JP2004294107A - High-speed data collection device for detecting faint light - Google Patents

High-speed data collection device for detecting faint light Download PDF

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Abstract

<P>PROBLEM TO BE SOLVED: To improve detection efficiency and to obtain high time resolution. <P>SOLUTION: An inputted analog detection signal is set to a digital detection signal S<SB>t</SB>made of pulses with specific width through a comparator. A coded time-series signal, where a coded time-series signal made of a group of ONs/OFFs is outputted in synchronization with block signals, comprises a mode signal S<SB>m1</SB>and a complementary mode signal S<SB>m2</SB>obtained by inverting the mode signal S<SB>m1</SB>. In each coded time-series signal, the arrangement patterns of ONs/OFFs differ mutually, and each composes orthogonal modulation patterns. A digital detection signal S<SB>t</SB>and the mode signals S<SB>m1</SB>, S<SB>m2</SB>their AND logic is obtained. The number of Hs by the AND is counted by a counter. The counter outputs a coefficient value for each coded time-series signal. By inverting the count values, the detection time of the inputted analog detection signal is obtained with the block signal as a reference. <P>COPYRIGHT: (C)2005,JPO&NCIPI

Description

【0001】
【発明の属する技術分野】
本発明は、高速でデータを収集する装置に係り、特に蛍光の検出などのように、時間的に出力される信号が少ない信号を検出するのに好適な微弱光検出用高速データ収集装置に関する。
【0002】
【従来の技術】
バイオテクノロジーや生化学、医療などのライフサイエンスの分野または環境分野などにおいて、特定のDNAやタンパク質、細胞などを検出する場合、または溶液中に含有されている微量物質を検出する場合、蛍光を利用した検出がしばしば行なわれる。例えば、特定のDNAを検出する場合、これとハイブリッドを形成するDNAに蛍光プローブを添加し、レーザ光を照射して蛍光プローブから生じる蛍光の有無により行なっている。そして、蛍光の時間的変化から検出対象物質の動的な分析などを行ないたい場合がある。
【0003】
蛍光の時間的変化を測定可能な従来の時間分解蛍光測定装置は、次のような方法に基づいている。その第1は、蛍光を受光して電気信号に変換して出力する光センサのアナログの出力信号を、A/D変換器によって高速にディジタル信号に変換し、A/D変換器の出力によって時間の経過に対する蛍光の時間分析を行なうものである。第2は、光センサの出力信号についての所定時間ごとの積分値、または所定時間ごとにカウンタ回路の計数値を出力させ、所定時間ごとの計数値から蛍光の時間分析を行なうものである。第3は、タイムゲートを遅延させながら蛍光を検出するもので、例えば試料に励起光を照射してから所定の時間後にタイムゲートを開き、その瞬間において光センサの出力を検出して蛍光の時間分析を行なうものである。
【0004】
すなわち、特許文献1には、一定間隔でパルス状レーザを検査対象(DNA)に照射するとともに、レーザの照射後、所定時間を経過したときに検査対象から放射される蛍光をCCDカメラによって撮像するようにしている。
【0005】
【特許文献1】
特開2002−286639号公報
【0006】
【発明が解決しようとする課題】
蛍光は、特定の波長、すなわち特定のエネルギーを有する光子を放出する。そして、蛍光が強いか弱いかは、その光子の放出量が多いか少ないかによる。したがって、蛍光の検出においては、光子が放出されたか否かを検出する。上記第1のA/D変換器によって高速にアナログデータをディジタルデータに変換する方法は、A/D変換器が多ビット(例えば8ビット)によって構成してあって、アナログデータの大きさに対応したディジタルデータを出力するようになっている。このため、本来、到来光子数を数えるためには、1ビットでもよいデータを8ビットでメモリに蓄えるため、非常に大きなメモリ容量を必要とする。しかも、蛍光のような微弱光を検出する場合、時間的に信号がない状態がほとんどであるにもかかわらず、NULLデータをメモリに蓄える必要がある。したがって、検出効率が悪く、高速化が困難である。
【0007】
また、第2の一定時間ごとの積分値または計数値を出力させる方法は、積分している時間または計数している時間中の情報が得られない。このため、この第2の方法は、データが時間軸方向に間引かれた状態となり、時間分解能を悪化させる。そして、第3のタイムゲートを遅延させてサンプリングする方法は、タイムゲートを開いたときにのみしかサンプリングできないため、極めて検出効率が悪く、測定に多大な時間を必要とする。そして、特許文献1に記載の時間分解蛍光検出装置は、蛍光をCCDカメラによって撮像するようになっているため、画像を取得するための積算時間が長く、高い時間分解能を得ることが困難である。
本発明は、前記従来技術の欠点を解消するためになされたもので、時間的に到来する数が少ない短時間パルス信号の検出効率を高めることができるとともに、高い時間分解能を得られるようにすることを目的としている。
【0008】
【課題を解決するための手段】
上記の目的を達成するために、本発明に係る微弱光検出用高速データ収集装置は、時間軸を所定長さの複数のブロックに分けるブロック信号を出力するとともに、前記各ブロック内において一定周期のサンプリングクロックを出力するタイミングパルス出力部と、前記サンプリングクロックに同期したオン・オフからなり、前記各ブロック内の前記サンプリングクロックの数と同数の種類であって相互に直交した符号化時系列信号を生成し、これら各符号化時系列信号を前記ブロック信号に同期して順次出力する時系列信号出力部と、光検出部の出力する検出パルスを前記符号化時系列信号との論理積を求める論理演算部と、この論理演算部が出力する「真」の数を前記ブロックごとに求める計数部と、この計数部が求めた前記「真」の数を前記ブロックごとに記憶する記憶部と、前記各符号化時系列信号のすべてについて前記論理演算部による論理演算が終了したのちに、前記記憶部に記憶されている前記「真」の数を読み出して数学的に処理し、前記サンプルクロックに基づいて、前記ブロック信号を基準にした時刻における前記検出パルスの平均出力数を求める検出時刻演算部と、を有することを特徴としている。
【0009】
各符号化時系列信号は、予め定めて配列されたオン・オフのパターンと、これと同時に出力されるその相補パターンとから形成するとよい。また、各符号化時系列信号は、オン・オフの配列パターンが直交変調パターンを形成するように構成するとよい。
【0010】
【作用】
上記のようになっている本発明は、サンプリングクロックに同期して出力される一群のオン・オフからなる符号化時系列信号を、時間軸上に種々のパターンで配列し、これらの符号化時系列信号を、時間軸を所定の長さに分けるブロック信号に同期して順次出力する。そして、各符号化時系列信号と、光検出部の出力する検出パルスとを論理演算(論理積)して検出データを得る。全部の符号化時系列信号について検出データを得たならば、それらを数学的に処理する。これにより、検出パルス(到来信号)がブロック信号を基準としてどの時刻に到来(検出)したかを知ることができる。
【0011】
また、ある配列パターンの符号化時系列信号によって到来信号を検出できなかったとしても、相補配列パターンの符号化時系列信号によって検出することができる。したがって、種々の配列パターンの符号化時系列信号を出力することにより、到来信号が微弱光を検出する光センサの出力信号のように、時間的に到来信号の数が少ない場合であっても、それをどの時刻に到来したかを含めて確実に検出することができる。そして、符号化時系列信号を構成する各パルスの幅をナノ秒以下にすることにより、ナノ秒以下の時間分解能を容易に得ることができる。また、本発明は、符号化時系列信号と検出パルス(到来信号)との論理積の結果を記憶すればよいため、NULLデータなどを記憶する必要がなく、記憶容量を小さくすることができて演算を高速に行なうことができる。
【0012】
符号化時系列信号は、予め定めたオン・オフの配列パターンと、これと同時に出力されるこの配列パターンを反転させた相補パターンとによって構成すると、符号化時系列信号を出力したときに到来信号があると、正側の配列パターンまたは相補(反転)パターンのいずれかによって検出することができ、到来信号を100%検出することが可能となる。したがって、非常に検出効率がよく、分析を行なうことが可能となる。そして、各符号化時系列信号のオン・オフの配列パターンが直交変調パターンを構成するように形成すると、検出時刻を求める場合に直交変調パターンを逆変換すればよく、数学的処理が容易となる。
【0013】
【発明の実施の形態】
本発明に係る微弱光検出用高速データ収集装置の好ましい実施の形態を、添付図面に従って詳細に説明する。
図2は、本発明の実施の形態に係る高速データ収集装置を用いた微弱光検出システムの一例を示す概略ブロック図である。図2において、微弱光検出システム10は、DNAチップなどの試料12に励起光14を照射する光源16を有している。光源16は、システム制御装置18に接続してあって、システム制御装置18から励起光トリガを受け、紫外線などのパルス状励起光14を放射する。光源16から放射された励起光14は、コリメートレンズ20、ダイクロイックミラー22、集光レンズ24などを介して試料12に照射される。
【0014】
試料12中に含まれているDNAなどに添加された蛍光物質は、励起光14によって励起され、所定波長の蛍光26を放射する。この蛍光26は、集光レンズ24を介してダイクロイックミラー22に入射する。ダイクロイックミラー22は、励起光14を透過して蛍光26を反射し、蛍光26のみを光センサ28に入射する。光センサ28は、例えばフォトマルチプライヤーである多数の光電子増倍管を配置したマイクロチャンネルプレートなどからなっていて、入射した蛍光(光子)をアナログ電気信号に変換し、出力側に接続された高速データ収集装置30に出力する。
【0015】
高速データ収集装置30は、図3のようになっていて、光センサ28の出力したアナログ検出信号が入力するコンパレータ・サンプルホールド回路32、詳細を後述する符号化時系列信号出力部33を有する。コンパレータ・サンプルホールド回路32は、到来信号であるアナログ検出信号(検出パルス)をディジタル信号に変換し、所定パルス幅のディジタル検出信号Sを出力する。
【0016】
符号化時系列信号出力部33は、実施形態の場合、符号化時系列信号データメモリ34と並直列変換器36とから構成してある。符号化時系列信号データメモリ34は、8ビット、16ビット等の複数ビットからなる相互に異なる複数のビットパターンを記憶している。これらのビットパターンは、後述するように時間軸上に配置された一群のオン・オフによるパルスからなる符号化時系列信号を生成するためのものである。そして、各ビットパターンは、相互に直交しているとともに、実施形態の場合、直交変調パターンの1つであるアダマール行列を構成するパターンとなっている。
【0017】
アダマール行列は、要素が「+1」と「−1」とからなっていて、対角線に沿った対象位置にある要素が同じである対称行列となっている。例えば、一次のアダマール行列H(1) を具体的に書くと、
【数1】

Figure 2004294107
のようになる。また、二次、三次のアダマール行列H(2) 、H(3) は、数式2、数式3のように書くことができる。
【数2】
Figure 2004294107
【数3】
Figure 2004294107
すなわち、アダマール行列は、一般的に次の漸化式によって定義することができる。
【数4】
Figure 2004294107
ただし、数式4において、kは次数を示す。
【0018】
符号化時系列信号データメモリ34は、符号化時系列信号が例えば8個分のオンまたはオフによって構成される場合、図4に示した0次から7次までの8つの変調モードに対応したビットパターンを記憶している。ただし、図4に示した「1」は符号化時系列信号データメモリ34のビットにおいて「1」として記憶され、図4の「−1」はビットにおいて「0」として記憶される。
【0019】
符号化時系列信号データメモリ34の出力側には、並直列変換器36が接続してある。符号化時系列信号データメモリ34は、タイミングパルス出力部を構成しているシステム制御装置18から後述するブロック用タイミングパルス(ブロック信号)が入力するごとに、ブロック信号に同期して記憶している直交変調モードに対応したビットパターンを、順次パラレル信号で並直列変換器36に出力する。そして、並直列変換器36は、入力したパラレル信号をシリアル信号に変換し、オン・オフからなる符号化時系列信号として出力する。この符号化時系列信号は、一群のオンとオフとにより形成されるパルスが時間軸上に配列されており、その配列パターンが符号化時系列信号データメモリ34の出力したビットパターンに対応している。
【0020】
並直列変換器36は、例えば図5(1)のように形成してあって、ビット記憶部38と出力ビット記憶部40とを有する。ビット記憶部38は、パラレル信号線によって符号化時系列信号データメモリ34に接続されていて、符号化時系列信号データメモリ34の出力するビットパターンの各ビットに対応したメモリを有する。そして、並直列変換器36は、システム制御装置18の出力するブロック信号に同期して、ビット記憶部38に書き込まれたビットパターンの内容を出力ビット記憶部40に書き込まれる。また、並直列変換器36は、システム制御部18からのサンプリングクロックに同期して、出力ビット記憶部40に書き込まれた各ビットを順次読み出し、「H」(オン)と「L」(オフ)とからなる符号化時系列信号をシリアル信号として出力する(図5(2)参照)。この符号化時系列信号は、ビットパターンに対応した正パターンと、これを反転させた相補パターンとからなっている。すなわち、並直列変換器36は、入力したビットパターンのビットが「1」であるときは「H」、ビットが「0」であるときは「L」を対応させた正パターンの正モード信号Sm1(図1(f)参照)を出力するとともに、これを反転させた相補パターンの相補モード信号Sm2を出力する。なお、サンプリングクロックの周期ΔTは、任意に設定することが可能であるが、実施形態の場合、1nsにしてある。
【0021】
並直列変換器36の出力した正モード信号Sm1、相補モード信号Sm2は、コンパレータ・サンプルホールド回路32の出力するディジタル検出信号Sとともに、論理演算部42に入力する(図3参照)。論理演算部42は、ディジタル検出信号Sと各モード信号Sm1、Sm2との論理積を求めるようになっている。この論理積の演算結果S、Sは、論理演算部42の出力側に設けたカウンタ44に入力される。そして、カウンタ44は、論理積の各演算結果S、Sに対応した計数部を有しており、それぞれの演算結果が「H」(真)である数を計数する。そして、カウンタ44は、パラレル信号線を介して各計数値をディジタルI/O46に出力する。ディジタルI/O46は、カウンタ44が出力した2つの計数値を、検出データとしてパラレル信号線によって検出時刻演算部48に入力する。検出時刻演算部48は、入力された検出データを数学的に処理し、基準時に対するディジタル検出信号Sが検出された時刻を求める。
【0022】
このようになっている実施形態の作用は、次のとおりである。まず、図2に示したシステム制御装置18は、図1の(a)に示したように、光源16に対して励起光トリガを与えるとともに、この励起トリガに同期して高速データ収集装置30に対し、図1(b)、(c)のブロック信号とサンプリングクロックとを与える。ブロック信号は、時間軸を所定の長さTのブロックに分けるための信号である。サンプリングクロックは、一定の時間ΔTを周期としてブロックT内における時刻を検出可能にするとともに、これに同期した一群のオン(「H」)、オフ(「L」)からなる符号化時系列信号の生成に利用される。
【0023】
光源16は、励起光トリガに同期してパルス状の励起光14を放射して試料12に照射する。試料12に含まれている蛍光物質から放射された蛍光26は、ダイクロイックミラー22に反射されて光センサ28に入射する。光センサ28は、蛍光の光子が入射するとこれを電気信号に変換し、図1(d)に示したようなアナログ検出信号を高速データ収集装置30に送出する。
【0024】
光センサ28が出力したアナログ検出信号は、図3に示したように、高速データ収集装置30のコンパレータ・サンプルホールド回路32に入力する。コンパレータ・サンプルホールド回路32は、入力したアナログ検出信号をディジタル信号に変換して出力する。すなわち、コンパレータ・サンプルホールド回路32は、光センサ28からの入力信号を設定されている閾値と比較し、入力信号が閾値を超えると、所定幅のパルスをディジタル検出信号Sとして出力する(図1(e)参照)。このディジタル検出信号Sは、論理演算部42に入力される。
【0025】
一方、高速データ収集装置30は、ブロック信号が入力すると、符号化時系列信号出力部33の符号化時系列信号データメモリ34が記憶しているビットパターンを、ブロック信号に同期して順次読み出し、並直列変換器36のビット記憶部38に書き込む(図5参照)。すなわち、符号化時系列信号が例えば8個のオンまたはオフからなるパルス列によって構成される場合、符号化時系列信号データメモリ34には、図4に示された0次から7次までのビットパターンが記憶させてあり、これらのビットパターンがブロック信号に同期して順次出力される。
【0026】
並直列変換器36は、ビット記憶部38に書き込まれた内容をブロック信号に同期して出力ビット記憶部40に転送する。さらに、並直列変換器36は、入力するサンプリングクロックに同期して出力ビット記憶部40の各ビットを順次読み出し、一群のオンとオフとからなる符号化時系列信号を生成してシリアル信号として出力する。これらの符号化時系列信号は、相互に直交している。また、符号化時系列信号は、実施形態の場合、時間のブロックTに含まれているサンプリングクロックの数と同数の種類が生成される。
【0027】
図6は、並直列変換器36の出力する符号化時系列信号の一例を示したものである。この図6に示した符号化時系列信号は、8個分のオン・オフによって構成してあって、モード0が図4の0次の直交変調モードに対応しており、モード1が同様に図4の1次の変調モードに対応している。以下同様である。また、実施形態においては、符号化時系列信号を構成しているパルスの幅が、サンプリングクロックの周期ΔTに一致させてあり、1ナノ秒にしてある。しかし、パルス幅は、任意の長さに設定できる。
【0028】
並直列変換器36の出力する符号化時系列信号は、実施形態の場合、符号化時系列信号データメモリ34の出力するビットパターンに対応した、図6に示した正パターンの正モード信号Sm1と、これを反転させた相補パターンからなる相補モード信号Sm2とからなっている(図1(f)、(g)参照)。そして、実施形態の場合、各モード信号Sm1、Sm2は、同時に出力される。なお、図1においては、1つの励起光トリガに対して複数のブロック信号を発生させるようにしているが、ブロック信号は1つの励起光トリガに対して1つであってよい。そして、この場合、励起光トリガが出力されるごとに、これに同期してブロック信号が出力され、これに同期して異なるパターン(モード)の符号化時系列信号が順次出力される。
【0029】
並直列変換器36の出力した符号化時系列信号を構成している各モード信号Sm1、Sm2は、論理演算部42に入力される。論理演算部42は、入力したモード信号S、Sm2のそれぞれについて、入力したディジタル検出信号Sとの論理積を求め、その演算結果S、Sをカウンタ44に出力する。すなわち、論理演算部42は、複数のパルス列からなるSm1が「H」のときにSが入力すると、演算結果Sを「真」である「H」にして出力する。また、Sm1が「L」でSm2が「H」のときにSが入力すると、演算結果Sを「偽」である「L」にし、演算結果Sを「H」(真)にする(図1(h)、(i))。これにより、到来信号に対応したディジタル検出信号Sのすべてを検出することができる。したがって、非常に検出効率が高く、高精度、高速な測定が可能となる。もちろん、符号化時系列信号は、各モード信号Sm1、Sm2のいずれかであってもよい。
【0030】
論理演算部42の演算結果S、Sは、順次カウンタ44に送出される。カウンタ44は、演算結果S、Sのそれぞれについて、論理演算部42が出力した「H」の数を別々に計数する。そして、カウンタ44は、図1に示したように、ブロック信号の1周期Tが終了したときに、S、Sのそれぞれについての計数値をパラレル信号線に出力する。このように、実施形態の場合、カウンタ44は、論理演算部42が出力する「H」のみを計数するようにしているため、微弱光の検出のように、到来信号が時間的にまばらな状態であったとしても、容量の大きなカウンタを必要とせず、ディジタルI/O46の負荷を軽くすることができる。
【0031】
カウンタ44が出力したこれらの計数値は、それぞれパラレル信号線によってディジタルI/O46に入力される。ディジタルI/O46は、カウンタ44が出力した各符号化時系列信号ごとに演算結果S、Sに対する計数値を、検出データとしてパラレル信号線によって検出時刻演算部48に入力する。検出時刻演算部48は、符号化時系列信号ごとの検出データを図示しない内部メモリ(記憶部)に順次記憶する。そして、検出時刻演算部48は、各直交変調パターン(例えば図4の0次から7次)に対応した符号化時系列信号による検出が終了すると、内部メモリに記憶している検出データを読み出し、数学的処理であるアダマール逆変換を行なう。
【0032】
サンプリングされたディジタルなデータ数列{X(m)}に対するアダマール変換は、次のように表される。
【数5】
Figure 2004294107
ただし、ここにH(k)は、N行N列のアダマール行列であり、X(k)、Y(k)は、N個の要素をもつ次のような行列ベクトルである。
【数6】
Figure 2004294107
【数7】
Figure 2004294107
ここに、数式6、数式7のTは、転置を表す。
(k)は、直交行列であって、N行N列の単位行列をE(k)とすると、
【数8】
Figure 2004294107
と書くことができる。そして、H(k)の逆行列は、規格化因子を除けばそれ自身に等しいので、
【数9】
Figure 2004294107
と書くことができる。
上記の性質から、アダマール逆変換は、アダマール変換そのものと同じになり、次のように表すことができる。
【数10】
Figure 2004294107
【0033】
このようにして、検出データをアダマール逆変換することにより、高速データ収集装置30に入力した到来信号であるアナログ検出信号の基準時、すなわち励起光トリガが出力された時刻であるブロック信号の立ち上がりを基準とした検出時刻を求めることができる。すなわち、ブロック信号の立ち上がりを基準にして、サンプリングクロックを時間分解とした到来信号(アナログ検出信号)の平均化した時間波形が得られ、各時刻ごとの平均到来パルス数を求めることができる。
【0034】
したがって、本発明に係る高速データ収集装置30を用いることにより、DNAチップリーダなどにおいて、蛍光をプローブしたDNAに対してレーザを照射し、蛍光物質を励起して蛍光を放射させ、この蛍光を時間分解で分析することにより、分析精度を著しく向上させることができる。また、赤外線パルスレーザの受光に用いることにより、空間の3次元画像を得ることができ、暗視3次元カメラを実現することができる。
【0035】
なお、図3の破線に示したように、ディジタルI/O46の出力する各符号化時系列信号に対応した検出データを、記憶部となる検出データメモリ50に一時格納し、すべての符号化時系列信号についての検出が終了したときに、検出データメモリ50に記憶させた内容を検出時刻演算部48に出力するようにしてもよい。また、前記実施形態においては、高速データ収集装置30に設けた並直列変換器36などが1である場合について説明したが、並直列変換器36などを複数設けて、これらを複数組設けることにより、多チャンネルのセンサ信号を同時に検出することができる。
【0036】
【発明の効果】
以上に説明したように、本発明によれば、サンプリングクロックに同期して出力される一群のオン・オフからなる符号化時系列信号を、時間軸上に種々のパターンで配列し、これらの符号化時系列信号を、時間軸を所定の長さに分けるブロック信号に同期して順次出力し、各符号化時系列信号と、光検出部の出力する検出パルスとを論理演算(論理積)して検出データを得、全部の符号化時系列信号について検出データを得たならば、それらを数学的に処理することにより、検出パルス(到来信号)がブロック信号を基準としてどの時刻に到来(検出)したかを知ることができる。
【図面の簡単な説明】
【図1】実施形態に係る到来信号検出方法を説明するタイムチャートである。
【図2】実施の形態に係る高速データ収集装置を用いた微弱光検出システムの概略ブロック図である。
【図3】実施の形態に係る高速データ収集装置のブロック図である。
【図4】直交変調パターンの説明図である。
【図5】実施の形態に係る並直列変換器の説明図である。
【図6】符号化時系列信号の説明図である。
【符号の説明】
10………微弱光検出システム、12………試料、14………励起光、18………タイミングパルス出力部(システム制御装置)、26………蛍光、28………光センサ、30………高速データ収集装置、32………コンパレータ・サンプルホールド回路、33………符号化時系列信号出力部、34………符号化時系列信号データメモリ、36………並直列変換器、42………論理演算部、44………カウンタ、46………ディジタルI/O、48………検出時刻演算部、50………記憶部(検出データメモリ)。[0001]
TECHNICAL FIELD OF THE INVENTION
The present invention relates to an apparatus for collecting data at a high speed, and more particularly to a high-speed data collection apparatus for detecting weak light, which is suitable for detecting a signal with a small number of temporally output signals, such as detection of fluorescence.
[0002]
[Prior art]
Fluorescence is used to detect specific DNA, proteins, cells, etc., or to detect trace substances contained in a solution in the fields of life sciences such as biotechnology, biochemistry, medical treatment, and the environment. Detection is often performed. For example, when a specific DNA is detected, a fluorescent probe is added to DNA that forms a hybrid with the specific DNA, and irradiation is performed with laser light to determine whether or not there is fluorescence generated from the fluorescent probe. There is a case where it is desired to perform dynamic analysis of a detection target substance based on a temporal change in fluorescence.
[0003]
A conventional time-resolved fluorescence measuring device capable of measuring a temporal change in fluorescence is based on the following method. First, an analog output signal of an optical sensor which receives fluorescence and converts it into an electric signal and outputs it is converted into a digital signal at a high speed by an A / D converter, and time is converted by an output of the A / D converter. The time analysis of the fluorescence with respect to the progress of time is performed. The second is to output the integrated value of the output signal of the optical sensor at every predetermined time or the count value of the counter circuit at every predetermined time, and perform the time analysis of the fluorescence from the count value at every predetermined time. The third method is to detect fluorescence while delaying the time gate. For example, the time gate is opened a predetermined time after irradiating the sample with excitation light, and at that moment the output of the optical sensor is detected and the time of fluorescence is detected. An analysis is performed.
[0004]
That is, in Patent Literature 1, a pulsed laser is irradiated to a test object (DNA) at regular intervals, and fluorescence emitted from the test object is imaged by a CCD camera when a predetermined time has elapsed after the laser irradiation. Like that.
[0005]
[Patent Document 1]
JP-A-2002-286639
[Problems to be solved by the invention]
Fluorescence emits photons having a specific wavelength, that is, a specific energy. Whether the fluorescence is strong or weak depends on whether the amount of emitted photons is large or small. Therefore, in the detection of fluorescence, it is detected whether or not a photon has been emitted. In the method of converting analog data into digital data at high speed by the first A / D converter, the A / D converter is constituted by multiple bits (for example, 8 bits) and corresponds to the size of analog data. Digital data is output. For this reason, in order to count the number of incoming photons, an extremely large memory capacity is required because 8-bit data, which may be 1 bit, is stored in the memory. In addition, when detecting weak light such as fluorescent light, it is necessary to store NULL data in a memory even though there is almost no signal in time. Therefore, the detection efficiency is poor and it is difficult to increase the speed.
[0007]
In the second method of outputting an integrated value or a count value every fixed time, information during the integrating time or the counting time cannot be obtained. Therefore, in the second method, data is thinned out in the time axis direction, and the time resolution is deteriorated. The third method of sampling with a delay of the time gate can perform sampling only when the time gate is opened, so that the detection efficiency is extremely low and a long time is required for measurement. The time-resolved fluorescence detection device described in Patent Document 1 captures fluorescence with a CCD camera, so that the integration time for acquiring an image is long and it is difficult to obtain high time resolution. .
SUMMARY OF THE INVENTION The present invention has been made to solve the above-mentioned disadvantages of the related art, and can improve the detection efficiency of a short-time pulse signal with a small number of signals arriving in time and obtain a high time resolution. It is aimed at.
[0008]
[Means for Solving the Problems]
In order to achieve the above object, the high-speed data acquisition device for detecting weak light according to the present invention outputs a block signal that divides a time axis into a plurality of blocks of a predetermined length, and has a constant period in each of the blocks. A timing pulse output unit for outputting a sampling clock, and an on / off synchronized with the sampling clock, and encoding time series signals of the same number as the number of the sampling clocks in each block and orthogonal to each other. A time-series signal output unit for generating and sequentially outputting each of the encoded time-series signals in synchronization with the block signal; and a logic for calculating a logical product of the detection pulse output from the light detection unit and the encoded time-series signal. An arithmetic unit, a counting unit that obtains the number of “true” output by the logical operation unit for each block, and a number of “true” obtained by the counting unit. After the logical operation by the logical operation unit is completed for all of the encoded time-series signals, the number of the “true” stored in the storage unit is read out. A detection time calculation unit that performs mathematical processing and calculates an average output number of the detection pulses at a time based on the block signal based on the sample clock.
[0009]
Each encoded time-series signal may be formed from a predetermined array of on / off patterns and its complementary pattern output at the same time. Also, each encoded time-series signal may be configured such that an on / off arrangement pattern forms a quadrature modulation pattern.
[0010]
[Action]
According to the present invention as described above, encoded time-series signals consisting of a group of on / off signals output in synchronization with a sampling clock are arranged in various patterns on a time axis, A sequence signal is sequentially output in synchronization with a block signal that divides a time axis into a predetermined length. Then, a logical operation (logical product) of each of the encoded time-series signals and the detection pulse output from the light detection unit is performed to obtain detection data. Once the detection data has been obtained for all the encoded time-series signals, they are processed mathematically. This makes it possible to know at what time the detection pulse (arrival signal) arrives (detects) with reference to the block signal.
[0011]
Further, even if an incoming signal cannot be detected by an encoded time-series signal of a certain arrangement pattern, it can be detected by an encoded time-series signal of a complementary arrangement pattern. Therefore, even when the number of arriving signals is small in time, such as the output signal of an optical sensor that detects weak light, the arriving signal is output by outputting encoded time-series signals of various arrangement patterns. It can be reliably detected including the time at which it has arrived. Then, by setting the width of each pulse constituting the encoded time-series signal to be equal to or less than nanosecond, it is possible to easily obtain the time resolution of equal to or less than nanosecond. Further, according to the present invention, since it is sufficient to store the result of the logical product of the encoded time-series signal and the detection pulse (arrival signal), it is not necessary to store NULL data or the like, and the storage capacity can be reduced. The operation can be performed at high speed.
[0012]
If the encoded time-series signal is composed of a predetermined on / off array pattern and a complementary pattern obtained by inverting the array pattern and output at the same time, an incoming signal is output when the encoded time-series signal is output. In this case, the signal can be detected by either the positive-side array pattern or the complementary (inverted) pattern, and 100% of the incoming signal can be detected. Therefore, the detection efficiency is very high, and the analysis can be performed. When the on / off array pattern of each encoded time-series signal is formed to form a quadrature modulation pattern, the orthogonal modulation pattern can be inversely transformed when the detection time is obtained, which facilitates mathematical processing. .
[0013]
BEST MODE FOR CARRYING OUT THE INVENTION
A preferred embodiment of a high-speed data acquisition device for detecting weak light according to the present invention will be described in detail with reference to the accompanying drawings.
FIG. 2 is a schematic block diagram illustrating an example of a weak light detection system using the high-speed data collection device according to the embodiment of the present invention. 2, the weak light detection system 10 includes a light source 16 that irradiates a sample 12 such as a DNA chip with excitation light 14. The light source 16 is connected to a system controller 18 and receives an excitation light trigger from the system controller 18 and emits a pulsed excitation light 14 such as ultraviolet light. The excitation light 14 emitted from the light source 16 is applied to the sample 12 via a collimator lens 20, a dichroic mirror 22, a condenser lens 24 and the like.
[0014]
The fluorescent substance added to the DNA or the like contained in the sample 12 is excited by the excitation light 14 and emits fluorescence 26 of a predetermined wavelength. The fluorescent light 26 enters the dichroic mirror 22 via the condenser lens 24. The dichroic mirror 22 transmits the excitation light 14 and reflects the fluorescent light 26, and makes only the fluorescent light 26 enter the optical sensor 28. The optical sensor 28 includes, for example, a microchannel plate on which a large number of photomultiplier tubes, which are photomultipliers, are arranged. The optical sensor 28 converts incident fluorescent light (photons) into an analog electric signal. The data is output to the data collection device 30.
[0015]
The high-speed data collection device 30 is configured as shown in FIG. 3 and includes a comparator / sample-hold circuit 32 to which an analog detection signal output from the optical sensor 28 is input, and an encoded time-series signal output unit 33 described in detail later. The comparator / sample-hold circuit 32 converts an analog detection signal (detection pulse), which is an incoming signal, into a digital signal, and outputs a digital detection signal St having a predetermined pulse width.
[0016]
In the case of the embodiment, the encoded time-series signal output unit 33 includes an encoded time-series signal data memory 34 and a parallel / serial converter 36. The encoded time-series signal data memory 34 stores a plurality of mutually different bit patterns composed of a plurality of bits such as 8 bits and 16 bits. These bit patterns are for generating an encoded time-series signal composed of a group of ON / OFF pulses arranged on the time axis as described later. Each bit pattern is orthogonal to each other, and in the case of the embodiment, is a pattern constituting a Hadamard matrix which is one of the orthogonal modulation patterns.
[0017]
The Hadamard matrix is a symmetric matrix in which the elements are “+1” and “−1”, and the elements at the target positions along the diagonal are the same. For example, when a first-order Hadamard matrix H (1) is specifically written,
(Equation 1)
Figure 2004294107
become that way. Further, the second-order and third-order Hadamard matrices H (2) and H (3) can be written as Expressions 2 and 3.
(Equation 2)
Figure 2004294107
[Equation 3]
Figure 2004294107
That is, the Hadamard matrix can be generally defined by the following recurrence formula.
(Equation 4)
Figure 2004294107
However, in Equation 4, k indicates the order.
[0018]
When the encoded time-series signal data memory 34 is constituted by, for example, eight ON or OFF, the encoded time-series signal data memory 34 stores bits corresponding to eight modulation modes from the 0th to the 7th order shown in FIG. I remember the pattern. However, "1" shown in FIG. 4 is stored as "1" in the bit of the encoded time-series signal data memory 34, and "-1" in FIG. 4 is stored as "0" in the bit.
[0019]
A parallel-to-serial converter 36 is connected to the output side of the encoded time-series signal data memory 34. The encoded time-series signal data memory 34 stores the data in synchronization with the block signal each time a block timing pulse (block signal) described later is input from the system controller 18 constituting the timing pulse output unit. The bit pattern corresponding to the quadrature modulation mode is sequentially output to the parallel / serial converter 36 as a parallel signal. Then, the parallel-to-serial converter 36 converts the input parallel signal into a serial signal, and outputs the serial signal as an encoded time-series signal consisting of ON and OFF. In the encoded time-series signal, pulses formed by a group of ON and OFF are arranged on the time axis, and the arrangement pattern corresponds to the bit pattern output from the encoded time-series signal data memory 34. I have.
[0020]
The parallel-to-serial converter 36 is formed, for example, as shown in FIG. 5A, and includes a bit storage unit 38 and an output bit storage unit 40. The bit storage unit 38 is connected to the encoded time-series signal data memory 34 by a parallel signal line, and has a memory corresponding to each bit of the bit pattern output from the encoded time-series signal data memory 34. Then, the parallel / serial converter 36 writes the content of the bit pattern written in the bit storage unit 38 into the output bit storage unit 40 in synchronization with the block signal output from the system control device 18. The parallel-to-serial converter 36 sequentially reads out each bit written in the output bit storage unit 40 in synchronization with the sampling clock from the system control unit 18, and outputs “H” (ON) and “L” (OFF). Is output as a serial signal (see FIG. 5 (2)). This coded time-series signal is composed of a positive pattern corresponding to a bit pattern and a complementary pattern obtained by inverting the positive pattern. That is, the parallel-to-serial converter 36 outputs a positive pattern positive mode signal S corresponding to “H” when the bit of the input bit pattern is “1” and “L” when the bit is “0”. m1 (refer to FIG. 1 (f)), and outputs a complementary mode signal Sm2 of a complementary pattern obtained by inverting the output. The period ΔT of the sampling clock can be arbitrarily set, but is set to 1 ns in the embodiment.
[0021]
Positive mode signal S m1 outputted parallel-to-serial converter 36, the complementary mode signal S m @ 2, together with the output to a digital detection signal S t from the comparator sample and hold circuit 32 is input to the logic operation unit 42 (see FIG. 3). The logical operation unit 42 calculates a logical product of the digital detection signal St and each of the mode signals S m1 and S m2 . The operation result S + of the logical product, S - is input to a counter 44 which is provided on the output side of the logical operation unit 42. Then, the counter 44, S + the calculated result of the logical product, S - has a counting unit corresponding to the respective operation results to count the number of "H" (true). Then, the counter 44 outputs each count value to the digital I / O 46 via the parallel signal line. The digital I / O 46 inputs the two count values output by the counter 44 to the detection time calculator 48 as detection data via a parallel signal line. Detection time calculation unit 48, mathematically process the input detection data, obtains the time at which the digital detection signal S t to the reference time is detected.
[0022]
The operation of the embodiment configured as described above is as follows. First, as shown in FIG. 1A, the system controller 18 shown in FIG. 2 gives an excitation light trigger to the light source 16 and synchronizes the excitation trigger with the high-speed data acquisition device 30. On the other hand, the block signal and the sampling clock shown in FIGS. The block signal is a signal for dividing the time axis into blocks having a predetermined length T. The sampling clock makes it possible to detect the time in the block T with a period of a fixed time ΔT as a period, and a group of on (“H”) and off (“L”) coded time-series signals in synchronization with this. Used for generation.
[0023]
The light source 16 emits pulsed excitation light 14 in synchronization with the excitation light trigger and irradiates the sample 12 with the pulsed excitation light 14. The fluorescent light 26 emitted from the fluorescent substance contained in the sample 12 is reflected by the dichroic mirror 22 and enters the optical sensor 28. When a photon of fluorescence enters, the optical sensor 28 converts the photon into an electric signal, and sends an analog detection signal as shown in FIG.
[0024]
The analog detection signal output from the optical sensor 28 is input to the comparator / sample-hold circuit 32 of the high-speed data collection device 30 as shown in FIG. The comparator / sample-hold circuit 32 converts the input analog detection signal into a digital signal and outputs the digital signal. That is, comparator sample and hold circuit 32 compares the threshold value set input signal from the optical sensor 28, the input signal exceeds the threshold value, outputs a pulse of a predetermined width as a digital detection signal S t (FIG. 1 (e)). The digital detection signal St is input to the logical operation unit 42.
[0025]
On the other hand, when the block signal is input, the high-speed data collection device 30 sequentially reads out the bit pattern stored in the encoded time-series signal data memory 34 of the encoded time-series signal output unit 33 in synchronization with the block signal, The data is written into the bit storage unit 38 of the parallel-to-serial converter 36 (see FIG. 5). That is, when the encoded time-series signal is composed of, for example, a pulse train of eight ON or OFF, the encoded time-series signal data memory 34 stores the bit patterns from the 0th order to the 7th order shown in FIG. Are stored, and these bit patterns are sequentially output in synchronization with the block signal.
[0026]
The parallel-to-serial converter 36 transfers the contents written in the bit storage unit 38 to the output bit storage unit 40 in synchronization with the block signal. Further, the parallel / serial converter 36 sequentially reads each bit of the output bit storage unit 40 in synchronization with the input sampling clock, generates an encoded time-series signal including a group of ON and OFF, and outputs the signal as a serial signal. I do. These encoded time-series signals are orthogonal to each other. In the case of the embodiment, the same number of types of encoded time-series signals as the number of sampling clocks included in the time block T are generated.
[0027]
FIG. 6 shows an example of an encoded time-series signal output from the parallel / serial converter 36. The coded time-series signal shown in FIG. 6 is constituted by eight ON / OFF signals. Mode 0 corresponds to the 0th-order quadrature modulation mode in FIG. This corresponds to the primary modulation mode in FIG. The same applies hereinafter. Further, in the embodiment, the width of the pulse constituting the encoded time-series signal is set to 1 nanosecond in accordance with the sampling clock cycle ΔT. However, the pulse width can be set to any length.
[0028]
In the case of the embodiment, the encoded time-series signal output from the parallel-to-serial converter 36 is a positive pattern positive mode signal S m1 shown in FIG. 6 corresponding to the bit pattern output from the encoded time-series signal data memory 34. And a complementary mode signal Sm2 having a complementary pattern obtained by inverting the complementary mode signal (see FIGS. 1 (f) and 1 (g)). In the case of the embodiment, the mode signals S m1 and S m2 are output simultaneously. In FIG. 1, a plurality of block signals are generated for one excitation light trigger, but one block signal may be generated for one excitation light trigger. In this case, every time the excitation light trigger is output, a block signal is output in synchronization with the excitation light trigger, and in synchronization with this, an encoded time-series signal of a different pattern (mode) is sequentially output.
[0029]
The mode signals S m1 and S m2 constituting the encoded time-series signal output from the parallel-serial converter 36 are input to the logical operation unit 42. The logical operation unit 42 calculates the logical product of the input mode signals S 1 and S m2 with the input digital detection signal St, and outputs the operation results S + and S to the counter 44. That is, when St is input when S m1 including a plurality of pulse trains is “H”, the logical operation unit 42 outputs the operation result S + as “H” which is “true”. Further, when the S m1 is the S m @ 2 at "L" to input S t at "H", the operation result S + to a "false", "L", the operation result S - the "H" (true) (FIGS. 1 (h) and (i)). This makes it possible to detect all of the digital detection signal S t that corresponds to the incoming signal. Therefore, the detection efficiency is extremely high, and high-accuracy and high-speed measurement can be performed. Of course, the encoded time-series signal may be any one of the mode signals S m1 and S m2 .
[0030]
The operation results S + and S of the logical operation unit 42 are sequentially sent to the counter 44. Counter 44, the operation result S +, S - for each, counting the number of "H" to the logical operation unit 42 has output separately. Then, as shown in FIG. 1, when one cycle T of the block signal ends, the counter 44 outputs the count value of each of S + and S to the parallel signal line. As described above, in the case of the embodiment, since the counter 44 counts only “H” output from the logical operation unit 42, the state in which the arrival signal is sparse in time, such as detection of weak light, is detected. However, a large-capacity counter is not required, and the load on the digital I / O 46 can be reduced.
[0031]
These count values output by the counter 44 are input to the digital I / O 46 via parallel signal lines. Digital I / O 46, the counter 44 is the operation result for each time-series signals each coding output S +, S - a count value for the inputs to the detection time calculation unit 48 by the parallel signal lines as detection data. The detection time calculation unit 48 sequentially stores the detection data for each encoded time-series signal in an internal memory (storage unit) not shown. Then, when the detection based on the coded time-series signal corresponding to each orthogonal modulation pattern (for example, the 0th to 7th order in FIG. 4) ends, the detection time calculation unit 48 reads out the detection data stored in the internal memory, Performs Hadamard inverse transformation, a mathematical process.
[0032]
The Hadamard transform for the sampled digital data sequence {X (m)} is expressed as follows.
(Equation 5)
Figure 2004294107
Here, H (k) is a Hadamard matrix of N rows and N columns, and X (k) and Y (k) are the following matrix vectors having N elements.
(Equation 6)
Figure 2004294107
(Equation 7)
Figure 2004294107
Here, T in Equations 6 and 7 represents transposition.
H (k) is an orthogonal matrix, and a unit matrix of N rows and N columns is E (k) .
(Equation 8)
Figure 2004294107
Can be written. And the inverse of H (k) is equal to itself except for the normalization factor,
(Equation 9)
Figure 2004294107
Can be written.
From the above properties, the Hadamard inverse transform becomes the same as the Hadamard transform itself, and can be expressed as follows.
(Equation 10)
Figure 2004294107
[0033]
In this way, by performing the Hadamard inverse conversion of the detection data, the rising edge of the block signal, which is the reference time of the analog detection signal that is the incoming signal input to the high-speed data collection device 30, that is, the time when the excitation light trigger is output, is obtained. The reference detection time can be obtained. That is, an averaged time waveform of an incoming signal (analog detection signal) obtained by time-resolving the sampling clock with reference to the rise of the block signal is obtained, and the average number of incoming pulses at each time can be obtained.
[0034]
Therefore, by using the high-speed data collection device 30 according to the present invention, in a DNA chip reader or the like, a laser is irradiated to the DNA probed with fluorescence to excite a fluorescent substance to emit fluorescence, and this fluorescence is timed. Analyzing by decomposition can significantly improve the analysis accuracy. In addition, by using the infrared pulse laser for receiving light, a three-dimensional image of space can be obtained, and a night-vision three-dimensional camera can be realized.
[0035]
As shown by the dashed line in FIG. 3, the detection data corresponding to each encoded time-series signal output from the digital I / O 46 is temporarily stored in a detection data memory 50 serving as a storage unit. When the detection of the sequence signal is completed, the content stored in the detection data memory 50 may be output to the detection time calculation unit 48. Further, in the above-described embodiment, the case where the number of the parallel-serial converters 36 provided in the high-speed data collection device 30 is 1 is described. , Multi-channel sensor signals can be detected simultaneously.
[0036]
【The invention's effect】
As described above, according to the present invention, an encoded time-series signal consisting of a group of on / off signals output in synchronization with a sampling clock is arranged in various patterns on a time axis, and these codes are Coded time-series signals are sequentially output in synchronization with a block signal that divides a time axis into a predetermined length, and a logical operation (logical product) is performed on each coded time-series signal and a detection pulse output from the light detection unit. Once the detection data is obtained and the detection data is obtained for all the coded time-series signals, they are mathematically processed so that the detection pulse (arrival signal) arrives at any time with respect to the block signal. ) Can know.
[Brief description of the drawings]
FIG. 1 is a time chart illustrating an incoming signal detection method according to an embodiment.
FIG. 2 is a schematic block diagram of a weak light detection system using the high-speed data collection device according to the embodiment.
FIG. 3 is a block diagram of a high-speed data collection device according to the embodiment.
FIG. 4 is an explanatory diagram of a quadrature modulation pattern.
FIG. 5 is an explanatory diagram of a parallel-to-serial converter according to an embodiment.
FIG. 6 is an explanatory diagram of an encoded time-series signal.
[Explanation of symbols]
Reference numeral 10: weak light detection system, 12: sample, 14: excitation light, 18: timing pulse output unit (system controller), 26: fluorescence, 28: optical sensor, 30 High-speed data acquisition device 32 Comparator / sample-and-hold circuit 33 Encoded time-series signal output unit 34 Encoded time-series signal data memory 36 Parallel-to-serial converter .., 42... Logic operation unit, 44... Counter, 46... Digital I / O, 48... Detection time operation unit, 50... Storage unit (detection data memory).

Claims (3)

時間軸を所定長さの複数のブロックに分けるブロック信号を出力するとともに、前記各ブロック内において一定周期のサンプリングクロックを出力するタイミングパルス出力部と、
前記サンプリングクロックに同期したオン・オフからなり、前記各ブロック内の前記サンプリングクロックの数と同数の種類であって相互に直交した符号化時系列信号を生成し、これら各符号化時系列信号を前記ブロック信号に同期して順次出力する時系列信号出力部と、
光検出部の出力する検出パルスを前記符号化時系列信号との論理積を求める論理演算部と、
この論理演算部が出力する「真」の数を前記ブロックごとに求める計数部と、
この計数部が求めた前記「真」の数を前記ブロックごとに記憶する記憶部と、
前記各符号化時系列信号のすべてについて前記論理演算部による論理演算が終了したのちに、前記記憶部に記憶されている前記「真」の数を読み出して数学的に処理し、前記サンプルクロックに基づいて、前記ブロック信号を基準にした時刻における前記検出パルスの平均出力数を求める検出時刻演算部と、
を有することを特徴とする微弱光検出用高速データ収集装置。
A timing pulse output unit that outputs a block signal that divides a time axis into a plurality of blocks of a predetermined length, and outputs a sampling clock having a fixed period in each of the blocks.
It consists of ON / OFF synchronized with the sampling clock, generates the same number of types of the sampling clocks in the respective blocks and generates mutually orthogonally coded time series signals, and generates these coded time series signals. A time-series signal output unit for sequentially outputting in synchronization with the block signal,
A logic operation unit for calculating a logical product of the detection pulse output from the light detection unit and the encoded time-series signal,
A counting unit for calculating the number of “true” output by the logical operation unit for each of the blocks;
A storage unit that stores the number of “true” obtained by the counting unit for each block;
After the logical operation by the logical operation unit is completed for all of the encoded time-series signals, the number of “true” stored in the storage unit is read and mathematically processed, and the sample clock is output. A detection time calculation unit that calculates an average output number of the detection pulses at a time based on the block signal,
A high-speed data collection device for detecting weak light, comprising:
請求項1に記載の微弱光検出用高速データ収集装置において、
前記各符号化時系列信号は、予め定めて配列されたオン・オフのパターンと、これと同時に出力されるその相補パターンとからなることを特徴とする微弱光検出用高速データ収集装置。
The high-speed data collection device for detecting weak light according to claim 1,
The high-speed data collection device for weak light detection, wherein each of the encoded time-series signals includes an on / off pattern arranged in a predetermined manner and a complementary pattern outputted at the same time.
請求項1または2に記載の微弱光検出用高速データ収集装置において、
前記各符号化時系列信号は、オン・オフの配列パターンが直交変調パターンを形成していることを特徴とする微弱光検出用高速データ収集装置。
The high-speed data acquisition device for detecting weak light according to claim 1 or 2,
The high-speed data collection device for detecting weak light, wherein the on / off arrangement pattern of each of the encoded time-series signals forms an orthogonal modulation pattern.
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