JP2003516305A - インターロイキン−２レセプターに標的化された結合体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 化学薬剤をインターロイキン−２−レセプター保有細胞（例えば、活性化Ｔ細胞）へ細胞内送達するための組成物は、化学薬剤、ならびに水溶性ポリマーにカップリングしたインターロイキン−２−レセプター結合およびエンドサイトーシス誘導リガンドの少なくとも２コピーを含む。リガンドは、インターロイキン−２−レセプター保有細胞上のレセプターに結合し、そして組成物のエンドサイトーシスを誘起する。組成物はまた、必要に応じて、化学薬剤およびリガンドをポリマーにカップリングするためのスペーサーを含む。化学薬剤としては、サイトトキシン、トランスフォーミング核酸、遺伝子調節因子、標識、抗原、薬物などが挙げられ得る。好ましい水溶性ポリマーは、ポリエチレングリコールおよびポリエチレンオキシドのようなポリアルキレンオキシド、ならびにその活性化誘導体である。組成物は、もう１つの水溶性ポリマー、リポソーム、または微粒子のようなキャリアをさらに含み得る。インビボまたはインビトロで化学薬剤を送達するためのこれらの組成物を使用する方法もまた開示される。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】 （発明の背景） 本発明は、化学薬剤の細胞への送達に関する。より詳細には、本発明は、特定
の細胞タイプ、すなわち、インターロイキン−２（ＩＬ−２）レセプターを有す
る細胞へ化学薬剤を細胞内送達するための組成物および方法に関する。

【０００２】 腫瘍細胞上の細胞表面レセプターまたは抗原を標的化するトキシンは、ガンの
処置のためにかなりの注意を引いていた。例えば、Ｉ．ＰａｓｔａｎおよびＤ．
ＦｉｔｚＧｅｒａｌｄ，Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ Ｔｏｘｉｎｓ ｆｏｒ Ｃａ
ｎｃｅｒ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ，２５４ Ｓｃｉｅｎｃｅ １１７３（１９９１
）；Ａｎｄｅｒｓｏｎら，米国特許第５，１６９，９３３号および第５，１３５
，７３６号；Ｔｈｏｒｐｅら，米国特許第５，１６５，９２３号；Ｊａｎｓｅｎ
ら，米国特許第４，９０６，４６９号；Ｆｒａｎｋｅｌ，米国特許第４，９６２
，１８８号；Ｕｈｒら，米国特許第４，７９２，４４７号；Ｍａｓｕｈｏら，米
国特許第４，４５０，１５４号および第４，３５０，６２６号。これらの薬剤に
は、植物または細菌トキシンに連結した、増殖因子または抗原結合タンパク質の
ような細胞標的化部分が含まれる。これらは、従来の化学療法とは異なるメカニ
ズムによって細胞を殺傷し、したがって、従来の化学療法剤に対する交差耐性を
潜在的に減少または排除する。

【０００３】 １９９４年９月１３日に出願した同時係属中の米国特許出願第０８／３０５，
７７０号は、ＣＲ２−レセプター保有細胞、例えば、Ｂリンパ球へ化学薬剤を特
異的に細胞内送達するための組成物および方法を記載する。組成物は、化学薬剤
にカップリングしたＣＲ２−レセプター結合リガンドおよびエンドサイトーシス
誘導リガンド（ＣＢＥＬ）を含む。ＣＢＥＬは、組成物がリソソームに輸送され
るように、Ｂリンパ球の表面上のＣＲ２レセプターに結合し、そして組成物のエ
ンドサイトーシスを誘起する。必要に応じて、組成物は、ＣＢＥＬを化学薬剤に
カップリングするための、生分解性（リソソームにおいて）または非生分解性の
いずれかであり得るスペーサーを含み得る。化学薬剤としては、サイトトキシン
、トランスフォーミング核酸、遺伝子調節因子、標識、抗原、薬物などが挙げら
れ得る。組成物は、他の水溶性ポリマー、リポソーム、または微粒子のようなキ
ャリアをさらに含み得る。

【０００４】 １９９６年３月１５日に出願された同時係属中の米国特許出願第０８／６１６
，６９３号および１９９７年５月１５日に出願された同第０８／８５７，００９
号は、化学薬剤をＴリンパ球へ特異的に細胞内送達するための組成物および方法
を記載する。組成物は、式［Ｌ−Ｓ］_a−Ｃ−［Ｓ−Ａ］_bによって表され、ここ
で、Ｌは、Ｔリンパ球上のレセプターに結合し、そして組成物のレセプターによ
って媒介されるエンドサイトーシスを刺激するために配置されたリガンドであり
、Ａは、化学薬剤であり、Ｓは、スペーサー部分であり、Ｃは、リガンド、化学
薬剤、およびスペーサーとの共有結合を形成することに適合可能な官能基を有す
る水溶性ポリマーであり、そしてａおよびｂは、正の整数である。これらの組成
物はまた、リソソームに輸送されるように設計される。好ましい水溶性ポリマー
としては、ポリ（エチレングリコール）、およびＮ−（２−ヒドロキシプロピル
）メタクリルアミド（ＨＰＭＡ）のコポリマーが挙げられる。好ましい化学薬剤
としては、サイトトキシン、トランスフォーミング核酸、遺伝子調節因子、標識
、抗原、薬物などが挙げられる。組成物は、他の水溶性ポリマー、リポソーム、
または微粒子のようなキャリアをさらに含み得る。

【０００５】 Ｔリンパ球上の他のレセプターに特異的に標的化される、さらなる組成物を開
発することもまた有利である。例えば、Ｔリンパ球の標的化は、Ｔ細胞関連疾患
および組織移植片拒絶についての治療適用を可能にする。このようなＴ細胞関連
疾患としては、関節炎、Ｔ細胞リンパ腫、皮膚ガン、乾癬、およびＨＩＶ感染か
ら生じる疾患が挙げられる。

【０００６】 上記の観点から、化学薬剤をＴ細胞へ細胞内送達するための組成物およびその
使用方法が、当該技術分野において顕著な前進であることが認められる。

【０００７】 （発明の目的および要旨） 本発明の目的は、選択された化学薬剤を、特定の細胞タイプ、すなわち、ＩＬ
−２−レセプター保有細胞へ細胞内送達するための組成物を提供することである
。

【０００８】 本発明の目的はまた、選択された化学薬剤をＩＬ−２−レセプター保有細胞へ
細胞内送達するための組成物を製造する方法およびそれを使用する方法を提供す
ることである。

【０００９】 本発明のもう１つの目的は、高価でなく、ＦＤＡ認可され、そして抗体応答の
発生に抵抗性である水溶性ポリマーを使用して、選択された化学薬剤をＩＬ−２
−レセプター保有細胞へ送達するための組成物および方法を提供することである
。

【００１０】 本発明のさらにもう１つの目的は、選択された化学薬剤を活性化Ｔ細胞へ細胞
内送達するための組成物およびその使用方法を提供することである。

【００１１】 これらおよび他の目的は、化学薬剤をＩＬ−２−レセプター保有細胞へ細胞内
送達するための組成物を提供することによって達成され、この組成物は、（ａ）
水溶性生体適合性ポリマー、（ｂ）このポリマーに共有的に解離可能に結合した
化学薬剤、および（ｃ）このポリマーに共有結合したＩＬ−２−レセプター結合
ペプチドを含むリガンドの少なくとも２コピーを含む。

【００１２】 本発明の好ましい実施態様では、組成物は、Ｐ−［Ｔ_a−Ｌ−Ｓ_b−Ａ］_cおよ
び［Ａ−Ｓ_b］_d−Ｐ−［Ｔ_a−Ｌ］_cからなる群より選択される式を有し、ここで
、Ｌは、リガンドであり；Ａは、化学薬剤であり；ＳおよびＴは、スペーサーで
あり、ここで、少なくともＳは、生分解性であり；Ｐは、リガンドとの共有結合
を形成することに適合可能な官能基を有する水溶性ポリマーであり；ａおよびｂ
は、０または１の整数であり；ｃは、少なくとも２の整数であり；そして、ｄは
、少なくとも１の整数である。

【００１３】 好ましくは、Ｐは、ポリアルキレンオキシドである。好ましいポリアルキレン
オキシドは、α置換ポリアルキレンオキシド誘導体、ポリエチレングリココール
（ＰＥＧ）ホモポリマー、ポリプロピレングリコールホモポリマー、アルキルキ
ャップしたポリエチレンオキシド、ビス−ポリエチレンオキシド、ポリ（アルキ
レンオキシド）のコポリマー、およびポリ（アルキレンオキシド）またはその活
性化誘導体のブロックコポリマーからなる群より選択される。好ましくは、ポリ
アルキレンオキシドは、約２００〜約５０，０００の分子量を有する。より好ま
しくは、ポリアルキレンオキシドは、約２，０００〜約２０，０００の分子量を
有する。最も好ましくは、ポリアルキレンオキシドは、約５，０００の分子量を
有する。特に好ましいポリアルキレンオキシドは、ポリエチレングリコールおよ
びポリエチレンオキシドである。

【００１４】 ＩＬ−２−レセプター結合ペプチドは、好ましくは、配列番号１およびその生
物学的機能等価物からなる群より選択されるメンバーである。より好ましくは、
ＩＬ−２−レセプター結合ペプチドは、配列番号１〜配列番号１１からなる群よ
り選択されるメンバーである。

【００１５】 化学薬剤は、好ましくは、サイトトキシン、トランスフォーミング核酸、遺伝
子調節因子、標識、抗原、および薬物からなる群より選択される。

【００１６】 好ましくは、スペーサーは、ペプチドを含む。好ましいペプチドスペーサーは
、Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ（配列番号２１）を含む。

【００１７】 １つの好ましい実施態様では、組成物は、他の水溶性ポリマー、リポソーム、
および微粒子からなる群より選択されるキャリアをさらに含む。好ましくは、こ
のような水溶性ポリマーは、デキストラン、イヌリン、改変εアミノ基を有する
ポリ（Ｌ−リジン）、ポリ（Ｌ−グルタミン酸）、およびＮ−置換メタクリルア
ミド含有ポリマーからなる群より選択される。

【００１８】 細胞の異種集団において化学薬剤をインビトロでＩＬ−２−レセプター保有細
胞に送達する方法は、 （ａ）（ｉ）水溶性生体適合性ポリマー、（ｉｉ）このポリマーに共有的に解
離可能に結合した化学薬剤、および（ｉｉｉ）このポリマーに共有結合したＩＬ
−２−レセプター結合ペプチドを含むリガンドの少なくとも２コピー、を含む組
成物を提供する工程；および （ｂ）リガンドがＩＬ−２−レセプター保有細胞上のＩＬ−２レセプターに結
合しそしてこの組成物のエンドサイトーシスを誘起する条件下で、細胞の集団を
組成物の有効量と接触させる工程、を包含する。

【００１９】 温血動物において化学薬剤をＩＬ−２−レセプター保有細胞に細胞内送達する
方法は、 （ａ）（ｉ）水溶性生体適合性ポリマー、（ｉｉ）このポリマーに共有的に解
離可能に結合した化学薬剤、および（ｉｉｉ）このポリマーに共有結合したＩＬ
−２−レセプター結合ペプチドを含むリガンドの少なくとも２コピー、を含む組
成物を提供する工程；および （ｂ）リガンドがＩＬ−２−レセプター保有細胞上のＩＬ−２レセプターに接
触および結合し、そしてこの組成物のエンドサイトーシスを誘起する条件下で、
組成物の有効量を温血動物に全身投与する工程、を包含する。

【００２０】 （発明の詳細な説明） ＩＬ−２−レセプター保有細胞への標的化された送達のための本発明の組成物
および方法を開示および記載する前に、本発明が、特定の実施態様、プロセス工
程、およびこのような実施態様、プロセス工程のような本明細書に開示された物
質に限定されず、そして物質が幾分変化し得ることが、理解されるべきである。
本明細書で使用される用語が、特定の実施態様のみを記載するために使用され、
そして本発明の範囲は、限定することを意図しないことも理解されるべきである
。なぜなら、本発明の範囲は、添付の請求の範囲およびその等価物によってのみ
限定されるからである。

【００２１】 本明細書および添付の請求の範囲で使用される、単数形「ａ」、「ａｎ」、お
よび「ｔｈｅ」は、文脈が明らかに他を示さない限り、複数の対象を含むことに
注意しなければならない。したがって、例えば、「リガンド（ａ ｌｉｇａｎｄ
）」を含む組成物への言及は、２つ以上のリガンドへの言及を含み、「化学薬剤
（ａ ｃｈｅｍｉｃａｌ ａｇｅｎｔ）」への言及は、同じまたは異なる化学薬
剤であり得る１つ以上のこのような化学薬剤への言及を含み、そして「スペーサ
ー（ａ ｓｐａｃｅｒ）」への言及は、２つ以上のスペーサーへの言及を含む。

【００２２】 本発明の説明および請求の範囲において、以下の用語は、以下の記載の定義に
従って使用される。

【００２３】 本明細書で使用される「ペプチド」とは、任意の長さのペプチドを意味し、そ
してタンパク質を含む。用語「ポリペプチド」および「オリゴペプチド」は、特
定のサイズが他に述べられなければ、任意の特定の意図されたサイズ限定なく、
本明細書で使用される。

【００２４】 本明細書で使用される「ＩＬ−２−レセプター結合ペプチド」とは、ＩＬ−２
レセプターに結合し、そしてレセプターによって媒介されるエンドサイトーシス
によって、そのインターナリゼーションを刺激するために配置されたペプチドを
意味する。本発明によれば、このようなＩＬ−２−レセプター結合ペプチドを含
むリガンドは、リガンドのエンドサイトーシスの際に、そこにカップリングした
種々の機能的分子も細胞によってインターナリゼーションされるように、種々の
機能的分子にカップリングされる。

【００２５】 好ましいＩＬ−２−レセプター結合ペプチドには、配列番号１として同定され
たアミノ酸配列を有するペプチドおよびその生物学的機能等価物が含まれる。こ
のような機能等価物は、ＩＬ−２レセプターを結合し、そしてレセプターによっ
て媒介されるエンドサイトーシスを誘起することにおいて機能性を保持するが、
これらは、配列番号１の短縮型、欠失改変体、または置換改変体であり得るか、
あるいはそれに付加されたさらなるアミノ酸残基を含み得る。また、好ましくは
、ＩＬ−２−レセプター結合ペプチドは、約６〜２０アミノ酸残基、より好まし
くは約６〜１２アミノ酸残基、および最も好ましくは約６〜８アミノ酸残基のサ
イズを有する。

【００２６】 上記のように、所望のレセプター結合特徴を維持すると同時にＩＬ−２−レセ
プター結合ペプチドの構造において、変化が行われ得る。例えば、あるアミノ酸
残基は、例えば、抗体の抗原結合領域またはＩＬ−２レセプター結合ペプチドの
ようなリガンドの結合部位のような構造と相互作用する結合能力が明らかに消失
することなく、タンパク質構造中の他のアミノ酸残基に置換され得る。これは、
タンパク質の生物学的機能的活性を規定するそのタンパク質の相互作用能力およ
び性質であるので、あるアミノ酸配列置換は、タンパク質配列において行われ得
、そしてそれにもかかわらず類似の特性を有するタンパク質を得る。したがって
、生物学的有用性または活性が明らかに消失することなく、ＩＬ−２レセプター
結合ペプチドの配列において、種々の変化が行われ得る。

【００２７】 分子の所定の部分内で行われ得、そして等価な生物学的活性の受容可能なレベ
ルを有する分子をさらに生じる変化の数への限定があるという概念は、生物学的
に機能的等価のタンパク質またはペプチドの定義において固有であることも、当
業者に十分に理解される。ある残基がタンパク質またはペプチドの生物学的また
は構造的特性、例えば、活性部位における残基に特に重要であることが示される
場合、このような残基は、一般的に交換されなくてもよいことも、十分理解され
る。

【００２８】 アミノ酸置換は、一般的に、例えば、その疎水性、親水性、電荷、サイズなど
に対するアミノ酸側鎖の相対的類似性に基づく。アミノ酸側鎖のサイズ、形状、
およびタイプの分析は、例えば、アルギニン、リジン、およびヒスチジンがすべ
て正荷電残基であり；アラニン、グリシン、およびセリンがすべて類似のサイズ
であり；そしてフェニルアラニン、トリプトファン、およびチロシンがすべて一
般的に類似の形状を有することを表す。したがって、これらの考慮に基づいて、
以下の保存的置換基または生物学的に機能的な等価物は、（ａ）Ｃｙｓ；（ｂ）
Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ；（ｃ）Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ａｓｎ、Ａｓｐ；（ｄ）Ｈｉ
ｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；（ｅ）Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ；および
（ｆ）Ｍｅｔ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｖａｌを規定している。Ｍ．Ｄａｙｈｏｆｆら
，Ａｔｌａｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎｄ Ｓｔｒｕｃ
ｔｕｒｅ（Ｎａｔ’ｌ Ｂｉｏｍｅｄ．Ｒｅｓ．Ｆｏｕｎｄ．，Ｗａｓｈｉｎｇ
ｔｏｎ，Ｄ．Ｃ．，１９７８）、参考として本明細書に援用される。

【００２９】 より量的な変化をもたらすために、アミノ酸のハイドロパシーインデックスを
考慮し得る。各アミノ酸は、その疎水性および電荷特性に基づいてハイドロパシ
ーインデックスを割り当てられており、これらは以下のとおりである：イソロイ
シン（＋４．５）；バリン（＋４．２）；ロイシン（＋３．８）；フェニルアラ
ニン（＋２．８）；システイン（＋２．５）；メチオニン（＋１．９）；アラニ
ン（＋１．８）；グリシン（−０．４）；トレオニン（−０．７）；セリン（−
０．８）；トリプトファン（−０．９）；チロシン（−１．３）；プロリン（−
１．６）；ヒスチジン（−３．２）；グルタミン酸（−３．５）；グルタミン（
−３．５）；アスパラギン酸（−３．５）；アスパラギン（−３．５）；リジン
（−３．９）；およびアルギニン（−４．５）。

【００３０】 タンパク質上の相互作用性の生物学的機能を与えることにおけるハイドロパシ
ーアミノ酸インデックスの重要性は、一般的に、当該技術分野で理解される。Ｊ
．ＫｙｔｅおよびＲ．Ｄｏｏｌｉｔｔｌｅ，Ａ ｓｉｍｐｌｅ ｍｅｔｈｏｄ
ｆｏｒ ｄｉｓｐｌａｙｉｎｇ ｔｈｅ ｈｙｄｒｏｐａｔｈｉｃ ｃｈａｒａ
ｃｔｅｒ ｏｆ ａ ｐｒｏｔｅｉｎ，１５７ Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１０５
−１３２（１９８２）、参考として本明細書に援用される。あるアミノ酸が、類
似のハイドロパシーインデックスまたはスコアを有する他のアミノ酸に置換され
得、そしてなお同様の生物学的活性を保持し得ることは、公知である。ハイドロ
パシーインデックスに基づいて変化を作製することにおいて、ハイドロパシーイ
ンデックスが±２以内であるアミノ酸の置換が好ましく、±１以内が特に好まし
く、そして±０．５以内がなおより特に好ましい。

【００３１】 アミノ酸が、同様のハイドロパシー値を有するもう１つのものに置換され得、
そしてなお生物学的に等価なタンパク質を得ることも、理解される。米国特許第
４，５５４，１０１号に詳述されるように、以下のハイドロパシー値が、アミノ
酸残基に割り当てられている：アルギニン（＋３．０）；リジン（＋３．０）；
アスパラギン酸（＋３．０）；グルタミン酸（＋３．０±１）；セリン（＋０．
３）；アスパラギン（＋０．２）；グルタミン（＋０．２）；グリシン（０）；
トレオニン（−０．４）；プロリン（−０．５±１）；アラニン（−０．５）；
ヒスチジン（−０．５）；システイン（−１．０）；メチオニン（−１．３）；
バリン（−１．５）；ロイシン（−１．８）；イソロイシン（−１．８）；チロ
シン（−２．３）；フェニルアラニン（−２．５）；トリプトファン（−３．４
）。

【００３２】 類似のハイドロパシー値に基づいて変化を作製することにおいて、ハイドロパ
シー値が±２以内であるアミノ酸の置換が好ましく、±１以内が特に好ましく、
そして±０．５以内がなおより特に好ましい。

【００３３】 ＩＬ−２レセプターに結合するＩＬ−２の一部であると考えられるヘキサペプ
チドが同定されている（配列番号１）、Ｄ．Ａ．Ｗｅｉｇｅｎｔら，１３９ Ｂ
ｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．３６７−７４（１９８
６）。さらに、このＩＬ−２ヘキサペプチドと免疫抑制性レトロウイルスのｅｎ
ｖタンパク質との間の相同性の領域が発見されている。Ｄ．Ａ．Ｗｅｉｇｅｎｔ
ら，前出；Ｗ．Ｅ．Ｒｅｉｈｅｒ ＩＩＩら，８３ Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａ
ｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９１８８−９２（１９８６）。したがって、ＩＬ−２
ヘキサペプチドと比較した相同性のこれらの領域におけるアミノ酸置換はまた、
生物学的機能等価物であると考えられる。したがって、配列番号１の例示的な生
物学的機能等価物には、以下が挙げられる：配列番号２；配列番号３；配列番号
４；配列番号５；および配列番号６。他の例示的な生物学的機能等価物もまた発
見されており、以下が挙げられる：配列番号７；配列番号８；配列番号９；配列
番号１０；および配列番号１１。さらなる生物学的機能等価物は、過度の実験を
行うことなく、本明細書に開示されたガイダンスおよび原理に従って当業者に発
見され得る。

【００３４】 本明細書で使用される「巨大分子」とは、リガンドおよびそれに結合した化学
薬剤を有する水溶性ポリマーを含む組成物を意味する。好ましくは、このポリマ
ーは、ポリアルキレンオキシドであり、そしてリガンドは、オリゴペプチドであ
る。化学薬剤は、本明細書でより詳細に説明されるように、分子の多くの異なる
クラスに由来し得る。

【００３５】 本明細書で使用される「プロドラッグ」とは、生物学的バリアを克服するよう
に化学的に改変される化学薬剤を意味する。化学薬剤がそのプロドラッグ形態に
変換される場合、その生物学的活性は排除されるか、または実質的に減少するが
、その効果を阻害した生物学的バリアはもはや問題ではない。プロドラッグを形
成するために化学薬剤に結合される化学基、すなわち、「プロ部分」は、化学薬
剤の活性形態を放出するために酵素的または非酵素的手段によって、プロドラッ
グから除去される。Ａ．Ａｌｂｅｒｔ，Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ａｓｐｅｃｔｓ ｏ
ｆ Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ Ｔｏｘｉｃｉｔｙ，１８２ Ｎａｔｕｒｅ ４２１（
１９５８）を参照のこと。ＩＬ−２−レセプター保有細胞にインターナリゼーシ
ョンされた場合に、選択された効果を有する化学薬剤が、リガンド、水溶性ポリ
マー、および必要に応じて、組成物がＩＬ−２−レセプター保有細胞に送達され
るようなスペーサーを用いて改変されるので、本発明の組成物はプロドラッグで
ある。そのためＩＬ−２−レセプター保有細胞の細胞膜を浸透する化学薬剤の生
物学的効果は、組成物が細胞内送達され、そして化学薬剤がスペーサーの生分解
によって組成物の残りの部分から放出されるまで、非常に減少または排除される
。

【００３６】 本明細書で使用される「化学薬剤」とは、ＩＬ−２−レセプター保有細胞にイ
ンターナリゼーションされる場合、選択された効果を有する何らかの物質を意味
し、そしてそれらを包含する。ある化学薬剤は、細胞にインターナリゼーション
される場合、細胞傷害性効果または遺伝子調節における効果のような、生理学的
効果を有する。「トランスフォーミング核酸」（ＲＮＡまたはＤＮＡ）は、細胞
にインターナリゼーションされる場合、細胞内で複製および／または発現され得
る。他の核酸は、選択された様式で、細胞内での遺伝子発現に影響を及ぼすため
に、細胞内で調節配列または調節因子と相互作用し得る。細胞内送達された検出
可能な標識は、標識の検出によって、本発明の組成物をインターナリゼーション
した細胞の同定を可能にし得る。薬物または薬理学的に活性な化合物は、病原性
効果または他のタイプの障害を寛解させるために使用され得る。特に有用な化学
薬剤としては、ポリペプチドが挙げられ、そしていくつかのこのような化学薬剤
は、生物学的に活性なタンパク質の活性フラグメントであるか、または抗原性タ
ンパク質の特異的抗原性フラグメント（例えば、エピトープ）である。したがっ
て、化学薬剤としては、サイトトキシン、遺伝子調節因子、トランスフォーミン
グ核酸、標識、抗原、薬物などが挙げられる。

【００３７】 本明細書で使用される「薬物」または「薬理学的に活性な薬剤」とは、ＩＬ−
２−レセプター保有細胞における所望の生物学的効果または薬理学的効果を刺激
する、このような細胞（例えば、活性化Ｔリンパ球）における細胞内投与に適切
な任意の化学物質または化合物を意味する。

【００３８】 本明細書で使用される、「キャリア」とは、本発明に従う組成物がカップリン
グされ得る、水溶性ポリマー、微粒子、またはリポソームを意味する。このよう
なキャリアは、組成物の分子サイズを増加させ、そして付加された選択性および
／または安定性を提供し得る。キャリア含有組成物が大きすぎて、受動拡散によ
って細胞内侵入できず、そのためにレセプターによって媒介されるエンドサイト
ーシスを介して細胞に侵入することに限定されるので、このような選択性が生じ
る。標的化された薬物送達のためのこのようなキャリアの使用のための可能性が
確立されている。例えば、Ｊ．Ｋｏｐｅｃｅｋ，５ Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ
１９（１９８４）；Ｅ．Ｓｃｈａｃｈｔら，Ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ
ａｓ Ｄｒｕｇ Ｃａｒｒｉｅｒｓ，Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ−Ｒｅｌｅａｓｅ
Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １８８（Ｐ．Ｉ．ＬｅｅおよびＷ．Ｒ．Ｇｏｏｄ編，
１９８７）；Ｆ．Ｈｕｄｅｃｚら，Ｃａｒｒｉｅｒ ｄｅｓｉｇｎ：Ｃｙｔｏｔ
ｏｘｉｃｉｔｙ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃｉｔｙ ｏｆ Ｓｙｎｔｈｅ
ｔｉｃ Ｂｒａｎｃｈｅｄ Ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅｓ ｗｉｔｈ Ｐｏｌｙ（
Ｌ−ｌｙｓｉｎｅ） Ｂａｃｋｂｏｎｅ，１９ Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒ
ｅｌｅａｓｅ ２３１（１９９２）；Ｚ．Ｂｒｉｃｈら，Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏ
ｎ ａｎｄ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ａ Ｗａｔｅｒ Ｓｏ
ｌｕｂｌｅ Ｄｅｘｔｒａｎ Ｉｍｍｕｎｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ ｏｆ Ｄｏｘ
ｏｒｕｂｉｃｉｎ ａｎｄ ｔｈｅ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ
（ＡＢＬ３６４），１９ Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ ２４
５（１９９２）。を参照のこと。したがって、例示的な水溶性ポリマーとしては
、デキストラン、イヌリン、改変されたεアミノ基を有するポリ（Ｌ−リジン）
、ポリ（Ｌ−グルタミン酸）、Ｎ−置換したメタクリルアミド含有合成ポリマー
およびコポリマーなどが挙げられる。

【００３９】 本明細書で使用される、「有効量」は、選択された効果を生じるために十分な
量である。例えば、化学薬剤としてサイトトキシンを含む組成物の選択された効
果は、選択された期間内に、ＩＬ−２−レセプター保有細胞、例えば、活性化Ｔ
細胞の選択された割合を殺傷することであり得る。有効量の組成物は、この選択
された結果を達成する量であり、そしてこのような量は、当業者によって定常的
な問題として決定され得る。

【００４０】 本発明の組成物は、ＩＬ−２−レセプター保有細胞に細胞内送達される場合、
選択された効果を誘起し得る化学薬剤の細胞内送達を提供する。組成物の例示的
実施態様は、Ｐ−［Ｔ_a−Ｌ−Ｓ_b−Ａ］_cおよび［Ａ−Ｓ_b］_d−Ｐ−［Ｔ_a−Ｌ］ _c からなる群より選択される式を有し、ここで、Ｌは、ＩＬ−２−レセプター保
有細胞上のＩＬ−２レセプターに結合しそして組成物のレセプターによって媒介
されるエンドサイトーシスを刺激するために配置されたリガンドであり；Ａは、
化学薬剤であり；ＳおよびＴは、スペーサーであり、ここで、少なくともＳは、
生分解性であり；Ｐは、リガンドとの共有結合を形成することに適合可能な官能
基を有する水溶性ポリマーであり；ａおよびｂは、０または１の整数であり；ｃ
は、少なくとも２の整数であり；そして、ｄは、少なくとも１の整数である。好
ましくは、ｃは、２〜約１０００の整数である。スペーサーは、好ましくは、化
学薬剤がＩＬ−２−レセプター保有細胞（例えば、Ｔ細胞）の内部、特にリソソ
ームにおいて、加水分解および／または酵素的切断によって組成物から分離され
るように、生分解性である。一旦分離されると、化学薬剤は、細胞においてその
機能的効果を発揮し得る。このようなスペーサーの例は、ペプチドＧｌｙ−Ｐｈ
ｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ（配列番号２１）である。等価なペプチドスペーサーは、当
該技術分野で周知である。化学薬剤は、サイトトキシン、トランスフォーミング
核酸、遺伝子調節因子、標識、抗原、薬物などからなる群より選択される。水溶
性ポリマー（上記の式でＰとして表される）は、好ましくは、ポリ（アルキレン
オキシド）である。メトキシポリエチレングリコールのようなα置換ポリアルキ
レンオキシド誘導体、またはＣ₁−Ｃ₄アルキル基を含むもののような他の適切な
アルキル置換誘導体は、このグループの物質の範囲内である。ポリマーは、モノ
メチル置換ＰＥＧホモポリマーであることが好ましい。他のポリ（アルキレンオ
キシド）もまた有用であり、これらには、他のポリエチレングリコール（ＰＥＧ
）ホモポリマー、ポリプロピレングリコールホモポリマー、他のアルキルキャッ
プしたポリエチレンオキシド、ビス−ポリエチレンオキシド、ポリ（アルキレン
オキシド）のコポリマー、およびポリ（アルキレンオキシド）またはその活性化
誘導体のブロックコポリマーが挙げられる。ＰＥＧベースのポリマーが使用され
る本発明のそれらの局面では、ＰＥＧベースのポリマーは、約２００〜約５０，
０００の分子量を有することが好ましい。約２，０００〜約２０，０００の分子
量の分子量が好ましく、そして、約５，０００の分子量が特に好ましい。ＰＥＧ
は、高価でなく、ヒトへの投与についてＦＤＡに認可され、そして抗体応答の誘
起に抵抗性であるので、好ましい。ポリ（エチレンオキシド）（ＰＥＯ）は、Ｐ
によって表されるもう１つの好ましい水溶性ポリマーである。リガンドの化学薬
剤へのカップリングは、共有結合、静電的相互作用、疎水性相互作用、物理的カ
プセル化などによってであり得るが、これらに限定されない。本発明の組成物は
、他の水溶性ポリマー、リポソーム、および微粒子からなる群より選択されるキ
ャリアをさらに含み得る。キャリアとしての使用のためのこのような水溶性ポリ
マーは、デキストラン、イヌリン、改変εアミノ基を有するポリ（Ｌ−リジン）
（ＰＬＬ）、ポリ（Ｌ−グルタミン酸）（ＰＧＡ）、Ｎ−置換メタクリルアミド
含有ポリマーおよびコポリマーなどからなる群より選択される。好ましい水溶性
ポリマーは、Ｎ−（２−ヒドロキシプロピル）メタクリルアミド（ＨＰＭＡ）の
コポリマーである。

【００４１】 したがって、本発明によれば、組成物は、例えば、活性化Ｔ細胞における、Ｉ
Ｌ−２レセプターへの優先的結合のための手段を提供し、そのためエンドサイト
ーシスによる組成物のインターナリゼーションを引き起こす。化学薬剤は、ＩＬ
−２−レセプター保有細胞において選択された効果を達成するための手段を提供
する。したがって、例えば、化学薬剤は、細胞の選択的殺傷または無力化のため
の、放射性核種を含むサイトトキシン；細胞において遺伝的に形質転換するか、
または遺伝子発現を調節するための核酸；選択された治療効果を達成するための
薬物または他の薬理学的に活性な薬剤；蛍光、放射活性、および磁性標識を含む
、組成物を取り込んだ細胞の検出を可能にするための標識などを含む。

【００４２】 ＩＬ−２は、正常な免疫応答に必須であるＴ細胞によって産生されるリンパ球
増殖因子である。ＩＬ−２レセプターへのＩＬ−２の結合は、レセプターによっ
て媒介されるエンドサイトーシスによるインターナリゼーションに先立つ。ヒト
ＩＬ−２遺伝子は配列決定され（Ｔ．Ｔａｎｉｇｕｃｈｉら，３０２ Ｎａｔｕ
ｒｅ ３０５−１０（１９８３）、参考として本明細書に援用される）、同様に
、ヒトＩＬ−２レセプターについての遺伝子も配列決定された（Ｗ．Ｊ．Ｌｅｏ
ｎａｒｄら，３１１ Ｎａｔｕｒｅ ６２６−３１（１９８４）；Ｔ．Ｎｉｋａ
ｉｄｏら、３１１ Ｎａｔｕｒｅ ６３１−３５（１９８４）；Ｄ．Ｃｏｓｍａ
ｎら，３１２ Ｎａｔｕｒｅ ７６８−７１（１９８４））。ＩＬ−２レセプタ
ーは、５５ｋＤａ αサブユニット、７５ｋＤａ βサブユニット、および６４
ｋＤａ γサブユニットを有する、細胞膜上のヘテロトリマー糖タンパク質複合
体である。αおよびβサブユニットを発現する単に正常なヒト組織は、活性化Ｔ
細胞、Ｂ細胞、ＬＧＬ細胞、および単球およびいくらかの肝臓クッパー細胞、マ
クロファージ、および皮膚ランゲルハンス細胞である。Ａ．Ｅ．Ｆｒａｎｋｅｌ
ら，１１ Ｌｅｕｋｅｍｉａ ２２−３０（１９９７）。毛様細胞性白血病、成
人Ｔ細胞白血病、ならびに皮膚型Ｔ細胞リンパ腫およびＢ細胞慢性リンパ球白血
病の一部を含む、種々の血液学的新生物は、高親和性ＩＬ−２レセプター発現を
示し得る。ＩＬ−２レセプターに標的化された組換えトキシンが記載されており
、ここでリガンドはＩＬ−２である。Ａ．Ｅ．Ｆｒａｎｋｅｌら，前出；米国特
許第４，６７５，３８２号；Ｊ．ｖａｎｄｅｒＳｐｅｋら，２６８ Ｊ．Ｂｉｏ
ｌ．Ｃｈｅｍ．１２０７７−８２（１９９３）；Ｉ．ＰａｓｔａｎおよびＤ．Ｆ
ｉｔｚＧｅｒａｌｄ，前出。

【００４３】 本発明のいくつかの実施態様では、組成物は、リガンドおよび化学薬剤を水溶
性ポリマーに化学的に結合体化することによって構築される。この用語が本明細
書で使用される、リガンドおよび化学薬剤を水溶性ポリマーに「化学的に結合体
化する」とは、互いにリガンドおよび化学薬剤を共有結合すること、好ましくは
スペーサー部分によって、および得られるリガンド／薬剤結合体を水溶性ポリマ
ーに結合体化することを意味する。特定の実施態様では、スペーサー部分は、リ
ガンドと化学薬剤との間の連結を形成するために使用される。

【００４４】 本発明の組成物のペプチド部分は、「融合タンパク質」として、Ｅ．ｃｏｌｉ
のような遺伝子操作された生物中で産生され得る。すなわち、リガンド、スペー
サー、またはペプチド化学薬剤をコードするヌクレオチドの配列を含むハイブリ
ッド遺伝子は、組換えＤＮＡ技術によって構築され得る。このハイブリッド遺伝
子は、ハイブリッド遺伝子によってコードされる「融合タンパク質」が発現され
るように、生物中に挿入され得る。次いで、融合タンパク質は、アフィニティー
クロマトグラフィーを含む標準的方法によって精製され得る。リガンド、スペー
サー、またはペプチド化学薬剤を含むペプチドはまた、化学合成によって構築さ
れ得る。短いペプチドはより容易に操作され得ること、ならびにさらなるアミノ
酸残基、および特に実質的に多くのアミノ酸残基の存在は、エンドサイトーシス
による化学薬剤のインターナリゼーションを刺激することにおいてペプチドリガ
ンドの機能を妨害し得ることの両方のため、短いペプチドリガンドが、一般的に
好ましい。

【００４５】 本発明に従う組成物はまた、一旦組成物が細胞内（例えば、リソソーム）に存
在すると、化学薬剤が切断部位のタンパク質分解によって組成物の残りの部分か
ら分離され得るように配置されたプロテアーゼ切断部位を（好ましくはスペーサ
ー部分に）さらに含む。このようなプロテアーゼ感受性スペーサーは、組成物の
ペプチド部分が化学合成されるか、または遺伝子操作された生物において発現ペ
プチドとして存在するかどうかにかかわりなく、付加され得る。後者の場合には
、プロテアーゼ感受性スペーサーをコードするヌクレオチドは、当該技術分野で
周知の技術によって、リガンドおよび／またはペプチド化学薬剤をコードするハ
イブリッド遺伝子に挿入され得る。１つの例示的実施態様では、プロテアーゼ感
受性スペーサーは、標的細胞のリソソームにおけるタンパク質分解によって切断
されるように設計される。エンドサイトーシスによってインターナリゼーション
される組成物は、エンドサイトーシス小胞にパッケージされ、このエンドサイト
ーシス小胞は、リソソームに輸送される。一旦リソソームにおいてプロテアーゼ
感受性スペーサーが切断されると、化学薬剤は、細胞質に輸送されるために利用
可能である。

【００４６】 本発明の別の局面は、細胞の異種集団に含まれるＩＬ−２−レセプター保有細
胞（例えば、活性化Ｔリンパ球）において所望の活性を特異的にもたらすための
方法が特徴であり、これはこのような活性を細胞内に指示する、本発明に従って
調製された組成物と、細胞の集団とを接触させる工程による。本発明の組成物は
、混合した集団においてＩＬ−２−レセプター保有Ｔ細胞に選択的に結合され、
その際、このような活性化Ｔ細胞への組成物のエンドサイトーシスが刺激され、
そして化学薬剤はこのようなＴ細胞内にその活性をもたらす。

【００４７】 本出願は、他に示されなければ、ペプチドの操作についておよびペプチドを発
現させるための核酸の操作について、標準的技術を用いる。オリゴペプチドおよ
びオリゴヌクレオチドの結合体化のための技術は、当該技術分野で公知であり、
そして例えば、Ｔ．Ｚｈｕら，３ Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｒｅｓ．Ｄｅｖ．２６
５（１９９３）；Ｔ．Ｚｈｕら，８９ Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃ
ｉ．ＵＳＡ ７９３４（１９９２）；Ｐ．Ｒｉｇａｕｄｙら，４９ Ｃａｎｃｅ
ｒ Ｒｅｓ．１８３６（１９８９）に記載され、これらは参考として本明細書に
援用される。

【００４８】 上記のように、本発明は、リガンド、スペーサー、および／または化学薬剤と
して用いられるペプチドが特徴である。本発明に従うペプチドは、有機合成およ
び組換えＤＮＡ方法を含む、種々の技術のいずれかによって作製され得る。ペプ
チドの化学合成のための技術は、例えば、Ｂ．Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄら，２１
Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ５０２０（１９８２）；Ｈｏｕｇｈｔｅｎ，８２
Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ５１３１（１９８５）；Ｍ
．ＢｏｄａｎｓｚｋｙおよびＡ．Ｂｏｄａｎｓｚｋｙ，Ｔｈｅ Ｐｒａｃｔｉｃ
ｅ ｏｆ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌ
ａｇ 第２版，１９９４）に記載され、これらは、参考として本明細書に援用さ
れる。ペプチドの他の分子との化学的結合体化についての技術は、当該技術分野
で公知である。

【００４９】 本発明に従う融合タンパク質は、リガンドおよび／またはスペーサーおよび／
または化学薬剤をコードするオリゴヌクレオチドを含む核酸の、適切な宿主細胞
における発現によって作製され得る。組換え融合タンパク質を産生するためのこ
のような技術は当該技術分野で周知であり、そして例えば、Ｊ．Ｓａｍｂｒｏｏ
ｋら，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａ
ｎｕａｌ（第２版，１９８９）に一般的に記載され、その適切な部分は参考とし
て本明細書に援用される。制限エンドヌクレアーゼなどのような、このような技
術を適用することに有用な試薬は、当該技術分野で周知であり、そしていくつか
の供給業者のいずれかから市販で入手可能である。

【００５０】 本発明に従う組成物の構築は、現在、生分解性スペーサー（配列番号２１）お
よび細胞傷害性化学薬剤のアドリアマイシンにカップリングしたペプチドリガン
ドが、ＰＥＧにカップリングされる実施例を特に参照して、記載される。

【００５１】

【実施例】

（実施例１） ＮＨ₂−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−ＯＨ（Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．Ｓｔ
．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ；２．７４ｇ，１４．６ｍｍｏｌ）を、０．５Ｍ ＮａＣｌ
を含む３０ｍｌのリン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）に溶解した。反応混合物を
撹拌し、そして５ｇの固体活性化ＰＥＧ（５ペンダント（ｐｅｎｄｅｎｔ）ポリ
エチレングリコールプロピオン酸のスクシンイミジルエステル；ｐ−５−ＳＰＡ
−５０００；Ｓｈｅａｒｗａｔｅｒ Ｐｏｌｙｍｅｒｓ，Ｉｎｃ．，Ｈｕｎｔｓ
ｖｉｌｌｅ，ＡＬ）を、溶液に添加した。反応を、ｐＨ ７〜８で４．５時間続
けた。次いで、反応混合物を、それぞれ５００ｍｌのジクロロメタン（Ａ．Ｃ．
Ｓ．，ＨＰＬＣグレードＳｉｇｍａまたはＡｌｄｒｉｃｈ，Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ
，ＷＩ）で４回抽出した。乳濁液が抽出の間に形成され、そして乳濁液へＮａＣ
ｌを添加することによって部分的に壊した。有機層をプールし、そしてＭｇＳＯ ₄ 上で一晩乾燥させた。次いで、溶液を濾過し、そして濾液を、約３５℃にて水
ポンプを使用してロータリーエバポレーターでジクロロメタンをエバポレートす
ることによって濃縮した。溶液の最終容量を、約１５ｍｌに減少した。溶液をエ
ーテル（７５０ｍｌ；無水、Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）に添加し、
そして産物（ＰＥＧ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−ＯＨ）を沈殿させた。沈殿物を濾過し、
エーテルで洗浄し、そして空気乾燥させた。

【００５２】 ＰＥＧ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−ＯＨ（３．５ｇ，３．４ｍｍｏｌ）およびｐ−ニト
ロフェノールを、５０ｍｌのテトラヒドロフラン（無水、Ａｌｄｒｉｃｈ）およ
び１０ｍｌの酢酸エチル（Ａｌｄｒｉｃｈ）に溶解した。溶液を、氷浴中で冷却
し、そしてジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ，Ｓｉｇｍａ；２．４ｇ，
１１．５ｍｍｏｌ）を、４つのアリコートで反応混合物に添加した。反応溶液を
、氷浴中で３０分間撹拌した。次いで、反応溶液の温度を、室温まで上昇させ、
次いで反応を、さらに９１時間続けた。次いで、反応溶液を、濾紙を通して濾過
し、そして濾液を、水ポンプを使用してロータリーエバポレーターで溶媒をエバ
ポレートすることによって濃縮した。清澄な濃縮した溶液（３０ｍｌ）を、エー
テル（７５０ｍｌ）に添加した。沈殿物を濾過し、エーテルで洗浄し、そして空
気乾燥させた。産物のアリコートを、０．１Ｎ ＮａＯＨに溶解し、遊離したｐ
−ニトロフェノールの濃度を、ε＝１．８×１０⁴ｌ／ｍｏｌ−ｃｍのモル吸光
係数を使用して、４００ｎｍでの分光光度法によって評価した。産物（ＰＥＧ−
Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−ＯＮｐ）が、３７５μｍｏｌ／ｇのＯＮｐ含量を有することを
決定した。

【００５３】 産物（ＰＥＧ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−ＯＮｐ；４３０．８８ｍｇ，Ｏｎｐ含量１６
１．２μｍｏｌ）を、５ｍｌ無水ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）に溶解し、そ
してペプチド（Ｇｌｎ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ、配列番号１
２）を、溶液に添加した。ＤＭＦで１：２希釈した約１５０μｌのトリエチルア
ミンを、１５分間隔で４回反応混合物に添加し、そして溶液を室温にて１７時間
撹拌した。反応溶液を、冷エーテル（４００ｍｌ）に添加し、そして結合体沈殿
物（ＰＥＧ−ＴＴ１３−ＯＨ；配列番号１３）を濾過し、４００ｍｌエーテルで
洗浄し、そして乾燥させた。

【００５４】 アドリアマイシン（６３．９７ｍｇ，１１１．５μｍｏｌ，Ｓｉｇｍａ）およ
びＰＥＧ−ＴＴ１３−ＯＨ（４５０．２６ｍｇ，１１１．５μｍｏｌ）を、５ｍ
ｌのＤＭＦに溶解し、そしてＤＣＣ固体（５９．３ｍｇ）を、この溶液に添加し
た。反応を２２時間行い、次いで、Ｗｈａｔｍａｎ Ｎｏ．４ペーパーを通して
濾過した。濾紙上の沈殿物を、減圧下で乾燥させ、次いでＰＢＳ緩衝液に溶解し
、そしてＰＢＳに対して一晩透析した。緩衝液の交換後、溶液を、さらに２時間
透析した。アドリアマイシン含量を、４９０ｎｍでの分光光度法によって決定し
た。得られた結合体は、構造ＰＥＧ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ
−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−アドリアマイシン（以下、「ＰＥＧ−ＴＴ１３−Ａ
ＤＲ」、配列番号１３）を有した。

【００５５】 （実施例２） この実施例では、構造ＰＥＧ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−ＡＤＲ（以
下、「ＰＥＧ−ＧＦＬＧ−ＡＤＲ」、配列番号２１）を有するコントロール組成
物を、実施例１の手順に従って調製した。

【００５６】 （実施例３） この実施例では、構造ＰＥＧ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ−Ｉｌｅ−Ｌ
ｅｕ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−アドリアマイシン（以下、「
ＰＥＧ−ＴＴ７−ＡＤＲ」、配列番号１４）を有する組成物を、実施例１の手順
に従って調製した。

【００５７】 （実施例４） この実施例では、構造ＰＥＧ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ^tBt−Ｈｉｓ−Ｉｌｅ
−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−アドリアマイシン（配列
番号１５）（ここでｔＢｔはグルタミン酸残基のＣＯＯＨ側鎖にカップリングし
たｔｅｒｔ−ブチル基である）を有する組成物を、実施例１の手順に従って調製
した。グルタミン酸のｔｅｒｔ−ブチル誘導体を、市販で購入し（Ｂａｃｈｅｍ
，Ｋｉｎｇ ｏｆ Ｐｒｕｓｓｉａ，ＰＡ）、そしてペプチド合成中にオリゴヌ
クレオチドに組み込んだ。ｔｅｒｔ−ブチル基は、グルタミン酸残基のＣＯＯＨ
側鎖の、アドリアマイシンのＮＨ₂基との反応を妨げるためにＣＯＯＨ基をブロ
ックする。

【００５８】 （実施例５） この実施例では、構造ＰＥＧ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ｈｉｓ−Ｉｌｅ−Ｌ
ｅｕ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−アドリアマイシン（配列番号
１６）を有する組成物を、実施例１の手順に従って調製した。

【００５９】 （実施例６） この実施例では、構造ＰＥＧ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｈｉｓ−Ｉｌｅ−Ｐ
ｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−アドリアマイシン（配列番号
１７）を有する組成物を、実施例１の手順に従って調製した。

【００６０】 （実施例７） この実施例では、構造ＰＥＧ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｈｉｓ−Ｉｌｅ−Ｐ
ｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−アドリアマイシン（配列番号
１８）を有する組成物を、実施例１の手順に従って調製した。

【００６１】 （実施例８） この実施例では、構造ＰＥＧ−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ｈｉｓ−Ｉ
ｌｅ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−アドリアマイシン（
配列番号１９）を有する組成物を、実施例１の手順に従って調製した。

【００６２】 （実施例９） この実施例では、構造ＰＥＧ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ｈｉｓ−Ｉｌｅ−Ｌ
ｅｕ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−アドリアマイシン（配列番号
２０）を有する組成物を、実施例１の手順に従って調製した。

【００６３】 （実施例１０） 実施例１の手順に従って調製したＰＥＧ−ＴＴ１３−ＡＤＲ、実施例２の手順
に従って調製したＰＥＧ−ＧＦＬＧ−ＡＤＲ、実施例３の手順に従って調製した
ＰＥＧ−ＴＴ７−ＡＤＲ、および結合体化されていないアドリアマイシンのイン
ビトロ効果を、以下のようにヒトＨＳＢ−２ Ｔ細胞（ＡＴＣＣ Ｎｏ．ＣＣＬ
１２０．１）に対してテストした。１×１０⁵細胞の３連の試料のそれぞれを、
９６ウェルマイクロタイタープレート（Ｆａｌｃｏｎ Ｍｉｃｒｏｔｅｓｔ １
１１）のウェルにおいて、０．１ｍｌの培養培地（ＲＰＭＩ １６４０、１０％
ウシ胎仔血清）中に種々の濃度の精製した組成物と混合し、そして加湿した５％
ＣＯ₂雰囲気下で３７℃にて４８時間インキュベートした。その後、細胞生存率
を、テトラゾリウム化合物ＭＴＳ（３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イ
ル）−５−（３−カルボキシメトキシフェニル）−２−（４−スルホフェニル）
−２Ｈ−テトラゾリウム、分子内塩）および電子カップリング試薬ＰＭＳ（フェ
ナジンメトスルフェート）を使用して比色方法によって評価した。Ａ．Ｊ．Ｃｏ
ｒｙら，３ Ｃａｎｃｅｒ Ｃｏｍｍｕｎ．２０７（１９９１）；Ｔ．Ｌ．Ｒｉ
ｓｓおよびＲ．Ａ．Ｍｏｒａｖｅｃ，３ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．Ｃｅｌｌ．１８４
ａ（増補；１９９２）；Ｔ．Ｍ．Ｂｕｔｔｋｅら，１５７ Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ
．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２３３（１９９３）、これらは参考として本明細書に援用さ
れる。ＭＴＳは、生存細胞によって可溶性ホルマザン産物に生物還元される。４
９０ｎｍでのホルマザンの吸光度は、さらなるプロセシングなく９６ウェルアッ
セイプレートから直接的に測定され得る。４９０ｎｍでの吸光度によって測定さ
れるようなホルマザン産物の量は、培養物中の生存細胞の数に直接比例する。Ｍ
ＴＳアッセイのための試薬を、Ｐｒｏｍｅｇａ Ｃｏｒｐ．（Ｍａｄｉｓｏｎ，
Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ）から得た。この方法に従って、２０μｌのＭＴＳ／ＰＭＳ
溶液（Ｐｒｏｍｅｇａ Ｎｏ．Ｇ５４２１）を、アッセイプレートの各ウェルに
添加した。次いで、プレートを、加湿した５％ＣＯ₂雰囲気下で３７℃にて４時
間さらにインキュベートした。次いで、各ウェルの吸光度を、ＥＬ３１１ Ｍｉ
ｃｒｏｐｌａｔｅ Ａｕｔｏｒｅａｄｅｒ（Ｂｉｏ−Ｔｅｋ Ｉｎｓｔｒｕｍｅ
ｎｔｓ）で４９０ｎｍにて測定した。次いで、各処理についての平均吸光度を算
出し、そして細胞傷害性のパーセントを、以下の式を使用して決定した：

【００６４】

【化１】

【００６５】 ここで、Ａ_Sは、各処理についての平均吸光度を表し、そしてＡ_Cは、コントロー
ル処理、すなわち、結合体に曝露されていない細胞、の平均吸光度を表す。

【００６６】 図１は、ＰＥＧ−ＴＴ７−ＡＲ（白菱形）およびＰＥＧ−ＴＴ１３−ＡＲ（白
三角）が、細胞傷害性の類似のレベルをもたらすためにＰＥＧ−ＧＦＬＧ−ＡＲ
（白四角）について必要とされるよりも約１００倍低い濃度で、このようなＨＳ
Ｂ−２ Ｔ細胞を殺傷することを示す。ＰＥＧ−ＴＴ７−ＡＤＲおよびＰＥＧ−
ＴＴ２３−ＡＤＲの細胞傷害性は、実質的に同一であった。これらの結果は、Ｉ
Ｌ−２レセプターに結合することおよびレセプターによって媒介されるエンドサ
イトーシスを誘導することに特異的なリガンドの存在が、このようなリガンドを
含まないＰＥＧ−およびアドリアマイシン含有結合体が非常に大きな細胞傷害性
を生じることを示す。したがって、ＩＬ−２−レセプター特異的リガンドを有す
る結合体は、このようなリガンドを含まない類似の結合体より非常に大きな効率
でインターナリゼーションされる。結合していないアドリアマイシンコントロー
ルは、細胞中に迅速に拡散し、そして細胞を殺傷する。予測したとおり、ＰＥＧ
−ＴＴ７−ＡＤＲおよびＰＥＧ−ＴＴ１３−ＡＤＲからの細胞傷害性は、ＰＥＧ
−ＴＴ７−ＡＤＲおよびＰＥＧ−ＴＴ１３−ＡＤＲがエンドサイトーシスによっ
てインターナリゼーションされる必要性があることに起因して、結合体化してい
ないアドリアマイシンよりも高い濃度のアドリアマイシンを必要とする。

【００６７】 本発明に従う組成物は、一般的に、レセプターへのリガンドの結合が細胞への
組成物へのエンドサイトーシスを刺激する条件下で、組成物と細胞とを接触させ
ることによって、ＩＬ−２−レセプター保有細胞（例えば、活性化Ｔ細胞）への
化学薬剤の標的化された送達のために用いられ得る。次いで、化学薬剤は、組成
物がインターナリゼーションされる、標的化された細胞でまたは細胞内で作用し
、そして活性薬剤の所望の効果は、レセプターを有する細胞に限定され得る。

【００６８】 例えば、本発明に従う組成物は、活性化Ｔ細胞を殺傷するためにインビボで効
果的な抗腫瘍薬剤として用いられ得る。好ましくは、組成物は、全身投与によっ
て、代表的には、皮下、筋肉内、または静脈内注射、あるいは腹腔内投与によっ
て、被験体に投与され、これは当該技術分野で周知の方法である。このような使
用のための注射可能物は、液体溶液もしくは懸濁液として、または注射前の液体
において溶液もしくは懸濁液調製のための固体形態で、または乳濁液としてのい
ずれかの従来の形態で調製され得る。適切な賦形剤としては、例えば、水、生理
食塩水、デキストロース、グリセロール、エタノールなどが挙げられ；そして所
望であれば、湿潤剤または乳化剤、緩衝剤などのような少量の補助物質が添加さ
れ得る。このような組成物の有効量は、本明細書で提供されるガイドラインに従
って、過度の実験なしに当業者によって決定され得る。

【００６９】 組成物は、インビトロまたはインビボで細胞と接触され得る。Ｔ細胞は、細胞
タイプが混在した集団の亜集団を構成し；本発明に従うリガンドは、Ｔ細胞への
、およびおそらく密接に関連したレセプターを有する他の細胞の小さい割合への
、結合体のエンドサイトーシスのために提供される。

【００７０】 化学薬剤は、標的化された細胞における種々の所望の効果のいずれかを有し得
る。上記のように、いくつかの特定の有用な実施態様では、化学薬剤は、薬剤が
細胞にインターナリゼーションされる場合のみまたは主としてその場合に、細胞
において効果的である。

【００７１】 （実施例１１） （Ｔ細胞へのインビボでの標的化された送達） 本発明に従う組成物は、ＩＬ−２−レセプター保有細胞（例えば、活性化Ｔ細
胞）への標的化された送達のために、温血動物に投与され得る。特に、組成物は
、標的化された細胞へ組成物を、レセプターによって媒介されるインターナライ
ゼーションするために提供する。

【００７２】 ５００μｌのＰＢＳ中の約１×１０⁶ＣＣＲＦ−ＣＥＭヒトＴ細胞白血病細胞
を、雄ＣＢ １７ ＳＣＩＤ（ＨＳＤ）マウスに腹腔内注射し、そして細胞を２
４時間、マウスにコロニー形成させた。ヒトＴ細胞白血病細胞が、脾臓および肝
臓に優先的にコロニー形成することを見いだした。マウスを、各６匹の動物の６
群に分けた：Ａ群を、１００μｇの結合体で処置し；Ｂ群を、７５μｇの結合体
で処置し；Ｃ群を、５０μｇの結合体で処置し；Ｄ群を、２５μｇの結合体で処
置し；Ｅ群を、１０μｇの結合体で処置し；そしてＦ群を、結合体で処置しなか
った。２４時間後、マウスに１０〜１００μｇのＰＥＧ−ＴＴ１３−ＡＤＲ（結
合体中のＡＤＲの質量を算出した）を腹腔内注射するか、または、Ｆ群の場合に
は、処置しなかった。さらに２４および４８時間後、Ｂ、Ｃ、Ｄ、およびＥ群に
、再度注射した。

【００７３】 これまでの実験に基づいて、注射の６０日後までに、Ｆ群の動物のすべてが、
Ｔ細胞白血病細胞の制御されない増殖により死亡するが、その一方、Ａ〜Ｅ群の
、すなわち、ＰＥＧ−ＴＴ１３−ＡＲを注射した動物のすべては、生存している
。これらの結果は、化学薬剤がサイトトキシンである場合、本発明に従う組成物
が、ＩＬ−２−レセプター保有細胞、すなわち、Ｔ細胞によって優先的にインタ
ーナリゼーションされ、そしてこのようなＴ細胞がサイトトキシンによって殺傷
されることを示す。

【００７４】 （実施例１２） この実施例では、マウスに、実施例１１の手順に従って、ＣＣＲＦ−ＣＥＭヒ
トＴ細胞白血病細胞およびＰＥＧ−ＴＴ１３−ＡＤＲまたはＰＥＧ−ＧＦＬＧ−
ＡＤＲのいずれかを注射して、このような動物の肝臓および脾臓がヒト細胞を含
むかどうかを決定する。脾臓および肝臓を、動物の死亡時に、または接種後１２
０日目に、どちらか早く発生した際に採取する。これらの器官から調製したゲノ
ムＤＮＡのＰＣＲアッセイを使用して、そこでのヒト細胞の存在または不在を決
定する。

【００７５】 ゲノムＤＮＡを、当該技術分野で一般に周知である方法に従ってマウス脾臓お
よび肝臓から調製する。例えば、Ｊ．Ｓａｍｂｒｏｏｋら，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（第２版，１９８
９）；Ｔ．Ｍａｎｉａｔｉｓら，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌ
ａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（１９８２）；Ｆ．Ａｕｓｕｂｅｌら，Ｃｕ
ｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ
（１９８７）を参照のこと。ゲノムＤＮＡの調製のための例示的方法は、ここで
、簡単に記載される。切除した脾臓および肝臓を破砕し、そして得られる細胞を
ＰＢＳで洗浄する。次いで、細胞を、１００ｍＭ ＮａＣｌ、１０ｍＭ Ｔｒｉ
ｓ−ＨＣｌ、ｐＨ ８．０、２５ｍＭ ＥＤＴＡ、０．５％ＳＤＳ、および０．
１ｍｇ／ｍｌプロテイナーゼＫを含む緩衝液に再懸濁し、そして３７℃にて一晩
インキュベートする。次いで、得られるライセートを、フェノール／クロロホル
ム／イソアミルアルコールで２回抽出する。次いで、水相中のＤＮＡを、エタノ
ールで沈殿させ、洗浄し、乾燥させ、そして１０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ
８．０、１ｍＭ ＥＤＴＡを含む緩衝液に再懸濁する。

【００７６】 ＰＣＲは、ゲノムＤＮＡ試料中の選択された配列の存在を決定するために、当
該技術分野で周知である。以下の参考文献は、ＰＣＲ ｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｙ
：ＰＣＲ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉ
ｃａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ＤＮＡ Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ（Ｈ．Ｅｒｌ
ｉｃｈ編，Ｓｔｏｃｋｔｏｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８９）；Ｐ
ＣＲ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ：Ａ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ
Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ（Ｉｎｎｉｓら編，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，
Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ， Ｃａｌｉｆ．，１９９０）；米国特許第４，６８３，１
９５号；同第４，６８３，２０２号；同第４，８００，１５９号；同第４，９６
５，１８８号を示す。簡単にいえば、ＰＣＲ反応を、１．２５ｍＭのそれぞれの
４つのデオキシヌクレオチド三リン酸、０．７２ユニットのＴｈｅｒｍｕｓ ａ
ｇｕａｔｉｃｕｓ（Ｔａｑ）ＤＮＡポリメラーゼ、３５〜７０ｐｍｏｌの各プラ
イマー（２０〜２３ヌクレオチド長）、２μｇゲノムＤＮＡ、および反応緩衝液
（５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ ８．３、３ｍＭ ＭｇＣｌ₂、２０ｍＭ
ＫＣｌ、および０．５ｍｇ／ｍｌのウシ血清アルブミンを含む）を含む１０μ
ｌ容量でガラスキャピラリーチューブ中で行う。増幅を、６０サイクルのＰＣＲ
によってルーチンで行う。ＤＮＡの量および増幅のサイクル数のようなこれらの
パラメータの変更は、過度に実験を行うことなく当業者によって経験的に決定さ
れ得る。

【００７７】 反応混合物を、キャピラリーチューブ中に封入し、次いでキャピラリーを、Ｍ
ｏｄｅｌ １６０５ Ａｉｒ Ｔｈｅｒｍｏｃｙｃｌｅｒ（Ｉｄａｈｏ Ｔｅｃ
ｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｄａｈｏ Ｆａｌｌｓ，Ｉｄａｈｏ）中に置く。アニーリン
グ温度、伸長時間、およびサイクル数のパラメータを選択する。アニーリング温
度を上昇させることは、ＰＣＲ増幅反応の特異性を増加させ、そして非特異的産
物の量を減少させる。アニーリング温度を、式：Ｔ_m＝４℃（プライマー中のＧ
残基およびＣ残基の数）＋２℃（プライマー中のＡ残基およびＴ残基の数）に従
って熱融解温度から予測し得る。当業者は、公知の原理に従ってアニーリング温
度を最適化し得る。伸長時間は、増幅される産物のサイズに依存する。大ざっぱ
なやり方として、約４秒は、約１００〜１５０ｂｐの産物に十分であり、約８秒
は、約２００〜３００ｂｐの産物に十分であり、そして約２０秒は、約５００ｂ
ｐより大きい産物に十分である。伸長時間を増加させることは、非特異的産物の
増幅を生じ得る。

【００７８】 増幅後、反応混合物を、キャピラリーから取り出し、等容量の停止溶液（９５
％ホルムアミド、２０ｍＭ ＥＤＴＡ、０．０５％ブロモフェノールブルー、０
．０５％キシレンシアノールＦＦ）と混合し、そして凍結するかまたは９５℃に
て５分間すぐに加熱するかのいずれかで貯蔵し、そしてアガロースゲル電気泳動
にかける。次いで、分画した産物を、エチジウムブロミド染色によって検出する
。

【００７９】 脾臓および肝臓組織においてヒトおよびマウス細胞の相対量を決定する例示的
方法は、マウスβ−アクチンおよびヒトβ−アクチン特異的プライマーとの反応
からの増幅された産物の比較を包含する。例示的なマウスβ−アクチンプライマ
ーは、以下のとおりである： ＧＴＡＡＣＡＡＴＧＣ ＣＡＴＧＴＴＣＡＡＴ （配列番号２２） ＣＴＣＣＡＴＣＧＴＧ ＧＧＣＣＧＣＴＣＴＡ Ｇ （配列番号２３）
。 例示的なヒトβ−アクチンプライマーは、以下のとおりである： ＣＴＴＡＧＴＴＧＣＧ ＴＴＡＣＡＣＣＣＴＴ ＴＣ （配列番号２４） ＧＧＧＣＣＡＴＴＣＴ ＣＣＴＴＡＧＡＧＡＧ ＡＡＧ （配列番号２５）
。

【００８０】 これまでの実験に基づいて、この実験の結果は、コントロールＰＥＧ−ＧＦＬ
Ｇ−ＡＤＲ組成物で処置したマウスのすべてが、特異的β−アクチンプライマー
でのＰＣＲ分析によってヒトおよびマウスの両方のＤＮＡの存在を提示すること
を示すと予測される。さらに、ヒトＴ細胞白血病細胞の投与の１２０日以内に死
亡するＰＥＧ−ＴＴ１３−ＡＤＲ組成物で処置したマウスもまた、ヒトＤＮＡの
存在を示す。しかし、ヒトＴ細胞白血病細胞の投与後１２０日間生存するＰＥＧ
−ＴＴ１３−ＡＤＲ組成物で処置したマウスは、ヒトＤＮＡの存在を示さない。
これらの結果は、本発明に従うリガンドおよびサイトトキシン含有組成物が、投
与される動物においてＴ細胞を選択的に殺傷することを証明する。

【００８１】 （実施例１３） ヒトにおいてＴ細胞リンパ腫を処置する方法は、（ａ）リガンド（配列番号１
）またはその生物学的機能等価物のようなリガンド、ならびにアドリアマイシン
のようなサイトトキシンを含む、本発明に従う組成物を提供する工程であって、
その両方が、スペーサー（Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ；配列番号２１）に
よってＰＥＧのような水溶性ポリマーにカップリングされる、工程、および（ｂ
）個体に有効量の組成物を全身投与する工程、を包含する。このような組成物は
、例えば、実施例１で上記のように、作製され得る。有効量の組成物は、組成物
が血流にはいり、そしてＴ細胞と接触するように個体に全身投与される。組成物
は、Ｔ細胞上のＩＬ−２レセプターに結合し、そしてエンドサイトーシスによる
組成物のインターナライゼーションを刺激する。生分解性スペーサーは、細胞内
プロテアーゼによって切断され、アドリアマイシンを放出する。次いで、アドリ
アマイシンは、細胞においてＤＮＡに介入することによって細胞を殺傷する。こ
の手順は、個体の身体において悪性Ｔ細胞の数を減少させ、それによって疾患の
処置においてポジティブな効果を有する。

【配列表】

【図面の簡単な説明】

【図１】 ヒトＨ５Ｂ−２ Ｔ細胞に対する、本発明に従う組成物およびコ
ントロール組成物のインビトロ細胞傷害性活性を示す：（白四角）ＰＥＧ−ＧＦ
ＬＧ−ＡＤＲ（配列番号２１）；（白三角）ＰＥＧ−ＴＴ１３−ＡＤＲ（配列番
号１３）；（白菱形）ＰＥＧ−ＴＴ７−ＡＤＲ（配列番号１４）；および結合し
ていないアドリアマイシン。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ) ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ， ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，Ｄ Ｋ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ， ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，Ｌ Ｖ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ， ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，Ｕ Ｚ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＷ Ｆターム(参考） 4C076 AA12 AA17 AA22 AA95 BB13 BB15 BB16 CC27 CC29 CC41 EE13A EE24A EE30A EE41A 4C084 AA03 AA19 BA44 DA14 NA13 ZB212 ZB262

Claims (54)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 ＩＬ−２−レセプター保有細胞へ化学薬剤を細胞内送達する
   ための組成物であって、（ａ）水溶性生体適合性ポリマー、（ｂ）該ポリマーに
   共有的に解離可能に結合した該化学薬剤、および（ｃ）該ポリマーに共有結合し
   たＩＬ−２−レセプター結合ペプチドを含むリガンドの少なくとも２コピーを包
   含する、組成物。
2. 【請求項２】 請求項１に記載の組成物であって、該組成物が、Ｐ−［Ｔ_a
   −Ｌ−Ｓ_b−Ａ］_cおよび［Ａ−Ｓ_b］_d−Ｐ−［Ｔ_a−Ｌ］_cからなる群より選択さ
   れる式を有し、ここで、Ｌは、前記リガンドであり；Ａは、前記化学薬剤であり
   ；ＳおよびＴは、スペーサーであり、ここで、少なくともＳは、生分解性であり
   ；Ｐは、該リガンドとの共有結合を形成することに適合可能な官能基を有する水
   溶性ポリマーであり；ａおよびｂは、０または１の整数であり；ｃは、少なくと
   も２の整数であり；そして、ｄは、少なくとも１の整数である、組成物。
3. 【請求項３】 Ｐが、ポリアルキレンオキシドである、請求項２に記載の組
   成物。
4. 【請求項４】 請求項３に記載の組成物であって、前記ポリアルキレンオキ
   シドが、α置換ポリアルキレンオキシド誘導体、ポリエチレングリココール（Ｐ
   ＥＧ）ホモポリマー、ポリプロピレングリコールホモポリマー、アルキルキャッ
   プしたポリエチレンオキシド、ビス−ポリエチレンオキシド、ポリ（アルキレン
   オキシド）のコポリマー、およびポリ（アルキレンオキシド）またはその活性化
   誘導体のブロックコポリマーからなる群より選択されるメンバーである、組成物
   。
5. 【請求項５】 前記ポリアルキレンオキシドが、約２００〜約５０，０００
   の分子量を有する、請求項４に記載の組成物。
6. 【請求項６】 前記ポリアルキレンオキシドが、約２，０００〜約２０，０
   ００の分子量を有する、請求項５に記載の組成物。
7. 【請求項７】 前記ポリアルキレンオキシドが、約５，０００の分子量を有
   する、請求項６に記載の組成物。
8. 【請求項８】 前記ポリアルキレンオキシドが、活性化ポリエチレングリコ
   ールである、請求項５に記載の組成物。
9. 【請求項９】 前記ポリアルキレンオキシドが、ポリエチレンオキシドであ
   る、請求項５に記載の組成物。
10. 【請求項１０】 前記ＩＬ−２−レセプター結合ペプチドが、配列番号１お
    よびその生物学的機能等価物からなる群より選択されるメンバーである、請求項
    ３に記載の組成物。
11. 【請求項１１】 前記ＩＬ−２−レセプター結合ペプチドが、配列番号１〜
    配列番号１１からなる群より選択されるメンバーである、請求項１０に記載の組
    成物。
12. 【請求項１２】 前記化学薬剤が、サイトトキシン、トランスフォーミング
    核酸、遺伝子調節因子、標識、抗原、および薬物からなる群より選択される、請
    求項１０に記載の組成物。
13. 【請求項１３】 前記スペーサーが、ペプチドを含む、請求項１２に記載の
    組成物。
14. 【請求項１４】 前記スペーサーが、Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ（配
    列番号２１）を含む、請求項１３に記載の組成物。
15. 【請求項１５】 前記化学薬剤が、アドリアマイシンである、請求項１４に
    記載の組成物。
16. 【請求項１６】 他の水溶性ポリマー、リポソーム、および微粒子からなる
    群より選択されるキャリアをさらに含む、請求項１２に記載の組成物。
17. 【請求項１７】 前記キャリアが、デキストラン、イヌリン、改変εアミノ
    基を有するポリ（Ｌ−リジン）、ポリ（Ｌ−グルタミン酸）、およびＮ−置換メ
    タクリルアミド含有ポリマーからなる群より選択される水溶性ポリマーである、
    請求項１６に記載の組成物。
18. 【請求項１８】 前記ＩＬ−２−レセプター保有細胞が、活性化Ｔ細胞であ
    る、請求項１に記載の組成物。
19. 【請求項１９】 細胞の異種集団において化学薬剤をインビトロでＩＬ−２
    −レセプター保有細胞に送達する方法であって、 （ａ）（ｉ）水溶性生体適合性ポリマー、（ｉｉ）該ポリマーに共有的に解離
    可能に結合した該化学薬剤、および（ｉｉｉ）該ポリマーに共有結合したＩＬ−
    ２−レセプター結合ペプチドを含むリガンドの少なくとも２コピー、を含む組成
    物を提供する工程；および （ｂ）該リガンドが該ＩＬ−２−レセプター保有細胞上のＩＬ−２レセプター
    に結合し、そして該組成物のエンドサイトーシスを誘起する条件下で、該細胞の
    集団を該組成物の有効量と接触させる工程、 を包含する、方法。
20. 【請求項２０】 請求項１９に記載の方法であって、前記組成物が、Ｐ−［
    Ｔ_a−Ｌ−Ｓ_b−Ａ］_cおよび［Ａ−Ｓ_b］_d−Ｐ−［Ｔ_a−Ｌ］_cからなる群より選
    択される式を有し、ここで、Ｌは、前記リガンドであり；Ａは、前記化学薬剤で
    あり；ＳおよびＴは、スペーサーであり、ここで、少なくともＳは、生分解性で
    あり；Ｐは、該リガンドとの共有結合を形成することに適合可能な官能基を有す
    る水溶性ポリマーであり；ａおよびｂは、０または１の整数であり；ｃは、少な
    くとも２の整数であり；そして、ｄは、少なくとも１の整数である、方法。
21. 【請求項２１】 Ｐが、ポリアルキレンオキシドである、請求項２０に記載
    の方法。
22. 【請求項２２】 請求項２１に記載の方法であって、前記ポリアルキレンオ
    キシドが、α置換ポリアルキレンオキシド誘導体、ポリエチレングリココール（
    ＰＥＧ）ホモポリマー、ポリプロピレングリコールホモポリマー、アルキルキャ
    ップしたポリエチレンオキシド、ビス−ポリエチレンオキシド、ポリ（アルキレ
    ンオキシド）のコポリマー、およびポリ（アルキレンオキシド）またはその活性
    化誘導体のブロックコポリマーからなる群より選択されるメンバーである、方法
    。
23. 【請求項２３】 前記ポリアルキレンオキシドが、約２００〜約５０，００
    ０の分子量を有する、請求項２２に記載の方法。
24. 【請求項２４】 前記ポリアルキレンオキシドが、約２，０００〜約２０，
    ０００の分子量を有する、請求項２３に記載の方法。
25. 【請求項２５】 前記ポリアルキレンオキシドが、約５，０００の分子量を
    有する、請求項２４に記載の方法。
26. 【請求項２６】 前記ポリアルキレンオキシドが、活性化ポリエチレングリ
    コールである、請求項２３に記載の方法。
27. 【請求項２７】 前記ポリアルキレンオキシドが、ポリエチレンオキシドで
    ある、請求項２３に記載の方法。
28. 【請求項２８】 前記ＩＬ−２−レセプター結合ペプチドが、配列番号１お
    よびその生物学的機能等価物からなる群より選択されるメンバーである、請求項
    ２１に記載の方法。
29. 【請求項２９】 前記ＩＬ−２−レセプター結合ペプチドが、配列番号１〜
    配列番号１１からなる群より選択されるメンバーである、請求項２８に記載の方
    法。
30. 【請求項３０】 前記化学薬剤が、サイトトキシン、トランスフォーミング
    核酸、遺伝子調節因子、標識、抗原、および薬物からなる群より選択される、請
    求項２８に記載の方法。
31. 【請求項３１】 前記スペーサーが、ペプチドを含む、請求項３０に記載の
    方法。
32. 【請求項３２】 前記スペーサーが、Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ（配
    列番号２１）を含む、請求項３１に記載の方法。
33. 【請求項３３】 前記化学薬剤が、アドリアマイシンである、請求項３２に
    記載の方法。
34. 【請求項３４】 他の水溶性ポリマー、リポソーム、および微粒子からなる
    群より選択されるキャリアをさらに含む、請求項３０に記載の方法。
35. 【請求項３５】 前記キャリアが、デキストラン、イヌリン、改変εアミノ
    基を有するポリ（Ｌ−リジン）、ポリ（Ｌ−グルタミン酸）、およびＮ−置換メ
    タクリルアミド含有ポリマーからなる群より選択される水溶性ポリマーである、
    請求項３４に記載の方法。
36. 【請求項３６】 前記ＩＬ−２−レセプター保有細胞が、活性化Ｔ細胞であ
    る、請求項１９に記載の方法。
37. 【請求項３７】 温血動物において化学薬剤をＩＬ−２−レセプター保有細
    胞に細胞内送達する方法であって、 （ａ）（ｉ）水溶性生体適合性ポリマー、（ｉｉ）該ポリマーに共有的に解離
    可能に結合した該化学薬剤、および（ｉｉｉ）該ポリマーに共有結合したＩＬ−
    ２−レセプター結合ペプチドを含むリガンドの少なくとも２コピー、を含む組成
    物を提供する工程；および （ｂ）前記リガンドが該ＩＬ−２−レセプター保有細胞上のＩＬ−２レセプタ
    ーに接触および結合し、そして該組成物のエンドサイトーシスを誘起する条件下
    で、該組成物の有効量を該温血動物に全身投与する工程、 を包含する、方法。
38. 【請求項３８】 請求項３７に記載の方法であって、前記組成物が、Ｐ−［
    Ｔ_a−Ｌ−Ｓ_b−Ａ］_cおよび［Ａ−Ｓ_b］_d−Ｐ−［Ｔ_a−Ｌ］_cからなる群より選
    択される式を有し、ここで、Ｌは、前記リガンドであり；Ａは、前記化学薬剤で
    あり；ＳおよびＴは、スペーサーであり、ここで、少なくともＳは、生分解性で
    あり；Ｐは、該リガンドとの共有結合を形成することに適合可能な官能基を有す
    る水溶性ポリマーであり；ａおよびｂは、０または１の整数であり；ｃは、少な
    くとも２の整数であり；そして、ｄは、少なくとも１の整数である、方法。
39. 【請求項３９】 Ｐが、ポリアルキレンオキシドである、請求項３８に記載
    の方法。
40. 【請求項４０】 請求項３９に記載の方法であって、前記ポリアルキレンオ
    キシドが、α置換ポリアルキレンオキシド誘導体、ポリエチレングリココール（
    ＰＥＧ）ホモポリマー、ポリプロピレングリコールホモポリマー、アルキルキャ
    ップしたポリエチレンオキシド、ビス−ポリエチレンオキシド、ポリ（アルキレ
    ンオキシド）のコポリマー、およびポリ（アルキレンオキシド）またはその活性
    化誘導体のブロックコポリマーからなる群より選択されるメンバーである、方法
    。
41. 【請求項４１】 前記ポリアルキレンオキシドが、約２００〜約５０，００
    ０の分子量を有する、請求項４０に記載の方法。
42. 【請求項４２】 前記ポリアルキレンオキシドが、約２，０００〜約２０，
    ０００の分子量を有する、請求項４１に記載の方法。
43. 【請求項４３】 前記ポリアルキレンオキシドが、約５，０００の分子量を
    有する、請求項４２に記載の方法。
44. 【請求項４４】 前記ポリアルキレンオキシドが、活性化ポリエチレングリ
    コールである、請求項４１に記載の方法。
45. 【請求項４５】 前記ポリアルキレンオキシドが、ポリエチレンオキシドで
    ある、請求項４１に記載の方法。
46. 【請求項４６】 前記ＩＬ−２−レセプター結合ペプチドが、配列番号１お
    よびその生物学的機能等価物からなる群より選択されるメンバーである、請求項
    ３９に記載の方法。
47. 【請求項４７】 前記ＩＬ−２−レセプター結合ペプチドが、配列番号１〜
    配列番号１１からなる群より選択されるメンバーである、請求項４６に記載の方
    法。
48. 【請求項４８】 前記化学薬剤が、サイトトキシン、トランスフォーミング
    核酸、遺伝子調節因子、標識、抗原、および薬物からなる群より選択される、請
    求項４６に記載の方法。
49. 【請求項４９】 前記スペーサーが、ペプチドを含む、請求項４８に記載の
    方法。
50. 【請求項５０】 前記スペーサーが、Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ（配
    列番号２１）を含む、請求項４９に記載の方法。
51. 【請求項５１】 前記化学薬剤が、アドリアマイシンである、請求項５０に
    記載の方法。
52. 【請求項５２】 他の水溶性ポリマー、リポソーム、および微粒子からなる
    群より選択されるキャリアをさらに含む、請求項４８に記載の方法。
53. 【請求項５３】 前記キャリアが、デキストラン、イヌリン、改変εアミノ
    基を有するポリ（Ｌ−リジン）、ポリ（Ｌ−グルタミン酸）、およびＮ−置換メ
    タクリルアミド含有ポリマーからなる群より選択される水溶性ポリマーである、
    請求項５２に記載の方法。
54. 【請求項５４】 前記ＩＬ−２−レセプター保有細胞が、活性化Ｔ細胞であ
    る、請求項３７に記載の方法。