JP2003530351A - サイトカイン生成の阻害 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 ＩＬ−４およびＩＬ−１３のような炎症惹起性サイトカインの生成の阻害を必要とするヒト患者におけるこのような阻害のための医薬の調製のためのデスロラタジンの使用が開示される。本発明は、ＩＬ−４およびＩＬ−１３の生成の阻害を必要とするヒト患者におけるこのような阻害の方法を提供し、この方法は、有効量のデスロラタジンをこのような患者に投与する工程を包含する。本発明はまた、アレルギー性状態および／または炎症性状態の症状を示す患者におけるヒト好塩基球からのＩＬ−４およびＩＬ−１３の生成を阻害する方法を提供し、この方法は、ＩＬ−４およびＩＬ−１３の生成を阻害し、かつこのようなアレルギー性状態および／または炎症性状態の症状を同時に処置するために有効な量のデスロラタジンを、このような患者に投与する工程を包含する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】 （発明の背景） 本発明は、薬学的組成物、ならびに炎症惹起性サイトカイン（例えば、ＩＬ−
４およびＩＬ−１３）の生成を阻害するための医薬の調製のためのデスロラタジ
ン（ｄｅｓｌｏｒａｔａｄｉｎｅ）の使用に関する。

【０００２】 マスト細胞および好塩基球は、アレルギー性疾患および炎症性疾患において役
割を果たす。これらの細胞は、広範な種々の媒介因子（例えば、プロスタグラン
ジン（例えば、プロスタグランジンＤ２）、ロイコトリエン（例えば、ロイコト
リエンＣ_４サイトカイン）およびヒスタミン）を産生する。サイトカインは、細
胞により分泌されるポリペプチドであり、その他の細胞の機能に影響を及ぼす。
サイトカイン（インターロイキンを含む）は、影響される細胞の型、および示さ
れる生物学的活性において広く異なる。デスロラタジン（非鎮静抗ヒスタミン）
は、Ｌｉｐｐｅｒｔ，Ｕ．ら，Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｄｅｒｍａｔｏｌｏ
ｇｙ，１９９５，Ｖｏｌ．４，２７２−２７６によりヒトマスト細胞株および好
塩基球細胞株からのサイトカインＩＬ−６の放出を４０％まで、およびサイトカ
インＩＬ−８の放出を５０％まで阻害する際にインビトロで活性であることが開
示される。ヒトＦ_ＣεＲＩ^＋細胞は、ヒスタミン、トリプターゼ（ｔｒｙｐｔａ
ｓｅ）およびカイメースの放出により炎症惹起性の重要な役割を果たす。しかし
、ヒトマスト細胞株および好塩基球細胞株は、抗親和性免疫グロブリン−Ｅ（Ｉ
ｇＥ）レセプター（Ｆ_ＣεＲＩ）を介するシグナル伝達において欠損しているの
で、ＩＬ−６およびＩＬ−８のＩｇＥ媒介放出に対して、（存在する場合に）デ
スロラタジンがどのような効果を有するのかを推定することは困難である。Ｓ．
Ｍｏｌｅｔら．，Ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｎｄ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ａｌ
ｌｅｒｇｙ，１９９７，Ｖｏｌ．２７，１１６７−１１７４頁は、内皮細胞にお
けるインビトロ研究において、デスロラタジンが、ＩＬ−６およびＩＬ−８のヒ
スタミン誘導放出を減少させることを開示する。Ｋｌｅｉｎｅ−Ｔｅｂｂｅ，Ｊ
．ら，Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９４，Ｖｏｌ．９
３，Ｎｏ．２，４９４−５００頁は、ヒト好塩基球におけるインビトロ研究にお
いて、デスロラタジンが、ＩｇＥ媒介および非ＩｇＥ媒介のヒスタミン放出を阻
害することを開示する。

【０００３】 ヒト好塩基球は、サイトカイン（ＩＬ−４およびＩＬ−１３）の主要な供給源
であり、これらのサイトカインは、混合白血球培養においてインビトロで生成さ
れる。好塩基球によるＩＬ−４およびＩＬ−１３の生成は、アレルギー性炎症性
状態の病因に関与する種々の活性を調節する際に役割を果たし得る。例えば、Ｉ
Ｌ−４およびＩＬ−１３はそれぞれ、ヒトＢ細胞によりＩｇＥ−４およびＩｇＧ
−４の分泌を誘導する。（Ｓｃｈｒｏｅｄｅｒ，Ｊ．Ｔ．，「Ｔｈｅ ｒｏｌｅ
ｏｆ ｂａｓｏｐｈｉｌ−ｃｙｔｏｋｉｎｅ ｎｅｔｗｏｒｋｓ ｉｎ ａｓ
ｔｈｍａ．」Ａｓｔｈｍａ ａｎｄ Ａｌｌｅｒｇｉｃ Ｄｉｓｅａｓｅｓ：Ｐ
ｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，Ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，ａｎｄ Ｔｒｅ
ａｔｍｅｎｔ，Ｅｄｉｔｏｒｓ：Ｇ．Ｍａｒｏｎｅ，Ｋ．Ｆ．Ａｕｓｔｅｎ，Ｓ
Ｔ Ｈｏｌｇａｔｅ，Ａ．Ｂ．Ｋａｙ，Ｌ．Ｍ．Ｌｉｃｈｔｅｎｓｔｅｉｎ，Ａ
ｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，７５−８４，１９９８ａを
参照のこと）。しかし、好塩基球または任意のその他の細胞型におけるＩＬ−４
およびＩＬ−１３のようなサイトカインの生成に対するデスロラタジンの効果に
関する情報はない。Ｇｉｂｂｓらによる１つの研究（Ｎａｕｎｙｎ Ｓｃｈｍｉ
ｅｄｅｂｅｇｓ Ａｒｃｈ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ，１９９８，Ｖｏｌ．３５７：
５７３−５７８）は、比較的高い濃度のテルフェナジン（非鎮静抗ヒスタミン）
を使用して、好塩基球におけるインビトロでのＩＬ−４およびＩＬ−１３の分泌
の中程度（５０％）の阻害を報告する。この研究は、使用されるテルフェナジン
濃度が毒性であるか否かを試験しなかった。ＦＤＡは、季節性アレルギー性鼻炎
の処置における使用に関して、心臓に関する理由のためにテルフェナジンがもは
や安全ではないことを見出したために、２つのテルフェナジンのＮＤＡを中止し
た。（Ｆｅｄｅｒａｌ Ｒｅｇｉｓｔｅｒ，Ｏｃｔｏｂｅｒ ５，１９９８，Ｖ
ｏｌ．６３，５３４４４頁）。

【０００４】 ＩＬ−４およびＩＬ−１３のような炎症惹起性サイトカインの分泌を阻害して
、疾患状態（例えば、アレルギー性状態および／または炎症性状態）を処置する
ための安全で効果的な治療法の必要性が存在する。

【０００５】 （発明の要旨） 本発明は、ＩＬ−４およびＩＬ−１３の生成の阻害を必要とするヒト患者にお
けるこのような阻害の方法を提供し、この方法は、有効量のデスロラタジンをこ
のような患者に投与する工程を包含する。

【０００６】 代表的には、ＩＬ−４およびＩＬ−１３は、ヒト好塩基球およびその他の細胞
（例えば、ヒトＢ細胞）から生成される。

【０００７】 本発明はまた、アレルギー性状態および／または炎症性状態の症状を示す患者
におけるヒト好塩基球からのＩＬ−４およびＩＬ−１３の生成を阻害する方法を
提供し、この方法は、ＩＬ−４およびＩＬ−１３の生成を阻害し、かつこのよう
なアレルギー性状態および／または炎症性状態の症状を同時に処置するために有
効な量のデスロラタジンを、このような患者に投与する工程を包含する。

【０００８】 本発明はまた、炎症惹起性サイトカインの生成をブロックすることを必要とす
る患者において炎症惹起性サイトカインの生成をブロックする方法を提供し、こ
の方法は、このような患者に有効量のデスロラタジンを投与する工程を包含する
。

【０００９】 本発明はまた、ヒト好塩基球からの炎症惹起性サイトカインの分泌を阻害する
必要のある患者において、ヒト好塩基球からの炎症惹起性サイトカインの分泌を
阻害する方法を提供し、この方法は、このような患者に有効量のデスロラタジン
を投与する工程を包含する。

【００１０】 好ましい炎症惹起性サイトカインは、ＩＬ−４およびＩＬ−１３である。

【００１１】 このような阻害を必要とする患者は、気道、皮膚、眼および腸管のアレルギー
性／炎症性状態の症状を有する患者である。

【００１２】 本発明はまた、皮膚、眼、腸管、ならびに／または上気道および下気道のアレ
ルギー性／炎症性状態の症状を示す患者を処置する方法を提供し、この方法は、
このような患者に有効量のデスロラタジンを投与する工程を包含する。

【００１３】 このような阻害を必要とする患者は、皮膚、眼、腸管、および／または上気道
および下気道のアレルギー性／炎症性状態の症状を有する患者である。

【００１４】 本発明はまた、アレルギー性の要素（ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ）および炎症性の要
素を有する疾患状態を処置する方法を提供し、この方法は、このような処置を必
要とする患者に、抗炎症性効果を生じるのに有効な量のデスロラタジンを投与す
る工程を包含する。

【００１５】 本発明はまた、アレルギー性ぜん息を処置および／または予防し、かつこのよ
うな処置を必要とする患者においてＩＬ−４およびＩＬ−１３の分泌を阻害する
方法を提供し、この方法は、このような患者に有効量のデスロラタジンを投与す
る工程を包含する。

【００１６】 本発明はまた、アレルギー性鼻炎を処置および／または予防し、かつこのよう
な処置を必要とする患者においてＩＬ−４およびＩＬ−１３の分泌を阻害する方
法を提供し、この方法は、このような患者に、有効量のデスロラタジンを投与す
る工程を包含する。

【００１７】 本発明はまた、アトピー性皮膚炎を処置および／または予防し、かつこのよう
な処置を必要とする患者においてＩＬ−４およびＩＬ−１３の分泌を阻害する方
法を提供し、この方法は、このような患者に有効量のデスロラタジンを投与する
工程を包含する。

【００１８】 本発明はまた、じんま疹を処置および／または予防し、かつこのような処置を
必要とする患者においてＩＬ−４およびＩＬ−１３の分泌を阻害する方法を提供
し、この方法は、このような患者に有効量のデスロラタジンを投与する工程を包
含する。

【００１９】 本発明はまた、ＩＬ−４およびＩＬ−１３が媒介する疾患状態を処置する必要
のある患者においてこのような処置をする方法を提供し、この方法は、ＩＬ−４
およびＩＬ−１３の生成を阻害するのに有効な量のデスロラタジンをこのような
患者に投与する工程を包含する。

【００２０】 有効量のデスロラタジンは、ヒト細胞からのＩＬ−４およびＩＬ−１３の生成
を阻害しかつ好ましくはブロックするのに十分な量である。

【００２１】 本発明はまた、皮膚、眼、腸管ならびに／または上気道および下気道のアレル
ギー性状態および／または炎症性状態の症状を示す患者において、ヒト好塩基球
からのＩＬ−４およびＩｌ−１３の生成を阻害する方法を提供し、この方法は、
このような患者に、ＩＬ−４およびＩＬ−１３の生成を阻害するのに有効でかつ
このようなアレルギー性および／または炎症性の状態の症状を同時に処置するの
に有効な量のデスロラタジンを投与する工程を包含する。

【００２２】 （発明の詳細な説明） 本発明の方法に従って、本発明者らは、ヒト好塩基球からのＩＬ−４およびＩ
Ｌ−１３の生成を阻害するデスロラタジンの能力を実証し、同時に、種々の刺激
を使用するこれらの細胞からの媒介因子の放出を防止する際のその効率を比較す
る。デスロラタジンは、抗ＩｇＥによって誘導されるヒト好塩基球からのヒトＩ
Ｌ−４およびＩＬ−１３の分泌を減少する際に、それが同じ培養物の上清におい
て放出される媒介因子（ヒスタミンおよびＬＴＣ_４）を阻害する際よりも、顕著
に（ほぼ６〜７倍）より強力であることが見出された。サイトカイン（ＩＬ−４
およびＩＬ−１３）は、イオノマイシンで誘導されたヒスタミン放出に対する効
果の欠如にも関わらず、イオノマイシンでの活性化後にデスロラタジンによって
等しく阻害された。デスロラタジンは、ＩＬ−３およびＰＭＡに対して応答して
分泌されるＩＬ−１３を阻害する際に、より少ない効果を有し、このことは、抗
ヒスタミンが、サイトカイン生成の個々の経路を差示的に標的化することを示唆
する。最終的に、デスロラタジンが細胞毒性であるという証拠は、存在しない（
すなわち、それは、減少した細胞生存度を引き起こすことによってその阻害効果
を媒介した）。本発明に従って、ＩＬ−４ ｍＲＮＡ蓄積はまた、デスロラタジ
ンでの前処理後に、８０％ほど多くまで、顕著に阻害された。このことは、デス
ロラタジンが、これらが媒介因子放出を制御することに加えて、サイトカイン遺
伝子転写を調節するシグナルを標的化することを示唆する。

【００２３】 成句「アレルギー性および／または炎症性状態」は、皮膚、眼、腸管および／
または鼻から肺の上気道および下気道において見出されるアレルギー性および炎
症性の状態および症状を意味する。皮膚または上気道および下気道の代表的なア
レルギー性および／または炎症性状態としては、季節性および多年性アレルギー
性鼻炎、非アレルギー性鼻炎、アレルギー性および非アレルギー性喘息を含む喘
息、副鼻腔炎、かぜ、皮膚炎（特に、アレルギー性およびアトピー性皮膚炎）、
ならびにじんま疹および症候性および皮膚描記症が挙げられる。眼の代表的なア
レルギー性および／または炎症性状態としては、アレルギー性結膜炎が挙げられ
るが、これに限定されない。胃腸管の代表的なアレルギー性および／または炎症
性状態としては、食物アレルギーが挙げられるが、これに限定されない。

【００２４】 本明細書中で使用される場合、用語「ヒト」は、１２歳未満１８歳未満の男性
または女性の小児被験体、１２歳を超えて１８歳未満の男性または女性の小児被
験体、そして１８歳以上の男性または女性成人を含む。

【００２５】 本明細書中で使用される場合、用語「炎症惹起性サイトカイン」は、アレルゲ
ンに曝露されたヒトの皮膚、眼、腸管、および気道のアレルギー性反応および炎
症性反応に関連するこれらのサイトカインを意味する。代表的に、適切な炎症惹
起性サイトカインは、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−８、Ｉ
Ｌ−９およびＩＬ−１３を含む。

【００２６】 皮膚または気道のアレルギー性および炎症性状態を処置または予防するための
デスロラタジンの有効量は、患者の年齢、性別、体重ならびにアレルギー性およ
び炎症性状態の重篤度で変化する。代表的には、１２歳を超える成人ヒトにおけ
るこのようなアレルギー性および炎症性状態を処置または予防するために効果的
なデスロラタジンの量は、約２．５ｍｇ／日〜約４５ｍｇ／日、好ましくは約２
．５ｍｇ／日〜約２０ｍｇ／日、または約５．０ｍｇ／日〜約１５ｍｇ／日、ま
たは約５．０ｍｇ／日〜約１０ｍｇ／日、より好ましくは約５．０ｍｇ／日〜約
７．５ｍｇ／日の範囲であり、そして最も好ましくは単回用量もしくは分割用量
で約５．０ｍｇ／日（例えば、２×２．５ｍｇ／日または単回用量の５．０ｍｇ
／日）である。

【００２７】 デスロラタジンは、強力かつ選択的な末梢Ｈ１レセプターアンタゴニスト活性
を有する非鎮静長期作用ヒスタミンアゴニストである。インビトロおよびインビ
ボの動物薬理学研究は、デスロラタジンおよびロラタジンの種々の薬力学的な効
果を評価するために行なわれてきた。マウスにおいて中枢神経（「ＣＮＳ」）活
性を評価する際に、デスロラタジンは、行動、神経性または自律神経性機能にお
ける変更を比較的生じなかった。デスロラタジンが脳Ｈ１レセプターを占める可
能性は、腹腔内投与後にモルモットにおいて評価され、そして結果は、デスロラ
タジンについての中央ヒスタミンレセプターへの乏しいアクセスを示唆する。

【００２８】 デスロラタジンの臨床的効率および臨床的安全は、４つの二重盲目検の無作為
臨床試験における３，２００を超える季節的アレルギー性鼻炎において実証され
ている。これらの臨床的研究の結果は、季節的鼻炎を有する成人および青年患者
の処置におけるデスロラタジンの効果を実証した。

【００２９】 全ての研究における効力指標は、有効性の臨床試験における総症状スコア（Ｔ
ｏｔａｌ Ｓｙｍｐｔｏｍ Ｓｃｏｒｅ）、総鼻症状スコア（Ｔｏｔａｌ Ｎａ
ｓａｌ Ｓｙｍｐｔｏｍ Ｓｃｏｒｅ）、総非鼻症状スコア（Ｔｏｔａｌ Ｎｏ
ｎ−ｎａｓａｌ Ｓｙｍｐｔｏｍ Ｓｃｏｒｅ）、および生活の健康の質（Ｈｅ
ａｌｔｈ Ｑｕａｌｉｔｙ ｏｆ Ｌｉｆｅ）分析であった。デスロラタジン（
１日１回５ｍｇ）は、総症状スコア（鼻漏、くしゃみ、うっ血／鼻詰まり（ｓｔ
ｕｆｆｉｎｅｓｓ）、鼻のかゆみ、痒い／ヒリヒリする眼、流涙、眼の赤み、お
よび痒い耳／口蓋の個々のスコアの合計）を有意に減少させた。デスロラタジン
（５ｍｇ）は、鼻の症状を減少する際にプラセボよりも有意に（ｐ＜０．０１）
より効果的であった。デスロラタジン研究において分析された重要な効力指標は
、ＡＭ ＮＯＷ総症状スコアである。このパラメーターは、翌日の用量を摂取す
る前に、２４時間後の患者による総症状の軽減を測定する。統計学的に有意な（
ｐ＜０．０５）減少が、全体の５ｍｇ〜２０ｍｇの投薬範囲にわたって、完全な
２４時間の投薬間隔の間、維持された。

【００３０】 性別、年齢、または人種によって定義される患者のサブグループ中に（全体の
５ｍｇ〜２０ｍｇの投薬範囲にわたって）、デスロラタジンの効果における有意
な差異は存在しなかった。デスロラタジンは、このような処置および／または予
防が必要な患者において、鼻のうっ血を含む、季節性アレルギー性鼻炎の鼻の症
状（鼻詰まり／うっ血、鼻漏、鼻のかゆみ、くしゃみ）および鼻以外の症状（痒
い／ヒリヒリする眼、流涙眼／涙眼、眼の赤み、耳／口蓋のかゆみ）の処置およ
び予防のために特に有用である。

【００３１】 米国特許第４，６５９，７１６号は、デスロラタジンを作製する方法、これを
含む薬学的組成物、ならびに哺乳動物においてアレルギー性反応を処置するため
にデスロラタジンおよびそれを含む薬学的組成物を使用する方法を開示する。

【００３２】 米国特許第５，５９５，９９７号は、デスロラタジンを含む薬学的組成物なら
びに種々の疾患状態（例えば、アレルギー性鼻炎）を処置および予防するための
デスロラタジンを使用する方法を開示する。

【００３３】 米国特許第６，１００，２７４号は、アレルギー反応（例えば、アレルギー性
鼻炎）を処置するための経口投与に適したデスロラタジンを含む安定した薬学的
組成物を開示する。

【００３４】 デスロラタジンの薬学的組成物は、投与の任意の様式（例えば、経口投与、非
経口投与（例えば、皮下（「ＳＣ］）投与、筋肉内（「ＩＭ］）投与、および腹
腔内（「ＩＰ］）投与）、局所的投与または膣投与または吸引による投与（経口
投与または鼻腔内投与））に適合され得る。好ましくは、デスロラタジンは、経
口投与される。

【００３５】 このような薬学的組成物は、デスロラタジンまたはその薬学的に受容可能な塩
の等量を、適切な不活性の薬学的に受容可能なキャリアまたは固体または液体の
いずれかであり得る希釈剤と組み合わせることによって、処方され得る。デスロ
ラタジンは、等量の薬学的に受容可能な酸とそれとを混合することによって、薬
学的に受容可能な酸性付加塩に変換され得る。代表的には、適切な薬学的に受容
可能な酸としては、無機酸（例えば、ＨＮＯ_３、Ｈ_２ＳＯ_４、Ｈ_３ＰＯ_４、ＨＣ
ｌ、ＨＢｒ）、有機酸（酢酸、トリフルオロ酢酸、プロピオン酸、酪酸、マレイ
ン酸、コハク酸、酒石酸、グルクロン酸およびクエン酸ならびにアルキル酸また
はアリールスルホン酸（例えば、ｐ−トルエンスルホン酸、２−ナフタレンスル
ホン酸、またはメタンスルホン酸）が挙げられるが、これらに限定されない）が
挙げられる。好ましい薬学的に受容可能な塩は、トリフルオロアセテート、トシ
レート、メシレート、およびクロライドである。デスロラタジンは、酸付加塩よ
りも遊離塩基としてより安定であり、そして本発明の薬学的組成物におけるデス
ロラタジン遊離塩基がより好ましい。米国特許第６，１００，２７４号を参照の
こと。

【００３６】 固体形態の調製物としては、粉末、錠剤、分散可能な顆粒剤、カプセル、カシ
ェ剤および坐剤が挙げられる。粉末および錠剤は、約２．５〜約９５％、好まし
くは約２．５〜約２０％、より好ましくは約２．５〜約１０％、または約２．５
〜約５％の活性成分から構成され得、そして最も好ましくは５％の活性成分から
構成され得る。適切な固体キャリア（例えば、炭酸マグネシウム、ステアリン酸
マグネシウム、タルク、糖またはラクトース）が、当該分野で公知である。錠剤
、粉末、カシェ剤およびカプセルは、経口投与に適切な固体投薬形態として使用
され得る。薬学的に重要可能なキャリアおよび種々の組成物のための製造方法の
例は、Ａ．Ｇｅｎｎａｒｏ（編）、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅ
ｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、第１８版、（１９９０）、Ｍａｃｋ Ｐｕｂ
ｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａにおいて見
出され得る。

【００３７】 液体形態調製物としては、溶液、懸濁物およびエマルジョンが挙げられる。例
としては、非経口注射のための水または水−ポリプロピレングリコール溶液が言
及され得る。固体形態処方物は、非経口または投与のいずれかの使用の直前に、
液体調製物に変換され得る。静脈内、筋肉内または皮下注射される非経口形態は
、通常、滅菌溶液の形態であり、そして緊張剤（糖またはグルコース）および緩
衝液を含み得る。乳白剤は、経口溶液、懸濁液およびエマルジョンに含まれ得る
。液体形態調製物は、鼻腔内投与のための溶液を含み得る。この液体調製物は、
固体形態調製物において使用されるのと、同じ範囲の活性成分を含み得る。

【００３８】 吸引に適切なエアロゾル調製物は、溶液および粉末形態の固体（これは、薬学
的に受容可能なキャリア（例えば、不活性な圧縮気体（例えば、窒素））と組み
合わせられ得る）を含み得る。

【００３９】 経口投与または非経口投与のいずれかのための液体形態調製物に、使用の直前
に変換されることが意図される固体形態調製物もまた含まれる。このような液体
形態としては、溶液、懸濁液およびエマルジョンが挙げられる。

【００４０】 本発明の化合物はまた、経皮送達可能であり得る。経皮組成物は、クリーム、
ローション、エアロゾルおよび／またはエマルジョンの形態を取り得、そしてこ
の目的のために当該分野で慣用的であるように、マトリクスまたはリザーバ型の
経皮パッチに含まれ得る。

【００４１】 好ましくは、薬学的調製物は、単位投薬形態である。このような形態において
、調製物は、適切な量の活性成分（例えば、所望の目的を達成するための効果的
な量）を含む適切なサイズの単位用量に分割される。

【００４２】 さらに、デスロラタジンは、当業者に公知のそしてＰｈｙｓｉｃｉａｎｓ’
Ｄｅｓｋ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅにおいて記載されるような投薬レベルに従って、
治療学的に効果的な量のステロイド（例えば、モメタゾンフロエート、ジプロピ
オン酸ベクロメタゾンもしくはプロピオン酸フルチカゾン（ｆｌｕｔｉｃａｓｏ
ｎｅ））、ロイコトリエンインヒビター（例えば、モンテルカスト（ｍｏｎｔｅ
ｌｕｋａｓｔ）ナトリウムもしくはザフィルルカスト（ｚａｆｉｒｌｕｋａｓｔ
））および／または上気道うっ血除去薬（フェニルエフェドリン、偽エフェドリ
ンおよびフェニルプロパノールアミンを含むがこれらに限定されない）あるいは
それらの薬学的に受容可能な塩と組み合わせて投与され得る。上気道うっ血除去
薬（偽エフェドリンＨＣｌ）の使用は好ましい。

【００４３】 （実施例） （材料および方法） （特殊な試薬） 全ての試薬を、他に記載しない限り購入した。Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ
Ｃｏ．（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）からのピペラジン−Ｎ，Ｎ’−ビス−２−
エタンスルホン酸（ＰＩＰＥ）、イオノマイシン、ＦＭＬＰ、ＰＭＡ、および胎
児ウシ血清（ＦＢＳ）；Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｇｒ
ａｎｄ Ｉｓｌａｎｄ，ＮＹからのＬ−グルタミンを含みかつ２５ｍＭ Ｎ−２
−ヒドロキシエチルピペラジン−Ｎ’−２−エタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）、
ゲンタマイシン、非必須アミノ酸（１００×）を含むＲＰＭＩ−１６４０および
Ｉｓｃｏｖｅの改変ダルベッコ培地（ＩＭＤＭ）；およびＰｈａｒｍａｃｉａ（
Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）からのパーコール。これらの実験において使用し
たデスロラタジンは、Ｓｃｈｅｒｉｎｇ−Ｐｌｏｕｇｈ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉ
ｎｓｔｉｔｕｔｅによって提供された。０．１Ｍストック溶液を、ＤＭＳＯ中で
作製し、アリコートし、そして−２０℃で凍結した。全てのｐｉｐｅｓ含有緩衝
液を、ストック１０×ＰＩＰＥＳ（２５０ｍＭ ＰＩＰＥＳ、１．２０Ｍ Ｎａ
Ｃｌ、および５０ｍＭ ＫＣｌ，ｐＨ７．３（４℃で貯蔵））から作製した。等
張性パーコール（１００％パーコールといわれる）を、９部のパーコールと１部
の１０×ＰＩＰＥＳとを混合することによって作製した。ＰＡＧは、１０分の１
の１０×ＰＩＰＥＳ、０．００３％ＨＡＳ、および０．１％Ｄ−グルコースを含
んだ。ＰＡＧ−ＥＤＴＡは、さらに４ｍＭ ＥＤＴＡを含んだ。細胞単離に使用
されたパーコール溶液を、１×ＰＩＰＥＳを含む１００％パーコールの適切な量
と混合することによって全て作製した。

【００４４】 （細胞の調製および培養） 好塩基球を含む混合白血球懸濁物を、記載のように（Ｓｃｈｒｏｅｄｅｒら、
Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９４，第１５３巻：１８０８）二重Ｐｅｒｃｏｌｌ密
度遠心分離を用いるか、または向流エルトリエーションおよびＰｅｒｃｏｌｌ密
度遠心分離プロトコールの組み合わせ（ＭａｃＧｌａｓｈａｎら、Ｊ．Ｉｍｍｕ
ｎｏｌ．，１９９４、第１５３巻：３００６〜３０１６）のいずれかによって、
調製した。これらのプロトコールを用いて得た好塩基球のパーセンテージは、そ
れぞれ、代表的に、５〜５０％、および１０〜３０％の間にわたり、そしてＳｐ
ｉｅｒｓ−Ｌｅｖｙチャンバ上でＡｌｃｉａｎブルー陽性染色および陰性染色さ
れた細胞を計数することによって決定された（ＧｉｌｌｂｅｒｔおよびＯｒｎｓ
ｔｅｉｎ，１９７５）。いくつかの実験について、この好塩基球を、陰性選択プ
ロトコール（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｃｏｒｐ．，Ａｕｂｕｒｎ，ＣＡ）を用いて＞
９９．９％までさらに精製した。これらのＩＬ−４ ｍＲＮＡ発現を評価する以
外の全ての実験について、５％熱非働化（５６℃、３０分）ＦＢＳ、１×非必須
アミノ酸、および５μｇ／ｍｌゲンタマイシン（Ｃ−ＩＭＤＭ）を補充したＩＭ
ＤＭを用いて９６ウェル平底マイクロタイタープレート中で（二連で）細胞を、
培養した。ＩＬ−４ ｍＲＮＡ発現の分析のために、Ｃ−ＩＭＤＭ中の細胞を、
オートクレーブした（ＲＮａｓｅフリー）の１．５ｍｌ微小遠心分離管（下記参
照）中で培養した。これによって、抽出の前に培養ウェルから細胞を移す必要な
くｍＲＮＡを定量的に単離するための、さらに正確な方法が可能になった。各条
件について、１００μｌのＣ−ＩＭＤＭ中に約１００，０００〜５００，０００
の好塩基球を含む白血球懸濁物を、３７℃に予熱し、その後、Ｃ−ＩＭＤＭ中に
１００μｌのデスロラタジン濃度を添加し、また３７℃に予熱した。プレインキ
ュベーションの１５分後、次いで５０μｌの５×（最終濃度の５倍）の刺激因子
を添加することによって、この細胞を活性化した。用いた刺激因子の濃度は、媒
介因子の放出ではなく、ＩＬ−４生成に至適であったことがここで注目される重
要な点である。このことは、特に抗ＩｇＥ抗体に関して正しい。抗ＩｇＥ抗体は
、至適のヒスタミン放出を起こす濃度の１０分の１の濃度でＩＬ−４を誘導する
ことが示されている（Ｓｃｈｒｏｅｄｅｒら、同書）。収集については、上記の
ように（Ｓｃｈｒｏｅｄｅｒら、同書）培養物を遠心分離し、そして媒介因子放
出およびサイトカイン分析のために、無細胞上清を収集した。４時間で得た培養
上清のアリコートにおいて、ヒスタミン、ＬＴＣ_４およびＩＬ−４を全て、測定
した。ヒスタミンに関しては、これは、２０〜５０μｌの上清をとること、およ
びそれを１．６％ＨＣｌＯ_４を含有する１ｍｌのＰＡＧ緩衝液中に希釈すること
を意味した。４℃での一晩の沈殿後、自動蛍光測定（Ｓｉｒａｇａｎｉａｎ，Ｒ
．Ｐ．、Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１９７４，第５７巻：３８３〜３９４）
によってサンプルをアッセイした。インハウスＲＩＡによって（ＭａｃＧｌａｓ
ｈａｎら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９８６、第１３６巻：２２３１〜２２３９）
ＬＴＣ_４を測定した。市販のＥＬＩＳＡ（Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅ Ｉｎｔｅｒｎａ
ｔｉｏｎａｌ）によってＩＬ−４タンパク質を測定した。ＩＬ−１３分泌でのデ
スロラタジンの効果を検討する全ての実験についてインキュベーションの２０時
間後、培養上清を回収した。ある場合には、ＩＬ−４をまた、この時点で、特に
イオノマイシンを用いたとき、測定した。なぜなら、このサイトカインの分泌の
ための動態は、この刺激因子で４時間を越えてのびたからである（Ｓｃｈｒｏｅ
ｄｅｒ、ら、Ｊ．Ｌｅｕｋ．Ｂｉｏｌ．１９９８、第６３巻：６９２〜６９８）
。ＩＬ−１３タンパク質測定をまた市販のＥＬＩＳＡ（Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈ）
を用いて行った。

【００４５】 （ＲＮＡ単離およびＩＬ−４ ｍＲＮＡ発現の半定量的分析） ＩＬ−４ ｍＲＮＡの分析のための培養を、上記のように１．５ｍｌのポリプ
リピレン微小遠心分離管中で実施した。細胞をデスロラタジン（１０μＭ）で１
５分間前処理し、その後、抗ＩｇＥ抗体（１０〜２０ｎｇ／ｍｌ）で活性化した
。ＲＮＡｚｏｌプロトコール（Ｔｅｌ−ｔｅｓｔ Ｉｎｃ．， Ｆｒｉｅｎｄｓ
ｗｏｏｄ，ＴＸ）を用いて、２時間のインキュベーション後に、総ＲＮＡを単離
した。この２時間のインキュベーションとは、ＩｇＥ依存性活性化合物を用いて
ＩＬ−４メッセンジャー発現がピークである時間である。（Ｓｃｈｒｏｅｄｅｒ
ら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９７，第１５８巻：５４４８〜５４５４）。イソ
プロパノール沈殿後、７０％エタノールを用いてＲＮＡを洗浄し、真空下で乾燥
した。続いて、ＲＮＡを２５μｌのジエチルピロカーボネート（ＤＥＰＣ）処理
水中に再懸濁し、そして−８０℃で保管した。ＧｅｎｅＡｍｐ ＲＮＡ ＰＣＲ
キット（Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ Ｃｅｔｕｓ，Ｎｏｒｗａｌｋ，ＣＴ）を用
いて、以前に詳細を説明した（ＭａｃＧｌａｓｈａｎら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．
，１９９４；第１５２巻：３００６〜３０１６；Ｓｃｈｒｏｅｄｅｒら、Ｊ．Ｉ
ｍｍｕｎｏｌ．１９９７、第１５８巻：５４４８〜５４５４）ように、階段希釈
したＲＮＡを用いて、逆転写（ＲＴ）およびポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を
実施した。エチジウムブロミド染色を用いて、３％アガロースゲル中で、ＰＣＲ
産物を可視化した。他のいずれかの場所で注記したように、ＩＬ−４に対して２
つの異なるバンドが観察された。優勢なバンドは、約４６０ｂｐのサイズで見ら
れた。供給源が小さくなるほど、わずかなバンドは不確かになるが、ＩＬ−４の
選択的スプライシングされた形態であると考えられる（Ａｔａｍａｓら、Ｊ．Ｉ
ｍｍｕｎｏｌ．１９９６、第１５６号：４３５〜４４１）。２つのバンドが、好
塩基球の純粋な懸濁物かまたは富化された懸濁物のいずれかを用いて慣用的に観
察される。

【００４６】 図１ａおよび１ｂは、ヒト好塩基球による、ヒスタミン、ＬＴＣ_４およびＩＬ
−４の分泌に対するデスロラタジンの効果を図示する。図１ａについて、３〜５
５％の好塩基球を含む混合リンパ球懸濁物を、Ｐｅｒｃｏｌｌ密度遠心分離を用
いて全血から調製した。示した濃度のデスロラタジンを用いて、細胞を１５分前
処理し、その後、抗ＩｇＥ抗体（１０〜２０ｎｇ／ｍｌ）で活性化した。４時間
のインキュベーション後に回収した同じ培養上清を用いて、３つの産物全てを測
定した。値は、平均±ＳＥＭ（ｎ＝５）である。各産物についての徐放性：全体
４０±６％、ＩＬ−４：４０３±２０７ｐｇ／１０^６好塩基球、およびＬＴＣ_４ ：８６０±１２７ｐｇ／１０^６好塩基球。図１ｂは、ヒト好塩基球（純度９９％
）からの、ヒスタミン、ＬＴＣ_４およびＩＬ−４の分泌に対するデスロラタジン
の効果を示す。ヒスタミンについての徐放性：ＬＴＣ_４、およびＩＬ−４は、総
量の６０％で、それぞれ９０３ｐｇ／１０^６好塩基球、および８５４ｐｇ／１０^６ 好塩基球。

【００４７】 図２は、イオノマイシンに対する応答における、ヒスタミン放出（ＨＲ）およ
びＩＬ−４の分泌に対するデスロラタジンの効果を例示する。４２％、９９％お
よび９８％純度の好塩基球懸濁物を、０．１μＭ、１．０μＭ、および１０μＭ
のデスロラタジンを用いて１５分間前処理した。次いで、細胞をイオノマイシン
（５００ｎｇ／ｍｌ）で４時間活性化した。培養上清を回収し、そしてヒスタミ
ンおよびＩＬ−４タンパク質についてアッセイした。値は、平均±ＳＥＭ、ｎ＝
３を示す。ＩＬ−４のコントロールレベルは、３３９８、２５３、および３４８
ｐｇ１０^６の好塩基球（ｎ＝３）であった。同じ培養物中のヒスタミン放出のパ
ーセンテージは、それぞれ、９１％、２５％および１０％であった。

【００４８】 図３は、抗ＩｇＥまたはイオノマイシンによって活性化されたヒト好塩基球に
よるＩＬ−１３分泌に対するデスロラタジンの効果を例示する。純度６〜９９％
にわたる好塩基球懸濁物を、示した濃度のデスロラタジンを用いて１５分前処理
した。細胞を抗ＩｇＥ（１０〜２０ｎｇ／ｍｌ）またはイオノマイシン（５００
ｎｇ／ｍｌ）のいずれかで活性化した。培養上清を１８時間のインキュベーショ
ン後に回収し、そしてＥＬＩＳＡによってＩＬ−１３タンパク質についてアッセ
イした。値には誤差バーを伴い、この値は平均±ＳＥＭ（ｎ＝３）を示す。コン
トロール培地中のＩＬ−３タンパク質は、抗ＩｇＥおよびイオノマイシンについ
て、それぞれ、平均して、１６９±３５および３３４±１４４ｐｇ／１０^６好塩
基球であった。白丸で示した値は、２つの実験の平均である（ＩＬ−１３のコン
トロールレベルは、２６０および２３０ｐｇ／１０^６好塩基球であった）。

【００４９】 図４は、デスロラタジンが、ＩＬ−３およびＰＭＡで活性化された好塩基球か
らのＩＬ−１３分泌を阻害することをグラフ表示する。好塩基球（９４％純度ま
で）を、二重Ｐｅｒｃｏｌｌ密度遠心分離および陰性選択プロトコールを用いて
、全血から調製した。示した濃度のデスロラタジンを用いて、細胞を前処理し、
その後ＩＬ−３（１００ｎｇ／ｍｌ）またはＰＭＡ（２ｎｇ／ｍｌ）を加えた。
培養上清を１８時間のインキュベーション後に回収し、そしてＥＬＩＳＡによっ
てＩＬ−１３タンパク質についてアッセイした。値は平均±ＳＥＭ（ｎ＝３）を
示す。デスロラタジン非存在下におけるＩＬ−１３分泌の量は、ＩＬ−３活性化
合物について５７０±１４２ｐｇ／１０^６好塩基球、そしてＰＭＡ誘導について
は、２１６±１２０ｐｇ／１０^６の好塩基球であった）。

【００５０】 図５ａ〜ｄは、デスロラタジンで前処理した好塩基球におけるＩＬ−４ ｍＲ
ＮＡ発現の阻害をグラフ表示する。デスロラタジン（１０μＭ）またはＤＭＳＯ
（１：１０，０００）を用いて、細胞を１５分インキュベートし、その後、抗Ｉ
ｇＥ抗体（１０ｎｇ／ｍｌ）または培地のみを投与した。２時間後に、総ＲＮＡ
を単離し、そして希釈ＲＴ−ＰＣＲ分析に用いて、ＩＬ−４およびハウスキーピ
ング遺伝子（ヒポキサンチンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＰＲＴ））
についてのメッセンジャーの発現を比較した（パネルａ）。希釈していないＲＮ
Ａ発現について濃度測定分析が示されている（パネルｂ）。２ｂ後の、上清中の
ヒルタミンおよびＩＬ−４の分泌を、比較のために示す（それぞれ、パネルｃお
よびｄ）。値は、平均±ＳＥＭ（ｎ＝３）を示す。

【００５１】 （考察） 最初の一連の実験（図１ａおよび１ｂを参照のこと）において、本発明者らは
、デスロラタジンが、抗ＩｇＥによって誘発された好塩基球からのＩＬ−４分泌
をブロックする能力を実証し、そしてこの阻害を、同じ４時間の培養情勢におけ
るヒスタミンおよびＬＴＣ_４放出に関してみられた阻害と比較した。図１ａに示
されるように、デスロラタジンは、１μＭ（１０^−６Ｍ）と１０μＭ（１０^−５ Ｍ）との間の濃度で、用量依存性に、ヒスタミンおよびＬＴＣ_４の放出を阻害し
た。比較のために、デスロラタジンは、前に形成された媒介因子の放出について
よりも、ＩＬ−４分泌に対して著しく、さらに強力であった。１μＭ〜１０μＭ
のデスロラタジンで前に処理された細胞は、薬物に曝露されていない細胞よりも
４０％〜８０％少ないＩＬ−４を分泌した。これらの細胞によるヒスタミンおよ
びＬＴＣ_４の放出において、匹敵する阻害を生じるには、ほぼ７倍大きい濃度の
デスロラタジンが、必要であった。ＩＬ−４の阻害は、ヒスタミンについてみら
れる阻害と異なり、デスロラタジンのマイクロモル範囲内でプラトーになり、次
いで１μＭ〜１０μＭの間のデスロラタジン濃度で徐々に高い値に達した。図１
ｂに示すように、この効果はまた、９９％より高度に精製された好塩基球を用い
て照明された。このことは、デスロラタジンが、ＩＬ−４の阻害について好塩基
球に直接影響していたことを示した。デスロラタジンはまた、不純な懸濁物に対
して阻害するのとほぼ同様に、純粋な好塩基球からのヒスタミンを阻害した。

【００５２】 本発明者らは、デスロラタジンが、他の刺激によって活性化された好塩基球か
らの、ＩＬ−４、ヒスタミン、およびＬＴＣ_４放出に影響したか否かを試験した
。図２は、カルシウムイオノフォアであるイオノマイシンによって誘導されたヒ
スタミンの分泌が、０．１μＭ、１．０μＭ、および１０μＭの濃度でデスロラ
タジンによって影響されなかったことを示す。しかし、イオノマイシン刺激に応
答して分泌された高レベルのＩＬ−４は、同じ濃度（すなわち、０．１μＭ、１
．０μＭ、および１０μＭ）のデスロラタジンによって顕著に阻害された。ＦＭ
ＬＰ刺激に応答して生じたヒスタミンおよびＬＴＣ_４はまた、デスロラタジンに
よって阻害されなかった（データ示さず）。

【００５３】 Ｒｅｄｒｕｐら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９８、第１６０巻：１９５７−１
９６４は、以下を報告した：（１）複数の刺激が、ヒト好塩基球におけるＩＬ−
１３の生成について薬理学的に異なる経路を誘導すること、および（２）抗Ｉｇ
Ｅおよびイオノマイシンの両方が、免疫抑制的な薬物であるＦＫ５０６に対して
感受性であるＩＬ−１３分泌を誘導し、このことは、これらの刺激がカルシウム
依存性経路を利用してこのサイトカインを生成することを示唆すること。Ｒｅｄ
ｒｕｐらの研究において、ＩＬ−３またはＰＭＡ活性化に応答して生成されたＩ
Ｌ−１３は、ＦＬ−５０６によって影響されなかった。そしてホルボールエステ
ルに応答して生成されたタンパク質のみがＰＫＣインヒビターによって阻害され
た。従って、本発明者らは、これらの刺激によって誘導されたＩＬ−１３がまた
、デスロラタジン前処理で示差的に影響されないか否かに取り組んだ。図３は、
抗ＩｇＥまたはイオノマイシンのいずれかに応答して生成されたＩＬ−１３を示
す。実際、いずれかの刺激によって誘導されたＩＬ−１３の阻害についてのデス
ロラタジンの濃度応答曲線の形状はかなり類似していた。図３におけるこれらの
曲線は、図１または２に示されるようなデスロラタジンによるＩＬ−４の阻害に
ついて見られた曲線とほぼ同一であった。特に、最初のプラトーは、５０〜７０
％阻害のレベルで１μＭで見られた。デスロラタジン濃度とともに続けられたＩ
Ｌ−１３の用量依存性阻害は、１０μＭまで増大した。興味深いことに、デスロ
ラタジン前処理に対する応答は、不純な（６〜１１％）好塩基球懸濁物を用いた
、２つの実験ではかなり異なっていた。これらの細胞調製物を用いた場合、抗Ｉ
ｇＥに応答して分泌されたＩＬ−１３を防止することにおいて、デスロラタジン
は、かなり有効性が低く、これによって、さらに純粋な好塩基球懸濁物を用いて
みられたのと同じＩＣ_５０を生成するには、ほぼ１０倍高い濃度が必要である。
図４は、デスロラタジンがまた、ＩＬ−３またはＰＭＡに応答して生じたＩＬ−
１３を、たとえさらに低い程度で、かつさらに対数線形で生じた阻害曲線でも、
阻害したことを示す。実際、この薬物は、ＩＬ−３が媒介したＩＬ−１３生成を
、約２μＭのＩＣ_５０で阻害した。この濃度は、抗ＩｇＥまたはイオノマイシン
活性化で分泌されたＩＬ−１３を阻害するために必要な濃度のほぼ５倍であった
。デスロラタジンは、同様の様式でＰＭＡによって誘導されたＩＬ−１３を阻害
した。この阻害は、１μＭ〜１０μＭの濃度の薬物でみられた。

【００５４】 ヒスタミンおよびＬＴＣ_４（これらの両方とも活性化後数分以内に好塩基球か
ら放出される）と異なり、ＩＬ−４タンパク質は、最初に１〜２時間後に検出さ
れ、そしてＩＬ−１３は、活性化後４８時間で検出される。従って、媒介因子放
出対サイトカイン産生の動態が、デスロラタジンに対する感度の差異の原因であ
り得る（特に細胞溶解が因子であった場合）という可能性がある。しかし、本発
明者らは、１０μＭのデスロラタジンが、たとえ１８時間刺激因子と合わされた
場合でも、細胞傷害性であった（すなわち、純粋な好塩基球培養物中でトリパン
ブルー排除によって評価したような細胞死を生じた）という証拠は見出さなかっ
た（データ示さず）。１００μＭのデスロラタジンとのみ培養した場合、細胞は
、トリパンブルーで染色した。さらに、ヒスタミンが、これらの培養物中で検出
された。このことは、この濃度のデスロラタジンが細胞溶解を生じたことを示す
。

【００５５】 結局、デスロラタジンが、ｍＲＮＡの蓄積に影響することによって、好塩基球
からのサイトカイン分泌を阻害する可能性を検討するため、本発明者らは、ＩＬ
−４のメッセンジャーの発現に対する、デスロラタジン（１０μＭ）前処理の効
果を試験した。これらの実験について、本発明者らは、希釈ＲＴ−ＰＣＲのプロ
トコールを用いて、半定量的分析を行った。図５のパネルは、ＩＬ−４のｍＲＮ
Ａ発現が、刺激を受けていない細胞（レーン２〜４）に対して、抗ＩｇＥで活性
化された細胞（レーン８〜１０）で誘導されたことを明確に示す。デスロラタジ
ンでの前処理は、誘導されたサイトカインのメッセンジャーの実質的な減少をも
たらした（レーン１１〜１３）が、ハウスキーピング遺伝子であるＨＰＲＴの発
現には影響を有さなかった。図５のパネルｂは、３つの実験の平均の濃度測定分
析を示す。これは、デスロラタジン前処理が、抗ＩｇＥ活性化で刺激されたＩＬ
−４メッセンジャーの約８０％の減少をもたらしたことを示す。比較のために、
デスロラタジン（１０μＭ）はまた、それぞれ、図５のパネルｃおよびｄに示す
ように、これらの培養物の上清中に分泌されたヒスタミンおよびＩＬ−４タンパ
ク質を阻害した。

【００５６】 本発明者らの発見は、デスロラタジンがヒト好塩基球からのＩＬ−４およびＩ
Ｌ−１３の生成に対する阻害活性を有することを示すことによってアレルギー性
鼻炎の処置におけるＨ１アンタゴニストの効力の根底にあるメカニズムが、ヒス
タミンがＨ１レセプターに結合することを防ぐＨ１アンタゴニストの能力を超え
て拡張するという考えを支持する。他者らは、デスロラタジンがＩｇＥ媒介性の
ヒスタミン放出およびヒト好塩基球によるＬＴＣ_４生成を防ぐということを示し
、そして本発明者らの結果により、これらの発見が確認された（Ｋｌｅｉｎｅ−
Ｔｅｂｂｅら、１９９４年；およびＧｅｎｏｖｅｓｅら、Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ａ
ｌｌｅｒｇｙ、１９９６年、Ｖｏｌ．２７：５５９〜５６７を参照）。しかし、
本発明により、本発明者らは、これらの培地における、ヒスタミンおよびＬＴＣ_４ の放出の阻害よりも、抗ＩｇＥによって誘導されるＩＬ−４およびＩＬ−１３
を阻害する点において、デスロラタジンが顕著に効果的（６〜７倍）であること
を示した。 興味深いことに、本発明により、デスロラタジンは、１μＭおよび
１０μＭの濃度でプラトーになる用量反応曲線を伴いＩＬ−４およびＩＬ−１３
を阻害する（図１ｂを参照）。この効果は、媒介因子の放出に対しては見られず
、抗ＩｇＥまたはイオノマイシンに応答して産生されるサイトカイン（ＩＬ−４
およびＩＬ−１３）に対してのみ生じる。この阻害の性質は、現在明らかでない
が、本発明者らは、デスロラタジンが両方の刺激によって引き起こされる共通の
経路と共に少なくとも２つのシグナルを標的とすることを予想した。従って、１
μＭ未満のデスロラタジンの濃度において、この阻害は、サイトカインに産生の
み関与するシグナルの妨害に起因し得るが、１μＭ以上の濃度では、第２のシグ
ナルもまた影響され得、ほとんどの刺激に対する予め形成された媒介因子の放出
の阻害を生じる。

【００５７】 本発明者らは、ＩｇＥ非依存性刺激（例えば、イオノマイシン、ｆｍｌｐ、お
よびホルボールエステル）によって誘導される媒介因子放出の防止において、デ
スロラタジンはあまり有効でないことを見出した。実際、これらの刺激により放
出されるヒスタミンおよび／またはＬＴＣ_４が、試験されたデスロラタジン濃度
のいずれかによって阻害されるという証拠は全くなかった（データを、示してい
ない）。対照的に、デスロラタジンは、イオノマイシンによって誘導されるＩＬ
−４の産生、およびイオノマイシン、ＰＭＡ、またはＩＬ−３のいずれかに応答
して産生されるＩＬ−１３の産生をブロックすることにおいて極めて効果的であ
った。上記のように、デスロラタジンは、イオノマイシンまたは抗ＩｇＥによっ
て誘導されるＩＬ−４およびＩＬ−１３を等しく阻害し、阻害曲線は、１μＭお
よび１０μＭの薬物濃度においてプラトーになった。しかし、ＩＬ−３またはＰ
ＭＡによって誘導されるＩＬ−１３の阻害に対しては、同様のパターンおよび阻
害効力は観察されなかった。サイトカイン産生に関して、抗ＩｇＥおよびイオノ
フォアの両方に誘導されるＩＬ−４およびＩＬ−１３は、免疫抑制剤（ＦＫ５０
６）によって阻害され、このことは、これらの刺激がカルシウム依存性カルシニ
ュリン経路をこれらのサイトカインの産生のために利用するということを示唆す
る。しかし、デスロラタジンは、ＩＬ−３またはＰＭＡ（これらは両方とも別々
の経路を活性化すると考えられる）に応答して作られるＩＬ−１３をブロックし
ない。従って、デスロラタジンは、細胞質ゾルカルシウムの変化を単に防ぐこと
によって、ＩｇＥ依存性サイトカイン分泌および媒介因子の放出を阻害し得る。
しかし、この効果は、なぜデスロラタジンがイオノマイシンによって誘導される
サイトカインを阻害するが、媒介因子放出には影響しないのかについて十分に説
明しない。ＩｇＥ架橋およびＣａ^２＋イオノフォアは好塩基球中のカルシニュリ
ンを活性化するようなので、デスロラタジンは、このホスファターゼによって開
始される経路における因子を標的にすることが可能である。

【００５８】 純粋な好塩基球懸濁液を用いることによって、本発明者らは、デスロラタジン
が、好塩基球の媒介因子放出およびサイトカイン産生に対するその阻害効果を直
接媒介するか否かを初めて結論づけることができた。本発明者らは、トリパンブ
ルー排除によって評価した場合に、減少したＩＬ−４およびＩＬ−１３分泌を、
４〜２０時間のインキュベーションの間に細胞死が増加することに付随するとい
う証拠を検出することはできなかった。これは、サイトカイン分泌のほぼ完全な
（＞９５％）阻害を引き起す１０μＭデスロラタジンでの全く同じであった。細
胞溶解を１００μＭの濃度で観察した。

【００５９】 本発明の方法により、本発明者らは、デスロラタジンがＩＬ−４のｍＲＮＡの
集積を阻害することを実証し、このことは、デスロラタジンがサイトカイン遺伝
子転写に重要な因子をネガティブに調節し得るという概念を支持する。興味深い
ことに、デスロラタジンの前処理は、ＩＬ−４ｍＲＮＡのＩｇＥ媒介性の増加の
ほぼ８０％を阻害した。しかし、同じ培養物におけるこのサイトカイン（ＩＬ−
４）に対するタンパク質分泌は、検出値より低く、したがって、＞９５％を阻害
された。またしても、このことは、デスロラタジンがサイトカイン産生の複数の
経路を標的にし、遺伝子転写に重要なシグナルのみならず影響することを意味す
る。実際に、転写が全く影響されないが、ＩＬ−４およびＩＬ−１３のｍＲＮＡ
がいくつかの経路において不安定にされ、そしてこれがデスロラタジンの阻害作
用の原因となるという可能性は残っている。この場合、不安定性は、サイトカイ
ンｍＲＮＡに対して特異的であるはずである。なぜなら、本発明者らの結果は、
ハウスキーピング遺伝子（ＨＰＲＴ）の発現がデスロラタジンによって影響され
ないことを実証したからである。

【００６０】 本発明者らは、これらのインビトロ研究においてみられるサイトカイン産生お
よび媒介因子の放出に対するデスロラタジンの阻害効果が、皮膚のアレルギーお
よび炎症状態（例えば、アトピー性皮膚炎およびじんま疹）、ならびに眼におけ
るアレルギーおよび炎症状態（例えば、アレルギー性結膜炎）、ならびに腸管に
おけるアレルギーおよび炎症状態（例えば、食物アレルギー）、ならびに上気道
ならびに下気道におけるアレルギーおよび炎症状態（例えば、アレルギー性鼻炎
、特に季節性アレルギー性鼻炎）に対するデスロラタジンの臨床的効果に転用で
きるはずであることを予測する。ＩＬ−４およびＩＬ−１３がＩｇＥの合成の調
節、ＶＣＡＭ−１媒介性の好酸球遊出に対する内皮の活性化を支援し、およびＩ
Ｌ−４がＴヘルパー２フェノタイプの発生を促進するという事実を考慮して、本
発明者らは、媒介因子の放出を阻害するのみによってでなく、炎症惹起性サイト
カインＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−９、および
ＩＬ−１３の産生をブロックすることによっても、デスロラタジンが抗アレルギ
ー活性を媒介することを予想する。

【００６１】 （臨床研究） 以下の臨床研究は、アレルゲンに曝されるか、または皮膚、眼、腸管、ならび
に気道のアレルギー性および／または炎症性の疾患の徴候ならびに症状を呈する
ヒト被験体に対して、デスロラタジンが抗ヒスタミン効果と抗アレルギー性炎症
効果との組み合せて提供して、初期ならびに後期段階のアレルギー反応の両方お
よび臨床的症状を調節することを示すように設計される。

【００６２】 （研究１） （目的） アトピー性ヒト被験体の鼻アレルギー誘発が、全身性のアレルギー性／免疫影
学定効果（例えば、好塩基球およびリンパ球によるサイトカイン産生の増大）を
誘導すること、ならびにこのことが、インビトロ（サイトカイン放出の増加）お
よびインビボ（アレルゲンで誘導された皮膚の反応の後期段階の反応の増大）で
明らかにされることを実証することである。

【００６３】 （研究設計） この研究は、内容を公開した（ｏｐｅｎ−ｌａｂｅｌ）非治療的な、試験的研
究であり、季節性のアレルギー性鼻炎（および恐らくは、アレルギー性ぜん息）
の病歴を提出した６〜１０人の無症候性のアトピー被験者を含み、この被験者は
、３日間連続して鼻にアレルゲンを負荷する。

【００６４】 鼻に負荷開始する３日前、各負荷の毎前日、および最初の負荷の１週間後に血
液検体を採取する。好塩基球およびリンパ球を標準的なＰｅｒｃｏｌｌ密度勾配
技術を用いて単離し、これらのＲＮＡを抽出し、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５
、ＩＬ−６、ＩＬ−９、ＩＬ−１３、ＩＬ−５、およびＲＡＮＴＥＳに対するプ
ライマーを用いたリアルタイムＰＣＲアッセイを使用して試験した。

【００６５】 これらの細胞産物に対するｍＲＮＡは、ハウスキーピング遺伝子（ＧＡＰＤＨ
）のＰＣＲ産物と比較することによって定量する。白血球の分化、および総好酸
球ならびに好塩基球の数を用いて、サイトカイン／ケモカインｍＲＮＡのアレル
ゲン誘導性の変化に対する細胞数の変化の潜在的影響を評価する。

【００６６】 用量滴定されるアレルゲン誘導性の皮膚じんま疹反応試験は、上記の最初の血
液採取の時点（すなわち、最初にアレルゲン鼻に負荷をする３日前）および最後
に鼻にアレルゲン負荷した後の１週間でなされる。

【００６７】 鼻の症状の重篤度のスコアを、鼻へのアレルゲン誘発の間毎日モニターする。
サイトカイン転写の誘導は、悪化する鼻の症候学に関連する。

【００６８】 （一次終点） インビトロデータに基づいて、予期される一次的な結果は、炎症細胞における
アレルゲン誘導性の皮膚生検組織におけるＩＬ−４およびＩＬ−１３の転写の増
大、ならびに皮膚の生検組織におけるＩＬ−４およびＩＬ−１３の転写が上方制
御である。

【００６９】 （二次終点） 好酸球、好塩基球、およびリンパ球を含む末梢白血球における基準からの変化
。

【００７０】 白血球によるサイトカイン産生における基準からの変化。

【００７１】 アレルゲン誘導性皮膚じんま疹の後期反応の大きさにおける基準からの変化。

【００７２】 上記の変化の臨床的症候学との関連。

【００７３】 （研究２） （目的） デスロラタジンの抗アレルギー特性および抗炎症特性の生化学的および臨床的
影響の同定。

【００７４】 アトピー被験者における鼻へのアレルゲン誘発による末梢血白血球サイトカイ
ンの誘導に対するデスロラタジンの影響の研究：デスロラタジンが抗ヒスタミン
効果と抗アレルギー性炎症効果を組み合せて提供して、鼻へのアレルゲン誘発に
曝された被検者における初期ならびに後期段階のアレルギー反応および臨床的症
状を調節することを実証する予備的な臨床研究。研究２における被検体の数は、
試験的なインビトロおよび臨床研究においての知見に基づいて決定される。

【００７５】 （仮説） アトピー個体の鼻へのアレルゲン誘発が、全身的影響（例えば、末梢血の好酸
球の数がこの手順後の６〜２４時間の間で増大し、アレルギー性鼻炎およびアレ
ルギー性ぜん息を有する患者における、下気道の応答性の一貫した増加が鼻への
アレルゲン誘発に続く）を誘導するという証拠が存在する。アレルギー性鼻炎の
全身的影響は、末梢白血球の増殖の増大およびこれらの細胞にサイトカイン産生
の増大を介して媒介される。これらの仮説について根底にある合理性は、これら
の現象が好塩基球およびリンパ球を含む免疫細胞における活性化状態に依存する
。

【００７６】 （研究設計） 臨床的効力は、研究（Ｓｔｕｄｙ Ｎｏ．）での鼻へのアレルゲン負荷の設計
、血液検体採取およびアレルゲン誘導性の皮膚じんま疹反応試験と本質的に同じ
である（以下を参照）。しかし、研究２は、二重盲検（プラセボで対照される）
、交差試験設計であり、その間、最初の血液採取の前および試験期間の残りを通
して、デスロラタジン（５ｍｇを１日１回）およびプラセボを５〜７日間、毎日
摂取する：アレルゲン誘導性の皮膚じんま疹反応試験を、最後の鼻へのアレルゲ
ン負荷後の１週間で繰り返す。この研究の被験者の数は、予備的研究の結果に依
存して検出力分析（ｐｏｗｅｒ ａｎａｌｙｓｉｓ）によって決定される。二週
間の洗い流し期間を、２つの処置期間の間に介在させる。

【００７７】

【表１】 ^＊・白血球分化、総好酸球および好塩基球の数。

【００７８】 ・好塩基球およびリンパ球の単離、ならびにＰＣＲアッセイのためのこれらの
ＲＮＡの抽出（ＩＬ−４、ＩＬ−３、ＩＬ−１３、ＩＬ−５、ＩＬ−６、および
ＲＡＮＴＥＳ）。^＊＊ 臨床的症状および重篤度のスコア化。

【００７９】 （臨床的効力の終点） 処置群間および処置群内で、以下について結果の比較をする： 好酸球、好塩基球、およびリンパ球を含む末梢白血球においての基準からの変
化。

【００８０】 サイトカイン産生における基準からの変化。

【００８１】 アレルゲン誘導性皮膚じんま疹の後期反応の大きさにおいての基準からの変化
。

【００８２】 上記の変化の、臨床的症候学との関連。

【００８３】 デスロラタジンは、抗ヒスタミン効果と抗アレルギー性炎症効果を組み合せて
提供して、ヒトにおける初期および後期段階のアレルギー反応の両方ならびに臨
床的症状を調節すると予測される。

【図面の簡単な説明】

【図１ａ】 図１ａは、ヒスタミン、ロイコトリエンＣ_４（「ＬＴＣ_４」）およびＩＬ−４
のヒト好塩基球による分泌に対するデスロラタジンの効果を図示する。

【図１ｂ】 図１ｂは、ヒスタミン、ロイコトリエンＣ_４（「ＬＴＣ_４」）およびＩＬ−４
のヒト好塩基球による分泌に対するデスロラタジンの効果を図示する。

【図２】 図２は、イオノマイシンによる活性化に応じた、ヒスタミン放出およびＩＬ−
４分泌に対するデスロラタジンの効果をグラフで図示する。

【図３】 図３は、抗ＩｇＥおよびイオノマイシンにより活性化されたヒト好塩基球によ
るＩＬ−１３分泌に対するデスロラタジンの効果をグラフで図示する。

【図４】 図４は、デスロラタジンが、ＩＬ−１３およびＰＭＡを用いて活性化された好
塩基球からのＩＬ−１３の分泌を阻害するということをグラフで図示する。

【図５ａ】 図５ａは、デスロラタジンで前処理された好塩基球におけるＩＬ−４ ｍＲＮ
Ａ発現の阻害をグラフで図示する。

【図５ｂ】 図５ｂは、デスロラタジンで前処理された好塩基球におけるＩＬ−４ ｍＲＮ
Ａ発現の阻害をグラフで図示する。

【図５ｃ】 図５ｃは、デスロラタジンで前処理された好塩基球におけるＩＬ−４ ｍＲＮ
Ａ発現の阻害をグラフで図示する。

【図５ｄ】 図５ｄは、デスロラタジンで前処理された好塩基球におけるＩＬ−４ ｍＲＮ
Ａ発現の阻害をグラフで図示する。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｃ０７Ｄ 401/04 Ｃ０７Ｄ 401/04 (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ，ＴＲ)，ＯＡ(ＢＦ ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ， ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，Ｇ Ｍ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＭＺ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ， ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＧ，ＡＬ，ＡＭ， ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，Ｂ Ｚ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＯ，ＣＲ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ ，ＤＭ，ＤＺ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ， ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＧ，Ｋ Ｒ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＸ，ＭＺ，ＮＯ，ＮＺ， ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，Ｓ Ｌ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＳ，ＵＺ ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ (72)発明者 シュライマー， ロバート ピー． アメリカ合衆国 メリーランド 21286， ボルチモア， スタッグス ヘッド ロ ード 704 (72)発明者 シュローダー， ジョン アメリカ合衆国 メリーランド 21228， ボルチモア， ダンモア ロード 47 (72)発明者 クルートナー， ウィリアム アメリカ合衆国 ニュージャージー 07424， ウエスト パターソン， ウッ ドランド ドライブ 18 Ｆターム(参考） 4C063 AA01 BB01 CC17 DD10 EE01 4C086 AA01 AA02 BC27 GA07 MA04 MA52 MA55 NA14 ZA33 ZA34 ZA59 ZA89 ZB11 ZB13

Claims (9)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 患者における炎症惹起性サイトカインの生成の阻害のための
   医薬の調製のためのデスロラタジンの使用であって、該医薬が有効量のデスロラ
   タジンを含む、使用。
2. 【請求項２】 ヒト好塩基球からの炎症惹起性サイトカインの分泌の阻害の
   ための医薬の調製のためのデスロラタジンの使用であって、該医薬が有効量のデ
   スロラタジンを含む、使用。
3. 【請求項３】 ＩＬ−４およびＩＬ−１３の生成の阻害のための医薬の調製
   のためのデスロラタジンの使用であって、該医薬が、有効量のデスロラタジンを
   含む、使用。
4. 【請求項４】 ヒト好塩基球からのＩＬ−４およびＩＬ−１３の生成の阻害
   のため、ならびに皮膚、眼、腸管、および／または上気道および下気道のアレル
   ギー性状態および／または炎症状態の症状の同時処置のための医薬の調製のため
   のデスロラタジンの使用であって、該医薬は、ＩＬ−４およびＩＬ−１３の生成
   を阻害するために有効でかつ該症状の同時処置のために有効な量のデスロラタジ
   ンを含む、使用。
5. 【請求項５】 前記炎症惹起性サイトカインがＩＬ−４およびＩＬ−１３で
   ある、請求項１または２に記載の使用。
6. 【請求項６】 ヒト好塩基球からのＩＬ−４およびＩＬ−１３の生成に関連
   しアレルギー性の要素および炎症性の要素を有する疾患状態の処置のための医薬
   の調製のためのデスロラタジンの使用であって、該医薬が、抗炎症性効果を生じ
   るために有効な量のデスロラタジンを含む、使用。
7. 【請求項７】 前記疾患状態が、皮膚、眼、腸管、ならびに／または上気道
   および下気道の、アレルギー性状態および／または炎症性状態である、請求項６
   に記載の使用。
8. 【請求項８】 前記疾患状態が、季節性もしくは永続性のアレルギー性鼻炎
   、非アレルギー性鼻炎、アレルギー性および非アレルギー性のぜん息、静脈洞炎
   、感冒、アレルギー性またはアトピー性の皮膚炎、およびじんま疹、アレルギー
   性結膜炎、腸性食物アレルギーまたは症候性皮膚描記症である、請求項６に記載
   の使用。
9. 【請求項９】 前記疾患状態が、季節性もしくはアレルギー性の鼻炎、アレ
   ルギー性ぜん息、アトピー性皮膚炎、アレルギー性結膜炎、腸性食物アレルギー
   、またはじんま疹である、請求項６に記載の使用。