JP2004117026A

JP2004117026A - 免疫センサ及びこのセンサを用いる測定方法

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Publication number: JP2004117026A
Application number: JP2002277186A
Authority: JP
Inventors: Masayasu Suzuki; 鈴木　正康
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2002-09-24
Filing date: 2002-09-24
Publication date: 2004-04-15

Abstract

【課題】ターゲット化合物が低分子量物質の場合にも、高い感度で測定できる、免疫センサ及びターゲット化合物の測定方法を提供する。
【解決手段】基板表面に抗ターゲット化合物抗体が固定化されている免疫検査用プレート。前記抗ターゲット化合物抗体は、前記基板表面の金薄膜表面にスペーサー及びプロティンＡまたはプロティンＧを介して、基板表面に固定化されている。この検査用プレートとこの検査用プレート表面の表面プラズモン共鳴を測定するための装置とを含む免疫センサ。ターゲット化合物と標識分子を結合したターゲット化合物（標識分子結合ターゲット化合物という）とを、抗ターゲット化合物抗体を固定化した基板表面に接触させ、抗ターゲット化合物抗体と結合した標識分子結合ターゲット化合物を、表面プラズモン共鳴を用いて検出することを含むターゲット化合物の測定方法。前記標識分子がヘモシアニンであり、かつ前記抗ターゲット化合物抗体が、基板表面の金薄膜表面にスペーサー及びプロティンＡまたはプロティンＧを介して基板表面に固定化されている。
【選択図】図４

Description

【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、競争法を用いた免疫検査法並びにそれに用いる免疫検査用プレート及び免疫センサに関する。
【０００２】
【従来の技術】
バイオセンサには、主として生体内に存在する低分子量物質（例えば、糖、有機酸、アルコール）を測定対象とする酵素センサと、病原菌、ウイルス、タンパク質、ペプチド、農薬、ダイオキシン、環境ホルモン、麻薬などを測定対象とする免疫センサとがある。
【０００３】
表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）現象を利用したセンサとして、テキサスインスツルメンツ社の　Ｓｐｒｅｅｔａ（スプリータ、登録商標）がある。ＳＰＲを利用したセンサは、リアルタイムな測定が可能であり、標識物質のＢ／Ｆ分離も不要であり、免疫センサとして利用すれば、病原菌等の測定には十分な感度を有するものである。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
例えば、非特許文献１に記載のように、ＳＰＲを利用した免疫センサは、基板表面に抗ターゲット化合物抗体が固定化されている免疫検査用プレートとこの検査用プレート表面の表面プラズモン共鳴を測定するための装置とを含む。そして、抗ターゲット化合物抗体は、基板表面の金薄膜表面にプロティンＡまたはプロティンＧを介して、基板表面に固定化されている。この抗ターゲット化合物抗体を固定化した基板表面に接触させ、抗ターゲット化合物抗体と結合した標識分子結合ターゲット化合物を、表面プラズモン共鳴を用いて検出する。
【０００５】
従来の免疫センサ及びターゲット化合物の測定方法では、例えば、非特許文献２に記載のように、標識分子として、アルブミンが使用されていた。しかし、ターゲット化合物が低分子量物質の場合、標識分子としてアルブミンを使用するのでは感度が不十分であり、より感度の高い測定方法及び免疫センサが望まれていた。
【０００６】
【非特許文献１】Ｍ．　Ｓｕｚｕｋｉ，　Ｆ．　Ｏｚａｗａ，　Ｗ．　Ｓｕｇｉｍｏｔｏ，　Ｓ．　Ａｓｏ；　Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ　ａｎｄＢｉｏａｎａｌｙｔｉｃａｌ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，　Ｖｏｌ．３７２，　Ｎｏ．２，　３０１−３０４，　（２００２）
【非特許文献２】Ｎ．　Ｍｉｕｒａ，　Ｋ．　Ｏｇａｔａ，　Ｇ．　Ｓａｋａｉ，　Ｔ．　Ｕｄａ，　Ｎ．　Ｙａｍａｚｏｅ，　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　Ｌｅｔｔｅｒｓ，　７１３（１９９７）
【０００７】
そこで本発明は、ターゲット化合物が低分子量物質の場合にも、高い感度で測定できる、免疫センサ及びターゲット化合物の測定方法を提供することを目的とする。
【０００８】
【課題を解決するための手段】
本発明は、以下の通りである。
（１）基板表面に抗ターゲット化合物抗体が固定化されている免疫検査用プレートであって、前記抗ターゲット化合物抗体は、前記基板表面の金薄膜表面にスペーサー及びプロティンＡまたはプロティンＧを介して、基板表面に固定化されていることを特徴とする前記検査用プレート。
（２）スペーサーが長鎖アルキルを含む（１）に記載の検査用プレート。
（３）長鎖アルキルがウンデカンである（２）に記載の検査用プレート。
（４）ウンデカンが、１１−アミノ−１−ウンデカンチオールの反応生成物である（３）に記載の検査用プレート。
（５）（１）〜（４）のいずれか１項に記載の検査用プレートとこの検査用プレート表面の表面プラズモン共鳴を測定するための装置とを含む免疫センサ。
（６）ターゲット化合物と標識分子を結合したターゲット化合物（以下、標識分子結合ターゲット化合物という）とを、抗ターゲット化合物抗体を固定化した基板表面に接触させ、抗ターゲット化合物抗体と結合した標識分子結合ターゲット化合物を、表面プラズモン共鳴を用いて検出することを含むターゲット化合物の測定方法であって、
前記標識分子がヘモシアニンであり、かつ
前記抗ターゲット化合物抗体が、基板表面の金薄膜表面にスペーサー及びプロティンＡまたはプロティンＧを介して基板表面に固定化されていることを特徴とする前記測定方法。
（７）スペーサーが長鎖アルキルを含む（６）に記載の測定方法。
（８）長鎖アルキルがウンデカンである（７）に記載の測定方法。
（９）ウンデカンが、１１−アミノ−１−ウンデカンチオールの反応生成物である（８）に記載の測定方法。
（１０）ターゲット化合物が低分子量化合物である（６）〜（９）のいずれか１項に記載の測定方法。
（１１）ターゲット化合物と標識分子結合ターゲット化合物とを含む水溶液の流通下に、抗ターゲット化合物抗体を固定化した基板表面を置き、表面プラズモン共鳴による抗ターゲット化合物抗体と結合した標識分子結合ターゲット化合物の検出を連続的に行う、（６）〜（１１）のいずれか１項に記載の方法。
【０００９】
【発明の実施の形態】
検査用プレート
本発明の免疫検査用プレートは、基板表面に抗ターゲット化合物抗体が固定化されており、前記抗ターゲット化合物抗体が、基板表面の金薄膜表面にスペーサー及びプロティンＡまたはプロティンＧを介して、基板表面に固定化されていることを特徴とする。
前記特許文献１及び２に記載の免疫検査用プレートは、抗ターゲット化合物抗体が、基板表面の金薄膜表面にプロティンＡまたはプロティンＧを介して、基板表面に固定化されている。即ち、金薄膜表面に直接固定されたプロティンＡまたはプロティンＧに抗ターゲット化合物抗体が結合している。
【００１０】
それに対して、本発明の免疫検査用プレートでは、抗ターゲット化合物抗体は、スペーサーを介して、基板表面の金薄膜表面に固定されたプロティンＡまたはプロティンＧに結合している。これは、本発明の免疫検査用プレートを用いる測定方法では、標識分子として、従来使用されていたアルブミンより高分子量のヘモシアニンを使用することに起因する。標識分子としてヘモシアニンを使用した場合、金薄膜表面に直接固定されたプロティンＡまたはプロティンＧに結合した抗ターゲット化合物抗体に対する標識分子結合ターゲット化合物の反応性が低いことが、本発明者らの検討の結果分かった。
【００１１】
それに対して、スペーサーを介して基板表面の金薄膜表面に固定されたプロティンＡまたはプロティンＧに結合した抗ターゲット化合物抗体に対しては、標識分子としてヘモシアニンを使用しても、高い反応性が得られることが判明した。
【００１２】
スペーサーとしては、例えば、長鎖アルキルを含むものを挙げることができるが、これに制限されるものではない。長鎖アルキルは、例えば、炭素数６〜２０のアルキルであることができ、長鎖アルキルは、例えば、ウンデカンであることが好ましい。
【００１３】
スペーサーは、例えば、両端に反応性基を有する長鎖アルキルを用いて、一方の反応性基を基板表面の金薄膜表面に固定し、他方の反応性基をプロティンＡまたはプロティンＧに結合させることで、導入できる。金薄膜表面に反応し得る反応性基としては、例えば、チオール基を挙げることができ、プロティンＡまたはプロティンＧと反応し得る反応性基としては、例えば、アミノ基を挙げることができる。
【００１４】
両端に反応性基を有する長鎖アルキルとしては、例えば、１１−アミノ−１−ウンデカンチオール、６−アミノ−１−ヘキサンチオール及び８−アミノ−１−オクタンチオール等を挙げることができる。
【００１５】
金薄膜表面と１１−アミノ−１−ウンデカンチオールとは、１１−アミノ−１−ウンデカンチオールの持つチオール基が金とメルカプチドを形成して結合する。この反応は、例えば、１１−アミノ−１−ウンデカンチオールの２ｍＭエタノール溶液と２時間、室温で行うことができる。
【００１６】
次に、金薄膜表面にチオール基を介して結合した１１−アミノ−１−ウンデカンチオールのアミノ基をグルタルアルデヒドで活性化し、プロティンＡまたはプロティンＧと結合させる。グルタルアルデヒドでの活性化は、５％グルタルアルデヒドと室温で２時間反応させることで行うことができる。グルタルアルデヒドでの活性化の後、例えば、０．１ｇ／ｌのプロティンＡまたはプロティンＧを反応させることができる。
【００１７】
プロティンＡまたはプロティンＧへの抗ターゲット化合物抗体の結合は、例えば、プロティンＡ及びプロティンＧが抗体のＦｃフラグメントと特異的に結合することを利用して行い、例えば、以下のようにして実施できる。
例えば、プロティンＡまたはプロティンＧを結合させたところへ、１０ｍｇ／Ｌの抗体溶液を加えることで、室温、中性条件下で抗体分子はプロティンＡまたはプロティンＧに結合する。
【００１８】
抗ターゲット化合物抗体は、ターゲット化合物に応じて適宜選択することができ、ターゲット化合物としては、後述するように、各種低分子量化合物を挙げることができる。また、ターゲット化合物の種類によっては、抗ターゲット化合物抗体は市販品として入手可能である。
【００１９】
免疫センサ
本発明の免疫センサは、上記本発明の免疫検査用プレートとこの検査用プレート表面の表面プラズモン共鳴を測定するための装置とを含む。
表面プラズモン共鳴を利用したセンサは、プリズムの上に形成した金薄膜の表面における屈折率変化を敏感に検出することを測定原理とする。プリズムに全反射が起きる条件で単色光を入射し、入射角に対する反射光の強度を調べる。このとき、金薄膜がプリズムの表面に形成される表面プラズモン共鳴現象により、臨界角より大きな入射角で光の吸収が起きる。光吸収が最大になる角度（共鳴角）は金薄膜の表面における屈折率に依存する。
【００２０】
本発明の免疫センサについて、テキサスインスツルメンツ社の　Ｓｐｒｅｅｔａ（スプリータ、登録商標）　を利用した例で説明する。図１にＳｐｒｅｅｔａを横から見た図を示す。
図１に示す免疫センサ１は、プリズムの上に形成した金薄膜２が、上記免疫検査用プレートに相当し、プリズムの上に形成した金薄膜に、１１−アミノ−１−ウンデカンチオール及びプロティンＡまたはプロティンＧを介して抗ターゲット化合物抗体が固定されている。免疫センサ１は、さらに、光源となるＬＥＤ３及びシリコンフォトダイオードアレーセンサ４を有する。
【００２１】
測定に際しては、ＬＥＤ３からの近赤外光が表面プラズモン効果を増幅するために分極される。光ビームは免疫検査用プレート２表面にて反射され、さらに金鏡面５を介してシリコンフォトダイオードアレーセンサ４で検出される。免疫検査用プレート（金薄膜）２の入射光の角度は、フォトダイオードアレーセンサ４により特定される。
【００２２】
測定方法
本発明のターゲット化合物の測定方法は、ターゲット化合物と標識分子結合ターゲット化合物とを、抗ターゲット化合物抗体を固定化した基板表面に接触させ、抗ターゲット化合物抗体と結合した標識分子結合ターゲット化合物を、表面プラズモン共鳴を用いて検出することを含むターゲット化合物の測定方法である。そして、第１の特徴は、前記標識分子がヘモシアニンであることである。標識分子がヘモシアニンであることで、ターゲット化合物が低分子量化合物であっても、高感度で測定することができる。ヘモシアニンは、従来使用されているアルブミンの約１００倍の分子量を有する巨大分子である。標識分子としてヘモシアニンがターゲット化合物に結合することで、より大きな屈折率変化が得られることにより、高感度に表面プラズモン共鳴の測定が可能になる。
【００２３】
さらに、第２の特徴は、前記抗ターゲット化合物抗体が、基板表面の金薄膜表面に１１−アミノ−１−ウンデカンチオール及びプロティンＡまたはプロティンＧを介して基板表面に固定化されていることである。
この点は、上記免疫検査用プレートにつていの説明と同様である。
【００２４】
本発明の測定方法において、抗ターゲット化合物抗体を固定化した基板表面に接触させるターゲット化合物と標識分子結合ターゲット化合物においては、標識分子結合ターゲット化合物の濃度は一定にしておく必要がある。この濃度を変えることで、ターゲット化合物の測定濃度範囲を調整できる。
【００２５】
抗ターゲット化合物抗体と結合した標識分子結合ターゲット化合物の、表面プラズモン共鳴を用いた検出は、常法により行うことができる。
【００２６】
本発明の測定方法においては、ターゲット化合物となり得る物質は特に制限されない。但し、本発明の測定方法は、ターゲット化合物が低分子量化合物である場合に、特に有利である。低分子量化合物とは、例えば、１００〜１０００程度の分子量を有する化合物であることができる。具体的には、ペプチド、ホルモン、各種農薬、覚せい剤、内分泌攪乱物質、ダイオキシン等を例示できる。
【００２７】
ターゲット化合物とヘモシアニンとの結合は、例えば、以下のように行うことができる。
１ｍｇ／ｍｌのターゲット化合物溶液に、１−エチル−３（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミドハイドロクロライド（ＥＤＣ）を１０ｍｇ／ｍｌとなるように加え、ｐＨを５に調整する。室温で５分間放置後、同体積のヘモシアニン溶液を加え、室温で４時間放置する。ｐＨ４．２の酢酸ナトリウム溶液を１００ｍＭとなるように加えて反応を停止させ、室温で１時間放置した後、リン酸緩衝液に対して透析する。
【００２８】
本発明の測定方法は、ターゲット化合物と標識分子結合ターゲット化合物とを含む水溶液の流通下に、抗ターゲット化合物抗体を固定化した基板表面を置き、表面プラズモン共鳴による抗ターゲット化合物抗体と結合した標識分子結合ターゲット化合物の検出を連続的に行うことができる。
【００２９】
この方法を、図２を用いて具体的に説明する。
図２中、１が抗ターゲット化合物抗体を固定化した基板表面を含む本発明の免疫センサであり、ターゲット化合物と標識分子結合ターゲット化合物とを含む水溶液が１０のマイクロシリンジに格納され、この水溶液はインジェクタ１１により、必要によりシリンジポンプ１２からの移送液とともに免疫センサ１に供給される。また、免疫センサ１からの廃液はペリスタポンプ（図示せず）により、免疫センサ１から排出される。これにより、抗ターゲット化合物抗体と結合した標識分子結合ターゲット化合物の表面プラズモン共鳴による検出を連続的に行うことができる。
尚、免疫センサ１からの表面プラズモン共鳴データはコンピューター１４に取り込まれ、適宜データ処理に供される。また、コントロールボックス１３は、電源供給、信号取り出し、及びパソコンとのインターフェースの役割を有する。
【００３０】
尚、上記測定を行った後、例えば、ｐＨ３．０のＧｌｙ−ＨＣｌを免疫センサに注入することで、プロティンＡまたはＧから抗ターゲット化合物抗体を解離させ、このセンサを繰り返し測定に使用することができる。
【００３１】
【実施例】
以下、本発明を実施例によりさらに詳細に説明する。
実施例１
（１）　プロティンＡ単独使用
図３に示すように、プロティンＡ　（ＰｒｏｔｅｉｎＡ―Ｓｏｌｕｂｌｅ　　Ｅｘｔｒａ　ｃｅｌｌｕｌａｒ　　（品番Ｐ―６０３１　ＳＩＧＭＡ））が抗体のＦｃフラグメントと特異的に結合する事を利用し、金薄膜にプロティンＡを物理的に吸着させて抗体を固定化した。ＤＮＰ（ジニトロフェノール）（特級　品番０４５−０３５７２　　和光純薬工業）と抗体の解離が出来なかったので、抗体ごとＤＮＰ及び標識ＤＮＰを解離させて、再び抗体を結合させて繰り返し測定を行った。標識ＤＮＰ　としては、ＤＮＰ−ＢＳＡ　（ＤＮＰ−Ａｌｂｕｍｉｎ　　Ｃｏｎｊｕｇａｔｅ，Ｂｏｖｉｎｅ　（品番３２４１０１　ＣＡＬＢＩＯＣＨＥＭ））及びＤＮＰ−γグロブリン（ＤＮＰ−γ−Ｇｌｏｂｕｌｉｎ　　Ｃｏｎｊｕｇａｔｅ，Ｂｏｖｉｎｅ　（品番３２４１１１　ＣＡＬＢＩＯＣＨＥＭ））を用いた。
【００３２】
以下に手順を示す。インジェクタ（レオダイン、タイプ７１２５　５００μｌ）への注入はマイクロシリンジ（ＭＳ−５００Ｒ　　イトー）を用い、試料は全て５００μｌ注入した。流速は全て５０μｌ／ｍｉｎで行った。
【００３３】
（１）ｐＨ７．４　０．０５Ｍのリン酸緩衝液をＳＰＲ角が安定するまで流した。
（２）インジェクターを用いて、０．１ｇ／ｌのプロティンＡ（Ｇ）を注入し、金薄膜面に吸着させた。
（３）１０ｇ／ｌのカゼイン溶液を注入し、プロティンＡの吸着していない金薄膜表面をブロッキングした。
（４）１０ｍｇ／ｌの抗ＤＮＰ抗体を注入し、プロティンＡと結合させて免疫センサを構築した。
（５）測定を行った後、ｐＨ３．０のＧｌｙ−ＨＣｌを注入してプロティンＡから抗体を解離させ、再び抗体を注入して結合させ、繰り返し測定を行った。
【００３４】
上記手法を用いて、ＤＮＰ濃度０〜１０^−６Ｍの範囲での標識ＤＮＰ　としてＤＮＰ−ＢＳＡ及びＤＮＰ−γグロブリンを用いた場合のＳＰＲ角を求め、図４に示す。
【００３５】
（２）プロティンＡ及び１１−アミノ−１−ウンデカンチオールを使用
（１）で示したプロティンＡ再生法では、ＤＮＰ−ＢＳＡ及びＤＮＰ−γグロブリンを標識抗原として用いた競争法は実施できた。
しかし、標識ＤＮＰ　としてＤＮＰ−ヘモシアニン（ＤＮＰ−Ｈｅｍｏｃｙａｎｉｎ　Ｃｏｎｊｕｇａｔｅ，Ｋｅｙｈｏｌｅ　Ｌｉｍｐｅｔ（品番３２４１２１　ＣＡＬＢＩＯＣＨＥＭ））を用いた場合、競争法は実施できなかった。これは、ＤＮＰ−ヘモシアニンが他の２つに比べて分子が大きい事が原因ではないかと考えた。そこで、本発明の手法により、金薄膜表面に１１−アミノ−１−ウンデカンチオールをつけ、グルタルアルデヒドでアミノ基をアルデヒド基にかえた後にプロティンＡと結合させ、免疫センサを構築した。
この点を、図５を用いて説明する。流速は、１１−アミノ−１−ウンデカンチオールをつけて、グルタルアルデヒドで活性化させるまではペリスタポンプを用いて１００μｌ／ｍｉｎとし、それ以降は静水圧を利用した送液装置で５０μｌ／ｍｉｎで行った。
【００３６】
（１）ペリスタポンプを用いて、１１−アミノ−１−ウンデカンチオールの２ｍＭエタノール溶液を２時間、循環させた。
（２）金薄膜表面に付かなかった１１−アミノ−１−ウンデカンチオールを、エタノールを１０分間流して洗浄した。
（３）５％のグルタルアルデヒドを２時間循環させて、アミノ基をアルデヒド基に変えた。
（４）ペリスタポンプから静水圧を利用した送液装置に代えて、ＳＰＲ角が安定するまでリン酸緩衝液を流した。
（５）インジェクタを用いて０．１ｇ／ｌのプロティンＡを５００μｌ注入し、１１−アミノ−１−ウンデカンチオールと結合させた。
（６）０．１ＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌを注入し、プロティンＡが結合しなかった１１−アミノ−１−ウンデカンチオールのアルデヒド基をブロッキングした。
（１）の（４）（５）と同じ手順で、繰り返し測定を行った。
【００３７】
上記手法を用いて、ＤＮＰ濃度０〜１０^−６Ｍの範囲での標識ＤＮＰ　としてＤＮＰ−ヘモシアニンを用いた場合のＳＰＲ角を求め、図４に示す。
【００３８】
本実施例の測定方法は、分子量の小さな物を，屈折率変化を増大させ、得られるＳＰＲ角の変化を大きくして測定する方法であって、低分子量物質としてＤＮＰ（分子量：１８４．１１）を用いて、競争法で測定を行った。競争法について、図６を用いて説明する。
まず、センサ表面にプロティンＡを物理吸着させ、抗ＤＮＰ抗体を結合させて免疫センサを構築する。そこに、抗原であるＤＮＰと、ＤＮＰに分子量の大きな物質を結合させた標識ＤＮＰを一定量混ぜた液を流す。ＤＮＰ濃度が低ければ、抗体と結合する標識ＤＮＰは多くなるので、得られる角度変化は大きくなる。逆に、ＤＮＰ濃度が高ければ、それだけ抗体と結合する標識ＤＮＰは少なくなり、角度変化は小さくなる。その結果、ＤＮＰ濃度が多くなるにしたがって角度変化が小さくなる検量線が得られる。これを競争法と言う。
【００３９】
本発明では、標識物質の分子量が大きい方が大きな屈折率変化を得られるのではないかと考えて、一般的に用いられているＤＮＰ−ＢＳＡ（分子量：６万９千）に加えＤＮＰ−γグロブリン（分子量：１５万）及びＤＮＰ−ヘモシアニン（分子量：７５０万）を用いて、溶液中の標識ＤＮＰ濃度は０〜１０^−６Ｍの範囲で変化させて測定を行い、その値を図４にて比較した。図４に示す結果から分かるように、ＤＮＰ−ヘモシアニン（分子量：７５０万）を用いた場合、ＤＮＰ−ＢＳＡ（分子量：６万９千）及びＤＮＰ−γグロブリン（分子量：１５万）を用いた場合に比べて７〜１０倍大きな角度変化が得られ、この件では、高感度での測定が可能であることを示している。
【００４０】
本発明によれば、ターゲット化合物が低分子量物質の場合にも、高い感度で測定できる、免疫センサ及びターゲット化合物の測定方法を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【図１】テキサスインスツルメンツ社の　Ｓｐｒｅｅｔａ（スプリータ、登録商標）　を横から見た図。
【図２】免疫センサを含む測定装置の概略図。
【図３】プロティンＡを単独使用した測定方法の説明図。
【図４】ＤＮＰ濃度０〜１０^−６Ｍの範囲での角度変化（ＳＰＲ角）の測定結果。
【図５】プロティンＡ及び１１−アミノ−１−ウンデカンチオールを使用した測定方法の説明図。
【図６】競争法の説明図。
【符号の説明】
１　免疫センサ
２　金薄膜
３　ＬＥＤ
４　シリコンフォトダイオードアレーセンサ
５　金鏡面
１０　マイクロシリンジ
１１　インジェクタ
１２　シリンジポンプ
１３　コントロールボックス
１４　コンピューター

Claims

基板表面に抗ターゲット化合物抗体が固定化されている免疫検査用プレートであって、前記抗ターゲット化合物抗体は、前記基板表面の金薄膜表面にスペーサー及びプロティンＡまたはプロティンＧを介して、基板表面に固定化されていることを特徴とする前記検査用プレート。
スペーサーが長鎖アルキルを含む請求項１に記載の検査用プレート。
長鎖アルキルがウンデカンである請求項２に記載の検査用プレート。
ウンデカンが、１１−アミノ−１−ウンデカンチオールの反応生成物である請求項３に記載の検査用プレート。
請求項１〜４のいずれか１項に記載の検査用プレートとこの検査用プレート表面の表面プラズモン共鳴を測定するための装置とを含む免疫センサ。
ターゲット化合物と標識分子を結合したターゲット化合物（以下、標識分子結合ターゲット化合物という）とを、抗ターゲット化合物抗体を固定化した基板表面に接触させ、抗ターゲット化合物抗体と結合した標識分子結合ターゲット化合物を、表面プラズモン共鳴を用いて検出することを含むターゲット化合物の測定方法であって、
前記標識分子がヘモシアニンであり、かつ
前記抗ターゲット化合物抗体が、基板表面の金薄膜表面にスペーサー及びプロティンＡまたはプロティンＧを介して基板表面に固定化されていることを特徴とする前記測定方法。
スペーサーが長鎖アルキルを含む請求項６に記載の測定方法。
長鎖アルキルがウンデカンである請求項７に記載の測定方法。
ウンデカンが、１１−アミノ−１−ウンデカンチオールの反応生成物である請求項８に記載の測定方法。
ターゲット化合物が低分子量化合物である請求項６〜９のいずれか１項に記載の測定方法。
ターゲット化合物と標識分子結合ターゲット化合物とを含む水溶液の流通下に、抗ターゲット化合物抗体を固定化した基板表面を置き、表面プラズモン共鳴による抗ターゲット化合物抗体と結合した標識分子結合ターゲット化合物の検出を連続的に行う、請求項６〜１１のいずれか１項に記載の方法。