JP2003523177A - ヒトａｂｃ１遺伝子の核酸、並びに治療及び予防へのそれらの適用 - Google Patents

ヒトａｂｃ１遺伝子の核酸、並びに治療及び予防へのそれらの適用

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プラデ，カトリーヌ
ノダン，ローラン
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デユベルジエ，ニコラ
ジエイ，マイケル
サーフオス，ジヨージ・エイチ，ザ・サード
リマリー，アラン
ブレアー，エイチ・ブライアン
デイーン，マイケル
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アバンテイス・フアルマ・エス・アー
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Abstract

(57)【要約】 本発明は、動脈硬化のような疾患を誘導するコレステロール代謝機能障害と関連した病理、より具体的にはコレステロール逆輸送の混乱、より具体的にはタンジアー病のような家族性ＨＤＬ欠損症（ＦＨＤ）の原因遺伝子であるＡＢＣ１遺伝子の様々なエキソン及びイントロンに対応する核酸に関する。本発明は、新規な全長ＡＢＣ１タンパク質をコードするＡＢＣ１ ｃＤＮＡにも関する。本発明は、ＡＢＣ１遺伝子、又はＡＢＣ１遺伝子の対立遺伝子型により産生された対応するタンパク質の多型全般、特に突然変異の検出のための手段にも関する。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】 （発明の分野） 本発明は、動脈硬化のような疾患を誘導するコレステロール代謝機能障害と関
連した病理、より具体的にはコレステロール逆輸送の混乱、より具体的にはタン
ジアー病のような家族性ＨＤＬ欠損症（ＦＨＤ）の原因遺伝子であるＡＢＣ１遺
伝子の様々なエキソン及びイントロンに対応する核酸に関する。本発明は、新規
な全長ＡＢＣ１タンパク質をコードするＡＢＣ１ ｃＤＮＡにも関する。本発明
は、ＡＢＣ１遺伝子、又はＡＢＣ１遺伝子の対立遺伝子型により産生された対応
するタンパク質の多型全般、特に突然変異の検出のための手段にも関する。
【０００２】 （発明の背景） 脂質は、水に不溶性の有機生体分子であり、エネルギーの貯蔵、輸送、及び代
謝、並びに膜の構造及び流動性を含む、多様な生物学的機能の必須成分である。
ヒト及びその他の動物において、脂質は、２つの起源に由来し、即ち食事由来の
脂肪として摂取される脂質もあるし、ヒト又は動物により生合成される脂質もあ
る。哺乳動物においては、体重の少なくとも１０％が脂質であり、その大半がト
リアシルグリセロールの形態で存在する。
【０００３】 トリグリセリド及びトリアシルグリセリドとしても知られるトリアシルグリセ
ロールは、３個の脂肪酸がグリセロールにエステル結合したものである。食事由
来のトリアシルグリセロールは、エネルギー源として脂肪組織に貯蔵されるか、
又はトリアシルグリセロールリパーゼにより消化管において加水分解される。ト
リアシルグリセロールリパーゼのうち最も重要なものは膵リパーゼである。トリ
アシルグリセロールは、リポタンパク質の形態で組織間輸送される。
【０００４】 リポタンパク質とは、血漿中に見出されるミセル様の会合体であり、異なる型
の脂質及びタンパク質（アポリポタンパク質と呼ばれる）を様々な割合で含有し
ている。脂質輸送が主要な機能である血漿リポタンパク質には、５つの主要なク
ラスがある。これらのクラスは、密度の低い順に、キロミクロン、超低密度リポ
タンパク質（ＶＬＤＬ）、中間密度リポタンパク質（ＩＤＬ）、低密度リポタン
パク質（ＬＤＬ）、及び高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）である。多くの型の脂
質が、各リポタンパク質クラスと関連していることが見出されているが、各クラ
スは主として１つの型の脂質を輸送する。トリアシルグリセロールはキロミクロ
ン、ＶＬＤＬ、及びＩＤＬで輸送され、リン脂質及びコレステロールエステルは
、それぞれＨＤＬ及びＬＤＬで輸送される。
【０００５】 リン脂質は、リン酸とカップリングした極性基も含有する、グリセロールリン
酸の二脂肪酸エステルである。リン脂質は、細胞膜の重要な構造成分である。リ
ン脂質は、ホスホリパーゼと呼ばれる酵素により加水分解される。リン脂質の一
例、ホスファチジルコリンは、大部分の真核細胞の膜の主成分である。
【０００６】 コレステロールは、ステロイドホルモン及び胆汁酸の代謝前駆体であり、細胞
膜の必須要素でもある。ヒト及びその他の動物において、コレステロールは、食
事からも摂取されるし、肝臓及びその他の組織によっても合成される。コレステ
ロールは、ＬＤＬ及びその他のリポタンパク質により、コレステリルエステルの
形態で組織間輸送される。
【０００７】 膜は、あらゆる生細胞を包囲しており、細胞内コンパートメントと細胞外コン
パートメントとの間の関門として機能している。膜は、真核細胞の核を囲い、小
胞体を構成し、そして軸索を包囲する髄鞘のような専門的な機能も果たしている
。典型的な膜は、約４０％の脂質と６０％のタンパク質とを含有するが、相当の
ばらつきが存在する。主要な脂質成分は、リン脂質、特にホスファチジルコリン
及びホスファチジルエタノールアミン、並びにコレステロールである。流動性の
ような膜の生理化学的特性は、リン脂質の脂肪酸プロファイル又はコレステロー
ル含量のいずれかの修飾により変化しうる。膜脂質の組成及び構成をモデュレー
トすることにより、受容体活性、エンドサイトーシス、及びコレステロール流動
のような膜依存性の細胞機能もモデュレートされる。
【０００８】 高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）は、血漿中を循環している４つの主要なリポ
タンパク質クラスのうちの１つである。これらのリポタンパク質は、脂質輸送、
胆汁酸の形成、ステロイド生成、細胞増殖のような様々な代謝経路に関与してお
り、さらに血漿プロテイナーゼ系を妨害する。
【０００９】 ＨＤＬは、完全な遊離型コレステロールのアクセプターであり、コレステロー
ルエステル輸送タンパク質（ＣＥＴＰ）、リポタンパク質リパーゼ（ＬＰＬ）、
肝リパーゼ（ＨＬ）、及びレシチン：コレステロールアシルトランスフェラーゼ
（ＬＣＡＴ）と共に、コレステロール逆輸送において、即ち末梢細胞中の過剰コ
レステロールを、胆汁酸の形態で体内から排除するため、肝臓へ輸送する際に、
主要な役割を果たしている。ＨＤＬは、末梢組織から肝臓へのコレステロール輸
送において中心的な役割を果たしていることが証明されている。
【００１０】 タンジアー及び／又はＦＨＤ病、ＨＤＬ欠損症、及びＬＣＡＴ欠損症を含む、
ＨＤＬ欠損症と関連した様々な疾患が記載されている。さらに、マラリア及び糖
尿病に罹患した患者において、ＨＤＬ−コレステロール欠損症が観察されている
（Ｋｉｔｔｌら、１９９２；Ｎｉｌｓｓｏｎら、１９９０；Ｄｊｏｕｍｅｓｓｉ
、１９８９；Ｍｏｈａｎｔｙら、１９９２；Ｍａｕｒｏｉｓら、１９８５；Ｇｒ
ｅｌｌｉｅｒら、１９９７；Ａｇｂｅｄａｎａら、１９９０；Ｅｒｅｌら、１９
９８；Ｃｕｉｓｉｎｉｅｒら、１９９０；Ｃｈａｎｄｅｒら、１９９８；Ｅｆｔ
ｈｉｍｉｏｕら、１９９２；Ｂａｐｔｉｓｔａら、１９９６；Ｄａｖｉｓら、１
９９３；Ｄａｖｉｓら、１９９５；Ｐｉｒｉｃｈら、１９９３；Ｔｏｍｌｉｎｓ
ｏｎ及びＲａｐｅｒ、１９９６；Ｈａｇｅｒ及びＨａｊｄｕｋ、１９９７、Ｋｗ
ｉｔｅｒｏｖｉｃｈ、１９９５、Ｓｙｖａｎｎｅら、１９９５ａ、Ｓｙｖａｎｎ
ｅら、１９９５ｂ、及びＦｒｅｎｃｈら、１９９３）。タンジアー及び／又はＦ
ＨＤ病に関与する欠損は、ＨＤＬの分解を引き起こし、リポタンパク質代謝の混
乱をもたらす、細胞コレステロール転移に関する細胞欠陥と関連している。にも
関わらず、タンジアー及び／又はＦＨＤ病に関して、欠陥の正確な性質は精密に
は解明されていない。
【００１１】 タンジアー病は、ホモ接合状態においては、血漿中のＨＤＬ−コレステロール
（ＨＤＬ−Ｃ）の欠損、肝脾腫、末梢神経障害、及び高頻度の早発性冠状動脈疾
患（ＣＡＤ）により特徴付けられる常染色体相互優性状態である。ヘテロ接合体
においては、ＨＤＬ−Ｃレベルが正常個体の約半分である。マクロファージから
のコレステロール流出の障害のため、全身に泡沫細胞が存在するようになるが、
このことが、タンジアー病家系においてＣＡＤのリスクが高い場合がある理由と
なっているのかもしれない。
【００１２】 タンジアー病患者においては、ＨＤＬ粒子が、末梢細胞からのコレステロール
を取り込まず、正確に代謝されず、体内から迅速に排除される。従って、これら
の患者における血漿ＨＤＬ濃度は、極めて低下しており、ＨＤＬはもはやコレス
テロールの肝臓への帰還を保証しない。コレステロールは、これらの末梢細胞に
蓄積し、橙色扁桃腺の形成のような特徴的な臨床的所見を引き起こす。さらに、
トリグリセリドの過剰産生、並びにリン脂質の合成及び細胞内代謝の増加のよう
なその他のリポタンパク質混乱も、タンジアー病患者には観察される。
【００１３】 前記のような症状を有するタンジアー病は、ＨＤＬ代謝と関連した家族性状態
のうち、冠状動脈疾患に罹患した患者において最も一般的に検出されるものとし
て分類される。多数の研究が、ＨＤＬコレステロールのレベルの低下が、個体の
、心臓血管状態を発症するか又は既に有しているリスクの優れた指標であること
を示している。これに関して、ＨＤＬ欠損症と関連した症候群は、アテローム発
生におけるＨＤＬの役割をよりよく理解することを可能にするため、過去十年間
に、次第に注目されるようになってきた。
【００１４】 動脈硬化は、組織学的には、血管壁、特に大きい動脈（大動脈、冠状動脈、頸
動脈）における脂質及びその他の血液派生物の沈着（脂質又は繊維脂質の斑）に
より定義される。これらの斑は、動脈硬化の過程の進行度に応じて多少石灰化し
ており、損傷と結び付いていることもあり、コレステロールエステルから本質的
になる脂肪沈着物の血管内蓄積と関連している。これらの斑には、血管壁の肥厚
、平滑筋の肥大、泡沫細胞（動員されたマクロファージによる調節されていない
コレステロール取り込みに起因する脂肪充満細胞）の出現、及び繊維組織の蓄積
が伴う。アテローム斑は、壁から顕著に突出し、最も重度の患者において起こる
であろうアテローム、血栓、又は塞栓による血管閉塞の原因となる狭窄形質を付
与する。これらの損傷は、梗塞、突然死、心不全、及び発作のような重篤な心臓
血管病理をもたらす場合がある。
【００１５】 リポタンパク質代謝において役割を果たしている遺伝子の突然変異が、同定さ
れている。特に、アポリポタンパク質ａｐｏＡ−Ｉ遺伝子のいくつかの突然変異
が、特徴決定されている。これらの突然変異は、稀であり、ａｐｏＡ−Ｉの産生
を消失させうる。ＬＰＬをコードする遺伝子又はその活性化因子ａｐｏＣ−ＩＩ
の突然変異は、重篤な高トリグリセリド血症と関連しており、ＨＤＬ−Ｃレベル
を大きく減少させる。酵素ＬＣＡＴをコードする遺伝子の突然変異も、重篤なＨ
ＤＬ欠損症と関連している。
【００１６】 さらに、コレステロール逆輸送の機能障害は、貯蔵されたコレステロールの、
細胞内小胞から膜表面（ここで、ＨＤＬに受容される）への輸送における工程の
１つ以上に影響を与える生理学的欠損により誘導されうる。
【００１７】 従って、コレステロール及び／又はリポタンパク質の代謝における何らかの工
程に関与する遺伝子、特に末梢細胞から肝臓へのコレステロール逆輸送における
機能障害と関連した遺伝子を同定することが、当分野においてはますます必要に
なってきている。
【００１８】 最近、ゲノム全体に分布し、相互の間隔が平均１０．３ｃＭである３４３個の
ミクロサテライトマーカーの異なる対立遺伝子型の分離に関する研究が実施され
た（Ｒｕｓｔら、１９９８）。この連鎖研究は、タンジアー病罹患率が高い、１
１世代にわたりよく特徴決定されてきた、５つの血族系を含む家系に関して実施
された。この研究により、タンジアー病と統計的に関連している、ヒト第９染色
体の９ｑ３１遺伝子座に位置する領域が同定された。
【００１９】 しかしながら、Ｒｕｓｔら（１９９８）は、障害がタンジアー病と関連してい
る可能性が高いゲノムの広い領域を決定したにすぎず、しかも、関連する９ｑ３
１−３４領域は、ＥＳＴは含有しているが、既知の遺伝子は含有していない。そ
の後、ヒトの９ｑ３１遺伝子座に位置する約１ｃＭの領域が、家族性ＨＤＬ欠損
症と一般的に関連していることが示された（Ｒｕｓｔら、１９９９及びＢｒｏｏ
ｋｓ−Ｗｉｌｓｏｎら、１９９９）。より精密には、９ｑ３１遺伝子座の１ｃＭ
の領域に精密に位置する、ＡＢＣ輸送体ファミリーのタンパク質をコードする遺
伝子が、コレステロール逆輸送の欠損と関連した病理に関与していた。より具体
的には、コレステロール逆輸送の障害を有する患者、最も具体的にはタンジアー
病及びＦＨＤ病に罹患した患者における、ＡＢＣ−１輸送体をコードする遺伝子
の突然変異が記載された（Ｒｕｓｔら、１９９９、Ｂｒｏｏｋｓ−Ｗｉｌｓｏｎ
ら、１９９９、Ｂｏｄｚｉｏｃｈら、１９９９、Ｍａｒｃｉｌら、１９９９ｂ、
及びＬａｗｎら、１９９９）。
【００２０】 ＡＢＣ（ＡＴＰ結合カセット）輸送タンパク質は、細菌からヒトまで、進化に
おいて極めてよく保存されてきたタンパク質ファミリーを構成している。ＡＢＣ
輸送タンパク質は、様々な基質、例えばイオン、アミノ酸、ペプチド、糖、ビタ
ミン、又はステロイドホルモンの膜輸送に関与している。
【００２１】 いくつかのＡＢＣ輸送体の完全アミノ酸配列の特徴決定により、これらのタン
パク質が、共通の一般構造、特にＷａｌｋｅｒ Ａ及びＢ型単位を含む２つのヌ
クレオチド結合フォールド（ＮＢＦ）を有し、そしてそれぞれ６個のヘリックス
からなる２つの膜貫通ドメインを有することを決定することができた。様々な輸
送分子のためのＡＢＣ輸送体の特異性は、膜貫通ドメインの構造により決定され
ると考えられており、輸送活性に必要なエネルギーは、ＮＢＦフォールドのレベ
ルでのＡＴＰ分解により供給される。
【００２２】 ヒトにおいて同定されたいくつかのＡＢＣ輸送タンパク質は、様々な疾患と関
連している。例えば、嚢胞性繊維症は、ＣＦＴＲ（嚢胞性繊維症膜コンダクタン
ス制御因子）遺伝子の突然変異により引き起こされる。さらに、腫瘍細胞におけ
るいくつかの多剤耐性表現型が、やはりＡＢＣ輸送体構造を有するＭＤＲ（多剤
耐性）タンパク質をコードする遺伝子の突然変異と関連していることが示されて
いる。ＡＢＣ−３タンパク質のような、ニューロン及び腫瘍の状態と関連してい
ることが示されているか（米国特許第５，８５８，７１９号）、又は金属のホメ
オスタシスの障害により引き起こされる疾患に関与しているかもしれないＡＢＣ
輸送体も存在する。同様に、ＰＦＩＣ２と名付けられたもう１つの輸送ＡＢＣは
、進行性家族性肝臓内胆汁うっ滞型に関与していると考えられており、ヒトにお
ける胆汁酸のエクスポートを担っている可能性がある。
【００２３】 １９９４年、新規マウスＡＢＣ輸送体をコードするｃＤＮＡが同定され、ＡＢ
Ｃ１と名付けられた（Ｌｕｃｉａｎｉら、１９９４）。このタンパク質は、高度
に疎水性のセグメント及び２つのＮＢＦ単位と連結した２つの膜貫通ドメインを
含む対称的な構造を有するというＡＢＣ輸送体の特徴を有している。
【００２４】 ヒトにおいて、ヒトＡＢＣ１輸送体の６６０３塩基対（ｂｐ）のオープンリー
ディングフレーム（ＯＲＦ）を含む部分ｃＤＮＡが同定された（Ｌｏｎｇｍａｎ
ｎら、１９９９）。この部分ｃＤＮＡに基づくと、ヒトＡＢＣ１タンパク質は、
２２０１アミノ酸（ａａ）を含み、タンパク質のサイズはおよそ２２０ｋＤａに
なると予測される（同書）。この研究は、このヒトＡＢＣ１タンパク質アイソフ
ォームをコードする遺伝子が、様々な組織で発現しており、より具体的には胎盤
、肝臓、肺、副腎、及びいくつかの胎児組織において高レベルに発現しているこ
とも示した。これらの著者らは、ヒトＡＢＣ１タンパク質をコードする遺伝子の
発現が、インビトロの単球からマクロファージへの分化の際に誘導されることを
証明した。さらに、この研究は、ヒトマクロファージをアセチル化された低密度
リポタンパク質（ＡｃＬＤＬ）の存在下でインキュベートすると、ＡＢＣ１タン
パク質をコードする遺伝子の発現が増加することを報告した。しかしながら、タ
ンジアー病及びＦＨＤ病に罹患した患者が、変異型ＡＢＣ１遺伝子を有すること
は示されているが（Ｒｕｓｔら、１９９９、Ｂｒｏｏｋｓ−Ｗｉｌｓｏｎら、１
９９９、Ｂｏｄｚｉｏｃｈら、１９９９、Ｍａｒｃｉｌら、１９９９ｂ、及びＬ
ａｗｎら、１９９９）、脂質輸送系におけるヒトＡＢＣ１タンパク質の正確な役
割は不明である。単純には、ＡＢＣ１タンパク質は、膜脂質輸送のためのトラン
スロカーゼ活性を有すると推定される。
【００２５】 最近、ＡＢＣ１ゲノミックＤＮＡのエキソン及びイントロンの一部、並びにヒ
トＡＢＣ１ｃＤＮＡの３’非翻訳領域（ＵＴＲ）の付加的な部分が、単離され、
同定された（Ｒｕｓｔら、１９９９）。
【００２６】 タンジアー病及びＦＨＤ病に罹患した患者は、変異型ＡＢＣ１遺伝子を保有し
ていることが示されているため（Ｒｕｓｔら、１９９９、Ｂｒｏｏｋｓ−Ｗｉｌ
ｓｏｎら、１９９９、Ｂｏｄｚｉｏｃｈら、１９９９、Ｍａｒｃｉｌら、１９９
９ｂ、及びＬａｗｎら、１９９９）、膜脂質輸送のためのヒトＡＢＣ１タンパク
質のトランスロカーゼ活性が調査された。
【００２７】 本出願人は、５’及び３’ＵＴＲ（非翻訳領域）の付加的な配列を含有し、Ｌ
ａｎｇｍａｎｎら（１９９９）のものよりも長いアミノ酸配列を示すＡＢＣ１タ
ンパク質をコードするヒトＡＢＣ１全長ｃＤＮＡを発見し単離した。全長ヒトＡ
ＢＣ１ ｃＤＮＡを使用して、コレステロール及びリン脂質の流出のメカニズム
を調査したところ、全長ＡＢＣ１タンパク質の特異的活性及び細胞脂質流出を促
進する様々な脂質アクセプターとの相互作用が証明された。
【００２８】 （発明の概要） 本発明は、動脈硬化のような疾患を誘導するコレステロール代謝機能障害と関
連した病理、より具体的にはコレステロール逆輸送の混乱、並びにタンジアー及
び／又はＦＨＤ病のような家族性ＨＤＬ欠損症の原因遺伝子であるヒトＡＢＣ１
遺伝子の様々なエキソン及びイントロンに相当する核酸に関する。
【００２９】 従って、本発明の第１の主題は、配列番号１、４〜６５、６８、７２〜８８、
１０３、１０９〜１１８、及び１３７、又は相補ポリヌクレオチド配列のうちの
いずれか１つのポリヌクレオチド配列を含む核酸である。
【００３０】 本発明は、ａ）配列番号１、４〜８、１１〜１６、１８〜２６、２８〜３５、
３７〜５２、５４〜６５、６８、及び１３７、もしくは相補ポリヌクレオチド配
列のうちのいずれか１つ；ｂ）配列番号９のヌクレオチド３１５４〜３２００も
しくは相補ポリヌクレオチド配列；ｃ）配列番号１０のヌクレオチド１〜２４２
もしくは相補ポリヌクレオチド配列；ｄ）配列番号１７のヌクレオチド１〜１８
５１もしくは相補ポリヌクレオチド配列；ｅ）配列番号２７のヌクレオチド１５
２〜１９８もしくは相補ポリヌクレオチド配列；ｆ）配列番号３６のヌクレオチ
ド１〜１６５７もしくは相補ポリヌクレオチド配列；又はｇ）配列番号５３のヌ
クレオチド１〜２４２もしくは相補ポリヌクレオチド配列のポリヌクレオチド配
列の少なくとも８個の連続ヌクレオチドを含む核酸にも関する。
【００３１】 本発明は、ａ）配列番号１、４〜８、１１〜１６、１８〜２６、２８〜３５、
３７〜５２、５４〜６５、６８、及び１３７、もしくは相補ポリヌクレオチド配
列のうちのいずれか１つ；ｂ）配列番号９のヌクレオチド３１５４〜３２００も
しくは相補ポリヌクレオチド配列；ｃ）配列番号１０のヌクレオチド１〜２４２
もしくは相補ポリヌクレオチド配列；ｄ）配列番号１７のヌクレオチド１〜１８
５１もしくは相補ポリヌクレオチド配列；ｅ）配列番号２７のヌクレオチド１５
２〜１９８もしくは相補ポリヌクレオチド配列；ｆ）配列番号３６のヌクレオチ
ド１〜１６５７もしくは相補ポリヌクレオチド配列；又はｇ）配列番号５３のヌ
クレオチド１〜２４２もしくは相補ポリヌクレオチド配列のポリヌクレオチド配
列を含む核酸との少なくとも８０％のヌクレオチド同一性を有する核酸にも関す
る。
【００３２】 本発明は、ａ）配列番号１、４〜８、１１〜１６、１８〜２６、２８〜３５、
３７〜５２、５４〜６５、６８、及び１３７、もしくは相補ポリヌクレオチド配
列のうちのいずれか１つ；ｂ）配列番号９のヌクレオチド３１５４〜３２００も
しくは相補ポリヌクレオチド配列；ｃ）配列番号１０のヌクレオチド１〜２４２
もしくは相補ポリヌクレオチド配列；ｄ）配列番号１７のヌクレオチド１〜１８
５１もしくは相補ポリヌクレオチド配列；ｅ）配列番号２７のヌクレオチド１５
２〜１９８もしくは相補ポリヌクレオチド配列；ｆ）配列番号３６のヌクレオチ
ド１〜１６５７もしくは相補ポリヌクレオチド配列；又はｇ）配列番号５３のヌ
クレオチド１〜２４２もしくは相補ポリヌクレオチド配列のポリヌクレオチド配
列を含む核酸との少なくとも８５％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％
、又はさらに好ましくは９８％のヌクレオチド同一性を有する核酸にも関する。
【００３３】 本発明は、ａ）配列番号１、４〜８、１１〜１６、１８〜２６、２８〜３５、
３７〜５２、５４〜６５、６８、及び１３７、もしくは相補ポリヌクレオチド配
列のうちのいずれか１つ；ｂ）配列番号９のヌクレオチド３１５４〜３２００も
しくは相補ポリヌクレオチド配列；ｃ）配列番号１０のヌクレオチド１〜２４２
もしくは相補ポリヌクレオチド配列；ｄ）配列番号１７のヌクレオチド１〜１８
５１もしくは相補ポリヌクレオチド配列；ｅ）配列番号２７のヌクレオチド１５
２〜１９８もしくは相補ポリヌクレオチド配列；ｆ）配列番号３６のヌクレオチ
ド１〜１６５７もしくは相補ポリヌクレオチド配列；又はｇ）配列番号５３のヌ
クレオチド１〜２４２もしくは相補ポリヌクレオチド配列のポリヌクレオチドと
、高ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズする核酸にも関する。
【００３４】 本発明は、全長ヒトＡＢＣ１タンパク質をコードする核酸、特にｃＤＮＡ分子
にも関する。従って、本発明は、配列番号６９もしくは配列番号７０又は相補ポ
リヌクレオチド配列のいずれかのポリヌクレオチド配列を含む核酸に関する。
【００３５】 本発明は、配列番号６９もしくは配列番号７０又は相補ポリヌクレオチド配列
に示されるようなポリヌクレオチド配列を含む核酸にも関する。
【００３６】 本発明は、配列番号６９のヌクレオチド１〜２４４もしくは配列番号７０のヌ
クレオチド１〜３５７又は相補ポリヌクレオチド配列を含む核酸にも関する。
【００３７】 本発明は、配列番号６９のヌクレオチド１〜２４４もしくは配列番号７０のヌ
クレオチド１〜３５７又は相補ポリヌクレオチド配列の少なくとも８個の連続ヌ
クレオチドを含む核酸にも関する。
【００３８】 配列番号６９のヌクレオチド１〜２４４もしくは配列番号７０のヌクレオチド
１〜３５７又は相補ポリヌクレオチド配列を含む核酸との少なくとも８０％のヌ
クレオチド同一性を有する核酸も、本発明の主題である。
【００３９】 本発明は、配列番号６９のヌクレオチド１〜２４４もしくは配列番号７０のヌ
クレオチド１〜３５７又は相補ポリヌクレオチド配列を含む核酸との少なくとも
８５％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％、さらに好ましくは９８％の
ヌクレオチド同一性を有する核酸にも関する。
【００４０】 本発明のもう１つの主題は、配列番号６９のヌクレオチド１〜２４４もしくは
配列番号７０のヌクレオチド１〜３５７又は相補ポリヌクレオチド配列を含む核
酸と、高ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズする核酸である。
【００４１】 本発明によると、配列番号６９又は配列番号７０いずれかのポリヌクレオチド
配列を含む核酸は、配列番号７１のアミノ酸配列を含む２２６１アミノ酸の全長
ＡＢＣ１ポリペプチドをコードする。
【００４２】 従って、本発明は、配列番号７１のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコード
する核酸にも関する。
【００４３】 特定の実施形態において、本発明は、配列番号７１のアミノ酸１〜６０を含む
ポリペプチドをコードする核酸にも関する。
【００４４】 従って、本発明は、配列番号７１のアミノ酸配列を含むポリペプチドにも関す
る。
【００４５】 本発明は、配列番号７１に示されるようなアミノ酸配列を含むポリペプチドに
も関する。
【００４６】 本発明は、配列番号７１のアミノ酸１〜６０を含むポリペプチドにも関する。
【００４７】 本発明は、配列番号７１のアミノ酸１〜６０を含むポリペプチドとの少なくと
も８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドにも関する
。
【００４８】 本発明は、配列番号７１のアミノ酸１〜６０を含むポリペプチドとの少なくと
も８５％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％、さらに好ましくは９８％
のアミノ酸同一性を有するポリペプチドにも関する。
【００４９】 好ましくは、本発明に係るポリペプチドは、本発明に係るポリペプチド、特に
配列番号７１のアミノ酸１〜６０を含むアミノ酸配列を含むポリペプチドの１５
個、１８個、又は２０個〜２５個、３５個、４０個、５０個、７０個、８０個、
１００個、又は２００個の長さの連続アミノ酸を有するであろう。
【００５０】 又は、本発明に係るポリペプチドは、本発明に係るポリペプチド、より具体的
には配列番号７１のアミノ酸１〜６０を含むアミノ酸配列を含むポリペプチドの
１５個、１８個、２０個、２５個、３５個、４０個、５０個、１００個、又は２
００個の長さの連続アミノ酸を有する断片を含むであろう。
【００５１】 本発明は、ＡＢＣ１遺伝子、又はＡＢＣ１遺伝子の対立遺伝子型により産生さ
れる対応するタンパク質の多型全般、特に突然変異を検出するための手段にも関
する。最近、タンジアー及びＦＨＤ病に罹患した患者が、変異型ＡＢＣ１遺伝子
を有することが示された（Ｒｕｓｔら、１９９９、Ｂｒｏｏｋｓ−Ｗｉｌｓｏｎ
ら、１９９９、Ｂｏｄｚｉｏｃｈら、１９９９、及びＭａｒｃｉｌら、１９９９
ｂ）。本発明により、様々な患者、特に重篤な型の心臓血管障害関連疾患に罹患
した患者のゲノムにおいて、ＡＢＣ１遺伝子の異なるエキソンに分布しているい
くつかの付加的な突然変異が同定された。さらに、最も軽度の型の疾患に罹患し
た患者のＡＢＣ１遺伝子のイントロンに、様々な多型が見出され、これらの患者
が、（１個以上の）「野生型」対立遺伝子とは区別される遺伝子の特定の対立遺
伝子を保有していることが示された。これらの多型により部分的に特徴付けられ
るそのような対立遺伝子は、第１エキソンの５’側、又は遺伝子の最終エキソン
の３’側に位置する非コーディング領域、特に制御領域、例えばプロモーター配
列又はエンハンサー配列に、欠陥を誘導する型のヌクレオチドの置換、付加、又
は欠失を含有している可能性が高い。これらの欠陥は、ＡＢＣ１ポリペプチドの
合成を増加又は減少させうる。
【００５２】 従って、本発明は、変異型ＡＢＣ１遺伝子、より具体的にはコレステロール逆
輸送の欠損に罹患した患者、最も具体的にはタンジアー病に罹患した患者の変異
型ＡＢＣ１遺伝子によりコードされるポリペプチドにも関する。
【００５３】 従って、本発明は、配列番号８９〜１０２のいずれか１つのアミノ酸配列を含
むポリペプチドに関する。
【００５４】 本発明は、配列番号８９〜１０２のうちのいずれか１つに示されるようなアミ
ノ酸配列を含むポリペプチドにも関する。
【００５５】 従って、本発明のもう１つの主題は、配列番号７２〜８８又は相補ポリヌクレ
オチド配列のうちのいずれか１つのポリヌクレオチド配列を含む、変異型ＡＢＣ
１ポリペプチドをコードする核酸である。
【００５６】 本発明は、配列番号７２〜８８又は相補ポリヌクレオチド配列のうちのいずれ
か１つに示されるようなポリヌクレオチド配列を含む、変異型ＡＢＣ１ポリペプ
チドをコードする核酸にも関する。
【００５７】 本発明は、配列番号８９〜１０２のうちのいずれか１つを含むポリペプチドを
コードする核酸にも関する。
【００５８】 もう１つの態様によると、本発明は、少なくとも１個の二対立遺伝子（ｂｉａ
ｌｌｅｒｉｃ）多型を含むＡＢＣ１遺伝子のヌクレオチド配列にも関する。従っ
て、本発明のもう１つの主題は、配列番号１０３及び１０９〜１１８又は相補ポ
リヌクレオチド配列のうちのいずれか１つのポリヌクレオチド配列を含む核酸で
ある。
【００５９】 本発明は、配列番号１０３及び１０９〜１１８又は相補ポリヌクレオチド配列
のうちのいずれか１つを含むポリヌクレオチド配列を含む核酸にも関する。
【００６０】 本発明は、配列番号１０３及び１０９〜１１８又は相補ポリヌクレオチド配列
のうちのいずれか１つに示されるようなポリヌクレオチド配列を含む核酸にも関
する。
【００６１】 ＡＢＣ１核酸（ゲノミックＤＮＡ、メッセンジャーＲＮＡ、ｃＤＮＡ）の領域
に位置する核酸配列、特に前記の突然変異又は多型のうちのいずれか１つを含む
核酸配列とハイブリダイズするヌクレオチドプローブ及びプライマーも、本発明
の一部を形成する。
【００６２】 本発明によると、ａ）配列番号１、４〜８、１１〜１６、１８〜２６、２８〜
３５、３７〜５２、５４〜６５、６８、及び１３７、もしくは相補ポリヌクレオ
チド配列のうちのいずれか１つ；ｂ）配列番号９のヌクレオチド３１５４〜３２
００もしくは相補ポリヌクレオチド配列；ｃ）配列番号１０のヌクレオチド１〜
２４２もしくは相補ポリヌクレオチド配列；ｄ）配列番号１７のヌクレオチド１
〜１８５１もしくは相補ポリヌクレオチド配列；ｅ）配列番号２７のヌクレオチ
ド１５２〜１９８もしくは相補ポリヌクレオチド配列；ｆ）配列番号３６のヌク
レオチド１〜１６５７もしくは相補ポリヌクレオチド配列；ｇ）配列番号５３の
ヌクレオチド１〜２４２もしくは相補ポリヌクレオチド配列、又はｈ）配列番号
６９のヌクレオチド１〜２４４もしくは配列番号７０のヌクレオチド１〜３５７
もしくは相補ポリヌクレオチド配列のポリヌクレオチド配列を含む核酸に由来す
る核酸断片は、試料中のＡＢＣ１遺伝子又はその断片もしくは異型（突然変異又
は多型を含有）のヌクレオチド配列、少なくとも１コピーの存在の検出に有用で
ある。
【００６３】 本発明に係るヌクレオチドプローブ又はプライマーは、ａ）配列番号１、４〜
８、１１〜１６、１８〜２６、２８〜３５、３７〜５２、５４〜６５、６８、及
び１３７、もしくは相補ポリヌクレオチド配列のうちのいずれか１つ；ｂ）配列
番号９のヌクレオチド３１５４〜３２００もしくは相補ポリヌクレオチド配列；
ｃ）配列番号１０のヌクレオチド１〜２４２もしくは相補ポリヌクレオチド配列
；ｄ）配列番号１７のヌクレオチド１〜１８５１もしくは相補ポリヌクレオチド
配列；ｅ）配列番号２７のヌクレオチド１５２〜１９８もしくは相補ポリヌクレ
オチド配列；ｆ）配列番号３６のヌクレオチド１〜１６５７もしくは相補ポリヌ
クレオチド配列；ｇ）配列番号５３のヌクレオチド１〜２４２もしくは相補ポリ
ヌクレオチド配列、又はｈ）配列番号６９のヌクレオチド１〜２４４もしくは配
列番号７０のヌクレオチド１〜３５７もしくは相補ポリヌクレオチド配列を含む
核酸の少なくとも８個の連続ヌクレオチドを含む。
【００６４】 好ましくは、本発明に係るヌクレオチドプローブ又はプライマーは、本発明に
係る核酸、特にａ）配列番号１、４〜８、１１〜１６、１８〜２６、２８〜３５
、３７〜５２、５４〜６５、６８、及び１３７、もしくは相補ポリヌクレオチド
配列のうちのいずれか１つ；ｂ）配列番号９のヌクレオチド３１５４〜３２００
もしくは相補ポリヌクレオチド配列；ｃ）配列番号１０のヌクレオチド１〜２４
２もしくは相補ポリヌクレオチド配列；ｄ）配列番号１７のヌクレオチド１〜１
８５１もしくは相補ポリヌクレオチド配列；ｅ）配列番号２７のヌクレオチド１
５２〜１９８もしくは相補ポリヌクレオチド配列；ｆ）配列番号３６のヌクレオ
チド１〜１６５７もしくは相補ポリヌクレオチド配列；ｇ）配列番号５３のヌク
レオチド１〜２４２もしくは相補ポリヌクレオチド配列、又はｈ）配列番号６９
のヌクレオチド１〜２４４もしくは配列番号７０のヌクレオチド１〜３５７もし
くは相補ポリヌクレオチド配列を含む核酸の１０個、１２個、１５個、１８個、
又は２０個〜２５個、３５個、４０個、５０個、７０個、８０個、１００個、２
００個、５００個、１０００個、１５００個の長さの連続ヌクレオチドを有する
であろう。
【００６５】 又は、本発明に係るヌクレオチドプローブ又はプライマーは、本発明に係る核
酸、より具体的にはａ）配列番号１、４〜８、１１〜１６、１８〜２６、２８〜
３５、３７〜５２、５４〜６５、６８、及び１３７、もしくは相補ポリヌクレオ
チド配列のうちのいずれか１つ；ｂ）配列番号９のヌクレオチド３１５４〜３２
００もしくは相補ポリヌクレオチド配列；ｃ）配列番号１０のヌクレオチド１〜
２４２もしくは相補ポリヌクレオチド配列；ｄ）配列番号１７のヌクレオチド１
〜１８５１もしくは相補ポリヌクレオチド配列；ｅ）配列番号２７のヌクレオチ
ド１５２〜１９８もしくは相補ポリヌクレオチド配列；ｆ）配列番号３６のヌク
レオチド１〜１６５７もしくは相補ポリヌクレオチド配列；ｇ）配列番号５３の
ヌクレオチド１〜２４２もしくは相補ポリヌクレオチド配列、又はｈ）配列番号
６９のヌクレオチド１〜２４４もしくは配列番号７０のヌクレオチド１〜３５７
もしくは相補ポリヌクレオチド配列を含む核酸の１２個、１５個、１８個、２０
個、２５個、３５個、４０個、５０個、１００個、２００個、５００個、１００
０個、１５００個の長さの連続ヌクレオチドを有する断片からなり、かつ／又は
含むであろう。
【００６６】 従って、本発明に係るヌクレオチドプローブ又はプライマーの定義は、ａ）配
列番号１、４〜８、１１〜１６、１８〜２６、２８〜３５、３７〜５２、５４〜
６５、６８、及び１３７、もしくは相補ポリヌクレオチド配列のうちのいずれか
１つ；ｂ）配列番号９のヌクレオチド３１５４〜３２００もしくは相補ポリヌク
レオチド配列；ｃ）配列番号１０のヌクレオチド１〜２４２もしくは相補ポリヌ
クレオチド配列；ｄ）配列番号１７のヌクレオチド１〜１８５１もしくは相補ポ
リヌクレオチド配列；ｅ）配列番号２７のヌクレオチド１５２〜１９８もしくは
相補ポリヌクレオチド配列；ｆ）配列番号３６のヌクレオチド１〜１６５７もし
くは相補ポリヌクレオチド配列；ｇ）配列番号５３のヌクレオチド１〜２４２も
しくは相補ポリヌクレオチド配列、又はｈ）配列番号６９のヌクレオチド１〜２
４４もしくは配列番号７０のヌクレオチド１〜３５７もしくは相補ポリヌクレオ
チド配列を含む核酸と、前記定義の高ストリンジェンシーハイブリダイゼーショ
ン条件下でハイブリダイズするオリゴヌクレオチドを包含する。
【００６７】 好ましい本発明に係るヌクレオチドプローブ又はプライマーは、配列番号１１
９〜１３６、１３８、及び１４１〜１５２又は相補ポリヌクレオチド配列のうち
のいずれか１つを含むポリヌクレオチド配列の全部又は一部を含む。
【００６８】 本発明に係るヌクレオチドプライマーは、本発明に係る核酸、より具体的には
配列番号１、４〜６５、６８〜７０、７２〜８８、１０３、１０９〜１１８、及
び１３７、又は相補ポリヌクレオチド配列のうちのいずれか１つのポリヌクレオ
チド配列を含む核酸のうちのいずれか１つを増幅するために使用されうる。又は
、本発明に係るヌクレオチドプライマーは、配列番号１、４〜６５、６８〜７０
、７２〜８８、１０３、１０９〜１１８、及び１３７、又は相補ポリヌクレオチ
ド配列のうちのいずれか１つの核酸断片又は異型を増幅するために使用されうる
。
【００６９】 特定の実施形態において、本発明に係るヌクレオチドプライマーは、ａ）配列
番号１、４〜８、１１〜１６、１８〜２６、２８〜３５、３７〜５２、５４〜６
５、６８、及び１３７、もしくは相補ポリヌクレオチド配列のうちのいずれか１
つ；ｂ）配列番号９のヌクレオチド３１５４〜３２００もしくは相補ポリヌクレ
オチド配列；ｃ）配列番号１０のヌクレオチド１〜２４２もしくは相補ポリヌク
レオチド配列；ｄ）配列番号１７のヌクレオチド１〜１８５１もしくは相補ポリ
ヌクレオチド配列；ｅ）配列番号２７のヌクレオチド１５２〜１９８もしくは相
補ポリヌクレオチド配列；ｆ）配列番号３６のヌクレオチド１〜１６５７もしく
は相補ポリヌクレオチド配列；ｇ）配列番号５３のヌクレオチド１〜２４２もし
くは相補ポリヌクレオチド配列、ｈ）配列番号６９のヌクレオチド１〜２４４も
しくは配列番号７０のヌクレオチド１〜３５７もしくは相補ポリヌクレオチド配
列、又はｉ）配列番号１、４〜６５、６８〜７０、７２〜８８、１０３、１０９
〜１１８、及び１３７、もしくは相補ポリヌクレオチド配列を含む核酸を増幅す
るために使用されうる。
【００７０】 本発明のもう１つの主題は、試料中に含まれる、本発明に係る核酸、より具体
的には配列番号１、４〜６５、６８〜７０、７２〜８８、１０３、１０９〜１１
８、及び１３７、もしくは相補ポリヌクレオチド配列のうちのいずれか１つのポ
リヌクレオチド配列を含む核酸、又はそれらの核酸断片もしくは異型を増幅する
方法に関し、該方法は、 ａ）増幅反応に必要な試薬の存在下で、ハイブリダイゼーション位置が、増幅
すべき標的核酸の領域のそれぞれ５’側及び３’側である１対のヌクレオチドプ
ライマーと、標的核酸の存在が推測される試料を接触させる工程、並びに、 ｂ）増幅された核酸を検出する工程、を含む。
【００７１】 本発明のもう１つの主題は、試料中に含まれる、本発明に係る核酸、より具体
的にはａ）配列番号１、４〜８、１１〜１６、１８〜２６、２８〜３５、３７〜
５２、５４〜６５、６８、及び１３７、もしくは相補ポリヌクレオチド配列のう
ちのいずれか１つ；ｂ）配列番号９のヌクレオチド３１５４〜３２００もしくは
相補ポリヌクレオチド配列；ｃ）配列番号１０のヌクレオチド１〜２４２もしく
は相補ポリヌクレオチド配列；ｄ）配列番号１７のヌクレオチド１〜１８５１も
しくは相補ポリヌクレオチド配列；ｅ）配列番号２７のヌクレオチド１５２〜１
９８もしくは相補ポリヌクレオチド配列；ｆ）配列番号３６のヌクレオチド１〜
１６５７もしくは相補ポリヌクレオチド配列；ｇ）配列番号５３のヌクレオチド
１〜２４２もしくは相補ポリヌクレオチド配列、ｈ）配列番号６９のヌクレオチ
ド１〜２４４もしくは配列番号７０のヌクレオチド１〜３５７もしくは相補ポリ
ヌクレオチド配列、又はｉ）配列番号１、４〜６５、６８〜７０、７２〜８８、
１０３、１０９〜１１８、及び１３７、もしくは相補ポリヌクレオチド配列を含
む核酸を増幅する方法に関し、該方法は、 ａ）増幅反応に必要な試薬の存在下で、ハイブリダイゼーション位置が、増幅
すべき標的核酸の領域のそれぞれ５’側及び３’側である１対のヌクレオチドプ
ライマーと、標的核酸の存在が推測される試料を接触させる工程、並びに ｂ）増幅された核酸を検出する工程、を含む。
【００７２】 本発明は、試料中の、配列番号１、４〜６５、６８〜７０、７２〜８８、１０
３、１０９〜１１８、及び１３７、もしくは相補ポリヌクレオチド配列のうちの
いずれか１つのポリヌクレオチド配列を含む核酸、又は配列番号１、４〜６５、
６８〜７０、７２〜８８、１０３、１０９〜１１８、及び１３７、もしくは相補
ポリヌクレオチド配列のうちのいずれか１つの核酸断片もしくは異型の存在を検
出する方法にも関し、該方法は、 ａ）１個以上の本発明に係るヌクレオチドプローブを、被検試料と接触させる
工程、及び ｂ）（１個以上の）プローブと試料中に存在する核酸とで形成されうる複合体
を検出する工程、を含む。
【００７３】 本発明に係る検出法の特定の実施形態によると、ヌクレオチドプローブは支持
体上に固定化されている。
【００７４】 もう１つの態様によると、ヌクレオチドプローブは検出可能マーカーを含む。
【００７５】 本発明のもう１つの主題は、ａ）配列番号１、４〜８、１１〜１６、１８〜２
６、２８〜３５、３７〜５２、５４〜６５、６８、及び１３７、もしくは相補ポ
リヌクレオチド配列のうちのいずれか１つ；ｂ）配列番号９のヌクレオチド３１
５４〜３２００もしくは相補ポリヌクレオチド配列；ｃ）配列番号１０のヌクレ
オチド１〜２４２もしくは相補ポリヌクレオチド配列；ｄ）配列番号１７のヌク
レオチド１〜１８５１もしくは相補ポリヌクレオチド配列；ｅ）配列番号２７の
ヌクレオチド１５２〜１９８もしくは相補ポリヌクレオチド配列；ｆ）配列番号
３６のヌクレオチド１〜１６５７もしくは相補ポリヌクレオチド配列；ｇ）配列
番号５３のヌクレオチド１〜２４２もしくは相補ポリヌクレオチド配列、又はｈ
）配列番号６９のヌクレオチド１〜２４４もしくは配列番号７０のヌクレオチド
１〜３５７もしくは相補ポリヌクレオチド配列を含む核酸を増幅するためのボッ
クス又はキットであり、該ボックス又はキットは、 １）ハイブリダイゼーション位置が、増幅すべき標的核酸のそれぞれ５’側及
び３’側である、１対の本発明に係るヌクレオチドプライマーを含み、かつ ２）増幅反応に必要な試薬を場合により含む。
【００７６】 そのような増幅ボックス又はキットは、好ましくは、前記のようなヌクレオチ
ドプライマーを少なくとも１対含むであろう。
【００７７】 本発明の主題は、さらに、ａ）配列番号１、４〜８、１１〜１６、１８〜２６
、２８〜３５、３７〜５２、５４〜６５、６８、及び１３７、もしくは相補ポリ
ヌクレオチド配列のうちのいずれか１つ；ｂ）配列番号９のヌクレオチド３１５
４〜３２００もしくは相補ポリヌクレオチド配列；ｃ）配列番号１０のヌクレオ
チド１〜２４２もしくは相補ポリヌクレオチド配列；ｄ）配列番号１７のヌクレ
オチド１〜１８５１もしくは相補ポリヌクレオチド配列；ｅ）配列番号２７のヌ
クレオチド１５２〜１９８もしくは相補ポリヌクレオチド配列；ｆ）配列番号３
６のヌクレオチド１〜１６５７もしくは相補ポリヌクレオチド配列；ｇ）配列番
号５３のヌクレオチド１〜２４２もしくは相補ポリヌクレオチド配列、又はｈ）
配列番号６９のヌクレオチド１〜２４４もしくは配列番号７０のヌクレオチド１
〜３５７もしくは相補ポリヌクレオチド配列を含む核酸の全部又は一部を増幅す
るためのボックス又はキットであり、該ボックス又はキットは、 １）ハイブリダイゼーション位置が、増幅すべき標的核酸の領域のそれぞれ５
’側及び３’側である、１対の本発明に係るヌクレオチドプライマーを含み、か
つ ２）増幅反応に必要な試薬を場合により含む。
【００７８】 そのような増幅ボックス又はキットは、好ましくは、前記のようなヌクレオチ
ドプライマーを少なくとも１対含むであろう。
【００７９】 本発明は、試料中の本発明に係る核酸の存在を検出するためのボックス又はキ
ットにも関し、該ボックス又はキットは、 ａ）１個以上の本発明に係るヌクレオチドプローブを含み； ｂ）ハイブリダイゼーション反応に必要な試薬を適宜含む。
【００８０】 第１の態様によると、検出ボックス又はキットは、（１個以上の）ヌクレオチ
ドプローブ及びプライマーが支持体上に固定化されていることを特徴とする。
【００８１】 第２の態様によると、検出ボックス又はキットは、（１個以上の）ヌクレオチ
ドプローブ及びプライマーが検出可能マーカーを含むことを特徴とする。
【００８２】 前記の検出キットの特定の実施形態によると、そのようなキットは、目的の標
的核酸を検出するため、又は本発明に係る核酸のコーディング領域もしくは非コ
ーディング領域の突然変異を検出するために使用されうる、本発明に係るオリゴ
ヌクレオチドプローブ及び／又はプライマーを複数個含むであろう。本発明の好
ましい実施形態によると、標的核酸は、配列番号１、４〜６５、６８〜７０、７
２〜８８、１０３、１０９〜１１８、及び１３７、もしくは相補核酸配列のうち
のいずれか１つのポリヌクレオチド配列を含む。又は、標的核酸は、配列番号１
、４〜６５、６８〜７０、７２〜８８、１０３、１０９〜１１８、及び１３７、
もしくは相補ポリヌクレオチド配列のうちのいずれか１つを含む核酸の核酸断片
又は異型である。
【００８３】 好ましい実施形態によると、２個の本発明に係るプライマーは、前記の配列番
号７２に示されるような突然変異を保持するＡＢＣ１遺伝子のエキソン５の領域
、又は相補ポリヌクレオチド配列を有する核酸を増幅することが可能な、配列番
号１２５及び１２６の全部又は一部を含む。
【００８４】 第２の好ましい実施形態によると、２個の本発明に係るプライマーは、前記の
配列番号７３もしくは７４に示されるような突然変異を保持するＡＢＣ１遺伝子
のエキソン６の領域、又は相補ポリヌクレオチド配列を有する核酸を増幅するこ
とが可能な、配列番号１２７及び１２８の全部又は一部を含む。
【００８５】 第３の好ましい実施形態によると、２個の本発明に係るプライマーは、前記の
配列番号７５〜７７に示されるような突然変異を保持するＡＢＣ１遺伝子のエキ
ソン８の領域、又は相補ポリヌクレオチド配列を有する核酸を増幅することが可
能な、配列番号１３１及び１３２の全部又は一部を含む。
【００８６】 第４の好ましい実施形態によると、２個の本発明に係るプライマーは、前記の
配列番号８４に示されるような突然変異を保持するＡＢＣ１遺伝子のエキソン２
７の領域、又は相補ポリヌクレオチド配列を有する核酸を増幅することが可能な
、配列番号１５５及び１５６の全部又は一部を含む。
【００８７】 第５の好ましい実施形態によると、２個の本発明に係るプライマーは、前記の
配列番号８５に示されるような突然変異を保持するＡＢＣ１遺伝子のエキソン３
２の領域、又は相補ポリヌクレオチド配列を有する核酸を増幅することが可能な
、配列番号１５９及び１６０の全部又は一部を含む。
【００８８】 第６の好ましい実施形態によると、２個の本発明に係るプライマーは、前記の
配列番号８７もしくは８８に示されるような突然変異を保持するＡＢＣ１遺伝子
のエキソン４７の領域、又は相補ポリヌクレオチド配列を有する核酸を増幅する
ことが可能な、配列番号１７５及び１７６の全部又は一部を含む。
【００８９】 もう１つの好ましい実施形態によると、本発明に係るプライマーは、一般的に
、配列番号１１９〜１３６、１３８、及び１４１〜１５２、又は相補配列のうち
のいずれか１つの全部又は一部を含む。
【００９０】 本発明は、本発明に係る核酸を含む組換えベクターにも関する。好ましくは、
そのような組換えベクターは、 ａ）配列番号１、４〜６５、６８〜７０、７２〜８８、１０３、１０９〜１１
８、及び１３７、もしくは相補ポリヌクレオチド配列のうちのいずれか１つのポ
リヌクレオチド配列を含む核酸、 ｂ）配列番号１、４〜６５、６８〜７０、７２〜８８、１０３、１０９〜１１
８、及び１３７、もしくは相補ポリヌクレオチド配列のうちのいずれか１つに示
されるようなポリヌクレオチド配列を含む核酸、 ｃ）配列番号６９のヌクレオチド１〜２４４もしくは配列番号７０のヌクレオ
チド１〜３５７又は相補ポリヌクレオチド配列を含む核酸、 ｄ）１）配列番号１、４〜８、１１〜１６、１８〜２６、２８〜３５、３７〜
５２、５４〜６５、６８、及び１３７、もしくは相補ポリヌクレオチド配列のう
ちのいずれか１つ；２）配列番号９のヌクレオチド３１５４〜３２００もしくは
相補ポリヌクレオチド配列；３）配列番号１０のヌクレオチド１〜２４２もしく
は相補ポリヌクレオチド配列；４）配列番号１７のヌクレオチド１〜１８５１も
しくは相補ポリヌクレオチド配列；５）配列番号２７のヌクレオチド１５２〜１
９８もしくは相補ポリヌクレオチド配列；６）配列番号３６のヌクレオチド１〜
１６５７もしくは相補ポリヌクレオチド配列；７）配列番号５３のヌクレオチド
１〜２４２もしくは相補ポリヌクレオチド配列、又は８）配列番号６９のヌクレ
オチド１〜２４４もしくは配列番号７０のヌクレオチド１〜３５７もしくは相補
ポリヌクレオチド配列のポリヌクレオチド配列を含む核酸の少なくとも８個の連
続ヌクレオチドを有する核酸； ｅ）１）配列番号１、４〜８、１１〜１６、１８〜２６、２８〜３５、３７〜
５２、５４〜６５、６８、及び１３７、もしくは相補ポリヌクレオチド配列のう
ちのいずれか１つ；２）配列番号９のヌクレオチド３１５４〜３２００もしくは
相補ポリヌクレオチド配列；３）配列番号１０のヌクレオチド１〜２４２もしく
は相補ポリヌクレオチド配列；４）配列番号１７のヌクレオチド１〜１８５１も
しくは相補ポリヌクレオチド配列；５）配列番号２７のヌクレオチド１５２〜１
９８もしくは相補ポリヌクレオチド配列；６）配列番号３６のヌクレオチド１〜
１６５７もしくは相補ポリヌクレオチド配列；７）配列番号５３のヌクレオチド
１〜２４２もしくは相補ポリヌクレオチド配列、又は８）配列番号６９のヌクレ
オチド１〜２４４もしくは配列番号７０のヌクレオチド１〜３５７もしくは相補
ポリヌクレオチド配列のポリヌクレオチド配列を含む核酸との少なくとも８０％
のヌクレオチド同一性を有する核酸； ｆ）１）配列番号１、４〜８、１１〜１６、１８〜２６、２８〜３５、３７〜
５２、５４〜６５、６８、及び１３７、もしくは相補ポリヌクレオチド配列のう
ちのいずれか１つ；２）配列番号９のヌクレオチド３１５４〜３２００もしくは
相補ポリヌクレオチド配列；３）配列番号１０のヌクレオチド１〜２４２もしく
は相補ポリヌクレオチド配列；４）配列番号１７のヌクレオチド１〜１８５１も
しくは相補ポリヌクレオチド配列；５）配列番号２７のヌクレオチド１５２〜１
９８もしくは相補ポリヌクレオチド配列；６）配列番号３６のヌクレオチド１〜
１６５７もしくは相補ポリヌクレオチド配列；７）配列番号５３のヌクレオチド
１〜２４２もしくは相補ポリヌクレオチド配列、又は８）配列番号６９のヌクレ
オチド１〜２４４もしくは配列番号７０のヌクレオチド１〜３５７もしくは相補
ポリヌクレオチド配列のポリヌクレオチド配列を含む核酸との８５％、９０％、
９５％、又は９８％のヌクレオチド同一性を有する核酸； ｇ）１）配列番号１、４〜８、１１〜１６、１８〜２６、２８〜３５、３７〜
５２、５４〜６５、６８、及び１３７、もしくは相補ポリヌクレオチド配列のう
ちのいずれか１つ；２）配列番号９のヌクレオチド３１５４〜３２００もしくは
相補ポリヌクレオチド配列；３）配列番号１０のヌクレオチド１〜２４２もしく
は相補ポリヌクレオチド配列；４）配列番号１７のヌクレオチド１〜１８５１も
しくは相補ポリヌクレオチド配列；５）配列番号２７のヌクレオチド１５２〜１
９８もしくは相補ポリヌクレオチド配列；６）配列番号３６のヌクレオチド１〜
１６５７もしくは相補ポリヌクレオチド配列；７）配列番号５３のヌクレオチド
１〜２４２もしくは相補ポリヌクレオチド配列、又は８）配列番号６９のヌクレ
オチド１〜２４４もしくは配列番号７０のヌクレオチド１〜３５７もしくは相補
ポリヌクレオチド配列のポリヌクレオチド配列を含む核酸と、高ストリンジェン
シー条件下でハイブリダイズする核酸； ｈ）配列番号７１のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする核酸；並び
に ｉ）配列番号７１のアミノ酸１〜６０を含むポリペプチドをコードする核酸、
からなる群より選択される核酸を含むであろう。
【００９１】 第１の実施形態によると、本発明に係る組換えベクターは、所望の細胞宿主の
形質転換又はトランスフェクションの後、その内部に挿入された核酸を増幅する
ために使用される。
【００９２】 第２の実施形態によると、本発明に係る組換えベクターは、本発明に係る核酸
に加え、制御シグナル、又は核酸及びそのコードされたｍＲＮＡの転写及び／も
しくは翻訳を指図もしくは調節するヌクレオチド配列を含む発現ベクターに相当
する。
【００９３】 好ましい実施形態によると、本発明に係る組換えベクターは、特に以下の成分
を含むであろう。
【００９４】 （１）プロモーター及び／又はエンハンサー配列のような挿入される核酸の発
現を制御するための因子又はシグナル； （２）（１）に記載の制御因子又はシグナルとインフレームで存在する、その
ようなベクターに挿入される本発明に係る核酸に含まれるヌクレオチドコーディ
ング領域；並びに （３）（２）に記載の核酸のヌクレオチドコーディング領域の転写の開始及び
終結のための適当な核酸。
【００９５】 本発明は、コレステロールの輸送及び代謝に関与するＡＢＣ１ポリペプチドを
コードするｃＤＮＡ核酸を含む欠陥組換えウイルスにも関する。本発明のもう１
つの好ましい実施形態において、欠陥組換えウイルスは、コレステロールの輸送
及び代謝に関与するＡＢＣ１ポリペプチドをコードするｇＤＮＡを含む。好まし
くは、ＡＢＣ１ポリペプチドは、配列番号７１のアミノ酸配列を含む。より好ま
しくは、ＡＢＣ１ポリペプチドは、配列番号７１のアミノ酸１〜６０を含む。
【００９６】 もう１つの好ましい実施形態において、本発明は、ＲＳＶ−ＬＴＲ又はＣＭＶ
初期プロモーターより選択されるプロモーターの調節下にある、コレステロール
の輸送及び代謝に関与するＡＢＣ１ポリペプチドをコードする核酸を含む欠陥組
換えウイルスに関する。
【００９７】 特定の実施形態によると、本発明に係る核酸を、宿主細胞、特に哺乳動物より
得られた宿主細胞へインビボ導入する方法は、薬学的に適合性のベクターと、適
当な制御配列の調節下に置かれた本発明に係る「裸の」核酸とを含む調製物を、
選択された組織、例えば平滑筋組織のレベルで、局所注射により導入し、「裸の
」核酸をこの組織の細胞に吸収させる工程を含む。
【００９８】 本発明の特定の実施形態によると、ＡＢＣ１タンパク質のインビボ作製のため
の組成物が提供される。この組成物は、生理学的に許容される媒体及び／又は賦
形剤の溶液の状態の、適当な制御配列の調節下に置かれたＡＢＣ１ポリペプチド
をコードする核酸を含む。
【００９９】 従って、本発明は、適当な制御因子の調節下に置かれた、配列番号７１のアミ
ノ酸配列を含むポリペプチドをコードする核酸を含む組成物にも関する。
【０１００】 本発明は、適当な制御因子の調節下に置かれた、配列番号７１のアミノ酸１〜
６０を含むポリペプチドをコードする核酸を含む組成物にも関する。
【０１０１】 従って、本発明は、１個以上の生理学的に適合性の賦形剤と組み合わされた、
ＡＢＣ１タンパク質をコードする核酸を含む、コレステロール逆輸送の機能障害
に罹患した患者又は対象の予防又は治療を目的とする薬学的組成物にも関する。
【０１０２】 好ましくは、そのような組成物は、適当な制御因子又はシグナルの調節下に置
かれた、配列番号６９又は配列番号７０いずれかのポリヌクレオチド配列を含む
核酸を含むであろう。
【０１０３】 本発明の主題は、さらに、１個以上の生理学的に適合性の賦形剤と組み合わさ
れた、本発明に係る組換えベクターを含む、コレステロール逆輸送の機能障害に
罹患した患者又は対象の予防又は治療を目的とする薬学的組成物である。
【０１０４】 本発明は、様々な形態の動脈硬化の予防、又はより具体的にコレステロール逆
輸送の機能障害に罹患した対象の治療を目的とする医薬品の製造のための、ＡＢ
Ｃ１タンパク質をコードする本発明に係る核酸の使用にも関する。
【０１０５】 本発明は、様々な形態の動脈硬化の予防、又はより具体的にコレステロール逆
輸送の機能障害に罹患した対象の治療を目的とする医薬品の製造のための、ＡＢ
Ｃ１タンパク質をコードする核酸を含む本発明に係る組換えベクターの使用にも
関する。
【０１０６】 従って、コレステロール代謝に関与するＡＢＣ１タンパク質又はポリペプチド
をコードする本発明に係る核酸を含む組換えベクターも、本発明の主題である。
【０１０７】 本発明は、心臓血管疾患、又はタンジアー及び／もしくはＦＨＤ病と関連した
ＨＤＬ欠損症、ＨＤＬ欠損症、ＬＣＡＴ欠損症、マラリア、及び糖尿病のような
ＨＤＬ欠損症と関連した状態の治療及び／又は予防を目的とする薬学的組成物の
調製のための、そのような組換えベクターの使用にも関する。
【０１０８】 本発明は、体内へ移植され、生物学的活性を有するＡＢＣ１ポリペプチドの長
期的かつ効率的なインビボ発現を可能にする、そのような本発明に係る組換えベ
クターでエクスビボで遺伝学的に修飾された細胞、又は組換えベクターを産生す
る細胞の使用にも関する。
【０１０９】 本発明は、様々な形態の動脈硬化の予防もしくは治療、又はより具体的にコレ
ステロール逆輸送の機能障害に罹患した対象の治療を目的とする医薬品の製造の
ための、ＡＢＣ１タンパク質をコードする本発明に係る核酸の使用にも関する。
【０１１０】 本発明は、様々な形態の動脈硬化の予防、又はより具体的にコレステロール逆
輸送の機能障害に罹患した対象の治療を目的とする医薬品の製造のための、本発
明に係るＡＢＣ１ポリペプチドをコードする核酸を含む本発明に係る組換えベク
ターの使用にも関する。
【０１１１】 本発明は、様々な形態の動脈硬化の予防、又はより具体的にコレステロール逆
輸送の機能障害に罹患した対象の治療を目的とする医薬品の製造のための、本発
明に係るＡＢＣ１ポリペプチドをコードする核酸を含む本発明に係る組換え宿主
細胞の使用にも関する。
【０１１２】 本発明は、コレステロール輸送と関連した病理の治療及び／又は予防のための
薬学的組成物の調製のための、本発明に係る組換えベクター、好ましくは欠陥組
換えウイルスの使用にも関する。
【０１１３】 本発明は、コレステロール逆輸送の欠損と関連した心臓血管疾患の治療及び／
又は予防を目的とする薬学的組成物の調製のための、そのような組換えベクター
又は欠陥組換えウイルスの使用に関する。従って、本発明は、本発明に係る組換
えベクター又は欠陥組換えウイルスを１個以上含む薬学的組成物にも関する。
【０１１４】 本発明は、体内へ移植され、生物学的活性を有するＡＢＣ１タンパク質の長期
的かつ効率的なインビボ発現を可能にする、本発明に係るウイルスでエクスビボ
で遺伝学的に修飾された細胞、又はそのようなウイルスを産生する細胞の使用に
も関する。
【０１１５】 本発明は、本発明に係るＡＢＣ１ポリペプチドをコードする核酸をウイルスベ
クターへ組み込むことが可能であること、及びこれらのベクターが、生物学的活
性を有する成熟ポリペプチドの効率的な発現を可能にすることを示す。より具体
的には、本発明は、ＡＢＣ１のインビボ発現が、そのような核酸が組み込まれた
アデノウイルスの直接投与により、又はそのような核酸が組み込まれたアデノウ
イルスもしくはレトロウイルスを産生する細胞、もしくはそれらにより遺伝学的
に修飾された細胞の移植により、得られうることを示す。
【０１１６】 これに関して、本発明のもう１つの主題は、１個以上の本発明に係る欠陥組換
えウイルスに感染した任意の哺乳動物細胞に関する。より具体的には、本発明は
、これらのウイルスに感染した任意のヒト細胞集団に関する。これらは、特に血
液を起源とする細胞（全能性幹細胞又は前駆細胞）、繊維芽細胞、筋芽細胞、肝
細胞、ケラチノサイト、平滑筋内皮細胞、グリア細胞等であり得る。
【０１１７】 本発明のもう１つの主題は、１個以上の本発明に係る欠陥組換えウイルスに感
染した哺乳動物細胞、又は組換えウイルスを産生する細胞と、細胞外マトリック
スとを含む移植片に関する。好ましくは、本発明に係る移植片は、１０５〜１０ １０ 個の細胞を含む。より好ましくは、それらは、１０６〜１０８個の細胞を含
む。
【０１１８】 より具体的には、本発明の移植片において、細胞外マトリックスは、ゲル化化
合物を含み、かつ細胞の固定を可能にする支持体を場合により含む。
【０１１９】 本発明は、本発明の核酸、より具体的には配列番号６９もしくは配列番号７０
又は相補ポリヌクレオチド配列のいずれかを含む核酸を含む組換え宿主細胞にも
関する。
【０１２０】 本発明は、本発明の核酸、より具体的には配列番号６９もしくは配列番号７０
又は相補ポリヌクレオチド配列に示されるようなヌクレオチド配列を含む核酸を
含む組換え宿主細胞にも関する。
【０１２１】 特に、本発明は、配列番号１、４〜６５、６８〜７０、７２〜８８、１０３、
１０９〜１１８、及び１３７、又は相補ポリヌクレオチド配列のうちのいずれか
１つを含む核酸を含む組換え宿主細胞に関する。
【０１２２】 本発明は、配列番号１、４〜６５、６８〜７０、７２〜８８、１０３、１０９
〜１１８、及び１３７、又は相補ポリヌクレオチド配列のうちのいずれか１つに
示されるようなポリヌクレオチド配列を含む核酸を含む組換え宿主細胞にも関す
る。
【０１２３】 本発明は、配列番号６９のヌクレオチド１〜２４４もしくは配列番号７０のヌ
クレオチド１〜３５７又は相補ポリヌクレオチド配列を含む核酸を含む組換え宿
主細胞にも関する。
【０１２４】 本発明は、配列番号７１のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする核酸
を含む組換え宿主細胞にも関する。
【０１２５】 本発明は、配列番号７１のアミノ酸１〜６０を含むポリペプチドをコードする
核酸を含む組換え宿主細胞にも関する。
【０１２６】 もう１つの態様によると、本発明は、本発明に係る組換えベクターを含む組換
え宿主細胞にも関する。従って、本発明は、本発明の核酸、より具体的には配列
番号６９もしくは配列番号７０又は相補ポリヌクレオチド配列のいずれかのヌク
レオチド配列を含む核酸を含む組換えベクターを含む組換え宿主細胞にも関する
。
【０１２７】 特に、本発明は、配列番号１、４〜６５、６８〜７０、７２〜８８、１０３、
１０９〜１１８、及び１３７、又は相補ポリヌクレオチド配列のうちのいずれか
１つを含む核酸を含む組換えベクターを含む組換え宿主細胞に関する。
【０１２８】 本発明は、本発明は、配列番号１、４〜６５、６８〜７０、７２〜８８、１０
３、１０９〜１１８、及び１３７、又は相補ポリヌクレオチド配列のうちのいず
れか１つに示されるようなポリヌクレオチド配列を含む核酸を含む組換えベクタ
ーを含む組換え宿主細胞にも関する。
【０１２９】 本発明は、配列番号６９のヌクレオチド１〜２４４もしくは配列番号７０のヌ
クレオチド１〜３５７又は相補ポリヌクレオチド配列を含む核酸を含む組換えベ
クターを含む組換え宿主細胞にも関する。
【０１３０】 本発明は、配列番号７１のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする核酸
を含む組換えベクターを含む組換え宿主細胞にも関する。
【０１３１】 本発明は、配列番号７１のアミノ酸１〜６０を含むポリペプチドをコードする
核酸を含む組換えベクターを含む組換え宿主細胞にも関する。
【０１３２】 本発明は、配列番号７１及び８９〜１０２のうちのいずれか１つのアミノ酸配
列を含むポリペプチド、又は配列番号７１のアミノ酸１〜６０を含むそれらのペ
プチド断片もしくは異型の作製のための方法にも関し、該方法は、 ａ）該ポリペプチドをコードする核酸を適当なベクターへ挿入する工程、 ｂ）予め形質転換された宿主細胞を適当な培養培地中で培養するか、又は工程
ａ）の組換えベクターで宿主細胞をトランスフェクトする工程、 ｃ）条件培養培地を回収するか、又は、例えば超音波処理もしくは浸透圧ショ
ックにより、宿主細胞を溶解させる工程、 ｄ）工程ｃ）において得られた該培養培地又は細胞溶解物から該ポリペプチド
を分離し精製する工程、並びに ｅ）適宜、産生された組換えポリペプチドを特徴決定する工程、を含む。
【０１３３】 本発明の特定の実施形態は、配列番号７１のアミノ酸１〜６０のアミノ酸配列
を含むポリペプチドを作製するための方法に関する。
【０１３４】 配列番号７１のアミノ酸１〜６０を含むアミノ酸配列を有するポリペプチドと
「相同」と呼ばれるポリペプチドも、本発明の一部を形成する。そのような相同
ポリペプチドは、配列番号７１のアミノ酸１〜６０と比較して、等価なアミノ酸
によるアミノ酸置換を１個以上保持しているアミノ酸配列を含む。
【０１３５】 本発明に係るＡＢＣ１ポリペプチド、特に１）配列番号７１及び８９〜１０２
のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含むポリペプチド、２）配列番号７１の
アミノ酸１〜６０を含むポリペプチド、３）配列番号７１のアミノ酸１〜６０を
含む、配列番号７１及び８９〜１０２のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含
むポリペプチドのポリペプチド断片もしくは異型、又は４）配列番号７１のアミ
ノ酸１〜６０を含むポリペプチドと「相同」と呼ばれるポリペプチド。
【０１３６】 特定の実施形態において、本発明に係る抗体は、１）配列番号７１及び８９〜
１０２のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含むポリペプチド、２）配列番号
７１のアミノ酸１〜６０を含むポリペプチド、３）配列番号７１のアミノ酸１〜
６０を含む、配列番号７１及び８９〜１０２のうちのいずれか１つのアミノ酸配
列を含むポリペプチドのポリペプチド断片もしくは異型、又は４）配列番号７１
のアミノ酸１〜６０を含むポリペプチドと「相同」と呼ばれるポリペプチドに対
する抗体である。
【０１３７】 本発明は、トリオーマ技術又はＫｏｚｂｏｒら（１９８３ｂ）により記載され
たハイブリドーマ技術により作製されるような、１）配列番号７１及び８９〜１
０２のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含むポリペプチド、２）配列番号７
１のアミノ酸１〜６０を含むポリペプチド、３）配列番号７１のアミノ酸１〜６
０を含む、配列番号７１及び８９〜１０２のうちのいずれか１つのアミノ酸配列
を含むポリペプチドのポリペプチド断片もしくは異型、又は４）配列番号７１の
アミノ酸１〜６０を含むポリペプチドと「相同」と呼ばれるポリペプチドに対す
る抗体に関し、これも、本発明の一部を形成する。
【０１３８】 従って、本発明の主題は、さらに、試料中の本発明に係るポリペプチドの存在
を検出する方法であり、該方法は、 ａ）被検試料を、１）配列番号７１及び８９〜１０２のうちのいずれか１つの
アミノ酸配列を含むポリペプチド、２）配列番号７１のアミノ酸１〜６０を含む
ポリペプチド、３）配列番号７１のアミノ酸１〜６０を含む、配列番号７１及び
８９〜１０２のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含むポリペプチドのポリペ
プチド断片もしくは異型、又は４）配列番号７１のアミノ酸１〜６０を含むポリ
ペプチドと「相同」と呼ばれるポリペプチドに対する抗体と接触させる工程、並
びに ｂ）形成された抗原／抗体複合体を検出する工程：を含む。
【０１３９】 本発明は、試料中の本発明に係るポリペプチドの存在の診断又は検出のための
ボックス又はキットにも関し、該ボックスは、 ａ）１）配列番号７１及び８９〜１０２のうちのいずれか１つのアミノ酸配列
を含むポリペプチド、２）配列番号７１のアミノ酸１〜６０を含むポリペプチド
、３）配列番号７１のアミノ酸１〜６０を含む、配列番号７１及び８９〜１０２
のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含むポリペプチドのポリペプチド断片も
しくは異型、又は４）配列番号７１のアミノ酸１〜６０を含むポリペプチドと「
相同」と呼ばれるポリペプチドに対する抗体と、 ｂ）形成された抗原／抗体複合体の検出を可能にする試薬とを含む。
【０１４０】 本発明は、本発明の核酸を含む薬学的組成物にも関する。
【０１４１】 本発明は、タンジアー及び／又はＦＨＤ病のようなコレステロール逆輸送の欠
損と関連した疾患の治療を目的とする、本発明に係るＡＢＣ１ポリペプチドをコ
ードする核酸を含む薬学的組成物、及び本発明に係るＡＢＣ１ポリペプチドを含
む薬学的組成物も提供する。
【０１４２】 本発明は、本発明に係るＡＢＣ１タンパク質をコードする核酸をインビボに伝
達し、発現させることを含む、コレステロール輸送と関連した病理の治療のため
の新規な治療法にも関する。特に、本発明は、タンジアー及び／又はＦＨＤ病と
関連したＨＤＬ欠損症、ＨＤＬ欠損症、ＬＣＡＴ欠損症、マラリア、及び糖尿病
のようなＨＤＬ欠損症の治療及び／又は予防のための新規な治療法を提供する。
【０１４３】 従って、本発明は、コレステロールの輸送及び代謝の異常と関連した心臓血管
及び神経の病理の治療及び予防のための新規な手法を提供する。特に、本発明は
、患者又は対象においてコレステロール逆輸送を回復させるか、又はその改善を
促進する方法を提供する。
【０１４４】 従って、本発明は、１個以上の生理学的に適合性の媒体及び／又は賦形剤と組
み合わされた、ＡＢＣ１タンパク質をコードする核酸を含む、コレステロール逆
輸送の機能障害に罹患した対象の予防又は治療を目的とする薬学的組成物にも関
する。
【０１４５】 本発明の特定の実施形態によると、ＡＢＣ１タンパク質のインビボ作製のため
の組成物が提供される。この組成物は、生理学的に適合性の媒体及び／又は賦形
剤の溶液の状態の、適当な制御配列の調節下におかれたＡＢＣ１ポリペプチドを
コードする核酸を含む。
【０１４６】 従って、本発明は、適当な制御配列の調節下におかれた、配列番号７１のアミ
ノ酸配列を含むポリペプチドをコードする核酸を含む組成物にも関する。
【０１４７】 本発明は、適当な制御配列の調節下におかれた、配列番号７１のアミノ酸１〜
６０を含むポリペプチドをコードする核酸を含む組成物にも関する。
【０１４８】 好ましくは、そのような組成物は、適当な制御配列の調節下におかれた、配列
番号６９又は配列番号７０のポリヌクレオチド配列を含む核酸を含むであろう。
【０１４９】 本発明は、１個以上の生理学的に適合性の媒体及び／又は賦形剤と組み合わさ
れた、本発明に係る組換えベクターを含む、コレステロール逆輸送の機能障害に
罹患した対象の予防又は治療を目的とする薬学的組成物にも関する。
【０１５０】 もう１つの態様によると、コレステロール代謝、より具体的にはコレステロー
ル輸送、さらに具体的にはコレステロール逆輸送の欠損により引き起こされた疾
患を治療する予防的又は治療的な治療法も、本発明の主題であり、該方法は、該
患者において本発明に係るＡＢＣ１ポリペプチドをコードする核酸を患者に投与
する工程を含み、該核酸は、適宜、１個以上の生理学的に適合性の媒体及び／又
は賦形剤と組み合わされる。
【０１５１】 本発明は、１個以上の生理学的に適合性の媒体及び／又は賦形剤と組み合わさ
れた、配列番号７１のアミノ酸配列を有するポリペプチド又は配列番号７１のア
ミノ酸１〜６０を含むポリペプチドを、治療に有効な量、含む、コレステロール
逆輸送の機能障害に罹患した患者又は対象の予防又は治療のための薬学的組成物
に関する。
【０１５２】 特定の実施形態によると、本発明に係る核酸を宿主細胞、特に哺乳動物より得
られた宿主細胞へインビボ導入する方法は、薬学的に適合性のベクターと、適当
な制御配列の調節下に置かれた本発明に係る「裸の」核酸とを含む調製物を、選
択された組織、例えば平滑筋組織のレベルで、局所注射により導入し、「裸の」
核酸をこの組織の細胞に吸収させる工程を含む。
【０１５３】 さらにもう１つの態様によると、コレステロール代謝、より具体的にはコレス
テロール輸送、さらに具体的にはコレステロール逆輸送の欠損により引き起こさ
れた疾患を治療する予防的又は治療的な治療法も、本発明の主題であり、該方法
は、治療に有効な量の本発明に係るＡＢＣ１ポリペプチドを該患者に投与する工
程を含み、該ポリペプチドは、適宜、１個以上の生理学的に適合性の媒体及び／
又は賦形剤と組み合わされる。
【０１５４】 好ましくは、本発明に係るＡＢＣ１ポリペプチドを含む薬学的組成物が、患者
へ投与されるであろう。従って、本発明は、正常なＡＢＣ１ポリペプチド、特に
配列番号７１のアミノ酸配列を有するＡＢＣ１ポリペプチドをコードする核酸を
、治療に有効な量、含むことを特徴とする、動脈硬化のようなコレステロール代
謝の欠損、特にコレステロール輸送の欠損、さらに具体的にはコレステロール逆
輸送の欠損の予防又は治療を目的とする薬学的組成物にも関する。特定の実施形
態において、ＡＢＣ１ポリペプチドは、配列番号７１のアミノ酸１〜６０を含む
。
【０１５５】 本発明の主題は、さらに、正常なＡＢＣ１ポリペプチド、特に配列番号７１の
アミノ酸配列を有するＡＢＣ１ポリペプチドを、治療に有効な量、含むことを特
徴とする、動脈硬化のようなコレステロール代謝の欠損、特にコレステロール輸
送の欠損、さらに具体的にはコレステロール逆輸送の欠損の予防又は治療を目的
とする薬学的組成物である。特定の実施形態において、ＡＢＣ１ポリペプチドは
、配列番号７１のアミノ酸１〜６０を含む。
【０１５６】 本発明は、治療的な観点から、動脈硬化に効率的に対抗するため、コレステロ
ール逆輸送を回復させるか又はその改善を促進することができるＡＢＣ１ポリペ
プチドのアゴニスト及びアンタゴニストを同定するための、ＡＢＣ１タンパク質
に対する活性を有する小分子及び化合物をスクリーニングするための方法も提供
する。これらの方法は、タンジアー病、又はより一般的にはＦＨＤ型状態のよう
なコレステロール代謝、特にコレステロール輸送、さらに具体的にはコレステロ
ール逆輸送の欠損による疾患の治療において治療的に使用するための小分子及び
化合物を同定するために有用である。
【０１５７】 従って、本発明は、コレステロール逆輸送の機能障害に起因する疾患の予防又
は治療のための活性要素をスクリーニングするための、本発明に係るＡＢＣ１ポ
リペプチド又はＡＢＣ１ポリペプチドを発現する細胞の使用にも関する。
【０１５８】 本発明は、コレステロール代謝に対する活性を有する化合物又は小分子、ＡＢ
Ｃ１ポリペプチドのアゴニスト及びアンタゴニストをスクリーニングする方法に
も関し、該方法は、 ａ）ＡＢＣ１ポリペプチドと検出可能マーカーを含む脂質基質とを含む膜小胞
を調製する工程； ｂ）工程ａ）において得られた小胞を、アゴニスト又はアンタゴニスト候補化
合物と共にインキュベートする工程； ｃ）検出可能マーカーを含む脂質基質の放出を定性的かつ／又は定量的に測定
する工程；及び ｄ）工程ｂ）において得られた放出を、アゴニスト又はアンタゴニスト候補化
合物と共に予めインキュベートされていない小胞による標識された脂質基質の放
出の測定値と比較する工程：を含む。
【０１５９】 第１の特定の実施形態において、ＡＢＣ１ポリペプチドは配列番号７１を含む
。
【０１６０】 第２の特定の実施形態において、ＡＢＣ１ポリペプチドは配列番号７１のアミ
ノ酸１〜６０を含む。
【０１６１】 本発明は、コレステロール代謝に対する活性を有する化合物又は小分子、ＡＢ
Ｃ１ポリペプチドのアゴニスト又はアンタゴニストをスクリーニングする方法に
も関し、該方法は、 ａ）天然に、又はＡＢＣ１コーディング核酸により細胞をトランスフェクトし
た後、ＡＢＣ１ポリペプチドを発現している細胞、例えば細胞系を得る工程； ｂ）工程ａ）の細胞を、検出可能マーカーで標識された陰イオンの存在下でイ
ンキュベートする工程； ｃ）工程ｂ）の細胞を洗浄することにより、細胞へと侵入していない過剰の標
識された陰イオンを除去する工程； ｄ）工程ｃ）において得られた細胞を、ＡＢＣ１ポリペプチドに対するアゴニ
スト又はアンタゴニスト候補化合物と共にインキュベートする工程； ｅ）標識された陰イオンの流出を測定する工程；及び ｆ）工程ｅ）において決定された標識された陰イオンの流出の値を、ＡＢＣ１
ポリペプチドに対するアゴニスト又はアンタゴニスト候補化合物の存在下で予め
インキュベートされていない細胞で測定された標識された陰イオンの流出の値と
比較する工程：を含む。
【０１６２】 第１の特定の実施形態において、ＡＢＣ１ポリペプチドは配列番号７１を含む
。
【０１６３】 第２の特定の実施形態において、ＡＢＣ１ポリペプチドは配列番号７１のアミ
ノ酸１〜６０を含む。
【０１６４】 コレステロール代謝に対する活性を有する化合物、ＡＢＣ１ポリペプチドのア
ゴニスト又はアンタゴニストをスクリーニングする方法も、本発明の主題であり
、該方法は、 ａ）適当な培養培地中のヒト単球系の細胞を、精製されたヒトアルブミンの存
在下で培養する工程； ｂ）工程ａ）の細胞を、同時に、ＩＬ−１ベータの産生を刺激する化合物及び
アゴニスト又はアンタゴニスト候補化合物の存在下でインキュベートする工程； ｃ）工程ｂ）において得られた細胞を、適当な濃度のＡＴＰの存在下でインキ
ュベートすること； ｄ）細胞培養上清へと放出されたＩＬ−１ベータを測定する工程；及び ｅ）工程ｄ）において得られたＩＬ−１ベータの放出の値を、アゴニスト又は
アンタゴニスト候補化合物の存在下で予めインキュベートされていない細胞の培
養上清へと放出されたＩＬ−１ベータの値と比較する工程：を含む。
【０１６５】 （図面の簡単な説明） 図１は、ＡＢＣ１ ５’ｃＤＮＡ伸長法を示す図である。
【０１６６】 図２は、１次及び２次ヒトＡＢＣ１ ５’ｃＤＮＡ伸長ＰＣＲ反応のアガロー
スゲル分析を示す図である。
【０１６７】 図３は、内部２次ヒトＡＢＣ１ ５’ｃＤＮＡ伸長内部ＰＣＲ反応のアガロー
スゲル分析を示す図である。
【０１６８】 図４は、アポリポタンパク質の非存在下■又は存在下□でのヒト全長ＡＢＣ１
タンパク質を発現するＨｅＬａ細胞系におけるコレステロール流出の測定を示す
図である。
【０１６９】 図５は、アポリポタンパク質の非存在下■又は存在下□でのヒト全長ＡＢＣ１
タンパク質を発現するＨｅＬａ細胞系におけるリン脂質流出の測定を示す図であ
る。
【０１７０】 図６Ａは、アポリポタンパク質Ａ−Ｉ（ＡＩ）の非存在下■又は存在下□での
コレステロール流出の測定を示す図である。
【０１７１】 図６Ｂは、アポリポタンパク質Ａ−Ｉ（ＡＩ）の非存在下■又は存在下□での
リン脂質流出の測定を示す図である。
【０１７２】 図６Ｃは、ＨＤＬの非存在下■又は存在下□でのコレステロール流出の測定を
示す図である。
【０１７３】 図６Ｄは、ホスファチジルコリン（ＰＣ）の非存在下■又は存在下□でのコレ
ステロール流出の測定を示す図である。
【０１７４】 図７は、［１２５Ｉ］ａｐｏＡ−Ｉと共にインキュベートされたＡＢＣ１細胞
を、アポリポタンパク質の非存在下□、アポリポタンパク質Ａ−Ｉ（ａｐｏＡ−
Ｉ）の存在下■、又はアポリポタンパク質Ａ−ＩＩ（ａｐｏＡ−ＩＩ）の存在下
（斜線付き四角）に置いた。
【０１７５】 （発明の詳細な説明） 一般定義 本発明は、任意の動物、特に哺乳動物又はトリ、より具体的にはヒトを起源と
する、全長、又は天然に存在する型のＡＢＣ１、及びその任意の抗原性断片を含
む本発明のＡＢＣ１ポリペプチドをコードする遺伝子の単離を企図する。
【０１７６】 本発明によると、当分野の技術の範囲内である従来の分子生物学、微生物学、
及び組換えＤＮＡ技術が使用されうる。そのような技術は、文献に完全に説明さ
れている。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、１９８９；Ｇｌｏｖｅｒ、１９８５；
Ｇａｉｔ、１９８４；Ｈａｍｅｓ及びＨｉｇｇｉｎｓ、１９８５；Ｈａｍｅｓ及
びＨｉｇｇｉｎｓ、１９８４；Ｆｒｅｓｈｎｅｙ、１９８６；Ｐｅｒｂａｌ、１
９８４；及びＦ．Ａｕｓｕｂｅｌら、１９９４を参照のこと。
【０１７７】 従って、本明細書に出現する場合、以下の用語は下記の定義を有するものとす
る。
【０１７８】 本明細書において使用されるように、「遺伝子」という用語は、ポリペプチド
をコードするヌクレオチドの会合体をさし、ｃＤＮＡ核酸及びゲノミックＤＮＡ
核酸を含む。
【０１７９】 本発明の目的のための「単離された」という用語は、その最初の環境（それが
天然に存在する環境）から取り出された生物学的材料（核酸又はタンパク質）を
意味する。
【０１８０】 例えば、植物又は動物の体内に天然の状態で存在するポリヌクレオチドは、単
離されていない。植物又は動物のゲノム内に天然に挿入されている、隣接核酸か
ら分離された同ポリヌクレオチドは、「単離されている」と見なされる。
【０１８１】 そのようなポリヌクレオチドはベクターに含まれていてもよく、かつ／又はそ
のようなポリヌクレオチドは組成物中に含まれていてもよく、その場合であって
も、ベクター又は組成物はその天然の環境を構成しないという事実のため、それ
らは単離された状態にある。
【０１８２】 「精製された」という用語は、材料が、他の化合物が存在しない、完全に純粋
な形態で存在することを必要としない。それは、むしろ相対的な定義である。
【０１８３】 ポリペプチドは、少なくとも１桁、好ましくは２又は３桁、好ましくは４又は
５桁の、出発材料又は天然材料の精製後、「精製された」状態にある。
【０１８４】 本明細書の目的のため、「ヌクレオチド配列」という表現は、ポリヌクレオチ
ド又は核酸のいずれかを意味するために使用されうる。「ヌクレオチド配列」と
いう表現は、遺伝子材料そのものを包含し、従ってその配列に関する情報に限定
されない。
【０１８５】 「核酸」、「ポリヌクレオチド」、「オリゴヌクレオチド」、又は「ヌクレオ
チド配列」という用語は、ＲＮＡ、ＤＮＡ、ｇＤＮＡ、もしくはｃＤＮＡの配列
、又は複数個のヌクレオチドのＲＮＡ／ＤＮＡハイブリッド配列を包含し、それ
らは一本鎖の形態であっても、又は二重鎖、二本鎖の形態であってもよい。
【０１８６】 「核酸」とは、ヌクレオチドと呼ばれるサブユニットが共有結合したものから
構成される重合化合物である。核酸には、ポリリボ核酸（ＲＮＡ）及びポリデオ
キシリボ核酸（ＤＮＡ）が含まれ、これらはいずれも、一本鎖であっても又は二
本鎖であってもよい。ＤＮＡには、ｃＤＮＡ、ゲノミックＤＮＡ、合成ＤＮＡ、
及び半合成ＤＮＡが含まれる。タンパク質をコードするヌクレオチド配列は、セ
ンス配列又はコーディング配列と呼ばれる。
【０１８７】 「ヌクレオチド」という用語は、天然のヌクレオチド（Ａ、Ｔ、Ｇ、Ｃ）、及
び（１）プリンの類似体、（２）ピリミジンの類似体、又は（３）類似糖、のよ
うな少なくとも１つの修飾を含む修飾型ヌクレオチドの両方を意味し、そのよう
な修飾型ヌクレオチドの例は、例えばＰＣＴ出願第ＷＯ９５／０４０６４号に記
載されている。
【０１８８】 本発明の目的のため、第１のヌクレオチドの各塩基が、逆方向の第２のポリヌ
クレオチドの相補塩基と対を形成している場合、第１のポリヌクレオチドは、第
２のポリヌクレオチドと「相補的」であると見なされる。相補塩基は、ＡとＴ（
もしくはＡとＵ）、又はＣとＧである。
【０１８９】 「異種」ＤＮＡとは、細胞、又は細胞の染色体部位に天然には位置しないＤＮ
Ａをさす。好ましくは、異種ＤＮＡには、細胞にとって外来性の遺伝子が含まれ
る。
【０１９０】 本明細書において使用されるように、全ての文法形及び綴り変形の「相同」と
いう用語は、スーパーファミリー（例えば、免疫グロブリンスーパーファミリー
）のタンパク質、及び異なる種に由来する相同タンパク質（例えば、ミオシン軽
鎖等）（Ｒｅｅｃｋら、１９８７）を含む、「共通の進化起源」を有するタンパ
ク質間の関係をさす。そのようなタンパク質（及びそれらのコーディング遺伝子
）は、高い配列類似度により反映されるような配列相同性を有する。
【０１９１】 従って、全ての文法形の「配列類似性」という用語は、共通の進化起源を有し
ていてもよいし、有していなくてもよいタンパク質の核酸配列間、又はアミノ酸
配列間の同一度又は一致度をさす（Ｒｅｅｃｋら（前記）参照）。しかしながら
、一般的な用法及び本願において、「相同」という用語は、「高度に」のような
副詞で修飾されている場合、共通の進化起源ではなく配列類似性をさす。
【０１９２】 特定の実施形態において、２個のＤＮＡ配列は、一定の長さのＤＮＡ配列にお
いてヌクレオチドの少なくとも約５０％（好ましくは少なくとも約７５％、より
好ましくは少なくとも約９０又は９５％）がマッチする場合、「実質的に相同」
又は「実質的に類似」である。実質的に相同な配列は、配列データバンクにおい
て入手可能な標準的なソフトウェアを使用して配列を比較することにより、又は
例えばその特定の系毎に決定されるようなストリンジェント条件下でのサザンハ
イブリダイゼーション実験において、同定されうる。適当なハイブリダイゼーシ
ョン条件の決定は、当分野の技術の範囲内である。例えば、Ｍａｎｉａｔｉｓら
（前記）；Ｇｌｏｖｅｒら、１９８５；Ｈａｍｅｓ及びＨｉｇｇｉｎｓ、１９８
５を参照のこと。
【０１９３】 同様に、特定の実施形態において、２個のアミノ酸配列は、アミノ酸の３０％
超が同一であるか、又は約６０％超が類似している（機能的に同一である）場合
、「実質的に相同」であるか又は「実質的に類似」している。好ましくは、類似
又は相同配列は、例えばＧＣＧ（Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒ
ｏｕｐ、Ｐｒｏｇｒａｍ Ｍａｎｕａｌ ｆｏｒ ｔｈｅ ＧＣＧ Ｐａｃｋ
ａｇｅ、バージョン７、Ｍａｄｉｓｏｎ、Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ）パイルアッププ
ログラムを使用した整列化により同定される。
【０１９４】 ２個のヌクレオチド配列間又はアミノ酸配列間の「同一率（％）」は、本発明
の目的のため、最適には比較ウィンドウを通して整列させた２個の配列を比較す
ることにより決定されうる。
【０１９５】 従って、２個の配列の最適な整列化を得るため、比較ウィンドウ内のヌクレオ
チド配列又はポリペプチド配列の部分は、参照配列（付加又は欠失を含まない）
と比較して付加又は欠失（例えば「ギャップ」）を含みうる。
【０１９６】 率（％）は、比較された２個の配列（核酸又はペプチド）について、同一核酸
塩基又は同一アミノ酸残基が観察される位置の数を決定し、次いで２個の塩基又
はアミノ酸残基の間に同一が存在する位置の数を、比較ウィンドウ内の位置の総
数で割り、次いで配列同一率（％）を得るため、その結果に１００を掛けること
により計算される。
【０１９７】 比較のための最適な配列整列化は、ＷＩＳＣＯＮＳＩＮ ＧＥＮＥＴＩＣＳ
ＳＯＦＴＷＡＲＥ ＰＡＣＫＡＧＥ社、ＧＥＮＥＴＩＣＳ ＣＯＭＰＵＴＥＲ
ＧＲＯＵＰ（ＧＣＧ）、５７５ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｄｏｃｔｏｒ、Ｍａｄｉｓｏ
ｎ、ＷＩＳＣＯＮＳＩＮのパッケージに含まれる既知のアルゴリズムを利用して
コンピュータを使用して達成されうる。
【０１９８】 例えば、デフォルトパラメータのみを使用して、ＢＬＡＳＴソフトウェア（１
９９６年３月のＢＬＡＳＴ１．４．９、１９９８年２月のＢＬＡＳＴ２．０．４
、及び１９９８年９月のＢＬＡＳＴ２．０．６のバージョン）を利用して、配列
同一率（％）を得ることが可能であろう（Ａｌｔｓｃｈｕｌら、１９９０；Ａｌ
ｔｓｃｈｕｌら、１９９７）。Ｂｌａｓｔは、Ａｌｔｓｃｈｕｌらのアルゴリズ
ムを利用して、参照「問い合わせ」配列と類似／相同な配列を検索するものであ
る。使用される問い合わせ配列及びデータベースは、ペプチド型であっても、又
は核酸型であってもよく、任意の組み合わせが可能である。
【０１９９】 「に対応する」という用語は、本明細書において、正確な位置が類似性又は相
同性を測定する分子と同一であるか又は異なっているかに関わらず、類似又は相
同配列をさすために使用される。核酸配列又はアミノ酸配列の整列化は、間隙を
含みうる。従って、「に対応する」という用語は、配列類似性をさすのであって
、アミノ酸残基又はヌクレオチド塩基の番号をさすのではない。
【０２００】 本発明のＡＢＣ１ポリペプチドをコードする遺伝子は、ゲノミックＤＮＡであ
っても又はｃＤＮＡであっても、任意の起源、特にヒトｃＤＮＡ又はゲノミック
ライブラリーから単離されうる。遺伝子を得る方法は、前記のように、当分野に
おいて周知である（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、１９８９参照）。
【０２０１】 従って、任意の動物細胞が、ＡＢＣ１遺伝子の分子クローニングのための核酸
起源となりうる。ＤＮＡは、クローニングされたＤＮＡ（例えば、ＤＮＡ「ライ
ブラリー」）から当分野において既知の標準的な手法により入手されうるが、好
ましくは、高レベルにタンパク質を発現している組織から調製されたｃＤＮＡラ
イブラリーから、化学合成により、ｃＤＮＡクローニングにより、又は所望の細
胞から精製されたゲノミックＤＮＡもしくはその断片のクローニングにより、得
られる（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、１９８９；Ｇｌｏｖｅｒ、１９８５参照
）。ゲノミックＤＮＡに由来するクローンは、コーディング領域に加え、制御領
域及びイントロンＤＮＡ領域を含有している場合があり、ｃＤＮＡに由来するク
ローンはイントロン配列を含有していないであろう。起源に関わらず、遺伝子は
、遺伝子の増幅のため適当なベクターへと分子クローニングされるべきである。
【０２０２】 ゲノミックＤＮＡからの遺伝子の分子クローニングにおいては、所望の遺伝子
をコードする断片を含むであろうＤＮＡ断片を生成させる。ＤＮＡは、様々な制
限酵素を使用して特異的な部位で分解されうる。又は、マンガンの存在下でＤＮ
Ａｓｅを使用してＤＮＡを断片化してもよいし、又は物理的に、例えば超音波処
理によりＤＮＡを切断してもよい。直鎖状ＤＮＡ断片は、次いで、これらに限定
されないがアガロースゲル電気泳動、ポリアクリルアミドゲル電気泳動、及びカ
ラムクロマトグラフィを含む標準的な技術により、サイズに応じて分離されうる
。
【０２０３】 ＤＮＡ断片を生成させた後は、所望のＡＢＣ１遺伝子を含有する特異的ＤＮＡ
断片の同定が、多数の方式で達成されうる。例えば、ある量のＡＢＣ１遺伝子の
一部もしくはその特異的ＲＮＡ、又はそれらの断片が入手可能であり、精製及び
標識が可能である場合には、生成したＤＮＡ断片を標識されたプローブとの核酸
ハイブリダイゼーションによりスクリーニングすることができる（Ｂｅｎｔｏｎ
及びＤａｖｉｓ、１９７７；Ｇｒｕｎｓｔｅｉｎ及びＨｏｇｎｅｓｓ、１９７５
）。ＡＢＣ１タンパク質について得られた部分アミノ酸配列情報に対応するオリ
ゴヌクレオチドセットを調製し、例えば下記の特定の実施例において実施された
ように、ＡＢＣ１をコードするＤＮＡのためのプローブとして、又は（例えば、
ＲＴ−ＰＣＲのためのポリＴプライマーと組み合わせて）ｃＤＮＡもしくはｍＲ
ＮＡのためのプライマーとして使用することが可能である。好ましくは、本発明
のＡＢＣ１核酸又はポリペプチドに高度に特徴的な断片が選択される。プローブ
との実質的な相同性を有するこれらのＤＮＡ断片は、ハイブリダイズするであろ
う。前述のように、相同度が高いほど、より高ストリンジェンシーのハイブリダ
イゼーション条件が使用されうる。特定の実施形態においては、相同ＡＢＣ１遺
伝子を同定するためのストリンジェンシーハイブリダイゼーション条件が使用さ
れる。
【０２０４】 例えば、遺伝子が、本明細書に開示されたようなＡＢＣ１タンパク質の等電点
、電気泳動性、アミノ酸組成、又は部分アミノ酸配列を有するタンパク質産物を
コードする場合、遺伝子の特定に基づき、さらなる選択が実施されうる。従って
、遺伝子の存在は、その発現産物の物理的、化学的、又は免疫学的特性に基づく
アッセイにより検出されうる。例えばＡＢＣ１について既知のものと類似又は同
一の電気泳動移動度、等電点電気泳動又は非平衡ｐＨゲル電気泳動における挙動
、プロテアーゼ消化地図、又は抗原性特性を有するタンパク質を産生するｃＤＮ
Ａクローン、又は適切なｍＲＮＡをハイブリッド選択するＤＮＡクローンが、例
えば選択されうる。
【０２０５】 本発明のＡＢＣ１遺伝子は、ｍＲＮＡ選択、即ち核酸ハイブリダイゼーション
及びその後のインビトロ翻訳によっても同定されうる。この手法においては、ヌ
クレオチド断片を使用して、ハイブリダイゼーションにより相補ｍＲＮＡを単離
する。そのようなＤＮＡ断片は、入手可能な精製されたＡＢＣ１ ＤＮＡであっ
てもよいし、又は部分アミノ酸配列情報から設計された合成オリゴヌクレオチド
であってもよい。単離されたｍＲＮＡの産物のインビトロ翻訳産物の免疫沈降分
析又は機能的アッセイ（例えば、チロシンホスファターゼ活性）は、所望の配列
を含有するｍＲＮＡを同定し、従って相補ＤＮＡ断片を同定する。さらに、細胞
から単離されたポリソームの、本発明のＡＢＣ１ポリペプチドに対する固定化特
異的抗体への吸着により、特異的ｍＲＮＡが選択されうる。
【０２０６】 放射性標識されたＡＢＣ１ ｃＤＮＡは、（吸着ポリソームからの）選択され
たｍＲＮＡを鋳型として使用して、合成されうる。次いで、放射性標識されたｍ
ＲＮＡ又はｃＤＮＡは、他のゲノミックＤＮＡ断片の中から相同ＡＢＣ１ ＤＮ
Ａ断片を同定するためのプローブとして使用されうる。
【０２０７】 本発明に係る核酸の「異型」は、参照ポリヌクレオチドと比較して１個以上の
塩基が異なっている核酸を意味することが理解されよう。異型核酸は、天然に存
在する対立遺伝子異型のような天然起源のものであってもよいし、又は例えば突
然変異誘発技術により得られた非天然の異型であってもよい。
【０２０８】 一般に、参照（一般的には、野生型）核酸と異型核酸との差違は、小さく、参
照核酸のヌクレオチド配列と異型核酸のヌクレオチド配列とは極めて類似してお
り、多くの領域においては同一である。異型核酸に存在するヌクレオチド修飾は
、サイレント、即ち該異型核酸によりコードされるアミノ酸配列を改変しないも
のであってもよい。
【０２０９】 しかしながら、異型核酸におけるヌクレオチド変化は、異型核酸によりコード
されるポリペプチドに、参照核酸によりコードされるポリペプチドに対する置換
、付加、又は欠失をもたらしてもよい。さらに、コーディング領域におけるヌク
レオチド修飾は、ポリペプチドのアミノ酸配列に保存的又は非保存的な置換を生
じさせてもよい。
【０２１０】 好ましくは、本発明に係る異型核酸は、参照核酸のポリペプチドと同一の機能
もしくは生物学的活性、又は初期参照核酸によりコードされるポリペプチドに対
する抗体により認識される能力が実質的に保存されているポリペプチドをコード
する。
【０２１１】 従って、いくつかの異型核酸は、変異型ポリペプチドをコードするであろう。
その体系的な研究は、問題のタンパク質の構造活性相関の推定を可能にするであ
ろう。疾患と関係しているこれらの異型を知ることは、病理の分子的原因の理解
を可能にするため、必須である。
【０２１２】 「断片」とは、参照核酸と比較して減少した長さを有し、共通の部分に、参照
核酸と同一のヌクレオチド配列を含むヌクレオチド配列を意味するものと理解さ
れよう。そのような本発明に係る核酸「断片」は、適宜、それを構成要素とする
比較的大きいポリヌクレオチドに含まれうる。そのような断片は、本発明に係る
核酸の８、１０、１２、１５、１８、又は２０連続ヌクレオチド〜２５、３０、
４０、５０、７０、８０、１００、２００、５００、１０００、又は１５００連
続ヌクレオチドの範囲の長さのオリゴヌクレオチドを含むか、又はそれらからな
る。
【０２１３】 「核酸分子」とは、一本鎖形態又は二本鎖らせんのいずれかである、リン酸エ
ステル重合型のリボヌクレオシド（アデノシン、グアノシン、ウリジン、又はシ
チジン；「ＲＮＡ分子」）又はデオキシリボヌクレオシド（デオキシアデノシン
、デオキシグアノシン、デオキシチミジン、又はデオキシシチジン；「ＤＮＡ分
子」）、又はホスホロチオエート及びチオエステルのようなそれらのホスホエス
テル類似体をさす。二本鎖ＤＮＡ−ＤＮＡ、ＤＮＡ−ＲＮＡ、及びＲＮＡ−ＲＮ
Ａらせんが可能である。核酸分子、特にＤＮＡ分子又はＲＮＡ分子という用語は
、分子の一次及び二次構造のみをさし、特定の三次形態にそれを制限しない。従
って、この用語には、特に直鎖状又は環状のＤＮＡ分子（例えば、制限断片）、
プラスミド、及び染色体に見出される二本鎖ＤＮＡが含まれる。特定の二本鎖Ｄ
ＮＡ分子の構造を考察する際、配列は、ＤＮＡの非転写鎖に沿って５’から３’
の方向への配列のみを与えるという通例に従い、本明細書において記載されうる
。「組換えＤＮＡ分子」とは、分子生物学的操作を受けたＤＮＡ分子である。
【０２１４】 一本鎖型の核酸分子が、適当な温度及び溶液イオン強度の条件下で、ｃＤＮＡ
、ゲノミックＤＮＡ、又はＲＮＡのようなもう１つの核酸分子とアニール化しう
る場合、その核酸分子は、その他の核酸分子と「ハイブリダイズ可能」である（
Ｓａｍｂｒｏｏｋら（前記）参照）。温度及びイオン強度の条件は、ハイブリダ
イゼーションの「ストリンジェンシー」を決定する。相同核酸の予備スクリーニ
ングには、Ｔｍ５５℃に対応する低ストリンジェンシーハイブリダイゼーション
条件が使用されうる（例えば、５×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ、０．２５％乳、及
びホルムアミドなし；又は３０％ホルムアミド、５×ＳＳＣ、０．５％ＳＤＳ）
。中ストリンジェンシーハイブリダイゼーション条件、例えば４０％ホルムアミ
ド、５×又は６×ＳＣＣは、比較的高いＴｍに相当する。高ストリンジェンシー
ハイブリダイゼーション条件、例えば５０％ホルムアミド、５×又は６×ＳＣＣ
は、最も高いＴｍに相当する。ハイブリダイゼーションは、２つの核酸が相補配
列を含有していることを必要とするが、ハイブリダイゼーションのストリンジェ
ンシーに依っては、塩基間の誤対合が可能である。核酸をハイブリダイズさせる
ための適当なストリンジェンシーは、当分野において周知の変量である核酸の長
さ及び相補性の程度に依存する。２個のヌクレオチド配列間の類似性又は相同性
の程度が大きいほど、これらの配列を有する核酸のハイブリッドのＴｍの値は大
きくなる。核酸ハイブリダイゼーションの（より高いＴｍに対応する）相対的安
定性は、ＲＮＡ：ＲＮＡ、ＤＮＡ：ＲＮＡ、ＤＮＡ：ＤＮＡの順に減少する。１
００ヌクレオチド長よりも大きいハイブリッドについては、Ｔｍを計算するため
の式が導出されている（Ｓａｍｂｒｏｏｋら（前記）、９．５０〜０．５１参照
）。比較的短い核酸、即ちオリゴヌクレオチドとのハイブリダイゼーションにつ
いては、誤対合の位置がより重要となり、オリゴヌクレオチドの長さがその特異
性を決定する（Ｓａｍｂｒｏｏｋら（前記）、１１．７〜１１．８参照）。好ま
しくは、ハイブリダイズ可能核酸の最小の長さは、少なくとも約１０ヌクレオチ
ド、好ましくは少なくとも約１５ヌクレオチドであり、より好ましくは、長さは
少なくとも約２０ヌクレオチドである。
【０２１５】 特定の実施形態において、「標準的なハイブリダイゼーション条件」という用
語は、５５℃のＴｍをさし、前記のような条件を利用する。好ましい実施形態に
おいて、Ｔｍは６０℃であり、より好ましい実施形態において、Ｔｍは６５℃で
ある。
【０２１６】 本発明の目的のための「高ストリンジェンシーハイブリダイゼーション条件」
とは、以下の条件を意味するものと理解されよう。 １−膜競合及びプレハイブリダイゼーション： −混合：サケ精子ＤＮＡ（１０ｍｇ／ｍｌ）４０μｌ＋ヒト胎盤ＤＮＡ（１０
ｍｇ／ｍｌ）４０μｌ −９６℃で５分間変性、次いで混合物を氷中に浸漬 −２×ＳＳＣを除去、ホルムアミド混合物４ｍｌを、膜を含有するハイブリダ
イゼーションチューブに注入 −２つの変性したＤＮＡの混合物を添加 −回転させながら、４２℃で５〜６時間インキュベート ２−標識されたプローブの競合 −精製された標識されたプローブに、リピートの量に応じて、ＣｏｔＩ ＤＮ
Ａ １０〜５０μｌを添加 −９５℃で７〜１０分間変性 −６５℃で２〜５時間インキュベート ３−ハイブリダイゼーション −プレハイブリダイゼーション混合物を除去 −サケ精子ＤＮＡ ４０μｌ＋ヒト胎盤ＤＮＡ ４０μｌを混合；９６℃で５
分間変性、次いで氷中に浸漬 −ハイブリダイゼーションチューブにホルムアミド混合物４ｍｌ、２つのＤＮ
Ａ及び変性され標識されたプローブ／ＣｏｔＩ ＤＮＡの混合物を添加 −回転させながら、４２℃で１５〜２０時間インキュベート ４−洗浄及び曝露： −濯ぎのため２×ＳＳＣで室温で１回洗浄 −室温、２×ＳＳＣ、及び６５℃、０．１％ＳＤＳで５分間、２回 −６５℃、１×ＳＳＣ、及び６５℃、０．１％ＳＤＳで１５分間、２回 −透明プラスチックラップで膜を覆い、曝露。
【０２１７】 前記のハイブリダイゼーション条件は、２０ヌクレオチド〜数百ヌクレオチド
の様々な長さの核酸分子の高ストリンジェンシー条件下でのハイブリダイゼーシ
ョンに適合している。前記のハイブリダイゼーション条件が、当業者に既知の技
術に従い、ハイブリダイズさせるべき核酸の長さ、又は選択された標識の型の関
数として調整されうることは述べるまでもない。適当なハイブリダイゼーション
条件は、例えば、Ｈａｍｅｓ及びＨｉｇｇｉｎｓ（１９８５）の参考書又はＦ．
Ａｕｓｕｂｅｌら（１９９９）の参考書に含まれる教示に従い、調整されうる。
【０２１８】 本明細書において使用されるように、「オリゴヌクレオチド」という用語は、
本発明に係る核酸とハイブリダイズ可能な核酸、一般的には少なくとも１５ヌク
レオチドの核酸をさす。オリゴヌクレオチドは、例えば３２Ｐ−ヌクレオチド、
又はビオチンのような標識が共有結合したヌクレオチドで標識されうる。１つの
実施形態において、標識されたオリゴヌクレオチドは、本発明のＡＢＣ１ポリペ
プチドをコードする核酸の存在を検出するためのプローブとして使用されうる。
もう１つの実施形態において、オリゴヌクレオチド（一方又は両方が標識されう
る）は、ＡＢＣ１核酸の全長又は断片をクローニングするため、又はＡＢＣ１を
コードする核酸の存在を検出するため、ＰＣＲプライマーとして使用されうる。
さらなる実施形態において、本発明のオリゴヌクレオチドは、ＡＢＣ１ ＤＮＡ
分子と三重らせんを形成しうる。一般に、オリゴヌクレオチドは、合成により、
好ましくは核酸合成機で、調製される。従って、オリゴヌクレオチドは、チオエ
ステル結合等のような天然には存在しないホスホエステル類似体結合を用いて調
製されうる。
【０２１９】 「相同組換え」とは、ベクターの外来ＤＮＡ配列の染色体への挿入をさす。好
ましくは、ベクターは、相同組換えのため特異的染色体部位を標的とする。特異
的相同組換えのため、ベクターは、ベクターの相補的結合及び染色体への組み込
みを可能にするための十分な長さを有する、染色体の配列との相同領域を含有す
る。相同領域が長いほど、そして配列類似性の程度が大きいほど、相同組換えの
効率は増加しうる。
【０２２０】 ＤＮＡ「コーディング配列」とは、適当な制御配列の調節下に置かれた場合、
インビトロ又はインビボで細胞内で転写されポリペプチドへと翻訳される二本鎖
ＤＮＡ配列である。コーディング配列の境界は、５’（アミノ）末端の開始コド
ン及び３’（カルボキシル）末端の終止コドンにより決定される。コーディング
配列には、これらに限定されないが、原核生物配列、真核生物ｍＲＮＡ由来のｃ
ＤＮＡ、真核生物（例えば哺乳動物）ＤＮＡ由来のゲノミックＤＮＡ配列が含ま
れ、さらに合成ＤＮＡ配列も含まれる。コーディング配列が真核細胞における発
現を目的とするものである場合には、ポリアデニル化シグナル及び転写終結配列
が、通常コーディング配列の３’に位置するであろう。
【０２２１】 転写及び翻訳の調節配列は、宿主細胞におけるコーディング配列の発現を提供
するプロモーター、エンハンサー、ターミネーター等のようなＤＮＡ制御配列で
ある。真核細胞において、ポリアデニル化シグナルは調節配列である。
【０２２２】 「制御領域」とは、核酸の発現を制御する核酸配列を意味する。制御領域は、
天然に特定の核酸の発現を担う配列（同種領域）を含んでいてもよいし、又は（
異なるタンパク質又は合成タンパク質の発現を担う）異なる起源の配列を含んで
いてもよい。特に、配列は、特異的又は非特異的に、そして誘導可能又は非誘導
可能な様式で遺伝子の転写を刺激又は阻止する真核生物又はウイルスの遺伝子の
配列、又は派生配列でありうる。制御領域には、複製開始点、ＲＮＡスプライス
部位、エンハンサー、転写終結配列、ポリペプチドを標的細胞の分泌経路に指向
させるシグナル配列、及びプロモーターが含まれる。
【０２２３】 「異種起源」由来の制御領域とは、発現される核酸と天然には関連していない
制御領域である。異種制御領域には、異なる種に由来する制御領域、異なる遺伝
子由来の制御領域、ハイブリッド制御配列、及び当業者により設計された天然に
は存在しない制御配列が含まれる。
【０２２４】 「カセット」とは、ベクターの特定の制限部位へ挿入されうるＤＮＡセグメン
トをさす。ＤＮＡセグメントは、目的のポリペプチドをコードし、カセット及び
制限部位は、転写及び翻訳のための適切なリーディングフレームへのカセットの
挿入を保証するよう設計される。
【０２２５】 「プロモーター配列」とは、細胞内でＲＮＡポリメラーゼと結合し、下流（３
’方向）のコーディング配列の転写を開始することができるＤＮＡ制御領域であ
る。本発明を定義するため、プロモーター配列は、転写開始部位が３’に結合し
ており、バックグラウンドを越える検出可能なレベルの転写を開始させるために
必要な最少数の塩基又は因子を含むよう上流（５’方向）に伸長する。プロモー
ター配列内には、転写開始部位（便利には、例えばヌクレアーゼＳ１マッピング
により決定される）、及びＲＮＡポリメラーゼの結合を担うタンパク質結合ドメ
イン（コンセンサス配列）が見出されるであろう。
【０２２６】 ＲＮＡポリメラーゼがコーディング配列をｍＲＮＡへと転写し、それがトラン
スＲＮＡスプライスされ、コーディング配列によりコードされたタンパク質へと
翻訳されるとき、そのコーディング配列は、細胞において転写及び翻訳の調節配
列の「調節下」にある。
【０２２７】 「シグナル配列」は、細胞表面上に発現されるタンパク質のコーディング配列
の始めに含まれる。この配列は、宿主細胞にポリペプチドの転移を指図するシグ
ナルペプチドを、成熟ポリペプチドのＮ末端にコードする。「転移シグナル配列
」という用語は、本明細書において、この種のシグナル配列をさすために使用さ
れる。転移シグナル配列は、真核生物及び原核生物の多様な天然タンパク質と関
連して見出されうるが、いずれの型の生物においても機能性であることが多い。
【０２２８】 「ポリペプチド」とは、共有結合したアミノ酸残基から構成される重合化合物
である。アミノ酸は、以下の一般構造を有する。
【０２２９】
【化１】
【０２３０】 アミノ酸は、側鎖Ｒに基づき、（１）脂肪族側鎖、（２）水酸（ＯＨ）基を含
有する側鎖、（３）硫黄原子を含有する側鎖、（４）酸性又はアミド基を含有す
る側鎖、（５）塩基性基を含有する側鎖、（６）芳香環を含有する側鎖、及び（
７）側鎖がアミノ基と縮合しているイミノ酸であるプロリン、という７つの群へ
と分類される。
【０２３１】 「タンパク質」とは、生細胞において構造的又は機能的な役割を果たしている
ポリペプチドである。
【０２３２】 本発明のポリペプチド及びタンパク質は、グリコシル化されていてもよいし、
又はグリコシル化されていなくてもよい。
【０２３３】 「相同性」とは、共通の進化起源を反映する配列の類似性を意味する。相当数
のアミノ酸が（１）同一であるか、又は（２）化学的に類似したＲ側鎖を有する
場合、それらのポリペプチド又はタンパク質は相同性を有すると言われる。核酸
は、相当数のヌクレオチドが同一である場合、相同性を有すると言われる。
【０２３４】 「単離されたポリペプチド」又は「単離されたタンパク質」とは、天然の状態
において通常関連している化合物（例えば、他のタンパク質又はポリペプチド、
核酸、炭水化物、脂質）を実質的に含まないポリペプチド又はタンパク質である
。「単離された」とは、他の化合物との人工的もしくは合成的混合物、又は例え
ば、不完全な精製、安定剤の添加、もしくは薬学的に許容される調製物への化合
のために存在しうる生物学的活性を妨害しない不純物の存在を排除するものでは
ない。
【０２３５】 本発明に係るポリペプチドの「断片」とは、参照ポリペプチドよりも短いアミ
ノ酸配列を有し、これらの参照ポリペプチドと全体にわたり同一のアミノ酸配列
を含むポリペプチドを意味するものと理解されよう。そのような断片は、適宜、
それらを一部とするより大きいポリペプチドに含まれうる。そのような本発明に
係るポリペプチドの断片は、１０、１５、２０、３０〜４０、５０、１００、２
００、又は３００アミノ酸の長さを有しうる。
【０２３６】 本発明に係るポリペプチドの「異型」とは、参照ポリペプチドのアミノ酸配列
と比較して、少なくとも１個のアミノ酸残基の置換、付加、又は欠失を１個以上
含有するアミノ酸配列を有するポリペプチドを主に意味するものと理解され、ア
ミノ酸置換は保存的であっても又は非保存的であてもよいことが理解されよう。
【０２３７】 ポリペプチド又はタンパク質の「異型」とは、ポリペプチド又はタンパク質に
由来し、ポリペプチド又はタンパク質の生物学的特性を少なくとも１つ保持して
いる任意の類似体、断片、誘導体、又は変異体である。ポリペプチド又はタンパ
ク質の異なる異型は、天然に存在しうる。これらの異型は、タンパク質をコード
する構造遺伝子のヌクレオチド配列の差違により特徴付けられる対立遺伝子変動
であってもよいし、又はディファレンシャルスプライシングもしくは翻訳後修飾
を含みうる。異型には、実質的に同一の生物学的活性を有しているが、異なる種
から得られる関連タンパク質も含まれる。
【０２３８】 当業者は、１個又は複数個のアミノ酸置換、欠失、付加、又は交換を有する異
型を作製することができる。これらの異型には、特に（ａ）１個以上のアミノ酸
残基が、保存的又は非保存的なアミノ酸で置換されている異型、（ｂ）１個以上
のアミノ酸がポリペプチド又はタンパク質に付加されている異型、（ｃ）１個以
上のアミノ酸が置換基を含む異型、及び（ｄ）ポリペプチド又はタンパク質が血
清アルブミンのようなもう１つのポリペプチドと融合している異型：が含まれる
。遺伝学的技術（サプレッション、欠失、突然変異等）、化学的技術、及び酵素
的技術を含む、これらの異型を得るための技術は、当業者に既知である。
【０２３９】 オルタナティブｍＲＮＡスプライシング型及びオルタナティブ翻訳後修飾型を
含む、そのような対立遺伝子変動、類似体、断片、誘導体、変異体、及び修飾が
、ポリペプチドの生物学的特性を保持しているポリペプチドの誘導体をもたらす
場合、それらは、本発明の範囲内に含まれるものとする。
【０２４０】 「ベクター」とは、付着したセグメントの複製を実施するため、もう１つのＤ
ＮＡセグメントを付着させうるプラスミド、ウイルス、ファージ、又はコスミド
のようなレプリコンである。「レプリコン」とは、インビボで自律ＤＮＡ複製単
位として機能する、即ち自己の調節下で複製することができる、任意の遺伝因子
（例えば、プラスミド、染色体、ウイルス）である。
【０２４１】 本発明は、ＡＢＣ１ポリペプチドと同一又は相同な機能的活性を有する、本発
明のＡＢＣ１ポリペプチドの類似体及び誘導体、並びに他の種由来のそれらの相
同体をコードする遺伝子を含有するクローニングベクターにも関する。ＡＢＣ１
と関連した誘導体及び類似体の作製及び使用は、本発明の範囲内である。特定の
実施形態において、誘導体又は類似体は、機能的活性を有する、即ち本発明の全
長野生型ＡＢＣ１ポリペプチドと関連した機能的活性を１つ以上示すことができ
る。
【０２４２】 ＡＢＣ１誘導体は、機能的に等価な分子を提供する置換、付加、又は欠失によ
りコーディング核酸配列を改変することにより作成されうる。好ましくは、天然
ＡＢＣ１と比較して増強された、又は増加した機能的活性を有する誘導体が作成
される。又は、そのような誘導体は、本発明のＡＢＣ１ポリペプチドの天然リガ
ンドに対する同一又はより大きい親和性を有するＡＢＣ１細胞外ドメインの可溶
性断片をコードしうる。そのような可溶性誘導体は、ＡＢＣ１へのリガンド結合
の強力な阻害剤である場合がある。
【０２４３】 ヌクレオチドコーディング配列の縮重のため、ＡＢＣ１遺伝子と実質的に同一
のアミノ酸配列をコードする他のＤＮＡ配列が、本発明の実施において使用され
うる。これらには、限定はされないが、対立遺伝子、他の種由来の相同遺伝子、
及び配列内の同一アミノ酸残基をコードし、従ってサイレント変化を生じる異な
るコドンの置換により改変されたＡＢＣ１遺伝子の全部又は一部を含むヌクレオ
チド配列が含まれる。同様に、本発明のＡＢＣ１誘導体には、限定はされないが
、配列内の残基が保存的アミノ酸置換をもたらす機能的に等価なアミノ酸残基に
置換されている改変型配列を含むＡＢＣ１タンパク質のアミノ酸配列の全部又は
一部を、一次アミノ酸配列として含有するものが含まれる。例えば、配列内の１
個以上のアミノ酸残基は、サイレント改変をもたらす、機能的等価物として作用
する類似の極性を有するもう１つのアミノ酸により置換されうる。配列内のアミ
ノ酸の置換基は、そのアミノ酸が属するクラスの他のメンバーから選択されうる
。例えば、非極性（疎水性）アミノ酸には、アラニン、ロイシン、イソロイシン
、バリン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファン、及びメチオニンが含
まれる。芳香環構造を含有するアミノ酸は、フェニルアラニン、トリプトファン
、及びチロシンである。極性中性アミノ酸には、グリシン、セリン、トレオニン
、システイン、チロシン、アスパラギン、及びグルタミンが含まれる。正の電荷
を有する（塩基性）アミノ酸には、アルギニン、リジン、及びヒスチジンが含ま
れる。負の電荷を有する（酸性）アミノ酸には、アスパラギン酸及びグルタミン
酸が含まれる。そのような改変は、ポリアクリルアミドゲル電気泳動により決定
されるような見かけの分子量又は等電点に影響を与えないであろうと予想される
。
【０２４４】 特に好ましい置換は、 −正の電荷が維持されるような、ＬｙｓとＡｒｇとの置換； −負の電荷が維持されるような、ＧｌｕとＡｓｐとの置換； −遊離−ＯＨが維持されるような、ＳｅｒとＴｈｒとの置換；及び −遊離ＣＯＮＨ２が維持されるような、ＧｌｎとＡｓｎとの置換：である。
【０２４５】 特に好ましい特性を有するアミノ酸を置換するためのアミノ酸置換も、導入さ
れうる。例えば、Ｃｙｓは、もう１つのＣｙｓとのジスルフィド架橋のための可
能性のある部位に導入されうる。Ｈｉｓは、特に「触媒」部位として導入されう
る（即ち、Ｈｉｓは、酸又は塩基として作用することができ、生化学的触媒にお
ける最も一般的なアミノ酸である）。Ｐｒｏは、特に平面的な構造のため導入さ
れ、タンパク質の構造にｂ−ターンを誘導しうる。
【０２４６】 本発明のＡＢＣ１誘導体及び類似体をコードする遺伝子は、当分野において既
知の様々な方法により作製されうる。それらの作製をもたらす操作は、遺伝子又
はタンパク質のレベルで実施されうる。例えば、クローニングされたＡＢＣ１遺
伝子配列は、当分野において既知の多数の戦略のうちのいずれかにより修飾され
うる（Ｓａｍｂｒｏｏｋら、１９８９（前記））。配列は、（１個以上の）制限
エンドヌクレアーゼにより適当な部位で分解され、続いて所望によりさらなる酵
素的修飾を受け、単離され、そしてインビトロでライゲートさせられる。ＡＢＣ
１の誘導体及び類似体をコードする遺伝子の作製においては、修飾された遺伝子
が、所望の活性がコードされている遺伝子領域において、ＡＢＣ１遺伝子と同一
の翻訳リーディングフレーム内に維持されており、遺伝子翻訳終止シグナルによ
り中断されないことを保証するよう注意すべきである。
【０２４７】 さらに、ＡＢＣ１コーディング核酸は、インビトロ修飾を助長するため、翻訳
、開始、及び／もしくは終結配列が作出かつ／もしくは破壊されるよう、又はコ
ーディング領域に変動が作出され、かつ／もしくは新たな制限エンドヌクレアー
ゼ部位が形成されるか、もしくは既存のものが破壊されるよう、インビトロ又は
インビボで突然変異誘発されうる。好ましくは、そのような突然変異は、変異型
ＡＢＣ１遺伝子産物の機能的活性を増強する。これらに限定されないが、インビ
トロ部位特異的突然変異誘発（Ｈｕｔｃｈｉｎｓｏｎ，Ｃ．ら、１９７８；Ｚｏ
ｌｌｅｒ及びＳｍｉｔｈ、１９８４；Ｏｌｉｐｈａｎｔら、１９８６；Ｈｕｔｃ
ｈｉｎｓｏｎら、１９８６；Ｈｕｙｇｅｎら、１９９６）、ＴＡＢ（登録商標）
リンカー（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）の使用等を含む、当分野において既知の任意の
突然変異誘発技術が使用されうる。ＰＣＲ技術は、部位特異的突然変異誘発にと
って好ましい（Ｈｉｇｕｃｈｉ、１９８９、”Ｕｓｉｎｇ ＰＣＲ ｔｏ Ｅｎ
ｇｉｎｎｅｒ ＤＮＡ”ＰＣＲ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ
ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ＤＮＡ Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔ
ｉｏｎ、Ｈ．Ｅｒｌｉｃｈ編、Ｓｔｏｃｋｔｏｎ Ｐｒｅｓｓ、チャプター６、
６１〜７０頁参照）。
【０２４８】 同定された単離された遺伝子は、次いで、適当なクローニングベクターへと挿
入されうる。当分野において既知の多数のベクター−宿主系が使用されうる。可
能なベクターには、これらに限定されないが、プラスミド又は修飾型ウイルスが
含まれる。ただし、ベクター系は、使用される宿主細胞と適合性でなければなら
ない。ベクターの例には、これらに限定されないが、大腸菌、ラムダ誘導体のよ
うなバクテリオファージ、又はｐＢＲ３２２誘導体もしくはｐＵＣプラスミド誘
導体のようなプラスミド、例えばｐＧＥＸベクター、ｐｍａｌ−ｃ、ｐＦＬＡＧ
等が含まれる。クローニングベクターへの挿入は、例えば、ＤＮＡ断片を、相補
的な付着末端を有するクローニングベクターとライゲートすることにより達成さ
れうる。しかしながら、ＤＮＡを断片化するために使用された相補的制限部位が
クローニングベクターに存在しない場合には、ＤＮＡ分子の末端を酵素的に修飾
してもよい。又は、ヌクレオチド配列（リンカー）をＤＮＡ末端にライゲートす
ることにより所望の部位を作製してもよい。これらのライゲートしたリンカーは
、制限エンドヌクレアーゼ認識配列をコードする特異的化学合成オリゴヌクレオ
チドを含みうる。組換え分子は、多コピーの遺伝子配列が生成するよう、形質転
換、トランスフェクション、感染、電気穿孔等を介して宿主細胞へ導入されうる
。好ましくは、クローニングされた遺伝子は、シャトルベクタープラスミドに含
まれる。シャトルベクタープラスミドは、クローニング細胞、例えば大腸菌にお
ける増幅を提供し、その後の適当な発現細胞系への挿入が望まれる場合、その挿
入のための容易な精製を提供する。例えば、複数の型の生物において複製するこ
とができるベクターであるシャトルベクターは、大腸菌プラスミド由来の配列を
、酵母２ｍプラスミド由来の配列と連結することにより、大腸菌及びサッカロミ
セスセレビシエの両方での複製のため調製されうる。
【０２４９】 別法において、所望の遺伝子は、「ショットガン」法での適当なクローニング
ベクターへの挿入の後に同定され単離されうる。例えばサイズ分画による所望の
遺伝子の濃縮が、クローニングベクターへの挿入の前に実施されうる。
【０２５０】 ＡＢＣ１ポリペプチド、又はその抗原性断片、誘導体、もしくは類似体、又は
それのキメラタンパク質を含む機能的活性を有する誘導体をコードするヌクレオ
チド配列は、適当な発現ベクター、即ち挿入されたタンパク質コーディング配列
の転写及び翻訳に必要な因子を含有するベクターへと挿入されうる。そのような
因子は、本明細書において「プロモーター」と呼ばれる。従って、本発明の発現
ベクターにおいて、本発明のＡＢＣ１ポリペプチドをコードする核酸は、プロモ
ーターと機能的に関連している。ｃＤＮＡ及びゲノミック配列の両方が、そのよ
うな制御配列の調節下でクローニングされ発現されうる。発現ベクターは、好ま
しくは、複製開始点も含む。
【０２５１】 必要な転写及び翻訳のシグナルは、組換え発現ベクター上に提供されてもよい
し、又はＡＢＣ１をコードする天然遺伝子及び／もしくはその両側の領域により
供給されてもよい。
【０２５２】 可能性のある宿主−ベクター系には、これらに限定されないが、ウイルス（例
えば、ワクシニアウイルス、アデノウイルス等）が感染した哺乳動物細胞系；ウ
イルス（例えば、バキュロウイルス）が感染した昆虫細胞系；酵母ベクターを含
有する酵母のような微生物；又はバクテリオファージ、ＤＮＡ、プラスミドＤＮ
Ａ、もしくはコスミドＤＮＡで形質転換された細菌が含まれる。ベクターの発現
因子は、強度及び特異性に関して様々である。利用される宿主−ベクター系に応
じて、多数の適当な転写及び翻訳の因子のうちのいずれか１つが使用されうる。
【０２５３】 本発明の組換えＡＢＣ１タンパク質、又はその機能的断片、誘導体、キメラ構
築物、もしくは類似体は、組換えによるコーディング配列の取り込み後、染色体
で発現されうる。これに関して、高レベルの安定的な遺伝子発現を達成するため
、多数の増幅系のうちのいずれかが使用されうる（Ｓａｍｂｒｏｏｋら、１９８
９（前記）参照）。
【０２５４】 本発明に係るＡＢＣ１ポリペプチドをコードする核酸を含む組換えベクターが
導入された細胞は、細胞によるＡＢＣ１ポリペプチドの発現を提供する条件下で
、適当な細胞培養培地中で培養される。
【０２５５】 ＤＮＡ断片のクローニングベクターへの挿入のための以前に記載された方法の
うちのいずれかが、適当な転写／翻訳調節シグナル及びタンパク質コーディング
配列からなる遺伝子を含有する発現ベクターを構築するため使用されうる。これ
らの方法には、インビトロ組換えＤＮＡ技術及び合成技術、並びにインビボ組換
え（遺伝子組み換え）が含まれうる。
【０２５６】 ＡＢＣ１ポリペプチドの発現は、当分野において既知の任意のプロモーター／
エンハンサー因子により調節されうるが、これらの制御因子は、発現のため選択
された宿主において機能性でなければならない。ＡＢＣ１遺伝子発現を調節する
ために使用されうるプロモーターには、これらに限定されないが、ＳＶ４０初期
プロモーター領域（Ｂｅｎｏｉｓｔ及びＣｈａｍｂｏｎ、１９８１）、ラウス肉
腫ウイルスの３’ロングターミナルリピートに含まれるプロモーター（Ｙａｍａ
ｍｏｔｏら、１９８０）、ヘルペスチミジンキナーゼプロモーター（Ｗａｇｎｅ
ｒら、１９８１）、メタロチオネイン遺伝子の制御配列（Ｂｒｉｎｓｔｅｒら、
１９８２）；ｂ−ラクタマーゼプロモーター（Ｖｉｌｌａ−Ｋａｍａｒｏｆｆら
、１９７８）又はｔａｃプロモーター（ＤｅＢｏｅｒら、１９８３）（Ｓｉｅｎ
ｔｆｉｃ Ａｍｅｒｉｃａｎ、１９８０、２４２：７４−９４の「組換え細菌由
来の有用タンパク質（Ｕｓｅｆｕｌ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｆｒｏｍ ｒｅｃｏｍ
ｂｉｎａｎｔ ｂａｃｔｅｒｉａ）」も参照）のような原核生物発現ベクター；
Ｇａｌ４プロモーター、ＡＤＣ（アルコールデヒドロゲナーゼ）プロモーター、
ＰＧＫ（ホスホグリセロールキナーゼ）プロモーター、アルカリホスファターゼ
プロモーターのような酵母又はその他の真菌に由来するプロモーター因子；組織
特異性を示し、トランスジェニック動物において利用されている動物転写調節領
域：膵臓腺房細胞において活性を有するエラスターゼＩ遺伝子調節領域（Ｓｗｉ
ｆｔら、１９８４；Ｏｒｎｉｔｚら、１９８６；ＭａｃＤｏｎａｌｄ、１９８７
）；膵臓ベータ細胞において活性を有するインスリン遺伝子調節領域（Ｈａｎａ
ｈａｎ、１９８５）、リンパ細胞において活性を有する免疫グロブリン遺伝子調
節領域（Ｇｒｏｓｓｃｈｅｄｌら、１９８４；Ａｄａｍｅｓら、１９８５；Ａｌ
ｅｘａｎｄｅｒら、１９８７）、精巣細胞、乳房細胞、リンパ細胞、及び肥満細
胞において活性を有するマウス乳房腫瘍ウイルス調節領域（Ｌｅｄｅｒら、１９
８６）、肝臓において活性を有するアルブミン遺伝子調節領域（Ｐｉｎｋｅｒｔ
ら、１９８７）、肝臓において活性を有するアルファ−フェトプロテイン遺伝子
調節領域（Ｋｒｕｍｌａｕｆら、１９８５；Ｈａｍｍｅｒら、１９８７）、肝臓
において活性を有するアルファ１−アンチトリプシン遺伝子調節領域（Ｋｅｌｓ
ｅｙら、１９８７）、骨髄細胞において活性を有するベータ−グロビン遺伝子調
節領域（Ｍｏｇｒａｍら、１９８５；Ｋｏｌｌｉａｓら、１９８６）、脳内のオ
リゴデンドロサイト細胞において活性を有するミエリン塩基性タンパク質遺伝子
調節領域（Ｒｅａｄｈｅａｄら、１９８７）、骨格筋において活性を有するミオ
シン軽鎖−２遺伝子調節領域（Ｓａｎｉ、１９８５）、並びに視床下部において
活性を有する性腺刺激ホルモン放出ホルモン遺伝子調節領域（Ｍａｓｏｎら、１
９８６）が含まれる。
【０２５７】 本発明のＡＢＣ１ポリペプチドをコードする核酸を含有する発現ベクターは、
４つの一般的な手法により同定されうる。（ａ）所望のプラスミドＤＮＡ又は特
異的ｍＲＮＡのポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）増幅、（ｂ）核酸ハイブリダイ
ゼーション、（ｃ）選択マーカー遺伝子機能の存在又は欠如、（ｄ）適当な制限
エンドヌクレアーゼによる分析、及び（ｅ）挿入された配列の発現。第１の手法
において、核酸は、増幅産物の検出を提供するため、ＰＣＲにより増幅されうる
。第２の手法においては、発現ベクターに挿入された外来遺伝子の存在が、挿入
されたマーカー遺伝子と相同な配列を含むプローブを使用した核酸ハイブリダイ
ゼーションにより検出されうる。第３の手法においては、組換えベクター／宿主
系が、ベクターへの外来遺伝子の挿入により引き起こされた、ある種の「選択マ
ーカー」遺伝子機能（例えば、ｂ−ガラクトシダーゼ活性、チミジンキナーゼ活
性、抗生物質耐性、形質転換表現型、バキュロウイルスにおける封入体形成等）
の存在又は欠如に基づき同定され選択される。もう１つの例において、ＡＢＣ１
ポリペプチドをコードする核酸がベクターの「選択マーカー」遺伝子配列内に挿
入される場合には、ＡＢＣ１核酸挿入物を含有する組換え体が、ＡＢＣ１遺伝子
機能の欠如により同定されうる。第４の手法においては、組換え発現ベクターが
、適当な制限酵素による消化により同定される。第５の手法においては、発現タ
ンパク質が機能的活性を有するコンフォメーションをとっていることを条件とし
て、組換え発現ベクターが、組換えにより発現した遺伝子産物の活性、生化学的
、又は免疫学的特徴についてのアッセイにより同定されうる。
【０２５８】 多様な宿主／発現ベクターの組み合わせが、本発明の核酸を発現させるために
利用されうる。有用な発現ベクターは、例えば、染色体、非染色体、及び合成Ｄ
ＮＡ配列のセグメントからなりうる。適当なベクターには、ＳＶ４０の誘導体及
び既知の細菌プラスミド、例えば大腸菌プラスミドｃｏｌＥ１、ｐＣＲ１、ｐＢ
Ｒ３２２、ｐＭａｌ−Ｃ２、ｐＥＴ、ｐＧＥＸ（Ｓｍｉｔｈら、１９８８）、ｐ
ＭＢ９及びその誘導体、ＲＰ４のようなプラスミド；ファージＤＮＡ、例えばフ
ァージ１の多数の誘導体、例えばＮＭ９８９及びその他のファージＤＮＡ、例え
ばＭ１３及び繊維状一本鎖ファージＤＮＡ；２ｍプラスミド又はその誘導体のよ
うな酵母プラスミド；昆虫細胞又は哺乳動物細胞において有用なベクターのよう
な真核細胞において有用なベクター；ファージＤＮＡ又はその他の発現調節配列
を使用するよう修飾されたプラスミドのような、プラスミドとファージＤＮＡと
の組み合わせに由来するベクター等が含まれる。
【０２５９】 例えば、バキュロウイルス発現系においては、これらに限定されないが、ｐＶ
Ｌ９４１（ＢａｍＨＩクローニング部位；Ｓｕｍｍｅｒｓ）、ｐＶＬ１３９３（
ＢａｍＨＩ、ＳｍａＩ、ＸｂａＩ、ＥｃｏＲＩ、ＮｏｔＩ、ＸｍａＩＩＩ、Ｂｇ
ｌＩＩ、及びＰｓｔＩクローニング部位；Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、ｐＶＬ１３
９２（ＢｇｌＩＩ、ＰｓｔＩ、ＮｏｔＩ、ＸｍａＩＩＩ、ＥｃｏＲＩ、ＸｂａＩ
、ＳｍａＩ、及びＢａｍＨＩクローニング部位；Ｓｕｍｍｅｒｓ及びＩｎｖｉｔ
ｒｏｇｅｎ）、及びｐＢｌｕｅＢａｃＩＩＩ（青／白組換えスクリーニングが可
能なＢａｍＨＩ、ＢｇｌＩＩ、ＰｓｔＩ、ＮｃｏＩ、及びＨｉｎｄＩＩＩクロー
ニング部位；Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）のような非融合伝達ベクター、並びにこれ
らに限定されないが、ｐＡｃ７００（ＢａｍＨＩ及びＫｐｎＩクローニング部位
、ＢａｍＨＩ認識部位は開始コドンで開始する；Ｓｕｍｍｅｒｓ）、ｐＡｃ７０
１及びｐＡｃ７０２（ｐＡｃ７００と同一であるが、異なるリーディングフレー
ムを有する）、ｐＡｃ３６０（ポリヘドリン開始コドンの３６塩基対下流のＢａ
ｍＨＩクローニング部位；Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（１９５））、及びｐＢｌｕｅ
ＢａｃＨｉｓＡ、Ｂ、Ｃ（ＢａｍＨＩ、ＢｇｌＩＩ、ＰｓｔＩ、ＮｃｏＩ、及び
ＨｉｎｄＩＩＩクローニング部位、ＰｒｏＢｏｎｄ精製、及びプラークの青／白
組換えスクリーニングのためのＮ末端ペプチドを含む、３つの異なるリーディン
グフレーム；Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（２２０））のような融合伝達ベクターの両
方が使用されうる。
【０２６０】 本発明において使用されることが企図される哺乳動物発現ベクターには、ジヒ
ドロ葉酸レダクターゼ（ＤＨＦＲ）プロモーターのような誘導可能プロモーター
を有するベクター、例えばＤＨＦＲ発現ベクターを有する任意の発現ベクター、
又はｐＥＤ（ＰｓｔＩ、ＳａｌＩ、ＳｂａＩ、ＳｍａＩ、及びＥｃｏＲＩクロー
ニング部位、ベクターはクローニングされた遺伝子及びＤＨＦＲの両方を発現す
る；Ｋａｕｆｍａｎ、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃ
ｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、１６．１２（１９９１）参照）のようなＤＨＦＲ／
メトトレキサート共増幅ベクターが含まれる。又は、ｐＥＥ１４（ＨｉｎｄＩＩ
Ｉ、ＸｂａＩ、ＳｍａＩ、ＳｂａＩ、ＥｃｏＲＩ、ＢｃｌＩクローニング部位、
ベクターはグルタミンシンターゼ及びクローニングされた遺伝子を発現する；Ｃ
ｅｌｌｔｅｃｈ）のようなグルタミンシンセターゼ／メチオニンスルホキシイミ
ン共増幅ベクター。もう１つの実施形態においては、ｐＲＥＰ４（ＢａｍＨＩ、
ＳｆｉＩ、ＸｈｏＩ、ＮｏｔＩ、ＮｈｅＩ、ＨｉｎｄＩＩＩ、ＮｈｅＩ、Ｐｖｕ
ＩＩ、及びＫｐｎＩクローニング部位、構成性ＲＳＶ−ＬＴＲプロモーター、ハ
イグロマイシン選択可能マーカー；Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、ｐＣＥＰ４（Ｂａ
ｍＨＩ、ＳｆｉＩ、ＸｈｏＩ、ＮｏｔＩ、ＮｈｅＩ、ＨｉｎｄＩＩＩ、ＮｈｅＩ
、ＰｖｕＩＩ、及びＫｐｎＩクローニング部位、構成性ｈＣＭＶ極初期遺伝子、
ハイグロマイシン選択可能マーカー；Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、ｐＭＥＰ４（Ｋ
ｐｎＩ、ＰｖｕＩ、ＮｈｅＩ、ＨｉｎｄＩＩＩ、ＮｏｔＩ、ＸｈｏＩ、ＳｆｉＩ
、ＢａｍＨＩクローニング部位、誘導可能メタロチオネインＩＩａ遺伝子プロモ
ーター、ハイグロマイシン選択可能マーカー；Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、ｐＲＥ
Ｐ８（ＢａｍＨＩ、ＸｈｏＩ、ＮｏｔＩ、ＨｉｎｄＩＩＩ、ＮｈｅＩ、及びＫｐ
ｎＩクローニング部位、ＲＳＶ−ＬＴＲプロモーター、ヒスチジノール選択可能
マーカー；Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、ｐＲＥＰ９（ＫｐｎＩ、ＮｈｅＩ、Ｈｉｎ
ｄＩＩＩ、ＮｏｔＩ、ＸｈｏＩ、ＳｆｉＩ、及びＢａｍＨＩクローニング部位、
ＲＳＶ−ＬＴＲプロモーター、Ｇ４１８選択可能マーカー；Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅ
ｎ）、並びにｐＥＢＶＨｉｓ（ＲＳＶ−ＬＴＲプロモーター、ハイグロマイシン
選択可能マーカー、ＰｒｏＢｏｎｄ樹脂を介して精製可能な、エンテロキナーゼ
により分解されるＮ末端ペプチド；Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）のような、エプスタ
インバーウイルス（ＥＢＶ）の調節下でエピソーム発現を指図するベクターが使
用されうる。本発明において使用するための選択可能哺乳動物発現ベクターには
、ｐＲｃ／ＣＭＶ（ＨｉｎｄＩＩＩ、ＢｓｔＸＩ、ＮｏｔＩ、ＳｂａＩ、及びＡ
ｐａＩクローニング部位、Ｇ４１８選択；Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、ｐＲｃ／Ｒ
ＳＶ（ＨｉｎｄＩＩＩ、ＳｐｅＩ、ＢｓｔＸＩ、ＮｏｔＩ、ＸｂａＩクローニン
グ部位、Ｇ４１８選択；Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）等が含まれる。本発明に従い使
用するためのワクシニアウイルス哺乳動物発現ベクター（Ｋａｕｆｍａｎ、１９
９１（前記）参照）には、これらに限定されないが、ｐＳＣ１１（ＳｍａＩクロ
ーニング部位、ＴＫ及びｂ−ｇａｌ選択）、ｐＭＪ６０１（ＳａｌＩ、ＳｍａＩ
、ＡｆｌＩ、ＮａｒＩ、ＢｓｐＭＩＩ、ＢａｍＨＩ、ＡｐａＩ、ＮｈｅＩ、Ｓａ
ｃＩＩ、ＫｐｎＩ、及びＨｉｎｄＩＩＩクローニング部位；ＴＫ及びｂ−ｇａｌ
選択）、並びにｐＴＫｇｐｔＦ１Ｓ（ＥｃｏＲＩ、ＰｓｔＩ、ＳａｌＩ、Ａｃｃ
Ｉ、ＨｉｎｄＩＩ、ＳｂａＩ、ＢａｍＨＩ、及びＨｐａクローニング部位、ＴＫ
又はＸＰＲＴ選択）が含まれる。
【０２６１】 酵母発現系も、ＡＢＣ１ポリペプチドを発現させるため、本発明に従い使用さ
れうる。例えば、２つのみを挙げるとすれば、非融合ｐＹＥＳ２ベクター（Ｘｂ
ａＩ、ＳｐｈＩ、ＳｈｏＩ、ＮｏｔＩ、ＧｓｔＸＩ、ＥｃｏＲＩ、ＢｓｔＸＩ、
ＢａｍＨＩ、ＳａｃＩ、ＫｐｎＩ、及びＨｉｎｄＩＩＩクローニング部位；Ｉｎ
ｖｉｔｒｏｇｅｎ）又は融合ｐＹＥＳＨｉｓＡ、Ｂ、Ｃ（ＸｂａＩ、ＳｐｈＩ、
ＳｈｏＩ、ＮｏｔＩ、ＢｓｔＸＩ、ＥｃｏＲＩ、ＢａｍＨＩ、ＳａｃＩ、Ｋｐｎ
Ｉ、及びＨｉｎｄＩＩＩクローニング部位、ＰｒｏＢｏｎｄ樹脂により精製され
、エンテロキナーゼにより分解されるＮ末端ペプチド；Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）
が、本発明に従い利用されうる。
【０２６２】 特定の組換えＤＮＡ分子が同定され単離された後は、当分野において既知のい
くつかの方法を使用して、それを増幅することができる。適当な宿主系及び増殖
条件が確立された後、組換え発現ベクターは、大量に増幅され調製されうる。既
に説明したように、使用されうる発現ベクターには、これらに限定されないが、
いくつかを挙げるとすれば、以下のベクター又はそれらの誘導体が含まれる。ワ
クシニアウイルス又はアデノウイルスのようなヒト及び動物のウイルス；バキュ
ロウイルスのような昆虫ウイルス；酵母ベクター；バクテリオファージベクター
（例えば、ラムダ）、並びにプラスミド及びコスミドＤＮＡベクター。
【０２６３】 さらに、宿主細胞株は、挿入された配列の発現をモデュレートするか、又は所
望の特定の様式で遺伝子産物を修飾しプロセシングするものが選択されうる。異
なる宿主細胞は、タンパク質の翻訳中及び翻訳後のプロセシング及び修飾（例え
ば、グリコシル化、［例えば、シグナル配列の］分解）のための特徴的な特異的
なメカニズムを有する。適当な細胞系又は宿主系は、発現される外来タンパク質
の所望の修飾及びプロセシングを保証するよう選択されうる。例えば、細菌系に
おける発現は、非グリコシル化コアタンパク質産物を作製するために使用されう
る。しかしながら、細菌において発現された膜貫通ＡＢＣ１タンパク質は、適切
に折り畳まれていない可能性がある。酵母における発現は、グリコシル化産物を
産生しうる。真核細胞における発現は、異種タンパク質の「天然型」グリコシル
化及び折り畳みの可能性を増加させうる。さらに、哺乳動物細胞における発現は
、ＡＢＣ１活性を再構成又は構成するための道具を提供しうる。さらに、異なる
ベクター／宿主発現系は、異なる程度に、プロテアーゼ分解のようなプロセシン
グ反応に影響を与えうる。
【０２６４】 ベクターは、当分野において既知の方法、例えばトランスフェクション、電気
穿孔、微量注入、形質導入、細胞融合、ＤＥＡＥデキストラン、リン酸カルシウ
ム沈殿、リポフェクション（リポソーム融合）、遺伝子銃の使用、又はＤＮＡベ
クター輸送体（例えば、Ｗｕら、１９９２；Ｗｕ及びＷｕ、１９８８；Ｈａｒｔ
ｍｕｔら、１９９０年３月１５日出願のカナダ特許出願第２，０１２，３１１号
参照）により所望の宿主細胞に導入される。
【０２６５】 外因性又は異種のＤＮＡが細胞内に導入されている場合、その細胞は、そのよ
うなＤＮＡにより「トランスフェクト」されている。トランスフェクトされたＤ
ＮＡが表現型を変化させる場合、その細胞は、外因性又は異種のＤＮＡにより「
形質転換」されている。好ましくは、形質転換ＤＮＡは、細胞のゲノムを構成す
る染色体ＤＮＡへと組み込まれる（共有結合する）べきである。
【０２６６】 膜内在性タンパク質として発現される組換えマーカータンパク質は、標準的な
方法により単離され精製されうる。一般的に、膜内在性タンパク質は、これらに
限定されないがドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）、トリトンＸ−１００ポリオ
キシエチレンエステル、Ｉｐａｇｅｌ／ノニデットＰ−４０（ＮＰ−４０）（オ
クチルフェノキシ）−ポリエトキシエタノール、ジゴキシン、デオキシコール酸
ナトリウム等（それらの混合物を含む）のような界面活性剤により膜を溶解させ
ることにより得られる。可溶化は、懸濁液の超音波処理により増強されうる。可
溶型タンパク質は、培養液を収集するか、又は前記のような界面活性剤処理と、
所望により超音波処理又はその他の機械的方法により封入体を可溶化することに
より得られうる。可溶化された、又は可溶性のタンパク質は、ポリアクリルアミ
ドゲル電気泳動（ＰＡＧＥ）、等電点電気泳動、２次元ゲル電気泳動、クロマト
グラフィ（例えば、イオン交換、アフィニティ、イムノアフィニティ、及びサイ
ズ分画カラムクロマトグラフィ）、遠心分離、溶解度の差、免疫沈降、又はタン
パク質の精製のためのその他の任意の標準的な技術のような様々な技術を使用し
て単離されうる。
【０２６７】 又は、本発明に係る核酸又はベクターは、リポフェクションによりインビボ導
入されうる。過去１０年間に、インビトロでの核酸のカプセル化及びトランスフ
ェクションのためのリポソームの使用は増加した。リポソーム媒介トランスフェ
クションに伴う問題及び危険を制限するために設計された合成陽イオン性脂質は
、マーカーをコードする遺伝子のインビボトランスフェクションのためのリポソ
ームを調製するために使用されうる（Ｆｅｌｇｎｅｒら、１９８７；Ｍａｃｋｅ
ｙら、１９８８；Ｕｌｍｅｒら、１９９３）。陽イオン性脂質の使用は、負の電
荷を有する核酸のカプセル化を促進し、負の電荷を有する細胞膜との融合も促進
しうる（Ｆｅｌｇｎｅｒ及びＲｉｎｇｏｌｄ、１９８９）。核酸伝達のための特
に有用な脂質化合物及び組成物は、国際特許公開第ＷＯ９５／１８８６３号及び
第ＷＯ９６／１７８２３号、並びに米国特許第５，４５９，１２７号に記載され
ている。外因性遺伝子を特異的な臓器にインビボ導入するためのリポフェクショ
ンの使用は、いくつかの実用上の利点を有している。リポソームの特異的細胞へ
の分子ターゲティングは、有益な１つの分野となっている。特定の細胞型へのト
ランスフェクションの指図が、膵臓、肝臓、腎臓、及び脳のような細胞不均一性
を有する組織において特に好ましいであろうことは明らかである。脂質は、ター
ゲティングの目的のため、他の分子と化学的にカップリングされうる［Ｍａｃｋ
ｅｙら（前記）参照］。標的となるペプチド、例えばホルモンもしくは神経伝達
物質、及び抗体のようなタンパク質、又は非ペプチド分子は、化学的にリポソー
ムとカップリングされうる。
【０２６８】 陽イオン性オリゴペプチド（例えば、国際特許公開第ＷＯ９５／２１９３１号
）、ＤＮＡ結合タンパク質に由来するペプチド（例えば、国際特許公開第ＷＯ９
６／２５５０８号）、又は陽イオン性重合体（例えば、国際特許公開第ＷＯ９５
／２１９３１号）のようなその他の分子も、核酸のインビボトランスフェクショ
ンを助長するために有用である。
【０２６９】 裸のＤＮＡプラスミドとしてベクターをインビボ導入することも可能である（
米国特許第５，６９３，６２２号、第５，５８９，４６６号、及び第５，５８０
，８５９号参照）。遺伝子治療のための裸のＤＮＡプラスミドは、当分野におい
て既知の方法、例えばトランスフェクション、電気穿孔、微量注入、形質導入、
細胞融合、ＤＥＡＥデキストラン、リン酸カルシウム沈殿、遺伝子銃の使用、又
はＤＮＡベクター輸送体の使用（例えば、Ｗｕら、１９９２；Ｗｕ及びＷｕ、１
９８８；Ｈａｒｔｍｕｔら、１９９０年３月１５日出願のカナダ特許出願第２，
０１２，３１１号；Ｗｉｌｌｉａｍｓら、１９９１参照）により所望の宿主細胞
に導入されうる。受容体媒介ＤＮＡ輸送法も、使用されうる（Ｃｕｒｉｅｌら、
１９９２；Ｗｕ及びＷｕ、１９８７）。
【０２７０】 「薬学的に許容される媒体又は賦形剤」には、投与法のため薬学的に許容され
、無菌であり、適当な分散剤、又は湿潤剤、及び懸濁化剤を使用して製剤化され
た水性又は油性の懸濁液であってもよい希釈剤及び増量剤が含まれる。特定の薬
学的に許容される担体、及び活性化合物と担体との比率は、組成物の溶解度及び
化学的特性、特定の投与様式、並びに標準的な薬学的実務により決定される。
【０２７１】 本発明の核酸、ポリペプチド、ベクター、又は宿主細胞は、好ましくは、薬学
的に許容される媒体又は賦形剤に含まれてインビボ導入されよう。「薬学的に許
容される」という語句は、生理学的に容認され、ヒトへ投与された際に、典型的
にはアレルギー反応、又は胃の不調、眩暈等のような類似の都合の悪い反応を生
じない分子的実体及び組成物をさす。好ましくは、本明細書において使用される
ように、「薬学的に許容される」という用語は、動物、より具体的にはヒトにお
ける使用が、連邦政府又は州政府の規制機関により承認されているか、又は米国
薬局方もしくはその他の一般的に認められている薬局方に掲載されていることを
意味する。「賦形剤」という用語は、化合物と共に投与される希釈剤、佐剤、賦
形剤、又は媒体をさす。そのような薬学的担体は、水、及びピーナッツ油、大豆
油、鉱油、ゴマ油等のような石油、動物油、植物油、又は合成起源の油を含む油
のような無菌の液体でありうる。水、又は生理食塩水、デキストロース水溶液、
及びグリセロール水溶液のような水性溶液が、好ましくは、特に注射可能溶液の
ための賦形剤として使用される。適当な薬学的賦形剤は、Ｅ．Ｗ．Ｍａｒｔｉｎ
による「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎ
ｃｅｓ」に記載されている。
【０２７２】 当然、本発明は、遺伝子治療適用のための治療に有効な量のＡＢＣ１ポリペプ
チドを発現するであろうベクターの輸送を企図する。「治療に有効な量」という
語句は、本明細書において、宿主の活性、機能、及び応答の臨床的に有意な欠陥
を少なくとも約１５パーセント、好ましくは少なくとも５０パーセント、より好
ましくは少なくとも９０パーセント、減少させ、さらに好ましくは防止するため
に十分な量を意味するために使用される。又は、治療に有効な量とは、宿主にお
ける臨床的に有意な状態の改善を引き起こすために十分なものである。
【０２７３】 「脂質プロファイル」とは、ヒト又はその他の動物の体内のコレステロール、
トリグリセリド、リポタンパク質コレステロール、及びその他の脂質の濃度セッ
トを意味する。
【０２７４】 「望ましくない脂質プロファイル」とは、コレステロール、トリグリセリド、
リポタンパク質コレステロールの濃度が、年齢及び性別により調整された基準範
囲の外にある状態である。一般に、総コレステロール＞２００ｍｇ／ｄｌ、血漿
トリグリセリド＞２００ｍｇ／ｄｌ、ＬＤＬコレステロール＞１３０ｍｇ／ｄｌ
、ＨＤＬコレステロール＜３９ｍｇ／ｄｌの濃度、又は総コレステロールとＨＤ
Ｌコレステロールとの比率＞４．０が、望ましくない脂質プロファイルであると
見なされる。望ましくない脂質プロファイルは、高脂血症、糖尿病性高コレステ
ロール血症、動脈硬化、及びその他の形態の冠状動脈疾患を含む、多様な病理学
的状態と関連している。
【０２７５】 ＡＢＣ１遺伝子の核酸 ゲノミック配列 ヒトＡＢＣ１遺伝子は、特にマウスのオルソログＡＢＣ１遺伝子の構造を参照
した場合、４８個のエキソン及び４７個のイントロンを含むと考えられる。最近
、ＡＢＣ１ゲノミックＤＮＡのエキソン及びイントロンの一部が単離され同定さ
れた（Ｒｕｓｔら、１９９９）。本発明により、ヒトＡＢＣ１遺伝子は、４９個
のエキソン及び４８個のイントロンを含むことが示された。
【０２７６】 ＡＢＣ１遺伝子のゲノミックヌクレオチド配列のいくつかの部分が、本発明に
より単離され特徴決定された。これらのゲノミック配列は、試料中のＡＢＣ１遺
伝子又はそのヌクレオチド発現産物の様々な検出手段の作製のため特に使用され
うる新たなエキソン配列及びイントロン配列の両方を含む。これらの部分ゲノミ
ック配列を、表Ｉに表す。
【０２７７】
【表１】
【０２７８】 従って、本発明の第１の主題は、配列番号１及び４〜１７又は相補ポリヌクレ
オチド配列のうちのいずれか１つのヌクレオチド配列を含む核酸からなる。
【０２７９】 本発明は、ａ）配列番号１及び４〜８及び１１〜１６、もしくは相補ポリヌク
レオチド配列のうちのいずれか１つ、ｂ）配列番号９のヌクレオチド３１５４〜
３２００もしくは相補ポリヌクレオチド配列、又はｃ）配列番号１０のヌクレオ
チド１〜２４２もしくは相補ポリヌクレオチド配列；ｄ）配列番号１７のヌクレ
オチド１〜１８５１もしくは相補ポリヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド
配列の少なくとも８個の連続ヌクレオチドを含む核酸にも関する。
【０２８０】 本発明の主題は、さらに、ａ）配列番号１及び４〜８及び１１〜１６、もしく
は相補ポリヌクレオチド配列のうちのいずれか１つ、ｂ）配列番号９のヌクレオ
チド３１５４〜３２００もしくは相補ポリヌクレオチド配列、又はｃ）配列番号
１０のヌクレオチド１〜２４２もしくは相補ポリヌクレオチド配列；ｄ）配列番
号１７のヌクレオチド１〜１８５１もしくは相補ポリヌクレオチド配列を含む核
酸との少なくとも８０％のヌクレオチド同一性を有する核酸である。
【０２８１】 本発明は、ａ）配列番号１及び４〜８及び１１〜１６、もしくは相補ポリヌク
レオチド配列のうちのいずれか１つ、ｂ）配列番号９のヌクレオチド３１５４〜
３２００もしくは相補ポリヌクレオチド配列、又はｃ）配列番号１０のヌクレオ
チド１〜２４２もしくは相補ポリヌクレオチド配列；ｄ）配列番号１７のヌクレ
オチド１〜１８５１もしくは相補ポリヌクレオチド配列を含む核酸との少なくと
も８５％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％、さらに好ましくは９８％
のヌクレオチド同一性を有する核酸にも関する。
【０２８２】 本発明は、ａ）配列番号１及び４〜８及び１１〜１６、もしくは相補ポリヌク
レオチド配列のうちのいずれか１つ、ｂ）配列番号９のヌクレオチド３１５４〜
３２００もしくは相補ポリヌクレオチド配列、又はｃ）配列番号１０のヌクレオ
チド１〜２４２もしくは相補ポリヌクレオチド配列；ｄ）配列番号１７のヌクレ
オチド１〜１８５１もしくは相補ポリヌクレオチド配列を含む核酸と、高ストリ
ンジェンシー条件下でハイブリダイズする核酸にも関する。 ＡＢＣ１遺伝子のいくつかのエキソンが、ヌクレオチド配列により少なくとも部
分的に特徴決定されており、それを表ＩＩに示す。
【０２８３】
【表２】
【０２８４】 従って、本発明は、配列番号１８〜３６又は相補ポリヌクレオチド配列のうち
のいずれか１つを含む核酸にも関する。
【０２８５】 本発明は、配列番号１８〜３６又は相補ポリヌクレオチド配列のうちのいずれ
か１つに示されるようなポリヌクレオチド配列を含む核酸にも関する。
【０２８６】 本発明は、ａ）配列番号１８〜２６及び２８〜３５もしくは相補ポリヌクレオ
チド配列のうちのいずれか１つ、ｂ）配列番号２７のヌクレオチド１５２〜１９
８もしくは相補ポリヌクレオチド配列、又はｃ）配列番号３６のヌクレオチド１
〜１６５７もしくは相補ポリヌクレオチド配列の少なくとも８個の連続ヌクレオ
チドを含む核酸にも関する。
【０２８７】 本発明の主題は、さらに、ａ）配列番号１８〜２６及び２８〜３５もしくは相
補ポリヌクレオチド配列のうちのいずれか１つ、ｂ）配列番号２７のヌクレオチ
ド１５２〜１９８もしくは相補ポリヌクレオチド配列、又はｃ）配列番号３６の
ヌクレオチド１〜１６５７もしくは相補ポリヌクレオチド配列を含む核酸との少
なくとも８０％のヌクレオチド同一性を有する核酸である。
【０２８８】 本発明は、ａ）配列番号１８〜２６及び２８〜３５もしくは相補ポリヌクレオ
チド配列のうちのいずれか１つ、ｂ）配列番号２７のヌクレオチド１５２〜１９
８もしくは相補ポリヌクレオチド配列、又はｃ）配列番号３６のヌクレオチド１
〜１６５７もしくは相補ポリヌクレオチド配列を含む核酸との少なくとも８５％
、好ましくは９０％、より好ましくは９５％、さらに好ましくは９８％のヌクレ
オチド同一性を有する核酸にも関する。
【０２８９】 本発明は、ａ）配列番号１８〜２６及び２８〜３５もしくは相補ポリヌクレオ
チド配列のうちのいずれか１つ、ｂ）配列番号２７のヌクレオチド１５２〜１９
８もしくは相補ポリヌクレオチド配列、又はｃ）配列番号３６のヌクレオチド１
〜１６５７もしくは相補ポリヌクレオチド配列を含む核酸と、高ストリンジェン
シー条件下でハイブリダイズする核酸にも関する。
【０２９０】 さらに、ＡＢＣ１遺伝子のいくつかのイントロンが、少なくとも部分的に単離
され、特徴決定された。ＡＢＣ１遺伝子のイントロン核酸、並びにそれらの断片
及び異型も、試料中の少なくとも１コピーのＡＢＣ１遺伝子の存在を検出するた
め、又はＡＢＣ１遺伝子内の特定の標的配列を増幅するためのヌクレオチドプロ
ーブ又はプライマーとして使用されうる。
【０２９１】 ＡＢＣ１遺伝子のイントロン核酸配列を、表ＩＩＩに示す。
【０２９２】
【表３】
【０２９３】 従って、本発明は、配列番号３７〜６５、６８、及び１３７又は相補ポリヌク
レオチド配列のうちのいずれか１つのポリヌクレオチド配列を含む核酸にも関す
る。
【０２９４】 本発明は、配列番号３７〜６５、６８、及び１３７又は相補ポリヌクレオチド
配列のうちのいずれか１つに示されるようなポリヌクレオチド配列を含む核酸に
も関する。
【０２９５】 本発明は、ａ）配列番号３７〜６５、６８、及び１３７もしくは相補ポリヌク
レオチド配列のうちのいずれか１つ、又はｂ）配列番号５３のヌクレオチド１〜
２４２もしくは相補ポリヌクレオチド配列の少なくとも８個の連続ヌクレオチド
を含む核酸にも関する。
【０２９６】 本発明の主題は、さらに、ａ）配列番号３７〜６５、６８、及び１３７もしく
は相補ポリヌクレオチド配列のうちのいずれか１つ、又はｂ）配列番号５３のヌ
クレオチド１〜２４２もしくは相補ポリヌクレオチド配列を含む核酸との少なく
とも８０％のヌクレオチド同一性を有する核酸である。
【０２９７】 本発明は、ａ）配列番号３７〜６５、６８、及び１３７もしくは相補ポリヌク
レオチド配列のうちのいずれか１つ、又はｂ）配列番号５３のヌクレオチド１〜
２４２もしくは相補ポリヌクレオチド配列を含む核酸との少なくとも８５％、好
ましくは９０％、より好ましくは９５％、さらに好ましくは９８％のヌクレオチ
ド同一性を有する核酸にも関する。
【０２９８】 本発明は、ａ）配列番号３７〜６５、６８、及び１３７もしくは相補ポリヌク
レオチド配列のうちのいずれか１つ、又はｂ）配列番号５３のヌクレオチド１〜
２４２もしくは相補ポリヌクレオチド配列を含む核酸と、高ストリンジェンシー
条件下でハイブリダイズする核酸にも関する。
【０２９９】 全長ＡＢＣ１タンパク質をコードするｃＤＮＡ分子 既に示したように、ヒトＡＢＣ１遺伝子に対応する部分ｃＤＮＡ配列が、Ｌａ
ｎｇｍａｎｎら（１９９９）により同定されている。このＡＢＣ１の部分ｃＤＮ
Ａ配列は、６８８０ヌクレオチドからなり、コレステロール逆輸送と関連した障
害に罹患していない対象において産生された部分的な２２０１アミノ酸（ａａ）
ＡＢＣ１ポリペプチドに対応する６６０３ヌクレオチドのオープンリーディング
フレームを含有する。Ｌａｎｇｍａｎｎら（１９９９）により記載されたｃＤＮ
Ａ配列は、さらに、５’非翻訳領域（ＵＴＲ）の一部（ヌクレオチド１〜１２０
）及び３’ＵＴＲの一部（ヌクレオチド６７２７〜６８８０）を含有する。
【０３００】 最近、ヒトＡＢＣ１ ｃＤＮＡの３’−ＵＴＲのさらなる部分が単離され同定
された（Ｒｕｓｔら、１９９９）。
【０３０１】 全長ヒトＡＢＣ１タンパク質をコードするｃＤＮＡは、本発明により同定され
た（実施例２参照）。この新規なヒトＡＢＣ１ ｃＤＮＡ（配列番号６９）は、
２４４個の付加的な５’ヌクレオチド及び真の開始ＡＴＧコドンを含む、新たに
同定された５’領域を含む。本発明によると、新規なヒトＡＢＣ１ ｃＤＮＡは
、Ｌａｎｇｍａｎｎら（１９９９）により以前に報告されたものよりも大きいオ
ープンリーディングフレームを含む。特に、この本発明のｃＤＮＡ核酸分子は、
全長ヒトＡＢＣ１タンパク質のＮ末端に６０個の付加的なアミノ酸をコードして
いる。さらに、この新規な本発明のｃＤＮＡ分子は、新たに同定された５’ＵＴ
Ｒを含んでいる。
【０３０２】 全長ＡＢＣ１タンパク質の特異的活性がインビトロで試験され、全長ＡＢＣ１
タンパク質が、細胞脂質流出を促進する能力を有することが証明された。実際、
下記の実施例１６及び図４〜７に提示された結果は、アポリポタンパク質が、全
長ＡＢＣ１タンパク質でトランスフェクトされた細胞におけるコレステロール及
びリン脂質の流出を有意に増加させることを示している。対照的に、ＨＤＬ及び
ホスファチジルコリンは、全長ＡＢＣ１タンパク質でトランスフェクトされた細
胞におけるコレステロール流出を、全く、又は部分的にしか媒介しない。
【０３０３】 これらの結果は、アポリポタンパク質が、ＡＢＣ１により媒介されるコレステ
ロール及びリン脂質の流出のためのアクセプタであることを示していると考えら
れる。さらに、図７は、ａｐｏＡ−Ｉ及びＡ−ＩＩの、全長ＡＢＣ１でトランス
フェクトされた細胞への特異的結合を明確に証明しており、それにより、全長Ａ
ＢＣ１タンパク質がアポリポタンパク質との直接相互作用を介して作用すること
、及びこれらの相互作用がアポリポタンパク質及び全長ＡＢＣ１タンパク質によ
り助長される脂質流出に必要であるを示唆している。従って、インビボでは肝臓
及び腸由来のアポリポタンパク質が循環血中に存在し、細胞表面上の全長ＡＢＣ
１タンパク質と相互作用して末梢細胞からの脂質流出を動員することが認知され
うる。
【０３０４】 特に、配列番号６９のポリヌクレオチド配列を有するヒトＡＢＣ１遺伝子のｃ
ＤＮＡ分子は、１８５位のヌクレオチド（翻訳開始のためのＡＴＧコドンの塩基
Ａ）から６９６７位のヌクレオチドまでのオープンリーディングフレームを含む
。配列番号６９の９６９８位のヌクレオチドから開始するポリアデニル化シグナ
ル（配列ＡＴＴＡＡＡを有する）が存在する。本発明によると、配列番号６９を
含むＡＢＣ１ ｃＤＮＡは、配列番号７１のアミノ酸配列を含む２２６１アミノ
酸からなる全長ＡＢＣ１ポリペプチドをコードする。
【０３０５】 従って、本発明は、配列番号６９又は相補ポリヌクレオチド配列を含む核酸に
も関する。
【０３０６】 本発明は、配列番号６９又は相補ポリヌクレオチド配列に示されるようなポリ
ヌクレオチド配列を含む核酸にも関する。
【０３０７】 本発明は、配列番号６９のヌクレオチド１〜２４４又は相補ポリヌクレオチド
配列を含む核酸にも関する。
【０３０８】 本発明は、配列番号６９のヌクレオチド１〜２４４又は相補ポリヌクレオチド
配列の少なくとも８個の連続ヌクレオチドを含む核酸にも関する。
【０３０９】 配列番号６９のヌクレオチド１〜２４４を含む核酸又は相補ポリヌクレオチド
配列を有する核酸との少なくとも８０％のヌクレオチド同一性を有する核酸も、
本発明の主題である。
【０３１０】 本発明は、配列番号６９のヌクレオチド１〜２４４を含む核酸又は相補ポリヌ
クレオチド配列を有する核酸との少なくとも８５％、好ましくは９０％、より好
ましくは９５％、さらに好ましくは９８％のヌクレオチド同一性を有する核酸に
も関する。
【０３１１】 本発明のもう１つの主題は、配列番号６９のヌクレオチド１〜２４４を含む核
酸又は相補ポリヌクレオチド配列を有する核酸と、高ストリンジェンシー条件下
でハイブリダイズする核酸である。
【０３１２】 ＧｅｎＢａｎｋデータベース（ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ）
の検索により、ＥＳＴのヌクレオチド１１４〜２９２が配列番号６９のヌクレオ
チド１〜１７９と重複している正常化乳児脳由来の登録番号Ｚ４４３７７の発現
遺伝子配列断片（ＥＳＴ）が明らかになった。本発明に係るｃＤＮＡが同定され
るまで、ＥＳＴとＡＢＣ１との関係は不明であった。従って、このＥＳＴは、ヒ
トＡＢＣ１ ｃＤＮＡの付加的な５’ＵＴＲヌクレオチドを表す。
【０３１３】 従って、本発明は、ＥＳＴ（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｚ４４３７７）のヌクレ
オチド１〜１１３及びＡＢＣ１ ｃＤＮＡ分子のヌクレオチド１〜９７４１（配
列番号６９）を含むｃＤＮＡ分子にも関する。この第２のｃＤＮＡ分子は、配列
番号７０のヌクレオチド配列を含む。この第２のｃＤＮＡ分子のＯＲＦは、配列
番号７０のヌクレオチド２９８からヌクレオチド７０８０に位置しており、ポリ
アデニル化シグナル（配列ＡＴＴＡＡＡを有する）が、配列番号７０のヌクレオ
チド９８１１以降に位置している。配列番号７０を含む核酸も、配列番号７１の
アミノ酸配列を含む全長ヒトＡＢＣ１タンパク質をコードする。
【０３１４】 従って、本発明は、配列番号７０又は相補ポリヌクレオチド配列を含む核酸に
も関する。
【０３１５】 本発明は、配列番号７０又は相補ポリヌクレオチド配列に示されるようなポリ
ヌクレオチド配列を含む核酸にも関する。
【０３１６】 本発明は、配列番号７０のヌクレオチド１〜３５７又は相補ポリヌクレオチド
配列を含む核酸にも関する。
【０３１７】 本発明は、配列番号７０のヌクレオチド１〜３５７又は相補ポリヌクレオチド
配列の少なくとも８個の連続ヌクレオチドを含む核酸にも関する。
【０３１８】 配列番号７０のヌクレオチド１〜３５７又は相補ポリヌクレオチド配列を含む
核酸との少なくとも８０％のヌクレオチド同一性を有する核酸も、本発明の主題
である。
【０３１９】 本発明は、配列番号７０のヌクレオチド１〜３５７又は相補ポリヌクレオチド
配列を含む核酸との少なくとも８５％、好ましくは９０％、より好ましくは９５
％、さらに好ましくは９８％のヌクレオチド同一性を有する核酸にも関する。
【０３２０】 本発明のもう１つの主題は、配列番号７０のヌクレオチド１〜３５７を含む核
酸又は相補ポリヌクレオチド配列を有する核酸と、高ストリンジェンシー条件下
でハイブリダイズする核酸である。
【０３２１】 本発明によると、配列番号６９又は配列番号７０のいずれかのポリヌクレオチ
ド配列を含む核酸は、配列番号７１のアミノ酸配列を含む２２６１アミノ酸から
なる全長ヒトＡＢＣ１ポリペプチドをコードする。
【０３２２】 従って、本発明は、配列番号７１のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコード
する核酸にも関する。
【０３２３】 本発明は、配列番号７１に示されるようなアミノ酸配列を含むポリペプチドを
コードする核酸にも関する。
【０３２４】 特定の実施形態において、本発明は、配列番号７１のアミノ酸１〜６０を含む
ポリペプチドをコードする核酸にも関する。
【０３２５】 本発明は、配列番号７１のアミノ酸配列を含むポリペプチドにも関する。
【０３２６】 本発明は、配列番号７１に示されるようなアミノ酸配列を含むポリペプチドに
も関する。
【０３２７】 本発明は、配列番号７１のアミノ酸１〜６０を含むポリペプチドに関する。
【０３２８】 本発明は、配列番号７１のアミノ酸１〜６０を含むアミノ酸配列を含むポリペ
プチド又はそのペプチド断片との少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するア
ミノ酸配列を含むポリペプチドにも関する。
【０３２９】 本発明は、配列番号７１のアミノ酸１〜６０を含むアミノ酸配列を含むポリペ
プチドとの少なくとも８５％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％、さら
に好ましくは９８％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドにも関する。
【０３３０】 好ましくは、本発明に係るポリペプチドは、本発明に係るポリペプチドの１５
個、１８個、又は２０個〜２５個、３５個、４０個、５０個、７０個、８０個、
１００個、又は２００個の長さの連続アミノ酸を有するであろう。 又は、本発明に係るポリペプチドは、本発明に係るポリペプチド、より具体的に
は配列番号７１のアミノ酸１〜６０を含むアミノ酸配列を含むポリペプチドの１
５個、１８個、２０個、２５個、３５個、４０個、５０個、１００個、又は２０
０個の長さの連続アミノ酸を有する断片を含むであろう。
【０３３１】 ＡＢＣ１遺伝子の多型 突然変異 ＡＢＣ１遺伝子の突然変異の分析は、数人が早発性冠状動脈疾患を含むタンジア
ー及び／又はＦＨＤ病に罹患している家族に属する数個体からのゲノミックＤＮ
Ａに対して実施されうる。本発明により、いくつかの突然変異が、ＡＢＣ１遺伝
子のＡＢＣ１ポリペプチドをコードする領域に同定された。これらの突然変異は
、重篤な冠状動脈疾患と関連した重度型のタンジアー病に罹患した患者において
特に見出された。１７個の突然変異が表ＩＶに記載されている。各変異型配列に
ついて、野生型（ＷＴ）配列の突然変異が、表ＩＶに示されている。
【０３３２】
【表４】
【０３３３】 変異型ＡＢＣ１配列（ゲノミック配列、メッセンジャーＲＮＡ、ｃＤＮＡ）か
ら正常配列を識別することを可能にする構造的特徴を、試料中の変異型ＡＢＣ１
配列の検出手段、特に変異型ＡＢＣ１配列と特異的にハイブリダイズするプロー
ブ、又はＡＢＣ１遺伝子の前記の突然変異を保持する領域を選択的に増幅するこ
とを可能にするプライマー対を作製するため活用することが可能であり、特に、
増幅された核酸断片の長さを区別することにより、前記の特異的プローブを利用
した増幅された断片のハイブリダイゼーションにより、又はこれらの増幅された
断片の直接配列決定により、これらの変異の存在の検出を実施することが可能で
ある。
【０３３４】 従って、本発明は、配列番号７２〜８８のうちのいずれか１つ又は相補ポリヌ
クレオチド配列を含む核酸に関する。
【０３３５】 本発明は、配列番号７２〜８８又は相補ポリヌクレオチド配列のうちのいずれ
か１つに示されるようなポリヌクレオチド配列を含む核酸にも関する。
【０３３６】 本発明のさらなる主題は、配列番号８９〜１０２のうちのいずれか１つのアミ
ノ酸配列を含むポリペプチドをコードする核酸である。
【０３３７】 本発明は、配列番号８９〜１０２のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む
ポリペプチドにも関する。
【０３３８】 その他の多型 その他の多型、特に非コーディング領域（イントロン）に位置するヌクレオチ
ド置換が、ＡＢＣ１遺伝子に見出された。ＡＢＣ１遺伝子内に同定された８個の
多型をそれぞれ表Ｖに表す。表Ｖは、野生型（ＷＴ）対立遺伝子及び変異型対立
遺伝子を示しており、多型自体は、各対立遺伝子にそれぞれ対応する２つのヌク
レオチド配列により定義される。
【０３３９】
【表５】
【０３４０】 もう１つの態様によると、本発明は、表Ｖに記載されるような少なくとも１個
の二対立遺伝子多型を含むヌクレオチド配列を含むＡＢＣ１遺伝子の核酸にも関
する。
【０３４１】 従って、本発明は、配列番号１０３及び１０９〜１１８又は相補ポリヌクレオ
チド配列のうちのいずれか１つを含む核酸に関する。
【０３４２】 本発明は、配列番号１０３及び１０９〜１１８又は相補ポリヌクレオチド配列
に示されるようなヌクレオチド配列を含む核酸にも関する。
【０３４３】 対象から得られたＤＮＡ試料の中のこれらのＡＢＣ１遺伝子多型の検出は、例
えば、多型塩基を含有するＡＢＣ１のヌクレオチド領域を特異的に増幅し、次い
で該対象が保持する１個以上の対立遺伝子の性質を決定するため増幅された断片
を配列決定することにより、実施されうる。 対象から得られたＤＮＡ試料の中のこれらの多型の検出は、本発明に係るＡＢＣ
１遺伝子の多型の多型塩基のうちの１つを含有する特定の対立遺伝子と特異的に
ハイブリダイズするヌクレオチドプローブ又はプライマーを利用しても実施され
うる。
【０３４４】 例えば、適当なヌクレオチドプライマーは、例えば、３’末端が該多型を含む
断片の多型塩基の５’側に隣接している塩基とハイブリダイズするようなプライ
マーである。特異的プライマーのハイブリダイゼーション工程の後、例えば蛍光
によりディファレンシャルに標識された、該多型の多型塩基と相補的な２つのジ
デオキシヌクレオチドの混合物を用いた伸長の工程、及び得られた蛍光シグナル
の検出の工程は、２つのディファレンシャルに標識された蛍光ジデオキシヌクレ
オチドのうちのどちらが取り込まれているかを決定し、この多型のレベルで存在
する多型塩基の性質を直接的に推定することを可能にする。
【０３４５】 ジデオキシヌクレオチドの標識及び検出には、様々な手段が使用されうる。Ｆ
ＲＥＴ（「蛍光共鳴エネルギー転移」）に基づく均一相での方法は、Ｃｈｅｎ及
びＫｗｏｋ（１９９７）により記載されている。この方法によると、多型を含有
するゲノミックＤＮＡの増幅された断片が、標識ジデオキシヌクレオチド三リン
酸及び修飾型Ｔａｑポリメラーゼの存在下で、５’末端がフルオレセインで標識
されたプライマーと共にインキュベートされる。標識されたプライマーは、相補
ゲノミックＤＮＡ配列上に存在する対立遺伝子に特異的な標識されたジデオキシ
ヌクレオチドの取り込みにより一塩基ずつ伸長される。この遺伝子型決定反応の
終了時、標識されたジデオキシヌクレオチドについての２つの標識化合物の蛍光
強度が、分離又は精製することなく、直接的に分析される。これらの工程は全て
同一チューブ内で実施され、蛍光シグナルの修飾がリアルタイムでモニターされ
うる。もう１つの実施形態によると、伸長したプライマーは、ＭＡＬＤＩ−ＴＯ
Ｆ型質量分析により分析されうる。多型部位のレベルで位置する塩基が、微量配
列決定プライマーに追加された質量を測定することにより同定される（Ｈａｆｆ
及びＳｍｉｒｎｏｖ、１９９７）。
【０３４６】 そのようなヌクレオチドプライマーは、例えば、支持体上に固定化されうる。
さらに、本発明に係るＡＢＣ１遺伝子の多型のうちの１つの検出に適している前
記の特異的プライマーを複数個、順に、支持体上に固定化することが可能である
。
【０３４７】 本発明に係るＡＢＣ１遺伝子の多型は、特に、対象における特定の対立遺伝子
の存在と、特定の病理、特に好ましくはコレステロール逆輸送の機能障害と関連
した病理を含む染色体領域９ｑ３１と関連した病理の１つに対するこの対象の素
因との関連の研究における遺伝学的マーカーとして有用である。
【０３４８】 複合形質（表現型）の遺伝学的分析のための方法には、様々な型がある（Ｌａ
ｎｄｅｒ及びＳｃｈｏｒｋ、１９９４）。一般に、本発明に係る二対立遺伝子多
型は、遺伝子型と表現型との間の統計的に有意な相関を証明することを目的とす
る当分野において記載されている方法において有用である。二対立遺伝子多型は
、連鎖分析及び対立遺伝子共有法において使用されうる。好ましくは、本発明に
係る二対立遺伝子多型は、その形質に罹患していない家族の使用を必要とせず、
さらに複雑かつ散発的な形質と関連した遺伝子の同定を可能にする手法である関
連研究のため、使用されている検出可能な形質（表現型）と関連した遺伝子を同
定するために使用される。
【０３４９】 本発明に係る二対立遺伝子多型を使用したその他な統計学的方法は、例えば、
Ｆｏｒｓｅｌｌら（１９９７）、Ｘｉｏｎｇら（１９９９）、Ｈｏｒｖａｔｈら
（１９９８）、Ｓｈａｍら（１９９５）、又はＮｉｃｋｅｒｓｏｎら（１９９２
）により記載されているものである。
【０３５０】 ヌクレオチドプローブ及びプライマー 本発明に係る核酸（ゲノミックＤＮＡ、メッセンジャーＲＮＡ、ｃＤＮＡ）と
ハイブリダイズするヌクレオチドプローブ及びプライマーも、本発明の一部を形
成する。
【０３５１】 本発明によると、ａ）配列番号１、４〜８、１１〜１６、１８〜２６、２８〜
３５、３７〜５２、５４〜６５、６８、及び１３７、もしくは相補ポリヌクレオ
チド配列のうちのいずれか１つ；ｂ）配列番号９のヌクレオチド３１５４〜３２
００もしくは相補ポリヌクレオチド配列；ｃ）配列番号１０のヌクレオチド１〜
２４２もしくは相補ポリヌクレオチド配列；ｄ）配列番号１７のヌクレオチド１
〜１８５１もしくは相補ポリヌクレオチド配列；ｅ）配列番号２７のヌクレオチ
ド１５２〜１９８もしくは相補ポリヌクレオチド配列；ｆ）配列番号３６のヌク
レオチド１〜１６５７もしくは相補ポリヌクレオチド配列；ｇ）配列番号５３の
ヌクレオチド１〜２４２もしくは相補ポリヌクレオチド配列、又はｈ）配列番号
６９のヌクレオチド１〜２４４もしくは配列番号７０のヌクレオチド１〜３５７
もしくは相補ポリヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドに由来する核酸断片
は、試料中のＡＢＣ１遺伝子のヌクレオチド配列、又はその断片もしくは異型（
突然変異もしくは多型を含む）、少なくとも１コピーの存在の検出に有用である
。
【０３５２】 本発明に係るヌクレオチドプローブ及びプライマーは、ａ）配列番号１、４〜
８、１１〜１６、１８〜２６、２８〜３５、３７〜５２、５４〜６５、６８、及
び１３７、もしくは相補ポリヌクレオチド配列のうちのいずれか１つ；ｂ）配列
番号９のヌクレオチド３１５４〜３２００もしくは相補ポリヌクレオチド配列；
ｃ）配列番号１０のヌクレオチド１〜２４２もしくは相補ポリヌクレオチド配列
；ｄ）配列番号１７のヌクレオチド１〜１８５１もしくは相補ポリヌクレオチド
配列；ｅ）配列番号２７のヌクレオチド１５２〜１９８もしくは相補ポリヌクレ
オチド配列；ｆ）配列番号３６のヌクレオチド１〜１６５７もしくは相補ポリヌ
クレオチド配列；ｇ）配列番号５３のヌクレオチド１〜２４２もしくは相補ポリ
ヌクレオチド配列、又はｈ）配列番号６９のヌクレオチド１〜２４４もしくは配
列番号７０のヌクレオチド１〜３５７もしくは相補ポリヌクレオチド配列を含む
ヌクレオチド配列を含む。
【０３５３】 本発明に係るヌクレオチドプローブ及びプライマーは、ａ）配列番号１、４〜
８、１１〜１６、１８〜２６、２８〜３５、３７〜５２、５４〜６５、６８、及
び１３７、もしくは相補ポリヌクレオチド配列のうちのいずれか１つ；ｂ）配列
番号９のヌクレオチド３１５４〜３２００もしくは相補ポリヌクレオチド配列；
ｃ）配列番号１０のヌクレオチド１〜２４２もしくは相補ポリヌクレオチド配列
；ｄ）配列番号１７のヌクレオチド１〜１８５１もしくは相補ポリヌクレオチド
配列；ｅ）配列番号２７のヌクレオチド１５２〜１９８もしくは相補ポリヌクレ
オチド配列；ｆ）配列番号３６のヌクレオチド１〜１６５７もしくは相補ポリヌ
クレオチド配列；ｇ）配列番号５３のヌクレオチド１〜２４２もしくは相補ポリ
ヌクレオチド配列、又はｈ）配列番号６９のヌクレオチド１〜２４４もしくは配
列番号７０のヌクレオチド１〜３５７もしくは相補ポリヌクレオチド配列を含む
核酸の少なくとも８個の連続ヌクレオチドを含む。
【０３５４】 好ましくは、本発明に係るヌクレオチドプローブ及びプライマーは、本発明に
係る核酸、特にａ）配列番号１、４〜８、１１〜１６、１８〜２６、２８〜３５
、３７〜５２、５４〜６５、６８、及び１３７、もしくは相補ポリヌクレオチド
配列のうちのいずれか１つ；ｂ）配列番号９のヌクレオチド３１５４〜３２００
もしくは相補ポリヌクレオチド配列；ｃ）配列番号１０のヌクレオチド１〜２４
２もしくは相補ポリヌクレオチド配列；ｄ）配列番号１７のヌクレオチド１〜１
８５１もしくは相補ポリヌクレオチド配列；ｅ）配列番号２７のヌクレオチド１
５２〜１９８もしくは相補ポリヌクレオチド配列；ｆ）配列番号３６のヌクレオ
チド１〜１６５７もしくは相補ポリヌクレオチド配列；ｇ）配列番号５３のヌク
レオチド１〜２４２もしくは相補ポリヌクレオチド配列、又はｈ）配列番号６９
のヌクレオチド１〜２４４もしくは配列番号７０のヌクレオチド１〜３５７もし
くは相補ポリヌクレオチド配列を含む核酸の少なくとも１０個、１２個、１５個
、１８個、又は２０個〜２５個、３５個、４０個、５０個、７０個、８０個、１
００個、２００個、５００個、１０００個、１５００個の長さの連続ヌクレオチ
ドを有するであろう。
【０３５５】 又は、本発明に係るヌクレオチドプローブ及びプライマーは、本発明に係る核
酸、より具体的にはａ）配列番号１、４〜８、１１〜１６、１８〜２６、２８〜
３５、３７〜５２、５４〜６５、６８、及び１３７、もしくは相補ポリヌクレオ
チド配列のうちのいずれか１つ；ｂ）配列番号９のヌクレオチド３１５４〜３２
００もしくは相補ポリヌクレオチド配列；ｃ）配列番号１０のヌクレオチド１〜
２４２もしくは相補ポリヌクレオチド配列；ｄ）配列番号１７のヌクレオチド１
〜１８５１もしくは相補ポリヌクレオチド配列；ｅ）配列番号２７のヌクレオチ
ド１５２〜１９８もしくは相補ポリヌクレオチド配列；ｆ）配列番号３６のヌク
レオチド１〜１６５７もしくは相補ポリヌクレオチド配列；ｇ）配列番号５３の
ヌクレオチド１〜２４２もしくは相補ポリヌクレオチド配列、又はｈ）配列番号
６９のヌクレオチド１〜２４４もしくは配列番号７０のヌクレオチド１〜３５７
もしくは相補ポリヌクレオチド配列を含む核酸の、１２個、１５個、１８個、２
０個、２５個、３５個、４０個、５０個、１００個、２００個、５００個、１０
００個、１５００個の長さの連続ヌクレオチドを有する断片からなり、かつ／又
は含むであろう。
【０３５６】 従って、本発明に係るヌクレオチドプローブ及びプライマーの定義は、ａ）配
列番号１、４〜８、１１〜１６、１８〜２６、２８〜３５、３７〜５２、５４〜
６５、６８、及び１３７、もしくは相補ポリヌクレオチド配列のうちのいずれか
１つ；ｂ）配列番号９のヌクレオチド３１５４〜３２００もしくは相補ポリヌク
レオチド配列；ｃ）配列番号１０のヌクレオチド１〜２４２もしくは相補ポリヌ
クレオチド配列；ｄ）配列番号１７のヌクレオチド１〜１８５１もしくは相補ポ
リヌクレオチド配列；ｅ）配列番号２７のヌクレオチド１５２〜１９８もしくは
相補ポリヌクレオチド配列；ｆ）配列番号３６のヌクレオチド１〜１６５７もし
くは相補ポリヌクレオチド配列；ｇ）配列番号５３のヌクレオチド１〜２４２も
しくは相補ポリヌクレオチド配列、又はｈ）配列番号６９のヌクレオチド１〜２
４４もしくは配列番号７０のヌクレオチド１〜３５７もしくは相補ポリヌクレオ
チド配列を含む核酸と、前記定義の高ストリンジェンシーハイブリダイゼーショ
ン条件下でハイブリダイズするオリゴヌクレオチドを包含する。
【０３５７】 好ましい実施形態によると、本発明に係るヌクレオチドプライマーは、配列番
号１１９〜１３６、１３８、及び１４１〜１５２又は相補核酸配列のうちのいず
れか１つのヌクレオチド配列を含む。
【０３５８】 ＡＢＣ１遺伝子の様々な領域を増幅することを可能にするプライマー及びプラ
イマー対の例を、下記表ＶＩに提示する。配列番号１、４〜９、１１、及び１３
〜１６の中の配列番号１１９〜１３６、１３８、及び１４１〜１５２の各プライ
マーの位置、並びにそのハイブリダイズする領域が、表ＶＩには示されている。
「Ｃｏｍｐ」なる略語は、相補核酸配列をさす。
【０３５９】
【表６】
【０３６０】 好ましい本発明に係るプローブ及びプライマーの特定の実施形態によると、そ
れらは、配列番号１１９〜１３６、１３８、及び１４１〜１５２、又は相補核酸
配列のうちのいずれか１つを含むポリヌクレオチド配列を有する核酸の全部又は
一部を含む。
【０３６１】 本発明に係るヌクレオチドプローブ及びプライマーは、クローニング及び制限
酵素作用、又はＮａｒａｎｇら（１９７９）もしくはＢｒｏｗｎら（１９７９）
によるホスホジエステル法、Ｂｅａｕｃａｇｅら（１９８０）によるジエチルホ
スホロアミダイト法、もしくはＥＵ特許第ＥＰ０，７０７，５９２号に記載の固
体支持体上での技術のような技術による直接化学合成を含む、当業者に周知の任
意の適当な方法により調製されうる。
【０３６２】 前記のヌクレオチドプローブ及びプライマーを含む本発明に係る核酸は、それ
ぞれ、所望により、分光学的、光化学的、生化学的、免疫化学的、又は化学的な
手段により検出されうるマーカーを組み込むことにより標識されうる。例えば、
そのようなマーカーは、放射性同位体（３２Ｐ、３３Ｐ、３Ｈ、３５Ｓ）、蛍光
分子（５−ブロモデオキシウリジン、フルオレセイン、アセチルアミノフルオレ
ン、ジゴキシゲニン）、又はビオチンのようなリガンドからなりうる。プローブ
の標識は、好ましくは、プライマー伸長、又は５’もしくは３’末端への付加に
より、標識された分子をポリヌクレオチドへと組み込むことにより実施される。
核酸断片の非放射性標識の例は、特にフランス特許第７８ １０９ ７５号、又
はＵｒｄｅａら（１９８８）もしくはＳａｎｃｈｅｚ−ｐｅｓｃａｄｏｒら（１
９８８）による論文に記載されている。
【０３６３】 好ましくは、本発明に係るヌクレオチドプローブ及びプライマーは、Ｕｒｄｅ
ａら（１９９１）又は欧州特許第ＥＰ−０，２２５，８０７号（ＣＨＩＲＯＮ）
に記載されたプローブのような、シグナルの増幅を可能にする型の構造的特徴を
有しうる。
【０３６４】 本発明に係るヌクレオチドプローブは、特にゲノミックＤＮＡを用いたサザン
型のハイブリダイゼーション、又は試料中に対応する転写物が発現していると考
えられる場合には、対応するメッセンジャーＲＮＡを用いたハイブリダイゼーシ
ョンにおいて使用されうる。
【０３６５】 本発明に係るプローブ及びプライマーは、ＰＣＲ増幅の産物の検出、又は誤対
合の検出にも使用されうる。
【０３６６】 本発明に係るヌクレオチドプローブ及びプライマーは、固体支持体上に固定化
されうる。そのような固体支持体は、当業者に周知であり、マイクロタイタープ
レートのウェル表面、ポリスチレンベッド、磁性ベッド、ニトロセルロースバン
ド、又はラテックス粒子のような微粒子を含む。
【０３６７】 従って、本発明は、試料中の、配列番号１、４〜６５、６８〜７０、７２〜８
８、１０３、１０９〜１１８、及び１３７、もしくは相補ポリヌクレオチド配列
のうちのいずれか１つのポリヌクレオチド配列を含む核酸、又は配列番号１、４
〜６５、６８〜７０、７２〜８８、１０３、１０９〜１１８、及び１３７、もし
くは相補ポリヌクレオチド配列のうちのいずれか１つの核酸断片もしくは異型の
存在を検出する方法にも関し、該方法は、 １）１個以上の本発明に係るヌクレオチドプローブ及びプライマーを被検試料
と接触させる工程、 ２）（１個以上の）プローブと試料中に存在する核酸とで形成された複合体を
検出する工程：を含む。
【０３６８】 本発明に係る検出法の特定の実施形態によると、ヌクレオチドプローブ及びプ
ライマーは支持体上に固定化されている。
【０３６９】 もう１つ面によると、ヌクレオチドプローブ及びプライマーは、検出可能マー
カーを含む。
【０３７０】 本発明は、さらに、試料中の本発明に係る核酸の存在を検出するためのボック
ス又はキットに関し、該ボックス又はキットは、 ａ）１個以上の前記のようなヌクレオチドプローブ又はプライマーを含み、 ｂ）ハイブリダイゼーション反応に必要な試薬を適宜含む。
【０３７１】 第１の態様によると、検出ボックス又はキットは、（１個以上の）プローブ又
はプライマーが、支持体上に固定化されていることを特徴とする。
【０３７２】 第２の態様によると、検出ボックス又はキットは、ヌクレオチドプローブが検
出可能マーカーを含むことを特徴とする。
【０３７３】 前記の検出キットの特定の実施形態によると、そのようなキットは、本発明に
係る核酸、より具体的には配列番号１、４〜６５、６８〜７０、７２〜８８、１
０３、１０９〜１１８、及び１３７又は相補ポリヌクレオチド配列のうちのいず
れか１つを含む核酸のコーディング領域又は非コーディング領域の中の、目的の
標的核酸を検出するため、又は突然変異を検出するために使用されうる、本発明
に係るヌクレオチドプローブ及びプライマーを複数個含むであろう。
【０３７４】 従って、支持体上に固定化された本発明に係るプローブは、「ＤＮＡチップ」
のようなマトリックスへと整列させられていてもよい。そのような整列マトリッ
クスは、特に、米国特許第５，１４３，８５４号、公開されたＰＣＴ出願第ＷＯ
９０／１５０７０号及び第を９２／１００９２号に記載されている。
【０３７５】 オリゴヌクレオチドプローブが高密度に固定化されている固体マトリックスは
、例えば、米国特許第５，４１２，０８７号、及び公開されたＰＣＴ出願第ＷＯ
９５／１１９９５号に記載されている。
【０３７６】 本発明に係るヌクレオチドプライマーは、本発明に係る核酸、より具体的には
配列番号１、４〜６５、６８〜７０、７２〜８８、１０３、１０９〜１１８、及
び１３７又は相補ポリヌクレオチド配列のうちのいずれか１つを含む核酸を増幅
するために使用されうる。又は、本発明に係るヌクレオチドプライマーは、配列
番号１、４〜６５、６８〜７０、７２〜８８、１０３、１０９〜１１８、及び１
３７又は相補ポリヌクレオチド配列のうちのいずれか１つの核酸断片又は異型を
増幅するために使用されうる。
【０３７７】 特定の実施形態において、本発明に係るヌクレオチドプライマーは、ａ）配列
番号１、４〜８、１１〜１６、１８〜２６、２８〜３５、３７〜５２、５４〜６
５、６８、及び１３７、もしくは相補ポリヌクレオチド配列のうちのいずれか１
つ；ｂ）配列番号９のヌクレオチド３１５４〜３２００もしくは相補ポリヌクレ
オチド配列；ｃ）配列番号１０のヌクレオチド１〜２４２もしくは相補ポリヌク
レオチド配列；ｄ）配列番号１７のヌクレオチド１〜１８５１もしくは相補ポリ
ヌクレオチド配列；ｅ）配列番号２７のヌクレオチド１５２〜１９８もしくは相
補ポリヌクレオチド配列；ｆ）配列番号３６のヌクレオチド１〜１６５７もしく
は相補ポリヌクレオチド配列；ｇ）配列番号５３のヌクレオチド１〜２４２もし
くは相補ポリヌクレオチド配列、又はｈ）配列番号６９のヌクレオチド１〜２４
４もしくは配列番号７０のヌクレオチド１〜３５７もしくは相補ポリヌクレオチ
ド配列を含む核酸、又はｉ）配列番号１、４〜６５、６８〜７０、７２〜８８、
１０３、１０９〜１１８、及び１３７もしくは相補ポリヌクレオチド配列のうち
のいずれか１つに示されるような核酸を増幅するために使用されうる。
【０３７８】 本発明のもう１つの主題は、試料中に含まれる、本発明に係る核酸、より具体
的にはａ）配列番号１、４〜８、１１〜１６、１８〜２６、２８〜３５、３７〜
５２、５４〜６５、６８、及び１３７、もしくは相補ポリヌクレオチド配列のう
ちのいずれか１つ；ｂ）配列番号９のヌクレオチド３１５４〜３２００もしくは
相補ポリヌクレオチド配列；ｃ）配列番号１０のヌクレオチド１〜２４２もしく
は相補ポリヌクレオチド配列；ｄ）配列番号１７のヌクレオチド１〜１８５１も
しくは相補ポリヌクレオチド配列；ｅ）配列番号２７のヌクレオチド１５２〜１
９８もしくは相補ポリヌクレオチド配列；ｆ）配列番号３６のヌクレオチド１〜
１６５７もしくは相補ポリヌクレオチド配列；ｇ）配列番号５３のヌクレオチド
１〜２４２もしくは相補ポリヌクレオチド配列、又はｈ）配列番号６９のヌクレ
オチド１〜２４４もしくは配列番号７０のヌクレオチド１〜３５７もしくは相補
ポリヌクレオチド配列を含む核酸、又はｉ）配列番号１、４〜６５、６８〜７０
、７２〜８８、１０３、１０９〜１１８、及び１３７もしくは相補ポリヌクレオ
チド配列のうちのいずれか１つに示されるような核酸を増幅する方法に関し、該
方法は、 ａ）増幅反応に必要な試薬の存在下で、ハイブリダイゼーション位置が、増幅
すべき標的核酸の領域のそれぞれ５’側及び３’側である１対のヌクレオチドプ
ライマーと、標的核酸の存在が推測される試料を接触させる工程；並びに ｂ）増幅された核酸を検出する工程：を含む。
【０３７９】 前記定義のような増幅法を実施するためには、好ましくは、前記のヌクレオチ
ドプライマーのうちのいずれかが使用されよう。
【０３８０】 本発明の主題は、さらに、本発明に係る核酸、より具体的にはａ）配列番号１
、４〜８、１１〜１６、１８〜２６、２８〜３５、３７〜５２、５４〜６５、６
８、及び１３７、もしくは相補ポリヌクレオチド配列のうちのいずれか１つ；ｂ
）配列番号９のヌクレオチド３１５４〜３２００もしくは相補ポリヌクレオチド
配列；ｃ）配列番号１０のヌクレオチド１〜２４２もしくは相補ポリヌクレオチ
ド配列；ｄ）配列番号１７のヌクレオチド１〜１８５１もしくは相補ポリヌクレ
オチド配列；ｅ）配列番号２７のヌクレオチド１５２〜１９８もしくは相補ポリ
ヌクレオチド配列；ｆ）配列番号３６のヌクレオチド１〜１６５７もしくは相補
ポリヌクレオチド配列；ｇ）配列番号５３のヌクレオチド１〜２４２もしくは相
補ポリヌクレオチド配列、又はｈ）配列番号６９のヌクレオチド１〜２４４もし
くは配列番号７０のヌクレオチド１〜３５７もしくは相補ポリヌクレオチド配列
を含む核酸、又はｉ）配列番号１、４〜６５、６８〜７０、７２〜８８、１０３
、１０９〜１１８、及び１３７もしくは相補ポリヌクレオチド配列のうちのいず
れか１つに示されるような核酸を増幅するためのボックス又はキットであり、該
ボックス又はキットは、 ａ）ハイブリダイゼーション位置が増幅すべき標的核酸のそれぞれ５’側及び
３’側である１対のヌクレオチドプライマーを含み；かつ ｂ）増幅反応に必要な試薬を場合により含む。
【０３８１】 そのような増幅ボックス又はキットは、好ましくは、前記のようなヌクレオチ
ドプライマーを少なくとも１対含むであろう。
【０３８２】 本発明の主題は、さらに、ａ）配列番号１、４〜８、１１〜１６、１８〜２６
、２８〜３５、３７〜５２、５４〜６５、６８、及び１３７、もしくは相補ポリ
ヌクレオチド配列のうちのいずれか１つ；ｂ）配列番号９のヌクレオチド３１５
４〜３２００もしくは相補ポリヌクレオチド配列；ｃ）配列番号１０のヌクレオ
チド１〜２４２もしくは相補ポリヌクレオチド配列；ｄ）配列番号１７のヌクレ
オチド１〜１８５１もしくは相補ポリヌクレオチド配列；ｅ）配列番号２７のヌ
クレオチド１５２〜１９８もしくは相補ポリヌクレオチド配列；ｆ）配列番号３
６のヌクレオチド１〜１６５７もしくは相補ポリヌクレオチド配列；ｇ）配列番
号５３のヌクレオチド１〜２４２もしくは相補ポリヌクレオチド配列、又はｈ）
配列番号６９のヌクレオチド１〜２４４もしくは配列番号７０のヌクレオチド１
〜３５７もしくは相補ポリヌクレオチド配列を含む核酸の全部又は一部を増幅す
るためのボックス又はキットであり、該ボックス又はキットは、 １）ハイブリダイゼーション位置が、増幅すべき標的核酸のそれぞれ５’側及
び３’側である１対の本発明に係るヌクレオチドプライマーを含み；かつ ２）増幅反応に必要な試薬を場合により含む。
【０３８３】 そのような増幅ボックス又はキットは、好ましくは、前記のようなヌクレオチ
ドプライマーを少なくとも１対含むであろう。
【０３８４】 本発明は、試料中の本発明に係る核酸の存在を検出するためのボックス又はキ
ットであり、該ボックス又はキットは、 ａ）１個以上の本発明に係るヌクレオチドプローブを含み、かつ ｂ）ハイブリダイゼーション反応に必要な試薬を適宜含む。
【０３８５】 第１の態様によると、検出ボックス又はキットは、（１個以上の）ヌクレオチ
ドプローブ又はプライマーが、支持体上に固定化されていることを特徴とする。
【０３８６】 第２の態様によると、検出ボックス又はキットは、（１個以上の）ヌクレオチ
ドプローブ又はプライマーが、検出可能マーカーを含むことを特徴とする。
【０３８７】 前記の検出キットの特定の実施形態によると、そのようなキットは、本発明に
係る核酸のコーディング領域又は非コーディング領域の中の、目的の標的核酸を
検出するため、又は突然変異を検出するために使用されうる、本発明に係るオリ
ゴヌクレオチドプローブ及び／又はプライマーを複数個含むであろう。本発明の
好ましい実施形態によると、標的核酸は、配列番号１、４〜６５、６８〜７０、
７２〜８８、１０３、１０９〜１１８、及び１３７、又は相補ポリヌクレオチド
配列のうちのいずれか１つのポリヌクレオチド配列を含む。又は、標的核酸は、
配列番号１、４〜６５、６８〜７０、７２〜８８、１０３、１０９〜１１８、及
び１３７、又は相補ポリヌクレオチド配列のうちのいずれか１つを含む核酸の核
酸断片又は異型である。
【０３８８】 好ましい実施形態によると、２個の本発明に係るプライマーは、前記の配列番
号７２に示されるような突然変異を保持するＡＢＣ１遺伝子のエキソン５の領域
、又は相補ポリヌクレオチド配列を有する核酸を増幅することを可能にする配列
番号１２５及び１２６の全部又は一部を含む。
【０３８９】 第２の好ましい実施形態によると、２個の本発明に係るプライマーは、前記の
配列番号７３又は７４に示されるような突然変異を保持するＡＢＣ１遺伝子のエ
キソン６の領域、又は相補ポリヌクレオチド配列を有する核酸を増幅することを
可能にする配列番号１２７及び１２８の全部又は一部を含む。
【０３９０】 第３の好ましい実施形態によると、２個の本発明に係るプライマーは、前記の
配列番号７５〜７７に示されるような突然変異を保持するＡＢＣ１遺伝子のエキ
ソン８の領域、又は相補ポリヌクレオチド配列を有する核酸を増幅することを可
能にする配列番号１３１及び１３２の全部又は一部を含む。
【０３９１】 第４の好ましい実施形態によると、２個の本発明に係るプライマーは、前記の
配列番号８４に示されるような突然変異を保持するＡＢＣ１遺伝子のエキソン２
７の領域、又は相補ポリヌクレオチド配列を有する核酸を増幅することを可能に
する配列番号１５５及び１５６の全部又は一部を含む。
【０３９２】 第５の好ましい実施形態によると、２個の本発明に係るプライマーは、前記の
配列番号８５に示されるような突然変異を保持するＡＢＣ１遺伝子のエキソン３
２の領域、又は相補ポリヌクレオチド配列を有する核酸を増幅することを可能に
する配列番号１５９及び１６０の全部又は一部を含む。
【０３９３】 第６の好ましい実施形態によると、２個の本発明に係るプライマーは、前記の
配列番号８７又は８８に示されるような突然変異を保持するＡＢＣ１遺伝子のエ
キソン４７の領域、又は相補ポリヌクレオチド配列を有する核酸を増幅すること
を可能にする配列番号１７５及び１７６の全部又は一部を含む。
【０３９４】 もう１つの好ましい実施形態によると、本発明に係るプライマーは、一般的に
、配列番号１１９〜１３６、１３８、及び１４１〜１５２、又は相補配列の全部
又は一部を含む。
【０３９５】 本発明に係るヌクレオチドプライマーは、対象の遺伝子型決定及び／又は集団
の遺伝子型決定の方法において、特に対象における特定の対立遺伝子型又は特定
の対立遺伝子群型（ハプロタイプ）と、これらの対象における特定の表現型（形
質）の存在、例えばこれらの対象の、コレステロール逆輸送の欠損と関連した疾
患を発症する素因、又はこれらの対象の、候補染色体領域が第９染色体、より精
密には９ｑ腕、さらに精密には９ｑ３１遺伝子座に位置している病理を発症する
素因との関連の研究に関して、特に有用である。
【０３９６】 組換えベクター 本発明は、本発明に係る核酸を含む組換えベクターにも関する。本発明の目的
のための「ベクター」とは、一本鎖又は二本鎖いずれかの形態の環状又は直鎖状
のＤＮＡ又はＲＮＡ分子を意味することが理解されよう。
【０３９７】 好ましくは、そのような組換えベクターは、以下の核酸から選択される核酸を
含むであろう。
【０３９８】 ａ）配列番号１、４〜６５、６８〜７０、７２〜８８、１０３、１０９〜１１
８、及び１３７、又は相補ポリヌクレオチド配列のうちのいずれか１つを含む核
酸、 ｂ）配列番号１、４〜６５、６８〜７０、７２〜８８、１０３、１０９〜１１
８、及び１３７、又は相補ポリヌクレオチド配列のうちのいずれか１つに示され
るようなポリヌクレオチド配列を含む核酸、 ｃ）配列番号６９のヌクレオチド１〜２４４もしくは配列番号７０のヌクレオ
チド１〜３５７もしくは相補ポリヌクレオチド配列を含む核酸、 ｄ）１）配列番号１、４〜８、１１〜１６、１８〜２６、２８〜３５、３７〜
５２、５４〜６５、６８、及び１３７、もしくは相補ポリヌクレオチド配列のう
ちのいずれか１つ；２）配列番号９のヌクレオチド３１５４〜３２００もしくは
相補ポリヌクレオチド配列；３）配列番号１０のヌクレオチド１〜２４２もしく
は相補ポリヌクレオチド配列；４）配列番号１７のヌクレオチド１〜１８５１も
しくは相補ポリヌクレオチド配列；５）配列番号２７のヌクレオチド１５２〜１
９８もしくは相補ポリヌクレオチド配列；６）配列番号３６のヌクレオチド１〜
１６５７もしくは相補ポリヌクレオチド配列；７）配列番号５３のヌクレオチド
１〜２４２もしくは相補ポリヌクレオチド配列、又は８）配列番号６９のヌクレ
オチド１〜２４４もしくは配列番号７０のヌクレオチド１〜３５７もしくは相補
ポリヌクレオチド配列のポリヌクレオチド配列を含む核酸の少なくとも８個の連
続ヌクレオチドを有する核酸、 ｅ）１）配列番号１、４〜８、１１〜１６、１８〜２６、２８〜３５、３７〜
５２、５４〜６５、６８、及び１３７、もしくは相補ポリヌクレオチド配列のう
ちのいずれか１つ；２）配列番号９のヌクレオチド３１５４〜３２００もしくは
相補ポリヌクレオチド配列；３）配列番号１０のヌクレオチド１〜２４２もしく
は相補ポリヌクレオチド配列；４）配列番号１７のヌクレオチド１〜１８５１も
しくは相補ポリヌクレオチド配列；５）配列番号２７のヌクレオチド１５２〜１
９８もしくは相補ポリヌクレオチド配列；６）配列番号３６のヌクレオチド１〜
１６５７もしくは相補ポリヌクレオチド配列；７）配列番号５３のヌクレオチド
１〜２４２もしくは相補ポリヌクレオチド配列、又は８）配列番号６９のヌクレ
オチド１〜２４４もしくは配列番号７０のヌクレオチド１〜３５７もしくは相補
ポリヌクレオチド配列のポリヌクレオチド配列を含む核酸との少なくとも８０％
のヌクレオチド同一性を有する核酸、 ｆ）１）配列番号１、４〜８、１１〜１６、１８〜２６、２８〜３５、３７〜
５２、５４〜６５、６８、及び１３７、もしくは相補ポリヌクレオチド配列のう
ちのいずれか１つ；２）配列番号９のヌクレオチド３１５４〜３２００もしくは
相補ポリヌクレオチド配列；３）配列番号１０のヌクレオチド１〜２４２もしく
は相補ポリヌクレオチド配列；４）配列番号１７のヌクレオチド１〜１８５１も
しくは相補ポリヌクレオチド配列；５）配列番号２７のヌクレオチド１５２〜１
９８もしくは相補ポリヌクレオチド配列；６）配列番号３６のヌクレオチド１〜
１６５７もしくは相補ポリヌクレオチド配列；７）配列番号５３のヌクレオチド
１〜２４２もしくは相補ポリヌクレオチド配列、又は８）配列番号６９のヌクレ
オチド１〜２４４もしくは配列番号７０のヌクレオチド１〜３５７もしくは相補
ポリヌクレオチド配列のポリヌクレオチド配列を含む核酸との８５％、９０％、
９５％、又は９８％のヌクレオチド同一性を有する核酸、 ｇ）１）配列番号１、４〜８、１１〜１６、１８〜２６、２８〜３５、３７〜
５２、５４〜６５、６８、及び１３７、もしくは相補ポリヌクレオチド配列のう
ちのいずれか１つ；２）配列番号９のヌクレオチド３１５４〜３２００もしくは
相補ポリヌクレオチド配列；３）配列番号１０のヌクレオチド１〜２４２もしく
は相補ポリヌクレオチド配列；４）配列番号１７のヌクレオチド１〜１８５１も
しくは相補ポリヌクレオチド配列；５）配列番号２７のヌクレオチド１５２〜１
９８もしくは相補ポリヌクレオチド配列；６）配列番号３６のヌクレオチド１〜
１６５７もしくは相補ポリヌクレオチド配列；７）配列番号５３のヌクレオチド
１〜２４２もしくは相補ポリヌクレオチド配列、又は８）配列番号６９のヌクレ
オチド１〜２４４もしくは配列番号７０のヌクレオチド１〜３５７もしくは相補
ポリヌクレオチド配列のポリヌクレオチド配列を含む核酸と、高ストリンジェン
シーハイブリダイゼーション条件下でハイブリダイズする核酸； ｈ）配列番号７１のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする核酸；並び
に ｉ）配列番号７１のアミノ酸１〜６０を含むポリペプチドをコードする核酸。
【０３９９】 第１の実施形態によると、本発明に係る組換えベクターは、所望の細胞宿主の
形質転換又はトランスフェクションの後、内部に挿入された核酸を増幅するため
に使用される。
【０４００】 第２の実施形態によると、本発明に係る組換えベクターは、本発明に係る核酸
に加え、制御シグナル、又は核酸及びそのコードされたｍＲＮＡの転写及び／又
は翻訳を指図又は調節するヌクレオチド配列を含む発現ベクターに相当する。
【０４０１】 好ましい実施形態によると、本発明に係る組換えベクターは、特に以下の成分
を含むであろう。
【０４０２】 （１）プロモーター及び／又はエンハンサー配列のような挿入される核酸の発
現を制御するための因子又はシグナル； （２）（１）に記載の制御因子又はシグナルとインフレームで位置している、
そのようなベクターに挿入される本発明に係る核酸に含まれるヌクレオチドコー
ディング領域；及び （３）（２）に記載の核酸のヌクレオチドコーディング領域の転写の開始及び
終結のための適当な核酸。
【０４０３】 さらに、本発明に係る組換えベクターは、増幅及び発現が意図される細胞宿主
における複製のための１個以上の開始点、マーカー又は選択可能マーカーを含み
うる。
【０４０４】 例えば、細菌プロモーターは、ＬａｃＩ又はＬａｃＺプロモーター、Ｔ３又は
Ｔ７バクテリオファージＲＮＡポリメラーゼプロモーター、ラムダファージＰＲ
又はＰＬプロモーターでありうる。
【０４０５】 真核細胞のためのプロモーターは、ヘルペス単純ウイルス（ＨＳＶ）チミジン
キナーゼプロモーター、又はマウスメタチオネイン−Ｌプロモーターを含むであ
ろう。
【０４０６】 一般に、適当なプロモーターの選択のため、当業者は、好ましくは、前記引用
のＳａｍｂｒｏｏｋら（１９８９）による書籍、又はＦｕｌｌｅｒら（１９９６
）により記載された技術を参照することができる。
【０４０７】 ＡＢＣ１遺伝子のゲノミック配列の発現が意図される場合には、好ましくは、
大きい挿入配列を含有することができるベクターが使用されよう。特定の実施形
態において、Ｓｔｅｒｎｂｅｒｇ（１９９２、１９９４）により記載されたベク
ターｐ１５８又はベクターｐ１５８／ｎｅｏ８のようなＰ１バクテリオファージ
ベクターのようなバクテリオファージベクターが、好ましくは、使用されよう。
【０４０８】 好ましい本発明に係る細菌ベクターは、例えば、ベクターｐＢＲ３２２（ＡＴ
ＣＣ３７０１７）又はｐＡＡ２２３−３（Ｐｈａｒｍａｃｉａ、Ｕｐｐｓａｌａ
、Ｓｗｅｄｅｎ）及びｐＧＥＭ１（Ｐｒｏｍｅｇａ Ｂｉｏｔｅｃｈ、Ｍａｄｉ
ｓｏｎ、ＷＩ、米国）のようなベクターである。
【０４０９】 ベクターｐＱＥ７０、ｐＱＥ６０、ｐＱＥ９（Ｑｉａｇｅｎ）、ｐｓｉＸ１７
４、ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ ＳＡ、ｐＮＨ８Ａ、ｐＮＨ１６Ａ、ｐＮＨ１８Ａ
、ｐＮＨ４６Ａ、ｐＷＬＮＥＯ、ｐＳＶ２ＣＡＴ、ｐＯＧ４４、ｐＸＴＩ、ｐＳ
Ｇ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）のようなその他の市販のベクターも挙げられる。
【０４１０】 それらは、スポドプテラフルギペルダ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐ
ｅｒｄａ）に由来するＳｆ９系の細胞（ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ１７１１）をトラン
スフェクトするために使用されるベクターｐＶＬ１３９２／１３９３（Ｐｈａｒ
ｍｉｎｇｅｎ）のようなバキュロウイルス型のベクターであってもよい。
【０４１１】 それらは、ヒトアデノウイルス２型又は５型のようなアデノウイルスベクター
であってもよい。
【０４１２】 本発明に係る組換えベクターは、レトロウイルスベクター又はアデノ随伴ウイ
ルスベクター（ＡＡＶ）であってもよい。そのようなアデノ随伴ウイルスベクタ
ーは、例えば、Ｆｌｏｔｔｅら（１９９２）、Ｓａｍｕｌｓｋｉら（１９８９）
、又はＭｃＬａｕｇｈｌｉｎ ＢＡら（１９９６）により記載されている。
【０４１３】 本発明に係るポリヌクレオチドの発現を可能にするため、後者は、宿主細胞に
導入されなければならない。本発明に係るポリヌクレオチドの宿主細胞への導入
は、初代培養物又は細胞系いずれかの形態の細胞を形質転換又はトランスフェク
トするための当業者に周知の技術に従い、インビトロで実施されうる。コレステ
ロール逆輸送の欠損と関連した疾患の予防又は治療のため、インビボ又はエクス
ビボで、本発明に係るポリヌクレオチドの導入を実施することも可能である。
【０４１４】 本発明のポリヌクレオチド又はベクターの宿主細胞への導入のため、当業者は
、好ましくはリン酸カルシウム沈殿技術（Ｇｒａｈａｍら、１９７３；Ｃｈｅｎ
ら、１９８７）、ＤＥＡＥデキストラン（Ｇｏｐａｌ、１９８５）、電気穿孔（
Ｔｕｒ−Ｋａｓｐａ、１８９６；Ｐｏｔｔｅｒら、１９８４）、直接微量注入（
Ｈａｒｌａｎｄら、１９８５）、ＤＮＡがチャージされたリポソーム（Ｎｉｃｏ
ｌａｕら、１９８２、Ｆｒａｌｅｙら、１９７９）のような様々な技術を参照す
ることができる。
【０４１５】 ポリヌクレオチドは、宿主細胞へ導入された後、細胞のゲノムへ安定的に組み
込まれうる。組み込みは、相同組換えによりゲノムの精密な部位で達成されても
よいし、又はランダムに組み込まれてもよい。いくつかの実施形態において、ポ
リヌクレオチドは、エピソームの保持、及び細胞周期と無関係な又は同調した複
製を可能にする配列を含むエピソームの断片の形態で、宿主細胞内に安定的に維
持されうる。
【０４１６】 特定の実施形態によると、本発明に係るポリヌクレオチドを宿主細胞、特に哺
乳動物から得られた宿主細胞へインビボ導入する方法は、薬学的に適合性のベク
ターと、適当な制御配列の調節下に置かれた本発明に係る「裸の」ポリヌクレオ
チドとを含む調製物を、選択された組織、例えば平滑筋組織のレベルで、局所注
射により導入し、「裸の」ポリヌクレオチドをこの組織の細胞に吸収させる工程
を含む。
【０４１７】 「裸の」ポリヌクレオチドを含むインビトロ及びインビボで使用するための組
成物は、例えば、ＰＣＴ出願第ＷＯ９５／１１３０７号（Ｉｎｓｔｉｔｕｔ Ｐ
ａｓｔｅｕｒ、Ｉｎｓｅｒｍ、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｏｔｔａｗａ）並
びにＴａｃｓｏｎら（１９９６）及びＨｕｙｇｅｎら（１９９６）の文献に記載
されている。
【０４１８】 本発明の特定の実施形態によると、ＡＢＣ１タンパク質のインビボ作製のため
の組成物が提供される。この組成物は、生理学的に許容されるベクターの溶液の
状態の、適当な制御配列の調節下に置かれたＡＢＣ１ポリペプチドをコードする
ポリヌクレオチドを含む。
【０４１９】 選択された宿主生物へと注射されるベクターの量は、注射の部位により異なる
。指針として、ＡＢＣ１タンパク質をコードするポリヌクレオチド約０．１〜１
００μｇを、動物の体内に、好ましくはコレステロール逆輸送の欠損と関連した
疾患を発症する可能性が高いか、又は既にこの疾患を発症している患者、特にタ
ンジアー病の素因を有するか、又は既にその疾患を発症している患者へ、注射す
ることができる。
【０４２０】 従って、本発明は、１個以上の生理学的に適合性の賦形剤と組み合わされた、
ＡＢＣ１タンパク質をコードする核酸を含む、コレステロール逆輸送の機能障害
に罹患した患者又は対象の予防又は治療を目的とする薬学的組成物にも関する。
【０４２１】 好ましくは、そのような組成物は、適当な制御因子又はシグナルの調節下に置
かれた、配列番号６９又は配列番号７０いずれかのポリヌクレオチド配列を含む
核酸を含むであろう。
【０４２２】 本発明の主題は、さらに、１個以上の生理学的に適合性の賦形剤と組み合わさ
れた、本発明に係る組換えベクターを含む、コレステロール逆輸送の機能障害に
罹患した患者又は対象の予防又は治療を目的とする薬学的組成物である。
【０４２３】 本発明は、様々な形態の動脈硬化の予防、又はより具体的にコレステロール逆
輸送の機能障害に罹患した対象の治療を目的とする医薬品の製造のための、ＡＢ
Ｃ１をコードする本発明に係る核酸の使用にも関する。
【０４２４】 本発明は、様々な形態の動脈硬化の予防、又はより具体的にコレステロール逆
輸送の機能障害に罹患した対象の治療を目的とする医薬品の製造のための、ＡＢ
Ｃ１をコードする核酸を含む本発明に係る組換えベクターの使用にも関する。
【０４２５】 従って、コレステロール代謝に関与するＡＢＣ１タンパク質又はポリペプチド
をコードする本発明に係る核酸を含む組換えベクターも、本発明の主題である。
【０４２６】 本発明は、心臓血管疾患、又はタンジアー及び／もしくはＦＨＤ病と関連した
ＨＤＬ欠損症、ＨＤＬ欠損症、ＬＣＡＴ欠損症、マラリア、及び糖尿病のような
ＨＤＬ欠損症と関連したＨＤＬ欠損と関連した状態の治療及び／又は予防を目的
とする薬学的組成物の調製のための、そのような組換えベクターの使用にも関す
る。
【０４２７】 本発明は、体内に移植され、生物学的活性を有するＡＢＣ１ポリペプチドの長
期的かつ効率的なインビボ発現を可能にする、本発明に係るそのような組換えベ
クターでエクスビボで遺伝学的に修飾された細胞、又は組換えベクターを産生す
る細胞の使用にも関する。
【０４２８】 体細胞性遺伝子治療法において有用なベクター及びそのようなベクターを含有
する組成物 本発明は、コレステロール輸送と関連した病理の治療のための新規治療法にも
関する。それは、コレステロールの輸送及び代謝に関与するＡＢＣ１タンパク質
をコードする遺伝子のインビボの伝達及び発現による遺伝子治療により、コレス
テロール輸送と関連した病理を治療することが可能であることを証明することに
より、先行技術の短所の有利な解決を提供する。従って、本発明は、例えば動脈
硬化のような関連病理の特異的かつ効率的な治療を可能にする簡便な手段を提供
する。
【０４２９】 遺伝子治療は、欠損又は異常（突然変異、異常発現等）を修正すること、及び
罹患した細胞又は臓器へ遺伝学的情報を導入することにより治療用タンパク質を
発現させることからなる。この遺伝学的情報を、臓器から抽出された細胞へとエ
クスビボで導入し、次いで修飾された細胞を体内に再導入してもよいし、又はこ
の遺伝学的情報を、適当な組織へと直接インビボ導入してもよい。この第２の例
において、様々な技術が存在するが、その中には、ＤＮＡとＤＥＡＥデキストラ
ンの複合体（Ｐａｇａｎｏら、１９６７）、ＤＮＡと核タンパク質との複合体（
Ｋａｎｅｄａら、１９８９）、ＤＮＡと脂質との複合体（Ｆｅｌｇｎｅｒら、１
９８７）、リポソームの使用（Ｆｒａｌｅｙら、１９８０）等を含む様々なトラ
ンスフェクション技術が含まれる。より最近、遺伝子の伝達のためのベクターと
してのウイルスの使用が、これらの物理学的トランスフェクション技術の有望な
代替法として出現した。これに関して、様々なウイルスが、ある種の細胞集団に
感染する能力について試験されている。特に、レトロウイルス（ＲＳＶ、ＨＭＳ
、ＭＭＳ等）、ＨＳＶウイルス、アデノ随伴ウイルス、及びアデノウイルス。
【０４３０】 従って、本発明は、ＡＢＣ１をコードする遺伝子をインビボに伝達し発現させ
ることからなる、コレステロール輸送と関連した病理の治療のための新規治療法
にも関する。特に、本発明は、タンジアー及び／又はＦＨＤ病と関連したＨＤＬ
欠損症、ＨＤＬ欠損症、ＬＣＡＴ欠損症、マラリア、及び糖尿病のようなＨＤＬ
欠損症の治療及び／又は予防のための新規治療法を提供する。特に好ましくは、
本出願人は、コレステロール代謝に関与するＡＢＣ１タンパク質をコードする核
酸を含む組換えベクターを構築すること、これらの組換えベクターをインビボ投
与することが可能であること、及びこの投与が、細胞病理学的影響を与えること
なく、生物学的活性を有するＡＢＣ１タンパク質の安定的かつ効率的なインビボ
発現を可能にすることを見出した。
【０４３１】 本発明は、アデノウイルスが、ＡＢＣ１遺伝子の伝達及び発現のための特に効
率的なベクターを構成することの証明からも生まれた。特に、本発明は、組換え
アデノウイルスのベクターとしての使用が、所望の治療効果を得るために十分に
高レベルのこの遺伝子の発現を得ることを可能にすることを示している。安定的
な遺伝子発現を可能にするレトロウイルス又はアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）の
ようなその他のウイルスベクターも、特許請求の範囲に記載されている。
【０４３２】 従って、本発明は、コレステロール輸送の異常と関連した心臓血管及び神経の
病理の治療及び予防のための新規な手法を提供する。
【０４３３】 従って、コレステロール代謝に関与するＡＢＣ１タンパク質又はポリペプチド
をコードする本発明に係る核酸を含む欠陥組換えウイルスも、本発明の主題であ
る。
【０４３４】 本発明は、心臓血管疾患、又はタンジアー及び／もしくはＦＨＤ病と関連した
ＨＤＬ欠損症、ＨＤＬ欠損症、ＬＣＡＴ欠損症、マラリア、及び糖尿病のような
ＨＤＬ欠損症の治療及び／又は予防を目的とする薬学的組成物の調製のためのそ
のような欠陥組換えウイルスの使用にも関する。
【０４３５】 本発明は、体内に移植され、生物学的活性を有するＡＢＣ１タンパク質の長期
的かつ効率的なインビボ発現を可能にする、そのような本発明に係る欠陥組換え
ウイルスによりエクスビボで遺伝学的に修飾された細胞、又は欠陥組換えウイル
スを産生する細胞の使用にも関する。
【０４３６】 本発明は、ＡＢＣ１をコードするＤＮＡ配列をウイルスベクターに組み込むこ
とが可能であること、及びこれらのベクターが生物学的活性を有する成熟型の効
率的な発現を可能にすることを示す。より具体的には、本発明は、そのようなＤ
ＮＡが組み込まれたアデノウイルスの直接投与により、又はそのようなＤＮＡが
組み込まれたアデノウイルスもしくはレトロウイルスを産生する細胞、もしくは
それらにより遺伝学的に修飾された細胞の移植により、ＡＢＣ１のインビボ発現
が得られうることを示す。
【０４３７】 本発明は、有害な効果を示すことなく、通常はこのタンパク質の発現に関与し
ていない臓器におけるＡＢＣ１の調節された発現を誘導することを可能にするた
め、特に有利である。特に、本発明のベクターを産生する細胞、又は本発明のベ
クターにエクスビボで感染した細胞の移植により、ＡＢＣ１タンパク質の有意な
放出が得られる。
【０４３８】 本発明に関して産生されるコレステロール輸送の活性は、ヒトＡＢＣ１型のも
のであっても動物ＡＢＣ１型のものであってもよい。本発明に関して使用される
核酸配列は、ｃＤＮＡ、ゲノミックＤＮＡ（ｇＤＮＡ）、ＲＮＡ（レトロウイル
スの場合）、又は例えば１個以上のイントロン（ｇＤＮＡ）が挿入されるであろ
うｃＤＮＡからなるハイブリッド構築物でありうる。それは、合成又は半合成の
配列も含みうる。特に有利には、ｃＤＮＡ又はｇＤＮＡが使用される。特に、ｇ
ＤＮＡの使用は、ヒト細胞におけるより良好な発現を可能にする。それらの本発
明に係るウイルスベクターへの組み込みを可能にするため、これらの配列は、好
ましくは、特に適当な制限部位の挿入のため、例えば部位特異的突然変異誘発に
より修飾される。先行技術において記載された配列は、実際には、本発明に係る
使用のため構築されておらず、実質的な発現を得るためには、事前の適合化が必
要であることが判明するかもしれない。本発明に関しては、ヒトＡＢＣ１タンパ
ク質をコードする核酸配列を使用することが好ましい。さらに、これらのＡＢＣ
１タンパク質の誘導体をコードする構築物を使用することも可能である。これら
のＡＢＣ１タンパク質の誘導体は、例えば、コレステロール輸送活性を保持して
いる産物をコードする、天然配列に対する突然変異、欠失、及び／又は付加によ
り得られた配列を含む。これらの修飾は、当業者に既知の技術によりなされうる
（下記の一般的な分子生物学的技術を参照）。次いで、このようにして得られた
誘導体の生物学的活性は、特に細胞からのコレステロール流出の測定の例に示さ
れるように、容易に決定されうる。本発明の目的のための誘導体は、天然配列又
はその断片をプローブとして使用した核酸ライブラリーからのハイブリダイゼー
ションによっても得られうる。
【０４３９】 これらの誘導体は、特に、結合部位とのより高い親和性を有する分子、より大
きいプロテアーゼ抵抗性を示す分子、より高い治療効力又はより少ない副作用を
有し、場合によっては新たな生物学的特性を有する分子である。誘導体には、改
善されたインビボ発現を可能にする修飾型ＤＮＡ配列も含まれる。
【０４４０】 第１の実施形態において、本発明は、コレステロールの輸送及び代謝に関与す
るＡＢＣ１ポリペプチドをコードするｃＤＮＡを含む欠陥組換えウイルスに関す
る。もう１つの好ましい本発明の実施形態において、欠陥組換えウイルスは、コ
レステロールの輸送及び代謝に関与するＡＢＣ１ポリペプチドをコードするゲノ
ミックＤＮＡ（ｇＤＮＡ）を含む。好ましくは、ＡＢＣ１ポリペプチドは、配列
番号７１のアミノ酸配列を含む。より好ましくは、ＡＢＣ１ポリペプチドは、配
列番号７１のアミノ酸１〜６０から構成される。
【０４４１】 本発明のベクターは、様々な型のウイルスから調製されうる。好ましくは、ア
デノウイルス、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）、ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）、
又はレトロウイルスに由来するベクターが使用される。直接投与、又は移植を目
的とする細胞のエクスビボ修飾にはアデノウイルスを、産生細胞の移植にはレト
ロウイルスを使用することが好ましい。
【０４４２】 本発明に係るウイルスは、欠陥を有する、即ち標的細胞において自律複製する
ことができない。従って、一般に、本発明に関して使用される欠陥ウイルスのゲ
ノムは、感染細胞における該ウイルスの複製に必要な配列を少なくとも欠いてい
る。これらの領域は、（完全又は部分的に）排除されるか、又は非機能性にされ
るか、又は他の配列、特にＡＢＣ１タンパク質をコードする核酸配列と置換され
うる。にもかかわらず、好ましくは、欠陥ウイルスは、ウイルス粒子のカプシド
形成に必要なゲノムの配列を保持している。
【０４４３】 より具体的にアデノウイルスに関しては、構造及び特性が多少異なっている様
々な血清型が特徴決定されている。これらの血清型のうち、ヒトアデノウイルス
２型又は５型（Ａｄ２又はＡｄ５）、又は動物起源のアデノウイルス（出願ＷＯ
９４／２６９１４参照）が、好ましくは、本発明に関して使用される。本発明に
関して使用されうる動物起源のアデノウイルスとしては、イヌ、ウシ、ネズミ（
例えば、Ｍａｖ１、Ｂｅａｒｄら、Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ７５（１９９０）８１）
、ヒツジ、ブタ、トリ、又はサル（例えば、ＳＡＶ）起源のアデノウイルスを挙
げることができる。好ましくは、動物起源のアデノウイルスは、イヌアデノウイ
ルス、より好ましくはＣＡＶ２アデノウイルス［例えば、Ｍａｎｈａｔｔａｎ又
はＡ２６／６１株（ＡＴＣＣ ＶＲ−８００）］である。好ましくは、ヒト又は
イヌ、又は混合起源のアデノウイルスが、本発明に関して使用される。好ましく
は、本発明の欠陥アデノウイルスは、ＩＴＲ、カプシド形成を可能にする配列、
及びＡＢＣ１タンパク質をコードする配列を含む。好ましくは、本発明のアデノ
ウイルスのゲノムにおいては、少なくともＥ１領域が非機能性にされている。さ
らに好ましくは、本発明のアデノウイルスのゲノムにおいては、Ｅ１遺伝子と、
Ｅ２、Ｅ４、及びＬ１〜Ｌ５遺伝子のうちの少なくとも１つとが非機能性である
。考慮されるウイルス遺伝子は、当業者に既知の任意の技術、特に、考慮される
（１個以上の）遺伝子の完全な抑制、置換、部分的欠失、又は１個以上の塩基の
付加により非機能性にされうる。そのような修飾は、インビトロで（単離された
ＤＮＡに対して）、又はインサイチューで、例えば遺伝子工学技術、又は突然変
異誘発剤による処理により、得られうる。その他の領域、特にＥ３（ＷＯ９５／
０２６９７）、Ｅ２（ＷＯ９４／２８９３８）、Ｅ４（ＷＯ９４／２８１５２、
ＷＯ９４／１２６４９、ＷＯ９５／０２６９７）、及びＬ５（ＷＯ９５／０２６
９７）領域も、修飾されうる。好ましい実施形態によると、本発明に係るアデノ
ウイルスは、Ｅ１領域及びＥ４領域の欠失を含み、ＡＢＣ１をコードする配列が
、不活化されたＥ１領域のレベルに挿入されている。もう１つの好ましい実施形
態によると、それは、Ｅ１領域に欠失を含み、そのレベルに、Ｅ４領域及びＡＢ
Ｃ１をコードする配列（フランス特許出願ＦＲ９４ １３３５５）が挿入されて
いる。
【０４４４】 本発明に係る欠陥組換えアデノウイルスは、当業者に既知の任意の技術により
調製されうる（Ｌｅｖｒｅｒｏら、１９９１、ＥＰ１８５ ５７３、及びＧｒａ
ｈａｍ、１９８４）。特に、それらは、アデノウイルスと、プラスミド、特にＡ
ＢＣ１をコードする配列を保持するプラスミドとの相同組換えにより調製されう
る。相同組換えは、該アデノウイルス及びプラスミドの、適当な細胞系への共ト
ランスフェクションの後に起こる。使用される細胞系は、好ましくは、（ｉ）該
因子により形質転換可能であり、かつ（ｉｉ）好ましくは組換えのリスクを回避
するため、組み込まれた形態の、欠陥アデノウイルスゲノムの一部を相補するこ
とができる配列を含有することが必要である。系の例としては、ヒト胎児腎臓系
２９３（Ｇｒａｈａｍら、１９７７）、特にＡｄ５アデノウイルスのゲノムの左
方部分（１２％）がゲノムに組み込まれた２９３、又は出願第ＷＯ９４／２６９
１４号及び第ＷＯ９５／０２６９７号に記載のようなＥ１及びＥ４の機能を相補
することができる系である。
【０４４５】 次に、複製したアデノウイルスは、実施例に例示されるような、従来の分子生
物学的技術に従い回収され精製される。
【０４４６】 アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）に関しては、それらは、比較的小さいサイズを
有するＤＮＡウイルスであり、それらが感染する細胞のゲノムに安定的かつ部位
特異的に組み込まれる。それらは、細胞の増殖、形態学、又は分化に対する効果
を誘導することなく、広域スペクトルの細胞に感染することができる。さらに、
それらは、ヒトにおける病理には関与していないと考えられている。ＡＡＶのゲ
ノムは、クローニングされ、配列決定され、そして特徴決定されている。それは
、約４７００塩基を含み、各末端にウイルスの複製開始点として機能する１４５
塩基の逆方向反復領域（ＩＴＲ）を含有している。ゲノムの残りは、カプシド形
成機能を保持する２つの必須領域に分割される。ゲノムの左方部分は、ウイルス
複製及びウイルス遺伝子の発現に関与するｒｅｐ遺伝子を含有し、ゲノムの右方
部分は、ウイルスカプシドタンパク質をコードするｃａｐ遺伝子を含有する。
【０４４７】 インビトロ及びインビボの遺伝子伝達のためのＡＡＶに由来するベクターの使
用は、文献に記載されている（特に、ＷＯ９１／１８０８８；ＷＯ９３／０９２
３９；米国特許第４，７９７，３６８号、米国特許第５，１３９，９４１号、Ｅ
Ｐ４８８５２８参照）。これらの出願は、ｒｅｐ及び／又はｃａｐ遺伝子が欠失
し、目的の遺伝子に交換されている、ＡＡＶに由来する様々な構築物、及び該目
的の遺伝子をインビトロで（培養細胞に対して）、又はインビボで（生物へ直接
）伝達するためのそれらの使用を記載している。しかしながら、これらの文書は
全て、ＡＢＣ１タンパク質のインビボもしくはエクスビボでの伝達及び発現のた
めの組換えＡＡＶの使用も、又はそのような伝達の利点も、記載又は示唆してい
ない。本発明に係る欠陥組換えＡＡＶは、ヒトヘルパーウイルス（例えば、アデ
ノウイルス）が感染した細胞系への、２つのＡＡＶ逆方向反復領域（ＩＴＲ）と
接するＡＢＣ１タンパク質をコードする配列を含有するプラスミドと、ＡＡＶカ
プシド形成遺伝子（ｒｅｐ及びｃａｐ遺伝子）を保持するプラスミドとの共トラ
ンスフェクションにより調製されうる。作製された組換えＡＡＶは、次いで、従
来の技術により精製される。
【０４４８】 ヘルペスウイルス及びレトロウイルスに関して、組換えベクターの構築は、広
く文献に記載されている。特に、Ｂｒｅａｄｆｉｅｌｄら（１９９１）；ＥＰ４
５３２４２、ＥＰ１７８２２０、Ｂｅｒｎｓｔｅｉｎ ら（１９８５）；ＭｃＣ
ｏｒｍｉｃｋ（１９８５）等を参照のこと。
【０４４９】 特に、レトロウイルスは、分裂中の細胞に感染する組込み型ウイルスである。
レトロウイルスのゲノムは、２つの末端反復配列（ＬＴＲ）、カプシド形成配列
、及び３つのコーディング領域（ｇａｇ、ｐｏｌ、及びｅｎｖ）から本質的にな
る。レトロウイルス由来の組換えベクターにおいては、ｇａｇ、ｐｏｌ、及びｅ
ｎｖ遺伝子が、一般には完全又は部分的に欠失しており、目的の異種核酸配列と
交換されている。これらのベクターは、特にＭｏＭｕＬＶ（「マウスモノニー白
血病ウイルス」；ＭｏＭＬＶとも呼ばれる）、ＭＳＶ（「マウスモロニー肉腫ウ
イルス」）、ＨａＳＶ（「ハーベイ肉腫ウイルス」）；ＳＮＶ（「脾臓壊死ウイ
ルス」）；ＲＳＶ（「ラウス肉腫ウイルス」）、又はフレンドウイルスのような
様々な型のレトロウイルスから作製されうる。
【０４５０】 本発明に係るＡＢＣ１をコードする配列を含有する組換えレトロウイルスを構
築するには、特にＬＴＲ、カプシド形成配列、及び該コーディング配列を含有す
るプラスミドが、一般的には構築され、次いで、プラスミドに欠損しているレト
ロウイルス機能をトランスに提供することができるいわゆるカプシド形成細胞系
をトランスフェクトするために使用される。従って、一般的に、カプシド形成系
は、ｇａｇ、ｐｏｌ、及びｅｎｖ遺伝子を発現することができる。そのようなカ
プシド形成系、特にＰＡ３１７系（米国特許第４，８６１，７１９号）、Ｐｓｉ
ＣＲＩＰ系（ＷＯ９０／０２８０６）、及びＧＰ＋ｅｎｖＡｍ−１２系（ＷＯ８
９／０７１５０）は、先行技術において記載されている。さらに、組換えレトロ
ウイルスは、転写活性を抑制するためのＬＴＲのレベルでの修飾、及びｇａｇ遺
伝子の一部を含有する伸長したカプシド形成配列を含有していてもよい（Ｂｅｎ
ｄｅｒら、１９８７）。作製された組換えレトロウイルスは、次いで、従来の技
術により精製される。
【０４５１】 本発明を実施するためには、欠陥組換えアデノウイルスを使用することが好ま
しい。アデノウイルスの特に有利な特性は、コレステロール輸送活性を有するタ
ンパク質のインビボ発現にとって好ましい。本発明に係るアデノウイルスベクタ
ーは、精製された懸濁液の直接インビボ投与、又は移植を考慮した細胞、特に自
己細胞のエクスビボ形質転換にとって好ましい。さらに、本発明に係るアデノウ
イルスベクターは、特に、少量のウイルス懸濁液を使用した感染の実施を可能に
する、極めて高い感染効率のような重要な利点を示す。
【０４５２】 もう１つの特に好ましい本発明の実施形態によると、ＡＢＣ１タンパク質をコ
ードする配列を含有するレトロウイルスベクターを産生する系が、インビボの移
植に使用される。この目標のため使用されうる系は、特に、本発明に係るＡＢＣ
１タンパク質をコードする核酸配列を含有するレトロウイルスの産生を可能にす
るため修飾されたＰＡ３１７細胞（米国特許第４，８６１，７１９号）、Ｐｓｉ
ＣＲＩＰ細胞（ＷＯ９０／０２８０６）、及びＧＰ＋ｅｎｖＡｍ−１２細胞（米
国特許第５，２７８，０５６号）である。例えば、血液細胞系の前駆細胞である
多能性幹細胞が、対象から収集され単離されうる。次いで、これらの細胞は、培
養時、マクロファージに特異的なウイルス性、非ウイルス性、又は非ウイルス性
のプロモーターの調節下の、又はそれ自身のプロモーターの調節下の、ＡＢＣ１
タンパク質をコードする配列を含有するレトロウイルスベクターでトランスフェ
クトされうる。これらの細胞は、次いで、対象へと再導入される。これらの細胞
の分化は、マクロファージへと形質転換された際に、動脈壁からのコレステロー
ルの除去に関与する、ＡＢＣ１タンパク質を発現する血液細胞、特に単球を与え
るであろう。ＡＢＣ１タンパク質を発現するこれらのマクロファージは、増加し
た過剰コレステロール代謝能を有し、膜コレステロールの主要アクセプタによる
除去のため、コレステロール細胞表面へとを利用可能にするであろう。
【０４５３】 好ましくは、本発明のベクターにおいて、ＡＢＣ１タンパク質をコードする配
列は、感染細胞におけるその発現を可能にするシグナルの調節下に置かれる。こ
れらは、同種であってもよいし、又は異種、すなわち、ＡＢＣ１タンパク質の発
現を天然に担っているものとは異なるシグナルであってもよい。それらは、特に
、他のタンパク質の発現を担う配列、又は合成配列であり得る。特に、それらは
、特異的又は非特異的に、そして誘導可能又は非誘導可能な様式で遺伝子の転写
を刺激又は阻止する真核生物又はウイルスの遺伝子の配列又はそれらの派生配列
でありうる。例えば、それらは、感染させることが望まれる細胞のゲノム、又は
ウイルスのゲノムに由来するプロモーター配列、特にアデノウイルスのＥ１Ａプ
ロモーター又は主要後期プロモーター（ＭＬＰ）、サイトメガロウイルス（ＣＭ
Ｖ）プロモーター、ＲＳＶ−ＬＴＲ等であり得る。真核生物のプロモーターとし
ては、普遍的なプロモーター（ＨＰＲＴ、ビタミン、α−アクチン、チューブリ
ン等）、中間径フィラメント（デスミン、ニューロフィラメント、ケラチン、Ｇ
ＦＡＰ等）のプロモーター、（ＭＤＲ、ＣＦＴＲ、又はＶＩＩＩ型因子等の）治
療用遺伝子のプロモーター、組織特異的プロモーター（ピルビン酸キナーゼ、ビ
リン、脂肪酸結合腸タンパク質のプロモーター、平滑筋細胞α−アクチンのプロ
モーター、肝臓特異的プロモーター；ＡｐｏＡＩ、ＡｐｏＡＩＩ、ヒトアルブミ
ン等）、又は刺激に対応するプロモーター（ステロイドホルモン受容体、レチノ
イン酸受容体等）が挙げられる。さらに、これらの発現配列は、エンハンサー又
は制御配列等の付加により修飾されうる。さらに、挿入された遺伝子が発現配列
を含有しない場合、それは、そのような配列の下流の欠陥ウイルスのゲノムへと
挿入されうる。
【０４５４】 特定の実施形態において、本発明は、ＲＳＶ−ＬＴＲ又はＣＭＶ初期プロモー
ターより選択されるプロモーターの調節下でコレステロール代謝に関与するＡＢ
Ｃ１タンパク質をコードする核酸を含む欠陥組換えウイルスに関する。
【０４５５】 前述のように、本発明は、コレステロール輸送と関連した病理の治療及び／又
は予防のための薬学的組成物の調製のための前記のようなウイルスの使用にも関
する。
【０４５６】 本発明は、前記のような欠陥組換えウイルスを１個以上含む薬学的組成物にも
関する。これらの薬学的組成物は、局所、経口、非経口、鼻腔内、静脈内、筋肉
内、皮下、眼内、又は経皮等の経路による投与のため製剤化されうる。好ましく
は、本発明の薬学的組成物は、特に静脈注射、例えば患者の門脈への静脈注射の
ための注射可能製剤のための薬学的に許容される媒体、又は生理学的に適合性の
賦形剤を含む。これらは、特に、等張無菌溶液、又は場合に応じて滅菌水もしく
は生理食塩水を添加した時に注射可能溶液が調製されるような、乾燥、特に凍結
乾燥組成物に関する。患者の門脈への直接注射は、肝臓のレベルでの感染を標的
とし、従ってこの臓器のレベルに治療効果を集中させることができるため、好ま
しい。
【０４５７】 注射のため使用される欠陥組換えウイルスの用量は、様々なパラメータの関数
として、特にウイルスベクター、使用される投与様式、関連する病理、又は所望
の治療期間の関数として、調整されうる。一般的に、本発明に係る組換えアデノ
ウイルスは、約１０４〜１０１４ｐｆｕ／ｍｌ、好ましくは１０６〜１０１０ｐ
ｆｕ／ｍｌの用量の形態で、製剤化され投与される。「ｐｆｕ」（プラーク形成
単位）という用語は、ウイルス溶液の感染性に対応し、適当な細胞系に感染させ
、一般的には４８時間後に感染細胞溶解から生じるプラークの数を測定すること
により、決定される。ウイルス溶液のｐｆｕ力価を決定するための技術は、文献
に充分に記載されている。
【０４５８】 レトロウイルスに関して、本発明に係る組成物は、移植を考慮した産生細胞を
直接含有しうる。 これに関して、本発明のもう１つの主題は、１個以上の本発明に係る欠陥組換え
ウイルスが感染した任意の哺乳動物細胞に関する。より具体的には、本発明は、
そのようなウイルスが感染した任意のヒト細胞集団に関する。これらは、特に血
液起源の細胞（多能性幹細胞又は前駆細胞）、繊維芽細胞、筋芽細胞、肝細胞、
ケラチノサイト、平滑筋内皮細胞、グリア細胞等であり得る。
【０４５９】 本発明に係る細胞は、初代培養物に由来してもよい。これらは、当業者に既知
の任意の技術により収集され、次いでそれらの増殖を可能にする条件下で培養さ
れうる。より具体的に繊維芽細胞に関して、これらは、例えばＨａｍ（１９８０
）により記載された技術に従い、生検標本から容易に得られうる。これらの細胞
は、直接ウイルス感染に使用されてもよいし、又はその後の使用を考慮した自己
ライブラリーの樹立のため、例えば凍結により保存されてもよい。本発明に係る
細胞は、例えば樹立されたライブラリーから得られる二次的な培養物であっても
よい（例えばＥＰ２２８４５８、ＥＰ２８９０３４、ＥＰ４０００４７、ＥＰ４
５６６４０参照）。
【０４６０】 培養細胞は、次いで、生物学的活性を有するＡＢＣ１タンパク質を産生する能
力を付与するため、本発明に係る組換えウイルスにより感染される。感染は、当
業者に既知の技術に従い、インビトロで実施される。特に、使用される細胞の型
及び１細胞当たりのウイルスの所望のコピー数によって、当業者は、感染多重度
、そして場合によっては産生される感染周期の数を調整しうる。細胞がインビボ
投与を目的とするものである場合、これらの工程が、適当な生殖不能条件の下で
実施されなければならないことは、明らかに理解される。細胞の感染のために使
用される組換えウイルスの用量は、所望の目標に従い、当業者によって調整され
うる。インビボ投与のための前記の条件は、インビトロ感染にも適用されうる。
レトロウイルス感染のためには、感染させる細胞を、本発明に係る組換えレトロ
ウイルスを産生する細胞と共に培養することも可能である。これにより、レトロ
ウイルスの精製を排除することが可能である。
【０４６１】 本発明のもう１つの主題は、本発明に係る欠陥組換えレトロウイルス１個以上
が感染した哺乳動物細胞、又は組換えウイルスを産生する細胞と、細胞外マトリ
ックスとを含む移植片に関する。好ましくは、本発明に係る移植片は、１０５〜
１０１０個の細胞を含む。より好ましくは、それらは、１０６〜１０８個の細胞
を含む。
【０４６２】 より具体的には、本発明の移植片において、細胞外マトリックスは、ゲル化化
合物を含み、かつ細胞の固定を可能にする支持体を場合により含む。
【０４６３】 本発明に係る移植片の調製のため、様々な型のゲル化剤が使用されうる。ゲル
化剤は、ゲル構成を有するマトリックスへの細胞の包含のため、及び支持体への
細胞の固定を促進するため、適宜使用される。従って、特にコラーゲン、ゼラチ
ン、グリコサミノグリカン、フィブロネクチン、レクチン等のような様々な細胞
接着剤が、ゲル化剤として使用されうる。好ましくは、コラーゲンが、本発明に
関して使用される。これは、ヒト、ウシ、又はマウス起源のコラーゲンであり得
る。より好ましくは、Ｉ型コラーゲンが使用される。
【０４６４】 前述のように、本発明に係る組成物は、好ましくは、細胞の固定を可能にする
支持体を含む。固定という用語は、細胞の支持体への接着及び／又は付着を引き
起こす、任意の形態の生物学的及び／又は化学的及び／又は物理的相互作用を意
味する。さらに、細胞は、使用される支持体を覆っていてもよいし、又はこの支
持体の内部へ侵入していてもよいし、又はその両方であってもよい。固体状、無
毒、かつ／又は生体適合性の支持体を、本発明に関して使用することが好ましい
。特に、ポリテトラフルオロエチレン（ＰＴＦＥ）繊維又は生物学的起源の支持
体を使用することが可能である。
【０４６５】 本発明は、従って、コレステロール輸送と関連した病理、特に肥満、ＨＤＬ欠
損症、高トリグリセリド血症、動脈硬化、又は心臓血管状態の領域では、心筋梗
塞、不整脈、突然死、心臓代償不全、及び脳血管発作の治療又は予防のための極
めて有効な手段を提供する。
【０４６６】 さらに、この治療は、ヒトにも、トリ、ウシ、ペット動物（イヌ、ネコ等）、
ウマ、サカナ等のような任意の動物にも、適用されうる。
【０４６７】 組換え宿主細胞 本発明は、本発明の核酸、より具体的には配列番号６９もしくは配列番号７０
又は相補ポリヌクレオチド配列いずれかのポリヌクレオチド配列を含む核酸を含
む組換え宿主細胞に関する。
【０４６８】 本発明は、本発明の核酸、より具体的には配列番号６９もしくは配列番号７０
又は相補ポリヌクレオチド配列のいずれかに示されるようなヌクレオチド配列を
含む核酸を含む組換え宿主細胞にも関する。
【０４６９】 特に、本発明は、配列番号１、４〜６５、６８〜７０、７２〜８８、１０３、
１０９〜１１８、及び１３７、又は相補ポリヌクレオチド配列のうちのいずれか
１つを含む核酸を含む組換え宿主細胞に関する。
【０４７０】 本発明は、配列番号１、４〜６５、６８〜７０、７２〜８８、１０３、１０９
〜１１８、及び１３７、又は相補ポリヌクレオチド配列のうちのいずれか１つに
示されるようなポリヌクレオチド配列を含む核酸を含む組換え宿主細胞にも関す
る。
【０４７１】 本発明は、配列番号６９のヌクレオチド１〜２４４もしくは配列番号７０のヌ
クレオチド１〜３５７又は相補ポリヌクレオチド配列を含む核酸を含む組換え宿
主細胞にも関する。
【０４７２】 本発明は、配列番号７１のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする核酸
を含む組換え宿主細胞にも関する。
【０４７３】 本発明は、配列番号７１のアミノ酸１〜６０を含むポリペプチドをコードする
核酸を含む組換え宿主細胞にも関する。
【０４７４】 もう１つの態様によると、本発明は、本発明に係る組換えベクターを含む組換
え宿主細胞にも関する。従って、本発明は、本発明の核酸、より具体的には配列
番号６９もしくは配列番号７０又は相補ポリヌクレオチド配列いずれかのポリヌ
クレオチド配列を含む核酸のうちのいずれかを含む組換えベクターを含む組換え
宿主細胞にも関する。
【０４７５】 特に、本発明は、配列番号１、４〜６５、６８〜７０、７２〜８８、１０３、
１０９〜１１８、及び１３７、又は相補ポリヌクレオチド配列のうちのいずれか
１つを含む核酸を含む組換えベクターを含む組換え宿主細胞に関する。
【０４７６】 本発明は、配列番号１、４〜６５、６８〜７０、７２〜８８、１０３、１０９
〜１１８、及び１３７、又は相補ポリヌクレオチド配列のうちのいずれか１つに
示されるようなポリヌクレオチド配列を含む核酸を含む組換えベクターを含む組
換え宿主細胞にも関する。
【０４７７】 本発明は、配列番号６９のヌクレオチド１〜２４４もしくは配列番号７０のヌ
クレオチド１〜３５７又は相補ポリヌクレオチド配列を含む核酸を含む組換えベ
クターを含む組換え宿主細胞にも関する。
【０４７８】 本発明は、配列番号７１のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする核酸
を含む組換えベクターを含む組換え宿主細胞にも関する。
【０４７９】 本発明は、配列番号７１のアミノ酸１〜６０を含むポリペプチドをコードする
核酸を含む組換えベクターを含む組換え宿主細胞にも関する。
【０４８０】 本発明に係る好ましい宿主細胞は、例えば、 ａ）原核宿主細胞：大腸菌（ＤＨ５−α株）、バチルスズブチリス（Ｂａｃｉ
ｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、サルモネラチフィムリウム（Ｓａｌｍｏｎｅｌ
ｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）
、ストレプトミセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）、及びスタフィロコッカス（
Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）のような属の株； ｂ）真核宿主細胞：ＨｅＬａ細胞（ＡＴＣＣ番号ＣＣＬ２）、Ｃｖ１細胞（Ａ
ＴＣＣ番号ＣＣＬ７０）、ＣＯＳ細胞（ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ１６５０）、Ｓｆ−
９細胞（ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ１７１１）、ＣＨＯ細胞（ＡＴＣＣ番号ＣＣＬ−６
１）、又は３Ｔ３細胞（ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ−６３６１）：である。
【０４８１】 変異型ＡＢＣ１ポリペプチド もう１つの態様によると、本発明は、変異型ＡＢＣ１遺伝子、より具体的には
コレステロール逆輸送の欠損に罹患した患者、より具体的にはタンジアー病に罹
患した患者の変異型ＡＢＣ１遺伝子によりコードされたポリペプチドに関する。
【０４８２】 前述のように、本発明に係るＡＢＣ１遺伝子には、１７個の突然変異が同定さ
れている（表ＩＶ参照）。
【０４８３】 配列番号８９〜１０２に示されるようなポリペプチドは、非サイレントＡＢＣ
１遺伝子突然変異に対応し、それらを特異的に認識する抗体の調製にとって特に
有用である。そのような抗体は、試験を受ける対象、好ましくはコレステロール
逆輸送の欠損に特徴的な症状を有する患者、より好ましくはタンジアー及び／又
はＦＨＤ病に特徴的な症状を有する患者から得られた試料の中の変異型ＡＢＣ１
ポリペプチドの産生を検出するための手段を構成する。
【０４８４】 もう１つの態様によると、本発明は、配列番号８９〜１０２のうちのいずれか
１つのアミノ酸配列を含むポリペプチドにも関する。
【０４８５】 本発明によると、本発明は、配列番号８９〜１０２のうちのいずれか１つに示
されるようなアミノ酸配列を含むポリペプチドにも関する。
【０４８６】 一般的に、本発明に係るポリペプチドは、単離又は精製された形態で提供され
る。
【０４８７】 ＡＢＣ１ポリペプチドを作製するための方法 本発明は、配列番号７１及び８９〜１０２のうちのいずれか１つのアミノ酸配
列を含むポリペプチドの作製のための方法にも関し、該方法は、 ａ）該ポリペプチドをコードする核酸を適当なベクターに挿入する工程； ｂ）予め形質転換された細胞を適当な培養培地中で培養するか、又は工程ａ）
の組換えベクターで宿主細胞をトランスフェクトする工程； ｃ）条件培養培地を回収するか、又は、超音波もしくは浸透圧ショックにより
、宿主細胞を溶解させる工程； ｄ）工程ｃ）で得られた該培養培地又は細胞溶解物から該ポリペプチドを分離
し精製する工程；並びに ｅ）適宜、産生された組換えポリペプチドを特徴決定する工程：を含む。
【０４８８】 本発明の特定の実施形態は、配列番号７１のアミノ酸１〜６０のアミノ酸配列
を含むポリペプチドを作製するための方法に関する。
【０４８９】 本発明に係るポリペプチドは、このポリペプチド又はその断片もしくは異型に
対する抗体が予め固定化されたイムノアフィニティクロマトグラフィカラムとの
結合により特徴付けられ得る。
【０４９０】 もう１つの態様によると、本発明に係る組換えポリペプチドは、当業者に既知
の、例えばＦ．Ａｕｓｕｂｅｌら（１９８９）に記載された方法に従い、それを
適当な一連のクロマトグラフィカラムに通すことにより精製されうる。
【０４９１】 本発明に係るポリペプチドは、均一溶液又は固相のいずれかにおける従来の化
学合成技術によっても調製されうる。例えば、本発明に係るポリペプチドは、Ｈ
ｏｕｂｅｎ Ｗｅｙｌ（１９７４）により記載された均一溶液技術又はＭｅｒｒ
ｉｆｉｅｌｄ（１９６５ａ；１９６５ｂ）により記載された固相合成技術により
調製されうる。
【０４９２】 配列番号７１のアミノ酸１〜６０を含むアミノ酸配列を有するポリペプチドと
「相同」と呼ばれるポリペプチドも、本発明の一部を形成する。そのような相同
ポリペプチドは、配列番号７１のアミノ酸１〜６０と比較して、等価アミノ酸に
よるアミノ酸置換を１個以上有するアミノ酸配列を含む。
【０４９３】 本発明に係る「等価アミノ酸」とは、例えば、当業者に周知の技術による、Ｄ
型残基によるＬ型残基の交換、又はポリグルタミン酸によるグルタミン酸（Ｅ）
の交換を意味することが理解されよう。例えば、少なくとも１個のＤ型残基を含
有するペプチドの合成は、Ｋｏｃｈ（１９７７）により記載されている。もう１
つの態様によると、同一クラスに属する２つのアミノ酸、即ち２つの電荷を有す
る極性アミノ酸、非極性アミノ酸、塩基性アミノ酸、又は酸性アミノ酸も、等価
アミノ酸と見なされる。
【０４９４】 レトロ−インバース（ｒｅｔｒｏ−ｉｎｖｅｒｓｅ）結合（ＮＨＣＯ）、カル
バ（ｃａｒｂａ）結合（ＣＨ２ＣＨ２）、又はケトメチレン（ｋｅｔｏｍｅｔｈ
ｙｌｅｎｅ）結合（ＣＯ−ＣＨ２）のような少なくとも１個の非ペプチド結合を
含むポリペプチドも、本発明の一部を形成する。
【０４９５】 好ましくは、少なくとも１個のアミノ酸の付加、欠失、置換を１個以上含む本
発明に係るポリペプチドは、非修飾型ポリペプチドに対する抗体により認識され
る能力を保持しているであろう。
【０４９６】 抗体 本発明に係るＡＢＣ１ポリペプチド、特に１）配列番号７１及び８９〜１０２
のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含むポリペプチド、２）配列番号７１の
アミノ酸１〜６０を含むポリペプチド、３）配列番号７１のアミノ酸１〜６０を
含む、配列番号７１及び８９〜１０２のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含
むポリペプチドのポリペプチド断片もしくは異型、又は４）配列番号７１のアミ
ノ酸１〜６０を含むポリペプチドと「相同」と呼ばれるポリペプチドは、特に患
者における正常型又は改変型のＡＢＣ１ポリペプチドの産生の検出のための抗体
の調製のために、使用されうる。
【０４９７】 配列番号７１のアミノ酸１〜６０を含むポリペプチドに対する抗体も、本発明
の一部を形成する。
【０４９８】 配列番号７１のアミノ酸１〜６０を含むアミノ酸配列を有するポリペプチドと
「相同」と呼ばれるポリペプチドに対する抗体も、本発明の一部を形成する。そ
のような抗体は、配列番号７１のアミノ酸１〜６０と比較して、等価アミノ酸に
よるアミノ酸置換を１個以上有するアミノ酸配列を含む相同ポリペプチドに対す
る抗体である。
【０４９９】 本発明の目的のための「抗体」とは、特に、ポリクローナルもしくはモノクロ
ーナルの抗体、又は断片（例えば、Ｆ（ａｂ）’２及びＦａｂ断片）、又は本発
明に係る標的のポリペプチドもしくはポリペプチド断片を認識する初期抗体のド
メインを含む任意のポリペプチドを意味することが理解されよう。
【０５００】 モノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒ及びＭｉｌｓｔｅｉｎ（１９７５）によ
り記載された技術に従い、ハイブリドーマから調製されうる。
【０５０１】 本発明によると、組換え又は化学合成により作製されたポリペプチド、及びそ
の断片又はその他の誘導体もしくは類似体（融合タンパク質を含む）は、本発明
に係るポリペプチドを認識する抗体を生成させるための免疫原として使用されう
る。そのような抗体には、これらに限定されないが、ポリクローナル抗体、モノ
クローナル抗体、キメラ抗体、単鎖抗体、Ｆａｂ断片、及びＦａｂ発現ライブラ
リーが含まれる。本発明の抗ＡＢＣ１抗体は、交差反応性を有していてもよく、
例えば異なる種由来のＡＢＣ１ポリペプチドを認識してもよい。ポリクローナル
抗体は、比較的大きい交差反応の可能性を有する。又は、本発明の抗体は、単一
の型のＡＢＣ１に特異的であってもよい。好ましくは、そのような抗体は、ヒト
ＡＢＣ１に特異的である。
【０５０２】 当分野において既知の様々な手法が、ＡＢＣ１ポリペプチド又はその誘導体も
しくは類似体に対するポリクローナル抗体の作製のため使用されうる。抗体の作
製には、これらに限定されないがウサギ、マウス、ラット、ヒツジ、ヤギ等を含
む様々な宿主動物を、ＡＢＣ１ポリペプチド又はその誘導体（例えば、断片又は
融合タンパク質）の注射により免疫感作することができる。１つの実施形態にお
いて、ＡＢＣ１ポリペプチド又はその断片は、免疫原性担体、例えばウシ血清ア
ルブミン（ＢＳＡ）又はキーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）と結合さ
せられうる。宿主の種に応じて、これらに限定されないがフロイント（完全及び
不完全）、水酸化アルミニウムのような鋼質ゲル、リゾレシチンのような界面活
性物質、プルロニックポリオール（ｐｌｕｒｏｎｉｃ ｐｏｌｙｏｌ）、ポリ陰
イオン、ペプチド、油乳濁剤、キーホールリンペットヘモシアニン、ジニトロフ
ェノール、並びに有用である可能性のあるＢＣＧ（ｂａｃｉｌｌｅ Ｃａｌｍｅ
ｔｔｅ−Ｇｕｅｒｉｎ）及びコリネバクテリウムパルブム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃ
ｔｅｒｉｕｍ ｐａｒｖｕｍ）のようなヒトアジュバントを含む、様々なアジュ
バントが、免疫原性応答を増加させるために使用されうる。
【０５０３】 ＡＢＣ１ポリペプチド、又はその断片、類似体、もしくは誘導体に対するモノ
クローナル抗体の調製には、連続的な培養細胞系による抗体分子の作製を提供す
る任意の技術が使用されうる。これらには、Ｋｏｈｌｅｒ及びＭｉｌｓｔｅｉｎ
（１９７５）により最初に開発されたハイブリドーマ技術、及びトリオーマ技術
、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術（Ｋｏｚｂｏｒら、１９８３ａ；Ｃｏｔｅら、
１９８３）、及びヒトモノクローナル抗体を作製するためのＥＢＶハイブリドー
マ技術［Ｃｏｌｅら、１９８５］が含まれる。本発明のさらなる実施形態におい
て、モノクローナル抗体は無胚動物［１９８９年１２月２８日公開の国際特許公
開第ＷＯ８９／１２６９０］において作製されうる。事実、本発明によると、適
当な生物学的活性を有するヒト抗体分子からの遺伝子と共にＡＢＣ１ポリペプチ
ドに特異的なマウス抗体分子からの遺伝子をスプライシングすることによる「キ
メラ抗体」の作製のため開発された技術［Ｍｏｒｒｉｓｏｎら（１９８４）；Ｎ
ｅｕｂｅｒｇｅｒら（１９８４）；Ｔａｋｅｄａら（１９８５）］が、使用され
うる。そのような抗体は、本発明の範囲内である。そのようなヒト又はヒト化キ
メラ抗体は、異種抗体よりも、免疫応答、特にアレルギー応答を誘導する可能性
がはるかに低いため、ヒトの疾患又は障害の治療（下記）における使用にとって
好ましい。
【０５０４】 本発明によると、単鎖抗体の作製のため記載された技術［Ｈｕｓｔｏｎの米国
特許第５，４７６，７８６号及び第５，１３２，４０５号；米国特許第４，９４
６，７７８号］は、ＡＢＣ１ポリペプチド特異的単鎖抗体の作製に適合している
かもしれない。本発明のさらなる実施形態は、ＡＢＣ１ポリペプチド又はその誘
導体もしくは類似体に対する所望の特異性を有するモノクローナルＦａｂ断片の
迅速かつ容易な同定を可能にする、Ｆａｂ発現ライブラリーの構築のため記載さ
れた技術を利用する（Ｈｕｓｅら、１９８９）。
【０５０５】 抗体分子のイディオタイプを含有する抗体断片は、既知の技術により生成させ
られ得る。例えば、そのような断片には、これらに限定されないが、抗体分子の
ペプシン消化により作製されうるＦ（ａｂ’）２断片；Ｆ（ａｂ’）２断片のジ
スルフィド架橋を還元することにより生成させられうるＦａｂ’断片、及びパパ
イン及び還元剤により抗体分子を処理することにより生成させられ得るＦａｂ断
片が含まれる。
【０５０６】 抗体の作製において、所望の抗体のスクリーニングは、当分野において既知の
技術、例えばラジオイムノアッセイ、ＥＬＩＳＡ（酵素結合免疫吸着アッセイ）
、「サンドイッチ」イムノアッセイ、イムノラジオメトリックアッセイ、ゲル拡
散沈降反応、免疫拡散アッセイ、インサイチューイムノアッセイ（例えば、コロ
イド金、酵素、又は放射性同位体標識を使用）、ウェスタンブロッティング、沈
降反応、凝集アッセイ（例えば、ゲル凝集アッセイ、赤血球凝集アッセイ）、補
体結合アッセイ、免疫蛍光アッセイ、プロテインＡアッセイ、及び免疫電気泳動
アッセイ等により達成されうる。１つの実施形態において、抗体結合は、一次抗
体上の標識を検出することにより検出される。もう１つの実施形態においては、
一次抗体が、二次抗体又は試薬の一次抗体との結合を検出することにより検出さ
れる。さらなる実施形態においては、二次抗体が標識される。イムノアッセイに
おける結合を検出するための多くの手段が、当分野において既知であり、本発明
の範囲内である。例えば、ＡＢＣ１ポリペプチドの特異的エピトープを認識する
抗体を選択するには、そのようなエピトープを含有するＡＢＣ１ポリペプチド断
片と結合する産物について、生成したハイブリドーマをアッセイすることができ
る。特定の動物種由来のＡＢＣ１ポリペプチドに特異的な抗体の選択には、その
動物種の細胞から発現された、又は単離されたＡＢＣ１ポリペプチドとの陽性結
合に基づき選択することができる。
【０５０７】 前述の抗体は、例えばウェスタンブロッティングのためのＡＢＣ１ポリペプチ
ド、インサイチューのＡＢＣ１ポリペプチドの位置及び活性に関する当分野にお
いて既知の方法、例えば前記の、もしくは当分野において既知の検出技術のいず
れかを使用した適当な生理学的試料等の中のそのレベルの測定において使用され
うる。
【０５０８】 特定の実施形態において、ＡＢＣ１ポリペプチドの活性に対してアゴニスト又
はアンタゴニストとして作用する抗体が生成させられ得る。そのような抗体は、
リガンドを同定するための下記のアッセイを使用して試験されうる。
【０５０９】 本発明は、トリオーマ技術又はＫｏｚｂｏｒら（１９８３ｂ）により記載され
たハイブリドーマ技術において作製されるような、１）配列番号７１及び８９〜
１０２のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含むポリペプチド、２）配列番号
７１のアミノ酸１〜６０を含むポリペプチド、３）配列番号７１のアミノ酸１〜
６０を含む、配列番号７１及び８９〜１０２のうちのいずれか１つのアミノ酸配
列を含むポリペプチドのポリペプチド断片もしくは異型、又は４）配列番号７１
のアミノ酸１〜６０を含むポリペプチドと「相同」と呼ばれるポリペプチドに対
する抗体に関し、これらも、本発明の一部を形成する。
【０５１０】 本発明は、米国特許第４，９４６，７７８号又はＭａｒｔｉｎｅａｕら（１９
９８）により記載されたような単鎖Ｆｖ抗体断片（ＳｃＦｖ）にも関する。
【０５１１】 本発明に係る抗体は、Ｒｉｄｄｅｒら（１９９５）に記載されたようなファー
ジライブラリーを利用して得られる抗体断片、又はＲｅｉｎｍａｎｎら（１９９
７）及びＬｅｇｅｒら（１９９７）により記載されたようなヒト化抗体も含む。
【０５１２】 本発明に係る抗体調製物は、試料中の抗原の存在及び／又は存在量の同定を目
的とする免疫学的検出試験において有用である。
【０５１３】 本発明に係る抗体は、さらに、同位体又は非同位体である検出可能マーカー、
例えば蛍光を含んでいてもよいし、又は当業者に周知の技術に従いビオチンのよ
うな分子とカップリングさせられ得る。
【０５１４】 従って、本発明の主題は、さらに、試料中の本発明に係るポリペプチドの存在
を検出する方法であり、該方法は、 ａ）１）配列番号７１及び８９〜１０２のうちのいずれか１つのアミノ酸配列
を含むポリペプチド、２）配列番号７１のアミノ酸１〜６０を含むポリペプチド
、３）配列番号７１のアミノ酸１〜６０を含む、配列番号７１及び８９〜１０２
のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含むポリペプチドのポリペプチド断片も
しくは異型、又は４）配列番号７１のアミノ酸１〜６０を含むポリペプチドと「
相同」と呼ばれるポリペプチドに対する抗体と被検試料を接触させる工程、並び
に ｂ）形成された抗原／抗体複合体を検出する工程：を含む。
【０５１５】 本発明は、試料中の本発明に係るポリペプチドの存在を診断又は検出するため
のボックス又はキットにも関し、該ボックスは、 ａ）１）配列番号７１及び８９〜１０２のうちのいずれか１つのアミノ酸配列
を含むポリペプチド、２）配列番号７１のアミノ酸１〜６０を含むポリペプチド
、３）配列番号７１のアミノ酸１〜６０を含む、配列番号７１及び８９〜１０２
のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含むポリペプチドのポリペプチド断片も
しくは異型、又は４）配列番号７１のアミノ酸１〜６０を含むポリペプチドと「
相同」と呼ばれるポリペプチドに対する抗体、並びに ｂ）形成された抗原／抗体複合体の検出を可能にする試薬：を含む。
【０５１６】 薬学的組成物及び治療法 本発明は、有効量の、正常ＡＢＣ１ポリペプチド、特に配列番号７１のアミノ
酸配列を含むポリペプチドの産生をもたらすことができるポリヌクレオチドを、
治療に有効な量、含むことを特徴とする、動脈硬化のようなコレステロール代謝
の欠損、具体的にはコレステロール輸送の欠損、さらに具体的にはコレステロー
ル逆輸送の欠損の予防又は治療を目的とする薬学的組成物にも関する。好ましい
実施形態において、ＡＢＣ１ポリペプチドは、配列番号７１のアミノ酸１〜６０
を含む。
【０５１７】 本発明の主題は、さらに、正常ＡＢＣ１ポリペプチド、特に配列番号７１のア
ミノ酸配列を含むポリペプチドを、治療に有効な量、含むことを特徴とする、動
脈硬化のようなコレステロール代謝の欠損、具体的にはコレステロール輸送の欠
損、さらに具体的にはコレステロール逆輸送の欠損の予防又は治療を目的とする
薬学的組成物である。好ましい実施形態において、ＡＢＣ１ポリペプチドは、配
列番号７１のアミノ酸１〜６０を含む。
【０５１８】 本発明は、様々な形態の動脈硬化の予防、又はより具体的にコレステロール逆
輸送の機能障害に罹患した対象の治療を目的とする医薬品の製造のための、配列
番号７１のアミノ酸配列又は配列番号７１のアミノ酸１〜６０を有するＡＢＣ１
ポリペプチドの使用にも関する。
【０５１９】 本発明は、配列番号７１のアミノ酸配列又は配列番号７１のアミノ酸１〜６０
を有するポリペプチドを、治療に有効な量、含む、コレステロール逆輸送の機能
障害に罹患した対象の予防又は治療のための薬学的組成物に関する。
【０５２０】 さらにもう１つの態様によると、コレステロール代謝、具体的にはコレステロ
ール輸送、さらに具体的にはコレステロール逆輸送の欠損により引き起こされる
疾患の予防又は治療のための処置法も、本発明の主題であり、そのような方法は
、１個以上の生理学的に適合性の媒体及び／又は賦形剤と適宜組み合わされたＡ
ＢＣ１ポリペプチドを、治療に有効な量、患者に投与する工程を含む。
【０５２１】 好ましくは、本発明に係るポリペプチドを含む薬学的組成物が、患者に投与さ
れよう。従って、本発明は、有効量の正常ＡＢＣ１ポリペプチド、特に配列番号
７１のアミノ酸配列又は配列番号７１のアミノ酸１〜６０を有するポリペプチド
の産生をもたらすことが可能なポリヌクレオチドを、治療に有効な量、含むこと
を特徴とする、動脈硬化のようなコレステロール代謝の欠損、具体的にはコレス
テロール輸送の欠損、さらに具体的にはコレステロール逆輸送の欠損の予防又は
治療を目的とする薬学的組成物にも関する。
【０５２２】 本発明の主題は、さらに、正常ＡＢＣ１ポリペプチド、特に配列番号７１のア
ミノ酸配列又は配列番号７１のアミノ酸１〜６０を有するポリペプチドを、治療
に有効な量、含むことを特徴とする、動脈硬化のようなコレステロール代謝の欠
損、具体的にはコレステロール輸送の欠損、さらに具体的にはコレステロール逆
輸送の欠損の予防又は治療を目的とする薬学的組成物である。
【０５２３】 そのような薬学的組成物は、好ましくは、１μｇ／ｋｇ／日〜１０ｍｇ／ｋｇ
／日の範囲、好ましくは少なくとも０．０１ｍｇ／ｋｇ／日、より好ましくは０
．０１〜１ｍｇ／ｋｇ／日の量のＡＢＣ１ポリペプチドの、例えば非経口経路に
よる投与に適しているであろう。
【０５２４】 本発明は、タンジアー及び／又はＦＨＤ病のようなコレステロール逆輸送の欠
損と関連した疾患の治療を目的とする、本発明に係るＡＢＣ１ポリペプチドをコ
ードする核酸を含む薬学的組成物、及び本発明に係るＡＢＣ１ポリペプチドを含
む薬学的組成物も、提供する。
【０５２５】 本発明は、本発明に係るＡＢＣ１タンパク質をコードする核酸をインビボで伝
達し発現させることを含む、コレステロール輸送と関連した病理の治療のための
新規治療法にも関する。特に、本発明は、タンジアー及び／又はＦＨＤ病と関連
したＨＤＬ欠損症、ＨＤＬ欠損症、ＬＣＡＴ欠損症、マラリア、及び糖尿病のよ
うなＨＤＬ欠損の治療及び／又は予防のための新規治療法を提供する。
【０５２６】 従って、本発明は、コレステロールの輸送及び代謝の異常と関連した心臓血管
及び神経の病理の治療及び予防のための新規手法を提供する。特に、本発明は、
患者又は対象におけるコレステロール逆輸送を回復させるか、又はその改善を促
進するための方法を提供する。
【０５２７】 従って、本発明は、１個以上の生理学的に適合性の媒体及び／又は賦形剤と組
み合わされた、ＡＢＣ１ポリペプチドをコードする核酸を含む、コレステロール
逆輸送の機能異常に罹患した対象の予防又は治療を目的とする薬学的組成物にも
関する。
【０５２８】 本発明の特定の実施形態によると、ＡＢＣ１タンパク質のインビボ作製のため
の組成物が提供される。この組成物は、生理学的に適合性の媒体及び／又は賦形
剤の溶液の状態の、適当な制御配列の調節下に置かれたＡＢＣ１ポリペプチドを
コードする核酸を含む。
【０５２９】 従って、本発明は、適当な制御因子の調節下に置かれた、配列番号７１のアミ
ノ酸配列を含むポリペプチドをコードする核酸を含む組成物にも関する。
【０５３０】 本発明は、適当な制御因子の調節下に置かれた、配列番号７１のアミノ酸１〜
６０を含むポリペプチドをコードする核酸を含む組成物にも関する。
【０５３１】 好ましくは、そのような組成物は、適当な制御因子の調節下に置かれた、配列
番号６９又は配列番号７０のポリヌクレオチド配列を含む核酸を含むであろう。
【０５３２】 もう１つの態様によると、コレステロール代謝、具体的にはコレステロール輸
送、さらに具体的にはコレステロール逆輸送の欠損により引き起こされる疾患の
予防又は治療のための処置法も、本発明の主題であり、そのような方法は、１個
以上の生理学的に適合性の媒体及び／又は賦形剤と適宜組み合わされた、該患者
において本発明に係るＡＢＣ１ポリペプチドをコードする核酸を患者に投与する
工程を含む。
【０５３３】 本発明は、１個以上の生理学的に適合性の賦形剤と組み合わされた、本発明に
係る組換えベクターを含む、コレステロール逆輸送の機能障害に罹患した対象の
予防又は治療を目的とする薬学的組成物にも関する。
【０５３４】 特定の実施形態によると、本発明に係る核酸を、宿主細胞、特に哺乳動物から
得られた宿主細胞へとインビボ導入する方法は、薬学的に適合性のベクターと、
適当な制御配列の調節下に置かれた本発明に係る「裸の」核酸とを含む調製物を
、選択された組織、例えば平滑筋組織のレベルで、局所注射により導入し、「裸
の」核酸をこの組織の細胞に吸収させる工程を含む。
【０５３５】 本発明は、様々な形態の動脈硬化の予防もしくは治療、又はより具体的にコレ
ステロール逆輸送の機能障害に罹患した対象の治療を目的とする医薬品の製造の
ための、ＡＢＣ１タンパク質をコードする本発明に係る核酸の使用にも関する。
【０５３６】 本発明は、様々な形態の動脈硬化の予防、又はより具体的にコレステロール逆
輸送の機能障害に罹患した対象の治療を目的とする医薬品の製造のための、ＡＢ
Ｃ１タンパク質をコードする核酸を含む本発明に係る組換えベクターの使用にも
関する。
【０５３７】 前述のように、本発明は、コレステロール輸送と関連した病理の治療及び／又
は予防のための薬学的組成物の調製のための、本発明に係る欠陥組換えウイルス
の使用にも関する。
【０５３８】 本発明は、コレステロール逆輸送の欠損と関連した心臓血管疾患の治療及び／
又は予防を目的とする薬学的組成物の調製のための、そのような欠陥組換えウイ
ルスの使用に関する。従って、本発明は、１個以上の本発明に係る欠陥組換えウ
イルスを含む薬学的組成物にも関する。
【０５３９】 本発明は、体内に移植され、生物学的活性を有するＡＢＣ１タンパク質の長期
的かつ効率的なインビボ発現を可能にする、本発明に係るウイルスでエクスビボ
で遺伝学的に修飾された細胞、又はそのようなウイルスを産生する細胞の使用に
も関する。
【０５４０】 本発明は、ＡＢＣ１ポリペプチドをコードする核酸をウイルスベクターに組み
込むことが可能であること、及びこれらのベクターが生物学的活性を有する成熟
型の効率的な発現を可能にすることを示す。より具体的には、本発明は、ＡＢＣ
１のインビボ発現が、そのようなＤＮＡが組み込まれたアデノウイルスの直接投
与により、又はそのようなＤＮＡが組み込まれたアデノウイルスもしくはレトロ
ウイルスを産生する細胞、もしくはそれらにより遺伝学的に修飾された細胞の移
植により、得られうることを示す。
【０５４１】 好ましくは、本発明の薬学的組成物は、特に、例えば患者の門脈への静脈注射
のための注射可能製剤のための、薬学的に許容される媒体又は生理学的に適合性
の賦形剤を含む。これらは、特に等張無菌溶液、又は場合に応じて滅菌水もしく
は生理食塩水を添加した時に注射可能溶液が調製されるような乾燥、特に凍結乾
燥組成物に関しうる。患者の門脈への直接注射は、肝臓のレベルでの感染を標的
とし、従ってこの臓器のレベルに治療効果を集中させることが可能であるため、
好ましい。
【０５４２】 「薬学的に許容される媒体又は賦形剤」には、投与法にとって薬学的に許容さ
れ、無菌であり、そして適当な分散剤又は湿潤剤及び懸濁化剤を使用して製剤化
された水性又は油性の懸濁液であり得る希釈剤及び増量剤が含まれる。特定の薬
学的に許容される担体、及び活性化合物と担体との比率は、組成物の溶解度及び
化学的特性、特定の投与様式、並びに標準的な薬学的実務により決定される。
【０５４３】 本発明の核酸、ポリペプチド、ベクター、又は宿主細胞は、好ましくは、薬学
的に許容される媒体又は賦形剤に含まれてインビボ導入されよう。「薬学的に許
容される」という語句は、生理学的に容認され、ヒトへ投与された際に、典型的
にはアレルギー反応、又は胃の不調、眩暈等のような類似の都合の悪い反応を生
じない分子的実体及び組成物をさす。好ましくは、本明細書において使用される
ように、「薬学的に許容される」という用語は、動物、より具体的にはヒトにお
ける使用が、連邦政府もしくは州政府の規制機関により承認されているか、又は
米国薬局方もしくはその他の一般的に認められている薬局方に掲載されているこ
とを意味する。「賦形剤」という用語は、化合物と共に投与される希釈剤、佐剤
、賦形剤、又は媒体をさす。そのような薬学的担体は、水、及びピーナッツ油、
大豆油、鉱油、ゴマ油等のような石油、動物油、植物油、又は合成起源の油、例
えばを含む油のような無菌の液体でありうる。水、又は生理食塩水、デキストロ
ース水溶液、及びグリセロール水溶液のような水性溶液が、好ましくは、特に注
射可能溶液のための賦形剤として使用される。適当な薬学的賦形剤は、Ｅ．Ｗ．
Ｍａｒｔｉｎによる「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ
Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」に記載されている。
【０５４４】 本発明に係る薬学的組成物は、経口、直腸、非経口、静脈内、皮下、又は皮内
の経路により同等に投与されうる。
【０５４５】 本発明は、様々な形態の動脈硬化の予防、又はより具体的にコレステロール逆
輸送の機能障害に罹患した患者もしくは対象の治療を目的とする医薬品の製造の
ための、配列番号７１のアミノ酸配列又は配列番号７１のアミノ酸１〜６０を有
するＡＢＣ１ポリペプチドの使用にも関する。
【０５４６】 本発明は、最後に、１個以上の薬学的に許容される媒体又は賦形剤と組み合わ
された、配列番号７１のアミノ酸配列を有するポリペプチド又は配列番号７１の
アミノ酸１〜６０を含むポリペプチドを、治療に有効な量、含む、コレステロー
ル逆輸送の機能障害に罹患した患者又は対象の予防又は治療のための薬学的組成
物に関する。
【０５４７】 もう１つの態様によると、１個以上の薬学的に許容される媒体又は賦形剤と適
宜組み合わされた、患者においてＡＢＣ１タンパク質をコードする核酸を患者又
は対象に投与する工程を含む、コレステロール代謝、より具体的にはコレステロ
ール輸送、さらに具体的にはコレステロール逆輸送の欠損により引き起こされる
疾患の予防又は治療のための処置法も、本発明の主題である。
【０５４８】 さらにもう１つの態様によると、１個以上の生理学的に適合性の媒体及び／又
は賦形剤と適宜組み合わされた、該患者又は対象において治療に有効な量の本発
明に係るＡＢＣ１タンパク質を患者又は対象に投与する工程を含む、コレステロ
ール代謝、より具体的にはコレステロール輸送、さらに具体的にはコレステロー
ル逆輸送の欠損により引き起こされる疾患の予防又は治療のための処置法も、本
発明の主題である。
【０５４９】 もう１つの実施形態において、本発明に係る核酸、ポリペプチド、組換えベク
ター、及び組成物は、小胞、特にリポソームに含まれて輸送されうる（Ｌａｎｇ
ｅｒ、１９９０；Ｔｒｅａｔら、１９８９；及びＬｏｐｅｚ−Ｂｅｒｅｓｔｅｉ
ｎ、１９８９参照）。
【０５５０】 さらにもう１つの実施形態において、本発明に係る核酸、ポリペプチド、組換
えベクター、及び組成物は、調節された放出系に含まれて輸送されうる。例えば
、ポリペプチドは、静脈内注入、移植可能浸透圧ポンプ、経皮的パッチ、リポソ
ーム、又はその他の投与様式を使用して投与されうる。１つの実施形態において
、ポンプが使用されうる（Ｌａｎｇｅｒ、１９９０；Ｓｅｆｔｏｎ、１９８７；
Ｂｕｃｈｗａｌｄら、１９８０；Ｓａｕｄｅｋら、１９８９）。もう１つの実施
形態においては、重合材料が使用されうる（Ｌａｎｇｅｒ及びＷｉｓｅ、１９７
４；Ｓｍｏｌｅｎ及びＢａｌｌ、１９８４；Ｒａｎｇｅｒ及びＰｅｐｐａｓ、１
９８３；Ｌｅｖｙら、１９８５；Ｄｕｒｉｎｇら、１９８９；及びＨｏｗａｒｄ
ら、１９８９）。さらにもう１つの実施形態において、調節された放出系は、全
身用量のごく一部を必要とするよう、標的の組織又は臓器、即ち心臓血管系の近
傍に置かれうる（Ｇｏｏｄｓｏｎ、１９８４参照）。その他の調節された放出系
は、Ｌａｎｇｅｒ（１９９０）による概説で論じられている。
【０５５１】 さらなる面において、本発明に係る核酸で形質転換されており、本発明に係る
ＡＢＣ１ポリペプチドを高レベルに発現する組換え細胞が、ＡＢＣ１ポリペプチ
ドを必要とする対象に移植されうる。好ましくは、拒絶を回避するため、本発明
に係るＡＢＣ１コーディング核酸で形質転換された自己細胞が移植される。又は
、可溶性因子を産生する非自己細胞を、免疫認識及び拒絶を防止する重合体マト
リックス内に保護する技術が、利用可能である。
【０５５２】 従って、ＡＢＣ１ポリペプチドは、静脈内、動脈内、腹腔内、筋肉内、又は皮
下の投与経路により輸送されうる。又は、適切に製剤化されたＡＢＣ１ポリペプ
チドは、鼻腔内又は経口投与により投与されうる。ＡＢＣ１の一定の供給は、治
療に有効な用量（即ち、対象における代謝変化を誘導するために有効な用量）を
、例えば１日１回、１２時間毎のように、必要な間隔を置いて提供することによ
り保証されうる。これらのパラメータは、治療を受ける疾患状態の重度、実行さ
れる食事修飾のようなその他の作用、対象の体重、年齢、及び性別、並びにその
他の基準に依存し、当業者により、標準的な優良医薬品規則（ｇｏｏｄ ｍｅｄ
ｉｃａｌ ｐｒａｃｔｉｃｅ）に従い、容易に決定されうる。
【０５５３】 本発明に係る核酸、ポリペプチド、組換えベクター、組換え宿主細胞、及び組
成物の投与が実施される対象は、好ましくはヒトであるが、任意の動物であって
もよい。従って、当業者により容易に認識され得るように、本発明の方法及び薬
学的組成物は、これらに限定されないが、ネコ又はイヌ対象のようなペット、こ
れらに限定されないがウシ、ウマ、ヤギ、ヒツジ、及びブタ対象のような家畜動
物、野生動物（野生に存在するものであっても又は動物園に存在するものであっ
てもよい）、マウス、ラット、ウサギ、ヤギ、ヒツジ、ブタ、イヌ、ネコ等のよ
うな研究用動物、ニワトリ、シチメンチョウ、メイチョウ等のようなトリ種を含
む任意の動物、特に哺乳動物への投与、即ち獣医学的使用に特に適している。
【０５５４】 好ましくは、前記定義のような核酸、組換えベクター、ポリペプチド、又は組
換え宿主を含む薬学的組成物が、患者又は対象へと投与されよう。
【０５５５】 ＡＢＣ１ポリペプチドのアゴニスト化合物又はアンタゴニスト化合物をスクリ
ーニングする方法 もう１つの態様によると、本発明は、タンジアー病、又はより一般的にはＦＨ
Ｄ型状態のような、コレステロール代謝、具体的にはコレステロール輸送、さら
に具体的にはコレステロール逆輸送の欠損による疾患の治療において有用な、治
療に使用するための化合物又は小分子をスクリーニングする様々な方法にも関す
る。
【０５５６】 従って、本発明は、コレステロール逆輸送の機能障害に起因する疾患の予防又
は治療のための活性成分をスクリーニングするための、ＡＢＣ１ポリペプチド又
はＡＢＣ１ポリペプチドを発現する細胞の使用にも関する。ＡＢＣ１ポリペプチ
ドの触媒部位及びオリゴペプチド又は免疫原性断片は、あらゆる既存の技術によ
る産物ライブラリーのスクリーニングのため使用されうる。この型のスクリーニ
ングにおいて使用されるポリペプチド断片は、溶液中に遊離の状態で存在しても
よいし、固体支持体上に結合していてもよいし、細胞表面、又は細胞内に存在し
てもよい。次いで、ＡＢＣ１ポリペプチド断片と被検薬剤との間の結合複合体の
形成が、測定されうる。
【０５５７】 目的のタンパク質との親和性を有する産物を入手するためのハイフラックス（
ｈｉｇｈ−ｆｌｕｘ）スクリーニングにおいて使用されうるもう１つの産物スク
リーニング技術は、出願ＷＯ８４／０３５６４に記載されている。ＡＢＣ１タン
パク質に適用されるこの方法においては、様々な産物を固体表面上で合成する。
これらの産物を、ＡＢＣ１タンパク質又はその断片と反応させ、複合体を洗浄す
る。次いで、ＡＢＣ１タンパク質と結合する産物を、当業者に既知の方法により
検出する。非中和抗体も、ペプチドを捕捉し、それを支持体上に固定化するため
に使用されうる。
【０５５８】 もう１つ可能性であるのは、ＡＢＣ１中和抗体競合、ＡＢＣ１タンパク質、及
びＡＢＣ１タンパク質と結合する可能性がある産物を使用した産物スクリーニン
グ法を実施することである。この様式においては、ＡＢＣ１ポリペプチド又はタ
ンパク質と共通の抗原性単位を有するペプチドの存在を検出するため、抗体が使
用されうる。
【０５５９】 ＡＢＣ１活性を増加させる能力に関して評価される産物としては、特に、分子
の活性化に関与するキナーゼ特異的ＡＴＰ相同体、及び該キナーゼに起因する脱
リン酸化を回避することができるホスファターゼを挙げることができる。特に、
ホスホジエステラーゼ（ＰＤＥ）阻害剤、テオフィリン及び３−イソブチル−１
−メチルキサンチン型、又はアデニルシクラーゼフォルスコリン活性化剤を挙げ
ることもできる。
【０５６０】 従って、本発明は、膜又は小胞の間のコレステロール転移の方法（実施例１３
参照）に基づく、産物、即ち化合物、小分子等の任意のスクリーニング法の使用
に関する。これは、全ての合成又は細胞型であってよく、即ちヒトＡＢＣ１コー
ディング核酸を構成性発現する、又はそれが組み込まれている哺乳動物、昆虫、
細菌、又は酵母のものであり得る。これに関しては、標識された脂質類似体が、
使用されうる。
【０５６１】 同様に、ＡＢＣ１タンパク質が陰イオン輸送（Ｂｅｃｑら、１９９７及びＹａ
ｍｏｎら、１９９７）を可能にすること、及びこの輸送が、オカダ酸及びオスト
バナジン酸塩のようなホスファターゼ阻害剤、及びフォルスコリンのような薬剤
によるｃＡＭＰの上昇の一部により活性化されることが記載されている。本発明
は、ＡＢＣ１タンパク質の活性をモデュレートする分子をスクリーニングするた
めのそのような系の使用にも関する（実施例１４参照）。
【０５６２】 Ｙａｍｏｎら（１９９７）は、マウスＡＢＣ１タンパク質が、マウス腹腔マク
ロファージにおける炎症誘発性サイトカインＩＬ−１ベータの分泌に関与してい
ることを証明した。従って、２つのタンパク質を発現する細胞型からのＩＬ−１
ベータの放出を決定することにより、ＡＢＣ１タンパク質の活性をモデュレート
する産物をスクリーニングする方法を提供することも可能である（実施例１５参
照）。
【０５６３】 さらに、多数の輸送体の混乱が記載されていることから（ｖａｎ ｄｅｒ Ｈ
ａｚｅｌら、１９９９）、特徴的な表現型を有する細胞変異体の使用を考慮する
こと、及びその機能をＡＢＣ１で補足すること、及びスクリーニング目的のため
全体を使用することが可能である。
【０５６４】 本発明は、コレステロール代謝に対する活性を有する化合物又は小分子、ＡＢ
Ｃ１ポリペプチドのアゴニスト又はアンタゴニストをスクリーニングする方法に
も関し、該方法は、 ａ）ＡＢＣ１ポリペプチドと検出可能マーカーを含む脂質基質とを含む膜小胞
を調製する工程； ｂ）工程ａ）において得られた小胞を、アゴニスト又はアンタゴニスト候補化
合物と共にインキュベートする工程； ｃ）検出可能マーカーを含む脂質基質の放出を定性的かつ／又は定量的に測定
する工程；及び ｄ）工程ｂ）において得られた放出測定値を、アゴニスト又はアンタゴニスト
候補化合物と共に予めインキュベートされていない小胞による標識された脂質基
質の放出の測定値と比較する工程：を含む。
【０５６５】 第１の特定の実施形態において、ＡＢＣ１ポリペプチドは、配列番号７１のア
ミノ酸配列を含 む。
【０５６６】 第２の特定の実施形態において、ＡＢＣ１ポリペプチドは、配列番号７１のア
ミノ酸１〜６０を含む。
【０５６７】 前記スクリーニング法の第１の態様によると、膜小胞は、当業者に周知の技術
に従い調製されうる合成脂質小胞である。この特定の態様によると、ＡＢＣ１タ
ンパク質は、組換えＡＢＣ１タンパク質でありうる。
【０５６８】 第２の態様によると、膜小胞は、ＡＢＣ１ポリペプチドを発現する細胞に由来
する原形質膜の小胞である。これらは、ＡＢＣ１ポリペプチドを天然に発現して
いる細胞、又はＡＢＣ１ポリペプチドをコードする核酸、もしくはＡＢＣ１ポリ
ペプチドをコードする核酸を含む組換えベクターでトランスフェクトされた細胞
であり得る。
【０５６９】 前記スクリーニング法の第３の態様によると、脂質基質は、コレステロール又
はホスファチジルコリンより選択される。
【０５７０】 第４の態様によると、脂質基質は、例えば３Ｈ又は１２５Ｉより選択される同
位体で、放射性標識されている。
【０５７１】 第５の態様によると、脂質基質は、ＮＢＤ又はピレンのような蛍光化合物で標
識されている。
【０５７２】 第６の態様によると、標識された脂質基質とＡＢＣ１ポリペプチドとを含む膜
小胞は、工程ｂ）の前に固体支持体の表面に固定化される。
【０５７３】 第７の態様によると、小胞により放出された蛍光又は放射能の測定値は、ＡＢ
Ｃ１ポリペプチドによる脂質基質輸送の活性の直接の反映である。
【０５７４】 本発明は、コレステロール代謝に対する活性を有する化合物又は小分子、ＡＢ
Ｃ１ポリペプチドのアゴニスト又はアンタゴニストをスクリーニングする方法に
も関し、該方法は、 ａ）天然に、又はＡＢＣ１コーディング核酸によりトランスフェクトした後、
ＡＢＣ１ポリペプチドを発現している細胞、例えば細胞系を得る工程； ｂ）工程ａ）の細胞を、検出可能マーカーで標識された陰イオンの存在下でイ
ンキュベートする工程； ｃ）工程ｂ）の細胞を洗浄することにより、これらの細胞へと侵入していない
過剰の標識された陰イオンを除去する工程； ｄ）工程ｃ）において得られた細胞を、ＡＢＣ１ポリペプチドに対するアゴニ
スト又はアンタゴニスト候補化合物と共にインキュベートする工程； ｅ）標識された陰イオンの流出を測定する工程；及び ｆ）工程ｅ）において決定された標識された陰イオンの流出の値を、ＡＢＣ１
ポリペプチドに対するアゴニスト又はアンタゴニスト候補化合物の存在下で予め
インキュベートされていない細胞で測定された標識された陰イオンの流出の値と
比較する工程：を含む。
【０５７５】 第１の特定の実施形態において、ＡＢＣ１ポリペプチドは、配列番号７１のア
ミノ酸配列を含む。
【０５７６】 第２の特定の実施形態において、ＡＢＣ１ポリペプチドは、配列番号７１のア
ミノ酸１〜６０を含む。
【０５７７】 前記スクリーニング法の第１の態様によると、使用される細胞は、ＡＢＣ１ポ
リペプチドを天然に発現している細胞である。それらは、ヒト血液単核細胞の集
団から精製されたヒト単球の初代培養物でありうる。それらは、単球白血病系Ｔ
ＨＰ１のようなヒト単球系であってもよい。
【０５７８】 第２の態様によると、前記スクリーニング法において使用される細胞は、ＡＢ
Ｃ１ポリペプチドをコードする核酸の発現を指図することができる本発明に係る
組換えベクターでトランスフェクトされた、ＡＢＣ１ポリペプチドを天然には発
現していないか、又は低レベルに発現している細胞であり得る。
【０５７９】 第３の態様によると、細胞は、天然に陰イオン輸送の欠損を有する細胞、又は
Ｖｅｒａｐａｍｉｌ（登録商標）もしくはテトラエチルアンモニウムのような１
個以上の陰イオンチャネル阻害剤で前処理された細胞でありうる。 該スクリーニング法の第４の態様によると、陰イオンは、塩Ｋ１２５Ｉ又はＮａ １２５ Ｉのような放射性標識されたヨウ素である。
【０５８０】 第５の態様によると、標識された陰イオンの流出の測定は、実験期間中、定期
的に決定され、従ってこの流出の動力学的測定の確立も可能にする。
【０５８１】 第６の態様によると、標識された陰イオンの流出の値は、特定の時点で細胞培
養上清中に存在する標識された陰イオンの量を測定することにより、決定される
。
【０５８２】 第７の態様によると、標識された陰イオンの流出の値は、細胞培養上清に見出
される放射能の、細胞溶解物中に見出される放射能と細胞培養上清に見出される
放射能との合計に相当する全放射能に対する割合として決定される。 コレステロール代謝に対する活性を有する化合物、ＡＢＣ１ポリペプチドのアゴ
ニスト又はアンタゴニストをスクリーニングする方法も、本発明の主題であり、
該方法は、 ａ）適当な培養培地中のヒト単球系の細胞を、精製されたヒトアルブミンの存
在下で培養する工程； ｂ）工程ａ）の細胞を、同時に、ＩＬ−１ベータの産生を刺激する化合物及び
アゴニスト又はアンタゴニスト候補化合物の存在下でインキュベートする工程； ｃ）工程ｂ）において得られた細胞を、適当な濃度のＡＴＰの存在下でインキ
ュベートすること； ｄ）細胞培養上清へと放出されたＩＬ−１ベータを測定する工程；及び ｅ）工程ｄ）において得られたＩＬ−１ベータの放出の値を、アゴニスト又は
アンタゴニスト候補化合物の存在下で予めインキュベートされていない細胞の培
養上清へと放出されたＩＬ−１ベータの値と比較する工程：を含む。 前記スクリーニング法の第１の態様によると、使用される細胞は、ヒト白血病単
球系ＴＨＰ１に属する。
【０５８３】 スクリーニング法の第２の態様によると、ＩＬ−１ベータの産生を刺激する化
合物は、リポ多糖である。
【０５８４】 該方法の第３の態様によると、これらの細胞によるＩＬ−１アルファ、ＩＬ−
６、及びＴＮＦアルファの産生も、定性的かつ／又は定量的に決定される。
【０５８５】 第４の態様によると、ＩＬ−１ベータをコードするメッセンジャーＲＮＡの発
現レベルも、決定される。
【０５８６】 以下の実施例は、本発明をさらに例示するためのものであり、本発明を制限す
るものではない。
【０５８７】 実施例 実施例１：本発明に係るＡＢＣ１遺伝子の転写物の組織分布 本発明に係るポリヌクレオチドの発現プロファイルは、サンブルックら（１９
８９）により特に記載されているＰＣＲ共役逆転写及びノーザンブロット分析の
プロトコルに従い決定される。
【０５８８】 例えば、逆転写による分析の場合は、前記のような１対のプライマーを、配列
番号６９及び７０に示されるようなポリヌクレオチド配列を含むヒトＡＢＣ１遺
伝子のｃＤＮＡから合成することができる。このプライマー対は、対応するＡＢ
Ｃ１ ｃＤＮＡを検出するために使用されうる。特に、ＡＢＣ１に特異的であり
、かつ１）配列番号６９のヌクレオチド領域１〜１８４に含まれる配列及び配列
番号６９のヌクレオチド領域６９６８〜９７４１に含まれる相補配列、又は２）
配列番号７０のヌクレオチド領域１〜２９７に含まれる配列及び配列番号７０の
ヌクレオチド領域７０８１〜９８５４に含まれる相補配列のいずれかを含む２つ
のオリゴヌクレオチドプライマーが、ＡＢＣ１ ｃＤＮＡを単離するために使用
されうる。
【０５８９】 ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を、逆転写されたポリＡ＋ｍＲＮＡ（Ｃｌｏ
ｎｔｅｃｈ）に対応するｃＤＮＡ鋳型に対して実施する。ｃＤＮＡへの逆転写は
、製造業者により記載された条件に従い、酵素ＳＵＰＥＲＳＣＲＩＰＴ ＩＩ（
ＧｉｂｃｏＢＲＬ、Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を用いて実施される
。ポリメラーゼ連鎖反応は、ｃＤＮＡ調製物２５ｎｇを含む反応混合物２０μｌ
中で標準的な条件に従い実施される。反応混合物は、４００μＭの各ｄＮＴＰ、
２単位のサーマスアクアチクス（Ｔｈｅｒｍｕｓ ａｑｕａｔｉｃｕｓ）（Ｔａ
ｑ）ＤＮＡポリメラーゼ（Ａｍｐｌｉ Ｔａｑ Ｇｏｌｄ；Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌ
ｍｅｒ）、０．５μＭの各プライマー、２．５ｍＭ ＭｇＣｌ２、及びＰＣＲ緩
衝液から構成される。Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ９７００サーモサイクラーを使
用して、最初の９４℃で１０分間の変性工程の後、３４ＰＣＲサイクル［９４℃
で３０秒間の変性、３０秒間のアニーリング、３４サイクルが以下のように分割
される：６４℃（２サイクル）、６１℃（２サイクル）、５８℃（２サイクル）
、及び５５℃（２８サイクル）、７２℃で１キロ塩基当たり１分間の伸長］が、
実施される。ＰＣＲ反応は、電気泳動によりアガロースゲル上に可視化される。
得られたｃＤＮＡ断片は、ノーザンブロット分析のためのプローブとして使用さ
れうるし、ポリヌクレオチド配列の正確な決定にも使用されうる。
【０５９０】 ノーザンブロット分析の場合には、前記のようにして作製されたｃＤＮＡプロ
ーブを、製造業者により示された指示に従い、ＤＮＡ標識系Ｈｉｇｈ Ｐｒｉｍ
ｅ（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ）により、３２Ｐで標識する。標識後、プローブを、
製造業者により示された指示に従い、Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ５０マイクロカラム
（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）で精製する。次いで、標識され精製されたプローブを、
様々な組織におけるｍＲＮＡの発現の検出のため使用する。
【０５９１】 異なるヒト組織のＲＮＡ試料を含有するノーザンブロット（Ｍｕｌｔｉｐｌｅ
Ｔｉｓｓｕｅ Ｎｏｒｔｈｅｒｎ、ＭＴＮ、Ｃｌｏｎｔｅｃｈ、ブロット２、
参照７７７５９−１）に、標識されたプローブをハイブリダイズさせる。ハイブ
リダイゼーション及び洗浄のためのプロトコルは、製造業者により記載された通
りのもの（インストラクションマニュアルＰＴ１２００−１）であってもよいし
、又は当業者に既知の、例えばＦ．Ａｕｓｕｂｅｌら（１９９９）に記載された
方法を使用してこのプロトコルを適合化したものであってもよい。従って、例え
ば、ホルムアミド存在下で、プレハイブリダイゼーション及びハイブリダイゼー
ションの温度を変化させることが可能である。
【０５９２】 例えば、以下のようなプロトコルを使用することが可能であるかもしれない。
【０５９３】 １−膜競合及びプレハイブリダイゼーション： −混合：サケ精子ＤＮＡ（１０ｍｇ／ｍｌ）４０μｌ＋ヒト胎盤ＤＮＡ（１０
ｍｇ／ｍｌ）４０μｌ −９６℃で５分間変性、次いで混合物を氷中に浸漬 −２×ＳＳＣを除去、ホルムアミド混合物４ｍｌを、膜を含有するハイブリダ
イゼーションチューブに注入 −２つの変性したＤＮＡの混合物を添加 −回転させながら、４２℃で５〜６時間インキュベート ２−標識されたプローブの競合 −精製された標識されたプローブを、リピートの量に応じて、ＣｏｔＩ ＤＮ
Ａ １０〜５０μｌに添加 −９５℃で７〜１０分間変性 −６５℃で２〜５時間インキュベート ３−ハイブリダイゼーション −プレハイブリダイゼーション混合物を除去 −サケ精子ＤＮＡ ４０μｌ＋ヒト胎盤ＤＮＡ ４０μｌを混合；９６℃で５
分間変性、次いで氷中に浸漬 −ハイブリダイゼーションチューブにホルムアミド混合物４ｍｌ、２つのＤＮ
Ａ及び変性され標識されたプローブ／ＣｏｔＩ ＤＮＡの混合物を添加 −回転させながら、４２℃で１５〜２０時間インキュベート ４−洗浄： −濯ぎのため２×ＳＳＣで室温で１回洗浄 −室温、２×ＳＳＣ、及び６５℃、０．１％ＳＤＳで５分間、２回 −６５℃、１×ＳＳＣ、及び６５℃、０．１％ＳＤＳで１５分間、２回 ハイブリダイゼーション及び洗浄の後、Ｓｔｏｒｍ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄ
ｙｎａｍｉｃｓ、Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ、ＣＡ）を利用して画像化されるホスフォ
ラススクリーン（ｐｈｏｓｐｈｏｒｕｓ ｓｃｒｅｅｎ）との一夜の接触の後、
ブロットを分析する。
【０５９４】 実施例２：ヒトＡＢＣ１ ｃＤＮＡの５’伸長 この実施例は、全長ヒトＡＢＣ１タンパク質をコードするｃＤＮＡ分子の単離
及び同定を記載する。部分ＡＢＣ１ ｃＤＮＡ配列（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ａ
Ｊ０１２３７６、Ｌａｎｇｍａｎｎら、１９９９）の５’伸長を、修飾型５’Ｒ
ＡＣＥ法を使用して実施した。
【０５９５】 実験の設計： ホルボールエステルを用いて分化させ、次いで泡沫細胞表現型へと変換するた
めアセチル化ＬＤＬを担荷させたＴＨＰ１細胞から予め作成されたヒト単球ＴＨ
Ｐ１ ｃＤＮＡライブラリー（ラムダファージベクターｌＺｉｐ−Ｌｏｘ中、Ｌ
ｉｆｅ、Ｔｅｃｈ（登録商標））を、この実施例において使用した。ＴＨＰ１細
胞は、コレステロールを担荷させた場合、ヒトＡＢＣ１遺伝子の発現を強く制御
することが示されている（Ｌａｎｇｍａｎｎら、１９９９）。ＡＢＣ１ ｃＤＮ
Ａが濃縮されているはずであるため、このＴＨＰ１ ｃＤＮＡライブラリーを使
用して、ヒトＡＢＣ１ ｃＤＮＡを５’伸長した。
【０５９６】 発表されているヒトＡＢＣ１ ｃＤＮＡの５’配列領域（Ｌａｎｇｍａｎｎら
、１９９９）のヌクレオチドとハイブリダイズする内部ＰＣＲプライマーセット
（配列番号１５５及び１５６）を使用して、ＡＢＣ１ ｃＤＮＡを５’方向に伸
長させた（表ＶＩＩ参照）。２つの内部ベクターアーム特異的プライマーセット
（配列番号２、１４０、１５３、及び１５４）を、ヒトＡＢＣ１ ｃＤＮＡ特異
的プライマーへ向かう方向での逆合成のため設計した（表ＶＩＩ及び図１参照）
。表ＶＩＩ中、「Ｃｏｍｐ」という用語は、示されたヌクレオチド位置の相補ヌ
クレオチド配列をさす。このように、ベクター内での方向に関わらず、ヒトＡＢ
Ｃ１ ｃＤＮＡの真の５’末端に対応するＰＣＲ産物を得ることができる。
【０５９７】
【表７】
【０５９８】 材料及び方法 一次ＰＣＲ ＴＨＰ１ ｃＤＮＡライブラリー（平均挿入物サイズ１．５ｋｂ
の、およそ５×１０９ｐｆｕ／ｍｌのλＺｉｐ−ｌｏｘ−ＴＨＰ１−ＦＣライブ
ラリーファージ、２．５×１０６個の組換え体を含有する清浄化細菌溶解物）の
一部を９５℃に１０分間加熱してファージを溶解させ、そのＤＮＡを放出させた
。次いで、溶解したファージ４μｌを、２０ｍＭトリスｐＨ８．４、５０ｍＭ
ＫＣｌ、１．５ｍＭ ＭｇＣｌ２、０．２ｍＭ ｄＮＴＰ、２．５単位のＰｌａ
ｔｉｎｕｍ（登録商標）Ｔａｑポリメラーゼ−ＨＦ（ＢＲＬ）、０．２μＭの各
プライマー［ＡＢＣ１−３’（配列番号１５５）及びλＺｉｐ−順向き（配列番
号１４０）又はλＺｉｐ−逆向き（配列番号１５３）のいずれか］を含有するＰ
ＣＲ反応液５０μｌ中で使用した。増幅は、９４℃１０秒間、５８℃２０秒間、
７２℃２．５分間を３５サイクル実施した。ＰＣＲ反応５μｌを、臭化エチジウ
ム．０２ｕｇ／ｍｌを含有する０．８％アガロース／ＴＢＥゲル上で電気泳動し
た。ゲルを写真撮影し、産物の証拠について検査した。
【０５９９】 二次ＰＣＲ 選択された一次ＰＣＲ反応から、反応液１μｌを除去し、１０ｍ
ＭのトリスｐＨ８．５で５０μｌに希釈した。希釈された一次ＰＣＲ反応１μｌ
を、内部ＡＢＣ１プライマー（ＡＢＣ１−９、配列番号１５６）及び適当な内部
アームプライマーλＺｉｐ−ｓｅｑ−１（配列番号１５４）又はλＺｉｐ−ｓｅ
ｑ−２（配列番号２）を使用した二次ＰＣＲ反応において使用した。ＰＣＲ反応
液は、サイクリングパラメータを９４℃２０秒、５６℃２０秒、７２℃１．５分
を２５サイクル、に調整したことを除き、前記と同様にして増幅した。二次ＰＣ
Ｒ反応５ｕｌを、前記のようなアガロースゲル上で分析した。
【０６００】 ＰＣＲ産物のゲル精製 次いで、適当なサイズの産物を有すると考えられた二
次ＰＣＲ反応を、アガロースゲル上で分析し、ＡＢＣ１ ｃＤＮＡ５’伸長産物
に相当するバンドを切り出し、Ｑｉａｇｅｎ Ｑｉａｑｕｉｃｋ（登録商標）ゲ
ル抽出精製系を使用して精製した。精製されたＤＮＡ断片を、３０ｕｌの容量の
１０ｍＭトリスｐＨ８．５で溶出させた。溶出したＰＣＲ産物５ｕｌを、およそ
の収率を決定するためアガロースゲル上で分析した。
【０６０１】 配列決定：精製されたＰＣＲ産物各５ｕｌを、ＡＢＣ１−７配列決定プライマ
ー（配列番号１３９）２０ｎｇと共に、ＡＢＩ３７７配列決定装置でのＢｉｇＤ
ｙｅ（登録商標）ターミネーターサイクル配列決定において使用した。精製され
た５’伸長ヒトＡＢＣ１ ｃＤＮＡ ＰＣＲ産物の配列結果を、Ｌａｓｅｒｇｅ
ｎｅ ＤＮＡ Ｓｔａｒソフトウェアパッケージ及びＮＣＢＩウェブサイト（ｈ
ｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ）にあるＢＬＡＳＴプ
ログラムを使用して分析した。
【０６０２】 結果及び考察： 一次ＰＣＲ反応は、プライマー染色以外には希薄なバンドしか与えなかった（
図２−ａ参照）。従って、二次内部ＰＣＲ反応を実施した。二次ＰＣＲ反応（図
２−ｂ）は、ＡＢＣ１−９（配列番号１５６）及びλＺｉｐ−ｓｅｑ−２（配列
番号２）を使用した２つの反応において、およそ８００ｂｐの強く染色された単
一のバンドを生じ、ＡＢＣ１−９（配列番号１５６）及びλＺｉｐ−ｓｅｑ−１
（配列番号１５４）を使用したレーン７には、およそ７５０ｂｐの比較的希薄な
バンドが存在した。
【０６０３】 ＰＣＲ産物が真正のヒトＡＢＣ１ ｃＤＮＡに特異的なものであることを確認
するため、希釈された一次ＰＣＲ反応を使用して、付加的な内部ＰＣＲ反応を実
施したところ、それぞれＡＢＣ１−７（配列番号１３９）及びλＺｉｐ−ｓｅｑ
−２（配列番号１５４）又はλＺｉｐ−ｓｅｑ−１（配列番号２）を使用した二
次ＰＣＲ反応（図２−ｂのレーン３、６、及び７）において得られたバンドが与
えられた。この付加的な内部ＰＣＲ反応は、二次ＰＣＲ反応において得られたも
のよりも２５４ｂｐ小さい産物を与えるはずである。レーン３及び６に対応する
試料について、その通りとなった。しかしながら、レーン７の試料は、そのよう
な産物を与えず、従って、ＡＢＣ１ ｃＤＮＡ特異的ではない可能性が高いため
、それ以上は分析しなかった。
【０６０４】 レーン３の試料に対応する二次ＰＣＲ反応において得られた産物をさらに生成
させるため、付加的な１００ｕｌのＰＣＲ反応を実施した。最初の試料３、試料
３の１００ｕｌスケールアップ、及び試料６からなる二次ＰＣＲ反応をクローニ
ング及び配列決定の準備のためゲル精製した（図３参照）。精製後、３つのゲル
精製された試料５ｕｌを、ＡＢＣ１−７オリゴヌクレオチド（配列番号１３９）
をプライマーとして使用して配列決定した。さらに、精製された産物を、プラス
ミドＰＣＲ２．１（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）にそれぞれクローニングした。
【０６０５】 配列決定の結果より、発表されている部分ヒトＡＢＣ１ ｃＤＮＡの５’に付
加的な２４４ヌクレオチド（配列番号３）を含む核酸が得られた。この核酸に対
してオープンリーディングフレーム検索を実施し、以前に発表されたオープンリ
ーディングフレームと連続する新たなＯＲＦを同定した。この新オープンリーデ
ィングフレームは、Ｌａｎｇｍａｎｎら（１９９９）の配列と比較すると、さら
に６０アミノ酸残基（配列番号７１のアミノ酸１〜６０）、ヒトＡＢＣ１タンパ
ク質を伸長させた。新たに同定された開始ＡＴＧコドン（配列番号３のヌクレオ
チド１８５〜１８７）は、真核生物翻訳開始のためのＫｏｚａｋコンセンサス配
列とよく適合し、重要なこととして、新ＡＴＧ開始コドンの９塩基上流（配列番
号３のヌクレオチド１７６〜１７８）にインフレームのＴＧＡターミネーターが
存在した。従って、本発明は、全長ヒトＡＢＣ１タンパク質（配列番号７１）を
コードする核酸を提供する。特に、本発明は、配列番号７１のアミノ酸１〜６０
を含むポリペプチドをコードする核酸を提供する。
【０６０６】 さらに、配列番号３の新たな位置２６０及び２６２［Ｌａｎｇｍａｎｎら（１
９９９）のヌクレオチド位置１６及び１８に対応］に、発表されている配列と比
較して、第３ヌクレオチドの差違が、２つ、同定された。これらのヌクレオチド
差違は、２６０：Ｔ→Ｃ及び２６２：Ａ→Ｇという保存的な変化であり、コドン
の変化はもたらさない。配列番号６９及び７０は、この実施例において得られた
新たな５’伸長ＡＢＣ１ ｃＤＮＡ領域（配列番号３）を含む。特に、配列番号
３のヌクレオチド１〜２４４は、それぞれ、配列番号６９のヌクレオチド１〜２
４４及び配列番号７０の１１４〜３５７に対応する。
【０６０７】 ＡＢＣ１の完全ｃＤＮＡに対応するｃＤＮＡを単離するため、その他の様々な
手段が使用されうる。例えば、完全クローンは、目的の遺伝子の配列に特異的な
ポリヌクレオチドプローブによりｃＤＮＡライブラリーをスクリーニングするこ
とにより、ハイブリダイゼーションにより直接単離されうる。特に、３０〜４０
ヌクレオチドの特異的プローブが、選択された配列によりＡｐｐｌｉｅｄ Ｂｉ
ｏｓｙｓｔｅｍ／Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ登録商標の合成機を使用して合成さ
れる。得られたオリゴヌクレオチドは、Ｔ４ポリヌクレオチドキナーゼを使用し
て、例えば［γ−３２Ｐ］ＡＴＰで放射性標識され、常法（例えば、Ｍａｎｉａ
ｔｉｓら、１９８２又はＦ．Ａｕｓｕｂｅｌら、１９８９）に従い精製される。
【０６０８】 スクリーニングすべきｃＤＮＡを含有するクローンライブラリーは、前記のよ
うな常法（Ｆ．Ａｕｓｕｂｅｌら）に従い、適当な抗生物質を含有するペトリ皿
（１．５％寒天）において培養培地上で樹立される。このようにしてインキュベ
ーションの後作製されたコロニーを、ニトロセルロースフィルターに移し、、常
法に従い、放射性標識されたヌクレオチドプローブによりスクリーニングし、プ
ローブとハイブリダイズするコロニーを単離し、サブクローニングする。
【０６０９】 このようにして同定されたクローンのＤＮＡを調製し、配列決定により分析す
る。完全ＤＮＡに対応する断片を含有するクローンを精製し、当業者に既知の、
例えばＦ．Ａｕｓｕｂｅｌら（１９８９）に提示されたプロトコルに従い、ベク
ターｐｃＤＮＡ３へと再クローニングする。
【０６１０】 本願に記載の遺伝子に対応するｃＤＮＡの５’及び３’末端を同定するための
様々な方法が既知である。これらの方法には、これらに限定されないが、当業者
に周知の、ハイブリダイゼーションクローニング、３’又は５’ＲＡＣＥ−ＰＣ
Ｒ（Ｒａｐｉｄ Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｃＤＮＡ Ｅｎｄ−ＰＣ
Ｒ）と類似又は同一のプロトコルを使用したクローニングが含まれる。
【０６１１】 例えば、Ｃｌｏｎｔｅｃｈ社より販売されているキット（Ｍａｒａｔｈｏｎ
Ｒｅａｄｙ（登録商標）ｃＤＮＡキット、参照ＰＴ１１５６−１により同定され
るプロトコル）を使用することが可能であろう。又はｃＤＮＡの存在しない５’
末端を特徴決定するための５’ＲＡＣＥと類似の方法が利用可能である（Ｆｒｏ
ｍｏｎｔ−Ｒａｃｉｎｅら、１９９３）。簡単に述べると、ＲＮＡオリゴヌクレ
オチドを、ｍＲＮＡ集団の５’末にライゲートさせる。ｃＤＮＡへの逆転写の後
、５’にライゲートしたアダプター、及び目的の遺伝子の３’に位置する配列に
それぞれ特異的なプライマーのセットを、所望のｃＤＮＡの５’部分を増幅する
ためのＰＣＲにおいて使用する。次いで、増幅された断片を使用して、完全ｃＤ
ＮＡを再構築する。
【０６１２】 実施例３：タンジアー病に関する遺伝子発現プロファイルの分析 タンジアー細胞表現型を引き起こすＡＢＣ１遺伝子の発現レベルの障害の確認
は、下記の方法に従い、これらの配列を、疾患に罹患した対象又は罹患していな
い対象の繊維芽細胞から得られたｍＲＮＡに対応するプローブとハイブリダイズ
させることにより決定されうる。
【０６１３】 １．全ＲＮＡ、ポリ（Ａ）＋ｍＲＮＡ、及びｃＤＮＡプローブの調製 全ＲＮＡは、グアニジンイソチオシアネート法（Ｃｈｏｍｃｚｙｎｓｋｉ＆Ｓ
ａｃｃｈｉ、１９８７）により、正常な対象、又はタンジアー病に罹患した対象
の繊維芽細胞の細胞培養物から得られる。ポリ（Ａ）＋ｍＲＮＡは、オリゴ（ｄ
Ｔ）−セルロースカラムでのアフィニティクロマトグラフィにより得られ（Ｓａ
ｍｂｒｏｏｋら、１９８９）、プローブとして使用されるｃＤＮＡは、蛍光産物
（Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ；ＣｙＤｙｅ（登録
商標））で標識されたオリゴヌクレオチドを用いたＲＴ−ＰＣＲにより得られる
（ＤｅＲｉｓｉら、１９９７）。
【０６１４】 ２．ハイブリダイゼーション及び発現レベルの検出 タンジアー病に対応する本特許出願に提示された配列を含有するガラスメンブ
レンに、繊維細胞より得られたｃＤＮＡプローブをハイブリダイズさせる（Ｉｙ
ｅｒら、１９９９）。Ａｍｅｒｓｈａｍ／ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｙｎａｍｉｃ
ｓ ｓｙｓｔｅｍ（Ａｖａｌａｎｃｅ Ｍｉｃｒｏｓｃａｎｎｅｒ（登録商標）
）を使用することにより、健康型又は罹患型の細胞における配列の産物の発現を
定量することができる。
【０６１５】 実施例４：哺乳動物細胞におけるＡＢＣ１の完全ｃＤＮＡを含有する発現ベク
ターの構築 ＡＢＣ１遺伝子は、哺乳動物細胞において発現されうる。典型的な真核生物発
現ベクターは、ｍＲＮＡの転写の開始を可能にするプロモーター、タンパク質を
コードする配列、及び転写終結及び転写物のポリアデニル化のため必要なシグナ
ルを含有する。それは、エンハンサーのような付加的なシグナル、Ｋｏｚａｋ配
列、及びｍＲＮＡのスプライシングに必要な配列も含有する。効率的な転写は、
ＳＶ４０ウイルスプロモーターの初期及び後期因子、レトロウイルスＬＴＲ、又
はＣＭＶウイルス初期プロモーターにより得られる。しかしながら、アクチンプ
ロモーターのような細胞因子も、使用されうる。多くの発現ベクターが、本発明
を実施するため使用されうるが、そのようなベクターの一例はｐｃＤＮＡ３（Ｉ
ｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）である。
【０６１６】 実施例５：正常型及び変異型ＡＢＣ１ポリペプチドの産生 ＡＢＣ１の完全ｃＤＮＡによりコードされた正常ＡＢＣ１ポリペプチド（その
単離は実施例２（完全ｃＤＮＡのクローニング）に記載）又は変異型ＡＢＣ１ポ
リペプチド（その完全ｃＤＮＡも、実施例２に記載の技術に従い得られうる）は
、バキュロウイルスベクターを使用した細菌又は昆虫細胞発現系、又はワクシニ
アウイルスベクターを用いた、もしくは用いない哺乳動物細胞において容易に作
製されうる。全ての方法が、現在、広範に記載されており、当業者に既知である
。それらの詳細な記載は、Ｆ．Ａｕｓｕｂｅｌら（１９８９）に見出されるであ
ろう。
【０６１７】 実施例６：変異型ＡＢＣ１ポリペプチドのうちの１つに対する抗体の作製 本発明における抗体は、様々な方法により調製されうる（Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐ
ｒｏｔｏｃｏｌｓ Ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、第１巻、Ｆｒ
ｅｄｅｒｉｃｋ Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌ、Ｒｏｇｅｒ Ｂｒｅｎｔ、Ｒｏｂｅｒ
ｔ Ｅ．Ｋｉｎｇｓｔｏｎ、Ｄａｖｉｄ Ｄ．Ｍｏｏｒｅ、Ｊ．Ｇ．Ｓｅｉｄｍ
ａｎ、Ｊｏｈｎ Ａ．Ｓｍｉｔｈ、Ｋｅｖｉｎ Ｓｔｒｕｈｌ−Ｍａｓｓａｃｈ
ｕｓｅｔｔｓ Ｇｅｎｅｒａｌ Ｈｏｓｐｉｔａｌ Ｈａｒｖａｒｄ Ｍｅｄ
ｉｃａｌ Ｓｃｈｏｏｌ、チャプター１１、１９８９）。例えば、本発明のポ
リペプチドを発現する細胞を、抗体を含有する血清の産生を誘導するため、動物
へ注射する。記載されている方法の１つにおいて、タンパク質は、汚染を回避す
るために調製され精製される。次いで、そのような調製物は、より高い活性を有
するポリクローナル抗血清を産生させることを目標として動物へと導入される。
【０６１８】 好ましい方法において、本発明の抗体は、モノクローナル抗体である。そのよ
うなモノクローナル抗体は、ハイブリドーマ技術（Ｋｏｈｌｅｒら、１９７５；
Ｋｏｈｌｅｒら、１９７６；Ｈａｍｍｅｌｉｎｇら、１９８１）を使用して調製
されうる。一般に、そのような方法は、ポリペプチドで、又はより好適にはポリ
ペプチドを発現する細胞で、動物（好ましくは、マウス）を免疫感作することを
含む。これらの細胞は、適当な組織培養培地中で培養されうる。しかしながら、
細胞の培養は、１０％胎児ウシ血清（５６℃で不活化）が補足され、約１０ｇ／
ｌの非必須アミノ酸、１０００Ｕ／ｍｌのペニシリン、及び約１００μｇ／ｍｌ
のストレプトマイシンが補足されたイーグル培地（改変Ｅａｒｌｅ）で行うこと
が好ましい。
【０６１９】 これらのマウスの脾細胞を抽出し、適当な骨髄腫細胞系と融合させる。しかし
ながら、ＡＴＣＣより入手可能な親骨髄腫細胞系（ＳＰ２Ｏ）を使用することが
好ましい。融合後、得られたハイブリドーマ細胞を、ＨＡＴ培地中で選択的に維
持し、Ｗａｎｄｓら（１９８１）により記載されたような限界希釈によりクロー
ニングする。そのような選択の後に得られたハイブリドーマ細胞を、ポリペプチ
ドとの結合能を有する抗体を分泌するクローンを同定するため試験する。
【０６２０】 さらに、ポリペプチドとの結合能を有するその他の抗体が、抗イディオタイプ
抗体を使用した２段階法に従い作製されうる。そのような方法は、抗体自体が抗
原であり、従って、他の抗体を認識する抗体を得ることが可能であるという事実
に基づく。この方法によると、タンパク質に特異的な抗体が、動物、好ましくは
マウスを免疫感作するために使用される。次いで、この動物の脾細胞を使用して
ハイブリドーマ細胞を作製し、ハイブリドーマ細胞を、特異的な抗体−タンパク
質複合体との結合能が、そのポリペプチドにより遮断されるような抗体を産生す
るクローンを同定するためスクリーニングする。これらの抗体は、タンパク質に
特異的な抗体の大量の形成を誘導するため、動物を免疫感作するために使用され
うる。
【０６２１】 本明細書に記載の方法に従い、本発明の抗体のＦａｂ、及びＦ（ａｂ’）２、
及びその他の断片を使用することが好ましい。そのような断片は、典型的には、
パパイン（Ｆａｂ断片を作製するため）又はペプシン（Ｆ（ａｂ’）２断片を作
製するため）のような酵素を利用したプロテアーゼ分解により作製される。又は
、タンパク質を認識する分泌型断片が、組換えＤＮＡ又は合成化学の技術を適用
することにより作製されうる。
【０６２２】 ヒトにおける抗体のインビボ使用のためには、「ヒト化」キメラモノクローナ
ル抗体を使用することが好ましいであろう。そのような抗体は、前記のモノクロ
ーナル抗体を産生するハイブリドーマ細胞に由来する遺伝子構築物を使用して作
製されうる。キメラ抗体を作製するための方法は、当業者に既知である（概説に
ついては、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ（１９８５）；Ｏｉら（１９８６）；Ｃａｂｉｌｌ
ｙら、米国特許第４，８１６，５６７号；Ｔａｎｉｇｕｃｈｉら、ＥＰ１７１４
９６；Ｍｏｒｒｉｓｏｎら、ＥＰ１７３４９４；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒら、ＷＯ８
６０１５３３；Ｒｏｂｉｎｓｏｎら、ＷＯ８７０２６７１；Ｂｏｕｌｉａｎｎｅ
ら（１９８４）、及びＮｅｕｂｅｒｇｅｒら（１９８５）を参照のこと）。
【０６２３】 実施例７：タンジアー病の細胞表現型の修正 タンジアー病は、高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）粒子の加速された代謝、及
び組織内のコレステロール蓄積により特徴付けられる。特に、タンジアー病に罹
患した患者の皮膚の繊維芽細胞においては、ＨＤＬの主要タンパク質であるアポ
リポタンパク質Ａ−Ｉ（ａｐｏＡ−Ｉ）により実施されるコレステロール流出の
過程によりコレステロール内容物を排除する能力が低下している（Ｆｒａｎｃｉ
ｓら、１９９５）。機能欠損に対応するこの特徴は、家族性ＨＤＬ欠損症に罹患
した患者の繊維芽細胞にも見出される（Ｍａｒｃｉｌら、１９９９ａ）。
【０６２４】 タンジアー繊維芽細胞の表現型の修正は、本発明に係るＡＢＣ１の完全ｃＤＮ
Ａの該細胞へのトランスフェクションにより実施されうる。ｃＤＮＡが発現ベク
ターに挿入され、次いで発現ベクターが下記の方法に従いトランスフェクトされ
る。
【０６２５】 １．正常対象及びタンジアー病に罹患した対象の繊維芽細胞培養物の調製 ヒト皮膚の初代繊維芽細胞は、前腕より得られた皮膚生検標本を培養すること
により得られる。これらの生検は、臨床的及び生化学的な「ホモ接合体」の特徴
、即ち橙色扁桃腺、５パーセンタイル未満のａｐｏＡ−Ｉ及びコレステロール−
ＨＤＬの血漿濃度、を有するタンジアー病に罹患した患者に対して実施される。
正常繊維芽細胞系は、アメリカンタイプカルチャーコレクション（Ｒｏｃｋｖｉ
ｌｌｅ、ＭＤ）より得られる。繊維芽細胞を、１０％胎児ウシ血清、２ｍＭ グ
ルタミン、１００ＩＵ／ｍｌ ペニシリン、及び１００μｇ／ｍｌ ストレプト
マイシンが補足されたＲＭＭＥＭ（イーグル改変最少必須培地；ＧＩＢＣＯ）培
地（ＥＭＭＥＭ１０と名付けられた培地）中で培養する。コレステロール流出の
研究を実施するためには、ウシ血清は含まないが２ｍｇ／ｍｌのウシアルブミン
（ＢＳＡ、画分Ｖ）を含有する前記培地中で５０μｇ／ｍｌのコレステロールと
共に２４時間インキュベートすることにより、これらの細胞に、予めコレステロ
ールを担荷させる。
【０６２６】 ２．コレステロール流出の研究 ２４穴プレート上のコレステロールを予め担荷させられたコンフルエント繊維
芽細胞を、ＥＭＭＥＭ１０培地中で１μＣｉ／ｍｌの１，２−３Ｈ−コレステロ
ール（５０Ｃｉ／ｍｍｏｌ：Ｄｕｐｏｎｔ；Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ、ＤＥ）と共
に４８時間インキュベートする。１ウェル当たり約１００，０００カウント毎分
、又は細胞タンパク質１μｇ当たり１０００カウント毎分が得られる。細胞をＥ
ＭＭＥＭ／ＢＳＡ培地で３回洗浄し、この培地と共に２４時間インキュベートし
た後、目的の遺伝子をトランスフェクトし、ＥＭＭＥＭ／ＢＳＡ培地にａｐｏＡ
−Ｉを含有するプロテオリポソーム１０μｇ／ｍｌを添加することにより流出を
開始させる。これらのプロテオリポソームは、ホスファチジルコリン及び精製さ
れたヒトａｐｏＡ−Ｉの超音波処理により調製される（Ｊｏｎａｓ、１９８６）
。細胞トランスフェクションは、リン酸カルシウム沈殿技術により実施される（
Ｓａｍｂｒｏｏｋら、１９８９）。流出期間の後、一般的には２０時間後、培地
を収集し、遠心分離し（１０００ｇ、５分）、液体シンチレーション計数により
放射能を決定する。細胞内の残存放射能も、イソプロパノール中で脂質を抽出し
た後、一夜かけて決定する。流出率（％）は、上清中で測定された放射能を、上
清中及び細胞抽出物中で測定された放射能の合計で割ることにより計算される。
内部標準は、マーカー遺伝子のトランスフェクション及びａｐｏＡ−Ｉを含有す
るプロテオリポソームを含まないＥＭＭＥＭ／ＢＳＡ培地との２４時間のインキ
ュベーションにより調製される。対照遺伝子でトランスフェクトされた正常繊維
芽細胞からの細胞コレステロールの流出は、６±２％に相当するが、この対照遺
伝子でトランスフェクトされた、タンジアー病に罹患した繊維芽細胞から得られ
るものは１％未満である。他方、本発明に係るＡＢＣ１の完全ｃＤＮＡ又はゲノ
ミックＤＮＡを含有するプラスミドによるタンジアー病に罹患した繊維芽細胞の
トランスフェクションは、これらの細胞の過剰コレステロールを排除する能力を
、正常繊維芽細胞のものと一致するレベルにまで回復させることができた。
【０６２７】 実施例８：ヒトＡＢＣ１遺伝子のゲノミック断片の単離及び特徴決定 ヒトＡＢＣ１ ｃＤＮＡの約３ｋｂの断片を、ＡＢＣ１の第１ＡＴＰ結合ドメ
インを含有する「ｐｆ１０」と名付けられたｃＤＮＡクローンから得た。このｃ
ＤＮＡクローンは、Ｌｕｃｉａｎｉら（１９９４）による文献に記載されている
。
【０６２８】 制限エンドヌクレアーゼＥｃｏＲＩを利用したクローンｐｆ１０の消化により
得られたこのｃＤＮＡ断片を、電気泳動の後アガロースゲル上で単離し、次いで
製造業者の指示に従いジゴキシゲニンで標識した（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａ
ｎｎｈｅｉｍより販売されているキット、参照１ ５８５ ６１４）。
【０６２９】 標識されたｃＤＮＡ断片を使用して、Ｎｙｌｏｎ（登録商標）フィルター上に
固定化された第９染色体のＬＬＮＬ（Ｌａｗｒｅｎｃｅ Ｌｉｖｅｒｍｏｒｅ
Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｌａｂｓ）コスミドライブラリーをスクリーニングした。
【０６３０】 ６個の陽性クローンが同定された。これらの６個のコスミドについて、プロー
ブは、単一コロニーにハイブリダイズした。
【０６３１】 これらの各コロニーから代表的なクローンを単離した。
【０６３２】 クローンＬＬＮＬＣ１３１Ｊ０８７ Ｑ２（本明細書において、ｃｏｓ３ａと
名付けた）及びＬＬＮＬｃ１３１Ｏ１１６５ Ｑ２（本明細書において、ｃｏｓ
６ｂと名付けた）を、さらに詳細に分析した。
【０６３３】 クローン３ａを、ＥｃｏＲＩ断片の形態でベクターＧｅｎ３ｚｆ（−）へとサ
ブクローニングし、ＡＢＩ３７７型配列決定機（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓ
ｔｅｍｓ、Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）でＢｉｇ Ｄｙｅターミネーター技術を
使用して両端を配列決定した。
【０６３４】 ベクターの配列とハイブリダイズするプライマーを利用して完全に配列決定す
るには長すぎる（様々な挿入物の末端の配列決定の後、又はそのサイズの決定に
より決定された）異なる挿入物を含有するクローンを、トランスポゾン挿入技術
によりさらに分析し、次いで、トランスポゾン特異的なプライマーを利用した配
列決定技術により分析した（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ ＢｉｏＬａｂｓより販売
されている「ＧＰＳ」系）。
【０６３５】 このようにして、ヒトＡＢＣ１遺伝子に対応するゲノミック配列を単離し特徴
決定した。これらの配列を、データベース内の参照により同定されたヒト及びマ
ウスの配列と比較することにより、イントロン−エキソン接合部を決定すること
ができた。
【０６３６】 患者のＤＮＡの増幅のためのプライマーは、イントロン−エキソン接合部及び
スプライシング工程中の二次構造の形成に必須の塩基が、増幅された断片に含ま
れるよう、ＡＢＣ１遺伝子のイントロンＤＮＡの非反復配列より設計された。
【０６３７】 患者のゲノミックＤＮＡを、Ｑｉａｇｅｎ Ｓｔａｒ Ｔａｑキット又はＳｕ
ｐｅｒｔａｑキットを使用して、製造業者により推奨されたハイブリダイゼーシ
ョン条件及び増幅サイクル条件を使用して、前記のプライマーを利用して増幅し
た。
【０６３８】 次いで、増幅されたＰＣＲ産物を、Ｑｉａｇｅｎ社より販売されているキット
を使用して精製し、次いで、ＡＢＩ３７７配列決定機でＢｉｇ Ｄｙｅターミネ
ーター技術により配列決定した。
【０６３９】 実施例９：ＡＢＣ１遺伝子の多型／突然変異の決定 ＡＢＣ１遺伝子の転写物配列又はゲノミック配列の多型又は突然変異の検出は
、様々なプロトコルに従い実施されうる。好ましい方法は、直接配列決定である
。
【０６４０】 ｍＲＮＡ調製物を得ることが可能な患者について、好ましい方法は、ｃＤＮＡ
を調製すること、及びそれらを直接配列決定することからなる。ＤＮＡのみが入
手可能な患者については、対応する遺伝子の構造が不明であるか、部分的にしか
明らかでない転写物の場合、イントロン−エキソン構造及び対応する遺伝子のゲ
ノミック配列を精密に決定することが必要である。従って、これは、第１の例に
おいて、実施例８に記載された方法に従い研究された転写物に対応する（１個以
上の）ゲノミックＤＮＡ ＢＡＣ又はコスミドクローンを単離すること、対応す
る（１個以上の）クローンの挿入物を配列決定すること、及びｃＤＮＡ配列を、
得られたゲノミックＤＮＡの配列と比較することによりイントロン−エキソン構
造を決定することを含む。
【０６４１】 直接配列決定による突然変異の検出の技術は、疾患に関するホモ接合体、又は
少なくとも８人の個体（研究された病理に罹患した個体４人、及び罹患していな
い個体４人）から得られたＡＢＣ１遺伝子のゲノミック配列を比較することから
なる。配列の多様性は、多型を構成する。野生型タンパク質のアミノ酸配列を修
飾するものは全て、該タンパク質の機能に影響を与えることができる突然変異で
あるかもしれず、特に系統における突然変異及び疾患の同時分離（遺伝子型−表
現型相関と呼ばれる）の研究のため、又は散発例の分析のための症例／対照関連
の研究において、考慮することが好ましい。
【０６４２】 実施例１０：原因突然変異又は転写の差違によるコレステロール逆輸送の欠損
と関連した疾患の原因遺伝子の同定 実施例９に記載の方法に従い同定された突然変異のうち、疾患表現型と関連す
るもの全てが、原因となり得る。これらの結果のバリデーションは、（ＤＮＡが
入手可能な）罹患個体及びそれらの親類全員において遺伝子を配列決定すること
により行われる。
【０６４３】 さらに、罹患個体又は非罹患個体に特異的なＲＮＡを使用した実施例１に記載
の方法によるノーザンブロット又はＲＴ−ＰＣＲ分析により、研究された遺伝子
の発現レベル、特に遺伝子の転写の欠如の顕著な変動を検出することができる。
【０６４４】 実施例１１：ＡＢＣ１遺伝子の二対立遺伝子多型の同定 患者のＤＮＡの増幅のためのプライマーを、イントロン−エキソン接合部及び
ＲＮＡスプライシング工程中の二次構造の形成に必須の塩基が、増幅された断片
に含まれるよう、ＡＢＣ１遺伝子のイントロンＤＮＡの非反復配列から設計した
。
【０６４５】 特別に開発された様々なプライマー対が、表ＶＩに提示されている。タンジア
ー又はＦＨＤ病例を含有する７家族からのＤＮＡに見出された結果は、表Ｖに示
されている。
【０６４６】 患者のゲノミックＤＮＡは、Ｑｉａｇｅｎ Ｓｔａｒ Ｔａｑキット又はＳｕ
ｐｅｒｔａｑキットを使用して、製造業者により推奨されたハイブリダイゼーシ
ョン条件及び増幅サイクル条件を使用して、前記のプライマーを利用して増幅し
た。
【０６４７】 次いで、増幅されたＰＣＲ産物を、Ｑｉａｇｅｎ社より販売されているキット
を使用して精製し、次いで、ＡＢＩ３７７配列決定機（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏ
ｓｙｓｔｅｍ、Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）でＢｉｇ Ｄｙｅターミネーター技
術により配列決定した。
【０６４８】 実施例１２：ＡＢＣ１タンパク質をコードする核酸を含む組換えベクターの構
築 Ｉ．ヒトＡＢＣ１タンパク質をコードする核酸の合成 ヒト細胞（即ち、胎盤組織、Ｃｌｏｎｔｅｃｈ、Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ、ＣＡ、
ＵＳＡ、又はＴＨＰ１細胞）から単離された全ＲＮＡ（５００ｎｇ）は、ヒトＡ
ＢＣ１遺伝子のｃＤＮＡの合成のための起源として使用されうる。ｍＲＮＡをｃ
ＤＮＡへと逆転写する方法は、当分野において周知である。例えば、「Ｓｕｐｅ
ｒｓｃｒｉｐｔ一工程ＲＴ−ＰＣＲ」系（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ
、Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ、ＭＤ、ＵＳＡ）を使用することができる。
【０６４９】 ＡＢＣ１ ｃＤＮＡに特異的なオリゴヌクレオチドプライマーは、この目的の
ため使用されうる。特に、１）配列番号６９のヌクレオチド領域１〜１８４に含
まれる配列及び配列番号６９のヌクレオチド領域６９６８〜９７４１に含まれる
相補配列、又は２）配列番号７０のヌクレオチド領域１〜２９７に含まれる配列
及び配列番号７０のヌクレオチド領域７０８１〜９８５４に含まれる相補配列の
いずれかを含むＡＢＣ１特異的な２つのオリゴヌクレオチドプライマー（０．２
５μＭ）が、ＡＢＣ１タンパク質をコードする核酸を単離するために使用されう
る。
【０６５０】 これらのオリゴヌクレオチドプライマーは、ＡＢＩ３９４型のＤＮＡ合成機（
Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍ、Ｆｏｓｔｅｒ Ｃｉｔｙ、ＣＡ、ＵＳＡ
）で、ホスホロアミダイト法により合成されうる。
【０６５１】 制限酵素ＮｏｔＩにより認識される部位は、各２００μＭのジデオキシヌクレ
オチドｄＡＴＰ、ｄＣＴＰ、ｄＴＴＰ、及びｄＧＴＰ、並びにピロコッカスフリ
オサス（Ｐｙｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆｕｒｉｏｓｕｓ）ＤＮＡポリメラーゼ（Ｓｔ
ｒａｔａｇｅｎｅ，Ｉｎｃ．Ｌａ Ｊｏｌｌａ、ＣＡ、ＵＳＡ）の存在下で、鋳
型としてのヒトＡＢＣ１ ｃＤＮＡ ５０ｎｇ、及び５’末端に制限酵素Ｎｏｔ
Ｉにより認識される部位（５’−ＧＣＧＧＣＣＧＣ−３’）を含有する前記で使
用された０．２５μＭのＡＢＣ１特異的オリゴヌクレオチドプライマーを使用し
た第２増幅工程により、組換えベクターへの挿入が望まれるＡＢＣ１ ｃＤＮＡ
領域の両端に存在するよう、増幅されたＡＢＣ１ ｃＤＮＡに組み込まれうる。
【０６５２】 ＰＣＲ反応は、ＰＣＲ用のサーモサイクラー装置（Ｃｅｔｕｓ Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ Ｎｏｒｗａｌｋ、ＣＴ、ＵＳＡ）において、９５℃１分の変性工
程、５０℃１分の再生工程、及び７２℃２分の伸長工程を含む３０サイクル実施
されうる。
【０６５３】 ＩＩ．ヒトＡＢＣ１遺伝子のｃＤＮＡの発現ベクターへのクローニング ヒトＡＢＣ１ ｃＤＮＡ挿入物は、次いで、ｐＡＢＣ１と名付けられた発現ベ
クターを作製するため、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）初期プロモーター及び
エンハンサー配列、並びにＳＶ４０ポリアデニル化シグナル（Ｂｅｇら、１９９
０；Ａｐｐｌｅｂａｕｍ−Ｂｏｄｅｎ、１９９６）を含有する発現ベクター、例
えばｐＣＭＶベクターのＮｏｔＩ制限部位へとクローニングされうる。
【０６５４】 クローニングされたｃＤＮＡの配列は、ＡＢＩ３１０型のキャピラリー配列決
定機（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍ、Ｆｏｓｔｅｒ Ｃｉｔｙ、ＣＡ、
ＵＳＡ）で、反応セット「ＡＢＩ Ｐｒｉｓｍ Ｂｉｇ Ｄｙｅ Ｔｅｒｍｉｎ
ａｔｏｒ Ｃｙｃｌｅ Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ ｒｅａｄｙ」（Ａｐｐｌｉｅｄ
Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍ、Ｆｏｓｔｅｒ Ｃｉｔｙ、ＣＡ、ＵＳＡ販売）を使用し
た２つの鎖の配列決定により確認されうる。
【０６５５】 ＩＩＩ．ヒトＡＢＣ１遺伝子のｃＤＮＡを含有する組換えアデノウイルスベク
ターの構築 Ａ−発現ベクターｐＣＭＶ−βの修飾 発現ベクターｐＣＭＶ−β（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ、Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ、ＣＡ、
ＵＳＡ、Ｇｅｎｅ Ｂａｎｋ登録番号Ｕ０２４５１）のβ−ガラクトシダーゼｃ
ＤＮＡは、制限エンドヌクレアーゼＮｏｔＩによる消化により除去され、Ｎｏｔ
Ｉ制限部位の領域にクローニングされる５’末から３’末へＮｏｔＩ、ＡｓｃＩ
、ＲｓｒＩＩ、ＡｖｒＩＩ、ＳｗａＩ、及びＮｏｔＩの部位を含有するマルチプ
ルクローニングサイトと交換されうる。このマルチプルクローニングサイトの配
列は、５’−ＣＧＧＣＣＧＣＧＧＣＧＣＧＣＣＣＧＧＡＣＣＧＣＣＴＡＧＧＡＴ
ＴＴＡＡＡＴＣＧＣＧＧＣＣＣＧＣＧ−３’（配列番号６６）である。 修飾された発現ベクターｐＣＭＶのＥｃｏＲＩ部位とＳａｎＩ部位の間のＤＮＡ
断片は、単離され、シャトルベクターｐＸＣＸＩＩ（ＭｃＫｉｎｎｏｎら、１９
８２；ＭｃＧｒｏｒｙら、１９８８）の修飾されたＸｂａＩ部位へとクローニン
グされうる。
【０６５６】 Ｂ−シャトルベクターｐＸＣＸＩＩの修飾 ５’−ＧＣＴＣＴＡＧＡＡＴＴＣＧＧＣＣＴＣＣＧＴＧＧＣＣＧＴＴＴＡＡＡ
ＣＧＣＴＡＧＣＧＣＣＣＧＧＧＣＴＴＡＡＴＴＡＡＧＴＣＧＡＣＴＣＴＡＧＡＧ
Ｃ−３’（配列番号６７）なる配列を有する、５’末から３’末へＸｂａＩ、Ｅ
ｃｏＲＩ、ＳｆｉＩ、ＰｍｅＩ、ＮｈｅＩ、ＳｒｆＩ、ＰａｃＩ、ＳａｌＩ、及
びＸｂａＩの制限部位を含むマルチプルクローニングサイトが、ベクターｐＸＣ
ＸＩＩ（ＭｃＫｉｎｎｏｎら、１９８２；ＭｃＧｒｏｒｙら、１９８８）のＸｂ
ａＩ部位（３３２９位のヌクレオチド）のレベルに挿入されうる。
【０６５７】 次いで、ＣＭＶプロモーター／エンハンサー、ＦＶ４０のドナー及びアクセプ
タースプライシング部位、並びにＦＶ４０のポリアデニル化シグナルを含有する
修飾されたｐＣＭＶ−βから単離されたＥｃｏＲＩ−ＳａｌＩ ＤＮＡ断片が、
修飾されたシャトルベクターｐＸＣＸのＥｃｏＲＩ−ＳａｌＩ部位へとクローニ
ングされ、ｐＣＭＶ−１１と名付けられうる。
【０６５８】 Ｃ−シャトルベクターｐＡＤ１２−ＡＢＣ１の調製： ヒトＡＢＣ１ ｃＤＮＡを、前記のようなＲＴ−ＰＣＲ反応により得、ベクタ
ーｐＣＭＶ−１２のＮｏｔＩ部位のレベルにクローニングすることにより、ベク
ターｐＣＭＶ−ＡＢＣ１が得られる。
【０６５９】 Ｄ．ＡＢＣ１組換えアデノウイルスの構築 ヒトＡＢＣ１ ｃＤＮＡを含有するＡＢＣ１−ｒｌｄＶ組換えアデノウイルス
は、ＭｃＧｒｏｒｙら（１９８８）により記載された技術に従い構築されうる。
簡単に述べると、ベクターｐＡＤ１２−ＡＢＣ１を、Ｃｈｅｎ及びＯｋａｙａｍ
ａ（１９８７）の技術に従い、ベクターｔＧＭ１７と共トランスフェクトした。
【０６６０】 同様に、ベクターｐＡＤ１２−ルシフェラーゼを構築し、ベクターｐＪＭ１７
と共トランスフェクトした。
【０６６１】 組換えアデノウイルスは、ＰＣＲ増幅により同定され、２回の精製サイクルに
供された後、ヒト胎児腎細胞系ＨＥＫ２９３（アメリカンタイプカルチャーコレ
クション、Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ、ＭＤ、ＵＳＡ）において大規模に増幅される。
【０６６２】 感染細胞は、アデノウイルスベクター感染の４８〜７２時間後に収集され、５
回の凍結−解凍サイクルに供される。
【０６６３】 粗溶解物をＦｒｅｏｎ（ハロカーボン１１３、Ｍａｔｈｅｓｏｎ Ｐｒｄｕｃ
ｔ、Ｓｃａｕｃｕｓ、Ｎ．Ｊ．ＵＳＡ）を利用して抽出し、０．２％マウスアル
ブミン（Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．、Ｓｔ Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ、Ｕ
ＳＡ）が補足された塩化セシウム中で２回沈降させ、１５０ｎＭ ＮａＣｌ、１
０ｍＭ ヘペス（ｐＨ７．４）、５ｍＭ ＫＣｌ、１ｍＭ ＭｇＣｌ２、及び１
ｍＭ ＣａＣｌ２から構成される緩衝液に対して十分に透析する。
【０６６４】 組換えアデノウイルスは、−７０℃で保存され、力価測定された後、動物へ投
与されるか、又は培養細胞と共にインキュベートされる。
【０６６５】 野生型アデノウイルスが混入していないことは、欠失領域の構造部分に位置す
るオリゴヌクレオチドプライマーを使用したＰＣＲ増幅を利用したスクリーニン
グにより確認される。
【０６６６】 ＩＶ ヒトＡＢＣ１ ｃＤＮＡの発現のバリデーション： ヒトＡＢＣ１ポリペプチドに特異的なポリクローナル抗体は、配列番号７１に
記載されるようなアミノ酸配列の全部又は一部を含む、ＡＢＣ１タンパク質に由
来する合成ポリペプチド断片を注射することにより、ウサギ及びニワトリにおい
て、前記のようにして調製されうる。これらのポリクローナル抗体は、イムノブ
ロッティング及び／又は免疫検出により、細胞及び動物モデルにおけるヒトＡＢ
Ｃ１遺伝子の発現を検出及び／又は定量するために使用される。
【０６６７】 ＡＢＣ１の生物学的活性は、コレステロールが担荷されたベクターｐＣＭＶ−
ＡＢＣ１でトランスフェクトされた細胞を使用して、ａｐｏＡ−Ｉにより誘導さ
れるコレステロール流出を定量することによりモニターされうる（Ｒｅｍａｌｅ
ｙら、１９９７）。
【０６６８】 Ｖ．細胞におけるヒトＡＢＣ１ ｃＤＮＡのインビトロ発現 ＨＥＫ２９３系及びＣＯＳ−７系の細胞（アメリカンタイプカルチャーコレク
ション、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、ＭＤ、ＵＳＡ）、並びにタンジアー患者又は低アル
ファリポタンパク質血症に罹患した患者に由来する繊維芽細胞の初代培養物を、
Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ（ＢＲＬ、Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ、ＭＤ、ＵＳ
Ａ）を使用して、又は塩化カルシウムを用いた共沈（Ｃｈｅｎら、１９８７）に
より、発現ベクターｐＣＭＶ−ＡＢＣ１（５〜２５μｇ）でトランスフェクトし
た。
【０６６９】 これらの細胞に、ベクターｐＡＢＣ１−ＡｄＶ（感染指数ＭＯＩ＝１０）も感
染させた。
【０６７０】 ヒトＡＢＣ１の発現は、イムノブロッティング、及びトランスフェクトかつ／
又は感染された細胞を使用したａｐｏＡ−Ｉにより誘導されるコレステロール流
出の定量によりモニターされうる。
【０６７１】 タンジアー患者及び低アルファリポタンパク質血症患者が罹患している遺伝学
的欠陥が、これらの患者の繊維芽細胞を使用して補足されることは、正常ＡＢＣ
１遺伝子の発現の検出により確認することができ、それにより、この受容体の機
能的重要性が確立されうる。
【０６７２】 ＶＩ．様々な動物モデルにおけるＡＢＣ１遺伝子のインビボ発現： 実験０日目に、１０８〜１０９溶解プラーク形成単位（ｐｆｕ）を含有する精
製された組換えアデノウイルス（ｐＡＢＣ１−ＡｄＶ又はｐＬｕｃｉｆ−ＡｄＶ
）を含有する培地を、適当な容量（１００〜３００μｌ）、マウス（Ｃ５７ＢＬ
／６、対照マウス及びトランスジェニック又はノックアウトマウスモデルの両方
）の伏在静脈に注入する。
【０６７３】 リポタンパク質の代謝におけるＡＢＣ１タンパク質の生理学的役割の評価は、
アデノウイルス投与の前（ゼロ日目）及び後（２、４、７、１０、１４日目）に
、マウスからのコレステロール、トリグリセリド、リン脂質、及び遊離コレステ
ロール（Ｓｉｇｍａ ａｎｄ Ｗａｋｏ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ、Ｒｉｃｈｍｏｎ
ｄ、ＶＡ、ＵＳＡ）、コレステロール−ＨＤＬ（ＣＩＢＡ−Ｃｏｒｎｉｎｇ、Ｏ
ｂｅｒｌｉｎ、ＯＨ、ＵＳＡ）、並びにアポリポタンパク質Ａ−Ｉ、Ａ−ＩＩ、
Ｅ、及びＢの総量を決定することにより実施される（Ｆｏｇｅｒら、１９９７）
。
【０６７４】 ＡＢＣ１発現の、ＨＤＬ及びＬＤＬの代謝、並びに肝臓へのコレステロール放
出に対する影響を評価するため、ａｐｏＡ−Ｉ−ＨＤＬ、ＣＥ−ＨＤＬ、並びに
ａｐｏＢ−ＬＤＬ及びＣＥ−ＬＤＬのような放射性標識された産物を利用した動
力学的研究が、ベクターｒＬｕｃｉｆ−ＡｄＶ及びｒＡＢＣ１−ＡｄＶの投与後
５日目に、実施される。
【０６７５】 動脈硬化の発生に対するＡＢＣ１発現の影響は、ｒＡＢＣ１−ＡｄＶの投与後
、ａｐｏＥマウスにおける大動脈損傷の平均表面積を定量することにより評価さ
れうる。
【０６７６】 さらに、ＡＢＣ１、ＣＭＶ、又はａｐｏＥのような内因性プロモーターの調節
下にあるヒトＡＢＣ１ ｃＤＮＡを含有する構築物を使用して、ＡＢＣ１遺伝子
を過剰発現するトランスジェニックマウス及びウサギが、Ｖａｉｓｍａｎ（１９
９５）及びＨｏｅｇ（１９９６）の教示に従い作製されうる。
【０６７７】 血漿脂質、リポタンパク質、及びアポリポタンパク質の動力学、並びに動脈硬
化に対するＡＢＣ１発現の長期的影響の評価は、前記のようにして実施されうる
。
【０６７８】 実施例１３：ＡＢＣ１タンパク質のアゴニスト分子及びアンタゴニスト分子の
スクリーニングのための小胞の使用 このスクリーニング試験の基本は、ＡＢＣ１タンパク質が取り込まれており、
コレステロール又はリン脂質のような基質を含有している膜の再構築である。次
いで、ＡＢＣ１タンパク質が不活化されるか、又はその機能が目的の分子の添加
により阻止される。次いで、ＡＢＣ１タンパク質により形成されたチャネルを介
した基質の流出が、検出される。
【０６７９】 ａ）ＡＢＣ１タンパク質と標識された脂質基質とを含む膜の再構築 これらの膜を製造するためには、有機溶媒を使用する方法、超音波処理、「フ
レンチプレス」のような機械的手段、凍結−解凍サイクルによる方法、又は界面
活性剤（コール酸塩、Ｃｈａｐｓ、Ｃｈａｐｓｏ）を使用する方法（Ｒｉｇａｕ
ｄら、１９９５参照）のような、様々な戦略が使用されうる。
【０６８０】 より具体的には、リン脂質、コレステロール、もしくはコレステロールエステ
ルのような脂質基質、３Ｈ−コレステロール、１２５Ｉ−コレステロール、もし
くは３Ｈ−ホスファチジルコリン型の放射性基質、又はＮＢＤもしくはピレンを
含む蛍光基質（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ；ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｐ
ｒｏｂｅｓ．ｃｏｍ）と、卵由来のホスファチジルコリン（１ｍＭ）とを、ガラ
スフラスコのペレット上で乾燥させる。コール酸ナトリウム及びＡＢＣ１タンパ
ク質をこのフラスコ内でモル対モル比０．３で混合する。全体を５分間ボルテッ
クスで混合し、次いで、２５℃で３０分間インキュベートし、次いで生理食塩緩
衝液に対して透析する。このプロトコルに従い作製されたプロテオリポソームを
、濁度測定によりモニターし、その製造が良好であることを確認する。
【０６８１】 ｂ）固体表面上へのプロテオリポソームの捕捉 この工程は、インテグリン型の結合タンパク質を組み込むことにより実施され
うる。このプロトコルにおいては、予め９６穴又は３８４穴のプレートに吸着さ
せたＡＢＣ１タンパク質に対する抗体による捕捉が使用される。
【０６８２】 これらの抗体を１００μｇ／ｌの濃度で含有する溶液を、４℃で一夜インキュ
ベートすることにより、これらのマルチウェルプレートに吸着させる。次いで、
洗浄後、プレートを、３７℃で２時間インキュベートされたウシアルブミン１ｍ
ｇ／ｍｌで飽和させる。次いで、全体を洗浄し、３７℃で２時間、ＡＢＣ１を含
有するプロテオリポソームと共にインキュベートする。
【０６８３】 ｃ）目的の分子との結合 この工程は、３７℃で１時間の産物のインキュベーションにより実施される。
【０６８４】 ｄ）ＡＢＣ１タンパク質の活性化又は阻害の決定 基質が蛍光性である場合、上清の蛍光が、プロテオリポソーム外部への脂質輸
送の誘導における産物の活性を示す。又は、Ｃｏｎｆｏｃａｌ系の使用は、プロ
テオリポソームの内部及び外部の、基質の量に関する情報を与える。基質が放射
性である場合には、シンチレーション液を含む底を有するＣｙｔｏＳｔａｒ型プ
レートの使用により、プロテオリポソーム内に依然として隔離されている基質を
明らかにすることができる。
【０６８５】 実施例１４：ＡＢＣ１タンパク質のアゴニスト分子及びアンタゴニスト分子の
スクリーニングのための陰イオン輸送の使用 この試験の原理は、活性化中にＡＢＣ１タンパク質が有する陰イオン輸送特性
にある。
【０６８６】 ａ）ＴＨＰ−１系のマクロファージ細胞、単球白血病ヒト細胞は、分化したマ
クロファージのモデルである。４８穴プレートで、１０％胎児ウシ血清が補足さ
れたＲＰＭＩ１６４０培地中で、細胞を、１ウェル当たり２×１０５細胞の密度
で培養する。タンジアー病に罹患した患者の繊維芽細胞においては、ＡＢＣ１タ
ンパク質が機能性でないため、それらの繊維芽細胞が陰性対照として使用されう
る。もう１つの陰性対照は、抗ＡＢＣ１抗体の添加により得られうる。
【０６８７】 ｂ）陰イオン輸送欠陥細胞、又は陰イオンチャネル阻害剤（Ｐ糖タンパク質阻
害剤であるベラパミル型、又はカリウムチャネル阻害剤であるテトラエチルアン
モニウム）で処理された細胞の使用も、使用されうる。
【０６８８】 ｃ）次いで、実際の試験のため、１μｍｏｌ／Ｌ（０．１μＣｉ／ｍｌのＮａ
Ｉ１２５）のＫＩ １ｍｌを予め担荷させたＥａｒｌｅｓ修飾塩溶液（ＥＳＳ）
培地で、３７℃で３０分間、細胞を洗浄する。次いで、産物を細胞外培地へと添
加する。次いで、細胞をＥＳＳ培地で洗浄する。
【０６８９】 ｄ）１１分間、１分毎に、培地中のヨウ素の量を検出する。最初の２点は、基
底流出に相当する。インキュベーション終了時、培地を採取し、１Ｍ ＮａＯＨ
中で細胞を溶解させた後、細胞内に残存しているヨウ素の量を計数する。
【０６９０】 ｅ）ゼロ時点での全放射能量は、上清中に見られる放射能と細胞内の残存放射
能との合計に等しい。培地中へ放出された放射能の割合（％）を、時間の関数と
してプロットすることにより、流出曲線を構築した。
【０６９１】 実施例１５：ＡＢＣ１タンパク質のアゴニスト分子及びアンタゴニスト分子を
スクリーニングするための、ＩＬ−１ベータを発現するＴＨＰ−１マクロファー
ジの使用 この試験の原理は、ＡＢＣ１タンパク質の活性をモデュレートする物質は、Ｉ
Ｌ−１ベータの合成に対する影響を有するであろうというものである。
【０６９２】 ａ）単球白血病ヒト細胞、ＴＨＰ−１系のマクロファージ細胞は、分化したマ
クロファージのモデルである。マルチウェルプレートで、１０％胎児ウシ血清が
補足されたＲＰＭＩ１６４０培地中で、細胞を１ウェル当たり２ １０５細胞の
密度で培養する。
【０６９３】 ｂ）次いで、実際の試験のため、細胞を洗浄し、１ｍｇ／ｍｌの精製されたヒ
トアルブミン第ＩＶ画分を含有するＲＰＭＩ１６４０培地中に置く。
【０６９４】 ｃ）産物を細胞外培地へと添加する。同時に、１μｇ／ｍｌのリポ多糖（ＬＰ
Ｓ）の添加により３時間かけて細胞を不活化し、続いて５ｍｍｏｌ／ＬのＡＴＰ
の存在下で３０分間インキュベートする。
【０６９５】 ｄ）ＩＬ−１ベータ、並びに対照のＩＬ−１アルファ、腫瘍壊死因子アルファ
（ＴＮＦアルファ）、及びＩＬ−６の濃度を、製造業者の指示に従い、ＥＬＩＳ
Ａキット（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｔｅｍ；ヒトＩＬ−１ベータ化学発光ＥＬＩＳＡ、参照
ＱＬＢ００）により決定する。影響を受けないと推測されるＩＬ−１ベータのｍ
ＲＮＡの変動を、対応するプローブを用いたノーザンブロッティング技術により
評価する。
【０６９６】 実施例１６：ＡＢＣ１により媒介されるリン脂質及びコレステロールの流出 Ｉ−培養細胞 ヒトＨｅｌａ Ｔｅｔ−Ｏｆｆ（登録商標）細胞（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ、Ｐａｌ
ｏ Ａｌｔｏ、ＣＡ）を、１０％胎児ウシ血清、２ｍＭグルタミン、１００ＩＵ
／ｍｌペニシリン、１００μｇ／ｍｌストレプトマイシン（ＥＭＥＭ１０）、及
び２５０μｇ／ｍｌ Ｇ４１８が補足されたダルベッコ改変最小必須培地（ＤＭ
ＥＭ）（ＧＩＢＣＯ ＢＲＬ、Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ、ＭＤ）中で増殖させた。ヒ
トＡＢＣ１−ＧＦＰ融合タンパク質を安定的に発現する細胞系を、融合タンパク
質のｃＤＮＡを含有するｐＴＲ２プラスミド（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ、Ｐａｌｏ Ａ
ｌｔｏ、ＣＡ）と、ハイグロマイシン耐性マーカーをコードするｐＨｙｇｒｏと
の共トランスフェクションにより得た。１ｍｇ／ｍｌハイグロマイシンによる選
択からおよそ２週間後、蛍光顕微鏡で査定されたＧＦＰ陽性細胞を、クローニン
グし、増幅した。
【０６９７】 ＩＩ−コレステロール流出アッセイ コレステロール流出アッセイは、Ｏｒａｍら（１９８６）及びＲｏｔｈｂｌａ
ｔら（１９８６）による記載と本質的に同様にして実施した。
【０６９８】 ２４穴プレート上でコンフルエントに増殖させたコレステロール担荷繊維芽細
胞を、１μＣｉ／ｍｌの１，２−３Ｈ−コレステロール（５０Ｃｉ／ｍｍｏｌ）
（Ｄｕｐｏｎｔ、Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ、ＤＥ）を含有するＥＭＥＭ１０と共に
４８時間インキュベートした。典型的には、この標識プロトコルは、およそ１０
０，０００ＣＰＭ／ウェル又は１０００ＣＰＭ／ｕｇタンパク質をもたらした。
細胞をＥＭＥＭ／ＢＳＡで３回洗浄し、１０μｇ／ｍｌのコレステロールアクセ
プタ、即ちａｐｏＡ−Ｉ、ａｐｏＡ−ＩＩ、ａｐｏＡ−ＩＶ、ａｐｏＣ−Ｉ、ａ
ｐｏＣ−ＩＩ、ａｐｏＣ−ＩＩＩ、ａｐｏＥ３の存在下又は非存在下で、ＥＭＥ
Ｍ／ＢＳＡ培地を添加し、３７℃で２４時間インキュベートした後、コレステロ
ールを流出させた。流出期間（１８ｈ）の後、培地を収集し遠心分離し（１０，
０００×ｇ、５分間）、培地の一部の放射能を液体シンチレーション計数により
計数した。細胞画分の残存放射能カウントは、イソプロパノールによる一夜の抽
出の後、決定した。流出率（％）を、流出培地中の放射能カウントを、培地中で
測定された放射能と細胞画分中で測定された放射能との合計で割ることにより計
算した。特記しない限り、ＥＭＥＭ／ＢＳＡ培地をブランクとして使用し、ブラ
ンクからの結果を、コレステロールアクセプタの存在下で得られた放射能カウン
トから差し引いた。
【０６９９】 図４に提示された結果は、様々なアポリポタンパク質Ａ−Ｉ、Ａ−ＩＩ、Ａ−
ＩＶ、Ｃ−Ｉ、Ｃ−ＩＩ、Ｃ−ＩＩＩ、及びＥ３が、ＡＢＣ１トランスフェクト
された細胞におけるコレステロール流出を顕著に増加させることを明確に証明し
ており、それにより、本発明に係る全長ＡＢＣ１タンパク質が、様々なアポリポ
タンパク質Ａ−Ｉ、Ａ−ＩＩ、Ａ−ＩＶ、Ｃ−Ｉ、Ｃ−ＩＩ、Ｃ−ＩＩＩ、及び
Ｅ３により媒介されるコレステロール流出を促進する能力を有することが示され
る。
【０７００】 ＩＩＩ−リン脂質流出アッセイ リン脂質流出アッセイは、Ｍｅｎｄｅｚら（１９９４）の記載と本質的に同様
にして実施した。
【０７０１】 ２４穴プレート上でコンフルエントに増殖させたコレステロール担荷繊維芽細
胞を、５μＣｉ／ｍｌのメチル−３Ｈ塩化コリン（８４Ｃｉ／ｍｍｏｌ）（Ａｍ
ｅｒｓｈａｍ；Ａｒｌｉｎｇｔｏｎ Ｈｅｉｇｈｔｓ、Ｉｌｌ）を含有するＥＭ
ＥＭ１０と共に２４時間インキュベートすることにより、コリン含有リン脂質を
標識した。細胞をＥＭＥＭ／ＢＳＡで３回洗浄し、続いてＥＭＥＭ／ＢＳＡ中で
１時間プレインキュベートした後、１０μｇ／ｍｌのリン脂質アクセプタ、即ち
ａｐｏＡ−Ｉ、ａｐｏＡ−ＩＩ、ａｐｏＡ−ＩＶ、ａｐｏＣ−Ｉ、ａｐｏＣ−Ｉ
Ｉ、ａｐｏＣ−ＩＩＩ、ａｐｏＥ３の存在下又は非存在下で、ＥＭＥＭ／ＢＳＡ
培地と共にインキュベートした。典型的には、この標識プロトコルは、およそ５
００，０００ＣＰＭ／ウェル又は５０００ＣＰＭ／ｕｇタンパク質をもたらした
。流出期間（１８ｈ）の後、培地を収集し遠心分離した（１０，０００×ｇ、５
分間）。上清の一部をクロロホルム：メタノール（２：１）で抽出し、有機相の
液体シンチレーション計数により放射能を決定した。細胞画分の残存カウントは
、イソプロパノールによる一夜の抽出、それに続くヘキサン：イソプロパノール
（３：２）による１時間の抽出の後、決定した。
【０７０２】 流出率（％）を、流出培地中の放射能カウントを、流出培地中の放射能カウン
トと細胞画分中の放射能カウントとの合計で割ることにより計算した。特記しな
い限り、ＥＭＥＭ／ＢＳＡ培地をブランクとして使用し、ブランクからの結果を
、リン脂質アクセプタの存在下で得られた放射能カウントから差し引いた。
【０７０３】 図５に提示された結果は、様々なアポリポタンパク質Ａ−Ｉ、Ａ−ＩＩ、Ａ−
ＩＶ、Ｃ−Ｉ、Ｃ−ＩＩ、Ｃ−ＩＩＩ、及びＥ３の添加が、ＡＢＣ１トランスフ
ェクトされた細胞におけるリン脂質流出を顕著に増加させることを明確に証明し
ており、それにより、本発明に係る全長ＡＢＣ１タンパク質が、様々なアポリポ
タンパク質Ａ−Ｉ、Ａ−ＩＩ、Ａ−ＩＶ、Ｃ−Ｉ、Ｃ−ＩＩ、Ｃ−ＩＩＩ、及び
Ｅ３により媒介される細胞リン脂質流出にも関与していることを示している。
【０７０４】 ＩＶ−リポタンパク質、アポリポタンパク質小胞の調製 ＨＤＬ（ｄ＝１．０６３〜１．０２１ｇ／ｍｌ）は、Ｓｈｕｍａｋｅｒらによ
る記載のようにして、密度勾配超遠心分離により、ヒト血漿から単離した。
【０７０５】 アポリポタンパク質は、Ｂｒｅｗｅｒら（１９８６）により記載されたように
して、カラムクロマトグラフィによりヒト血漿から精製し、ＳＤＳ−ポリアクリ
ルアミドゲル電気泳動及びアミノ末端配列分析により査定したところ、９９％超
の純度であることが決定された。ホスファチジルコリン小胞、及び１：２．５（
ｗ／ｗ）の比率での卵黄ホスファチジルコリンによるａｐｏＡ−Ｉの再構築は、
Ｊｏｎａｓら（１９８６）により以前に記載されたようにして、超音波処理によ
り実施された。
【０７０６】 図６の結果は、ＡＢＣ１トランスフェクトされた細胞におけるコレステロール
流出を、ａｐｏＡ−Ｉは完全に、ＨＤＬは部分的に、媒介することを示している
。さらに、ａｐｏＡ−Ｉは、ＡＢＣ１トランスフェクトされた細胞におけるリン
脂質流出を媒介する。しかしながら、ホスファチジルコリン（ＰＣ）は、ＡＢＣ
１トランスフェクトされた細胞におけるコレステロール流出を媒介しない。
【０７０７】 Ｖ−ａｐｏＡ−Ｉ及びａｐｏＡ−ＩＩのＡＢＣ１との結合 ヨウ化物一塩化物（ｉｏｄｉｄｅ ｍｏｎｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）法により、ａ
ｐｏＡ−Ｉを同位体性１２５ヨウ化物で、比活性が２×１０６ｃｐｍ／μｇとな
るようヨウ素化した。２４穴プレート上でコンフルエントに増殖させた繊維芽細
胞を、５０倍過剰の、ＨＤＬから単離されたアポリポタンパク質Ａ−Ｉ及びＡ−
ＩＩ画分の存在下及び非存在下で３７℃で３時間、ヨウ素化ａｐｏＡ−Ｉと共に
インキュベートした。細胞を４℃でＥＭＥＭ／ＢＳＡで迅速に３回洗浄した。細
胞画分を、０．１Ｍ ＮａＯＨ及び０．１％ＳＤＳで溶解させた後、結合したヨ
ウ素化リガンドを、ガンマ計数により決定した。
【０７０８】
【表８】
【０７０９】 本発明の範囲は、本明細書に記載された特定の実施形態により制限されない。
実際、本明細書に記載されたものに加え、様々な本発明の修飾が、前述の説明及
び添付の図面より、当業者には明らかとなろう。そのような修飾は、添付の特許
請求の範囲の範囲内に含まれるものとする。
【０７１０】 様々な出版物が本明細書において引用されているが、それらの開示は、参照に
より完全に組み込まれる。
【図面の簡単な説明】
【図１】 ＡＢＣ１ ５’ｃＤＮＡ伸長法を示す図である。
【図２】 １次及び２次ヒトＡＢＣ１ ５’ｃＤＮＡ伸長ＰＣＲ反応のアガロースゲル分
析を示す図である。
【図３】 内部２次ヒトＡＢＣ１ ５’ｃＤＮＡ伸長内部ＰＣＲ反応のアガロースゲル分
析を示す図である。
【図４】 アポリポタンパク質の非存在下■又は存在下□でのヒト全長ＡＢＣ１タンパク
質を発現するＨｅＬａ細胞系におけるコレステロール流出の測定を示す図である
。
【図５】 アポリポタンパク質の非存在下■又は存在下□でのヒト全長ＡＢＣ１タンパク
質を発現するＨｅＬａ細胞系におけるリン脂質流出の測定を示す図である。
【図６】 ６Ａはアポリポタンパク質Ａ−Ｉ（ＡＩ）の非存在下■又は存在下□でのコレ
ステロール流出の測定を示し、６Ｂはアポリポタンパク質Ａ−Ｉ（ＡＩ）の非存
在下■又は存在下□でのリン脂質流出の測定を示し、６ＣはＨＤＬの非存在下■
又は存在下□でのコレステロール流出の測定を示し、６Ｄはホスファチジルコリ
ン（ＰＣ）の非存在下■又は存在下□でのコレステロール流出の測定を示す図で
ある。
【図７】 ［１２５Ｉ］ａｐｏＡ−Ｉと共にインキュベートされたＡＢＣ１細胞を、アポ
リポタンパク質の非存在下□、アポリポタンパク質Ａ−Ｉ（ａｐｏＡ−Ｉ）の存
在下■、又はアポリポタンパク質Ａ−ＩＩ（ａｐｏＡ−ＩＩ）の存在下（斜線付
き四角）に置いた。
【配列表】
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｋ 39/395 Ａ６１Ｋ 48/00 ４Ｃ０８５ 45/00 Ａ６１Ｐ 3/06 ４Ｃ０８６ 48/00 3/10 ４Ｃ０８７ Ａ６１Ｐ 3/06 9/10 ４Ｈ０４５ 3/10 １０１ 9/10 33/06 １０１ Ｃ０７Ｋ 14/47 33/06 16/18 Ｃ０７Ｋ 14/47 Ｃ１２Ｎ 1/15 16/18 1/19 Ｃ１２Ｎ 1/15 1/21 1/19 Ｃ１２Ｑ 1/02 1/21 1/68 Ａ 5/10 Ｇ０１Ｎ 33/15 Ｚ Ｃ１２Ｑ 1/02 33/50 Ｚ 1/68 33/53 Ｄ Ｇ０１Ｎ 33/15 Ｍ 33/50 33/566 33/53 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ 5/00 Ａ 33/566 Ａ６１Ｋ 37/02 (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＭＺ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ， ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＧ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ， ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＢＺ，Ｃ Ａ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ ，ＤＺ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ， ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，Ｋ Ｅ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ， ＭＷ，ＭＸ，ＭＺ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，Ｒ Ｕ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ， ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ (72)発明者 アルヌ−レギーニユ，イザベル フランス国、エフ−94430・シエンヌビエ ール、リユ・デ・ブリ、112 (72)発明者 プラデ，カトリーヌ フランス国、エフ−94320・テイエ、アブ ニユ・ドユ・ジエネラル・ドウ・ゴール、 30 (72)発明者 ノダン，ローラン フランス国、エフ−91150・エタンプ、ビ ス・リユ・ドウ・ラ・ロシユ・プラツト、 11 (72)発明者 ルモアンヌ，サンドリーヌ フランス国、エフ−91310・モンレリー、 リユ・デ・ピシヨ、16 (72)発明者 デユベルジエ，ニコラ フランス国、エフ−75005・パリ、リユ・ ロラン、４ (72)発明者 ジエイ，マイケル アメリカ合衆国、ペンシルバニア・19038、 グレンサイド、ノース・リンウツド・アベ ニユー・142 (72)発明者 サーフオス，ジヨージ・エイチ，ザ・サー ド アメリカ合衆国、ペンシルバニア・19508、 バーズボーロ、バリー・ドライブ・16 (72)発明者 リマリー，アラン アメリカ合衆国、メリーランド・20892、 ベセダ、トレイモア・ストリート・4510 (72)発明者 ブレアー，エイチ・ブライアン アメリカ合衆国、メリーランド・20854、 ポトマツク、ペブル・ブルツク・レイン・ 10805 (72)発明者 デイーン，マイケル アメリカ合衆国、メリーランド・21703、 フレデリツク、ヒツチングポスト・レイ ン、1362 Ｆターム(参考） 2G045 AA40 DA12 DA13 DA14 DA36 DA77 FB02 FB03 4B024 AA01 AA11 BA65 CA04 DA02 EA02 FA02 GA11 HA01 HA17 4B063 QA01 QA13 QA18 QQ43 QR32 QR55 QR62 QS25 QS34 4B065 AA90X AA99Y AB01 AC14 BA02 CA24 CA44 4C084 AA02 AA06 AA07 AA13 AA17 BA01 BA08 BA20 BA22 BA23 MA01 NA14 ZA402 ZA452 ZB382 ZC212 ZC332 ZC352 4C085 AA13 AA14 AA16 CC32 DD62 EE01 GG01 4C086 AA01 AA02 AA03 AA04 EA16 MA01 MA04 NA14 ZA40 ZA45 ZB38 ZC21 ZC33 ZC35 4C087 AA01 AA02 BB65 BC83 CA12 MA01 NA13 NA14 ZA40 ZA45 ZB38 ZC21 ZC33 ZC35 4H045 AA10 AA11 AA30 BA10 CA40 DA01 DA50 EA22 EA28 FA74

Claims (111)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 配列番号１、４〜６５、６８〜７０、７２〜８８、１０３、
    １０９〜１１８、及び１３７、又は相補ポリヌクレオチド配列のうちのいずれか
    １つを含む単離された核酸。
  2. 【請求項２】 ａ）配列番号１、４〜８、１１〜１６、１８〜２６、２８〜
    ３５、３７〜５２、５４〜６５、６８、及び１３７、もしくは相補ポリヌクレオ
    チド配列のうちのいずれか１つ；ｂ）配列番号９のヌクレオチド３１５４〜３２
    ００もしくは相補ポリヌクレオチド配列；ｃ）配列番号１０のヌクレオチド１〜
    ２４２もしくは相補ポリヌクレオチド配列；ｄ）配列番号１７のヌクレオチド１
    〜１８５１もしくは相補ポリヌクレオチド配列；ｅ）配列番号２７のヌクレオチ
    ド１５２〜１９８もしくは相補ポリヌクレオチド配列；ｆ）配列番号３６のヌク
    レオチド１〜１６５７もしくは相補ポリヌクレオチド配列；又はｇ）配列番号５
    ３のヌクレオチド１〜２４２もしくは相補ポリヌクレオチド配列のポリヌクレオ
    チド配列の少なくとも８個の連続ヌクレオチドを含む単離された核酸。
  3. 【請求項３】 ａ）配列番号１、４〜８、１１〜１６、１８〜２６、２８〜
    ３５、３７〜５２、５４〜６５、６８、及び１３７、もしくは相補ポリヌクレオ
    チド配列のうちのいずれか１つ；ｂ）配列番号９のヌクレオチド３１５４〜３２
    ００もしくは相補ポリヌクレオチド配列；ｃ）配列番号１０のヌクレオチド１〜
    ２４２もしくは相補ポリヌクレオチド配列；ｄ）配列番号１７のヌクレオチド１
    〜１８５１もしくは相補ポリヌクレオチド配列；ｅ）配列番号２７のヌクレオチ
    ド１５２〜１９８もしくは相補ポリヌクレオチド配列；ｆ）配列番号３６のヌク
    レオチド１〜１６５７もしくは相補ポリヌクレオチド配列；又はｇ）配列番号５
    ３のヌクレオチド１〜２４２もしくは相補ポリヌクレオチド配列を含む核酸との
    少なくとも８０％のヌクレオチド同一性を含む単離された核酸。
  4. 【請求項４】 ａ）配列番号１、４〜８、１１〜１６、１８〜２６、２８〜
    ３５、３７〜５２、５４〜６５、６８、及び１３７、もしくは相補ポリヌクレオ
    チド配列のうちのいずれか１つ；ｂ）配列番号９のヌクレオチド３１５４〜３２
    ００もしくは相補ポリヌクレオチド配列；ｃ）配列番号１０のヌクレオチド１〜
    ２４２もしくは相補ポリヌクレオチド配列；ｄ）配列番号１７のヌクレオチド１
    〜１８５１もしくは相補ポリヌクレオチド配列；ｅ）配列番号２７のヌクレオチ
    ド１５２〜１９８もしくは相補ポリヌクレオチド配列；ｆ）配列番号３６のヌク
    レオチド１〜１６５７もしくは相補ポリヌクレオチド配列；又はｇ）配列番号５
    ３のヌクレオチド１〜２４２もしくは相補ポリヌクレオチド配列を含む核酸との
    ８５％、９０％、９５％、又は９８％のヌクレオチド同一性を含む、請求項３記
    載の単離された核酸。
  5. 【請求項５】 ａ）配列番号１、４〜８、１１〜１６、１８〜２６、２８〜
    ３５、３７〜５２、５４〜６５、６８、及び１３７、もしくは相補ポリヌクレオ
    チド配列のうちのいずれか１つ；ｂ）配列番号９のヌクレオチド３１５４〜３２
    ００もしくは相補ポリヌクレオチド配列；ｃ）配列番号１０のヌクレオチド１〜
    ２４２もしくは相補ポリヌクレオチド配列；ｄ）配列番号１７のヌクレオチド１
    〜１８５１もしくは相補ポリヌクレオチド配列；ｅ）配列番号２７のヌクレオチ
    ド１５２〜１９８もしくは相補ポリヌクレオチド配列；ｆ）配列番号３６のヌク
    レオチド１〜１６５７もしくは相補ポリヌクレオチド配列；又はｇ）配列番号５
    ３のヌクレオチド１〜２４２もしくは相補ポリヌクレオチド配列を含む核酸と、
    高ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズする単離された核酸。
  6. 【請求項６】 配列番号１、４〜６５、６８〜７０、７２〜８８、１０３、
    １０９〜１１８、及び１３７、又は相補ポリヌクレオチド配列のうちのいずれか
    １つに示されるようなポリヌクレオチド配列を含む単離された核酸。
  7. 【請求項７】 配列番号６９のヌクレオチド１〜２４４もしくは配列番号７
    ０のヌクレオチド１〜３５７又は相補ポリヌクレオチド配列を含む単離された核
    酸。
  8. 【請求項８】 配列番号６９のヌクレオチド１〜２４４もしくは配列番号７
    ０のヌクレオチド１〜３５７又は相補ポリヌクレオチド配列の少なくとも８個の
    連続ヌクレオチドを含む単離された核酸。
  9. 【請求項９】 配列番号６９のヌクレオチド１〜２４４もしくは配列番号７
    ０のヌクレオチド１〜３５７又は相補ポリヌクレオチド配列との少なくとも８０
    ％のヌクレオチド同一性を含む単離された核酸。
  10. 【請求項１０】 配列番号６９のヌクレオチド１〜２４４もしくは配列番号
    ７０のヌクレオチド１〜３５７又は相補ポリヌクレオチド配列との８５％、９０
    ％、９５％、又は９８％のヌクレオチド同一性を含む、請求項９記載の単離され
    た核酸。
  11. 【請求項１１】 配列番号６９のヌクレオチド１〜２４４もしくは配列番号
    ７０のヌクレオチド１〜３５７又は相補ポリヌクレオチド配列と、高ストリンジ
    ェンシー条件下でハイブリダイズする単離された核酸。
  12. 【請求項１２】 ａ）配列番号１、４〜８、１１〜１６、１８〜２６、２８
    〜３５、３７〜５２、５４〜６５、６８、及び１３７、もしくは相補ポリヌクレ
    オチド配列のうちのいずれか１つ；ｂ）配列番号９のヌクレオチド３１５４〜３
    ２００もしくは相補ポリヌクレオチド配列；ｃ）配列番号１０のヌクレオチド１
    〜２４２もしくは相補ポリヌクレオチド配列；ｄ）配列番号１７のヌクレオチド
    １〜１８５１もしくは相補ポリヌクレオチド配列；ｅ）配列番号２７のヌクレオ
    チド１５２〜１９８もしくは相補ポリヌクレオチド配列；ｆ）配列番号３６のヌ
    クレオチド１〜１６５７もしくは相補ポリヌクレオチド配列；又はｇ）配列番号
    ５３のヌクレオチド１〜２４２もしくは相補ポリヌクレオチド配列のポリヌクレ
    オチド配列の少なくとも１５個の連続ヌクレオチドを含む、ＡＢＣ１遺伝子に特
    異的なヌクレオチドプローブ又はプライマー。
  13. 【請求項１３】 配列番号６９のヌクレオチド１〜２４４もしくは配列番号
    ７０のヌクレオチド１〜３５７又は相補ポリヌクレオチド配列の少なくとも１５
    個の連続ヌクレオチドを含む、ＡＢＣ１遺伝子に特異的なヌクレオチドプローブ
    又はプライマー。
  14. 【請求項１４】 配列番号１１９〜１３６、１３８、及び１４１〜１５２、
    又は相補ポリヌクレオチド配列のうちのいずれか１つを含む、ＡＢＣ１遺伝子に
    特異的なヌクレオチドプローブ又はプライマー。
  15. 【請求項１５】 請求項１記載の核酸の領域を増幅する方法であって、 ａ）増幅反応に必要な試薬の存在下で、核酸の領域の５’の位置に第１ヌクレ
    オチドプライマーがハイブリダイズし、かつ核酸の領域の３’の位置に第２ヌク
    レオチドプライマーがハイブリダイズするよう、核酸を２つのヌクレオチドプラ
    イマーと接触させること、及び ｂ）増幅された核酸領域を検出すること、を含む方法。
  16. 【請求項１６】 ２つのヌクレオチドプライマーが、 Ａ）ａ）配列番号１、４〜８、１１〜１６、１８〜２６、２８〜３５、３７〜
    ５２、５４〜６５、６８、及び１３７、もしくは相補ポリヌクレオチド配列のう
    ちのいずれか１つ；ｂ）配列番号９のヌクレオチド３１５４〜３２００もしくは
    相補ポリヌクレオチド配列；ｃ）配列番号１０のヌクレオチド１〜２４２もしく
    は相補ポリヌクレオチド配列；ｄ）配列番号１７のヌクレオチド１〜１８５１も
    しくは相補ポリヌクレオチド配列；ｅ）配列番号２７のヌクレオチド１５２〜１
    ９８もしくは相補ポリヌクレオチド配列；ｆ）配列番号３６のヌクレオチド１〜
    １６５７もしくは相補ポリヌクレオチド配列；又はｇ）配列番号５３のヌクレオ
    チド１〜２４２もしくは相補ポリヌクレオチド配列のポリヌクレオチド配列の少
    なくとも１５個の連続ヌクレオチドを含むヌクレオチドプライマー、 Ｂ）配列番号６９のヌクレオチド１〜２４４もしくは配列番号７０のヌクレオ
    チド１〜３５７又は相補配列を有する核酸の少なくとも１５個の連続ヌクレオチ
    ドを含むヌクレオチドプライマー、並びに Ｃ）配列番号１１９〜１３６、１３８、及び１４１〜１５２、又は相補配列を
    有する核酸のうちのいずれか１つのポリヌクレオチド配列を含むヌクレオチドプ
    ライマー、からなる群より選択される、請求項１５記載の核酸の領域を増幅する
    方法。
  17. 【請求項１７】 請求項１記載の核酸を増幅するためのキットであって、 ａ）ハイブリダイゼーション位置が核酸の領域のそれぞれ５’及び３’である
    ２つのヌクレオチドプライマーを含み、かつ ｂ）増幅反応に必要な試薬を場合により含む、キット。
  18. 【請求項１８】 ２つのヌクレオチドプライマーが、 Ａ）ａ）配列番号１、４〜８、１１〜１６、１８〜２６、２８〜３５、３７〜
    ５２、５４〜６５、６８、及び１３７、もしくは相補ポリヌクレオチド配列のう
    ちのいずれか１つ；ｂ）配列番号９のヌクレオチド３１５４〜３２００もしくは
    相補ポリヌクレオチド配列；ｃ）配列番号１０のヌクレオチド１〜２４２もしく
    は相補ポリヌクレオチド配列；ｄ）配列番号１７のヌクレオチド１〜１８５１も
    しくは相補ポリヌクレオチド配列；ｅ）配列番号２７のヌクレオチド１５２〜１
    ９８もしくは相補ポリヌクレオチド配列；ｆ）配列番号３６のヌクレオチド１〜
    １６５７もしくは相補ポリヌクレオチド配列；又はｇ）配列番号５３のヌクレオ
    チド１〜２４２もしくは相補ポリヌクレオチド配列のポリヌクレオチド配列の少
    なくとも１５個の連続ヌクレオチドを含むヌクレオチドプライマー、 Ｂ）配列番号６９のヌクレオチド１〜２４４もしくは配列番号７０のヌクレオ
    チド１〜３５７又は相補ポリヌクレオチド配列の少なくとも１５個の連続ヌクレ
    オチドを含むヌクレオチドプライマー、並びに Ｃ）配列番号１１９〜１３６、１３８、及び１４１〜１５２、又は相補ポリヌ
    クレオチド配列のうちのいずれか１つのポリヌクレオチド配列を含むヌクレオチ
    ドプライマー、からなる群より選択される、請求項１７記載のキット。
  19. 【請求項１９】 マーカー化合物を含む、請求項１２記載のヌクレオチドプ
    ローブ又はプライマー。
  20. 【請求項２０】 マーカー化合物を含む、請求項１３記載のヌクレオチドプ
    ローブ又はプライマー。
  21. 【請求項２１】 マーカー化合物を含む、請求項１４記載のヌクレオチドプ
    ローブ又はプライマー。
  22. 【請求項２２】 請求項１記載の核酸を検出する方法であって、 Ａ）１）ａ）配列番号１、４〜８、１１〜１６、１８〜２６、２８〜３５、３
    ７〜５２、５４〜６５、６８、及び１３７、もしくは相補ポリヌクレオチド配列
    のうちのいずれか１つ；ｂ）配列番号９のヌクレオチド３１５４〜３２００もし
    くは相補ポリヌクレオチド配列；ｃ）配列番号１０のヌクレオチド１〜２４２も
    しくは相補ポリヌクレオチド配列；ｄ）配列番号１７のヌクレオチド１〜１８５
    １もしくは相補ポリヌクレオチド配列；ｅ）配列番号２７のヌクレオチド１５２
    〜１９８もしくは相補ポリヌクレオチド配列；ｆ）配列番号３６のヌクレオチド
    １〜１６５７もしくは相補ポリヌクレオチド配列；又はｇ）配列番号５３のヌク
    レオチド１〜２４２もしくは相補ポリヌクレオチド配列のポリヌクレオチド配列
    の少なくとも１５個の連続ヌクレオチドを含むヌクレオチドプローブ、 ２）配列番号６９のヌクレオチド１〜２４４もしくは配列番号７０のヌクレオ
    チド１〜３５７又は相補ポリヌクレオチド配列の少なくとも１５個の連続ヌクレ
    オチドを含むヌクレオチドプライマー、並びに ３）配列番号１１９〜１３６、１３８、及び１４１〜１５２、又は相補ポリヌ
    クレオチド配列のうちのいずれか１つのポリヌクレオチド配列を含むヌクレオチ
    ドプローブ、からなる群より選択されるヌクレオチドプローブと核酸を接触させ
    ること、並びに Ｂ）核酸とプローブとで形成された複合体を検出すること：を含む方法。
  23. 【請求項２３】 プローブが支持体上に固定化されている、請求項２２記載
    の検出法。
  24. 【請求項２４】 Ａ）１）ａ）配列番号１、４〜８、１１〜１６、１８〜２
    ６、２８〜３５、３７〜５２、５４〜６５、６８、及び１３７、もしくは相補ポ
    リヌクレオチド配列のうちのいずれか１つ；ｂ）配列番号９のヌクレオチド３１
    ５４〜３２００もしくは相補ポリヌクレオチド配列；ｃ）配列番号１０のヌクレ
    オチド１〜２４２もしくは相補ポリヌクレオチド配列；ｄ）配列番号１７のヌク
    レオチド１〜１８５１もしくは相補ポリヌクレオチド配列；ｅ）配列番号２７の
    ヌクレオチド１５２〜１９８もしくは相補ポリヌクレオチド配列；ｆ）配列番号
    ３６のヌクレオチド１〜１６５７もしくは相補ポリヌクレオチド配列；又はｇ）
    配列番号５３のヌクレオチド１〜２４２もしくは相補ポリヌクレオチド配列のポ
    リヌクレオチド配列の少なくとも１５個の連続ヌクレオチドを含むヌクレオチド
    プローブ、 ２）配列番号６９のヌクレオチド１〜２４４もしくは配列番号７０のヌクレオ
    チド１〜３５７又は相補ポリヌクレオチド配列の少なくとも１５個の連続ヌクレ
    オチドを含むヌクレオチドプライマー、並びに ３）配列番号１１９〜１３６、１３８、及び１４１〜１５２、又は相補ポリヌ
    クレオチド配列のうちのいずれか１つを含むヌクレオチドプローブ、からなる群
    より選択されるヌクレオチドプローブを含み、かつ Ｂ）ハイブリダイゼーション反応に必要な試薬を場合により含む、請求項１記
    載の核酸を検出するためのキット。
  25. 【請求項２５】 プローブが支持体上に固定化されている、請求項２４記載
    のキット。
  26. 【請求項２６】 請求項１記載の核酸を含む組換えベクター。
  27. 【請求項２７】 アデノウイルスである、請求項２６記載のベクター。
  28. 【請求項２８】 請求項６記載の核酸を含む組換えベクター。
  29. 【請求項２９】 アデノウイルスである、請求項２８記載のベクター。
  30. 【請求項３０】 請求項７記載の核酸を含む組換えベクター。
  31. 【請求項３１】 アデノウイルスである、請求項３０記載のベクター。
  32. 【請求項３２】 請求項１記載の核酸を含む組換え宿主細胞。
  33. 【請求項３３】 請求項２６記載の組換えベクターを含む組換え宿主細胞。
  34. 【請求項３４】 請求項６記載の核酸を含む組換え宿主細胞。
  35. 【請求項３５】 請求項２８記載の組換えベクターを含む組換え宿主細胞。
  36. 【請求項３６】 請求項７記載の核酸を含む組換え宿主細胞。
  37. 【請求項３７】 請求項３０記載の組換えベクターを含む組換え宿主細胞。
  38. 【請求項３８】 配列番号７１のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコード
    する単離された核酸。
  39. 【請求項３９】 配列番号７１のアミノ酸１〜６０を含むポリペプチドをコ
    ードする単離された核酸。
  40. 【請求項４０】 請求項３８記載の核酸を含む組換えベクター。
  41. 【請求項４１】 請求項３９記載の核酸を含む組換えベクター。
  42. 【請求項４２】 請求項３８記載の核酸を含む組換え宿主細胞。
  43. 【請求項４３】 請求項３９記載の核酸を含む組換え宿主細胞。
  44. 【請求項４４】 請求項４０記載の組換えベクターを含む組換え宿主細胞。
  45. 【請求項４５】 請求項４１記載の組換えベクターを含む組換え宿主細胞。
  46. 【請求項４６】 ａ）配列番号７１及び８９〜１０２のうちのいずれか１つ
    のアミノ酸配列を含むポリペプチド、 ｂ）配列番号７１のアミノ酸１〜６０を含むポリペプチド、 ｃ）配列番号７１のアミノ酸１〜６０を含む、配列番号７１及び８９〜１０２
    のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含むポリペプチドのポリペプチド断片又
    は異型、並びに ｄ）配列番号７１のアミノ酸１〜６０を含むポリペプチドと相同なポリペプチ
    ド、からなる群より選択される単離されたポリペプチド。
  47. 【請求項４７】 請求項４６記載の単離されたポリペプチドに対する抗体。
  48. 【請求項４８】 検出可能化合物を含む、請求項４７記載の抗体。
  49. 【請求項４９】 ポリペプチドを検出する方法であって、 ａ）請求項４７記載の抗体とポリペプチドを接触させること；及び ｂ）ポリペプチドと抗体とで形成された抗原／抗体複合体を検出すること、を
    含む方法。
  50. 【請求項５０】 ポリペプチドを検出するための診断用キットであって、 ａ）請求項４７記載の抗体；及び ｂ）ポリペプチドと抗体とで形成された抗原／抗体複合体の検出を可能にする
    試薬、を含む診断用キット。
  51. 【請求項５１】 請求項１記載の核酸と、生理学的に適合性の賦形剤とを含
    む薬学的組成物。
  52. 【請求項５２】 請求項６記載の核酸と、生理学的に適合性の賦形剤とを含
    む薬学的組成物。
  53. 【請求項５３】 請求項７記載の核酸と、生理学的に適合性の賦形剤とを含
    む薬学的組成物。
  54. 【請求項５４】 請求項３８記載の核酸と、生理学的に適合性の賦形剤とを
    含む薬学的組成物。
  55. 【請求項５５】 請求項３９記載の核酸と生理学的に適合性の賦形剤とを含
    む薬学的組成物。
  56. 【請求項５６】 請求項２６記載の組換えベクターと、生理学的に適合性の
    賦形剤とを含む薬学的組成物。
  57. 【請求項５７】 請求項２８記載の組換えベクターと、生理学的に適合性の
    賦形剤とを含む薬学的組成物。
  58. 【請求項５８】 請求項３０記載の組換えベクターと、生理学的に適合性の
    賦形剤とを含む薬学的組成物。
  59. 【請求項５９】 請求項４０記載の組換えベクターと、生理学的に適合性の
    賦形剤とを含む薬学的組成物。
  60. 【請求項６０】 請求項４１記載の組換えベクターと、生理学的に適合性の
    賦形剤とを含む薬学的組成物。
  61. 【請求項６１】 様々な形態の動脈硬化の予防、又はより具体的にコレステ
    ロール逆輸送の機能障害に罹患した対象の治療を目的とする医薬品の製造のため
    の、請求項１記載の核酸の使用。
  62. 【請求項６２】 様々な形態の動脈硬化の予防、又はより具体的にコレステ
    ロール逆輸送の機能障害に罹患した対象の治療を目的とする医薬品の製造のため
    の、請求項６記載の核酸の使用。
  63. 【請求項６３】 様々な形態の動脈硬化の予防、又はより具体的にコレステ
    ロール逆輸送の機能障害に罹患した対象の治療を目的とする医薬品の製造のため
    の、請求項７記載の核酸の使用。
  64. 【請求項６４】 様々な形態の動脈硬化の予防、又はより具体的にコレステ
    ロール逆輸送の機能障害に罹患した対象の治療を目的とする医薬品の製造のため
    の、請求項３８記載の核酸の使用。
  65. 【請求項６５】 様々な形態の動脈硬化の予防、又はより具体的にコレステ
    ロール逆輸送の機能障害に罹患した対象の治療を目的とする医薬品の製造のため
    の、請求項３９記載の核酸の使用。
  66. 【請求項６６】 様々な形態の動脈硬化の予防、又はより具体的にコレステ
    ロール逆輸送の機能障害に罹患した対象の治療を目的とする医薬品の製造のため
    の、請求項２６記載の組換えベクターの使用。
  67. 【請求項６７】 様々な形態の動脈硬化の予防、又はより具体的にコレステ
    ロール逆輸送の機能障害に罹患した対象の治療を目的とする医薬品の製造のため
    の、請求項２８記載の組換えベクターの使用。
  68. 【請求項６８】 様々な形態の動脈硬化の予防、又はより具体的にコレステ
    ロール逆輸送の機能障害に罹患した対象の治療のための医薬品の製造のための、
    請求項３０記載の組換えベクターの使用。
  69. 【請求項６９】 様々な形態の動脈硬化の予防、又はより具体的にコレステ
    ロール逆輸送の機能障害に罹患した対象の治療のための医薬品の製造のための、
    請求項４０記載の組換えベクターの使用。
  70. 【請求項７０】 様々な形態の動脈硬化の予防、又はより具体的にコレステ
    ロール逆輸送の機能障害に罹患した対象の治療のための医薬品の製造のための、
    請求項４１記載の組換えベクターの使用。
  71. 【請求項７１】 様々な形態の動脈硬化の予防、又はより具体的にコレステ
    ロール逆輸送の機能障害に罹患した対象の治療を目的とする医薬品の製造のため
    の、配列番号７１のアミノ酸配列又は配列番号７１のアミノ酸１〜６０を含む単
    離されたＡＢＣ１ポリペプチドの使用。
  72. 【請求項７２】 配列番号７１のアミノ酸配列を含むポリペプチドと、生理
    学的に適合性の賦形剤とを含む薬学的組成物。
  73. 【請求項７３】 配列番号７１のアミノ酸１〜６０を含むポリペプチドと、
    生理学的に適合性の賦形剤とを含む薬学的組成物。
  74. 【請求項７４】 配列番号７１及び８９〜１０２のうちのいずれか１つのア
    ミノ酸配列を含むポリペプチドと、生理学的に適合性の賦形剤とを含む薬学的組
    成物。
  75. 【請求項７５】 コレステロール逆輸送の機能障害に起因する疾患の予防又
    は治療のための活性成分をスクリーニングするための、配列番号７１及び８９〜
    １０２のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む単離されたＡＢＣ１ポリペプ
    チドの使用。
  76. 【請求項７６】 コレステロール逆輸送の機能障害に起因する疾患の予防又
    は治療のための活性成分をスクリーニングするための、配列番号７１及び８９〜
    １０２のアミノ酸配列を含むＡＢＣ１ポリペプチドを発現する組換え宿主細胞の
    使用。
  77. 【請求項７７】 コレステロール代謝に対する活性を有する化合物、ＡＢＣ
    １ポリペプチドのアゴニスト、又はアンタゴニストをスクリーニングする方法で
    あって、 ａ）ＡＢＣ１ポリペプチドと検出可能マーカーを含む脂質基質とを含む膜小胞
    を調製すること； ｂ）工程ａ）において得られた小胞を、アゴニスト又はアンタゴニスト候補化
    合物と共にインキュベートすること； ｃ）検出可能マーカーを含む脂質基質の放出を定性的かつ／又は定量的に測定
    すること；及び ｄ）工程ｂ）において測定された脂質基質の放出を、アゴニスト又はアンタゴ
    ニスト候補化合物と共に予めインキュベートされていない膜小胞による標識され
    た脂質基質の放出の測定値と比較すること、を含む方法。
  78. 【請求項７８】 コレステロール代謝に対する活性を有する化合物、ＡＢＣ
    １ポリペプチドのアゴニスト、又はアンタゴニストをスクリーニングする方法で
    あって、 ａ）ＡＢＣ１ポリペプチドを発現する細胞を、検出可能マーカーで標識された
    陰イオンと共にインキュベートすること； ｂ）工程ａ）の細胞を洗浄することにより、細胞へと侵入していない過剰の標
    識された陰イオンを除去すること； ｃ）工程ｂ）において得られた細胞を、ＡＢＣ１ポリペプチドに対するアゴニ
    スト又はアンタゴニスト候補化合物と共にインキュベートすること； ｄ）細胞からの標識された陰イオンの流出を測定すること；及び ｅ）工程ｄ）において決定された標識された陰イオンの流出を、アゴニスト又
    はアンタゴニスト候補化合物と共に予めインキュベートされていない細胞で測定
    された標識された陰イオンの流出と比較すること、を含む方法。
  79. 【請求項７９】 コレステロール代謝に対する活性を有する化合物、ＡＢＣ
    １ポリペプチドのアゴニスト又はアンタゴニストをスクリーニングする方法であ
    って、 ａ）適当な培養培地中のヒト単球系の細胞を、精製されたヒトアルブミンと共
    に培養すること； ｂ）工程ａ）の細胞を、同時に、ＩＬ−１ベータの産生を刺激する化合物及び
    アゴニスト又はアンタゴニスト候補化合物と共にインキュベートすること； ｃ）工程ｂ）において得られた細胞を、適当な濃度のＡＴＰと共にインキュベ
    ートすること； ｄ）工程ｃ）において得られた細胞により細胞培養上清へと放出されたＩＬ−
    １ベータを測定すること；及び ｅ）工程ｄ）において得られた放出されたＩＬ−１ベータを、アゴニスト又は
    アンタゴニスト候補化合物と共に予めインキュベートされていない細胞の培養上
    清へと放出されたＩＬ−１ベータと比較すること、を含む方法。
  80. 【請求項８０】 請求項３２記載の組換え宿主細胞を含む移植片。
  81. 【請求項８１】 請求項３４記載の組換え宿主細胞を含む移植片。
  82. 【請求項８２】 請求項３６記載の組換え宿主細胞を含む移植片。
  83. 【請求項８３】 ａ）配列番号１、１７、３６、３７、３８、４０、６９、
    及び７０、もしくはそれらの相補ヌクレオチド配列、ｂ）配列番号１のヌクレオ
    チド１〜３８７もしくはその相補ヌクレオチド配列、ｃ）配列番号１のヌクレオ
    チド１１４９８〜１１７５４もしくはその相補ヌクレオチド配列、ｄ）配列番号
    ６９のヌクレオチド１〜１１０もしくはその相補ヌクレオチド配列、ｅ）配列番
    号６９のヌクレオチド７９７１〜９７４１、ｆ）配列番号７０のヌクレオチド１
    〜２２３もしくはその相補ヌクレオチド配列、ｇ）配列番号７０のヌクレオチド
    ８０８４〜９８５４もしくはその相補ヌクレオチド配列、ｈ）配列番号４０のヌ
    クレオチド６９６〜９５１もしくはその相補ヌクレオチド配列、ｉ）配列番号３
    ６のヌクレオチド２９６〜２８９４もしくはその相補ヌクレオチド配列、及びｊ
    ）配列番号１７のヌクレオチド４９０〜５３５２もしくはその相補ヌクレオチド
    配列のうちのいずれか１つを含む単離された核酸。
  84. 【請求項８４】 ａ）配列番号１、１７、３６、３７、３８、４０、６９、
    及び７０、もしくはそれらの相補ヌクレオチド配列のうちのいずれか１つ、ｂ）
    配列番号１のヌクレオチド１〜３８７もしくはその相補ヌクレオチド配列、ｃ）
    配列番号１のヌクレオチド１１４９８〜１１７５４もしくはその相補ヌクレオチ
    ド配列、ｄ）配列番号６９のヌクレオチド１〜１１０もしくはその相補ヌクレオ
    チド配列、ｅ）配列番号６９のヌクレオチド７９７１〜９７４１、ｆ）配列番号
    ７０のヌクレオチド１〜２２３もしくはその相補ヌクレオチド配列、ｇ）配列番
    号７０のヌクレオチド８０８４〜９８５４もしくはその相補ヌクレオチド配列、
    ｈ）配列番号４０のヌクレオチド６９６〜９５１もしくはその相補ヌクレオチド
    配列、ｉ）配列番号３６のヌクレオチド２９６〜２８９４もしくはその相補ヌク
    レオチド配列、及びｊ）配列番号１７のヌクレオチド４９０〜５３５２もしくは
    その相補ヌクレオチド配列のヌクレオチド配列の少なくとも８個の連続ヌクレオ
    チドを含む単離された核酸。
  85. 【請求項８５】 ａ）配列番号１、１７、３６、３７、３８、４０、６９、
    及び７０、もしくはそれらの相補ヌクレオチド配列のうちのいずれか１つ、ｂ）
    配列番号１のヌクレオチド１〜３８７もしくはその相補ヌクレオチド配列、ｃ）
    配列番号１のヌクレオチド１１４９８〜１１７５４もしくはその相補ヌクレオチ
    ド配列、ｄ）配列番号６９のヌクレオチド１〜１１０もしくはその相補ヌクレオ
    チド配列、ｅ）配列番号６９のヌクレオチド７９７１〜９７４１、ｆ）配列番号
    ７０のヌクレオチド１〜２２３もしくはその相補ヌクレオチド配列、ｇ）配列番
    号７０のヌクレオチド８０８４〜９８５４もしくはその相補ヌクレオチド配列、
    ｈ）配列番号４０のヌクレオチド６９６〜９５１もしくはその相補ヌクレオチド
    配列、ｉ）配列番号３６のヌクレオチド２９６〜２８９４もしくはその相補ヌク
    レオチド配列、及びｊ）配列番号１７のヌクレオチド４９０〜５３５２もしくは
    その相補ヌクレオチド配列を含む核酸との少なくとも８０％のヌクレオチド同一
    性を含む単離された核酸。
  86. 【請求項８６】 ａ）配列番号１、１７、３６、３７、３８、４０、６９、
    及び７０、もしくはそれらの相補ヌクレオチド配列のうちのいずれか１つ、ｂ）
    配列番号１のヌクレオチド１〜３８７もしくはその相補ヌクレオチド配列、ｃ）
    配列番号１のヌクレオチド１１４９８〜１１７５４もしくはその相補ヌクレオチ
    ド配列、ｄ）配列番号６９のヌクレオチド１〜１１０もしくはその相補ヌクレオ
    チド配列、ｅ）配列番号６９のヌクレオチド７９７１〜９７４１、ｆ）配列番号
    ７０のヌクレオチド１〜２２３もしくはその相補ヌクレオチド配列、ｇ）配列番
    号７０のヌクレオチド８０８４〜９８５４もしくはその相補ヌクレオチド配列、
    ｈ）配列番号４０のヌクレオチド６９６〜９５１もしくはその相補ヌクレオチド
    配列、ｉ）配列番号３６のヌクレオチド２９６〜２８９４もしくはその相補ヌク
    レオチド配列、及びｊ）配列番号１７のヌクレオチド４９０〜５３５２もしくは
    その相補ヌクレオチド配列を含む核酸との８５％、９０％、９５％、又は９８％
    のヌクレオチド同一性を含む、請求項８５記載の単離された核酸。
  87. 【請求項８７】 ａ）配列番号１、１７、３６、３７、３８、４０、６９、
    及び７０、もしくはそれらの相補ヌクレオチド配列のうちのいずれか１つ、ｂ）
    配列番号１のヌクレオチド１〜３８７もしくはその相補ヌクレオチド配列、ｃ）
    配列番号１のヌクレオチド１１４９８〜１１７５４もしくはその相補ヌクレオチ
    ド配列、ｄ）配列番号６９のヌクレオチド１〜１１０もしくはその相補ヌクレオ
    チド配列、ｅ）配列番号６９のヌクレオチド７９７１〜９７４１、ｆ）配列番号
    ７０のヌクレオチド１〜２２３もしくはその相補ヌクレオチド配列、ｇ）配列番
    号７０のヌクレオチド８０８４〜９８５４もしくはその相補ヌクレオチド配列、
    ｈ）配列番号４０のヌクレオチド６９６〜９５１もしくはその相補ヌクレオチド
    配列、ｉ）配列番号３６のヌクレオチド２９６〜２８９４もしくはその相補ヌク
    レオチド配列、及びｊ）配列番号１７のヌクレオチド４９０〜５３５２もしくは
    その相補ヌクレオチド配列を含む核酸と、高ストリンジェンシー条件下でハイブ
    リダイズする単離された核酸。
  88. 【請求項８８】 ａ）配列番号１、１７、３６、３７、３８、４０、６９
    、及び７０、もしくはそれらの相補ヌクレオチド配列のうちのいずれか１つ、ｂ
    ）配列番号１のヌクレオチド１〜３８７もしくはその相補ヌクレオチド配列、ｃ
    ）配列番号１のヌクレオチド１１４９８〜１１７５４もしくはその相補ヌクレオ
    チド配列、ｄ）配列番号６９のヌクレオチド１〜１１０もしくはその相補ヌクレ
    オチド配列、ｅ）配列番号６９のヌクレオチド７９７１〜９７４１、ｆ）配列番
    号７０のヌクレオチド１〜２２３もしくはその相補ヌクレオチド配列、ｇ）配列
    番号７０のヌクレオチド８０８４〜９８５４もしくはその相補ヌクレオチド配列
    、ｈ）配列番号４０のヌクレオチド６９６〜９５１もしくはその相補ヌクレオチ
    ド配列、ｉ）配列番号３６のヌクレオチド２９６〜２８９４もしくはその相補ヌ
    クレオチド配列、及びｊ）配列番号１７のヌクレオチド４９０〜５３５２もしく
    はその相補ヌクレオチド配列に示されるようなヌクレオチド配列を含む単離され
    た核酸。
  89. 【請求項８９】 ａ）配列番号１、１７、３６、３７、３８、４０、６９、
    及び７０、もしくはそれらの相補ヌクレオチド配列のうちのいずれか１つ、ｂ）
    配列番号１のヌクレオチド１〜３８７もしくはその相補ヌクレオチド配列、ｃ）
    配列番号１のヌクレオチド１１４９８〜１１７５４もしくはその相補ヌクレオチ
    ド配列、ｄ）配列番号６９のヌクレオチド１〜１１０もしくはその相補ヌクレオ
    チド配列、ｅ）配列番号６９のヌクレオチド７９７１〜９７４１、ｆ）配列番号
    ７０のヌクレオチド１〜２２３もしくはその相補ヌクレオチド配列、ｇ）配列番
    号７０のヌクレオチド８０８４〜９８５４もしくはその相補ヌクレオチド配列、
    ｈ）配列番号４０のヌクレオチド６９６〜９５１もしくはその相補ヌクレオチド
    配列、ｉ）配列番号３６のヌクレオチド２９６〜２８９４もしくはその相補ヌク
    レオチド配列、及びｊ）配列番号１７のヌクレオチド４９０〜５３５２もしくは
    その相補ヌクレオチド配列のヌクレオチド配列の少なくとも１５個の連続ヌクレ
    オチドを含む、ＡＢＣ１遺伝子に特異的なヌクレオチドプローブ又はプライマー
    。
  90. 【請求項９０】 マーカー化合物を含む、請求項８９記載のヌクレオチドプ
    ローブ又はプライマー。
  91. 【請求項９１】 請求項８３記載の核酸の領域を増幅する方法であって、 ａ）増幅反応に必要な試薬の存在下で、核酸の領域の５’の位置に第１ヌクレ
    オチドプライマーがハイブリダイズし、かつ核酸の領域の３’の位置に第２ヌク
    レオチドプライマーがハイブリダイズするよう、核酸を２つのヌクレオチドプラ
    イマーと接触させること、及び ｂ）増幅された核酸領域を検出すること、を含む方法。
  92. 【請求項９２】 ２つのヌクレオチドプライマーが、 ａ）配列番号１、１７、３６、３７、３８、４０、６９、及び７０、もしくは
    それらの相補ヌクレオチド配列のうちのいずれか１つ、ｂ）配列番号１のヌクレ
    オチド１〜３８７もしくはその相補ヌクレオチド配列、ｃ）配列番号１のヌクレ
    オチド１１４９８〜１１７５４もしくはその相補ヌクレオチド配列、ｄ）配列番
    号６９のヌクレオチド１〜１１０もしくはその相補ヌクレオチド配列、ｅ）配列
    番号６９のヌクレオチド７９７１〜９７４１、ｆ）配列番号７０のヌクレオチド
    １〜２２３もしくはその相補ヌクレオチド配列、ｇ）配列番号７０のヌクレオチ
    ド８０８４〜９８５４もしくはその相補ヌクレオチド配列、ｈ）配列番号４０の
    ヌクレオチド６９６〜９５１もしくはその相補ヌクレオチド配列、ｉ）配列番号
    ３６のヌクレオチド２９６〜２８９４もしくはその相補ヌクレオチド配列、及び
    ｊ）配列番号１７のヌクレオチド４９０〜５３５２もしくはその相補ヌクレオチ
    ド配列のヌクレオチド配列の少なくとも１５個の連続ヌクレオチドを含むヌクレ
    オチドプライマーからなる群より選択される、請求項９１記載の核酸の領域を増
    幅する方法。
  93. 【請求項９３】 請求項８３記載の核酸を増幅するためのキットであって、 ａ）ハイブリダイゼーション位置が核酸の領域のそれぞれ５’及び３’である
    ２つのヌクレオチドプライマーを含み、かつ ｂ）増幅反応に必要な試薬を場合により含む、キット。
  94. 【請求項９４】 ２つのヌクレオチドプライマーが、 ａ）配列番号１、１７、３６、３７、３８、４０、６９、及び７０、もしくは
    それらの相補ヌクレオチド配列のうちのいずれか１つ、ｂ）配列番号１のヌクレ
    オチド１〜３８７もしくはその相補ヌクレオチド配列、ｃ）配列番号１のヌクレ
    オチド１１４９８〜１１７５４もしくはその相補ヌクレオチド配列、ｄ）配列番
    号６９のヌクレオチド１〜１１０もしくはその相補ヌクレオチド配列、ｅ）配列
    番号６９のヌクレオチド７９７１〜９７４１、ｆ）配列番号７０のヌクレオチド
    １〜２２３もしくはその相補ヌクレオチド配列、ｇ）配列番号７０のヌクレオチ
    ド８０８４〜９８５４もしくはその相補ヌクレオチド配列、ｈ）配列番号４０の
    ヌクレオチド６９６〜９５１もしくはその相補ヌクレオチド配列、ｉ）配列番号
    ３６のヌクレオチド２９６〜２８９４もしくはその相補ヌクレオチド配列、及び
    ｊ）配列番号１７のヌクレオチド４９０〜５３５２もしくはその相補ヌクレオチ
    ド配列のヌクレオチド配列の少なくとも１５個の連続ヌクレオチドを含むヌクレ
    オチドプライマーからなる群より選択される、請求項９３記載のキット。
  95. 【請求項９５】 請求項８３記載の核酸を検出する方法であって、 Ａ）ａ）配列番号１、１７、３６、３７、３８、４０、６９、及び７０、もし
    くはそれらの相補ヌクレオチド配列のうちのいずれか１つ、ｂ）配列番号１のヌ
    クレオチド１〜３８７もしくはその相補ヌクレオチド配列、ｃ）配列番号１のヌ
    クレオチド１１４９８〜１１７５４もしくはその相補ヌクレオチド配列、ｄ）配
    列番号６９のヌクレオチド１〜１１０もしくはその相補ヌクレオチド配列、ｅ）
    配列番号６９のヌクレオチド７９７１〜９７４１、ｆ）配列番号７０のヌクレオ
    チド１〜２２３もしくはその相補ヌクレオチド配列、ｇ）配列番号７０のヌクレ
    オチド８０８４〜９８５４もしくはその相補ヌクレオチド配列、ｈ）配列番号４
    ０のヌクレオチド６９６〜９５１もしくはその相補ヌクレオチド配列、ｉ）配列
    番号３６のヌクレオチド２９６〜２８９４もしくはその相補ヌクレオチド配列、
    及びｊ）配列番号１７のヌクレオチド４９０〜５３５２もしくはその相補ヌクレ
    オチド配列のヌクレオチド配列の少なくとも１５個の連続ヌクレオチドを含むヌ
    クレオチドプローブからなる群より選択されるヌクレオチドプローブと核酸を接
    触させること、並びに Ｂ）核酸とプローブとで形成された複合体を検出すること、を含む方法。
  96. 【請求項９６】 プローブが支持体上に固定化されている、請求項９５記載
    の検出法。
  97. 【請求項９７】 請求項８３記載の核酸を検出するためのキットであって、 Ａ）ａ）配列番号１、１７、３６、３７、３８、４０、６９、及び７０、もし
    くはそれらの相補ヌクレオチド配列のうちのいずれか１つ、ｂ）配列番号１のヌ
    クレオチド１〜３８７もしくはその相補ヌクレオチド配列、ｃ）配列番号１のヌ
    クレオチド１１４９８〜１１７５４もしくはその相補ヌクレオチド配列、ｄ）配
    列番号６９のヌクレオチド１〜１１０もしくはその相補ヌクレオチド配列、ｅ）
    配列番号６９のヌクレオチド７９７１〜９７４１、ｆ）配列番号７０のヌクレオ
    チド１〜２２３もしくはその相補ヌクレオチド配列、ｇ）配列番号７０のヌクレ
    オチド８０８４〜９８５４もしくはその相補ヌクレオチド配列、ｈ）配列番号４
    ０のヌクレオチド６９６〜９５１もしくはその相補ヌクレオチド配列、ｉ）配列
    番号３６のヌクレオチド２９６〜２８９４もしくはその相補ヌクレオチド配列、
    及びｊ）配列番号１７のヌクレオチド４９０〜５３５２もしくはその相補ヌクレ
    オチド配列のヌクレオチド配列の少なくとも１５個の連続ヌクレオチドを含むヌ
    クレオチドプローブからなる群より選択されるヌクレオチドプローブを含み、か
    つ Ｂ）ハイブリダイゼーション反応に必要な試薬を場合により含む、キット。
  98. 【請求項９８】 プローブが支持体上に固定化されている、請求項９７記載
    のキット。
  99. 【請求項９９】 請求項８３及び８８のうちのいずれか１つに記載の核酸を
    含む組換えベクター。
  100. 【請求項１００】 アデノウイルスである、請求項９９記載のベクター。
  101. 【請求項１０１】 請求項８３及び８８のうちのいずれか１つに記載の核酸
    を含む組換え宿主細胞。
  102. 【請求項１０２】 請求項９９記載の組換えベクターを含む組換え宿主細胞
    。
  103. 【請求項１０３】 配列番号７１のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコー
    ドする配列番号６９又は７０より選択される配列の単離された核酸。
  104. 【請求項１０４】 請求項１０３記載の核酸を含む組換えベクター。
  105. 【請求項１０５】 請求項１０３記載の核酸を含む組換え宿主細胞。
  106. 【請求項１０６】 請求項１０４記載の組換えベクターを含む組換え宿主細
    胞。
  107. 【請求項１０７】 請求項８３、８８、及び１０３のうちのいずれか１つに
    記載の核酸と、生理学的に適合性の賦形剤とを含む薬学的組成物。
  108. 【請求項１０８】 請求項１０４記載の組換えベクターと、生理学的に適合
    性の賦形剤とを含む薬学的組成物。
  109. 【請求項１０９】 様々な形態の動脈硬化の予防、又はより具体的にコレス
    テロール逆輸送の機能障害に罹患した対象の治療を目的とする医薬品の製造のた
    めの、請求項８３、８８、及び１０３のうちのいずれか１つに記載の核酸の使用
    。
  110. 【請求項１１０】 様々な形態の動脈硬化の予防、又はより具体的にコレス
    テロール逆輸送の機能障害に罹患した対象の治療のための医薬品の製造のための
    、請求項１０４記載の組換えベクターの使用。
  111. 【請求項１１１】 請求項１０６記載の組換え宿主細胞を含む移植片。
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