JP2003516172A - 再狭窄予防用放射性被覆用具およびその製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 ステントなどの放射性血管形成用具の製造に導く迅速かつ再現性のある電気化学的方法を提供する。 【解決手段】 血管形成用具に荷電分子を析出させるのに適した条件下で、血管形成用具と荷電分子含有溶液とを接触させる工程を有する方法。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】

本発明は放射性被覆された用具および該用具に放射性同位体含有分子を析出さ
せることにより放射性被覆用具を製造する方法に関するものである。

【０００２】

【従来技術とその課題】

冠血管形成術の処置は狭心症症状を緩和するものの、高い率で発生する再狭窄
（６ヵ月以内に３０ないし４０％）が、介入性心臓病学における“アキレス腱”
だといえる。世界中で一年間に実施される冠動脈処置は１００万件を超え、再狭
窄の経済効果は相当なものである。再狭窄を予防する効果的な戦略があれば、す
べての冠動脈処置後に適用して年間少なくとも１０億米ドル（ＵＳ＄）の市場が
もたらされることが推定される。再狭窄を予防する薬物学的方法は、これまでに
効果を示しておらず、冠動脈ステント処置のみが再狭窄率を低下させている（ST
RESS BENESTENT試験）。しかし、ステントの配置は、しばしば、ステント内再狭
窄として知られる新たな冠動脈閉塞を誘発する。ステント配置患者の約２０％が
ステント内再狭窄を発生させる。そこで最近になって再狭窄の発生を予防するた
めに、イオン放射に基づく新しい治療戦略が提案された。冠動脈内放射線療法は
、種々の動物モデルで内膜過形成を防止することが報告された（Raizner et al.
, Chap 3: 287-296, Vascular Brachytherapy, Second Edition. Armonk, NY, 1
999）。臨床開発では、患者の（ワイヤおよびステントに基づく）動脈管内放射
線療法が血管形成術後の再狭窄予防において安全かつ有効であると報告された（
Condado et al., Circulation, 90(3): 727-732, 1997; Teirstein et al., N.
Engl. J Med., 336(24): 1697-1703, 1997; King et al., Circulation, 97: 20
25-2030, 1998; Waksman et al., Circulation, 101: 1895-1898, 2000）。今日
まで、再狭窄予防のために、ベータ線源またはガンマ線源の使用や、中間エネル
ギーまたは高ベータエネルギーの選択に関してのコンセンサスはない（Coursey
and Ravinder, Physics Today, vol. 53(4): 25-30, 2000）。しかし、ベータ線
放射源（すなわち、³²Ｐ、⁹⁰Ｙ、⁹⁰Ｓｒ／Ｙ）は、ガンマ線放射同位体（¹⁹²Ｉ
ｒ）を用いたこれまでの治験と比べて、作業者の被爆を大幅に低減できる。近接
照射療法に比較して、ステントに基づく放射療法は血管収縮と過度の新生内膜増
殖を防止するように作用する。

【０００３】 介入性心臓病学において放射性ステントを広範に使用するにあたって、主な限
界の一つとして、放射性同位体の選択や物理的半減期の関数としての活性により
金属製人工器官の臨床処方（直径、長さ、型など）が複雑となることがある。こ
れらの規格に関して、このような活性な用具を日常的業務の中で製造、常備する
ことは困難や問題を生じる。克服が最も困難である点としては、市販のステント
を使用時に規定量の放射能を有するように操作する必要があることがあげられる
。ステントの規格（比放射能、長さ、直径など）が求められるものと異なる可能
性があるため、製造業者によって予め負荷されたステントを使用することが理想
的とはいえない。

【０００４】 Hafeliら（Biomaterials 19: 925-933, 1998）はステント上にレニウム（¹⁸⁶
Ｒｅまたは¹⁸⁸Ｒｅ）を電気メッキする方法を提案した。しかし、Hafeliらによ
れば、レニウムは単独では巧く電気穿孔せず、コバルトとともに析出させねばな
らなかった。そしてコバルトとの同時析出は析出層にクラッキングやフレーキン
グを引き起こした。これらの問題を解決するために、Hafeliらは予め析出させた
コバルト・レニウム層の上に金の第二層を析出させ、コバルトを被覆してクラッ
キングを防止した。Hafeliらはまた、これにより貴金属である金が析出の際にレ
ニウムと競合して、金がレニウム上に優先して析出すると教示している。

【０００５】 従って、血管形成術後の再狭窄を防止するために、ステントなどの用具表面に
放射能放射源（³²Ｐ−オリゴヌクレオチド由来など）をクラッキングやフレーキ
ングなく強力かつ迅速に析出させる方法が大いに望まれる。³²Ｐ−標識オリゴヌ
クレオチドが新生内膜過形成を阻害する能力を有することは、すでにインビトロ
のモデルで証明されている（Fareh et al., Circulation, 99: 1477-1489, 1999
）。

【０００６】

【課題を解決するための手段】

本発明の目的の一つは、血管形成術後の再狭窄予防のために、血管形成用具の
表面に放射性分子を強力かつ迅速に析出させる方法を提供することである。

【０００７】 本発明により、血管形成用具に荷電分子を析出させる方法が提供される。本方
法は、血管形成用具に荷電分子を析出させるのに適した条件下で、血管形成用具
と荷電分子含有溶液とを接触させる工程を有するものである。荷電分子は、好ま
しくは、放射性荷電分子である。

【０００８】 該析出は受動的であっても、能動的であってもよい。能動的析出とは、電気メ
ッキを包含することを意味する。

【０００９】 受動析出においては、血管形成用具が表面にステンレス鋼または金を有するこ
とが好ましい。金表面では、荷電分子が、該血管形成用具上の金に付着するため
のチオール含有基を有することが好ましい。ステンレス鋼では、化学的または電
気化学的処理により機能化するために、その表面が酸化ケイ素（ＳｉＯ₂）また
はケイ素（Ｓｉ）で被覆されていることが好ましい。電気化学的機能化のために
ステンレス鋼表面を直接使用してもよい。

【００１０】 また、本発明により、受動析出または電気メッキにより血管形成用具に荷電分
子を固定化する方法が提供される。電気的方法（電気メッキ）では、該方法は血
管形成用具と荷電分子含有溶液間に電位差を印加する工程が含まれ、当該荷電分
子は電位差と逆の電荷をもち、それによって血管形成用具上に電気メッキを行う
。

【００１１】 電位差は該用具上に被覆すべき分子の電荷によるものであり、正であっても負
であってもよい。

【００１２】 好ましくは、放射性分子はベータ放射体を含有する。好適なベータ放射体はア
ンチモン−１２４、セシウム−１３４、セシウム−１３７、カルシウム−４５、
カルシウム−４７、セリウム−１４１、塩素−３６、コバルト−６０、ユウロピ
ウム−１５２、金−１９８、ハフニウム−１８１、ホルミウム−１６６、ヨウ素
−１３１、イリジウム−１９２、鉄−５９、ルテチウム−１７７、水銀−２０３
、ネオジム−１４７、ニッケル−６３、リン−３２、リン−３３、レニウム−１
８６、ロジウム−１０６、ルビジウム−８６、ルテニウム−１０６、サマリウム
−１５３、スカンジウム−４６、銀−１１０ｍ、ストロンチウム−８９、ストロ
ンチウム−９０、イオウ−３５、テクネチウム−９９、テルビウム−１６０、ツ
リウム−１７０、タングステン−１８８、イットリウム−９０およびキセノン−
１３３からなる群より選択される。

【００１３】 印加される電位差が正である場合、放射性分子は、好ましくは、放射性ＤＮＡ
またはその類似体、放射性ＲＮＡ、放射性ヌクレオチド、放射性オリゴヌクレオ
チド、放射性Ｈ₂ＰＯ₄、放射性ジエチレントリアミンペンタ酢酸、および放射性
ポリアニオン性複合体からなる群より選択される。より好ましくは、放射性分子
は放射性オリゴヌクレオチドである。該オリゴヌクレオチドは、好ましくは８−
ないし３５−量体のオリゴヌクレオチド、より好ましくは８−ないし２０−量体
のオリゴヌクレオチド、最も好ましくは１５−量体のオリゴヌクレオチドである
。これらの分子は溶液中で陰イオンを形成し、従って、血管形成用具上に吸引さ
れる。

【００１４】 印加される電位差が負である場合、分子は、好ましくは複合カチオン性ポリペ
プチド、カチオン性ペプチド、デキストラン、ポリアミンおよびキトサンからな
る群より選択される。これらの分子は、好ましくは放射性分子である。これらの
分子は溶液中で陽イオンを形成し、従って、血管形成用具上に吸引される。

【００１５】 該血管形成用具は例えばステントであればよい。好ましくは、該血管形成用具
はステンレス鋼、金、タンタル、ニッケルおよびチタンまたはそれらの合金など
の金属表面を有する。

【００１６】 本発明の方法は、電位差を印加する工程の前に、当該血管形成用具表面の不純
物を除去するために、さらに、該血管形成用具を溶媒、電気化学的処理、または
アルゴン−イオン・スパッタリング処理により清浄する工程を有するか、または
該血管形成用具に電位差を印加する工程の後に、さらに、当該血管形成用具表面
の遊離分子を除去するために、該血管形成用具をすすぐ工程を有する。

【００１７】 本発明の好適な態様では、該血管形成用具の表面は分子被覆のために機能化さ
れる。該血管形成用具は例えば、ジアゾニウム処理により機能化することができ
る。

【００１８】 また、本発明により、冠状動脈および／または末梢動脈での再狭窄を予防する
血管形成用具であって、その表面に放射性荷電分子が析出してなる用具が提供さ
れる。

【００１９】 さらに本発明により、冠状動脈および／または末梢動脈での再狭窄を予防する
方法であって、上記定義の血管形成用具を、かかる治療の必要な患者の冠状動脈
および／または末梢動脈などの潜在的な再狭窄部位に移植することを特徴とする
方法が提供される。

【００２０】 本発明方法は迅速であり、放射性同位体含有分子を効率的に均一に析出させた
放射性被覆用具の入手を可能とするものである。被覆ステントでは、析出処理に
よる悪影響はインビトロ（機械的および無色の性質）でもインビボ（血餅形成、
血栓形成）でも観察されない。金属表面上の³²Ｐ−オリゴヌクレオチドの強固で
有効な結合が得られた。

【００２１】 本発明の方法は迅速であるため、再狭窄予防のために放射線療法と同時にステ
ントを使用することをも可能とする。本発明の方法により、簡単な方法でステン
トなどの用具に放射性同位体担持分子を付着させることが可能となる。本方法は
簡単なため、使用される放射性被覆ステントを移植の直前に調製することが可能
となる。

【００２２】 機能化という用語は、固体表面に試薬を塗布し、分子被覆を可能とすることを
意味するものである。放射性被覆用具という用語は、再狭窄の治療技術に使用さ
れるあらゆる用具を意味するものである。かかる用具に制限はないが、冠状動脈
または末梢動脈における再狭窄部位で、または再狭窄を予防するための血管形成
術の部位で使用されるステントまたは放射線療法用放射性フィラメントであって
もよい。

【００２３】 血管形成用具という用語は、放射線療法が有益と思われる血管形成術に使用す
る用具を意味するものである。かかる用具に制限はないが、ステントまたはワイ
ヤ、あるいは、制御不能増殖性病変の防止のために当業者が考え得るあらゆる用
具である。血管形成用具という用語はまた、血管内治療の目的で、血管内または
これらに限定されるものではないが、胆管または尿道などの他の体内導管内に移
植される人工器官をも包含する。

【００２４】 ＤＮＡ類似体という用語は、二本鎖ＤＮＡ配列、一本鎖ＤＮＡ配列、ＲＮＡま
たはそれらの組み合わせなどの核酸配列を意味するものである。

【００２５】 放射性ポリアニオン性複合体という用語は、少なくとも１個の放射性元素を保
有し、少なくとも１個の負電荷を有する分子を意味するものである。

【００２６】

【発明実施の形態】

本発明により、再狭窄を予防するための用具上に放射性分子を電気メッキする
方法が提供される。

【００２７】 本発明の好適な態様では、析出とは図１に示した定電位／定電流装置（ＥＧ＆
Ｇモデル２７３Ａ）２０による電気メッキであり、本明細書においては以下ポテ
ンシオスタットという。図１は、実際に金およびステンレス鋼表面上に放射性分
子を被覆するために使用される電気化学セルと血管形成用具を模式的に表した図
である。

【００２８】 この態様において、電気メッキは窒素気流下（Ｎ₂）にガラスセル２２内で実
施される。作用電極として作動するステント２４は、参照電極２８（好ましくは
ＰｄＨ₂電極）と対極３０（Ｐｔ板）とともに電解液２６中に浸漬される。これ
ら３個の電極は、それ自体が作用状況を記録するためのコンピューター３２に接
続されたポテンシオスタット２０に接続される。セル２２は、電極線を通す穴を
備えたカバー３４を備える。カバー３４はまた、窒素の循環を可能とするガス導
入口３６とガス排出口３８を備える。

【００２９】 本発明の他の好適な態様では、析出が受動析出であることが挙げられるが、こ
の場合、装置は、ポテンシオスタット２０を必要としない点以外は、図１に示し
たのと同様である。かかる態様において、放射性オリゴヌクレオチドなどの放射
性ポリアニオン性複合体を析出させる方法は、オリゴヌクレオチドにチオール含
有基を付加して修飾する工程を有するものである。チオール含有基としては、例
えば、オリゴヌクレオチドの５'末端に付加した端部にチオール官能基をもつＣ₆ 鎖であってもよい。そのように修飾したオリゴヌクレオチドは³²Ｐまたは他の放
射性元素で標識されていてもよい。金または金被覆ステントは放射標識オリゴヌ
クレオチドを含有する０.１Ｍリン酸カリウム緩衝液（ＫＨ₂ＰＯ₄、ｐＨ７．０
）または純テトラヒドロフラン中でインキュベートする。室温で６０分間のイン
キュベーションの後、ステントを蒸留水ですすぐ。放射性オリゴヌクレオチドは
チオール基を介して金に付着し、放射性被覆ステントが得られる。この好適な態
様は、チオール基に対する金の高い親和性によって起こる受動析出の一例（実施
例Ｉ参照）にすぎない。

【００３０】 受動析出のもう一つの例は、酸化ケイ素（ＳｉＯ₂）またはケイ素（Ｓｉ）に
よる表面被覆と、それに続く基質による表面機能化に基づくものである。このよ
うな本発明のさらなる好適な態様では、ＳｉＯ₂−処理表面は、次いでグリシド
キシ−プロピルトリエトキシシラン（ＧＰＴＳ）で修飾され、Ｓｉ−処理表面は
、四フッ化ホウ酸４−ブロモベンゼンジアゾニウム（ジアゾニウム）により機能
化される。ステンレス鋼表面はＳｉ／ＳｉＯ2での前処理をしなくても、四フッ
化ホウ酸４−ブロモベンゼンジアゾニウムで直接活性化できる。ＧＰＴＳによる
修飾は受動的である（図２）が、ジアゾニウム析出は電気化学的機能化であり、
この場合、図３に示したものと同様の装置が使用される。

【００３１】 図２は酸化ケイ素処理表面のグリシドキシ−プロピルトリエトキシシラン（Ｇ
ＰＴＳ）修飾用の反応槽を示した模式図である。

【００３２】 図２においては、基材をオーブンから出した後、２個のガラスホルダー５０に
おける種々のスロットに入れる。各ホルダーは、シラン化が行われる反応槽５２
に掛けられる。次いで、このもの全体を乾燥Ｎ₂雰囲気のグローブボックス内に
入れる。さらに、グローブボックス内で、ＧＴＰＳ反応化合物を順に反応槽に加
える。攪拌子５４を反応混合物中に入れ、次いで反応槽を閉じ、グローブボック
スから取出す。反応槽を温度制御装置付き水循環器５６に繋ぐ。攪拌を開始し、
ガスタンクから連続的にＮ₂流５８を送り、７０℃で４時間反応を進行させる。

【００３３】 図３はシリコンおよびステンレス鋼表面のブロモベンゼンジアゾニウム機能化
に使用される電気化学セルの模式図である。

【００３４】 図３において、電気化学セル２２としては標準的な三極装置を用いた。使用さ
れた参照電極２８は飽和カロメル電極（ＳＣＥ）であり、対極３０は白金ホイル
（１ｃｍ²）であった。ブロモ−アリールジアゾニウム溶液をサイクリックボル
タンメトリー用電解液として用い、作用電極２４として作用するＳｉまたは３１
６Ｌ基体の表面（面積０.５ｃｍ²）にブロモ−アリールジアゾニウムを付着させ
た。走査型ポテンシオスタットを用い、作用電極に直流電位を印加した。電流−
電圧応答をＸＹレコーダーに記録した。

【００３５】 本発明のこの好適な態様では、放射性オリゴヌクレオチドなどの放射性ポリア
ニオン性複合体の代替析出法としては、オリゴヌクレオチドにアミン含有基を付
加して修飾する工程を含むものがある。該アミン含有基は、オリゴヌクレオチド
の５’末端に付加した例えば末端にアミン官能基をもつＣ₆鎖であってもよい。
そのように修飾したオリゴヌクレオチドは³²Ｐまたは他の放射性元素で標識して
もよい。

【００３６】 この好適な態様はアミン基に対するＧＰＴＳとジアゾニウム基質との高い親和
性により生じる受動析出の一例（実施例Ｉ参照）にすぎない。

【００３７】 本発明のもう一つの態様では、放射性同位体は他の放射性同位体担持分子に付
着させてもよい。

【００３８】 例えば、ステントが陽極（正に荷電）の役割を果たす電気メッキ装置（図１）
の好適な態様では、負に荷電した分子はステント表面への有効な電気メッキに使
用することができる。負に荷電した分子としては、制限されるものではないが、
例えば、標識ＤＮＡまたはＲＮＡ、あるいはその標識類似体、標識ヌクレオチド
、放射性Ｈ₃ＰＯ₄、標識ジエチレントリアミンペンタ酢酸（ＤＴＰＡ）または標
識ポリアニオン性複合体が好適なものとして挙げられる。

【００３９】 ステントが陰極（負に荷電）の役割を果たす場合の電気メッキ装置のさらなる
好適な態様では、正に荷電した分子はステント表面への有効な電気メッキに使用
することができる。かかる正に荷電した分子は、例えば、制限されるものではな
いが、標識複合ポリペプチド、標識カチオン性ペプチド、標識デキストラン、標
識キトサンまたは標識ポリアミンであってもよい。

【００４０】 本発明の一態様により、カテーテル法実験室や放射線腫瘍学部門において、所
望の規格に沿って患者に投与し得る該用具を該用具の移植の直前に準備する、日
常的に実施可能な方法が提供される。ベータ線源（³²Ｐ）などの放射性同位体源
を担持し、長時間にわたり分子を安定にする媒体は、好ましくは短鎖ＤＮＡ配列
（１１個のホスホロチオエート結合により連なった１５−量体のオリゴヌクレオ
チド）である。金についてのＤＮＡ−オリゴヌクレオチドの強固な結合は報告さ
れている（Sellergren et al., Anal. Chem., 68(2): 402-407, 1996）。

【００４１】 二本鎖核酸を用いてステントを被覆する場合には、この二本鎖核酸の第一非放
射性標識鎖を本発明の一態様に従いステントに被覆できる。そして二本鎖核酸の
第二相補鎖を標識し、第一の鎖にアニールすることができる。かかる態様も本発
明が企図するものであり、また放射性被覆用具という用語に包含されるものであ
る。

【００４２】 放射性同位体のβ−放射源が好適ではあるが、他の放射性同位体源も本発明に
従い使用することができる。

【００４３】 放射性同位体源は所定の治療に従い決定される。場合によっては、放射線療法
は患者によって変わり得る。従って、放射性同位体源は放射性同位体源の半減期
、そのエネルギーと所望の放射性同位体源の比活性に基づき決定される。放射性
同位体源の決定は当業者の技量の範囲内にあることである。

【００４４】 好ましくは、放射性分子はβ−放射体を含んでなる。好適なβ−放射体はアン
チモン−１２４、セシウム−１３４、セシウム−１３７、カルシウム−４５、カ
ルシウム−４７、セリウム−１４１、塩素−３６、コバルト−６０、ユウロピウ
ム−１５２、金−１９８、ハフニウム−１８１、ホルミウム−１６６、ヨウ素−
１３１、イリジウム−１９２、鉄−５９、ルテチウム−１７７、水銀−２０３、
ネオジム−１４７、ニッケル−６３、リン−３２、リン−３３、レニウム−１８
６、ロジウム−１０６、ルビジウム−８６、ルテニウム−１０６、サマリウム−
１５３、スカンジウム−４６、銀−１１０ｍ、ストロンチウム−８９、ストロン
チウム−９０、イオウ−３５、テクネチウム−９９、テルビウム−１６０、ツリ
ウム−１７０、タングステン−１８８、イットリウム−９０およびキセノン−１
３３からなる群より選択される。 〔電気メッキ〕 （ステンレス鋼ステントの特性と表面の前処理） 好適な態様では、長さ１３〜２３ｍｍのＡＣＳマルチリンクＲＸ・ＤＵＥＴ^TM ステント（ガイダント・ヴァスキュラー・インターベンション（Guidant Vascul
ar Intervention)、サンタ・クララ、ＣＡ）を本発明に従い使用した。市販の３
１６Ｌステンレス鋼サンプルを、直径１ｃｍ、厚さ０.２ｍｍのディスク（グッ
ドフェロウ・ケンブリッジ社（Goodfellow Cambridge Ltd.)、ハンチンドン（Hu
ntingdon）、英国）の形状で使用した。

【００４５】 析出または電気メッキは、被覆する表面を清浄にし、汚染物を除去するとより
効果的である。そのために、被覆すべきステントは先ず有機溶媒（アセトンまた
はメタノール）で洗浄し汚染物を除いた後風乾した。表面清浄化のもう一つの例
は、アルゴン−イオンスパッタリングである。ステントまたはディスクのスパッ
タは以下の条件で実施した： 開始時の槽圧 １.３×１０^-8 torr アルゴン導入後の圧 １.３×１０^-5 torr エネルギー ２keＶ 焦点電圧 １keＶ 電流 ４μＡ 時間 ２０分（ディスク） ５分（ステント） また、ディスクおよびステントの移動は減圧下で行った。

【００４６】 ステンレス鋼表面（ステントまたはディスク）の浄化には、電気化学的方法を
使用することもできる。電解研磨はグローブボックス内で電圧発生器を用いて実
施した。洗浄溶液は１Ｍシュウ酸と１５％過酸化水素水からなるものとした。２
個の電極のみを使用した：一方を試料とし、もう一方はＰｔディスクとした。こ
れらの電極に１０Ｖの電圧を１０分間印加し、次いで十分にすすぎ、図１に示し
た電気化学析出セルに移した。 （金ステントの特性と表面の前処理） 好適な態様では、長さ１３〜２３ｍｍのニロイヤル（NIROYAL^TM）２４ｃｔ金
メッキステント（ボストン・サイエンティフィック・アイルランド社（Boston S
cientific Ireland Ltd.）、バリーブリット（Ballybrit）ビジネス・パーク、
ゴールウエイ、アイルランド）を本発明に従って使用した。直径１ｃｍのディス
ク（グッドフェロウ（Goodfellow））形状の金メッキ３１６Ｌディスクも使用し
た。

【００４７】 金表面はそのままで金メッキに使用してもよいし、またはステンレス鋼金属に
ついてすでに記載した条件下でアルゴン−イオンスパッタにより清浄化して用い
てもよい。 （³²Ｐ−オリゴヌクレオチド化合物） 本発明の一態様においては、ベータ線源（³²Ｐ）を担持させるために選択され
る媒体は、短鎖ＤＮＡ配列（１１個のホスホロチオエート結合により連なった１
５−量体のオリゴヌクレオチド；特許番号５,８２１,３５４）である。この短鎖
ＤＮＡ配列は非常に安定であり、細胞増殖の防止に有効であって、副作用もない
ことが報告されている（Fareh et al., Circulation, 99: 1477-1484, 1999）。

【００４８】 受動析出の態様では、放射性分子はその５'末端に、例えば、アミン官能基を
担持するＣ₆鎖のようなアミン含有基、またはチオール官能基を担持するＣ₆鎖を
有する。アミン−およびチオール−修飾オリゴヌクレオチドは³²Ｐまたは他の放
射性元素により標識されていてもよい。 （³²Ｐ−オリゴヌクレオチドの電気メッキ） 電気メッキは２５０μＬの酢酸ナトリウム緩衝液（０.２Ｍ−ＣＨ₃ＣＨ₂ＣＯ₂ Ｎａ・３Ｈ₂Ｏ）（ｐＨ８.５）に希釈した³²Ｐ−オリゴヌクレオチド（７５μＣ
ｉ／５０μＬ水）を入れた電気化学セル中で実施される。電解液と³²Ｐ−オリゴ
ヌクレオチド溶液を入れた電気化学セル中、金属ステントを陽極に固定し、陰極
は直径２ｍｍ、長さ５ｃｍの白金ワイヤまたはＰｔ板とした。

【００４９】 電気メッキは、標準的なポテンシオスタット２０を用い、室温で１５分間１ボ
ルト（５０〜６０ｍＡ）の電圧を印加することにより実施される。

【００５０】 電気メッキは何らかの後処理を施した場合、ステント表面に最初の³²Ｐ−オリ
ゴヌクレオチドの２.５％を結合させることができる。

【００５１】 有効な電気メッキ用電解液のもう一つの例としてはリン酸水溶液がある。

【００５２】 電解液としてのリン酸水溶液中、金表面（電極およびメッキステント）上の１
５−量体オリゴヌクレオチドの電気メッキについて評価するために、ＤＮＡの吸
着を検討する方法を用いた。簡単に説明すると、サイクリックボルタンメトリー
（ＣＶ）を電気化学的水晶振動子ナノバランス・システムと組み合わせて使用し
、金表面上の有機分子の吸着について検討した。結晶の振動数変動とサイクリッ
クボルタンモグラムが同時に記録されるので、この方法により全電位窓および単
一のサイクルにおいて金上に吸着された分子の量を測定することが可能となる。
図５はｐＨ６.９８〜７.０のリン酸緩衝溶液中における電位の関数として、金電
極上の１５−量体オリゴヌクレオチド（３.８μＭ）の表面濃度（τ）を示す図
である。掃引速度は１００ｍＶ／ｓである。矢印は掃引開始点を示す。

【００５３】 図５に示すように、１５−量体の電気メッキは分極電位が増大するに連れて増
大し、最大Ｅ＝１.１〜１.２Ｖ ｖｓ．ＳＣＥ（カロメル参照電極）に達する（
図５参照）。１.１〜１.２Ｖを超える電位では、分子の表面濃度が減少し始める
。この現象は電解液としてリン酸緩衝液を用いたときにこれらの電位で起こる金
の酸化として説明することができる。

【００５４】 １５−量体分子の幾つかの異なる濃度で同じ手法を繰返した後、定電位での吸
着等温線がこれらの条件で得られた。この例では、金メッキステント（ニロイヤ
ル）と市販の金電極（０.１６８４ｃｍ²；アルドリッチ（Aldrich）カナダ）を
使用した。金線をＫｅｌ−Ｆ棒に挿入し、その一端のみを溶液と接触させるよう
にした。Ｋｅｌ−Ｆは酸性および塩基性水性媒体に不活性であることから、支持
材料として選択した。電極は０.５μｍのアルミナ懸濁液で研磨した。リン酸水
溶液はＮａ₂ＨＰＯ₄・７Ｈ₂Ｏ（１７.８８９７ｇ／Ｌ）とＫＨ₂ＰＯ₄（９.０７
２５ｇ／Ｌ）の溶液から調製した。

【００５５】 図６はリン酸緩衝液溶液中、ｐＨ＝６.９８〜７.０、ｐＨ＝８.０４およびｐ
Ｈ＝５.５９における、金電極上、Ｅ＝１.１Ｖ ＳＣＥ（カロメル参照電極）で
の、１５−量体オリゴヌクレオチドの吸着等温図を示す。図６には、検討した３
種の緩衝液溶液での１.１Ｖ ｖｓ．ＳＣＥにおける金上の非放射性１５−量体オ
リゴヌクレオチドの吸着等温図が示されている。ここでは、ｐＨ＝６.９８〜７.
０で、オリゴヌクレオチドの濃度の増大により、約２０μＭの濃度で平坦となる
まで表面濃度が増大することが確認されるだろう。この点を越えると、１５−量
体オリゴヌクレオチドの濃度を増大しても表面濃度は上昇しない。同様の実験を
ｐＨ＝５.５９およびｐＨ＝８.０４にて実施したところ、金上の１５−量体オリ
ゴヌクレオチドの電気メッキはｐＨ＝６.９８〜７.０でより効果的であることが
示された。また、分極を６０℃で実施した場合には、より高い電気メッキが得ら
れた。

【００５６】 図７はリン酸緩衝液溶液中、ｐＨ＝６.９８〜７.０、金電極上、Ｅ＝１.１Ｖ
、ＳＣＥ（カロメル参照電極）での８−量体オリゴヌクレオチドの吸着等温図を
示す。図７に示されるように、８−量体オリゴヌクレオチドの電気メッキは、室
温で１５分間、１.２Ｖの電圧を印加場合に、金電極表面上で有効である。より
高い電気メッキは分極を６０℃で実施したときに得られた。同様の吸着等温図が
３５−量体オリゴヌクレオチドについても報告された。

【００５７】 金ステント（１６ｍｍ）を室温で³²Ｐ−オリゴヌクレオチド（８００μＣｉ）
の存在下に１５〜３０分間１.２Ｖで分極した場合、２.５〜３μＣｉの放射能が
ステント表面上に検出され（被覆効率０.３％に相当）、表面統合性の変化は見
られなかった。 （本発明において有用な他の電解液） ³²Ｐ−オリゴヌクレオチドの析出を０.１Ｍ−ＨＣｌＯ₄中、窒素（気泡）下に
、ＳＣＥ（飽和カロメル電極）に対し１.４５Ｖの電位、かつ６０±１０℃の温
度で実施した。この好適な態様では、６０℃で高い被覆率が得られた。しかし、
ステンレス鋼または金表面の³²Ｐ−オリゴヌクレオチドによる被覆は室温でも実
行可能であり、有効である。

【００５８】 電気化学セル（図１）は３つの電極から構成された：ｉ）作用電極（我々のサ
ンプル）；ii）対電極（白金ディスク）；および参照電極（Ｐｄ／ＰｄＨ₂）；
各測定前に較正する。

【００５９】 参照電極は０.１Ｍ−ＨＣｌＯ₄中３０分間、Ｐｄディスク上に水素を流すこと
により作製する。

【００６０】 分極時間と当初活性の影響を１６ｍｍのもとの金ステントで評価したが、この
場合、表面の浄化は行わなかった。同様に、予め１Ｍシュウ酸と１５％過酸化水
素水で浄化した１８ｍｍのステンレス鋼ステントを使用して評価した。また、電
気メッキの長さ（５、１５、３０および６０分）に関しても評価した。

【００６１】 図８は電気メッキレベルに対する被覆時間の影響を示す（１６ｍｍ−金メッキ
ステント）。図８に示すように、５〜１５分で最大の被覆が得られたことから、
金ステント上への³²Ｐ−オリゴヌクレオチドの迅速かつ効果的な電気メッキが示
唆された（平均１.６％）。図９は、５分間での³²Ｐ−オリゴヌクレオチドの活
性を増大させたとき（０.２５、０.５、１および２ｍＣｉ）、金表面への被覆が
活性に依存的であることを示す。しかし、低い開始活性でより有効な被覆が得ら
れた（０.２５０、０.５００、１.０および２.０ｍＣｉに対し、それぞれ１.９
％、１.２％、０.８％および０.５％）。これらの条件において（被覆５分）は
、０.５％（平均）の有効な被覆が得られ、例えば、１６ｍｍ−金ステント上の
１０μＣｉの活性に対応した。同様のレベルは金表面をアルゴン−イオンスパッ
タにより清浄化した場合にも得られた。

【００６２】 図１０は電気メッキレベルに対する被覆時間の影響を示す（１８ｍｍ−ステン
レス鋼ステント）。図１０に示されるように、同様に、５から１５〜２０分で０
.５％の同様の被覆が得られ、６０分でステンレス鋼表面上に最大の被覆（１.０
％）が得られたことから、ステンレス鋼ステント上への³²Ｐ−オリゴヌクレオチ
ドの迅速かつ効果的な電気メッキが示唆された。³²Ｐ−オリゴヌクレオチドの活
性を増大（０.２５、０.５、１および２ｍＣｉ）について試験したところ、０.
２５〜１.０ｍＣｉ（平均２.５〜３.０μＣｉ）の活性をもつ同様の被覆が得ら
れたが、より高い活性（２.０ｍＣｉ）はステンレス鋼表面上に有意量の³²Ｐ−
オリゴヌクレオチドをもたらした（図１１）。これらの条件において（被覆１５
分）は、例えば、１８ｍｍ−ステンレス鋼ステント上の１０μＣｉの活性に対応
する、５％（平均）の有効な被覆が得られた。図１１は被覆効率に対する³²Ｐ−
オリゴヌクレオチドの活性増大の影響を示す（１８ｍｍ−ステンレス鋼ステント
）。同様のレベルはステンレス鋼表面をアルゴン−イオンスパッタにより清浄化
した場合にも得られた。 （表面上の³²Ｐ−オリゴヌクレオチド分布） 電解液としてＨＣｌＯ₄を用いて、被覆ステント（ｎ＝６金メッキステントお
よびｎ＝６ステンレス鋼ステント）を４時間走査し、ステントの長軸に沿って金
属表面上に³²Ｐ−オリゴヌクレオチドを可視化した。ステントの放射能均一性は
、ガイガーカウンターの正面に０.５ｍｍのスリットを設け、コンピューター制
御ステッピングモニターにより０.５ｍｍの間隔でステント上を移動させて測定
した。

【００６３】 被覆ステントの走査グラフから、金メッキステント（図９）およびステンレス
鋼ステント（図１２および１３）の金属表面上に、高度に均一な電気メッキが得
られることが示された。図１２および１３は³²Ｐ−オリゴヌクレオチドでそれぞ
れ被覆した金メッキステントまたはステンレス鋼ステントの走査グラフを示す。

【００６４】 同様の均一な放射能分布は、電解液として酢酸ナトリウム緩衝液を用い、図１
の装置にて電気メッキを実施した場合にも得られた。 （放射性ステントの後処理（インビトロ保持）） 酢酸ナトリウム緩衝液電解液中での電気メッキに続いて、放射性ステントを室
温２４時間蒸留水中で洗い風乾するか、または３０分間超音波処理した。生物処
理を検討するために、放射性ステントを、５μｌのヌクレアーゼＳ₁（３３２Ｕ
／μｌ）、１μｌのエキソヌクレアーゼIII（大腸菌；１００Ｕ／μｌ）、およ
び１μｌのホスホジエステラーゼ（０.５Ｕ／μｌ）からなる酵素溶液を追加し
たＤＭＥＭと、１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ、ギブコ（Gibco））の存在下に、
３７℃で一夜インキュベートした。水中で２４時間、被覆ステントをインキュベ
ートした後、当初被覆溶液の８０％が金属表面上に残ったのに対し、さらに超音
波処理をした（３０分）ものはその残存率が５０％に低下した。３７℃、１４〜
１６時間での、被覆ステントの生物処理（擬血液酵素溶液）後、処理前の電気メ
ッキレベルと比較したところ、放射能量の１２％がステント上に残存していた。

【００６５】 ０.１Ｍ−ＨＣｌＯ₄電解液中での電気メッキに続いて、放射性被覆ステント（
ｎ＝８、１６ｍｍの金メッキステント）を、２０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ、ギブ
コ（Gibco））の含有ＤＭＥＭからなる生物媒体中、３７℃、一定攪拌下でイン
キュベートした。これらの物理的生物的条件は、擬似インビボ条件として使用さ
れた。培地サンプル（５０μＬ）をインキュベーションの１５分、３０分、６０
分、１２０分、２４０分および２４時間後に計測した。図１４はインビトロ条件
（擬似血液条件）において１６ｍｍ−金メッキステント表面に被覆した³²Ｐ−オ
リゴヌクレオチドの保持プロファイルを示す。図１４に示されるように、金被覆
ステントを３７℃でインキュベーションしたところ、６０分、１２０分および２
４０分で、それぞれ平均５０％、４０％および３５％の残存活性に相当する³²Ｐ
−オリゴヌクレオチドの溶出が進行した。血液疑似条件下での処理８日目まで、
最初の電気メッキレベルと比較して１０〜１２％の有意な活性が維持されること
が示される（図１４）。

【００６６】 同様に、放射性被覆ステント（ｎ＝８；１８ｍｍのステンレス鋼ステント）を
、２０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ、ギブコ）含有ＤＭＥＭからなる生物媒体中、３
７℃、一定の攪拌下にインキュベートした。培地サンプル（５０μＬ）をインキ
ュベーションの１５分、３０分、６０分、１２０分、２４０分および１８時間後
に計測した。図１５はインビトロ条件（血液疑似条件）において１８ｍｍ−ステ
ンレス鋼ステント表面に被覆した³²Ｐ−オリゴヌクレオチドの保持プロファイル
を示す。図１５に示すように、ステンレス鋼被覆ステントを３７℃でインキュベ
ーションしたところ、６０分から２４０分後に平均４５％から３７〜４０％の残
存活性に相当する³²Ｐ−オリゴヌクレオチドの溶出が進行した。血液疑似条件下
の処理１日後、４０％の有意な維持活性が報告される；初期電気メッキレベルの
平均１０％未満がインキュベーションの７日まで残存した。

【００６７】 放射性ステントの簡単な製造方法と血管形成用具からの規定どおりの放射性分
子の放出を組み合わせることにより、再狭窄の予防方法として、古典的なステン
トによる放射線とステントによる薬理学的方法が想定できる。

【００６８】 提案された放射性被覆を強化するために、金属表面を簡単な方法で埋め込むこ
とができる。一連の生物学的被覆と１〜２％の寒天溶液について試験したところ
、分子の維持が、金属表面からの³²Ｐ−オリゴヌクレオチドの除去量を減少させ
ることにより改善されることを示した。医療用途にすでに使用されている（パリ
レンなどの）ポリマー被覆が血管形成用具を埋め込むために用いられる。

【００６９】 この薬理学的方法を支持するために、被覆ステントからの正確な溶出は、ベー
タ線粒子の動脈内徐放性で得られたデータに基づいて、再狭窄を防止するための
局所的ドラッグデリバリー用具として作用し得る。その場合、用具の埋め込みを
行わずに実施する。 （放射性被覆ステントの機械的性質） 被覆ステントについて、色調および剛性などに関する一般的観察を行った。機
械的性質は疑似インビボ・ステントを配置することにより評価した。ステントを
脱気した風船の上に載せた後、その風船を１０〜１４気圧まで膨らませ、ステン
ト展開の許容範囲を評価した。本発明による被覆ステントでは物理的変化（色調
および配置能力、表面劣化、表面のクラッキングやフレーキング）はが観察され
なかった。Ｘ線透視下に、被覆ステントの可視度は修飾されなかった。 （ブタ冠状動脈への放射性被覆ステントの移植） 家畜のブタにケタミン、アザペロンおよびアトロピンを筋肉内注射して沈静化
させ、チオペンタール・ナトリウム（ｉｖ）により麻酔した。ブタに挿管し、そ
の手技の間、イソフラン２％と酸素の混合物を通気した。８Ｆｒの案内カテーテ
ルを０.０３５Ｊガイドワイヤにより、Ｘ線透視下、大腿鞘から上行大動脈に進
めた。次いで、ガイドワイヤを取除き、案内カテーテルを標的血管の開口部に位
置させた。血管造影を実施する前に、０.３ｍｇ／ｍＬ濃度のニトログリセリン
溶液１ｍｌを一度に冠動脈内注射する。次いで、血管造影は少なくとも２ヶ所の
近位直交視野にて実施し、ブタの右冠動脈（ＲＣＡ）または左回旋動脈（ＬＣＸ
）の標的部位を可視化した。定量的な冠動脈造影（ＱＣＡ）測定を実施し、適切
なステント移植のために血管サイズを査定した。ステントを標的部位に進め、１
０〜１２気圧、３０秒間の風船膨張を実施し、ステントを適切に配置した（１頭
につき２個のステント）。ステントの移植に続いて、風船を萎ませ、カテーテル
を引き抜いた。コントロールの血管造影を次いで実施し、残余の管腔狭窄または
血管壁切開を記録した。もし痙攣が記録されたなら、０.３ｍｇ／ｍＬ濃度のニ
トログリセリン溶液１ｍｌを冠動脈内注射した。 （肉眼による観察） ステントの移植後、処置を施したブタを６時間、観察下に維持した。致死量の
ＫＣｌでブタを安楽死させた後、心筋層を切開し、ステントを移植した動脈を取
出した。心臓とステント移植動脈を肉眼で観察し、被覆ステント移植の潜在的な
副作用（血栓形成、血液凝固など）を探査した。次いでステントを動脈から取出
し、ステント表面上³²Ｐ−オリゴヌクレオチドのインビボ保持を計測し評価した
。この例では、電解液として酢酸ナトリウム緩衝液を用い、電気化学装置として
図１のものを使用して生成した被覆ステントを冠動脈移植に使用した。

【００７０】 蛍光透視と肉眼観察では、本発明による放射性処理ステントの移植に関連する
副作用は、心筋層組織にも、移植動脈にも見られなかった。被覆ステントの放射
能レベル測定から、ステント移植後の６時間、最初の被覆活性の４５％がステン
ト表面上に残存するが、標的動脈においては低い放射能が検出される（３％未満
）ことが明らかになり、これより４４％を越える薬物が６時間以内にステント表
面から冠状動脈洗浄により除去されることが示唆された。ブタ冠状動脈における
ステント表面に被覆した³²Ｐ−オリゴヌクレオチドの生物学的半減期を約５.５
〜６時間と判定した。被覆した³²Ｐ−オリゴヌクレオチドの滞在時間は、インフ
ィルトレーター（Infiltrator）（登録商標）カテーテルを用いて、液状の³²Ｐ
−オリゴヌクレオチドを直接壁内投与した場合（０.５１時間）よりも１１倍な
いし１２倍高い。 （被覆ステントからの³²Ｐ−オリゴヌクレオチド溶出のインビボ追跡） 血管内検出装置を介してカテーテルからの放射線を検出により、ステントから
の放射性分子溶出のプロファイルが鮮明かつ連続的に確認できる。この試験では
、金メッキステント（１６ｍｍ）とステンレス鋼ステント（１８ｍｍ）を使用し
た。ＨＣｌＯ₄を電解液として用いて生成した³²Ｐ−被覆ステントを、上記のよ
うにブタの冠状動脈（ＬＣＸおよびＲＣＡ）に３時間移植した。

【００７１】 血管内検出装置を用いて放射能レベルを３０秒ごとに測定し、ステントからの
局部的³²Ｐ−オリゴヌクレオチド溶出を追跡した。連続的な血管内モニターの終
末点（３時間まで）で、致死量のＫＣｌでブタを屠殺した。心筋層を切開してス
テント移植動脈を取出した。この実験の間に血液を収集した。

【００７２】 図１６および１７はそれぞれ、ブタ冠状動脈に移植したときの被覆³²Ｐ−オリ
ゴヌクレオチド金メッキステント（１６ｍｍ）と被覆³²Ｐ−オリゴヌクレオチド
・ステンレス鋼ステント（１８ｍｍ）の保持プロファイルを示す。図１６および
１７に示すように、³²Ｐ−オリゴヌクレオチドを電気的に被覆した金メッキステ
ントとステンレス鋼ステントの溶出プロファイルは２つの要素により特徴づけら
れる：すなわち、最初の３０分間の急速な溶出と、３時間まで維持される有意に
持続する放射能である。血液サンプル、ステント移植した冠状動脈および隣接位
の心筋層において検出された放射能は僅かであった。

【００７３】 本発明は以下の実施例を参照することによりさらに容易に理解されるが、これ
らの実施例は発明を説明するためのものであり、発明の範囲を限定するものでは
ない。

【００７４】

【実施例】

〔実施例Ｉ〕 チオール修飾オリゴヌクレオチドを用いる受動析出 （５'−末端チオール部分を含む³²Ｐ−オリゴヌクレオチドでの金メッキステン
トの被覆） ニロイヤル（NIROYAL）金ステント（６ｍｍ）をピランハ（piranha）溶液（３
０％Ｈ₂Ｏ₂：９８％Ｈ₂ＳＯ₂＝３：７ｖ／ｖ）に７０℃で２０分間入れた。次い
で、ステントをＨ₂Ｏ、アセトン、エタノールおよびＨ₂Ｏで洗浄し、Ｎ₂ガス気
流下で乾燥した。次に、予め洗浄したステントを、５'−末端チオール部分含有^{3 2} Ｐ−オリゴヌクレオチド１００μＣｉを含むリン酸カリウム緩衝液（Ｋ₂ＨＰＯ ₄ −ＫＨ₂ＰＯ₄；ｐＨ７.０）またはテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）に入れ、室温
で６０分間インキュベートした。これらの放射性ステントをさらに５０ｍｌのＨ ₂ Ｏで３回すすいだ。

【００７５】 受動析出の後、ニロイヤル金ステントの放射能レベルは、純テトラヒドロフラ
ン中でインキュベートした場合１.１５μＣｉ、そしてリン酸カリウム緩衝液中
でインキュベートした場合０.０２μＣｉであったが、これらはそれぞれ受動析
出効率１.１５％および０.０２％に相当する。固定化に続き、ステントをブタ血
液中で絶えず攪拌しながら３７℃で２日間インキュベートした。次いで、ステン
トを生物的条件から取出して水ですすぎ、残存する放射能をシンチレーション・
カウンターにより評価した。³²Ｐ−オリゴヌクレオチドを追加したテトラヒドロ
フラン中でインキュベートしたニロイヤル金ステントは、インキュベーションの
１日後および２日後に、それぞれ最初の活性の３３％（０.８０μＣｉの残存活
性）および６６％（０.３４μＣｉの残存活性）を喪失した。リン酸カリウム緩
衝液中でインキュベートしたステントはインキュベーションの１日後に当初活性
の１００％を喪失した。 〔実施例II〕 ＧＰＴＳ修飾による受動析出 （グリシドキシ−プロピルトリエトキシシラン（ＧＰＴＳ）によるＳｉ／ＳｉＯ ₂ の機能化） 基体： Ｓｉ／ＳｉＯ₂の基体は賽の目に切断した４インチのウエハ（トロニックスマ
イクロシステムズ（Tronics Microsystems）、グルノーブル（Grenoble））から
取出した１ｃｍ×１ｃｍのプレートとした。Ｓｉ（１００）は１０¹⁵ｃｍ^-3の密
度にリンをドープしたｎ−タイプであり、０.３μｍの厚さを有する。このＳｉ
に熱処理により厚さ１５０ÅのＳｉＯ₂層を被覆する。Ｓｉ板の背面はＣｒ／Ａ
ｕオーム接触により被覆した。

【００７６】 清浄： 基体を沸騰アセトン（(sprectrograde)、アルドリッチ（Aldrich））中に５分
間入れ、次いでさらに５分間沸騰メタノール（スプレクトログレイド(sprectrog
rade)、アルドリッチ）中に入れた。次いで、基体をスルホクロム酸（９５ｍＬ
の濃硫酸（Ｈ₂ＳＯ₄）を５ｍＬのジクロム酸カリウム飽和水溶液に加えて調製）
に室温で４分間浸漬した。

【００７７】 基体を蒸留脱イオン（ｄ−ｄ）水で１５秒間すすぎ、次いで、沸騰ｄ−ｄ水に
１０分間入れた。これに続いて、基体をＮ₂流で乾燥し、１４０℃で１時間、ク
リーンオーブン内（大気中）に入れた。

【００７８】 ＧＰＴＳ修飾： 基体を図２に示した反応槽と共に乾燥Ｎ₂雰囲気のグローブボックス内に置い
た。グローブボックス内に入れた後、基体を反応槽に入れ、次いでＧＰＴＳ反応
化合物を順番に反応槽に入れた。反応混合物は１１１ｍＬのｏ−キシレン（９８
％、窒素気流下で封入、アルドリッチ）、次いで、１２.５ｍＬのＧＰＴＳ（純
度９８％、フルカ（Fluka））、そして次に１.５ｍＬのジイソプロピル−エチル
アミン（純度９９.５％、窒素気流下で封入、アルドリッチ）とした（１処理単
位８基体について）。磁気攪拌棒を反応混合物に加え、次いで、反応槽を閉じ、
グローブボックスから取出した。

【００７９】 反応槽を水循環器に接続し、温度をコントロールする。攪拌を開始し、連続し
てＮ₂を流しながら７０℃で４時間反応を進める。

【００８０】 反応槽から基体を取出し、エタノール（分光学等級、アルドリッチ）中に５分
間（室温で）浸け、大気下で乾燥させる。最後に基体を個々に５ｍＬエチルエー
テル（純度９９.９％、ＨＰＬＣ等級、アルドリッチ）入りのガラスバイアルに
貯蔵する。 （ＧＰＴＳ修飾Ｓｉ／ＳｉＯ₂基体上³²Ｐ−オリゴヌクレオチドの固定化） ³²Ｐ−オリゴヌクレオチド（４０μＣｉ、５'末端にＣ₆アミノリンカーをもつ
ものともたないもの）を直接ＧＰＴＳ修飾基体表面に析出させる。³²Ｐ−オリゴ
ヌクレオチド溶液を湿潤雰囲気下にＫＯＨ中０.０１Ｍ濃度でＧＰＴＳ表面に２
時間反応させた。次いで、基体表面をｄ−ｄ水ですすいだ。 （結果） ＧＰＴＳで機能化したＳｉ／ＳｉＯ₂基体上に受動析出を行った場合、³²Ｐ−
オリゴヌクレオチドそのものに比べ、アミノリンカーをもつ³²Ｐ−オリゴヌクレ
オチドでの被覆は５倍に増大し（それぞれ当初活性の０.０２％に対し０.１０％
）、アミノリンカーをもつ³²Ｐ−オリゴヌクレオチドのＧＰＴＳに対する親和性
が、非修飾³²Ｐ−オリゴヌクレオチドよりも良好であることと一致した。さらに
、固定化したアミノリンカーをもつ³²Ｐ−オリゴヌクレオチドによる放射能レベ
ルは当初の³²Ｐ−オリゴヌクレオチド濃度で３００μＣｉまで増大し、この時点
で横ばいになる様子を見せた。固定化効率は２２℃（当初活性の０.１６％）、
３７℃（当初活性の０.１９％）および７０℃（当初活性の１.０％）と比較した
場合、５２℃の反応温度でより良好であった。析出を５２℃で実施した場合、室
温の条件と比較して被覆の１２〜１３倍の増大が見られた。 〔実施例III〕 ジアゾニウム修飾による受動析出 （ブロモベンゼンジアゾニウムによるＳｉとステンレス鋼基体（ディスクおよび
ステント）の電気化学的機能化、および³²Ｐ−オリゴヌクレオチドの固定化） Ｓｉおよび３１６Ｌステンレス鋼基体を電気化学的に修飾するために使用した
手法は、C. Henry de Villeneuve et al., J. Phys. Chem. B, 101, 2415-2419
(1997)に記載されている。 （試薬および溶媒の純度）

【００８１】

【表１】

【００８２】 基体： ケイ素（Ｓｉ、１００）基体はトロニックス−マイクロシステムズ（Tronics
Microsystems）（グルノーブル（Grenoble）、フランス）から購入し、賽の目に
切断したウエハから取出し、１ｃｍ×１ｃｍとした。Ｓｉはリンをドープし（ｎ
−タイプ）、１０¹⁵ｃｍ^-3の密度とした。金／クロム・フィルムを減圧下にＳｉ
基体の析出させ、背面にオーム接触を付与した。ステンレス鋼基体は３１６Ｌタ
イプ（Ｆｅ／Ｃｒ１８／Ｎｉ１０／Ｍｏ３）で、直径１０ｍｍ、厚さ０.２ｍｍ
であり、グッドフェロウ・ケンブリッジ社（Goodfellow Cambridge Ltd.)（ハン
チンドン（Huntingdon）、英国）から入手した。好適な態様においては、長さ１
８ｍｍのＡＣＳ多リンクＲＸ・ＤＵＥＴ（商標）ステント（ガイダント・ヴァス
キュラー・インターベンション（Guidant Vascular Intervention)、サンタ・ク
ララ、ＣＡ）を本発明に従い使用した。ステントは実験用に９ｍｍの長さに切断
した。

【００８３】 電気化学的機能化に先立ち、両タイプの基体は清浄／エッチングされた。Ｓｉ
基体はトリクロロエチレン、アセトン、およびメタノール、それぞれに１分ずつ
浸漬することで清浄化した。これら基体を蒸留脱イオン（ｄ−ｄ）水ですすぎ、
Ｎ₂流で乾燥した。次いで、Ｓｉ基体をフッ化水素酸中１分間、次いで緩衝化フ
ッ化アンモニウム中６分間化学的にエッチングを施し、再度１回すすいでＮ₂で
乾燥した。３１６Ｌ基体（ディスクおよびステント）を５０ｍＬの王水（濃ＨＣ
ｌ：ＨＮＯ₃、４：１（ｖ／ｖ））に１分間浸漬し、ｄ−ｄ水ですすぎ、Ｎ₂流で
乾燥した。 （ブロモベンゼンジアゾニウム塩溶液） ０.１Ｍ−Ｈ₂ＳＯ₄と２％ＨＦ中の四フッ化ホウ酸ブロモベンゼンジアゾニウ
ムの２０ｍＭ水溶液は、０.５４ｇの四フッ化ホウ酸ブロモベンゼンジアゾニウ
ム、０.５６ｍＬの濃Ｈ₂ＳＯ₄および４ｍＬの濃ＨＦを１００ｍＬのｄ−ｄ水に
溶解することにより調製した。この溶液に約２０分間Ｎ₂を吹き込むことで脱気
した。 （電気化学的機能化） 電気化学セルは標準的な三電極装置とした。使用した参照電極は飽和のカロメ
ル電極（ＳＣＥ）であり、フィッシャー・サイエンティフィック（Fisher Scien
tific）より購入した。対電極は白金ホイル（１ｃｍ²）とした。電気化学セルを
図３に図示する。

【００８４】 作用電極として機能するＳｉまたは３１６Ｌ基体表面にブロモ−アリールジア
ゾニウムを付着させるために、ブロモ−アリールジアゾニウム溶液をサイクリッ
クボルタンメトリー用の電解液として使用した。走査型定電位装置（ＥＧ＆Ｇプ
リンストン（Princeton）アプライド・リサーチ・モデル３６２）を使用し、作
用電極に直流電位を印加した。電流−電圧応答はＸＹレコーダー（フィリップス
（Phillips）、モデルＰＭ８１４３）に記録した。

【００８５】 シングル−サイクル・ボルタンモグラムを各基体について実施した。電流範囲
は１ｍＡに設定した。還元的走査はＳＣＥに対して−０.３Ｖの開始電位から−
１.９Ｖの最終電位までとして実施し、そして戻した。掃引速度は１００ｍＶ／
ｓに設定した。Ｓｉ基体の修飾により典型的な還元波（〜−１.５Ｖに）が観察
された。電流密度はより大きな電導性を有する３１６Ｌ基体でより大きく、還元
波はＳＣＥに対し〜−０.９５で観察される。 （結果） この一連の実験において、ステンレス鋼表面（ディスクまたはステント）はす
べてジアゾニウムで機能化され、次いで、５０μＬ（５０μＣｉ）の³²Ｐ−オリ
ゴヌクレオチド／アミノリンカー溶液の存在下に被覆された。これらは前記同様
にすすいだ。５'末端にＣ６アミノリンカーをもつ³²Ｐ−オリゴヌクレオチドは
この態様のために使用した。

【００８６】 ディスク表面を用いると、初期活性５０μＣｉの³²Ｐ−オリゴヌクレオチド／
アミノリンカー溶液により、固定化効率は９.５μＣｉ／ｃｍ²のレベルに達した
（９.５％の効率）。初期活性を３００μＣｉに上昇すると被覆効率は１５.８μ
Ｃｉ／ｃｍ²に改善された。被覆は２２℃および７０℃の反応温度に比べて、５
２℃でより良好であった。析出を５２℃で実施した場合、室温条件の場合と比較
して、被覆の増大は２〜３倍であった（８〜１８μＣｉ／ｃｍ²）。図４に示す
ように、被覆レベルは反応時間（５分、１５分、３０分、６０分および１２０分
）と共に増大した。放射能は反応時間と共に経時的に増大し、５分で約６μＣｉ
／ｃｍ²から１２０分で１７.５μＣｉ／ｃｍ²となる。ディスクの機能化に比較
して、固定化効率はステンレス鋼ステント表面で１.４倍増大した。³²Ｐ−オリ
ゴヌクレオチド／アミノリンカー溶液の平均２.９３μＣｉが９ｍｍのステンレ
ス鋼ステントに被覆されたが、これは１８ｍｍのステントでは２４.５μＣｉ／
ｃｍ²のレベルまたは５.９μＣｉの活性に相当する。これらの実験条件はステン
ト表面の³²Ｐ−オリゴヌクレオチド／アミノリンカー溶液による被覆の迅速性を
明瞭に示している。

【００８７】 図４はブロモベンゼンジアゾニウム処理ステンレス鋼表面の³²Ｐ−オリゴヌク
レオチド被覆に対する受動析出時間の影響を示す。

【００８８】 本発明をその具体的な態様と関連させて説明したが、さらなる修飾が可能であ
り、本出願は本発明の原理に一般的に従う本発明の変更、使用、または適応をも
その範囲とし、本発明が関わる技術の範囲内で既知または慣行となっている場合
、また前記の本質的な特徴に当てはまり得る場合、そして上記特許請求項の範囲
に従うものである場合、本開示からのかかる発展をも包含することを理解された
い。

【図面の簡単な説明】

【図１】 本発明の好適な態様としての電気メッキ装置の概略模式図である。

【図２】 受動析出のためのグリシドキシ−プロピルトリエトキシシラン（ＧＰＴＳ）修
飾用反応槽を示す概略模式図である。

【図３】 受動析出用にシリコンおよびステンレス鋼表面をジアゾニウム機能化する際に
使用される電気メッキ装置の概略模式図である。

【図４】 ブロモベンゼンジアゾニウム被覆ステンレス鋼表面上に³²Ｐ−オリゴヌクレオ
チドを受動析出させた場合の時間の影響を示した図である。

【図５】 金電極上への１５−量体のオリゴヌクレオチドの電気メッキを電位の関数とし
て表した線グラフを示した図である。

【図６】 異なるｐＨの電解溶液における金電極上への１５−量体のオリゴヌクレオチド
の吸着等温図である。

【図７】 異なる濃度の８−量体オリゴヌクレオチドの金電極上への吸着等温図である。

【図８】 金メッキステントへの放射性１５−量体オリゴヌクレオチドの被覆度に対する
分極時間の影響を示した図である。

【図９】 金メッキステント上への放射性１５−量体オリゴヌクレオチドの被覆度に対す
る活性増大の影響を示した図である。

【図１０】 ステンレス鋼ステント上への放射性１５−量体オリゴヌクレオチドの被覆度に
対する分極時間の影響を示した図である。

【図１１】 ステンレス鋼ステント上への放射性１５−量体オリゴヌクレオチドの被覆度に
対する活性増大の影響を示した図である。

【図１２】 ステントの長軸に沿った金属表面上の放射性分子分布を表す、本発明の電気化
学的方法により被覆した金メッキステントの走査グラフを示した図である。

【図１３】 ステントの長軸に沿った金属表面上の放射性分子の分布を表す、本発明の電気
化学的方法により被覆したステンレス鋼ステントの走査グラフを示した図である
。

【図１４】 金メッキステント表面上に被覆した³²Ｐ−オリゴヌクレオチドのインビトロ保
持率プロファイルの線グラフを示した図である。

【図１５】 ステンレス鋼ステント表面上に被覆した³²Ｐ−オリゴヌクレオチドのインビト
ロ保持率プロファイルの線グラフを示した図である。

【図１６】 ³²Ｐ−オリゴヌクレオチド被覆金ステント（１６ｍｍ）をブタ冠状動脈に移植
した際の保持率プロファイルの線グラフを示した図である。

【図１７】 ³²Ｐ−オリゴヌクレオチド被覆ステンレス鋼ステント（１８ｍｍ）をブタ冠状
動脈に移植した際の保持率プロファイルの線グラフである。

【符号の説明】

２０ 定電位／定電流装置、ポテンシオスタット ２２ セル ２４ 作用電極、ステント ２６ 電解液 ２８ 参照電極 ３０ 対極 ３２ コンピューター ３４ カバー ３６ ガス導入口 ３８ ガス排出口 ４０ 導線 ４２ 導線 ５０ ガラスホルダー ５２ 反応槽 ５４ 攪拌子 ５６ 水循環器 ５８ Ｎ₂流

【手続補正書】特許協力条約第３４条補正の翻訳文提出書

【提出日】平成１３年１１月６日（２００１．１１．６）

【手続補正１】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】全文

【補正方法】変更

【補正の内容】

【発明の名称】 再狭窄予防用放射性被覆用具およびその製造方法

【特許請求の範囲】

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】 本発明は放射性被覆された用具および該用具に放射性同位体含有分子を析出さ
せることにより放射性被覆用具を製造する方法に関するものである。

【０００２】

【従来技術とその課題】 冠血管形成術の処置は狭心症症状を緩和するものの、高い率で発生する再狭窄
（６ヵ月以内に３０ないし４０％）が、介入性心臓病学における“アキレス腱”
だといえる。世界中で一年間に実施される冠動脈処置は１００万件を超え、再狭
窄の経済効果は相当なものである。再狭窄を予防する効果的な戦略があれば、す
べての冠動脈処置後に適用して年間少なくとも１０億米ドル（ＵＳ＄）の市場が
もたらされることが推定される。再狭窄を予防する薬物学的方法は、これまでに
効果を示しておらず、冠動脈ステント処置のみが再狭窄率を低下させている（ST
RESS BENESTENT試験）。しかし、ステントの配置は、しばしば、ステント内再狭
窄として知られる新たな冠動脈閉塞を誘発する。ステント配置患者の約２０％が
ステント内再狭窄を発生させる。そこで最近になって再狭窄の発生を予防するた
めに、イオン放射に基づく新しい治療戦略が提案された。冠動脈内放射線療法は
、種々の動物モデルで内膜過形成を防止することが報告された（Raizner et al.
, Chap 3: 287-296, Vascular Brachytherapy, Second Edition. Armonk, NY, 1
999）。臨床開発では、患者の（ワイヤおよびステントに基づく）動脈管内放射
線療法が血管形成術後の再狭窄予防において安全かつ有効であると報告された（
Condado et al., Circulation, 90(3): 727-732, 1997; Teirstein et al., N.
Engl. J Med., 336(24): 1697-1703, 1997; King et al., Circulation, 97: 20
25-2030, 1998; Waksman et al., Circulation, 101: 1895-1898, 2000）。今日
まで、再狭窄予防のために、ベータ線源またはガンマ線源の使用や、中間エネル
ギーまたは高ベータエネルギーの選択に関してのコンセンサスはない（Coursey
and Ravinder, Physics Today, vol. 53(4): 25-30, 2000）。しかし、ベータ線
放射源（すなわち、³²Ｐ、⁹⁰Ｙ、⁹⁰Ｓｒ／Ｙ）は、ガンマ線放射同位体（¹⁹²Ｉ
ｒ）を用いたこれまでの治験と比べて、作業者の被爆を大幅に低減できる。近接
照射療法に比較して、ステントに基づく放射療法は血管収縮と過度の新生内膜増
殖を防止するように作用する。

【０００３】 介入性心臓病学において放射性ステントを広範に使用するにあたって、主な限
界の一つとして、放射性同位体の選択や物理的半減期の関数としての活性により
金属製人工器官の臨床処方（直径、長さ、型など）が複雑となることがある。こ
れらの規格に関して、このような活性な用具を日常的業務の中で製造、常備する
ことは困難や問題を生じる。克服が最も困難である点としては、市販のステント
を使用時に規定量の放射能を有するように操作する必要があることがあげられる
。ステントの規格（比放射能、長さ、直径など）が求められるものと異なる可能
性があるため、製造業者によって予め負荷されたステントを使用することが理想
的とはいえない。

【０００４】 Hafeliら（Biomaterials 19: 925-933, 1998）はステント上にレニウム（¹⁸⁶
Ｒｅまたは¹⁸⁸Ｒｅ）を電気メッキする方法を提案した。しかし、Hafeliらによ
れば、レニウムは単独では巧く電気穿孔せず、コバルトとともに析出させねばな
らなかった。そしてコバルトとの同時析出は析出層にクラッキングやフレーキン
グを引き起こした。これらの問題を解決するために、Hafeliらは予め析出させた
コバルト・レニウム層の上に金の第二層を析出させ、コバルトを被覆してクラッ
キングを防止した。Hafeliらはまた、これにより貴金属である金が析出の際にレ
ニウムと競合して、金がレニウム上に優先して析出すると教示している。

【０００５】 従って、血管形成術後の再狭窄を防止するために、ステントなどの用具表面に
放射能放射源（³²Ｐ−オリゴヌクレオチド由来など）をクラッキングやフレーキ
ングなく強力かつ迅速に析出させる方法が大いに望まれる。³²Ｐ−標識オリゴヌ
クレオチドが新生内膜過形成を阻害する能力を有することは、すでにインビトロ
のモデルで証明されている（Fareh et al., Circulation, 99: 1477-1489, 1999
）。

【０００６】 国際出願公開公報ＷＯ９８／１７３３１には、移植可能な医療用具が開示され ており、そこでは生物活性物質をその上に析出させ、その生物活性物質層の上に 析出させた多孔層を保持させている。しかし、かかる手技は複雑であり、すべて の場合に信頼性があり、かつ再現性があるわけではない。

【０００７】 国際出願公開公報ＷＯ９８／２３２９９は、放射標識したＤＮＡオリゴヌクレ オチドの調製法と使用についてのみ開示しており、本出願に開示したごとき血管 形成用具の調製方法については何ら開示していない。

【０００８】 さらに、国際出願公開公報ＷＯ９９／０２１９５は、放射性放射線不透過性コ ーティングしたステントについて記載している。しかし、放射能はステント上に 析出させた放射線不透過性物質の上に析出させる必要があり、そのことが本出願 に以下開示する方法よりもこの方法を複雑にしている。

【０００９】

【課題を解決するための手段】 本発明の目的の一つは、血管形成術後の再狭窄予防のために、血管形成用具の
表面に放射性分子を強力かつ迅速に析出させる方法を提供することである。

【００１０】 本発明により、血管形成用具に荷電分子を析出させる方法が提供される。本方
法は、血管形成用具に荷電分子を析出させるのに適した条件下で、血管形成用具
と荷電分子含有溶液とを接触させる工程を有するものである。荷電分子は、好ま
しくは、放射性荷電分子である。

【００１１】 該析出は受動的であっても、能動的であってもよい。能動的析出とは、電気メ
ッキを包含することを意味する。

【００１２】 受動析出においては、血管形成用具が表面にステンレス鋼または金を有するこ
とが好ましい。金表面では、荷電分子が、該血管形成用具上の金に付着するため
のチオール含有基を有することが好ましい。ステンレス鋼では、化学的または電
気化学的処理により機能化するために、その表面が酸化ケイ素（ＳｉＯ₂）また
はケイ素（Ｓｉ）で被覆されていることが好ましい。電気化学的機能化のために
ステンレス鋼表面を直接使用してもよい。

【００１３】 また、本発明により、受動析出または電気メッキにより血管形成用具に荷電分
子を固定化する方法が提供される。電気的方法（電気メッキ）では、該方法は血
管形成用具と荷電分子含有溶液間に電位差を印加する工程が含まれ、当該荷電分
子は電位差と逆の電荷をもち、それによって血管形成用具上に電気メッキを行う
。

【００１４】 電位差は該用具上に被覆すべき分子の電荷によるものであり、正であっても負
であってもよい。

【００１５】 好ましくは、放射性分子はベータ放射体を含有する。好適なベータ放射体はア
ンチモン−１２４、セシウム−１３４、セシウム−１３７、カルシウム−４５、
カルシウム−４７、セリウム−１４１、塩素−３６、コバルト−６０、ユウロピ
ウム−１５２、金−１９８、ハフニウム−１８１、ホルミウム−１６６、ヨウ素
−１３１、イリジウム−１９２、鉄−５９、ルテチウム−１７７、水銀−２０３
、ネオジム−１４７、ニッケル−６３、リン−３２、リン−３３、レニウム−１
８６、ロジウム−１０６、ルビジウム−８６、ルテニウム−１０６、サマリウム
−１５３、スカンジウム−４６、銀−１１０ｍ、ストロンチウム−８９、ストロ
ンチウム−９０、イオウ−３５、テクネチウム−９９、テルビウム−１６０、ツ
リウム−１７０、タングステン−１８８、イットリウム−９０およびキセノン−
１３３からなる群より選択される。

【００１６】 印加される電位差が正である場合、放射性分子は、好ましくは、放射性ＤＮＡ
またはその類似体、放射性ＲＮＡ、放射性ヌクレオチド、放射性オリゴヌクレオ
チド、放射性Ｈ₃ＰＯ₄ 、放射性ジエチレントリアミンペンタ酢酸、および放射性
ポリアニオン性複合体からなる群より選択される。より好ましくは、放射性分子
は放射性オリゴヌクレオチドである。該オリゴヌクレオチドは、好ましくは８−
ないし３５−量体のオリゴヌクレオチド、より好ましくは８−ないし２０−量体
のオリゴヌクレオチド、最も好ましくは１５−量体のオリゴヌクレオチドである
。これらの分子は溶液中で陰イオンを形成し、従って、血管形成用具上に吸引さ
れる。

【００１７】 印加される電位差が負である場合、分子は、好ましくは複合カチオン性ポリペ
プチド、カチオン性ペプチド、デキストラン、ポリアミンおよびキトサンからな
る群より選択される。これらの分子は、好ましくは放射性分子である。これらの
分子は溶液中で陽イオンを形成し、従って、血管形成用具上に吸引される。

【００１８】 該血管形成用具は例えばステントであればよい。好ましくは、該血管形成用具
はステンレス鋼、金、タンタル、ニッケルおよびチタンまたはそれらの合金など
の金属表面を有する。

【００１９】 本発明の方法は、電位差を印加する工程の前に、当該血管形成用具表面の不純
物を除去するために、さらに、該血管形成用具を溶媒、電気化学的処理、または
アルゴン−イオン・スパッタリング処理により清浄する工程を有するか、または
該血管形成用具に電位差を印加する工程の後に、さらに、当該血管形成用具表面
の遊離分子を除去するために、該血管形成用具をすすぐ工程を有する。

【００２０】 本発明の好適な態様では、該血管形成用具の表面は分子被覆のために機能化さ
れる。該血管形成用具は例えば、ジアゾニウム処理により機能化することができ
る。

【００２１】 また、本発明により、冠状動脈および／または末梢動脈での再狭窄を予防する
血管形成用具であって、その表面に放射性荷電分子が析出してなる用具が提供さ
れる。

【００２２】 さらに本発明により、冠状動脈および／または末梢動脈での再狭窄を予防する
方法であって、上記定義の血管形成用具を、かかる治療の必要な患者の冠状動脈
および／または末梢動脈などの潜在的な再狭窄部位に移植することを特徴とする
方法が提供される。

【００２３】 本発明方法は迅速であり、放射性同位体含有分子を効率的に均一に析出させた
放射性被覆用具の入手を可能とするものである。被覆ステントでは、析出処理に
よる悪影響はインビトロ（機械的および無色の性質）でもインビボ（血餅形成、
血栓形成）でも観察されない。金属表面上の³²Ｐ−オリゴヌクレオチドの強固で
有効な結合が得られた。

【００２４】 本発明の方法は迅速であるため、再狭窄予防のために放射線療法と同時にステ
ントを使用することをも可能とする。本発明の方法により、簡単な方法でステン
トなどの用具に放射性同位体担持分子を付着させることが可能となる。本方法は
簡単なため、使用される放射性被覆ステントを移植の直前に調製することが可能
となる。

【００２５】 機能化という用語は、固体表面に試薬を塗布し、分子被覆を可能とすることを
意味するものである。放射性被覆用具という用語は、再狭窄の治療技術に使用さ
れるあらゆる用具を意味するものである。かかる用具に制限はないが、冠状動脈
または末梢動脈における再狭窄部位で、または再狭窄を予防するための血管形成
術の部位で使用されるステントまたは放射線療法用放射性フィラメントであって
もよい。

【００２６】 血管形成用具という用語は、放射線療法が有益と思われる血管形成術に使用す
る用具を意味するものである。かかる用具に制限はないが、ステントまたはワイ
ヤ、あるいは、制御不能増殖性病変の防止のために当業者が考え得るあらゆる用
具である。血管形成用具という用語はまた、血管内治療の目的で、血管内または
これらに限定されるものではないが、胆管または尿道などの他の体内導管内に移
植される人工器官をも包含する。

【００２７】 ＤＮＡ類似体という用語は、二本鎖ＤＮＡ配列、一本鎖ＤＮＡ配列、ＲＮＡま
たはそれらの組み合わせなどの核酸配列を意味するものである。

【００２８】 放射性ポリアニオン性複合体という用語は、少なくとも１個の放射性元素を保
有し、少なくとも１個の負電荷を有する分子を意味するものである。

【００２９】

【発明実施の形態】 本発明により、再狭窄を予防するための用具上に放射性分子を電気メッキする
方法が提供される。

【００３０】 本発明の好適な態様では、析出とは図１に示した定電位／定電流装置（ＥＧ＆
Ｇモデル２７３Ａ）２０による電気メッキであり、本明細書においては以下ポテ
ンシオスタットという。図１は、実際に金およびステンレス鋼表面上に放射性分
子を被覆するために使用される電気化学セルと血管形成用具を模式的に表した図
である。

【００３１】 この態様において、電気メッキは窒素気流下（Ｎ₂）にガラスセル２２内で実
施される。作用電極として作動するステント２４は、参照電極２８（好ましくは
ＰｄＨ₂電極）と対極３０（Ｐｔ板）とともに電解液２６中に浸漬される。これ
ら３個の電極は、それ自体が作用状況を記録するためのコンピューター３２に接
続されたポテンシオスタット２０に接続される。セル２２は、電極線を通す穴を
備えたカバー３４を備える。カバー３４はまた、窒素の循環を可能とするガス導
入口３６とガス排出口３８を備える。

【００３２】 本発明の他の好適な態様では、析出が受動析出であることが挙げられるが、こ
の場合、装置は、ポテンシオスタット２０を必要としない点以外は、図１に示し
たのと同様である。かかる態様において、放射性オリゴヌクレオチドなどの放射
性ポリアニオン性複合体を析出させる方法は、オリゴヌクレオチドにチオール含
有基を付加して修飾する工程を有するものである。チオール含有基としては、例
えば、オリゴヌクレオチドの５'末端に付加した端部にチオール官能基をもつＣ₆ 鎖であってもよい。そのように修飾したオリゴヌクレオチドは³²Ｐまたは他の放
射性元素で標識されていてもよい。金または金被覆ステントは放射標識オリゴヌ
クレオチドを含有する０.１Ｍリン酸カリウム緩衝液（ＫＨ₂ＰＯ₄、ｐＨ７．０
）または純テトラヒドロフラン中でインキュベートする。室温で６０分間のイン
キュベーションの後、ステントを蒸留水ですすぐ。放射性オリゴヌクレオチドは
チオール基を介して金に付着し、放射性被覆ステントが得られる。この好適な態
様は、チオール基に対する金の高い親和性によって起こる受動析出の一例（実施
例Ｉ参照）にすぎない。

【００３３】 受動析出のもう一つの例は、酸化ケイ素（ＳｉＯ₂）またはケイ素（Ｓｉ）に
よる表面被覆と、それに続く基質による表面機能化に基づくものである。このよ
うな本発明のさらなる好適な態様では、ＳｉＯ₂−処理表面は、次いでグリシド
キシ−プロピルトリエトキシシラン（ＧＰＴＳ）で修飾され、Ｓｉ−処理表面は
、四フッ化ホウ酸４−ブロモベンゼンジアゾニウム（ジアゾニウム）により機能
化される。ステンレス鋼表面はＳｉ／ＳｉＯ2での前処理をしなくても、四フッ
化ホウ酸４−ブロモベンゼンジアゾニウムで直接活性化できる。ＧＰＴＳによる
修飾は受動的である（図２）が、ジアゾニウム析出は電気化学的機能化であり、
この場合、図３に示したものと同様の装置が使用される。

【００３４】 図２は酸化ケイ素処理表面のグリシドキシ−プロピルトリエトキシシラン（Ｇ
ＰＴＳ）修飾用の反応槽を示した模式図である。

【００３５】 図２においては、基材をオーブンから出した後、２個のガラスホルダー５０に
おける種々のスロットに入れる。各ホルダーは、シラン化が行われる反応槽５２
に掛けられる。次いで、このもの全体を乾燥Ｎ₂雰囲気のグローブボックス内に
入れる。さらに、グローブボックス内で、ＧＴＰＳ反応化合物を順に反応槽に加
える。攪拌子５４を反応混合物中に入れ、次いで反応槽を閉じ、グローブボック
スから取出す。反応槽を温度制御装置付き水循環器５６に繋ぐ。攪拌を開始し、
ガスタンクから連続的にＮ₂流５８を送り、７０℃で４時間反応を進行させる。

【００３６】 図３はシリコンおよびステンレス鋼表面のブロモベンゼンジアゾニウム機能化
に使用される電気化学セルの模式図である。

【００３７】 図３において、電気化学セル２２としては標準的な三極装置を用いた。使用さ
れた参照電極２８は飽和カロメル電極（ＳＣＥ）であり、対極３０は白金ホイル
（１ｃｍ²）であった。ブロモ−アリールジアゾニウム溶液をサイクリックボル
タンメトリー用電解液として用い、作用電極２４として作用するＳｉまたは３１
６Ｌ基体の表面（面積０.５ｃｍ²）にブロモ−アリールジアゾニウムを付着させ
た。走査型ポテンシオスタットを用い、作用電極に直流電位を印加した。電流−
電圧応答をＸＹレコーダーに記録した。

【００３８】 本発明のこの好適な態様では、放射性オリゴヌクレオチドなどの放射性ポリア
ニオン性複合体の代替析出法としては、オリゴヌクレオチドにアミン含有基を付
加して修飾する工程を含むものがある。該アミン含有基は、オリゴヌクレオチド
の５’末端に付加した例えば末端にアミン官能基をもつＣ₆鎖であってもよい。
そのように修飾したオリゴヌクレオチドは³²Ｐまたは他の放射性元素で標識して
もよい。

【００３９】 この好適な態様はアミン基に対するＧＰＴＳとジアゾニウム基質との高い親和
性により生じる受動析出の一例（実施例Ｉ参照）にすぎない。

【００４０】 本発明のもう一つの態様では、放射性同位体は他の放射性同位体担持分子に付
着させてもよい。

【００４１】 例えば、ステントが陽極（正に荷電）の役割を果たす電気メッキ装置（図１）
の好適な態様では、負に荷電した分子はステント表面への有効な電気メッキに使
用することができる。負に荷電した分子としては、制限されるものではないが、
例えば、標識ＤＮＡまたはＲＮＡ、あるいはその標識類似体、標識ヌクレオチド
、放射性Ｈ₃ＰＯ₄、標識ジエチレントリアミンペンタ酢酸（ＤＴＰＡ）または標
識ポリアニオン性複合体が好適なものとして挙げられる。

【００４２】 ステントが陰極（負に荷電）の役割を果たす場合の電気メッキ装置のさらなる
好適な態様では、正に荷電した分子はステント表面への有効な電気メッキに使用
することができる。かかる正に荷電した分子は、例えば、制限されるものではな
いが、標識複合ポリペプチド、標識カチオン性ペプチド、標識デキストラン、標
識キトサンまたは標識ポリアミンであってもよい。

【００４３】 本発明の一態様により、カテーテル法実験室や放射線腫瘍学部門において、所
望の規格に沿って患者に投与し得る該用具を該用具の移植の直前に準備する、日
常的に実施可能な方法が提供される。ベータ線源（³²Ｐ）などの放射性同位体源
を担持し、長時間にわたり分子を安定にする媒体は、好ましくは短鎖ＤＮＡ配列
（１１個のホスホロチオエート結合により連なった１５−量体のオリゴヌクレオ
チド）である。金についてのＤＮＡ−オリゴヌクレオチドの強固な結合は報告さ
れている（Sellergren et al., Anal. Chem., 68(2): 402-407, 1996）。

【００４４】 二本鎖核酸を用いてステントを被覆する場合には、この二本鎖核酸の第一非放
射性標識鎖を本発明の一態様に従いステントに被覆できる。そして二本鎖核酸の
第二相補鎖を標識し、第一の鎖にアニールすることができる。かかる態様も本発
明が企図するものであり、また放射性被覆用具という用語に包含されるものであ
る。

【００４５】 放射性同位体のβ−放射源が好適ではあるが、他の放射性同位体源も本発明に
従い使用することができる。

【００４６】 放射性同位体源は所定の治療に従い決定される。場合によっては、放射線療法
は患者によって変わり得る。従って、放射性同位体源は放射性同位体源の半減期
、そのエネルギーと所望の放射性同位体源の比活性に基づき決定される。放射性
同位体源の決定は当業者の技量の範囲内にあることである。

【００４７】 好ましくは、放射性分子はβ−放射体を含んでなる。好適なβ−放射体はアン
チモン−１２４、セシウム−１３４、セシウム−１３７、カルシウム−４５、カ
ルシウム−４７、セリウム−１４１、塩素−３６、コバルト−６０、ユウロピウ
ム−１５２、金−１９８、ハフニウム−１８１、ホルミウム−１６６、ヨウ素−
１３１、イリジウム−１９２、鉄−５９、ルテチウム−１７７、水銀−２０３、
ネオジム−１４７、ニッケル−６３、リン−３２、リン−３３、レニウム−１８
６、ロジウム−１０６、ルビジウム−８６、ルテニウム−１０６、サマリウム−
１５３、スカンジウム−４６、銀−１１０ｍ、ストロンチウム−８９、ストロン
チウム−９０、イオウ−３５、テクネチウム−９９、テルビウム−１６０、ツリ
ウム−１７０、タングステン−１８８、イットリウム−９０およびキセノン−１
３３からなる群より選択される。 〔電気メッキ〕 （ステンレス鋼ステントの特性と表面の前処理） 好適な態様では、長さ１３〜２３ｍｍのＡＣＳマルチリンクＲＸ・ＤＵＥＴ^TM ステント（ガイダント・ヴァスキュラー・インターベンション（Guidant Vascul
ar Intervention)、サンタ・クララ、ＣＡ）を本発明に従い使用した。市販の３
１６Ｌステンレス鋼サンプルを、直径１ｃｍ、厚さ０.２ｍｍのディスク（グッ
ドフェロウ・ケンブリッジ社（Goodfellow Cambridge Ltd.)、ハンチンドン（Hu
ntingdon）、英国）の形状で使用した。

【００４８】 析出または電気メッキは、被覆する表面を清浄にし、汚染物を除去するとより
効果的である。そのために、被覆すべきステントは先ず有機溶媒（アセトンまた
はメタノール）で洗浄し汚染物を除いた後風乾した。表面清浄化のもう一つの例
は、アルゴン−イオンスパッタリングである。ステントまたはディスクのスパッ
タは以下の条件で実施した： 開始時の槽圧 １.３×１０^-8 torr アルゴン導入後の圧 １.３×１０^-5 torr エネルギー ２keＶ 焦点電圧 １keＶ 電流 ４μＡ 時間 ２０分（ディスク） ５分（ステント） また、ディスクおよびステントの移動は減圧下で行った。

【００４９】 ステンレス鋼表面（ステントまたはディスク）の浄化には、電気化学的方法を
使用することもできる。電解研磨はグローブボックス内で電圧発生器を用いて実
施した。洗浄溶液は１Ｍシュウ酸と１５％過酸化水素水からなるものとした。２
個の電極のみを使用した：一方を試料とし、もう一方はＰｔディスクとした。こ
れらの電極に１０Ｖの電圧を１０分間印加し、次いで十分にすすぎ、図１に示し
た電気化学析出セルに移した。 （金ステントの特性と表面の前処理） 好適な態様では、長さ１３〜２３ｍｍのニロイヤル（NIROYAL^TM）２４ｃｔ金
メッキステント（ボストン・サイエンティフィック・アイルランド社（Boston S
cientific Ireland Ltd.）、バリーブリット（Ballybrit）ビジネス・パーク、
ゴールウエイ、アイルランド）を本発明に従って使用した。直径１ｃｍのディス
ク（グッドフェロウ（Goodfellow））形状の金メッキ３１６Ｌディスクも使用し
た。

【００５０】 金表面はそのままで金メッキに使用してもよいし、またはステンレス鋼金属に
ついてすでに記載した条件下でアルゴン−イオンスパッタにより清浄化して用い
てもよい。 （³²Ｐ−オリゴヌクレオチド化合物） 本発明の一態様においては、ベータ線源（³²Ｐ）を担持させるために選択され
る媒体は、短鎖ＤＮＡ配列（１１個のホスホロチオエート結合により連なった１
５−量体のオリゴヌクレオチド；特許番号５,８２１,３５４）である。この短鎖
ＤＮＡ配列は非常に安定であり、細胞増殖の防止に有効であって、副作用もない
ことが報告されている（Fareh et al., Circulation, 99: 1477-1484, 1999）。

【００５１】 受動析出の態様では、放射性分子はその５'末端に、例えば、アミン官能基を
担持するＣ₆鎖のようなアミン含有基、またはチオール官能基を担持するＣ₆鎖を
有する。アミン−およびチオール−修飾オリゴヌクレオチドは³²Ｐまたは他の放
射性元素により標識されていてもよい。 （³²Ｐ−オリゴヌクレオチドの電気メッキ） 電気メッキは２５０μＬの酢酸ナトリウム緩衝液（０.２Ｍ−ＣＨ₃ＣＨ₂ＣＯ₂ Ｎａ・３Ｈ₂Ｏ）（ｐＨ８.５）に希釈した³²Ｐ−オリゴヌクレオチド（７５μＣ
ｉ／５０μＬ水）を入れた電気化学セル中で実施される。電解液と³²Ｐ−オリゴ
ヌクレオチド溶液を入れた電気化学セル中、金属ステントを陽極に固定し、陰極
は直径２ｍｍ、長さ５ｃｍの白金ワイヤまたはＰｔ板とした。

【００５２】 電気メッキは、標準的なポテンシオスタット２０を用い、室温で１５分間１ボ
ルト（５０〜６０ｍＡ）の電圧を印加することにより実施される。

【００５３】 電気メッキは何らかの後処理を施した場合、ステント表面に最初の³²Ｐ−オリ
ゴヌクレオチドの２.５％を結合させることができる。

【００５４】 有効な電気メッキ用電解液のもう一つの例としてはリン酸水溶液がある。

【００５５】 電解液としてのリン酸水溶液中、金表面（電極およびメッキステント）上の１
５−量体オリゴヌクレオチドの電気メッキについて評価するために、ＤＮＡの吸
着を検討する方法を用いた。簡単に説明すると、サイクリックボルタンメトリー
（ＣＶ）を電気化学的水晶振動子ナノバランス・システムと組み合わせて使用し
、金表面上の有機分子の吸着について検討した。結晶の振動数変動とサイクリッ
クボルタンモグラムが同時に記録されるので、この方法により全電位窓および単
一のサイクルにおいて金上に吸着された分子の量を測定することが可能となる。
図５はｐＨ６.９８〜７.０のリン酸緩衝溶液中における電位の関数として、金電
極上の１５−量体オリゴヌクレオチド（３.８μＭ）の表面濃度（τ）を示す図
である。掃引速度は１００ｍＶ／ｓである。矢印は掃引開始点を示す。

【００５６】 図５に示すように、１５−量体の電気メッキは分極電位が増大するに連れて増
大し、最大Ｅ−１.１〜１.２Ｖ ｖｓ．ＳＣＥ（カロメル参照電極）に達する（
図５参照）。１.１〜１.２Ｖを超える電位では、分子の表面濃度が減少し始める
。この現象は電解液としてリン酸緩衝液を用いたときにこれらの電位で起こる金
の酸化として説明することができる。

【００５７】 １５−量体分子の幾つかの異なる濃度で同じ手法を繰返した後、定電位での吸
着等温線がこれらの条件で得られた。この例では、金メッキステント（ニロイヤ
ル ^TM ）と市販の金電極（０.１６８４ｃｍ²；アルドリッチ（Aldrich）カナダ）
を使用した。金線をＫｅｌ−Ｆ棒に挿入し、その一端のみを溶液と接触させるよ
うにした。Ｋｅｌ−Ｆは酸性および塩基性水性媒体に不活性であることから、支
持材料として選択した。電極は０.５μｍのアルミナ懸濁液で研磨した。リン酸
水溶液はＮａ₂ＨＰＯ₄・７Ｈ₂Ｏ（１７.８８９７ｇ／Ｌ）とＫＨ₂ＰＯ₄（９.０
７２５ｇ／Ｌ）の溶液から調製した。

【００５８】 図６はリン酸緩衝液溶液中、ｐＨ＝６.９８〜７.０、ｐＨ＝８.０４およびｐ
Ｈ＝５.５９における、金電極上、Ｅ＝１.１Ｖ ＳＣＥ（カロメル参照電極）で
の、１５−量体オリゴヌクレオチドの吸着等温図を示す。図６には、検討した３
種の緩衝液溶液での１.１Ｖ ｖｓ．ＳＣＥにおける金上の非放射性１５−量体オ
リゴヌクレオチドの吸着等温図が示されている。ここでは、ｐＨ＝６.９８〜７.
０で、オリゴヌクレオチドの濃度の増大により、約２０μＭの濃度で平坦となる
まで表面濃度が増大することが確認されるだろう。この点を越えると、１５−量
体オリゴヌクレオチドの濃度を増大しても表面濃度は上昇しない。同様の実験を
ｐＨ＝５.５９およびｐＨ＝８.０４にて実施したところ、金上の１５−量体オリ
ゴヌクレオチドの電気メッキはｐＨ＝６.９８〜７.０でより効果的であることが
示された。また、分極を６０℃で実施した場合には、より高い電気メッキが得ら
れた。

【００５９】 図７はリン酸緩衝液溶液中、ｐＨ＝６.９８〜７.０、金電極上、Ｅ−１.１Ｖ
、ＳＣＥ（カロメル参照電極）での８−量体オリゴヌクレオチドの吸着等温図を
示す。図７に示されるように、８−量体オリゴヌクレオチドの電気メッキは、室
温で１５分間、１.２Ｖの電圧を印加場合に、金電極表面上で有効である。より
高い電気メッキは分極を６０℃で実施したときに得られた。同様の吸着等温図が
３５−量体オリゴヌクレオチドについても報告された。

【００６０】 金ステント（１６ｍｍ）を室温で³²Ｐ−オリゴヌクレオチド（８００μＣｉ）
の存在下に１５〜３０分間１.２Ｖで分極した場合、２.５〜３μＣｉの放射能が
ステント表面上に検出され（被覆効率０.３％に相当）、表面統合性の変化は見
られなかった。 （本発明において有用な他の電解液） ³²Ｐ−オリゴヌクレオチドの析出を０.１Ｍ−ＨＣｌＯ₄中、窒素（気泡）下に
、ＳＣＥ（飽和カロメル電極）に対し１.４５Ｖの電位、かつ６０±１０℃の温
度で実施した。この好適な態様では、６０℃で高い被覆率が得られた。しかし、
ステンレス鋼または金表面の³²Ｐ−オリゴヌクレオチドによる被覆は室温でも実
行可能であり、有効である。

【００６１】 電気化学セル（図１）は３つの電極から構成された：ｉ）作用電極（我々のサ
ンプル）；ii）対電極（白金ディスク）；および参照電極（Ｐｄ／ＰｄＨ₂）；
各測定前に較正する。

【００６２】 参照電極は０.１Ｍ−ＨＣｌＯ₄中３０分間、Ｐｄディスク上に水素を流すこと
により作製する。

【００６３】 分極時間と当初活性の影響を１６ｍｍのもとの金ステントで評価したが、この
場合、表面の浄化は行わなかった。同様に、予め１Ｍシュウ酸と１５％過酸化水
素水で浄化した１８ｍｍのステンレス鋼ステントを使用して評価した。また、電
気メッキの長さ（５、１５、３０および６０分）に関しても評価した。

【００６４】 図８は電気メッキレベルに対する被覆時間の影響を示す（１６ｍｍ−金メッキ
ステント）。図８に示すように、５〜１５分で最大の被覆が得られたことから、
金ステント上への³²Ｐ−オリゴヌクレオチドの迅速かつ効果的な電気メッキが示
唆された（平均１.６％）。図９は、５分間での³²Ｐ−オリゴヌクレオチドの活
性を増大させたとき（０.２５、０.５、１および２ｍＣｉ）、金表面への被覆が
活性に依存的であることを示す。しかし、低い開始活性でより有効な被覆が得ら
れた（０.２５０、０.５００、１.０および２.０ｍＣｉに対し、それぞれ１.９
％、１.２％、０.８％および０.５％）。これらの条件において（被覆５分）は
、０.５％（平均）の有効な被覆が得られ、例えば、１６ｍｍ−金ステント上の
１０μＣｉの活性に対応した。同様のレベルは金表面をアルゴン−イオンスパッ
タにより清浄化した場合にも得られた。

【００６５】 図１０は電気メッキレベルに対する被覆時間の影響を示す（１８ｍｍ−ステン
レス鋼ステント）。図１０に示されるように、同様に、５から１５〜２０分で０
.５％の同様の被覆が得られ、６０分でステンレス鋼表面上に最大の被覆（１.０
％）が得られたことから、ステンレス鋼ステント上への³²Ｐ−オリゴヌクレオチ
ドの迅速かつ効果的な電気メッキが示唆された。³²Ｐ−オリゴヌクレオチドの活
性を増大（０.２５、０.５、１および２ｍＣｉ）について試験したところ、０.
２５〜１.０ｍＣｉ（平均２.５〜３.０μＣｉ）の活性をもつ同様の被覆が得ら
れたが、より高い活性（２.０ｍＣｉ）はステンレス鋼表面上に有意量の³²Ｐ−
オリゴヌクレオチドをもたらした（図１１）。これらの条件において（被覆１５
分）は、例えば、１８ｍｍ−ステンレス鋼ステント上の１０μＣｉの活性に対応
する、５％（平均）の有効な被覆が得られた。図１１は被覆効率に対する³²Ｐ−
オリゴヌクレオチドの活性増大の影響を示す（１８ｍｍ−ステンレス鋼ステント
）。同様のレベルはステンレス鋼表面をアルゴン−イオンスパッタにより清浄化
した場合にも得られた。 （表面上の³²Ｐ−オリゴヌクレオチド分布） 電解液としてＨＣｌＯ₄を用いて、被覆ステント（ｎ＝６金メッキステントお
よびｎ＝６ステンレス鋼ステント）を４時間走査し、ステントの長軸に沿って金
属表面上に³²Ｐ−オリゴヌクレオチドを可視化した。ステントの放射能均一性は
、ガイガーカウンターの正面に０.５ｍｍのスリットを設け、コンピューター制
御ステッピングモニターにより０.５ｍｍの間隔でステント上を移動させて測定
した。

【００６６】 被覆ステントの走査グラフから、金メッキステント（図９）およびステンレス
鋼ステント（図１２および１３）の金属表面上に、高度に均一な電気メッキが得
られることが示された。図１２および１３は³²Ｐ−オリゴヌクレオチドでそれぞ
れ被覆した金メッキステントまたはステンレス鋼ステントの走査グラフを示す。

【００６７】 同様の均一な放射能分布は、電解液として酢酸ナトリウム緩衝液を用い、図１
の装置にて電気メッキを実施した場合にも得られた。 （放射性ステントの後処理（インビトロ保持）） 酢酸ナトリウム緩衝液電解液中での電気メッキに続いて、放射性ステントを室
温２４時間蒸留水中で洗い風乾するか、または３０分間超音波処理した。生物処
理を検討するために、放射性ステントを、５μｌのヌクレアーゼＳ₁（３３２Ｕ
／μｌ）、１μｌのエキソヌクレアーゼIII（大腸菌；１００Ｕ／μｌ）、およ
び１μｌのホスホジエステラーゼ（０.５Ｕ／μｌ）からなる酵素溶液を追加し
たＤＭＥＭと、１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ、ギブコ（Gibco））の存在下に、
３７℃で一夜インキュベートした。水中で２４時間、被覆ステントをインキュベ
ートした後、当初被覆溶液の８０％が金属表面上に残ったのに対し、さらに超音
波処理をした（３０分）ものはその残存率が５０％に低下した。３７℃、１４〜
１６時間での、被覆ステントの生物処理（擬血液酵素溶液）後、処理前の電気メ
ッキレベルと比較したところ、放射能量の１２％がステント上に残存していた。

【００６８】 ０.１Ｍ−ＨＣｌＯ₄電解液中での電気メッキに続いて、放射性被覆ステント（
ｎ＝８、１６ｍｍの金メッキステント）を、２０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ、ギブ
コ（Gibco））の含有ＤＭＥＭからなる生物媒体中、３７℃、一定攪拌下でイン
キュベートした。これらの物理的生物的条件は、擬似インビボ条件として使用さ
れた。培地サンプル（５０μＬ）をインキュベーションの１５分、３０分、６０
分、１２０分、２４０分および２４時間後に計測した。図１４はインビトロ条件
（擬似血液条件）において１６ｍｍ−金メッキステント表面に被覆した³²Ｐ−オ
リゴヌクレオチドの保持プロファイルを示す。図１４に示されるように、金被覆
ステントを３７℃でインキュベーションしたところ、６０分、１２０分および２
４０分で、それぞれ平均５０％、４０％および３５％の残存活性に相当する³²Ｐ
−オリゴヌクレオチドの溶出が進行した。血液疑似条件下での処理８日目まで、
最初の電気メッキレベルと比較して１０〜１２％の有意な活性が維持されること
が示される（図１４）。

【００６９】 同様に、放射性被覆ステント（ｎ＝８；１８ｍｍのステンレス鋼ステント）を
、２０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ、ギブコ）含有ＤＭＥＭからなる生物媒体中、３
７℃、一定の攪拌下にインキュベートした。培地サンプル（５０μＬ）をインキ
ュベーションの１５分、３０分、６０分、１２０分、２４０分および１８時間後
に計測した。図１５はインビトロ条件（血液疑似条件）において１８ｍｍ−ステ
ンレス鋼ステント表面に被覆した³²Ｐ−オリゴヌクレオチドの保持プロファイル
を示す。図１５に示すように、ステンレス鋼被覆ステントを３７℃でインキュベ
ーションしたところ、６０分から２４０分後に平均４５％から３７〜４０％の残
存活性に相当する³²Ｐ−オリゴヌクレオチドの溶出が進行した。血液疑似条件下
の処理１日後、４０％の有意な維持活性が報告される；初期電気メッキレベルの
平均１０％未満がインキュベーションの７日まで残存した。

【００７０】 放射性ステントの簡単な製造方法と血管形成用具からの規定どおりの放射性分
子の放出を組み合わせることにより、再狭窄の予防方法として、古典的なステン
トによる放射線とステントによる薬理学的方法が想定できる。

【００７１】 提案された放射性被覆を強化するために、金属表面を簡単な方法で埋め込むこ
とができる。一連の生物学的被覆と１〜２％の寒天溶液について試験したところ
、分子の維持が、金属表面からの³²Ｐ−オリゴヌクレオチドの除去量を減少させ
ることにより改善されることを示した。医療用途にすでに使用されている（パリ
レンなどの）ポリマー被覆が血管形成用具を埋め込むために用いられる。

【００７２】 この薬理学的方法を支持するために、被覆ステントからの正確な溶出は、ベー
タ線粒子の動脈内徐放性で得られたデータに基づいて、再狭窄を防止するための
局所的ドラッグデリバリー用具として作用し得る。その場合、用具の埋め込みを
行わずに実施する。 （放射性被覆ステントの機械的性質） 被覆ステントについて、色調および剛性などに関する一般的観察を行った。機
械的性質は疑似インビボ・ステントを配置することにより評価した。ステントを
脱気した風船の上に載せた後、その風船を１０〜１４気圧まで膨らませ、ステン
ト展開の許容範囲を評価した。本発明による被覆ステントでは物理的変化（色調
および配置能力、表面劣化、表面のクラッキングやフレーキング）はが観察され
なかった。Ｘ線透視下に、被覆ステントの可視度は修飾されなかった。 （ブタ冠状動脈への放射性被覆ステントの移植） 家畜のブタにケタミン、アザペロンおよびアトロピンを筋肉内注射して沈静化
させ、チオペンタール・ナトリウム（ｉｖ）により麻酔した。ブタに挿管し、そ
の手技の間、イソフラン２％と酸素の混合物を通気した。８Ｆｒの案内カテーテ
ルを０.０３５Ｊガイドワイヤにより、Ｘ線透視下、大腿鞘から上行大動脈に進
めた。次いで、ガイドワイヤを取除き、案内カテーテルを標的血管の開口部に位
置させた。血管造影を実施する前に、０.３ｍｇ／ｍＬ濃度のニトログリセリン
溶液１ｍｌを一度に冠動脈内注射する。次いで、血管造影は少なくとも２ヶ所の
近位直交視野にて実施し、ブタの右冠動脈（ＲＣＡ）または左回旋動脈（ＬＣＸ
）の標的部位を可視化した。定量的な冠動脈造影（ＱＣＡ）測定を実施し、適切
なステント移植のために血管サイズを査定した。ステントを標的部位に進め、１
０〜１２気圧、３０秒間の風船膨張を実施し、ステントを適切に配置した（１頭
につき２個のステント）。ステントの移植に続いて、風船を萎ませ、カテーテル
を引き抜いた。コントロールの血管造影を次いで実施し、残余の管腔狭窄または
血管壁切開を記録した。もし痙攣が記録されたなら、０.３ｍｇ／ｍＬ濃度のニ
トログリセリン溶液１ｍｌを冠動脈内注射した。 （肉眼による観察） ステントの移植後、処置を施したブタを６時間、観察下に維持した。致死量の
ＫＣｌでブタを安楽死させた後、心筋層を切開し、ステントを移植した動脈を取
出した。心臓とステント移植動脈を肉眼で観察し、被覆ステント移植の潜在的な
副作用（血栓形成、血液凝固など）を探査した。次いでステントを動脈から取出
し、ステント表面上³²Ｐ−オリゴヌクレオチドのインビボ保持を計測し評価した
。この例では、電解液として酢酸ナトリウム緩衝液を用い、電気化学装置として
図１のものを使用して生成した被覆ステントを冠動脈移植に使用した。

【００７３】 蛍光透視と肉眼観察では、本発明による放射性処理ステントの移植に関連する
副作用は、心筋層組織にも、移植動脈にも見られなかった。被覆ステントの放射
能レベル測定から、ステント移植後の６時間、最初の被覆活性の４５％がステン
ト表面上に残存するが、標的動脈においては低い放射能が検出される（３％未満
）ことが明らかになり、これより４４％を越える薬物が６時間以内にステント表
面から冠状動脈洗浄により除去されることが示唆された。ブタ冠状動脈における
ステント表面に被覆した³²Ｐ−オリゴヌクレオチドの生物学的半減期を約５.５
〜６時間と判定した。被覆した³²Ｐ−オリゴヌクレオチドの滞在時間は、インフ
ィルトレーター（Infiltrator）（登録商標）カテーテルを用いて、液状の³²Ｐ
−オリゴヌクレオチドを直接壁内投与した場合（０.５１時間）よりも１１倍な
いし１２倍高い。 （被覆ステントからの³²Ｐ−オリゴヌクレオチド溶出のインビボ追跡） 血管内検出装置を介してカテーテルからの放射線を検出により、ステントから
の放射性分子溶出のプロファイルが鮮明かつ連続的に確認できる。この試験では
、金メッキステント（１６ｍｍ）とステンレス鋼ステント（１８ｍｍ）を使用し
た。ＨＣｌＯ₄を電解液として用いて生成した³²Ｐ−被覆ステントを、上記のよ
うにブタの冠状動脈（ＬＣＸおよびＲＣＡ）に３時間移植した。

【００７４】 血管内検出装置を用いて放射能レベルを３０秒ごとに測定し、ステントからの
局部的³²Ｐ−オリゴヌクレオチド溶出を追跡した。連続的な血管内モニターの終
末点（３時間まで）で、致死量のＫＣｌでブタを屠殺した。心筋層を切開してス
テント移植動脈を取出した。この実験の間に血液を収集した。

【００７５】 図１６および１７はそれぞれ、ブタ冠状動脈に移植したときの被覆³²Ｐ−オリ
ゴヌクレオチド金メッキステント（１６ｍｍ）と被覆³²Ｐ−オリゴヌクレオチド
・ステンレス鋼ステント（１８ｍｍ）の保持プロファイルを示す。図１６および
１７に示すように、³²Ｐ−オリゴヌクレオチドを電気的に被覆した金メッキステ
ントとステンレス鋼ステントの溶出プロファイルは２つの要素により特徴づけら
れる：すなわち、最初の３０分間の急速な溶出と、３時間まで維持される有意に
持続する放射能である。血液サンプル、ステント移植した冠状動脈および隣接位
の心筋層において検出された放射能は僅かであった。

【００７６】 本発明は以下の実施例を参照することによりさらに容易に理解されるが、これ
らの実施例は発明を説明するためのものであり、発明の範囲を限定するものでは
ない。

【００７７】

【実施例】 〔実施例Ｉ〕 チオール修飾オリゴヌクレオチドを用いる受動析出 （５'−末端チオール部分を含む³²Ｐ−オリゴヌクレオチドでの金メッキステン
トの被覆） ニロイヤル ^TM （NIROYAL ^TM ）金ステント（６ｍｍ）をピランハ（piranha）溶液
（３０％Ｈ₂Ｏ₂：９８％Ｈ₂ＳＯ₂＝３：７ｖ／ｖ）に７０℃で２０分間入れた。
次いで、ステントをＨ₂Ｏ、アセトン、エタノールおよびＨ₂Ｏで洗浄し、Ｎ₂ガ
ス気流下で乾燥した。次に、予め洗浄したステントを、５'−末端チオール部分
含有³²Ｐ−オリゴヌクレオチド１００μＣｉを含むリン酸カリウム緩衝液（Ｋ₂
ＨＰＯ₄−ＫＨ₂ＰＯ₄；ｐＨ７.０）またはテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）に入れ
、室温で６０分間インキュベートした。これらの放射性ステントをさらに５０ｍ
ｌのＨ₂Ｏで３回すすいだ。

【００７８】 受動析出の後、ニロイヤル ^TM 金ステントの放射能レベルは、純テトラヒドロフ
ラン中でインキュベートした場合１.１５μＣｉ、そしてリン酸カリウム緩衝液
中でインキュベートした場合０.０２μＣｉであったが、これらはそれぞれ受動
析出効率１.１５％および０.０２％に相当する。固定化に続き、ステントをブタ
血液中で絶えず攪拌しながら３７℃で２日間インキュベートした。次いで、ステ
ントを生物的条件から取出して水ですすぎ、残存する放射能をシンチレーション
・カウンターにより評価した。³²Ｐ−オリゴヌクレオチドを追加したテトラヒド
ロフラン中でインキュベートしたニロイヤル金ステントは、インキュベーション
の１日後および２日後に、それぞれ最初の活性の３３％（０.８０μＣｉの残存
活性）および６６％（０.３４μＣｉの残存活性）を喪失した。リン酸カリウム
緩衝液中でインキュベートしたステントはインキュベーションの１日後に当初活
性の１００％を喪失した。 〔実施例II〕 ＧＰＴＳ修飾による受動析出 （グリシドキシ−プロピルトリエトキシシラン（ＧＰＴＳ）によるＳｉ／ＳｉＯ ₂ の機能化） 基体： Ｓｉ／ＳｉＯ₂の基体は賽の目に切断した４インチのウエハ（トロニックスマ
イクロシステムズ（Tronics Microsystems）、グルノーブル（Grenoble））から
取出した１ｃｍ×１ｃｍのプレートとした。Ｓｉ（１００）は１０¹⁵ｃｍ^-3の密
度にリンをドープしたｎ−タイプであり、０.３μｍの厚さを有する。このＳｉ
に熱処理により厚さ１５０ÅのＳｉＯ₂層を被覆する。Ｓｉ板の背面はＣｒ／Ａ
ｕオーム接触により被覆した。

【００７９】 清浄： 基体を沸騰アセトン（(sprectrograde)、アルドリッチ（Aldrich））中に５分
間入れ、次いでさらに５分間沸騰メタノール（スプレクトログレイド(sprectrog
rade)、アルドリッチ）中に入れた。次いで、基体をスルホクロム酸（９５ｍＬ
の濃硫酸（Ｈ₂ＳＯ₄）を５ｍＬのジクロム酸カリウム飽和水溶液に加えて調製）
に室温で４分間浸漬した。

【００８０】 基体を蒸留脱イオン（ｄ−ｄ）水で１５秒間すすぎ、次いで、沸騰ｄ−ｄ水に
１０分間入れた。これに続いて、基体をＮ₂流で乾燥し、１４０℃で１時間、ク
リーンオーブン内（大気中）に入れた。

【００８１】 ＧＰＴＳ修飾： 基体を図２に示した反応槽と共に乾燥Ｎ₂雰囲気のグローブボックス内に置い
た。グローブボックス内に入れた後、基体を反応槽に入れ、次いでＧＰＴＳ反応
化合物を順番に反応槽に入れた。反応混合物は１１１ｍＬのｏ−キシレン（９８
％、窒素気流下で封入、アルドリッチ）、次いで、１２.５ｍＬのＧＰＴＳ（純
度９８％、フルカ（Fluka））、そして次に１.５ｍＬのジイソプロピル−エチル
アミン（純度９９.５％、窒素気流下で封入、アルドリッチ）とした（１処理単
位８基体について）。磁気攪拌棒を反応混合物に加え、次いで、反応槽を閉じ、
グローブボックスから取出した。

【００８２】 反応槽を水循環器に接続し、温度をコントロールする。攪拌を開始し、連続し
てＮ₂を流しながら７０℃で４時間反応を進める。

【００８３】 反応槽から基体を取出し、エタノール（分光学等級、アルドリッチ）中に５分
間（室温で）浸け、大気下で乾燥させる。最後に基体を個々に５ｍＬエチルエー
テル（純度９９.９％、ＨＰＬＣ等級、アルドリッチ）入りのガラスバイアルに
貯蔵する。 （ＧＰＴＳ修飾Ｓｉ／ＳｉＯ₂基体上³²Ｐ−オリゴヌクレオチドの固定化） ³²Ｐ−オリゴヌクレオチド（４０μＣｉ、５'末端にＣ₆アミノリンカーをもつ
ものともたないもの）を直接ＧＰＴＳ修飾基体表面に析出させる。³²Ｐ−オリゴ
ヌクレオチド溶液を湿潤雰囲気下にＫＯＨ中０.０１Ｍ濃度でＧＰＴＳ表面に２
時間反応させた。次いで、基体表面をｄ−ｄ水ですすいだ。 （結果） ＧＰＴＳで機能化したＳｉ／ＳｉＯ₂基体上に受動析出を行った場合、³²Ｐ−
オリゴヌクレオチドそのものに比べ、アミノリンカーをもつ³²Ｐ−オリゴヌクレ
オチドでの被覆は５倍に増大し（それぞれ当初活性の０.０２％に対し０.１０％
）、アミノリンカーをもつ³²Ｐ−オリゴヌクレオチドのＧＰＴＳに対する親和性
が、非修飾³²Ｐ−オリゴヌクレオチドよりも良好であることと一致した。さらに
、固定化したアミノリンカーをもつ³²Ｐ−オリゴヌクレオチドによる放射能レベ
ルは当初の³²Ｐ−オリゴヌクレオチド濃度で３００μＣｉまで増大し、この時点
で横ばいになる様子を見せた。固定化効率は２２℃（当初活性の０.１６％）、
３７℃（当初活性の０.１９％）および７０℃（当初活性の１.０％）と比較した
場合、５２℃の反応温度でより良好であった。析出を５２℃で実施した場合、室
温の条件と比較して被覆の１２〜１３倍の増大が見られた。 〔実施例III〕 ジアゾニウム修飾による受動析出 （ブロモベンゼンジアゾニウムによるＳｉとステンレス鋼基体（ディスクおよび
ステント）の電気化学的機能化、および³²Ｐ−オリゴヌクレオチドの固定化） Ｓｉおよび３１６Ｌステンレス鋼基体を電気化学的に修飾するために使用した
手法は、C. Henry de Villeneuve et al., J. Phys. Chem. B, 101, 2415-2419
(1997)に記載されている。 （試薬および溶媒の純度）

【００８４】

【表１】 基体： ケイ素（Ｓｉ、１００）基体はトロニックス−マイクロシステムズ（Tronics
Microsystems）（グルノーブル（Grenoble）、フランス）から購入し、賽の目に
切断したウエハから取出し、１ｃｍ×１ｃｍとした。Ｓｉはリンをドープし（ｎ
−タイプ）、１０¹⁵ｃｍ^-3の密度とした。金／クロム・フィルムを減圧下にＳｉ
基体の析出させ、背面にオーム接触を付与した。ステンレス鋼基体は３１６Ｌタ
イプ（Ｆｅ／Ｃｒ１８／Ｎｉ１０／Ｍｏ３）で、直径１０ｍｍ、厚さ０.２ｍｍ
であり、グッドフェロウ・ケンブリッジ社（Goodfellow Cambridge Ltd.)（ハン
チンドン（Huntingdon）、英国）から入手した。好適な態様においては、長さ１
８ｍｍのＡＣＳ多リンクＲＸ・ＤＵＥＴ（商標）ステント（ガイダント・ヴァス
キュラー・インターベンション（Guidant Vascular Intervention)、サンタ・ク
ララ、ＣＡ）を本発明に従い使用した。ステントは実験用に９ｍｍの長さに切断
した。

【００８５】 電気化学的機能化に先立ち、両タイプの基体は清浄／エッチングされた。Ｓｉ
基体はトリクロロエチレン、アセトン、およびメタノール、それぞれに１分ずつ
浸漬することで清浄化した。これら基体を蒸留脱イオン（ｄ−ｄ）水ですすぎ、
Ｎ₂流で乾燥した。次いで、Ｓｉ基体をフッ化水素酸中１分間、次いで緩衝化フ
ッ化アンモニウム中６分間化学的にエッチングを施し、再度１回すすいでＮ₂で
乾燥した。３１６Ｌ基体（ディスクおよびステント）を５０ｍＬの王水（濃ＨＣ
ｌ：ＨＮＯ₃、４：１（ｖ／ｖ））に１分間浸漬し、ｄ−ｄ水ですすぎ、Ｎ₂流で
乾燥した。 （ブロモベンゼンジアゾニウム塩溶液） ０.１Ｍ−Ｈ₂ＳＯ₄と２％ＨＦ中の四フッ化ホウ酸ブロモベンゼンジアゾニウ
ムの２０ｍＭ水溶液は、０.５４ｇの四フッ化ホウ酸ブロモベンゼンジアゾニウ
ム、０.５６ｍＬの濃Ｈ₂ＳＯ₄および４ｍＬの濃ＨＦを１００ｍＬのｄ−ｄ水に
溶解することにより調製した。この溶液に約２０分間Ｎ₂を吹き込むことで脱気
した。 （電気化学的機能化） 電気化学セルは標準的な三電極装置とした。使用した参照電極は飽和のカロメ
ル電極（ＳＣＥ）であり、フィッシャー・サイエンティフィック（Fisher Scien
tific）より購入した。対電極は白金ホイル（１ｃｍ²）とした。電気化学セルを
図３に図示する。

【００８６】 作用電極として機能するＳｉまたは３１６Ｌ基体表面にブロモ−アリールジア
ゾニウムを付着させるために、ブロモ−アリールジアゾニウム溶液をサイクリッ
クボルタンメトリー用の電解液として使用した。走査型定電位装置（ＥＧ＆Ｇプ
リンストン（Princeton）アプライド・リサーチ・モデル３６２）を使用し、作
用電極に直流電位を印加した。電流−電圧応答はＸＹレコーダー（フィリップス
（Phillips）、モデルＰＭ８１４３）に記録した。

【００８７】 シングル−サイクル・ボルタンモグラムを各基体について実施した。電流範囲
は１ｍＡに設定した。還元的走査はＳＣＥに対して−０.３Ｖの開始電位から−
１.９Ｖの最終電位までとして実施し、そして戻した。掃引速度は１００ｍＶ／
ｓに設定した。Ｓｉ基体の修飾により典型的な還元波（〜−１.５Ｖに）が観察
された。電流密度はより大きな電導性を有する３１６Ｌ基体でより大きく、還元
波はＳＣＥに対し〜−０.９５で観察される。 （結果） この一連の実験において、ステンレス鋼表面（ディスクまたはステント）はす
べてジアゾニウムで機能化され、次いで、５０μＬ（５０μＣｉ）の³²Ｐ−オリ
ゴヌクレオチド／アミノリンカー溶液の存在下に被覆された。これらは前記同様
にすすいだ。５'末端にＣ６アミノリンカーをもつ³²Ｐ−オリゴヌクレオチドは
この態様のために使用した。

【００８８】 ディスク表面を用いると、初期活性５０μＣｉの³²Ｐ−オリゴヌクレオチド／
アミノリンカー溶液により、固定化効率は９.５μＣｉ／ｃｍ²のレベルに達した
（９.５％の効率）。初期活性を３００μＣｉに上昇すると被覆効率は１５.８μ
Ｃｉ／ｃｍ²に改善された。被覆は２２℃および７０℃の反応温度に比べて、５
２℃でより良好であった。析出を５２℃で実施した場合、室温条件の場合と比較
して、被覆の増大は２〜３倍であった（８〜１８μＣｉ／ｃｍ²）。図４に示す
ように、被覆レベルは反応時間（５分、１５分、３０分、６０分および１２０分
）と共に増大した。放射能は反応時間と共に経時的に増大し、５分で約６μＣｉ
／ｃｍ²から１２０分で１７.５μＣｉ／ｃｍ²となる。ディスクの機能化に比較
して、固定化効率はステンレス鋼ステント表面で１.４倍増大した。³²Ｐ−オリ
ゴヌクレオチド／アミノリンカー溶液の平均２.９３μＣｉが９ｍｍのステンレ
ス鋼ステントに被覆されたが、これは１８ｍｍのステントでは２４.５μＣｉ／
ｃｍ²のレベルまたは５.９μＣｉの活性に相当する。これらの実験条件はステン
ト表面の³²Ｐ−オリゴヌクレオチド／アミノリンカー溶液による被覆の迅速性を
明瞭に示している。

【００８９】 図４はブロモベンゼンジアゾニウム処理ステンレス鋼表面の³²Ｐ−オリゴヌク
レオチド被覆に対する受動析出時間の影響を示す。

【００９０】 本発明をその具体的な態様と関連させて説明したが、さらなる修飾が可能であ
り、本出願は本発明の原理に一般的に従う本発明の変更、使用、または適応をも
その範囲とし、本発明が関わる技術の範囲内で既知または慣行となっている場合
、また前記の本質的な特徴に当てはまり得る場合、そして上記特許請求項の範囲
に従うものである場合、本開示からのかかる発展をも包含することを理解された
い。

【図面の簡単な説明】

【図１】 本発明の好適な態様としての電気メッキ装置の概略模式図である。

【図２】 受動析出のためのグリシドキシ−プロピルトリエトキシシラン（ＧＰＴＳ）修
飾用反応槽を示す概略模式図である。

【図３】 受動析出用にシリコンおよびステンレス鋼表面をジアゾニウム機能化する際に
使用される電気メッキ装置の概略模式図である。

【図４】 ブロモベンゼンジアゾニウム被覆ステンレス鋼表面上に³²Ｐ−オリゴヌクレオ
チドを受動析出させた場合の時間の影響を示した図である。

【図５】 金電極上への１５−量体のオリゴヌクレオチドの電気メッキを電位の関数とし
て表した線グラフを示した図である。

【図６】 異なるｐＨの電解溶液における金電極上への１５−量体のオリゴヌクレオチド
の吸着等温図である。

【図７】 異なる濃度の８−量体オリゴヌクレオチドの金電極上への吸着等温図である。

【図８】 金メッキステントへの放射性１５−量体オリゴヌクレオチドの被覆度に対する
分極時間の影響を示した図である。

【図９】 金メッキステント上への放射性１５−量体オリゴヌクレオチドの被覆度に対す
る活性増大の影響を示した図である。

【図１０】 ステンレス鋼ステント上への放射性１５−量体オリゴヌクレオチドの被覆度に
対する分極時間の影響を示した図である。

【図１１】 ステンレス鋼ステント上への放射性１５−量体オリゴヌクレオチドの被覆度に
対する活性増大の影響を示した図である。

【図１２】 ステントの長軸に沿った金属表面上の放射性分子分布を表す、本発明の電気化
学的方法により被覆した金メッキステントの走査グラフを示した図である。

【図１３】 ステントの長軸に沿った金属表面上の放射性分子の分布を表す、本発明の電気
化学的方法により被覆したステンレス鋼ステントの走査グラフを示した図である
。

【図１４】 金メッキステント表面上に被覆した³²Ｐ−オリゴヌクレオチドのインビトロ保
持率プロファイルの線グラフを示した図である。

【図１５】 ステンレス鋼ステント表面上に被覆した³²Ｐ−オリゴヌクレオチドのインビト
ロ保持率プロファイルの線グラフを示した図である。

【図１６】 ³²Ｐ−オリゴヌクレオチド被覆金ステント（１６ｍｍ）をブタ冠状動脈に移植
した際の保持率プロファイルの線グラフを示した図である。

【図１７】 ³²Ｐ−オリゴヌクレオチド被覆ステンレス鋼ステント（１８ｍｍ）をブタ冠状
動脈に移植した際の保持率プロファイルの線グラフである。

【符号の説明】 ２０ 定電位／定電流装置、ポテンシオスタット ２２ セル ２４ 作用電極、ステント ２６ 電解液 ２８ 参照電極 ３０ 対極 ３２ コンピューター ３４ カバー ３６ ガス導入口 ３８ ガス排出口 ４０ 導線 ４２ 導線 ５０ ガラスホルダー ５２ 反応槽 ５４ 攪拌子 ５６ 水循環器 ５８ Ｎ₂流

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｃ２５Ｄ 13/12 Ｃ２５Ｄ 13/12 Ｚ (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＭＺ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ， ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＧ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ， ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＢＺ，Ｃ Ａ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ ，ＤＺ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ， ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，Ｋ Ｅ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ， ＭＷ，ＭＸ，ＭＺ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，Ｒ Ｕ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ， ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ (72)発明者 ルブラン フィリップ カナダ Ｊ２Ｎ １Ｙ８ ケベック サン −リュック ルー ガルニエ 155 (72)発明者 レヴェスク リュック カナダ Ｊ４Ｂ ２Ｌ８ ケベック ブー シェルヴィル ルー ベンジャミン−スイ ート 141 (72)発明者 マーテル レミ カナダ Ｈ１Ｖ １Ｒ５ ケベック モン トリオール ルー ラ フォンテーン 4865 (72)発明者 クドレビッチ スヴェトラナ カナダ Ｈ２Ａ ２Ａ５ ケベック モン トリオール アプト．1804 シェミン デ ラ コート ステュ−カトリーヌ 55 (72)発明者 ローレンス マーカス エフ カナダ Ｊ３Ｌ ５ＭＬ ケベック シャ ンブリー ルー ノエル−ラロー 1479 (72)発明者 ブルギニョン ベルナール カナダ Ｈ２Ｈ ２Ｃ９ ケベック モン トリオール ルー デゼラブル 4738 (72)発明者 レザール ジャン カナダ Ｊ１Ｊ １Ｈ９ ケベック シェ ルブルーク ロンシャン 1585 (72)発明者 ブレイズ ソニア アメリカ ＮＪ 08540 プリンストン ウィルキンソン ウェイ 19 (72)発明者 シャプゼ ジャン−マルク カナダ Ｊ１Ｋ ２Ｒ１ ケベック シェ ルブルーク ロウロー 4070 (72)発明者 ムニエール ミシェル カナダ Ｈ８ｙ 312 ケベック ピエー ルフォン フェリクス マクレーナン 4949 (72)発明者 ナポーン テコ カナダ Ｈ３Ｘ ２Ｓ３ ケベック モン トリオール クランラナル＃305 5045 (72)発明者 ポーリン スージイ カナダ Ｈ１Ｋ ２Ｎ２ ケベック モン トリオール ポール−ポウ 5775 (72)発明者 サシェル エドワード カナダ Ｈ４Ｗ １Ｙ７ ケベック コー ト サン−リュック キンコート アヴェ ニュー 5739 (72)発明者 サヴァドゴ オウマロウ カナダ Ｈ４Ｊ １Ｙ１ ケベック モン トリオール ラヴィーネ 12125 Ｆターム(参考） 4C081 AC16 BB03 CD012 CD092 CD112 CD35 CF25 CG04 CG07 CG08 DC03 EA06 4C167 AA28 AA41 AA74 BB02 BB06 BB12 BB26 CC09 DD01 FF05 GG21 GG22 GG23 4K044 AA03 AA06 AB10 BA08 BA21 BB02 CA04 CA17

Claims (50)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 血管形成用具に荷電分子を析出させる方法であって、血管形
   成用具に荷電分子を析出させるのに適した条件下で、血管形成用具と荷電分子含
   有溶液とを接触させる工程を有することを特徴とする方法。
2. 【請求項２】 該析出が受動析出である請求項１の方法。
3. 【請求項３】 該血管形成用具がその表面に金を有し、かつ、荷電分子が該
   血管形成用具上の金に付着するためのチオール含有基を有する請求項２の方法。
4. 【請求項４】 該析出が電気メッキである請求項１の方法。
5. 【請求項５】 血管形成用具に荷電分子を電気メッキする方法であって、該
   血管形成用具と荷電分子含有溶液の間に電位差を印加する工程を有し、当該荷電
   分子が該電位差と逆の電荷を示し、それによって該血管形成用具に電気メッキさ
   れることを特徴とする方法。
6. 【請求項６】 該電位差が正である請求項５の方法。
7. 【請求項７】 該電位差が負である請求項５の方法。
8. 【請求項８】 放射性分子が複合ポリペプチド、カチオン性ペプチド、デキ
   ストラン、ポリアミンおよびキトサンからなる群より選択される請求項７の方法
   。
9. 【請求項９】 該血管形成用具がステントである請求項５の方法。
10. 【請求項１０】 該血管形成用具が金属表面を有する請求項９の方法。
11. 【請求項１１】 該金属表面がステンレス鋼、金、タンタル、ニッケルおよ
    びチタンまたはそれらの合金からなる群より選択される請求項１０の方法。
12. 【請求項１２】 電位差を印加する工程の前に、さらに、該血管形成用具表
    面の不純物を除去するために、該血管形成用具を溶媒で洗浄する工程を有する請
    求項５の方法。
13. 【請求項１３】 電位差を印加する工程の後に、当該血管形成用具表面の遊
    離分子を除去するために、該血管形成用具をすすぐ工程をさらに含んでなる請求
    項５の方法。
14. 【請求項１４】 冠状動脈および／または末梢動脈での再狭窄を予防するた
    めの血管形成用具であって、表面に、析出した荷電分子を有することを特徴とす
    る用具。
15. 【請求項１５】 該血管形成用具がステントまたはマイクロカテーテル・ワ
    イヤのいずれかである請求項１４の血管形成用具。
16. 【請求項１６】 血管形成用具に放射性荷電分子を析出させる方法であって
    、血管形成用具に放射性荷電分子を析出させるのに適した条件下で、血管形成用
    具と放射性荷電分子含有溶液とを接触させる工程を有することを特徴とする方法
    。
17. 【請求項１７】 該析出が受動析出である請求項１６の方法。
18. 【請求項１８】 該血管形成用具がその表面に金を有し、かつ、放射性荷電
    分子が該血管形成用具上の金に付着するためのチオール含有基を有する請求項１
    ７の方法。
19. 【請求項１９】 該析出が電気メッキである請求項１６の方法。
20. 【請求項２０】 血管形成用具に放射性荷電分子を電気メッキする方法であ
    って、該血管形成用具と放射性荷電分子含有溶液の間に電位差を印加する工程を
    有し、当該荷電分子が該電位差と逆の電荷を示し、それによって該血管形成用具
    に電気メッキされることを特徴とする方法。
21. 【請求項２１】 該電位差が正である請求項２０の方法。
22. 【請求項２２】 該放射性分子がβ−放射体を有する請求項２０の方法。
23. 【請求項２３】 β−放射体がアンチモン−１２４、セシウム−１３４、セ
    シウム−１３７、カルシウム−４５、カルシウム−４７、セリウム−１４１、塩
    素−３６、コバルト−６０、ユウロピウム−１５２、金−１９８、ハフニウム−
    １８１、ホルミウム−１６６、ヨウ素−１３１、イリジウム−１９２、鉄−５９
    、ルテチウム−１７７、水銀−２０３、ネオジム−１４７、ニッケル−６３、リ
    ン−３２、リン−３３、レニウム−１８６、ロジウム−１０６、ルビジウム−８
    ６、ルテニウム−１０６、サマリウム−１５３、スカンジウム−４６、銀−１１
    ０ｍ、ストロンチウム−８９、ストロンチウム−９０、イオウ−３５、テクネチ
    ウム−９９、テルビウム−１６０、ツリウム−１７０、タングステン−１８８、
    イットリウム−９０およびキセノン−１３３である請求項２２の方法。
24. 【請求項２４】 該放射性分子が放射性ＤＮＡまたはその類似体、放射性Ｒ
    ＮＡ、放射性ヌクレオチド、放射性オリゴヌクレオチド、放射性Ｈ₂ＰＯ₄、放射
    性ジエチレントリアミンペンタ酢酸、および放射性ポリアニオン性複合体からな
    る群より選択される請求項２１の方法。
25. 【請求項２５】 該放射性分子が放射性オリゴヌクレオチドである請求項２
    ４の方法。
26. 【請求項２６】 該オリゴヌクレオチドが８−から３５−量体のオリゴヌク
    レオチドである請求項２５の方法。
27. 【請求項２７】 該オリゴヌクレオチドが８−から２０−量体のオリゴヌク
    レオチドである請求項２５の方法。
28. 【請求項２８】 該オリゴヌクレオチドが１５−量体のオリゴヌクレオチド
    である請求項２５の方法。
29. 【請求項２９】 該電位差が負である請求項２０の方法。
30. 【請求項３０】 該放射性分子が放射性複合ポリペプチド、放射性カチオン
    性ペプチド、放射性デキストラン、放射性ポリアミンおよび放射性キトサンから
    なる群より選択される請求項２９の方法。
31. 【請求項３１】 該血管形成用具がステントである請求項２０の方法。
32. 【請求項３２】 該血管形成用具が金属表面を有する請求項３１の方法。
33. 【請求項３３】 該金属表面がステンレス鋼、金、タンタル、ニッケルおよ
    びチタンまたはそれらの合金からなる群より選択される請求項３２の方法。
34. 【請求項３４】 電位差を印加する工程の前に、さらに、該血管形成用具表
    面の不純物を除去するために、該血管形成用具を洗浄する工程を有する請求項２
    ０の方法。
35. 【請求項３５】 該血管形成用具を溶媒で清浄する請求項３４の方法。
36. 【請求項３６】 電位差を印加する工程の後に、さらに、当該血管形成用具
    表面の遊離放射性分子を除去するために、該血管形成用具を清掃する工程を有す
    る請求項２０の方法。
37. 【請求項３７】 冠状動脈および／または末梢動脈での再狭窄を予防する血
    管形成用具であって、表面に、析出した放射性荷電分子を有することを特徴とす
    る用具。
38. 【請求項３８】 該放射性分子がβ−放射体を含む請求項３７記載の血管形
    成用具。
39. 【請求項３９】 該β−放射体がアンチモン−１２４、セシウム−１３４、
    セシウム−１３７、カルシウム−４５、カルシウム−４７、セリウム−１４１、
    塩素−３６、コバルト−６０、ユウロピウム−１５２、金−１９８、ハフニウム
    −１８１、ホルミウム−１６６、ヨウ素−１３１、イリジウム−１９２、鉄−５
    ９、ルテチウム−１７７、水銀−２０３、ネオジム−１４７、ニッケル−６３、
    リン−３２、リン−３３、レニウム−１８６、ロジウム−１０６、ルビジウム−
    ８６、ルテニウム−１０６、サマリウム−１５３、スカンジウム−４６、銀−１
    １０ｍ、ストロンチウム−８９、ストロンチウム−９０、イオウ−３５、テクネ
    チウム−９９、テルビウム−１６０、ツリウム−１７０、タングステン−１８８
    、イットリウム−９０およびキセノン−１３３からなる群より選択される請求項
    ３７記載の血管形成用具。
40. 【請求項４０】 該放射性分子が放射性ＤＮＡまたはその類似体、放射性Ｒ
    ＮＡ、放射性ヌクレオチド、放射性オリゴヌクレオチド、放射性Ｈ₂ＰＯ₄、放射
    性ジエチレントリアミンペンタ酢酸、および放射性ポリアニオン性複合体からな
    る群より選択される請求項３７記載の血管形成用具。
41. 【請求項４１】 該放射性分子が放射性オリゴヌクレオチドである請求項３
    ７記載の血管形成用具。
42. 【請求項４２】 該オリゴヌクレオチドが１０−から３０−量体のオリゴヌ
    クレオチドである請求項３７記載の血管形成用具。
43. 【請求項４３】 該オリゴヌクレオチドが８−から２０−量体のオリゴヌク
    レオチドである請求項３７記載の血管形成用具。
44. 【請求項４４】 該オリゴヌクレオチドが１５−量体のオリゴヌクレオチド
    である請求項３７記載の血管形成用具。
45. 【請求項４５】 該放射性分子が放射性複合ポリペプチド、放射性カチオン
    性ペプチド、放射性デキストラン、放射性ポリアミンおよび放射性キトサンから
    なる群より選択される請求項３７の方法。
46. 【請求項４６】 該血管形成用具がステントまたはマイクロカテーテル・ワ
    イヤのいずれかである請求項３７記載の血管形成用具。
47. 【請求項４７】 冠状動脈および／または末梢動脈における再狭窄を予防す
    る方法であって、請求項３７に記載の血管形成用具を、かかる治療の必要な患者
    の冠状動脈および／または末梢動脈での潜在的な再狭窄部位に移植することを特
    徴とする方法。
48. 【請求項４８】 電位差を印加する工程の前に、該血管形成用具の表面を分
    子被覆するために機能化する請求項２０の方法。
49. 【請求項４９】 該血管形成用具をジアゾニウム処理により機能化する請求
    項４８の方法。
50. 【請求項５０】 冠状動脈および／または末梢動脈での再狭窄を予防するた
    めの、請求項１４、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５ま
    たは４６に記載した血管形成用具の使用。