JP2003531587A - 精神分裂病関連遺伝子 - Google Patents

精神分裂病関連遺伝子

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Abstract

(57)【要約】 精神分裂病の診断および／または治療の開発に使用される単離されたポリヌクレオチドフラグメントが提供される。本明細書に開示された１つ以上のポリヌクレオチドを用いる精神分裂病の診断方法もさらに提供される。精神分裂病関連遺伝子の発現を制御する化合物のスクリーニング方法も提供される。患者において観察される機能低下を類似させた精神分裂病の慢性動物モデル、および動物にＰＣＰを投与することを含む動物モデルの作製方法も提供される。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】 本発明は、精神分裂病に関与するおよび／または関連すると仮定される遺伝子
の同定に関する。本発明はまた、精神分裂病における機能低下を類似させた慢性
動物モデルの開発、薬物スクリーニングおよび精神分裂病に関連する遺伝子／タ
ンパク質の同定における当該モデルの使用、ならびに同定された特定の遺伝子お
よび精神分裂病の治療／診断におけるそれらの使用に関する。
【０００２】 精神分裂病は、世界人口の１％が罹患している荒廃的な精神病であり、その病
因は未だによくわかっていない。今までのところ、関与する遺伝子についての理
解は乏しく、また、この疾患の全ての特性を類似させた慢性精神分裂病動物モデ
ルは開発されていない。
【０００３】 現代の抗精神病薬開発の１つの目標は、精神分裂病に特徴的な陰性症状および
認知障害の改善において現行の治療よりも効果的な薬物を製造することである。
定型的および非定型的な抗精神病薬（例えば、ハロペリドールおよびクロザピン
）は、陽性症状を減ずるのには効果的であるが、この疾患に関連する陰性症状お
よび認知障害に対しては効果がない（ハロペリドール）かまたは最小限の効果し
か有しない（クロザピン）(Goldberg, Tら)。陰性症状および認知障害に対して
優れた作用を有する改良された抗精神病薬の開発は、どの遺伝子が精神分裂病に
関与するのかおよび／または関連するのかという知識の欠如により、あるいはこ
れらの症状を正確に類似させた動物モデルの欠如により、ひどく妨げられている
。
【０００４】 多くの推定上の精神分裂病モデルが今日までに記載されている。これらは、発
達障害モデル（development model）(Lillirankら)、社会的隔離(Jones,G.H.ら)
または社会的相互作用(Sams Dodd,F.ら)から、薬理学的モデル(Snyder,S.H.ら)ま
での範囲にわたる。目下の薬理学的な精神分裂病モデルの主な欠点は、薬物の急
性投与に基づいていることである。このモデルは、薬物を投与して精神病の状態
を生じさせることを含むが、抗精神病薬の活性を試験するために、これらの薬物
は、アンフェタミンやフェンサイクリジン（ＰＣＰ）に曝露する前に動物に投与
される。これでは、精神分裂病を発症する前に患者に抗精神病薬を投与するのと
同じことであろう。このモデルはまた、抗精神病治療がこの疾患に対する有益な
効果を得るまで１ヶ月もかかり得るという事実を説明できない。従って、現在の
精神分裂病モデルは、この疾患の臨床的プロファイルに正確に類似してはいない
。
【０００５】 さらに、遺伝子について、すなわち、より詳細には、精神分裂病に罹患した患
者におけるいかなる遺伝子の発現の変化／変異についても、ほとんど知られてい
ない。
【０００６】 従って、本発明の目的の１つは、上記した欠点のうち少なくとも１つを除去す
るおよび／または軽減することである。
【０００７】 本発明は、部分的には、薬物フェンサイクリジン（ＰＣＰ）を用いた精神分裂
病の慢性動物モデルの開発、ならびに精神分裂病に関与するおよび／または関連
すると考えられる遺伝子を同定するためのこのモデルの使用に基づいている。Ｐ
ＣＰがヒトにおいて精神分裂病様の症状を生じさせること、そして精神分裂病に
おける精神病の状態を悪化させることは長年にわたって知られていたが(Allen,R
.M.ら)、これは、患者において観察される機能低下を類似させる精神分裂病の慢
性動物モデルを開発するためには今日まで用いられてこなかった。
【０００８】 本発明はまた、部分的には、精神分裂病患者の血液中で特異的に発現する遺伝
子の解明に部分的に基づいている。
【０００９】 従って、第１の局面によれば、精神分裂病の診断および／または治療の開発に
用いるための単離されたポリヌクレオチドフラグメントが提供される。単離され
たポリヌクレオチドフラグメントを、添付の図面１、２、３、４、５ａ、６ａ、
６ｃ、６ｅ、７ａ、８ａ、９ａ、９ｃおよび１０ａに示す。本発明者らは、現在
、本明細書中に開示される動物モデルまたは精神分裂病患者由来の血液サンプル
において特異的に発現することが観察された１０の遺伝子を同定している。これ
らの遺伝子は、ＹＳＧ１〜１０と命名された。ＹＳＧ３（図１：配列番号１）、
ＹＳＧ４（図２：配列番号２）、ＹＳＧ６（図３：配列番号３）、およびＹＳＧ
９（図４：配列番号４）は、データベーススクリーニングに基づいて新規な配列
であることがわかっている。残りの配列は、公知の遺伝子であるが、以前は精神
分裂病と関連付けられていなかった遺伝子である；ＹＳＧ１（図５ａ：配列番号
５）は、ホスホジエステラーゼ１αに関連する；ＹＳＧ２（図６ａ、６ｃ、６ｅ
：それぞれ配列番号７、９および１１）は、カルシウム非依存性α−ラトロトキ
シンレセプター（ＣＩＲＬ１、２および３）に関連する；ＹＳＧ５（図７ａ：配
列番号１３）は、上皮ジスコイジンドメインレセプター１、ｔｒｋＥに関連する
；ＹＳＧ７（図８ａ：配列番号１５）は、ネトリンレセプターＵＮＣ５Ｈ１に関
連する；ＹＳＧ８（図９ａ、９ｃ：それぞれ配列番号１７および１９）はシナプ
シン１Ａおよび１Ｂに関する；そしてＹＳＧ１０（図１０ａ：配列番号２１）は
ＴＮＦαに関する。
【００１０】 従って、本発明は、配列番号１で表されるＤＮＡ配列を有するポリヌクレオチ
ド；配列番号２で表されるＤＮＡ配列を有するポリヌクレオチド；配列番号３で
表されるＤＮＡ配列を有するポリヌクレオチド；または配列番号４で表されるＤ
ＮＡ配列を有するポリヌクレオチドを提供する。
【００１１】 本発明はまた、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号
５（ＰＤＥ１ α）、配列番号７、９および１１（ＣＩＲＬ１、２および３）、
配列番号１３（ｔｒｋＥレセプター）、配列番号１５（ネトリンレセプター）、
配列番号１７および１９（シナプシン１Ａ／１Ｂ）、ならびに配列番号２１（Ｔ
ＮＦα）からなる群より選択される１つ以上のポリヌクレオチドを指標として用
いることを含む、精神分裂病の診断方法を提供する。
【００１２】 上記ポリヌクレオチドフラグメントは、本明細書中で記載されるような慢性動
物モデルまたは精神分裂病の患者の血液中で特異的に発現することが発見され、
それゆえに、推測上、精神分裂病に関与するおよび／または関連するとみなされ
ている。
【００１３】 本明細書中で使用される「ポリヌクレオチドフラグメント」とは、任意の長さ
のヌクレオチドのポリマー形態を意味し、リボ核酸配列およびデオキシリボ核酸
配列の両方を意味する。原則的に、この用語は、分子の１次構造を意味する。従
って、この用語は、二本鎖ＤＮＡおよび一本鎖ＤＮＡならびに二本鎖ＲＮＡおよ
び一本鎖ＲＮＡ、ならびにそれらの修飾物を包含する。
【００１４】 さらなる局面では、本発明は、精神分裂病を診断するおよび／または精神分裂
病のための治療を開発するのに用いるためのポリペプチドをコードするポリヌク
レオチドフラグメントを提供する。
【００１５】 特に、このポリペプチドは、図５ｂ、６ｂ、６ｄ、６ｆ、７ｂ、８ｂ、９ｂ、
９ｄおよび１０ｂに示され、配列番号６、８、１０、１２、１４、１６、１８、
２０および２２に関する。
【００１６】 一般に、「ポリペプチド」なる用語は、生物学的活性を有するアミノ酸の分子
鎖を意味する。これは特定の長さの産物を意味せず、必要であれば、例えばグリ
コシル化、ミリストイル化、アミド化、カルボキシル化またはホスホリル化によ
りインビボおよび／またはインビトロで修飾され得る；従って、とりわけ、ペプ
チド、オリゴペプチドおよびタンパク質が挙げられる。本明細書中で開示される
ポリペプチドは、当該分野で公知の合成または組換え技術により得ることができ
る。
【００１７】 従って、この用語は、例えば、特定の遺伝子からの種々の転写物およびこれら
の転写物のスプライシング変異体から得ることが可能なポリペプチドなどを包含
するように拡張される。
【００１８】 本明細書中で示されるポリヌクレオチドフラグメントおよびポリペプチド配列
について、個体間に天然の変異が存在し得ることが理解されるだろう。これらの
変異は、全配列におけるヌクレオチドおよび／またはアミノ酸の相違により、あ
るいは当該配列におけるヌクレオチドまたはアミノ酸の欠失、置換、挿入または
逆位によって示され得る。
【００１９】 当該分野で周知のように、遺伝コードの縮重により、同一のアミノ酸について
別のコドンをもたらすコドン中の塩基置換が可能となる。従って、本明細書中に
開示される配列に基づくいかなるこのような派生的ヌクレオチド配列もまた、本
発明の範囲に包含されることが明らかである。
【００２０】 従って、本発明は、添付の図面に示される配列と少なくとも８０％、特に、少
なくとも９０％、就中少なくとも９５％の相同性または類似性を有するヌクレオ
チドおよび／またはポリペプチド配列をさらに包含する。
【００２１】 本発明はまた、本明細書中に開示されるポリヌクレオチド配列と類似するヌク
レオチド配列を包含する。類似する配列は、ストリンジェントな条件下で本発明
のポリヌクレオチド配列にハイブリダイズされたままの配列を包含すると理解さ
れる。通常、被検類似配列と本発明のヌクレオチド配列とを、一般に５０℃〜７
０℃の間の温度で、一定期間、２倍強度のＳＳＣ（２×ＮａＣｌ １７．５ｇ／
ｌおよびクエン酸ナトリウム（ＳＣ）８．８ｇ／ｌ）で緩衝化した生理食塩水（
０．１％のドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）を含む）中でハイブリダイズさせ
、次いで、同じ温度であるがＳＳＣ濃度を低減させた緩衝液を用いて支持体をす
すぐことができる。配列の類似性の程度に依存して、このような低濃度の緩衝液
は、通常、１倍強度のＳＳＣ（０．１％ＳＤＳを含む）、２分の１倍強度のＳＳ
Ｃ（０．１％ＳＤＳを含む）および１０分の１倍強度のＳＳＣ（０．１％ＳＤＳ
を含む）である。類似性の程度が最も大きい配列は、そのハイブリダイゼーショ
ンに対する、低濃度の緩衝液中での洗浄による影響が最も少なかった配列である
。類似の配列と本発明の配列は、それらの間のハイブリダイゼーションが１０分
の１倍強度のＳＳＣ（０．１％ＳＤＳを含む）中における洗浄またはインキュベ
ーションにより実質的に影響されない程度に類似していることが最も好ましい。
【００２２】 さらに、図面に記載されたポリヌクレオチドフラグメントに由来するフラグメ
ントが用いられ得る。
【００２３】 さらに、コードされたポリペプチドに由来するフラグメントもまた本発明に包
含される。
【００２４】 このようなポリペプチドの誘導体を生じる、上述したこのような修飾の全ては
、特徴的なポリペプチドの特性が、本質において実質的に影響を受けないままで
ある限り本発明に包含される。
【００２５】 本明細書中に示される情報は、配列またはその誘導体を遺伝的に操作するため
に（例えば、当該分野で一般的に公知の組換えＤＮＡ技術により配列をクローニ
ングするために）用いることができる。他種の哺乳動物からの（および特にヒト
における）相同配列のクローニングは、広く知られた技術により、本明細書中に
開示される情報を用いて実施することができる；例えば、オリゴヌクレオチドを
、図面に示される配列のコンセンサス領域および／または機能的ドメインに対し
てデザインし、そのようなオリゴヌクレオチド、および／またはこれらのオリゴ
ヌクレオチドプライマーを用いて産生されたポリメラーゼ連鎖反応産物を、例え
ばポリメラーゼ連鎖反応またはハイブリダイゼーションにより他の生物から相同
配列をクローニングするためのプローブとして用いることができる。
【００２６】 本発明のポリヌクレオチドフラグメントを、発現制御配列に結合することがで
きる。このような制御配列は、プロモーター、オペレーター、インデューサー、
リボソーム結合部位などを含み得る。当業者は所定の宿主に対する適切な制御配
列を選択することができる。
【００２７】 本発明のヌクレオチド配列は、種々の発現制御ＤＮＡ配列に結合して、いわゆ
る組換え核酸分子を生じ得る。従って、本発明はまた、発現可能なヌクレオチド
配列を含む発現ベクターを包含する。次いで、当該組換え核酸分子を、適切な宿
主の形質転換に用いることができる。
【００２８】 このような組換え核酸分子は、好ましくは、例えばプラスミドに由来するか、
あるいはバクテリオファージまたはウイルス中に存在する核酸配列に由来し、こ
れらはベクター分子と呼ばれる。
【００２９】 本発明のヌクレオチド配列をクローニングするのに用いることができる特定の
ベクターは、当該分野で公知である(例えば、Rodriguez RLおよびDT Denhardt編、
Vectors: A survey of molecular cloning vectors and their uses, Butterwor
ths, 1988)。
【００３０】 本発明の組換え核酸分子の構築に用いられる方法は、当業者に公知であり、と
りわけ、Sambrookら、Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Ha
rbour Laboratory, 1989に記載されている。
【００３１】 本発明はまた、本発明のポリヌクレオチドフラグメントを（適切であれば）発
現可能な形態で含む形質転換細胞に関する。本明細書中で用いられる「形質転換
」とは、使用する方法（例えば、リン酸カルシウム共沈殿、直接取り込み、エレ
クトロポレーション法または形質導入）に関係なく、インビボ、イクスビボまた
はインビトロで異種核酸配列を宿主に導入することを意味する。
【００３２】 異種核酸配列は、自己複製により維持することができ、あるいは宿主のゲノム
にインテグレートすることもできる。この組換えＤＮＡ分子には、挿入された核
酸配列の発現を制御し得る、指定された宿主に適合する適当な調節配列を備えて
いることが好ましい。
【００３３】 組換え核酸分子の発現に最も広範に用いられている宿主は、細菌、酵母、昆虫
細胞および哺乳動物細胞である。各系は、用いられるベクター、考えられる組換
えポリペプチドの産生および精製の容易さ、ならびに３次構造、グリコシル化状
態、生物学的活性および安定性という点での産物の確実性に関して利点と欠点と
を有し、これは当業者の選択の問題である。
【００３４】 本発明のポリヌクレオチドフラグメントを発現することに加えて、ある状況下
では、細胞または宿主におけるポリヌクレオチドフラグメントの発現または活性
を実質的に阻止するかまたは低減することが有利である。従って、本発明のさら
なる局面によれば、本発明のポリヌクレオチドフラグメントまたはサブフラグメ
ントに相補的なアンチセンスヌクレオチドフラグメントが提供される。合成オリ
ゴヌクレオチド配列の使用または当業者に公知の等価な化学的実在物（例えば、
ペプチド核酸）の使用は、「アンチセンスヌクレオチドフラグメント」の範囲内
に包含される。細胞によって転写されたときにこのようなアンチセンスフラグメ
ントを産生するヌクレオチド配列を含むヌクレオチドフラグメントもまた提供さ
れる。通常、相補的なｍＲＮＡフラグメントに結合してＲＮＡ二重らせんを形成
するアンチセンスＲＮＡフラグメントが提供され、それによってＲＮａｓｅＨが
該分子を切断できるようにし、そして該分子が細胞によってポリペプチドへと翻
訳されることを不可能にする。
【００３５】 本発明のさらなる局面は、本発明のポリペプチドに特異的な抗体またはそれら
のエピトープを提供する。抗原に特異的な抗体の製造および精製は、通常の技術
の問題であり、用いられる方法は当業者に明らかである。「抗体」なる用語は、
ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体（ｍＡｂｓ）、ヒト化、すなわちキメ
ラ抗体、一本鎖抗体、Ｆａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ’）2フラグメント、Ｆａｂ
発現ライブラリーにより産生されるフラグメント、抗イディオタイプ（ａｎｔｉ
‐Ｉｄ）抗体およびエピトープに結合する上記のいずれかのフラグメントを包含
するが、これらに限定されない。このような抗体は、特定のポリペプチドの発現
または活性を調節するのに、あるいは当該ポリペプチドをインビボまたはインビ
トロで検出するのに用いることができる。
【００３６】 本発明はさらに、精神分裂病の治療において治療薬として使用するための試薬
の製造のための組換えまたは合成ポリペプチドを提供する。特に、本発明は、組
換えまたは合成ポリペプチドを医薬上許容されるそれらの担体と共に含む医薬組
成物を提供する。
【００３７】 本発明はまた、例えば個体における本明細書中で同定される遺伝子の発現また
は配列を測定してアレル変異を試験することによる、精神分裂病の予知的および
／または診断的評価方法、ならびに／あるいは精神分裂病に罹患しやすい素質の
ある者の同定方法に関する。さらに、本発明は、このような障害に対する薬剤の
効力を評価する方法、およびこのような障害の治療についての臨床試験に関与す
る患者の進行をモニタリングする方法を提供する。
【００３８】 従って、本発明はさらに、ポリヌクレオチドフラグメントの発現および／また
は本明細書中で同定されたポリペプチド配列の活性を調節する化合物の同定方法
を提供する。このようにして同定された化合物は、精神分裂病の治療に用いるこ
とができる。
【００３９】 従って、 （ａ）配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５（ＰＤ
ＥＩ α）、配列番号７、９および１１（ＣＩＲＬ１、２および３）、配列番号
１３（ｔｒｋＥ）、配列番号１５（ネトリンレセプター）、１７および１９（シ
ナプシン１Ａ／ＡＢ）、ならびに配列番号２１（ＴＮＦα）からなる群より選択
される遺伝子を発現し得る形質転換細胞に試験化合物を接触させること、 （ｂ）当該細胞における精神分裂病関連因子の発現を検出すること、および （ｃ）コントロール（ビヒクル）と比較して、精神分裂病関連因子の誘導を促
進または抑制する化合物を選択すること を含む、精神分裂病関連遺伝子の発現を調節する化合物のスクリーニング方法が
提供される。
【００４０】 （ａ）局所的脳内グルコース利用（local cerebral glucose utilisation）（
ＬＣＧＵ）を測定するか、あるいは配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列
番号４、配列番号５（ＰＤＥ１α）、配列番号７、９および１１（ＣＩＲＬ１、
２および３）、配列番号１３（ｔｒｋＥ）、配列番号１５（ネトリンレセプター
）、配列番号１７および１９（シナプシン１Ａ／１Ｂ）、ならびに配列番号２１
（ＴＮＦα）からなる群により表される１または２以上の遺伝子の発現のレベル
を検出すること、および （ｂ）コントロール群と比較すること を含む、本発明の動物モデルを用いた化合物の抗精神分裂病効果の測定方法もま
た提供される。
【００４１】 本明細書中で同定された遺伝子の生物学的機能は、関連するインビボ系および
インビトロ系を用いて、より直接的に評価することができる。インビボ系には、
精神分裂病の症状を自然に発症する動物系、またはこのような症状を発症するよ
うに操作された動物系（例えば、本明細書中に記載されたモデル）が挙げられる
が、これらに限定されない。さらに、このような系には、トランスジェニック動
物系が挙げられ得るが、これに限定されない。インビボ系には、同定された遺伝
子／ポリペプチド発現細胞種を含む細胞ベースの系が挙げられ得るが、これらに
限定されない。この細胞は、野生型であっても、あるいは精神分裂病に寄与する
ことが公知であるかまたは疑われる改変を含む非野生型細胞であってもよい。
【００４２】 当該同定された遺伝子の生物学的機能のさらなる特徴付けにおいて、当該同定
された遺伝子の発現は、インビボ系および／またはインビトロ系で調節すること
ができ（すなわち、例えば、トランスジェニック動物および／または細胞株内で
過剰発現されるかまたは過少発現されるか）、それに続く系に及ぼす影響をアッ
セイすることができる。あるいは、同定された遺伝子の産物の活性は、目的のイ
ンビボ系および／またはインビトロ系における活性のレベルを増加させるかまた
は減少させることにより調節することができ、次いでそれに続く影響をアッセイ
することができる。
【００４３】 このような特徴付けにより得られた情報は、関連のある精神分裂病の治療また
は制御方法を示唆し得る。例えば、関連する治療には、遺伝子発現および／また
は遺伝子産物活性の調節が含まれ得る。本明細書中に記載されたような特徴付け
の手順は、このような調節がポジティブまたはネガティブであるべきことを示し
得る。本明細書中で用いられる「ポジティブな調節」は、目的の遺伝子または遺
伝子産物の遺伝子発現または活性における増加を意味する。本明細書中で用いら
れる「ネガティブな調節」は、遺伝子発現または活性における減少を意味する。
【００４４】 インビトロ系は、本発明の当該同定された遺伝子の産物を結合し得る化合物を
同定するように設計され得る。同定された化合物は、例えば、野生型および／ま
たは変異体遺伝子の産物の活性を調節するのに有用であり得るか、当該同定され
た遺伝子産物の生物学的機能を精巧に作り上げるのに有用であり得るか、あるい
は正常な同定された遺伝子産物の相互作用を破壊し得る。
【００４５】 別の局面において、本発明は、患者において観察される機能低下を類似させた
精神分裂病の慢性動物モデルを提供するが、この動物モデルは、動物へのＰＣＰ
の付加により開発された。
【００４６】 さらなる局面において、本発明は、 ａ）ヒトにおける精神分裂病の発症を表現する精神病状態を動物に誘発するた
めに、ＰＣＰを動物に投与すること、および ｂ）当該動物におけるＰＣＰにより誘発された精神病状態を維持するために、
一定期間にわたって、ＰＣＰをさらに投与し、この動物における精神分裂病の慢
性状態に類似させること を含む、精神分裂病の慢性動物モデルの開発方法を提供する。
【００４７】 本発明はまた、本発明の方法により製造された動物モデルに関する。
【００４８】 本発明の動物は、任意の適切な非ヒト動物であり得る。通常、この動物は、ラ
ット、マウス、モルモット、ウサギなどである。
【００４９】 上記したように、本発明は、慢性動物モデルの開発に関する。「慢性」なる用
語は、急性すなわち急激に発症させた疾患とは反対に、根深いすなわち長期にわ
たって続く疾患に関する。
【００５０】 本発明者らは、２つの段階を含む慢性的処置パラダイムを開発した。最初の段
階は、ラットなどの動物に精神病状態を誘発すると仮定されたＰＣＰで一定期間
処置することを含み、これはヒトにおける精神分裂病の発症を代弁する。第２段
階は、長期の抗精神病治療を包含し得る期間にわたって、このＰＣＰにより誘発
された精神病状態を維持することに関連するものであり、これはヒトにおいて観
察される抗精神病薬の効力の治療的遅延に関連する。精神病状態の観察は、多く
の方法で測定され得る。しかし、この「精神病状態」の測定は、本発明者らによ
って、類似のヒト画像診断の研究において観察されるＰＣＰに誘発された前頭皮
質機能低下（hypofrontality）として測定され、これは慢性精神分裂病に関連す
る陰性症状および認知障害と相関がある(Wolkin,A.ら)。
【００５１】 ＰＣＰの動物への最初の投与は、精神病状態を誘発するのに十分でなければな
らず、ＰＣＰのさらなる投与は、ＰＣＰにより誘発された精神病状態を維持する
のに十分でなければならない。本発明者らは、精神病状態を誘発するのに必要と
されるＰＣＰの最初の量は、動物において精神分裂病の慢性状態を維持および類
似させるのに不十分であり得ることを観察した。
【００５２】 ０．８６ｍｇｋｇ-1のレベルが、動物モデルにおいて精神分裂病の急性状態を
誘発するに十分であることは以前に観察されているが、本発明者らは、このレベ
ルは慢性状態を維持および誘発するには不十分であることを見出した。本発明者
らは、ラットモデルにおいて精神分裂病の慢性状態を維持および誘発するために
、２．５８ｍｇｋｇ-1のレベルを用いた。このように、本発明は、精神分裂病の
慢性動物モデルの開発方法を提供し、この方法は、精神分裂病の慢性状態を誘導
するために、動物に、１−５ｍｇｋｇ-1のＰＣＰ、例えば、２．５８ｍｇｋｇ-1 のレベルのような２−４ｍｇｋｇ-1のレベルを投与することを含む。
【００５３】 選択された脳領域内でのドーパミン利用に及ぼすこのＰＣＰ処置パラダイムの
効果についても、ＨＰＬＣ分析により調査した。精神分裂病患者の血漿およびＣ
ＳＦ内でのドーパミン代謝物のレベルが確定され、慢性精神分裂病患者はホモバ
ニリン酸（ＨＶＡ）およびジヒドロキシフェニル酢酸（ＤＯＰＡＣ）の両方のレ
ベルがコントロールに比較して低いことが見出された(Heritch, A. J)。このこ
とは、精神分裂病患者の脳内でドーパミンのターンオーバーが減少したことを暗
示している。
【００５４】 実用的疾患動物モデルとしての有効性に関し、基本的でありかつ考慮しなけれ
ばならないある判断基準が存在する。第１の基準である構築妥当性(construct v
alidity)は、モデルがこの疾患の中心的な特性である根本的な神経生物学的異常
に類似する能力として定義される。精神分裂病の病因学は少しも明らかになって
いないので、この疾患に類似させるのは難しい。第２の基準である外観的妥当性
(face validity)は、モデルが、この疾患で特徴的に観察される症状に類似した
症状を生じなければならないこととして定義される。第３の基準である予見的妥
当性（predictive validity）は、疾患に対して確定した作用を有する薬物が、
動物モデルにおけるパラメータを正常な状態に回復させるべきである一方、他の
クラスの薬物は不活性であるべきであることとして定義される。
【００５５】 本明細書に記載される慢性ＰＣＰモデルは、これらの基準を見事に満足する。
該モデルは、精神分裂病において観察される効果と類似する効果をヒトにおいて
生じさせることが知られている薬物を使用する。
【００５６】 この精神病的状態は同一の機構によっては引き起こされないかもしれないが、
生じた事実から、この精神病的状態はおそらく、精神分裂病と関連する障害にお
いて暗示される系と同一の系（例えば、グルタミン酸作動性の系(Tamminga,C.)
およびドーパミン作動性の系(Angrist,B.ら)）により仲介されると思われる。こ
のモデルはまた、特定の神経系回路（皮質視床回路および側頭辺縁回路）におい
て改変された機能を示したが、精神分裂病における異常であることがわかってい
る(Swerdlow,N.R.らおよびWeinberger,D.R)。このモデルはまた、代謝機能不全を
伴う外観的妥当性を有し、また、レセプター結合における変化がこのモデルおよ
び精神分裂病において観察される。前頭前野皮質の機能不全の可逆性欠如が臨床
的観察を反映しているものの、このモデルの予見的妥当性を評価するのはより難
しい。しかし、公知の抗精神病薬によって聴覚系内での機能不全を減ずることは
、このモデルが予見的妥当性を有することを示唆する。
【００５７】 このモデルはまた、精神分裂病患者の死後組織において減少することがわかっ
ているパルブアルブミンの発現についても研究された。このモデルにおけるパル
ブアルブミンの発現もまた、精神分裂病患者において観察されたように、前頭前
野皮質において減少した。従って、このモデルは、精神分裂病に関連する脳障害
の確立されたパターンを再現する。この観察は、新規な抗精神病薬の開発に有用
であり得る。
【００５８】 このモデルは、新規精神分裂病治療薬のスクリーニングにおいて特に応用でき
ることがわかる。すなわち、試験化合物を、この動物モデルに投与し、それらが
精神病の症状に及ぼす影響を観察することができる。従って本発明はまた、本発
明の動物モデルを用いて同定される新規な抗精神分裂病薬に関する。
【００５９】 このモデルはまた、その発現が「正常な」動物と比較して変化している遺伝子
の検出を可能にする。「正常な」動物とは、慢性の精神病状態が誘発されておら
ず、正常な挙動を示す動物である。
【００６０】 このようにして同定された遺伝子は、精神分裂病の状態と関連し得る。それゆ
え、このような遺伝子を同定することにより、発現を正常に戻すようにデザイン
された治療の研究および／または開発が可能となる。
【００６１】
【実施例】
本発明を、非限定的な実施例により、および添付の図面（ＣＬＯはクロザピン
を示し、ＨＡＬはハロペリドールを示す）を参照して、ここでさらに説明する。
【００６２】実施例１−ラットモデルの開発 腹腔内（ｉ．ｐ．）注射の初期処置期間（毎日１回、５日間）を実行し、次い
で、腹腔内注射の維持スケジュールを週に３回（６０時間毎）、さらに２１日間
にわたって実行した。脳組織中での薬物の長い半減期のために、モデルの維持段
階の間、ＰＣＰを断続的に曝露するのが好ましかった(Misra,A.L.ら)。選択され
たＰＣＰの用量は、ＮＭＤＡチャンネルの選択的阻害（０．８６ｍｇｋｇ-1）お
よび薬理学的に選択性が小さいがＰＣＰが誘発する細胞死についてのより少ない
ＥＤ50用量（２．５８ｍｇｋｇ-1）を示した。本モデルとの比較として、本発明
者らはまた、定量的Ｃ−２−デオキシグルコースオートラジオグラフィーを用い
て(Sokoloff,L.)、以前に刊行されたＰＣＰでの半慢性的処置(Jentsch,J.D.ら)
の効果も研究した。
【００６３】 局所的脳内グルコース利用（ＬＣＧＵ）は、自由に動いているラットについて
の最初の方法を改変して(Crane.A.M.ら)、最初の誘発段階から７２時間後（第８
日目）、およびその後に維持段階（第２９日目）が続くこの誘発段階の7２時間
後に測定した。ＬＣＧＵは、ＰＣＰへの最後の曝露の７２時間後に測定されたの
で、ＰＣＰのＬＣＧＵへの影響は、この薬物の急激な影響とは無関係であろう。
表１は、該モデルの誘発および維持段階からの結果を示す。２．５８ｍｇｋｇ-1 のＰＣＰ用量は、代謝機能不全を誘発し、このことは、内側眼窩皮質、縁前方皮
質、聴覚経路および視床の網様体核内でモデルの両方の段階の後に明らかであっ
た。しかし、モデルの初期段階の間に、これらの領域内で低用量ＰＣＰ（０．８
６ｍｇｋｇ-1）によって生じた代謝機能不全は、それに続くモデルの第２の段階
では、維持されなかった。従って、２．５９ｍｇｋｇ-1の用量を用いて、本発明
者らは、精神分裂病の患者におけるヒト画像診断の研究における所見に類似する
新規な処置パラダイムを確立した。これと比較して、以前に刊行された、ＰＣＰ
（５ｍｇｋｇ-1を１日２回、７日間）を用いた半慢性的処置(Jentschら)は、い
かなる脳の領域内においても、ＬＣＧＵに対する有意な影響を生じなかった（デ
ータは示さない）。
【００６４】 要約すると、この慢性ＰＣＰモデルを用いる動物研究から提供されたデータは
、ヒト画像診断の研究および精神分裂病患者由来の精神分裂病脳組織の死後の研
究から以前に刊行されたデータによく似ている。ヒト画像診断の研究は、前頭前
野機能不全を精神分裂病の陰性症状と関連づけ(Wolkin,A.ら、1992)、そして側頭
辺縁系（聴覚系および海馬を含む）および視床の異常を精神分裂病の陽性症状と
関連づける(Tamminga,C.A.ら、1992)ので、このモデルは、この疾患の陽性および
陰性症状の両方に類似することが提唱され得る。このように、このモデルは、既
存の精神分裂病の動物モデルよりも優れた構築的、外観的および予見的妥当性を
有する。
【００６５】
【表１】
【００６６】 表１：全てのデータは、平均ＬＣＧＵ（μｍｏｌ／１００ｇ／分）±ＳＥＭ（
ｎ＝５〜６）として表した。別個の脳領域について個別の一方向ＡＮＯＶＡ（on
e-way ANOVA）を用い、次いで適切な場合には、ｐ＜０．０５の統計的有意性（* コントロールと比較してｐ＜０．０５）でもってFischerの最小有意差ｈｏｃ後
試験（least significant difference post hoc test）により統計的解析を行っ
た。第８日目のデータは、５日間の腹腔内注射（１日に１回、０．８６ｍｇｋｇ-1 または２．５８ｍｇｋｇ-1のＰＣＰあるいはビヒクル（滅菌生理食塩水）を注
射）後のＰＣＰへの最後の曝露の後７２時間で測定したＬＣＧＵを表す。第２９
日目のデータは、０．８６ｍｇｋｇ-1または２．５８ｍｇｋｇ-1のＰＣＰあるい
はビヒクル（滅菌生理食塩水）の、第１〜５日目における１日１回の腹腔内注射
ならびに第８、１０、１２、１５、１７、１９、２２、２４および２６日目にお
ける１日１回の腹腔内注射後のＰＣＰへの最後の曝露の後７２時間で測定したＬ
ＣＧＵを表す。
【００６７】 略号：ｍＯ、内側眼窩皮質；ＰｒＬ、縁前方皮質；Ｒｔ、視床の網様体核；Ｍ
Ｄ、視床の背側正中核；Ａｕ、第１の聴覚皮質；ＡｕＤ、第２の聴覚皮質の背側
核；ＤＬＬおよびＶＬＬ、外側毛帯の背側核および腹側核。
【００６８】実施例２−ラットモデルの試験 このモデルにおける、抗精神病薬の効果を確定するために、次いで、２．５８
ｍｇｋｇ-1の用量のＰＣＰ（これは、第１の研究において代謝機能不全を生じた
）を用いて、第２の研究を抗精神病治療と組み合わせて行った。薬物の一定の血
漿濃度（これは、ヒトにおける薬物の治療上の血漿レベルを反映する）を維持す
るために、抗精神病薬を浸透圧ミニポンプにより２１日間投与した。
【００６９】 表２は、ビヒクルで処置したラットと比較した、ハロペリドールおよびクロザ
ピンの単独ならびにＰＣＰ処置と組み合わせた効果を示す。内側眼窩皮質、縁前
方皮質内、海馬のＣＡ１領域および視床の網様体核内では、コントロールと比較
して、ＰＣＰ処置した後に代謝機能不全が再び観察された。クロザピンおよびハ
ロペリドールはまた、これらの領域内で代謝機能不全を生じ、そしてＰＣＰによ
って生じる機能不全を調節できなかった。聴覚系、第２聴覚皮質の背側核、外側
毛帯の背側および外側核ならびに蝸牛核では、ＰＣＰは再び代謝機能不全を誘発
した。しかし、これらの領域内で、クロザピンおよびハロペリドールはそれら自
身では有意な機能不全を生じなかったが、ＰＣＰと組み合わせて用いた場合、Ｐ
ＣＰにより誘発された機能不全を回復した。ハロペリドールおよびクロザピンが
前頭前野機能低下を調節することができないことは、臨床的研究からのデータと
一致し、かつこの前頭前野機能低下が精神分裂病の陰性症状および認知障害と関
連するという理論とも一致する。抗精神病薬が陽性症状に与える影響は、画像診
断の研究に関してはあまり研究されていない。側頭葉構造（海馬および聴覚皮質
）内でのハロペリドールおよびクロザピンの効果に関しては、刊行された証拠は
今日までのところ存在しない。
【００７０】 しかし、両方の抗精神病薬が聴覚系（聴覚皮質、外側毛帯および蝸牛核）内で
のグルコース利用の減少を回復する能力は、定型的および非定型抗精神病薬が、
精神分裂病の陽性症状の程度を改良し得るという臨床的証拠と一致する。
【００７１】 この慢性ＰＣＰモデルの有効性をさらに実証するために、この処置法が前頭前
野皮質内で５−ＨＴ2Aレセプターに与える影響を研究した。慢性ＰＣＰ処置によ
り、層ＩＩおよび層ＩＩＩ（コントロール１５８±６、ＰＣＰ１３９±４ｆｍｏ
ｌｍｇ-1）および層ＶおよびＶＩ（コントロール８２±４、ＰＣＰ６９±３ｆｍ
ｏｌｍｇ-1）において５−ＨＴ2Aレセプターは有意に減少した。これは、精神分
裂病患者由来の５−ＨＴ2Aレセプター結合の死後の研究(Laurelle,M.ら)と完全
に一致する。
【００７２】 この慢性ＰＣＰモデルの有効性をさらに実証するために、この処置法がパルブ
アルブミンｍＲＮＡ発現に及ぼす影響を研究した。慢性ＰＣＰ処置の後、前頭前
野皮質の縁前方領域内で、パルブアルブミンｍＲＮＡの減少が観察された（コン
トロール０．０７１７±０．００１１、ＰＣＰ０．０５３６±０．００２３相対
光学的密度（ＲＯＤ））。このＰＣＰにより誘発される減少は、クロザピン（０
．０６９３±０．００５０ＲＯＤ）により回復されるが、ハロペリドール（０．
０５５７±０．００２２ＲＯＤ）によっては回復されない。ＰＣＰは、視床の腹
側網様体核内で、パルブアルブミンｍＲＮＡを有意に減少させた（コントロール
０．６４１６±０．０１２２、ＰＣＰ０．５０３２±０．０１９４ＲＯＤ）が、
これはクロザピン（０．６３５４±０．０１７３ＲＯＤ）およびハロペリドール
（０．０６１９９±０．０１３７ＲＯＤ）の療法によって回復された（図１２を
参照のこと）。このパルブアルブミン発現の減少は、前頭前野皮質内(Beasley&R
eynords,1997)および視床前部（Danosら、1998）での精神分裂病の死後組織の研
究と一致する。ハロペリドールではなくクロザピンが前頭前野皮質内でパルブア
ルブミン発現の減少を回復させる能力は、それが精神分裂病において認知障害／
および陰性症状を軽減する能力と一致する。従って、パルブアルブミン不全が回
復されることは、非定型的抗精神病活性を検出するための有用な指標であり得る
。
【００７３】方法 ５−ＨＴ2Aレセプター結合：前頭前野皮質レベルからの切片を、５０ｍＭトリ
スＨＣＬ緩衝液（ｐＨ ７．４）中、室温でプレインキュベートした後、２回連
続して洗浄し内因性のリガンドを除去した。全結合を、１μＭプラゾジンおよび
１μＭのテトラベナジン（非５−ＨＴ2A結合をブロックするため）存在下で、０
．７１ｎＭ(Wolkin,A.ら)の3Ｈ−ケタンセリンを用いて測定した。非特異的結合
を、５０ｎＭスピペロンを用いて規定した。切片を、適切なリガンド溶液を用い
て、１時間、室温でインキュベートし、次いで、氷冷した緩衝液中で、２回、１
０分間にわたって洗浄し、次いで、氷冷水ですすぎ、速やかに風乾させた。次い
で、この切片を、予め補正した(Wolkin,A.ら) 3Ｈ−標準を用いてフィルムに露
光した(Biomax MR, Kodak)。オートラジオグラムを、ＭＣＩＤデンシトメトリー
システムを用いて分析した。結果を、一方向ＡＮＯＶＡを用いて、次いでstuden
t Newman-Keulsのhoc後試験（student Newman-Keuls post hoc test）を用いて
統計的に解析した。
【００７４】 インサイチュハイブリダイゼーション：４５マーオリゴヌクレオチドプローブ
を、ラットパルブアルブミン遺伝子（GenBank受託番号Ａ８１９３４５）の塩基
２２３〜２６７に対してデザインした。インサイチュハイブリダイゼーションを
、WisdenおよびMorris(1994)の方法に従って行なった。
【００７５】
【表２】
【００７６】 表２：全てのデータは、平均ＬＣＧＵ（μｍｏｌ／１００ｇ／分）±ＳＥＭ（
ｎ＝６）として表した。それぞれの別個の脳領域について個別の二方向ＡＮＯＶ
Ａ(two-way ANOVA)を用い、続いて、適切な場合には、ｐ＜０．０５の統計学的
有意性（*コントロールに比較してｐ＜０．０５）でもってTukeyのhoc後試験（p
ost hoc test）により統計学的分析を行った。処置パラダイムは以下の通りであ
る：第１〜５日目における、ＰＣＰ（２．５８ｍｇｋｇ-1）またはビヒクル（生
理食塩水）の１日１回の腹腔内注射（段階１）、第８日目に予め水に浸した浸透
圧ミニポンプの埋め込み（ビヒクル、クロザピン２０ｍｇｋｇ-1／日、ハロペリ
ドール１ｍｇｋｇ-1／日）、第８、１０、１２、１５、１７、１９、２２、２４
および２６日目における、１日１回のＰＣＰまたはビヒクルの腹腔内注射（段階
２）、そして該動物を第２９日目に殺した。略号は、表１の説明文のものと同じ
である。
【００７７】実施例３−精神分裂病およびその治療に重要であり得る新規遺伝子の発見のため のＰＣＰモデルの使用 ２つの異なる分子生物学的アプローチを用い、本明細書中に記載のＰＣＰモデ
ルを使用して、精神分裂病に関する新規遺伝子を同定した。
【００７８】 １）アトラスアレイ（Atlas Arrays) ラットの４つの群を、（ａ）慢性的ＰＣＰ（実施例１を参照）、（ｂ）慢性的
ビヒクル（コントロール）、（ｃ）慢性的ＰＣＰ＋慢性的クロザピンおよび（ｄ
）慢性的ＰＣＰ＋慢性的ハロペリドールで処置した。
【００７９】 ＹＲＩＮＧ ＰＣＰモデルに従って、ラットにＰＣＰ（２．５８ｍｇ／ｋｇ）
またはビヒクルを５日にわたって腹腔内注射した。第７日目に、これらに、それ
ぞれ２０ｍｇ／ｋｇ／日または１ｍｇ／ｋｇ／日で薬物を投与するような濃度の
クロザピンまたはハロペリドールのいずれかあるいはビヒクルを含む浸透圧ミニ
ポンプを埋め込んだ。同じ日に、ラットに、ＰＣＰ（２．５８ｍｇ／ｋｇ）また
はビヒクルのいずれかの一連の腹腔内注射（２．５日毎）を開始した。この投薬
プログラムにより、以下の処置群が生ずる： 腹腔内 ミニポンプ Ｎ° ビヒクル ビヒクル ６ ＰＣＰ ビヒクル ６ ＰＣＰ クロザピン ６ ＰＣＰ ハロペリドール ６
【００８０】 ミニポンプ埋め込みの２１日後、動物を頚椎脱臼により殺し、そして前頭前野
皮質を解剖し、そして−７０℃で保存した。次いで、以下のプロトコルに従って
ＲＮＡを調製し、そして製造者(Clontech)の説明書に従って、ラットアトラスア
レイキットを用いて対応するｃＤＮＡ合成およびハイブリダイゼーション処置を
実行した。この処置によりいくつかの遺伝子が影響を受けた。特に興味が持たれ
るのはＥ３Ｃ（カルシウム非依存性α−ラトロトキシンレセプターＣＩＲＬ）で
あり、これはＰＣＰ処置方法の後に増加を示し、そして抗精神病薬ハロペリドー
ルおよびクロザピンによって覆った。第２の実験は、１群当たりｎ＝４で同じ処
置法を用いて行われた（各値は、３匹のラット由来のプールされた前頭前野皮質
組織である）。ＣＩＲＬの著しい増加が、慢性的ＰＣＰの後に確認され、それに
加えて、ビヒクルで処置したコントロール群と比較して、慢性的ＰＣＰ後にＵＮ
Ｃ５Ｈ１（ネトリンレセプター）およびシナプシン（１Ａおよび１Ｂ）の発現が
顕著に増加した（以下の表を参照のこと）。
【００８１】
【表３】
【００８２】 結果を、平均相対光学密度±ＳＥＭとして表す。統計学的有意性は、ｐ＜０．
０５であると規定された。１群当たりＮ＝３／４。
【００８３】 アトラスアレイのためのＲＮＡ調製のためのプロトコル 解剖手順からの凍結組織をリボライサー管(ribolyser tube)内に予め入れてお
く。 １）Qiagen溶解緩衝液（lysis buffer）（β-メルカプトエタノール含有、最終
濃度３％）を１．１ｍｌ添加する。 ２）リボライサー中６．５ｇで、２０秒のホモジナイゼーションを３回行う。 ３）遠心分離器中で３分間回転させる。 ４）新しい管にデカンテーションし、再び３分間回転させる。 ５）上清をさらに溶解緩衝液で希釈することが望まれる場合、この段階で決定す
る。 ６）等容積の精製フェノール／ＣＨＣｌ3（ｐＨ４．７）を添加し、３０秒間攪
拌し、そして氷上に１０分間放置する。 ７）再び攪拌し、そして４℃にて、５〜１０分間、１５００ｇで回転させる。 ８）上清をデカンテーションし、そして１００μｌのＨ2Ｏを添加する。等容積
のフェノール／ＣＨＣｌ3（ｐＨ４．７）を添加し、攪拌し、１５００ｇで５〜
１０分間回転させる。 ９）上清をデカンテーションし、そして１００μｌのＨ2Ｏを添加する。等容積
のＣＨＣｌ3を添加し、攪拌し、１５００ｇで５〜１０分間回転させる。 １０）上清を新しい管にデカンテーションする。 １１）さらに溶解緩衝液で再抽出し、そして工程６〜９を進行させ、ステージ１
０で画分をプールする（上清にＨ2Ｏを加えないこと）。 １２）上清の容積を測定し、０．１容積の２Ｍ ＮａＯＡｃおよび２．５容積（
全容積）のエタノールを添加し、混合し、そして−８０℃で少なくとも１時間放
置する。 １３）１５００ｇで１５〜２０分、４℃にて回転させる。 １４）ペレットを７０％ＥｔＯＨで洗浄する。 １５）５分間回転させる。 １６）上清をデカンテーションし、高速回転させ、上清の残りをピペットで除去
する。 １７）ペレットを風乾する（乾燥しすぎないこと）。 １８）ペレットを、６０μｌのＨ2Ｏ中に再び懸濁させる。 １９）ＯＤ260を測定する。 ２０）（Ｈ2Ｏでさらなる再抽出を行う以外は）Message Clean (Genhunter) プ
ロトコルに従ってＲＮＡをＤＮａｓｅ１で処理する。 ２１）可能な限り少量のＨ2Ｏ（１２μｌ）中に再び懸濁させて、アトラスのｃ
ＤＮＡ合成工程のために、ＲＮＡを濃縮したまま保つ。 ２２）最終容積が５μｌである２０μｇのＲＮＡを、アトラスアレイマニュアル
で概説されているプロトコルに従ってｃＤＮＡを産生するために用いる。
【００８４】 ２）ＣＩＲＬの重要性の更なる証明 ヒト精神分裂病患者脳および年齢の釣り合ったコントロール組織のサンプル（
Sheffield大学のG Reynolds教授から得た）を、ＣＩＲＬの発現における変化に
関し、ＲＴ−ＰＣＲで試験した。
【００８５】 さらに、ラットの４群を、アトラスアレイ実験で第３２頁に詳細に記載したよ
うに、ａ）慢性ＰＣＰ、慢性ビヒクル（コントロール）、ｃ）慢性ＰＣＰ＋クロ
ザピン、およびｄ）慢性ＰＣＰ＋慢性ハロペリドールで処置した。次いで、ＣＩ
ＲＬの特定のアイソフォームのためのＲＴ−ＰＣＲを前頭前野皮質において行っ
た。
【００８６】 脳組織調製方法（ラットおよびヒト） ＲＴ−ＰＣＲプロトコル 全ＲＮＡの単離 １％β−メルカプトエタノールを含有する溶解緩衝液（Qiagen）１ｍｌを、脳
組織約５０−１００ｍｇに加えた。組織サンプルを、リボライザー（Hybaid）を
用い、各々２０秒続く６．５ｇでの３回の粉砕によってホモゲナイズした。次い
で、サンプルを、室温で微量遠心機で３分間回転させた。上清を取り出し、さら
に３分間再回転させた。上清を新しいチューブにデカントし、それに、等容積の
７０％エタノールを加えた。次のＲＮＡ単離操作は、製造業者（Qiagen）のプロ
トコルに従い行った。
【００８７】 ｃＤＮＡの合成 ｃＤＮＡ合成を、製造業者（Life Technologies）のプロトコルに従い行った
。要約すると、オリゴｄTプライミングを用い、全ＲＮＡ３−５μｇを逆転写し
た。ｃＤＮＡ合成後、サンプルを小分けし、−７０℃で保存した。各々の小分け
のｃＤＮＡ量によって、各ＰＣＲ反応につき、インプットのＲＮＡ鋳型濃度約７
５ｎｇによって４回の異なるサイクルでＰＣＲ滴定が可能となろう。
【００８８】 ＰＣＲ 発現レベルの変化は、半定量的ＰＣＲによって測定した。異なるサンプル間の
発現レベルを、各サンプルに存在するβ−アクチンのｍＲＮＡの量に対し標準化
した。簡単に述べると、既知量の鋳型をＰＣＲ増幅した。サンプルを、４回の連
続サイクルで取り出したが、取り出す第１サイクルは時には、対数増幅が検出さ
れたときに依存して、変わった。サンプルをアガロースゲル上で分離し、GelSta
r溶液（Flowgen）で染色した。結果は、サイクル数の増加に対し、相対的光学密
度のｌｏｇ10としてプロットした。線型回帰分析を行った。β−アクチン滴定の
場合、値は、回帰線とＹ軸との交点から得た。これらの値を単一サンプルに対し
標準化した。この工程で生じた標準化係数を用いて、標的遺伝子発現レベルから
のデータを標準化した。
【００８９】 結果 コントロールと比較して、精神分裂病死後脳組織におけるブロードマン領域１
１で増加したＣＩＲＬ１のｍＲＮＡのレベルは、ＣＩＲＬの変化が精神分裂病状
態において重要であり得ることを示唆する（図１３参照）。
【００９０】 ラット脳におけるＣＩＲＬの選択された特定アイソフォームの分析は、慢性Ｐ
ＣＰ処置は、前頭前野皮質におけるＣＩＲＬ１、ＣＩＲＬ２（ＡＢ）およびＣＩ
ＲＬ３（ＡＡ）の発現を減少させることを示した（図１４、１５および１６参照
）。定型的抗精神病薬であるハロペリドールではなく、非定型的抗精神病薬のク
ロザピンによって、ＰＣＰにより誘発されるＣＩＲＬ１のｍＲＮＡレベルの減少
が回復した。両方の薬剤は、ＰＣＰによって誘発されるＣＩＲＬ２とＣＩＲＬ３
の減少を回復させた。
【００９１】 これらのデータは、抗精神病薬活性の治療標的としてＣＩＲＬを支持する。
【００９２】 ３）ディファレンシャルディスプレイ（Differential Display） ラットの４つの群を、（ａ）慢性的ＰＣＰ、（ｂ）慢性的ビヒクル（コントロ
ール）、（ｃ）慢性的ＰＣＰ＋慢性的クロザピン、（ｄ）慢性的ビヒクル＋慢性
的クロザピンで処置した（上記の通り）。
【００９３】 ディファレンシャルディスプレイを、LiangおよびPardeeの方法に従って実行
した(Molecular Biotechnology,110,261-267, 1998)。前頭前野皮質組織を解剖
し、そして全ＲＮＡを、Qiagenの「RNeasy」キットを用いて抽出した。次いで、
オリゴ（ｄＴ）プライマーを用い、ＭＭＬＶ逆転写酵素を使用してｃＤＮＡを合
成した。得られたｃＤＮＡを、Clontech「Delta」ディファレンシャルディスプ
レイキットを用いるポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）のためのテンプレートとし
て用いた。Clontechの「Delta」ディファレンシャルディスプレイキットマニュ
アルに従って、任意のプライマーと「Advantage 2」ポリメラーゼの種々の対の
組み合わせを用いた。ディファレンシャルディスプレイ産物を６％アクリルアミ
ドゲル上で電気泳動し、Ｘ線フィルムに露光した。ビヒクル処置した動物および
ＰＣＰ処置した動物由来の前頭前野皮質間で差異をもって発現しているｃＤＮＡ
フラグメントに対応するバンドを切り出し、オリジナルのプライマーを用いて再
増幅した。次いで、これらの処置群に由来するさらなる前頭前野皮質を用いて、
差異のある発現を確認した。差異のある発現が確認されたｃＤＮＡをサブクロー
ニングし、配列を決定し、次いで公知の遺伝子またはＥＳＴとの相同性について
、得られた配列情報を「DNA Data Bank of Japan」のデータベースと比較した。
【００９４】 ホスホジエステラーゼ１αについての既知の遺伝子と同様に差異をもって発現
したとして、３つの新規な配列が同定された（配列番号１、２、３および４）。
上記で同定されたヌクレオチド配列の発現における変化のさらなる確認は、ラッ
トモデルの慢性的ＰＣＰ処置の後に、半定量的ＲＴ−ＰＣＲにより確認された（
データは示さない）。
【００９５】 ４）ＲＴ−ＰＣＲ ラットの４群を、（ａ）慢性ＰＣＰ、（ｂ）慢性ビヒクル（コントロール）、
（ｃ）慢性ＰＣＰ＋慢性クロザピン（上記）、または（ｄ）慢性ＰＣＰ＋慢性ハ
ロペリドール（上記）で処置した。組織を、ＴＮＦαのｍＲＮＡに特異的なプラ
イマーを用いて、上記のように、ＲＮＡ抽出とＲＴ−ＰＣＲのために処理した。
【００９６】 急性ＰＣＰ処置は、ラット前頭前野皮質におけるＴＮＦαのレベルを減少させ
た（図１７参照）。この効果は、薬剤処理後２時間および２４時間で明らかであ
った。
【００９７】 ＰＣＰと抗精神病薬で慢性的に処置した群において（詳細は、第３２頁参照）
、ハロペリドールと組み合わせたＰＣＰは、慢性ＰＣＰ群とは有意に異なってい
た（図１８参照）。
【００９８】 更なる研究は、分裂病患者の下前頭回眼窩部におけるＴＮＦαのｍＲＮＡレベ
ルにおける有意な増加を示した（図１９参照）。
【００９９】 これらの結果は、精神分裂病の発症と治療におけるＴＮＦαの関係を示す。
【０１００】実施例４−ｃＤＮＡマクロアレイを用いて測定したヒト血液サンプル中で発現量 の異なる遺伝子 材料および方法 精神分裂病患者および健康なボランティア由来のヒト男性の血液サンプルを、
Gartnaval Royal Hospital, Glasgow, UKから、同意のもとに得た。サンプルの
プロファイルを表４に示す。
【０１０１】 全ＲＮＡを、TRIzol LS Reagent(Gibco/BRL)を用いてヒト血液から単離し、そ
してＤＮａｓｅＩで処理した。４〜８μｇの全ＲＮＡを、ｃＤＮＡのためのテン
プレートとして用いた。33Ｐ放射標識したｃＤＮＡを、アトラス（登録商標）ヒ
トサイトカイン／レセプターアレイ(Clontech)を用いてハイブリダイズした。ア
レイを洗浄し、次いでＸ線フィルムに曝露した。フィルム上のスポットを、デン
シトメトリーにより分析した。独立したサンプルのｔ−検定によりデータを分析
した。統計的有意性はｐ＜０．０５であると規定された。
【０１０２】結果およびディスカッション この研究において、２６８の遺伝子のうち２４〜９３だけを測定することがで
きた。これは、いくつかの理由に起因し得る。第１に、多くのサイトカインは発
現が乏しい。第２に、第１鎖ｃＤＮＡ（1st strand cDNA）合成の効率は、ｍＲ
ＮＡの代わりに全ＲＮＡを用いたために低くなった可能性があるだろう。入手可
能なサンプルは量が限られているので、全ＲＮＡを利用した。最後に、いくつか
の膜は極めて高いバックグラウンドを有しており、これはこの膜を煮沸しても洗
い落とせなかった。
【０１０３】 最初に、インプットＲＮＡの量を補正するために、遺伝子の発現レベルを、３
つのハウスキーピング遺伝子、ユビキチン、リボソームタンパク質Ｓ９およびホ
スホリパーゼＡ２のそれぞれと比較した。シグナルを標準化するために異なるハ
ウスキーピング遺伝子を用いた場合、わずかに異なった結果が得られた。従って
、偏差を少なくするため、３つのハウスキーピング遺伝子からのそれぞれの相対
的な発現レベルを平均化した。上皮ジスコイジンドメインレセプター１であるｔ
ｒｋＥ（２３ｊ）のみが、精神分裂病とコントロールとの間で有意な差を示した
（図８を参照のこと）。このキナーゼは、神経成長因子のレセプターであり、ほ
とんどの組織中で低レベルで発現し、発現は脳および肺中で最も高いと主張され
ている(Perezら)。最近の論文は、精神分裂病患者におけるｔｒｋＣ ｍＲＮＡ
レベルが前頭皮質内で減少したことを示した（Schrammら）。ｔｒｋＣは、ニュ
ーロトロフィン−３の高親和性レセプターである。ニューロトロフィンおよびそ
れらのレセプターは、精神分裂病における分子病理と関連している(Bayer&Falka
i)。ＴｒｋＥもまた、ｔｒｋＣと同様の減少を示すかもしれない。
【０１０４】
【表４】
【０１０５】参考文献
【０１０６】
【表５】
【０１０７】
【表６】
【図面の簡単な説明】
【図１】 本発明のラットモデルの脳内で特異的に発現することが観察された配列のヌク
レオチド配列を示す。
【図２】 本発明のラットモデルの脳内で特異的に発現することが観察された配列のヌク
レオチド配列を示す。
【図３】 本発明のラットモデルの脳内で特異的に発現することが観察された配列のヌク
レオチド配列を示す。
【図４】 本発明のラットモデルの脳内で特異的に発現することが観察された配列のヌク
レオチド配列を示す。
【図５】 図５ａは、本発明のラットモデルの脳内で特異的に発現することが観察された
、ホスホジエステラーゼ１αのヌクレオチド配列を示す。 図５ｂは、本発明のラットモデルの脳内で特異的に発現することが観察された
、ホスホジエステラーゼ１αのポリペプチド配列を示す。
【図６】 図６ａは、本発明のラットモデルの脳内で特異的に発現することが観察された
、カルシウム非依存性α−ラトロトキシンレセプターのヌクレオチド配列を示す
。 図６ｂは、本発明のラットモデルの脳内で特異的に発現することが観察された
、カルシウム非依存性α−ラトロトキシンレセプターのポリペプチド配列を示す
。 図６ｃは、本発明のラットモデルの脳内で特異的に発現することが観察された
、カルシウム非依存性α−ラトロトキシンレセプターのヌクレオチド配列を示す
。 図６ｄは、本発明のラットモデルの脳内で特異的に発現することが観察された
、カルシウム非依存性α−ラトロトキシンレセプターのポリペプチド配列を示す
。 図６ｅは、本発明のラットモデルの脳内で特異的に発現することが観察された
、カルシウム非依存性α−ラトロトキシンレセプターのヌクレオチド配列を示す
。 図６ｆは、本発明のラットモデルの脳内で特異的に発現することが観察された
、カルシウム非依存性α−ラトロトキシンレセプターのポリペプチド配列を示す
。
【図７】 図７ａは、正常なコントロールと比較して、精神分裂病患者の血中で特異的に
発現することが観察された、上皮ジスコイジンドメインレセプター（ｔｒｋＥ）
のヌクレオチド配列を示す。 図７ｂは、正常なコントロールと比較して、精神分裂病患者の血中で特異的に
発現することが観察された、上皮ジスコイジンドメインレセプター（ｔｒｋＥ）
のポリペプチド配列を示す。
【図８】 図８ａは、本発明のラットモデルの脳内で特異的に発現することが観察された
、ネトリンレセプターのヌクレオチド配列を示す。 図８ｂは、本発明のラットモデルの脳内で特異的に発現することが観察された
、ネトリンレセプターのポリペプチド配列を示す。
【図９】 図９ａは、本発明のラットモデルの脳内で特異的に発現することが観察された
、シナプシン１Ａのヌクレオチド配列を示す。 図９ｂは、本発明のラットモデルの脳内で特異的に発現することが観察された
、シナプシン１Ａのポリペプチド配列を示す。 図９ｃは、本発明のラットモデルの脳内で特異的に発現することが観察された
、シナプシン１Ｂのヌクレオチド配列を示す。 図９ｄは、本発明のラットモデルの脳内で特異的に発現することが観察された
、シナプシン１Ｂのポリペプチド配列を示す。
【図１０】 図１０ａは、正常コントロールと比較して精神分裂病患者とＰＣＰ処置ラット
の脳で特異的に発現することが観察された、ＹＳＧ９（配列番号１９）のヌクレ
オチド配列を示す。 図１０ｂは、正常コントロールと比較して精神分裂病患者とＰＣＰ処置ラット
の脳で特異的に発現することが観察された、ＹＳＧ９（配列番号１９）のポリペ
プチド配列を示す。
【図１１】 ヒト血液サンプルにおける遺伝子の相対的な発現レベルを示すヒストグラム
である。
【図１２】 本発明の動物モデルの脳組織におけるパルブアルブミンの発現を示す。
【図１３】 精神分裂病（灰色の破線、ｎ＝６）とコントロール（黒、ｎ＝８）死後組織の
ＢＡ１１領域に存在するＣＩＲＬ１のｍＲＮＡのレベルを示す。TCTCCTGGCTGTGC
CTGGAGGGCおよびGGCTTGAGCACAGATCAGCTTCGGは、上記産物を増幅するために用い
たプライマー配列であった。
【図１４】 慢性ＰＣＰ処置と抗精神病薬処置後、ラット脳の前頭前野皮質に存在するＣＩ
ＲＬ１のｍＲＮＡのレベル（ビヒクル−ビヒクルがｎ＝１１であることを除いて
全ての群でｎ＝１２）を示す。TCTCCTGGCTGTGCCTAGAGGGCおよびGGCTTGAGCACGGAT
GAGCTTCGGは、上記産物を増幅するために用いたプライマー配列であった。
【図１５】 慢性ＰＣＰ処置と抗精神病処置後、ラット脳の前頭前野皮質に存在するＣＩＲ
Ｌ２変異体ＡＢのｍＲＮＡのレベル（ビヒクル−ビヒクルがｎ＝１１であること
を除いて全ての群でｎ＝１２）を示す。GGAAAACATTAAGTCTTGGGTGおよびGTGAATGT
CCTTGATTAAGGGTは、上記産物を増幅するために用いたプライマー配列であった。
【図１６】 慢性ＰＣＰ処置と抗精神病薬処置後、ラット脳の前頭前野皮質に存在するＣＩ
ＲＬ３変異体ＡＡのｍＲＮＡのレベル（ビヒクル−ビヒクルがｎ＝１１であるこ
とを除いて全ての群でｎ＝１２）を示す。GTAGTTCATGCTTTCAGCCGTおよびAGAAGCC
CCTCTCTGTTGAGは、上記産物を増幅するために用いたプライマー配列であった。
【図１７】 ＰＣＰ（２ｍｇ／ｋｇ）の単一ｉ．ｐ．注入後２時間と２４時間でのＴＮＦα
の発現プロファイル（全ての処置群でｎ＝４）を示す。AGGAGGAGAAGTTCCCAAATG
およびTTGTCCCTTGAAGAGAACCTGは、上記産物を増幅するために用いたプライマー
配列であった。
【図１８】 慢性ＰＣＰ処置と抗精神病薬処置後、ラット脳の前頭前野皮質に存在するＴＮ
Ｆαのレベル（ビヒクル−ビヒクルがｎ＝１１であることを除いて全ての群でｎ
＝１２）を示す。AGGAGGAGAAGTTCCCAAATGおよびTTGTCCCTTGAAGAGAACCTGは、上記
産物を増幅するために用いたプライマー配列であった。
【図１９】 精神分裂病患者（ｎ＝４）とコントロール（ｎ＝５）の死後眼窩前頭皮質のＴ
ＮＦαのレベルを示す。GGTAGGAGACGGCGATGCおよびCAGGCAGTCAGATCATCTTCは、上
記産物を増幅するために用いたプライマー配列であった。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｃ０７Ｋ 14/47 Ｃ０７Ｋ 16/18 ４Ｈ０４５ 16/18 Ｃ１２Ｎ 1/15 Ｃ１２Ｎ 1/15 1/19 1/19 1/21 1/21 Ｃ１２Ｑ 1/02 5/10 1/68 Ａ Ｃ１２Ｑ 1/02 Ｇ０１Ｎ 33/15 Ｚ 1/68 33/48 Ｎ Ｇ０１Ｎ 33/15 33/50 Ｚ 33/48 33/53 Ｄ 33/50 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ 33/53 5/00 Ａ (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ，ＴＲ)，ＯＡ(ＢＦ ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ， ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，Ｇ Ｍ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＭＺ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ， ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＧ，ＡＬ，ＡＭ， ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，Ｂ Ｚ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＯ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ ，ＤＫ，ＤＭ，ＤＺ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ， ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，Ｉ Ｓ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ，ＭＤ，ＭＧ， ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＭＺ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，Ｐ Ｔ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ， ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ (72)発明者 パターソン、ギャリー イギリス国、グラスゴウ ジー12 ８キュ ーキュー、ユニヴァーシティ オヴ グラ スゴウ、ウェスト メディカル ビルディ ング、ヨシトミ リサーチ インスティテ ュート オヴ ニューロサイエンス イン グラスゴウ（ワイアールアイエヌジー) （番地なし) (72)発明者 大橋 良孝 東京都中央区日本橋本町二丁目２番６号 三菱ウェルファーマ株式会社 東京本社内 (72)発明者 モリス、ブライアン イギリス国、グラスゴウ ジー12 ８キュ ーキュー、ユニヴァーシティ オヴ グラ スゴウ、ウェスト メディカル ビルディ ング、ヨシトミ リサーチ インスティテ ュート オヴ ニューロサイエンス イン グラスゴウ（ワイアールアイエヌジー) （番地なし) (72)発明者 プラット、ジュディス イギリス国、グラスゴウ ジー12 ８キュ ーキュー、ユニヴァーシティ オヴ グラ スゴウ、ウェスト メディカル ビルディ ング、ヨシトミ リサーチ インスティテ ュート オヴ ニューロサイエンス イン グラスゴウ（ワイアールアイエヌジー) （番地なし) Ｆターム(参考） 2G045 AA29 AA34 AA35 CB01 DA13 DA36 FB02 4B024 AA01 AA11 CA04 CA09 DA02 DA05 DA11 EA02 EA03 EA04 FA02 GA01 GA11 HA12 4B063 QA01 QA18 QQ42 QQ52 QR08 QR33 QR42 QR55 QR59 QR62 QR74 QR80 QS05 QS25 QS34 QS36 QX02 4B065 AA01X AA57X AA90X AA91Y AA93Y AB01 AB02 BA01 BA08 CA24 CA25 CA44 CA46 4C084 AA01 AA13 AA17 BA35 NA14 ZA181 ZC781 4H045 AA10 AA11 AA30 BA10 CA40 EA21 EA50 FA72 FA74

Claims (45)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 精神分裂病を診断するための、配列番号１、配列番号２、配
    列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号７、９および１１、配列番号１３
    、配列番号１５、配列番号１７および１９、ならびに配列番号２１からなる群か
    ら選択される１つ以上のポリヌクレオチド配列またはそれらのフラグメントの使
    用。
  2. 【請求項２】 精神分裂病を診断するための、配列番号１、配列番号２、配
    列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号７、９および１１、配列番号１３
    、配列番号１５、配列番号１７および１９、ならびに配列番号２１からなる群か
    ら選択される１つ以上のポリヌクレオチド配列またはそれらのフラグメントに由
    来する１つ以上のポリペプチド配列の使用。
  3. 【請求項３】 精神分裂病の診断方法であって、精神分裂病の指標として、
    配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号７、
    ９および１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７および１９、ならび
    に配列番号２１からなる群から選択される１つ以上のポリヌクレオチド配列また
    はそれらのフラグメントの使用を含む方法。
  4. 【請求項４】 精神分裂病の診断方法であって、精神分裂病の指標として、
    配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号７、
    ９および１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７および１９、ならび
    に配列番号２１からなる群から選択される１つ以上のポリヌクレオチド配列また
    はそれらのフラグメントに由来する１つ以上のポリペプチド配列の使用を含む方
    法。
  5. 【請求項５】 精神分裂病治療用医薬の製造における、配列番号１、配列番
    号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号７、９および１１、配列
    番号１３、配列番号１５、配列番号１７および１９、ならびに配列番号２１から
    なる群から選択される１つ以上のポリヌクレオチド配列またはそれらのフラグメ
    ントの使用。
  6. 【請求項６】 精神分裂病の治療用の医薬の製造における、配列番号１、配
    列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号７、９および１１、
    配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７および１９、ならびに配列番号２１
    からなる群から選択される１つ以上のポリヌクレオチド配列またはそれらのフラ
    グメントに由来する１つ以上のポリペプチド配列の使用。
  7. 【請求項７】 配列番号１、配列番号２、配列番号３および配列番号４から
    なる群から選択される核酸配列を有する単離されたポリヌクレオチド配列。
  8. 【請求項８】 配列番号１、配列番号２、配列番号３および配列番号４から
    なる群から選択される核酸配列と少なくとも８０％の同一性または相同性を有す
    る単離された核酸。
  9. 【請求項９】 少なくとも９０％の同一性または相同性を有する、請求項８
    に記載の単離された核酸。
  10. 【請求項１０】 長さが少なくとも１５ヌクレオチドである、請求項８に記
    載の単離された核酸。
  11. 【請求項１１】 配列番号１、２、３および４からなる群から選択される配
    列またはそれらの相補配列と特異的にハイブリダイズできる核酸。
  12. 【請求項１２】 配列番号１、２、３および４からなる群から選択される配
    列、またはそれらの相補配列と少なくとも８０％の配列同一性または相同性を有
    する、請求項１１に記載の核酸。
  13. 【請求項１３】 長さが少なくとも１５ヌクレオチドである、請求項１１ま
    たは１２に記載の核酸。
  14. 【請求項１４】 精神分裂病を診断するための請求項１３に記載の核酸の使
    用。
  15. 【請求項１５】 請求項７〜１３に記載のポリヌクレオチドフラグメントを
    含む組換え核酸分子。
  16. 【請求項１６】 ポリヌクレオチドフラグメントの発現の制御のために、該
    ポリヌクレオチドフラグメントに制御可能に結合した調節制御配列を含むことを
    特徴とする請求項１５に記載の組換え核酸分子。
  17. 【請求項１７】 プラスミドである、請求項１６に記載の組換え核酸分子。
  18. 【請求項１８】 ウイルスベクターに由来する、請求項１６に記載の組換え
    核酸分子。
  19. 【請求項１９】 請求項７〜１７のいずれか１項に記載のポリヌクレオチド
    フラグメントまたは組換え分子によって形質転換された原核または真核宿主細胞
    。
  20. 【請求項２０】 ポリヌクレオチド配列の発現を調節する化合物の同定にお
    ける配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号
    ７、９および１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７および１９、な
    らびに配列番号２１からなる群から選択される１つ以上のポリヌクレオチド配列
    またはそれらのフラグメントの使用。
  21. 【請求項２１】 ポリペプチド配列の発現を調節する化合物の同定における
    配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号７、
    ９および１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７および１９、ならび
    に配列番号２１からなる群から選択される１つ以上のポリヌクレオチド配列また
    はそれらのフラグメントに由来する１つ以上のポリペプチド配列の使用。
  22. 【請求項２２】 前記同定された化合物により、ポリヌクレオチドまたはポ
    リペプチド配列の過剰発現が生じる、請求項２０または２１に記載のポリヌクレ
    オチドまたはポリペプチド配列の使用。
  23. 【請求項２３】 前記同定された化合物により、ポリヌクレオチドまたはポ
    リペプチド配列の過少発現が生じる、請求項２０または２１に記載のポリヌクレ
    オチドまたはポリペプチド配列の使用。
  24. 【請求項２４】 配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列
    番号５、配列番号７、９および１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１
    ７および１９、ならびに配列番号２１からなる群から選択されるポリヌクレオチ
    ドフラグメントまたはサブフラグメントに相補的なアンチセンスヌクレオチドフ
    ラグメント、またはそのフラグメント。
  25. 【請求項２５】 精神分裂病治療用医薬の製造における、配列番号１、配列
    番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号７、９および１１、配
    列番号１３、配列番号１５、配列番号１７および１９、ならびに配列番号２１か
    らなる群から選択されるポリヌクレオチドフラグメントまたはサブフラグメント
    に相補的なアンチセンスヌクレオチドフラグメント、またはそのフラグメントの
    使用。
  26. 【請求項２６】 精神分裂病関連遺伝子の発現を調節する化合物のスクリー
    ニング方法であって、 （ａ）試験化合物を、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、
    配列番号５（ＰＤＥＩ α）、配列番号７、９および１１（ＣＩＲＬ １、２お
    よび３）、配列番号１３（ｔｒｋＥ）、配列番号１５（ネトリンレセプター）、
    配列番号１７および１９（アイナプシン１Ａ／ＡＢ）、ならびに配列番号２１（
    ＴＮＦα）からなる群から選択される遺伝子の発現を可能とする形質転換細胞と
    接触させること； （ｂ）該細胞において精神分裂病関連因子の発現を検出すること；および （ｃ）コントロール（ビヒクル）と比較して、精神分裂病関連因子の誘導を
    促進または抑制する化合物を選択すること； を含む方法。
  27. 【請求項２７】 本発明の動物モデルを使用して、化合物の抗精神分裂病効
    果を測定する方法であって、 （ａ）局所的脳内グルコース利用（ＬＣＧＵ）を測定すること、または配列
    番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５（ＰＤＥＩ α）、
    配列番号７、９および１１（ＣＩＲＬ １、２および３）、配列番号１３（ｔｒ
    ｋＥ）、配列番号１５（ネトリンレセプター）、配列番号１７および１９（アイ
    ナプシン１Ａ／ＡＢ）、ならびに配列番号２１（ＴＮＦα）からなる群によって
    表される１つ以上の遺伝子の発現レベルを検出すること；および （ｂ）コントロール群と比較すること； を含む方法。
  28. 【請求項２８】 配列番号１、２、３、４、５、７、９、１１、１３、１５
    、１７、１９および２１からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む１つ
    以上の遺伝子の発現が、インビボで調節されたトランスジェニック動物。
  29. 【請求項２９】 配列番号１、２、３、４、５、７、９、１１、１３、１５
    、１７、１９および２１からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む１つ
    以上の遺伝子の発現が調節された細胞系。
  30. 【請求項３０】 配列番号１、配列番号２、配列番号３および配列番号４か
    らなる群から選択されたポリヌクレオチドフラグメント由来のポリペプチドまた
    はそのフラグメントと免疫反応性である抗体。
  31. 【請求項３１】 精神分裂病の診断のための、配列番号１、配列番号２、配
    列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号７、９および１１、配列番号１３
    、配列番号１５、配列番号１７および１９、ならびに配列番号２１からなる群か
    ら選択されるポリヌクレオチドフラグメント由来のポリペプチドまたはそのフラ
    グメントと免疫反応性である抗体の使用。
  32. 【請求項３２】 請求項７乃至１３のいずれかに記載のポリヌクレオチドフ
    ラグメントまたはその誘導体と、医薬として許容し得る担体を共に含有する医薬
    組成物。
  33. 【請求項３３】 請求項３２に記載のポリペプチドフラグメントまたはその
    誘導体と、医薬として許容し得る担体を共に含有する医薬組成物。
  34. 【請求項３４】 ポリペプチドに対して効果がある候補化合物を試験するた
    めの、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番
    号７、９および１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７および１９、
    ならびに配列番号２１からなる群から選択される１つ以上のポリヌクレオチド配
    列またはそれらのフラグメント由来の１つ以上のポリペプチド配列の使用。
  35. 【請求項３５】 精神分裂病の慢性動物モデル。
  36. 【請求項３６】 動物にＰＣＰを付加することによって開発された、請求項
    ３５に記載の慢性動物モデル。
  37. 【請求項３７】 精神分裂病の慢性動物モデルの開発方法であって、 （ａ）ヒトにおける精神分裂病の発症を表現する精神病状態を動物に誘発す
    るために、ＰＣＰを動物に投与すること；および （ｂ）当該動物におけるＰＣＰにより誘発された精神病状態を維持するため
    に、一定期間にわたって、ＰＣＰをさらに投与し、この動物における精神分裂病
    の慢性状態に類似させること； を含む方法。
  38. 【請求項３８】 動物に精神病状態を誘導するために使用されるＰＣＰの投
    与量が１〜５ｍｇｋｇ-1の範囲内である、請求項３７に記載の方法。
  39. 【請求項３９】 動物に精神病状態を誘導するために使用されるＰＣＰの投
    与量が２〜４ｍｇｋｇ-1の範囲内である、請求項３８に記載の方法。
  40. 【請求項４０】 動物に精神病状態を誘導するために使用されるＰＣＰの投
    与量が約２．５８ｍｇｋｇ-1である、請求項３９に記載の方法。
  41. 【請求項４１】 請求項３７〜４０のいずれか１項に記載の方法によって作
    製される動物モデル。
  42. 【請求項４２】 動物が、ラット、マウス、モルモットまたはウサギからな
    る群から選択される、請求項３５、３６または４１のいずれかに記載の動物モデ
    ル。
  43. 【請求項４３】 精神分裂病の治療のための新規薬剤のスクリーニングのた
    めの、請求項３５、３６、４１または４２のいずれかに記載の動物モデルの使用
    。
  44. 【請求項４４】 精神分裂病状態と関連する遺伝子の同定における請求項３
    ５、３６、４１または４２のいずれかに記載の動物モデルの使用。
  45. 【請求項４５】 パルブアルブミンまたはＣＩＲＬ１を指標として使用する
    ことを含む、非定型的抗精神病薬のスクリーニング方法。
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