JP2004224775A - 抗炎症剤 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】ＰＡＣＡＰペプチドまたはＶＩＰペプチドより誘導したペプチドまたはその薬学的に許容される塩を有効成分として含有する、抗炎症医薬組成物。
【効果】本発明によれば、アレルギー性喘息、気管支炎、結膜炎、自己免疫疾患、アトピー性皮膚炎等の炎症反応を長時間に渡って抑制する ＰＡＣＡＰ／ＶＩＰ 誘導体を提供できる。
【選択図】 なし
【効果】本発明によれば、アレルギー性喘息、気管支炎、結膜炎、自己免疫疾患、アトピー性皮膚炎等の炎症反応を長時間に渡って抑制する ＰＡＣＡＰ／ＶＩＰ 誘導体を提供できる。
【選択図】 なし
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、極めて強力な抗炎症作用を有し、生体内において長時間に渡ってその効果を示すことが可能である ＰＡＣＡＰ／ＶＩＰ 誘導体及びこれを含有する医薬組成物に関する。
【０００２】
【従来の技術】
ＶＩＰ（血管作動性腸管ペプチド；Ｖｏｓｏａｃｔｉｖｅ Ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ Ｐｅｐｔｉｄｅ）は、脳−腸管ペプチドと呼ばれ、血流促進、血圧低下作用をもつ生理活性ペプチドの一種である。このＶＩＰは、ブタ腸管から抽出されており、２８個のアミノ酸残基からなる（例えば非特許文献１参照）。一方、ＰＡＣＡＰ（下垂体アデニレートシクラーゼ活性化ペプチド； Ｐｉｔｕｉｔａｒｙ Ａｄｅｎｙｌａｔｅ Ｃｙｃｌａｓｅ Ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ Ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ） は、羊の視床下部から下垂体培養細胞のアデニル酸シクラーゼを活性化させるバイオアッセイ系を指標にして単離され構造決定された３８個のアミノ酸残基よりなるペプチドであり、ＰＡＣＡＰ３８と、ＰＡＣＡＰ２７の２種類がある（例えば非特許文献２参照）。このＰＡＣＡＰのＮ末端側から２７個のアミノ酸配列はＶＩＰと極めて類似した構造を有している。また、ＶＩＰとＰＡＣＡＰのアミノ酸配列は、セクレチン、グルカゴン等に類似していることから、グルカゴン−セクレチンスーパーファミリーに属するペプチドとされている。これら ＰＡＣＡＰ および ＶＩＰ は ＰＡＣＡＰ／ＶＩＰ レセプターを介してその生理作用を示すが、この ＰＡＣＡＰ／ＶＩＰ レセプターは生体内において広い分布を示し、それ故 ＰＡＣＡＰ／ＶＩＰ は多くの生理活性を有することが報告されている。例えば、抗喘息作用（特許文献１）、血圧低下作用（特許文献２）、増毛作用（特許文献３）、インポテンツ改善作用（特許文献４）、膣潤滑誘発作用（特許文献５）、胃腸管蠕動運動抑制作用（特許文献６）、神経変性疾患・低酸素症・記憶能力低下改善作用（特許文献７）、皮膚潰瘍治療作用（特許文献８）、ニューロンネットワーク形成促進（特許文献９）、コンフォメーション病改善薬（非特許文献３）などである。また、これらの活性以外にも抗炎症作用が指摘されており、外部からの抗原刺激によるマクロファージの活性化を強力に抑制することが報告されている（例えば非特許文献４参照）。それ故、アレルギー性鼻炎や喘息に ＰＡＣＡＰ／ＶＩＰ 、特に ＶＩＰ が有効であるとされてきた（特許文献１０参照）。これらの生理作用を考慮すれば医薬応用の可能性は非常に大きいものと考えられるが、ＰＡＣＡＰ や ＶＩＰ 等の生理活性ペプチドは概して不安定であり、特に生体内においては速やかな代謝を受けるためにその作用継続時間は非常に短いものである。作用時間の短い抗炎症剤は実用化に難しく、さらにアレルギー喘息患者においては致命的な欠点となる可能性が高い。
【０００３】
【特許文献１】
特開平８−３３３２７６号公報
【特許文献２】
特開昭６３−１７９８９４号公報
【特許文献３】
特開平０１−８３０１２号公報
【特許文献４】
特開平０１−１９０９７号公報
【特許文献５】
特表平０１−５０１９３７号公報
【特許文献６】
特表平０６−５０７４１５号公報
【特許文献７】
特開平０７−６９９１９号公報
【特許文献８】
特開平０８−４０９２６号公報
【特許文献９】
特開２００１−２２６２８４号公報
【特許文献１０】
特開昭５６−１２８７２１号公報
【非特許文献１】
サイド（Ｓ．Ｉ．Ｓａｉｄ）ら、「サイエンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ）」 （米国） １９７０年 １６９巻 ｐ．１２１７
【非特許文献２】
宮田（Ａ．Ｍｉｙａｔａ）ら、「バイオケミカル アンド バイオフィジカル リサーチ コミュニケーションズ（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ａｎｄ ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ ｒｅｓｅａｒｃｈ ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ）」 （米国） １９８９年 １６４巻 ｐ．５６７
【非特許文献３】
尾上（Ｏｎｏｕｅ， Ｓ．）ら、「フェブス レターズ（ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔｅｒｓ）」 （オランダ） ２００２年 ５２２巻 ｐ．６５−ｐ．７０
【非特許文献４】
ダルガド（Ｄｅｌｇａｄｏ， Ｍ．）ら、「ジャーナル オブ イミュノロジー（Ｊｏｕｒｎａｌｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ）」 １９９９年 １６２巻ｐ．２３５８−ｐ．６７
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
従って、本発明は、長時間に渡って抗炎症作用を発揮することが出来、臨床上安全に使用できる安定性の高い ＰＡＣＡＰ／ＶＩＰ 誘導体からなる抗炎症医薬組成物を提供することを目的とする。
【０００５】
【課題を解決するための手段】
そこで本発明者らは先に、酵素耐性を新規機能として保持させた ＰＡＣＡＰ／ＶＩＰ 誘導体を創製し（特開平８−３３３２７６号）、実際にこれらがトリプシン等生体内ペプチダーゼによる代謝に対して優れていること（樫本（Ｋａｓｈｉｍｏｔｏ， Ｋ．）ら、「ペプチド ケミストリー（Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）」 １９９６年 １９９７巻 ｐ．２４９−ｐ．２５２参照）、さらには気管支拡張作用を指標としてこれらの誘導体が著しい薬効持続作用を有することを明らかにした（吉原（Ｙｏｓｈｉｈａｒａ， Ｓ．）ら、「ペプチド（Ｐｅｐｔｉｄｅｓ）」 （米国） １９９８年 １９巻 ｐ．５９３−ｐ．５９７；吉原（Ｙｏｓｈｉｈａｒａ， Ｓ．）ら、「ブリティッシュ ジャーナル オブ ファーマコロジー（Ｂｒｉｔｉｓｈ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ）」 １９９７年 １２１巻 ｐ．１７３０−ｐ．１７３４を参照）。さらに本発明者らは、溶液中での安定性を飛躍的に向上させた誘導体を開発し、薬理効果の延長を可能とすることに成功した（特願２００２−３４４５２３）。従って、この長時間作動型 ＰＡＣＡＰ／ＶＩＰ 誘導体は医薬応用において極めて有用なものと考えられ、特に先述の各種生理・薬理作用を目的とした薬剤の有力な候補として考えられた。
【０００６】
ＰＡＣＡＰ の最小活性単位は ＶＩＰ と同様 Ｎ 末端より ２３ 残基であることが公知の事実となっており（Ｋｉｔａｄａ， Ｃ． ｅｔ ａｌ．， Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ １９９０， １９９１， ２３９−２４４）、上記 ＰＡＣＡＰ 誘導体群についても Ｎ 末端より ２３ 残基以上あれば ＰＡＣＡＰ／ＶＩＰ の生理・薬理効果が期待できる。
【０００７】
さらに本発明者らは上記ペプチドが、天然型ＶＩＰ及びＰＡＣＡＰと同様、またはそれ以上の高い生理活性を有すると共に、高い安定性を有することを見出すに到った。また、これらの高安定性誘導体群は ＶＩＰ と比して、作用時間が長く、抗炎症作用が長期に渡って継続することを新規に見出した。
【０００８】
すなわち、本発明は以下の（１）〜（１６）の発明を提供する。
（１） 下記式（Ｉ）：
Ｈｉｓ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ａ−Ｂ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｃ−Ｄ−Ｔｙｒ−
Ｅ−Ａｒｇ−Ｆ−Ａｒｇ−Ｇ−Ｇｌｎ−Ｈ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｉ− （Ｉ）
Ｊ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ｋ−Ｌ−Ｍ−Ｎ （配列番号１）
（式中、Ａ は、Ａｌａ または Ｇｌｙ；Ｂ はＶａｌ または Ｉｌｅ；Ｃ は、Ａｓｐ、 Ｇｌｕ または Ａｌａ；Ｄ は、Ａｓｎ または Ｓｅｒ；Ｅ は、Ｔｈｒ または Ｓｅｒ；Ｆ は、Ｌｅｕ または Ｔｙｒ；Ｇ，Ｉ，Ｊ は Ｌｙｓ または Ａｒｇ；Ｈ は、Ｍｅｔ、Ｌｅｕ または ｎＬｅｕ；Ｋ は、Ａｓｎ、Ａｌａ または化学結合；Ｌ は Ｓｅｒ、Ａｌａ または化学結合；Ｍ は、Ｉｌｅ、Ｖａｌまたは化学結合；Ｎ は、化学結合、Ｌｅｕ，Ｌｅｕ−Ａｓｎ，Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ， Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ， Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ， Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ， Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ， Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ａｒｇ， Ｌｅｕ−Ｇｌｙ，Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ，Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ，Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ，Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ，Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ａｒｇ，Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ｌｙｓ，Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ａｓｎ−Ａｒｇ、またはＬｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｓｎ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｐｈｅ−Ｔｙｒを表す。但し、Ｇ，Ｉ，Ｊが共にＬｙｓであり、かつＨがＭｅｔであることはない。）
で示されるアミノ酸配列のＮ末端より少なくとも２３残基からなるアミノ酸配列で示され、Ｃ 末端アミノ酸のα位カルボキシル基がＮＨ２で修飾されているかまたはされていないペプチド、または薬学的に許容されるその塩を含有する抗炎症剤。
【０００９】
（２） 前記ペプチドが、一般式 （Ｉ） においてＡ が Ａｌａ、Ｂ が Ｖａｌ、Ｃ が Ａｓｐ、Ｄ が Ａｓｎ、Ｅ が Ｔｈｒ、Ｆ がＬｅｕ、Ｇ， Ｉ， Ｊ が Ａｒｇ、Ｈ が Ｌｅｕ、Ｋ が Ａｓｎ、Ｌ が Ｓｅｒ、Ｍ が Ｉｌｅ、Ｎ が Ｌｅｕ−Ａｓｎであるアミノ酸配列のＮ 末端より少なくとも ２３ 残基のアミノ酸配列で示され、Ｃ末端が −ＮＨ２ で修飾されたペプチドである、上記（１）に記載の抗炎症剤。（ペプチド２等が相当）
【００１０】
（３） 前記ペプチドが、一般式 （Ｉ） においてＡ が Ａｌａ、Ｂ が Ｖａｌ、Ｃ が Ａｓｐ、Ｄ が Ａｓｎ、Ｅ が Ｔｈｒ、Ｆ がＬｅｕ、Ｇ， Ｉ， Ｊ が Ａｒｇ、Ｈ が Ｌｅｕ、Ｋ が Ａｓｎ、Ｌ が Ｓｅｒ、Ｍ が Ｉｌｅ、Ｎ が Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ａｒｇであるアミノ酸配列のＮ 末端より少なくとも ２３ 残基のアミノ酸配列で示され、Ｃ末端が −ＮＨ２ で修飾されたペプチドである、上記（１）に記載の抗炎症剤。（ペプチド３等）
【００１１】
（４） 前記ペプチドが、一般式 （Ｉ） においてＡ が Ａｌａ、Ｂ が Ｖａｌ、Ｃ が Ａｓｐ、Ｄ が Ａｓｎ、Ｅ が Ｔｈｒ、Ｆ がＬｅｕ、Ｇ， Ｉ， Ｊ が Ａｒｇ、Ｈ が Ｌｅｕ、Ｋ が Ａｓｎ、Ｌ が Ｓｅｒ、Ｍ が Ｉｌｅ、Ｎ が Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ａｒｇであるアミノ酸配列のＮ 末端より少なくとも ２３ 残基のアミノ酸配列で示され、Ｃ末端が −ＮＨ２ で修飾されたペプチドである、上記（１）に記載の抗炎症剤。（ペプチド４等）
【００１２】
（５） 前記ペプチドが、一般式 （Ｉ） においてＡ が Ａｌａ、Ｂ が Ｖａｌ、Ｃ が Ａｓｐ、Ｄ が Ａｓｎ、Ｅ が Ｔｈｒ、Ｆ がＬｅｕ、Ｇ， Ｉ， Ｊ が Ａｒｇ、Ｈ が Ｌｅｕ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ が化学結合であるアミノ酸配列で示され、Ｃ末端が −ＮＨ２ で修飾されたペプチドである、上記（１）に記載の抗炎症剤。（ペプチド６等）
【００１３】
（６） 前記ペプチドが、一般式 （Ｉ） においてＡ が Ａｌａ、Ｂ が Ｖａｌ、Ｃ が Ａｓｐ、Ｄ が Ａｓｎ、Ｅ が Ｔｈｒ、Ｆ がＬｅｕ、Ｇ， Ｉ， Ｊ が Ａｒｇ、Ｈ が Ｌｅｕ、Ｋ が Ａｌａ、Ｌ が Ａｌａ、Ｍ が Ｉｌｅ、Ｎ が Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ａｒｇであるアミノ酸配列のＮ 末端より少なくとも ２３ 残基のアミノ酸配列で示され、Ｃ末端が −ＮＨ２ で修飾されたペプチドである、上記（１）に記載の抗炎症剤。（ペプチド８等）
【００１４】
（７） 前記ペプチドが、一般式 （Ｉ） においてＡ が Ａｌａ、Ｂ が Ｖａｌ、Ｃ が Ｇｌｕ、Ｄ が Ａｓｎ、Ｅ が Ｔｈｒ、Ｆ がＬｅｕ、Ｇ， Ｉ， Ｊ が Ａｒｇ、Ｈ が Ｌｅｕ、Ｋ が Ａｌａ、Ｌ が Ａｌａ、Ｍ が Ｉｌｅ、Ｎ が Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ａｒｇであるアミノ酸配列のＮ 末端より少なくとも ２３ 残基のアミノ酸配列で示され、Ｃ末端が −ＮＨ２ で修飾されたペプチドである、上記（１）に記載の抗炎症剤。（ペプチド１７等）
【００１５】
（８） 前記ペプチドが、一般式 （Ｉ） においてＡ が Ａｌａ、Ｂ が Ｖａｌ、Ｃ が Ａｌａ、Ｄ が Ａｓｎ、Ｅ が Ｔｈｒ、Ｆ がＬｅｕ、Ｇ， Ｉ， Ｊ が Ａｒｇ、Ｈ が Ｌｅｕ、Ｋ が Ａｌａ、Ｌ が Ａｌａ、Ｍ が Ｉｌｅ、Ｎ が Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ａｒｇであるアミノ酸配列のＮ 末端より少なくとも ２３ 残基のアミノ酸配列で示され、Ｃ末端が −ＮＨ２ で修飾されたペプチドである、上記（１）に記載の抗炎症剤。（ペプチド１９等）
【００１６】
（９） 前記ペプチドが、一般式 （Ｉ） においてＡ が Ａｌａ、Ｂ が Ｖａｌ、Ｃ が Ａｓｐ、Ｄ が Ａｓｎ、Ｅ が Ｔｈｒ、Ｆ がＬｅｕ、Ｇ， Ｉ， Ｊ が Ａｒｇ、Ｈ が Ｌｅｕ、Ｋ が Ａｌａ、Ｌ が Ａｌａ、Ｍ が Ｖａｌ、Ｎ が Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ａｒｇであるアミノ酸配列のＮ 末端より少なくとも ２３ 残基のアミノ酸配列で示され、Ｃ末端が −ＮＨ２ で修飾されたペプチドである、上記（１）に記載の抗炎症剤。（ペプチド２１等）
【００１７】
（１０） 前記ペプチドが、一般式 （Ｉ） においてＡ が Ｇｌｙ、Ｂ が Ｉｌｅ、Ｃ が Ａｓｐ、Ｄ が Ｓｅｒ、Ｅ が Ｓｅｒ、Ｆ がＴｙｒ、Ｇ， Ｉ， Ｊ が Ａｒｇ、Ｈ が Ｌｅｕ、Ｋ が Ａｌａ、Ｌ がＡｌａ、Ｍ が Ｖａｌ、Ｎ が Ｌｅｕであるアミノ酸配列のＮ 末端より少なくとも ２３ 残基のアミノ酸配列で示され、Ｃ末端が −ＮＨ２ で修飾されたペプチドである、上記（１）に記載の抗炎症剤。（ペプチド２４等）
【００１８】
（１１） 前記ペプチドが、一般式 （Ｉ） においてＡ が Ｇｌｙ、Ｂ が Ｉｌｅ、Ｃ が Ａｓｐ、Ｄ が Ｓｅｒ、Ｅ が Ｓｅｒ、Ｆ がＴｙｒ、Ｇ， Ｉ， Ｊ が Ａｒｇ、Ｈ が Ｌｅｕ、Ｋ が Ａｌａ、Ｌ がＡｌａ、Ｍ が Ｖａｌ、Ｎ が Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ａｒｇであるアミノ酸配列のＮ 末端より少なくとも ２３ 残基のアミノ酸配列で示され、Ｃ末端が −ＮＨ２ で修飾されたペプチドである、上記（１）に記載の抗炎症剤。（ペプチド２５等）
【００１９】
（１２） 前記ペプチドが、一般式 （Ｉ） においてＡ が Ａｌａ、Ｂ が Ｉｌｅ、Ｃ が Ａｓｐ、Ｄ が Ｓｅｒ、Ｅ が Ｓｅｒ、Ｆ がＴｙｒ、Ｇ， Ｉ， Ｊ が Ａｒｇ、Ｈ が Ｌｅｕ、Ｋ が Ａｌａ、Ｌ がＡｌａ、Ｍ が Ｖａｌ、Ｎ が Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ａｒｇであるアミノ酸配列のＮ 末端より少なくとも ２３ 残基のアミノ酸配列で示され、Ｃ末端が −ＮＨ２ で修飾されたペプチドである、上記（１）に記載の抗炎症剤。（ペプチド２７等）
【００２０】
（１３） 前記ペプチドが、一般式 （Ｉ） においてＡ が Ａｌａ、Ｂ が Ｉｌｅ、Ｃ が Ａｓｐ、Ｄ が Ｓｅｒ、Ｅ が Ｓｅｒ、Ｆ がＴｙｒ、Ｇ， Ｉ， Ｊ が Ａｒｇ、Ｈ が Ｌｅｕ、Ｋ が Ａｌａ、Ｌ がＡｌａ、Ｍ が Ｖａｌ、Ｎ が Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ａｓｎ−Ａｒｇであるアミノ酸配列のＮ 末端より少なくとも ２３ 残基のアミノ酸配列で示され、Ｃ末端が −ＮＨ２ で修飾されたペプチドである、上記（１）に記載の抗炎症剤。（ペプチド３１等）
【００２１】
（１４） 前記ペプチドが、一般式 （Ｉ） においてＡ が Ａｌａ、Ｂ が Ｉｌｅ、Ｃ が Ａｓｐ、Ｄ が Ｓｅｒ、Ｅ が Ｓｅｒ、Ｆ がＴｙｒ、Ｇ， Ｉ， Ｊ が Ａｒｇ、Ｈ が Ｌｅｕ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ が化学結合であるアミノ酸配列で示され、Ｃ末端が −ＮＨ２ で修飾されたペプチドである、上記（１）に記載の抗炎症剤。（ペプチド３５等）
（１５） 上記（１）〜（１４）に記載の抗炎症剤を含有する医薬組成物。
（１６） 粉末吸入製剤、粉末点鼻製剤、眼局所投与剤、注射剤、または塗布剤である、上記（１５）に記載の医薬組成物。
以下、本発明を具体的に説明する。
【００２２】
【発明を実施するための形態】
本発明の高安定性ペプチド誘導体は、具体的には一般式（Ｉ）に記載のアミノ酸配列のＮ末端より少なくとも２３残基からなるアミノ酸配列で示され、Ｃ 末端アミノ酸のα位カルボキシル基がＮＨ２で修飾されているかまたはされていないペプチドであり、Ｎ末端のアミノ基はアセチル基、ステアリル基等の各種脂肪酸、ポリエチレングリコール、ヒアルロン酸等の高分子、さらにはデンドリマー等が結合していても良い。Ｃ 末端については、−ＯＨ，−ＮＨ２，あるいは Ｎ−メチルアミドやＮ−エチルアミド等で修飾されていても良いが望ましくは −ＮＨ２ である。
【００２３】
本発明に用いられるペプチドの代表例を表１に示した。ここに示したペプチド２〜２１、並びに ２４〜３２及び３４〜３６ は、後記配列表の配列番号３〜２２及び２５〜３３及び３５〜３７に対応するペプチドである。ただし、ペプチド ５，６，１８，２０，３４，３５，３６は ２３ 残基のアミノ酸配列からなるペプチドであり、ペプチド９， ２９， ３６ は Ｎ 末端アミノ基にアセチル基が、そしてペプチド １０ の Ｎ 末端アミノ基にはステアリル基が結合している。尚、表中の空欄は化学結合であることを示す。
【００２４】
【表１】
【００２５】
上記ペプチドは、使用の際にはその Ｎ 末端に極性物質または非極性物質（脂肪酸、アシル基等）を結合させて分子の極性を変化させたり、ポリエチレングリコール、グルコサミノグリカン（ヒアルロン酸等）の高分子を結合させて酵素耐性を増強したり、リポソーム基質に結合させてリポソームに封入したり、あるいは脂質膜表面に固定することもできる。アシル基の導入は、その活性の向上のみならず、自己凝集を抑制することが当業者間で知られている。
【００２６】
本発明に使用するペプチドは、特に限定するものではないが、公知のペプチド合成の常法に従って合成できる。例えば「ザ．ペプチド（Ｔｈｅ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ）」第１巻（１９６６年） ［Ｓｃｈｒｅｄｅｒ ａｎｄ Ｌｕｈｋｅ 著、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， Ｕ．Ｓ．Ａ．］ 、あるいは「ペプチド合成」［泉屋ら著、丸善株式会社（１９７５年）］の記載に従い、具体的には、アジド法、酸クロライド法、酸無水物法、混合酸無水物法、ＤＣＣ法、活性エステル法（Ｐ−ニトロフエニルエステル法、Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミドエステル法、シアノメチルエステル法など）、ウッドワード試薬Ｋを用いる方法、カルボイミダゾール法、酸化還元法、ＤＣＣ−アディティブ（ＨＯＮＢ、ＨＯＢｔ、ＨＯＳｕ）法など、各種の方法により合成することができる。これらの方法は、固相合成及び液相合成のいずれにも適用できる。
【００２７】
本発明においてペプチド合成は、上記のような一般的なポリペプチドの合成法に従って、例えば末端アミノ酸に順次１個ずつアミノ酸を縮合させるいわゆるステップワイズ法によって、または数個のフラグメントに分けてカップリングさせていく方法により行われる。
【００２８】
例えばステップワイズ法による固相合成は、具体的には、メリフィールド（Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ．Ｒ．Ｂ．）の方法 ［Ｓｏｌｉｄ ｐｈａｓｅ ｐｅｐｔｉｄｅ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ， Ｊ．Ａｍｅｒ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．， ８５， ２１４９−２１５９ （１９６３）］に従い、以下のようにして行うことができる。まず、Ｃ末端アミノ酸（アミノ基を保護したもの）をそのカルボキシル基によって不溶性樹脂に結合させ、その後、該Ｃ末端アミノ酸のアミノ基の保護基を除去する。次いで、得られたこの遊離の反応性アミノ基に、目的とするペプチドのアミノ酸配列に従って、アミノ基を保護したアミノ酸の反応性カルボキシル基を縮合反応により順次結合させる。このようにして一段階ずつ全配列を合成した後、ペプチドを不溶性樹脂からはずす。
【００２９】
上記の固相合成において用いられる不溶性樹脂は、反応性カルボキシル基との結合性を有するものであればいずれをも使用でき、例えばベンズヒドリルアミン樹脂（ＢＨＡ樹脂）、クロルメチル樹脂、オキシメチル樹脂、アミノメチル樹脂、メチルベンズヒドリル樹脂（ＭＢＨＡ樹脂）、４−アミノメチルフェノキシメチル樹脂、４−ヒドロキシメチルフェノキシメチル樹脂、４−オキシメチルフェニルアセタミドメチル樹脂などが挙げられる。
【００３０】
また、α−アミノ基の保護基として９−フルオレニルメチルオキシカルボニル基（Ｆｍｏｃ）を使用する場合は４−ヒドロキシメチルフェノキシメチル樹脂など、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）によって樹脂から脱離できるものがよく、ｔ−ブトキシカルボニル基（Ｂｏｃ）を使用する場合は４−オキシメチルフェニルアセタミドメチル樹脂（ＰＡＭ樹脂）など、フッ化水素などによって樹脂から脱離できるものがよい。樹脂１ｇ当りペプチド濃度は０．５ｍｍｏｌｅ以下とすることが好ましい。
【００３１】
上記の方法においては、アミノ酸のペプチド結合に関与するアミノ基への保護基の結合及び該保護基の脱離、ならびにアミノ酸のペプチド結合に関与するカルボキシル基の活性化が必要である。
【００３２】
アミノ基の保護基として、例えば、ベンジルオキシカルボニル（Ｚ）、ｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）、ｔ−アミノオキシカルボニル（Ａｏｃ）、イソボニルオキシカルボニル、ｐ−メトキシベンジルオキシカルボニル、２−クロル−ベンジルオキシカルボニル、アダマンチルオキシカルボニル、トリフルオロアセチル、フタロイル、ホルミル、ｏ−ニトロフェニルスルフェニル、ジフェニルホスフイノチオイルなどの基が挙げられる。
【００３３】
また、アミノ酸の中で、側鎖に官能基を有するもの、例えばＨｉｓ、Ｔｙｒ、Ｔｈｒ、Ｌｙｓ、Ａｓｐ、Ａｒｇ及びＳｅｒは、その側鎖の官能基を保護しておくのが好ましい。官能基の保護は、通常用いられている方法で、下記のような通常の保護基を結合させることにより行われ、反応終了後、該保護基は脱離される。
【００３４】
Ｈｉｓのイミノ基の保護基としては、例えばベンジルオキシメチル（Ｂｏｍ）、ｐ−トルエンスルホニル（Ｔｏｓ）、ベンジル（Ｂｚｌ）、ベンジルオキシカルボニル（Ｚ）、トリチル基などが挙げられる。
【００３５】
Ｓｅｒ及びＴｈｒの水酸基は、例えばエステル化またはエーテル化によって保護することができるが、この保護は必須ではない。エステル化に適する基としては、アセチルなどの低級アルカノイル基、ベンゾイルなどのアロイル基、ベンゾイルオキシカルボニル、エチルオキシカルボニルなどの炭酸から誘導される基などが挙げられる。またエーテル化に適する基としては、ベンジル（Ｂｚｌ）、テトラヒドロピラニル、ｔｅｒｔ−ブチル基などが挙げられる。
【００３６】
Ｔｙｒの水酸基の保護基としては、例えばベンジル（Ｂｚｌ）、ブロモベンジルオキシカルボニル（Ｂｒ−Ｚ） 、ジクロロベンジル（Ｃｌ２−Ｂｚｌ） 、ベンジルオキシカルボニル（Ｚ）、アセチル、ｐ−トルエンスルホニル（Ｔｏｓ）基などが挙げられる。
【００３７】
Ｌｙｓのアミノ基の保護基としては、例えばベンジルオキシカルボニル（Ｚ）、クロロベンジルオキシカルボニル（Ｃｌ−Ｚ） 、ジクロロベンジル（Ｃｌ２−Ｂｚｌ）、ｔ−ブトキシカルボニル基（Ｂｏｃ）、ｐ−トルエンスルホニル（Ｔｏｓ）基などが挙げられる。
【００３８】
Ａｒｇのグアニジノ基の保護基としては、例えばｐ−トルエンスルホニル（Ｔｏｓ）、ニトロ、ベンジルオキシカルボニル（Ｚ）、ｔ−アミルオキシカルボニル（Ａｏｃ）基などが挙げられる。
【００３９】
Ａｓｐのカルボキシル基の保護は、例えばベンジルアルコール、メタノール、エタノール、ｔｅｒｔ−ブタノール、シクロヘキシル（ｃＨｅｘ）などによるエステル化により行われる。
【００４０】
その他のアミノ酸の保護基として、Ｔｒｐのインドリル基の保護基としては、例えばホルミル、カルボベンゾキシル、４−メトキシ−２，３，６−トリメチルベンゼンスルホニル、２，２，２−トリクロロエチルオキシカルボニルなどが挙げられるが、この保護は必須ではない。
Ｍｅｔのチオメチル基の保護基としては予めメチルスルホキシドにしておき、後に還元する方法があるが、この保護は必須ではない。
【００４１】
一方、カルボキシル基の活性化は、従来公知の方法にて行うことができ、用いられる試薬なども公知のものから適宜選択しえる。例えば、カルボキル基の活性化は、該カルボキシル基と種々の試薬とを反応させ、対応する酸クロライド、酸無水物または混合酸無水物、アジド、活性エステル（ペンタクロロフェノール、ｐ−ニトロフェノール、Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミド、Ｎ−ヒドロキシベンズトリアゾール、Ｎ−ヒドロキシ−５−ノルボルネン−２、３−ジカルボキシイミド等とのエステル）などを形成させることにより行う。
【００４２】
上記の固相における反応性アミノ基と反応性カルボキシル基との縮合反応（ペプチド結合形成反応）に用いる溶媒としては、ペプチド結合形成に使用できるものであればいずれでもよい。例えば無水または含水のジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、ピリジン、クロロホルム、ジオキサン、ジクロロメタン（ＤＣＭ）、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、酢酸エチル、Ｎ−メチルピロリドン、ヘキサメチルリン酸トリアミド（ＨＭＰＡ）などを単独で、あるいは２種以上の混合溶媒として使用することができる。
【００４３】
また、上記縮合反応は、縮合剤、例えばジシクロヘキシルカルボキシイミド（ＤＣＣ）、カルボジイミダゾールなどのカルボジイミド試薬やテトラエチルピロホスフェイト、ベンゾトリアゾール−Ｎ−ヒドロキシトリスジメチルアミノホスホニウムヘキサフルオロリン化物塩（Ｂｏｐ試薬）などの存在下に行うこともできる。
【００４４】
合成されたペプチドは、通常の方法に従い脱塩、精製することができる。例えば、ＤＥＡＥ−セルロースなどのイオン交換クロマトグラフィー、セファデックスＬＨ−２０ 、セファデックスＧ−２５ などの分配クロマトグラフィー、シリカゲルなどの順相クロマトグラフィー、ＯＤＳ−シリカゲルなどの逆相クロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィーなどが挙げられる。
上記のようにして精製したペプチドは、各種の酸を用いて、所望により薬学的に許容される塩、例えば、酢酸塩、塩酸塩、リン酸塩等にすることができる。
【００４５】
上記ペプチドまたはその塩は、医薬的に許容できる溶剤、賦形剤、担体、補助剤などを使用し、製剤製造の常法に従って液剤、錠剤、散剤、顆粒剤、坐剤、腸溶剤およびカプセル剤などの医薬組成物として調製し、経口製剤、粉末吸入製剤、粉末点鼻製剤、眼局所投与剤、注射剤、または塗布剤として用いることができるが、特に限定するものではない。
【００４６】
本発明のペプチドまたはその塩は、抗炎症作用を有するので、当該製剤は各種炎症関連疾病、具体的には、急性結膜炎、アレルギー性結膜炎、慢性結膜炎、眼瞼縁炎、湿疹、じんま疹、皮膚そう痒症、そう痒を伴う尋常性乾癬、ビダール苔癬、口内炎、アフタ性口内炎、咽頭炎、扁桃炎、急性歯肉炎、辺縁性歯周炎、歯槽骨膜炎、急性上気道炎（急性気管支炎を伴う急性上気道炎を含む）、気管支炎、気道過敏症、急性中耳炎、強膜炎、結節性紅斑、肩関節周囲炎、肩甲関節周囲炎、孤立性アフタ、掌蹠膿疱症、症候性神経痛、進行性指掌角皮症、舌炎、前立腺炎、多形浸出性紅斑、虫刺症、痛風発作、皮膚炎、日光皮膚炎、アトピー性皮膚炎、表層角膜炎、変形性関節症、放射線皮膚炎、慢性円板状エリテマトーデス、慢性関節リウマチ、扁平苔癬、痒疹、膀胱炎、褥瘡性潰瘍、頸肩腕症候群、慢性閉塞性肺疾患、外傷後及び手術後の炎症、さらには膠原病やクローン病などの自己免疫疾患などに有効であり、上記疾病からなる群から構成される１種以上の疾患または症状の治療または予防のために、また手術後及び外傷後の消炎・鎮痛・腫脹の緩解のために使用することができるが、用途は特に限定されるものではない。
【００４７】
本発明の医薬組成物は、例えばヒト、マウス、ラット、ウサギ、イヌ、ネコ等の哺乳動物に対して非経口的にまたは経口的に、さらにはドラッグデリバリーシステムを必要に応じて用いて、安全に投与することができる。当該医薬組成物の投与量は、剤形、投与ルート、症状等により適宜変更しうるが、例えばヒトを含む哺乳動物に投与する場合、ペプチド量として１人１日当たり約１ｐｇ 〜１ ｍｇ／ｋｇ 程度を適用することが例示される。
【００４８】
【実施例】
以下に本発明を参考例、実施例を挙げてより具体的に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【００４９】
〔実施例１〕 ペプチドの合成
配列番号２０に示すアミノ酸配列を有するペプチド １９ をペプチド固相合成の常法に従い製造した。
ＭＢＨＡ 樹脂 ＨＣｌ 塩 （ｐｏｌｙｓｔｙｒｅｎｅ−１％ ｄｉｖｉｎｙｌｂｅｎｚｅｎｅ 共重合体、１００〜２００ ｍｅｓｈ） をマニュアル合成用反応槽（ガラス製、φ６．０ ｘ ２９．５ ｃｍ）に加え、樹脂容量の ２〜３ 倍量のメタノールで攪拌洗浄し、次いでジクロロメタン（樹脂容量の ２〜３ 倍量）で攪拌洗浄して樹脂を膨潤させた。１０％ トリエチルアミン／ジクロロメタンにて中和反応を行い、Ｃ 末端アミノ酸に相当する Ｂｏｃ−Ａｒｇ （Ｔｏｓ）−ＯＨ を樹脂の約 ２ 倍当量用い、ジシクロヘキシルカルボジイミドおよび Ｎ−ハイドロキシベンゾトリアゾールを加えて縮合反応を行った。約 ２ 時間の反応（攪拌下）後、メタノールおよびジクロロメタンにて洗浄し、カイザー試験にてα−アミノ基の消失を確認後、５０％ トリフルオロ酢酸／ジクロロメタンにて ３０ 分間処理して脱保護を行った。次いで、１０％ トリエチルアミン／ジクロロメタンにて中和し、メタノールおよびジクロロメタンにて再洗浄後、再びカイザー試験を実施して脱保護反応の確認を行った。確認後は Ｃ 末より ２ 番目の Ｂｏｃ−Ａｒｇ （Ｔｏｓ）−ＯＨ のカップリングを行うため、同様の工程を繰り返した。その後、Ｂｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ， Ｂｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ， Ｂｏｃ−Ｉｌｅ−ＯＨ， Ｂｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ， Ｂｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ， Ｂｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ， Ｂｏｃ−Ｔｙｒ （Ｃｌ２−Ｂｚｌ）−ＯＨ， Ｂｏｃ−Ａｒｇ （Ｔｏｓ）−ＯＨ， Ｂｏｃ−Ａｒｇ （Ｔｏｓ）−ＯＨ， Ｂｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ， Ｂｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ， Ｂｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ， Ｂｏｃ−Ｇｌｎ （Ｘａｎ）−ＯＨ， Ｂｏｃ−Ａｒｇ （Ｔｏｓ）−ＯＨ， Ｂｏｃ−Ａｒｇ （Ｔｏｓ）−ＯＨ， Ｂｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ， Ｂｏｃ−Ａｒｇ （Ｔｏｓ）−ＯＨ， Ｂｏｃ−Ｔｈｒ （Ｂｚｌ）−ＯＨ， Ｂｏｃ−Ｔｙｒ （Ｃｌ２−Ｂｚｌ）−ＯＨ， Ｂｏｃ−Ａｓｎ （Ｘａｎ）−ＯＨ， Ｂｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ， Ｂｏｃ−Ｔｈｒ （Ｂｚｌ）−ＯＨ， Ｂｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ， Ｂｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ， Ｂｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ， Ｂｏｃ−Ａｓｐ （ＯｃＨｅｘ）−ＯＨ， Ｂｏｃ−Ｓｅｒ （Ｂｚｌ）−ＯＨ， Ｂｏｃ−Ｈｉｓ （Ｂｏｍ）−ＯＨ の順に順次カップリング／脱保護を行い、ペプチド １９ に相当する保護ペプチド； Ｈｉｓ （Ｂｏｍ）−Ｓｅｒ （Ｂｚｌ）−Ａｓｐ （ＯｃＨｅｘ）−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ （Ｂｚｌ）−Ａｌａ−Ａｓｎ−Ｔｙｒ （Ｃｌ２−Ｂｚｌ）−Ｔｈｒ （Ｂｚｌ）−Ａｒｇ （Ｔｏｓ）−Ｌｅｕ−Ａｒｇ （Ｔｏｓ）−Ａｒｇ （Ｔｏｓ）−Ｇｌｎ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ａｒｇ （Ｔｏｓ）− Ａｒｇ （Ｔｏｓ）−Ｔｙｒ （Ｃｌ２−Ｂｚｌ）−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｉｌｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−ＭＢＨＡ を得た。ここで得られた保護ペプチド−ＭＢＨＡ 樹脂にエタンジチオールおよびアニソール存在下無水フッ化水素を加えて反応させた。反応後、無水フッ化水素を減圧下留去後、残渣をエーテルで洗浄し、これに １０％酢酸を加えてペプチドを抽出した。抽出液を逆相カラムクロマトグラフィーにより精製し、凍結乾燥を行いペプチド １９ を得た。
【００５０】
上記方法と同様にして、下記のペプチド１〜４３ を化学合成した。
【００５１】
〔実施例 ２〕 （製剤例１：粉末吸入製剤）
使用機器： Ａ−Ｏ−Ｊｅｔ Ｍｉｌｌ （セイシン企業）
原料供給方法： オートフィーダー
供給エアー圧力： ６．０ ｋｇ／ｃｍ２Ｇ
粉砕エアー圧力： ６．５ ｋｇ／ｃｍ２Ｇ
集塵方法： アウトレットバグ（ポリエチレン）
上記条件にて、エリスリトール（日研化学）及び実施例１で合成したペプチド４ の混合物 約 ４ ｇ を対象に粉砕を行った。収率は約 ８５％ であった。得られた粉末製剤は潮解性がなく、薬剤分布もほぼ均一であることを確認した。本粉末とエリスリトール ５０Ｍ（日研化学）を約 １：０．１ の比率で均一になるよう混和し、吸入・点鼻用粉末製剤を得た。
【００５２】
〔実施例 ３〕 （電子顕微鏡による粒径評価）
実施例 ２ にて得られたペプチド ４ の吸入・点鼻用粉末製剤について、その性状を確認した。ＳＣ−７０１ 型 Ｑｕｉｃｋ ｃｏａｔｅｒ（サンユー電子）を用いて金蒸着させ（膜厚 １０ ｎｍ）、走査型電子顕微鏡 ＪＥＯＬ ＪＳＭ−Ｔ２２０Ａ にて観察した。その結果を図１に示す。キャリアー分子表面を取り囲むようにしてペプチド ４ の微細粒子が付着し、その粒径は数十 μｍ〜約１００ μｍ 程度であることを確認した。
【００５３】
〔実施例 ４〕 （レーザー回折法による製剤特性評価）
実施例 ２ にて得られたペプチド ４ の吸入・点鼻用粉末製剤についてその粒度とキャリアーからの解離性を確認するために、乾式レーザー回折・散乱式粒径分布測定装置（セイシン企業）にて評価を行った。図 ２ に示すように ０．１５ ＭＰａ の吸引力によって、ピークトップ約 ５ μｍ と約 ６０ μｍ の明瞭な ２ つのピークを認め、前者は微細化した薬剤粒子で、後者はキャリアーであることを確認した。そのピーク面積比から、ほぼ定量的にキャリアーからの薬剤粒子脱離が起こっていることを確認し、本製剤が外部からの弱い力によって効率よく薬剤ミストになりうるものであることを確かめた。
【００５４】
〔実施例 ５〕 （製剤例２：点眼剤）
滅菌精製水 ８０ ｍＬ を約 ８０℃まで加温し、ヒドロキシメチルセルロースを加えて攪拌し、液温を室温まで戻す。この液にペプチド １７、塩化ナトリウム、ホウ酸、エデト酸ナトリウムおよび塩化ベンザルコニウムを加えて溶解する。ホウ砂を適量加えて ｐＨ を ７．０ に調整する。滅菌精製水を加えて １００ ｍＬ までメスアップする。
【００５５】
〔実施例 ６〕 （製剤例３：注射剤）
ペプチド１９ １０ ｍｇ
塩化ナトリウム ９００ ｍｇ
１ Ｎ 水酸化ナトリウム 適量
注射用蒸留水 全量 １００ ｍＬ
以上の成分を常法により無菌的に混和して注射剤を調製する。
【００５６】
〔実施例 ７〕 （肺組織 ＶＩＰ レセプターに対するペプチドの結合活性 １）
ラット肺ホモジネートを用いて、 ＶＩＰ レセプターに対するペプチド １−４、３７−４３ の結合活性を検討した。実験動物として、７〜９週齢（体重：２００〜３５０）のＳＤ系雄性ラット（日本チャールズリバー（株）より購入）を使用し、ラット用固形試料（ＭＦ、オリエンタル酵母工業（株）製）及び飲料水を自由に与えて、室温２４±２℃で飼育した。ラットをエーテル麻酔下で開腹し、腹部下行大動脈より採血し屠殺した。直ちに生理食塩水で灌流し、肺を摘出した。肺の一部を秤量後、１９倍量の２５０ ｍＭ ｓｕｃｒｏｓｅ、５ ｍＭ ＭｇＣｌ２・６Ｈ２Ｏ、０．１％ ｂａｃｉｔｒａｃｉｎを含む２５ ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ ｂｕｆｆｅｒ （ｐＨ ７．４）を加え、ポリトロンホモジナイザーでホモジナイズした。ホモジネートを冷却下３０，０００ ｘ ｇで２０分間遠心分離した。得られた沈渣を、５ ｍＭ ＭｇＣｌ２・６Ｈ２Ｏ、０．１％ ｂａｃｉｔｒａｃｉｎ、０．２％ ＢＳＡを含む２５ ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ ｂｕｆｆｅｒ（ｂｕｆｆｅｒ Ａ）で懸濁して受容体標品（５％）とした。肺におけるＶＩＰ受容体の測定は、標識リガンドとして［１２５Ｉ］ＶＩＰを用いるラジオレセプターアッセイ法により行った。肺より調製した受容体標品を１０−１０〜１０−５ ＭのＶＩＰまたはＶＩＰ誘導体（ペプチド１−４、３７−４３）を含むｂｕｆｆｅｒ Ａ（ｐＨ ７．４）中で［１２５Ｉ］ＶＩＰ（３０ ｐＭ）と４℃、３時間インキュベーション後、ｆｉｌｔｅｒ ｂｏｘ（Ａｄｖａｎｔｅｃ）を用いて反応液をガラス繊維濾紙（Ｗｈａｔｍａｎｎ ＧＦ／Ｃ）上に急速吸引濾過し、その濾紙を５ ｍＭ ＭｇＣｌ２・６Ｈ２Ｏ、０．２％ ＢＳＡを含む２５ ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ ｂｕｆｆｅｒ（ｐＨ ７．４）２ ｍＬで３回洗浄後、濾紙上の放射活性をγカウンター（Ａｌｏｋａ）で測定した。本測定において、ペプチド非存在下で得られた放射活性を全結合、３ μＭのペプチド１（非標識ＶＩＰ）の存在下で得られた放射活性を非特異的結合とし、両者の差を特異的結合と定義した。その結果を図３に示す。ペプチド １−４ はいずれも、肺組織 ＶＩＰ レセプターに対して強い結合活性を示すが、ペプチド １ （ＶＩＰ）と比して、ペプチド ２−４ は有意に結合活性が上昇しており、ＶＩＰ 誘導体群の有用性を示唆した（図３（Ａ））。ペプチド ３７−４３に関しては、Ｃ 末端構成アミノ酸の欠損に従って徐々に結合活性が低下したが、特に Ｃ 末端より ６ 残基のアミノ酸を欠落させた場合には著しくその活性が低下した（図 ３（Ｂ））。この結果より、ＶＩＰ レセプターに対しては少なくとも Ｎ 末端側より ２３ 残基の構成アミノ酸が必須であることを確認した。
【００５７】
〔実施例 ８〕 （肺組織 ＶＩＰ レセプターに対するペプチドの結合活性 ２）
実験動物として、８〜１０週齢（体重：２５０〜４００）のＳＤ系雄性ラット（日本チャールズリバー（株）より購入）を使用し、ラット用固形試料（ＭＦ、 オリエンタル酵母工業（株）製及び飲料水を自由に与えて、室温２４±２℃で飼育した。ネンブタール麻酔下（４０ ｍｇ／ｋｇ ｉ．ｐ．）のラットにペプチド４（５０ μｇ／ｂｏｄｙ）のＤＰＩ製剤または賦形剤を粉末気管内投与器具（ＤＰ−４）を用いてラット気管内に投与し、投与後３０分で開腹し、腹部下行大動脈より採血し屠殺した。直ちに生理食塩水で灌流し、肺を摘出した。肺の一部を秤量後、１９倍量の２５０ ｍＭ ｓｕｃｒｏｓｅ、５ ｍＭ ＭｇＣｌ２・６Ｈ２Ｏ、０．１％ ｂａｃｉｔｒａｃｉｎを含む２５ ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ ｂｕｆｆｅｒ （ｐＨ ７．４）を加え、ポリトロンホモジナイザーでホモジナイズした。ホモジネートは冷却下３０，０００ ｘ ｇで２０分間遠心分離した。得られた沈渣を、５ ｍＭ ＭｇＣｌ２・６Ｈ２Ｏ、０．１％ ｂａｃｉｔｒａｃｉｎ、０．２％ ＢＳＡを含む２５ ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ ｂｕｆｆｅｒ（ｂｕｆｆｅｒ Ａ）で懸濁して受容体標品（１％）とした。肺におけるＶＩＰ受容体の測定は、標識リガンドとして［１２５Ｉ］ＶＩＰを用いるラジオレセプターアッセイ法により行った。肺より調製した受容体標品をｂｕｆｆｅｒＡ（ｐＨ ７．４）中で［１２５Ｉ］ＶＩＰ（５００ ｐＭ）と４℃、３時間インキュベーション後、ｆｉｌｔｅｒ ｂｏｘ（Ａｄｖａｎｔｅｃ）を用いて反応液をガラス繊維濾紙（Ｗｈａｔｍａｎｎ ＧＦ／Ｃ）上に急速吸引濾過し、その濾紙を５ ｍＭ ＭｇＣｌ２・６Ｈ２Ｏ、０．２％ ＢＳＡを含む２５ ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ ｂｕｆｆｅｒ（ｐＨ ７．４）２ ｍＬで３回洗浄後、濾紙上の放射活性をγカウンター（Ａｌｏｋａ）で測定した。本測定において、非標識ＶＩＰ非存在下で得られた放射活性を全結合、３ μＭの非標識ＶＩＰの存在下で得られた放射活性を非特異的結合とし、両者の差を特異的結合と定義して、ペプチド４のラット肺の種々の部位における特異的結合の程度を求めた。その結果、図４に示すように、ペプチド ４ は多少の差はあるもののラット肺の全ての組織においてほぼ同量のレセプター結合量を認めた。このことは、ペプチド ４ の粉末製剤が均一な薬剤ミストを形成し、肺のあらゆる箇所に到達して薬効を発揮しうることを強く示唆している。
【００５８】
〔実施例 ９〕 （ＶＩＰ 類の抗炎症作用）
１００ μｇ の 卵白アルブミン（ＯＶＡ） をラットに継続的に腹腔内投与し（０ 日、７ 日、１４ 日）、１５ 日目に同量の ＯＶＡ 微細粉末を気道内投与して気道炎症を誘起した。この時、１５ 日目の ＯＶＡ 気道内投与 １ 時間前に １００ μｇ のペプチド１ あるいはペプチド ４ の吸入用粉末製剤を気道内投与、そしてポジティブコントロールとして ０．５ ｍｇ／ｋｇ のデキサメタゾンを腹腔内投与した。ＯＶＡ 気道内投与後 ６ 時間および ２４ 時間目に麻酔下肺および気管支を摘出し、１０％ 中性緩衝ホルマリンに浸して固定する。固定後、切片標本を作製し、肺実質表面の状態および好酸球・好中球の浸潤度合についてモニタリングした。ラット気道および気管支を対象とし、ペルオキシダーゼ染色によって好酸球・好中球の検出を行い、これらの組織への浸潤度合を指標として各検体の抗炎症作用について評価を行った。図５及び６にペルオキシダーゼ染色後の気道（図５；（Ａ） 薬剤非投与群；（Ｂ） デキサメタゾン投与群；（Ｃ） ペプチド１ 投与群；（Ｄ） ペプチド ４ 投与群）および気管支（図６；（Ａ） 薬剤非投与群；（Ｂ） デキサメタゾン投与群；（Ｃ） ペプチド１ 投与群；（Ｄ） ペプチド ４ 投与群）の写真を示す。その結果、薬剤非投与群ではいずれも強い顆粒球浸潤を認め、ＯＶＡ による炎症が誘起されていることを確認した。デキサメタゾン投与によって、この炎症反応は抑制され、薬剤および ＯＶＡ 投与後の約 ２４ 時間後においてもその効果は継続していることが明らかとなった。ペプチド １ 投与群では完全に炎症を抑制出来ていないものの、ペプチド ４ 投与によってデキサメタゾンと同程度まで炎症が抑制されることを確認した。
【００５９】
【発明の効果】
本発明によれば、生体内において長時間に渡って炎症を抑制しうる ＰＡＣＡＰ／ＶＩＰ誘導体を提供することが出来る。
【００６０】
【配列表】
【００６１】
【配列表フリーテキスト】
配列番号１〜４４：合成ペプチド
【図面の簡単な説明】
【図１】本発明の医薬組成物の一形態である粉末製剤の走査型電子顕微鏡写真を示す（（Ａ）７５０倍、（Ｂ）１，５００倍）。
【図２】本発明の医薬組成物の一形態である粉末製剤の粒度分布を示す。
【図３】（Ａ）及び（Ｂ）は本発明に用いるペプチド及び対照ペプチドのラット肺組織ＶＩＰレセプターに対する結合活性を示す。
【図４】ペプチド４のラット肺の種々の部位における特異的結合を示す。
【図５】炎症を誘起させた気道におけるペプチド４の抗炎症効果を示す。
（Ａ） 薬剤非投与群；（Ｂ） デキサメタゾン投与群；（Ｃ） ペプチド１ 投与群；（Ｄ） ペプチド ４ 投与群
【図６】炎症を誘起させた気管支におけるペプチド４の抗炎症効果を示す。
（Ａ） 薬剤非投与群；（Ｂ） デキサメタゾン投与群；（Ｃ） ペプチド１ 投与群；（Ｄ） ペプチド ４ 投与群
【発明の属する技術分野】
本発明は、極めて強力な抗炎症作用を有し、生体内において長時間に渡ってその効果を示すことが可能である ＰＡＣＡＰ／ＶＩＰ 誘導体及びこれを含有する医薬組成物に関する。
【０００２】
【従来の技術】
ＶＩＰ（血管作動性腸管ペプチド；Ｖｏｓｏａｃｔｉｖｅ Ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ Ｐｅｐｔｉｄｅ）は、脳−腸管ペプチドと呼ばれ、血流促進、血圧低下作用をもつ生理活性ペプチドの一種である。このＶＩＰは、ブタ腸管から抽出されており、２８個のアミノ酸残基からなる（例えば非特許文献１参照）。一方、ＰＡＣＡＰ（下垂体アデニレートシクラーゼ活性化ペプチド； Ｐｉｔｕｉｔａｒｙ Ａｄｅｎｙｌａｔｅ Ｃｙｃｌａｓｅ Ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ Ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ） は、羊の視床下部から下垂体培養細胞のアデニル酸シクラーゼを活性化させるバイオアッセイ系を指標にして単離され構造決定された３８個のアミノ酸残基よりなるペプチドであり、ＰＡＣＡＰ３８と、ＰＡＣＡＰ２７の２種類がある（例えば非特許文献２参照）。このＰＡＣＡＰのＮ末端側から２７個のアミノ酸配列はＶＩＰと極めて類似した構造を有している。また、ＶＩＰとＰＡＣＡＰのアミノ酸配列は、セクレチン、グルカゴン等に類似していることから、グルカゴン−セクレチンスーパーファミリーに属するペプチドとされている。これら ＰＡＣＡＰ および ＶＩＰ は ＰＡＣＡＰ／ＶＩＰ レセプターを介してその生理作用を示すが、この ＰＡＣＡＰ／ＶＩＰ レセプターは生体内において広い分布を示し、それ故 ＰＡＣＡＰ／ＶＩＰ は多くの生理活性を有することが報告されている。例えば、抗喘息作用（特許文献１）、血圧低下作用（特許文献２）、増毛作用（特許文献３）、インポテンツ改善作用（特許文献４）、膣潤滑誘発作用（特許文献５）、胃腸管蠕動運動抑制作用（特許文献６）、神経変性疾患・低酸素症・記憶能力低下改善作用（特許文献７）、皮膚潰瘍治療作用（特許文献８）、ニューロンネットワーク形成促進（特許文献９）、コンフォメーション病改善薬（非特許文献３）などである。また、これらの活性以外にも抗炎症作用が指摘されており、外部からの抗原刺激によるマクロファージの活性化を強力に抑制することが報告されている（例えば非特許文献４参照）。それ故、アレルギー性鼻炎や喘息に ＰＡＣＡＰ／ＶＩＰ 、特に ＶＩＰ が有効であるとされてきた（特許文献１０参照）。これらの生理作用を考慮すれば医薬応用の可能性は非常に大きいものと考えられるが、ＰＡＣＡＰ や ＶＩＰ 等の生理活性ペプチドは概して不安定であり、特に生体内においては速やかな代謝を受けるためにその作用継続時間は非常に短いものである。作用時間の短い抗炎症剤は実用化に難しく、さらにアレルギー喘息患者においては致命的な欠点となる可能性が高い。
【０００３】
【特許文献１】
特開平８−３３３２７６号公報
【特許文献２】
特開昭６３−１７９８９４号公報
【特許文献３】
特開平０１−８３０１２号公報
【特許文献４】
特開平０１−１９０９７号公報
【特許文献５】
特表平０１−５０１９３７号公報
【特許文献６】
特表平０６−５０７４１５号公報
【特許文献７】
特開平０７−６９９１９号公報
【特許文献８】
特開平０８−４０９２６号公報
【特許文献９】
特開２００１−２２６２８４号公報
【特許文献１０】
特開昭５６−１２８７２１号公報
【非特許文献１】
サイド（Ｓ．Ｉ．Ｓａｉｄ）ら、「サイエンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ）」 （米国） １９７０年 １６９巻 ｐ．１２１７
【非特許文献２】
宮田（Ａ．Ｍｉｙａｔａ）ら、「バイオケミカル アンド バイオフィジカル リサーチ コミュニケーションズ（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ａｎｄ ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ ｒｅｓｅａｒｃｈ ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ）」 （米国） １９８９年 １６４巻 ｐ．５６７
【非特許文献３】
尾上（Ｏｎｏｕｅ， Ｓ．）ら、「フェブス レターズ（ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔｅｒｓ）」 （オランダ） ２００２年 ５２２巻 ｐ．６５−ｐ．７０
【非特許文献４】
ダルガド（Ｄｅｌｇａｄｏ， Ｍ．）ら、「ジャーナル オブ イミュノロジー（Ｊｏｕｒｎａｌｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ）」 １９９９年 １６２巻ｐ．２３５８−ｐ．６７
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
従って、本発明は、長時間に渡って抗炎症作用を発揮することが出来、臨床上安全に使用できる安定性の高い ＰＡＣＡＰ／ＶＩＰ 誘導体からなる抗炎症医薬組成物を提供することを目的とする。
【０００５】
【課題を解決するための手段】
そこで本発明者らは先に、酵素耐性を新規機能として保持させた ＰＡＣＡＰ／ＶＩＰ 誘導体を創製し（特開平８−３３３２７６号）、実際にこれらがトリプシン等生体内ペプチダーゼによる代謝に対して優れていること（樫本（Ｋａｓｈｉｍｏｔｏ， Ｋ．）ら、「ペプチド ケミストリー（Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）」 １９９６年 １９９７巻 ｐ．２４９−ｐ．２５２参照）、さらには気管支拡張作用を指標としてこれらの誘導体が著しい薬効持続作用を有することを明らかにした（吉原（Ｙｏｓｈｉｈａｒａ， Ｓ．）ら、「ペプチド（Ｐｅｐｔｉｄｅｓ）」 （米国） １９９８年 １９巻 ｐ．５９３−ｐ．５９７；吉原（Ｙｏｓｈｉｈａｒａ， Ｓ．）ら、「ブリティッシュ ジャーナル オブ ファーマコロジー（Ｂｒｉｔｉｓｈ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ）」 １９９７年 １２１巻 ｐ．１７３０−ｐ．１７３４を参照）。さらに本発明者らは、溶液中での安定性を飛躍的に向上させた誘導体を開発し、薬理効果の延長を可能とすることに成功した（特願２００２−３４４５２３）。従って、この長時間作動型 ＰＡＣＡＰ／ＶＩＰ 誘導体は医薬応用において極めて有用なものと考えられ、特に先述の各種生理・薬理作用を目的とした薬剤の有力な候補として考えられた。
【０００６】
ＰＡＣＡＰ の最小活性単位は ＶＩＰ と同様 Ｎ 末端より ２３ 残基であることが公知の事実となっており（Ｋｉｔａｄａ， Ｃ． ｅｔ ａｌ．， Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ １９９０， １９９１， ２３９−２４４）、上記 ＰＡＣＡＰ 誘導体群についても Ｎ 末端より ２３ 残基以上あれば ＰＡＣＡＰ／ＶＩＰ の生理・薬理効果が期待できる。
【０００７】
さらに本発明者らは上記ペプチドが、天然型ＶＩＰ及びＰＡＣＡＰと同様、またはそれ以上の高い生理活性を有すると共に、高い安定性を有することを見出すに到った。また、これらの高安定性誘導体群は ＶＩＰ と比して、作用時間が長く、抗炎症作用が長期に渡って継続することを新規に見出した。
【０００８】
すなわち、本発明は以下の（１）〜（１６）の発明を提供する。
（１） 下記式（Ｉ）：
Ｈｉｓ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ａ−Ｂ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｃ−Ｄ−Ｔｙｒ−
Ｅ−Ａｒｇ−Ｆ−Ａｒｇ−Ｇ−Ｇｌｎ−Ｈ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｉ− （Ｉ）
Ｊ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ｋ−Ｌ−Ｍ−Ｎ （配列番号１）
（式中、Ａ は、Ａｌａ または Ｇｌｙ；Ｂ はＶａｌ または Ｉｌｅ；Ｃ は、Ａｓｐ、 Ｇｌｕ または Ａｌａ；Ｄ は、Ａｓｎ または Ｓｅｒ；Ｅ は、Ｔｈｒ または Ｓｅｒ；Ｆ は、Ｌｅｕ または Ｔｙｒ；Ｇ，Ｉ，Ｊ は Ｌｙｓ または Ａｒｇ；Ｈ は、Ｍｅｔ、Ｌｅｕ または ｎＬｅｕ；Ｋ は、Ａｓｎ、Ａｌａ または化学結合；Ｌ は Ｓｅｒ、Ａｌａ または化学結合；Ｍ は、Ｉｌｅ、Ｖａｌまたは化学結合；Ｎ は、化学結合、Ｌｅｕ，Ｌｅｕ−Ａｓｎ，Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ， Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ， Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ， Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ， Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ， Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ａｒｇ， Ｌｅｕ−Ｇｌｙ，Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ，Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ，Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ，Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ，Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ａｒｇ，Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ｌｙｓ，Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ａｓｎ−Ａｒｇ、またはＬｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｓｎ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｐｈｅ−Ｔｙｒを表す。但し、Ｇ，Ｉ，Ｊが共にＬｙｓであり、かつＨがＭｅｔであることはない。）
で示されるアミノ酸配列のＮ末端より少なくとも２３残基からなるアミノ酸配列で示され、Ｃ 末端アミノ酸のα位カルボキシル基がＮＨ２で修飾されているかまたはされていないペプチド、または薬学的に許容されるその塩を含有する抗炎症剤。
【０００９】
（２） 前記ペプチドが、一般式 （Ｉ） においてＡ が Ａｌａ、Ｂ が Ｖａｌ、Ｃ が Ａｓｐ、Ｄ が Ａｓｎ、Ｅ が Ｔｈｒ、Ｆ がＬｅｕ、Ｇ， Ｉ， Ｊ が Ａｒｇ、Ｈ が Ｌｅｕ、Ｋ が Ａｓｎ、Ｌ が Ｓｅｒ、Ｍ が Ｉｌｅ、Ｎ が Ｌｅｕ−Ａｓｎであるアミノ酸配列のＮ 末端より少なくとも ２３ 残基のアミノ酸配列で示され、Ｃ末端が −ＮＨ２ で修飾されたペプチドである、上記（１）に記載の抗炎症剤。（ペプチド２等が相当）
【００１０】
（３） 前記ペプチドが、一般式 （Ｉ） においてＡ が Ａｌａ、Ｂ が Ｖａｌ、Ｃ が Ａｓｐ、Ｄ が Ａｓｎ、Ｅ が Ｔｈｒ、Ｆ がＬｅｕ、Ｇ， Ｉ， Ｊ が Ａｒｇ、Ｈ が Ｌｅｕ、Ｋ が Ａｓｎ、Ｌ が Ｓｅｒ、Ｍ が Ｉｌｅ、Ｎ が Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ａｒｇであるアミノ酸配列のＮ 末端より少なくとも ２３ 残基のアミノ酸配列で示され、Ｃ末端が −ＮＨ２ で修飾されたペプチドである、上記（１）に記載の抗炎症剤。（ペプチド３等）
【００１１】
（４） 前記ペプチドが、一般式 （Ｉ） においてＡ が Ａｌａ、Ｂ が Ｖａｌ、Ｃ が Ａｓｐ、Ｄ が Ａｓｎ、Ｅ が Ｔｈｒ、Ｆ がＬｅｕ、Ｇ， Ｉ， Ｊ が Ａｒｇ、Ｈ が Ｌｅｕ、Ｋ が Ａｓｎ、Ｌ が Ｓｅｒ、Ｍ が Ｉｌｅ、Ｎ が Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ａｒｇであるアミノ酸配列のＮ 末端より少なくとも ２３ 残基のアミノ酸配列で示され、Ｃ末端が −ＮＨ２ で修飾されたペプチドである、上記（１）に記載の抗炎症剤。（ペプチド４等）
【００１２】
（５） 前記ペプチドが、一般式 （Ｉ） においてＡ が Ａｌａ、Ｂ が Ｖａｌ、Ｃ が Ａｓｐ、Ｄ が Ａｓｎ、Ｅ が Ｔｈｒ、Ｆ がＬｅｕ、Ｇ， Ｉ， Ｊ が Ａｒｇ、Ｈ が Ｌｅｕ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ が化学結合であるアミノ酸配列で示され、Ｃ末端が −ＮＨ２ で修飾されたペプチドである、上記（１）に記載の抗炎症剤。（ペプチド６等）
【００１３】
（６） 前記ペプチドが、一般式 （Ｉ） においてＡ が Ａｌａ、Ｂ が Ｖａｌ、Ｃ が Ａｓｐ、Ｄ が Ａｓｎ、Ｅ が Ｔｈｒ、Ｆ がＬｅｕ、Ｇ， Ｉ， Ｊ が Ａｒｇ、Ｈ が Ｌｅｕ、Ｋ が Ａｌａ、Ｌ が Ａｌａ、Ｍ が Ｉｌｅ、Ｎ が Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ａｒｇであるアミノ酸配列のＮ 末端より少なくとも ２３ 残基のアミノ酸配列で示され、Ｃ末端が −ＮＨ２ で修飾されたペプチドである、上記（１）に記載の抗炎症剤。（ペプチド８等）
【００１４】
（７） 前記ペプチドが、一般式 （Ｉ） においてＡ が Ａｌａ、Ｂ が Ｖａｌ、Ｃ が Ｇｌｕ、Ｄ が Ａｓｎ、Ｅ が Ｔｈｒ、Ｆ がＬｅｕ、Ｇ， Ｉ， Ｊ が Ａｒｇ、Ｈ が Ｌｅｕ、Ｋ が Ａｌａ、Ｌ が Ａｌａ、Ｍ が Ｉｌｅ、Ｎ が Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ａｒｇであるアミノ酸配列のＮ 末端より少なくとも ２３ 残基のアミノ酸配列で示され、Ｃ末端が −ＮＨ２ で修飾されたペプチドである、上記（１）に記載の抗炎症剤。（ペプチド１７等）
【００１５】
（８） 前記ペプチドが、一般式 （Ｉ） においてＡ が Ａｌａ、Ｂ が Ｖａｌ、Ｃ が Ａｌａ、Ｄ が Ａｓｎ、Ｅ が Ｔｈｒ、Ｆ がＬｅｕ、Ｇ， Ｉ， Ｊ が Ａｒｇ、Ｈ が Ｌｅｕ、Ｋ が Ａｌａ、Ｌ が Ａｌａ、Ｍ が Ｉｌｅ、Ｎ が Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ａｒｇであるアミノ酸配列のＮ 末端より少なくとも ２３ 残基のアミノ酸配列で示され、Ｃ末端が −ＮＨ２ で修飾されたペプチドである、上記（１）に記載の抗炎症剤。（ペプチド１９等）
【００１６】
（９） 前記ペプチドが、一般式 （Ｉ） においてＡ が Ａｌａ、Ｂ が Ｖａｌ、Ｃ が Ａｓｐ、Ｄ が Ａｓｎ、Ｅ が Ｔｈｒ、Ｆ がＬｅｕ、Ｇ， Ｉ， Ｊ が Ａｒｇ、Ｈ が Ｌｅｕ、Ｋ が Ａｌａ、Ｌ が Ａｌａ、Ｍ が Ｖａｌ、Ｎ が Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ａｒｇであるアミノ酸配列のＮ 末端より少なくとも ２３ 残基のアミノ酸配列で示され、Ｃ末端が −ＮＨ２ で修飾されたペプチドである、上記（１）に記載の抗炎症剤。（ペプチド２１等）
【００１７】
（１０） 前記ペプチドが、一般式 （Ｉ） においてＡ が Ｇｌｙ、Ｂ が Ｉｌｅ、Ｃ が Ａｓｐ、Ｄ が Ｓｅｒ、Ｅ が Ｓｅｒ、Ｆ がＴｙｒ、Ｇ， Ｉ， Ｊ が Ａｒｇ、Ｈ が Ｌｅｕ、Ｋ が Ａｌａ、Ｌ がＡｌａ、Ｍ が Ｖａｌ、Ｎ が Ｌｅｕであるアミノ酸配列のＮ 末端より少なくとも ２３ 残基のアミノ酸配列で示され、Ｃ末端が −ＮＨ２ で修飾されたペプチドである、上記（１）に記載の抗炎症剤。（ペプチド２４等）
【００１８】
（１１） 前記ペプチドが、一般式 （Ｉ） においてＡ が Ｇｌｙ、Ｂ が Ｉｌｅ、Ｃ が Ａｓｐ、Ｄ が Ｓｅｒ、Ｅ が Ｓｅｒ、Ｆ がＴｙｒ、Ｇ， Ｉ， Ｊ が Ａｒｇ、Ｈ が Ｌｅｕ、Ｋ が Ａｌａ、Ｌ がＡｌａ、Ｍ が Ｖａｌ、Ｎ が Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ａｒｇであるアミノ酸配列のＮ 末端より少なくとも ２３ 残基のアミノ酸配列で示され、Ｃ末端が −ＮＨ２ で修飾されたペプチドである、上記（１）に記載の抗炎症剤。（ペプチド２５等）
【００１９】
（１２） 前記ペプチドが、一般式 （Ｉ） においてＡ が Ａｌａ、Ｂ が Ｉｌｅ、Ｃ が Ａｓｐ、Ｄ が Ｓｅｒ、Ｅ が Ｓｅｒ、Ｆ がＴｙｒ、Ｇ， Ｉ， Ｊ が Ａｒｇ、Ｈ が Ｌｅｕ、Ｋ が Ａｌａ、Ｌ がＡｌａ、Ｍ が Ｖａｌ、Ｎ が Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ａｒｇであるアミノ酸配列のＮ 末端より少なくとも ２３ 残基のアミノ酸配列で示され、Ｃ末端が −ＮＨ２ で修飾されたペプチドである、上記（１）に記載の抗炎症剤。（ペプチド２７等）
【００２０】
（１３） 前記ペプチドが、一般式 （Ｉ） においてＡ が Ａｌａ、Ｂ が Ｉｌｅ、Ｃ が Ａｓｐ、Ｄ が Ｓｅｒ、Ｅ が Ｓｅｒ、Ｆ がＴｙｒ、Ｇ， Ｉ， Ｊ が Ａｒｇ、Ｈ が Ｌｅｕ、Ｋ が Ａｌａ、Ｌ がＡｌａ、Ｍ が Ｖａｌ、Ｎ が Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ａｓｎ−Ａｒｇであるアミノ酸配列のＮ 末端より少なくとも ２３ 残基のアミノ酸配列で示され、Ｃ末端が −ＮＨ２ で修飾されたペプチドである、上記（１）に記載の抗炎症剤。（ペプチド３１等）
【００２１】
（１４） 前記ペプチドが、一般式 （Ｉ） においてＡ が Ａｌａ、Ｂ が Ｉｌｅ、Ｃ が Ａｓｐ、Ｄ が Ｓｅｒ、Ｅ が Ｓｅｒ、Ｆ がＴｙｒ、Ｇ， Ｉ， Ｊ が Ａｒｇ、Ｈ が Ｌｅｕ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ が化学結合であるアミノ酸配列で示され、Ｃ末端が −ＮＨ２ で修飾されたペプチドである、上記（１）に記載の抗炎症剤。（ペプチド３５等）
（１５） 上記（１）〜（１４）に記載の抗炎症剤を含有する医薬組成物。
（１６） 粉末吸入製剤、粉末点鼻製剤、眼局所投与剤、注射剤、または塗布剤である、上記（１５）に記載の医薬組成物。
以下、本発明を具体的に説明する。
【００２２】
【発明を実施するための形態】
本発明の高安定性ペプチド誘導体は、具体的には一般式（Ｉ）に記載のアミノ酸配列のＮ末端より少なくとも２３残基からなるアミノ酸配列で示され、Ｃ 末端アミノ酸のα位カルボキシル基がＮＨ２で修飾されているかまたはされていないペプチドであり、Ｎ末端のアミノ基はアセチル基、ステアリル基等の各種脂肪酸、ポリエチレングリコール、ヒアルロン酸等の高分子、さらにはデンドリマー等が結合していても良い。Ｃ 末端については、−ＯＨ，−ＮＨ２，あるいは Ｎ−メチルアミドやＮ−エチルアミド等で修飾されていても良いが望ましくは −ＮＨ２ である。
【００２３】
本発明に用いられるペプチドの代表例を表１に示した。ここに示したペプチド２〜２１、並びに ２４〜３２及び３４〜３６ は、後記配列表の配列番号３〜２２及び２５〜３３及び３５〜３７に対応するペプチドである。ただし、ペプチド ５，６，１８，２０，３４，３５，３６は ２３ 残基のアミノ酸配列からなるペプチドであり、ペプチド９， ２９， ３６ は Ｎ 末端アミノ基にアセチル基が、そしてペプチド １０ の Ｎ 末端アミノ基にはステアリル基が結合している。尚、表中の空欄は化学結合であることを示す。
【００２４】
【表１】
上記ペプチドは、使用の際にはその Ｎ 末端に極性物質または非極性物質（脂肪酸、アシル基等）を結合させて分子の極性を変化させたり、ポリエチレングリコール、グルコサミノグリカン（ヒアルロン酸等）の高分子を結合させて酵素耐性を増強したり、リポソーム基質に結合させてリポソームに封入したり、あるいは脂質膜表面に固定することもできる。アシル基の導入は、その活性の向上のみならず、自己凝集を抑制することが当業者間で知られている。
【００２６】
本発明に使用するペプチドは、特に限定するものではないが、公知のペプチド合成の常法に従って合成できる。例えば「ザ．ペプチド（Ｔｈｅ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ）」第１巻（１９６６年） ［Ｓｃｈｒｅｄｅｒ ａｎｄ Ｌｕｈｋｅ 著、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， Ｕ．Ｓ．Ａ．］ 、あるいは「ペプチド合成」［泉屋ら著、丸善株式会社（１９７５年）］の記載に従い、具体的には、アジド法、酸クロライド法、酸無水物法、混合酸無水物法、ＤＣＣ法、活性エステル法（Ｐ−ニトロフエニルエステル法、Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミドエステル法、シアノメチルエステル法など）、ウッドワード試薬Ｋを用いる方法、カルボイミダゾール法、酸化還元法、ＤＣＣ−アディティブ（ＨＯＮＢ、ＨＯＢｔ、ＨＯＳｕ）法など、各種の方法により合成することができる。これらの方法は、固相合成及び液相合成のいずれにも適用できる。
【００２７】
本発明においてペプチド合成は、上記のような一般的なポリペプチドの合成法に従って、例えば末端アミノ酸に順次１個ずつアミノ酸を縮合させるいわゆるステップワイズ法によって、または数個のフラグメントに分けてカップリングさせていく方法により行われる。
【００２８】
例えばステップワイズ法による固相合成は、具体的には、メリフィールド（Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ．Ｒ．Ｂ．）の方法 ［Ｓｏｌｉｄ ｐｈａｓｅ ｐｅｐｔｉｄｅ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ， Ｊ．Ａｍｅｒ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．， ８５， ２１４９−２１５９ （１９６３）］に従い、以下のようにして行うことができる。まず、Ｃ末端アミノ酸（アミノ基を保護したもの）をそのカルボキシル基によって不溶性樹脂に結合させ、その後、該Ｃ末端アミノ酸のアミノ基の保護基を除去する。次いで、得られたこの遊離の反応性アミノ基に、目的とするペプチドのアミノ酸配列に従って、アミノ基を保護したアミノ酸の反応性カルボキシル基を縮合反応により順次結合させる。このようにして一段階ずつ全配列を合成した後、ペプチドを不溶性樹脂からはずす。
【００２９】
上記の固相合成において用いられる不溶性樹脂は、反応性カルボキシル基との結合性を有するものであればいずれをも使用でき、例えばベンズヒドリルアミン樹脂（ＢＨＡ樹脂）、クロルメチル樹脂、オキシメチル樹脂、アミノメチル樹脂、メチルベンズヒドリル樹脂（ＭＢＨＡ樹脂）、４−アミノメチルフェノキシメチル樹脂、４−ヒドロキシメチルフェノキシメチル樹脂、４−オキシメチルフェニルアセタミドメチル樹脂などが挙げられる。
【００３０】
また、α−アミノ基の保護基として９−フルオレニルメチルオキシカルボニル基（Ｆｍｏｃ）を使用する場合は４−ヒドロキシメチルフェノキシメチル樹脂など、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）によって樹脂から脱離できるものがよく、ｔ−ブトキシカルボニル基（Ｂｏｃ）を使用する場合は４−オキシメチルフェニルアセタミドメチル樹脂（ＰＡＭ樹脂）など、フッ化水素などによって樹脂から脱離できるものがよい。樹脂１ｇ当りペプチド濃度は０．５ｍｍｏｌｅ以下とすることが好ましい。
【００３１】
上記の方法においては、アミノ酸のペプチド結合に関与するアミノ基への保護基の結合及び該保護基の脱離、ならびにアミノ酸のペプチド結合に関与するカルボキシル基の活性化が必要である。
【００３２】
アミノ基の保護基として、例えば、ベンジルオキシカルボニル（Ｚ）、ｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）、ｔ−アミノオキシカルボニル（Ａｏｃ）、イソボニルオキシカルボニル、ｐ−メトキシベンジルオキシカルボニル、２−クロル−ベンジルオキシカルボニル、アダマンチルオキシカルボニル、トリフルオロアセチル、フタロイル、ホルミル、ｏ−ニトロフェニルスルフェニル、ジフェニルホスフイノチオイルなどの基が挙げられる。
【００３３】
また、アミノ酸の中で、側鎖に官能基を有するもの、例えばＨｉｓ、Ｔｙｒ、Ｔｈｒ、Ｌｙｓ、Ａｓｐ、Ａｒｇ及びＳｅｒは、その側鎖の官能基を保護しておくのが好ましい。官能基の保護は、通常用いられている方法で、下記のような通常の保護基を結合させることにより行われ、反応終了後、該保護基は脱離される。
【００３４】
Ｈｉｓのイミノ基の保護基としては、例えばベンジルオキシメチル（Ｂｏｍ）、ｐ−トルエンスルホニル（Ｔｏｓ）、ベンジル（Ｂｚｌ）、ベンジルオキシカルボニル（Ｚ）、トリチル基などが挙げられる。
【００３５】
Ｓｅｒ及びＴｈｒの水酸基は、例えばエステル化またはエーテル化によって保護することができるが、この保護は必須ではない。エステル化に適する基としては、アセチルなどの低級アルカノイル基、ベンゾイルなどのアロイル基、ベンゾイルオキシカルボニル、エチルオキシカルボニルなどの炭酸から誘導される基などが挙げられる。またエーテル化に適する基としては、ベンジル（Ｂｚｌ）、テトラヒドロピラニル、ｔｅｒｔ−ブチル基などが挙げられる。
【００３６】
Ｔｙｒの水酸基の保護基としては、例えばベンジル（Ｂｚｌ）、ブロモベンジルオキシカルボニル（Ｂｒ−Ｚ） 、ジクロロベンジル（Ｃｌ２−Ｂｚｌ） 、ベンジルオキシカルボニル（Ｚ）、アセチル、ｐ−トルエンスルホニル（Ｔｏｓ）基などが挙げられる。
【００３７】
Ｌｙｓのアミノ基の保護基としては、例えばベンジルオキシカルボニル（Ｚ）、クロロベンジルオキシカルボニル（Ｃｌ−Ｚ） 、ジクロロベンジル（Ｃｌ２−Ｂｚｌ）、ｔ−ブトキシカルボニル基（Ｂｏｃ）、ｐ−トルエンスルホニル（Ｔｏｓ）基などが挙げられる。
【００３８】
Ａｒｇのグアニジノ基の保護基としては、例えばｐ−トルエンスルホニル（Ｔｏｓ）、ニトロ、ベンジルオキシカルボニル（Ｚ）、ｔ−アミルオキシカルボニル（Ａｏｃ）基などが挙げられる。
【００３９】
Ａｓｐのカルボキシル基の保護は、例えばベンジルアルコール、メタノール、エタノール、ｔｅｒｔ−ブタノール、シクロヘキシル（ｃＨｅｘ）などによるエステル化により行われる。
【００４０】
その他のアミノ酸の保護基として、Ｔｒｐのインドリル基の保護基としては、例えばホルミル、カルボベンゾキシル、４−メトキシ−２，３，６−トリメチルベンゼンスルホニル、２，２，２−トリクロロエチルオキシカルボニルなどが挙げられるが、この保護は必須ではない。
Ｍｅｔのチオメチル基の保護基としては予めメチルスルホキシドにしておき、後に還元する方法があるが、この保護は必須ではない。
【００４１】
一方、カルボキシル基の活性化は、従来公知の方法にて行うことができ、用いられる試薬なども公知のものから適宜選択しえる。例えば、カルボキル基の活性化は、該カルボキシル基と種々の試薬とを反応させ、対応する酸クロライド、酸無水物または混合酸無水物、アジド、活性エステル（ペンタクロロフェノール、ｐ−ニトロフェノール、Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミド、Ｎ−ヒドロキシベンズトリアゾール、Ｎ−ヒドロキシ−５−ノルボルネン−２、３−ジカルボキシイミド等とのエステル）などを形成させることにより行う。
【００４２】
上記の固相における反応性アミノ基と反応性カルボキシル基との縮合反応（ペプチド結合形成反応）に用いる溶媒としては、ペプチド結合形成に使用できるものであればいずれでもよい。例えば無水または含水のジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、ピリジン、クロロホルム、ジオキサン、ジクロロメタン（ＤＣＭ）、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、酢酸エチル、Ｎ−メチルピロリドン、ヘキサメチルリン酸トリアミド（ＨＭＰＡ）などを単独で、あるいは２種以上の混合溶媒として使用することができる。
【００４３】
また、上記縮合反応は、縮合剤、例えばジシクロヘキシルカルボキシイミド（ＤＣＣ）、カルボジイミダゾールなどのカルボジイミド試薬やテトラエチルピロホスフェイト、ベンゾトリアゾール−Ｎ−ヒドロキシトリスジメチルアミノホスホニウムヘキサフルオロリン化物塩（Ｂｏｐ試薬）などの存在下に行うこともできる。
【００４４】
合成されたペプチドは、通常の方法に従い脱塩、精製することができる。例えば、ＤＥＡＥ−セルロースなどのイオン交換クロマトグラフィー、セファデックスＬＨ−２０ 、セファデックスＧ−２５ などの分配クロマトグラフィー、シリカゲルなどの順相クロマトグラフィー、ＯＤＳ−シリカゲルなどの逆相クロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィーなどが挙げられる。
上記のようにして精製したペプチドは、各種の酸を用いて、所望により薬学的に許容される塩、例えば、酢酸塩、塩酸塩、リン酸塩等にすることができる。
【００４５】
上記ペプチドまたはその塩は、医薬的に許容できる溶剤、賦形剤、担体、補助剤などを使用し、製剤製造の常法に従って液剤、錠剤、散剤、顆粒剤、坐剤、腸溶剤およびカプセル剤などの医薬組成物として調製し、経口製剤、粉末吸入製剤、粉末点鼻製剤、眼局所投与剤、注射剤、または塗布剤として用いることができるが、特に限定するものではない。
【００４６】
本発明のペプチドまたはその塩は、抗炎症作用を有するので、当該製剤は各種炎症関連疾病、具体的には、急性結膜炎、アレルギー性結膜炎、慢性結膜炎、眼瞼縁炎、湿疹、じんま疹、皮膚そう痒症、そう痒を伴う尋常性乾癬、ビダール苔癬、口内炎、アフタ性口内炎、咽頭炎、扁桃炎、急性歯肉炎、辺縁性歯周炎、歯槽骨膜炎、急性上気道炎（急性気管支炎を伴う急性上気道炎を含む）、気管支炎、気道過敏症、急性中耳炎、強膜炎、結節性紅斑、肩関節周囲炎、肩甲関節周囲炎、孤立性アフタ、掌蹠膿疱症、症候性神経痛、進行性指掌角皮症、舌炎、前立腺炎、多形浸出性紅斑、虫刺症、痛風発作、皮膚炎、日光皮膚炎、アトピー性皮膚炎、表層角膜炎、変形性関節症、放射線皮膚炎、慢性円板状エリテマトーデス、慢性関節リウマチ、扁平苔癬、痒疹、膀胱炎、褥瘡性潰瘍、頸肩腕症候群、慢性閉塞性肺疾患、外傷後及び手術後の炎症、さらには膠原病やクローン病などの自己免疫疾患などに有効であり、上記疾病からなる群から構成される１種以上の疾患または症状の治療または予防のために、また手術後及び外傷後の消炎・鎮痛・腫脹の緩解のために使用することができるが、用途は特に限定されるものではない。
【００４７】
本発明の医薬組成物は、例えばヒト、マウス、ラット、ウサギ、イヌ、ネコ等の哺乳動物に対して非経口的にまたは経口的に、さらにはドラッグデリバリーシステムを必要に応じて用いて、安全に投与することができる。当該医薬組成物の投与量は、剤形、投与ルート、症状等により適宜変更しうるが、例えばヒトを含む哺乳動物に投与する場合、ペプチド量として１人１日当たり約１ｐｇ 〜１ ｍｇ／ｋｇ 程度を適用することが例示される。
【００４８】
【実施例】
以下に本発明を参考例、実施例を挙げてより具体的に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【００４９】
〔実施例１〕 ペプチドの合成
配列番号２０に示すアミノ酸配列を有するペプチド １９ をペプチド固相合成の常法に従い製造した。
ＭＢＨＡ 樹脂 ＨＣｌ 塩 （ｐｏｌｙｓｔｙｒｅｎｅ−１％ ｄｉｖｉｎｙｌｂｅｎｚｅｎｅ 共重合体、１００〜２００ ｍｅｓｈ） をマニュアル合成用反応槽（ガラス製、φ６．０ ｘ ２９．５ ｃｍ）に加え、樹脂容量の ２〜３ 倍量のメタノールで攪拌洗浄し、次いでジクロロメタン（樹脂容量の ２〜３ 倍量）で攪拌洗浄して樹脂を膨潤させた。１０％ トリエチルアミン／ジクロロメタンにて中和反応を行い、Ｃ 末端アミノ酸に相当する Ｂｏｃ−Ａｒｇ （Ｔｏｓ）−ＯＨ を樹脂の約 ２ 倍当量用い、ジシクロヘキシルカルボジイミドおよび Ｎ−ハイドロキシベンゾトリアゾールを加えて縮合反応を行った。約 ２ 時間の反応（攪拌下）後、メタノールおよびジクロロメタンにて洗浄し、カイザー試験にてα−アミノ基の消失を確認後、５０％ トリフルオロ酢酸／ジクロロメタンにて ３０ 分間処理して脱保護を行った。次いで、１０％ トリエチルアミン／ジクロロメタンにて中和し、メタノールおよびジクロロメタンにて再洗浄後、再びカイザー試験を実施して脱保護反応の確認を行った。確認後は Ｃ 末より ２ 番目の Ｂｏｃ−Ａｒｇ （Ｔｏｓ）−ＯＨ のカップリングを行うため、同様の工程を繰り返した。その後、Ｂｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ， Ｂｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ， Ｂｏｃ−Ｉｌｅ−ＯＨ， Ｂｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ， Ｂｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ， Ｂｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ， Ｂｏｃ−Ｔｙｒ （Ｃｌ２−Ｂｚｌ）−ＯＨ， Ｂｏｃ−Ａｒｇ （Ｔｏｓ）−ＯＨ， Ｂｏｃ−Ａｒｇ （Ｔｏｓ）−ＯＨ， Ｂｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ， Ｂｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ， Ｂｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ， Ｂｏｃ−Ｇｌｎ （Ｘａｎ）−ＯＨ， Ｂｏｃ−Ａｒｇ （Ｔｏｓ）−ＯＨ， Ｂｏｃ−Ａｒｇ （Ｔｏｓ）−ＯＨ， Ｂｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ， Ｂｏｃ−Ａｒｇ （Ｔｏｓ）−ＯＨ， Ｂｏｃ−Ｔｈｒ （Ｂｚｌ）−ＯＨ， Ｂｏｃ−Ｔｙｒ （Ｃｌ２−Ｂｚｌ）−ＯＨ， Ｂｏｃ−Ａｓｎ （Ｘａｎ）−ＯＨ， Ｂｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ， Ｂｏｃ−Ｔｈｒ （Ｂｚｌ）−ＯＨ， Ｂｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ， Ｂｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ， Ｂｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ， Ｂｏｃ−Ａｓｐ （ＯｃＨｅｘ）−ＯＨ， Ｂｏｃ−Ｓｅｒ （Ｂｚｌ）−ＯＨ， Ｂｏｃ−Ｈｉｓ （Ｂｏｍ）−ＯＨ の順に順次カップリング／脱保護を行い、ペプチド １９ に相当する保護ペプチド； Ｈｉｓ （Ｂｏｍ）−Ｓｅｒ （Ｂｚｌ）−Ａｓｐ （ＯｃＨｅｘ）−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ （Ｂｚｌ）−Ａｌａ−Ａｓｎ−Ｔｙｒ （Ｃｌ２−Ｂｚｌ）−Ｔｈｒ （Ｂｚｌ）−Ａｒｇ （Ｔｏｓ）−Ｌｅｕ−Ａｒｇ （Ｔｏｓ）−Ａｒｇ （Ｔｏｓ）−Ｇｌｎ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ａｒｇ （Ｔｏｓ）− Ａｒｇ （Ｔｏｓ）−Ｔｙｒ （Ｃｌ２−Ｂｚｌ）−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｉｌｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−ＭＢＨＡ を得た。ここで得られた保護ペプチド−ＭＢＨＡ 樹脂にエタンジチオールおよびアニソール存在下無水フッ化水素を加えて反応させた。反応後、無水フッ化水素を減圧下留去後、残渣をエーテルで洗浄し、これに １０％酢酸を加えてペプチドを抽出した。抽出液を逆相カラムクロマトグラフィーにより精製し、凍結乾燥を行いペプチド １９ を得た。
【００５０】
上記方法と同様にして、下記のペプチド１〜４３ を化学合成した。
〔実施例 ２〕 （製剤例１：粉末吸入製剤）
使用機器： Ａ−Ｏ−Ｊｅｔ Ｍｉｌｌ （セイシン企業）
原料供給方法： オートフィーダー
供給エアー圧力： ６．０ ｋｇ／ｃｍ２Ｇ
粉砕エアー圧力： ６．５ ｋｇ／ｃｍ２Ｇ
集塵方法： アウトレットバグ（ポリエチレン）
上記条件にて、エリスリトール（日研化学）及び実施例１で合成したペプチド４ の混合物 約 ４ ｇ を対象に粉砕を行った。収率は約 ８５％ であった。得られた粉末製剤は潮解性がなく、薬剤分布もほぼ均一であることを確認した。本粉末とエリスリトール ５０Ｍ（日研化学）を約 １：０．１ の比率で均一になるよう混和し、吸入・点鼻用粉末製剤を得た。
【００５２】
〔実施例 ３〕 （電子顕微鏡による粒径評価）
実施例 ２ にて得られたペプチド ４ の吸入・点鼻用粉末製剤について、その性状を確認した。ＳＣ−７０１ 型 Ｑｕｉｃｋ ｃｏａｔｅｒ（サンユー電子）を用いて金蒸着させ（膜厚 １０ ｎｍ）、走査型電子顕微鏡 ＪＥＯＬ ＪＳＭ−Ｔ２２０Ａ にて観察した。その結果を図１に示す。キャリアー分子表面を取り囲むようにしてペプチド ４ の微細粒子が付着し、その粒径は数十 μｍ〜約１００ μｍ 程度であることを確認した。
【００５３】
〔実施例 ４〕 （レーザー回折法による製剤特性評価）
実施例 ２ にて得られたペプチド ４ の吸入・点鼻用粉末製剤についてその粒度とキャリアーからの解離性を確認するために、乾式レーザー回折・散乱式粒径分布測定装置（セイシン企業）にて評価を行った。図 ２ に示すように ０．１５ ＭＰａ の吸引力によって、ピークトップ約 ５ μｍ と約 ６０ μｍ の明瞭な ２ つのピークを認め、前者は微細化した薬剤粒子で、後者はキャリアーであることを確認した。そのピーク面積比から、ほぼ定量的にキャリアーからの薬剤粒子脱離が起こっていることを確認し、本製剤が外部からの弱い力によって効率よく薬剤ミストになりうるものであることを確かめた。
【００５４】
〔実施例 ５〕 （製剤例２：点眼剤）
【００５５】
〔実施例 ６〕 （製剤例３：注射剤）
ペプチド１９ １０ ｍｇ
塩化ナトリウム ９００ ｍｇ
１ Ｎ 水酸化ナトリウム 適量
注射用蒸留水 全量 １００ ｍＬ
以上の成分を常法により無菌的に混和して注射剤を調製する。
【００５６】
〔実施例 ７〕 （肺組織 ＶＩＰ レセプターに対するペプチドの結合活性 １）
ラット肺ホモジネートを用いて、 ＶＩＰ レセプターに対するペプチド １−４、３７−４３ の結合活性を検討した。実験動物として、７〜９週齢（体重：２００〜３５０）のＳＤ系雄性ラット（日本チャールズリバー（株）より購入）を使用し、ラット用固形試料（ＭＦ、オリエンタル酵母工業（株）製）及び飲料水を自由に与えて、室温２４±２℃で飼育した。ラットをエーテル麻酔下で開腹し、腹部下行大動脈より採血し屠殺した。直ちに生理食塩水で灌流し、肺を摘出した。肺の一部を秤量後、１９倍量の２５０ ｍＭ ｓｕｃｒｏｓｅ、５ ｍＭ ＭｇＣｌ２・６Ｈ２Ｏ、０．１％ ｂａｃｉｔｒａｃｉｎを含む２５ ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ ｂｕｆｆｅｒ （ｐＨ ７．４）を加え、ポリトロンホモジナイザーでホモジナイズした。ホモジネートを冷却下３０，０００ ｘ ｇで２０分間遠心分離した。得られた沈渣を、５ ｍＭ ＭｇＣｌ２・６Ｈ２Ｏ、０．１％ ｂａｃｉｔｒａｃｉｎ、０．２％ ＢＳＡを含む２５ ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ ｂｕｆｆｅｒ（ｂｕｆｆｅｒ Ａ）で懸濁して受容体標品（５％）とした。肺におけるＶＩＰ受容体の測定は、標識リガンドとして［１２５Ｉ］ＶＩＰを用いるラジオレセプターアッセイ法により行った。肺より調製した受容体標品を１０−１０〜１０−５ ＭのＶＩＰまたはＶＩＰ誘導体（ペプチド１−４、３７−４３）を含むｂｕｆｆｅｒ Ａ（ｐＨ ７．４）中で［１２５Ｉ］ＶＩＰ（３０ ｐＭ）と４℃、３時間インキュベーション後、ｆｉｌｔｅｒ ｂｏｘ（Ａｄｖａｎｔｅｃ）を用いて反応液をガラス繊維濾紙（Ｗｈａｔｍａｎｎ ＧＦ／Ｃ）上に急速吸引濾過し、その濾紙を５ ｍＭ ＭｇＣｌ２・６Ｈ２Ｏ、０．２％ ＢＳＡを含む２５ ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ ｂｕｆｆｅｒ（ｐＨ ７．４）２ ｍＬで３回洗浄後、濾紙上の放射活性をγカウンター（Ａｌｏｋａ）で測定した。本測定において、ペプチド非存在下で得られた放射活性を全結合、３ μＭのペプチド１（非標識ＶＩＰ）の存在下で得られた放射活性を非特異的結合とし、両者の差を特異的結合と定義した。その結果を図３に示す。ペプチド １−４ はいずれも、肺組織 ＶＩＰ レセプターに対して強い結合活性を示すが、ペプチド １ （ＶＩＰ）と比して、ペプチド ２−４ は有意に結合活性が上昇しており、ＶＩＰ 誘導体群の有用性を示唆した（図３（Ａ））。ペプチド ３７−４３に関しては、Ｃ 末端構成アミノ酸の欠損に従って徐々に結合活性が低下したが、特に Ｃ 末端より ６ 残基のアミノ酸を欠落させた場合には著しくその活性が低下した（図 ３（Ｂ））。この結果より、ＶＩＰ レセプターに対しては少なくとも Ｎ 末端側より ２３ 残基の構成アミノ酸が必須であることを確認した。
【００５７】
〔実施例 ８〕 （肺組織 ＶＩＰ レセプターに対するペプチドの結合活性 ２）
実験動物として、８〜１０週齢（体重：２５０〜４００）のＳＤ系雄性ラット（日本チャールズリバー（株）より購入）を使用し、ラット用固形試料（ＭＦ、 オリエンタル酵母工業（株）製及び飲料水を自由に与えて、室温２４±２℃で飼育した。ネンブタール麻酔下（４０ ｍｇ／ｋｇ ｉ．ｐ．）のラットにペプチド４（５０ μｇ／ｂｏｄｙ）のＤＰＩ製剤または賦形剤を粉末気管内投与器具（ＤＰ−４）を用いてラット気管内に投与し、投与後３０分で開腹し、腹部下行大動脈より採血し屠殺した。直ちに生理食塩水で灌流し、肺を摘出した。肺の一部を秤量後、１９倍量の２５０ ｍＭ ｓｕｃｒｏｓｅ、５ ｍＭ ＭｇＣｌ２・６Ｈ２Ｏ、０．１％ ｂａｃｉｔｒａｃｉｎを含む２５ ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ ｂｕｆｆｅｒ （ｐＨ ７．４）を加え、ポリトロンホモジナイザーでホモジナイズした。ホモジネートは冷却下３０，０００ ｘ ｇで２０分間遠心分離した。得られた沈渣を、５ ｍＭ ＭｇＣｌ２・６Ｈ２Ｏ、０．１％ ｂａｃｉｔｒａｃｉｎ、０．２％ ＢＳＡを含む２５ ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ ｂｕｆｆｅｒ（ｂｕｆｆｅｒ Ａ）で懸濁して受容体標品（１％）とした。肺におけるＶＩＰ受容体の測定は、標識リガンドとして［１２５Ｉ］ＶＩＰを用いるラジオレセプターアッセイ法により行った。肺より調製した受容体標品をｂｕｆｆｅｒＡ（ｐＨ ７．４）中で［１２５Ｉ］ＶＩＰ（５００ ｐＭ）と４℃、３時間インキュベーション後、ｆｉｌｔｅｒ ｂｏｘ（Ａｄｖａｎｔｅｃ）を用いて反応液をガラス繊維濾紙（Ｗｈａｔｍａｎｎ ＧＦ／Ｃ）上に急速吸引濾過し、その濾紙を５ ｍＭ ＭｇＣｌ２・６Ｈ２Ｏ、０．２％ ＢＳＡを含む２５ ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ ｂｕｆｆｅｒ（ｐＨ ７．４）２ ｍＬで３回洗浄後、濾紙上の放射活性をγカウンター（Ａｌｏｋａ）で測定した。本測定において、非標識ＶＩＰ非存在下で得られた放射活性を全結合、３ μＭの非標識ＶＩＰの存在下で得られた放射活性を非特異的結合とし、両者の差を特異的結合と定義して、ペプチド４のラット肺の種々の部位における特異的結合の程度を求めた。その結果、図４に示すように、ペプチド ４ は多少の差はあるもののラット肺の全ての組織においてほぼ同量のレセプター結合量を認めた。このことは、ペプチド ４ の粉末製剤が均一な薬剤ミストを形成し、肺のあらゆる箇所に到達して薬効を発揮しうることを強く示唆している。
【００５８】
〔実施例 ９〕 （ＶＩＰ 類の抗炎症作用）
１００ μｇ の 卵白アルブミン（ＯＶＡ） をラットに継続的に腹腔内投与し（０ 日、７ 日、１４ 日）、１５ 日目に同量の ＯＶＡ 微細粉末を気道内投与して気道炎症を誘起した。この時、１５ 日目の ＯＶＡ 気道内投与 １ 時間前に １００ μｇ のペプチド１ あるいはペプチド ４ の吸入用粉末製剤を気道内投与、そしてポジティブコントロールとして ０．５ ｍｇ／ｋｇ のデキサメタゾンを腹腔内投与した。ＯＶＡ 気道内投与後 ６ 時間および ２４ 時間目に麻酔下肺および気管支を摘出し、１０％ 中性緩衝ホルマリンに浸して固定する。固定後、切片標本を作製し、肺実質表面の状態および好酸球・好中球の浸潤度合についてモニタリングした。ラット気道および気管支を対象とし、ペルオキシダーゼ染色によって好酸球・好中球の検出を行い、これらの組織への浸潤度合を指標として各検体の抗炎症作用について評価を行った。図５及び６にペルオキシダーゼ染色後の気道（図５；（Ａ） 薬剤非投与群；（Ｂ） デキサメタゾン投与群；（Ｃ） ペプチド１ 投与群；（Ｄ） ペプチド ４ 投与群）および気管支（図６；（Ａ） 薬剤非投与群；（Ｂ） デキサメタゾン投与群；（Ｃ） ペプチド１ 投与群；（Ｄ） ペプチド ４ 投与群）の写真を示す。その結果、薬剤非投与群ではいずれも強い顆粒球浸潤を認め、ＯＶＡ による炎症が誘起されていることを確認した。デキサメタゾン投与によって、この炎症反応は抑制され、薬剤および ＯＶＡ 投与後の約 ２４ 時間後においてもその効果は継続していることが明らかとなった。ペプチド １ 投与群では完全に炎症を抑制出来ていないものの、ペプチド ４ 投与によってデキサメタゾンと同程度まで炎症が抑制されることを確認した。
【００５９】
【発明の効果】
本発明によれば、生体内において長時間に渡って炎症を抑制しうる ＰＡＣＡＰ／ＶＩＰ誘導体を提供することが出来る。
【００６０】
【配列表】
【配列表フリーテキスト】
配列番号１〜４４：合成ペプチド
【図面の簡単な説明】
【図１】本発明の医薬組成物の一形態である粉末製剤の走査型電子顕微鏡写真を示す（（Ａ）７５０倍、（Ｂ）１，５００倍）。
【図２】本発明の医薬組成物の一形態である粉末製剤の粒度分布を示す。
【図３】（Ａ）及び（Ｂ）は本発明に用いるペプチド及び対照ペプチドのラット肺組織ＶＩＰレセプターに対する結合活性を示す。
【図４】ペプチド４のラット肺の種々の部位における特異的結合を示す。
【図５】炎症を誘起させた気道におけるペプチド４の抗炎症効果を示す。
（Ａ） 薬剤非投与群；（Ｂ） デキサメタゾン投与群；（Ｃ） ペプチド１ 投与群；（Ｄ） ペプチド ４ 投与群
【図６】炎症を誘起させた気管支におけるペプチド４の抗炎症効果を示す。
（Ａ） 薬剤非投与群；（Ｂ） デキサメタゾン投与群；（Ｃ） ペプチド１ 投与群；（Ｄ） ペプチド ４ 投与群
Claims (16)
- 下記式（Ｉ）：
Ｈｉｓ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ａ−Ｂ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｃ−Ｄ−Ｔｙｒ−
Ｅ−Ａｒｇ−Ｆ−Ａｒｇ−Ｇ−Ｇｌｎ−Ｈ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｉ− （Ｉ）
Ｊ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ｋ−Ｌ−Ｍ−Ｎ （配列番号１）
（式中、Ａ は、Ａｌａ または Ｇｌｙ；Ｂ はＶａｌ または Ｉｌｅ；Ｃ は、Ａｓｐ、 Ｇｌｕ または Ａｌａ；Ｄ は、Ａｓｎ または Ｓｅｒ；Ｅ は、Ｔｈｒ または Ｓｅｒ；Ｆ は、Ｌｅｕ または Ｔｙｒ；Ｇ，Ｉ，Ｊ は Ｌｙｓ または Ａｒｇ；Ｈ は、Ｍｅｔ、Ｌｅｕ または ｎＬｅｕ；Ｋ は、Ａｓｎ、Ａｌａ または化学結合；Ｌ は Ｓｅｒ、Ａｌａ または化学結合；Ｍ は、Ｉｌｅ、Ｖａｌまたは化学結合；Ｎ は、化学結合、Ｌｅｕ，Ｌｅｕ−Ａｓｎ，Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ， Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ， Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ， Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ， Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ， Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ａｒｇ， Ｌｅｕ−Ｇｌｙ，Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ，Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ，Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ，Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ，Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ａｒｇ，Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ｌｙｓ，Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ａｓｎ−Ａｒｇ、またはＬｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｓｎ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｐｈｅ−Ｔｙｒを表す。但し、Ｇ，Ｉ，Ｊが共にＬｙｓであり、かつＨがＭｅｔであることはない。）
で示されるアミノ酸配列のＮ末端より少なくとも２３残基からなるアミノ酸配列で示され、Ｃ 末端アミノ酸のα位カルボキシル基がＮＨ２で修飾されているかまたはされていないペプチド、または薬学的に許容されるその塩を含有する抗炎症剤。 - 前記ペプチドが、一般式 （Ｉ） においてＡ が Ａｌａ、Ｂ が Ｖａｌ、Ｃ が Ａｓｐ、Ｄ が Ａｓｎ、Ｅ が Ｔｈｒ、Ｆ がＬｅｕ、Ｇ， Ｉ， Ｊ が Ａｒｇ、Ｈ が Ｌｅｕ、Ｋ が Ａｓｎ、Ｌ が Ｓｅｒ、Ｍ が Ｉｌｅ、Ｎ が Ｌｅｕ−Ａｓｎであるアミノ酸配列のＮ 末端より少なくとも ２３ 残基のアミノ酸配列で示され、Ｃ末端が −ＮＨ２ で修飾されたペプチドである、請求項１に記載の抗炎症剤。
- 前記ペプチドが、一般式 （Ｉ） においてＡ が Ａｌａ、Ｂ が Ｖａｌ、Ｃ が Ａｓｐ、Ｄ が Ａｓｎ、Ｅ が Ｔｈｒ、Ｆ がＬｅｕ、Ｇ， Ｉ， Ｊ が Ａｒｇ、Ｈ が Ｌｅｕ、Ｋ が Ａｓｎ、Ｌ が Ｓｅｒ、Ｍ が Ｉｌｅ、Ｎ が Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ａｒｇであるアミノ酸配列のＮ 末端より少なくとも ２３ 残基のアミノ酸配列で示され、Ｃ末端が −ＮＨ２ で修飾されたペプチドである、請求項１に記載の抗炎症剤。
- 前記ペプチドが、一般式 （Ｉ） においてＡ が Ａｌａ、Ｂ が Ｖａｌ、Ｃ が Ａｓｐ、Ｄ が Ａｓｎ、Ｅ が Ｔｈｒ、Ｆ がＬｅｕ、Ｇ， Ｉ， Ｊ が Ａｒｇ、Ｈ が Ｌｅｕ、Ｋ が Ａｓｎ、Ｌ が Ｓｅｒ、Ｍ が Ｉｌｅ、Ｎ が Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ａｒｇであるアミノ酸配列のＮ 末端より少なくとも ２３ 残基のアミノ酸配列で示され、Ｃ末端が −ＮＨ２ で修飾されたペプチドである、請求項１に記載の抗炎症剤。
- 前記ペプチドが、一般式 （Ｉ） においてＡ が Ａｌａ、Ｂ が Ｖａｌ、Ｃ が Ａｓｐ、Ｄ が Ａｓｎ、Ｅ が Ｔｈｒ、Ｆ がＬｅｕ、Ｇ， Ｉ， Ｊ が Ａｒｇ、Ｈ が Ｌｅｕ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ が化学結合であるアミノ酸配列で示され、Ｃ末端が −ＮＨ２ で修飾されたペプチドである、請求項１に記載の抗炎症剤。
- 前記ペプチドが、一般式 （Ｉ） においてＡ が Ａｌａ、Ｂ が Ｖａｌ、Ｃ が Ａｓｐ、Ｄ が Ａｓｎ、Ｅ が Ｔｈｒ、Ｆ がＬｅｕ、Ｇ， Ｉ， Ｊ が Ａｒｇ、Ｈ が Ｌｅｕ、Ｋ が Ａｌａ、Ｌ が Ａｌａ、Ｍ が Ｉｌｅ、Ｎ が Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ａｒｇであるアミノ酸配列のＮ 末端より少なくとも ２３ 残基のアミノ酸配列で示され、Ｃ末端が −ＮＨ２ で修飾されたペプチドである、請求項１に記載の抗炎症剤。
- 前記ペプチドが、一般式 （Ｉ） においてＡ が Ａｌａ、Ｂ が Ｖａｌ、Ｃ が Ｇｌｕ、Ｄ が Ａｓｎ、Ｅ が Ｔｈｒ、Ｆ がＬｅｕ、Ｇ， Ｉ， Ｊ が Ａｒｇ、Ｈ が Ｌｅｕ、Ｋ が Ａｌａ、Ｌ が Ａｌａ、Ｍ が Ｉｌｅ、Ｎ が Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ａｒｇであるアミノ酸配列のＮ 末端より少なくとも ２３ 残基のアミノ酸配列で示され、Ｃ末端が −ＮＨ２ で修飾されたペプチドである、請求項１に記載の抗炎症剤。
- 前記ペプチドが、一般式 （Ｉ） においてＡ が Ａｌａ、Ｂ が Ｖａｌ、Ｃ が Ａｌａ、Ｄ が Ａｓｎ、Ｅ が Ｔｈｒ、Ｆ がＬｅｕ、Ｇ， Ｉ， Ｊ が Ａｒｇ、Ｈ が Ｌｅｕ、Ｋ が Ａｌａ、Ｌ が Ａｌａ、Ｍ が Ｉｌｅ、Ｎ が Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ａｒｇであるアミノ酸配列のＮ 末端より少なくとも ２３ 残基のアミノ酸配列で示され、Ｃ末端が −ＮＨ２ で修飾されたペプチドである、請求項１に記載の抗炎症剤。
- 前記ペプチドが、一般式 （Ｉ） においてＡ が Ａｌａ、Ｂ が Ｖａｌ、Ｃ が Ａｓｐ、Ｄ が Ａｓｎ、Ｅ が Ｔｈｒ、Ｆ がＬｅｕ、Ｇ， Ｉ， Ｊ が Ａｒｇ、Ｈ が Ｌｅｕ、Ｋ が Ａｌａ、Ｌ が Ａｌａ、Ｍ が Ｖａｌ、Ｎ が Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ａｒｇであるアミノ酸配列のＮ 末端より少なくとも ２３ 残基のアミノ酸配列で示され、Ｃ末端が −ＮＨ２ で修飾されたペプチドである、請求項１に記載の抗炎症剤。
- 前記ペプチドが、一般式 （Ｉ） においてＡ が Ｇｌｙ、Ｂ が Ｉｌｅ、Ｃ が Ａｓｐ、Ｄ が Ｓｅｒ、Ｅ が Ｓｅｒ、Ｆ がＴｙｒ、Ｇ， Ｉ， Ｊ が Ａｒｇ、Ｈ が Ｌｅｕ、Ｋ がＡｌａ、Ｌ が Ａｌａ、Ｍ が Ｖａｌ、Ｎ が Ｌｅｕであるアミノ酸配列のＮ 末端より少なくとも ２３ 残基のアミノ酸配列で示され、Ｃ末端が −ＮＨ２ で修飾されたペプチドである、請求項１に記載の抗炎症剤。
- 前記ペプチドが、一般式 （Ｉ） においてＡ が Ｇｌｙ、Ｂ が Ｉｌｅ、Ｃ が Ａｓｐ、Ｄ が Ｓｅｒ、Ｅ が Ｓｅｒ、Ｆ がＴｙｒ、Ｇ， Ｉ， Ｊ が Ａｒｇ、Ｈ が Ｌｅｕ、Ｋ がＡｌａ、Ｌ が Ａｌａ、Ｍ が Ｖａｌ、Ｎ が Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ａｒｇであるアミノ酸配列のＮ 末端より少なくとも ２３ 残基のアミノ酸配列で示され、Ｃ末端が −ＮＨ２ で修飾されたペプチドである、請求項１に記載の抗炎症剤。
- 前記ペプチドが、一般式 （Ｉ） においてＡ が Ａｌａ、Ｂ が Ｉｌｅ、Ｃ が Ａｓｐ、Ｄ が Ｓｅｒ、Ｅ が Ｓｅｒ、Ｆ がＴｙｒ、Ｇ， Ｉ， Ｊ が Ａｒｇ、Ｈ が Ｌｅｕ、Ｋ がＡｌａ、Ｌ が Ａｌａ、Ｍ が Ｖａｌ、Ｎ が Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ａｒｇであるアミノ酸配列のＮ 末端より少なくとも ２３ 残基のアミノ酸配列で示され、Ｃ末端が −ＮＨ２ で修飾されたペプチドである、請求項１に記載の抗炎症剤。
- 前記ペプチドが、一般式 （Ｉ） においてＡ が Ａｌａ、Ｂ が Ｉｌｅ、Ｃ が Ａｓｐ、Ｄ が Ｓｅｒ、Ｅ が Ｓｅｒ、Ｆ がＴｙｒ、Ｇ， Ｉ， Ｊ が Ａｒｇ、Ｈ が Ｌｅｕ、Ｋ がＡｌａ、Ｌ が Ａｌａ、Ｍ が Ｖａｌ、Ｎ が Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ａｓｎ−Ａｒｇであるアミノ酸配列のＮ 末端より少なくとも ２３ 残基のアミノ酸配列で示され、Ｃ末端が −ＮＨ２ で修飾されたペプチドである、請求項１に記載の抗炎症剤。
- 前記ペプチドが、一般式 （Ｉ） においてＡ が Ａｌａ、Ｂ が Ｉｌｅ、Ｃ が Ａｓｐ、Ｄ が Ｓｅｒ、Ｅ が Ｓｅｒ、Ｆ がＴｙｒ、Ｇ， Ｉ， Ｊ が Ａｒｇ、Ｈ が Ｌｅｕ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ が化学結合であるアミノ酸配列で示され、Ｃ末端が −ＮＨ２ で修飾されたペプチドである、請求項１に記載の抗炎症剤。
- 請求項１〜１４に記載の抗炎症剤を含有する医薬組成物。
- 粉末吸入製剤、粉末点鼻製剤、眼局所投与剤、注射剤、または塗布剤である、請求項１５に記載の医薬組成物。
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|---|---|---|---|---|
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2003
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