JP2003527817A - 遺伝子修飾したｃｄ３４−陰性付着成長性幹細胞および遺伝子療法におけるそれらの使用 - Google Patents

遺伝子修飾したｃｄ３４−陰性付着成長性幹細胞および遺伝子療法におけるそれらの使用

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Abstract

(57)【要約】 本発明は、遺伝子修飾した非常に初期の造血および間充織幹細胞（表面分子ＣＤ３４の発現に関して陰性）の、モノまたはオリゴ遺伝子性疾患の個体の遺伝子療法または細胞療法における使用に関する。患者の末梢血由来の自己ＣＤ３４−陰性付着成長性幹細胞培養物を利用し、遺伝子構築物で効果的にトランスフェクトまたは感染させる。これらの遺伝子の遺伝子産物は、患者生物において長期間、欠損または欠失タンパク質あるいは因子を置換するであろう。また、拡大後、自己幹細胞は、細胞療法（器官置換療法）にも使用できる。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】 発明の記載 本発明は、遺伝子修飾した最も初期の造血および間充織幹細胞（ＣＤ３４表面
分子の発現に関して陰性である）の、モノまたはオリゴ遺伝子性疾患の各々、造
血疾患ならびに慢性障害の個体の遺伝子療法における使用に関する。この目的の
ため、内因性ＣＤ３４−陰性付着成長性幹細胞培養物が患者の末梢血から樹立さ
れ、遺伝子構築物で各々、効果的にトランスフェクトまたは感染される。長期間
、該遺伝子の遺伝子産物は、患者生物において欠損または欠失タンパク質あるい
は因子を各々、置換し、または細胞治療を可能にするであろう。
【０００２】 体性遺伝子療法または細胞療法の目的は、各々、遺伝物質の生物中への有効な
移入である。体性遺伝子療法において、体細胞中の遺伝子欠損を補正するか、ま
たは治療上有用な遺伝子産物をコードしている遺伝子を細胞中に導入する。遺伝
子療法による改変は、子孫に伝達されない。遺伝物質の標的細胞中への導入は、
エクス・ビボならびにイン・ビボで行ってもよい。エクス・ビボは、標的細胞を
体外で培養し、次いで、遺伝物質の導入後に患者中へ再導入することを意味する
。しかしながら、体性遺伝子療法の効率は、トランスフェクト細胞の限られた寿
命によって影響される。したがって、造血幹細胞のような特に長命な細胞が、体
性遺伝子療法の標的細胞として特に適当である。これまで、移植目的の造血幹細
胞は、提供者の骨髄から、または末梢血から富化工程後に得られた。患者または
近親者の体からの細胞の単離は、同種骨髄移植と呼ばれる。次いで、しばしば、
幹細胞および他の骨髄細胞の非選択混合物を患者に再導入する。最後に、該混合
物に含有される造血幹細胞が血液から造血性骨髄に移動して、造血系の全細胞を
必要量、生産する。該型の移植は、しばしば、重篤な合併症を伴う。提供者と受
容者の間の最小の組織相違であっても、患者にとって非常に危険な合併症を引き
起こすかもしれない。この危険性は、実際の疾患、例えば、白血病に対して推量
されなければならない。提供者−受容者不適合性（移植片対宿主疾患）は、通常
、実際の幹細胞調製物に混入している細胞によって引き起こされる。特に、これ
らは、提供者の免疫系の細胞である。
【０００３】 骨髄または幹細胞移植のこの混入を排除するために、各々、造血幹細胞の集団
を豊富にするための方法が開発されてきた。多能性造血幹細胞とも呼ばれる該細
胞は、これまで、特定の表面分子の発現または非発現によって定義付けられてき
た。該多能性造血幹細胞は、付加的な前駆細胞を経て、ヒト造血細胞系統、例え
ば、Ｂ細胞、Ｔ細胞、白血球、血小板または赤血球を生産できる。現在、多能性
造血幹細胞としての造血細胞の決定は、いわゆるＣＤ３４分子の発現によって、
同時に、ＣＤ５のような他の表面分子の非発現によって定義付けられる。ＣＤ３
４分子は、約１０５〜１２０ｋＤの分子量を有するムチンファミリーの強く負に
荷電したプロテオグリカンである。Cellpro Inc. company, Seattle, USAは、ア
フィニティークロマトグラフィーによるＣＤ３４−陽性細胞の精製方法を開発し
た（米国特許第５，２１５，９２７号、５，２６２，３３４号、５，２４０，８
５６号、５，２２５，３５３号、ＥＰ５２６５７７ＢおよびＥＰ２６０２８０Ｂ
）。同時に、ＣＤ３４−陰性細胞は、間充織幹細胞のプールを形成する。
【０００４】 現在、造血幹細胞による体性遺伝子療法の場合、ＣＤ３４−陽性細胞は、増殖
因子、例えば、Ｇ−ＣＳＦ（ノイポゲン−Ｒ（neupogen-R））で該細胞を刺激後
、患者の末梢血から単離され、遺伝子操作後、患者に再導入されて、致死照射さ
れ、化学療法で処理された骨髄を再構築する。今まで、この方法で修飾された造
血幹細胞は、アデノシンデアミナーゼ欠損、ＳＣＩＤ症候群またはＨＩＶ感染の
ような特異的免疫欠乏症候群、ゴージェ病のような代謝性疾患、造血障害、例え
ば、地中海貧血の特異的形態および白血病のような悪性疾患に特に用いられてき
た。
【０００５】 しかしながら、道徳上および社会的理由のため、該方法は、自己または近親者
による血液幹細胞の提供に限られ、末梢血中の幹細胞の蓄積のために、増殖因子
を各々、提供者または患者に投与しなければならない。今まで、白血病クローン
の可能な拡大（expansion）または健康な血液幹細胞の可能な形質転換に対する
該増殖因子の長期間の効果を予測することは不可能であった。
【０００６】 さらに、造血幹細胞による体性遺伝子療法は、ある特定の技術的困難を引き起
こす。治療遺伝子または遺伝子構築物でトランスフェクトされた造血幹細胞のほ
んの一部しか遺伝子修飾を受けず、または遺伝子産物が生産されないであろう。
したがって、現在、該方法の効率は非常に低い（Huss, R. Infusionsthera. Tra
nsfusionsmed. 23 (1996) 147-160参照）。
【０００７】 遺伝子療法に使用できる改善された手段および方法に対する要望がある。 目的は、請求項１〜８に記載の内容によって解決される。 したがって、本発明の主題は、遺伝子修飾したＣＤ３４−陰性付着成長性幹細
胞である。 好ましい具体例において、寿命または分裂能は、各々、一時的不死化によって
延長される。 本発明は、図１および２ならびに下記の記載によって、より詳細に記載される
。
【０００８】 発明の詳細な記載 最も初期のＣＤ３４−陰性造血幹細胞の存在の最初の観察は、繊維芽細胞に類
似し、特に、造血増殖因子を生産できるＣＤ３４−陰性細胞からなるイヌ初代骨
髄ストロマ培養由来の対応する細胞系統の単離およびクローニングに基づいてい
る。今まで、造血増殖因子の生産は、ストロマ細胞系統についてすでに記載され
ていた（ＤＥ４３２２５７０Ｃ１参照）。かかる初代培養から、モノクローナル
集団（コロニー形成単位＝ＣＦＵ）が標準的コロニーアッセイにおいて樹立され
た。該クローンのいくつかは、より成熟した造血前駆細胞に分化することができ
た（Hussら、Proc. Natl. Acad. Sci. USA 92 (1995) 748-752）。該細胞の分化
ならびに増殖は、異なる増殖因子に依存する。したがって、幹細胞因子（ｃ−ｋ
ｉｔリガンド；ＳＣＦ）は、ＣＤ３４−陰性付着成長性細胞のもはや付着成長性
ではないＣＤ３４−陽性細胞への分化を誘発するが、インターロイキン６（ＩＬ
−６）は、主として、増殖および付着成長を促進する（Hussら、Blood 85 (1995
) 2414-2421）。
【０００９】 末梢血のＣＤ３４−陽性細胞から、繊維芽細胞に類似のＣＤ３４−陰性付着成
長性集団を樹立できた。ＣＤ３４−陰性付着成長から、もはや付着成長しないＣ
Ｄ３４−陽性への分化の手順は可逆的であることが見出された。ＩＬ−６の添加
により、付着性であるが最初に非均一な細胞集団が、健康な自発的提供者の末梢
単核細胞から樹立された。この目的で、約２０ｍｌのヘパリン処理した血液を２
回、Ｆｉｃｏｌｌ勾配上に充填し、標準的な方法にしたがって単核細胞フラクシ
ョンを単離し、３７℃および５％ＣＯ２のインキュベーター中における細胞培養
フラスコ中のＩＬ−６含有培地に添加した。２、３日後、付着成長性細胞層が生
産された。該初代培養は、免疫表現型によって検出するとき、最初、繊維芽細胞
に類似の細胞ならびにマクロファージ、内皮細胞および時折、脂肪細胞からなっ
た。しかしながら、「混入」細胞の量は、ほとんど均一な細胞集団が形成される
まで、最初の数日および数週の間に完全に減少した（Hussら、Infusionsthera.
Ytansfusionsmed. 24(1997) 404-409）。しかしながら、このとき、それは不死
化されなかったので、該集団をクローン化することはできない。にもかかわらず
、該細胞は、細胞培養において維持するか、または通常の方法において液体窒素
中で冷凍してもよい。
【００１０】 また、細胞培養における条件を修飾することによって、ＣＤ３４−陰性付着成
長性細胞は間充織幹細胞に分化し、よって、骨、軟骨および他の組織の前駆細胞
を生産しうる。
【００１１】 遺伝子移入 繊維芽細胞に類似のＣＤ３４−陰性付着成長性細胞は、末梢血の精製した単核
細胞から、上記の方法にしたがって単離された。最初に、他の細胞の多くの混入
があったが、時間が経つにつれて完全に消失し、その結果、付着細胞の１００％
がＣＤ３４−陰性付着細胞を提示した。最適な形質導入効率のために、「緑色蛍
光タンパク質（ＧＦＰ）」の遺伝子移入のための種々の方法が研究された。「緑
色蛍光タンパク質」は、トランスフェクトされたまたは感染された細胞において
、各々、紫外線下で緑色を示し、よって、単純な方法で、各々、トランスフェク
トされたまたは感染された細胞の検出をＧＦＰを用いて可能にする遺伝子構築物
である。
【００１２】 イン・ビトロ培養ならびにＳＣＩＤマウス（ＳＣＩＤマウスは、細胞性免疫欠
乏を有し、該マウスは、同種または異種移植モデルのためのイン・ビボモデルと
して役立つ）におけるイン・ビボ実験での結果は、標的細胞におけるＧＦＰの発
現が数週間持続し、ここに、ＳＣＩＤマウスにおけるＧＦＰトランスフェクト細
胞の蛍光は、明らかに認識できるが、純粋な細胞培養法におけるよりも弱いこと
を示した。
【００１３】 ＧＦＰタンパク質について、各々、異なるトランスフェクションまたは感染法
の研究は、下記の異なる結果を与えた。 トランスフェクションのためのＣａＣｌ２手法は、トランスフェクトされるべ
き細胞の大部分を死に導く強い細胞性ストレスを誘発した。
【００１４】 対照的に、リポフェクタミンまたはウイルス上清を用いる感染による遺伝子移
入の効率は、各々、非常に高かった。リポフェクタミンを用いるトランスフェク
ション効率は１回の適用後、約４０〜５０％であり、一方、ウイルス上清を用い
る感染効率は１０〜１４日および３〜４継代後、８８〜９４％であった。相応じ
て、新しいウイルス含有上清を３〜４日毎に標的細胞に添加した。
【００１５】
【表１】
【００１６】 効率 本発明の系の明らかな利益は、主として、まだモノクローナルではないが、し
ばしばオリゴクローナルである該均一な細胞集団の高いトランスフェクションま
たは感染効率である。 激しい努力にもかかわらず同様の方法が、造血前駆細胞の約５〜２０％の感染
効率を有する一方で、本発明の初期幹細胞集団のほとんど全ての細胞が所望の遺
伝子で感染される。
【００１７】 ＳＣＩＤマウスを用いる実験は、遺伝子の発現が、造血の全系統においてイン
・ビボでも起きることを示した。これは、レトロウイルス構築物に当てはまるだ
けでなく、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）の応用またはエプスタイン−バーウイ
ルス（ＥＢＶ）由来の構築物にも当てはまる。
【００１８】 均質性 末梢血からの単純な単離およびその高い効率のため、繊維芽細胞に類似の付着
成長性のほとんど均一な細胞集団は、遺伝子療法および細胞療法の分野において
非常によく応用できる。
【００１９】 実験は、最も初期の造血幹細胞が長期の再構築を示すだけでなく、胸腺におけ
るそれらのコロニー化を介する耐性も誘導しうることを示した。 これは、自己または同系の系におけるだけでなく、同種移植の分野においても
応用が可能である。
【００２０】 療法選択 患者において欠損または欠失している遺伝子産物を示す全遺伝子を、欠失また
は欠損遺伝子のための構築物での自己造血細胞の感染による患者自身の遺伝子修
飾細胞を用いて患者に再導入してもよい（図１参照）。
【００２１】 候補は、特に、ある特定の代謝性疾患（例えば、ゴージェ病、ＰＮＨ、糖尿病
）、免疫欠乏症候群（ＡＤＡ欠乏、ＳＣＩＤ、ＣＧＤ、ＬＡＤ、ＡＩＤＳ）、異
常ヘモグロビン症（例えば、鎌状赤血球貧血、地中海貧血）および悪性疾患（例
えば、同定された突然変異に関して、ＭＤＲ、アンチセンス構築物、ハンマーヘ
ッド型リボザイム）に関与する遺伝子である（Somatic Gene Therapy; P.L. Cha
ng（編）CRC Press, Inc., Boca Raton, USAの表１、８頁を参照）。
【００２２】 患者の自己の初期造血幹細胞中への所望の遺伝子の移入後、患者から単離され
た細胞を液体窒素中で冷凍し、必要に応じて、それらを１回または再度使用して
もよい。これは、該細胞が非常に大量に増殖するので、可能である。
【００２３】 さらなる具体例は、所望により、感染細胞をガンシクロビルによって完全にま
たは部分的に除去するための、「自殺遺伝子」、例えば、チミジンキナーゼの導
入に関する。これにより、例えば、酵素の活性が所望の血清レベルを上回る場合
、または腫瘍疾患が治った場合に、細胞をイン・ビボで連続的な成長制御下に維
持してもよい。
【００２４】 また、一時的（パサージャー（passager））方法において部分的に不死化され
た幹細胞を細胞療法あるいは内因性軟骨または骨物質の調製に各々、使用しても
よい（図２参照）。 また、該具体例において、患者の造血を完全に再構築する必要がなく、単に造
血幹細胞の一部を遺伝子修飾した幹細胞で置換するだけなので、患者を骨髄除去
療法に付す必要はない。
【００２５】 以下の実施例は本発明を説明する。 実施例１：細胞の単離 約２０ｍｌのヘパリン処理した血液またはクエン酸塩を添加した血液を患者ま
たは自発的な提供者から各々、採取し、Ficoll Hypaque勾配（Pharmacia Biotec
h, Uppsala, Sweden）上に上層する（Hussら、Infusionsthera. Transfusionsme
d. 24 (1997) 404-409）。
【００２６】 ブレーキをかけることなく４００ｘｇで１５〜２０分遠心分離後、単核細胞の
輪を取りだし、ＰＢＳまたは等張セーライン中で数回洗浄する。 その後、５ｘ１０６〜１ｘ１０７細胞／ｍｌを細胞培養フラスコ（例えば、Ｎ
ＵＮＣ）中において、細胞培養培地（例えば、１２．５％胎仔ウシ血清および１
２．５％ウマ血清を含有するＭｃＣｏｙの標準培地）中１０ｎｇ／ｍｌ組換えイ
ンターロイキン−６（ｒｈｕ ＩＬ−６；RD Systems GmbH, Wiesbaden）の存在
下、３７℃および５％ＣＯ２のインキュベーター中でインキュベートする。
【００２７】 培養物を毎日モニターし、毎週カウントした。 １０〜１４日後、繊維芽細胞に類似の付着成長性細胞の均一な細胞集団が出現
し、それは、FACScan分析または免疫組織化学によって、各々、ほとんど完全な
ＣＤ３４−陰性であった。にもかかわらず、いくつかの分化中の細胞が、同時性
をもたないので、ＣＤ３４抗原を一時的に発現する。
【００２８】 実施例２：レトロウイルス感染／ＥＢＶ構築物での感染の例 上記の均一細胞集団は、ここで、ＰＧ−１３細胞系統（テナガザル白血病ウイ
ルス包膜中へのＰＧ−１３細胞のトランスフェクション後に所望のレトロウイル
スベクターをパッケージするパッケージング細胞系統。パッケージング細胞系統
のトランスフェクションは、２．５μｇのプラスミドＤＮＡを１５μｌのSuperf
ect（Qiagen）と混合し、１００μｌの無血清培地中、室温で２０分間インキュ
ベートすることによって行われる。その後、該混合物をＰＧ−１３細胞と一緒に
３７℃で５時間インキュベートし、次いで、新しい血清含有培地を添加する）の
レトロウイルス上清と一緒に、１０〜１４日間にわたり、その間、ウイルス含有
培地を少なくとも３〜４回交換してインキュベートする。この期間の後、標的細
胞において遺伝子発現を調べ（蛍光顕微鏡によってＧＦＰについて）、効率を決
定する。
【００２９】 ここで、陽性細胞を患者に再導入するか、または後の使用のために冷凍しても
よい。これらのレトロウイルス感染において、ＭＯＩ（感染多重度＝どれ程多く
のウイルス粒子が１つの細胞の感染に必要であるか）は約１０である。 細胞はまた、幹細胞の拡大を達成するために、一時的に不死化させてもよい。
【００３０】 実施例３：ルシフェラーゼを発現する組換えＡＡＶウイルスでの患者から単離
した標的細胞の感染 患者から単離した標的細胞をルシフェラーゼを発現する組換えＡＡＶウイルス
で非常に効果的に感染させることができた。患者の標的細胞は、ＬＵＣ−ｒＡＡ
Ｖと一緒に３７℃で３時間インキュベートし、その後、無血清培地中でさらに７
２時間維持した。その後、ルシフェラーゼ活性およびルミネセンスの両方を測定
した。該系において、ＭＯＩは約１０００である。
【００３１】 実施例４：患者例１ 図１に手順を図示する。 遺伝子欠損Ｘを有する患者Ａの腕の静脈から採血し、そこから末梢単核細胞を
勾配遠心分離によって単離する。付着細胞層が樹立されるまで、これらの単核細
胞をインターロイキン−６と一緒に細胞培養基中でインキュベートする。
【００３２】 初代培養において、非造血幹細胞の混入は、まだ非常に高い。２〜４週後、排
他的にＣＤ３４−陰性造血幹細胞が増殖し、ここに拡大しうる。 ここで、以前に所望の遺伝子構築物でトランスフェクトしたレトロウイルス構
築物またはＡＡＶウイルスでこれらを感染させる。２、３日後、遺伝子Ｘの存在
および遺伝子産物Ｘの発現（例えば、グルコセレブロシダーゼまたはインスリン
）が患者Ａの造血幹細胞中で検出されうる。
【００３３】 ここで、患者Ａは、自身の遺伝子修飾した初期造血幹細胞を注入によって受け
取り、一方、該細胞の一部は、後の使用のために液体窒素中に保管されている。
新しい遺伝情報を供給された患者の血液幹細胞は、患者Ａに自身にとって重要な
遺伝子産物Ｘを供給する。
【００３４】 糖尿病の場合、非常に低い割合の内因性幹細胞だけに新しい遺伝物質を供給す
れば、十分に血糖値の減少、よって、必要なインスリン要求の減少を達成できる
。糖尿病患者において、これは、長期間、重篤な併発症を遅らせるか、または予
防さえするであろう。
【００３５】 実施例５：患者例２ 患者Ｂは、膝関節における重篤な軟骨欠損に罹患している。末梢血幹細胞を該
患者から採取し（例えば、アフェレーシスによって）、一時的に（パサージャー
）不死化させる（例えば、ＥＢＮＡ１を有するｃｒｅ／ｌｏｘ系におけるＳＶ４
０ラージＴ抗原による）。次いで、これらの細胞を細胞培養において軟骨／骨前
駆細胞に分化し、欠損部位に移植する。
【００３６】
【図面の簡単な説明】
【図１】 患者Ａの遺伝子療法を図示する。
【図２】 末梢血幹細胞の使用を図示する。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｐ 31/04 Ａ６１Ｐ 43/00 １１１ 43/00 １１１ Ｃ１２Ｎ 15/00 Ａ Ｃ１２Ｎ 5/10 5/00 Ｂ (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，Ｅ Ａ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ， ＣＺ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，Ｇ Ｈ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ， ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，Ｍ Ｗ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ， ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，Ｚ Ｗ Ｆターム(参考） 4B024 AA01 BA80 DA03 EA02 GA18 HA17 4B065 AA93X AA93Y AB01 AC14 BA02 BB19 CA44 4C086 AA01 AA02 AA03 EA16 MA01 MA04 NA14 ZA53 ZB21 ZB35 ZC02 ZC35 4C087 AA01 AA02 BB65 BC83 MA01 NA14 ZA53 ZB21 ZB35 ZC02 ZC35

Claims (8)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 遺伝子修飾したＣＤ３４−陰性付着成長性幹細胞。
  2. 【請求項２】 レトロウイルス構築物またはＥＢＶ構築物またはアデノ随伴
    ウイルス構築物を含有することを特徴とする請求項１記載の遺伝子修飾したＣＤ
    ３４−陰性付着成長性幹細胞。
  3. 【請求項３】 レトロウイルス構築物またはＥＢＶ構築物またはアデノ随伴
    ウイルス構築物が治療遺伝子を有することを特徴とする請求項２記載の遺伝子修
    飾したＣＤ３４−陰性付着成長性幹細胞。
  4. 【請求項４】 治療遺伝子がインスリン、因子ＶＩＩＩ、アデニンデアミナ
    ーゼ、多剤耐性（ＭＤＲ）または不死化因子をコードすることを特徴とする請求
    項３記載の遺伝子修飾したＣＤ３４−陰性付着成長性幹細胞。
  5. 【請求項５】 請求項１〜４のいずれか１項記載の遺伝子修飾したＣＤ３４
    −陰性付着成長性幹細胞の薬剤としての使用。
  6. 【請求項６】 モノまたはオリゴ遺伝子性疾患の各々における個体の遺伝子
    療法のための薬剤の調製のための請求項１〜４のいずれか１項記載の遺伝子修飾
    したＣＤ３４−陰性付着成長性幹細胞の使用。
  7. 【請求項７】 免疫欠乏症候群、代謝性疾患、造血障害および悪性疾患にお
    ける個体の遺伝子療法のための薬剤の調製のための請求項１〜４のいずれか１項
    記載の遺伝子修飾したＣＤ３４−陰性付着成長性幹細胞の使用。
  8. 【請求項８】 間充織または造血幹細胞による個体の細胞療法のための薬剤
    の調製のための請求項１〜４のいずれか１項記載の遺伝子修飾したＣＤ３４−陰
    性付着成長性幹細胞の使用。
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