JP2003533999A

JP2003533999A - Ｇタンパク質共役型受容体ｏｒｇ３

Info

Publication number: JP2003533999A
Application number: JP2001587000A
Authority: JP
Inventors: グラツシー，モラグ・エイ; ギヤザラー，デリク; センプル，コリン・アンドリユー・マクリーン
Original assignee: アクゾ・ノベル・エヌ・ベー
Priority date: 2000-05-24
Filing date: 2001-05-21
Publication date: 2003-11-18
Also published as: AU2001272417A1; WO2001090189A2; EP1290174A2; WO2001090189A3; US20030152973A1

Abstract

(57)【要約】本発明は、Ｇタンパク質共役型受容体をコードする全長ｃＤＮＡ配列、並びに完全遺伝子、及びコードされたタンパク質を提供する。本発明は、治療的使用のための、これらの受容体における活性を有する新規化合物が同定され得るよう、適切なレベルでこれらの受容体を発現する組換え細胞系を提供する。本発明において記載された受容体配列は、既知の内因性リガンドを有しない新規ＧＰＣＲ受容体サブファミリーのメンバーである。このｃＤＮＡは、特にＣＮＳ障害の分野における治療的介入、より具体的には双極性情動障害（ＢＰＡＤ）の処置のための、受容体における活性を有する新規化合物を同定するために使用され得る。この遺伝子のヌクレオチド配列は、精神科の患者及び感受性を有する集団において診断目的で使用され得る。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】本発明は、Ｇタンパク質共役型受容体をコードする全長ｃＤＮＡ配列、並びに
完全遺伝子、及びコードされたタンパク質を提供する。本発明は、治療的使用の
ための、これらの受容体における活性を有する新規化合物が同定され得るよう、
適切なレベルでこれらの受容体を発現する組換え細胞系を提供する。本発明にお
いて記載された受容体配列は、既知の内因性リガンドを有しない新規ＧＰＣＲ受
容体サブファミリーのメンバーである。このｃＤＮＡは、特にＣＮＳ障害の分野
における治療的介入、より具体的には双極性情動障害（ＢＰＡＤ）の処置のため
の、受容体における活性を有する新規化合物を同定するために使用され得る。こ
の遺伝子のヌクレオチド配列は、精神科の患者及び感受性を有する集団において
診断目的で使用され得る。

【０００２】Ｇタンパク質共役型受容体（ＧＰＣＲ）スーパーファミリーは、現在までに同
定されている最大のタンパク質ファミリーのうちの一つである。このファミリー
は、広範囲の種よりクローニングされた８００個を超えるメンバーを含み、少な
くとも３００個のヒト・メンバーを含む。ＧＰＣＲは優れた治療標的であること
が立証されており、現在までの薬物標的の４０から５０％がＧＰＣＲである（Ｍ
ｕｒｐｈｙ，１９９８）。ＧＰＣＲは、光、生体アミン、アミノ酸、ペプチド、
脂質、ヌクレオシド、及び大型ポリペプチドを含む極めて多様な刺激及び化学伝
達物質に対して応答する。これは、神経伝達、細胞代謝、分泌、細胞の分化及び
増殖、並びに炎症応答及び免疫応答を含む多数の過程を制御する。これらのＧＰ
ＣＲの多くは脳において発現されており、ＣＮＳ障害の処置のための治療標的と
して活用され得る。より重要なこととして、公共データベース及び占有データベ
ースにおいて、既知の内因性リガンドを有しない多くのＧＰＣＲが依然として同
定されつつある。これらのオーファンＧＰＣＲは、一連の治療的介入、及び多様
な障害の処置のための潜在的な新規の治療標的となる。

【０００３】リバースファーマコロジー（ｒｅｖｅｒｓｅｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ）又
は機能ゲノミクスが、現在、薬物発見において採用されている。これは、代理リ
ガンド又はそれらの内因性リガンドを同定することにより、新規遺伝子を薬理学
的にバリデートすることを目的とした、遺伝子に基づく生物学である。

【０００４】新規なオーファンＧＰＣＲに加えて、以前は未同定であったリガンドと結合す
る新規なＧＰＣＲ遺伝子サブファミリーも存在することを示唆する証拠が存在す
る。多くのオーファンＧＰＣＲが天然リガンドを割り当てられていないため、こ
れらの受容体の多くは、これまで同定されていない新規なリガンドと結合する可
能性がある（Ｃｉｖｅｌｌｉら、１９９９）。

【０００５】不活性受容体は進化によって排除されているはずであるとみなされているので
、オーファンＧＰＣＲはリガンドと結合すると推定される。従って、オーファン
受容体は、それらの天然リガンド又は代理リガンドを単離するための餌として使
用され得る。新規リガンドの同定におけるこの戦略の使用は、オルファニン（ｏ
ｒｐｈａｎｉｎ）／ノシセプチン（ｎｏｃｉｃｅｐｔｉｎ）、オレキシン（ｏｒ
ｅｘｉｎｓ）／ヒポクレチン（ｈｙｐｏｃｒｅｔｉｎｓ）、及びプロラクチン放
出ペプチドの同定において例証されている（Ｒｅｉｎｓｃｈｅｉｄら、１９９５
、Ｓａｋｕｒａｉら、１９９８、及びＨｉｎｕｍａら、１９９８）。

【０００６】多くの既知のＧタンパク質共役型受容体（ＧＰＣＲ）が、よく確立された薬物
標的であり、現在利用可能な薬物のうちの相当数が、そのようなＧＰＣＲを標的
としている（Ｗｉｌｓｏｎら、１９９８）。リガンドの受容体との結合によりＧ
ＰＣＲが活性化された後、シグナルは一連のシグナル伝達カスケードを通って増
幅され、従って、このリガンドのＧＰＣＲとの結合を介したシグナル伝達経路の
制御は、厳密に調節された生物学的経路を変調するための方策を提供する。

【０００７】ＧＰＣＲは、広範囲の生物学的に関連した過程を媒介し、光、生体アミン、ア
ミノ酸、ペプチド、脂質、ヌクレオシド、及び大型ポリペプチドを含む極めて多
様な刺激及び化学／神経伝達物質に対して応答する。特定の受容体のクローニン
グが治療用化合物の開発へと至った状況は、セロトニン／アドレナリン受容体の
例において特に例証されている。さらに、多数の疾患が、既知のＧＰＣＲの変異
と関連していることが報告されている（Ｗｉｌｓｏｎら、１９９８）。ＧＰＣＲ
の作用を媒介するシグナリング経路も、製薬産業にとって重要な多くの生物学的
過程に関与していることが示されている。そのようなシグナリング経路には、Ｇ
タンパク質、ｃＡＭＰ又はカルシウムのような二次メッセンジャー（Ｌｅｆｋｏ
ｗｉｔｚ，１９９１）、ホスホリパーゼＣ、アデニリルシクラーゼ、ＲＧＳタン
パク質、プロテインキナーゼＡ、及びプロテインキナーゼＣのようなエフェクタ
ータンパク質（Ｓｉｍｏｎら、１９９１）が含まれている。

【０００８】例えば、受容体と結合して、シグナル伝達経路の次の成分へとメッセージを受
け渡すＧタンパク質の活性化を引き起こすリガンドによって、ＧＰＣＲは活性化
され得る。そのような成分は、アデニリルシクラーゼであり得る。この酵素の活
性化のためには、関連Ｇタンパク質（そのファミリーが存在する）が、Ｇタンパ
ク質が不活性状態にある場合に結合しているＧＤＰを、ＧＴＰへと交換しなけれ
ばならない。ＧＤＰとＧＴＰとの交換は、リガンドのＧＰＣＲへの結合の後に起
こり得るが、調査中の受容体に依っては、基底のＧＤＰとＧＴＰとの交換も起こ
り得る。

【０００９】Ｇタンパク質と結合しているＧＴＰのＧＤＰへの変換は、加水分解によって起
こり、Ｇタンパク質自体によって触媒される。この加水分解の後、Ｇタンパク質
は不活性状態へと戻る。従って、Ｇタンパク質は、活性化された受容体から細胞
内シグナリング経路へのシグナルの転移を媒介のみならず、そのＧＴＰ結合Ｇタ
ンパク質を通る細胞内シグナリング経路を受容体が活性化することができる時間
の長さを調節することにより、付加的なレベルの調節を導入することもできる。

【００１０】一般に、これらの受容体のトポロジーは、およそ２０から３０アミノ酸からな
る膜貫通ドメインを７個含有しているようなものである。従って、これらの受容
体は、７ＴＭ受容体として知られる場合が多い。これらの７個のＴＭドメインは
、コンセンサスアミノ酸配列、及びカイト・ドゥーリトル（ＫｙｔｅＤｏｏｌ
ｉｔｔｌｅ）プログラムのような構造推定アルゴリズムによって画定され得る。
推測される膜貫通ドメインにおいては、疎水性ヘリックスが形成されており、そ
れらは細胞外及び細胞内のループを介して接続されている。ポリペプチドのＮ末
端は膜の外面に存在し、Ｃ末端は膜の内面に存在する。

【００１１】多数のさらなる特質が、ＧＰＣＲにおいてしばしば観察される。これらは、Ｎ
末端テールのグリコシル化を含む。最初の２つの細胞外ループには、それぞれシ
ステインが保存されており、それらはジスルフィド結合が形成されるよう修飾さ
れており、それによって安定化された機能的な三次構造がもたらされると考えら
れている。ＧＰＣＲに対して起こり得るその他の修飾には、リピド化（例えば、
パルミトイル化及びファルネシル化）並びにリン酸化が含まれ、それらは、Ｃ末
端テールに多い。大部分のＧＰＣＲは、Ｇタンパク質との相互作用及びシグナル
伝達に寄与すると考えられる領域、第３細胞内ループ内にリン酸化部位も有して
いる。ｃＡＭＰ依存性プロテインキナーゼ（ｃＡＰＫ）のような特異的な受容体
キナーゼ、又はβ−アドレナリン受容体のようないくつかのＧＰＣＲ内のＧＰＣ
Ｒキナーゼ（ＧＲＫ）クラスによる第３細胞内ループのリン酸化も、そのような
受容体の脱感作を媒介する。従って、ＧＰＣＲの特定の領域における特異的な変
異は、機能的な意義を有する場合がある。ＧＲＫは、トレオニン残基及びセリン
残基を標的として複数の部位でＧＰＣＲをリン酸化することが知られている。リ
ン酸化は、受容体を不活化するのみならず、β−アレスチンとして知られる付加
的な阻害性タンパク質による受容体を可能にする。この相互作用も、問題のＧＰ
ＣＲが活性化されていることの指標として使用され得る。

【００１２】ＧＰＣＲについては、まだ限られた三次元結晶構造データしか得られていない
が、ＧＰＣＲ上に存在するリガンド結合部位のいくつかの詳細が報告されている
。いくつかの受容体については、リガンド結合部位が、膜貫通ドメインのうちの
いくつかによって形成された親水性ポケットを含むと考えられている。膜貫通ド
メインにおいて、α−ヘリックス構造内のアミノ酸は、アミノ酸の親水性表面が
リガンド結合ポケットの中心へと内側を向くよう整列している。これが、仮定的
な極性リガンド結合部位をもたらす。第３膜貫通ドメインは、いくつかのＧＰＣ
Ｒにおいて、リガンド結合に関与していることが報告されている。特に、ＴＭ３
のアスパラギン酸、ＴＭ５のセリン、ＴＭ６のアスパラギン、並びにＴＭ６及び
／又はＴＭ７のフェニルアラニン又はチロシンが、リガンド結合に関与している
ことが示されている。

【００１３】細胞内のシグナリング経路の活性化に加えて、ＧＰＣＲは、イオンチャンネル
、トランスポーター、及び酵素のようなさらなる遺伝子ファミリーと、Ｇタンパ
ク質を介して共役することもできる。多くのＧＰＣＲが、哺乳動物系に存在し、
極めて特異的なパターンから極めて広範囲のパターンまで様々な分布パターンを
示す。このため、バイオインフォマティクスによる推定新規ＧＰＣＲの同定の後
の、新規ＧＰＣＲへの治療的用途の割り当ては、以前に報告されているＧＰＣＲ
のこの多様な機能及び分布のため、明白ではない。

【００１４】疾患状態を改変（修正、防止、又は改善）するために機能し得る新規ＧＰＣＲ
を同定し特徴決定する必要が、明白に存在する。そのような疾患は、多様であり
、これだけに限らないが、うつ病、精神分裂病、不安症、神経学的障害、肥満、
不眠症、嗜癖、神経変性、低血圧、高血圧、急性心不全、アテローム性血栓症、
アテローム性動脈硬化症、骨粗鬆症、及び慢性関節リウマチを含む。

【００１５】ＢＰＡＤは、うつ及び気分の高揚の組み合わせを周期的に示す精神医学的疾病
である。ＢＰＡＤは家族性であるため、ある程度の遺伝学的病因を有し、一生の
うちにＢＰＡＤを発症するリスクは０．８％であると推定されている。ブラック
ウッド（Ｂｌａｃｋｗｏｏｄ）ら（１９９６）は、包括的ゲノムの精査（１９３
マーカー）によって双極性家族における４ｐ１６との連関を示した。マーカーＤ
４Ｓ３９４は、４．１というオッズ比の対数（ＬＯＤ）スコアを与えた。４を超
えるＬＯＤスコアは、その所見が偶然に起こる確率がわずか１００００分の１で
あることを示しており、従って４．１というＬＯＤスコアは高度に有意である。
三点分析は、マーカーＤ４Ｓ４３１とＤ４Ｓ４０３との間の４．８というＬＯＤ
を与えた。さらなる１１家族はＬＯＤ４．１でＤ４Ｓ３９４との連関を示した。
これらのデータは、同一領域及び同一初期家族における単極性障害及び双極性障
害についての量的形質遺伝子座（ＱｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅＴｒａｉｔＬｏ
ｃｉ）（ＱＴＬ；即ち、連続的に可変性の測定可能な発現型を生じさせる遺伝学
的要因）を検出したビッシャー（Ｖｉｓｓｃｈｅｒ）ら（１９９９）によって強
化された。ここでは、ブラックウッドらにより同定された１０センチモルガン（
ｃＭ）の領域４ｐ領域において、５．９という連関ＬＯＤで、ＱＴＬ（形質−単
極性又は双極性の情動障害の２５％の原因となる）が観察された。その他のいく
つかのグループが、ＢＰＡＤ連鎖領域が４ｐに存在するとの所見を反復した（Ｅ
ｗａｌｄら、１９９８、Ｄｅｔｅｒａ−Ｗａｄｌｅｉｇｈら、１９９７；Ａｓｈ
ｅｒｓｏｎら、１９９８；Ｋｅｎｎｅｄｙ＆Ｍａｃｃｉａｒｄｉ１９９８）。
ギンス（Ｇｉｎｎｓ）ら（１９９６）は、アマン派集団において、４ｐ上の同一
遺伝子座に存在する防御効果又は「健康」遺伝子を見い出した。その他のいくつ
かの遺伝子座が、ＢＰＡＤに関する陽性ＬＯＤスコアを与えたが、４ｐ１６所見
と同一の有意性又は反復を有するものは存在しない。従って、ＢＰＡＤ病遺伝子
座が４ｐ１６に存在するという遺伝連関の証拠は強力である。

【００１６】本発明は、ＯＲＧ３と名付けられた、前記の４ｐ１６連関領域に位置すること
が見出された、脳において発現している遺伝子／タンパク質を提供する。遺伝子
の分析は、それがＧＰＣＲであるとの証拠を提供している。従って、その遺伝子
は、ＯＲＧ３と特異的に反応する化合物を選択するため、従来の発現系において
使用され得る。次いで、これらの化合物は、ＢＰＡＤを治療するために使用され
得る。

【００１７】本発明は、ＯＲＧ３、特にＯＲＧ３ポリペプチド、ＯＲＧ３ポリヌクレオチド
、それらの作製のための組換え材料及び方法に関する。さらに、本発明は、その
ようなポリペプチド及びポリヌクレオチドが、精神医学的疾患、特に双極性及び
単極性の疾患、精神分裂病、及び不安症のような疾患の処置のための、本発明に
おける活性を有するアゴニスト又はアンタゴニストのような化合物を同定するた
め、使用され得る方法に関する。本発明における活性を有するアゴニスト又はア
ンタゴニストの使用は、ＯＲＧ３及び関連経路の不均衡を伴う疾患を修正するた
めに使用され得る。特に、本発明は、ＣＮＳ疾患、特に好ましくは双極性うつ病
及び情動障害を伴う、ＯＲＧ３遺伝子の修飾又は発現を同定するための診断アッ
セイに関する。

【００１８】配列番号２に示されたＯＲＧ３の完全ｃＤＮＡ配列を翻訳したところ、配列番
号３のアミノ酸配列が得られ、次いでそれを既知のタンパク質配列と比較した。
最も近いマッチは、ｇ６６４４３２８ラットオーファンＧタンパク質共役型受容
体ＧＰＲ２６であった。これは、アミノ酸レベルでわずか５０％の相同性を示し
、従って、これらは実際に異なる受容体であるが、同一の受容体サブファミリー
に属しているであろうことが示された。

【００１９】ＯＲＧ３は、特許出願第ＷＯ９９３７６７９号からのヒト配列ｆｌｈ２８８２
との高度の相同性も有している。その他のヒト配列との近いマッチは存在しなか
った。ＯＲＧ３のゲノム配列は、配列番号１に提供されている。ＯＲＧ３は、オ
ーファン受容体ＧＰＲ２６（Ｌｅｅら、２０００）を含み、より遠縁のＳＲＥＢ
１（特許ＷＯ９９４６３７８＿Ａ１）及びＳＲＥＢ２（特許ＷＯ９９４６３７８
−Ａ１）を含む、ＧＰＣＲ受容体の新規受容体サブファミリーのメンバーである
。ＯＲＧ３は、脳において主に発現されており、他の組織においては、検出され
るとしても、ほとんど検出されない。

【００２０】本発明のゲノムポリヌクレオチドは、ヒトゲノムＤＮＡライブラリーから、標
準的なクローニング技術及びスクリーニング技術を使用して入手し得るが、配列
番号１に記載されたような本発明の非コーディング領域を欠く全長ｃＤＮＡ産物
は、脳ｃＤＮＡライブラリーのようなｃＤＮＡライブラリーからのみ入手し得る
。本発明において詳述されたポリヌクレオチドは、ゲノムＤＮＡから作製されて
もよいし、又は周知の市販の技術を使用して合成されてもよい。

【００２１】ＧＰＣＲは、キーとなる配列モチーフを有しているため、オーファンＧＰＣＲ
及び非オーファンＧＰＣＲの７個の膜貫通ドメインを整列化することにより、系
統樹を作出することが可能である。この樹は、よく特徴決定されたＧＰＣＲの多
くを、生体アミン、ケモカイン、プリン作動性、嗅覚、アンジオテンシン、ニュ
ーロペプチド、オピオイド等のファミリーへと分類する。この樹上に新規オーフ
ァンＧＰＣＲを位置付けることにより、このＧＰＣＲが属しているサブファミリ
ー及び可能性のある生化学的機能に関する推定を行うことが可能となる。ＯＲＧ
３は、ＧＰＲ２６、ＳＲＥＢ１、及びＳＲＥＢ２を含むファミリーに含まれる。
これらのＧＰＣＲは、脳において主に発現されており、従って、ＯＲＧ３はＣＮ
Ｓ障害との関連性を有していよう。

【００２２】いずれのＧＰＣＲＯＲＧ３が最も近縁であるかを決定するため、そのアミノ
酸配列の系統発生学的分析を実施した。膜貫通領域を、疎水性プロット及び／又
は既知の膜貫通領域との整列化によって同定した。鎖状に連結させた膜貫通領域
を整列化し（ＨＭＭＡｌｉｇｎ）、ＰｒｏｔＰａｒｓによって樹を作製し、Ｔｒ
ｅｅＶｉｅｗで検討した。この決定から、ＧＰＲ２６を含み、そしてより遠縁の
ＳＲＥＢ１及びＳＲＥＢ２を含む受容体ファミリーにＯＲＧ３が含まれていると
いう結論に至った。

【００２３】本発明の配列は、診断法を実施するためのＤＮＡ増幅反応において使用するた
めの、又はＣＮＳ障害の発生に寄与する可能性のあるさらなる近隣遺伝子を同定
するためのプライマー及びプローブを導出するため、使用され得る。

【００２４】遺伝子のヌクレオチド配列が、種内及び種間で変動し得ることは当分野におい
て知られている。他の種に由来するＯＲＧ３遺伝子は、上記のプローブ及びプラ
イマーを使用して容易に同定され得る。従って、本発明は、配列番号１に示され
たＯＲＧ３配列の少なくとも一部と、好ましくは高ストリンジェンシー条件下で
、ハイブリダイズすることができることを特徴とする機能的等価物も含む。

【００２５】２個の核酸断片が、例えばマニアティス（Ｍａｎｉａｔｉｓ）らの３２０から
３２８頁及び３８２から３８９頁に記載されているような典型的なハイブリダイ
ゼーション条件及び洗浄条件の下で、又は最高で約２５から３０％の塩基対ミス
マッチが可能となるようストリンジェンシーを低下させた洗浄条件、例えば２×
ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ、室温、２回、各３０分、次いで２×ＳＳＣ、０．１％
ＳＤＳ、３７℃、１回、３０分；次いで、２×ＳＳＣ、室温、２回、各１０分と
いう条件を使用して、相互にハイブリダイズすることができる場合、それらは、
ハイブリダイズ可能な配列を有していると見なされる。好ましくは、相同核酸鎖
は、１５から２５％、より好ましくは５から１５％の塩基対ミスマッチを含有す
る。これらの相同度は、当分野において周知なように、遺伝子ライブラリー又は
その他の遺伝学的材料源からのクローンの同定にとって適切なストリンジェンシ
ーの洗浄条件を使用することにより、選択され得る。

【００２６】さらに、コドン可変性に適応するよう、本発明は、本明細書において開示され
た配列と同一のアミノ酸配列をコードする配列も含む。発現されたタンパク質の
個々のドメインをコードするコーディング配列の一部、並びにその対立遺伝子変
動及び種変動も、本発明の一部である。遺伝子は、改変された５’又は３’ｍＲ
ＮＡをもたらすか、又は付加的なエクソン配列の包含をもたらすことができるス
プライシング異型を含む、異なるアイソフォームを、ある組織において発現する
場合がある。又は、メッセンジャーは、その対応物と比較してより少ないエクソ
ンを有している場合がある。これらの配列及びこれらの配列によってコードされ
たタンパク質も、全て、同一又は類似の機能を果たすことが予想され、やはり本
発明の一部を形成する。

【００２７】本明細書において提供された配列情報は、誤って同定された塩基の包含を要求
するような厳密な解釈をされるべきではない。本明細書において開示された特定
の配列は、さらなる配列分析を容易に受けることができるさらなる遺伝子を単離
し、それにより配列決定のエラーを同定するために容易に使用され得る。従って
、一つの面において、本発明は、精神医学的疾患、特に双極性情動障害において
破壊されている新規遺伝子をコードする単離されたポリヌクレオチドを提供する
。

【００２８】本発明に係るＤＮＡは、ｃＤＮＡより入手され得る。又は、コーディング配列
は、ゲノムＤＮＡであってもよいし、又はＤＮＡ合成技術を使用して調製されて
もよい。ポリヌクレオチドは、ＲＮＡの形態であってもよい。ポリヌクレオチド
は、一本鎖形態であってもよいし、又は二本鎖形態であってもよい。一本鎖は、
コーディング鎖であってもよいし、又は非コーディング（アンチセンス）鎖であ
ってもよい。

【００２９】本発明は、さらに、少なくとも８０％、好ましくは９０％、より好ましくは９
５％、さらに好ましくは９８％の配列番号１との同一性を有するポリヌクレオチ
ドに関する。そのようなポリヌクレオチドは、天然の成熟タンパク質と同一の生
物学的機能又は活性を保持しているポリペプチドをコードする。

【００３０】２つの配列間の同一率（％）は、ＤＮＡＭＡＮ（ＬｙｎｎｏｎＢｉｏｓｏｆ
ｔ、バージョン３．２）のようなプログラムによって決定され得る。このプログ
ラムを使用し、スミス（Ｓｍｉｔｈ）及びウォーターマン（Ｗａｔｅｒｍａｎ）
（１９８１）の最適整列化アルゴリズムを使用して、２つの配列を整列させるこ
とができる。２つの配列の整列化の後、２配列間の同一ヌクレオチドの数を、整
列化された配列の長さから全てのギャップの長さを差し引いたもので割ることに
より、同一率（％）が計算され得る。

【００３１】本発明に係るＤＮＡは、十分な量の、かつ本質的に純粋な形態の、本発明に係
る新規遺伝子のインビボ又はインビトロの発現に極めて有用であろう。

【００３２】本発明のもう一つの面において、前記のＤＮＡ分子によってコードされたアミ
ノ酸配列を含むポリペプチドが提供される。

【００３３】好ましくは、本発明に係るポリペプチドは、配列番号３に示されるようなアミ
ノ酸配列の少なくとも一部を含む。

【００３４】配列の変動を有するが、依然として機能的特徴を維持している、配列番号３又
はその一部と相同なポリペプチドである機能的等価物も、本発明に含まれる。

【００３５】配列内に起こり得る変動は、配列全体の（１個以上の）アミノ酸の違い、又は
該配列内の（１個以上の）アミノ酸の欠失、置換、挿入、逆位、又は付加によっ
て例証され得る。生物学的活性及び免疫学的活性を本質的に改変させないと予想
されるアミノ酸置換は、記載されている。関連アミノ酸間の置換、又は進化中に
高頻度に起こっている置換は、特に、Ｓｅｒ／Ａｌａ、Ｓｅｒ／Ｇｌｙ、Ａｓｐ
／Ｇｌｙ、Ａｓｐ／Ａｓｎ、Ｉｌｅ／Ｖａｌである（Ｄａｙｈｏｆ，Ｍ．Ｄ．，
Ａｔｌａｓｏｆｐｒｏｔｅｉｎｓｅｑｕｅｎｃｅａｎｄｓｔｒｕｃｔ
ｕｒｅ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｒｅｓ．Ｆｏｕｎｄ．，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ
Ｄ．Ｃ．，１９７８，第５巻，ｓｕｐｐｌ．３参照）。この情報に基づき、リ
ップマン（Ｌｉｐｍａｎ）及びピアソン（Ｐｅａｒｓｏｎ）は、迅速かつ高感度
のタンパク質比較（Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９８５，２２７，１４３５−１４４１）
及び相同ポリペプチド間の機能的類似性の決定のための方法を開発した。そのよ
うな異型をコードするポリヌクレオチドも、本発明の一部であることは明らかで
あろう。

【００３６】本発明に係るポリペプチドは、配列番号３を含むポリペプチドのみならず、そ
れらのアイソフォーム、即ち７０％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％
の類似性を有するポリペプチドも含む。生物学的効果を与えることができるその
ようなポリペプチドの一部も、含まれる。特に、依然としてリガンドと結合する
部分が、発明の一部を形成する。そのような部分は、それ自体機能性、例えば可
溶型であってもよいし、又はキメラタンパク質を得るため、既知のバイオテクノ
ロジー的手段もしくは化学合成によって他のポリペプチドと連結させられてもよ
い。そのようなタンパク質は、ＯＲＧ３遺伝子の異常な発現を有する個体におい
て、遺伝産物の代わりとなり得るため、治療剤として有用であろう。

【００３７】遺伝子の配列は、コードされたタンパク質の適切な宿主細胞における発現のた
めのベクター分子の調製においても使用され得る。極めて多様な宿主細胞とクロ
ーニング媒体との組み合わせが、本発明のＯＲＧ３遺伝子をコードする核酸配列
又はその一部のクローニングにおいて有用に利用され得る。例えば、有用なクロ
ーニング媒体には、染色体ＤＮＡ配列、非染色体ＤＮＡ配列、及び合成ＤＮＡ配
列、例えば様々な既知の細菌プラスミド、並びにプラスミドとファージ又はウィ
ルスＤＮＡとの組み合わせに由来する宿主域がより広いプラスミド及びベクター
が含まれ得る。

【００３８】本発明の遺伝子又はそのリガンド結合ドメインの発現において使用するための
媒体は、リガンド結合ドメインをコードする核酸配列と機能的に連結した調節配
列をさらに含むであろう。そのような調節配列には、一般に、プロモーター配列
、並びに発現レベルを制御及び／又は増強する配列が含まれる。当然、調節配列
及びその他の配列は、選択された宿主細胞に依って変動し得る。

【００３９】適切な発現ベクターは、例えば、細菌又は酵母のプラスミド、プラスミドとフ
ァージ又はウィルスＤＮＡとの組み合わせに由来する宿主域がより広いプラスミ
ド及びベクターである。染色体ＤＮＡに由来するベクターも含まれ得る。さらに
、複製開始点及び／又は優性選択マーカーが、本発明に係るベクターの中に存在
し得る。本発明に係るベクターは、宿主細胞の形質転換に適している。

【００４０】本発明のＤＮＡを含む組換え発現ベクター、及び該ＤＮＡ又は該発現ベクター
で形質転換された細胞も、本発明の一部を形成する。

【００４１】本発明に係る適当な宿主細胞は、細菌宿主細胞、酵母及びその他の真菌、植物
、又は動物の宿主細胞、例えばチャイニーズハムスター卵巣細胞又はサル細胞で
ある。従って、本発明に係るＤＮＡ又は発現ベクターを含む宿主細胞も、本発明
の範囲内である。操作された宿主細胞は、例えば適切な選択、増幅、又は転写誘
導のため修飾され得る従来の栄養培地の中で培養され得る。温度、ｐＨ、栄養素
等のような培養条件は、当業者に周知である。

【００４２】本発明に係るＤＮＡ又はベクターの調製、及び該ＤＮＡ又はベクターによる宿
主細胞の形質転換又はトランスフェクションのための技術は、標準的であり、当
分野において周知であり、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
Ｃｌｏｎｉｎｇ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ．第２版，Ｃｏｌｄ
ＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙ，ＣｏｌｄＳｐｒｉｎ
ｇＨａｒｂｏｒ，ＮＹ，１９８９参照を参照のこと。

【００４３】本発明に係るタンパク質は、硫安沈殿、抽出、疎水性相互作用クロマトグラフ
ィー、陽イオンもしくは陰イオン交換クロマトグラフィー、又はアフィニティク
ロマトグラフィー、及び高速液体クロマトグラフィーのようなクロマトグラフィ
ーを含む一般的な生化学的精製法により、組換え細胞培養物から回収され精製さ
れ得る。必要であれば、タンパク質再折り畳み工程も含まれ得る。

【００４４】本発明に係るＯＲＧ３遺伝子産物は、新規なリガンド又はそのアナログのイン
ビボ又はインビトロの同定のため使用され得る。このためには、本発明に係るＯ
ＲＧ３遺伝子産物を発現している、本発明に係るＤＮＡ又は本発明に係るＤＮＡ
を含む組換え発現ベクターで形質転換された細胞を用いて、結合実験が実施され
得る。

【００４５】又は、本発明に係るＯＲＧ３遺伝子産物及びそのリガンド結合ドメインは、Ｏ
ＲＧ３遺伝子産物に対する機能性リガンド又はアナログの同定のためのアッセイ
においても使用され得る。

【００４６】発現された遺伝子産物との結合を決定する方法、並びに遺伝子産物の生物学的
活性を決定するためインビトロ及びインビボのアッセイは、周知である。一般に
、発現された遺伝子産物が、試験される化合物と接触させられ、結合、機能的応
答の刺激又は阻害が測定される。

【００４７】従って、本発明は、ＯＲＧ３遺伝子産物に対するリガンドを同定するための方
法を提供する。該方法は、ａ）本発明に係るポリヌクレオチドを適当な宿主細胞へ導入する工程、ｂ）ＤＮＡ配列の発現を可能にする条件の下で細胞を培養する工程、ｃ）場合により、発現産物を単離する工程、ｄ）発現産物（又は、工程ｂ）の宿主細胞）を、該工程ａ）のＤＮＡによりコ
ードされたタンパク質と結合する可能性のある潜在的リガンドと接触させる工程
、ｅ）発現されたタンパク質とリガンドが結合したか否かを確定する工程、ｆ）場合により、リガンドを単離し同定する工程を含む。

【００４８】発現されたタンパク質へのリガンドの結合を検出する好ましい手段として、シ
グナル伝達能が測定されてもよい。

【００４９】従って、本発明は、ＣＮＳ障害と関係のある疾患の防止及び／又は処置のため
の治療剤をスクリーニングするための迅速かつ経済的な方法を提供する。その方
法は、多数の潜在的リガンドのハイスループットスクリーニングのための使用に
特に適している。

【００５０】ＯＲＧ３遺伝子産物の機能を活性化又は阻害する化合物は、本発明のポリペプ
チドを活性化又は阻害するために、治療的処置において利用され得る。

【００５１】本発明に係るポリペプチド分子に対する抗体、特にモノクローナル抗体も、発
明の範囲内である。そのような抗体は、治療的に、ＯＲＧ３遺伝子産物の機能を
阻害するため使用されてもよいし、診断的に、ＯＲＧ３遺伝子産物を検出するた
めに使用されてもよい。

【００５２】本発明は、ＯＲＧ３遺伝子をコードする核酸配列の変異と関係のある精神医学
的異常又は精神医学的障害に対する感受性の検出のための診断アッセイの一部と
しての、ＯＲＧ３遺伝子産物の使用にさらに関する。そのような変異は、例えば
ＰＣＲ（Ｓａｉｋｉｅｔｅｔ．，１９８６）を使用することにより検出され
得る。ＲＮＡの相対レベルが、例えばハイブリダイゼーション又は定量的ＰＣＲ
技術を使用して決定されてもよい。ＯＲＧ３遺伝子産物自体の存在及びレベルは
、遺伝子産物に対する特異的抗体を使用した、ラジオイムノアッセイ、ウェスタ
ンブロッティング、及びＥＬＩＳＡのような免疫学的技術によってアッセイされ
得る。ＲＮＡ及びタンパク質のレベルを測定するためのそのような技術は、当業
者に周知である。

【００５３】個々の患者におけるＯＲＧ３遺伝子産物の発現レベルの決定は、治療プロトコ
ルの精密な調整をもたらし得る。

【００５４】また、ＯＲＧ３遺伝子の発現が改変されているか又は消失しているトランスジ
ェニック動物が調製され得る。精神医学的疾患のインビボ動物モデルとしての、
そのような動物の使用が含まれる。

【００５５】実施例１全長配列の同定ＥＭＢＬデータベース・リリース６０内のヒトゲノムプロジェクトハイスルー
プットゲノムクローンに対する隠れマルコフモデリングによって、ＢＡＣクロー
ンＡＣ００７１０４上のＧＰＣＲタンパク質断片が推定された。全長である可能
性の高い受容体タンパク質配列が決定されるまで、この配列を、Ｎ末端方向及び
Ｃ末端方向へ伸長させた。推定されるｃＤＮＡ及びイントロン−エクソン境界を
、推定タンパク質配列をゲノムＤＮＡと比較することにより同定した。同定の時
点で、占有データベース又は公共データベースから新規タンパク質に関する発現
情報は得られなかった。

【００５６】ヒト脳内の完全ＯＲＧ３ｃＤＮＡの存在を、ＡＴＧ翻訳開始部位及びＴＧＡ
終止コドンを包含する推定配列（配列番号２）に対して設計されたプライマーを
使用したＰＣＲによって確認した。各ＰＣＲ反応物は、１×ＰＣＲ緩衝液（Ｅｘ
ｐａｎｄＨｉｇｈＦｉｄｅｌｉｔｙ緩衝液）、１．５ｍＭＭｇＣｌ_２、５
μｌの全ヒト脳Ｍａｒａｔｈｏｎ−ＲｅａｄｙｃＤＮＡ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）、
１μＭのプライマー１及び２（ＯＲＧ３順方向プライマー５’−ＣＣＡＣＣＡ
ＴＧＧＧＣＣＣＣＧＧＣＧＡＧＧＣＧＣＴＧＣＴ３’、及びＯ
ＲＧ３逆方向プライマー５’−ＴＣＡＧＴＧＴＧＴＣＴＧＣＴＧＣＡ
ＧＧＣＡＧＧＡＡＴＣ３’）、４００μＭｄＡＴＰ、４００μＭｄ
ＣＴＰ、４００μＭｄＧＴＰ、４００μＭｄＴＴＰ、１０％ＤＭＳＯ、及び
２．６２５単位のＥｘｐａｎｄＨｉｇｈＦｉｄｅｌｉｔｙＰＣＲ酵素混合
物を全容量５０μｌで含有していた。反応は、９５℃５分、そして９５℃１分、
５８℃１分３０秒、７２℃２分を４０サイクル、その後７２℃１０分の伸長とい
う条件を使用して、ＭＪＲｅｓｅａｒｃｈＰＴＣ−２００サーマルサイクラ
ーにおいて実施された。およそ１．１ＫｂのＰＣＲ産物を同定し、精製し、ＡＢ
ＩＰｒｉｓｍ３１０Ｇｅｎｅｔｉｃａｎａｌｙｓｅｒ（ＰＥＢｉｏｓ
ｙｓｔｅｍｓ）を使用して配列決定した。配列決定反応は、ＡＢＩＰｒｉｓｍ
ＢｉｇＤｙｅＴｅｒｍｉｎａｔｏｒｃｙｃｌｅｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ
Ｒｅａｄｙ反応キット（ＰＥＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を使用して実施した。各
配列決定反応物は、３００ｎｇのｃＤＮＡクローン、３．２ｐｍｏｌの配列決定
用プライマー、及びＰＥＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓＴｅｒｍｉｎａｔｏｒＲｅ
ａｄｙ反応混合物を最終容量２０μｌで含有していた。ＰＥＢｉｏｓｙｓｔｅ
ｍｓＧｅｎｅＡｍｐＰＣＲシステム９７００において、９６℃１０秒、５０
℃５秒、６０℃４分を２５サイクルという反応を実施した。サイクリングの後、
２μｌの３ＭＮａＯＡｃ（ｐＨ４．６）及び５０μｌの９５％エタノールを添
加することにより伸長産物を沈殿させた。産物を、ＲＴで１５分間沈殿させ、１
４０００ｒｐｍで２０分間の遠心単離により収集した。ペレットを７０％エタノ
ールで２回洗浄した後、配列決定のため、２０ｕｌのＴｅｍｐｌａｔｅｓｕｐ
ｐｒｅｓｓｉｏｎｒｅａｇｅｎｔ（ＰＥＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）に再懸濁さ
せた。その配列クローンは、完全ヒトＯＲＧ３オープンリーディングフレームを
コードしていた。その配列を、配列番号２に示す。

【００５７】全長ＯＲＧ３配列は、ｃＤＮＡが、３６３アミノ酸のタンパク質（配列番号３
）をコードする、１０９２ｂｐのオープンリーディングフレーム（配列番号２）
からなることを示している。

【００５８】実施例２ＰＣＲによるＯＲＧ３の組織分布の分析さらに、多様なヒト組織に由来する材料における、配列番号１を含むＧタンパ
ク質共役型受容体の発現を分析するため、推定ＯＲＧ３ｃＤＮＡ配列に対して
設計されたプライマー（ＯＲＧ３順方向プライマー５’−ＣＣＡＣＣＡＴＧ
ＧＧＣＣＣＣＧＧＣＧＡＧＧＣＧＣＴＧＣＴ３’（１〜２３）、
及びＯＲＧ３逆方向プライマー５’−ＴＣＡＧＴＧＴＧＴＣＴＧＣＴＧ
ＣＡＧＧＣＡＧＧＡＡＴＣ（１０９２〜１０６５）３’）を使用したＰ
ＣＲを実施した。各ＰＣＲは、１×ＰＣＲ緩衝液、１．５ｍＭ塩化マグネシウム
、２００μＭのｄＮＴＰ混合物、１μＭの各プライマー、１０％ＤＭＳＯ、２．
５単位のＥｘｐａｎｄポリメラーゼ（Ｒｏｃｈｅ）、及び５μｌのヒトｍａｒａ
ｔｈｏｎ−ｒｅａｄｙｃＤＮＡ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）を全容量５０μｌで含有
していた。ＯＲＧ３発現に関して調査されたヒトｃＤＮＡは、心臓、腎臓、骨格
筋、脾臓、卵巣、肺、肝臓、胸腺、精巣、小腸、及び脳（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）で
あった。ヒトのゲノムＤＮＡ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を用いた陽性対照反応もセット
アップした。ハウスキーピング遺伝子Ｇ３ＰＤＨのＰＣＲ増幅を、Ｃｌｏｎｔｅ
ｃｈから購入した配列特異的プライマーを使用して前記と同様に実施し、これを
、各ｃＤＮＡ鋳型についての陽性対照として使用した。反応は、９５℃５分、そ
して９５℃１分、５８℃１分３０秒、７２℃２分を４０サイクル、その後７２℃
１０分の伸長という条件を使用して、ＭＪＲｅｓｅａｒｃｈＰＴＣ−２００
サーマルサイクラーにおいて実施した。ＰＣＲ産物を、臭化エチジウム（１０ｍ
ｇ／ｍｌ）を含有している１％アガロースゲル上で分離し、ＵＶ光の下で可視化
した。４０サイクルの増幅の後、全長ＯＲＧ３ｃＤＮＡに相当する１０９２ｂ
ｐの希薄なバンドが脳においてのみ観察され、肝臓には極めて希薄なバンドが存
在した。残りの末梢組織においては、発現は、事実上検出不可能であった。脳に
おいて検出されたバンドは、このオーファンＧＰＣＲに関して観察された低レベ
ルの発現パターンと一致している。

【００５９】

【表１】

【配列表】

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ａ６１Ｐ 9/10 １０１Ａ６１Ｐ 9/12 9/12 19/02 19/02 19/10 19/10 25/00 25/00 25/18 25/18 25/20 25/20 25/22 25/22 25/24 25/24 29/00 １０１ 29/00 １０１Ｃ０７Ｋ 14/705 Ｃ０７Ｋ 14/705 16/28 16/28 Ｃ１２Ｎ 1/15 Ｃ１２Ｎ 1/15 1/19 1/19 1/21 1/21 Ｃ１２Ｑ 1/02 5/10 1/68 ＡＣ１２Ｑ 1/02 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ 1/68 5/00 Ａ (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ，ＴＲ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＭＺ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＧ，ＡＬ，ＡＵ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＺ，ＣＡ，ＣＮ，ＣＯ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＭ，ＤＺ，ＥＣ，ＥＥ，ＧＤ，ＧＥ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＰ，ＫＲ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＴ，ＬＶ，ＭＡ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＸ，ＭＺ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ (72)発明者センプル，コリン・アンドリユー・マクリーンイギリス国、エデインバラ・イー・エイチ・12・８・エイ・エイチ、フオレスター・ロード・81 Ｆターム(参考） 4B024 AA01 AA11 BA63 CA04 DA02 DA05 DA06 DA11 DA12 EA04 GA11 HA12 HA17 4B063 QA19 QA20 QQ08 QQ43 QQ53 QR08 QR42 QR56 QS25 QS34 QX02 4B065 AA01X AA57X AA72X AA90X AB01 BA02 CA24 CA44 CA46 4C084 AA07 AA13 AA17 BA22 CA53 CA56 CA59 NA14 ZA012 ZA052 ZA122 ZA182 ZA362 ZA422 ZA432 ZA452 ZA702 ZA962 ZA972 ZB152 ZC782 4H045 AA10 AA11 AA30 BA10 CA45 DA50 DA75 EA21 EA50 FA72 FA74

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】配列番号３のアミノ酸配列又はそのアイソフォームをコード
する実質的に純粋なポリヌクレオチド。
【請求項２】配列番号２に記載の配列を含む、請求項１記載のポリヌクレ
オチド。
【請求項３】請求項１もしくは２に記載のポリヌクレオチド又はそれらの
断片を含む組換え発現ベクター。
【請求項４】配列番号３に記載のポリペプチド又はそのアイソフォーム。
【請求項５】請求項４に記載のポリペプチドの少なくとも一部をコードす
るポリヌクレオチドで形質転換された細胞系。
【請求項６】請求項１もしくは２に記載のポリヌクレオチドもしくはそれ
らの断片、又は請求項３のベクターで形質転換された細胞系。
【請求項７】哺乳動物由来の請求項６に記載の細胞系。
【請求項８】ＯＲＧ３遺伝子産物を発現し、ＯＲＧ３遺伝子が、配列番号
１及び／又は配列番号２に記載のポリヌクレオチド配列とハイブリダイズ可能な
ＤＮＡストレッチと定義される、請求項６又は７記載の細胞系。
【請求項９】精神医学的障害のインビトロ診断における、ＯＲＧ３遺伝子
とハイブリダイズ可能なポリヌクレオチドの使用であって、ＯＲＧ３遺伝子が、
配列番号１及び／又は配列番号２に記載のポリヌクレオチド配列とハイブリダイ
ズ可能なＤＮＡストレッチと定義される、上記使用。
【請求項１０】精神医学的障害のインビトロ診断における、請求項６から
８に記載の細胞系の使用。
【請求項１１】精神医学的障害のインビトロ診断における配列番号２を含
むポリヌクレオチド又はその断片によりコードされたポリペプチドの使用。
【請求項１２】新規薬物の同定のためのスクリーニングアッセイにおける
、請求項１もしくは２に記載のポリヌクレオチドもしくはそれらの断片、又は請
求項３の発現ベクターの使用。
【請求項１３】精神医学的障害の処置のための薬物の同定のためのスクリ
ーニングアッセイにおける、請求項４に記載のポリペプチド又はそのアナログも
しくは断片の使用。
【請求項１４】精神医学的障害の処置のための新規薬物の同定のためのス
クリーニングアッセイにおける、請求項６から８に記載の細胞系の使用。
【請求項１５】医薬品として使用するための、配列番号１を含むポリヌク
レオチド又はその断片。
【請求項１６】医薬品として使用するための、配列番号２を含むポリヌク
レオチド又はその断片によりコードされたポリペプチド。
【請求項１７】精神医学的障害の処置のための医薬品として使用するため
の、配列番号２を含むポリヌクレオチド又はその断片。
【請求項１８】精神医学的障害の処置のための医薬品として使用するため
の、配列番号２を含むポリヌクレオチド又はその断片によりコードされたポリペ
プチド。
【請求項１９】精神医学的障害の処置のための医薬品の調製における、配
列番号２を含むポリヌクレオチド又はその断片の使用。
【請求項２０】精神医学的障害の処置のための医薬品の調製における、配
列番号２を含むポリヌクレオチド又はその断片によりコードされたポリペプチド
の使用。
【請求項２１】請求項４記載のポリペプチドに対する抗体。
【請求項２２】ａ）ＯＲＧ３遺伝子のヌクレオチド配列とハイブリダイズ
することができるオリゴヌクレオチドプライマーセットを準備する工程、ｂ）対象から核酸を含有する試料を得る工程、ｃ）核酸増幅法を使用して、工程１のプライマーセットにより挟まれた領域を増
幅する工程、ｅ）増幅された配列を正常対照対象の配列と比較することにより、ｄ）増幅された領域が変異を含有しているか否かを検出する工程を含む、ある特
定の対象におけるＯＲＧ３遺伝子の変異の検出のための方法であって、ＯＲＧ３
遺伝子が、配列番号１に記載のポリヌクレオチド配列とハイブリダイズ可能なＤ
ＮＡストレッチと定義される、上記方法。
【請求項２３】ａ）請求項１もしくは２に記載のポリヌクレオチド、又は
請求項３に記載の発現ベクター、又はそれらの断片を適当な宿主細胞へ導入する
工程、ｂ）ＤＮＡ配列の発現を可能にする条件の下で細胞を培養する工程、ｃ）場合により、発現産物を単離する工程、ｄ）発現産物（又は、工程ｂ）の宿主細胞）を、該工程ａ）のＤＮＡによりコ
ードされたタンパク質と結合する可能性のある潜在的リガンドと接触させる工程
、ｅ）発現されたタンパク質とリガンドが結合したか否かを確定する工程、ｆ）場合により、リガンドを単離し同定する工程を含む、ＯＲＧ３遺伝子産物
に対するリガンドを同定するための方法。
【請求項２４】ＣＮＳ障害、特にＢＰＡＤの処置において有用な、請求項
２３に記載の方法により選択された化合物。
【請求項２５】ＣＮＳ障害、特にＢＰＡＤの処置において有用な医薬品の
製造のための、請求項２４に記載の化合物の使用。