JP2003530077A - Ｐｃａｍ−１マーカータンパク質、ｐｃａｍ−１をコードする核酸配列及びｐｃａｍ−１の検出のための免疫アッセイ - Google Patents

Ｐｃａｍ−１マーカータンパク質、ｐｃａｍ−１をコードする核酸配列及びｐｃａｍ−１の検出のための免疫アッセイ

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JP2003530077A JP2001525386A JP2001525386A JP2003530077A JP 2003530077 A JP2003530077 A JP 2003530077A JP 2001525386 A JP2001525386 A JP 2001525386A JP 2001525386 A JP2001525386 A JP 2001525386A JP 2003530077 A JP2003530077 A JP 2003530077A
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Abstract

(57)【要約】 本発明は、癌マーカータンパク質、ＰＣＡＭ−１、及びこのタンパク質を同定しコードするポリヌクレオチドを提供する。このマーカーの検出は、患者における癌を診断及び予測することにおいて有用である。また提供されるのは、ＰＣＡＭ−１の発現のための発現ベクター及び宿主細胞並びにＰＣＡＭ−１タンパク質に対して作製される抗体である。さらに、組織、細胞もしくは他の生物学的流体の粗抽出物中のタンパク質に選択的に結合する特定の８ｍｅｒ配列の同定のためのモンテカルロ様スクリーニングアッセイが提供される。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】発明の分野 本発明は、本明細書においてＰＣＡＭ−１と称する、癌の新規に同定されたマ
ーカータンパク質に特異的に結合する、本明細書においてＰＣＡＭ−１プローブ
１及びＰＣＡＭ−１プローブ２と称する核酸プローブ（すなわち、ＤＮＡ共通ド
メイン）に関する。本発明はさらに、ＰＣＡＭ−１の核酸配列及びアミノ酸配列
に関する。また提供されるのは、ＰＣＡＭ−１を特異的に認識するポリクローナ
ル及びモノクローナル抗体である。本発明はさらに、癌を包含する、無調節の細
胞増加及び増殖に関連する疾患の診断、予防及び処置においてＰＣＡＭ−１タン
パク質を検出するように設計された免疫アッセイにおけるこれらの抗体の使用に
関する。発明の背景 リンパ系組織における染色体異常の存在は確立している。Ｔ細胞急性リンパ芽
球性白血病（Ｔ−ＡＬＬ）と関連する染色体転座は、いくつかの可能性がある癌
遺伝子の同定につながっている（Ｒａｂｂｉｔｔｓ，Ｔ．Ｈ．Ｃｅｌｌ １９９
１ ６７：６４１−６４４）。Ｔ−ＡＬＬと関連する染色体転座の多くは、Ｔ細
胞受容体（ＴＣＲ）遺伝子に局在している。免疫グロブリン遺伝子の組換えは、
Ｂ−リンパ球分化の初期に起こる。部位特異的組換えにより２もしくは３個の生
殖系列セグメント（すなわち、可変−Ｖ；多様性−Ｄ；及び連結−Ｊセグメント
）をＶ遺伝子エキソンへと連結するＶ−（Ｄ）−Ｊ組換えは、Ｖ領域の多様性の
増幅に寄与する。Ｖ、Ｄ及びＪセグメントの隣接する領域のヌクレオチド配列の
比較により、１２もしくは２３塩基のいずれかのスペーサー配列により隔てられ
ているヘプタマーＣＡＣＴＧＴＧ及びＴに富んだノナマーＧＧＴＴＴＴＴＧＴを
包含するヌクレオチド配列の２つの共通ブロックが保存されていることが示され
ている（Ｅａｒｌｙ ｅｔ ａｌ．Ｃｅｌｌ １９８０ １９：９８１−９９２
）。Ｔ細胞受容体及び免疫グロブリン遺伝子のヘプタマー−スペーサー−ヘプタ
マー−ノナマー配列間の相同性は、一般に切断点クラスター領域もしくはＢＰＣ
Ｒｓと呼ばれるこれらの要素がＶ−（Ｄ）−Ｊ組換えにおいて重要な役割を有す
ることを示唆する。保存された組換えシグナル配列（ＲＳ）を認識するＤＮＡ結
合タンパク質（１つもしくは複数）は、シグナルとコーディング領域配列間の連
結箇所でＤＮＡを切断しそして切断末端を連結する組換え機構に関与し得ると考
えられる。最も初期の報告は、ＲＳタンパク質がリンパ系細胞に位置すると開示
した（Ａｇｕｉｌｅｒａ ｅｔ ａｌ．Ｃｅｌｌ １９８７ ５１：９０９−９
１７；Ｈａｌｌｉｇａｎ，Ｂ．Ｄ．ａｎｄ Ｄｉｓｉｄｅｒｉｏ，Ｓ．Ｖ．Ｐｒ
ｏｃ．Ｎａｔｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １９８７ ８４：７０１９−７０
２３；Ｈａｍａｇｕｃｈｉ ｅｔ ａｌ．Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｒｅｓ．
１９８９ １７：９０１５−９０２６；及びＭａｋ，Ｃ．Ｈ．Ｎｕｃｌｅｉｃ
Ａｃｉｄ Ｒｅｓ．１９９４ ２２：３８３−３９０）。より最近では、異なる
ＲＳタンパク質が同定されている。例えば、Ｖ（Ｄ）Ｊ組換えシグナル配列のカ
ッパＢ結合及び認識成分のＤＮＡ結合タンパク質が同定されている。このファミ
リーの転写因子の活性化は、腫瘍形成チロシンキナーゼが、カッパＢにより制御
される遺伝子調節要素を有する遺伝子を調節する機構をもたらすと考えられる。
【０００２】 Ｔ細胞異常に関する研究は、組換え酵素の関与に関して、特に染色体バンド１
１ｐ１３内の切断点に関して特に情報を提供している。たいてい両方の相互転座
染色体は、組換え酵素活性の特徴であるＮ領域ヌクレオチド付加を有するので、
組換え酵素は異常な染色体連結を招くようである（Ａｌｔ，Ｆ．Ｗ．ａｎｄ Ｂ
ａｌｔｉｍｏｒｅ，Ｄ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １９
８２ ７９：４１１８−４２２３）。これらの転座は、正常な染色体連結過程の
突然変異とみなされる。
【０００３】 リボソームタンパク質をコードする遺伝子の過剰発現と癌の間の関連性を示す
多数の報告がある（Ｃｈｉａｏ ｅｔ ａｌ．Ｍｏｌ．Ｃａｒｃｉｎｏｇ．１９
９２ ５：２１９−２３１；Ｆｅｒｎａｎｄｅｚ−Ｐｏｌ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｂ
ｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．１９９３ ２６８：２１１９８−２１１２０４；Ｆｅｒｎａ
ｎｄｅｚ−Ｐｏｌ ｅｔ ａｌ．Ｃｅｌｌ Ｇｒｏｗｔｈ ＆ Ｄｉｆｆｅｒｅ
ｎｔｉａｔｉｏｎ １９９４ ５：８２１−８２５；Ｆｅｒｎａｎｄｅｚ−Ｐｏ
ｌ，Ｊ．Ａ．Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１９９６ １６：２１７７−２１
８６；Ｃｈａｎ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．ａｎｄ Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅ
ｓ．Ｃｏｍｍ．１９９６ ２２８：１４１−１４７；Ｃｈａｎ ｅｔ ａｌ．Ｂ
ｉｏｃｈｅｍ．ａｎｄ Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．１９９６ ２２５
：９５２−９５６；Ｗｏｏｌ，Ｉ．Ｇ．Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ｂｉｏｃｈｅｍｉ
ｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ １９９６ ２１：１６４−１６５；Ｗｏｏｌ ｅｔ
ａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ １９
９５ ７３：９３３−９４７；及びＶａａｒａｌａ ｅｔ ａｌ．Ｉｎｔ．Ｊ．
Ｃａｎｃｅｒ １９９８ ７８：２７−３２）。例えば、Ｃｈｉａｏ ｅｔ ａ
ｌ．（Ｍｏｌ．Ｃａｒｃｉｎｏｇ．１９９２ ５：２１９−２３１）は、Ｓ２−
リボソームタンパク質が頭部及び頸部の癌では高められているが、正常な組織で
はほとんど検出できないことを見出した。これらの研究に基づき、リボソームタ
ンパク質は、癌においてタンパク質合成を高めることにおいて役割を有すると一
般に考えられる。
【０００４】 あるいはまた、特定のロイシンジッパー配列モチーフもしくは多数のリボソー
ムタンパク質に特有の他のモチーフが突然変異している可能性があること及び突
然変異体が次に核酸に結合することができ（Ｆｅｒｎａｎｄｅｚ−Ｐｏｌ ｅｔ
ａｌ．Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１９９６ １６：２１７７−２１８６
；Ｗｏｏｌ，Ｉ．Ｇ．Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｃｉｅ
ｎｃｅｓ １９９６ ２１：１６４−１６５；Ｗｏｏｌ，Ｉ．Ｇ．（１９９７）
Ｔｈｅ ｒｉｂｏｓｏｍａｌ ＲＮＡ ａｎｄ Ｇｒｏｕｐ Ｉ ｉｎｔｒｏｎ
ｓ（Ｒ．Ｇｒｅｅｎ ａｎｄ Ｒ．Ｓｃｈｒｏｅｄｅｒ，Ｅｄｓ．）Ｒ．Ｇ．Ｌ
ａｎｄｅｓ Ｃｏ．，Ａｕｓｔｉｎ ＴＸ ＵＳＡ ｐｐ．１５３−１７８）、
そして癌細胞においてヌクレアーゼの機能を果たすか、連結を制御するか、また
は遺伝子転写もしくは翻訳を調節するいずれかをできることが提示されている。
例えば、ラットリボソームタンパク質Ｓ３ａは、ラットｖ−ｆｏｓトランスフォ
ーメーションエフェクター遺伝子の産物と同一である（Ｃｈａｎ ｅｔ ａｌ．
Ｂｉｏｃｈｅｍ．ａｎｄ Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．１９９６ ２２
８：１４１−１４７）。Ｓ３ａはタンパク質合成の開始に関与し、そしてまた増
殖の調節及び細胞周期に関与するタンパク質にも関連している（Ｃｈａｎ ｅｔ
ａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．ａｎｄ Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．１９９
６ ２２８：１４１−１４７）。同様に、ラットリボソームタンパク質Ｌ１０は
、推定のウィルムス腫瘍サプレッサー遺伝子に対するＤＮＡ結合タンパク質に相
同である（Ｃｈａｎ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．ａｎｄ Ｂｉｏｐｈｙｓ．
Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．１９９６ ２２５：９５２−９５６）。これらの研究は、突
然変異体リボソーム様タンパク質が癌の予測もしくは診断に役立つ可能性があり
、そして癌細胞の性質を調節することにおいて重要な役割を果たすことを示唆す
る。
【０００５】 要するに、再編成する遺伝子と関連する染色体異常を引き起こす機構（１つも
しくは複数）及び正常な抗原受容体遺伝子に関与する酵素（すなわち、組換え酵
素）（Ｃｒｏｃｅ，Ｃ．Ｍ．Ｃｅｌｌ ４９：１９８７ １５５−１６９）の役
割は、十分に研究されてはいるが、それでもなおあまり理解されていない。従っ
て、新規なＢＰＣＲｓ及び新規な組換え酵素の同定は、特に非リンパ系タイプ疾
患及び固形癌発生を理解するために必要とされる。発明の要約 本発明の一つの目的は、無作為の８ｍｅｒＤＮＡ配列の製造及び選択した組織
により生産される一つのタンパク質もしくは複数のタンパク質に結合する８ｍｅ
ｒ配列を同定するタンパク質結合アッセイにおけるそれらの使用を含んでなる新
規な転写因子の同定のためのモンテカルロ様スクリーニングアッセイを提供する
ことである。
【０００６】 本発明の別の目的は、ＰＣＡＭ−１タンパク質に結合するモンテカルロ様スク
リーニングアッセイにより同定される８ｍｅｒ共通配列を提供することである。
これらの精製された核酸配列は、本明細書においてＰＣＡＭ−１プローブ１及び
ＰＣＡＭ−２プローブ２と称する。
【０００７】 本発明の別の目的は、ＰＣＡＭ−１ポリペプチドをコードするかもしくはＰＣ
ＡＭ−１ポリペプチドをコードする遺伝子とハイブリダイズする単離され、精製
された核酸配列を提供することである。
【０００８】 本発明の別の目的は、ＰＣＡＭ−１ポリペプチドのアミノ酸配列を提供するこ
とである。
【０００９】 本発明の別の目的は、細胞及び組織における組換え及び天然のＰＣＡＭ−１タ
ンパク質を特異的に認識するＰＣＡＭ−１ポリペプチドに対して作製されるポリ
クローナル及びモノクローナル抗体を提供することである。
【００１０】 本発明の別の目的は、ＰＣＡＭ−１ポリペプチドをコードするかもしくはＰＣ
ＭＡ−１ポリペプチドをコードする遺伝子とハイブリダイズするいずれかの核酸
配列を含有する発現ベクター及び発現ベクターを含んでなる宿主細胞を提供する
ことである。
【００１１】 本発明のさらに別の目的は、患者から得られる生物学的サンプル中のＰＣＡＭ
−１タンパク質レベルの検出及び／もしくはモニタリングにより患者における癌
を診断及び／もしくは予測するための方法及びキットを提供することである。好
ましい態様として、ＰＣＡＭ−１は、ＰＣＡＭ−１タンパク質に対して作製され
る抗体を用いて免疫アッセイにより尿サンプルにおいて検出される。発明の詳細な記述 前立腺癌のような癌の早期検出のためのマーカーの開発は、癌の改善された処
置にとって必須である。前立腺癌に関して、一般に、血清前立腺特異的抗原（Ｐ
ＳＡ）レベルは、前立腺癌にかかっている患者の同定のために高感度ではなくま
た特異的でもないと考えられる（Ｇａｒｎｉｃｋ，Ｍ．Ｂ．ａｎｄ Ｆａｉｒ，
Ｗ．Ｒ．Ｐｒｏｓｔａｔｅ Ｃａｎｃｅｒ．Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ａｍｅｒｉ
ｃａｎ，Ｄｅｃｅｍｂｅｒ １９９８ ７５−８３）。前立腺癌にかかっている
男性の２５％程度は正常なＰＳＡレベルを有すると概算されている。従って、前
立腺癌を包含する癌のより高感度で且つより特異的なアッセイの開発が明らかに
必要とされる。集団地域検査プログラムによるかもしくは日常的な臨床検査にお
ける実施を可能にする、非侵襲性で且つ安価な尿に基づくスクリーニングアッセ
イは、特に有用である。
【００１２】 本発明は、ヒト組織から得られる核抽出物中の新規なＤＮＡ結合タンパク質を
同定するためにスクリーニングアッセイにおいて用いることができる二本鎖核酸
配列に関する。本発明はまた、無作為の８ｍｅｒ ＤＮＡ配列を製造し、そして
選択した組織、すなわち、腫瘍組織において生産されるタンパク質に結合する８
ｍｅｒ配列を同定するためにタンパク質結合アッセイを用いる、本明細書におい
て「モンテカルロ」タイプスクリーニングアッセイと称する、新規なスクリーニ
ングアッセイにも関する。モンテカルロタイプスクリーニングアッセイを、腫瘍
組織の核タンパク質抽出物において過剰に発現される新規な転写因子を同定する
ために用いた。このアッセイのために、８ｍｅｒの二本鎖ＤＮＡプローブ（ｎ＝
４０９６の組み合わせ）を設計した。次にＤＮＡプローブは、同じ患者（ｎ＝１
１）からの匹敵する標本における癌、良性、高い悪性度分類の前立腺上皮内腫瘍
及び精嚢組織からの匹敵するタンパク質抽出物間でタンパク質−ＤＮＡ結合親和
性の違いについてスクリーニングするために用いた。タンパク質の結合は、ニト
ロセルロースフィルターによりそして電気泳動移動度ゲルシフトアッセイ（ＥＭ
ＳＡｓ）において決定した。シンチレーション計数及びホスホイメージング（ｐ
ｈｏｓｐｈｏｉｍａｇｉｎｇ）により、進行したヒト前立腺癌組織の核抽出物か
ら単離されたタンパク質は、ＰＣＡＭ−１プローブ１（ＣＡＣＧＧＡＴＧ）及び
ＰＣＡＭ−１プローブ２（ＣＡＣＡＡＴＧＡ）を含んでなる２つの異なる二本鎖
核酸配列に特異的に結合することが示された。調べた他の組織から抽出したタン
パク質は、これら２つの核酸配列に結合せず、これらが腫瘍特異的タンパク質に
結合したことを示す。これらの配列の一つ、「ＰＣＡＭ−１プローブ２」は、Ｔ
細胞白血病細胞において以前に同定されている、いわゆる、「切断点クラスター
領域」もしくはＢＰＣＲ（Ｒａｂｂｉｔｔｓ，Ｔ．Ｈ．ａｎｄ Ｂｏｅｈｍ，Ｔ
．Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １９９１ ５０：１１９−
１４６）と同一であった。ＢＰＣＲ配列は、以前に、Ｔ細胞及びＢ細胞における
染色体切断と関連付けられており、そしてこれらのＢＰＣＲｓと関連する機構も
しくはタンパク質の機能不全は、白血病並びに前立腺癌における癌性細胞の発生
をある程度説明することができる。「ＰＣＡＭ−１プローブ１」及び「ＰＣＡＭ
−１プローブ２」の配列を以下に示す： 「ＰＣＡＭ−１プローブ１」： ５’−ＣＡＣＧＧＡＴＧ−３’ ３’−ＧＴＧＣＣＴＡＣ−５’ 「ＰＣＡＭ−１プローブ２」： ５’−ＣＡＣＡＡＴＧＡ−３’ ３’−ＧＴＧＴＴＡＣＴ−５’ 同定された特定のＤＮＡ配列（すなわち、二本鎖の）ＣＡＣＧＧＡＴＧ及びＣ
ＡＣＡＡＴＧＡを、ＰＣ−３ＭＬ前立腺細胞（Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．Ｏｎｃｏ
ｌｏｇｙ Ｒｅｓｅａｒｃｈ １９９８ １０：２１９−２３３）から開発され
たｃＤＮＡライブラリーをスクリーニングするために用いた。このスクリーニン
グは、ＰＣＡＭ−１リボソームタンパク質を発現するファージミドクローンの同
定をもたらした。「ＰＣＡＭ−１」は、本明細書において用いる場合、精製され
た組換えもしくは天然のＰＣＡＭ−１タンパク質のアミノ酸配列をさす。ＰＣＡ
Ｍ−１遺伝子のサブクローニング及び遺伝子バンクの検索により、この遺伝子が
ヒトリボソームタンパク質Ｓ２及びマウス染色体タンパク質ＬＬＲｅｐ３と約９
０〜９５％の相同性を示すことが示された。このＰＣＡＭ−１リボソームタンパ
ク質を発現する核酸配列は配列番号：１を含んでなり、そしてこのポリペプチド
の推定アミノ酸配列は配列番号：２を含んでなる。
【００１３】 組換えＰＣＡＭ−１タンパク質は、ＥＭＳＡｓにおいて「ＰＣＡＭ−１プロー
ブ１」及び「ＰＣＡＭ−１プローブ２」に特異的に結合する（そして無作為に作
製した８ｍｅｒ配列にはそうしない）ことが示された。また、生物学的サンプル
中のＰＣＡＭ−１を同定するためにＤＮＡタンパク質結合アッセイも開発した。
ＥＭＳＡｓを用いて、ＰＣＡＭ−１は、前立腺癌組織からの組織抽出物において
そしてヒト患者からの尿及び血清において検出された。これらのアッセイにおい
て、ＰＣＡＭ−１は、良性もしくは正常な前立腺組織または精嚢組織では検出さ
れなかった。ＰＣＡＭ−１はまた、前立腺癌の臨床証拠のない正常な個体の尿も
しくは血清においても検出されなった。
【００１４】 ＰＣＡＭ−１タンパク質を特異的に認識する抗体の開発後に、酵素結合免疫サ
ンドイッチアッセイもしくはＥＬＩＳＡ研究をヒト組織及び流体からのタンパク
質抽出物に対して実施した。ＥＬＩＳＡｓにより、ＰＣＡＭ−１は、組織からの
粗タンパク質抽出物の研究における前立腺癌の非常に高感度のマーカーであるこ
とが示された（表１）。これらの実験において、前立腺の顕微解剖領域（調べた
ｎ＝４０の根治的前立腺切除）からの核タンパク質抽出物は、匹敵する精嚢（Ｓ
Ｖ）、前立腺肥大症（ＢＰＨ）もしくは高い悪性度分類の前立腺上皮内腫瘍（Ｈ
ＧＰＩＮ）病巣において検出される非常に低いレベルと比較して有意に高いレベ
ルのＰＣＡＭ−１を発現した。ＰＣＡＭ−１の量（μｇ／ｍｇ ＤＮＡ）は、グ
リーソンスコア（ＧＳ）の関数として増加するようであり、このタンパク質が癌
の病期特異的マーカーであり得ることを示す。
【００１５】
【表１】
【００１６】 癌性組織を含有する前立腺を除くための根治的前立腺切除（合計ｎ＝４０）後に
、異なる腺病巣及び組織を前立腺の矢状切片から切断した。全てのＢＰＨ及びＨ
ＧＰＩＮ標本は、癌を示す同じ前立腺から得た。サンプルは少なくとも３回アッ
セイし、そしてデータは、調べたコホートにおける全ての患者について平均した
。
【００１７】 診断試験は、患者における尿ＰＣＡＭ−１レベルを比較するために行った。こ
れらの試験からのデータを表２に示す。
【００１８】
【表２】
【００１９】 検出限界カットオフは：ＰＣＡＭ−１陽性（＞５ｎｇ／ｍｌ）；ＰＣＡＭ−１陰
性（＜４ｎｇ／ｍｌ）であった。ＰＣＡＭ−１レベルは、ＰＣＡＭ−１陽性患者
において５−９３ｎｇ／ｌ、そしてＰＣＡＭ−１陰性患者において０．１−４．
０ｎｇ／ｍｌの範囲であった。
【００２０】 表２に示すように、尿ＰＣＡＭ−１アッセイの感度は７３％（すなわち、２４
／３３）であった。３〜４年前（すなわち、ＧＳ８−１０、Ｔ３期癌）に前立腺
を取り除いた２人の患者では、おそらく、再発する癌のために、尿ＰＣＡＭ−１
レベルは高かった。これらの患者は、再発する癌があるかどうかを決定するため
に現在観察中である。逆に、これらの患者のうち１２人（すなわち、ＧＳ５−６
、Ｔ２期癌）は、尿ＰＣＡＭ−１について陰性であった。ＢＰＨにかかっている
（そして癌の指標がない）と診断される患者では、約１６％（ｎ＝１５／９６）
が高いＰＣＡＭ−１尿レベルを示した。患者のこのコホートにおいて、ＢＰＨ患
者の８４％（ｎ＝８１／９６）は、ＰＣＡＭ−１について陰性であった。４０人
の志願者男性のうち、全てがＰＣＡＭ−１について陰性であった。直腸癌にかか
っている一人の患者及び感染症もしくは炎症にかかっている５人の患者（ｎ＝５
／９）は、ＰＣＡＭ−１について陽性であり、従って、感染症もしくは炎症から
偽陽性が生じる可能性があることを示す。
【００２１】 従って、これらの結果は、ＰＣＡＭ−１尿アッセイの感度が前立腺癌について
７３％であることを示す。総合的な特異性（すなわち、疾患にかかっていない患
者の総数で割った陰性患者の総数）は約９２％（１６７／１８０）であった。従
って、ＰＣＡＭ−１タンパク質は、癌、特に前立腺癌の有用な独立した診断マー
カーであると考えられる。
【００２２】 本発明の一つの態様として、ＰＣＡＭ−１タンパク質をコードする核酸配列及
びこれらの核酸配列によりコードされるＰＣＡＭ−１タンパク質の推定アミノ酸
配列が提供される。ＰＣＡＭ−１タンパク質をコードする代表的核酸配列及び代
表的推定アミノ酸配列をそれぞれ配列番号：１及び配列番号：２に示す。「核酸
配列」は、本明細書において用いる場合、オリゴヌクレオチド、ヌクレオチドも
しくはポリヌクレオチド及びそのフラグメントもしくは一部、並びに一本もしく
は二本鎖であることができそしてセンスもしくはアンチセンス鎖を表すことがで
きるゲノムもしくは合成起源のＤＮＡもしくはＲＮＡをさす。「アミノ酸配列」
、「ポリペプチド」もしくは「タンパク質」という用語は、本明細書において用
いる場合、単離及び精製されておりそしてＰＣＡＭ−１タンパク質と関連する天
然に存在するタンパク質分子のアミノ酸配列をさす。
【００２３】 本発明はまた、これらの核酸配列を含んでなる発現ベクター及び発現ベクター
を含有する宿主細胞にも関する。発現ベクター及び発現ベクターでトランスフェ
クションすることができる宿主細胞は、当該技術分野において周知である。本発
明のもののような選択した核酸配列をベクターにそして最終的に宿主細胞に導入
する方法もまた周知である。
【００２４】 本発明の核酸及びアミノ酸配列は、生物学的サンプル中のＰＣＡＭ−１タンパ
ク質の検出のためのスクリーニングアッセイを開発することにおいて有用である
。本明細書において示すように、一つの態様として、抗体をＰＣＡＭ−１タンパ
ク質に対して作製し、そして組織、痰、尿もしくは血清のような生物学的サンプ
ル中のＰＣＡＭ−１タンパク質を検出するためにＥＬＩＳＡのような免疫アッセ
イにおいて用いることができる。周知の方法に従ってモノクローナルもしくはポ
リクローナル抗体をこのタンパク質に対して作製することができる。あるいはま
た、標識した核酸プローブを本発明の核酸配列から製造し、そして組織生検サン
プルの核抽出物中のＰＣＡＭ−１を検出するためにＥＭＳＡｓにおいて用いるこ
とができる。
【００２５】 従って、本発明の別の態様は、生物学的サンプル中のＰＣＡＭ−１の検出のた
めの方法及びキットに関する。本明細書において示すように、患者の生物学的サ
ンプル中のＰＣＡＭ−１レベルの検出は、患者における癌、特に前立腺癌を診断
及び予測することにおいて有用である。本発明の方法では、生物学的サンプルを
患者から得、そして次に生物学的サンプル中のＰＣＡＭ−１を検出するための手
段と接触させる。一つの態様として、この手段は、組織、痰、血清及び尿のよう
な生物学的サンプル中のＰＣＡＭ−１タンパク質を検出することができる、ＰＣ
ＡＭ−１タンパク質に対して作製される抗体を含んでなることができる。別の態
様として、この手段は、組織生検のような生物学的サンプル中のＰＣＡＭ−１タ
ンパク質を検出することができるＣＡＣＧＧＡＴＧのような標識した核酸プロー
ブを含んでなることができる。従って、本発明のキットでは、サンプル中のＰＣ
ＡＭ−１タンパク質及びＰＣＡＭ−１タンパク質基準を検出するための手段が提
供される。ＰＣＡＭ−１タンパク質を検出するための手段は、ＰＣＡＭ−１タン
パク質に対して作製される抗体もしくは該タンパク質に結合することができる標
識した核酸プローブを含んでなることができる。生物学的サンプル中のＰＣＡＭ
−１の存在は、患者が癌、特に前立腺癌にかかっていることを示す。本発明の方
法及びキットはまた、前立腺癌にかかっている患者において患者におけるＰＣＡ
Ｍ−１のレベルの変化を継時的にモニターすることにより彼らの予後を評価しそ
して処置を評価するために用いることもできる。継時的なＰＣＡＭ−１のレベル
の増加は、癌が進行していることを示し、一方、継時的なＰＣＡＭ−１のレベル
の減少は、癌の退行を示す。
【００２６】 さらに、ＰＣＡＭ−１タンパク質レベルを検出するためのこれらの方法及びキ
ットはまた、他のタイプの癌、炎症症状、感染症及び遺伝的突然変異を診断及び
予測することにおいても有用であり得ると考えられる。
【配列表】
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｃ１２Ｎ 1/21 Ｃ１２Ｑ 1/68 Ａ 5/10 Ｇ０１Ｎ 33/53 Ｄ Ｃ１２Ｑ 1/68 33/574 Ｂ Ｇ０１Ｎ 33/53 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ 33/574 5/00 Ａ (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＭＺ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ， ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＧ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ， ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＢＺ，Ｃ Ａ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ ，ＤＺ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ， ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，Ｋ Ｅ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ， ＭＷ，ＭＸ，ＭＺ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，Ｒ Ｕ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ， ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ Ｆターム(参考） 4B024 AA12 CA01 CA04 CA12 GA11 HA12 4B063 QA19 QQ03 QQ79 QQ96 QR32 QR48 QR55 QS32 QS33 QX01 4B065 AA90Y AB01 AC14 BA02 CA24 CA46 4H045 AA10 AA11 AA30 BA10 CA40 DA76 EA51 FA74

Claims (16)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 無作為の８ｍｅｒ二本鎖ＤＮＡ配列を製造すること及び選択
    した組織において生産されるタンパク質に結合する８ｍｅｒ配列を同定するため
    にタンパク質結合アッセイを用いることを含んでなる選択した組織におけるタン
    パク質の同定のためのモンテカルロ様スクリーニングアッセイ。
  2. 【請求項２】 ＰＣＡＭ−１タンパク質に結合する単離され、精製された核
    酸配列。
  3. 【請求項３】 配列ＣＡＣＧＧＡＴＧを含んでなる請求項２の単離され、精
    製された核酸配列。
  4. 【請求項４】 配列ＣＡＣＡＡＴＧＡを含んでなる請求項２の単離され、精
    製された核酸配列。
  5. 【請求項５】 ＰＣＡＭ−１ポリペプチドをコードするかもしくはＰＣＡＭ
    −１ポリペプチドをコードする遺伝子とハイブリダイズする単離され、精製され
    た核酸配列。
  6. 【請求項６】 配列番号：１を含んでなる請求項５の単離され、精製された
    核酸配列。
  7. 【請求項７】 コードするＰＣＡＭ−１ポリペプチドが配列番号：２を含ん
    でなる請求項５の単離され、精製された核酸配列。
  8. 【請求項８】 単離され、精製されたＰＣＡＭ−１ポリペプチド。
  9. 【請求項９】 配列番号：２を含んでなる請求項８の単離され、精製された
    ＰＣＡＭ−１ポリペプチド。
  10. 【請求項１０】 請求項８のＰＣＡＭ−１ポリペプチドに対して作製される
    抗体。
  11. 【請求項１１】 ＰＣＡＭ−１ポリペプチドをコードするかもしくはＰＣＭ
    Ａ−１ポリペプチドをコードする遺伝子とハイブリダイズする核酸配列を含んで
    なる発現ベクター。
  12. 【請求項１２】 請求項１１の発現ベクターを含んでなる宿主細胞。
  13. 【請求項１３】 患者から生物学的サンプルを得ること及び生物学的サンプ
    ル中のＰＣＡＭ−１タンパク質レベルを検出するかもしくはモニターすることを
    含んでなり、ここで、生物学的サンプル中のＰＣＡＭ−１タンパク質の存在は、
    患者における癌の存在もしくは進行を示す、患者における癌を診断及び予測する
    方法。
  14. 【請求項１４】 癌が前立腺癌である請求項１３の方法。
  15. 【請求項１５】 （ａ）ＰＣＡＭ−１基準；及び （ｂ）生物学的サンプル中のＰＣＡＭ−１タンパク質を検出するための手段、 を含んでなる患者における癌を診断及び予測するためのキット。
  16. 【請求項１６】 癌が前立腺癌である請求項１５のキット。
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