JP2003535903A - プロバイオティックを用いた、粘膜表面での細菌またはウイルス感染の免疫療法または治療、およびそのための組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 粘膜表面に関連する障害の療法的または予防的治療のための組成物および方法、並びに特に、非特異的粘膜免疫を、特に乳酸桿菌またはミコバクテリウム・バカイなどのプロバイオティックで増進することによる、粘膜部位での感染性障害の治療。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】技術分野 本発明は、粘膜表面と関連する疾患の療法的または予防的治療に適した組成物
および方法に、そして特に、非特異的粘膜免疫を増進する方法による、粘膜部位
での感染性障害の治療に関する。

【０００２】背景技術 粘膜免疫が全身性免疫と分割され（ＩｇＡをマーカーとして用いる）、腸関連
リンパ組織（特にパイアー斑）から駆動され、ＴおよびＢリンパ球両方を必要と
し、そしてパイアー斑への抗原の搬送によって生成される反応において、粘膜表
面間の腸由来リンパ球の特異的再循環が、すべての粘膜表面の関与を確実にする
という認識に始まって、粘膜保護の機構の理解は、過去３０年間で、爆発的に増
加してきた。初期の研究はＩｇＡに重点を置いたが、次第に、Ｔリンパ球および
これらが分泌するサイトカインが果たす重要な役割が考察の優位を占めるように
なってきた。Ｔ細胞を分泌されるサイトカインの特定のパターンによって特徴付
けることが可能であると示されたため、「サイトカインプロフィール」という概
念が重要になり、Ｔｈ１およびＴｈ２ ＣＤ４＋ Ｔ細胞の概念が導かれた。Ｔ
ｈ１細胞はＩＦＮ−γを分泌し、一方、Ｔｈ２細胞はＩＬ−４分泌によって特徴
付けられた。この「パターン」は結果を決定し、そして現在、多くの感染結果は
、分泌されるサイトカインのパターンによって影響を受けることが知られている
。

【０００３】 上記は、特定の抗原によって開始される特異的免疫に重点を置く。非特異的免
疫反応は、抗原受容体を通じて得られる特異性を伴わずに作動する強力なエフェ
クター機構である、細胞および分子のアレイ上に「腰を掛け」、そしてそれを通
じて作動する。

【０００４】 多様な食物または処方型に取り入れられた、ある範囲の腸微生物（プロバイオ
ティック）の健康促進における価値が認識されてしばらくになる。これらのプロ
バイオティックの価値に対する主張は、主に明確でなく、そして科学的裏付けを
欠き、そして主として臨床的印象に基づく。プロバイオティックは有益な正常フ
ロラであると推定されるものの再構成を介して健康を促進すると考えられる。あ
る特定の腸異常を治療するためのプロバイオティックの使用が報告されてきてい
る。しかし、主張がしばしば誇張されることにより、療法上の利益が確固たるも
のとされるよりむしろ、信頼性が減少している。

【０００５】 粘膜疾患（例えばアレルギー、感染）に対する傾向のパターンの変化は、環境
「無菌性」および腸細菌フロラ改変に関連付けられるアレルギーおよび喘息の発
生率変化、並びに非病原性大腸菌（Ｅ． ｃｏｌｉ）を投与された乳児における
粘膜感染およびアレルギーの減少を含む分野で、微生物／腸粘膜「経験」と、ま
すます関連付けられてきている。

【０００６】 したがって、感染、アレルギーおよびそれらに匹敵するものなどの粘膜障害の
予防または療法のための改善された調製および方法に関する必要性がある。また
、ウイルスの再活性化またはウイルスでの再感染の予防に使用可能な調製および
方法、並びにウイルス感染または再感染と関連する異常および症候群の治療に関
する必要性もある。

【０００７】 先行技術の不都合な点の少なくともいくつかを克服するかまたは寛解させるか
、あるいは有用な代替物を提供するのが本発明の目的である。発明の概要 本発明は、部分的に、特定の微生物、特に乳酸桿菌が、特定のサイトカイン「
パターン」を誘導し、したがって微生物コロニー形成および／または微生物病原
性に好ましくない条件を生成することによって、粘膜表面をプライミングするこ
とが可能であるという観察に、そして部分的に、通常の粘膜系内を移動する非抗
原活性化細胞の新規証明に基づく。

【０００８】 本発明の実施に有用な微生物は、伝統的なプロバイオティック効果を持ってい
る可能性もまたは持っていない可能性もあるが、これらはサイトカインパターン
または平衡を改変するか、あるいはＴｈ１型細胞性反応を誘導することが可能で
あろう。便宜上、有用な微生物またはそれらの構成要素もまた、それらが実際に
プロバイオティック効果を持っていてもまたは持っていなくても、本明細書にお
いて、プロバイオティックと称される可能性がある。この用語（「プロバイオテ
ィック」）には、その範囲内に、Ｔｈ１型細胞性反応を誘導可能な他のアジュバ
ント剤も含まれると意図する。

【０００９】 第一の側面にしたがって、腸粘膜表面以外の粘膜表面の慢性または急性感染、
あるいは望ましくない微生物コロニー形成の予防的または療法的治療法であって
、プロバイオティックまたはプロバイオティック含有組成物の有効量を、その必
要がある被験者に投与することを含んでなる、前記方法を提供する。

【００１０】 本発明のこの態様において、粘膜表面は、好ましくは、口腔、鼻咽頭、呼吸器
、胃、生殖器および腺からなる群より選択される。感染またはコロニー形成は、
急性または慢性であることが可能であり、そして細菌、真菌またはウイルス性で
あることが可能である。慢性ウイルス感染には、例えば慢性疲労症候群およびそ
れに匹敵するものなどの、ウイルス感染に起源を有する可能性がある特定の症候
群が含まれるであろうことが理解されるであろう。

【００１１】 第二の側面にしたがって、気道の粘膜表面の慢性または急性障害の予防的また
は療法的治療法であって、プロバイオティックまたはプロバイオティック含有組
成物の有効量を、その必要がある被験者に投与することを含んでなる、前記方法
を提供する。

【００１２】 好ましくは、気道粘膜表面は、上気道粘膜表面であり、そしてさらにより好ま
しくは、粘膜表面は口腔または肺粘膜である。

【００１３】 好ましくは、プロバイオティックまたはプロバイオティック含有組成物は、胃
または腸粘膜表面に投与する。

【００１４】 第三の側面にしたがって、サイトカイン平衡の撹乱または適切なＴ細胞免疫反
応の欠如によって引き起こされた粘膜表面の慢性または急性障害の予防的または
療法的治療法であって、プロバイオティックまたはプロバイオティック含有組成
物の有効量を、その必要がある被験者に投与することを含んでなる、前記方法を
提供する。

【００１５】 好ましくは、粘膜表面は、口腔、鼻咽頭、呼吸器、胃、腸、生殖器および腺か
らなる群より選択される。

【００１６】 サイトカイン平衡の評価に有用なマーカーは、インターフェロン−γ（ＩＦＮ
−γ）、インターロイキン−４（ＩＬ−４）およびインターロイキン−１２（Ｉ
Ｌ−１２）の１以上である。しかし、Ｔｈ１またはＴｈ２細胞性反応いずれかの
マーカーとして知られる他のサイトカインもまた、この目的に有用である。

【００１７】 プロバイオティックが、細菌、例えば限定されるわけではないが、乳酸細菌、
ミコバクテリウム属（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）種またはビフィドバクテリ
ウム属（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）種より選択可能なものであることが
好ましい。さらにより好ましいのは、アシドフィルス菌（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌ
ｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ（Ｌ． ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ））、発酵乳
酸桿菌（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ（Ｌ． ｆｅｒｍｅ
ｎｔｕｍ））またはミコバクテリウム・バカイ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ
ｖａｃｃａｅ（Ｍ． ｖａｃｃａｅ））、あるいはＴｈ１細胞性反応を誘導可能
なそれらの一部の使用である。特に好ましいのは、アシドフィルス菌である。ア
シドフィルス菌、発酵乳酸桿菌またはＭ．バカイは、Ｔｈ１反応を誘導可能であ
る限り、生存状態で、または不活性化調製として使用可能である。アシドフィル
ス菌および発酵乳酸桿菌は、なるべく、生存調製で使用する。例えばカセイ菌、
Ｌ．プランタルム（Ｌ． ｐｌａｎｔａｒｕｍ）、Ｌ．ラムノスス（Ｌ． ｒｈ
ａｍｎｏｓｕｓ）、ビフィドバクテリウム・ブレーベ（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅ
ｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅ）およびそれらに匹敵するものなどの公知の免疫賦活（ａ
ｄｊｕｖａｔｉｎｇ）細菌などの他の細菌もまた、本明細書に定義するようなプ
ロバイオティックとして適切であろうとみなされる（これらがプロバイオティッ
ク効果を持っていてもまたは持っていなくても）。

【００１８】 必要とされる投薬量は、予防的にまたは療法的に用いられるのであっても、粘
膜表面障害の性質、および関与する生物または新生物の種類に応じて多様であろ
う。治療パラメーターと共に、必要とされる投薬量は、当業者によって、容易に
評価可能である。プロバイオティックの好ましい投薬量は、プロバイオティック
が、全生存プロバイオティック細菌である場合、約１ｘ１０⁸から約１ｘ１０¹²
生物である。

【００１９】 プロバイオティックは、１以上の抗生物質または１以上の他の薬学的活性剤と
組み合わせて投与可能である。プロバイオティックは、抗生物質療法または他の
活性剤での療法の前に、該療法と同時に、または該療法に続いて投与することが
可能である。

【００２０】 好ましくは、粘膜表面障害は、例えば、シュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏ
ｎａｓ）種、連鎖球菌属（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）種、ブドウ球菌属（Ｓ
ｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）種、カンジダ属（Ｃａｎｄｉｄａ）種、ヘリコバ
クター属（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ）種またはヘモフィルス属（Ｈａｅｍｏｐ
ｈｉｌｕｓ）種による感染などの、細菌感染である。さらにより好ましいのは、
型決定不能インフルエンザ菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ
）、緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、肺炎連鎖球菌
（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、白色ブドウ球菌（Ｓ
ｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｌｂｕｓ）、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌ
ｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）、カンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ
ａｌｂｉｃａｎｓ）および／またはピロリ菌（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙ
ｌｏｒｉ）である。粘膜障害はまた、細菌または他の微生物による不適切なコロ
ニー形成であることも可能である。例えば、粘膜障害は、エプスタイン・バーウ
イルス（ＥＢＶ）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、ヘルペスウイルスおよび
それらに匹敵するものなどのウイルスによる、慢性または急性コロニー形成また
は感染を伴うことが可能である。他のウイルスによる感染および／またはコロニ
ー形成の治療もまた、本発明の方法および組成物で達成可能であることが、当業
者には明らかとなるであろう。

【００２１】 好ましくは、治療が必要な被験者は、感染の高リスクを有する個体からなる群
より選択される。しかし、本治療は、いかなる被験者においても、粘膜障害の予
防に適切に使用されることが認識されるであろう。例えば、本発明の治療法は、
被験者の免疫状態に影響を有し、そしてしたがって、被験者が感染しやすくする
、多様なストレス要因に曝露される被験者に、適切に実行することが可能である
。例えば、運動選手が一般的に遭遇するような疲労および／または肉体的ストレ
ス要因は、これらの被験者を気道感染に罹りやすくする。これは、粘膜表面の免
疫状態、特にＩｇＡ分泌の機能障害によって引き起こされるようである。

【００２２】 本明細書に記載するものなどのプロバイオティック調製を運動またはトレーニ
ング前、その間および／またはその後に投与すると、運動選手の免疫状態、特に
気道の粘膜表面のものが回復し、したがって、感染と戦うかまたは感染を予防す
ることが可能である。

【００２３】 好ましくは、プロバイオティックまたはプロバイオティック含有組成物は、錠
剤またはカプセル型である。しかし、プロバイオティック組成物が、液体または
固形調製の他の型であることが可能であり、そしてまた、ヨーグルトまたは他の
乳製品、あるいは例えばダイズ（ｓｏｙ）に基づく類似の非乳製品などの食物供
給源に存在することも可能であることが、当業者には明らかであろう。

【００２４】 治療は、障害を有する粘膜表面の遠位の部位への、プロバイオティックまたは
プロバイオティック含有組成物の投与を伴うことが可能である。例えば、鼻咽頭
、胃または上気道粘膜感染の治療において、プロバイオティックまたはプロバイ
オティック含有組成物を、腸粘膜表面に投与することが可能である。

【００２５】 第四の側面にしたがって、被験者において、粘膜表面でサイトカイン平衡を改
変する方法であって、プロバイオティックまたはプロバイオティック含有組成物
の有効量を、その必要がある被験者に投与することを含んでなる、前記方法を提
供する。

【００２６】 第五の側面にしたがって、被験者において、粘膜表面でＴｈ１細胞性免疫反応
を誘導する方法であって、プロバイオティックまたはプロバイオティック含有組
成物の有効量を、その必要がある被験者に投与することを含んでなる、前記方法
を提供する。

【００２７】 第六の側面にしたがって、被験者において、粘膜表面でインターフェロン−γ
の分泌を増進する方法であって、プロバイオティックまたはプロバイオティック
含有組成物の有効量を、その必要がある被験者に投与することを含んでなる、前
記方法を提供する。

【００２８】 第七の側面にしたがって、被験者において、粘膜表面でインターロイキン−４
の分泌を減少させる方法であって、プロバイオティックまたはプロバイオティッ
ク含有組成物の有効量を、その必要がある被験者に投与することを含んでなる、
前記方法を提供する。

【００２９】 第八の側面にしたがって、被験者において、粘膜表面で正常サイトカイン平衡
を回復する方法であって、プロバイオティックまたはプロバイオティック含有組
成物の有効量を、その必要がある被験者に投与することを含んでなる、前記方法
を提供する。

【００３０】 第九の側面にしたがって、免疫療法のため、粘膜表面をプライミングする方法
であって、プロバイオティックまたはプロバイオティック含有組成物の有効量を
、その必要がある被験者に投与することを含んでなる、前記方法を提供する。

【００３１】 好ましくは、免疫療法は療法的または予防的ワクチンの投与に存する。やはり
好ましいのは、それによってプロバイオティックまたはプロバイオティック含有
組成物を、ワクチンの前に、またはワクチンと同時に投与する方法である。プロ
バイオティックまたはプロバイオティック含有組成物の投与は、ワクチンが投与
された後の期間、続けることが可能である。

【００３２】 第十の側面にしたがって、粘膜表面の慢性または急性障害の予防的または療法
的治療に適した薬剤組成物であって、プロバイオティックまたはプロバイオティ
ック含有組成物の有効量を含んでなる、前記薬剤組成物を提供する。

【００３３】 プロバイオティックが、細菌、例えば限定されるわけではないが、乳酸細菌、
ミコバクテリウム属種またはビフィドバクテリウム属種より選択可能なものであ
ることが好ましい。さらにより好ましいのは、アシドフィルス菌（Ｌ． ａｃｉ
ｄｏｐｈｉｌｕｓ）、発酵乳酸桿菌（Ｌ． ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ）またはミコバ
クテリウム・バカイ（Ｍ． ｖａｃｃａｅ）、あるいはＴｈ１細胞性反応を誘導
可能なそれらの一部の使用である。特に好ましいのは、アシドフィルス菌である
。アシドフィルス菌、発酵乳酸桿菌またはＭ．バカイは、Ｔｈ１反応を誘導可能
である限り、生存状態で、または不活性化調製として使用可能である。アシドフ
ィルス菌および発酵乳酸桿菌は、なるべく、生存調製で使用する。例えばカセイ
菌、Ｌ．プランタルム、Ｌ．ラムノスス、ビフィドバクテリウム・ブレーベおよ
びそれらに匹敵するものなどの公知の免疫賦活細菌などの他の細菌もまた、本明
細書に定義するようなプロバイオティックとして適切であろうとみなされる（こ
れらがプロバイオティック効果を持っていてもまたは持っていなくても）。

【００３４】 好ましくは、薬剤組成物には生存生物が含まれるが、殺した生物もまた使用可
能であると理解されるであろう。さらに、単一生物の調製または多数の生物を含
有する調製が予見される。生物（類）は、損なわれていなくても（ｉｎｔａｃｔ
）または破壊されていても、いずれであってもよい。

【００３５】 プロバイオティックの好ましい含量は、プロバイオティックが、全生存プロバ
イオティック細菌である場合、約１ｘ１０⁸から約１ｘ１０¹²生物の投薬量を搬
送するであろうものである。

【００３６】 組成物の好ましい処方は、例えば錠剤またはカプセルなどの固形投薬型である
。しかし、食物製品、例えばダイズに基づく、または乳製品に基づく製品の形で
処方可能であることが、理解されるであろう。

【００３７】 第十一の側面にしたがって、粘膜表面の慢性または急性感染、あるいは望まし
くない微生物コロニー形成または再活性化と関連する症状および／または症候群
の予防的または療法的治療法であって、通常の粘膜系の非特異的活性化が可能な
剤の有効量を、その必要がある被験者に投与することを含んでなる、前記方法を
提供する。

【００３８】 好ましくは、治療しようとする症状および／または症候群は、慢性疲労症候群
である。

【００３９】 好ましい剤は、プロバイオティックまたはプロバイオティック含有組成物であ
る。やはり好ましいのは、プロバイオティックが、損なわれていない生存生物で
あるか、またはプロバイオティック含有組成物が前記生物を含んでなることであ
る。

【００４０】 好ましくは、治療しようとする被験者は、ＥＢＶ陽性運動選手、突発性ＣＦＳ
を有する被験者、運動後の遅延性疲労を有する被験者、唾液ＩｇＡまたはＩｇＡ
１が低レベルである被験者および感染性単核球症と立証された被験者からなる群
より選択される。好ましい態様の説明 本発明は、粘膜表面を「プライミング」して、「危険」に反応し、Ｔｈ１サイ
トカインを産生するこれらのシステム両方に関与する細胞および分子の操作に関
する。展開される概念は、特定の細菌、特に乳酸桿菌が、高密度病原体に曝露さ
れる被験者の腸に住み着くことである。我々の研究は、これらの細菌が、Ｔｈ１
反応に向かうサイトカインパターンに影響を与えることを示した。活性化され、
そしてＩＦＮ−γを産生するＴ細胞は、粘膜表面およびその局所リンパ節に住み
着き、封じ込め装備をセットアップして、「危険」を待つ。

【００４１】 本発明の方法および組成物はまた、急性および慢性ウイルス感染の治療に有効
に使用可能である。特に、集団中に遍在性（ubiquitous）であり、そして多くの
症状および疾患と関連する、慢性エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）、サイ
トメガロウイルス（ＣＭＶ）および他のヘルペス型ウイルス感染の治療が、特に
有用な適用と予見される。やはり本発明の組成物および方法の有用な適用と予見
されるのは、集団に蔓延しているウイルス感染に起源を有する可能性があるか、
または該ウイルス感染に誘発されるものであり、そして衰弱させる可能性がある
が、既知のまたはよく定義された治療プロトコルがない障害、例えば慢性疲労症
候群（「ＣＦＳ」）などの治療である。

【００４２】 現在、「ＣＦＳ」と診断される患者の相当数は、粘膜免疫障害のため、反復し
て活性化ＥＢＶ（または類似のヘルペス群ウイルス感染）を示す。これは唾液Ｉ
ｇＡ１またはＩＮＦ−γ、あるいはＰＣＲが検出する遊離ウイルスの測定を通じ
て、監視可能である。プロバイオティック療法に反応する可能性があるものの特
徴的な（しかし限定されない）臨床的特徴には、慢性再発性疲労の状態を残す、
「ウイルス病」の開始が含まれる。急性増悪は、通常、喉の痛みとして示される
「感染」、または過剰な運動と共に生じる。

【００４３】 ウイルス感染は、必ずしも直ちに認識可能な症状を引き起こさず、そしてかな
りの期間、そうでなければ元気でそして健康な被験者中で休眠している可能性が
あるが、誘発因子が提供されると直ちに再活性化される可能性がある。例えば、
集中的なトレーニングまたは運動を経験している運動選手では、ＥＢＶの粘膜封
じ込めの減少によって、能力障害が引き起こされる可能性があり、封じ込めの減
少はウイルスの再活性化および排出を導き、これが次に能力障害および／または
疲労を導く。したがって、ＥＢＶ陽性であり、そして能力障害を有し、特に低い
唾液ＩｇＡまたはＩｇＡ１が検出される（例えば５０ｍｇ／１００ｍｌ未満）運
動選手は、本発明の調製を用いた治療から利益を得る可能性がある。

【００４４】 もちろん、本発明の調製および方法はまた、他の被験者、例えば「ＣＦＳ」と
診断された患者で、ウイルス（通常ＥＢＶであるが、ＣＭＶ、ロスリバーウイル
スおよびそれらに匹敵するものである可能性がある）が再活性化され、そして疲
労が特に運動によって開始される場合にも、適用可能である。しかし、数週間以
内に好転せず、そして疲労が残っている、実証された感染性単核球症のいかなる
患者も、ウイルス病の臨床的（±血清学的）証拠後に長引く疲労を有するいかな
る患者も、あるいは再発する喉の痛み、運動後の疲労の有意な悪化、または低レ
ベルの唾液ＩｇＡもしくはＩｇＡ１（例えば５０ｍｇ／１００ｍｌ未満）を伴う
、突発性ＣＦＳを有する被験者も、本発明の調製を用いた治療から利益を得る可
能性がある。

【００４５】 プロバイオティックまたはプロバイオティックを含有する組成物の投与はまた
、ウイルス感染に関連する上述の症状および／または障害の治療も補助するであ
ろうことが予見される。

【００４６】 プロバイオティックは、プロバイオティック投与部位の遠位の粘膜表面上で効
果を有する。したがって、広い意味で、本発明は、多量投与（ｂｏｌｕｓ）とし
て投与するか、または好ましくは定期的に与えて、粘膜Ｔ細胞のプライミングま
たは細胞のプライミングされた状態の維持を通じて、すべての粘膜表面の最適粘
膜保護を維持することが可能である、プロバイオティック製品、特に、乳酸桿菌
であるかまたは乳酸桿菌を含む製品に関するが、他の細菌または細菌の組み合わ
せ、あるいはＴｈ１型細胞性反応を誘導可能なまったく別のアジュバントを含む
ことが可能である。こうしたＴ細胞はＩＮＦγを含有し、そして非特異的機構に
よって、ＩＮＦ−γを放出するよう誘発可能である。したがって、通常の粘膜系
を非特異的に活性化することが可能な他の剤もまた、本発明の調製および方法に
好適に使用可能である。

【００４７】 さらに、本発明のプロバイオティックは、その効能を増進するかまたは補助す
る、他の治療と組み合わせて使用可能である。例えば、ピロリ菌感染のため、抗
生物質で治療した患者のおよそ２０％が、該生物を根絶するのに失敗する。抗生
物質療法へのこの耐性は、Ｔｈ０反応（すなわちより少ないＩＦＮ−γおよびよ
り多いＩＬ−４）に向かうシフトによる可能性がある。抗生物質療法前の、該療
法と組み合わせた、または該療法に続く、プロバイオティックの投与は、より優
位なＴｈ１反応にスイッチバックし、そしてしたがって、こうした患者において
、該生物を根絶する抗生物質療法を補充するかまたは補助することによって、有
益である可能性がある。

【００４８】 したがって、プロバイオティックの投与は、粘膜感染、異常なまたは不適切な
生物の粘膜表面のコロニー形成、およびウイルスでの再感染またはウイルスの再
活性化の予防または療法に使用可能である。

【００４９】 これから、限定されない実施例を参照して、本発明をより詳細に記載する。

【００５０】

【実施例】

実施例１：Ｔｈ１／Ｔｈ２サイトカイン反応に対するプロバイオティック細菌 の影響 プロバイオティック細菌が、Ｔｈ２を下方制御し、そしてＴｈ１サイトカイン
反応を上方制御するかどうかを決定するため、給餌針を用いて、Ｃ５７／Ｂｌ６
マウスに多様な数のアシドフィルス菌（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｎｅｗ
Ｓｏｕｔｈ Ｗａｌｅｓ， Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ
ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ， オ
ーストラリア・シドニー）を、毎日２週間、胃内投与し、その後、腹膜注射によ
って投与した、０．２ｍｌリン酸緩衝生理食塩水中の８μｇのオボアルブミン（
ＯＶＡ）および水酸化アルミニウムで感作した。マウスを屠殺する前に、２日毎
に２週間、アシドフィルス菌をさらに１０回与えた。ふるいを通して脾臓を細か
く裂くことによって、リンパ球を単離し、ＰＢＳで洗浄し、そして１０ｘ１０⁶
で再懸濁した。細胞懸濁物の１ｍｌのアリコットを、２４ウェル平底マイクロタ
イタープレートのウェルに分配し、そしてＯＶＡ（５μｇ／ｍｌ）で刺激した。
４日間のインキュベーション後、上清を収集し、そしてＩＬ−４およびＩＦＮ−
γ産生に関して、ＩＬ−４またはＩＦＮ−γモノクローナル抗体対を用いた標準
的ＥＬＩＳＡ技術によってアッセイした。

【００５１】 簡潔には、２４ウェルマイクロタイタープレートのウェルを捕捉抗ＩＬ−４抗
体でコーティングした。室温で１時間インキュベーションした後、ウェルを洗浄
し、そしてビオチン化抗ＩＬ−４抗体を各ウェルに添加した。さらに１時間イン
キュベーションした後、ウェルを洗浄し、そしてストレプトアビジン−ペルオキ
シダーゼコンジュゲートを各ウェルに添加した。インキュベーション３０分後、
ウェルを洗浄し、そしてその後、ＴＭＢ基質を添加した。ＥＬＩＳＡプレート読
み取り装置中、４５０／６２０ｎｍで、発色を読み取った。未知の試料中のＩＬ
−４レベルは、標準曲線を用いた内挿によって定量化した。ＩＦＮ−γの測定に
、類似の方法を用いた。

【００５２】 図１ＡおよびＢに示した結果は、アシドフィルス菌を与えた結果、用量依存方
式で、ＩＬ−４産生が抑制された（図１Ａ）が、ＩＦＮ−γ産生は増進された（
図１Ｂ）ことを立証する。

【００５３】 実施例２：唾液中の一酸化窒素（ＮＯ）分泌に対するプロバイオティック細菌 の影響 ＤＢＡ／２マウス（群あたりｎ＝３から５）にアシドフィルス菌を与え、そし
てその後、以下の実施例３に記載するように、カンジダ・アルビカンスに曝露し
た。経口注入後の多様な時点で、唾液流を刺激するピロカルピン注射後、唾液を
収集した。唾液中のＮＯ濃度は、Ｇｒｅｅら（１９８２）Ａｎａｌ． Ｂｉｏｃ
ｈｅｍ １２６：１３１−１３８による方法にしたがって、グリース反応によっ
て測定した。

【００５４】 データは、アシドフィルス菌（５ｘ１０⁹ＣＦＵの経口投与）を与えた動物の
唾液へのＮＯの分泌が、カンジダ・アルビカンス曝露後の初期に増加したが、よ
り後期の段階では、有意に減少したことを立証する（図２）。

【００５５】 実施例３：プロバイオティック細菌を与えた後のＣ．アルビカンスへの耐性 ＤＢＡ／２マウスＨ２ｄ雄マウス（群あたりｎ＝３−５）に、０．２ｍｌ Ｐ
ＢＳ中の５ｘ１０⁹アシドフィルス菌を２日毎に２週間、胃内投与した。最後の
投与の１日後、先細滅菌綿棒を用いて、口腔に塗布することによって、１０⁸カ
ンジダ・アルビカンス分芽胞子にマウスを曝露した。感染後、多様な日数で、口
腔粘膜中のＣ．アルビカンス数を測定した。口腔（頬、舌および軟口蓋）を、先
細綿棒を用いて、完全にぬぐった。綿棒を１ｍｌ ＰＢＳ中に入れ、そしてボル
テックス混合装置中で混合することによって、酵母細胞を再懸濁し、その後、ク
ロラムフェニコールを補ったサボーランド（Ｓａｂｏｕｒａｎｄ）デキストロー
ス寒天上、３７℃で、連続１０倍希釈で培養した。結果はＣＦＵ／ｍｌで表した
（図５）。

【００５６】 アシドフィルス菌を与えたマウスは、ＰＢＳを与えた対照マウスに比較して、
すべての時点で、感染により耐性であった。第６日までに、アシドフィルス菌を
与えたマウスから、酵母はほぼ完全に一掃された。

【００５７】 実施例４：ＩＬ−４、ＩＦＮ−γおよびＩＬ−１２産生 カンジダ・アルビカンス感染への反応に関して、実施例３に記載したモデルに
おいて、さらなる研究を行った。

【００５８】 カンジダ抗原は、ＭＳＥ Ｓｏｎｉｐｒｅｐ中での超音波処理によって、新鮮
に培養したカンジダ・アルビカンスから調製した。超音波処理したものを２００
０ｇで１０分間遠心分離し、その後、上清を収集し、そしてＰＢＳに対して透析
した。タンパク質概算後、溶液をフィルター滅菌し、そして必要になるまで−２
０℃で保管した。

【００５９】 頚部リンパ節（ＣＬＮ）細胞の単細胞懸濁物は、ふるいを通してリンパ節組織
を細かく裂くことによって調製した。１０％ウシ胎児血清（ＦＣＳ）を補ったＲ
ＰＭＩ １６４０培地中に細胞を収集し、遠心分離によって２回洗浄し、そして
２４ウェルプレート中、２．５μｇ／ｍｌのカンジダ抗原の存在下、ウェルあた
り４ｘ１０⁶細胞で３日間培養した。

【００６０】 培養上清を収集し、そしてマッチした抗体対および標準として組換えサイトカ
インを用いたＥＬＩＳＡによって、ＩＬ−４、ＩＬ−１２およびＩＦＮ−γに関
してアッセイした（Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ、カリフォルニア州サンディエゴ）。
サイトカインＥＬＩＳＡの感度は３１ｐｇ／ｍｌであり、そして結果は、バック
グラウンドを減じた正味量で表した。

【００６１】 唾液試料は、実施例２に記載した方法にしたがって得た。

【００６２】 ＩＬ−４およびＩＬ−１２研究の結果は、図３（ＩＬ−１２）および図４（Ｉ
Ｌ−４）に示す。

【００６３】 ＩＦＮ−γ研究の結果は、図６（唾液ＩＦＮ−γ）および７（頚部リンパ節Ｉ
ＦＮ−γ）に示す。

【００６４】 対照データは、カンジダ・アルビカンスでの経口感染に対する、小さく持続が
不完全な反応を示し、感染第６日まで、ＩＦＮ−γは検出不能であった。アシド
フィルス菌を与えたマウスにおけるデータは、未感染マウスではＩＦＮ−γ反応
がないが、マウスをＣ．アルビカンスに曝露すると、早期反応（第２日）がある
ことを示す。さらに、Ｃ．アルビカンスに曝露した後、アシドフィルス菌を与え
なかった対照におけるより、より持続したＩＦＮ−γ反応があった。この初期効
果は、リンパ節で第１５日に、そして唾液で第８日に、なお見ることが可能であ
る。

【００６５】 作用のいかなる特定の機構にも拘束されることは望ましくないが、粘膜表面が
乳酸桿菌の投与によってプライミングされ、曝露後、ＩＦＮ−γを分泌するよう
であり、そしてこのモデルでは、ＩＦＮ−γは、病原体、カンジダ・アルビカン
スが、該真菌の菌糸体（侵襲）型に変換するのを防ぎ、そして細胞性免疫および
一酸化窒素産生を増進するよう作用するようである。

【００６６】 実施例５：感染への耐性におけるＩＦＮ−γおよびＮＯの役割 保護の免疫パラメーターを同定するため、Ｃ．アルビカンス感染後の多様な時
点で、ＩＦＮ−γレベルを測定した。図８に示すように、非免疫マウスと比較し
て、Ｃ．アルビカンス曝露直後および曝露１日後、唾液中のＩＦＮ−γレベルの
顕著な増加があった。レベルは１５日間に渡って維持され、非免疫マウスのもの
と比較して、第１０日および第１５日には、有意により高いレベルが検出された
。一酸化窒素産生は、寄生虫感染における宿主防御に関連するため、同一のＨ２
ｄ ＭＨＣハプロタイプを共有する２つのマウス系統で、感染後、ＮＯの定量化
を行った。この実験では、マウスをＣ．アルビカンスに感染させ、そしてその後
、毎日３日間、ＮＧ−モノメチル−Ｌ−アルギニン一酢酸（ＭＮＬＡ）を注射す
ることによって、ＮＯシンターゼ阻害剤をｉｐ注射し、その後、酵母のクリアラ
ンス率を決定した。図９に示すように、ＭＮＬＡで処置したマウスは、未処置マ
ウスと比較して、２つのマウス系統で、多様な時点での酵母クリアランスを遅延
させ、ＮＯ産生の減少が、耐性と関連することが示された。

【００６７】 実施例６：アシドフィルス菌を与えたラット肺からの型決定不能インフルエン ザ菌のクリアランス増進 ＤＡラット（２００−２５０グラム、８−１０週齢、Ａｎｉｍａｌ Ｒｅｓｏ
ｕｒｃｅ Ｃｅｎｔｒｅ、ウェスタンオーストラリア州パース）に、０．７５ｍ
ｌ ＰＢＳ中のアシドフィルス菌（ラットあたり２．５ｘ１０¹⁰）またはＰＢＳ
のみを、２日毎に７日間、胃内投与し、その時点で、ホルマリンで殺したインフ
ルエンザ菌（ラットあたり５ｘ１０⁹）を腔内投与して、ラットを免疫した（以
下の群を参照されたい）。ラットには、２日毎に２週間与えつづけ、そしてその
後、気管内経路によって投与する、５０μｌのホルマリンで殺したインフルエン
ザ菌（ラットあたり５ｘ１０⁸）で追加免疫した。アシドフィルス菌をさらに７
日間与えた後、ラット肺を、５０μｌの生存５ｘ１０⁸インフルエンザ菌に曝露
した。

【００６８】 免疫群（５ラット／群）： １ ＰＢＳ（腔内） ２ インフルエンザ菌（腔内）＋インフルエンザ菌（気管内追加免疫） ３ ＰＢＳ（腔内）＋アシドフィルス菌を２日毎に与える ４ インフルエンザ菌（腔内）＋インフルエンザ菌（気管内追加免疫）＋アシ
ドフィルス菌を２日毎に与える 曝露４時間後、ラットを屠殺し、そして気管支洗浄液（ＢＡＬ）および肺ホモ
ジネート（ＬＨ）において、肺中のコロニー形成レベルを調べた。クリアランス
レベルは、洗浄液または肺ホモジネートの連続１０倍希釈を、チョコレート寒天
プレート上に蒔くことによって測定した。結果は、コロニー形成単位（ＣＦＵ）
数として表した。

【００６９】 結果を表１に示す。アシドフィルス菌を与え、そして死菌インフルエンザ菌で
免疫したラットは、肺中のインフルエンザ菌感染に、より耐性であった。さらに
、反復用量のアシドフィルス菌を経口投与したラットは、単回多量アシドフィル
ス菌を与えたラットより、感染により耐性であり、クリアランス増進が、反復投
与後、アシドフィルス菌での腸のコロニー形成が増加したためである可能性が示
唆された。

【００７０】 表１ アシドフィルス菌を与えたラット肺中のインフルエンザ菌のクリアラン ス増加

【００７１】

【表１】 実施例７：熱殺サルモネラワクチンを用いた免疫後のマウスにおけるネズミチ フス菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）の転位置に対するア シドフィルス菌（ＶＲＩ０１１）の影響 グラム陰性細菌の腸上皮を横切る転位置は、特に、術後または胃腸感染後の被
験者で起こる可能性がある。治療せずにおくと、内毒素症につながる可能性があ
る。本実施例では、腸病原体、ネズミチフス菌の転位置に対するアシドフィルス
菌投与の影響を調べる。

【００７２】 雌ＢＡＬＢ／ｃマウス６−８週齢は、Ａｎｉｍａｌ Ｒｅｓｏｕｒｃｅ Ｃｅ
ｎｔｒｅ、ウェスタンオーストラリア州パースより得た。アシドフィルス菌株（
ＶＲＩ０１１）および病原体、ネズミチフス菌は、Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｍｉｃ
ｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒ
ｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ， Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｎｅｗ Ｓｏｕｔ
ｈ Ｗａｌｅｓより得た。

【００７３】 マウスに、２週間の期間に渡って、アシドフィルス菌（ＶＲＩ０１１）（用量
あたり１ｘ１０⁸ｃｆｕ）５用量を与え、その後、死菌経口サルモネラワクチン
で、マウスを胃内免疫した。免疫２週間後、マウスを屠殺し、そしてアシドフィ
ルス菌およびネズミチフス菌を計数するため、脾臓を収集した。

【００７４】 死菌経口ネズミチフス菌ワクチンの前に、または該ワクチンと同時に、アシド
フィルス菌（ＶＲＩ０１１）を与えたマウスは、ＰＢＳを与えたマウスと比較し
て、経口経路を介した生菌曝露後、ネズミチフス菌の転位置に対して、より優れ
た保護を有する（表１）。死菌経口ワクチンでの免疫は、ネズミチフス菌の脾臓
への転位置の減少を導いたが、アシドフィルス菌を与えることによって、これは
さらに増進された。したがって、腸上皮を通じた病原性細菌の転位置は、プロバ
イオティックの経口投与によって予防可能である。

【００７５】 実施例８：死菌経口サルモネラワクチンで予防接種したマウスの腸からの病原 性ネズミチフス菌の転位置に対する発酵乳酸桿菌の影響 ＢＡＬＢ／ｃ雌マウス（６−８週齢）に、２週間の期間に渡って４回、１０⁸
の死菌ネズミチフス菌ワクチンを投与する前に、または投与するのと同時に、１
０⁸発酵乳酸桿菌ＶＲＩ０１２（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｎｅｗ Ｓｏｕ
ｔｈ Ｗａｌｅｓ， Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ
Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ， オースト
ラリア・シドニー）を与えた。経口投与２週間後、経口経路によって投与した生
存ネズミチフス菌にマウスを曝露した。屠殺後、脾臓におけるネズミチフス菌で
のコロニー形成レベルを測定した。表２は、ＰＢＳを与えたマウスに比較して、
ネズミチフス菌での免疫前に、またはネズミチフス菌と同時に発酵乳酸桿菌を投
与したマウスで、低レベルの転位置が起きることを示した。

【００７６】 表２ 発酵乳酸桿菌ＶＲＩ０１２は、死菌ネズミチフス菌ワクチンで免疫した マウスにおけるネズミチフス菌の転位置の阻害を増進した

【００７７】

【表２】 実施例９：ＮＴＨｉ細菌のクリアランスに対する発酵乳酸桿菌の影響 ６匹の雄、特定病原体不含、濃アグーチ（ＤＡ）ラットの群に、開腹術により
腸を暴露した後、直接、十二指腸管腔に単回用量のＰＢＳまたは生存発酵乳酸桿
菌（２．５ｘ１０¹⁰）を投与した。２１日後、ラットを、５ｘ１０⁸生存型決定
不能インフルエンザ菌（ＮＴＨｉ）に、気管内感染させた。４時間後、ペントバ
ルビトン過剰用量でラットを殺した。肺を１０ｍｌ ＰＢＳで洗浄して、気管支
肺胞洗浄液（ＢＡＬ）を得た。その後、洗浄した肺を１０ｍｌのＰＢＳ中でホモ
ジナイズした。ＢＡＬおよび肺ホモジネート（ＬＨ）の１０倍連続希釈２０μｌ
を、チョコレート寒天プレート上に蒔き、そして１０％ ＣＯ２インキュベータ
ー中で、３７℃で一晩インキュベーションした。コロニーを計数し、そしてＢＡ
ＬおよびＬＨ調製中の生存細菌数を決定した。コロニー形成単位（ＣＦＵ）とし
て表した、生存ＮＴＨｉ細菌の回収は、以下のとおりであった： 表３

【００７８】

【表３】 ^*ＰＢＳ群と比較した際 これらのデータは、腸に搬送された単回用量の発酵乳酸桿菌が、続く急性ＮＴ
Ｈｉ呼吸器感染のクリアランス増進を引き起こすことを示す。

【００７９】 実施例１０：ピロリ菌のクリアランスに対するアシドフィルス菌の影響 ５匹の雌Ｃ５７ＢＬ／６マウスの２群を、胃管栄養法によって、連続３日間（
第１、２および３日）、およそ１０⁹の生存ピロリ菌を投与することにより、ピ
ロリ菌（シドニー株１）に感染させた。第２８、３０、３２、３５、３７および
３９日に、マウスに、胃管栄養法によって、生存アシドフィルス菌（０．２ｍｌ
水中５ｘ１０⁹）または水（対照群）を投与した。

【００８０】 ２１日後（第５０日）、ペントバルビトン過剰用量（腹腔内投与）によってマ
ウスを殺し、そしてその胃を除去した。胃を２つの等しい半分に切り裂き、そし
て片方を１ｍｌの脱イオン水中に入れ、そしてホモジナイズした。胃ホモジネー
トの連続１０倍希釈物を、ファンギゾン、バンコマイシン、バシトラシンおよび
ナリジクス酸を含有するチョコレート寒天プレート上に蒔いた。微好気性条件下
で、３７℃で３日間インキュベーションした後、コロニーを計数し、そして元来
の胃ホモジネート中の生存ピロリ菌総数を決定した。コロニー形成単位（ＣＦＵ
）として表した、胃における生存ピロリ菌回収結果を以下の表に示す。

【００８１】 表４：

【００８２】

【表４】 ２群は有意に異なる（Ｐ＝０．０１３）。

【００８３】 これらの結果は、アシドフィルス菌を投与したマウスが、対照マウスより、よ
り低いレベルの胃ピロリ菌感染を有することを示す。これは、あらかじめ確立さ
れたピロリ菌感染に対するアシドフィルス菌の療法効果の例である。

【００８４】 実施例１１：プロバイオティックで前処置したマウスにおける、ピロリ菌感染 の抗細菌療法（メトロニダゾール） ピロリ菌感染マウス（群あたり５匹）を、メトロニダゾール（０．０８ｍｇ／
動物）での１週間の処置前に、週３回、２週間、経口投与によって、アシドフィ
ルス菌（動物あたり１ｘ１０⁹）で処置した。

【００８５】 以下の結果は、生理食塩水処置対照群と比較した際、プロバイオティックで前
処置し、そしてその後、抗生物質療法を行ったマウス（７０％、ｐ＝０．００９
）、プロバイオティックのみで処置したマウス（５８％、ｐ＝０．０１３）、お
よびメトロニダゾールのみで処置したマウス（５５％、ｐ＝０．０２５）におい
て、細菌の非常に有意な根絶が見られることを立証する。

【００８６】 表６：

【００８７】

【表５】 対照値と比較して、ａ、ｐ＜０．０１；ｂ、ｐ＜０．０２；ｃ、ｐ＜０．００
５ 上記例は、プロバイオティック細菌が、特定のサイトカイン平衡（腸由来であ
るが、粘膜上で再配置されたＴ細胞からのもの）を動かすことによって、特定の
微生物増殖に、より好ましくない環境を生成することを立証する。

【００８８】 本発明は、好ましい態様に関連して記載してきているが、本明細書に記載する
本発明の概念を保持する変形もまた意図することが理解されるであろう。

【図面の簡単な説明】

【図１】 アシドフィルス菌を与えた後のＩＬ−４およびＩＦＮ−γ産生

【図２】 カンジダ・アルビカンス曝露後の、アシドフィルス菌を与えた動
物の唾液中へのＮＯの分泌

【図３】 カンジダ・アルビカンス曝露後のＩＬ−１２産生に対するプロバ
イオティックの影響

【図４】 カンジダ・アルビカンス曝露後のＩＬ−４産生に対するプロバイ
オティックの影響

【図５】 アシドフィルス菌を与えた動物における感染への耐性

【図６】 カンジダ・アルビカンス曝露後の唾液ＩＦＮ−γに対するプロバ
イオティックの影響

【図７】 カンジダ・アルビカンス曝露後の頚部リンパ節ＩＦＮ−γ産生に
対するプロバイオティックの影響

【図８】 Ｃ．アルビカンス曝露後の唾液ＩＦＮ−γ

【図９】 マウスにおけるＣ．アルビカンスのクリアランスに対する、Ｌ−
ＭＬＮＡでの処置の影響

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｋ 45/00 Ａ６１Ｋ 45/00 Ａ６１Ｐ 1/00 Ａ６１Ｐ 1/00 1/02 1/02 11/00 11/00 11/02 11/02 11/04 11/04 15/00 15/00 31/00 31/00 31/04 31/04 31/10 31/10 31/12 31/12 31/16 31/16 43/00 43/00 (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ，ＴＲ)，ＯＡ(ＢＦ ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ， ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，Ｇ Ｍ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＭＺ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ， ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＧ，ＡＬ，ＡＭ， ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，Ｂ Ｚ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＯ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ ，ＤＫ，ＤＭ，ＤＺ，ＥＣ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ， ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，Ｉ Ｎ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ，ＭＤ， ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＭＺ，ＮＯ，ＮＺ，Ｐ Ｌ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ， ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ (72)発明者 パン，ジェラルド オーストラリア国ニューサウスウェールズ 2011，エリザベス・ベイ，ビルヤード・ アベニュー ４／25 (72)発明者 ボロディ，トーマス オーストラリア国ニューサウスウェールズ 2046，ファイヴ・ドック，グレート・ノ ース・ロード 144 (72)発明者 ダンクリー，マーガレット オーストラリア国ニューサウスウェールズ 2287，エラーモア・ヴェール，デンジャ ーフィールド・ドライブ 80 (72)発明者 コンウェイ，パトリシア・リン オーストラリア国ニューサウスウェールズ 2036，ラ・ペローズ，グーラワール・ア ベニュー 20 Ｆターム(参考） 4C076 AA36 AA53 BB01 BB04 CC06 CC07 CC15 CC16 CC17 CC32 CC34 CC35 FF68 4C084 AA17 AA20 MA02 MA35 MA37 MA52 ZA591 ZA592 ZA661 ZA662 ZA671 ZA672 ZA811 ZA812 ZB321 ZB322 ZB331 ZB332 ZB351 ZB352 ZC541 ZC542 4C085 AA03 BA01 BA13 BA14 BA18 BA19 BA20 BA49 BA55 BA78 BA80 BA83 EE01 GG08 4C087 AA02 BC29 BC56 MA02 MA35 MA37 MA52 ZA59 ZA66 ZA67 ZA81 ZB32 ZB33 ZB35 ZC54

Claims (50)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 腸粘膜表面以外の粘膜表面の慢性または急性感染、あるい
   は望ましくない微生物コロニー形成の予防的または療法的治療法であって、本明
   細書に定義するようなプロバイオティックまたはプロバイオティック含有組成物
   の有効量を、その必要がある被験者に投与することを含んでなる、前記方法。
2. 【請求項２】 粘膜表面が、口腔、鼻咽頭、呼吸器、胃、生殖器および腺
   からなる群より選択される、請求項１記載の方法。
3. 【請求項３】 気道の粘膜表面の慢性または急性障害の予防的または療法
   的治療法であって、本明細書に定義するようなプロバイオティックまたはプロバ
   イオティック含有組成物の有効量を、その必要がある被験者に投与することを含
   んでなる、前記方法。
4. 【請求項４】 粘膜表面が口腔粘膜である、請求項３記載の方法。
5. 【請求項５】 粘膜表面が肺粘膜である、請求項３記載の方法。
6. 【請求項６】 本明細書に定義するようなプロバイオティックまたはプロ
   バイオティック含有組成物を、胃または腸粘膜表面に投与する、先行する請求項
   のいずれか１つに記載の方法。
7. 【請求項７】 サイトカイン平衡の撹乱または適切なＴ細胞免疫反応の欠
   如によって引き起こされた粘膜表面の慢性または急性障害の予防的または療法的
   治療法であって、プロバイオティック細菌またはプロバイオティック細菌含有組
   成物の有効量を、その必要がある被験者に投与することを含んでなる、前記方法
   。
8. 【請求項８】 粘膜表面が、口腔、鼻咽頭、呼吸器、胃、腸、生殖器およ
   び腺からなる群より選択される、請求項６または請求項７記載の方法。
9. 【請求項９】 障害が感染または不適切な微生物コロニー形成である、請
   求項３から８のいずれか１つに記載の方法。
10. 【請求項１０】 感染が、シュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）
    種、連鎖球菌属（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）種、ブドウ球菌属（Ｓｔａｐｈ
    ｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）種、カンジダ属（Ｃａｎｄｉｄａ）種、ヘリコバクター属
    （Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ）種およびヘモフィルス属（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕ
    ｓ）種からなる群より選択される、１以上の細菌によって引き起こされる細菌感
    染である、請求項９記載の方法。
11. 【請求項１１】 １以上の細菌が、型決定不能インフルエンザ菌（Ｈａｅ
    ｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）、緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ
    ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎ
    ｅｕｍｏｎｉａｅ）、白色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｌｂ
    ｕｓ）、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）、カ
    ンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ）およびピロリ菌（
    Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ）からなる群より選択される、請求項
    １０記載の方法。
12. 【請求項１２】 障害が、ウイルスによる感染または不適切なコロニー形
    成である、請求項９記載の方法。
13. 【請求項１３】 ウイルスが、エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）、
    サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、ロスリバーウイルス（ＲＲＶ）、ヘルペス型
    ウイルスおよびそれらに匹敵するものからなる群より選択される、請求項１２記
    載の方法。
14. 【請求項１４】 障害が慢性疲労症候群（ＣＦＳ）である、請求項９また
    は請求項１２記載の方法。
15. 【請求項１５】 サイトカインがインターフェロン−γ、インターロイキ
    ン−４および／またはインターロイキン−１２である、請求項７から１４のいず
    れか１つに記載の方法。
16. 【請求項１６】 適切なＴ細胞免疫反応がＴｈ１反応である、請求項９か
    ら１５のいずれか１つに記載の方法。
17. 【請求項１７】 本明細書に定義するようなプロバイオティックが乳酸桿
    菌属（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）またはミコバクテリウム属（Ｍｙｃｏｂａ
    ｃｔｅｒｉｕｍ）種であるか、あるいはプロバイオティック含有組成物が前記種
    を含有する、請求項１から１６のいずれか１つに記載の方法。
18. 【請求項１８】 本明細書に定義するようなプロバイオティックがアシド
    フィルス菌（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ）、発酵乳
    酸桿菌（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ）、カセイ菌（Ｌａ
    ｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃａｓｅｉ）および／またはミコバクテリウム・バカ
    イ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｖａｃｃａｅ）であるか、あるいはプロバイ
    オティック含有組成物が前記種を含有する、請求項１７記載の方法。
19. 【請求項１９】 本明細書に定義するようなプロバイオティックまたはプ
    ロバイオティック含有組成物に、生存生物が含まれる、請求項１７または請求項
    １８記載の方法。
20. 【請求項２０】 有効量が約１０⁸から１０¹²ＣＦＵの範囲内である、請
    求項１から１９のいずれか１つに記載の方法。
21. 【請求項２１】 有効量が約１０¹¹ＣＦＵである、請求項２０記載の方法
    。
22. 【請求項２２】 本明細書に定義するようなプロバイオティックまたはプ
    ロバイオティック含有組成物が、固形投薬型である、請求項１から２１のいずれ
    か１つに記載の方法。
23. 【請求項２３】 投薬型が錠剤またはカプセルである、請求項２２記載の
    方法。
24. 【請求項２４】 １以上の薬学的活性剤の投与をさらに含んでなる、請求
    項１から２３のいずれか１つに記載の方法。
25. 【請求項２５】 １以上の薬学的活性剤が抗生物質である、請求項２４記
    載の方法。
26. 【請求項２６】 本明細書に定義するようなプロバイオティックまたはプ
    ロバイオティック含有組成物を、１以上の薬学的活性剤の前に、該剤と同時に、
    または該剤に続いて投与する、請求項２４または請求項２５記載の方法。
27. 【請求項２７】 本明細書に定義するようなプロバイオティックまたはプ
    ロバイオティック含有組成物の投与部位が、障害を有する粘膜表面の遠位である
    、請求項１から２６のいずれか１つに記載の方法。
28. 【請求項２８】 本明細書に定義するようなプロバイオティックまたはプ
    ロバイオティック含有組成物を、口腔、鼻咽頭、胃、気道、生殖管または腺粘膜
    感染の治療において、腸粘膜表面に投与する、請求項２７記載の方法。
29. 【請求項２９】 被験者において、粘膜表面でサイトカイン平衡を改変す
    る方法であって、本明細書に定義するようなプロバイオティックまたはプロバイ
    オティック含有組成物の有効量を、その必要がある被験者に投与することを含ん
    でなる、前記方法。
30. 【請求項３０】 被験者において、粘膜表面でＴｈ１細胞性免疫反応を誘
    導する方法であって、本明細書に定義するようなプロバイオティックまたはプロ
    バイオティック含有組成物の有効量を、その必要がある被験者に投与することを
    含んでなる、前記方法。
31. 【請求項３１】 被験者において、粘膜表面でインターフェロン−γの分
    泌を増進する方法であって、本明細書に定義するようなプロバイオティックまた
    はプロバイオティック含有組成物の有効量を、その必要がある被験者に投与する
    ことを含んでなる、前記方法。
32. 【請求項３２】 被験者において、粘膜表面でインターロイキン−４の分
    泌を減少させる方法であって、本明細書に定義するようなプロバイオティックま
    たはプロバイオティック含有組成物の有効量を、その必要がある被験者に投与す
    ることを含んでなる、前記方法。
33. 【請求項３３】 被験者において、粘膜表面で正常サイトカイン平衡を回
    復する方法であって、本明細書に定義するようなプロバイオティックまたはプロ
    バイオティック含有組成物の有効量を、その必要がある被験者に投与することを
    含んでなる、前記方法。
34. 【請求項３４】 免疫療法のため、粘膜表面をプライミングする方法であ
    って、本明細書に定義するようなプロバイオティックまたはプロバイオティック
    含有組成物の有効量を、その必要がある被験者に投与することを含んでなる、前
    記方法。
35. 【請求項３５】 免疫療法が療法的または予防的ワクチンの投与に存する
    、請求項３４記載の方法。
36. 【請求項３６】 本明細書に定義するようなプロバイオティックまたはプ
    ロバイオティック含有組成物を、ワクチンの前に、またはワクチンと同時に投与
    する、請求項３４または請求項３５記載の方法。
37. 【請求項３７】 本明細書に定義するようなプロバイオティックまたはプ
    ロバイオティック含有組成物を、ワクチンの後に、さらに投与する、請求項３５
    または請求項３６記載の方法。
38. 【請求項３８】 粘膜表面の慢性または急性障害の予防的または療法的治
    療に適した薬剤組成物であって、本明細書に定義するようなプロバイオティック
    またはプロバイオティック含有組成物の有効量を含んでなる、前記薬剤組成物。
39. 【請求項３９】 本明細書に定義するようなプロバイオティックが乳酸桿
    菌属またはミコバクテリウム属種であるか、あるいはプロバイオティック含有組
    成物が該種を含有する、請求項３８記載の薬剤組成物。
40. 【請求項４０】 本明細書に定義するようなプロバイオティックがアシド
    フィルス菌、発酵乳酸桿菌、カセイ菌および／またはミコバクテリウム・バカイ
    であるか、あるいはプロバイオティック含有組成物が前記種を含有する、請求項
    ３９記載の薬剤組成物。
41. 【請求項４１】 本明細書に定義するようなプロバイオティックまたはプ
    ロバイオティック含有組成物に、生存生物が含まれる、請求項３８から４０のい
    ずれか１つに記載の薬剤組成物。
42. 【請求項４２】 約１０⁸から約１０¹²ＣＦＵを含有する、請求項３８か
    ら４１のいずれか１つに記載の薬剤組成物。
43. 【請求項４３】 約１０¹¹ＣＦＵを含有する、請求項４２記載の薬剤組成
    物。
44. 【請求項４４】 固形投薬型である、請求項３８から４３のいずれか１つ
    に記載の薬剤組成物。
45. 【請求項４５】 投薬型が錠剤またはカプセルである、請求項４４記載の
    薬剤組成物。
46. 【請求項４６】 粘膜表面の慢性または急性感染、あるいは望ましくない
    微生物コロニー形成または再活性化と関連する症状および／または症候群の予防
    的または療法的治療法であって、通常の粘膜系の非特異的活性化が可能な剤の有
    効量を、その必要がある被験者に投与することを含んでなる、前記方法。
47. 【請求項４７】 症状および／または症候群が慢性疲労症候群である、請
    求項４６記載の方法。
48. 【請求項４８】 剤が、本明細書に定義するようなプロバイオティックま
    たはプロバイオティック含有組成物である、請求項４６または請求項４７記載の
    方法。
49. 【請求項４９】 本明細書に定義するようなプロバイオティックが、損な
    われていない（ｉｎｔａｃｔ）生存生物であるか、またはプロバイオティック含
    有組成物が前記生物を含んでなる、請求項４８記載の方法。
50. 【請求項５０】 被験者が、ＥＢＶ陽性運動選手、突発性ＣＦＳを有する
    被験者、運動後の遅延性疲労を有する被験者、唾液ＩｇＡまたはＩｇＡ１が低レ
    ベルである被験者および感染性単核球症と立証された被験者からなる群より選択
    される、請求項４６から４９のいずれか１つに記載の方法。