JP2003533488A

JP2003533488A - 免疫抑制を達成するための組成物および方法

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Publication number: JP2003533488A
Application number: JP2001583797A
Authority: JP
Inventors: ビー．ストローム、テリー; マスリンスキー、ブウォジミエシ; シャオチェン、シン; スキム、ヨン; フェラーリラクラツ、シルヴィー
Original assignee: ベス・イスラエル・ディーコニス・メディカル・センター・インコーポレーテッド
Priority date: 2000-05-12
Filing date: 2001-05-14
Publication date: 2003-11-11
Also published as: WO2001087330A3; AU2001261585C1; US20040219148A1; AU6158501A; AU2001261585B2; US6797263B2; CN1441675A; RU2270691C2; CA2408691A1; US20020128436A1; EP1284747A2; US7347995B2; WO2001087330A2; BR0110779A

Abstract

(57)【要約】インターロイキン−１５受容体（ＩＬ−１５Ｒ）を標的とする第１作用物質と、Ｔ細胞と抗原呈示細胞（ＡＰＣ）との間で伝達される同時刺激シグナルを阻害する第２作用物質とを含む組成物。この組成物は、免疫疾患、特に自己免疫疾患の診断および治療に用いられ得る。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】（発明の分野）本発明の分野は免疫抑制である。（発明の背景）有効な免疫応答は、抗原またはマイトジェンがＴ細胞の活性化を誘起したとき
に始まる。Ｔ細胞活性化プロセスにおいては、多くの細胞変化が生じるが、そう
した変化には、サイトカインおよびサイトカイン受容体の発現が含まれる。免疫
応答に関与するサイトカインの１種は、インターロイキン−１５（ＩＬ−１５）
であり、これは、ｉｎｖｉｔｒｏで、Ｂ細胞、Ｔ細胞、ナチュラルキラー（Ｎ
Ｋ）細胞およびリンパ球活性化キラー（ＬＡＫ）細胞の増殖、分化を刺激するＴ
細胞増殖因子である。これらの細胞型の増殖はｉｎｖｉｖｏでは免疫応答を促
進する。

【０００２】患者は、多くの状況、例えば、臓器移植または免疫疾患、特に自己免疫疾患の
場合に、免疫応答を抑制することによって利益を得る。他の状況、例えば、選ば
れた免疫細胞が悪性化または自己攻撃性化したときに、それらの細胞を効果的に
破壊することは有益である。

【０００３】（発明の要旨）本発明は、いくつかの新規な免疫応答抑制法の発見に基づいている。いずれの
方法においても、免疫応答の抑制は、インタロイキン−１５受容体（ＩＬ−１５
Ｒ）を標的とする第１作用物質と、抗原呈示細胞（ＡＰＣ）からＴ細胞に通常伝
達される同時刺激シグナルをブロックする第２作用物質とを投与することにより
達成される。したがって、本発明は、ＩＬ−１５Ｒを標的とする１種以上の作用
物質と、同時刺激シグナルをブロックする１種以上の作用物質とを投与すること
により、免疫抑制により利益を得るであろう患者（例えば、移植片を受けたかま
たは移植片を受ける予定の患者、もしくは免疫疾患、特に自己免疫疾患を有する
患者）を治療する方法をその特徴とする。さらに、本発明は、上述の第１作用物
質および第２作用物質をそれぞれ１種以上含む治療組成物をその特徴とする。そ
のような組成物は必然的に２種以上の作用物質を含有するが、本発明の方法は、
それらの作用物質が必ず同時に投与される方法には限定されない。本発明の作用
物質およびそれらの使用方法を以下に説明する。

【０００４】本発明の内容で用いられる作用物質の多くは、有利な治療特性を有している。
例えば、ＩＬ−１５Ｒを標的とする作用物質は、突然変異ＩＬ−１５（ｍＩＬ−
１５）ポリペプチドを含む融合タンパク質であり得る。そのような作用物質は、
融合タンパク質の突然変異ＩＬ−１５部分が野生型ＩＬ−１５とわずか数個の置
換残基しか異なっていない可能性があるため、免疫原性であるとは考えられない
。その上、ｍＩＬ−１５ポリペプチドは野生型ＩＬ−１５と同じ高親和性でＩＬ
−１５Ｒαに結合し得るので、受容体を求めて有効に競合し得る。さらに、本発
明の作用物質は、（例えば、標的細胞の溶解または食作用を仲介することにより
）本発明の作用物質が結合する受容体産生細胞の除去、すなわち破壊を最終的に
仲介する、補体および食細胞などの宿主免疫系成分を活性化し得る。ＩＬ−１５
受容体のαサブユニット（ＩＬ−１５Ｒα）は、休止免疫細胞ではなく活性化免
疫細胞または悪性化免疫細胞によって発現されるので、本発明の作用物質を活性
化細胞（例えば、抗原活性化Ｔ細胞）または悪性化細胞を特異的に標的とするよ
うに使用することができる。本発明のさらなる利点は、ＩＬ−１５Ｒを標的とす
る作用物質と同時刺激シグナルをブロックする作用物質とを合わせて投与すると
、寛容が誘導されることである。その結果、移植片が拒絶反応を起こすことなく
免疫抑制が停止され得るか、または二次移植片がさらに免疫抑制することなく受
容され得る。

【０００５】免疫応答を抑制するかまたは免疫疾患を治療する薬剤を調製するために本発明
の組成物を用いることも本発明の特徴である。本発明の他の特徴および利点は以下の詳細な説明および請求項から明らかにな
るであろう。本発明の実施または試験に際して、本明細書に記載のものと類似ま
たは同等な材料および方法を用いることが可能であるが、好ましい材料および方
法を以下に説明する。

【０００６】（詳細な説明）有効な免疫応答は、抗原またはマイトジェンがＴ細胞の活性化を誘起したとき
に始まる。抗原フラグメントは、主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）分子と連
係して抗原呈示細胞（ＡＰＣ）表面上に呈示される。また、ＡＰＣは、同時刺激
シグナル、例えば、ＣＤ４０／ＣＤ１５４およびＣＤ２８／Ｂ７−１またはＢ７
−２によって仲介されるシグナル（「Ｔ細胞同時刺激シグナル」または「同時刺
激シグナル」）を運ぶ。Ｔ細胞活性化プロセスにおいて、サイトカインおよびサ
イトカイン受容体の発現を含めた多くの細胞変化が生じる。免疫応答に関与する
サイトカインの１種はインターロイキン−１５（ＩＬ−１５）である。ＩＬ−１
５は、他のインターロイキン受容体βおよびγサブユニットと固有のＩＬ−１５
Ｒαサブユニットからなるヘテロ三量体受容体に結合する。上述のように、ＩＬ
−１５は、ｉｎｖｉｔｒｏでＢ細胞、Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞
およびリンパ球活性化キラー（ＬＡＫ）細胞の増殖・分化を刺激するＴ細胞増殖
因子であるとみなされている。これらの細胞型の増殖はｉｎｖｉｖｏでは免疫
応答を促進する。

【０００７】本発明は、いくつかの新規な免疫応答抑制法の発見に基づいている。免疫応答
の抑制は、ＩＬ−１５Ｒを標的とするものをその１つとして含む複数の作用物質
の組み合わせを投与することにより達成し得る。用語「作用物質」とは、治療物
質として用い得る実質的にすべてのタイプの分子を包含するものとする。野生型
タンパク質と同一であるか、突然変異（すなわち、１つ以上のアミノ酸残基の欠
失、付加もしくは置換）を含み得る、抗体、融合タンパク質および可溶性リガン
ドなどのタンパク質や、それらをコードする核酸分子はすべて「作用物質」であ
る。本発明の作用物質は、全身投与もしくは局所投与するか、または細胞ベース
療法を介して投与し得る（すなわち、本発明の作用物質は、それを発現する細胞
を患者に投与することにより患者に投与し得る）。該細胞は、治療物質を発現さ
せるためだけに患者に投与される細胞であってよい。また、該細胞は、移植され
た移植片を作用物質で処理するか、または、ｅｘｖｉｖｏで移植前もしくは移
植後に治療物質をコードする核酸を用いて導入した、細胞移植片、臓器移植片も
しくは組織移植片の細胞であってもよい。このように、移植された細胞はそれ自
身の免疫抑制因子を産生する。例えば、有用な表現型としてインスリンを産生す
る細胞は、本発明の免疫抑制因子を産生する遺伝子を含むように修飾されるであ
ろう。上記および他の投与法は当業者により日常的に用いられており、以下に詳
細に説明する。

【０００８】（ＩＬ−１５Ｒを標的とする作用物質）ＩＬ−１５Ｒを標的とする作用物質には、ＩＬ−１５Ｒに結合する作用物質や
、活性化Ｔ細胞などのＩＬ−１５Ｒ産生細胞に結合した後、それを破壊する作用
物質が含まれる。このように、免疫抑制の達成に有用な作用物質は、２つの機能
性部分、すなわち、作用物質の標的をＩＬ−１５Ｒ産生細胞とするターゲティン
グ部分と、ＩＬ−１５Ｒ産生細胞の除去を引き起こす標的細胞破壊性（例えば、
溶解誘発性）部分とを含み得る。１つの実施形態において、ターゲティング部分
は、ＩＬ−１５Ｒに、該受容体を介してシグナルを有効に伝達することなく結合
する。例えば、ターゲティング部分は突然変異ＩＬ−１５ポリペプチドを含み得
、標的細胞破壊性部分は免疫グロブリン分子のＦｃ領域を含み得るが、このＦｃ
領域は、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４などのＩｇＧ、または類
似の哺乳動物ＩｇＧ由来、もしくはヒトＩｇＭまたは類似の哺乳動物ＩｇＭなど
のＩｇＭ由来である。好ましい実施形態において、Ｆｃ領域は、ヒンジ部、ヒト
ＩｇＧ１またはマウスＩｇＧ２ａのＣＨ２およびＣＨ３ドメインを包含する。本
発明は特定の機構を介して機能する作用物質には限定されないが、Ｆｃ領域は、
ＩＬ−１５Ｒ産生細胞の補体および食細胞誘導性除去を仲介すると考えられる。

【０００９】野生型ＩＬ−１５に類似した親和性でＩＬ−１５受容体複合体に結合するが、
シグナル伝達を十分に活性化し得ない突然変異ＩＬ−１５ポリペプチドを産生さ
せた。これらの突然変異ポリペプチドは野生型ＩＬ−１５ポリペプチドと有効に
競合し、通常、細胞増殖などのＩＬ−１５シグナリングに応答して起こる１種以
上の事象を阻害し得る。本明細書において言及されている「野生型ＩＬ−１５ポ
リペプチド」とは、天然ＩＬ−１５と同一のポリペプチドである（例えば、野生
型ＩＬ−１５ポリペプチドは図１に示されている）。これに対し、「突然変異Ｉ
Ｌ−１５ポリペプチド」とは、野生型ＩＬ−１５に対して少なくとも１つの突然
変異を有し、通常、野生型ＩＬ−１５によって促進されるｉｎｖｉｖｏまたは
ｉｎｖｉｔｒｏ活性の少なくとも一方を阻害するポリペプチドである。

【００１０】本発明に従って用い得る突然変異ＩＬ−１５ポリペプチドは、野生型ＩＬ−１
５分子の１種以上の活性を、一般的には少なくとも４０％、より好ましくは少な
くとも７０％、最も好ましくは少なくとも９０％ブロックするであろう。突然変
異ＩＬ−１５ポリペプチドの野生型ＩＬ−１５活性ブロック能は、本明細書に記
載のＢＡＦ−ＢＯ３細胞増殖アッセイ（このアッセイでは、ＩＬ−２Ｒβをコー
ドする構築物で細胞をトランスフェクトした）を含めた多くのアッセイにより評
価し得る。さらに、本発明の突然変異ポリペプチドは、それらが示す野生型ＩＬ
−１５との特定の同一性に従って定義し得る。２種のポリペプチド間の同一性を
調べる際に、比較される配列の長さは、一般的には少なくとも１６アミノ酸、好
ましくは少なくとも２０アミノ酸、より好ましくは少なくとも２５アミノ酸、最
も好ましくは少なくとも３５アミノ酸であろう。ポリペプチドまたはＤＮＡ配列
に関して用いられている用語「同一性」とは、比較されている２種のポリペプチ
ドまたはＤＮＡ配列内のサブユニット（タンパク質のアミノ酸残基またはＤＮＡ
分子のヌクレオチド）間の同一性を表す。両分子におけるサブユニット位置が同
一のモノマーサブユニット（すなわち、同じアミノ酸残基またはヌクレオチド）
で占められている場合、両分子はその位置で同一である。２種のアミノ酸配列ま
たは２種のヌクレオチド配列間の類似性は、同一位置の数の直接関数である。し
たがって、１００アミノ酸長の基準ポリペプチドと５０％同一のポリペプチドは
、基準ポリペプチドの５０アミノ酸長部分と完全に同一である５０アミノ酸ポリ
ペプチドであり得る。また、このポリペプチドは、その全長にわたって基準ポリ
ペプチドと５０％同一である１００アミノ酸長ポリペプチドでもよい。他の多く
のポリペプチドが同じ基準を満たすであろうことは勿論である。同一性は、ウィ
スコンシン大学のバイオテクノロジーセンター（ＷＩ５３７０５、マディソン、
１７１０ユニバーシティーアベニュー所在）〔Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆ
ＷｉｓｃｏｎｓｉｎＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙＣｅｎｔｅｒ（１７１０
ＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＡｖｅｎｕｅ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ５３７０５）〕の
遺伝学コンピュータグループ（ＧｅｎｅｔｉｃｓＣｏｍｐｕｔｅｒＧｒｏｕ
ｐ）の配列解析ソフトウエアパッケージ（ＳｅｑｕｅｎｃｅＡｎａｌｙｓｉｓ
ＳｏｆｔｗａｒｅＰａｃｋａｇｅ）などの配列解析ソフトウエアを、そのデ
フォルトパラメータと共に用いて測定するのが一般的かつ最も便利である。

【００１１】突然変異ＩＬ−１５ポリペプチドは、野生型ＩＬ−１５と少なくとも６５％、
好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも９０％、最も好ましく
は少なくとも９５％（例えば、９６％、９７％、９８％または９９％）同一であ
り得る。突然変異は、アミノ酸残基の数または内容における変化からなり得る。
例えば、突然変異ＩＬ−１５は、野生型ＩＬ−１５より多いかまたは少ない数の
アミノ酸残基を有し得る。あるいはまたはそれに加えて、突然変異ポリペプチド
は、野生型ＩＬ−１５中に存在する１つ以上のアミノ酸残基の置換を含み得る。
突然変異ＩＬ−１５ポリペプチドは、野生型ＩＬ−１５と、単一アミノ酸の付加
、欠失または置換、例えば、１５６位残基の付加、欠失または置換だけ異なり得
る。同様に、突然変異ポリペプチドは、野生型ＩＬ−１５と、２つのアミノ酸残
基、例えば、１５６位および１４９位のアミノ酸残基の付加、欠失または置換だ
け異なり得る。例えば、突然変異ＩＬ−１５ポリペプチドは、野生型ＩＬ−１５
と、（図２に示されているような）１５６位および１４９位残基のグルタミンが
アスパラギン酸に置き換えられた置換だけ異なり得る。ターゲティング作用物質
として有用な突然変異ポリペプチドは、野生型ＩＬ−１５と同様に、ＩＬ−１５
Ｒの成分を認識して、それに結合する。１つの実施形態において、ＩＬ−１５の
突然変異は、ＩＬ−２Ｒγ（ＩＬ−２受容体サブユニット）に結合すると考えら
れている、サイトカインのカルボキシ末端ドメインに存在する。あるいはまたは
それに加えて、突然変異ＩＬ−１５ポリペプチドは、ＩＬ−２Ｒβ（ＩＬ−２受
容体βサブユニット）結合ドメイン内に１つ以上の突然変異を含み得る。

【００１２】突然変異ＩＬ−１５ポリペプチドが１つのアミノ酸残基の別のアミノ酸残基に
よる置換を含む場合、この置換は、以下の群：グリシン、アラニン；バリン、イ
ソロイシン、ロイシン；アスパラギン酸、グルタミン酸；アスパラギン、グルタ
ミン；セリン、トレオニン；リシン、アルギニン；およびフェニルアラニン、チ
ロシン；内の置換を含む保存的置換であり得るが、必ずそうでなければならない
わけではない。

【００１３】ＩＬ−１５Ｒポリペプチド（例えば、突然変異ＩＬ−１５ポリペプチド）を用
いる代わりに、またはその使用に加えて、このＩＬ−１５Ｒを、ＩＬ−１５Ｒの
成分（例えば、ＩＬ−１５Ｒαサブユニット）に結合する抗体と合わせて標的に
向け得る。ＩＬ−１５Ｒの成分に対するヒト型化抗体を含めた抗体を産生させる
方法は当該技術分野では周知である。抗体は、補体または食細胞、例えば、ヒト
ＩｇＧ３およびＩｇＧ１（後者が好ましい）サブクラス、またはマウスＩｇＧ２
ａサブクラスを活性化し得るのが好ましい。

【００１４】上述のように、免疫抑制の達成に有用な作用物質は２つの機能性部分、すなわ
ち、作用物質の標的を（上記突然変異ＩＬ−１５分子などの）ＩＬ−１５Ｒ産生
細胞に向けるターゲティング部分と、例えばＩＬ−１５Ｒ産生細胞の溶解または
除去を引き起こす標的細胞破壊性部分とを含み得る。従って、作用物質は、突然
変異ＩＬ−１５ポリペプチドと、抗体のＩｇＧおよびＩｇＭサブクラスのＦｃ領
域などの異種ポリペプチドとを含むキメラポリペプチドであり得る。Ｆｃ領域は
、補体の結合およびＦｃ受容体の結合を阻害する突然変異を含むか、または標的
細胞破壊性であり得る（すなわち、補体に結合するか、または抗体依存性補体溶
解などの別の機構により細胞を破壊し得る）。

【００１５】Ｆｃ領域は、天然源から単離するか、組換えにより産生させるか、または（本
発明で特徴付けられているポリペプチドのいずれかのように）合成することがで
きる。例えば、ＩｇＧのＣ末端ドメインに対応するＦｃ領域は、ＩｇＧをパパイ
ンで分解して生成することができる。ＩｇＧＦｃは、約５０ｋＤａの分子量を
有する。本発明のポリペプチドは、全Ｆｃ領域を含むか、または細胞溶解能を保
持する小部分を含み得る。さらに、全長Ｆｃ領域またはＦｃ領域フラグメントは
、野生型分子の変異体であり得る。つまり、Ｆｃ領域は、本発明のポリペプチド
の機能に影響を及ぼしても及ぼさなくてもよい突然変異を含み得る。

【００１６】Ｆｃ領域は、「標的細胞破壊性」または「非標的細胞破壊性」であり得る。非
標的細胞破壊性Ｆｃ領域は、通常、高親和性Ｆｃ受容体結合部位およびＣ′１ｑ
結合部位を欠く。マウスＩｇＧＦｃの高親和性Ｆｃ受容体結合部位は、ＩｇＧＦｃの２３５位にＬｅｕ残基を有している。したがって、マウスＦｃ受容体結
合部位は、Ｌｅｕ２３５を突然変異させるか欠失させるかして破壊することがで
きる。例えば、Ｌｅｕ２３５がＧｌｕに置き換えられると、Ｆｃ領域の高親和性
Ｆｃ受容体結合能が阻害される。マウスＣ′１ｑ結合部位は、ＩｇＧのＧｌｕ３
１８、Ｌｙｓ３２０およびＬｙｓ３２２残基を突然変異または欠失させることに
より機能的に破壊することができる。例えば、Ｇｌｕ３１８、Ｌｙｓ３２０およ
びＬｙｓ３２２がＡｌａ残基に置き換えられると、ＩｇＧ１Ｆｃは抗体依存性
補体溶解を誘導し得なくなる。これに対し、標的細胞破壊性ＩｇＧＦｃ領域は
、高親和性Ｆｃ受容体結合部位およびＣ′１ｑ結合部位を有する。高親和性Ｆｃ
受容体結合部位は、ＩｇＧＦｃの２３５位にＬｅｕ残基を有し、Ｃ′１ｑ結合
部位は、ＩｇＧ１のＧｌｕ３１８、Ｌｙｓ３２０およびＬｙｓ３２２残基を有し
ている。標的細胞破壊性ＩｇＧＦｃは、これらの部位に、野生型残基または保
存的アミノ酸置換を有している。標的細胞破壊性ＩｇＧＦｃは、細胞の標的を
抗体依存性細胞性細胞毒性または補体誘導性細胞溶解（ＣＤＣ）に設定する。ヒ
トＩｇＧ用に適切な突然変異も公知である（例えば、Ｍｏｒｒｉｓｏｎら，Ｔｈ
ｅＩｍｍｕｎｏｌｏｇｉｓｔ２：１１９−１２４、１９９４；およびＢｒｅ
ｋｋｅら，ＴｈｅＩｍｍｕｎｏｌｏｇｉｓｔ２：１２５，１９９４参照）。

【００１７】さらに、ＩＬ−１５Ｒを標的とする作用物質は、突然変異ＩＬ−１５ポリペプ
チドおよびＦＬＡＧ配列などの抗原性標識として機能するポリペプチドを含む作
用物質であってもよい。ＦＬＡＧ配列は、本明細書に記載されているような、ビ
オン化高特異的抗ＦＬＡＧ抗体によって認識される（Ｂｌａｎａｒら，Ｓｃｉｅ
ｎｃｅ２５６：１０１４，１９９２；ＬｅＣｌａｉｒら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ
．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８９：８１４５，１９９２も参照されたい）。

【００１８】（同時刺激シグナルを阻害する作用物質）免疫応答を抑制するために、上述のＩＬ−１５Ｒ産生細胞を標的とする作用物
質と、通常、ＡＰＣからＴ細胞に伝達される同時刺激シグナルを阻害する作用物
質とを合わせて投与し得る。もう一方のものと「共に」投与される作用物質は、
同時に投与されることもあるが、必ずしも同時に投与されるわけではない。例え
ば、本発明の内容において、ＩＬ−１５Ｒを標的とする作用物質は、同時刺激シ
グナルを阻害する作用物質の前または後に投与し得る。同時刺激シグナルを阻害
するために、Ｔ細胞またはＡＰＣ上の、それら２種の細胞型間の同時刺激シグナ
リングに関与することが知られている１つ以上の分子に結合してそれをブロック
する任意の作用物質を投与し得る。例を挙げると、例えば、Ｔ細胞によって発現
され、Ｂ７を介して結合する、ＡＰＣ上の（Ｂ７−１もしくはＢ７−２が含まれ
るがそれには限定されない）Ｂ７分子に結合するか、または、例えばＴ細胞によ
って発現され、Ｂ７を介して結合するＣＤ２８に結合する任意の作用物質を投与
し得る。これらの作用物質には、Ｂ７分子に結合する抗体（例えば、抗Ｂ７抗体
）、ＣＴＬＡ４／Ｉｇ、およびＣＤ２８に結合する抗体が含まれる。あるいはま
たはそれに加えて、例えば、Ｔ細胞によって発現され、ＣＤ４０を介して結合す
る、ＡＰＣ上のＣＤ４０または（ＣＤ１５４としても知られている）ＣＤ４０Ｌ
に結合する任意の作用物質を投与し得る。これらの作用物質には、ＣＤ４０また
はＣＤ４０Ｌに結合する抗体が含まれる。

【００１９】（免疫応答を阻害する作用物質のスクリーニング法）以下の実施例に記載されているｉｎｖｉｔｒｏアッセイで候補作用物質（例
えば、突然変異ＩＬ−１５ポリペプチド）を試験することに加えて、以下のｉｎ
ｖｉｖｏアッセイのいずれかを用いて、本明細書に記載の作用物質のうち、ど
の特定の組み合わせが最も効果的に免疫抑制を達成するかを試験し得る。例えば
、ＩＬ−１５Ｒを標的とする１種以上の作用物質と、通常、ＡＰＣからＴ細胞に
伝達される同時刺激シグナルをブロックするか、ＴＣＲを拮抗させるか、カルシ
ニューリンを阻害するか、細胞増殖を抑制するか、または抗原活性化Ｔ細胞に結
合してそれを不活性化させる１種以上の作用物質とを組み合わせて試験すること
ができる。これらのｉｎｖｉｖｏアッセイは、当業者がさらに本発明の作用物
質の効力を試験し得る日常的な方法の極く一部を表すに過ぎない。これらのアッ
セイは、ＩＬ−１５Ｒを標的とする作用物質を用いて治療し得る多様な臨床症状
に関係があるという理由でここに含めるために選択された。例えば、これらのア
ッセイは、臓器移植、免疫疾患、特に自己免疫疾患、および免疫系のガン（例え
ば、Ｔ細胞が悪性化したときに発生するガン）に関連がある。

【００２０】（移植バラダイム）本発明の作用物質、またはそのような作用物質の組み合わせが免疫抑制を達成
するか否かを確認するために、それらの作用物質を、十分に確立された移植バラ
ダイムの内容下で（直接、遺伝子ベース療法、または細胞ベース療法を介して）
投与し得る。

【００２１】本発明の作用物質またはそれらをコードする核酸分子は、標準手段を用いて、
ラット、マウス、ウサギ、モルモット、またはイヌなどの任意の通常の実験動物
に、同種もしくは異種皮膚移植、臓器移植、または細胞移植をその動物に実施す
る前に、全身または局所投与し得る。Ｃ５７Ｂ１−１０、Ｂ１０．ＢＲおよびＢ
１０．ＡＫＭ（ジャクソン・ラボラトリー、メーン州バーハーバー所在）などの
マウス系は、同じ遺伝的背景を有するが、Ｈ−２遺伝子座にミスマッチを有して
おり、種々の臓器移植を評価するのに好適である。

【００２２】（心臓移植）宿主腹部の大血管にドナー心臓を吻合して心臓移植を実施する方法は、最初に
オノ（Ｏｎｏ）らにより発表された（Ｊ．Ｔｈｏｒａｃ．Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ
．Ｓｕｒｇ．５７：２２５，１９６９；またＣｏｒｒｙら，Ｔｒａｎｓｐｌａｎ
ｔａｔｉｏｎ１６：３４３，１９７４も参照されたい）。この外科治療により
、標準的な微小血管技術を用いて、ドナー心臓の大動脈を宿主の腹部大動脈に吻
合し、ドナー心臓の肺動脈を隣接する大静脈に吻合する。心臓が適正な位置に移
植され、乳酸リンゲル液で３７℃に温められると、正常な洞リズムが再開する。
移植された心臓の機能は、腹壁を介して心室収縮を触診すれば頻繁に評価するこ
とができる。拒絶反応とは心筋収縮の停止と定義される。本発明の作用物質（例
えば、突然変異ＩＬ−１５／ＦｃとＣＴＬＡ４／Ｉｇとの組み合わせ）は、これ
らの作用物質を受容した宿主が治療を受けていない宿主より長期のドナー心臓生
着を経験するならば、臓器拒絶反応の低減に有効であると考えられよう。

【００２３】（皮膚移植）本発明の作用物質の種々の組み合わせの有効性は、皮膚移植後に評価すること
もできる。げっ歯動物に皮膚移植を行うために、ドナー動物を麻酔し、尾の一部
から皮膚の全厚を除去する。レシピエント動物も麻酔し、剃毛した側腹部から１
片の皮膚を除去して移植片床を作製する。一般に、皮膚片は約０．５×０．５ｃ
ｍである。ドナー由来の皮膚を移植片床に適合するような形にして配置し、ガー
ゼをかぶせて包帯する。移植片は術後６日目から毎日視診することができ、移植
した上皮の半分を超える部分が生育不能に見えたら拒絶反応が起きたと考えられ
る。本発明の作用物質（例えば、突然変異ＩＬ−１５／ＦｃとＣＴＬＡ４／Ｉｇ
との組み合わせ）は、これらの作用物質を受容した宿主が治療を受けていない宿
主より長期のドナー皮膚生着を経験するならば、皮膚移植拒絶反応の低減に有効
であると考えられよう。

【００２４】（島同種移植片モデル）ＤＢＡ／２Ｊ島細胞同種移植片は、ストレプトゾトシン（２２５ｍｇ／ｋｇ；
シグマ・ケミカル社、ミズーリ州セントルイス所在）を１回腹腔内注射するだけ
で糖尿病にされた、６〜８週齢のＢ６ＡＦ１マウスなどのげっ歯動物に移植す
ることができる。コントロールとして、糖尿病マウスに同系島細胞移植片を移植
し得る。島細胞移植は、公表されたプロトコル（例えば、Ｇｏｔｏｈら，Ｔｒａ
ｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ４２：３８７，１９８６参照）に従って実施し得る
。簡単に説明すると、ドナー膵臓を、ＩＶ型コラゲナーゼ（２ｍｇ／ｍｌ；ワー
ジントン・バイオケミカル社、ニュージャージー州フリーホールド所在）と共に
ｉｎｓｉｔｕ潅流させる。３７℃で４０分消化した後、島を不連続フィコール
勾配で単離する。次いで、各レシピエントの腎被膜の下に３００〜４００個の島
を移植する。同種移植片機能は、連続血中グルコース測定（Ａｃｃｕ−Ｃｈｅｃ
ｋＩＩＩ^ＴＭ；ベーリンガー社、ドイツマンハイム所在）により精察し得る。
一次移植片機能は、移植後３日目の１１．１ｍｍｏｌ／Ｌを下回る血中グルコー
スレベルと定義され、移植片拒絶反応は、一次移植片反応期間後の（それぞれ少
なくとも２連続日における）１６．５ｍｍｏｌ／Ｌを超える血中グルコースの上
昇と定義される。

【００２５】（自己免疫疾患モデル）自己免疫疾患モデルは、本発明の作用物質の組み合わせをｉｎｖｉｖｏで評
価する別の手段を提供する。これらのモデルは当業者には周知であり、ＩＬ−１
５Ｒを標的とする作用物質を含む所与の作用物質の組み合わせを、直接投与か、
遺伝子療法を介して、または細胞ベース療法を介して投与した場合、それが特定
の自己免疫疾患の治療に治療上有用であるか否かを確認するのに用い得る。

【００２６】動物でモデル化された自己免疫疾患には、慢性関節リューマチや全身性エリテ
マトーデス（ＳＬＥ）などのリューマチ性疾患、Ｉ型糖尿病、ならびに甲状腺、
腸および中枢神経系の自己免疫疾患が含まれる。例えば、ＳＬＥの動物モデルに
は、ＭＲＬマウス、ＢＸＳＢマウスおよびＮＺＢマウスならびにそれらのＦ_１ハ
イブリッドが含まれる。これらの動物は、リューマチ性疾患プロセスの特定の態
様を研究するために交雑させることができ、ＮＺＢ系の後代はＮＺＷマウスと交
雑させると重度のループス糸球体腎炎を発症する（Ｂｉｅｌｓｃｈｏｗｓｋｙら
，Ｐｒｏｃ．Ｕｎｉｖ．ＯｔａｇｏＭｅｄ．Ｓｃｈ．３７：９，１９５９：さ
らにＦｕｎｄａｍｅｎｔａｌＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，ＰａｕＬ，Ｅｄ．，Ｒａ
ｖｅｎＰｒｅｓｓ，ＮｅｗＹｏｒｋ，ＮＹ，１９８９も参照されたい）。同
様に、ＮＢＺ×ＳＷＲ交配の後代には、致死腎炎への移行が見られる（Ｄａｔａ
ら，Ｎａｔｕｒｅ２６３：４１２，１９７６）。ＳＮＦ_１マウスの腎病変部の
組織学的外観は十分に特徴付けられている（Ｅａｓｔｃｏｔｔら，Ｊ．Ｉｍｍｕ
ｎｏｌ．１３１：２２３２，１９８３；さらにＦｕｎｄａｍｅｎｎｔａｌＩｍ
ｍｕｎｏｌｏｇｙ，前掲、も参照されたい）。したがって、これらの動物の全身
健康状態に加えて腎組織の組織学的外観を利用して、ＩＬ−１５Ｒを標的とする
作用物質、および、例えば同時刺激を阻害する作用物質の投与がＳＬＥ動物モデ
ルにおける免疫応答を効果的に抑制し得るか否かを確認することができる。

【００２７】ＳＬＥ、ＭＲＬ−ｌｐｒ／ｌｐｒを発症するＭＲＬ系マウスの１種も、ヒトの
慢性関節リューマチに似た形態の関節炎を発症する（Ｔｈｅｏｆｉｌｏｐｏｕｌ
ｏｓら，Ａｄｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３７：２６９，１９８５）。あるいは、フロ
イントの完全アジュバントに１：１で混合したラットＩＩ型コラーゲン（２ｍｇ
／ｍｌ）（合計１００μｌ）をげっ歯動物の尾の基部に注射して実験的関節炎を
誘発させることもできる。関節炎は免疫感作後２〜３週間で発症する。本発明の
作用物質（例えば、ＩＬ−１５Ｒを標的とする作用物質および同時刺激を阻害す
るか抗原活性化Ｔ細胞に結合してそれを不活性化させる作用物質）をコードする
核酸分子の免疫応答抑制能は、それらの核酸分子の標的をＴリンパ球に設定する
ことにより評価し得る。Ｔリンパ球を標的にする１つの方法は以下の通りである
。関節炎発症の２〜３日後に脾臓細胞懸濁液を調製し、コラーゲン（１００μｇ
／ｍｌ）と共に４８時間インキュベートして、コラーゲン活性化Ｔ細胞の増殖を
誘発させる。この時間内に、当該ポリペプチド作用物質をコードするベクターを
用いて細胞を形質導入する。コントロールとして、同様な培養細胞を増殖させる
が形質導入しないか、または「空」のベクターを用いて形質導入する。次いで、
細胞を腹腔内注射する（５×１０^７細胞／動物）。その後２週間の疾患症状を、
Ｃｈｅｒｎａｊｏｖｓｋｙら（ＧｅｎｅＴｈｅｒａｐｙ２：７３１−７３５
，１９９５）により記載のように追跡して、治療の有効性を評価する。コントロ
ールに比べて症状が軽減されていれば、本発明の作用物質の組み合わせおよびそ
れらをコードする核酸分子が免疫抑制剤として機能し、したがって、免疫疾患、
特に自己免疫疾患の治療に有用であることを示す。

【００２８】Ｉ型糖尿病の場合、種々の作用物質組み合わせの免疫応答抑制能は、バイオ−
ブリーディング・ラボラトリーズ社、オタワ所在の市販ウイスター系ラットコロ
ニーから発展させたＢＢラット系で試験することができる。これらのラットは、
ちょうどヒトＩ型糖尿病の場合に出現するような、島細胞およびインスリンに対
する自己抗体を自然発生的に産生する。あるいは、モデル系としてＮＯＤ（非肥
満型糖尿病）マウスを用いてもよい。

【００２９】甲状腺の自己免疫疾患は、ニワトリでモデル化されている。肥満系（ＯＳ）ニ
ワトリはいずれも、橋本病に似た自然発生的自己免疫性甲状腺炎を発症する（Ｃ
ｏｌｅら，Ｓｃｉｅｎｃｅ１６０：１３５７，１９６８）。これらのニワトリ
の約１５％は、ヒトの自己免疫性甲状腺炎の場合と同じように、胃の壁細胞に対
する自己抗体を産生する。任意の治療方式中にモニターし得るＯＳニワトリにお
けるこの疾患の徴候には、身体の大きさ、脂肪の堆積、血清脂質、低温感受性、
および不妊性が含まれる。

【００３０】中枢神経系（ＣＮＳ）の自己免疫疾患モデルも実験的に誘発させることができ
る。麻痺を引き起こすＣＮＳの炎症は、げっ歯動物および霊長動物を含めた多く
の異なる実験動物に脳または脊髄組織をアジュバントと共に１回注射するだけで
誘発させることができる。実験的アレルギー性脳脊髄炎（ＥＡＥ）と称されるこ
のモデルはＴ細胞仲介性である。同様に、実験的に誘発される重症筋無力症はア
セチルコリン受容体をアジュバントと共に１回注射するだけで発生させることが
できる（Ｌｅｎｎｏｎら，Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．２７４：２８３
，１９７６）。

【００３１】腸の自己免疫疾患は、ＩＬ−２もしくはＩＬ−１０「ノックアウト」マウス、
またはウシ血清アルブミンを含有する浣腸剤を受けているマウスでモデル化する
ことができる。

【００３２】（本発明の作用物質をコードする核酸分子）融合タンパク質であるもの（例えば、突然変異ＩＬ−１５／Ｆｃ分子およびＣ
ＴＬＡ４／Ｉｇ分子）を含めた本発明のポリペプチド作用物質は、ｉｎｖｉｔ
ｒｏで適当な真核細胞または原核細胞発現系中で核酸分子を発現させることによ
り得られるだけでなく、核酸分子をコードする適当な遺伝子治療用発現ベクター
を介して患者に投与することもできる。さらに、核酸は、移植片を移植する前に
、移植片の細胞に導入することができる。したがって、上記の作用物質をコード
する核酸分子は本発明の範囲内に包含される。本発明のポリペプチド（例えば、
突然変異ＩＬ−１５／Ｆｃポリペプチド）が、それらの野生型ポリペプチド（例
えば、野生型ＩＬ−１５ポリペプチド）との同一性に関して説明し得るように、
本発明のポリペプチドをコードする核酸分子は、必然的に対応する野生型ポリペ
プチドをコードする核酸分子とある程度の同一性を有しているであろう。例えば
、突然変異ＩＬ−１５ポリペプチドをコードする核酸分子は、野生型ＩＬ−１５
をコードする核酸と、少なくとも６５％、好ましくは少なくとも７５％、より好
ましくは少なくとも８５％、最も好ましくは少なくとも９５％（例えば、９６％
、９７％、９８％または９９％）同一であり得る。核酸に関して、比較される配
列の長さは、一般的には少なくとも５０ヌクレオチド、好ましくは少なくとも６
０ヌクレオチド、より好ましくは少なくとも７５ヌクレオチド、最も好ましくは
少なくとも１１０ヌクレオチドであろう。

【００３３】本発明の作用物質をコードする核酸分子は、天然配列、または天然ではあるが
、遺伝子コードの縮重により、同じポリペプチドをコードする配列とは異なる配
列を含み得る。これらの核酸分子は、ＲＮＡもしくはＤＮＡ（例えば、ゲノムＤ
ＮＡ、ｃＤＮＡ、もしくはホスホルアミダイトベース合成により合成されたもの
などの合成ＤＮＡ）、またはこれらのタイプの核酸内のヌクレオチドの組み合わ
せもしくは修飾体からなり得る。さらに、これらの核酸分子は、二本鎖または一
本鎖（すなわち、センス鎖またはアンチセンス鎖）であり得る。

【００３４】本発明の核酸分子は、生物の天然ゲノム中で隣り合っている５′または３′コ
ード配列から分離されているので「分離体」と称される。したがって、本発明の
核酸分子は、ポリペプチドをコードする配列には限定されず、コード配列から上
流または下流に存在する非コード配列をも含み得る。分子生物学の当業者は、日
常的な核酸分子単離法に精通している。核酸分子は、例えば、ゲノムＤＮＡを制
限エンドヌクレアーゼで処理するか、またはポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を
実施することにより生成し得る。核酸分子がリボ核酸（ＲＮＡ）である場合、分
子はｉｎｖｉｔｒｏ転写により生成し得る。

【００３５】本発明の単離核酸分子は、天然状態ではそのようなものとしては見出されない
フラグメントを包含し得る。したがって、本発明は、核酸配列（例えば、突然変
異ＩＬ−１５をコードする配列）が、ベクター（例えば、プラスミドもしくはウ
イルスベクター）または異種細胞のゲノム（もしくは、天然染色体位置以外の位
置の同種細胞のゲノム）中に組込まれているものなどの組換え分子を包含する。

【００３６】上述のように、本発明の作用物質は融合タンパク質であり得る。上記異種ポリ
ペプチドに加えて、またはそれに代わって、本発明の作用物質をコードする核酸
分子は、「マーカー」または「レポーター」をコードする配列を含み得る。マー
カーまたはレポーター遺伝子の例としては、β−ラクタマーゼ、クロラムフェニ
コールアセチルトランスフェラーゼ（ＣＡＴ）、アデノシンデアミナーゼ（ＡＤ
Ａ）、アミノグリコシドホスホトランスフェラーゼ（ｎｅｏ^ｒ、Ｇ４１８^ｒ）、
ジヒドロ葉酸レダクターゼ（ＤＨＦＲ）、ヒグロマイシン−Ｂ−ホスホトランス
フェラーゼ（ＨＰＨ）、チミジンキナーゼ（ＴＫ）、（β−ガラクトシダーゼを
コードする）ｌａｃＺ、およびキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェ
ラーゼ（ＸＧＰＲＴ）が挙げられる。本発明の実施に関連する多くの標準法に関
して、当業者は、有用な追加試薬、例えば、マーカーまたはレポーターの機能を
果たし得る追加配列に精通しているであろう。

【００３７】本発明の核酸分子は、哺乳動物細胞などの任意の生物細胞から得るか、または
日常的なクローニング法で産生させた本発明の作用物質（例えば、ＩＬ−１５分
子またはＣＴＬＡ４分子）に突然変異を導入して得ることができる。したがって
、本発明の核酸は、マウス、ラット、モルモット、ウシ、ヒツジ、ウマ、ブタ、
ウサギ、サル、ヒヒ、イヌまたはネコの核酸であってよい。本発明の核酸分子は
、ヒトの核酸であるのが好ましい。

【００３８】上記核酸分子は、ベクター内に入れて、例えば、そのベクターを用いて形質導
入した細胞中でその発現を誘導することができる。したがって、好ましい実施形
態には、ポリペプチド作用物質に加えて、それらの作用物質をコードする核酸分
子を有する発現ベクターおよびそれらのベクターを用いてトランスフェクトした
細胞が含まれる。

【００３９】本発明に用いるのに適したベクターには、細菌中で使用するためのＴ７ベース
ベクター（例えば、Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇら，Ｇｅｎｅ５６：１２５，１９８７
参照）、哺乳動物細胞中で使用するためのｐＭＳＸＮＤ発現ベクター（Ｌｅｅお
よびＮａｔｈａｎｓ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６３：３５２１，１９８８）
、Ｐｉｃｈｉａｐａｓｔｏｒｉｓなどの酵母発現系（例えば、インビトロジェ
ン社、カリフォルニア州カールズバッド所在のＰＩＣＺ発現ベクターファミリー
）および昆虫細胞中で用いるためのバキュロウイルス誘導ベクター（例えば、ク
ロンテク社、カリフォルニア州パロアルト所在の発現ベクターｐＢａｃＰＡＫ９
）が含まれる。そのようなベクター中の当該ポリペプチドをコードする核酸挿入
配列は、例えば、発現させたい細胞型に基づいて選択されるプロモーターに作動
可能に結合させることができる。例えば、Ｔ７プロモーターは細菌中で、ポリヘ
ドリンプロモーターは昆虫細胞中で、サイトメガロウイルスまたはメタロチオネ
インプロモーターは哺乳動物細胞中で用いることができる。また、高等な真核生
物の場合、組織特異的または細胞型特異的プロモーターが広く利用可能である。
これらのプロモーターは、所与の体内組織または細胞型中で核酸酸分子の発現を
誘導するそれらの能力にちなんでそのように命名されている。当業者は、多くの
プロモーターおよび核酸発現の誘導に用い得る他の調節成分に精通しているであ
ろう。

【００４０】ベクターは、挿入された核酸分子の転写を促進する配列に加えて、複製起点や
、選択マーカーをコードする他の遺伝子を含み得る。例えば、ネオマイシン耐性
（ｎｅｏ^ｒ）遺伝子は、それが発現される細胞にＧ４１８耐性を与え、それゆえ
、トランスフェクトされた細胞の表現型選択を可能にする。細胞の表現型選択を
可能にする他の適当な選択マーカー遺伝子には、種々の蛍光タンパク質、例えば
、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）およびその変異体が含まれる。当業者は、所与
の調節成分または選択マーカーが特定の実験内容で用いるのに適しているか否か
を容易に確認し得るであろう。

【００４１】本発明に用い得るウイルスベクターには、例えば、レトロウイルスベクター、
アデノウイルスベクター、およびアデノ関連ベクター、ヘルペスウイルスベクタ
ー、シミアンウイルス４０（ＳＶ４０）ベクター、ウシパピローマウイルスベク
ター〔例えば、Ｇｌｕｚｍａｎ（Ｅｄ．），ＥｕｋａｒｙｏｔｉｃＶｉｒａｌ
Ｖｅｃｔｏｒｓ，ＣＳＨＬａｂｏｒａｔｏｒｙＰｒｅｓｓ，ＣｏｌｄＳ
ｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒ，ＮｅｗＹｏｒｋ参照〕が含まれる。

【００４２】本発明の作用物質をコードする核酸分子を含み、その核酸分子でコードされる
タンパク質をｉｎｖｉｔｒｏで発現する原核細胞または真核細胞も、本発明の
特徴である。本発明の細胞は、トランスフェクト細胞、すなわち、組換えＤＮＡ
技術を用いて核酸分子、例えば、突然変異ＩＬ−１５ポリペプチドをコードする
核酸分子を導入した細胞である。そのような細胞の後代も本発明の範囲内に包含
されると考えられる。発現ベクターの正確な成分は重要ではない。例えば、突然
変異ＩＬ−１５ポリペプチドは、細菌Ｅ．ｃｏｌｉなどの原核生物宿主か、昆虫
細胞（例えば、Ｓｆ２１細胞）などの真核生物宿主か、または哺乳動物細胞（例
えば、ＣＯＳ細胞、ＣＨＯ細胞、２９３細胞、ＮＩＨ３Ｔ３細胞、もしくはＨｅ
Ｌａ細胞）中で産生させることができる。これらの細胞は、Ａｍｅｒｉｃａｎ
ＴｙｐｅＣｕｌｔｕｒｅＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ヴァージニア州マナッサス
所在）を含めた多くの供給源から入手可能である。発現系を選択する際には、そ
の成分が互いに適合性であることだけが問題である。当業者はそのような確認を
することができる。さらに、発現系選択の際にガイダンスが必要であれば、Ａｕ
ｓｕｂｅｌら（ＣｕｒｒｅｎｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓｉｎＭｏｌｅｃｕｌａ
ｒＢｉｏｌｏｇｙ，ＪｏｈｎＷｉｌｅｙａｎｄＳｏｎｓ，ＮｅｗＹｏ
ｒｋ，ＮＹ，１９９３）およびＰｏｕｗｅｌｓら（ＣｌｏｎｉｎｇＶｅｃｔｏ
ｒｓ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ，１９８５Ｓｕｐｐｌ．１９
８７）を参考にし得る。

【００４３】本発明の作用物質をコードする核酸分子を含み、そのような核酸分子でコード
されるタンパク質をｉｎｖｉｖｏで発現する真核細胞も本発明の特徴である。さらに、本発明の真核細胞は、細胞移植片、組織移植片または臓器移植片の一
部である細胞であってよい。そのような移植片は、ドナー生物から採取した一次
細胞、またはレシピエント生物に移植する前にｉｎｖｉｔｒｏで培養、修飾か
つ／もしくは選択された細胞、例えば、幹細胞もしくは前駆細胞を含めた真核細
胞系を含み得る。レシピエント生物に移植した後、細胞増殖が生じるので、その
ような細胞の後代も本発明の範囲内に包含されると考えられる。細胞、組織また
は臓器移植片の一部である細胞は、突然変異ＩＬ−１５ポリペプチドをコードす
る核酸でトランスフェクトした後で、突然変異ＩＬ−１５ポリペプチドの発現が
生じるレシピエント生物に移植することができる。さらに、そのような細胞は、
レシピエント生物に移植する前に、選択手順、例えば、特定の細胞系または細胞
型の適用を見込んだ１種以上の追加核酸構築物を含み得る。

【００４４】発現したポリペプチドは、日常的な生化学手順を用いて発現系から精製するこ
とができ、以下に記載のような診断ツールまたは治療薬（本発明の治療組成物は
医薬品とみなし得る）として用いることができる。したがって、本発明はさらに
、ＩＬ−１５Ｒのサブユニットに結合する突然変異ＩＬ−１５ポリペプチドとＢ
７分子に結合するポリペプチドとを含む治療組成物の製造方法を特徴とする。こ
の方法は、例えば、（ａ）発現系から突然変異ＩＬ−１５ポリペプチドを精製し
、（ｂ）発現系からＢ７に結合するポリペプチドを精製し、（ｃ）ＩＬ−１５ポ
リペプチドとＢ７結合ポリペプチドを組み合わせることによって実施し得る。本
発明の治療組成物は、本明細書に記載の任意の免疫疾患（例えば、任意の自己免
疫疾患）を有する患者を治療するために、（本明細書に記載のように、かつ当業
者には公知の方法に従って）調剤することができる。

【００４５】（ＩＬ−１５Ｒを標的とする作用物質は診断に有用である）ＩＬ−１５Ｒを標的とする作用物質は、患者が本明細書に記載の作用物質組み
合わせで治療しやすい疾患（例えば、免疫疾患、特に自己免疫疾患）を有してい
るか否かの確認に用い得る。診断法は、例えば、免疫疾患、特に自己免疫疾患ま
たは悪性免疫細胞であることが明らかなガンを有すると思われる患者から組織試
料を採取し、その組織を、ＩＬ−１５Ｒを標的とする抗原性標識ポリペプチドに
暴露することにより実施し得る。試料は、血液、尿、血清または血漿試料などの
任意の生物試料であり得る。さらに、試料は、組織試料（例えば、生検組織）、
または関節から得た滲出液（例えば、滑液）、腹腔から得た滲出液（例えば、腹
水液）、胸から得た滲出液（例えば、胸膜液）、もしくは中枢神経系から得た滲
出液（例えば、脳脊髄液）であり得る。また、試料は、もとをたどれば患者から
得た培養細胞（例えば、末梢血単核細胞）からなることもある。試料は、ヒト患
者などの哺乳動物から得ることができる。試料が、暴露される作用物質に結合す
る細胞を含んでいる場合、試料は、ｉｎｖｉｖｏでその作用物質（例えば、Ｉ
Ｌ−１５Ｒを標的とする作用物質）に結合し、それによって、ｉｎｖｉｖｏで
の増殖が阻害されるか、破壊されることは確実と思われる。そのような試験用候
補患者の主症状および特定の症状群を考えて試料化される関連組織は当業者には
周知である。

【００４６】（治療しやすい患者）本発明の作用物質の組み合わせは、以下を含むがそれらには限定されない免疫
疾患、特に自己免疫疾患に罹患している患者の治療に用い得る：（１）慢性関節
リューマチ、全身性エリテマトーデス、シェーグレン症候群、強皮症、混合結合
組織病、皮膚筋炎、多発性筋炎、ライター症候群またはベーチェット症候群など
のリューマチ性疾患、（２）Ｉ型またはＩＩ型糖尿病、（３）橋本甲状腺炎また
はバセドウ病などの甲状腺の自己免疫疾患、（４）多発性硬化症、重症筋無力症
または脳脊髄炎などの中枢神経系の自己免疫疾患、（５）尋常性天疱瘡、増殖性
天疱瘡、落葉状天疱瘡、セニーア−アッシャー症候群またはブラジル天疱瘡など
の多様な天疱瘡、（６）乾癬または皮膚神経炎などの皮膚疾患、および（７）炎
症性腸疾患（例えば、潰瘍性大腸炎またはクローン病）。本発明の作用物質の組
み合わせは、後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）の治療にも用い得る。同様に、
これらの作用物質を投与する方法は、合成もしくは生物材料またはそれらの組み
合わせからなる移植片を受容した患者の治療にも用い得る。そのような移植片は
、臓器、組織もしくは細胞移植片、または細胞を接種した合成移植片、例えば、
血管細胞を接種した合成血管移植片であり得る。さらに、血管損傷を受けた患者
もこの方法から利益を受けるであろう。

【００４７】本発明はＩＬ−１５Ｒを標的とする標的細胞破壊型作用物質の投与を包含する
ので、正常Ｔ細胞を大量に破壊することなく、自己反応性または「移植片破壊性
」免疫細胞を選択的に死滅させることができる。したがって、本発明は、活性化
もしくは自己反応性または「移植片破壊性」免疫細胞もしくは悪性細胞を含めた
、ｉｎｖｉｖｏでＩＬ−１５Ｒを発現する細胞を死滅させる方法を特徴とする
。これらの方法は、患者に、ＩＬ−１５Ｒを標的とする作用物質と、補体系を活
性化するか、ＡＤＣＣ機構により細胞を溶解するか、または野生型ＩＬ−１５受
容体複合体を発現する細胞を死滅させる作用物質との組み合わせを投与すること
により実施し得る。この方法は、ＩＬ−１５Ｒ^＋白血病、リンパ腫、または結腸
ガンなどの他のＩＬ−１５Ｒ^＋悪性疾患を有する患者の治療に用い得る。

【００４８】（使用製剤および投与経路）本発明の方法およびそれを実施するために使用される治療組成物は、「実質的
に純粋な」作用物質を含有する。例えば、作用物質がポリペプチドである場合、
ポリペプチドは、少なくとも６０重量％（乾量）の当該ポリペプチド、例えば、
ＩＬ−１５Ｒ産生細胞に結合してそれを破壊するポリペプチドである。作用物質
（例えば、ポリペプチド）は、好ましくは少なくとも７５重量％、より好ましく
は少なくとも９０重量％、最も好ましくは少なくとも９９重量％の当該作用物質
である。純度は、任意の適切な標準法、例えば、カラムクロマトグラフィー、ポ
リアクリルアミドゲル電気泳動、またはＨＰＬＣ分析により測定し得る。

【００４９】本発明の方法に有用な作用物質は天然源から得ることができるが、合成または
生産することもできる（例えば、ＩＬ−１５Ｒ産生細胞に結合してそれを破壊す
る作用物質は組換え核酸分子を発現させて生産し得る）。真核生物由来であるか
、またはＥ．ｃｏｌｉもしくは他の原核生物中で合成されたポリペプチド、およ
び化学合成されたポリペプチドは、それらの天然関連成分を実質的に含んでいな
い。ポリペプチドがキメラである場合、ポリペプチドは、作用物質のすべてまた
は一部をコードする１つの配列（例えば、突然変異ＩＬ−１５ポリペプチドをコ
ードする配列とＩｇＧのＦｃ領域をコードする配列）を含むハイブリッド核酸分
子によってコードされ得る。本発明の作用物質（例えば、ポリペプチド）は、ヘ
キサヒスチジン標識に融合して、細菌により発現されるタンパク質の精製を容易
にするか、またはヘマグルチニン標識に融合して、真核細胞中で発現されるタン
パク質の精製を容易にし得る。

【００５０】本発明の作用物質の生成に必要な技術は、当該技術分野では日常的であり、当
業者が過度の実験に頼らなくても実施し得る。例えば、ＩＬ−１５における１つ
以上のアミノ酸残基の置換からなる突然変異は、本明細書に記載されている、１
４９位および１５６位のグルタミン残基がアスパラギン酸残基に変わった突然変
異ＩＬ−１５ポリペプチドを生成するためのＰＣＲ支援突然変異誘発技術を用い
て作り出すことができる。（ＩＬ−１５ポリペプチドまたは本明細書に記載の他
の任意の有用なポリペプチド、例えば同時刺激を阻害するか、または活性化Ｔ細
胞に結合するポリペプチドに関する）アミノ酸残基の欠失または付加からなる突
然変異も、標準的な組換え技術を用いて作り出すことができる。治療に用いる場
合、本発明の作用物質は、生理的食塩水などの生理的に許容し得る担体と共に投
与し得る。本発明の治療組成物は担体または賦形剤をさらに含み得るが、その多
くは当業者に公知である。使用し得る賦形剤には、緩衝液（例えば、クエン酸塩
緩衝液、リン酸塩緩衝液、酢酸塩緩衝液、および重炭酸塩緩衝液）、アミノ酸、
尿素、アルコール、アスコルビン酸、リン脂質、タンパク質（例えば、血清アル
ブミン）、ＥＤＴＡ、塩化ナトリウム、リポソーム、マンニトール、ソルビトー
ルおよびグリセロールが含まれる。本発明の作用物質は、対応する投与経路に応
じて種々の方法で調剤し得る。例えば、経口摂取または注射用には溶液とするこ
とができ、経口摂取、吸入または局所投与用にはゲルまたは粉末とすることがで
きる。そのような製剤を調製する方法は周知であり、例えば、「Ｒｅｍｉｎｇｔ
ｏｎ’ｓＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅ」に見出すことがで
きる。

【００５１】投与経路も熟練した薬理学者および医師には周知であり、それらの経路には、
腹腔内、筋肉内、皮下および静脈内投与が含まれる。その他の経路には、頭蓋内
（例えば、大槽内または心室内）、眼窩内、眼、皮膜内、髄腔内、腹腔内、経粘
膜、局所、皮下、および経口投与が含まれる。ＩＬ−１５受容体を標的とする作
用物質の投与には、静脈内または動脈内経路が好ましいと考えられる。皮下経路
も、皮下組織がポリペプチドをゆっくり放出し得るポリペプチドにとって安定し
た環境を提供するので、頻繁に用いられるであろう。

【００５２】細胞ベース療法（遺伝子療法）の場合、細胞／組織／臓器は、治療タンパク質
が発現され、その後、移植された細胞／組織／臓器を介してレシピエント生物内
に放出されるように、移植前に、核酸組成物と共にインキュベート、侵出または
潅流させることによりトランスフェクトし得るであろう。同様に、細胞／組織／
臓器は、ドナー細胞／組織／臓器に付着している移植片関連免疫細胞を除去する
ために、移植前に治療タンパク質と共に潅流させるかまたは単純にインキュベー
トするだけの予備処置を施してもよいであろう（但し、これは、恐らく臨床関連
性を有していないであろう副次的側面に過ぎない）。細胞移植片の場合、細胞は
、移植するか、またはカテーテルを介して血管壁を通して注入することにより投
与し得る。場合により、細胞は、脈間系中に放出して投与することもあり、細胞
は、その後、脈間系から血流を介して分配され、かつ／または周囲組織中に移行
する（これは、島細胞の移植の際に行われ、この場合、島細胞は肝臓の門脈中に
放出され、次いで肝臓組織に移行する）。

【００５３】医療業界においては、任意の１人の患者用の用量は、患者の全身的健康状態、
性別、体重、体表面積および年齢だけでなく、投与される特定の化合物、投与時
間および経路、ならびに同時に投与される他の薬剤を含めた多くの要素によって
決まることは周知である。本発明のポリペプチドの用量は様々であろうが、静脈
内投与する場合、用量は、体重１ｋｇ当たり１μｇ〜１０ｍｇの規模のオーダー
、または血液量１Ｌ当たり０．０１ｍｇ〜１００ｍｇの規模のオーダーの量で投
与し得る。用量は、必要なら、１日につき１回以上投与してよく、治療は長期間
継続し得る。所与の用途に適した正しい用量の決定は、十分に当業者の能力の範
囲内である。

【００５４】（実施例）試薬本明細書に記載の研究には以下の試薬を用いた：組換えヒトＩＬ−２はホフマ
ン−ラ・ロシュ社、ニュージャージー州ナトリー所在から入手し；ラパマイシン
はワイエス−エアースト社、ニュージャージー州プリンストン所在から入手し；
シクロスポリン−Ａ（ＣｓＡ）はサンド社、ニュージャージー州イーストハノー
バー所在から入手し；ＲＰＭＩ−１６４０およびウシ胎児血清（ＦＣＳ）はバイ
オ・ウィタッカー社、メリーランド州ウォーカーズビル所在から入手し；ペニシ
リン、ストレプトマイシン、Ｇ４１８およびストレプトアビジン−ＲＥＤ６７０
はギブコ−ＢＲＬ社、メリーランド州ゲイザーズバーグ所在から入手し；デキサ
メタゾン、ＰＨＡ、リソザイム、ノニデット（Ｎｏｎｉｄｅｔ）Ｐ−４０、Ｎａ
Ｃｌ、ＨＥＰＥＳおよびＰＭＳＦはシグマ社、ミズーリ州セントルイス所在から
入手し；フィコール−ハイパック（Ｆｉｃｏｌ−Ｈｙｐａｑｕｅ）はファルマシ
ア・バイオテク社、スウェーデンのウプサラ所在から入手し；組換えヒトＩＬ−
１５および抗ヒトＩＬ−１５Ａｂはペプロ・テク社、ニュージャージー州ロッキ
ーヒル所在から入手し；抗ＦＬＡＧＡｂおよび抗ＦＬＡＧアフィニティービー
ズはインターナショナル・バイオテクノロジーズ社、コダック、コネティカット
州ニューヘブン所在から入手し；ｐＲｃＣＭＶはインビトロジェン社、カリフォ
ルニア州サンディエゴ所在から入手し；ゲニステインはＩＣＮバイオメディカ
ルズ社、カリフォルニア州アービン所在から入手し；ジスクシンイミジルスベレ
ート〔ｄｉｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｙｌｓｕｂｅｒａｔｅ（ＤＳＳ）〕はピアス
社、イリノイ州ロックフォード所在から入手し；制限エンドヌクレアーゼはニュ
ー・イングランド・バイラブス社、マサチューセッツ州ビバリー所在から入手し
；［^３Ｈ］ＴｄＲはニュー・イングランド・ニュークリア社、マサチューセッツ
州ボストン所在から入手し；蛍光染料結合抗体ＣＤ２５−ＰＥ^３、ＣＤ１４−Ｐ
Ｅ、ＣＤ１６−ＰＥ、ＣＤ１２２−ＰＥ、ＣＤ４−ＦＩＴＣ、ＣＤ８−ＦＩＴＣ
、ＩｇＧ１−ＰＥまたはＩｇＧ１−ＦＩＴＣはベックトン／ディッキンソン社、
カリフォルニア州サンホゼ所在から入手した。ＦＬＡＧペプチドはハーバード・
メディカル・スクール（ＨａｒｖａｒｄＭｅｄｉｃａｌＳｃｈｏｏｌ）のペ
プチド合成施設（ＰｅｐｔｉｄｅＳｙｎｔｈｅｓｉｓＦａｃｉｌｉｔｙ）で
合成された。

【００５５】ＦＬＡＧ−ＨＭＫ−ＩＬ−１５融合タンパク質の産生ヒトＩＬ−１５受容体発現の細胞パターンを研究するために、ＩＬ−１５融合
タンパク質の発現に用い得るプラスミドを構築した。このプラスミドは、１８ア
ミノ酸ＦＬＡＧ−ＨＭＫ配列に共有結合したＮ末端を有するＩＬ−１５ポリペプ
チド（ＦＬＡＧ−ＨＭＫ−ＩＬ−１５）をコードする。ＦＬＡＧ配列はビオチン
化高特異的抗ＦＬＡＧ抗体によって認識され（Ｂｌａｎａｒら，Ｓｃｉｅｎｃｅ
２５６：１０１４，１９９２；ＬｅＣｌａｉｒら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃ
ａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８９：８１４５，１９９２）、ＨＭＫ（ＨｅａｒｔＭ
ｕｓｃｌｅＫｉｎａｓｅｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎｓｉｔｅ、心筋キナーゼ
認識部位）配列は、放射性標識［^３２Ｐ］を分子に導入させる（Ｂｌａｎａｒら
，前掲，ＬｅＣｌａｉｒら，前掲）。

【００５６】プラスミドＦＬＡＧ−ＨＭＫ−ＩＬ−１５を構築するために、合成オリゴヌク
レオチド〔センス５′−ＧＧＡＡＴＴＣＡＡＣＴＧＧＧＴＧＡＡＴＧＴＡＡＴ
Ａ―３′（配列番号５；ＦｃｏＲＩ部位（下線）＋塩基１４５−１６２）；アン
チセンス５′−ＣＧＧＧＡＴＣＣＴＣＡＡＧＡＡＧＴＧＴＴＧＡＴＧＡＡ−３
′（配列番号５；ＢａｍＨＩ部位［下線］＋塩基４７２−４８９）〕を利用する
ＰＣＲにより、成熟ＩＬ−１５タンパク質をコードする３２２ｂｐのｃＤＮＡフ
ラグメントを増幅させた。鋳型ＤＮＡはＰＨＡ活性化ヒトＰＢＭＣから得た。Ｐ
ＣＲ産物を精製、ＥｃｏＲＩおよびＢａｍＨＩで消化し、上述のようにＥｃｏＲ
Ｉ−ＢａｍＨＩで消化したｐＡＲ（ＤＲＩ）５９／６０プラスミドにクローン化
した（Ｂｌａｎａｒら，Ｓｃｉｅｎｃｅ２５６：１０１４，１９９２；ＬｅＣ
ｌａｉｒら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８９：８１４５
，１９９２）。ｐＡＲ（ＤＲＩ）５９／６０プラスミドの主鎖は、枠中にＦＬＡ
ＧおよびＨＭＫ認識ペプチド配列をコードする配列を含んでいる（Ｂｌａｎａｒ
ら，Ｓｃｉｅｎｃｅ２５６：１０１４，１９９２；ＬｅＣｌａｉｒら，Ｐｒｏ
ｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８９：８１４５，１９９２）。

【００５７】ＦＬＡＧ−ＨＭＫ−ＩＬ−１５融合タンパク質の発現および精製上述のように、ＩＬ−１５関連融合構築物であるＦＬＡＧ−ＨＭＫ−ＩＬ−１
５をＢＬ−２１系Ｅ．ｃｏｌｉ中で発現させ、抗ＦＬＡＧコートビーズでアフィ
ニティー精製した（Ｂｌａｎａｒら，Ｓｃｉｅｎｃｅ２５６：１０１４，１９
９２；ＬｅＣｌａｉｒら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８
９：８１４５，１９９２）。０．１Ｍグリシン（ｐＨ３．０）で徹底的に洗浄し
た後、アフィニティーカラムから融合タンパク質を溶出させた。ＦＬＡＧ−ＨＭ
Ｋ−ＩＬ−１５を含む溶出液を、５０ｍＭトリス（ｐＨ７．４）および０．１
ＭＮａＣｌを含有する緩衝液に４℃で１８時間透析し、０．２μｍメンブラン
に通じて濾過し、−２０℃で貯蔵した。

【００５８】ＦＬＡＧ−ＨＭＫ−ＩＬ−１５はＩＬ−１５Ｒαサブユニットに結合する精製されたＦＬＡＧ−ＨＭＫ−ＩＬ−１５融合タンパク質が細胞表面ＩＬ−１
５受容体と相互作用するか否かを確認する試験を行った。上述のように、［^３２Ｐ］−ＦＬＡＧ−ＨＭＫ−ＩＬ−１５をマイトジェン、ＰＨＡで活性化させたＰ
ＢＭＣ培養細胞に添加した。相互作用性タンパク質を互いに永久結合させるため
に、化学架橋剤ジスクシンイミジルスベレート（ＤＳＳ）を添加した。細胞を洗
浄、溶解、遠心し、洗剤溶性タンパク質をＳＤＳ−ＰＡＧＥで分離した。ＳＤＳ
−ＰＡＧＥで分離したタンパク質をオートラジオグラフィーにかけると、ＦＬＡ
Ｇ−ＨＭＫ−ＩＬ−１５（１５ｋＤａ）とヒトＩＬ−１５Ｒαサブユニット（６
０〜６５ｋＤａ）を合わせた分子量に相当する単一の７５〜８５ｋＤａバンドが
現われた。このバンドがＩＬ−１５Ｒαと同一であることは、モル過剰のｈＩＬ
−１５の存在下に実施した架橋実験により確認された。これらの条件下では、放
射性標識された１５ｋＤａバンドを検出することはできなかった。したがって、
［^３２Ｐ］−ＦＬＡＧ−ＨＭＫ−ＩＬ−１５融合タンパク質のコンホメーション
により、マイトジェン活性化ＰＢＭＣ表面上に発現した６０〜６５ｋＤａのＩＬ
−１５Ｒαサブユニットに対する部位特異的結合が得られる。

【００５９】ＦＬＡＧ−ＨＭＫ−ＩＬ−１５はＩＬ−２Ｒβの発現を要求する生物活性増殖因子である次の一連の実験で、ＦＬＡＧ−ＨＭＫ−ＩＬ−１５融合タンパク質が生物活性
増殖因子として機能し得るか否かを確認するために試験を行った。ＰＨＡ活性化
ヒトＰＢＭＣは、ＦＬＡＧ−ＨＭＫ−ＩＬ−１５または［^３Ｈ］−ＴｄＲ組み込
みアッセイにより検出されるようなヒト組換えＩＬ−２に応答して増殖する。Ｉ
Ｌ−１５配列を欠くＦＬＡＧペプチドは細胞増殖を刺激しない。ＩＬ−２と同じ
ように、ＦＬＡＧ−ＨＭＫ−ＩＬ−１５融合タンパク質は、ＩＬ−２Ｒβサブユ
ニットを発現するＩＬ−２Ｒγ^＋ＢＡＦ−ＢＯ３細胞トランスフェクタントの増
殖を刺激する。しかし、ＦＬＡＧ−ＨＭＫ−ＩＬ−１５融合タンパク質は、ＩＬ
−２Ｒβ鎖配列を欠くベクターを用いてトランスフェクトした親ＢＡＦ−ＢＯ３
細胞の増殖は刺激しない。したがって、ＦＬＡＧ−ＨＭＫ−ＩＬ−１５は、細胞
増殖を刺激するために標的細胞上にＩＬ−２Ｒβ鎖の発現を要求する生物活性増
殖因子である。

【００６０】マイトジェン活性化ＰＢＭＣはＩＬ−１５Ｒαサブユニットを発現するが、休止ＰＢＭＣは発現しないＦＬＡＧ−ＨＭＫ−ＩＬ−１５融合タンパク質、ビオチン化抗ＦＬＡＧ抗体、
およびストレプトアビジン−ＲＥＤ６７０を用いて、サイトフルオロメトリー分
析により、ヒトＰＢＭＣ上のＩＬ−１５結合部位発現の検出を行った。試験した
ＰＢＭＣは、新規に単離したものまたはＰＨＡで活性化されたものである。これ
らの細胞を洗浄し、培地のみ、またはＦＬＡＧ−ＨＭＫ−ＩＬ−１５、続いて抗
ＦＬＡＧビオチン化Ａｂおよびストレプトアビジン−ＲＥＤ６７０と共にインキ
ュベートした。染色された細胞をフローサイトメトリーで分析した。ＰＨＡで活
性化されたＰＢＭＣはＩＬ−１５Ｒαタンパク質を発現したが、休止ＰＢＭＣは
発現しなかった。上述の架橋実験の結果と一致して、ＦＬＡＧ−ＨＭＫ−ＩＬ−
１５とＰＨＡ活性化ＰＢＭＣとの結合は、モル過剰のｒＩＬ−１５によってブロ
ックされるが、これは、ＩＬ−１５結合部位に対するＦＬＡＧ−ＨＭＫ−ＩＬ−
１５結合特異性を示している。活性化されたＣＤ４^＋細胞もＣＤ８^＋細胞もＩＬ
−１５α鎖を発現する。ＣＤ１４^＋（単球／マクロファージ）細胞およびＣＤ１
６^＋（ナチュラルキラー）細胞上にも、活性化により誘発されたＩＬ−１５Ｒα
鎖が検出された。

【００６１】ＩＬ−１５の結合にはＩＬ−２ＲαサブユニットおよびＩＬ−２Ｒβサブユニットは要求されないＦＬＡＧ−ＨＭＫ−ＩＬ−１５タンパク質およびＩＬ−２Ｒαサブユニットに
対する抗ＣＤ２５Ｍａｂで染色されたＰＨＡ活性化ＰＢＭＣのＦＡＣＳ分析によ
り、ＩＬ−１５ＲαサブユニットおよびＩＬ−２Ｒαサブユニットを共に発現す
る細胞集団と共に、上記サブユニットの片方だけを発現する細胞集団が示される
。ＦＬＡＧ−ＨＭＫ−ＩＬ−１５に結合しないＩＬ−２Ｒα^＋細胞が存在する。
１日だけＰＨＡで刺激したＰＢＭＣはほぼすべてＩＬ−１５Ｒα鎖かＩＬ−２Ｒ
β鎖のどちらかを発現するが、両タンパク質を発現することはない。それに対し
、ＰＨＡ刺激してから３日後には、はるかに大きな集団のＩＬ−１５Ｒα^＋、Ｉ
Ｌ−２Ｒβ^＋細胞（ダブル−ポジティブ）と、はるかに小さい集団のＩＬ−１５
Ｒα^＋細胞、ＩＬ−２Ｒβ⁻細胞（シングル−ポジティブ）が認められた。興味
深いことには、ＩＬ−１５に結合できないＩＬ−２Ｒβ^＋細胞が存在する。した
がって、ＩＬ−２Ｒβ鎖の発現はＩＬ−１５の結合には十分ではない。

【００６２】総合すれば、これらのデータは、ＩＬ−１５がＩＬ−１５Ｒα^＋細胞、ＩＬ−
２Ｒα⁻細胞およびＩＬ−２Ｒβ⁻細胞に結合し得ることを示している。ＩＬ−
１５と、ＩＬ−１５ＲαサブユニットでトランスフェクトされたＩＬ−２Ｒα⁻ 細胞、ＩＬ−２Ｒβ⁻細胞との相互作用を証明した実験からも同様な結論が得ら
れた（Ａｎｄｅｒｓｏｎら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７０：２９８６２，１
９９５；Ｇｉｒｉら，ＥＭＢＯＪ．１４：３６５４，１９９５）。ＩＬ−１５
ＩＬ−１５Ｒαサブユニットの発現が要求されるのに加えて、ＩＬ−２Ｒβおよ
びＩＬ−２Ｒγは細胞をＩＬ−１５誘発増殖に対して感受性にするために要求さ
れる。

【００６３】要約すると、上記に示した実験により：（ｉ）ＩＬ−１５Ｒαサブユニットは
、活性化マクロファージ、Ｔ細胞およびＮＫ細胞により急速発現されること、お
よび（ｉｉ）ＩＬ−１５Ｒαサブユニットの誘発はＣｓＡまたはデキサメタゾン
によりブロックされるがラパマイシンではブロックされないことが証明された。
さらに、これらの実験により、ＩＬ−１５結合にはＩＬ−１５Ｒαサブユニット
が必要かつ十分であること、およびＦＬＡＧ−ＨＭＫ−ＩＬ−１５融合タンパク
質はＩＬ−１５受容体の研究に極めて有用なツールであることが確認された。

【００６４】ＩＬ−２により誘発されたチロシンリン酸化タンパク質のパターンはＩＬ−１５により誘発されたものと同じであるＩＬ−２ＲβサブユニットはＩＬ−２シグナル伝達にもＩＬ−１５シグナル伝達にも不可欠である

【００６５】活性化Ｔ細胞の生存力を低下させ、それによって活性化Ｔ細胞を破壊すること
は、加速性アテローム性動脈硬化症、同種移植片拒絶反応、ある種の白血病およ
び他の免疫性病理学の一因となるリンフォカインおよびマイトジェンの産生を低
減させる１つの方法を提供する。さらに、ＩＬ−１５によって活性化されるシグ
ナル伝達経路をブロックすることも、加速性アテローム性動脈硬化症、同種移植
片拒絶反応、ある種の白血病および他の免疫性病理学の一因となるリンフォカイ
ンおよびマイトジェンの産生を低減させる１つの方法を提供する。Ｔ細胞は、活
性化されると増殖し、それらの細胞表面にインターロイキン受容体を発現する。
さらに、活性化Ｔ細胞は少なくとも３種のリンフォカイン、すなわち、γ型イン
ターフェロン、Ｂ細胞分化因子ＩＩ、およびＩＬ−３を放出する。これらのリン
フォカインは、同種移植片拒絶反応などの種々の望ましくない事象を発生させ得
る。それに対し、休止Ｔ細胞および長期持続記憶Ｔ細胞はリンフォカイン受容体
を発現しない。受容体発現におけるこの相違は、休止細胞に干渉せずに活性化免
疫細胞を標的にするための手段を提供する。ＩＬ−１５Ｒのあるサブユニットを
認識するように設計された分子は、活性化単球／マクロファージだけでなく、活
性化Ｔ細胞も認識するであろうから、これらの分子を使って細胞を選択的に阻害
するか、それらを破壊することができる。ＩＬ−１５Ｒサブユニットに結合する
がＩＬ−１５活性を欠くＩＬ−１５誘導体は、真のＩＬ−１５の結合および／ま
たは取り込みをブロックするので、本発明の方法において有用である。以下に記
載の突然変異ＩＬ−１５分子はそのような誘導体の実用例を提供する。

【００６６】ＩＬ−１５Ｒを標的とする突然変異ＩＬ−１５ポリペプチド突然変異ＩＬ−１５の遺伝子構築ＩＬ−２Ｒγサブユニットとの結合に重要な推定部位を標的とする二重突然変
異（Ｑ１４９Ｄ；Ｑ１５６Ｄ）を有するヒトＩＬ−１５タンパク質を設計した。
ＰＣＲ支援突然変異誘発を利用して、１４９位および１５６位の極性ではあるが
無荷電のグルタミン残基をアスパラギン酸の酸性残基に突然変異させた。合成セ
ンスオリゴヌクレオチド［５′−ＧＧＡＡＴＴＣＡＡＣＴＧＧＧＴＧＡＡＴＧＴ
ＡＡＴＡ−３′（配列番号：）；ＥｃｏＲＩ部位（下線を付したヘキサマー）
＋塩基１４５−１６２］および合成アンチセンスオリゴヌクレオチド［５′−Ｃ
ＧＧＧＡＴＣＣＴＣＡＡＧＡＡＧＴＧＴＴＧＡＴＧＡＡＣＡＴＧＴＣＧＡＣＡＡ
ＴＡＴＧＴＡＣＡＡＡＡＣＴＧＴＣＣＡＡＡＡＡＴ−３′（配列番号：）；Ｂ
ａｍＨＩ部位（下線を付したヘキサマー）＋塩基４３８−４８９；突然変異塩基
は個別に下線が付されている］を利用するＰＣＲにより、ＩＬ−１５の二重突然
変異体をコードするｃＤＮＡを増幅させた。鋳型は、ヒトＦＬＡＧ−ＨＭＫ−Ｉ
Ｌ−１５をコードするｃＤＮＡを含むプラスミドであった。増幅されたフラグメ
ントをＥｃｏＲＩ／ＢａｍＨＩで消化し、上述のように、ＥｃｏＲＩ／ＢａｍＨ
Ｉで消化したｐＡＲ（ＤＲＩ）５９／６０プラスミド中にクローン化した（Ｌｅ
Ｃｌａｉｒら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８９：８１４
５，１９８９）。１５６残基に突然変異が存在するか否かを、ＳａｌＩで消化し
て確認した。その突然変異により新規なＳａｌＩ制限部位が導入される。さらに
、標準技術に従ってＤＮＡ配列決定して突然変異を検証した。ＦＬＡＧ−ＨＭＫ
−ＩＬ−１５（Ｑ１４９Ｄ；Ｑ１５６Ｄ）二重突然変異タンパク質を産生させ、
精製し、ＦＬＡＧ−ＨＭＫ−ＩＬ−１５野生型タンパク質について上述したよう
に配列決定して検証した。

【００６７】これと同じ方法を用いて、１４９位か１５６位に単一のアミノ酸置換を含む突
然変異体を調製した。上述のように、これらの位置（１４９および１５６）は、
それぞれ、４８アミノ酸シグナル配列を欠く成熟ＩＬ−１５ポリペプチドの位置
１０１および１０８に対応する。

【００６８】同様に、この方法を用いて、１４９位もしくは１５６位のグルタミン残基の代
わりに任意の他のアミノ酸を組込むか、または１４９位および／または１５６位
以外の位置にアミノ酸置換を導入することができる。

【００６９】ＩＬ−１５関連タンパク質の存在下におけるＢＡＦ−ＢＯ３細胞の増殖二重突然変異ＩＬ−１５ポリペプチドは用量依存的にＢＡＦ−ＢＯ３の増殖を
阻害し得る：３０μｌ（約５０μｇ／ｍｌ）の二重突然変異ＩＬ−１５を加える
と、同じ濃度の二重突然変異ＩＬ−１５を２０μｌ加えたときよりも完全に増殖
を阻害した。

【００７０】ＰＨＡ刺激ヒトＰＢＭＣの増殖二重突然変異ＦＬＡＧ−ＨＭＫ−ＩＬ−１５ポリペプチドのＰＨＡ活性化ヒト
ＰＢＭＣ結合能を以下のように証明した。ＰＨＡ活性化ＰＢＭＣを洗浄し、培地
のみまたは二重突然変異ＦＬＡＧ−ＨＭＫ−ＩＬ−１５と共にインキュベートし
た。次いで、細胞を抗ＦＬＡＧビオチン化抗体と共にインキュベートし、ＲＥＤ
６７０に結合させたストレプトアビジンで染色した。染色された細胞をフローサ
イトメトリーで分析した。

【００７１】野生型ＦＬＡＧ−ＨＭＫ−ＩＬ−１５で染色した白血病細胞系のＦＡＣＳ分析上述のものと類似の一連の実験で、野生型ＦＬＡＧ―ＨＭＫ−ＩＬ−１５ポリ
ペプチドの白血病細胞結合能が証明された。治療した細胞は、白血病細胞系ＭＯ
ＬＴ−１４、ＹＴ、ＨｕＴ−１０２、およびベートイスラエル病院（Ｂｅｔｈ
ＩｓｒａｅｌＨｏｓｐｉｔａｌ）、マサチューセッツ州ボストン所在、で最近
確立され、２Ａおよび２Ｂと命名された細胞系から得た。培養細胞を洗浄し、培
地のみまたはＦＬＡＧ−ＨＭＫ−ＩＬ−１５野生型ポリペプチドを含む培地と共
にインキュベートした。次いで、細胞をビオチン化抗ＦＬＡＧ抗体と共にインキ
ュベートし、ＲＥＤ６７０に結合させたストレプトアビジンで染色した。染色さ
れた細胞をフローサイトメトリーで分析した。

【００７２】追加の突然変異ＩＬ−１５キメラポリペプチドの遺伝子構築いずれのＩＬ−１５突然変異体にも、抗原性標識を付した突然変異ＩＬ−１５
を提供するＦＬＡＧ―ＨＭＫ−ＩＬ−１５キメラの他に他の多くのポリペプチド
を結合させることができる。例えば、以下の方法に従って、ＩＬ−１５突然変異
体を抗体のＩｇＧサブクラスのＦｃフラグメントに結合させることができる。

【００７３】突然変異ＩＬ−１５／Ｆｃの遺伝子構築Ｆｃγ２ａのｃＤＮＡは、標準技術を用いて、ＩｇＧ２ａ分泌ハイブリドーマ
から、逆転写酵素〔ＭＭＬＶ−ＲＴ；ギブコ−ＢＲＬ社、ニューヨーク州グラン
ドアイランド所在、および合成オリゴ−ｄＴ（１２−１８）オリゴヌクレオチド
（ギブコＢＲＬ）で抽出したｍＲＮＡから調製することができる。突然変異Ｉ
Ｌ−１５のｃＤＮＡは、ＩＬ−１５特異的合成オリゴヌクレオチドを用いてＰＣ
Ｒによりプラスミド鋳型から増幅させ得る。

【００７４】５′オリゴヌクレオチドは、ユニークＮｏｔＩ制限部位４０ヌクレオチド５′
を翻訳開始コドンに挿入するように設計されており、一方、３′オリゴヌクレオ
チドは、突然変異ＩＬ−１５／Ｆｃ接合部でのユニークＢａｍＨＩ部位の生成に
対応するように、終止コドンを除去し、Ｃ末端Ｓｅｒ残基コドンの使用をＡＧＣ
からＴＣＧに変える。Ｆｃγ２ａドメインのｃＤＮＡ増幅に用いられる合成オリ
ゴヌクレオチドは、ヒンジ部の第１コドンにわたるユニークＢａｍＨＩ部位を生
成させて、終止コドンにユニークＸｂａＩ部位３′を導入するために、ヒンジ部
の第１コドンをＧｌｕからＡｓｐに変える。Ｆｃフラグメントは、非標的細胞破
壊性であるように、すなわち、補体系を活性化し得ないように改変し得る。非標
的細胞破壊性突然変異ＩＬ−１５構築物（ｍＩＬ−１５／Ｆｃ）を作るために、
オリゴヌクレオチド部位特異的突然変異誘発を用いて、Ｃ′１ｑ結合モチーフＧ
ｌｕ３１８、Ｌｙｓ３２０、Ｌｙｓ３２２をＡｌａ残基で置換する。同様に、Ｌ
ｅｕ２３５をＧｌｕで置換してＦｃγＲＩ結合部位を不活性化する。正しい翻訳
読み取り枠内のユニークＢａｍＨＩ部位でサイトカイン成分とＦｃ″成分を連結
させると、（１８アミノ酸ＩＬ−１５シグナルペプチドを含む）単一の４１１ア
ミノ酸ポリペプチドと合計１３のシステイン残基をコードする１，２３６塩基対
読み取り枠が生成する。分泌される成熟ホモダイマーＩＬ−１５／Ｆｃは、合計
して最大８つの分子内ジスルフィド結合および３つの重鎖内ジスルフィド結合と
、グリコシル化を除いて、約８５ｋＤａの分子量を有すると推測される。

【００７５】ｍＩＬ−１５Ｆｃ融合タンパク質の発現および精製ＮｏｔＩ−ＸｂａＩカセットとしての融合遺伝子を真核生物発現プラスミドｐ
Ｒｃ／ＣＭＶ（インビトロジェン社、カリフォルニア州サンディエゴ所在）中に
クローニングした後ＤＮＡ配列分析して、適切なｍＩＬ−１５／Ｆｃの遺伝子構
築を確認することができる。このプラスミドは、ＣＭＶプロモーター／エンハン
サー、ウシ成長ホルモンポリアでニル化シグナルおよびＧ４１８を用いて選択す
るためのネオマイシン耐性遺伝子を担持している。ｍＩＬ−１５／Ｆｃ融合遺伝
子を担持するプラスミドを、エレクトロポレーション（１．５ｋＶ／３μＦ／０
．４ｃｍ／ＰＢＳ）により、チャイニーズハムスター卵巣細胞（Ａｍｅｒｉｃａ
ｎＴｙｐｅＣｕｌｔｕｒｅＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎから入手し得るＣＨＯ−
Ｋ１）中にトランスフェクトし、１．５ｍｇ／ｍｌのＧ４１８（ジェネティシン
、ギブコ−ＢＲＬ）を含有する無血清Ｕｌｔｒａ−ＣＨＯ培地（バイオ・ウィタ
ッカー社、メリーランド州ウォーカービル所在）中で選択させる。サブクローニ
ング後、ＥＬＩＳＡ〔カリフォルニア州サンディエゴ所在のファーミンジェン（
ＰｈａｒＭｉｎｇｅｎ，ＳａｎＤｉｅｇｏ，ＣＡ）〕によりＩＬ−１５の上澄
液をスクリーニングして、高レベルの融合タンパク質を産生するクローンを選択
する。プロテインＡセファロースアフィニティークロマトグラフィーにかけた後
、ＰＢＳに透析し、０．２２μｍフィルターで滅菌して、培養細胞上澄液からｍ
ＩＬ−１５／Ｆｃ融合タンパク質を精製する。精製されたタンパク質は使用前に
−２０℃で貯蔵することができる。

【００７６】モノクローナルまたはポリクローナル抗ｍＩＬ−１５または抗Ｆｃγ一次抗体
を用いて、（ＤＴＴを用いる）還元条件下および（ＤＴＴを用いない）非還元条
件下にＳＤＳ−ＰＡＧＥの後でウエスターンブロット分析を実施して、融合タン
パク質のサイズおよびイソタイプ特異性を評価することができる。突然変異ＩＬ
−１５／Ｆｃの機能活性は、上述のような標準的なＴ細胞増殖アッセイにより評
価し得る。

【００７７】ｍＩＬ−１５およびＣＴＬＡ４／Ｉｇの投与以下の研究は、ＩＬ−１５Ｒを標的とする作用物質および同時刺激シグナルを
ブロックする作用物質で同種移植片レシピエントを治療すると、同種移植片の生
存が劇的に向上することを証明している。ストレプトゾトシンを注射して糖尿病
にしたマウスに生の島同種移植片を移植した。マウスをＣＴＬＡ４／Ｉｇおよび
ｍＩＬ−１５／Ｆｃで治療すると、ＤＢＡ／２Ｊ（Ｈ−２ｄ）ドナーからＢ６Ａ
Ｆ１（Ｈ−２ｂ／ｄ，ｋ）レシピエントへの同種移植片はすべて永久受容された
。治療しなかったマウスまたは１回だけプロテインで治療したマウスでは、永久
的生着は全く見られなかった。Ｂａｌｂ／ｃ（^Ｈ２ｄ）からＣ５７Ｂ１／６（^Ｈ ^２ｂ）への完全ＭＨＣミスマッチ島同種移植片は、治療しなかったマウスでは１
５日の平均生存期間、ＣＴＬＡ４／Ｉｇのみで治療したマウスでは３０日の平均
生存期間、ｍＩＬ−１５Ｆｃのみで治療したマウスでは３０日の平均生存期間後
に拒絶された。それに対し、ＣＴＬＡ４／ＩｇおよびｍＩＬ−１５／Ｆｃで治療
すると、治療したマウスのうち７０％を超えるもので移植片の永久生存が生じた
（図３も参照されたい）。さらに、免疫抑制治療を受けずに２回目のＢａｌｂ／
ｃ島同種移植片を受容した２匹のレシピエントでは安定した同種移植片耐性状態
が観測された。移植片組織およびリンパ節を定量的ＲＴ−ＰＣＲにより分析する
と、組み合わせ治療後に、Ｔ細胞受容体転写物に加えて多くのリンフォカイン遺
伝子の発現が著しく減少することも明らかになった。組織学的分析により、組み
合わせ治療が移植片を白血球浸潤から保護することが確認された。

【図面の簡単な説明】

【図１】野生型ＩＬ−１５核酸配列（配列番号１）およびその予測アミノ
酸配列（配列番号２）の図。

【図２】突然変異１Ｌ−１５核酸配列（配列番号３）およびその予測アミ
ノ酸配列（配列番号４）の図。１４９位グルタミンをコードする野生型コドン、
ＣＡＧ、および１５６位グルタミンをコードする野生型コドン、ＣＡＡは共に、
アスパラギン酸をコードするＧＡＣに変わっている〔これらの位置（１４９およ
び１５６）は、それぞれ、４８アミノ酸シグナル配列を欠く成熟ＩＬ−１５ポリ
ペプチドの１０１位および１０８位に対応する〕。

【図３】ドナーＤＢＡ２マウスからレシピエントＢ６ＡＦ１マウスへの島
細胞移植後の移植片生存％を示す折れ線グラフ。レシピエントは、治療しなかっ
たか、またはｍＩＬ−１５／Ｉｇ、ＣＴＬＡ４／ＩｇもしくはｍＩＬ−１５／Ｉ
ｇとＣＴＬＡ４／Ｉｇの組み合わせで治療した。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ａ６１Ｐ 17/00 Ａ６１Ｐ 17/02 17/02 17/06 17/06 19/02 19/02 25/00 25/00 29/00 29/00 １０１１０１ 31/18 31/18 37/04 37/04 37/06 37/06 Ｃ１２Ｐ 21/02 ＫＣ１２Ｎ 5/10 ＺＮＡＣ１２Ｑ 1/02 Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｎ 5/00 ＺＮＡＢＣ１２Ｑ 1/02 Ａ６１Ｋ 37/02 (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ，ＴＲ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＭＺ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＧ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＢＺ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ，ＤＺ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＭＺ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ (72)発明者チェン、シンシャオアメリカ合衆国 02446 マサチューセッツ州ブルックラインアルトンプレイス 59 ユニット６ (72)発明者キム、ヨンスアメリカ合衆国 02115 マサチューセッツ州ボストンワンディーコニスロード (72)発明者ラクラツ、シルヴィーフェラーリスイス国 1206 ジュネーブクレットデチャンペル 31 Ｆターム(参考） 4B063 QA01 QA19 QQ79 QX10 4B064 AG03 AG20 CA10 CA19 CC24 DA01 4B065 AA90X AB01 BA02 CA24 CA44 4C084 AA01 AA18 BA01 BA08 BA22 BA23 CA17 CA18 DC50 MA02 MA17 MA66 NA14 ZA021 ZA361 ZA891 ZA941 ZB091 ZB111 ZB151 ZC351 ZC651 4C085 AA13 CC03 EE03 GG02 GG03 GG04 GG06

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】インターロイキン−１５受容体（ＩＬ−１５Ｒ）を標的とす
る第１作用物質と、Ｔ細胞と抗原呈示細胞（ＡＰＣ）との間で伝達される同時刺
激シグナルを阻害する第２作用物質とを含む治療組成物。
【請求項２】第１作用物質がＩＬ−１５Ｒのサブユニットに結合する実質
的に純粋な突然変異ＩＬ−１５ポリペプチドを含む、請求項１に記載の治療組成
物。
【請求項３】サブユニットがＩＬ−１５Ｒαサブユニットである、請求項
２に記載の治療組成物。
【請求項４】突然変異ＩＬ−１５ポリペプチドが配列番号２の１４９位に
突然変異を有する、請求項３に記載の治療組成物。
【請求項５】突然変異ＩＬ−１５ポリペプチドが配列番号２の１５６位に
突然変異を有する、請求項３に記載の治療組成物。
【請求項６】突然変異ＩＬ−１５ポリペプチドがさらに配列番号２の１４
９位にも突然変異を有する、請求項５に記載の治療組成物。
【請求項７】配列番号２の１５６位の突然変異は、グルタミンがアスパラ
ギン酸に置き換わった置換である、請求項５に記載の治療組成物。
【請求項８】配列番号２の１４９位の突然変異は、グルタミンがアスパラ
ギン酸に置き換わった置換である、請求項６に記載の治療組成物。
【請求項９】突然変異ＩＬ−１５ポリペプチドは、配列番号２の１４９位
および１５６位のグルタミンがアスパラギン酸に置き換わった置換を有する、請
求項６に記載の治療組成物。
【請求項１０】第１作用物質がＩＬ−１５Ｒ産生細胞の除去を引き起こす
部分をさらに含む、請求項２に記載の治療組成物。
【請求項１１】ＩＬ−１５Ｒ産生細胞を溶解する部分がＩｇＧ分子のＦｃ
領域である、請求項１０に記載の治療組成物。
【請求項１２】第１作用物質が実質的に純粋な抗ＩＬ−１５Ｒ抗体を含む
、請求項１に記載の治療組成物。
【請求項１３】第２作用物質がＢ７分子に結合する実質的に純粋なポリペ
プチドを含む、請求項１に記載の治療組成物。
【請求項１４】Ｂ７分子がＢ７−１である、請求項１３に記載の治療組成
物。
【請求項１５】Ｂ７分子がＢ７−２である、請求項１３に記載の治療組成
物。
【請求項１６】Ｂ７に結合するポリペプチドがＣＴＬＡ４／Ｉｇを含むポ
リペプチドである、請求項１３に記載の治療組成物。
【請求項１７】Ｂ７に結合するポリペプチドが抗Ｂ７抗体を含む、請求項
１３に記載の治療組成物。
【請求項１８】第２作用物質がＣＤ２８に結合する実質的に純粋なポリペ
プチドを含む、請求項１に記載の治療組成物。
【請求項１９】ＣＤ２８に結合するポリペプチドが抗ＣＤ２８抗体を含む
、請求項１８に記載の治療組成物。
【請求項２０】第２作用物質がＣＤ４０Ｌに結合する実質的に純粋なポリ
ペプチドを含む、請求項１に記載の治療組成物。
【請求項２１】ＣＤ４０Ｌに結合するポリペプチドが抗ＣＤ４０Ｌ抗体を
含むポリペプチドである、請求項２０に記載の治療組成物。
【請求項２２】第２作用物質がＣＤ４０に結合する実質的に純粋なポリペ
プチドを含む、請求項１に記載の治療組成物。
【請求項２３】ＣＤ４０に結合するポリペプチドが抗ＣＤ４０抗体を含む
ポリペプチドである、請求項１に記載の治療組成物。
【請求項２４】患者の免疫応答を抑制する方法であって、患者に、ＩＬ−
１５Ｒを標的とする第１作用物質と、Ｔ細胞と抗原呈示細胞（ＡＰＣ）との間で
伝達される同時刺激シグナルを阻害する第２作用物質とを含む治療組成物を投与
するステップから成る方法。
【請求項２５】患者が、免疫疾患、特に自己免疫疾患を有するか、または
免疫疾患、特に自己免疫疾患を発症する恐れがある、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】自己免疫疾患が、全身性エリテマトーデス、シェーグレン
症候群、強皮症、混合結合組織病、皮膚筋炎、多発性筋炎、ライター症候群およ
びベーチェット症候群からなる群から選択されるリューマチ性疾患である、請求
項２５に記載の方法。
【請求項２７】自己免疫疾患が慢性関節リューマチである、請求項２５に
記載の方法。
【請求項２８】自己免疫疾患がＩ型糖尿病である、請求項２５に記載の方
法。
【請求項２９】自己免疫疾患が、橋本甲状腺炎およびバセドウ病からなる
群から選択される甲状腺の自己免疫疾患である、請求項２５に記載の方法。
【請求項３０】自己免疫疾患が、多発性硬化症、重症筋無力症および脳脊
髄炎からなる群から選択される中枢神経系の自己免疫疾患である、請求項２５に
記載の方法。
【請求項３１】自己免疫疾患が、尋常性天疱瘡、増殖性天疱瘡、落葉状天
疱瘡、セニーア−アッシャー症候群およびブラジル天疱瘡からなる群から選択さ
れる多様な天疱瘡である、請求項２５に記載の方法。
【請求項３２】自己免疫疾患が乾癬である、請求項２５に記載の方法。
【請求項３３】自己免疫疾患が炎症性腸疾患である、請求項２５に記載の
方法。
【請求項３４】患者が後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）を有する、請求
項２５に記載の方法。
【請求項３５】患者が、生物臓器、組織または細胞の移植片を受容してい
る、請求項２５に記載の方法。
【請求項３６】患者が血管損傷を受けている、請求項２５に記載の方法。
【請求項３７】患者がＩＩ型糖尿病を有する、請求項２５に記載の方法。
【請求項３８】ＩＬ−１５の受容体を発現する細胞を除去する方法であっ
て、前記細胞を、ＩＬ−１５Ｒを標的とする第１作用物質と、免疫系細胞と抗原
提示細胞との間で伝達される同時刺激シグナルを阻害する第２作用物質とを含む
治療組成物に暴露するステップから成る方法。
【請求項３９】前記細胞が免疫系細胞である、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】前記細胞が悪性細胞である、請求項３８に記載の細胞。
【請求項４１】患者を、請求項１に記載の治療組成物を用いて治療し得る
疾患または症状を有すると診断する方法であって、患者から組織試料を得るステ
ップと、ＩＬ−１５Ｒを標的とする抗原標識ポリペプチドに前記試料を暴露する
ステップとを含んでなり、前記ポリペプチドと試料中の細胞との結合は、試料細
胞が、ｉｎｖｉｖｏでＩＬ−１５Ｒを標的とする作用物質により結合され、そ
れによって、ｉｎｖｉｖｏで野生型ＩＬ−１５に応答して増殖することが抑止
され得ることを示す方法。
【請求項４２】ＩＬ−１５Ｒのサブユニットに結合する突然変異ＩＬ−１
５ポリペプチドとＢ７分子に結合するポリペプチドとを含む治療組成物を製造す
る方法であって、（ａ）発現系から突然変異ＩＬ−１５ポリペプチドを精製するステップ、（ｂ）発現系からＢ７に結合するポリペプチドを精製するステップ、および（ｃ）ＩＬ−１５ポリペプチドと、Ｂ７に結合するポリペプチドとを組み合
わせるステップから成る方法。
【請求項４３】患者の免疫応答を抑制するための、インターロイキン−１
５受容体（ＩＬ−１５Ｒ）を標的とする第１作用物質と、Ｔ細胞と抗原呈示細胞
（ＡＰＣ）との間で伝達される同時刺激シグナルを阻害する第２作用物質とを含
む治療組成物の使用方法。
【請求項４４】患者の免疫応答を抑制するための薬剤の製造における、イ
ンターロイキン−１５受容体（ＩＬ−１５Ｒ）を標的とする第１作用物質と、Ｔ
細胞と抗原呈示細胞（ＡＰＣ）との間で伝達される同時刺激シグナルを阻害する
第２作用物質とを含む治療組成物の使用方法。
【請求項４５】患者が、リューマチ性疾患、慢性関節リューマチ、Ｉ型糖
尿病、ＩＩ型糖尿病、甲状腺の自己免疫疾患、中枢神経系の自己免疫疾患、多様
な天疱瘡、炎症性腸疾患、後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）を有するか、生物
臓器、組織もしくは細胞の移植片を受容しているか、または血管損傷を受けてい
る、請求項４３または４４に記載の治療組成物の使用方法。