ_３０Ｎ_６Ｏ_４・２Ｈ_２Ｏの計算値：Ｃ，５８．３５；Ｈ，６．６３；Ｎ，１６．３３、実測値：Ｃ，５８．１７；Ｈ，６．６３；Ｎ，１６．１１
【００７４】
脂肪族アミノ基の代わりに機能的脂肪族カルボン酸基または脂肪族スルフヒドリル基を有するＶＲＡ類似体は、工程（ａ）において適当なカルボン酸を用い、工程（ｄ）において溶媒ジオキサン中の４Ｍ ＨＣｌ、ＣＨ_２Ｃｌ_２を用いて、同様の方法において調製できる。
【００７５】
別法では、標題ＶＲＡは下記のスキーム２にしたがって合成される。
スキーム２
【化１０】

（ａ）４−ブロモブチロニトリル、ＮａＨＣＯ_３、ＤＭＦ、ＲＴ（３５％）；
（ｂ）７−カルボキシ−４−メチル−３−オキソ−２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン−２−酢酸メチル、ＥＤＣ、ＨＯＢｔ・Ｈ_２Ｏ、ｉ−Ｐｒ_２ＮＥｔ、ＣＨ_３ＣＮ（７４％）；
（ｃ）２．５Ｎ ＮａＯＨ、ＭｅＯＨ（８１％）；
（ｄ）Ｈ_２、ラネーＮｉ、ＮＨ_４ＯＨ、ＭｅＯＨ（３３％）
【００７６】
ａ）４−［（ベンゾイミダゾール−２−イルメチル）アミノ］ブチロニトリル　２−アミノメチルベンゾイミダゾール二塩酸塩水和物（０．５ｇ、２．２７１７ミリモル）およびＮａＨＣＯ_３（０．６７ｇ、７．９５１ミリモル）の乾燥ＤＭＦ（１０ｍＬ）中攪拌混合物に、４−ブロモブチロニトリル（０．３７ｇ、２．４９８９ミリモル）を加える。室温で２４時間攪拌後、混合物を濃縮する。残渣をＨ_２Ｏ中に溶解し、ＣＨ_２Ｃｌ_２で抽出する。有機抽出物をＭｇＳＯ_４で乾燥し、濃縮し、シリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（５％ＭｅＯＨ／ＣＨ_２Ｃｌ_２）によって精製して標題化合物を茶色油として得る（０．１５ｇ、３５％）。
^１Ｈ ＮＭＲ （２５０ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ−ｄ_６） δ ７．５０ （ｍ， ２Ｈ）， ７．１４ （ｍ， ２Ｈ）， ４．１１ （ｓ， ２Ｈ）， ２．８５ （ｔ， Ｊ＝４ Ｈｚ， ２Ｈ）， ２．４５ （ｔ， Ｊ＝４ Ｈｚ， ２Ｈ）， １．８２ （ｍ， ２Ｈ）
【００７７】
ｂ）（Ｓ）−７−［［Ｎ−（ベンゾイミダゾール−２−イルメチル）−Ｎ−（３−シアノプロピル）］アミノ］カルボニル−４−メチル−３−オキソ−２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン−２−酢酸メチル
４−［（ベンゾイミダゾール−２−イルメチル）アミノ］ブチロニトリル（０．１５９ｇ、０．７４２２ミリモル）、７−カルボキシ−４−メチル−３−オキソ−２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン−２−酢酸メチル（０．２１７ｇ、０．７４２２ミリモル）、ＨＯＢｔ・Ｈ_２Ｏ（０．１２０ｇ、０．８９０６ミリモル）およびｉ−Ｐｒ_２ＮＥｔ（０．１９２ｇ、１．４８４４ミリモル）の乾燥ＣＨ_３ＣＮ（７ｍＬ）中の攪拌混合物に、ＥＤＣ（０．２６５ｇ、０．８９０６ミリモル）を加える。室温で４８時間攪拌後、混合物を濃縮する。残渣をＨ_２Ｏ中に溶解し、ＣＨ_２Ｃｌ_２で抽出する。有機層を飽和ＮａＨＣＯ_３およびブラインで連続洗浄し、ＭｇＳＯ_４で乾燥させ、濃縮して茶色油を得る。シリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（３％ＭｅＯＨ／ＣＨ_２Ｃｌ_２）により、標題化合物をオフホワイト色の泡沫（０．２６１ｇ、７４％）として得る。
^１Ｈ ＮＭＲ （２５０ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ−ｄ_６） δ ７．６２ （ｍ， １Ｈ）， ７．５０ （ｍ， １Ｈ）， ７．２５ （ｍ， ４Ｈ）， ６．５４ （ｄ， Ｊ＝８．３ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．４０ （ｄ， Ｊ＝３．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．４８ （ｄ， Ｊ＝１６ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．１５ （ｍ， １Ｈ）， ４．８４ （ｄ， Ｊ＝２．９ Ｈｚ， ２Ｈ）， ４．５２ （ｓ， ２Ｈ）， ３．８０ （ｄ， Ｊ＝１６ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．６０ （ｓ， ３Ｈ）， ３．４５ （ｔ， Ｊ＝ ８．７ Ｈｚ， ２Ｈ）， ２．８５ （ｔ， Ｊ＝８．７ Ｈｚ， ２Ｈ）， ２．７８ （ｄｄ， Ｊ＝ １６．４， ３．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ２．６６ （ｄｄ， Ｊ＝１６．４， ３．５ Ｈｚ， １Ｈ）， １．９５ （ｍ， ２Ｈ）
【００７８】
ｃ）（Ｓ）−７−［［Ｎ−（ベンゾイミダゾール−２−イルメチル）−Ｎ−（３−シアノプロピル）］アミノ］カルボニル−４−メチル−３−オキソ−２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン−２−酢酸
（Ｓ）−７−［［Ｎ−（ベンゾイミダゾール−２−イルメチル）−Ｎ−（３−シアノプロピル）］アミノ］カルボニル−４−メチル−３−オキソ−２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン−２−酢酸メチル（０．２６１ｇ、０．５４７８ミリモル）のＭｅＯＨ（５ｍＬ）中攪拌溶液に、２．５Ｎ ＮａＯＨ（０．７ｍＬ、１．６４３３ミリモル）を加える。室温で一晩攪拌後、混合物を濃縮する。残渣をＨ_２Ｏ中に溶解し、６Ｎ ＨＣｌを用いて溶液をｐＨ４まで酸性化する。白色固体をろ過し、乾燥させて標題化合物を得る（０．２１ｇ、８１％）。
^１Ｈ ＮＭＲ （２５０ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ−ｄ_６） δ ７．６２ （ｍ， １Ｈ）， ７．５０ （ｍ， １Ｈ）， ７．２５ （ｍ， ４Ｈ）， ６．５４ （ｄ， Ｊ＝８．３ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．４０ （ｄ， Ｊ＝３．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．４８ （ｄ， Ｊ＝１６ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．１５ （ｍ， １Ｈ）， ４．８４ （ｄ， Ｊ＝２．９ Ｈｚ， ２Ｈ）， ４．５２ （ｓ， ２Ｈ）， ３．８０ （ｄ， Ｊ＝１６ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．４５ （ｔ， Ｊ＝８．７ Ｈｚ， ２Ｈ）， ２．８５ （ｔ， Ｊ＝ ８．７ Ｈｚ， ２Ｈ）， ２．７８ （ｄｄ， Ｊ＝１６．４， ３．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ２．６６ （ｄｄ， Ｊ＝ １６．４， ３．５ Ｈｚ， １Ｈ）， １．９５ （ｍ， ２Ｈ）
【００７９】
ｄ）（Ｓ）−７−［［Ｎ−（４−アミノブチル）−Ｎ−（ベンゾイミダゾール−２−イルメチル）］アミノ］カルボニル−４−メチル−３−オキソ−２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン−２−酢酸
（Ｓ）−７−［［Ｎ−（ベンゾイミダゾール−２−イルメチル）−Ｎ−（３−シアノプロピル）］アミノ］カルボニル−４−メチル−３−オキソ−２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン−２−酢酸（０．２００ｇ、０．４３２５ミリモル）およびＮＨ_４ＯＨ（１ｍＬ、３０％溶液）のＭｅＯＨ（５ｍＬ）中混合物をラネーＮｉで室温にて２４時間水素化する。触媒をろ過し、ろ液を濃縮し、逆相クロマトグラフィー（０．１％ＴＦＡを含有する１０％ＣＨ_３ＣＮ／Ｈ_２Ｏ）によって精製して標題化合物をオフホワイト色の固体として得る（０．１００ｇ、３３％）。
^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ−ｄ_６） δ ７．８５ （ｍ， ２Ｈ）， ７．７５ （ｓ， ２Ｈ）， ７．６１ （ｍ， ２Ｈ）， ７．２０ （ｍ， ２Ｈ）， ６．６５ （ｄ， Ｊ＝８．３ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．４８ （ｄ， Ｊ＝１６ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．１５ （ｍ， １Ｈ）， ５．０５ （ｓ， ２Ｈ）， ３．８５ （ｄ， Ｊ＝１６ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．６５ （ｔ， Ｊ＝ ８．７ Ｈｚ， ２Ｈ）， ２．９５ （ｓ， ３Ｈ）， ２．７５ （ｄｄ， Ｊ＝ １６．４， ３．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ２．７０ （ｍ， ２Ｈ）， ２．５４ （ｄｄ， Ｊ＝１６．４， ３．５ Ｈｚ， １Ｈ）， １．７２ （ｍ， ２Ｈ）， １．４５ （ｍ， ２Ｈ）； ＩＲ （ＫＢｒ） ３４２５， ３０００， ３１００， １７２８， １６７５， １６３０， １６２５， １６１３ ｃｍ^−１； ＭＳ（ＥＳ） ｍ／ｅ ４７９ （Ｍ＋Ｈ）^＋
分析、Ｃ_２５Ｈ_３０Ｎ_６Ｏ_４・２ＣＦ_３ＣＯ_２Ｈの計算値；Ｃ，４９．３０；Ｈ，４．５６；Ｎ，１１．８９、実測値：Ｃ，４９．２２；Ｈ，４．８９；Ｎ，１１．８４
【００８０】
機能的脂肪族カルボン酸基または脂肪族スルフヒドリル基を有するＶＲＡは、例えば、下記のスキームにしたがって、標準的な合成化学技術を用いる同様の方法において調製される。
【００８１】
スキーム３
【化１１】

（ａ）ＥＤＣ、ＨＯＢｔ・Ｈ_２Ｏ、Ｅｔ_３Ｎ、ＤＭＦ；
（ｂ）ＢＨ_３・ＴＨＦ、ＴＨＦ；
（ｃ）７−カルボキシ−４−メチル−３−オキソ−２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン−２−酢酸メチル、ＥＤＣ、ＨＯＢｔ・Ｈ_２Ｏ、Ｅｔ_３Ｎ、ＤＭＦ；
（ｄ）ジオキサン中における４Ｍ ＨＣｌ、ＣＨ_２Ｃｌ_２
【００８２】
スキーム４
【化１２】

（ａ）ＥＤＣ、ＨＯＢｔ・Ｈ_２Ｏ、Ｅｔ_３Ｎ、ＤＭＦ；
（ｂ）ＢＨ_３・ＴＨＦ、ＴＨＦ；
（ｃ）７−カルボキシ−４−メチル−３−オキソ−２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン−２−酢酸メチル、ＥＤＣ、ＨＯＢｔ・Ｈ_２Ｏ、Ｅｔ_３Ｎ、ＤＭＦ；
（ｄ）ジオキサン中における４Ｍ ＨＣｌ、ＣＨ_２Ｃｌ_２；
（ｅ）１．０Ｎ ＬｉＯＨ、ＭｅＯＨ、Ｈ_２Ｏ
【００８３】
スキーム３によるＶＲＡは、ＶＲＡ遊離カルボン酸基を介して、例えば、１．０Ｎ ＬｉＯＨ、ＭｅＯＨ、Ｈ_２Ｏの存在下で、リポソーム形成脂質またはリポソームに結合する。スキーム４によるＶＲＡは、ＶＲＡ遊離スルフヒドリル基を介して、リポソーム形成脂質またはリポソームに結合する。
【００８４】
実施例２
ＶＲＡ−脂質コンジュゲートの調製
実施例１のＶＲＡを含むビトロネクチン受容体アンタゴニスト−脂質コンジュゲートの合成を図１に図示する。
【化１３】

（図１）
【００８５】
５０ｍｇのＶＲＡ（２）をＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＮＨＳ（１）（Ｓｈｅａｒｗａｔｅｒ Ｐｏｌｙｍｅｒｓ， Ｈｕｎｔｓｖｉｌｌｅ， ＡＬから市販されている）と１０ｍＬ ＤＭＳＯ中において反応させることによって、ＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＶＲＡを合成する。過剰量のＶＲＡ（１．２倍モル過剰）を用いる。ＶＲＡはＤＭＳＯ中に完全に溶解させる。ＤＭＳＯ中に予め溶解させたＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＮＨＳをＶＲＡ溶液に滴下する。該反応混合物を暗所において室温で一晩攪拌する。過剰のグリシン（５倍モル過剰）の添加により、不反応性ＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＮＨＳをクエンチする。反応混合物を４０ｍＬ０．１Ｍ ＭＥＳ（モルホリノエタンスルホン酸）セーラインバッファー（ｐＨ５．８）で希釈し、次いで、ＭＥＳバッファー（ｐＨ５．８）に対して透析して副産物、ＤＭＳＯおよび不反応性ＶＲＡを除去する（この時点で、不反応性ＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＮＨＳはＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＣＯＯＨに加水分解されるであろう）。次いで、反応混合物を水に対して透析し、次いで、凍結乾燥する。ＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＶＲＡの形成は、マトリックス支援レーザー脱離／イオン化（ｍａｔｒｉｘ−ａｓｓｉｓｔｅｄ−ｌａｓｅｒ−ｄｅｓｏｒｐｔｉｏｎ／ｉｏｎｉｚａｔｉｏｎ （ＭＡＬＤＩ））質量分析によって確認する：見積もりＭＷ（Ｄａ）＝４６２５；測定ＭＷ（Ｄａ）＝４３８０。ＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＣＯＯＨは、イオン交換または逆相クロマトグラフィーのいずれかを用いてＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＶＲＡから除去する。該コンジュゲートにおけるＶＲＡのＤＳＰＥに対する比率は１であるべきである。
【００８６】
実施例３
ＶＲＡ−標的化リポソームの調製
実施例２の脂質−ＶＲＡコンジュゲートを含むリポソームを下記のように調製する。脂質材料の組成を表１に示す。
【００８７】
【表１】

【００８８】
脂質材料は個々に重量を測り、適当な大きさの容器中で合わせる。該脂質を有機溶媒、例えば、ＣＨＣｌ_３／ＭｅＯＨ ９５／５ ｖ／ｖ、ベンゼン：ＭｅＯＨ ７０／３０ ｖ／ｖまたはエタノール中に完全に溶解させる。溶媒を蒸発させ（またはベンゼンメタノールの場合は凍結乾燥させ）、痕跡溶媒を高真空下で除去する。脂質フィルムを２０ｍＭ Ｈｅｐｅｓ、１５０ｍＭ ＮａＣｌ ｐＨ７．４（ＨＢＳ）を含有する水性バッファー中に６５℃で攪拌しながら再懸濁する。脂質懸濁を直径２−１００ｎｍのポリカーボネートフィルターを介して押出すことによってサイズ分類して直径〜１００ｎｍのベシクルを形成させる。
【００８９】
表２に示す成分から付加的なリポソームを調製する。表２は、標的モル％組成および使用される各成分の標的重量を反映する。
【００９０】
【表２】

＊ＰＥＧ３４００ＤＳＰＥ、Ｓｈｅａｒｗａｔｅｒ Ｐｏｌｙｍｅｒｓ， Ｈｕｎｔｓｖｉｌｌｅ， ＡＬからＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＮＨＳ、ＭＷ３４００として市販されている。
【００９１】
脂質材料は個々に重量を測り、適当な大きさの容器中で合わせる。該脂質を有機溶媒、例えば、ＣＨＣｌ_３／ＭｅＯＨ ９５／５ ｖ／ｖ、ベンゼン：ＭｅＯＨ ７０／３０ ｖ／ｖまたはエタノール中に完全に溶解させる。溶媒を蒸留させ（またはベンゼンメタノールの場合は凍結乾燥させ）、痕跡溶媒を高真空下で除去する。脂質フィルムをＴＲＩＳ緩衝化セーライン（ＴＢＳ：５０ｍＭ ＴＲＩＳ、１００ｍＭ ＮａＣｌ ｐＨ７．４）中に６５℃で攪拌しながら再懸濁させる。脂質懸濁を直径２−１００ｎｍのポリカーボネートフィルターを介して押出すことによってサイズ分類して、直径〜１００ｎｍのベシクルを形成させる。
【００９２】
リポソームは、当該分野で既知の技術を用いて、大きさおよび脂質組成について物理的に特徴付けられる：
ａ）動的光散乱による大きさ
試料をＨＢＳで１ｍＭに希釈し、Ｍａｌｖｅｒｎ Ｚｅｔａ−Ｓｉｚｅｒを用いて、標準的な動的光散乱（ゼータ−サイジング）を行う。
ｂ）ＨＰＬＣによる最終的な脂質組成
最終的な脂質組成を順相Ｚｏｒｂａｘ−ＳＩＬカラムを用いるＨＰＬＣ法によって決定する。脂質種は、ヘキサン：イソプロパノール：水−ヘキサン：イソプロパノール勾配において分離し；ピーク面積を同じ勾配において実施した標準との比較によって定量し、最終的な脂質組成の決定に用いる。
【００９３】
実施例４
本発明のリポソームのイン・ビトロ結合アフィニティー：
実施例３のリポソームを、ヒトαＶβ３またはαＶβ５に対するその結合アフィニティーについて、以前に記載されたイン・ビトロ固相結合アッセイ（Ｗｏｎｇ Ａ， Ｈｗａｎｇ ＳＭ， ＭｃＤｅｖｉｔｔ Ｐ， ＭｃＮｕｌｔｙ Ｄ， Ｓｔａｄｅｌ ＪＭ および Ｊｏｈａｎｓｏｎ Ｋ， 「（^３Ｈ） ＳＫ＆Ｆ−１０７２６０ 結合アッセイを用いるαｖβ３／リガンド相互作用の研究」（Ｓｔｕｄｉｅｓ ｏｎ ａｌｐｈａｖｂｅｔａ ３／ｌｉｇａｎｄ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ ｕｓｉｎｇ ａ （^３Ｈ） ＳＫ＆Ｆ−１０７２６０ ｂｉｎｄｉｎｇ ａｓｓａｙ） （１９９６） Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ５０（３）：５２９−５３７）を用いて試験する。
該リポソームの他の受容体に対する、または他のリガンドを含むリポソームの受容体に対するイン・ビトロ結合アフィニティーは、当該分野で既知のような受容体結合アッセイによって決定しうる。
本発明のリポソームは、ナノモルないしマイクロモル範囲の、好ましくはナノモル範囲の受容体結合アッセイにしたがうＫｉを有するものである。
【００９４】
実施例３にしたがって調製されたリポソーム、組成３ｐ−３ｓは、上記のＷｏｎｇら（（１９９６） Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ５０（３）：５２９−５３７）によって発表された結合アッセイにしたがって、下記のＫｉ値を示した。
【表３】

【００９５】
実施例５
正常および腫瘍を有する動物におけるリポソームのイン・ビボでの生体分布：　リポソームを、下記を除いて実施例３のとおり調製する。微量の^３Ｈ−標識化コレステリルヘキサデシルエーテル（ＣＨＥ）がリポソーム膜に含まれ、イン・ビボ実験のためのリポソームトレーサーとして用いられる；リポソームは、イン・ビボ投与の前に滅菌ろ過される。
リポソームの生体分布は、雌性Ｃ５７Ｂｌ／６正常または腫瘍を有するマウスにおいて試験される。マウスにリポソームの緩衝化懸濁液を外側尾静脈を介して〜１００ｍｇ／ｋｇ体重の投与量でボーラス静脈内注射する。動物を殺し、所定の時点スケジュール（すなわち、リポソーム投与後１、４、８、１２および２４時間）にしたがって、血液および組織を採取する。より詳細には、血液は心穿刺によって採血し、ＥＤＴＡ−被覆したミクロタイターチューブ中に置く。チューブをよく混合し、遠心分離によって血漿を全血から分離する。肺、肝臓、脾臓、心臓および腎臓を摘出し、Ｍｏｎｃｋ ＭＡ． Ｍｏｒｉ Ａ． Ｌｅｅ Ｄ． Ｔａｍ Ｐ． Ｗｈｅｅｌｅｒ ＪＪ． Ｃｕｌｌｉｓ ＰＲ． Ｓｃｈｅｒｒｅｒ Ｐ． （２０００） 「安定化したプラスミド−脂質粒子：静脈内注射後の薬物動力学および遠位腫瘍へのプラスミドデリバリー」（Ｓｔａｂｉｌｉｚｅｄ ｐｌａｓｍｉｄ−ｌｉｐｉｄ ｐａｒｔｉｃｌｅｓ： ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ ａｎｄ ｐｌａｓｍｉｄ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｔｏ ｄｉｓｔａｌ ｔｕｍｏｒｓ ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ ｉｎｔｒａｖｅｎｏｕｓ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ．） Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｄｒｕｇ Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ． ７（６）：４３９−５２， ２０００にしたがって、血漿および組織を放射能の存在について分析する。腫瘍組織は、標識されたリポソームの蓄積を示すはずである。
【００９６】
実施例６
本発明のリポソームを用いる卵巣癌の治療：
当該分野で既知のようなイオン勾配またはポリマー勾配負荷／保持技術を用いて、実施例３において調製されたリポソームにトポテカンを負荷する。リポソームの水性セーライン懸濁液を卵巣癌と診断された患者に静脈内投与して、癌性腫瘍の成長を阻害する。投与方針は、患者の臨床的状態および遊離の薬物としてのトポテカンの典型的な投与方針、すなわち、２１日サイクルで５日間のクールにわたり１回の３０分注入として投与される１．５ｍｇ／ｍ２を４サイクル繰り返すことを考慮して、当該分野で既知の方法によって決定される。例えば、投与方針は、２１日サイクルにおいて２週間につき１週間に１−３日のクールにわたり１回の３０分注入として１．５ｍｇ／ｍ２のトポテカンリポソーム投与を４サイクル繰り返すことである。

Claims (31)

1. 脂質二重層に結合したコンジュゲートを含んでなるリポソームであって、該コンジュゲートが、
   （ａ）極性頭部基および疎水性尾部を有するベシクル形成脂質および
   （ｂ）該ベシクル形成脂質の極性頭部基に直接または間接的に化学結合した、疾患部位にてアップレギュレートされる受容体に対する非生物学的で生体模倣性のアンタゴニスト
   を含むリポソーム。
2. コンジュゲートのベシクル形成脂質が、リン脂質、ステロール、糖脂質、カチオン性脂質、スフィンゴ脂質、グリセロ脂質、前記脂質のいずれかの親水性ポリマー誘導体およびその組み合わせよりなる群から選択される請求項１記載のリポソーム。
3. コンジュゲートのベシクル形成脂質が、ジェミニ界面活性剤、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、スフィンゴ脂質、グリセロ脂質、前記脂質のいずれかの親水性ポリマー誘導体、およびその組み合わせよりなる群から選択される請求項１記載のリポソーム。
4. コンジュゲートのベシクル形成脂質が、ジェミニ界面活性剤、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、スフィンゴ脂質およびグリセロ脂質よりなる群から選択される脂質の親水性ポリマー誘導体である請求項１記載のリポソーム。
5. コンジュゲートのベシクル形成脂質が、ホスファチジルエタノールアミンまたはジェミニ界面活性剤の親水性ポリマー誘導体である請求項１記載のリポソーム。
6. 親水性ポリマーが、ポリアルキルエーテル、ポリアルキルエーテルのアルコキシ−キャップ付加した類似体、ポリ（シアル）酸、およびポリ（シアル）酸の類似体から選択される請求項２〜５のいずれか１項記載のリポソーム。
7. 親水性ポリマーがポリオキシエチレングリコールである請求項６記載のリポソーム。
8. 非生物学的で生体模倣性のアンタゴニストが、炎症、感染または腫瘍部位の管内皮においてアップレギュレートされる受容体に対するアンタゴニストである前記請求項のいずれか１項記載のリポソーム。
9. 非生物学的で生体模倣性のアンタゴニストが、インテグリン受容体、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）／受容体、ハーセプチン、Ｔｉｅ１受容体、Ｔｉｅ２受容体、ＩＣＡＭ１、葉酸受容体、塩基性繊維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦ）受容体、上皮細胞増殖因子（ＥＧＦ）受容体、管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）受容体、ラミニン受容体、エンドグリン、管細胞接着分子ＶＣＡＭ−１、Ｅ−セレクチンおよびＰ−セレクチンよりなる群から選択される受容体に対するアンタゴニストである前記請求項のいずれか１項記載のリポソーム。
10. 非生物学的で生体模倣性のアンタゴニストが、αＶβ３、αＶβ５およびα５β１よりなる群から選択されるインテグリン受容体に対するアンタゴニストである請求項９記載のリポソーム。
11. 非生物学的で生体模倣性のアンタゴニストがビトロネクチン受容体（αＶβ３）アンタゴニストである請求項１０記載のリポソーム。
12. ビトロネクチン受容体アンタゴニストが式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、（ＩＶ）、（Ｖ）または（ＶＩ）：
    

    

    ［構造式（Ｉ）−（ＶＩ）中、
    ＲはＮＨ_２、ＣＯＯＨおよびＳＨから選択され、
    Ｒ１は：
    

    

    で示される基から選択され、
    Ｒ２はＨまたは１−４Ｃアルキルであり、および
    ｎは０−２０の整数である］
    で示される構造を有する化合物から選択される請求項１１記載のリポソーム。
13. ビトロネクチン受容体アンタゴニストが式：
    

    

    で示される構造を有する請求項１１記載のリポソーム。
14. さらに、ホスファチジルコリン、スフィンゴミエリンおよびその組み合わせよりなる群から選択されるベシクル形成脂質を含む前記請求項のいずれか１項記載のリポソーム。
15. ホスファチジルコリンがＨＳＰＣ、ＤＳＰＣ、ＤＰＰＣ、ＤＭＰＣ、ＰＯＰＣ、ＥｇｇＰＣおよびその組み合わせから選択される請求項１４記載のリポソーム。
16. さらにコレステロールを含む請求項１４または１５記載のリポソーム。
17. さらにＰＥＧ修飾された脂質を含む請求項１４、１５または１６のいずれか１項記載のリポソーム。
18. 実質的に、実施例３に関して定義された請求項１記載のリポソーム。
19. コンジュゲートがリポソーム二重層の形成の間に該二重層中に挿入される前記請求項のいずれか１項記載のリポソーム。
20. リポソーム中に捕捉された治療活性剤または画像診断に適当な造影剤を含む前記請求項のいずれか１項記載のリポソーム。
21. （ａ）極性頭部基および疎水性尾部を有するベシクル形成脂質および
    （ｂ）ベシクル形成脂質の極性頭部基に直接または間接的に化学結合した、疾患部位にてアップレギュレートされる受容体に対する非生物学的で生体模倣性のアンタゴニスト
    を含んでなる標的化リポソームを調製するのに有用なコンジュゲート。
22. 実質的に、実施例２に関して定義された請求項２１記載のコンジュゲート。
23. 受容体のアップレギュレーションによって特徴付けられる疾患の治療または診断方法であって、アンタゴニストがアップレギュレートされた受容体に対して結合アフィニティーを有する安全かつ有効量の請求項１〜２０のいずれか１項記載のリポソームをその必要のある患者に投与することを特徴とする方法。
24. 受容体が炎症、感染または腫瘍部位の管内皮においてアップレギュレートされる請求項２３記載の方法。
25. 受容体がインテグリンである請求項２３記載の方法。
26. 受容体がビトロネクチン受容体である請求項２３記載の方法。
27. 疾患が脈管形成によって特徴付けられる請求項２３記載の方法。
28. 疾患が再狭窄、骨関節炎、慢性関節リウマチ、糖尿病性網膜症、血管腫、乾癬または癌性腫瘍である請求項２３記載の方法。
29. 請求項１〜２０のいずれか１項記載のリポソームおよび医薬上許容される担体または希釈剤を含んでなる医薬組成物。
30. 受容体のアップレギュレーションによって特徴付けられる疾患の治療において有用な医薬の製造における請求項１〜２０のいずれか１項記載のリポソームの使用。
31. 受容体のアップレギュレーションによって特徴付けられる疾患を治療するのに有用な請求項１〜２０のいずれか１項記載のリポソーム。