JP2003515534A - がん治療のためのエンド−エクソヌクレアーゼ活性の阻害剤 - Google Patents
がん治療のためのエンド−エクソヌクレアーゼ活性の阻害剤Info
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Abstract
(57)【要約】
エンド−エクソヌクレアーゼ活性を阻害する化合物を含む医薬品組成物はがん細胞の増殖または腫瘍の増殖を阻害する。
Description
【０００１】
（技術分野）
本発明はがん治療のための化学療法剤に関する。
【０００２】
（背景技術）
がん細胞は正常細胞に比してより速く増殖する。それ故に、がん細胞の有糸分
裂およびＤＮＡ複製の速度が驚くべき程大きい。ＤＮＡ複製および組み換えを阻
害する作用物質は正常細胞よりもがん細胞により大きな影響を与える。
裂およびＤＮＡ複製の速度が驚くべき程大きい。ＤＮＡ複製および組み換えを阻
害する作用物質は正常細胞よりもがん細胞により大きな影響を与える。
【０００３】
がん治療のための多くの化学療法剤はＤＮＡ切断を誘発する事によってＤＮＡ
複製を阻害するものである。マイトマイシンの如きいくつかの薬剤はＤＮＡそれ
自体と結びついてＤＮＡ切断を部分的に誘発する。他の抗がん剤はＤＮＡの構造
を変性させるトポイソメラーゼ酵素を妨害する。そのようにすることにより、そ
れらは鎖切断を誘発する。通常、鎖の切断は一過性であるがエトポシドの如きト
ポイソメラーゼ酵素阻害剤の存在下では鎖の切断は長期的なものとなりＤＮＡに
永久的な損傷を与えることになる。
複製を阻害するものである。マイトマイシンの如きいくつかの薬剤はＤＮＡそれ
自体と結びついてＤＮＡ切断を部分的に誘発する。他の抗がん剤はＤＮＡの構造
を変性させるトポイソメラーゼ酵素を妨害する。そのようにすることにより、そ
れらは鎖切断を誘発する。通常、鎖の切断は一過性であるがエトポシドの如きト
ポイソメラーゼ酵素阻害剤の存在下では鎖の切断は長期的なものとなりＤＮＡに
永久的な損傷を与えることになる。
【０００４】
生命体は切除−修復システムを含む多様な機構によってＤＮＡを修復する。切
除−修復を媒介する酵素は損傷したＤＮＡを切り除く。これらの酵素は、ついで
損傷したＤＮＡ配列を正常配列と置き換える。この修復システムはＤＮＡ切断を
誘発する化学療法剤に依存するがん治療の効率を低下させる。効率のロスはがん
細胞の増殖を十分に阻害するためにＤＮＡを切断する高濃度の化学療法剤の使用
を余儀なくさせる。 これらの化学療法剤は非常に有毒で、有害な副作用を引き起こす。高濃度の薬
剤の使用は重大な障害となる。エンド−エクソヌクレアーゼがＤＮＡの修復およ
び組み換えに作用するとの示唆があった。ResnickらによるＵＳ特許５，３２４
，８３０にS.cerevisiae由来のエンド−エクソヌクレアーゼRhoNucをコードする
ＤＮＡ断片の単離について述べられている。ＵＳ特許５，４８９，５２４には哺
乳動物のエンド−エクソヌクレアーゼの遺伝子の特性および霊長類のエンド−エ
クソヌクレアーゼの単離について述べられている。しかし、以前はエンド−エク
ソヌクレアーゼ活性を阻害することがＤＮＡ修復の阻害またはがん細胞の増殖に
効果的であるとは示唆されていなかった。
除−修復を媒介する酵素は損傷したＤＮＡを切り除く。これらの酵素は、ついで
損傷したＤＮＡ配列を正常配列と置き換える。この修復システムはＤＮＡ切断を
誘発する化学療法剤に依存するがん治療の効率を低下させる。効率のロスはがん
細胞の増殖を十分に阻害するためにＤＮＡを切断する高濃度の化学療法剤の使用
を余儀なくさせる。 これらの化学療法剤は非常に有毒で、有害な副作用を引き起こす。高濃度の薬
剤の使用は重大な障害となる。エンド−エクソヌクレアーゼがＤＮＡの修復およ
び組み換えに作用するとの示唆があった。ResnickらによるＵＳ特許５，３２４
，８３０にS.cerevisiae由来のエンド−エクソヌクレアーゼRhoNucをコードする
ＤＮＡ断片の単離について述べられている。ＵＳ特許５，４８９，５２４には哺
乳動物のエンド−エクソヌクレアーゼの遺伝子の特性および霊長類のエンド−エ
クソヌクレアーゼの単離について述べられている。しかし、以前はエンド−エク
ソヌクレアーゼ活性を阻害することがＤＮＡ修復の阻害またはがん細胞の増殖に
効果的であるとは示唆されていなかった。
【０００５】
従来の化学療法剤より毒性が少なく且つがん細胞の増殖を阻害する化合物が求
められている。さらに、がん細胞の増殖を阻害するためにＤＮＡ修復を阻害する
化合物が求められている。さらに、がん治療の効率を改善するために従来の化学
療法剤と共に使用し得る化合物が求められている。さらに、従来の化学療法剤と
共に使用され、併用することにより治療効率を低下させることなくがん患者への
化学療法剤の投与量をより少なく出来る化合物が求められている。
められている。さらに、がん細胞の増殖を阻害するためにＤＮＡ修復を阻害する
化合物が求められている。さらに、がん治療の効率を改善するために従来の化学
療法剤と共に使用し得る化合物が求められている。さらに、従来の化学療法剤と
共に使用され、併用することにより治療効率を低下させることなくがん患者への
化学療法剤の投与量をより少なく出来る化合物が求められている。
【０００６】
（発明の開示）
＜発明の概要＞
本発明はがん細胞の方が正常細胞よりエンド−エクソヌクレアーゼの含有濃度
が高いと言う発見に関する。本発明はエンド−エクソヌクレアーゼ活性を阻害す
ることによってがん細胞の増殖および腫瘍の増殖を阻害する方法を提供する。本
発明はまたがん細胞中のエンド−エクソヌクレアーゼの上昇濃度に基づいて行う
がん診断方法に関する。
が高いと言う発見に関する。本発明はエンド−エクソヌクレアーゼ活性を阻害す
ることによってがん細胞の増殖および腫瘍の増殖を阻害する方法を提供する。本
発明はまたがん細胞中のエンド−エクソヌクレアーゼの上昇濃度に基づいて行う
がん診断方法に関する。
【０００７】
本発明の一態様によりエンド−エクソヌクレアーゼ活性を阻害する化合物が提
供される。本発明の他の態様によりエンド−エクソヌクレアーゼ活性を阻害する
化合物を患者に投与する手順を含むことを特徴とするがん細胞の増殖および腫瘍
の増殖を阻害する方法を提供する。 本発明の他の態様によりがん細胞の増殖および腫瘍の増殖を阻害するために、
ＤＮＡの切断を引き起こす従来の化学療法剤と組み合わせられる、エンド−エク
ソヌクレアーゼ活性を阻害する化合物を提供する。この発明はＤＮＡの切断を引
き起こす従来の化学療法剤と組み合わせてエンド−エクソヌクレアーゼ活性を阻
害する化合物を患者に投与する手順を含むことを特徴とするがん細胞の増殖およ
び腫瘍の増殖を阻害する方法を提供する。この発明は、ＤＮＡの切断を引き起こ
す作用物質（agent、全明細書に通じて同様である。）とエンド−エクソヌクレ
アーゼ活性を阻害する化合物との組み合わせの、がん細胞の増殖および腫瘍の増
殖を阻害するための使用を含む。
供される。本発明の他の態様によりエンド−エクソヌクレアーゼ活性を阻害する
化合物を患者に投与する手順を含むことを特徴とするがん細胞の増殖および腫瘍
の増殖を阻害する方法を提供する。 本発明の他の態様によりがん細胞の増殖および腫瘍の増殖を阻害するために、
ＤＮＡの切断を引き起こす従来の化学療法剤と組み合わせられる、エンド−エク
ソヌクレアーゼ活性を阻害する化合物を提供する。この発明はＤＮＡの切断を引
き起こす従来の化学療法剤と組み合わせてエンド−エクソヌクレアーゼ活性を阻
害する化合物を患者に投与する手順を含むことを特徴とするがん細胞の増殖およ
び腫瘍の増殖を阻害する方法を提供する。この発明は、ＤＮＡの切断を引き起こ
す作用物質（agent、全明細書に通じて同様である。）とエンド−エクソヌクレ
アーゼ活性を阻害する化合物との組み合わせの、がん細胞の増殖および腫瘍の増
殖を阻害するための使用を含む。
【０００８】
本発明の一態様により、エンド−エクソヌクレアーゼ活性を阻害する化合物を
含むことを特徴とするがん細胞の増殖および腫瘍の増殖を阻害する医薬品組成物
を提供する。 本発明の他の態様により、エンド−エクソヌクレアーゼ活性を阻害する化合物
およびＤＮＡ鎖の切断を引き起こす化合物を含むことを特徴とするがん細胞の増
殖および腫瘍の増殖を阻害するための医薬品組成物を提供する。 本発明の他の態様により、エンド−エクソヌクレアーゼ活性を阻害する手順を
含むことを特徴とするがん細胞の増殖および腫瘍の増殖を阻害する方法を提供す
る。 本発明のさらに他の態様により、ＤＮＡ鎖の切断を引き起こす作用物質と組み
合わせてエンド−エクソヌクレアーゼ活性を阻害する化合物を含む医薬品組成物
を患者に投与する手順を含むことを特徴とするがん細胞の増殖および腫瘍の増殖
を阻害する方法を提供する。
含むことを特徴とするがん細胞の増殖および腫瘍の増殖を阻害する医薬品組成物
を提供する。 本発明の他の態様により、エンド−エクソヌクレアーゼ活性を阻害する化合物
およびＤＮＡ鎖の切断を引き起こす化合物を含むことを特徴とするがん細胞の増
殖および腫瘍の増殖を阻害するための医薬品組成物を提供する。 本発明の他の態様により、エンド−エクソヌクレアーゼ活性を阻害する手順を
含むことを特徴とするがん細胞の増殖および腫瘍の増殖を阻害する方法を提供す
る。 本発明のさらに他の態様により、ＤＮＡ鎖の切断を引き起こす作用物質と組み
合わせてエンド−エクソヌクレアーゼ活性を阻害する化合物を含む医薬品組成物
を患者に投与する手順を含むことを特徴とするがん細胞の増殖および腫瘍の増殖
を阻害する方法を提供する。
【０００９】
本発明の一態様により、患者のがん細胞の増殖および腫瘍の増殖を阻害するた
めのエンド−エクソヌクレアーゼ活性を阻害する化合物の使用を提供する。本発
明の他の態様により、ＤＮＡ鎖の切断を引き起こす化合物とエンド−エクソヌク
レアーゼ活性を阻害する化合物との組み合わせの、患者のがん細胞の増殖および
腫瘍の増殖を阻害するための使用を提供する。本発明のさらに他の態様により、
患者から採取した血清サンプル中のエンド−エクソヌクレアーゼの濃度を測定す
る工程を含むことを特徴とするがん診断方法を提供する。
めのエンド−エクソヌクレアーゼ活性を阻害する化合物の使用を提供する。本発
明の他の態様により、ＤＮＡ鎖の切断を引き起こす化合物とエンド−エクソヌク
レアーゼ活性を阻害する化合物との組み合わせの、患者のがん細胞の増殖および
腫瘍の増殖を阻害するための使用を提供する。本発明のさらに他の態様により、
患者から採取した血清サンプル中のエンド−エクソヌクレアーゼの濃度を測定す
る工程を含むことを特徴とするがん診断方法を提供する。
【００１０】
（発明の開示）
＜発明の詳細な説明＞
本発明はエンド−エクソヌクレアーゼが細胞増殖に重要な役割を果たすという
驚くべき発見に関する。エンド−エクソヌクレアーゼは正常な増殖と組織の修復
に必要である。 エンド−エクソヌクレアーゼは急速に増殖するがん細胞のような細胞内で特別
な役割を果たす。この酵素はがん細胞内に高濃度で存在し、これが実際に腫瘍の
増殖を持続させる手助けをする。エンド−エクソヌクレアーゼは細胞を機能させ
るすべての遺伝子を運搬するＤＮＡ分子の切断を修復する機能を果たす。ＤＮＡ
の切断はしばしば細胞分裂の過程で起こり、細胞増殖を続ける限り切断を修復し
なければならない。
驚くべき発見に関する。エンド−エクソヌクレアーゼは正常な増殖と組織の修復
に必要である。 エンド−エクソヌクレアーゼは急速に増殖するがん細胞のような細胞内で特別
な役割を果たす。この酵素はがん細胞内に高濃度で存在し、これが実際に腫瘍の
増殖を持続させる手助けをする。エンド−エクソヌクレアーゼは細胞を機能させ
るすべての遺伝子を運搬するＤＮＡ分子の切断を修復する機能を果たす。ＤＮＡ
の切断はしばしば細胞分裂の過程で起こり、細胞増殖を続ける限り切断を修復し
なければならない。
【００１１】
本発明はエンド−エクソヌクレアーゼ活性を阻害する化合物に関する。活性を
阻害するということはがん細胞の増殖および腫瘍の増殖を阻害する。本発明はエ
ンド−エクソヌクレアーゼ活性を阻害する化合物をＤＮＡ切断を引き起こす作用
物質と組み合わせて用いるのが好ましい。ＤＮＡの二本鎖の切断を引き起こす化
合物または他の作用物質をエンド−エクソヌクレアーゼ活性を阻害する化合物ま
たは他の作用物質と組み合わせて用いるのが好ましい。これらのタイプの化合物
または他の作用物質と組み合わせて用いることはがん治療の貴重なツール（tool
）となる。
阻害するということはがん細胞の増殖および腫瘍の増殖を阻害する。本発明はエ
ンド−エクソヌクレアーゼ活性を阻害する化合物をＤＮＡ切断を引き起こす作用
物質と組み合わせて用いるのが好ましい。ＤＮＡの二本鎖の切断を引き起こす化
合物または他の作用物質をエンド−エクソヌクレアーゼ活性を阻害する化合物ま
たは他の作用物質と組み合わせて用いるのが好ましい。これらのタイプの化合物
または他の作用物質と組み合わせて用いることはがん治療の貴重なツール（tool
）となる。
【００１２】
本発明はペンタミジンがエンド−エクソヌクレアーゼ活性を阻害するという予
想しなかった結果に関する。ペンタミジンが抗真菌性活性を持つことは以前から
知られていた。ペンタミジンが、in vitroにおいてがん細胞系の増殖を止めるの
に十分にエンド−エクソヌクレアーゼ活性を阻害するということが発見された。
ペンタミジンはまた非常に攻撃性のがんを持つ動物の腫瘍増殖を遅らせる。ペン
タミジンによるがん療法はペンタミジンが標準の化学療法剤に比較して低毒性で
あるという理由で特に有利である。ペンタミジンの副作用がしばしばそれらの標
準化学療法剤と異なっており、その結果ペンタミジンとそれらの作用物質を組み
合わせて用いた場合、副作用の危険性の様相が潜在的に薄れる。
想しなかった結果に関する。ペンタミジンが抗真菌性活性を持つことは以前から
知られていた。ペンタミジンが、in vitroにおいてがん細胞系の増殖を止めるの
に十分にエンド−エクソヌクレアーゼ活性を阻害するということが発見された。
ペンタミジンはまた非常に攻撃性のがんを持つ動物の腫瘍増殖を遅らせる。ペン
タミジンによるがん療法はペンタミジンが標準の化学療法剤に比較して低毒性で
あるという理由で特に有利である。ペンタミジンの副作用がしばしばそれらの標
準化学療法剤と異なっており、その結果ペンタミジンとそれらの作用物質を組み
合わせて用いた場合、副作用の危険性の様相が潜在的に薄れる。
【００１３】
エンド−エクソヌクレアーゼ活性を阻害する他の化合物が発明の範囲内にある
。例えば、エンド−エクソヌクレアーゼの産生を阻害するためにエンド−エクソ
ヌクレアーゼをコードする遺伝子に対してアンチセンス配列を形成することが可
能である。本発明の範囲内にあるエンド−エクソヌクレアーゼ活性を阻害する他
の化合物の中にジスタマイシンＡおよびベレニルを含む。
。例えば、エンド−エクソヌクレアーゼの産生を阻害するためにエンド−エクソ
ヌクレアーゼをコードする遺伝子に対してアンチセンス配列を形成することが可
能である。本発明の範囲内にあるエンド−エクソヌクレアーゼ活性を阻害する他
の化合物の中にジスタマイシンＡおよびベレニルを含む。
【００１４】
本発明はまた単鎖または二本鎖のＤＮＡ切断を引き起こす既知の化合物および
他の作用物質をがん細胞の増殖および腫瘍の増殖を阻害するためにエンド−エク
ソヌクレアーゼ活性を阻害する化合物および他の作用物質と組み合わせて用いる
組み合わせ効果に関する。二本鎖のＤＮＡ切断を引き起こす化合物および他の作
用物質はエンド−エクソヌクレアーゼ活性を阻害する化合物および他の作用物質
と組み合わせることによって特に良好な効果を発揮するということが発見された
。このことががん細胞の増殖および腫瘍の増殖を阻害する。作用物質が直接二本
鎖切断を引き起こすかまたは二本鎖切断に発展する単鎖切断を引き起こす。これ
は生体系で起こる共通現象である。
他の作用物質をがん細胞の増殖および腫瘍の増殖を阻害するためにエンド−エク
ソヌクレアーゼ活性を阻害する化合物および他の作用物質と組み合わせて用いる
組み合わせ効果に関する。二本鎖のＤＮＡ切断を引き起こす化合物および他の作
用物質はエンド−エクソヌクレアーゼ活性を阻害する化合物および他の作用物質
と組み合わせることによって特に良好な効果を発揮するということが発見された
。このことががん細胞の増殖および腫瘍の増殖を阻害する。作用物質が直接二本
鎖切断を引き起こすかまたは二本鎖切断に発展する単鎖切断を引き起こす。これ
は生体系で起こる共通現象である。
【００１５】
本発明はまたがん細胞の増殖および腫瘍の増殖を阻害するためにエンド−エク
ソヌクレアーゼの活性を阻害するペンタミジン、ジスタマイシンＡおよびベレニ
ル（berenil）のような化合物の使用に関する。腫瘍の増殖を阻害するために、
これらの化合物を単独またはＤＮＡ切断を引き起こす既知の薬剤と組み合わせて
使用することも出来る。本発明の範囲内にあるＤＮＡ切断を引き起こす作用物質
はシスプラチン、マイトマイシンＣ、メルファラン、カルムスチン、アドリアマ
イシン、タクソール、５−フルオロ−ウラシル、イオン化照射およびブレオマイ
シンを含む。
ソヌクレアーゼの活性を阻害するペンタミジン、ジスタマイシンＡおよびベレニ
ル（berenil）のような化合物の使用に関する。腫瘍の増殖を阻害するために、
これらの化合物を単独またはＤＮＡ切断を引き起こす既知の薬剤と組み合わせて
使用することも出来る。本発明の範囲内にあるＤＮＡ切断を引き起こす作用物質
はシスプラチン、マイトマイシンＣ、メルファラン、カルムスチン、アドリアマ
イシン、タクソール、５−フルオロ−ウラシル、イオン化照射およびブレオマイ
シンを含む。
【００１６】
単鎖または二本鎖のＤＮＡ切断を引き起こす化合物および作用物質とエンド−
エクソヌクレアーゼ活性を阻害する化合物および作用物質との種々の置き換えま
たは組み合わせは本発明の範囲に入る。これらの化合物および他の作用物質の組
成物または混合物はヒトおよび動物を含む患者に投与してもいい。組成物はある
化合物のすべての医薬品製剤および化合物それ自体を含む。組み合わせは二つま
たはそれ以上の組成物を含む。これは錠剤および液剤のような二つあるいはそれ
以上の異なった製剤(formulations)を含む。二つあるいはそれ以上の化合物の混
合物を同一の製剤にすることもまた本発明の範囲内である。組成物はまた化合物
や他の作用物質の治療効果を補強する働きのある小のう、ミセルおよびリポソー
ムのような補助剤も含む。小のう、ミセルおよびリポソームの働きは化合物およ
び作用物質の溶解性の向上、腫瘍細胞へのこれらの輸送の改善および化合物およ
び作用物質に対するこれらの細胞の浸透性の向上といった腫瘍細胞との相互作用
を含む。効率の向上は治療の改善または投与量の減少および副作用の軽減が可能
になると同時に同等の効果をもたらすことができた。
エクソヌクレアーゼ活性を阻害する化合物および作用物質との種々の置き換えま
たは組み合わせは本発明の範囲に入る。これらの化合物および他の作用物質の組
成物または混合物はヒトおよび動物を含む患者に投与してもいい。組成物はある
化合物のすべての医薬品製剤および化合物それ自体を含む。組み合わせは二つま
たはそれ以上の組成物を含む。これは錠剤および液剤のような二つあるいはそれ
以上の異なった製剤(formulations)を含む。二つあるいはそれ以上の化合物の混
合物を同一の製剤にすることもまた本発明の範囲内である。組成物はまた化合物
や他の作用物質の治療効果を補強する働きのある小のう、ミセルおよびリポソー
ムのような補助剤も含む。小のう、ミセルおよびリポソームの働きは化合物およ
び作用物質の溶解性の向上、腫瘍細胞へのこれらの輸送の改善および化合物およ
び作用物質に対するこれらの細胞の浸透性の向上といった腫瘍細胞との相互作用
を含む。効率の向上は治療の改善または投与量の減少および副作用の軽減が可能
になると同時に同等の効果をもたらすことができた。
【００１７】
（発明を実施するための最良の形態）
＜実施例＞
ヒト結腸腺がん（ＨＴ２９）、乳房腺がん（ＭＣＦ７）およびヒト頚部上皮腺
がん（HeLa）の細胞株を米国細胞培養銀行協会（ＡＴＣＣ）から取り寄せた。AT
CCのアクセスナンバーはそれぞれＨＴＢ−３８、ＨＴＢ−２２、ＣＣＬ−２であ
る。正常な原発性細胞、NHDFをDr. Shirley Lehnertから取り寄せた。これらの
細胞は正常なヒト皮膚線維芽細胞である。細胞を１０％ＦＣＳを添加したＲＰＭ
Ｉ培地にて５％ＣＯ２を含む加湿された恒温装置内にて３７℃で培養した。
がん（HeLa）の細胞株を米国細胞培養銀行協会（ＡＴＣＣ）から取り寄せた。AT
CCのアクセスナンバーはそれぞれＨＴＢ−３８、ＨＴＢ−２２、ＣＣＬ−２であ
る。正常な原発性細胞、NHDFをDr. Shirley Lehnertから取り寄せた。これらの
細胞は正常なヒト皮膚線維芽細胞である。細胞を１０％ＦＣＳを添加したＲＰＭ
Ｉ培地にて５％ＣＯ２を含む加湿された恒温装置内にて３７℃で培養した。
【００１８】
実施例１：細胞内のエンド−エクソヌクレアーゼ濃度の決定
細胞系内のエンド−エクソヌクレアーゼ濃度はChowおよびResnickによって述
べられた免疫ブロット分析法(１９８７)により決定された。指数関数的に増殖す
る細胞を細胞溶解（lysis）緩衝液（0.125Mトリス−ＨＣｌ、ｐＨ７．０、２０
％グリセロール、４％ＳＤＳ、０．５mM EDTA）で煮沸した。溶解された細胞は1
0,000gで１０分間、遠心分離され、２５μｌの上澄み液をLaemmliにより述べら
れた方法（１９７０）により１０％ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル（SDS-PAGE
）上で電気泳動にかけた。SDS-PAGEゲル上で分離された蛋白質を電気泳動により
ニトロセルロース膜に移行させた。次いでニトロセルロース膜を、ChowおよびRe
snickにより先に述べられた方法（１９８８）により０．５％スキム−ミルク粉
末を含む緩衝液Ｂ（10mMトリス-HCl、pH8.0、１mM EDTA、150mM NaCl）中でサ
ルＣＶ−１エンド−エクソヌクレアーゼに抗して作られたラビットの抗血清と反
応させた。膜を緩衝液Ｂで３回、１５分間洗浄した後、０．５％スキム-ミルク
粉末を含む緩衝液Ｂ中で西洋わさびのペルオキシダーゼと結合した蛋白質Ａ（抗
体と結合する部位と相互作用を持つことなしに免疫グロブリン分子のＦｃ領域に
結合する黄色ぶどう球菌から単離されたポリペプチド）を膜に添加し、室温で３
時間培養した。次に、膜を緩衝液Ｂで３時間洗浄した。陽性シグナルが西洋わさ
びのペルオキシダーゼ酵素反応における対応する部位における基質４−クロロ−
１−ナフトールの着色によって示された。陽性シグナルの比較量がＨＰ４スキャ
ナーとライト ツール リサーチ（Light Tool Research）ソフトウエア プロ
グラムを用いて検出された。
べられた免疫ブロット分析法(１９８７)により決定された。指数関数的に増殖す
る細胞を細胞溶解（lysis）緩衝液（0.125Mトリス−ＨＣｌ、ｐＨ７．０、２０
％グリセロール、４％ＳＤＳ、０．５mM EDTA）で煮沸した。溶解された細胞は1
0,000gで１０分間、遠心分離され、２５μｌの上澄み液をLaemmliにより述べら
れた方法（１９７０）により１０％ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル（SDS-PAGE
）上で電気泳動にかけた。SDS-PAGEゲル上で分離された蛋白質を電気泳動により
ニトロセルロース膜に移行させた。次いでニトロセルロース膜を、ChowおよびRe
snickにより先に述べられた方法（１９８８）により０．５％スキム−ミルク粉
末を含む緩衝液Ｂ（10mMトリス-HCl、pH8.0、１mM EDTA、150mM NaCl）中でサ
ルＣＶ−１エンド−エクソヌクレアーゼに抗して作られたラビットの抗血清と反
応させた。膜を緩衝液Ｂで３回、１５分間洗浄した後、０．５％スキム-ミルク
粉末を含む緩衝液Ｂ中で西洋わさびのペルオキシダーゼと結合した蛋白質Ａ（抗
体と結合する部位と相互作用を持つことなしに免疫グロブリン分子のＦｃ領域に
結合する黄色ぶどう球菌から単離されたポリペプチド）を膜に添加し、室温で３
時間培養した。次に、膜を緩衝液Ｂで３時間洗浄した。陽性シグナルが西洋わさ
びのペルオキシダーゼ酵素反応における対応する部位における基質４−クロロ−
１−ナフトールの着色によって示された。陽性シグナルの比較量がＨＰ４スキャ
ナーとライト ツール リサーチ（Light Tool Research）ソフトウエア プロ
グラムを用いて検出された。
【００１９】
この方法に基づいて正常細胞およびＨＴ２９、ＭＣＦ−７、およびHeLa系細胞
のエンド−エクソヌクレアーゼ濃度を算出した。図１の結果ががん細胞のエンド
−エクソヌクレアーゼの濃度が正常細胞のそれよりはるかに高いことを示してい
る。この結果は、その酵素を阻害することにより、選択的にガン細胞を攻撃でき
る方法を得られることを示唆している。加えて、この結果は体液または組織の酵
素濃度を測定することによりがんの発見およびその進行の監視の手段になり得る
ことを示唆している。
のエンド−エクソヌクレアーゼ濃度を算出した。図１の結果ががん細胞のエンド
−エクソヌクレアーゼの濃度が正常細胞のそれよりはるかに高いことを示してい
る。この結果は、その酵素を阻害することにより、選択的にガン細胞を攻撃でき
る方法を得られることを示唆している。加えて、この結果は体液または組織の酵
素濃度を測定することによりがんの発見およびその進行の監視の手段になり得る
ことを示唆している。
【００２０】
実施例２：細胞の残存数の決定
細胞の残存数は次の方法により決定される。
細胞残存−クローン産生性検定（アッセイ）：細胞残存のクローン産生性測定
はSadekovaらによって述べられた方法に基づくペンタミジンの初期効果を決定す
るのに用いられた（１９９７）。この方法では、対数期の細胞(接種効率に依存
するが、１０００〜３０００cells/５０mmの範囲)が種々の薬剤濃度（０．２μM
〜２０mMの範囲）を変えて細胞培養プレートに接種された。増殖一週間後、細胞
コロニーを透明なスミレ色に色付けしてコロニー数を数えた。
はSadekovaらによって述べられた方法に基づくペンタミジンの初期効果を決定す
るのに用いられた（１９９７）。この方法では、対数期の細胞(接種効率に依存
するが、１０００〜３０００cells/５０mmの範囲)が種々の薬剤濃度（０．２μM
〜２０mMの範囲）を変えて細胞培養プレートに接種された。増殖一週間後、細胞
コロニーを透明なスミレ色に色付けしてコロニー数を数えた。
【００２１】
細胞残存−ＭTTアッセイ：細胞の増殖／細胞毒性を決定するＭＴＴ（３−［４
，５−ジメチルチアゾール−２−イル］−２，５ ジフェニル テルトラゾリウ
ム ブロミド）法が細胞残存を決定するための他に採用しうる便利な方法である
。ＭＴＴは生存細胞のミトコンドリアのデヒドロゲナーゼによって開裂されるテ
トラゾリウム塩である。開裂が黄色で水溶性ＭＴＴを不溶性、暗紫青色の結晶に
変化させる。この結晶は５０％Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド(vol/vol),２０%
ＳＤＳ(wt/vol)溶液(ｐＨ４．７)に可溶で、５７０ｎｍにおける吸光度が測定さ
れた。死滅した細胞はＭＴＴを開裂せず、そして開裂されていないＭＴＴはこの
波長では検出されない。開裂されたＭＴＴの量は細胞数の増加に伴って増加し、
そして細胞毒性の結果減少する(NiksおよびOtto 1990,Hussainら１９９３)。
，５−ジメチルチアゾール−２−イル］−２，５ ジフェニル テルトラゾリウ
ム ブロミド）法が細胞残存を決定するための他に採用しうる便利な方法である
。ＭＴＴは生存細胞のミトコンドリアのデヒドロゲナーゼによって開裂されるテ
トラゾリウム塩である。開裂が黄色で水溶性ＭＴＴを不溶性、暗紫青色の結晶に
変化させる。この結晶は５０％Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド(vol/vol),２０%
ＳＤＳ(wt/vol)溶液(ｐＨ４．７)に可溶で、５７０ｎｍにおける吸光度が測定さ
れた。死滅した細胞はＭＴＴを開裂せず、そして開裂されていないＭＴＴはこの
波長では検出されない。開裂されたＭＴＴの量は細胞数の増加に伴って増加し、
そして細胞毒性の結果減少する(NiksおよびOtto 1990,Hussainら１９９３)。
【００２２】
細胞は標準的な手法(Trypsin/EDTA)を用いて細胞培地から回収された。それか
ら細胞(細胞型に依存するが、５０μl中における１０００〜５０００の細胞)が
植え付けられ、実験用試薬(すなわち、関心のある薬剤)、組み合わせ実験のため
には両者の薬剤が添加される前に37℃で一夜培養された。それから37℃にて二日
間培養の後、５mg/ml ＭＴＴ溶液１０μlを対照培養容器(media control well)
と同様にすべての実験容器に添加した。次いでさらに４時間培養を行った。１０
０μlのＭＴＴ溶解緩衝液を加えて一夜３７℃で培養を行った。次いでプレート
がELISAプレートリーダー(plate reader)上で５７０ｎｍ、参考のために６３０
ｎｍにおける吸光度が読み取られた。
ら細胞(細胞型に依存するが、５０μl中における１０００〜５０００の細胞)が
植え付けられ、実験用試薬(すなわち、関心のある薬剤)、組み合わせ実験のため
には両者の薬剤が添加される前に37℃で一夜培養された。それから37℃にて二日
間培養の後、５mg/ml ＭＴＴ溶液１０μlを対照培養容器(media control well)
と同様にすべての実験容器に添加した。次いでさらに４時間培養を行った。１０
０μlのＭＴＴ溶解緩衝液を加えて一夜３７℃で培養を行った。次いでプレート
がELISAプレートリーダー(plate reader)上で５７０ｎｍ、参考のために６３０
ｎｍにおける吸光度が読み取られた。
【００２３】
ルイス肺がん細胞系および細胞培養：ルイス肺がんクローンであるM４７は転
移モデルである。ルイス肺がん細胞はウシ胎仔の血清およびペニシリン−ストレ
プトマイシンが添加されたＲＰＭＩ−１６４０の培地中にて保存された。腫瘍を
誘導するために細胞をリン酸緩衝液で三回洗浄した。次いでこれを１×１０６細
胞数／０．１ｍｌに希釈して再度懸濁させた。生存率が＞９５%であった細胞の
みがin vivoにおける研究に供された。
移モデルである。ルイス肺がん細胞はウシ胎仔の血清およびペニシリン−ストレ
プトマイシンが添加されたＲＰＭＩ−１６４０の培地中にて保存された。腫瘍を
誘導するために細胞をリン酸緩衝液で三回洗浄した。次いでこれを１×１０６細
胞数／０．１ｍｌに希釈して再度懸濁させた。生存率が＞９５%であった細胞の
みがin vivoにおける研究に供された。
【００２４】
この研究に使用されたマウス系はＣ５７ＢＬ／１０であった。一週間の環境順
応後、腫瘍細胞の懸濁液の形態で、細胞がマウスの皮下に移植された。すべての
マウスの同一の部位に細胞が接種された。
応後、腫瘍細胞の懸濁液の形態で、細胞がマウスの皮下に移植された。すべての
マウスの同一の部位に細胞が接種された。
【００２５】
原発性腫瘍に対する薬剤の効果を評価するために二日ごとに薬剤溶液が腹腔内
(ip)注射により与えられた。動物に対しては、日単位で一般的な試験が実施され
た。腫瘍の増殖は常時監視された。腫瘍転移に対する薬剤の効果を評価するため
に、腫瘍が０．５〜１．０ｃｍ３の大きさになるまで増殖させた。マウスをラン
ダムに数グループに分けて、薬剤を腹腔内注射により与えた。各実験終了後は実
験動物を犠牲にし、剖検を行った。腫瘍、器官または両者を無菌状態下で取り出
した。腫瘍を秤量した。器官の病理学的変化を肉眼で検査し、その後器官をホリ
マリンに固定した。肺はブーアン固定液(Bouin's fixative)で固定され、肺表面
の転移の数が立体顕微鏡により数えられた。
(ip)注射により与えられた。動物に対しては、日単位で一般的な試験が実施され
た。腫瘍の増殖は常時監視された。腫瘍転移に対する薬剤の効果を評価するため
に、腫瘍が０．５〜１．０ｃｍ３の大きさになるまで増殖させた。マウスをラン
ダムに数グループに分けて、薬剤を腹腔内注射により与えた。各実験終了後は実
験動物を犠牲にし、剖検を行った。腫瘍、器官または両者を無菌状態下で取り出
した。腫瘍を秤量した。器官の病理学的変化を肉眼で検査し、その後器官をホリ
マリンに固定した。肺はブーアン固定液(Bouin's fixative)で固定され、肺表面
の転移の数が立体顕微鏡により数えられた。
【００２６】
ＲＩＦ(放射線により誘導された線維肉腫)細胞系および細胞培養：放射線によ
り誘導された線維肉腫クローンであるＲＩＦ−１は固体の腫瘍モデルである。Ｒ
ＩＦ−１細胞は致死性のウシの血清およびペニシリン−ストレプトマイシンが添
加されたＤＭＥＭ培地にて保存された。腫瘍誘導のために、２×１０５個の細胞
がＣ３Ｈ系マウスの背中に皮下注射された。腫瘍が１０日以内に出現し３週間以
内でその大きさが９４〜１３０ｍｍ３に達した。薬剤を含有したpoly(カルボキ
シフェノキシプロパン−コ−セバシン酸)またはpoly(CPP-SA)ポリマーインプラ
ントを準備し、これをヤップらの方法(１９９７)により腫瘍に移植した。同一人
が移植時における初期容積の４倍になるまで二日ごとに腫瘍の大きさを測定した
。その最終容積は４００ｍｍ３であった。
り誘導された線維肉腫クローンであるＲＩＦ−１は固体の腫瘍モデルである。Ｒ
ＩＦ−１細胞は致死性のウシの血清およびペニシリン−ストレプトマイシンが添
加されたＤＭＥＭ培地にて保存された。腫瘍誘導のために、２×１０５個の細胞
がＣ３Ｈ系マウスの背中に皮下注射された。腫瘍が１０日以内に出現し３週間以
内でその大きさが９４〜１３０ｍｍ３に達した。薬剤を含有したpoly(カルボキ
シフェノキシプロパン−コ−セバシン酸)またはpoly(CPP-SA)ポリマーインプラ
ントを準備し、これをヤップらの方法(１９９７)により腫瘍に移植した。同一人
が移植時における初期容積の４倍になるまで二日ごとに腫瘍の大きさを測定した
。その最終容積は４００ｍｍ３であった。
【００２７】
組み合わせ実験のために、照射率１Gy／分の割合でガンマー線照射(６０Co,セ
ラトン７８０)のシグナルドース（signal dose）が薬剤含有ポリマーの移植後２
４時間行われた。
ラトン７８０)のシグナルドース（signal dose）が薬剤含有ポリマーの移植後２
４時間行われた。
【００２８】
実施例３：エンド−エクソヌクレアーゼの単離および検定(アッセイ)
ヒトエンド−エクソヌクレアーゼはリウ(Liu)らによって述べられた方法(１９
９５)により単離された。培養細胞がトリプシンＥＤＴＡで分離され、その細胞
懸濁液は４℃にて７００ｇの力で１０分間遠心分離された。細胞ペレットは冷リ
ン酸塩緩衝生理食塩水(PBS)で二回洗浄された。細胞は次いで再び懸濁され、５m
M EDTMおよび１mM PMSFを含むpH7.5の20mM トリス−塩酸中で音波処理された(緩
衝液Ａ)。その結果起こる細胞溶解懸濁液は４℃にて10,000gの力で遠心分離され
た。上澄み液はそれから、チョウおよびレズニック(Chow and Resnick)により先
述された(１９８７)ように抗体−蛋白質Ａ−セファロース(Sepharose)親和性カ
ラムにかけられた。緩衝液Ａ(溶出液のＡ２８０がゼロになるまで)で十分に洗浄
した後、次いでエンド−エクソヌクレアーゼを溶離するために３．５M MgCl２を
含む緩衝液Ａでカラムを溶離した。溶離したエンド−エクソヌクレアーゼは、緩
衝液Ａで、少なくとも緩衝液を二度、さらに蒸留水に一度取り替えて、十分に透
析された。
９５)により単離された。培養細胞がトリプシンＥＤＴＡで分離され、その細胞
懸濁液は４℃にて７００ｇの力で１０分間遠心分離された。細胞ペレットは冷リ
ン酸塩緩衝生理食塩水(PBS)で二回洗浄された。細胞は次いで再び懸濁され、５m
M EDTMおよび１mM PMSFを含むpH7.5の20mM トリス−塩酸中で音波処理された(緩
衝液Ａ)。その結果起こる細胞溶解懸濁液は４℃にて10,000gの力で遠心分離され
た。上澄み液はそれから、チョウおよびレズニック(Chow and Resnick)により先
述された(１９８７)ように抗体−蛋白質Ａ−セファロース(Sepharose)親和性カ
ラムにかけられた。緩衝液Ａ(溶出液のＡ２８０がゼロになるまで)で十分に洗浄
した後、次いでエンド−エクソヌクレアーゼを溶離するために３．５M MgCl２を
含む緩衝液Ａでカラムを溶離した。溶離したエンド−エクソヌクレアーゼは、緩
衝液Ａで、少なくとも緩衝液を二度、さらに蒸留水に一度取り替えて、十分に透
析された。
【００２９】
それからエンド−エクソヌクレアーゼは凍結乾燥により濃縮された。ヌクレア
ーゼ活性がチョウおよびレズニックにより述べられた方法(１９８３)によってγ
−３２Ｐでラベルされた熱変性した単鎖pBR３２２ＤＮＡからの酸可溶放射能の
放出量を測定することによって決定された。活性の一単位は３７℃にて３０分間
に１μｇのＤＮＡを酸性可溶にするデオキシリボヌクレアーゼ量と定義された。
薬剤による阻害アッセイのために、ヌクレアーゼ反応の開始に先立って薬剤がエ
ンド−エクソヌクレアーゼに添加された。 表１は種々の化学療法剤によるエンド−エクソヌクレアーゼ阻害の水準を示す
。
ーゼ活性がチョウおよびレズニックにより述べられた方法(１９８３)によってγ
−３２Ｐでラベルされた熱変性した単鎖pBR３２２ＤＮＡからの酸可溶放射能の
放出量を測定することによって決定された。活性の一単位は３７℃にて３０分間
に１μｇのＤＮＡを酸性可溶にするデオキシリボヌクレアーゼ量と定義された。
薬剤による阻害アッセイのために、ヌクレアーゼ反応の開始に先立って薬剤がエ
ンド−エクソヌクレアーゼに添加された。 表１は種々の化学療法剤によるエンド−エクソヌクレアーゼ阻害の水準を示す
。
【００３０】
【表１】
【００３１】
実施例４：クローン産生性検定(アッセイ)によるペンタミジンの存在下における
細胞残存数 細胞残存数のクローン産生性測定が上述した方法によりペンタミジンの初期効
果を決定するのに用いられた。 原発性細胞であるＭＣＦ７およびHela細胞のペンタミジン存在下におけるクロ
ーン産生性アッセイを用いて算出した残存率が図２に示されている。図２に示さ
れた結果はペンタミジンがその投与量に依存してがん細胞を攻撃することを強調
している。がん性のＭＣＦ７およびHela細胞がヒト原発性線維芽細胞と比較され
た。細胞の残存率がペンタミジンの投与量を変えて測定された。ペンタミジン０
．１ｍＭの濃度においてがん細胞が死滅し始めて、１０ｍＭの濃度において全が
ん細胞が死滅した。これらの条件下では、ペンタミジンは正常な原発性ヒト細胞
に対しては影響が無かった。がん細胞に対する投与量依存性および選択性はペン
タミジンが有益な抗がん剤であることを示している。
細胞残存数 細胞残存数のクローン産生性測定が上述した方法によりペンタミジンの初期効
果を決定するのに用いられた。 原発性細胞であるＭＣＦ７およびHela細胞のペンタミジン存在下におけるクロ
ーン産生性アッセイを用いて算出した残存率が図２に示されている。図２に示さ
れた結果はペンタミジンがその投与量に依存してがん細胞を攻撃することを強調
している。がん性のＭＣＦ７およびHela細胞がヒト原発性線維芽細胞と比較され
た。細胞の残存率がペンタミジンの投与量を変えて測定された。ペンタミジン０
．１ｍＭの濃度においてがん細胞が死滅し始めて、１０ｍＭの濃度において全が
ん細胞が死滅した。これらの条件下では、ペンタミジンは正常な原発性ヒト細胞
に対しては影響が無かった。がん細胞に対する投与量依存性および選択性はペン
タミジンが有益な抗がん剤であることを示している。
【００３２】
実施例５：抗がん活性
ペンタミジンおよび多くの既知の抗がん剤の抗がん活性を表２に示す。
【表２】
【００３３】
表２のがん細胞タイプはつぎのとおりである。 Ｈ５２０−NSCLC（スクアムス
属がん原発性腫瘍）、Ｈ４６０−NSCLC（大細胞がん、胸膜浸出液）、Ｈ６６１
−NSCLC(大細胞がん、リンパ節)、ＭＣＦ−７−乳がん(腺がん、胸膜浸出液)、
ＨＴ２９−結腸がん(腺がん、原発性腫瘍)。細胞が化合物に暴露される時間の長
さは日単位で示される。数字３で示されるデータは国立がん研究所から得たもの
である。
属がん原発性腫瘍）、Ｈ４６０−NSCLC（大細胞がん、胸膜浸出液）、Ｈ６６１
−NSCLC(大細胞がん、リンパ節)、ＭＣＦ−７−乳がん(腺がん、胸膜浸出液)、
ＨＴ２９−結腸がん(腺がん、原発性腫瘍)。細胞が化合物に暴露される時間の長
さは日単位で示される。数字３で示されるデータは国立がん研究所から得たもの
である。
【００３４】
ＬＣ５０は細胞の５０％を死滅させる薬剤または化学物質の濃度である。結果
はペンタミジンが抗がん剤であることを示している。データはまたペンタミジン
はエトポシドより多くの細胞を死滅させるが、マイトマイシンＣよりは少ない細
胞しか死滅させないことを示している。仮に実験を２日に対して４日以上続けら
れればペンタミジンの効果は向上する。このことは天然に発生する菌株のDNA破
壊は比較的まれであることおよびペンタミジンへの暴露を長くすることが効果的
であることを示唆している。これら薬剤の臨床的使用の可否は抗がん活性と有害
な副作用との間のバランス如何で決まる。このように高濃度で投与可能な比較的
無害な薬剤の方が、より効果的であるが非常に少ない投与量でしか許容されない
毒性を持つ薬剤よりも有益である。既知の臨床データによれば、ペンタミジンは
低毒性である。ペンタミジン、ジスタマイシンＡおよびベレニルの抗がん活性を
表３に示す。
はペンタミジンが抗がん剤であることを示している。データはまたペンタミジン
はエトポシドより多くの細胞を死滅させるが、マイトマイシンＣよりは少ない細
胞しか死滅させないことを示している。仮に実験を２日に対して４日以上続けら
れればペンタミジンの効果は向上する。このことは天然に発生する菌株のDNA破
壊は比較的まれであることおよびペンタミジンへの暴露を長くすることが効果的
であることを示唆している。これら薬剤の臨床的使用の可否は抗がん活性と有害
な副作用との間のバランス如何で決まる。このように高濃度で投与可能な比較的
無害な薬剤の方が、より効果的であるが非常に少ない投与量でしか許容されない
毒性を持つ薬剤よりも有益である。既知の臨床データによれば、ペンタミジンは
低毒性である。ペンタミジン、ジスタマイシンＡおよびベレニルの抗がん活性を
表３に示す。
【００３５】
【表３】
【００３６】
がん細胞タイプは次のとおりである：Ｈ５２０−NSCLC(スクアムス属がん、原
発性腫瘍)、Ｈ４６０−NSCLC(大細胞がん、胸膜浸出液)、Ｈ６６１−NSCLC(大細
胞がん、リンパ節)、ＭＣＦ−７−乳房がん(腺がん、胸膜浸出液)、ＨＴ２９−
結腸がん(腺がん、原発性腫瘍)。 細胞が化学物質に暴露される時間(日)の長さは表３に示されている。これらの
結果はエンド−エクソヌクレアーゼのこれら阻害剤が抗がん活性を有することを
示している。
発性腫瘍)、Ｈ４６０−NSCLC(大細胞がん、胸膜浸出液)、Ｈ６６１−NSCLC(大細
胞がん、リンパ節)、ＭＣＦ−７−乳房がん(腺がん、胸膜浸出液)、ＨＴ２９−
結腸がん(腺がん、原発性腫瘍)。 細胞が化学物質に暴露される時間(日)の長さは表３に示されている。これらの
結果はエンド−エクソヌクレアーゼのこれら阻害剤が抗がん活性を有することを
示している。
【００３７】
実施例６：エンド−エクソヌクレアーゼの阻害剤のDNA切断誘発剤との組み合わ
せ 表４のデータはペンタミジンのマイトマイシンC、エトポシドおよびシスプラ
チンとの組み合わせ効果を示す。
せ 表４のデータはペンタミジンのマイトマイシンC、エトポシドおよびシスプラ
チンとの組み合わせ効果を示す。
【００３８】
【表４】
【００３９】
表２および表４のデータを比較すると、ペンタミジンをマイトマイシンとの組
み合わせて使用することにより細胞を死滅させるに必要な薬剤の濃度を低下でき
ることを示している。 同じことがペンタミジンとエトポシドとの組み合わせの場合にも言える。これ
らの効果の大きさが、マイトマイシンおよびエトポシドを組み合わせたペンタミ
ジンの使用ががん細胞の非常に効果的な死滅につながることを示唆している。こ
のことがマイトマイシンおよびエトポシドのような毒性の少ない抗がん剤を多量
に投与することを可能にする。 図３はマイトマイシンＣおよびエトポシドを各々単独で使用するよりもマイト
マイシンＣおよびエトポシドをペンタミジンと組み合わせて使用する方ががん細
胞を死滅させるのに５０から１０００倍以上の効果があることを示している。
み合わせて使用することにより細胞を死滅させるに必要な薬剤の濃度を低下でき
ることを示している。 同じことがペンタミジンとエトポシドとの組み合わせの場合にも言える。これ
らの効果の大きさが、マイトマイシンおよびエトポシドを組み合わせたペンタミ
ジンの使用ががん細胞の非常に効果的な死滅につながることを示唆している。こ
のことがマイトマイシンおよびエトポシドのような毒性の少ない抗がん剤を多量
に投与することを可能にする。 図３はマイトマイシンＣおよびエトポシドを各々単独で使用するよりもマイト
マイシンＣおよびエトポシドをペンタミジンと組み合わせて使用する方ががん細
胞を死滅させるのに５０から１０００倍以上の効果があることを示している。
【００４０】
我々は組み合わせの効率をつぎのように定義した：
効率＝(［ペンタミジン］ｃ／［ペンタミジン］ｃ)＊(［Ｐ］ｃ／［Ｐ］ｃ)
この式中「ペンタミジン」oはペンタミジン単独使用のＬＣ５０投与量で、一方
［ペンタミジン］cは他の薬剤との組み合わせで使用した時に必要とするＬＣ５
０の投与量を表す。“Ｐ”はマイトマイシンまたはエトポシドを表し、下付き文
字“ｏ”および“ｃ”はそれぞれ化学物質が実験において単独で使用されたか組
み合わせでの使用かの場合を示す。
［ペンタミジン］cは他の薬剤との組み合わせで使用した時に必要とするＬＣ５
０の投与量を表す。“Ｐ”はマイトマイシンまたはエトポシドを表し、下付き文
字“ｏ”および“ｃ”はそれぞれ化学物質が実験において単独で使用されたか組
み合わせでの使用かの場合を示す。
【００４１】
図４はシスプラチンとペンタミジンの組み合わせによりがん細胞を死滅させる
効率がより絶大なものになることを示している。シスプラチンをペンタミジンと
組み合わせることによりシスプラチン単独使用に比して効率が１６，０００倍に
もなる。この驚くべき効率の向上は既知の化学療法剤の挙動機構と一致する。マ
イトマイシンＣおよびエトポシドは単鎖切断を介在する複合機構により細胞死滅
を達成する。これらの単鎖切断の内、日本鎖切断に進展するものは比較的少ない
。対照的に、シスプラチンは最終的には二本鎖切断を誘発する機構により効果を
発揮するエンド−エクソヌクレアーゼは二本鎖切断を修復する。これらの結果は
細胞培養において、ペンタミジンによるエンド−エクソヌクレアーゼの阻害が単
鎖切断誘発する薬剤よりも二本鎖切断を誘発する薬剤の抗がん活性効率をはるか
に増大させることを証明している。 化学療法処理においてペンタミジンを追加することによってなんらの効率低下
なしに化学療法剤の濃度を低下させることが可能となる。また治療の効率も向上
させる。
効率がより絶大なものになることを示している。シスプラチンをペンタミジンと
組み合わせることによりシスプラチン単独使用に比して効率が１６，０００倍に
もなる。この驚くべき効率の向上は既知の化学療法剤の挙動機構と一致する。マ
イトマイシンＣおよびエトポシドは単鎖切断を介在する複合機構により細胞死滅
を達成する。これらの単鎖切断の内、日本鎖切断に進展するものは比較的少ない
。対照的に、シスプラチンは最終的には二本鎖切断を誘発する機構により効果を
発揮するエンド−エクソヌクレアーゼは二本鎖切断を修復する。これらの結果は
細胞培養において、ペンタミジンによるエンド−エクソヌクレアーゼの阻害が単
鎖切断誘発する薬剤よりも二本鎖切断を誘発する薬剤の抗がん活性効率をはるか
に増大させることを証明している。 化学療法処理においてペンタミジンを追加することによってなんらの効率低下
なしに化学療法剤の濃度を低下させることが可能となる。また治療の効率も向上
させる。
【００４２】
実施例７：動物実験
図５はかなり大きな(１００mm３)腺維芽細胞(RIF)腫瘍(皮膚がんから単離され
た細胞系)を持ったマウスに生理食塩水、ペンタミジン、または標準の抗がん剤
である５-フルオロウラシルを含有した生分解性ポリマーの腫瘍移植を行った基
礎実験の結果を示す。ペンタミジンの腫瘍増殖を遅らせる効果は生理食塩水と５
−フルオロウラシルの中間であった。 この結果は固体の腫瘍がすでに充分定着しており、またペンタミジンの投与量
が最適化されていなかったという理由で疑いのないものである。ポリマー移植シ
ステムは関心事の薬剤を監視するのに便利な方法である。ポリマーが生分解され
ることによって薬剤が放出される。しかしもはや薬剤が存在しない３日または４
日のうちに分解が終了する。このような制約があるにもかかわらず、ペンタミジ
ンは薬剤が存在する期間においてはその効果を発揮した。
た細胞系)を持ったマウスに生理食塩水、ペンタミジン、または標準の抗がん剤
である５-フルオロウラシルを含有した生分解性ポリマーの腫瘍移植を行った基
礎実験の結果を示す。ペンタミジンの腫瘍増殖を遅らせる効果は生理食塩水と５
−フルオロウラシルの中間であった。 この結果は固体の腫瘍がすでに充分定着しており、またペンタミジンの投与量
が最適化されていなかったという理由で疑いのないものである。ポリマー移植シ
ステムは関心事の薬剤を監視するのに便利な方法である。ポリマーが生分解され
ることによって薬剤が放出される。しかしもはや薬剤が存在しない３日または４
日のうちに分解が終了する。このような制約があるにもかかわらず、ペンタミジ
ンは薬剤が存在する期間においてはその効果を発揮した。
【００４３】
図６はペンタミジンを運ぶためにポリマー移植を行った同様の実験結果を示す
。実験は腫瘍が１００mm３の大きさに増殖した直後に照射(移植後２４時間)処理
が行われた腺維芽細胞（RIF）腫瘍を持つマウスを用いて行われた。図６の結果
は照射処理の有効性が処理後１２日で消失したことを示す。しかし照射およびペ
ンタミジン投与の組み合わせにより処方された動物にかなり長期間有意な腫瘍の
増殖が見られなかった。ペンタミジンがポリマー移植を媒介として運ばれ、そし
てそれ故にペンタミジンは３または４日で消失した。それにもかかわらず、その
作用の有効性は絶大であった。実験マウスはペンタミジンの使用によりなんらの
副作用の兆候をも示さなかった。
。実験は腫瘍が１００mm３の大きさに増殖した直後に照射(移植後２４時間)処理
が行われた腺維芽細胞（RIF）腫瘍を持つマウスを用いて行われた。図６の結果
は照射処理の有効性が処理後１２日で消失したことを示す。しかし照射およびペ
ンタミジン投与の組み合わせにより処方された動物にかなり長期間有意な腫瘍の
増殖が見られなかった。ペンタミジンがポリマー移植を媒介として運ばれ、そし
てそれ故にペンタミジンは３または４日で消失した。それにもかかわらず、その
作用の有効性は絶大であった。実験マウスはペンタミジンの使用によりなんらの
副作用の兆候をも示さなかった。
【００４４】
図７はルイス型肺がんである原発性腫瘍モデルに対して投与された場合の抗が
ん剤としてのペンタミジンの効果を示す。ペンタミジンは注射により毎日投与さ
れた。その結果はペンタジミンが現在肺がんの治療に使用されている化学物質で
あるシスプラチニウムと同様がん増殖阻害効果があったことを示している。ルイ
ス型肺がんへの肺腫瘍移植は転移によって二次性の腫瘍を形成する。これら肺へ
の転移発生率に対するペンタミジンの効果については別途研究された。死後検査
でマウスの肺転移個所が数えられた。ペンタミジンはその投与量に依存して転移
を低減させ、試験されたうちの最高の投与量の場合で転移を３のファクターで低
減させた。これらの死後の試験結果について表５に示す。
ん剤としてのペンタミジンの効果を示す。ペンタミジンは注射により毎日投与さ
れた。その結果はペンタジミンが現在肺がんの治療に使用されている化学物質で
あるシスプラチニウムと同様がん増殖阻害効果があったことを示している。ルイ
ス型肺がんへの肺腫瘍移植は転移によって二次性の腫瘍を形成する。これら肺へ
の転移発生率に対するペンタミジンの効果については別途研究された。死後検査
でマウスの肺転移個所が数えられた。ペンタミジンはその投与量に依存して転移
を低減させ、試験されたうちの最高の投与量の場合で転移を３のファクターで低
減させた。これらの死後の試験結果について表５に示す。
【００４５】
【表５】
【００４６】
実施例８：in vivoにおける動物実験
（材料と方法）
ペンタミジンを調達した。ペンタミジンを滅菌された蒸留水に溶解して溶液を
作製した。ペンタミジン溶液は等分して分けられ、調製後直ちに−２０℃にて保
管された。使用直前に在庫薬品を急速解凍し、４℃で保管し処理するまでの間光
を遮断した。シスプラチンおよびアドリアマイシンを調達した。これらの薬剤を
臨床的試料用に指示どおりに調達した。生理食塩水(０．９％)が４℃にて保管さ
れた。
作製した。ペンタミジン溶液は等分して分けられ、調製後直ちに−２０℃にて保
管された。使用直前に在庫薬品を急速解凍し、４℃で保管し処理するまでの間光
を遮断した。シスプラチンおよびアドリアマイシンを調達した。これらの薬剤を
臨床的試料用に指示どおりに調達した。生理食塩水(０．９％)が４℃にて保管さ
れた。
【００４７】
（ルイス型肺がん細胞および細胞培養）
高い転移潜在性を持つルイス型肺がんクローンであるＭ４７が用いられた。Ｍ
４７によって誘発された腫瘍は増殖率および化学療法薬剤に対する反応との関係
について十分特性づけられていた。用いられた細胞はマイコプラズマに汚染され
ていないことが確認された。細胞は１０％のウシ胎仔血清および１％ペニシリン
−ストレプトマイシンを添加したＰＲＭＩ−１６４０培地で５％二酸化炭素雰囲
気下にて保存された。細胞は次いで増殖され、同一継代(接種)のストックとして
保証されて液体窒素中にて保管された。同一細胞ストックおよび同一継代ナンバ
ーでオンコザイム調査(Oncozyme studies)がなされた。腫瘍誘発のために、細胞
が完全培地中で７０％増殖した後、次いでトリプシン-EDTA溶液［Ca++、Mg++、
およびNaHCO３のないHBSS中の0.05%トリプシン0.53mM EDTA-4Na；Cellgro no.25
-052-Li］。次いで細胞は遠心分離にかけられ、リン酸緩衝液［D-PBS, Ca++、お
よびMg++なし；Cellgro no.21-031-LV］で三回洗浄され、０．１〜1×１０６細
胞数／０．１ｍｌに希釈して再懸濁された。トリパン青色着色(trypan blue sta
ining)により生存度を調べ、生存度が＞９５％であった細胞のみがin vivo 研究
用に用いられた。
４７によって誘発された腫瘍は増殖率および化学療法薬剤に対する反応との関係
について十分特性づけられていた。用いられた細胞はマイコプラズマに汚染され
ていないことが確認された。細胞は１０％のウシ胎仔血清および１％ペニシリン
−ストレプトマイシンを添加したＰＲＭＩ−１６４０培地で５％二酸化炭素雰囲
気下にて保存された。細胞は次いで増殖され、同一継代(接種)のストックとして
保証されて液体窒素中にて保管された。同一細胞ストックおよび同一継代ナンバ
ーでオンコザイム調査(Oncozyme studies)がなされた。腫瘍誘発のために、細胞
が完全培地中で７０％増殖した後、次いでトリプシン-EDTA溶液［Ca++、Mg++、
およびNaHCO３のないHBSS中の0.05%トリプシン0.53mM EDTA-4Na；Cellgro no.25
-052-Li］。次いで細胞は遠心分離にかけられ、リン酸緩衝液［D-PBS, Ca++、お
よびMg++なし；Cellgro no.21-031-LV］で三回洗浄され、０．１〜1×１０６細
胞数／０．１ｍｌに希釈して再懸濁された。トリパン青色着色(trypan blue sta
ining)により生存度を調べ、生存度が＞９５％であった細胞のみがin vivo 研究
用に用いられた。
【００４８】
（腫瘍細胞の接種および処理）
この研究に用いたマウス系はチャールズリバー社のＣ５７BL／１０である。動
物はケージ当たり５匹収容されて、動物用食料が与えられ水が任意に与えられた
。一週間の環境順化の後、右横腹のわきの下領域の皮下に腫瘍細胞の懸濁液［２
−５×１０５の生存細胞／０．１ｍｌ］としてLLC細胞が移植された。すべての
動物が同一部位に接種された。動物に対して毎日一般的試験が行われた。腫瘍の
増殖がカリパスを用いて２日または３日ごとに監視(モニター)された。測定され
たパラメーターは以下のとおりであった。腫瘍は、最も長い長軸(長さ)と、これ
に垂直方向の最短軸の長さ（幅）を測定し、次式によって相対的な腫瘍容積(ｃ
ｍ３)を算出した：「長さ(ｃｍ)×(幅 ｃｍ)２」(約１０−１５日)、マウスは
無作為に次のグループのひとつに移された。
物はケージ当たり５匹収容されて、動物用食料が与えられ水が任意に与えられた
。一週間の環境順化の後、右横腹のわきの下領域の皮下に腫瘍細胞の懸濁液［２
−５×１０５の生存細胞／０．１ｍｌ］としてLLC細胞が移植された。すべての
動物が同一部位に接種された。動物に対して毎日一般的試験が行われた。腫瘍の
増殖がカリパスを用いて２日または３日ごとに監視(モニター)された。測定され
たパラメーターは以下のとおりであった。腫瘍は、最も長い長軸(長さ)と、これ
に垂直方向の最短軸の長さ（幅）を測定し、次式によって相対的な腫瘍容積(ｃ
ｍ３)を算出した：「長さ(ｃｍ)×(幅 ｃｍ)２」(約１０−１５日)、マウスは
無作為に次のグループのひとつに移された。
【００４９】
１）転移
動物は原発性がんを単離するために外科手術に委ねられた。マウスはフォラン
で軽く麻酔がかけられた。腫瘍の上に横たわる皮膚が層流フード(laminar flow
hood)中でベタジンまたはエタノールで洗浄された。滅菌したメスで小さな皮膚
切開(０．５−１ｃｍ)を行い、腫瘍が正常な組織(皮膚と筋肉)から注意深く分離
された。ルイス型がん細胞(増殖の初期段階；１−３週間)は全く局限された腫瘍
で正常な組織になんらダメージを与えることなく分離が容易であった。腫瘍が単
離され、秤量され場合によっては組織病理学的目的のために固定された。傷は外
科用ステンレス製クリップ(オートクリップ；９ｍｍ；クレー アダムス社、パ
ーシッパニー、ニュージャージー州)でふさがれた。この部位はさらにベタジン
で消毒され、動物は先述したようにケージに収容された。
で軽く麻酔がかけられた。腫瘍の上に横たわる皮膚が層流フード(laminar flow
hood)中でベタジンまたはエタノールで洗浄された。滅菌したメスで小さな皮膚
切開(０．５−１ｃｍ)を行い、腫瘍が正常な組織(皮膚と筋肉)から注意深く分離
された。ルイス型がん細胞(増殖の初期段階；１−３週間)は全く局限された腫瘍
で正常な組織になんらダメージを与えることなく分離が容易であった。腫瘍が単
離され、秤量され場合によっては組織病理学的目的のために固定された。傷は外
科用ステンレス製クリップ(オートクリップ；９ｍｍ；クレー アダムス社、パ
ーシッパニー、ニュージャージー州)でふさがれた。この部位はさらにベタジン
で消毒され、動物は先述したようにケージに収容された。
【００５０】
このグループでは、マウスが外科手術後ケージ当たり５匹のグループに無作為
に収容された。ケージは無作為に特別実験グループに指定された。次いでマウス
はイアーパンチング法により数字で標識された。マウスは感染しないように毎日
チェックされた。不快感を表したマウスは直ちに殺された。各実験のために、特
別に追加されたスペアの対照マウスのグループが、十分局限化した肺がん転移の
有意な事例数を確保するためにマウスを殺す適正なタイミングを決定する目的で
組み入れられた。 このグループに対して薬剤処理を除いてグループ１と同様の実験が行われた。こ
のグループにおいて、原発性腫瘍の切除後約二週間で平均２５−３５の結節が検
出された。
に収容された。ケージは無作為に特別実験グループに指定された。次いでマウス
はイアーパンチング法により数字で標識された。マウスは感染しないように毎日
チェックされた。不快感を表したマウスは直ちに殺された。各実験のために、特
別に追加されたスペアの対照マウスのグループが、十分局限化した肺がん転移の
有意な事例数を確保するためにマウスを殺す適正なタイミングを決定する目的で
組み入れられた。 このグループに対して薬剤処理を除いてグループ１と同様の実験が行われた。こ
のグループにおいて、原発性腫瘍の切除後約二週間で平均２５−３５の結節が検
出された。
【００５１】
２）原発性腫瘍
このグループの条件は原発性腫瘍が取り除かれなかった点以外は転移実験に供
されたグルプと同一であって、動物は腫瘍が殺害を正当化できる程度に増殖する
までかまたは動物が殺害を正当化できる程度に苦しみを表すまで生かされた(運
動性の低下、厳しい呼吸徴候等)。
されたグルプと同一であって、動物は腫瘍が殺害を正当化できる程度に増殖する
までかまたは動物が殺害を正当化できる程度に苦しみを表すまで生かされた(運
動性の低下、厳しい呼吸徴候等)。
【００５２】
３）投与スケジュールおよび処理
ペンタミジンと化学療法剤は結果で述べたとおりに与えられた。対照の動物に
対して同容量の生理食塩水［０．９％塩化ナトリウム］が与えられた。各薬剤の
投与量は動物当たりの体重に対して規格化された。ペンタミジンおよびシスプラ
チニウムは腹腔内注射によって投与された。アドリアマイシンは静脈注射により
投与された。ペンタミジンおよび化学療法剤は動物に対して異なった時間に投与
された。二日おきに計５回投与された。 ペンタミジンおよびすべての化学療法剤を静脈注射することも可能であり、そ
してこれらを同時に投与することも可能である。投与の方法および方式の如何で
異なった組み合わせ効果が得られる。
対して同容量の生理食塩水［０．９％塩化ナトリウム］が与えられた。各薬剤の
投与量は動物当たりの体重に対して規格化された。ペンタミジンおよびシスプラ
チニウムは腹腔内注射によって投与された。アドリアマイシンは静脈注射により
投与された。ペンタミジンおよび化学療法剤は動物に対して異なった時間に投与
された。二日おきに計５回投与された。 ペンタミジンおよびすべての化学療法剤を静脈注射することも可能であり、そ
してこれらを同時に投与することも可能である。投与の方法および方式の如何で
異なった組み合わせ効果が得られる。
【００５３】
〔動物の殺害、腫瘍／器官調製〕
各実験の最後に(計５−８週間)動物は脱臼および剖検により殺害された。腫瘍
、器官または両者は無菌状態で切除された(層流フードを用いて)。腫瘍は秤量さ
れた。器官(グループ当たり5個)の病理学的変化を肉眼で観察した後、１０％フ
ォルマリンに固定した。 肺はフォルマリン溶液で希釈された１０％ブーアン固定液(Bouin's fixative)
で固定され、倍率4倍の立体顕微鏡または拡大鏡で肺表面の転移部位が数えられ
て、そしてある場合には肺が標準処方に基づいてパラフィンワックスに包埋され
た。包埋された組織は転移を確認するため、そしてさらに組織病理学的変化を調
べるために使用された。
、器官または両者は無菌状態で切除された(層流フードを用いて)。腫瘍は秤量さ
れた。器官(グループ当たり5個)の病理学的変化を肉眼で観察した後、１０％フ
ォルマリンに固定した。 肺はフォルマリン溶液で希釈された１０％ブーアン固定液(Bouin's fixative)
で固定され、倍率4倍の立体顕微鏡または拡大鏡で肺表面の転移部位が数えられ
て、そしてある場合には肺が標準処方に基づいてパラフィンワックスに包埋され
た。包埋された組織は転移を確認するため、そしてさらに組織病理学的変化を調
べるために使用された。
【００５４】
〔血液の分析〕
薬剤組み合わせを含むいくつかの実験のために、グループ当たり３−５匹の動
物から血液をカルディアックポンクション(cardiac ponction)によって採取した
。血液はヘパリン化されたチューブに集められて、分析された。 〔統計的分析〕 両側スチューデント・ティー(Ｔ)検定が種々のグループ間の統計的有意性を比
較するために使用された。
物から血液をカルディアックポンクション(cardiac ponction)によって採取した
。血液はヘパリン化されたチューブに集められて、分析された。 〔統計的分析〕 両側スチューデント・ティー(Ｔ)検定が種々のグループ間の統計的有意性を比
較するために使用された。
【００５５】
参照文献
（１）Chow, T.Y.-K.,and Resnick,M.A. (1983) The identification of a de
oxyribonuclease controlled by the RAD52 gene of Saccharomyces cerevisae.
In Friedberg, E.C. and Bridges, B.A. (eds), Cellular Responses to DNA D
amages. Alan R. Liss, New York, pp.447-455. （２）Chow, T.Y.-K., and Resnick, M.A. (1987) Purification and charact
erization of an end-exonuclease activity of yeast that requires a functi
onal RAD52 gene. J.Biol.Chem., 262, 17659-17667, （３）Chow, T.Y-K., and Resnick, M.A. (1988) An endo-exonuclease activ
ity of yeast that requires a functional RAD52 gene. Mol. Gen. Genet. 211
, 41-48. （４）Liu, G., Lehnert, S., and Chow, T.Y.-K. (1995) Mammalian endo-ex
onuclease activity and its level in various radiation sensitive cell lin
es. Mutagenesis 10, 91-94. （５）Sadecova, S., Lehnert, S., and Chow, T.Y.-K. (1997) Induction of
PBP74/mortalin/Grp75, a member of the hsp70 family , by low doses of io
nizing radiation: a possible role in the induced radioresistance. Int.J.
Radiat. Biol. 72, 653-660. （６）Niks, M., and Otto, M. (1990) Towards an optimized MTT assay. J.
Immunol. Methods. 130, 149-151. （７）Hussain, R.F., Nouri, A.M.E., and Oliver, R.T.D. (1993) A new ap
proach for measurement of cytotoxicity using colorimetric assay. J. Immu
nol. Methods. 160, 89-96 （８）Yapp, D.T.T., Lloyd, D.K., Zhu, j., and Lehnert, S.M. (1997) Tum
our treatment by sustained intratumoural release of cisplatin: effects o
f drug alone and combined with radiation. Int. J. Rad. Oncol. 39, 497-50
4.
oxyribonuclease controlled by the RAD52 gene of Saccharomyces cerevisae.
In Friedberg, E.C. and Bridges, B.A. (eds), Cellular Responses to DNA D
amages. Alan R. Liss, New York, pp.447-455. （２）Chow, T.Y.-K., and Resnick, M.A. (1987) Purification and charact
erization of an end-exonuclease activity of yeast that requires a functi
onal RAD52 gene. J.Biol.Chem., 262, 17659-17667, （３）Chow, T.Y-K., and Resnick, M.A. (1988) An endo-exonuclease activ
ity of yeast that requires a functional RAD52 gene. Mol. Gen. Genet. 211
, 41-48. （４）Liu, G., Lehnert, S., and Chow, T.Y.-K. (1995) Mammalian endo-ex
onuclease activity and its level in various radiation sensitive cell lin
es. Mutagenesis 10, 91-94. （５）Sadecova, S., Lehnert, S., and Chow, T.Y.-K. (1997) Induction of
PBP74/mortalin/Grp75, a member of the hsp70 family , by low doses of io
nizing radiation: a possible role in the induced radioresistance. Int.J.
Radiat. Biol. 72, 653-660. （６）Niks, M., and Otto, M. (1990) Towards an optimized MTT assay. J.
Immunol. Methods. 130, 149-151. （７）Hussain, R.F., Nouri, A.M.E., and Oliver, R.T.D. (1993) A new ap
proach for measurement of cytotoxicity using colorimetric assay. J. Immu
nol. Methods. 160, 89-96 （８）Yapp, D.T.T., Lloyd, D.K., Zhu, j., and Lehnert, S.M. (1997) Tum
our treatment by sustained intratumoural release of cisplatin: effects o
f drug alone and combined with radiation. Int. J. Rad. Oncol. 39, 497-50
4.
【００５６】
〔結果〕
（ペンタミジンの毒性）
抗腫瘍研究に使用されうるペンタミジンの最高投与許容量を調べるために、腫
瘍を持たないマウスを使用して、第一次検討を行った。３種類の腹腔内注射（一
日、三日および五日）をそれぞれ体重Ｋｇ当たり25、50、100および200ｍｇで実
施した。体重Ｋｇ当たり100ｍｇを投与されたすべての動物は図8に示されるとお
り急性毒性のため死亡した。これは、腹腔内注射の後でさえ観察された。体重Ｋ
ｇ当たり２５ｍｇおよび５０ｍｇの投与量は、明らかな副作用示すことなくマウ
スに受け入れられた。したがって、ペンタミジンの生物活性を調べるために５０
ｍｇ／Ｋｇまたはそれ未満を投与量として使用した。
瘍を持たないマウスを使用して、第一次検討を行った。３種類の腹腔内注射（一
日、三日および五日）をそれぞれ体重Ｋｇ当たり25、50、100および200ｍｇで実
施した。体重Ｋｇ当たり100ｍｇを投与されたすべての動物は図8に示されるとお
り急性毒性のため死亡した。これは、腹腔内注射の後でさえ観察された。体重Ｋ
ｇ当たり２５ｍｇおよび５０ｍｇの投与量は、明らかな副作用示すことなくマウ
スに受け入れられた。したがって、ペンタミジンの生物活性を調べるために５０
ｍｇ／Ｋｇまたはそれ未満を投与量として使用した。
【００５７】
（原発性腫瘍の増殖に対するペンタミジンの効果）
ＬＬＣ原発性腫瘍の増殖に対するペンタミジンの抗腫瘍性を検討するためにい
くつかの独立した実験を行った。これらの実験の結果、図１０から１５に示され
るように、最も活性な投与量は５０ｍｇ／Ｋｇ(p<0.01)である。ペンタミジンの
抗腫瘍効果は、図１０に示されるように、腫瘍増殖（14−16日）の最終日に非常
に明白である。注目すべきは、ペンタミジンは３−４ｍｇ/Ｋｇ/ipの投与量でシ
スプラチンと同等の活性を示す（図１３）。また図１４a と１４bに示される実
験において、ペンタミジンが３ｍｇ／Ｋｇのシスプラチンと併用した場合に、腫
瘍の完全な退行を示した動物があったことに注目することは重要である。しかし
ながら、これらの動物は、腫瘍の再増殖がなかったことを確認するためにより長
時間観察されなかった。５０ｍｇ／Ｋｇのペンタミジンとアドリアマイシンの混
合は、好ましい効果を示した（図１８）が、アドリアマイシンは試験された最高
濃度（7.5mg/Kg/iv,100％の死亡率（図１９））では非常に毒性が強く、一方で
最小投与量の５ｍｇ／Ｋｇではペンタミジンと同様に有効な抗腫瘍作用を示すの
で、併用効果をさらに増加するためにはより低投与量が必要であろう。
くつかの独立した実験を行った。これらの実験の結果、図１０から１５に示され
るように、最も活性な投与量は５０ｍｇ／Ｋｇ(p<0.01)である。ペンタミジンの
抗腫瘍効果は、図１０に示されるように、腫瘍増殖（14−16日）の最終日に非常
に明白である。注目すべきは、ペンタミジンは３−４ｍｇ/Ｋｇ/ipの投与量でシ
スプラチンと同等の活性を示す（図１３）。また図１４a と１４bに示される実
験において、ペンタミジンが３ｍｇ／Ｋｇのシスプラチンと併用した場合に、腫
瘍の完全な退行を示した動物があったことに注目することは重要である。しかし
ながら、これらの動物は、腫瘍の再増殖がなかったことを確認するためにより長
時間観察されなかった。５０ｍｇ／Ｋｇのペンタミジンとアドリアマイシンの混
合は、好ましい効果を示した（図１８）が、アドリアマイシンは試験された最高
濃度（7.5mg/Kg/iv,100％の死亡率（図１９））では非常に毒性が強く、一方で
最小投与量の５ｍｇ／Ｋｇではペンタミジンと同様に有効な抗腫瘍作用を示すの
で、併用効果をさらに増加するためにはより低投与量が必要であろう。
【００５８】
（転移の形成に対するペンタミジンの効果）
第一次実験において、図１６に示されるようにペンタミジンは５０ｍｇ／Ｋｇ
の投与量で生理食塩水処理コントロール（ｐ＜０．００１）と比較して５０％を
超える肺転移抑制を示した。このことは、後の実験でも確認された。ペンタミジ
ンは５０ｍｇ／Ｋｇの投与量で最も活性があり（ｐ＜０．０１）、１０−２５ｍ
ｇ／Ｋｇの投与量では重要な効果を示さない。顕微鏡検査の結果明らかになった
ことは、ペンタミジンで処理した動物においては生理食塩水で処理したグループ
に比較して、転移結節の数が顕著に減少し、結節の大きさが小さいことである。
50mg/Kg/ipのペンタミジンと４mg/Kg/ipのシスプラチンとのコンビネーションは
図１７に示すように顕著な効果を示した。同様に、50mg/Kg/ipのペンタミジンと
5mg/Kgのアドリアマイシン/ivとのコンビネーションは、図２０に示すようにあ
る有利な効果を示した。
の投与量で生理食塩水処理コントロール（ｐ＜０．００１）と比較して５０％を
超える肺転移抑制を示した。このことは、後の実験でも確認された。ペンタミジ
ンは５０ｍｇ／Ｋｇの投与量で最も活性があり（ｐ＜０．０１）、１０−２５ｍ
ｇ／Ｋｇの投与量では重要な効果を示さない。顕微鏡検査の結果明らかになった
ことは、ペンタミジンで処理した動物においては生理食塩水で処理したグループ
に比較して、転移結節の数が顕著に減少し、結節の大きさが小さいことである。
50mg/Kg/ipのペンタミジンと４mg/Kg/ipのシスプラチンとのコンビネーションは
図１７に示すように顕著な効果を示した。同様に、50mg/Kg/ipのペンタミジンと
5mg/Kgのアドリアマイシン/ivとのコンビネーションは、図２０に示すようにあ
る有利な効果を示した。
【００５９】
（結論）
この研究は、ペンタミジンが長期腹腔内投与の後、ルイス肺がん（Lewis Lung
Carcinoma）腫瘍増殖を許容される投与量で阻止することを明らかにする。原発
性腫瘍が０．５ないし１ｃｍ３に達した後除去された群において、投与量−効果
依存で抗転移効果が明らかに観察された。最高許容投与量である５０ｍｇ／Ｋｇ
が最も効果的であった。顕微鏡試験では、肺結節の数が減少したし、存在する場
合は、ペンタミジン処理群では、コントロールに比較してより小さかった。ペン
タミジンと化学療法剤とのコンビネーションは、得られたデータを参照すれば、
明らかに治療反応を改善している。
Carcinoma）腫瘍増殖を許容される投与量で阻止することを明らかにする。原発
性腫瘍が０．５ないし１ｃｍ３に達した後除去された群において、投与量−効果
依存で抗転移効果が明らかに観察された。最高許容投与量である５０ｍｇ／Ｋｇ
が最も効果的であった。顕微鏡試験では、肺結節の数が減少したし、存在する場
合は、ペンタミジン処理群では、コントロールに比較してより小さかった。ペン
タミジンと化学療法剤とのコンビネーションは、得られたデータを参照すれば、
明らかに治療反応を改善している。
【００６０】
（薬学的組成物）
上記化合物の薬学的組成物はがん患者の治療に使用される。本発明の化合物を
人体の目的組織に移送する運送材としては、生理食塩水とＤ５Ｗ（５％デキスト
ロース水）が挙げられる。本発明化合物経口投与調剤形態の製剤のために使用さ
れる増量剤として、例えば緩衝材、溶解剤、懸濁剤、乳化剤、粘度調節剤、風味
改良剤、ラクトース充填剤、抗酸化剤、保存剤または染料などの添加物が挙げら
れる。注射または他の投与のための増量剤も好ましい。そのような増量剤として
、例えば血清アルブミン、グルタミン酸、アスパラギン酸、リン脂質および脂肪
酸が挙げられる。
人体の目的組織に移送する運送材としては、生理食塩水とＤ５Ｗ（５％デキスト
ロース水）が挙げられる。本発明化合物経口投与調剤形態の製剤のために使用さ
れる増量剤として、例えば緩衝材、溶解剤、懸濁剤、乳化剤、粘度調節剤、風味
改良剤、ラクトース充填剤、抗酸化剤、保存剤または染料などの添加物が挙げら
れる。注射または他の投与のための増量剤も好ましい。そのような増量剤として
、例えば血清アルブミン、グルタミン酸、アスパラギン酸、リン脂質および脂肪
酸が挙げられる。
【００６１】
好ましい製剤は、バイアルまたは静脈内投与用バッグ（intravenous bag）に
保存される液剤である。本発明の化合物は固体または半固体の形態に製剤化され
ても良く、例えばピル、錠剤、クリーム、軟膏、粉末、乳液、ゼラチンカプセル
、カプセル、座剤、ゲルまたは薄膜などが挙げられる。 好ましい投与ルートは、静脈内投与である。他の可能な投与ルートは、経口投
与、局所投与、直腸投与、注射、身体の一部投与、吸入剤、硬膜外投与が挙げら
れる。本発明の組成物はまた移送分子と結合させてもよく例えば小胞やミセルな
どの移送様式に中に含ませて分子の移送を容易にしても良い。患者に投与するこ
とが出来る薬学的に許容することが出来る組成物の製造方法はこの技術分野で知
られている。
保存される液剤である。本発明の化合物は固体または半固体の形態に製剤化され
ても良く、例えばピル、錠剤、クリーム、軟膏、粉末、乳液、ゼラチンカプセル
、カプセル、座剤、ゲルまたは薄膜などが挙げられる。 好ましい投与ルートは、静脈内投与である。他の可能な投与ルートは、経口投
与、局所投与、直腸投与、注射、身体の一部投与、吸入剤、硬膜外投与が挙げら
れる。本発明の組成物はまた移送分子と結合させてもよく例えば小胞やミセルな
どの移送様式に中に含ませて分子の移送を容易にしても良い。患者に投与するこ
とが出来る薬学的に許容することが出来る組成物の製造方法はこの技術分野で知
られている。
【００６２】
本発明の組成物は、またがん細胞を選択的に標的とするあるいは薬剤を受け取
らせるためにがん細胞活性化する移送分子、モノクロナール抗体または例えば小
のう、ミセル等の移送様式と結合させても良い。 本発明化合物を含む薬学的な組成物は、ヒトまたは動物に投与される。投与量は
、個々の患者の状態、薬物の効能、薬物の物理的および化学的な安定性、毒性、
期待される効果および選択される投与ルートにより異なる（Robert Rakel, ed.,
Conn's Current Therapy(1995, W.B. Saunders Company, USA)）。このような
薬学的組成物はがんの治療に使用される。
らせるためにがん細胞活性化する移送分子、モノクロナール抗体または例えば小
のう、ミセル等の移送様式と結合させても良い。 本発明化合物を含む薬学的な組成物は、ヒトまたは動物に投与される。投与量は
、個々の患者の状態、薬物の効能、薬物の物理的および化学的な安定性、毒性、
期待される効果および選択される投与ルートにより異なる（Robert Rakel, ed.,
Conn's Current Therapy(1995, W.B. Saunders Company, USA)）。このような
薬学的組成物はがんの治療に使用される。
【００６３】
実施例９：診断方法
（材料と方法）
がん患者から採取した血清をニトロセルロース膜上にスポットし、Ｌｉｕなど
（１９５５）が記載した方法に従ってエンド−エクソヌクレアーゼに対して取得
したラビットの抗血清でプローブした。この方法において、エンド−エクソヌク
レアーゼ蛋白の試料を膜基質の上にスポットする。ラビットのポリクロナール抗
体を上記試料スポットした膜に加えた。抗体は蛋白に結合する。洗浄後、市販さ
れている抗ラビット抗体またはプロテインＡを含有する第二溶液を加えると、西
洋わさびペルオキシダーゼ（ｈｒｐ）と結合する。洗浄後に４−クロロ−１−ナ
フトールを最後に膜に加える。これは結合したhrpと反応して青色を呈する。こ
の色の強度は存在するエンド−エクソヌクレアーゼの濃度に比例する。要するに
、血清蛋白をビオーラッド・スロットブロット器具（Bio-Rad slotblot apparat
us）を使用して膜上にスポットする。ついで、膜を１ｍＭのＥＤＴＡ含有するｐ
Ｈ８．０の１０ｍＭトリス−塩酸でゆすいだ。洗浄後に、１％スキム−ミルク粉
末を含む緩衝液Ｂ（１０ｍＭトリス−塩酸、ｐＨ８．０、1ｍＭＥＤＴＡ、１５
０ｍＭＮａＣｌ）中で、膜を抗エンド−エクソヌクレアーゼ抗体とインキュベー
トした。膜を緩衝液Ｂで１５分間３度にわたり洗浄した後、市販されている、西
洋わさびペルオキシダーゼと共役した抗ラビットｌｇｇ（anti-rabbit-lgg）ま
たは西洋わさびペルオキシダーゼと共役している蛋白Ａ（プロテインＡ）を１％
スキムミルク粉末含有緩衝液Ｂに加えて、これを膜に加えて３時間室温でインキ
ュベートした。その後、膜を１５分間緩衝液Ｂで、１ＭＮａＣｌを含む緩衝液で
３０分間そして再び緩衝液Ｂで１５分間洗浄した。洗浄後、４−クロロ−１−ナ
フトール溶液を膜に加えた。西洋わさびペルオキシダーゼが存在すれば、反応し
て青色を呈する。
（１９５５）が記載した方法に従ってエンド−エクソヌクレアーゼに対して取得
したラビットの抗血清でプローブした。この方法において、エンド−エクソヌク
レアーゼ蛋白の試料を膜基質の上にスポットする。ラビットのポリクロナール抗
体を上記試料スポットした膜に加えた。抗体は蛋白に結合する。洗浄後、市販さ
れている抗ラビット抗体またはプロテインＡを含有する第二溶液を加えると、西
洋わさびペルオキシダーゼ（ｈｒｐ）と結合する。洗浄後に４−クロロ−１−ナ
フトールを最後に膜に加える。これは結合したhrpと反応して青色を呈する。こ
の色の強度は存在するエンド−エクソヌクレアーゼの濃度に比例する。要するに
、血清蛋白をビオーラッド・スロットブロット器具（Bio-Rad slotblot apparat
us）を使用して膜上にスポットする。ついで、膜を１ｍＭのＥＤＴＡ含有するｐ
Ｈ８．０の１０ｍＭトリス−塩酸でゆすいだ。洗浄後に、１％スキム−ミルク粉
末を含む緩衝液Ｂ（１０ｍＭトリス−塩酸、ｐＨ８．０、1ｍＭＥＤＴＡ、１５
０ｍＭＮａＣｌ）中で、膜を抗エンド−エクソヌクレアーゼ抗体とインキュベー
トした。膜を緩衝液Ｂで１５分間３度にわたり洗浄した後、市販されている、西
洋わさびペルオキシダーゼと共役した抗ラビットｌｇｇ（anti-rabbit-lgg）ま
たは西洋わさびペルオキシダーゼと共役している蛋白Ａ（プロテインＡ）を１％
スキムミルク粉末含有緩衝液Ｂに加えて、これを膜に加えて３時間室温でインキ
ュベートした。その後、膜を１５分間緩衝液Ｂで、１ＭＮａＣｌを含む緩衝液で
３０分間そして再び緩衝液Ｂで１５分間洗浄した。洗浄後、４−クロロ−１−ナ
フトール溶液を膜に加えた。西洋わさびペルオキシダーゼが存在すれば、反応し
て青色を呈する。
【００６４】
III 結果
病歴の知られた３７名の癌患者（乳癌転移）から採取した血清試料から、延命
とエンド−エクソヌクレアーゼの濃度との相関関係が見出された。５．５を使用
した高エンド−エクソヌクレアーゼに対するカット・ポイントの場合（With a c
ut point for high endo-exonuclease that was used of 5.5）、38.91ヶ月の平
均延命を示した患者群は、低エンド−エクソヌクレアーゼ量を示したのに対して
、10.43ヶ月の平均延命を示した患者群は高エンド−エクソヌクレアーゼ量を示
した。ｐ値は０．０２で、結果に対して、高い統計意義であることが示された。 さらに実際、すべてのがん患者は、異常な濃度のエンド−エクソヌクレアーゼ
（がんでない個人で検知された値を超えて）を示したが、他方、標準的ながん診
察マーカーであるＣＥＡは患者から採取した血清試料の約２５％しか陽性を検知
できなかった。
とエンド−エクソヌクレアーゼの濃度との相関関係が見出された。５．５を使用
した高エンド−エクソヌクレアーゼに対するカット・ポイントの場合（With a c
ut point for high endo-exonuclease that was used of 5.5）、38.91ヶ月の平
均延命を示した患者群は、低エンド−エクソヌクレアーゼ量を示したのに対して
、10.43ヶ月の平均延命を示した患者群は高エンド−エクソヌクレアーゼ量を示
した。ｐ値は０．０２で、結果に対して、高い統計意義であることが示された。 さらに実際、すべてのがん患者は、異常な濃度のエンド−エクソヌクレアーゼ
（がんでない個人で検知された値を超えて）を示したが、他方、標準的ながん診
察マーカーであるＣＥＡは患者から採取した血清試料の約２５％しか陽性を検知
できなかった。
【００６５】
この研究は、エンド−エクソヌクレアーゼ濃度が、転移乳がん患者の延命期間
と良好な関係を有することを明らかにした。 ほとんど全患者の試料においてエンド−エクソヌクレアーゼの異常な濃度を検
出したのに対して、標準的ながん診断マーカーであるＣＥＡは同じ患者群の２５
％しか陽性を検出できなかった。 本発明を好ましい実施の態様を用いて記載したが、当業者に明らかなごとくそ
の変更もまた可能であると理解すべきである。そのような変更や変化は本発明の
権利および範囲内であると考えるべきである。
と良好な関係を有することを明らかにした。 ほとんど全患者の試料においてエンド−エクソヌクレアーゼの異常な濃度を検
出したのに対して、標準的ながん診断マーカーであるＣＥＡは同じ患者群の２５
％しか陽性を検出できなかった。 本発明を好ましい実施の態様を用いて記載したが、当業者に明らかなごとくそ
の変更もまた可能であると理解すべきである。そのような変更や変化は本発明の
権利および範囲内であると考えるべきである。
【図１】 種々の細胞系におけるエンド−エクソヌクレアーゼ量のレベルを示
す棒グラフである。
す棒グラフである。
【図２】 ペンタミジンの異なる添加量下におけるクローン産生性定量法によ
る種々の細胞の残存量を示すグラフである。
る種々の細胞の残存量を示すグラフである。
【図３】 細胞死に対する異なる薬剤（マイトマイシンＣ＋ペンタミジン、エ
トポシド＋ペンタミジン）の組み合わせ効果を示す棒グラフである。
トポシド＋ペンタミジン）の組み合わせ効果を示す棒グラフである。
【図４】 細胞死に対するシスプラチンとペンタミジンの組み合わせ効果を示
す棒グラフである。
す棒グラフである。
【図５】 RIF腫瘍マウスモデルの腫瘍増殖に対するペンタミジンのポリマー
インプラントの効果を示すグラフである。
インプラントの効果を示すグラフである。
【図６】 RIF腫瘍マウスモデルの腫瘍増殖に対するペンタミジンのポリマー
インプラントおよび照射の組み合わせ効果を示すグラフである。
インプラントおよび照射の組み合わせ効果を示すグラフである。
【図７】 マウスの肺がんモデルの原発性腫瘍の増殖に対するペンタミジンの
効果を示すグラフである。
効果を示すグラフである。
【図８】 腹腔内経路から付与されたペンタミジンの毒性を示すグラフである
。
。
【図９】 ペンタミジンのin vivoにおける抗がん効果を示すグラフである。
【図１０】 ペンタミジンとシスプラチニウムの各々および組み合わせのin v
ivoにおける抗がん効果を示すグラフである。
ivoにおける抗がん効果を示すグラフである。
【図１１】 ペンタミジンとシスプラチニウムの各々および組み合わせによる
in vivoにおける抗がん効果を示すグラフである。
in vivoにおける抗がん効果を示すグラフである。
【図１２】 ペンタミジンとシスプラチニウムの各々および組み合わせによる
in vivoにおける抗がん効果を示すグラフである。
in vivoにおける抗がん効果を示すグラフである。
【図１３】 ルイス肺がんの原発性腫瘍の増殖に対するペンタミジンの効果を
示すグラフである。
示すグラフである。
【図１４ａ】 ペンタミジンとシスプラチニウムの各々および組み合わせのin
vivoにおける抗がん効果を示すグラフである。
vivoにおける抗がん効果を示すグラフである。
【図１４ｂ】 ペンタミジンとシスプラチニウムの各々および組み合わせのin
vivoにおける抗がん効果を示す棒グラフである。
vivoにおける抗がん効果を示す棒グラフである。
【図１５】 ペンタミジンとシスプラチニウムの各々および組み合わせのin v
ivoにおける抗がん効果を示す棒グラフである。
ivoにおける抗がん効果を示す棒グラフである。
【図１６】 ルイス肺がんに誘導された肺転移の発生率へのペンタミジンの影
響を示す棒グラフである。
響を示す棒グラフである。
【図１７】 ペンタミジンとシスプラチニウムの各々および組み合わせのin v
ivoにおける抗がん効果を示す棒グラフである。
ivoにおける抗がん効果を示す棒グラフである。
【図１８】 ペンタミジンとアドリアマイシンのin vivoにおける抗がん効果
を示すグラフである。
を示すグラフである。
【図１９】 in vivoにおける原発性腫瘍についてペンタミジンとアドリアマ
イシンが体重に与える効果を示す棒グラフである。
イシンが体重に与える効果を示す棒グラフである。
【図２０】 ペンタミジンおよびアドリアマイシンのin vivoにおける抗転移
効果を示す棒グラフである。 なお、図の中で、OPがペンタミジン、Adrがアドリアマイシン、およびCDDPが
シスプラチニウムを指す。
効果を示す棒グラフである。 なお、図の中で、OPがペンタミジン、Adrがアドリアマイシン、およびCDDPが
シスプラチニウムを指す。
─────────────────────────────────────────────────────
フロントページの続き
(51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考）
Ａ６１Ｋ 31/704 Ａ６１Ｋ 31/704
31/7056 31/7056
33/24 33/24
48/00 48/00
Ａ６１Ｐ 35/00 Ａ６１Ｐ 35/00
(81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ，
ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ
Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ，ＴＲ)，ＯＡ(ＢＦ
，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，
ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，Ｇ
Ｍ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＭＺ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ
，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，
ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＧ，ＡＬ，ＡＭ，
ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，Ｂ
Ｚ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ
，ＤＭ，ＤＺ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，
ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，Ｊ
Ｐ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ
，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，
ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＭＺ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，Ｒ
Ｏ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ
，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，
ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ
(72)発明者 イエー・チアオリ
カナダ国 ケベック州エイチ１エム１ヴイ
８ アンジュー ダンジューブ−ルヴァー
ル デギャレリー 6252
(72)発明者 グリラー・デービッド
カナダ国 オンタリオ州ケイ１エイチ５ア
ール７ オタワ デルマーコート 2026
(72)発明者 ユエン・レオナルド
カナダ国 ケベック州エイチ７エックス３
ケイ５ ラヴァル ラジャンネスストリー
ト 639
Ｆターム(参考） 4C084 AA13 AA17 DC32 MA02 MA17
MA52 MA55 MA66 NA05 NA14
ZB261 ZC781
4C086 AA01 AA02 CB02 CB03 EA10
EA11 HA12 MA01 MA02 MA17
MA52 MA55 NA05 NA14 ZB26
ZC78
4C206 AA01 AA02 FA51 HA10 HA26
JB15 MA01 MA02 MA37 MA72
MA75 MA86 NA05 NA14 ZB26
ZC78
Claims (50)
- 【請求項１】エンド−エクソヌクレアーゼ活性を阻害する化合物を含むことを
特徴とするがん細胞の増殖または腫瘍の増殖を阻害する医薬品組成物。 - 【請求項２】エンド−エクソヌクレアーゼ活性を阻害する化合物がペンタミジ
ンである請求項１記載の医薬品組成物。 - 【請求項３】エンド−エクソヌクレアーゼ活性を阻害する化合物がエンド−エ
クソヌクレアーゼをコードする遺伝子に対してアンチセンス配列となっているこ
とを特徴とする請求項１記載の医薬品組成物。 - 【請求項４】さらにＤＮＡ鎖の切断を誘発する作用物質を含有することを特徴
とする請求項２または３に記載の医薬品組成物。 - 【請求項５】作用物質が、ＤＮＡ鎖の二本鎖切断を誘発することを特徴とする
請求項４記載の医薬品組成物。 - 【請求項６】作用物質が、シスプラチン、マイトマイシンＣ、メルファラン、
アドリアマイシン、タクソール、５−フルオロ−ウラシル、カルムスチン、イオ
ン化照射およびブレオマイシンからなる群から選択されることを特徴とする請求
項４記載の医薬品組成物。 - 【請求項７】上記化合物または上記作用物質が、がん細胞まで運ばれるために
輸送作用物質と結合していることを特徴とする請求項４記載の医薬品組成物。 - 【請求項８】輸送作用物質が、ミセル、小のう(vesicles)、リポソームおよび
モノクロナール抗体から成る群から選択されることを特徴とする請求項７記載の
医薬品組成物。 - 【請求項９】さらに、ＤＮＡ切断を誘発する作用物質および／またはエンド−
エクソヌクレアーゼ活性を阻害する化合物に対するがん細胞の感度を増大させる
作用物質を含むことを特徴とする請求項４〜８のいずれかに記載の医薬品組成物
。 - 【請求項１０】エンド−エクソヌクレアーゼ活性を阻害する化合物を含む医薬
品組成物を患者に投与する手順を含むことを特徴とするがん細胞の増殖または腫
瘍増殖を阻害する方法。 - 【請求項１１】エンド−エクソヌクレアーゼ活性を阻害する化合物が、ペンタ
ミジンであることを特徴とする請求項１０記載の方法。 - 【請求項１２】化合物が、エンド−エクソヌクレアーゼをコードする遺伝子に
対してアンチセンス配列となっていることを特徴とする請求項１０記載の方法。 - 【請求項１３】さらにＤＮＡ鎖の切断を誘発する作用物質を患者に投与する手
順を含むことを特徴とする請求項１１または１２記載の方法。 - 【請求項１４】作用物質が、ＤＮＡ鎖の二本鎖切断を誘発することを特徴とす
る請求項１３記載の方法。 - 【請求項１５】作用物質が、シスプラチン、マイトマイシンＣ、メルファラン
、アドリアマイシン、タクソール、５−フルオロ−ウラシル、カルムスチン、イ
オン化照射およびブレオマイシンから成る群から選択されることを特徴とする請
求項１４記載の方法。 - 【請求項１６】上記化合物または上記作用物質ががん細胞まで運ばれるために
輸送作用物質と結合していることを特徴とする請求項１５記載の方法。 - 【請求項１７】輸送作用物質がミセル、小のう(vesicles)、リポソームおよび
モノクロナール抗体から成る群から選択されることを特徴とする請求項１６記載
の方法。 - 【請求項１８】さらに、ＤＮＡ切断を誘発させる作用物質および／またはエン
ド−エクソヌクレアーゼ活性を阻害する化合物に対するがん細胞の感度を増大さ
せる物質を患者に投与する手順を含むことを特徴とする請求項１３〜１７記載の
方法。 - 【請求項１９】患者のエンド−エクソヌクレアーゼ活性を阻害する手順を含む
ことを特徴とする患者のがん細胞の増殖または腫瘍の増殖を阻害する方法。 - 【請求項２０】患者のエンド−エクソヌクレアーゼ活性を阻害する手順が、患
者にペンタミジンを投与することによって行われることを特徴とする請求項１９
記載の方法。 - 【請求項２１】患者のエンド−エクソヌクレアーゼ活性を阻害する手順が、エ
ンド−エクソヌクレアーゼをコードする遺伝子に対してアンチセンス配列を有す
る化合物を患者に投与することによって行われることを特徴とする請求項２０記
載の方法。 - 【請求項２２】さらにＤＮＡ鎖の切断を誘発する作用物質を患者に投与する手
順を含むことを特徴とする請求項２０または２１記載の方法。 - 【請求項２３】作用物質が、ＤＮＡ鎖の二本鎖切断を誘発することを特徴とす
る請求項２２記載の方法。 - 【請求項２４】作用物質が、シスプラチン、マイトマイシンＣ、メルファラン
、カルムスチン、アドリアマイシン、タクソール、５−フルオロ−ウラシル、イ
オン化照射および ブレオマイシンから成る群から選択されることを特徴とする請求項２２記載の方
法。 - 【請求項２５】さらにＤＮＡ切断を誘発する作用物質に対するがん細胞の感度
を増大させる作用物質を患者に投与する手順を含むことを特徴とする請求項２２
〜２４のいずれかに記載の方法。 - 【請求項２６】患者のがん細胞の増殖または腫瘍の増殖を阻害するためのエン
ド−エクソヌクレアーゼを阻害する化合物の使用。 - 【請求項２７】化合物がペンタミジンである事を特徴とする請求項２６記載の
使用。 - 【請求項２８】化合物がエンド−エクソヌクレアーゼをコードする遺伝子に対
してアンチセンス配列を有することを特徴とする請求項２６記載の使用。 - 【請求項２９】ＤＮＡ鎖切断を誘発する作用物質とエンド−エクソヌクレアー
ゼ活性を阻害する化合物との組み合わせの、患者のがん細胞の増殖または腫瘍の
増殖を阻害するための使用。 - 【請求項３０】エンド−エクソヌクレアーゼ活性を阻害する化合物が、ペンタ
ミジンまたはエンド−エクソヌクレアーゼをコードする遺伝子に対してアンチセ
ンス配列を有する化合物であることを特徴とする請求項２９記載の使用。 - 【請求項３１】作用物質が、シスプラチン、マイトマイシンＣ、メルファラン
、カルムスチン、アドリアマイシン、タクソール、５−フルオロ−ウラシル、イ
オン化照射およびブレオマイシンの群から選択されることを特徴とする請求項３
０記載の使用。 - 【請求項３２】次の工程を含むことを特徴とするがんの診断およびその進展を
監視する方法。 （ｉ）患者から血清を単離する； （ii）上記血清中のエンド−エクソヌクレアーゼの濃度を測定する；および （iii）上記濃度が所定の平均値を超えるかどうかを決定する。 - 【請求項３３】上記血清がニトロセルロース膜に通されて、エンド−エクソヌ
クレアーゼに抗して作られた哺乳動物の抗血清でプローブされることを特徴とす
る請求項３２記載の方法。 - 【請求項３４】ペンタミジンを含有することを特徴とするがん細胞の増殖また
は腫瘍の増殖を阻害する医薬品組成物。 - 【請求項３５】さらにＤＮＡ鎖の切断を誘発する作用物質を含有することを特
徴とする請求項３４記載の医薬品組成物。 - 【請求項３６】作用物質が、ＤＮＡ鎖の二本鎖の切断を誘発することを特徴と
する請求項３５記載の医薬品組成物。 - 【請求項３７】作用物質が、シスプラチン、マイトマイシンＣ、５−フルオロ
−ウラシル、カルムスチン、イオン化照射およびブレオマイシンから成る群から
選択されることを特徴とする請求項３６記載の医薬品組成物。 - 【請求項３８】ペンタミジンを含む医薬品組成物を患者に投与する手順を含む
ことを特徴とするがん細胞の増殖または腫瘍の増殖を阻害する方法。 - 【請求項３９】さらに、ＤＮＡ鎖の切断を誘発する作用物質を患者に投与する
手順を含むことを特徴とする請求項３８記載の方法。 - 【請求項４０】作用物質が、ＤＮＡ鎖の二本鎖の切断を誘発することを特徴と
する請求項３９記載の方法。 - 【請求項４１】作用物質が、シスプラチン、マイトマイシンＣ、５−フルオロ
−ウラシル、カルムスチン、イオン化照射およびブレオマイシンから成る群から
選択されることを特徴とする請求項４０記載の方法。 - 【請求項４２】上記作用物質ががん細胞まで運ばれるために輸送作用物質と結
合していることを特徴とする請求項４１記載の方法。 - 【請求項４３】輸送作用物質が、ミセル、小のう、リポソームおよびモノクロ
ナール抗体から成る群から選択される事を特徴とする請求項４２記載の方法。 - 【請求項４４】次の工程を含むことを特徴とする患者のがん診断およびがん進
展の監視のための方法。 （ｉ）上記患者のエンド−エクソヌクレアーゼ濃度を測定する；および （ii）濃度が所定の平均値を超えるかどうかを決定する、 ここで上記濃度が上記所定の平均値を超えれば、がん存在の陽性指標となる。 - 【請求項４５】上記患者のエンド−エクソヌクレアーゼ濃度を測定する工程が
次のサブ工程から成ることを特徴とする請求項４４記載の方法。 （ｉ）上記患者からのサンプルを採取する; および （ii）上記サンプル中のエンド−エクソヌクレアーゼ濃度を測定する。 - 【請求項４６】次の工程を含むことを特徴とする患者のがん診断およびその進
展を監視する方法。 （ｉ）患者からサンプルを採取する；および （ii）上記サンプル中のエンド−エクソヌクレアーゼの検出。 - 【請求項４７】エンド−エクソヌクレアーゼが診断撮像により検出されること
を特徴とする請求項４６記載の方法。 - 【請求項４８】上記サンプル中のエンド−エクソヌクレアーゼの検出が次のサ
ブ工程により行われることを特徴とする請求項４６記載の方法。 （ｉ）ニトロセルロース膜上にサンプルをスポットする； （ii）エンド−エクソヌクレアーゼに対する抗体を産生させる； （iii)上記抗体を上記サンプルに反応させる； （iv）上記第一抗体と結合する、西洋わさびのペルオキシダーゼと結合体を形
成する第二抗体を供給する； （ｖ）第一抗体と結合して４−クロロ−１−ナフトール液の存在下で青色を呈
する第二抗体をサンプルと反応させる。 - 【請求項４９】患者のがん細胞の増殖または腫瘍の増殖を阻害するためのペン
タミジンの使用。 - 【請求項５０】ＤＮＡ鎖の切断を誘発する作用物質とペンタミジンとの組み合
わせの、患者のがん細胞の増殖または腫瘍の増殖を阻害するための使用。
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|---|---|---|---|
| US16568899P | 1999-11-16 | 1999-11-16 | |
| US60/165,688 | 1999-11-16 | ||
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|---|---|
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|---|---|---|---|
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Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2006062072A1 (ja) * | 2004-12-10 | 2006-06-15 | Tmrc Co., Ltd. | 転移癌治療剤および癌転移抑制剤 |
| JP2012525371A (ja) * | 2009-05-01 | 2012-10-22 | オンコザイム・ファーマ・インコーポレイテッド | 癌を治療するためのペンタミジンの組み合わせ |
| JP2021503016A (ja) * | 2017-11-16 | 2021-02-04 | モンドレックス・インコーポレーテッド | モノアミジン及びジアミジンのエンド−エキソヌクレアーゼ阻害剤とエンド−エキソヌクレアーゼ活性を阻害する方法 |
Families Citing this family (15)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2001097794A2 (en) * | 2000-06-21 | 2001-12-27 | Georgetown University | Inhibitors of matriptase for the treatment of cancer |
| US6569853B1 (en) | 2000-11-06 | 2003-05-27 | Combinatorx, Incorporated | Combinations of chlorpromazine and pentamidine for the treatment of neoplastic disorders |
| US6693125B2 (en) | 2001-01-24 | 2004-02-17 | Combinatorx Incorporated | Combinations of drugs (e.g., a benzimidazole and pentamidine) for the treatment of neoplastic disorders |
| US8053477B2 (en) * | 2002-03-29 | 2011-11-08 | University Of Maryland, Baltimore | Inhibitors of the S100-p53 protein-protein interaction and method of inhibiting cancer employing the same |
| ITMI20021455A1 (it) * | 2002-07-02 | 2004-01-02 | Ugo Raffaello Citernesi | Formulazioni fosfolipidiche di lexitropsine loro preparazione ed impiego terapeutico |
| US20050054708A1 (en) * | 2003-07-28 | 2005-03-10 | Nichols Matthew James | Combinations of drugs for the treatment of neoplasms |
| ES2629682T3 (es) | 2004-03-29 | 2017-08-14 | University Of South Florida | Tratamiento efectivo de tumores y cáncer con fosfato de triciribina |
| US20100009929A1 (en) | 2004-03-29 | 2010-01-14 | Cheng Jin Q | Compositions including triciribine and bortezomib and derivatives thereof and methods of use thereof |
| US20100028339A1 (en) | 2004-03-29 | 2010-02-04 | Cheng Jin Q | Compositions including triciribine and trastuzumab and methods of use thereof |
| US20110008327A1 (en) | 2004-03-29 | 2011-01-13 | Cheng Jin Q | Compositions including triciribine and epidermal growth factor receptor inhibitor compounds or salts thereof and methods of use thereof |
| US20100009928A1 (en) | 2004-03-29 | 2010-01-14 | Cheng Jin Q | Compositions including triciribine and taxanes and methods of use thereof |
| US20100173864A1 (en) | 2004-03-29 | 2010-07-08 | Cheng Jin Q | Compositions including triciribine and one or more platinum compounds and methods of use thereof |
| WO2009086485A1 (en) | 2007-12-28 | 2009-07-09 | Server Technology, Inc. | Power distribution, management, and monitoring systems and methods |
| WO2014008592A1 (en) * | 2012-07-13 | 2014-01-16 | Oncozyme Pharma Inc. | Combinations comprising diamidine compounds and parp inhibitors for use iν treating cancer |
| CN115998872A (zh) * | 2020-04-15 | 2023-04-25 | 四川大学华西第二医院 | 一种含有抑制核酸内切酶功能的药物及其抗肿瘤的用途 |
Family Cites Families (32)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE2145528C3 (de) * | 1971-09-11 | 1981-12-17 | Heinrich Mack Nachf., 7918 Illertissen | Exonuclease und diese enthaltendes cytostatisches Mittel |
| EP0585957A1 (en) * | 1986-08-06 | 1994-03-09 | Ajinomoto Co., Inc. | Recombinant B-cell differentiation factor |
| DE3872635T2 (de) * | 1987-04-09 | 1992-12-17 | Fisons Plc | Pentamidin enthaltende pharmazeutische zusammensetzungen. |
| US5204113A (en) * | 1987-04-09 | 1993-04-20 | Fisons Plc | Pharmaceutical compositions containing pentamidine |
| US5166140A (en) * | 1987-05-05 | 1992-11-24 | City Of Hope | Use of certain nucleoside analogs to attenuate cancer cell resistance to DNA damaging chemotherapy |
| US5585363A (en) * | 1987-05-05 | 1996-12-17 | City Of Hope | Circumvention of human tumor drug resistance |
| US4856528A (en) * | 1987-06-26 | 1989-08-15 | John Hopkins University | Tumor volume determination |
| US5204352A (en) * | 1987-09-29 | 1993-04-20 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Army | Compounds exhibiting anti-parasitic activity and a method for their use |
| US5084480A (en) * | 1987-11-06 | 1992-01-28 | Fujisawa Usa, Inc. | Pentamidine salts useful in the treatment of pneumocystis carinii pneumonia |
| US5422120A (en) * | 1988-05-30 | 1995-06-06 | Depotech Corporation | Heterovesicular liposomes |
| MX16687A (es) * | 1988-07-07 | 1994-01-31 | Ciba Geigy Ag | Compuestos de biarilo y procedimiento para su preparacion. |
| US5037758A (en) * | 1989-01-11 | 1991-08-06 | Her Majesty The Queen In Right Of Canada, As Represented By The National Research Council Of Canada | Enhanced production of biosurfactant through the use of a mutated B subtilis strain |
| GB8903438D0 (en) * | 1989-02-15 | 1989-04-05 | May & Baker Ltd | New compositions of matter |
| US5352581A (en) * | 1989-03-24 | 1994-10-04 | United States/National Institutes Of Health | Sensitive yeast genetic system for identifying agents causing double-stranded DNA damage |
| WO1991009954A1 (en) * | 1989-12-27 | 1991-07-11 | Resnick Michael A | Novel system for isolating and producing new genes, gene products and dna sequences |
| US5489524A (en) * | 1991-03-26 | 1996-02-06 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Chimeric protein that has a human Rho motif and deoxyribonuclease activity |
| US5324830A (en) * | 1991-03-26 | 1994-06-28 | United States Of America | Chimeric protein that has a human RHo Motif and deoxyribonuclease activity |
| US5283238A (en) * | 1992-04-24 | 1994-02-01 | Immtech International, Inc. | Methods of treating cancer using modified C-reactive protein |
| US5723288A (en) * | 1994-05-06 | 1998-03-03 | The University Of North Carolina At Chapel Hill | Method of fluorescent detection of nucleic acids and cytoskeleton elements using bis-dicationic aryl furans, and kits useful therefor |
| US5874283A (en) * | 1995-05-30 | 1999-02-23 | John Joseph Harrington | Mammalian flap-specific endonuclease |
| US5698556A (en) * | 1995-06-07 | 1997-12-16 | Chan; Carcy L. | Methotrexate analogs and methods of using same |
| US5643935A (en) * | 1995-06-07 | 1997-07-01 | The University Of North Carolina At Chapel Hill | Method of combatting infectious diseases using dicationic bis-benzimidazoles |
| US5916779A (en) * | 1995-09-21 | 1999-06-29 | Becton, Dickinson And Company | Strand displacement amplification of RNA targets |
| US5935982A (en) * | 1997-02-28 | 1999-08-10 | The University Of North Carolina At Chapel Hill | Methods of treating retroviral infection and compounds useful therefor |
| US5977311A (en) * | 1997-09-23 | 1999-11-02 | Curagen Corporation | 53BP2 complexes |
| US20020102542A1 (en) * | 1997-10-07 | 2002-08-01 | Daikichi Fukushima | Polypeptide, cdna encoding the polypeptide, and use of the both |
| US7115665B1 (en) * | 2000-11-16 | 2006-10-03 | Onocozyme Pharma, Inc. | Inhibitors of endo-exonuclease activity for treating cancer |
| EP2298875B1 (en) * | 2000-03-08 | 2015-08-12 | Novozymes A/S | Variants with altered properties |
| US6569853B1 (en) * | 2000-11-06 | 2003-05-27 | Combinatorx, Incorporated | Combinations of chlorpromazine and pentamidine for the treatment of neoplastic disorders |
| US6693125B2 (en) * | 2001-01-24 | 2004-02-17 | Combinatorx Incorporated | Combinations of drugs (e.g., a benzimidazole and pentamidine) for the treatment of neoplastic disorders |
| US20040010045A1 (en) * | 2001-09-07 | 2004-01-15 | Taolin Yi | Therapeutic compositions comprised of pentamidine and methods of using same to treat cancer |
| US8053477B2 (en) * | 2002-03-29 | 2011-11-08 | University Of Maryland, Baltimore | Inhibitors of the S100-p53 protein-protein interaction and method of inhibiting cancer employing the same |
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Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2006062072A1 (ja) * | 2004-12-10 | 2006-06-15 | Tmrc Co., Ltd. | 転移癌治療剤および癌転移抑制剤 |
| JP2012525371A (ja) * | 2009-05-01 | 2012-10-22 | オンコザイム・ファーマ・インコーポレイテッド | 癌を治療するためのペンタミジンの組み合わせ |
| JP2021503016A (ja) * | 2017-11-16 | 2021-02-04 | モンドレックス・インコーポレーテッド | モノアミジン及びジアミジンのエンド−エキソヌクレアーゼ阻害剤とエンド−エキソヌクレアーゼ活性を阻害する方法 |
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