JP2003513637A - Ｊａｋ−ｓｔａｔ系の新規の使用 - Google Patents
Ｊａｋ−ｓｔａｔ系の新規の使用Info
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Abstract
(57)【要約】
本発明はＪＡＫ−ＳＴＡＴシグナルの何らかの延長をモニターすることによる、生存生物において生物学的に活性な実体の効果を追跡するための培養細胞におけるＪＡＫ−ＳＴＡＴ系の使用、および前記効果を追跡する方法に関する。
Description
【０００１】
（発明の背景）
細胞性ストレスは病理学的細胞応答の重要な部分であると考えられている。酸
素枯渇、代謝機能不全または化学化合物などのいくつかの異なる因子／状況によ
りかかる細胞性ストレスを被る。細胞性ストレスはシグナル発生分子と干渉する
ことにより細胞にその細胞機能変化を引き起こす。細胞性ストレスの延長により
例えば心血管系および代謝性障害などの疾患の発現を引き起こし得る。
素枯渇、代謝機能不全または化学化合物などのいくつかの異なる因子／状況によ
りかかる細胞性ストレスを被る。細胞性ストレスはシグナル発生分子と干渉する
ことにより細胞にその細胞機能変化を引き起こす。細胞性ストレスの延長により
例えば心血管系および代謝性障害などの疾患の発現を引き起こし得る。
【０００２】
多くの細胞における重要なシグナル発生経路の１つはＪＡＫ−ＳＴＡＴ経路か
らなる。ヤヌス・キナーゼ（Ｊａｎｕｓ Ｋｉｎａｓｅｓ：ＪＡＫｓ）は細胞内
チロシンキナーゼであり、転写のシグナル・トランスデューサーおよびアクチベ
ーター（Ｓｉｇｎａｌ Ｔｒａｎｓｄｕｃｅｒｓ ａｎｄ Ａｃｔｉｖａｔｏｒ
ｓ ｏｆ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ：ＳＴＡＴｓ）はチロシンリン酸化およ
び再度異なる分子形態により活性化される転写因子である。ＪＡＫ−ＳＴＡＴ経
路はいわゆるサイトカイン系により、優先的に活性化される。サイトカインには
例えば成長ホルモン（ＧＨ）、プロラクチン（Ｐｒｌ）、レプチン、エリトロポ
イエチン（Ｅｐｏ）、コロニー刺激因子、異なるインターロイキンおよびインタ
ーフェロンなどがある。これらは全て特異的膜結合レセプターを介してＪＡＫ−
ＳＴＡＴ経路を活性化し、異なる形態のＪＡＫ分子には、例えばＪＡＫ１、ＪＡ
Ｋ２、ＪＡＫ３、およびＴＹＫ１などが存在することに注目することは適当であ
る。また異なるＳＴＡＴ分子、例えばＳＴＡＴ１、ＳＴＡＴ２、ＳＴＡＴ３、Ｓ
ＴＡＴ４、ＳＴＡＴ５、ＳＴＡＴ５ａ、ＳＴＡＴ５ｂ、およびＳＴＡＴ６もまた
単離されている。個々のＪＡＫ−ＳＴＡＴの組み合わせを特異的シグナルトラン
スダクション・チェーン（概説に関しては参考文献１および２を参照）に使用す
ることができる。ＪＡＫ−ＳＴＡＴ経路はまたその他のシグナル発生分子、例え
ばＭＡＰキナーゼおよびＩＲＳをも含む。本発明によれば、ＪＡＫ−ＳＴＡＴ経
路はＪＡＫにより誘起される細胞性効果として定義される。
らなる。ヤヌス・キナーゼ（Ｊａｎｕｓ Ｋｉｎａｓｅｓ：ＪＡＫｓ）は細胞内
チロシンキナーゼであり、転写のシグナル・トランスデューサーおよびアクチベ
ーター（Ｓｉｇｎａｌ Ｔｒａｎｓｄｕｃｅｒｓ ａｎｄ Ａｃｔｉｖａｔｏｒ
ｓ ｏｆ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ：ＳＴＡＴｓ）はチロシンリン酸化およ
び再度異なる分子形態により活性化される転写因子である。ＪＡＫ−ＳＴＡＴ経
路はいわゆるサイトカイン系により、優先的に活性化される。サイトカインには
例えば成長ホルモン（ＧＨ）、プロラクチン（Ｐｒｌ）、レプチン、エリトロポ
イエチン（Ｅｐｏ）、コロニー刺激因子、異なるインターロイキンおよびインタ
ーフェロンなどがある。これらは全て特異的膜結合レセプターを介してＪＡＫ−
ＳＴＡＴ経路を活性化し、異なる形態のＪＡＫ分子には、例えばＪＡＫ１、ＪＡ
Ｋ２、ＪＡＫ３、およびＴＹＫ１などが存在することに注目することは適当であ
る。また異なるＳＴＡＴ分子、例えばＳＴＡＴ１、ＳＴＡＴ２、ＳＴＡＴ３、Ｓ
ＴＡＴ４、ＳＴＡＴ５、ＳＴＡＴ５ａ、ＳＴＡＴ５ｂ、およびＳＴＡＴ６もまた
単離されている。個々のＪＡＫ−ＳＴＡＴの組み合わせを特異的シグナルトラン
スダクション・チェーン（概説に関しては参考文献１および２を参照）に使用す
ることができる。ＪＡＫ−ＳＴＡＴ経路はまたその他のシグナル発生分子、例え
ばＭＡＰキナーゼおよびＩＲＳをも含む。本発明によれば、ＪＡＫ−ＳＴＡＴ経
路はＪＡＫにより誘起される細胞性効果として定義される。
【０００３】
ＪＡＫ−ＳＴＡＴ経路を使用するレセプターによるサイトカインシグナル発生
の重要な態様はレセプターシグナルを遮断する形態である。最近では、新規のク
ラスの分子、サイトカインシグナル発生のサプレッサー（Ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ
ｓ ｏｆ Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ：ＳＯＣＳ）が報告されてい
る。ＳＯＣＳタンパク質はＪＡＫ−ＳＴＡＴ活性化の結果として誘導され、個々
のサイトカインレセプターを遮断する機能を有する。ＪＡＫ−ＳＴＡＴ経路のそ
の他の分子と同様に、いくつかの異なるＳＯＣＳ、例えばＳＯＣＳ１、ＳＯＣＳ
２、ＳＯＣＳ３およびＣＩＳもまた説明されている（参考文献３および４）。
の重要な態様はレセプターシグナルを遮断する形態である。最近では、新規のク
ラスの分子、サイトカインシグナル発生のサプレッサー（Ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ
ｓ ｏｆ Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ：ＳＯＣＳ）が報告されてい
る。ＳＯＣＳタンパク質はＪＡＫ−ＳＴＡＴ活性化の結果として誘導され、個々
のサイトカインレセプターを遮断する機能を有する。ＪＡＫ−ＳＴＡＴ経路のそ
の他の分子と同様に、いくつかの異なるＳＯＣＳ、例えばＳＯＣＳ１、ＳＯＣＳ
２、ＳＯＣＳ３およびＣＩＳもまた説明されている（参考文献３および４）。
【０００４】
（本発明）
サイトカインシグナル発生に関する我々の長期にわたる研究の結果、驚くべき
ことに、ＪＡＫ−ＳＴＡＴ経路が多くの異なる化学化合物により変調され得るこ
とを見出した。この事実はＧＨシグナルの遮断メカニズムの詳細な研究の後に明
らかになった。前記研究により、我々はＪＡＫ−ＳＴＡＴ−ＳＯＣＳ経路が細胞
性ストレスを引き起こす化学化合物に対して非常に感受性が高いことを見出した
。この経路がかかる感受性を示す可能な理由は、遮断メカニズム、すなわちＳＯ
ＣＳ機能がＳＯＣＳタンパク質の非常に急速な代謝により達成されるという事実
に在る。
ことに、ＪＡＫ−ＳＴＡＴ経路が多くの異なる化学化合物により変調され得るこ
とを見出した。この事実はＧＨシグナルの遮断メカニズムの詳細な研究の後に明
らかになった。前記研究により、我々はＪＡＫ−ＳＴＡＴ−ＳＯＣＳ経路が細胞
性ストレスを引き起こす化学化合物に対して非常に感受性が高いことを見出した
。この経路がかかる感受性を示す可能な理由は、遮断メカニズム、すなわちＳＯ
ＣＳ機能がＳＯＣＳタンパク質の非常に急速な代謝により達成されるという事実
に在る。
【０００５】
本発明はＪＡＫ−ＳＴＡＴ−ＳＯＣＳ経路に基づくアッセイ系に関し、これを
用いて細胞性ストレスを引き起こす化合物をモニターできる。細胞性ストレスは
いくつかのその他の方法で、例えば熱ショック応答タンパク質またはアポプトシ
スを測定することによりモニターできる。しかしながら、ＪＡＫ−ＳＴＡＴ経路
が重要な細胞内経路であり、薬理作用を有する化合物は明白な熱ショック反応お
よびアポプトシスを引き起こすことなくＪＡＫ−ＳＴＡＴ経路に影響を及ぼし得
るので、化学化合物の作用に関連するＪＡＫ−ＳＴＡＴ経路の分析は有利である
。
用いて細胞性ストレスを引き起こす化合物をモニターできる。細胞性ストレスは
いくつかのその他の方法で、例えば熱ショック応答タンパク質またはアポプトシ
スを測定することによりモニターできる。しかしながら、ＪＡＫ−ＳＴＡＴ経路
が重要な細胞内経路であり、薬理作用を有する化合物は明白な熱ショック反応お
よびアポプトシスを引き起こすことなくＪＡＫ−ＳＴＡＴ経路に影響を及ぼし得
るので、化学化合物の作用に関連するＪＡＫ−ＳＴＡＴ経路の分析は有利である
。
【０００６】
本発明に記載する技術を用いて化学的、生物学的および物理学的実体、とりわ
け確立された薬物または可能性のある薬物候補物質を、ＪＡＫ−ＳＴＡＴ−ＳＯ
ＣＳ経路に及ぼす影響に関してスクリーニングすることができる。このアッセイ
において特定の化合物のスコアが陽性である場合、細胞性ストレスを引き起こす
可能性があり、これは無傷の生物を前記化合物で処置した場合、副作用に至り得
る。
け確立された薬物または可能性のある薬物候補物質を、ＪＡＫ−ＳＴＡＴ−ＳＯ
ＣＳ経路に及ぼす影響に関してスクリーニングすることができる。このアッセイ
において特定の化合物のスコアが陽性である場合、細胞性ストレスを引き起こす
可能性があり、これは無傷の生物を前記化合物で処置した場合、副作用に至り得
る。
【０００７】
先行技術では、ＪＡＫ−ＳＴＡＴ−ＳＯＣＳ経路の存在および生物学的重要性
は十分に文献化されている。しかしながら、先行技術ではこの経路を生物学的に
活性な実体、例えば薬物の副作用を読み出すために使用できることを示している
文献を何ら見出すことはできなかった。生物学的に活性な実体またはその他の実
体が副作用を呈するかどうかを早い段階で同定することはますます重要になって
きている。生存生物に暴露できるのは生物学的または化学的または物理学的物質
のいずれの化合物でもよい。生物学的に活性な実体は治療的、栄養的または環境
的に有用であるか、または反対に生物の健康に有害であるか、または将来的にそ
うなり得る何れかの分子として定義される。前記実体には臨床に使用される薬物
、臨床使用の可能性を有する薬物候補化合物、生物学的影響を引き起こす天然ま
たは合成栄養または環境化学物質、放射線および生存生物に影響し得る類似の手
段などがある。
は十分に文献化されている。しかしながら、先行技術ではこの経路を生物学的に
活性な実体、例えば薬物の副作用を読み出すために使用できることを示している
文献を何ら見出すことはできなかった。生物学的に活性な実体またはその他の実
体が副作用を呈するかどうかを早い段階で同定することはますます重要になって
きている。生存生物に暴露できるのは生物学的または化学的または物理学的物質
のいずれの化合物でもよい。生物学的に活性な実体は治療的、栄養的または環境
的に有用であるか、または反対に生物の健康に有害であるか、または将来的にそ
うなり得る何れかの分子として定義される。前記実体には臨床に使用される薬物
、臨床使用の可能性を有する薬物候補化合物、生物学的影響を引き起こす天然ま
たは合成栄養または環境化学物質、放射線および生存生物に影響し得る類似の手
段などがある。
【０００８】
以下に実例を示すように、ＪＡＫ−ＳＴＡＴ−ＳＯＣＳ経路の分析を用いて被
験化合物の副作用の可能性を示すことができる。関係する原理は、最初に細胞の
ＪＡＫ−ＳＴＡＴ−ＳＯＣＳ経路を活性化し、次いで被験化合物を加えることで
ある。前記するように、多くの因子が培養細胞においてＪＡＫ−ＳＴＡＴ経路を
活性化でき、これらの実際の特性、および必要な用量は当業者に公知である。Ｊ
ＡＫ−ＳＴＡＴ経路を活性化する因子の非限定的なリストには成長ホルモン、プ
ロラクチン、エリトロポエチン、レプチン、エリスロポエチン、種々のインター
ロイキン、コロニー刺激因子およびインターフェロンなどがある。当業者はまた
ＪＡＫ−ＳＴＡＴ経路の成分を検出するのに利用できるいくつかの異なる方法が
あることも知っており、これらの方法には活性化すなわちリン酸化ＪＡＫまたは
ＳＴＡＴのタンパク質分析、および抗体技術または関連タンパク質結合技術を用
いるＳＯＣＳレベルの測定などがある。また別のアッセイはＳＴＡＴ ＤＮＡ結
合を検出するために用いることができるゲルシフト分析または類似のＤＮＡ結合
技術、およびＳＯＣＳ ｍＲＮＡレベルを分析するために用いることができる別
の型のハイブリダイゼーション技術である。加えて、ＪＡＫ−ＳＴＡＴ−ＳＯＣ
Ｓ経路の成分をタグで修飾して細胞での検出を簡便化する遺伝子タグ化技術を適
用できる。従って本発明を種々の方法を用いて実施できる。ＪＡＫ−ＳＴＡＴ経
路またはＪＡＫ−ＳＴＡＴ系なる用語は、本明細書にてＪＡＫの活性化に依存す
るいずれかの細胞性事象として定義される。サイトカインシグナルを測定するた
めに用いることができるＪＡＫまたはＳＴＡＴ以外の別の細胞パラメーターもあ
り、例えばＭＡＰキナーゼおよびＩＲＳの活性化がある。本発明の原理はＪＡＫ
−ＳＴＡＴ経路が活性化された単離された細胞の使用にある。細胞を被験化合物
に暴露する場合、かかる被験化合物によるＪＡＫ−ＳＴＡＴ経路の干渉はＪＡＫ
リン酸化の時間分析により、またはＳＴＡＴ−５ＤＮＡ結合（または別法）によ
り、またはＳＯＣＳタンパク質／ｍＲＮＡレベルの時間分析により検出される。
化合物がＪＡＫ−ＳＴＡＴ経路で相互作用する場合、ＪＡＫ−ＳＴＡＴ活性化の
時間が延長されたり、またはＳＯＣＳレベルが低下した場合にスコアは陽性とな
る。
験化合物の副作用の可能性を示すことができる。関係する原理は、最初に細胞の
ＪＡＫ−ＳＴＡＴ−ＳＯＣＳ経路を活性化し、次いで被験化合物を加えることで
ある。前記するように、多くの因子が培養細胞においてＪＡＫ−ＳＴＡＴ経路を
活性化でき、これらの実際の特性、および必要な用量は当業者に公知である。Ｊ
ＡＫ−ＳＴＡＴ経路を活性化する因子の非限定的なリストには成長ホルモン、プ
ロラクチン、エリトロポエチン、レプチン、エリスロポエチン、種々のインター
ロイキン、コロニー刺激因子およびインターフェロンなどがある。当業者はまた
ＪＡＫ−ＳＴＡＴ経路の成分を検出するのに利用できるいくつかの異なる方法が
あることも知っており、これらの方法には活性化すなわちリン酸化ＪＡＫまたは
ＳＴＡＴのタンパク質分析、および抗体技術または関連タンパク質結合技術を用
いるＳＯＣＳレベルの測定などがある。また別のアッセイはＳＴＡＴ ＤＮＡ結
合を検出するために用いることができるゲルシフト分析または類似のＤＮＡ結合
技術、およびＳＯＣＳ ｍＲＮＡレベルを分析するために用いることができる別
の型のハイブリダイゼーション技術である。加えて、ＪＡＫ−ＳＴＡＴ−ＳＯＣ
Ｓ経路の成分をタグで修飾して細胞での検出を簡便化する遺伝子タグ化技術を適
用できる。従って本発明を種々の方法を用いて実施できる。ＪＡＫ−ＳＴＡＴ経
路またはＪＡＫ−ＳＴＡＴ系なる用語は、本明細書にてＪＡＫの活性化に依存す
るいずれかの細胞性事象として定義される。サイトカインシグナルを測定するた
めに用いることができるＪＡＫまたはＳＴＡＴ以外の別の細胞パラメーターもあ
り、例えばＭＡＰキナーゼおよびＩＲＳの活性化がある。本発明の原理はＪＡＫ
−ＳＴＡＴ経路が活性化された単離された細胞の使用にある。細胞を被験化合物
に暴露する場合、かかる被験化合物によるＪＡＫ−ＳＴＡＴ経路の干渉はＪＡＫ
リン酸化の時間分析により、またはＳＴＡＴ−５ＤＮＡ結合（または別法）によ
り、またはＳＯＣＳタンパク質／ｍＲＮＡレベルの時間分析により検出される。
化合物がＪＡＫ−ＳＴＡＴ経路で相互作用する場合、ＪＡＫ−ＳＴＡＴ活性化の
時間が延長されたり、またはＳＯＣＳレベルが低下した場合にスコアは陽性とな
る。
【０００９】
「時間分析」なる用語は、生物学的に活性な実体の存在下のＪＡＫ−ＳＴＡＴ
経路の活性化時のＪＡＫ−ＳＴＡＴシグナルの持続時間を、生物学的に活性な実
体の不在下でサイトカインにより引き起こされるＪＡＫ−ＳＴＡＴシグナルの持
続時間と比較することを意味する。ＪＡＫ−ＳＴＡＴ経路の大幅な変化、持続時
間の正常な延長を検査する。当業者は、本明細書ではＳＴＡＴ活性化およびＳＯ
ＣＳレベルとして実例が示されている異なる終末点の読み出しを使用して、高ス
ループット・アッセイに変換できる。実際には、細胞を好ましくは９６ウェルフ
ォーマットで成長させ、次いでサイトカイン、例えば成長ホルモンに暴露し、Ｓ
ＴＡＴ活性化またはＳＯＣＳレベルを測定することができる。初期実験では使用
する特定のサイトカインおよび使用する特定のセルラインに関して、ＪＡＫ−Ｓ
ＴＡＴ経路のサイトカイン活性化の時間的動態を確立する必要がある。活性化は
一過性であると考えられ、これはＪＡＫ−ＳＴＡＴ経路が最大に活性化される一
時点、およびシグナルが大幅に低下する別の、後の時点を同定できることを意味
する。ＧＨを肝細胞における刺激性サイトカインとして用いる場合、ＪＡＫ−Ｓ
ＴＡＴ経路の活性化は１時間（１ｈ）以内の時間内で最大になり、４時間（４ｈ
）後にはシグナルは大幅に低下する。この情報は異なる細胞およびサイトカイン
間で変化する。初期パラメーターを確立した後、被験化合物をＪＡＫ−ＳＴＡＴ
経路の活性化と組み合わせて添加できる。ＧＨ系でＪＡＫ−ＳＴＡＴ経路の成分
を分析する適当な時間は４時間（４ｈ）である。この時間で、例えば持続性ＳＴ
ＡＴ ＤＮＡ結合および／またはＪＡＫリン酸化および／またはＳＯＣＳ ｍＲ
ＮＡまたはＳＯＣＳタンパク質のレベルからなるＪＡＫ−ＳＴＡＴ経路の延長を
検査できる。
経路の活性化時のＪＡＫ−ＳＴＡＴシグナルの持続時間を、生物学的に活性な実
体の不在下でサイトカインにより引き起こされるＪＡＫ−ＳＴＡＴシグナルの持
続時間と比較することを意味する。ＪＡＫ−ＳＴＡＴ経路の大幅な変化、持続時
間の正常な延長を検査する。当業者は、本明細書ではＳＴＡＴ活性化およびＳＯ
ＣＳレベルとして実例が示されている異なる終末点の読み出しを使用して、高ス
ループット・アッセイに変換できる。実際には、細胞を好ましくは９６ウェルフ
ォーマットで成長させ、次いでサイトカイン、例えば成長ホルモンに暴露し、Ｓ
ＴＡＴ活性化またはＳＯＣＳレベルを測定することができる。初期実験では使用
する特定のサイトカインおよび使用する特定のセルラインに関して、ＪＡＫ−Ｓ
ＴＡＴ経路のサイトカイン活性化の時間的動態を確立する必要がある。活性化は
一過性であると考えられ、これはＪＡＫ−ＳＴＡＴ経路が最大に活性化される一
時点、およびシグナルが大幅に低下する別の、後の時点を同定できることを意味
する。ＧＨを肝細胞における刺激性サイトカインとして用いる場合、ＪＡＫ−Ｓ
ＴＡＴ経路の活性化は１時間（１ｈ）以内の時間内で最大になり、４時間（４ｈ
）後にはシグナルは大幅に低下する。この情報は異なる細胞およびサイトカイン
間で変化する。初期パラメーターを確立した後、被験化合物をＪＡＫ−ＳＴＡＴ
経路の活性化と組み合わせて添加できる。ＧＨ系でＪＡＫ−ＳＴＡＴ経路の成分
を分析する適当な時間は４時間（４ｈ）である。この時間で、例えば持続性ＳＴ
ＡＴ ＤＮＡ結合および／またはＪＡＫリン酸化および／またはＳＯＣＳ ｍＲ
ＮＡまたはＳＯＣＳタンパク質のレベルからなるＪＡＫ−ＳＴＡＴ経路の延長を
検査できる。
【００１０】
異なる細胞型、すなわち異なるセルラインに由来する細胞型を使用することに
より、被験化合物がＪＡＫ−ＳＴＡＴ系を介して副作用を引き起こす能力を有す
るかどうかの危険性を評価することが可能になる。異なるセルラインを用いるこ
とは細胞が発生起源のもの、例えば内胚葉、外胚葉、間葉等に由来するものでよ
い。初代細胞および確立されたセルラインを使用できる。主な特徴は実験室で一
般的に使用される細胞を使用することであり、かかる細胞のリストをＡＴＣＣ（
Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）か
ら入手できる。特定の場合、個々の患者の細胞、例えば繊維芽細胞または腫瘍細
胞を分析し、化学化合物に対する応答性を特徴づけするのが有用であろう。以下
の実施例では、モデルは肝細胞におけるＳＴＡＴ−５のＪＡＫ２活性化であり、
ＳＴＡＴ−５ ＤＮＡ結合の延長、またはＳＯＣＳ２、ＳＯＣＳ３およびＣＩＳ
の低下が被験化合物に関して読み出された。時間動態および実施例で使用したモ
デルは本発明の説明のみを意味し、本発明の使用の限定を意図するものではない
。実験設計、例えば使用する細胞、適用できる時間動態、および／または終末点
測定で使用するＪＡＫ／ＳＴＡＴ／ＳＯＣＳ経路の成分の変更は、スクリーニン
グ系が細胞基盤であり、ＪＡＫ／ＳＴＡＴ−ＳＯＣＳ系が活性化される細胞を使
用し、この経路に及ぼす被験化合物の影響の時間分析を行う限り、本発明の範囲
内である。
より、被験化合物がＪＡＫ−ＳＴＡＴ系を介して副作用を引き起こす能力を有す
るかどうかの危険性を評価することが可能になる。異なるセルラインを用いるこ
とは細胞が発生起源のもの、例えば内胚葉、外胚葉、間葉等に由来するものでよ
い。初代細胞および確立されたセルラインを使用できる。主な特徴は実験室で一
般的に使用される細胞を使用することであり、かかる細胞のリストをＡＴＣＣ（
Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）か
ら入手できる。特定の場合、個々の患者の細胞、例えば繊維芽細胞または腫瘍細
胞を分析し、化学化合物に対する応答性を特徴づけするのが有用であろう。以下
の実施例では、モデルは肝細胞におけるＳＴＡＴ−５のＪＡＫ２活性化であり、
ＳＴＡＴ−５ ＤＮＡ結合の延長、またはＳＯＣＳ２、ＳＯＣＳ３およびＣＩＳ
の低下が被験化合物に関して読み出された。時間動態および実施例で使用したモ
デルは本発明の説明のみを意味し、本発明の使用の限定を意図するものではない
。実験設計、例えば使用する細胞、適用できる時間動態、および／または終末点
測定で使用するＪＡＫ／ＳＴＡＴ／ＳＯＣＳ経路の成分の変更は、スクリーニン
グ系が細胞基盤であり、ＪＡＫ／ＳＴＡＴ−ＳＯＣＳ系が活性化される細胞を使
用し、この経路に及ぼす被験化合物の影響の時間分析を行う限り、本発明の範囲
内である。
【００１１】
請求の範囲に開示される全ての特徴は参照として本明細書に含まれる。
図１はゲル移動シフトアッセイを用いて測定されるＧＨによるＳＴＡＴ５活性
化の時間特性に関する。 ＢＲＬ４細胞を血清不含条件下で８時間成長させた。次いで組換えｈＧＨ（５
０ｎＭ）を加え、指示された時点で細胞を収穫し、核抽出物を調製した。電気泳
動移動シフトアッセイを用いて32Ｐ−標識ＳＰＩＧＬＥ１プローブでＳＴＡＴ５
およびＳＴＡＴ１結合活性を決定した。オートラジオグラフィーにより相対的な
ＤＮＡ結合レベルを測定した。この実験によりＧＨがＳＴＡＴ５ ＤＮＡ結合を
一過性の様式で活性化することが示された。ＧＨ刺激後、ＳＴＡＴ ＤＮＡ結合
活性は急速に増加し、２時間後には急速にバックグラウンドレベルまで低下する
。
化の時間特性に関する。 ＢＲＬ４細胞を血清不含条件下で８時間成長させた。次いで組換えｈＧＨ（５
０ｎＭ）を加え、指示された時点で細胞を収穫し、核抽出物を調製した。電気泳
動移動シフトアッセイを用いて32Ｐ−標識ＳＰＩＧＬＥ１プローブでＳＴＡＴ５
およびＳＴＡＴ１結合活性を決定した。オートラジオグラフィーにより相対的な
ＤＮＡ結合レベルを測定した。この実験によりＧＨがＳＴＡＴ５ ＤＮＡ結合を
一過性の様式で活性化することが示された。ＧＨ刺激後、ＳＴＡＴ ＤＮＡ結合
活性は急速に増加し、２時間後には急速にバックグラウンドレベルまで低下する
。
【００１２】
【表１】
【００１３】
細胞を全面成長の９０％まで成長させ、８時間で収穫し、異なる薬物：Ｄ６０
９（５０ｍｇ／ｍｌ）（Ｂ）Ｈ７（２００μＭ）、ＢＡＰＴＡ−ＡＭ（２５ｎＭ
）、ベラパミル（１００μＭ）、Ａ２３１８７（５ｎＭ）、アクチノマイシンＤ
（１μｇ／ｍｌ）、カルホスチンＣ（１ｍＭ）およびビスインドリルマレイミド
Ｉ（２ｍＭ）と共に３０分間インキュベートした。次いで組換えｈＧＨ（５０ｎ
Ｍ）を加え、指示された時間（３０分または４時間）に細胞を収穫し、核抽出物
を調製した。電気泳動移動シフトアッセイを用いて32Ｐ−標識ＳＰＩＧＬＥ１プ
ローブでＳＴＡＴ５結合活性を決定した。活性化ＳＴＡＴ５を可視化し、オート
ラジオグラフィーにより定量した。異なる薬物で得られた結果を表にまとめた。
ＳＴＡＴ５ ＤＮＡ結合の有意な検出を「＋」として表した。単独で添加した場
合にＳＴＡＴ活性化を引き起こした薬物はなかった。ＧＨと組み合わせて添加し
た場合、１５分後に測定したときに結合活性に大きな効果を示す薬物はなかった
が、４時間では前記薬物のいくつかはＧＨ誘導ＳＴＡＴ５活性化を延長できた。
９（５０ｍｇ／ｍｌ）（Ｂ）Ｈ７（２００μＭ）、ＢＡＰＴＡ−ＡＭ（２５ｎＭ
）、ベラパミル（１００μＭ）、Ａ２３１８７（５ｎＭ）、アクチノマイシンＤ
（１μｇ／ｍｌ）、カルホスチンＣ（１ｍＭ）およびビスインドリルマレイミド
Ｉ（２ｍＭ）と共に３０分間インキュベートした。次いで組換えｈＧＨ（５０ｎ
Ｍ）を加え、指示された時間（３０分または４時間）に細胞を収穫し、核抽出物
を調製した。電気泳動移動シフトアッセイを用いて32Ｐ−標識ＳＰＩＧＬＥ１プ
ローブでＳＴＡＴ５結合活性を決定した。活性化ＳＴＡＴ５を可視化し、オート
ラジオグラフィーにより定量した。異なる薬物で得られた結果を表にまとめた。
ＳＴＡＴ５ ＤＮＡ結合の有意な検出を「＋」として表した。単独で添加した場
合にＳＴＡＴ活性化を引き起こした薬物はなかった。ＧＨと組み合わせて添加し
た場合、１５分後に測定したときに結合活性に大きな効果を示す薬物はなかった
が、４時間では前記薬物のいくつかはＧＨ誘導ＳＴＡＴ５活性化を延長できた。
【００１４】
【表２】
【００１５】
細胞を全面成長の９０％まで成長させ、８時間で収穫し、表１に記載した異な
る薬物と共に３０分間インキュベートした。次いで組換えｈＧＨ（５０ｎＭ）を
加え、異なる時間で細胞を収穫し、これを用いて全ＲＮＡを調製した。時間経過
実験で液体ハイブリダイゼーションアッセイを用いてＳＯＣＳ−２、ＳＯＣＳ−
３およびＣＩＳ ｍＲＮＡを測定した。ウェスターンブロットを用いてＳＯＣＳ
タンパク質を分析した。異なる薬物で得られた結果を表にまとめた。
る薬物と共に３０分間インキュベートした。次いで組換えｈＧＨ（５０ｎＭ）を
加え、異なる時間で細胞を収穫し、これを用いて全ＲＮＡを調製した。時間経過
実験で液体ハイブリダイゼーションアッセイを用いてＳＯＣＳ−２、ＳＯＣＳ−
３およびＣＩＳ ｍＲＮＡを測定した。ウェスターンブロットを用いてＳＯＣＳ
タンパク質を分析した。異なる薬物で得られた結果を表にまとめた。
【００１６】
（実施例）
１．薬物により誘導されるＳＴＡＴ活性化に及ぼす効果をモニターするための
アッセイ ＧＨに応答するＢＲＬ−４細胞（ラット肝細胞）を使用した（５）。ＧＨを１
００ｍｇ／ｍｌの濃度でこれらの細胞に加えた。図１に示すように、これにより
ゲルシフト分析でＳＴＡＴ−５の一過性の活性化が引き起こされた（６）。３０
分後に最大ＳＴＡＴ−５結合が観察され、４時間後には応答は消失した。非常に
多様な化学化合物をＳＴＡＴ−５活性化を延長する能力に関して試験し、非常に
多くの化合物がＧＨ存在下ではＳＴＡＴ−５活性化を延長できるという驚くべき
知見が得られた。ＧＨ不在下ではこれらの化合物はいかなる効果をも呈さなかっ
た。表１に列挙するように、かかる化合物にはＣＨＸ、Ｄ６０９、Ｂａｐｔａお
よびＨ７などがある。これらの化合物は作用メカニズムが全く異なり、かかる作
用にはタンパク質翻訳、チロシンリン酸化、カルシウムおよびリパーゼ阻止など
がある。これらが全てＳＴＡＴ−５活性化を延長するという知見は、化合物の作
用およびＳＴＡＴ５の延長と細胞性ストレスとの関係を示している。この細胞系
を使用することにより、化合物をＳＴＡＴ５を延長する能力のある、なしに関し
て類別できる。薬物開発過程においてこのような情報は重要である。本発明の１
つの実施形態は、薬物をＪＡＫ−ＳＴＡＴ−ＳＯＣＳ経路との相互作用の可能性
に関して類別することによる細胞基盤の薬物スクリーニングである。ここでサイ
トカインレセプターは１つのサイトカインまたは異なるサイトカインの組み合わ
せにより細胞内で活性化される。かかるサイトカインは多様な供給源に由来する
タンパク質、および様々な純度のサイトカインまたは可能なサイトカインアナロ
グのタンパク質変種からなってよい。目的の薬物をサイトカイン刺激と組み合わ
せて（前に、一緒に、または後に）加える。続いて前記薬物の効果を一定時間で
のＳＴＡＴタンパク質を分析することにより検出できる。経路の干渉によりＳＴ
ＡＴ ＤＮＡ結合活性におけるサイトカイン応答の延長またはＳＴＡＴチロシン
リン酸化の存在の延長に至る。当業者に公知であるように、かかるアッセイをス
クリーニング目的に適した自動または半自動様式で行うことができる。
アッセイ ＧＨに応答するＢＲＬ−４細胞（ラット肝細胞）を使用した（５）。ＧＨを１
００ｍｇ／ｍｌの濃度でこれらの細胞に加えた。図１に示すように、これにより
ゲルシフト分析でＳＴＡＴ−５の一過性の活性化が引き起こされた（６）。３０
分後に最大ＳＴＡＴ−５結合が観察され、４時間後には応答は消失した。非常に
多様な化学化合物をＳＴＡＴ−５活性化を延長する能力に関して試験し、非常に
多くの化合物がＧＨ存在下ではＳＴＡＴ−５活性化を延長できるという驚くべき
知見が得られた。ＧＨ不在下ではこれらの化合物はいかなる効果をも呈さなかっ
た。表１に列挙するように、かかる化合物にはＣＨＸ、Ｄ６０９、Ｂａｐｔａお
よびＨ７などがある。これらの化合物は作用メカニズムが全く異なり、かかる作
用にはタンパク質翻訳、チロシンリン酸化、カルシウムおよびリパーゼ阻止など
がある。これらが全てＳＴＡＴ−５活性化を延長するという知見は、化合物の作
用およびＳＴＡＴ５の延長と細胞性ストレスとの関係を示している。この細胞系
を使用することにより、化合物をＳＴＡＴ５を延長する能力のある、なしに関し
て類別できる。薬物開発過程においてこのような情報は重要である。本発明の１
つの実施形態は、薬物をＪＡＫ−ＳＴＡＴ−ＳＯＣＳ経路との相互作用の可能性
に関して類別することによる細胞基盤の薬物スクリーニングである。ここでサイ
トカインレセプターは１つのサイトカインまたは異なるサイトカインの組み合わ
せにより細胞内で活性化される。かかるサイトカインは多様な供給源に由来する
タンパク質、および様々な純度のサイトカインまたは可能なサイトカインアナロ
グのタンパク質変種からなってよい。目的の薬物をサイトカイン刺激と組み合わ
せて（前に、一緒に、または後に）加える。続いて前記薬物の効果を一定時間で
のＳＴＡＴタンパク質を分析することにより検出できる。経路の干渉によりＳＴ
ＡＴ ＤＮＡ結合活性におけるサイトカイン応答の延長またはＳＴＡＴチロシン
リン酸化の存在の延長に至る。当業者に公知であるように、かかるアッセイをス
クリーニング目的に適した自動または半自動様式で行うことができる。
【００１７】
２．薬物により誘導されるＳＯＣＳ発現に及ぼす効果をモニターするためのア
ッセイ 実施例１のＳＴＡＴ−５活性化の延長を引き起こす異なる薬物の効果は、ＳＯ
ＣＳタンパク質が薬物により低減される可能性により最も容易に説明され、ＳＯ
ＣＳのレベル低減に続いて「サイトカインレセプター遮断」の低下に至る。ＲＮ
アーゼ保護／液体ハイブリダイゼーションの技術を用いて異なるＳＯＣＳ ｍＲ
ＮＡを分析することによりこの概念を試験した（７、８）。表２に示すように、
いくつかの異なる薬物はＳＯＣＳ ｍＲＮＡを低減し得る。しかしながらあるケ
ースでは（ＢＡＰＴＡ）、効果は逆であり、主にＳＯＣＳ ｍＲＮＡは増加した
。このためにタンパク質合成に及ぼすＢＡＰＴＡの効果を測定し、低減されるこ
とを見出した。結果的に、表２に記載する全ての処置により最終的にＳＯＣＳタ
ンパク質の低減に至る。本発明の１つの実施形態によれば、続いてＳＯＣＳタン
パク質レベルを測定する。別の型の例えばタンパク質結合アッセイでこれを達成
することができる。スクリーニングアッセイでは、ＳＯＣＳ１、ＳＯＣＳ２、Ｓ
ＯＣＳ３およびＣＩＳなどのＳＯＣＳタンパク質の低減を引き起こす場合、被験
化合物のスコアを陽性とする。
ッセイ 実施例１のＳＴＡＴ−５活性化の延長を引き起こす異なる薬物の効果は、ＳＯ
ＣＳタンパク質が薬物により低減される可能性により最も容易に説明され、ＳＯ
ＣＳのレベル低減に続いて「サイトカインレセプター遮断」の低下に至る。ＲＮ
アーゼ保護／液体ハイブリダイゼーションの技術を用いて異なるＳＯＣＳ ｍＲ
ＮＡを分析することによりこの概念を試験した（７、８）。表２に示すように、
いくつかの異なる薬物はＳＯＣＳ ｍＲＮＡを低減し得る。しかしながらあるケ
ースでは（ＢＡＰＴＡ）、効果は逆であり、主にＳＯＣＳ ｍＲＮＡは増加した
。このためにタンパク質合成に及ぼすＢＡＰＴＡの効果を測定し、低減されるこ
とを見出した。結果的に、表２に記載する全ての処置により最終的にＳＯＣＳタ
ンパク質の低減に至る。本発明の１つの実施形態によれば、続いてＳＯＣＳタン
パク質レベルを測定する。別の型の例えばタンパク質結合アッセイでこれを達成
することができる。スクリーニングアッセイでは、ＳＯＣＳ１、ＳＯＣＳ２、Ｓ
ＯＣＳ３およびＣＩＳなどのＳＯＣＳタンパク質の低減を引き起こす場合、被験
化合物のスコアを陽性とする。
【００１８】
引用文献
【図１】
ゲル移動シフトアッセイを用いて測定されるＧＨによるＳＴＡＴ５活性化の時
間特性図。
間特性図。
【手続補正書】特許協力条約第３４条補正の翻訳文提出書
【提出日】平成１４年２月１３日（２００２．２．１３）
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
─────────────────────────────────────────────────────
フロントページの続き
(81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ，
ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ
Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ
，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ，
ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ
Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＭＺ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ
，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，
ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＧ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，
ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＢＺ，Ｃ
Ａ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ
，ＤＺ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，
ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，Ｋ
Ｅ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ
，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，
ＭＷ，ＭＸ，ＭＺ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，Ｒ
Ｕ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ
，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，
ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ
Claims (15)
- 【請求項１】 ＪＡＫ−ＳＴＡＴ経路が活性化されている細胞に生物学的に
活性な実体を添加することにより前記生物学的に活性な実体の効果を追跡するた
めの培養細胞におけるＪＡＫ−ＳＴＡＴ系の使用であって、それによりＪＡＫ−
ＳＴＡＴシグナルの期間の延長をモニターすることにより生物学的に活性な実体
の効果を追跡でき、生物学的に活性な実体の不在下でのＪＡＫ−ＳＴＡＴシグナ
ルの期間と比較することができるＪＡＫ−ＳＴＡＴ系の使用。 - 【請求項２】 生物学的に活性な実体が、公知のまたは可能性のある治療的
用途のある異なる化学組成物の化合物、例えば薬物または薬物候補物質、並びに
栄養的および環境的な化学的実体および放射線および生存生物に影響を及ぼし得
る類似の物理的物質のような天然または合成起源の化学化合物などを含む請求項
１に記載の使用。 - 【請求項３】 細胞が初代または確立されたセルラインからなる異なる型の
セルラインから選択される真核生物起源である特徴を有し、ＪＡＫ−ＳＴＡＴ経
路の成分が天然かまたは遺伝子移動の結果としてのいずれかで存在する請求項１
に記載の細胞の使用。 - 【請求項４】 ＪＡＫ−ＳＴＡＴ経路が天然にまたは人工的に前記細胞経路
を活性化できるいずれかの化合物により活性化され、アクチベーターがサイトカ
インまたはサイトカイン擬似物質の群から選択される請求項１に記載の細胞の使
用。 - 【請求項５】 アクチベーターが成長ホルモン（ＧＨ）、プロラクチン（Ｐ
ｒｌ）、エリトロポエチン（Ｅｐｏ）、レプチン、コロニー刺激因子、インター
ロイキンおよびインターフェロンまたはそのアナログから選択される請求項４に
記載の使用。 - 【請求項６】 アクチベーターが単一の分子、または分子の混合物のいずれ
かとして生物学的に活性な用量範囲である請求項４および５に記載の使用。 - 【請求項７】 ＪＡＫ−ＳＴＡＴ経路の活性化が、サイトカインに誘導され
る前記経路の修飾の分析によりモニターされ、前記修飾がタンパク質リン酸化、
ＤＮＡ結合、タンパク質のレベル変化、タンパク質輸送の分析および／またはタ
グ化タンパク質の分析を検出することにより検査される請求項１に記載の細胞の
使用。 - 【請求項８】 ＪＡＫ−ＳＴＡＴ経路の分析がＪＡＫ活性化依存性タンパク
質の分析によりモニターされる請求項１〜７に記載の細胞の使用。 - 【請求項９】 ＪＡＫ−ＳＴＡＴ経路の分析がチロシンキナーゼと結合する
レセプターである特徴を有する異なる型のＪＡＫ、例えばＪＡＫ１、ＪＡＫ２、
ＪＡＫ３およびＴＹＫ１、ＳＴＡＴ ＤＮＡエレメントに結合する特徴を有する
異なる型のＳＴＡＴ、例えばＳＴＡＴ１、ＳＴＡＴ２、ＳＴＡＴ３、ＳＴＡＴ４
、ＳＴＡＴ５ａ、ＳＴＡＴ５ｂおよびＳＴＡＴ６、内因的に発現されるかまたは
遺伝子移動後に人工的に発現されるＳＯＣＳモチーフおよびＳＨ２ドメインによ
り特徴づけられる異なる型のＳＯＣＳ、例えばＳＯＣＳ１、ＳＯＣＳ２、ＳＯＣ
Ｓ３、ＳＯＣＳ４およびＣＩＳを含んでなる請求項１〜８に記載の細胞の使用。 - 【請求項１０】 生物学的に活性な実体をＪＡＫ−ＳＴＡＴシグナルを延長
する能力に関してスクリーニングし、前記延長が数分から数時間にわたる期間か
ら選択され、前記延長を検出するアッセイが低、中または高スループット特性の
アッセイプロトコルのいずれかの型から選択される請求項１〜９に記載の細胞の
使用。 - 【請求項１１】 生物学的に活性な実体を活性化細胞に添加し、生物学的に
活性な実体の不在下で得られるＪＡＫ−ＳＴＡＴシグナルに比較してＪＡＫ−Ｓ
ＴＡＴシグナルの期間を延長するいずれかの能力をモニターする、生存生物の細
胞においてＪＡＫ−ＳＴＡＴ経路を活性化することにより生存生物に及ぼす前記
生物学的に活性な実体の効果を追跡する方法。 - 【請求項１２】 細胞が初代または確立されたセルラインからなる異なる型
のセルラインから選択される真核生物起源である特徴を有し、ＪＡＫ−ＳＴＡＴ
経路の成分が天然かまたは遺伝子移動の結果としてのいずれかで存在する請求項
１１に記載の方法。 - 【請求項１３】 細胞が天然にまたは人工的に前記細胞経路を活性化できる
いずれかの化合物により活性化され、サイトカインまたはサイトカイン擬似物質
の群から選択される請求項１１に記載の方法。 - 【請求項１４】 ＪＡＫ−ＳＴＡＴ経路の活性化が、サイトカインに誘導さ
れる前記経路の修飾の分析によりモニターされ、前記修飾がタンパク質リン酸化
、ＤＮＡ結合、タンパク質のレベル変化、タンパク質輸送の分析および／または
タグ化タンパク質の分析を検出することにより検査される請求項１１に記載の方
法。 - 【請求項１５】 生物学的に活性な実体をＪＡＫ−ＳＴＡＴシグナルを延長
する能力に関してスクリーニングし、前記延長が数分から数時間にわたる期間か
ら選択され、前記延長を検出するアッセイが低、中または高スループット特性の
アッセイプロトコルのいずれかの型から選択される請求項１１〜１４に記載の方
法。
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SE9903953-9 | 1999-11-01 | ||
| SE9903953A SE9903953D0 (sv) | 1999-11-01 | 1999-11-01 | New use of the jak-stat system |
| PCT/SE2000/002093 WO2001032912A1 (en) | 1999-11-01 | 2000-10-27 | Use of the jak-stat system in cultured cells to trace effects of tested compounds |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2003513637A true JP2003513637A (ja) | 2003-04-15 |
Family
ID=20417572
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2001535592A Pending JP2003513637A (ja) | 1999-11-01 | 2000-10-27 | Ｊａｋ−ｓｔａｔ系の新規の使用 |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP1226268A1 (ja) |
| JP (1) | JP2003513637A (ja) |
| AU (1) | AU1425001A (ja) |
| CA (1) | CA2387147A1 (ja) |
| SE (1) | SE9903953D0 (ja) |
| WO (1) | WO2001032912A1 (ja) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1639371A1 (en) * | 2003-06-30 | 2006-03-29 | Biovitrum Ab | Methods for identifying agents, which regulate cytokines |
| EP3389695A4 (en) | 2015-12-16 | 2019-10-09 | The Walter and Eliza Hall Institute of Medical Research | INHIBITION OF SH2 PROTEINS INDUCED BY CYTOKINES IN NK CELLS |
| CN105802987A (zh) * | 2016-03-31 | 2016-07-27 | 江苏省农业科学院 | 一种基于jak-stat5信号传导通路检测家禽prl的方法 |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5814517A (en) * | 1994-04-14 | 1998-09-29 | Ligand Pharmaceuticals, Inc. | DNA spacer regulatory elements responsive to cytokines and methods for their use |
| JPH09511908A (ja) * | 1994-04-14 | 1997-12-02 | リガンド・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド | サイトカインに応答性のｄｎａ調節要素 |
| CA2320226A1 (en) * | 1998-02-11 | 1999-08-19 | Beth Israel Deaconess Medical Center | Methods and compositions for modulating leptin activity |
-
1999
- 1999-11-01 SE SE9903953A patent/SE9903953D0/xx unknown
-
2000
- 2000-10-27 EP EP00976484A patent/EP1226268A1/en not_active Withdrawn
- 2000-10-27 CA CA002387147A patent/CA2387147A1/en not_active Abandoned
- 2000-10-27 JP JP2001535592A patent/JP2003513637A/ja active Pending
- 2000-10-27 WO PCT/SE2000/002093 patent/WO2001032912A1/en not_active Application Discontinuation
- 2000-10-27 AU AU14250/01A patent/AU1425001A/en not_active Abandoned
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP1226268A1 (en) | 2002-07-31 |
| WO2001032912A8 (en) | 2001-06-07 |
| CA2387147A1 (en) | 2001-05-10 |
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| AU1425001A (en) | 2001-05-14 |
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