JP2003533178A

JP2003533178A - Ｏ−スーパーファミリー・コノトキシンペプチド

Info

Publication number: JP2003533178A
Application number: JP2001549679A
Authority: JP
Inventors: バルドメロ・エム・オリベラ; ジー・エドワード・カーティア; マレン・ワトキンズ; デイビッド・アール・ヒルヤード; ジェイ・マイケル・マッキントッシュ; リチャード・ティ・レイヤー; ロバート・エム・ジョーンズ
Original assignee: ユニバーシティ・オブ・ユタ・リサーチ・ファウンデーション; コグネティックス・インコーポレイテッド
Priority date: 1999-12-30
Filing date: 2000-12-28
Publication date: 2003-11-11
Also published as: US6762165B2; WO2001049312A2; CA2396529A1; AU2740401A; EP1246635A4; US20020173449A1; US20050214903A1; EP1246635A1

Abstract

(57)【要約】とりわけ、アミロイドまたはその凝集体とナトリウムチャネルとの間の相互作用の驚くべき観察に基づいた疾患（例えば、アルツハイマー病）のアッセイ方法ならびに診断および治療の方法が提供される。特に、この相互作用を変調する化合物を同定する方法、ならびにこの相互作用に基づく診断および治療の方法が提供される。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】本発明は、メリーランド州ベセスダのアメリカ国立予防衛生研究所の国立一般
医学研究所（National Institute of General Medical Sciences）によって授け
られた助成金番号ＰＯ１ＧＭ４８６７７下の政府援助によりなされた。合衆国
政府は本発明にある種の権利を有する。

【０００２】発明の背景本発明は、（本明細書において、Ｏ−スーパーファミリー・コノトキシンと称
する）約２０〜４０残基長の比較的短いペプチドに関し、これはイモガイ（cone
snail）の毒液中に微量で天然に入手可能であり、または天然に入手可能なペプ
チドに類似し、これらは好ましくは３つのジスルフィド結合を含む。

【０００３】本発明の背景を説明する場合、特に、実施に関するさらなる詳細を提供する場
合において、本明細書中で用いる刊行物および他の資料は、出典明示して本明細
書の一部とみなし、利便のため、以下の本文中では著者および日付で参照して、
添付の出典リストにおいて著者のアルファベット順で列記する。

【０００４】コーヌス（Conus）は、被食体に毒液を注入する捕食性海洋腹足動物（巻貝）
の属である。有毒なイモガイは、高度に発達した毒液器官を用いて、有毒なコノ
トキシンのそれらのカクテルをそれらの被食体に送達する。Conus magusのごと
き捕魚性種において、該イモガイは、そのサイホン中の化学的感覚器を用いて魚
の存在を検知する。該イモガイは閉められる場合その口を十分に延ばし、毒液を
含有する中空の銛様の歯を放つ。これは、魚を不動とさせ、イモガイがその吻の
端にて保持された歯を介してその口にそれを巻き込むのを可能とする。コーヌス
およびそれらの毒液に関する一般的な情報については、ウェブサイトアドレス h
ttp:/grimwade.biochem.unimelb.edu.au/cone/referenc.htmlを参照されたし。
被食体捕捉は、特殊なイオンチャネルおよび受容体サブタイプを標的とするペプ
チドの精巧な蓄積を通して達成される。各コーヌス種の毒液は、５０〜２００ペ
プチドのユニークな組を含有するらしい。毒液の組成は、種間および各種内の個
々の巻貝間で大きく異なり、各々は、その被食体を麻痺させるように最適に進化
している。毒液の有効成分は、小さなペプチド毒素、典型的には長さが１２〜３
０個のアミノ酸残基で、高密度のジスルフィド結合のために典型的には高度に制
限されたペプチドである。

【０００５】該毒液は、分離される場合、ある範囲の生物学的活性を示し；マウスに注射さ
れる場合、それらはある範囲のショックないし抑制の生理学的な応答を得る非常
に多数の異なるペプチドよりなる。最近の研究の焦点となっている毒液の麻痺性
成分は、α−、ω−およびμ−コノトキシンである。これらのコノトキシンの全
てが、神経伝達を妨害することによって作用するが、各々は、プロセスの異なる
点を標的として、これを達成する。該α−コノトキシンは、ニコチン性のリガン
ド感受性（ligand gated）チャネルを標的とし、該μ−コノトキシンは、電位依
存性（voltage-gated）ナトリウムチャネルを標的とし、ω−コノトキシンは、
電位依存性カルシウムチャネルを標的とする（Oliveraら、１９８５；Oliveraら
、１９９０）。例えば、結合は、α−、αＡ−およびΨ−コノトキシンとニコチ
ン性リガンド感受性イオンチャネルとの間；ω−コノトキシンと電位依存性カル
シウムチャネルとの間；μ−コノトキシンと電位依存性ナトリウムチャネルとの
間；δ−コノトキシンと電位依存性ナトリウムとの間；κ−コノトキシンと電位
依存性カリウムチャネルとの間；コナントキン（conantokin）とリガンド感受性
グルタミン酸（ＮＭＤＡ）チャネルとの間で確立されている。５つのδ−コノト
キシンが記載されている：ＧｍＶＩＡ（米国特許第５,７１９,２４６号）；ＰＶ
ＩＡ（米国特許第５,７３９,２７６号）；ＴｘＶＩＡ（Hillyardら、１９８９；
Fainzilberら、１９９１）；ＴｘＶＩＢ（Fainzilberら、１９９１）；ＮｇＶＩ
Ａ（Fainzilberら、１９９５）；およびＴｘIIA（Nakamuraら、１９９６）。コ
ーヌスペプチドおよびそれらのアミノ酸配列の部分的なリストについては、ウェ
ブサイトアドレスhttp://pir.georgetown.edu.を参照されたし。

【０００６】しかしながら、これらのペプチドの少数だけの構造および機能が現在決定され
ている。機能が決定されたペプチドでは、３つのクラスの標的：電位依存性イオ
ンチャネル；リガンド感受性イオンチャネルおよびＧタンパク結合受容体が評価
された。

【０００７】電位依存性イオンチャネルを標的とするコーヌスペプチドには、ナトリウムチ
ャネルの不活性化を遅延させるもの、ならびにナトリウムチャネル、カルシウム
チャネルおよびカリウムチャネルに特異的なブロッカーが含まれる。リガンド感
受性イオンチャネルを標的とするペプチドには、ＮＭＤＡおよびセロトニン受容
体のアンタゴニスト、ならびに競合的および非競合的なニコチン性受容体アンタ
ゴニストが含まれる。Ｇ−タンパク受容体に作用するペプチドには、ニューロテ
ンシンおよびバソプレシンの受容体アゴニストが含まれる。コノトキシンの新し
い医薬上の選択性は、少なくとも部分的に、ジスルフィド・ループ内の超可変性
アミノ酸と結合した特異的ジスルフィド結合骨格によって規定される（概説につ
きMcIntoshら、１９９８参照）。

【０００８】カリウムチャンネルは、細胞膜電位の維持によって、正常な生物学的機能にお
いて重要である大きくかつ種々の群の蛋白質を含む。これらのチャネルは、興奮
性細胞における静止膜電位を制御するのに活性であり、３つのクラス：電位依存
性Ｋ^＋チャネル、Ｃａ^＋＋活性化Ｋ^＋チャネルおよびＡＴＰ−感受性Ｋ^＋チャネ
ルに広く細分類できる。多数の障害が、これらのチャネルを介してカリウムイオ
ンの異常な流れと関連付けられる。各々のこれらのチャネルタイプを介するカリ
ウムイオンの流れを変調する薬剤の同定は、かかる異常な流れと関連付けられる
障害を治療するのに有用であろう。

【０００９】上記のコノペプチドの活性を有するさらなるコノトキシンペプチド、ならびに
さらなる活性を有するコノトキシンペプチドを同定することが望ましい。

【００１０】発明の概要本発明は、（本明細書において、Ｏ−スーパーファミリー・コノトキシンと称
する）約２０〜４０残基長の比較的短いペプチドに関し、これはイモガイの毒液
中に微量で天然に入手可能であり、または天然に入手可能なペプチドに類似し、
これらは好ましくは３つのジスルフィド結合を含む。Ｏ−スーパーファミリー・
コノトキシンには、ω−コノトキシン、κ−コノトキシン、δ−コノトキシン、
μＯ−コノトキシンおよびＧＳコノトキシンが含まれる。

【００１１】かくして、１つの具体例において、本発明は、表２に記載されたコノトキシン
ペプチドおよび表１に記載された対応するペプチドに指向される。

【００１２】第２の態様において、本発明は、表１に記載されたプロペプチドおよびプロペ
プチドまたはペプチドをコードする核酸配列に指向される。

【００１３】第３の具体例において、本発明は、本明細書に開示されたコノトキシンペプチ
ドの誘導体または医薬上許容される塩に指向される。誘導体の例には、該Ａｒｇ
残基は、Ｌｙｓ、オルニチン、ホモアルギニン、ノル−Ｌｙｓ、N−メチル−Ｌ
ｙｓ、Ｎ,Ｎ−ジメチル−Ｌｙｓ、Ｎ,Ｎ,Ｎ−トリメチル−Ｌｙｓまたはいずれ
かの合成塩基性アミノ酸によって置換でき；該Ｌｙｓ残基は、Ａｒｇ、オルニチ
ン、ホモアルギニン、ノル−Ｌｙｓまたはいずれかの合成塩基性アミノ酸によっ
て置換でき；該Ｔｙｒ残基は、^１２５Ｉ−Ｔｙｒ、メタ−Ｔｙｒ、オルト−Ｔｙ
ｒ、ノル−Ｔｙｒ、モノ−ハロ−Ｔｙｒ、ジ−ハロ−Ｔｙｒ、Ｏ−スルホ−Ｔｙ
ｒ、Ｏ−ホスホ−Ｔｙｒ、ニトロ−Ｔｙｒまたはいずれの合成ヒドロキシ含有ア
ミノ酸で置換でき；該Ｓｅｒ残基は、Ｔｈｒまたはいずれかの合成ヒドロキシル
化アミノ酸で置換でき；該Ｔｈｒ残基は、Ｓｅｒまたはいずれかの合成ヒドロキ
シル化アミノ酸で置換でき；該Ｐｈｅ残基は、いずれかの合成芳香族アミノ酸で
置換でき；該Ｔｒｐ残基は、Ｔｒｐ（Ｄ）、ネオ−Ｔｒｐ、ハロ−Ｔｒｐ（Ｄま
たはＬ）またはいずれか合成芳香族アミノ酸で置換でき；および該Ａｓｎ、Ｓｅ
ｒ、ＴｈｒまたはＨｙｐ残基はグリコシル化できる。該ハロゲンは、ヨード、ク
ロロまたはブロモ；好ましくは、ハロゲン置換−Ｔｙｒにつきヨードおよびハロ
ゲン置換−Ｔｒｐにつきブロモである。また、該Ｔｙｒ残基は、３−ヒドロキ
シルまたは２−ヒドロキシル異性体（各々、メタ−Ｔｙｒまたはオルト−Ｔｙｒ
）ならびに対応するＯ−スルホ−およびＯ−ホスホ−誘導体で置換できる。酸性
アミノ酸残基は、いずれの合成酸性アミノ酸、例えば、ＧｌｙおよびＡｌａのテ
トラゾリル誘導体で置換できる。脂肪族アミノ酸は、非天然脂肪族のｎ＝８以下
の分岐鎖または直鎖Ｃ_ｎＨ_２ｎ＋２を持つ合成誘導体によって置換できる。該Ｌ
ｅｕ残基は、Ｌｅｕ（Ｄ）で置換できる。該Ｇｌｕ残基は、Ｇｌａで置換できる
。該Ｇｌａ残基は、Ｇｌｕで置換できる。該Ｍｅｔ残基は、ノルロイシン（Ｎｌ
ｅ）で置換できる。該Ｃｙｓ残基は、ＤもしくはＬ配置であり得、所望によりホ
モシステイン（ＤもしくはＬ）で置換されていてもよい。

【００１４】合成芳香族アミノ酸の例には、限定されるものではないが、ニトロ−Ｐｈｅ、
４−置換−Ｐｈｅ（ここに、置換基はＣ_１−Ｃ_３アルキル、カルボキシル、ヒド
ロキシメチル、スルホメチル、ハロ、フェニル、−ＣＨＯ、−ＣＮ、−ＳＯ_３Ｈ
および−ＮＨＡｃである）のごときが含まれる。合成ヒドロキシ含有アミノ酸の
例には、限定されるものではないが、４−ヒドロキシメチル−Ｐｈｅ、４−ヒド
ロキシフェニル−Ｇｌｙ、２,６−ジメチル−Ｔｙｒおよび５−アミノ−Ｔｙｒ
のごときが含まれる。合成塩基性アミノ酸の例には、限定されるものではないが
、Ｎ−１−（２−ピラゾジリニル）−Ａｒｇ、２−（４−ピペリジニル）−Ｇｌ
ｙ、２−（４−ピペリニル）−Ａｌａ、２−［３−（２Ｓ）ピロリジニニル］−
Ｇｌｙおよび２−［３−（２Ｓ）ピロリジニニル］−Ａｌａが含まれる。これら
および他の合成塩基性アミノ酸、合成ヒドロキシ含有アミノ酸または合成芳香族
アミノ酸は、RSP Amino Acid Analogues，Inc.社、Worcester，MAによるおよび
そこから入手可能であるBuilding Block Index，Version ３.０（１９９９カタ
ログ、ヒドロキシ含有アミノ酸および芳香族アミノ酸については４〜４７頁に、
および塩基性アミノ酸については６６〜８７頁に記載されており；また、http：
//www.amino-acids.comも参照されたし）（これらをここに出典明示して本明細
書の一部とみなす）に記載されている。保護基を含有する残基は、通常の手法を
用いて脱保護される。合成酸性アミノ酸の例には、各々出典明示して本明細書の
一部とみなす、Ornsteinら（１９９３）によっておよび米国特許第５,３３１,０
０１号に記載されるごとき、カルボキシル、リン酸、スルホン酸ならびに合成テ
トラゾリル誘導体を含む酸性官能基を持つそれらの誘導体が含まれる。

【００１５】所望により、本発明のペプチドにおいては、Ａｓｎ残基は修飾されてＮ−グリ
カンを含んでいてもよく、ＳｅｒおよびＴｈｒおよびＨｙｐ残基は修飾されてＯ
−グリカン（例えば、ｇ−Ｎ、ｇ−Ｓ、ｇ−Ｔおよびｇ−Ｈｙｐ）を含んでいて
もよい。本発明によれば、グリカンはいずれかのＮ−、Ｓ−またはＯ−結合した
単−、二−、三−、多−またはオリゴ糖を意味し、それらは当該技術分野で知ら
れている合成または酵素法によって天然または修飾アミノ酸のいずれかのヒドロ
キシ、アミノまたはチオール基に結合することができる。グリカンを構成する単
糖には、Ｄ−アロース、Ｄ−アルトロース、Ｄ−グルコース、Ｄ−マンノース、
Ｄ−グロース、Ｄ−イドース、Ｄ−ガラクトース、Ｄ−タロース、Ｄ−ガラクト
サミン、Ｄ−グルコサミン、Ｄ−Ｎ−アセチル−グルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）
、Ｄ−Ｎ−アセチル−ガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）、Ｄ−フコースまたはＤ
−アラビノースが含まれ得る。これらの糖は、例えば、１以上のＯ−硫酸、Ｏ−
リン酸、Ｏ−アセチル、またはシアル酸のごとき酸性基ならびにこれらの組合せ
で、構造的に修飾されていてもよい。グリカンには、Ｄ−ペニシラミン２,５お
よびそのハロゲン化誘導体のごとき同様のポリヒドロキシ基またはポリプロピレ
ングリコール誘導体も含まれ得る。また、グリコシド結合はベータであって１−
４または１−３、好ましくは１−３である。グリカンとアミノ酸との間の結合は
アルファまたはベータであってもよく、好ましくはアルファであって１−である
。

【００１６】コアＯ−グリカンは、Van de Steenら（１９９８）（ここに出典明示して本明
細書の一部とみなす）によって記載されている。ムチン型Ｏ−結合オリゴ糖はＧ
ａｌＮＡｃ残基によってＳｅｒまたはＴｈｒ（または本ペプチドの他のヒドロキ
シル化残基）に結合している。単糖形成ブロックおよびこの第１のＧａｌＮＡｃ
残基に結合した結合は「コアグリカン」と定義され、そのうちの８が同定されて
いる。各コアグリカンについてグリコシド結合の型（向きおよび結合性）は定義
される。適当なグリカンおよびグリカン・アナログは、１９９９年１０月１９日
に出願された米国出願第０９／４２０,７９７号および１９９９年１０月１９日
に出願されたＰＣＴ出願番号ＰＣＴ／ＵＳ９９／２４３８０（各々、出典明示し
て本明細書の一部とみなす）にさらに記載されている。好ましいグリカンはＧａ
ｌ（β１→３）ＧａｌＮＡｃ（α１→）である。

【００１７】所望により、一般式Ｉのペプチドならびに前記した特定のペプチドにおいて、
Ｃｙｓ残基の対はＳｅｒ／（ＧｌｕもしくはＡｓｐ）、Ｌｙｓ／（Ｇｌｕもしく
はＡｓｐ）、Ｃｙｓ／（ＧｌｕもしくはＡｓｐ）またはＣｙｓ／Ａｌａ組合せの
ごとき、アイソテリック（isoteric）ラクタムまたはエステル−チオエーテル交
換でペアで置きかえることができる。公知の方法（Barnayら、２０００；Hruby
ら、１９９４；Bitanら、１９９７）による順次カップリングは、ラクタム架橋
での天然Ｃｙｓ架橋の置換を可能とする。チオエーテル・アナログは、RSP Amin
o Acid Analoguesから市販されているハロ−Ａｌａ残基を用いて容易に合成でき
る。

【００１８】また、本発明は、前記ペプチドの誘導体、およびアシル置換であるペプチド誘
導体に指向され、ここに、非環式の置換体（permutant）は、天然毒素の天然架
橋パターンを保持する。Craikら（２００１）参照。

【００１９】第４の具体例において、本発明は、本明細書に記載されたコノトキシンペプチ
ドの使用に指向される。本具体例の１つの態様において、本明細書に開示された
Ｏ−スーパーファミリー・コノトキシンまたはその医薬上許容される塩もしくは
溶媒化合物は、Ｎａ^＋チャネルを介するナトリウムイオン流を変調するのに用い
られる。これらのコノペプチドを用いて治療できる障害には、多発性硬化症、（
急性散在性脳脊髄炎、視神経脊髄炎、副腎脳白質萎縮症、急性横断性脊髄炎、進
行性多病巣性白質脳症のごとき）他の脱髄疾病、亜急性硬化性全脳脊髄炎（ＳＳ
ＰＥ）、異染性白質萎縮症、メルツバッヒャー−ペリツェーウス病、脊髄損傷、
ボツリヌス菌毒素中毒、ハンチントン舞踏病、（手根管症候群、尺骨神経麻痺の
ごとき）圧迫性およびエントラップの神経障害、（不整脈、鬱血心不全のごとき
）心血管障害、反応性神経膠症、高血糖、免疫抑制、コカイン中毒、癌、認識機
能障害、（イートン・ランバート症候群のごとき）神経伝達物質放出の欠損に起
因する障害、ならびにクラーレおよび神経筋遮断薬の作用の逆転が含まれる。

【００２０】本具体例の第２の態様には、対象における電位依存性イオンチャネル障害と関
連付けられる障害を治療する方法が提供され、ここに、該方法は、本明細書に記
載されたＯ−スーパーファミリー・コノトキシン、またはその医薬上許容される
塩もしくは溶媒化合物のメンバーの治療上の有効量を含む有効量の医薬組成物を
対象に投与することを特徴とする。かくして、これらのペプチドを用いて、抗痙
攣性薬剤または神経保護剤のごとき、または発作を治療するためのごとき、心血
管剤として、または痛みを管理するためのごとき神経障害を治療できる。これら
のペプチドをさらに用いて、痙攣、脊髄損傷または上部運動ニューロン症候群を
治療できる。

【００２１】本具体例の第３の態様において、対象による痛みの認知を低下／緩和／減少さ
せる方法、または対象における鎮痛、特に、局所的鎮痛を誘導するための方法を
提供し、ここに、該方法は、本明細書に記載されたＯ−スーパーファミリー・コ
ノトキシン、またはその医薬上許容される塩もしくは溶媒化合物のメンバーの治
療上有効量を含む有効量の医薬組成物を対象に投与することを特徴とする。

【００２２】本具体例の第４の態様において、対象におけるＡＴＰ−感受性Ｋ^＋チャネルを
活性化する（すなわち、開く）方法を提供し、ここに、該方法は、本明細書に記
載されたＯ−スーパーファミリー・コノトキシン、またはその医薬上許容される
塩もしくは溶媒化合物のメンバーの治療上有効量を含む有効量の医薬組成物を対
象に投与することを特徴とする。

【００２３】本具体例の第５の態様において、対象におけるプロトン依存性イオンチャネル
と関連する障害または疾患を治療する方法は、本明細書に記載されたＯ−スーパ
ーファミリー・コノトキシン、またはその医薬上許容される塩もしくは溶媒化合
物のメンバーの治療上有効量を含む有効量の医薬組成物を対象に投与することを
含むことを特徴とする。

【００２４】本発明のもう一つの具体例は、本発明の治療活性を模倣する化合物を同定する
方法が含まれ、ここに、該方法は、（ａ）テスト化合物に対して生物学的アッセ
イを行って、治療上の活性を測定し；次いで、（ｂ）該テスト化合物の生物学的
アッセイから得られた結果を、該ペプチドの生物学的アッセイから得られた結果
と比較する工程を含むことを特徴とする。該ペプチドは、いずれかの通常の標識
、好ましくは、入手可能なＴｙｒに対する放射性ヨウ素で標識される。かくして
、本発明は、放射性ヨウ素化Ｏ−スーパーファミリー・コノトキシンにも指向さ
れる。

【００２５】好ましい具体例の詳細な記載本発明は、（本明細書において、Ｏ−スーパーファミリー・コノトキシンと称
する）約２０〜４０残基長の比較的短いペプチドに関し、これはイモガイの毒液
中に微量で天然に入手可能であり、または天然に入手可能なペプチドに類似し、
これらは好ましくは３つのジスルフィド結合を含む。

【００２６】もう一つの態様において、本発明は、有効量のＯ−スーパーファミリー・コノ
トキシンペプチド、そのムテイン、そのアナログ、その活性断片または医薬上許
容される塩を含む医薬組成物に関する。

【００２７】１つの具体例において、かかる医薬組成物は、ナトリウムチャネルの不活性化
を遅延させる能力を有する本明細書に記載されたＯ−スーパーファミリー・コノ
トキシンのメンバーを含む。ナトリウムチャネルに対するＯ−スーパーファミリ
ーのメンバーのδ−コノトキシンペプチドの活性は、米国特許第５,７３９,２７
６号に記載され、それをここに出典明示して本明細書の一部とみなす。本具体例
による障害の治療は、それを必要とするヒトを含めたかかる生きている動物身体
に有効量の本発明の医薬組成物を投与する工程を含む。

【００２８】ナトリウムチャネルは、細胞膜電位の維持を介して、正常な生物学的機能にお
いて重要である大きくかつ種々の群の蛋白質を含む。Ｎａ^＋チャネルを介するナ
トリウムイオン流を変調する化合物についての治療上の適用は広範囲であり、非
常に広範囲の疾患および損傷状態の治療を含む。これらのコノペプチドを用いて
治療できる障害には、多発性硬化症、（急性散在性脳脊髄炎、視神経脊髄炎、副
腎脳白質萎縮症、急性横断性脊髄炎、進行性多病巣性白質脳症のごとき）他の脱
髄疾病、亜急性硬化性全脳脊髄炎（ＳＳＰＥ）、異染性白質萎縮症、メルツバッ
ヒャー−ペリツェーウス病、脊髄損傷、ボツリヌス菌毒素中毒、ハンチントン舞
踏病、（手根管症候群、尺骨神経麻痺のごとき）圧迫性およびエントラップの神
経障害、（不整脈、鬱血心不全のごとき）心血管障害、反応性神経膠症、高血糖
、免疫抑制、コカイン中毒、癌、認識機能障害、（イートン・ランバート症候群
のごとき）神経伝達物質放出の欠損に起因する障害、ならびにクラーレおよび神
経筋遮断薬の作用の逆転が含まれる。

【００２９】第２の具体例において、かかる医薬組成物は、電位依存性イオンチャネル、特
に、カルシウムチャネルにて作用する能力を有する本明細書に記載されたＯ−ス
ーパーファミリー・コノトキシンのメンバーを含み、かくして、障害または疾患
が、中枢神経系の電位依存性イオンチャネルの部分的または完全な遮断に応答性
であるヒトを含めた生きている動物身体の障害または疾患を治療するのに有用で
ある。カルシウムチャネルに対するＯ−スーパーファミリーのメンバーのω−コ
ノトキシンペプチドの活性は、米国特許第５,５８７,４５４号；第５,５５９,０
９５号および第５,８２４,６４５号に記載され、それらをここに出典明示して本
明細書の一部とみなす。本具体例による治療は、治療上有効量の本発明の医薬組
成物を、それを必要とするヒトを含めたかかる生きている動物身体に投与する工
程を含む。

【００３０】電位依存性カルシウムチャネルは、ニューロン中、および心筋、平滑筋および
骨格筋および他の興奮性細胞中に存在し、シナプス伝達におけるごとき、膜興奮
性、筋収縮および細胞分泌における様々な役割を演じることが知られている（Mc
Cleskey）。ニューロン細胞において、電位依存性カルシウムチャネルは、それ
らの電気生理学的ならびにそれらの生化学的（結合）特性によって分類されてい
る。６つのクラスの生理学的に区別されるカルシウムチャネル、すなわち、Ｔ、
Ｌ、Ｎ、Ｐ、ＱおよびＲ−タイプのチャネルが現在まで同定されている。

【００３１】脳内カルシウムの蓄積（カルシウム過負荷）は、酸素欠乏症、虚血、片頭痛、
および癲癇痙攣の後のごとき、脳の活動亢進期間後に見られることはよく知られ
ている。中枢神経系（ＣＮＳ）の細胞におけるカルシウムが制御されていない高
濃度は、前記疾病と関連する大部分の変性変化を引き起こすことが知られている
。脳細胞のカルシウムチャネルをブロックできる化合物は、従って、発作、酸素
欠乏症、虚血、片頭痛、精神病または癲癇、いずれの他の痙攣性の障害の治療に
おいて有用であり、それらの同一物と関連する変性変化の予防において有用であ
る。

【００３２】ＣＮＳにおけるいわゆるＬ−型カルシウムチャネルをブロックする化合物は、
ＣＮＳにおけるカルシウムの取込みを直接的にブロックすることによって前記障
害の治療に有用である。さらに、いわゆるＮ−およびＰ−型のカルシウムチャネ
ル、ならびに可能な他の型のカルシウムチャネルは、神経伝達物質の放出の変調
に関連付けられる。Ｎ−および／またはＰ−型のカルシウムチャネルをブロック
する化合物は、ＣＮＳのかかる活動亢進期間後に見られる神経伝達物質放出の増
強、特に、ＣＮＳのかかる活動亢進期間後のグルタミン酸放出の増強を阻害する
ことによって、前記の脳の活動亢進期間後のＣＮＳにおけるカルシウムの過負荷
を間接的でかつ非常に強力に防止する。さらに、Ｎ−および／またはＰ−型のカ
ルシウムチャネルのブロッカーは、問題の該化合物の選択性に依存して、アスパ
ラギン酸、ＧＡＢＡ、グリシン、ドーパミン、セロトニンおよびノルアドレナリ
ンのごとき様々な他の神経伝達物質の放出を阻害する。

【００３３】かくして、本発明のＯ−スーパーファミリー・コノトキシンのメンバーを含む
医薬組成物は、神経保護剤、心血管薬剤、抗痙攣薬、鎮痛剤または全身麻酔薬へ
の補助薬として有用である。「神経学上の障害または疾病」は、限定されるもの
ではないが、総体および限局性の虚血性および出血性の発作、頭外傷、脊髄損傷
、心停止または新生児仮死における低酸素症誘導の神経細胞損傷、あるいは癲癇
を含めた神経系の障害または疾患である。加えて、「神経学上の障害または疾病
」は、神経保護剤（neuroprotectant）、抗痙攣薬、鎮痛剤、および／または全
身麻酔における補助物として示され、有用であり、推奨または処方できる疾患状
態および疾患である。

【００３４】より詳細には、本発明は、癲癇の治療および緩和のための、および一般的な抗
痙攣剤として、Ｏ−スーパーファミリー・コノトキシンのメンバーの使用に指向
される。また、本発明は、典型的には、発作に続く低酸素症、酸素欠乏症または
虚血性疾患、脳血管事故、脳または脊髄外傷、心筋梗塞、身体的外傷、溺死、窒
息、分娩仮死または低血糖事象に関連した神経毒性損傷を低下させるためのこれ
らの化合物の使用に指向される。さらに、本発明は、急性および慢性の痛み、か
かる片頭痛、侵害受容性および神経障害性の痛みを含めた痛みを治療するための
Ｏ−スーパーファミリー・コノトキシンの使用に指向される。これらのペプチド
をさらに用いて、痙攣、脊髄損傷または上部運動ニューロン症候群を治療できる
。これらの化合物の他の使用は、米国特許第５,８５９,１８６号に記載され、そ
れをここに出典明示して本明細書の一部とみなす。

【００３５】「神経保護剤」は、神経の障害または疾患と関連するニューロン死を予防でき
る化合物である。「抗痙攣薬」は、単純部分発作、複合部分発作、痙攣重積状態
、および頭部手術を含めた続いての頭部外傷を引き起こすごとき外傷誘導発作に
よって生成した痙攣を減少できる化合物である。「鎮痛剤」は、麻酔または意識
喪失を生じない侵害受容性刺激に対する認知を変更することによって痛みを緩和
できる化合物である。「筋弛緩剤」は、筋肉緊張を低下させる化合物である。「
全身麻酔における補助物（adjunct）」は、意識喪失に関連した痛みを知覚する
能力の喪失を生じる麻酔剤と組み合せて有用な化合物である。

【００３６】本発明は、限定されるものではないが、総体および限局性の虚血性および出血
性の発作、頭外傷、脊髄損傷、心停止または新生児仮死における低酸素症誘導の
神経細胞損傷、癲癇、または望ましくない副作用のない他の痙攣性障害を含めた
神経系の障害および疾患の治療に有用な方法にさらに関連する。

【００３７】かくして、１の態様において、本発明は、対象による痛みの認知を低下／緩和
／減少させる方法、または対象における鎮痛を誘導するための方法を提供し、こ
こに、該方法は、本明細書に記載されたＯ−スーパーファミリー・コノトキシン
、またはその医薬上許容される塩もしくは溶媒化合物のメンバーの治療上有効量
を含む有効量の医薬組成物を対象に投与することを含む。その痛みは、急性、持
続性、炎症性または神経障害性の痛みであり得る。

【００３８】第２の態様において、本発明は、発作、頭または脊髄の外傷または損傷、酸素
欠乏症、低酸素症誘導の神経細胞損傷、虚血、片頭痛、精神病、不安、精神分裂
病、炎症、運動障害、癲癇、いずれかの他の痙攣性障害を治療する方法、または
対象における同一物と関連した変性変化の予防における方法を提供し、ここに、
該方法は、治療上有効量の本発明のＯ−スーパーファミリー・コノトキシン、ま
たはその医薬上許容される塩またはその溶媒化合物のメンバーを含む有効量の医
薬組成物を対象に投与することを含む。

【００３９】第３の具体例において、かかる医薬組成物は、痛みを治療するための局所麻酔
剤として有用である本明細書に記載されたＯ−スーパーファミリー・コノトキシ
ンのメンバーを含む。これらのコノペプチドは、長時間作用型の麻酔活性を有し
、特に、手術後の痛みのために急性に、または重篤な慢性の痛みの状態もしくは
上皮組織における痛みの治療のために髄腔内ポンプを介してのいずれかで投与さ
れた脊髄麻酔に有用である。ナトリウムチャネルに対するＯ−スーパーファミリ
ーのメンバーのμＯ−コノトキシンペプチドの活性は、２０００年６月９日に出
願された米国特許出願０９／５９０,３８６（国際出願番号ＰＣＴ／ＵＳ００／
１５７７９）に記載され、それをここに出典明示して本明細書の一部とみなす。
本具体例による治療は、治療上有効量の本発明の医薬組成物を、それを必要とす
るヒトを含めたかかる生きている動物身体に投与する工程を含む。

【００４０】より詳細には、１つの態様において、痛みは、外科的または医学的手法から由
来し、本明細書に記載されるＯ−スーパーファミリー・コノトキシンのメンバー
は、中枢神経系（ＣＮＳ）、例えば、脊髄麻酔のための脊椎に投与される。第２
の態様において、痛みは、例えば、形成外科、口内靡爛、火傷、咽喉痛、生殖器
病変、上部または下部胃腸の気管支鏡法または内視鏡検査、挿管、皮膚擦傷また
は化学的皮膚剥離の結果としての上皮組織の損傷または喪失と関連する上皮組織
領域に存在し、本明細書に記載されるＯ−スーパーファミリー・コノトキシンの
メンバーを投与して、関連する痛みを緩和する。

【００４１】第４の態様において、かかる医薬組成物は、ＡＴＰ感受性Ｋ^＋チャネルを活性
化する（すなわち、開く）能力を有するＯ−スーパーファミリー・コノトキシン
のメンバーを含み、かくして、それは、ヒトを含めた生きている動物身体の障害
または疾患を治療するのに有用であり、障害または疾患は、ＡＴＰ感受性Ｋ^＋チ
ャネルの活性化に敏感である。ナトリウムチャネルに対するＯ−スーパーファミ
リーのメンバーのκ−コノトキシンの活性は、２０００年９月２１日に出願され
た米国特許出願第（国際出願番号ＰＣＴ／ＵＳ００／２５８２７）に記
載され、それらをここに出典明示して本明細書の一部とみなす。本具体例による
治療は、治療上有効量の本発明の医薬組成物を、それを必要とするヒトを含めた
、かかる生きている動物身体に投与する工程を含む。かくして、本発明は、対象
における心虚血、、ニューロン虚血、視覚虚血または喘息を治療する方法を提供
し、ここに、該方法は、本明細書に記載されたＯ−スーパーファミリー・コノト
キシン、またはその医薬上許容される塩もしくは溶媒化合物のメンバーの治療上
有効量を含む治療上有効量の医薬組成物を含む有効量の医薬組成物を対象に投与
することを特徴とする。

【００４２】第５の具体例において、かかる医薬組成物は、プロトン依存性イオンチャネル
に対して作用する能力を有するＯ−スーパーファミリー・コノトキシンのメンバ
ーを含み、かくして、ヒトを含めた生きている動物身体の障害、疾患または状態
を治療するのに有用であり、障害、疾患または状態は、プロトン依存性（proton
-gated）イオンチャネルの部分的および完全な遮断に応答性である。Ｏ−スーパ
ーファミリーのこれらのメンバーは、プロトン依存性イオンチャネルに拮抗する
ので、それらは、鎮痛剤として、特に、炎症、血腫、心臓もしくは筋肉の虚血ま
たは癌と関連する痛みに有用である。かくして、本発明の１つの態様として、本
明細書に開示されたペプチドおよび誘導体は、鎮痛剤、すなわち、痛みの認知に
おける低下または鎮痛の導入に有用である。本具体例による治療は、治療上有効
量の本発明の医薬組成物を、それを必要するヒトを含めたかかる生きている動物
身体に投与する工程を含む。

【００４３】本発明のコノトキシンペプチドは、コーヌス毒液からの単離によって同定さ
れる。あるいは、本発明のコノトキシンペプチドは、逆転写−ポリメラーゼ鎖反
応（ＲＴ−ＰＣＲ）の使用または縮退プローブの使用のごとき通常の技術を用い
て、種々のコーヌス種のｃＤＮＡライブラリーをスクリーニングすることによる
組換えＤＮＡ技術を用いて同定される。ＲＴ−ＰＣＲ用のプライマーは、縮退プ
ローブを用いて単離されたコノトキシンペプチド遺伝子のシグナル配列および３
'非翻訳領域における保存配列に基づいている。縮退プローブにハイブリダイズ
するクローンを分析して、評価されるべき特定のｃＤＮＡライブラリーにつきｃ
ＤＮＡクローニング部位の間に挟まれるＰＣＲプライマーを用いて測定されるご
とく、最小サイズの必要性、すなわち、約３００個のヌクレオチドを有するクロ
ーンに合うものを同定する。次いで、これらの最小サイズのクローンおよびＲＴ
−ＰＣＲによって生成したクローンを配列決定する。次いで、該配列をＯ−スー
パーファミリー・コノトキシンペプチドについて前記された特徴を有するペプチ
ドの存在につき調べた。

【００４４】本明細書に記載されたコノトキシンペプチドは、化学的に合成するのに十分に
小さい。前記のコノトキシンペプチドを調製するための一般的な化学合成は、後
記されている。また、コノトキシンペプチドの種々のものが、米国特許第４,４
４７,３５６号（Oliveraら、１９８４）；第５,５１４,７７４号；第５,７１９,
２６４号；および第５,５９１,８２１号、ならびにＰＣＴ公開出願ＷＯ９８／
０３１８９（これらをここに出典明示して本明細書の一部とみなす）に記載され
た技術を用いて、特定のコーヌス種からの単離および精製によって得ることがで
きる。

【００４５】本発明のコノトキシンペプチドはイモガイからの精製によって得ることができ
るが、個々の巻貝から得ることができるコノトキシンペプチドの量は非常に少量
であるため、所望の実質的に純粋なコノトキシンペプチドは、固相戦略を用いる
化学合成によって商業的に価値ある量にて現実には最良に得る。例えば、単一の
イモガイからの収量は約１０マイクログラム以下のコノトキシンペプチドであり
得る。「実質的に純粋」とは、該ペプチドが同一タイプの他の生物学的分子の実
質的な不存在下にて存在することを意味し；それは好ましくは少なくとも約８５
％純度、好ましくは少なくとも約９５％純度の量で存在する。生物学的に活性な
コノトキシンペプチドの化学合成は、もちろんアミノ酸配列の正確な決定の過程
に依存する。

【００４６】また、コノトキシンペプチドは、当該技術分野でよく知られている組換えＤＮ
Ａ技術によっても産生できる。かかる技術はSambrookら（１９８９）によって記
載されている。注目する遺伝子（すなわち、適当なコノトキシンペプチドをコー
ドする遺伝子）は、標準的手法を用いることによって適当な発現ベクターのクロ
ーニング部位に挿入できる。これらの手法は、当業者によく知られている。次い
で、注目する遺伝子を含有する発現ベクターを用いて、所望の細胞系をトランス
フェクトできる。カルシウム共沈殿、ＤＥＡＥ−デキストラントランスフェクシ
ョンまたはエレクトロポレーションのごとき標準的トランスフェクション手法を
利用できる。非常に広範囲の宿主／発現ベクターの組合せを用いて、注目するコ
ノトキシンペプチドをコードする遺伝子を発現できる。かかる組合せは当業者に
よく知られている。このようにして産生したペプチドを単離し、要すれば還元し
、酸化して、正確なジスルフィド結合を形成させる。

【００４７】本発明のペプチド中にジスルフィド結合を形成させる１つの方法は、冷室温下
または室温にて長時間の線状ペプチドの空気酸化である。この手法の結果、実質
量の生物活性のジスルフィド結合ペプチドが創製する。酸化されたペプチドは逆
相高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）等を用いて分画して、異なる結合立
体配置を有するペプチドを分離する。その後、これらの画分を天然物質の溶出と
比較するか、または単純なアッセイ方法を用いることによって、最大の生物学的
効力の正確な結合を有する特定の画分を容易に決定する。しかしながら、より低
い生物効力の他の画分の存在から生じる希釈のため、幾分より高い投与量が必要
となり得る。

【００４８】該ペプチドは、絶対固相技術、部分固相技術、フラグメント縮合または古典的
な溶液カップリングによるごとき、適当な方法によって合成される。

【００４９】通常の液相ペプチド合成においては、ペプチド鎖は、構成アミノ酸を所望の順
序で伸長するペプチド鎖に付加する一連のカップリング反応によって調製できる
。種々のカップリング試薬、例えば、ジシクロヘキシルカルボジイミドまたはジ
イソプロピルカルボニルジイミダゾール、種々の活性エステル、例えば、Ｎ−ヒ
ドロキシフタルイミドまたはＮ−ヒドロキシ−スクシンイミドのエステル、なら
びに種々の切断試薬を用いて溶液中で反応を行う、続いて中間体を単離および精
製することはよく知られている古典的なペプチド法である。古典的な溶液合成は
、論文「Methoden der Organischen Chemie（Houben−Weyl）： Synthese von P
eptiden」（１９７４）に詳記されている。絶対的固相合成の技術は、テキスト
ブック、「Solid‐Phase Peptide Synthesis」（StewartおよびYoung，１９６９
）に記載されており、米国特許第４,１０５,６０３号（Ｖａｌeら、１９７８）
の開示によって例示されている。合成のフラグメント縮合法は米国特許第３,９
７２,８５９号（１９７６）に例示されている。他の利用可能な合成は、米国特
許第３,８４２,０６７号（１９７４）および第３,８６２,９２５号（１９７５）
によって例示されている。γ−カルボキシグルタミン酸残基を含有するペプチド
の合成は、Rivierら（１９８７）、Nishiuchiら（１９９３）およびZhouら（１
９９６）によって例示されている。

【００５０】かかる化学合成に共通しているのは、当該基が最終的に除去されるまで、その
部位で化学反応が起こるのを妨ぐであろう適当な保護基で種々のアミノ酸部位の
不安定な側鎖基を保護することである。また、通常共通しているのは、その原子
団がカルボキシル基において反応し、続いてα−アミノ保護基を選択的に除去し
てその位置で続く反応が起こることを許容する間に、アミノ酸または断片上のα
−アミノ基を保護することである。したがって、かかる合成における工程として
、不安定側鎖を有する残基の種々のものに結合した適当な側鎖保護基を有するペ
プチド鎖中に所望の順序で位置する各アミノ酸残基を含む中間体化合物を生成す
ることが共通している。

【００５１】側鎖アミノ保護基の選択に関する限り、一般的に、合成中α−アミノ基の脱保
護の間には除去されないものが選択される。しかしながら、いくらかのアミノ酸
、例えばＨｉｓについては、保護は一般的には必要でない。ペプチド合成に用い
られるべき特定の側鎖保護基の選択においては、以下の一般規則に従う：（ａ）
保護基は好ましくはカップリング条件下にてその保護特性を保持し、かつ、分裂
しないこと、（ｂ）保護基は合成の各工程にてα−アミノ保護基を除去するため
に選択した反応条件下で安定でなければならないこと、ならびに、（ｃ）側鎖保
護基は、ペプチド鎖を望ましくないように変化させない反応条件下にて、所望の
アミノ酸配列を含む合成の完了の際に、除去可能でなければならないこと。

【００５２】組換えＤＮＡ技術を用いてこれらのペプチドの多くまたは全てでさえ調製する
ことが可能である。しかしながら、ペプチドをそのように調製しない場合には、
当該技術分野で知られている他の等価な化学合成も先に述べたごとく用い得るが
、それを好ましくはメリフィールド固相合成を用いて調製する。固相合成は、保
護α−アミノ酸を適当な樹脂にカップリングさせることによって、ぺプチドのＣ
−末端から開始される。かかる出発物質は、α−アミノ−保護アミノ酸を、エス
テル結合によりクロロメチル化樹脂もしくはヒドロキシメチル樹脂に結合させる
ことによって、あるいは、アミド結合によってベンズヒドリルアミン（ＢＨＡ）
樹脂またはパラメチルベンズヒドリルアミン（ＭＢＨＡ）樹脂に結合させること
によって調製できる。ヒドロキシメチル樹脂の調製は、Bodanskyら（１９６６）
によって記載されている。クロロメチル化樹脂はBio Rad Laboratories社（Rich
mond、CA）およびLab. Systems，Inc.社から市販されている。かかる樹脂の調製
は、StewartおよびYoung（１９６９）によって記載されている。ＢＨＡおよびＭ
ＢＨＡ樹脂支持体は市販されており、合成すべき所望のポリペプチドがＣ−末端
に非置換アミドを有する場合に一般的に用いられる。したがって、式−Ｏ−ＣＨ_２ −樹脂支持体、−ＮＨＢＨＡ樹脂支持体または−ＮＨ−ＭＢＨＡ樹脂支持体
を有するもののごとく、固体樹脂支持体は当該技術分野で知られているいずれの
ものであってもよい。未置換アミドが望まれる場合、切断がアミドを直接的に与
えるためにＢＨＡまたはＭＢＨＡ樹脂の使用が好ましい。Ｎ−メチルアミドが望
まれる場合、それはＮ−メチルＢＨＡ樹脂から生成することができる。他の置換
されたアミドが所望ならば、米国特許第４,５６９,９６７号の教示（Kornreich
ら、１９８６）を用いることができ、あるいは、遊離酸以外のなお他の基がＣ−
末端に望まれる場合、Houben−Weylテキスト（１９７４）に記載された古典的方
法を用いてペプチドを合成するのが好ましいであろう。

【００５３】ＢｏｃまたはＦｍｏｃによって、および側鎖保護基によって保護されたＣ−末
端アミノ酸は、適当には、Ｃ−末端に遊離酸を有するペプチドを合成すべき場合
、まず、攪拌しつつ約６０℃にて２４時間、ＤＭＦ中のＫＦを用い、K.Horikiら
（１９７８）に記載された手法に従って、クロロメチル化樹脂にカップリングさ
せることができる。ＢＯＣ−保護アミノ酸を樹脂支持体にカップリングさせた後
に、塩化メチレン中のトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）またはＴＦＡ単独を用いるこ
とによって、α−アミノ保護基を除去する。脱保護は約０℃と室温との間の温度
で行う。ジオキサン中のＨＣｌのごとき他の標準的な切断試薬および特異的α−
アミノ保護基の除去のための条件は、SchroderおよびLubke（１９６５）に記載
されているごとく使用できる。

【００５４】 α−アミノ保護基の除去後、残りのα−アミノ−および側鎖−保護アミノ酸を
所望の順序でステップ−ワイズでカップリングさせて本明細書に前記に定義した
中間体化合物を得るか、あるいは別法として、合成中に各アミノ酸に別々に付加
し、そのうちの幾つかは固相反応器に添加する前に互いにカップリングさせ得る
。適当なカップリング試薬の選択は当業者の範囲内にある。カップリング試薬と
して特に適当なのは、Ｎ,Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＨｏＢｔま
たはＨｏＡｔの存在下でのＤＣＣ、ＤＩＣ、ＨＢＴＵ、ＨＡＴＵ、ＴＢＴＵ）で
ある。

【００５５】ペプチドの固相合成に用いる活性化試薬は、ペプチドの技術分野でよく知られ
ている。適当な活性化試薬の例は、Ｎ,Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミドお
よびＮ−エチル−Ｎ’−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミドのごと
きカルボジイミドである。他の活性化試薬およびペプチド・カップリングにおけ
るそれらの使用は、SchroderおよびLubke（１９６５）ならびにKapoor（１９７
０）によって記載されている。

【００５６】各保護アミノ酸またはアミノ酸配列を約２倍以上の過剰量で固相反応器に導入
し、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）：ＣＨ_２Ｃｌ_２（１：１）の媒体中または
ＤＭＦもしくはＣＨ_２Ｃｌ_２単独中でカップリングを行い得る。中間体カップリ
ングが起こる場合、次のアミノ酸のカップリングより前のα−アミノ保護基の除
去前にカップリング手法を繰り返す。手動で行う場合、合成の各段階でのカップ
リング反応の成功は、好ましくは、Kaiserら（１９７０）によって記載されてい
るごとく、ニンヒドリン反応によってモニターする。カップリング反応は、Beck
man ９９０自動合成器におけるように、Rivierら（１９７８）において報告され
ているごときプログラムを用いて自動的に行い得る。

【００５７】所望のアミノ酸配列が完成した後に、液体フッ化水素またはＴＦＡ（Ｆｍｏｃ
化学を用いる場合）のごとき試薬を用いる処理によって、中間体ペプチドを樹脂
支持体から取り外すことができ、それは、樹脂からペプチドを切断するだけでは
なく、全ての残存する側鎖保護基および以前に除去されていない場合には、Ｎ末
端のα−アミノ保護基をも切断して、ペプチドを遊離酸の形態で得ることができ
る。配列中にＭｅｔが存在する場合、好ましくは、ＨＦを用いて樹脂からペプチ
ドを切断する前にトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）／エタンジチオールを用いて最初
にＢｏｃ保護基を除去して、潜在的なＳ−アルキル化を排除する。フッ化水素ま
たはＴＦＡを切断に用いる場合には、アニソール、クレゾール、ジメチルスルフ
ィドおよびメチルエチルスルフィドのごとき１以上のスカベンジャーを反応容器
に含ませる。

【００５８】ペプチド−樹脂の一部である場合のペプチドの環化とは対照的に、好ましくは
、線状ペプチドの環化に影響してＣｙｓ残基間の結合を創製する。かかるジスル
フィド環化結合をもたらすために、当該技術分野でよく知られているごとく、ア
ンモノリシスによって、完全に保護されたペプチドをヒドロキシメチル化樹脂ま
たはクロロメチル化樹脂支持体から切断して、完全に保護されたアミド中間体を
得ることができ、その後、それを適当に環化および脱保護することができる。別
法として、脱保護ならびに上記の樹脂またはベンズヒドリルアミン（ＢＨＡ）樹
脂もしくはメチルベンズヒドリルアミン（ＭＢＨＡ）からのペプチドの切断は、
フッ化水素酸（ＨＦ）またはＴＦＡを用いて０℃で行うことができ、その後、上
記のように酸化できる。

【００５９】また、自動合成器を用いてもペプチドが合成される。Advanced Chemtech ３５
７自動ペプチド合成器を用いて、Ｃ末端にて開始してＭＢＨＡＲｉｎｋ樹脂（
典型的には１００ｍｇの樹脂）にアミノ酸を順次カップリングさせる。カップリ
ングは、Ｎ−メチルピロリジノン（ＮＭＰ）中の１，３−ジイソプロピルカルボ
ジイミドを用いるか、または２−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１
，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴ
Ｕ）およびジエチルイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）によって行う。ＦＭ
ＯＣ保護基は、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中のピペリジンの２０％溶液で
の処理によって除去する。その後、樹脂をＤＭＦ（２回）、続いてメタノールお
よびＮＭＰで洗浄する。

【００６０】また、前記のコノトキシンペプチドのアナログまたは活性断片のムテインは本
明細書に含まれる。Hammerlandら, Eur. J. Pharmacol., ２２６, pp２３９−２
４４（１９９２）参照。前記のコノトキシンペプチドのアナログまたは活性断片
の、誘導体ムテインは、米国特許第５,５４５,７２３号（特に、第２欄、第５０
行〜第３欄、第８行）；第５,５３４,６１５号（特に、第１９欄、第４５行〜第
２２欄、第３３行）；および第５,３６４,７６９号（特に、第４欄、第５５行〜
第７欄、第２６行）（各々をここに出典明示して本明細書の一部とみなす）に概
説されたごとき保存的アミノ酸置換を含めた公知の手法により合成できる。

【００６１】有効成分として本発明の化合物またはその医薬上許容される塩または溶媒化合
物を含有する医薬組成物は、慣用的な医薬調剤技術に従って調製できる。例えば
、Remington's Pharmaceutical Sciences、第１８版（１９９０，Mack Publishi
ng Co.社，Easton，PA）を参照されたし。典型的には、治療上有効量の有効成分
は医薬上許容される担体と混合されるであろう。担体は、投与、例えば静脈内、
経口または非経口、に望ましい製剤の形態に依存して非常に様々な形態を取るこ
とができる。該組成物は、さらに、抗酸化剤、安定化剤、保存料等を含有できる
。送達方法については、米国特許第５,８４４,０７７号（ここに出典明示して本
明細書の一部とみなす）を参照されたし。

【００６２】「医薬組成物」とは、医薬投与につき適当な物理的に区別される統一性のある
部分を意味する。「投与単位形態における医薬組成物」とは、医薬投与につき適
当な物理的に区別される統一性のある単位を意味し、各々は、担体と組み合わせ
たおよび／または包被内に入れられた活性化合物の毎日用量、複数（４回まで）
またはサブマルチプル（４０回より下）の毎日用量を含有する。該組成物が毎日
用量、または毎日用量の半分または１／３または１／４を含むかは、該医薬組成
物が、１日当り１回または例えば、２、３または４回投与されるべきかに依存す
るであろう。

【００６３】本明細書に用いられる「塩」とは、無機または有機の酸および／または塩基、
好ましくは塩基塩で形成された酸性および／または塩基性塩を示す。特に、本発
明の化合物を医薬として使用する場合、医薬上許容される塩が好ましいが、他の
塩は、例えば、これらの化合物を処理するのに、または医薬タイプでない使用を
意図する場合に有用性を見出せる。これらの化合物の塩は、技術が認識されてい
る手法によって調製できる。

【００６４】かかる医薬上許容される塩の例には、限定されるものではないが、各々、塩酸
塩、硫酸塩、硝酸塩またはリン酸塩および酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、プロピ
オン酸塩、コハク酸塩、安息香酸塩、クエン酸塩、酒石酸塩、フマル酸塩、マレ
イン酸塩、メタンスルホン酸塩、イソチオン酸塩、酢酸テオフィリン、サリチル
酸塩等のごとき無機および有機の付加塩が含まれる。低級アルキル四級アンモニ
ウム塩等も適当である。

【００６５】本明細書に用いる「医薬上許容される」担体なる用語は、非毒性の、不活性固
体の、半固形液体の充填剤、希釈剤、カプセル化物質、いずれかのタイプの処方
補助剤、または単に、セーラインのごとき無菌水性媒体を意味する。医薬上許容
される担体として機能できる物質のいつらかの例は、ラクトース、グルコースお
よびスクロースのごとき糖、コーンスターチおよび馬鈴薯デンプンのごときデン
プン、セルロースおよびカルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロ
ースおよび酢酸セルロースのごときその誘導体；粉末トラガカントゴム；メルト
、ゼラチン、タルク；カカオ脂および坐薬ワックスのごとき賦形剤；落花生油、
べにばな油、ゴマ油、オリーブ油、トウモロコシ油および大豆油のごとき油；プ
ロピレングリコールのごときグリコール、グリセリン、ソルビトール、マンニト
ールおよびポリエチレングリコールのごときポリオール；オレイン酸エチルおよ
びラウリン酸エチルのごときエステル、寒天；水酸化マグネシウムおよび水酸化
アルミニウムのごとき緩衝剤；アルギン酸；パイロジェンフリー水；等張性セー
ライン、リンゲル液；エチルアルコールおよびリン酸緩衝液、ならびに医薬処方
において用いられる他の非毒性の適合性物質である。

【００６６】また、ラウリル硫酸ナトリウムおよびステアリン酸マグネシウムのごとき湿潤
剤、乳化剤および滑沢剤、ならびに着色剤、放出剤、コーティング剤、甘味剤、
矯味剤および芳香剤、保存剤および抗酸化剤は、処方者の判断により該組成物中
に存在できる。医薬上許容される抗酸化剤の例には、限定されるものではないが
、アスコルビン酸、システイン塩酸塩、亜硫酸水素ナトリウム、メタ重亜硫酸水
素ナトリウム、硫酸ナトリウム等のごとき水溶性抗酸化剤；アスコルビルパルチ
メート、ブチルヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）またはブチルヒドロキシトルエ
ン（ＢＨＴ）、レクチン、没食子酸プロピル、アルファ−トコフェロール等のご
とき油可溶性抗酸化剤；およびクエン酸、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）
、ソルビトール、酒石酸、リン酸等のごとき金属キレート化剤が含まれる。

【００６７】経口投与に関しては、化合物をカプセル剤、丸剤、錠剤、トローチ剤、メルト
剤、散剤、懸濁剤または乳剤のごとき固体または液体の製剤に処方化できる。経
口投与形態での組成物の調製においては、いずれかの通常の医薬媒体を用いるこ
とができ、これは例えば、（例えば、懸濁剤、エリキシル剤および液剤のごとき
）経口液体製剤の場合においては、水、グリコール、油剤、アルコール、矯味剤
、保存料、着色剤、懸濁化剤等；あるいは（例えば、散剤、カプセル剤および錠
剤のごとき）経口固体製剤の場合においては、デンプン、糖、希釈剤、顆粒化剤
、滑沢剤、結合剤、崩壊剤等のごとき担体である。投与におけるそれらの簡便性
のために、錠剤およびカプセル剤は最も有利な投与単位形態を表し、その場合、
固体医薬担体を明らかに用いる。所望ならば、錠剤は標準的な技術によって糖衣
または腸溶衣をかけ得る。活性薬剤をカプセル化して、それが血液脳関門を通過
することを許容すると同時に胃腸管を安定に通過させ得る。例えば、ＷＯ９６／
１１６９８を参照されたし。

【００６８】非経口投与に関しては、化合物を医薬担体に溶解して、液剤または懸濁剤とし
て投与できる。安定な担体の例示は水、生理食塩水、デキストロース溶液、フラ
クトース溶液、エタノール、または動物、植物もしくは合成起源の油剤である。
また、担体は、他の成分、例えば、保存剤、懸濁化剤、可溶化剤、緩衝剤等も含
むこともできる。また、化合物を髄腔内投与する場合、それらを脳脊髄液に溶解
できる。

【００６９】様々な投与経路が利用可能である。選択された特定の様式は、選択された特定
の薬物、治療されるべき疾患状態の重篤度および治療上の効力のために必要とさ
れる用量にもちろん依存するであろう。本発明の方法は、一般的に言えば、医学
的に許容できるいずれの様式の投与を用いても実施でき、臨床的に許容できない
副作用を生じることなく、活性化合物の有効レベルを生じるいずれの様式も意味
する。かかる投与様式には、経口、直腸、舌下、局所、鼻、経皮または非経口の
経路が含まれる。「非経口」なる用語は、皮下、静脈内、硬膜外、潅注、筋肉内
、放出ポンプまたは注入が含まれる。

【００７０】例えば、本発明による活性薬剤の投与は、いずれの適当な送達手段を用いても
達成でき、（ａ）ポンプ（例えば、LauerおよびHatton（１９９３）、Zimmら（１９８４）
ならびにEttingerら（１９７８）参照）；（ｂ）マイクロカプセル化（例えば、米国特許第４,３５２,８８３号；第４,３
５３,８８８号および第５,０８４,３５０号参照）；（ｃ）持続性放出ポリマー埋込み剤（例えば、米国特許第４,８８３,６６６号参
照）；（ｄ）マイクロカプセル化（例えば、米国特許第５,２８４,７６１号、第５,１
５８,８８１号、第４,９７６,８５９号および第４,９６８,７３３号ならびに公
開されたＰＣＴ特許出願ＷＯ９２／１９１９５、ＷＯ９５／０５４５２参照）；
（ｅ）ＣＮＳに対する裸のまたは非カプセル化の細胞移植（例えば、米国特許第
５,０８２,６７０号および第５,６１８,５３１号参照）；（ｆ）皮下、静脈内、動脈内、筋肉内もしくは他の適当な部位への注射；または
（ｇ）カプセル剤、液剤、錠剤、丸剤または持続性放出製剤における経口投与が含まれる。

【００７１】本発明の１つの具体例において、活性薬剤は、ＣＮＳ、好ましくは、脳室、脳
実質、髄腔または他の適当なＣＮＳ位置、最も好ましくは髄腔内に直接的に送達
される。本投与は、好ましくはポンプによる。

【００７２】あるいは、ターゲティング治療を用いて、抗体または細胞特異的リガンドのご
ときターゲティング・システムの使用によって、さらにとりわけ、ある種のタイ
プの細胞に活性薬剤を送達できる。ターゲティングは、種々の理由、例えば、薬
剤が許容できない毒性があるならば、余りにも高用量を必要とするならば、また
は標的細胞に入ることができないならば望ましい。

【００７３】また、ペプチドである活性薬剤は、活性薬剤をコードするＤＮＡ配列を患者の
体内、特に脊髄領域に移植するために設計された細胞に導入する細胞ベースの送
達システムにて投与できる。適当な送達システムは、米国特許第５,５５０,０５
０号およびＰＣＴ出願公開番号ＷＯ９２／１９１９５、ＷＯ９４／２５５０３、
ＷＯ９５／０１２０３、ＷＯ９５／０５４５２、ＷＯ９６／０２２８６、ＷＯ９
６／０２６４６、ＷＯ９６／４０８７１、ＷＯ９６／４０９５９およびＷＯ９７
／１２６３５に記載されている。適当なＤＮＡ配列は、開示された配列および公
知の遺伝暗号に基づいて、各活性薬剤について合成により調製できる。

【００７４】活性薬剤は、好ましくは、治療上有効量にて投与される。活性化合物の「治療
上有効量」または単に「有効量」とは、いずれの医学的治療にも適用できる適当
な利益／リスク比にて、痛みを緩和するか、または鎮痛を導入するのに十分な量
を意味する。投与される実際の量、ならびに投与の速度および時間経過は、治療
すべき症状の性質および程度に依存するであろう。治療の処方箋、例えば、投与
量、時期等に関する決定は、一般医師または専門医の責任の範囲内にあり、典型
的には治療すべき障害、個々の患者の症状、送達部位、投与方法、および実践者
に知られている他の因子を考慮する。技術およびプロトコールの例は、Remingto
n's Pharmaceutical Sciencesに見出すことができる。

【００７５】用量は、局所的または全身的に薬物レベルを達成するように適当に調製できる
。典型的には、本発明の活性薬剤は、活性薬剤の約０.００１ｍｇ／ｋｇないし
約２５０ｍｇ／ｋｇ、好ましくは、約０.０１ｍｇ／ｋｇないし約１００ｍｇ／
ｋｇ、最も好ましくは、約０.０５ｍｇ／ｋｇないし約７５ｍｇ／ｋｇの用量範
囲にてそれらの効果を示す。適当な用量は、１日当り複数のサブ用量にて投与で
きる。典型的には、用量またはサブ用量は、単位投与形態当り約０.１ｍｇない
し約５００ｍｇの活性薬剤を含有できる。より好ましい用量は、単位投与形態当
り約０.５ｍｇないし約１００ｍｇの活性薬剤を含有するであろう。用量は、一
般的には、低レベルにて開始され、所望の効果が達成されるまで増加させる。対
象における応答がかかる用量にて十分である事象において、より高用量（異なる
より局所化された送達経路による有効なより高用量）さえ、患者耐容性が許され
る範囲まで使用できる。例えば、２４時間にわたる連続投与または１日当りの複
数用量は、化合物の適当な全身レベルを達成すると考えられる。

【００７６】痛みの治療では、投与経路がＣＮＳに直接的であるならば、考えられる用量は
、１日当り約１ｎｇないし約１００ｍｇ、好ましくは１日当り約１００ｎｇない
し約１０ｍｇ、より好ましくは１日当り約１μｇないし約１００μｇである。末
梢的に投与されるならば、考えられる用量は、いくらか高く、１日当り約１００
ｎｇないし約１０００ｍｇ、好ましくは１日当り約１０μｇないし約１００ｍｇ
、より好ましくは１日当り約１００μｇないし約１０ｍｇである。コノペプチド
が連続注入によって（例えば、ポンプ送達、生分解性ポリマー送達または細胞ベ
ースの送達により）送達されるならば、低用量がボーラス送達についてよりも考
えられる。

【００７７】有利には、該組成物は、投与単位として処方され、各単位は、活性薬剤の固定
用量を供給するために適合される。錠剤、被覆錠、カプセル剤、アンプル剤およ
び坐剤は、本発明による投与形態の例である。

【００７８】活性薬剤は、すなわち、適当な有効用量が、単一または複数の単位用量にて用
いられた投与形態と一致するであろうように、有効量を構成することを必要とす
るにすぎない。正確な個々の用量、ならびに毎日用量は、使用ヒトまたは動物に
つき医師または獣医の指示の下、標準的医学原理により決定される。

【００７９】医薬組成物は、一般的には、全組成物の重量当り、活性薬剤の約０.０００１
ないし９９重量％、好ましくは約０.００１ないし５０重量％、より好ましくは
約０.０１ないし１０重量％を含有するであろう。また、活性薬剤に加えて、該
医薬組成物および医薬品は、他の医薬上活性な化合物を含有できる。他の医薬上
活性な化合物の例には、限定されるものではないが、鎮痛剤、サイトカインおよ
び臨床医学の全ての主要領域における治療剤が含まれる。他の医薬上活性な化合
物と共に用いる場合、本発明のコノトキシンペプチドは、薬物カクテルの形態に
て送達できる。カクテルは、本発明で有用ないずれかの化合物と、もう一つの薬
物または薬剤の混合物である。本具体例において、共通の投与ビヒクル（例えば
、丸剤、錠剤、埋込み剤、ポンプ、注射溶液等）は、薬剤を補足的に増強する組
合せにて本組成物の双方を含有するであろう。カクテルの個々の薬物は、治療上
有効量にて各々投与される。治療上の有効量は、前記のパラメーターによって決
定されるであろうが；それは、いずれの事象においても薬物が、所望の効果を達
成するのに有効である時間に必要とされる身体の領域における薬物レベルを確立
するその量である。

【００８０】本発明の実施には、特記されない限り、化学、分子生物学、微生物学、組換え
ＤＮＡ、遺伝子学、免疫学、細胞生物学、細胞培養およびトランスジェニックバ
イオロジーを使用し、それらは当該技術分野の技量内にある。例えば、Maniatis
ら、１９８２；Sambrookら、１９８９；Ausubelら、１９９２；Glover、１９８
５；Anand、１９９２；GuthrieおよびFink、１９９１；HarlowおよびLane、１９
８８；JakobyおよびPastan、１９７９；Nucleic Acid Hybridization（B. D. Ha
mesおよびS. J. Higgins編１９８４）；Transcription And Translation（B. D
. HamesおよびS. J. Higgins編１９８４）；Culture Of Animal Cells（R. I.
Freshney、Alan R. Liss、Inc.、１９８７）；Immobilized Cells And Enzymes
（IRL Press、１９８６）；B. Perbal、A Practical Guide To Molecular Cloni
ng（１９８４）；論文、Methods In Enzymology（Academic Press、Inc.、N.Y.
）；Gene Transfer Vectors For Mammalian Cells（J. H. MillerおよびM. P. C
alos編、１９８７、Cold Spring Harbor Laboratory）；Methods In Enzymology
、第１５４および１５５巻（Wuら編）、Immunochemical Methods In Cell And M
olecular Biology（MayerおよびWalker編、Academic Press、London、１９８７
）；Handbook Of Experimental Immunology、第I−IV巻（D. M. WeirおよびC. C
. Blackwell編、１９８６）；Riott、Essential Immunology、第６版、Blackwel
l Scientific Publications、Oxford、１９８８；Hoganら、Manipulating the M
ouse Embryo、（Cold Spring Harbor Laboratory Press、Cold Spring Harbor、
N.Y.、１９８６）参照。

【００８１】実施例本発明を以下の実施例に参照することによって説明するが、それは例示的な方
法によって提供するもので、如何なる場合においても本発明を限定することを意
図するものではない。当該技術分野でよく知られている標準的な技術、または以
下に特記される技術を利用した。

【００８２】実施例１Ｏ−スーパーファミリー・コノトキシンの単離毒液管から粗製毒液を抽出し（Cruzら、１９７６）、従前に記載されているご
とく成分を精製した（Cartierら、１９９６）。毒液管からの粗製抽出物を、Ｖ
ｙｄａｃＣ_１８半分取用カラム（１０×２５０ｍｍ）を用いる逆相液体クロマト
グラフィー（ＲＰＬＣ）によって精製した。生物活性ピークのさらなる精製は、
ＶｙｄａｃＣ_１８分析用カラム（４.６×２２０ｍｍ）にて行った。流出物は２
２０ｍｍでモニターした。ピークを収集し、そのアリコートを活性につきアッセ
イした。

【００８３】精製ペプチドのアミノ酸配列は、標準的な方法によって決定した。１２０A ア
ナライザを有するApplied Biosystems ４７７Aタンパク質シークエンサー上の自
動エドマン分解によって配列決定する前に、精製したペプチドを還元し、アルキ
ル化した（DNA／Peptide Facility，University of Utah）（Martinezら、１９
９５；Shonら、１９９４）。この方法により、ペプチドδ−ＧｍＶＩＡ、δ−ＰＶＩＡ、δ−ＳＶＩＥ、δ
−ＳＶＩＥ［Ｄ１Ｅ］、δ−ＮｇＶＩＡ、δ−ＴｘＶＩＡおよびイスラエルＴｘ
ＶＩＡを得た。

【００８４】実施例２コノペプチドの合成成熟毒素または前駆体ペプチドのいずれかのコノペプチドの合成は、Cartier
ら（１９９６）によって記載されているごとく慣用的な保護化学を用いて別々に
行った。簡単には、Bachem社（Torrence，CA）から購入したアミノ酸誘導体とAB
I model ４３０Aペプチド合成器を用いる、２−（１Ｈ−ベンゾトリオール−１
−イル）−１,１,３,３−テトラメチルウロニウム・テトラフルオロホウ酸化カ
ップリングを用いるＦｍｏｃ手法によって、Ｒｉｎｋアミド樹脂上に線状鎖を構
成した。直交保護をシステインに対して用いた：２つのシステインは安定なＣｙ
ｓ（Ｓ−アセトアミドメチル）として保護し、一方、他の２つのシステインは酸
に不安定なＣｙｓ（Ｓ−トリチル）として保護した。末端Ｆｍｏｃ保護基を除去
し、樹脂からペプチドを切断した後に、放出されたペプチドは、反応混合物を−
１０℃のメチルｔ−ブチルエーテルに濾過することによって沈澱させ、それはＣ
ｙｓ（Ｓ−アセトアミドメチル）以外の保護基を除去した。そのペプチドを０.
１％ＴＦＡおよび６０％アセトニトリルに溶解し、ＶｙｄａｃＣ_１８分取用カラ
ム（２２×２５０ｍｍ）上のＲＰＬＣによって精製し、０.１％ＴＦＡ中のアセ
トニトリルの勾配で２０ｍＬ／分の流速にて溶出させた。

【００８５】３つのコノペプチド中のジスルフィド架橋は、Cartierら（１９９６）に記載
されているごとく形成した。簡単には、システインの１のペアの間のジスルフィ
ド架橋は空気酸化によって形成し、これは分析用ＲＰＬＣによって完了したこと
を判断した。単環ペプチドはＶｙｄａｃＣ_１８分取用カラム（２２×２５０ｍｍ
）上のＲＰＬＣによって精製し、０.１％ＴＦＡ中のアセトニトリルのグラジエ
ントで溶出した。Ｓ−アセトアミドメチル基の除去および他のペアのシステイン
の間のジスルフィド架橋の閉鎖はヨウ素酸化によって同時に行った。環状ペプチ
ドは、ＶｙｄａｃＣ_１８分取用カラム（２２×２５０ｍｍ）でのＲＰＬＣによっ
て精製し、０.１％ＴＦＡ中のアセトニトリルの勾配にて溶出させた。

【００８６】実施例３Ｏ−スーパーファミリー・コノトキシンをコードするＤＮＡの単離本明細書に記載されたコノトキシンをコードするＤＮＡは、Oliveraら（１９
９６）に記載されているごとき、当該技術分野でよく知られている一般的手法を
用いる慣用技術に従って単離およびクローン化した。別法として、ｃＤＮＡライ
ブラリーは、慣用技術を用いてコーヌス毒液管から調製した。単一クローンから
のＤＮＡは、Ｍ１３ユニバーサル・プライミング部位およびＭ１３リバース・ユ
ニバーサル・プライミング部位にほぼ対応するプライマーを用いる慣用技術によ
って増幅させた。ほぼ３００−５００ヌクレオチドのサイズを有するクローンを
配列決定し、実施例１で単離したδ−コノトキシンを含めた既知のＯ−スーパー
ファミリー・コノトキシンに対する配列中の類似性につきスクリーニングした。
ＤＮＡ配列、コードされたプロペプチド配列および成熟毒素の配列を付属の表１
に記載する。また、成熟毒素をコードするＤＮＡ配列は、これらの頁に記載して
いるＤＮＡ配列に基づいて調製できる。該コノトキシンの整列を表２に記載する
。

【００８７】表１成熟Ｏ−スーパファミリー・コノトキシン、プロペプチド、およびプロペプチドをコードするＤＮＡの配列名称：δ-GmVIA 種：gloriamaris 単離：はいクローニング：はいＤＮＡ配列：

【００８８】

【化１】

【００８９】翻訳：

【００９０】

【化２】

【００９１】毒素配列：

【００９２】

【化３】

【００９３】名称：δ-GmVIA [F15Y] 種：gloriamaris 毒素配列：

【００９４】

【化４】

【００９５】名称：δ-GmVIA [F27Y] 種：gloriamaris 単離：いいえ毒素配列：

【００９６】

【化５】

【００９７】名称：Omaria9 種：omaria 単離：いいえクローニング：はいＤＮＡ配列：

【００９８】

【化６】

【００９９】翻訳：

【０１００】

【化７】

【０１０１】毒素配列：

【０１０２】

【化８】

【０１０３】名称：Tx6.11 種：textile 単離：いいえクローニング：はいＤＮＡ配列：

【０１０４】

【化９】

【０１０５】翻訳：

【０１０６】

【化１０】

【０１０７】毒素配列：

【０１０８】

【化１１】

【０１０９】名称：Om6.6 種：omaria 単離：いいえクローニング：はいＤＮＡ配列：

【０１１０】

【化１２】

【０１１１】翻訳：

【０１１２】

【化１３】

【０１１３】毒素配列：

【０１１４】

【化１４】

【０１１５】名称：Da6.2 種：dalli 単離：いいえクローニング：はいＤＮＡ配列：

【０１１６】

【化１５】

【０１１７】翻訳：

【０１１８】

【化１６】

【０１１９】毒素配列：

【０１２０】

【化１７】

【０１２１】名称：Da6.6 種：dalli 単離：いいえクローニング：はいＤＮＡ配列：

【０１２２】

【化１８】

【０１２３】翻訳：

【０１２４】

【化１９】

【０１２５】毒素配列：

【０１２６】

【化２０】

【０１２７】名称：δ-TxVIA 種：textile 単離：はいクローニング：はいＤＮＡ配列：

【０１２８】

【化２１】

【０１２９】翻訳：

【０１３０】

【化２２】

【０１３１】毒素配列：

【０１３２】

【化２３】

【０１３３】名称：δ-TxVIA [M8J] 種：textile 毒素配列：

【０１３４】

【化２４】

【０１３５】名称：M6.4 種：magus 単離：いいえクローニング：はいＤＮＡ配列：

【０１３６】

【化２５】

【０１３７】翻訳：

【０１３８】

【化２６】

【０１３９】毒素配列：

【０１４０】

【化２７】

【０１４１】名称：Israel TxIA 種：textile 単離：はいクローニング：いいえ毒素配列：

【０１４２】

【化２８】

【０１４３】名称：Di6.2 種：distans 単離：いいえクローニング：はいＤＮＡ配列：

【０１４４】

【化２９】

【０１４５】翻訳：

【０１４６】

【化３０】

【０１４７】毒素配列：

【０１４８】

【化３１】

【０１４９】名称：Af6.9 種：ammiralis 単離：いいえクローニング：はいＤＮＡ配列：

【０１５０】

【化３２】

【０１５１】翻訳：

【０１５２】

【化３３】

【０１５３】毒素配列：

【０１５４】

【化３４】

【０１５５】名称：Da6.4 種：dalli 単離：いいえクローニング：はいＤＮＡ配列：

【０１５６】

【化３５】

【０１５７】翻訳：

【０１５８】

【化３６】

【０１５９】毒素配列：

【０１６０】

【化３７】

【０１６１】名称：Gm6.5 種：gloriamaris 単離：いいえクローニング：はいＤＮＡ配列：

【０１６２】

【化３８】

【０１６３】翻訳：

【０１６４】

【化３９】

【０１６５】毒素配列：

【０１６６】

【化４０】

【０１６７】名称：Gm6.6 種：gloriamaris 単離：いいえクローニング：はいＤＮＡ配列：

【０１６８】

【化４１】

【０１６９】翻訳：

【０１７０】

【化４２】

【０１７１】毒素配列：

【０１７２】

【化４３】

【０１７３】名称：Gm6.3 種：gloriamaris 単離：いいえクローニング：はいＤＮＡ配列：

【０１７４】

【化４４】

【０１７５】翻訳：

【０１７６】

【化４５】

【０１７７】毒素配列：

【０１７８】

【化４６】

【０１７９】名称：M6.5 種：magus 単離：いいえクローニング：はいＤＮＡ配列：

【０１８０】

【化４７】

【０１８１】翻訳：

【０１８２】

【化４８】

【０１８３】毒素配列：

【０１８４】

【化４９】

【０１８５】名称：Tx6.2 種：textile 単離：いいえクローニング：はいＤＮＡ配列：

【０１８６】

【化５０】

【０１８７】翻訳：

【０１８８】

【化５１】

【０１８９】毒素配列：

【０１９０】

【化５２】

【０１９１】名称：KK-1 種：textile 毒素配列：

【０１９２】

【化５３】

【０１９３】名称：KK-2 種：textile 毒素配列：

【０１９４】

【化５４】

【０１９５】名称：Om6.1 種：omaria 単離：いいえクローニング：はいＤＮＡ配列：

【０１９６】

【化５５】

【０１９７】翻訳：

【０１９８】

【化５６】

【０１９９】毒素配列：

【０２００】

【化５７】

【０２０１】名称：Om6.3 種：omaria 単離：いいえクローニング：はいＤＮＡ配列：

【０２０２】

【化５８】

【０２０３】翻訳：

【０２０４】

【化５９】

【０２０５】毒素配列：

【０２０６】

【化６０】

【０２０７】名称：Om6.4 種：omaria 単離：いいえクローニング：はいＤＮＡ配列：

【０２０８】

【化６１】

【０２０９】翻訳：

【０２１０】

【化６２】

【０２１１】毒素配列：

【０２１２】

【化６３】

【０２１３】名称：Au6.1 種：aulicus 単離：いいえクローニング：はいＤＮＡ配列：

【０２１４】

【化６４】

【０２１５】翻訳：

【０２１６】

【化６５】

【０２１７】毒素配列：

【０２１８】

【化６６】

【０２１９】名称：Au6.2 種：aulicus 単離：いいえクローニング：はいＤＮＡ配列：

【０２２０】

【化６７】

【０２２１】翻訳：

【０２２２】

【化６８】

【０２２３】毒素配列：

【０２２４】

【化６９】

【０２２５】名称：Da6.5 種：dalli 単離：いいえクローニング：はいＤＮＡ配列：

【０２２６】

【化７０】

【０２２７】翻訳：

【０２２８】

【化７１】

【０２２９】毒素配列：

【０２３０】

【化７２】

【０２３１】名称：Di6.4 種：distans 単離：いいえクローニング：はいＤＮＡ配列：

【０２３２】

【化７３】

【０２３３】翻訳：

【０２３４】

【化７４】

【０２３５】毒素配列：

【０２３６】

【化７５】

【０２３７】名称：Pn6.2 種：pennaceus 単離：いいえクローニング：はいＤＮＡ配列：

【０２３８】

【化７６】

【０２３９】翻訳：

【０２４０】

【化７７】

【０２４１】毒素配列：

【０２４２】

【化７８】

【０２４３】名称：Pn6.3 種：pennaceus 単離：いいえクローニング：はいＤＮＡ配列：

【０２４４】

【化７９】

【０２４５】翻訳：

【０２４６】

【化８０】

【０２４７】毒素配列：

【０２４８】

【化８１】

【０２４９】名称：Pn6.4 種：pennaceus 単離：いいえクローニング：はいＤＮＡ配列：

【０２５０】

【化８２】

【０２５１】翻訳：

【０２５２】

【化８３】

【０２５３】毒素配列：

【０２５４】

【化８４】

【０２５５】名称：Pn6.7 種：pennaceus 単離：いいえクローニング：はいＤＮＡ配列：

【０２５６】

【化８５】

【０２５７】翻訳：

【０２５８】

【化８６】

【０２５９】毒素配列：

【０２６０】

【化８７】

【０２６１】名称：Omaria3 種：omaria 単離：いいえクローニング：はいＤＮＡ配列：

【０２６２】

【化８８】

【０２６３】翻訳：

【０２６４】

【化８９】

【０２６５】毒素配列：

【０２６６】

【化９０】

【０２６７】名称：Omarial 種：omaria 単離：いいえクローニング：はいＤＮＡ配列：

【０２６８】

【化９１】

【０２６９】翻訳：

【０２７０】

【化９２】

【０２７１】毒素配列：

【０２７２】

【化９３】

【０２７３】名称：Marm7 種：marmoreus 単離：いいえクローニング：はいＤＮＡ配列：

【０２７４】

【化９４】

【０２７５】翻訳：

【０２７６】

【化９５】

【０２７７】毒素配列：

【０２７８】

【化９６】

【０２７９】名称：Marm12 種：marmoreus 単離：いいえクローニング：はいＤＮＡ配列：

【０２８０】

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【０６３７】名称：O6.3 種：obscurus 単離：いいえクローニング：はいＤＮＡ配列：

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【０６４３】名称：R6.3 種：radiatus 単離：いいえクローニング：はいＤＮＡ配列：

【０６４４】

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【０６４５】翻訳：

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【化２８１】

【０６４９】名称：G6.3 種：geographus 単離：いいえクローニング：はいＤＮＡ配列：

【０６５０】

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【０６５１】翻訳：

【０６５２】

【化２８３】

【０６５３】毒素配列：

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【０６５５】名称：Tx6.8 種：textile 単離：いいえクローニング：はいＤＮＡ配列：

【０６５６】

【化２８５】

【０６５７】翻訳：

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【化２８７】

【０６６１】 −−−−−−−−−−−−−−−−−−− 名称：Qc6.1 種：quercinus 単離：いいえクローニング：はいＤＮＡ配列：

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【０６６３】翻訳：

【０６６４】

【化２８９】

【０６６５】毒素配列：

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【化２９０】

【０６６７】 −−−−−−−−−−−−−−−−−−− 名称：Lp6.5 種：leopardus 単離：いいえクローニング：はいＤＮＡ配列：

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【化２９１】

【０６６９】翻訳：

【０６７０】

【化２９２】

【０６７１】毒素配列：

【０６７２】

【化２９３】

【０６７３】 −−−−−−−−−−−−−−−−−−− 名称：Mr6.4 種：marmoreus 単離：いいえクローニング：はいＤＮＡ配列：

【０６７４】

【化２９４】

【０６７５】翻訳：

【０６７６】

【化２９５】

【０６７７】毒素配列：

【０６７８】

【化２９６】

【０６７９】 −−−−−−−−−−−−−−−−−−− 名称：Qc6.2 種：quercinus 単離：いいえクローニング：はいＤＮＡ配列：

【０６８０】

【化２９７】

【０６８１】翻訳：

【０６８２】

【化２９８】

【０６８３】毒素配列：

【０６８４】

【化２９９】

【０６８５】 −−−−−−−−−−−−−−−−−−− 名称：Qc6.3 種：quercinus 単離：いいえクローニング：はいＤＮＡ配列：

【０６８６】

【化３００】

【０６８７】翻訳：

【０６８８】

【化３０１】

【０６８９】毒素配列：

【０６９０】

【化３０２】

【０６９１】 −−−−−−−−−−−−−−−−−−− 名称：Ar6.5 種：arenatus 単離：いいえクローニング：はいＤＮＡ配列：

【０６９２】

【化３０３】

【０６９３】翻訳：

【０６９４】

【化３０４】

【０６９５】毒素配列：

【０６９６】

【化３０５】

【０６９７】 −−−−−−−−−−−−−−−−−−− 名称：Ar6.11 種：arenatus 単離：いいえクローニング：はいＤＮＡ配列：

【０６９８】

【化３０６】

【０６９９】翻訳：

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【化３０７】

【０７０１】毒素配列：

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【化３０８】

【０７０３】 −−−−−−−−−−−−−−−−−−− 名称：Ar6.12 種：arenatus 単離：いいえクローニング：はいＤＮＡ配列：

【０７０４】

【化３０９】

【０７０５】翻訳：

【０７０６】

【化３１０】

【０７０７】毒素配列：

【０７０８】

【化３１１】

【０７０９】 −−−−−−−−−−−−−−−−−−− 名称：Ts6.2 種：tessulatus 単離：いいえクローニング：はいＤＮＡ配列：

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【０７１２】

【化３１３】

【０７１３】毒素配列：

【０７１４】

【化３１４】

【０７１５】 −−−−−−−−−−−−−−−−−−− 名称：Ts6.4 種：tessulatus 単離：いいえクローニング：はいＤＮＡ配列：

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【０７１９】毒素配列：

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【化３１７】

【０７２１】 −−−−−−−−−−−−−−−−−−− 名称：Im6.1 種：imperialis 単離：いいえクローニング：はいＤＮＡ配列：

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【化３１８】

【０７２３】翻訳：

【０７２４】

【化３１９】

【０７２５】毒素配列：

【０７２６】

【化３２０】

【０７２７】 −−−−−−−−−−−−−−−−−−− 名称：Ca6.5 種：caracteristicus 単離：いいえクローニング：はいＤＮＡ配列：

【０７２８】

【化３２１】

【０７２９】翻訳：

【０７３０】

【化３２２】

【０７３１】毒素配列：

【０７３２】

【化３２３】

【０７３３】 −−−−−−−−−−−−−−−−−−− 名称：Mf6.2 種：miliaris 単離：いいえクローニング：はいＤＮＡ配列：

【０７３４】

【化３２４】

【０７３５】翻訳：

【０７３６】

【化３２５】

【０７３７】毒素配列：

【０７３８】

【化３２６】

【０７３９】 −−−−−−−−−−−−−−−−−−− 名称：Ak6.1 種：atlanticus 単離：いいえクローニング：はいＤＮＡ配列：

【０７４０】

【化３２７】

【０７４１】翻訳：

【０７４２】

【化３２８】

【０７４３】毒素配列：

【０７４４】

【化３２９】

【０７４５】 −−−−−−−−−−−−−−−−−−− 名称：Lv6.1 種：lividus 単離：いいえクローニング：はいＤＮＡ配列：

【０７４６】

【化３３０】

【０７４７】翻訳：

【０７４８】

【化３３１】

【０７４９】毒素配列：

【０７５０】

【化３３２】

【０７５１】 −−−−−−−−−−−−−−−−−−− 名称：Pu6.3 種：pulicarius 単離：いいえクローニング：はいＤＮＡ配列：

【０７５２】

【化３３３】

【０７５３】翻訳：

【０７５４】

【化３３４】

【０７５５】毒素配列：

【０７５６】

【化３３５】

【０７５７】 −−−−−−−−−−−−−−−−−−− 名称：Ge6.1 種：generalis 単離：いいえクローニング：はいＤＮＡ配列：

【０７５８】

【化３３６】

【０７５９】翻訳：

【０７６０】

【化３３７】

【０７６１】毒素配列：

【０７６２】

【化３３８】

【０７６３】 −−−−−−−−−−−−−−−−−−− 名称：Ep6.1 種：episcopatus 単離：いいえクローニング：はいＤＮＡ配列：

【０７６４】

【化３３９】

【０７６５】翻訳：

【０７６６】

【化３４０】

【０７６７】毒素配列：

【０７６８】

【化３４１】

【０７６９】 −−−−−−−−−−−−−−−−−−− 名称：Ep6.2 種：episcopatus 単離：いいえクローニング：はいＤＮＡ配列：

【０７７０】

【化３４２】

【０７７１】翻訳：

【０７７２】

【化３４３】

【０７７３】毒素配列：

【０７７４】

【化３４４】

【０７７５】 −−−−−−−−−−−−−−−−−−− 名称：Ac6.1 種：achatinus 単離：いいえクローニング：はいＤＮＡ配列：

【０７７６】

【化３４５】

【０７７７】翻訳：

【０７７８】

【化３４６】

【０７７９】毒素配列：

【０７８０】

【化３４７】

【０７８１】 −−−−−−−−−−−−−−−−−−− 名称：Ac6.2 種：achatinus 単離：いいえクローニング：はいＤＮＡ配列：

【０７８２】

【化３４８】

【０７８３】翻訳：

【０７８４】

【化３４９】

【０７８５】毒素配列：

【０７８６】

【化３５０】

【０７８７】 −−−−−−−−−−−−−−−−−−− 名称：Bu6.7 種：bullatus 単離：いいえクローニング：はいＤＮＡ配列：

【０７８８】

【化３５１】

【０７８９】翻訳：

【０７９０】

【化３５２】

【０７９１】毒素配列：

【０７９２】

【化３５３】

【０７９３】 −−−−−−−−−−−−−−−−−−− 名称：Bu6.8 種：bullatus 単離：いいえクローニング：はいＤＮＡ配列：

【０７９４】

【化３５４】

【０７９５】翻訳：

【０７９６】

【化３５５】

【０７９７】毒素配列：

【０７９８】

【化３５６】

【０７９９】 −−−−−−−−−−−−−−−−−−− 名称：Sx6.4 種：striolatus 単離：いいえクローニング：はいＤＮＡ配列：

【０８００】

【化３５７】

【０８０１】翻訳：

【０８０２】

【化３５８】

【０８０３】毒素配列：

【０８０４】

【化３５９】

【０８０５】 −−−−−−−−−−−−−−−−−−− 名称：Cn6.9 種：consors 単離：いいえクローニング：はいＤＮＡ配列：

【０８０６】

【化３６０】

【０８０７】翻訳：

【０８０８】

【化３６１】

【０８０９】毒素配列：

【０８１０】

【化３６２】

【０８１１】 −−−−−−−−−−−−−−−−−−− 名称：Cn6.10 種：consors 単離：いいえクローニング：はいＤＮＡ配列：

【０８１２】

【化３６３】

【０８１３】翻訳：

【０８１４】

【化３６４】

【０８１５】毒素配列：

【０８１６】

【化３６５】

【０８１７】 −−−−−−−−−−−−−−−−−−− 名称：Cr6.6 種：circumcisus 単離：いいえクローニング：はいＤＮＡ配列：

【０８１８】

【化３６６】

【０８１９】翻訳：

【０８２０】

【化３６７】

【０８２１】毒素配列：

【０８２２】

【化３６８】

【０８２３】 −−−−−−−−−−−−−−−−−−− 名称：Cr6.5 種：circumcisus 単離：いいえクローニング：はいＤＮＡ配列：

【０８２４】

【化３６９】

【０８２５】翻訳：

【０８２６】

【化３７０】

【０８２７】毒素配列：

【０８２８】

【化３７１】

【０８２９】 −−−−−−−−−−−−−−−−−−− 名称：Cr6.5A 種：circumcisus 単離：いいえクローニング：はいＤＮＡ配列：

【０８３０】

【化３７２】

【０８３１】翻訳：

【０８３２】

【化３７３】

【０８３３】毒素配列：

【０８３４】

【化３７４】

【０８３５】 −−−−−−−−−−−−−−−−−−− 名称：Cr6.6A 種：circumcisus 単離：いいえクローニング：はいＤＮＡ配列：

【０８３６】

【化３７５】

【０８３７】翻訳：

【０８３８】

【化３７６】

【０８３９】毒素配列：

【０８４０】

【化３７７】

【０８４１】 −−−−−−−−−−−−−−−−−−− 名称：Cr6.5B 種：circumcisus 単離：いいえクローニング：はいＤＮＡ配列：

【０８４２】

【化３７８】

【０８４３】翻訳：

【０８４４】

【化３７９】

【０８４５】毒素配列：

【０８４６】

【化３８０】

【０８４７】 −−−−−−−−−−−−−−−−−−− 名称：Cr6.6B 種：circumcisus 単離：いいえクローニング：はいＤＮＡ配列：

【０８４８】

【化３８１】

【０８４９】翻訳：

【０８５０】

【化３８２】

【０８５１】毒素配列：

【０８５２】

【化３８３】

【０８５３】 −−−−−−−−−−−−−−−−−−− 名称：Cr6.6C 種：circumcisus 単離：いいえクローニング：はいＤＮＡ配列：

【０８５４】

【化３８４】

【０８５５】翻訳：

【０８５６】

【化３８５】

【０８５７】毒素配列：

【０８５８】

【化３８６】

【０８５９】 −−−−−−−−−−−−−−−−−−− 名称：Cr6.7 種：circumcisus 単離：いいえクローニング：はいＤＮＡ配列：

【０８６０】

【化３８７】

【０８６１】翻訳：

【０８６２】

【化３８８】

【０８６３】毒素配列：

【０８６４】

【化３８９】

【０８６５】 −−−−−−−−−−−−−−−−−−− 名称：Mn6.3 種：monachus 単離：いいえクローニング：はいＤＮＡ配列：

【０８６６】

【化３９０】

【０８６７】翻訳：

【０８６８】

【化３９１】

【０８６９】毒素配列：

【０８７０】

【化３９２】

【０８７１】 −−−−−−−−−−−−−−−−−−− 名称：Sm6.5 種：stercusmuscarum 単離：いいえクローニング：はいＤＮＡ配列：

【０８７２】

【化３９３】

【０８７３】翻訳：

【０８７４】

【化３９４】

【０８７５】毒素配列：

【０８７６】

【化３９５】

【０８７７】 −−−−−−−−−−−−−−−−−−− 名称：Sm6.6 種：stercusmuscarum 単離：いいえクローニング：はいＤＮＡ配列：

【０８７８】

【化３９６】

【０８７９】翻訳：

【０８８０】

【化３９７】

【０８８１】毒素配列：

【０８８２】

【化３９８】

【０８８３】 −−−−−−−−−−−−−−−−−−− 名称：Sx6.5 種：striolatus 単離：いいえクローニング：はいＤＮＡ配列：

【０８８４】

【化３９９】

【０８８５】翻訳：

【０８８６】

【化４００】

【０８８７】毒素配列：

【０８８８】

【化４０１】

【０８８９】 −−−−−−−−−−−−−−−−−−− 名称：Sx6.6 種：striolatus 単離：いいえクローニング：はいＤＮＡ配列：

【０８９０】

【化４０２】

【０８９１】翻訳：

【０８９２】

【化４０３】

【０８９３】毒素配列：

【０８９４】

【化４０４】

【０８９５】 −−−−−−−−−−−−−−−−−−− 名称：Sx6.7 種：striolatus 単離：いいえクローニング：はいＤＮＡ配列：

【０８９６】

【化４０５】

【０８９７】翻訳：

【０８９８】

【化４０６】

【０８９９】毒素配列：

【０９００】

【化４０７】

【０９０１】 −−−−−−−−−−−−−−−−−−− 名称：Sx6.8 種：striolatus 単離：いいえクローニング：はいＤＮＡ配列：

【０９０２】

【化４０８】

【０９０３】翻訳：

【０９０４】

【化４０９】

【０９０５】毒素配列：

【０９０６】

【化４１０】

【０９０７】 −−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−− Ｘａａ１は、Ｇｌｕまたはγ−カルボキシ−ＧｌｕＸａａ２は、Ｇｌｎまたはピロ−ＧｌｕＸａａ３は、Ｐｒｏまたはヒドロキシ−ＰｒｏＸａａ４は、Ｔｒｐまたはブロモ−ＴｒｐＸａａ５は、Ｔｙｒ、^１２５Ｉ−Ｔｙｒ、モノ−ヨード−Ｔｙｒ、ジ−ヨード−
Ｔｙｒ、Ｏ−スルホ−ＴｙｒまたはＯ−ホスホ−ＴｙｒＸａａ６は、Ｎｌｅ＾は、遊離カルボキシルまたはアミド化のＣ末端、好ましくは、遊離カルボキシ
ル、＃は、遊離カルボキシルまたはアミド化のＣ末端、好ましくは、アミド化である
。

【０９０８】表２コノトキシンペプチド配列の整列

【０９０９】

【表１】

【表２】

【表３】

【０９１０】本発明の方法および組成物は、様々な具体例の形態において組込むことができ
、そのいくつかだけを本明細書に開示すると認められるであろう。他の具体例が
存在し、それは本発明の精神から逸脱しないことは当業者には明らかであろう。
かくして、記載された具体例は例示であり、制限として構成されるべきものでは
ない。

【０９１１】参考文献リスト Barnay, G.ら (2000). J. Med. Chem. Bitan, G.ら (1997). J. Peptide Res. 49: 421-426. Bodanskyら (1966). Chem. Ind. 38: 1597-98. Cartier, G. E.ら (1996). J. Biol. Chem. 271: 7522-7528. Cornell-Bell, A. H.ら (1999). Kainate spiral waves and integrins: A sign
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Wunsch (編), Georg Thieme Verlag, Stuttgart, Ger. (1974). Myers, R. A.ら (1991). Biochemistry 30: 9370-9377. Nakamura, T.ら (1996). Protein Sci. 5: 524-530. Nishiuchi, Y.ら (1993). Synthesis of gamma-carboxyglutamic acid-containi
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Nowak, L.ら (1984). Nature 307: 462-465. Olivera, B. M.ら (1984). 米国特許第4, 447, 356号. Olivera, B. M.ら (1985). Science 230: 1338-1343. Olivera, B. M.ら (1990). Science 249: 257-263. Olivera, B. M.ら (1996). 米国特許第5,514,774号. Ornstein,ら (1993). Biorganic Medicinal Chemistry Letters 3: 43-48. Plone, M. A.ら (1996). Pain 66: 265-70. Plummer, J. L.ら (1991). J Pharmacol Methods 26: 79-87. Rivier, J. R.ら (1978). Biopolymers 17: 1927-38. Rivier, J. R.ら (1987). Biochem. 26: 8508-8512. Sambrook, J.ら (1989). Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 第２版, C
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07. Zafaralla, G. C.ら (1988). Biochemistry 27: 7102-7105. Zhou L. M.,ら (1996). J. Neurochem. 66: 620-628. Zimm, S.ら (1984). Cancer Res. 44: 1698-1701. 米国特許第3,972,859号. 米国特許第3,842,067号. 米国特許第3,862,925号. 米国特許第5,514,774号. 米国特許第5,531,001号. 米国特許第5,534,615号. 米国特許第5,364,769号. 米国特許第5,545,723号. 米国特許第5,550,050号. 米国特許第5,591,821号. 米国特許第5,719,264号. 米国特許第5,844,077号. ＰＣＴ公開出願WO 92/19195. ＰＣＴ公開出願WO 94/25503. ＰＣＴ公開出願WO 95/01203. ＰＣＴ公開出願WO 95/05452. ＰＣＴ公開出願WO 96/02286. ＰＣＴ公開出願WO 96/02646. ＰＣＴ公開出願WO 96/11698. ＰＣＴ公開出願WO 96/40871. ＰＣＴ公開出願WO 96/40959. ＰＣＴ公開出願WO 97/12635. ＰＣＴ公開出願WO 98/03189. ＰＣＴ公開出願WO 00/23092.

【配列表】

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ａ６１Ｐ 11/06 Ａ６１Ｐ 25/06 25/00 25/08 25/06 25/14 25/08 25/20 25/14 25/28 25/20 25/36 25/28 29/00 25/36 35/00 29/00 37/06 35/00 39/00 37/06 43/00 １１１ 39/00 Ｃ０７Ｋ 14/435 43/00 １１１Ｇ０１Ｎ 33/15 ＺＣ０７Ｋ 14/435 33/50 ＺＧ０１Ｎ 33/15 33/53 Ｄ 33/50 Ｍ 33/53 33/566 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ 33/566 Ａ６１Ｋ 37/02 (31)優先権主張番号６０／２１９，４４０ (32)優先日平成12年７月20日(2000．7．20) (33)優先権主張国米国（ＵＳ） (31)優先権主張番号６０／２４３，４１２ (32)優先日平成12年10月27日(2000．10．27) (33)優先権主張国米国（ＵＳ） (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ，ＴＲ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＭＺ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＧ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＢＺ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ，ＤＺ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＭＺ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ (72)発明者バルドメロ・エム・オリベラアメリカ合衆国84108ユタ州ソルト・レイク・シティ、ブライアン・アベニュー1370 番 (72)発明者ジー・エドワード・カーティアアメリカ合衆国84108ユタ州ソルト・レイク・シティ、アパートメント・ナンバー・ビー−216、イースト・ストリンガム・アベニュー2629番 (72)発明者マレン・ワトキンズアメリカ合衆国84105ユタ州ソルト・レイク・シティ、イースト・ガーフィールド・アベニュー845番 (72)発明者デイビッド・アール・ヒルヤードアメリカ合衆国84124ユタ州ソルト・レイク・シティ、ジュノー・サークル3685番 (72)発明者ジェイ・マイケル・マッキントッシュアメリカ合衆国84108ユタ州ソルト・レイク・シティ、サウス・2000・イースト1151 番 (72)発明者リチャード・ティ・レイヤーアメリカ合衆国84093ユタ州サンディ、サンバースト・コート9024番 (72)発明者ロバート・エム・ジョーンズアメリカ合衆国84101ユタ州ソルト・レイク・シティ、ウエスト・ブロードウェイ・ナンバー2103・サウス44番Ｆターム(参考） 2G045 AA40 BA11 BB50 DA12 DA13 DA14 DA36 FB02 4B024 AA01 BA38 CA04 4C084 AA02 AA07 BA01 BA19 BA20 BA21 BA22 BA23 CA47 DA35 NA14 ZA02 ZA08 ZA15 ZA22 ZA36 ZA39 ZA40 ZB08 ZB11 ZB26 ZC35 ZC39 4H045 AA10 AA30 BA17 BA18 BA19 BA32 BA50 BA71 BA72 CA50 DA83 EA20 EA21 EA22 FA34 FA71

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】表２に記載されたペプチドから選択された実質的に純粋なＯ
−スーパーファミリー・コノペプチド。
【請求項２】ペプチドＤｉ６.２、Ａｆ６.９、ＫＫ１、ＫＫ２、δ−Ｇ
ｍＶＩＡ、Ｍ６.４、δ−ＰＶＩＡ、δ−ＰＶＩＡ−ＯＨ、δ−ＮｇＶＩＡ、δ
−ＴｘＶＩＡおよびイスラエルＴｘＶＩＡ以外の表１に開示された成熟毒素ペプ
チド配列よりなる群から選択される実質的に純粋なコノトキシンペプチド。
【請求項３】Ｘａａ_１がＧｌｕである請求項２記載の実質的に純粋なコノ
トキシンペプチド。
【請求項４】Ｘａａ_５がＴｙｒである請求項２記載の実質的に純粋なコノ
トキシンペプチド。
【請求項５】Ｘａａ_４がＴｒｐである請求項２記載の実質的に純粋なコノ
トキシンペプチド。
【請求項６】Ｘａａ_２がＧｌｎである請求項２の実質的に純粋なコノトキ
シンペプチド。
【請求項７】Ｘａａ_３がＰｒｏである請求項２記載の実質的に純粋なコノ
トキシンペプチド。
【請求項８】Ｘａａ_３がヒドロキシ−Ｐｒｏである請求項２記載の実質的
に純粋なコノトキシンペプチド。
【請求項９】Ｘａａ_５が、^１２５Ｉ−Ｔｙｒ、モノ−ヨードＴｙｒまたは
ジ−ヨード−Ｔｙｒである請求項２記載の実質的に純粋なコノトキシンペプチド
。
【請求項１０】Ｘａａ_４が６−ブロモ−Ｔｒｐである請求項２記載の実質
的に純粋なコノトキシンペプチド。
【請求項１１】Ｘａａ_１がＧｌａである請求項２記載の実質的に純粋なコ
ノトキシンペプチド。
【請求項１２】Ｘａａ_２がピロ−Ｇｌｕである請求項２記載の実質的に純
粋なコノトキシンペプチド。
【請求項１３】表１に記載されたアミノ酸配列の群から選択されたアミノ
酸配列を含むＯ−スーパーファミリー・コノトキシン前駆体をコードする核酸を
含む単離核酸。
【請求項１４】該核酸が、表１に記載されたヌクレオチド配列またはそれ
らの相補体の群から選択されたヌクレオチド配列を含む請求項１３記載の核酸。
【請求項１５】表１に記載されたアミノ酸配列の群から選択されたアミノ
酸配列を含む実質的に純粋なコノトキシン蛋白質前駆体。
【請求項１６】コノトキシンペプチドまたはその医薬上許容される塩、お
よび医薬上許容される担体を含み、該コノトキシンペプチドが請求項１記載のコ
ノトキシンペプチドである医薬組成物。
【請求項１７】コノトキシンペプチドまたはその医薬上許容される塩、お
よび医薬上許容される担体を含み、該コノトキシンペプチドが請求項２記載のコ
ノトキシンペプチドである医薬組成物。
【請求項１８】それを必要とする個人におけるナトリウムチャネルを介す
るナトリウム流を変調する方法であって、治療上有効量の請求項１記載のコノト
キシンペプチドまたはその医薬上許容される塩を投与することを特徴とする該方
法。
【請求項１９】電位依存性イオンチャネル障害と関連した疾患を治療また
は予防する方法であって、それを必要とする患者に治療上有効量の請求項１記載
のコノトキシンペプチドまたはその医薬上許容される塩を投与することを含むこ
とを特徴とする該方法。
【請求項２０】それを必要とする該個人が、多発性硬化症、（急性散在性
脳脊髄炎、視神経脊髄炎、副腎脳白質萎縮症、急性横断性脊髄炎、進行性多病巣
性白質脳症のごとき）他の脱髄疾病、亜急性硬化性全脳脊髄炎（ＳＳＰＥ）、異
染性白質萎縮症、メルツバッヒャー−ペリツェーウス病、脊髄損傷、ボツリヌス
菌毒素中毒、ハンチントン舞踏病、（手根管症候群、尺骨神経麻痺のごとき）圧
迫性およびエントラップの神経障害、（不整脈、鬱血心不全のごとき）心血管障
害、反応性神経膠症、高血糖、免疫抑制、コカイン中毒、癌、認識機能障害、（
イートン・ランバート症候群のごとき）神経伝達物質放出の欠損に起因する障害
、ならびにクラーレおよび神経筋遮断薬の作用の逆転よりなる群から選択される
障害に苦しむことを特徴とする請求項１８記載の方法。
【請求項２１】該障害が神経障害であることを特徴とする請求項１９記載
の方法。
【請求項２２】該神経障害が発作であることを特徴とする請求項１９記載
の方法。
【請求項２３】該発作が、癲癇に関連することを特徴とする請求項２２記
載の方法。
【請求項２４】該神経障害が、低酸素症、酸素欠乏症または虚血性疾患に
関連する神経毒性損傷であることを特徴とする請求項２１記載の方法。
【請求項２５】該神経毒性損傷が、発作、脳血管事故、脳または脊髄外傷
、心筋梗塞、身体的外傷、溺死、窒息、分娩仮死または低血糖事象に関連するこ
とを特徴とする請求項２４記載の方法。
【請求項２６】該障害が痛みであることを特徴とする請求項１９記載の方
法。
【請求項２７】該痛みが、片頭痛、急性苦痛、持続性痛、神経障害性痛ま
たは侵害受容性痛であることを特徴とする請求項２６記載の方法。
【請求項２８】該障害が炎症であることを特徴とする請求項１９記載の方
法。
【請求項２９】該障害が心血管障害であることを特徴とする請求項１９記
載の方法。
【請求項３０】請求項１記載のコノトキシンペプチドまたはその医薬上許
容される塩を含む活性薬剤の痛みを緩和する量を、痛みを示しているまたは痛み
を引き起こす事象に付されようとする哺乳動物に投与することを特徴とする痛み
を緩和する方法
【請求項３１】Ｋ_ＡＴＰチャネルを活性化することによって興奮性の膜の
基の脱分極と関連する障害を治療する方法であって、請求項１記載のコノトキシ
ンペプチドまたはその医薬上許容される塩を含む有効成分の有効量をそれを必要
とする個人に投与することを特徴とする該方法。
【請求項３２】該障害が心臓虚血であることを特徴とする請求項３１記載
の方法。
【請求項３３】該障害が大脳虚血であることを特徴とする請求項３１記載
の方法。
【請求項３４】該障害が喘息であることを特徴とする請求項３１記載の方
法。
【請求項３５】該障害が眼虚血であることを特徴とする請求項３１記載の
方法。
【請求項３６】Ｏ−スーパーファミリー・コノトキシンの治療上の活性を
模倣する化合物を同定する方法であって、（ａ）テスト化合物に対する生物学的
アッセイを行って、治療上の活性を測定し；次いで、（ｂ）該テスト化合物の生
物学的アッセイから得られた結果を、Ｏ−スーパーファミリー・コノトキシンの
生物学的アッセイから得られた結果と比較する工程を含むことを特徴とする該方
法。
【請求項３７】請求項１記載のペプチドの置換体を含む実質的に純粋なＯ
−スーパーファミリー・コノトキシンペプチド誘導体。
【請求項３８】請求項２記載のペプチドの置換体を含む実質的に純粋なＯ
−スーパーファミリー・コノトキシンペプチド誘導体。