JP2003509017A - ヒトａｂｃ２輸送体およびその使用 - Google Patents

ヒトａｂｃ２輸送体およびその使用

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JP2003509017A JP2001518743A JP2001518743A JP2003509017A JP 2003509017 A JP2003509017 A JP 2003509017A JP 2001518743 A JP2001518743 A JP 2001518743A JP 2001518743 A JP2001518743 A JP 2001518743A JP 2003509017 A JP2003509017 A JP 2003509017A
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Abstract

(57)【要約】 本発明は、新規のＡＢＣ輸送体ファミリーメンバーをコードする単離された核酸分子（ＡＢＣ２輸送体核酸分子と名付けられる）を提供する。本発明はまた、アンチセンス核酸分子、ＡＢＣ２輸送体核酸分子を含む組換え発現ベクター、この発現ベクターが導入された宿主細胞、およびＡＢＣ２輸送体遺伝子が導入されているかまたは破壊された非ヒトトランスジェニック動物を提供する。本発明はなおさらに、単離されたＡＢＣ２輸送体タンパク質、融合タンパク質、抗原ペプチド、抗ＡＢＣ２輸送体抗体、およびＡＢＣ２輸送体モジュレーターについてのスクリーニングアッセイを提供する。本発明の組成物を利用する診断方法および治療方法もまた提供される。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】 （発明の背景） ＡＢＣ輸送体タンパク質は、原核生物および真核生物の両方において保存され
た特徴を有するタンパク質の大きなスーパーファミリーを表す。ＡＢＣ輸送体は
、生物学的膜を横切る内因性基質もしくは外因性基質のＡＴＰ依存性輸送を触媒
し（Ｂｏｒｓｔ，Ｐ．、（１９９７）Ｓｅｍｉｎａｒ ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｂ
ｉｏｌｏｇｙ ８：１３１−２１３）、そして／または異種タンパク質の機能を
アロステリックに改変する（Ｈｉｇｇｉｎｓ ＣＦ、１９９５、Ｃｅｌｌ ８２
：６９３−６９６）。いくつかのＡＢＣ輸送体は、少数の例を挙げれば、多剤耐
性現象（Ａｍｂｕｄｋａｒ Ｓ．Ｖ．ら、（１９９９）、Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｔ
ｏｘｉｃｏｌ．、３９：３６１−３９８）、嚢胞性繊維症（Ｒｉｏｒｄｉｎ Ｊ
Ｒら、（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４５：１０６６−１０７３）、アテロー
ム性動脈硬化症（Ｂｒｏｏｋｓ−Ｗｉｌｓｏｎ Ａら、（１９９９）Ｎａｔｕｒ
ｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ２２：３３６−３４５）、高インスリン低血糖症（ｈｙ
ｐｅｒｉｎｓｕｌｉｎｅｍｉｃ ｈｙｐｏｇｌｙｃｅｍｉａ）（Ｔｈｏｍａｓ
ＰＭら、（１９９５）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６８：４６−４２９）、黄斑変性（Ａ
ｌｌｉｋｍｅｔｓ Ｒら、（１９９７）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２７７：１８０５−１
８０７）および副腎白質ジストロフィー（Ｍｏｓｓｅｒ Ｊら、（１９９３）Ｎ
ａｔｕｒｅ ３６１：７２６−７３０）を含む臨床上関連した表現型に関連して
いる。
【０００２】 これらの疾患表現型に関連した遺伝子は、ある程度まで同定されているが、種
々のＥＳＴデータベースに示された部分配列によって証明されるように、多数の
推定ＡＢＣ輸送体が、ヒトゲノムに存在することが明らかである（Ａｌｌｉｋｍ
ｅｔｓら、（１９９６）Ｈｕｍ Ｍｏｌ Ｇｅｎｅｔ ５：１６４９−１６５５
）。しかし、このような情報の有用性は、関連遺伝子のコード領域の全長ヌクレ
オチド配列およびその翻訳されたタンパク質産物が存在しないことによって損な
われている。
【０００３】 （発明の要旨） 本発明は、少なくとも部分的に、新規のＡＴＰ結合カセット（ＡＢＣ）輸送体
ファミリーメンバー（本明細書中において、ＡＢＣ２輸送体核酸およびタンパク
質分子といわれる）の発見に基づく。本発明のＡＢＣ２輸送体分子は、種々の細
胞プロセス、特に、細胞膜、または例えば、血液脳関門（ＢＢＢ）を横切る神経
毒性分子（例えば、βアミロイドペプチド）の輸送を調節するための調節剤の開
発のための標的として有用である。βアミロイドペプチドのような神経毒性分子
は、アルツハイマー病のような神経学的障害に関与する（例えば、Ｇｏａｔｅら
（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ ３４９：７０４；Ｇａｍｅｓら（１９９５）Ｎａｔ
ｕｒｅ ３７３：５２３；およびＳｕｚｕｋｉら（１９９４）Ｓｃｉｅｎｃｅ
２６４：１３３６を参照のこと）。毒性ポリペプチドに関連する他の神経学的疾
患としては、例えば、プリオン病、ハンチントン舞踏病、パーキンソン病などが
挙げられる（概説については、Ｈａｒｄｙら（１９９８）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２８
２：１０７５−１０７９を参照のこと）。
【０００４】 従って、ヒトＡＢＣ２輸送体のモジュレーターを用いたアミロイドβタンパク
質輸送の調節は、アミロイド沈着、従ってアルツハイマー病を調節することが期
待される。
【０００５】 さらに、本発明のＡＢＣ２輸送体分子は、多剤耐性の調節剤の開発のための標
的として有用である。さらに、本発明の分子は、診断手段および治療手段として
有用である。
【０００６】 従って、一つの局面において、本発明は、ＡＢＣ２輸送体タンパク質またはそ
の生物学的に活性な部分をコードする単離された核酸分子、ならびにプライマー
またはＡＢＣ２コード核酸の検出のためのハイブリダイゼーションプローブとし
て適切な核酸フラグメントを提供する。
【０００７】 一つの実施形態において、本発明のＡＢＣ２輸送体核酸分子は、配列番号１ま
たは３に示されるヌクレオチド配列（例えば、このヌクレオチド配列の全長）あ
るいはその相補体と少なくとも７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４
％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３
％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％以上同一である。
【０００８】 好ましい実施形態において、この単離された核酸分子は、配列番号１または３
に示されるヌクレオチド配列あるいはその相補体を含む。別の実施形態において
、この核酸分子は、配列番号３、および配列番号１のヌクレオチド１〜９０を含
む。別の実施形態において、この核酸分子は、配列番号３、および配列番号１の
ヌクレオチド６０９７〜６７９２を含む。
【０００９】 別の実施形態において、ＡＢＣ２輸送体核酸分子は、配列番号２のアミノ酸配
列に十分に相同なアミノ酸配列を有するタンパク質をコードするヌクレオチド配
列を含む。好ましい実施形態において、ＡＢＣ２輸送体核酸分子は、配列番号２
のアミノ酸配列の全長と少なくとも７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、
８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、
９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％以上相同なアミノ酸配列を有
するタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む。
【００１０】 別の好ましい実施形態において、単離された核酸分子は、配列番号２のアミノ
酸配列を有するヒトＡＢＣ２輸送体のアミノ酸配列をコードする。なお別の好ま
しい実施形態において、この核酸分子は、少なくとも６００６ヌクレオチド長で
ある。さらに好ましい実施形態において、この核酸分子は、少なくとも６７９２
ヌクレオチド長であり、そしてＡＢＣ２輸送体活性（本明細書中で記載されるよ
うな）を有するタンパク質をコードする。
【００１１】 本発明の別の実施形態は、核酸分子、好ましくはＡＢＣ２輸送体核酸分子を特
徴とし、これは、非ＡＢＣ２輸送体タンパク質をコードする核酸分子に関して、
ＡＢＣ２輸送体核酸分子を特異的に検出する。例えば、一つの実施形態において
、このような核酸分子は、少なくとも５０、６０、７０、８０、９０、１００、
１５０、２００、３００、４００、５００、５００〜１０００、１０００〜１５
００、１５００〜２０００もしくは２０００〜２５００以上のヌクレオチド長で
あり、そして／あるいは、配列番号１に示されるヌクレオチド配列を含む核酸分
子またはその相補体とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする。この核
酸分子が、ヌクレオチド長の数についての下限として上記に列挙された数のうち
の１つおよびその上限として別の数を有する範囲内の長さであり得る（例えば、
６０〜８０ヌクレオチド長、３００〜１０００ヌクレオチド長または１５０〜４
００ヌクレオチド長である分子）ことが理解されるべきである。
【００１２】 好ましい実施形態において、この核酸分子は、少なくとも１５（例えば、連続
した）ヌクレオチド長であり、そして配列番号１のヌクレオチド９１〜６０９６
とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする。他の好ましい実施形態にお
いて、この核酸分子は、配列番号１のヌクレオチド９１〜６０９６を含む。
【００１３】 他の好ましい実施形態において、この核酸分子は、配列番号２のアミノ酸配列
を含むポリペプチドの天然に存在する対立遺伝子改変体をコードし、ここで、こ
の核酸分子は、配列番号１または３を含む核酸分子とストリンジェントな条件下
でハイブリダイズする。
【００１４】 本発明の別の実施形態は、ＡＢＣ２輸送体核酸分子に対してアンチセンスであ
る単離された核酸分子（例えば、ＡＢＣ２輸送体核酸分子のコード鎖）を提供す
る。
【００１５】 本発明の別の局面は、ＡＢＣ２輸送体核酸分子を含むベクターを提供する。特
定の実施形態において、このベクターは、組換え発現ベクターである。別の実施
形態において、本発明は、本発明のベクターを含む宿主細胞を提供する。なお別
の実施形態において、本発明は、本発明の核酸分子を含む宿主細胞を提供する。
本発明はまた、適切な培地中で組換え発現ベクターを含む本発明の宿主細胞（例
えば、非ヒト哺乳動物細胞のような哺乳動物宿主細胞）を培養し、その結果タン
パク質を産生することによって、タンパク質、好ましくはＡＢＣ２輸送体タンパ
ク質を産生するための方法を提供する。
【００１６】 本発明の別の局面は、単離されたまたは組換えのＡＢＣ２輸送体タンパク質お
よびポリペプチドを特徴とする。好ましい実施形態において、タンパク質、好ま
しくはＡＢＣ２輸送体タンパク質は、少なくとも１つの膜貫通ドメインを含み、
そして配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも約７５％、８０％、８１％、８２
％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１
％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％以上相同なアミ
ノ酸配列を有する。さらに別の好ましい実施形態において、タンパク質、好まし
くはＡＢＣ２輸送体タンパク質は、少なくとも１つの膜貫通ドメインを含み、そ
してストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で配列番号１のヌクレオ
チド配列を含む核酸分子とハイブリダイズするヌクレオチド配列を有する核酸分
子によってコードされる。
【００１７】 別の実施形態において、本発明は、配列番号２のアミノ酸配列を有するタンパ
ク質のフラグメントを特徴とし、ここで、このフラグメントは、配列番号２のア
ミノ酸配列の少なくとも１５のアミノ酸（例えば、連続したアミノ酸）を含む。
別の実施形態において、タンパク質、好ましくはＡＢＣ２輸送体タンパク質は、
配列番号２のアミノ酸配列を有する。
【００１８】 別の実施形態において、本発明は、単離されたタンパク質、好ましくはＡＢＣ
２輸送体タンパク質を特徴とし、このＡＢＣ２輸送体タンパク質は、配列番号１
または３のヌクレオチド配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８
７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９
６％、９７％、９８％以上相同なヌクレオチド配列からなる核酸分子あるいはそ
の相補体によってコードされる。本発明は、単離されたタンパク質、好ましくは
ＡＢＣ２輸送体タンパク質をさらに特徴とし、このＡＢＣ２輸送体タンパク質は
、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で配列番号１または３のヌ
クレオチド配列を含む核酸分子あるいはその相補体とハイブリダイズするヌクレ
オチド配列からなる核酸分子によってコードされる。
【００１９】 本発明のタンパク質またはその部分（例えば、その生物学的に活性な部分）は
、非ＡＢＣ２輸送体ポリペプチド（例えば、異種アミノ酸配列）に作動可能に連
結され、融合タンパク質を形成し得る。本発明は、さらに、本発明のタンパク質
、好ましくはＡＢＣ２輸送体タンパク質に特異的に結合する抗体（例えば、モノ
クローナル抗体またはポリクローナル抗体）を特徴とする。さらに、ＡＢＣ２輸
送体タンパク質、その生物学的に活性な部分、またはこのＡＢＣ２輸送体タンパ
ク質およびその生物学的に活性な部分をコードする発現可能な（ｅｘｐｒｅｓｓ
ｉｂｌｅ）核酸は、薬学的組成物に組み込まれ得、この薬学的組成物は、必要に
応じて、薬学的に受容可能なキャリアを含む。
【００２０】 別の局面において、本発明は、生物学的サンプル中のＡＢＣ２輸送体核酸分子
、タンパク質またはポリペプチドの存在を検出するための方法を提供し、この方
法は、生物学的サンプルをＡＢＣ２輸送体核酸分子、タンパク質またはポリペプ
チドを検出し得る因子と接触させ、その結果、ＡＢＣ２輸送体核酸分子、タンパ
ク質またはポリペプチドの存在が、生物学的サンプル中で検出されることによる
。
【００２１】 別の局面において、本発明は、生物学的サンプル中のＡＢＣ２輸送体活性の存
在を検出するための方法を提供し、この方法は、生物学的サンプルをＡＢＣ２輸
送体活性のインジケータを検出し得る因子と接触させ、その結果、ＡＢＣ２輸送
体活性の存在が、生物学的サンプル中で検出されることによる。
【００２２】 別の局面において、本発明は、ＡＢＣ２輸送体活性を調節するための方法を提
供し、この方法は、ＡＢＣ２輸送体を発現し得る細胞をＡＢＣ２輸送体活性を調
節する因子と接触させ、その結果、細胞におけるＡＢＣ２輸送体活性が調節され
る工程を包含する。１つの実施形態において、この因子は、ＡＢＣ２輸送体活性
を阻害する。別の実施形態において、この因子は、ＡＢＣ２輸送体が他の膜タン
パク質の機能をアロステリックに改変する能力を調節する。別の実施形態におい
て、この因子は、ＡＢＣ２輸送体活性を刺激する。１つの実施形態において、こ
の因子は、ＡＢＣ２輸送体タンパク質に特異的に結合する抗体である。別の実施
形態において、この因子は、ＡＢＣ２輸送体遺伝子の転写またはＡＢＣ２輸送体
ｍＲＮＡの翻訳を調節することによってＡＢＣ２輸送体の発現を調節する。さら
に別の実施形態において、この因子は、ＡＢＣ２輸送体ｍＲＮＡまたはＡＢＣ２
輸送体遺伝子のコード鎖に対してアンチセンスなヌクレオチド配列を有する核酸
分子である。
【００２３】 １つの実施形態において、本発明の方法を使用して、ＡＢＣ２輸送体モジュレ
ーターである因子を被験体に投与することによって、異常または所望されないＡ
ＢＣ２輸送体タンパク質または核酸の発現または活性によって特徴付けられる障
害を有する被験体を処置する。１つの実施形態において、ＡＢＣ２輸送体モジュ
レーターは、ＡＢＣ２輸送体タンパク質である。別の実施形態において、ＡＢＣ
２輸送体モジュレーターは、ＡＢＣ２輸送体核酸分子である。さらに別の実施形
態において、ＡＢＣ２輸送体モジュレーターは、ポリペプチド抗体（もしくはそ
のフラグメント）、ペプチド、ペプチド模倣物または他の低分子（例えば、炭水
化物ベース、脂質ベース、核酸ベース、天然の有機物ベースもしくは合成的に誘
導された有機物ベースである分子）である。
【００２４】 本発明はまた、（ｉ）ＡＢＣ２輸送体タンパク質をコードする遺伝子の異常な
改変または変異；（ｉｉ）遺伝子の誤調節；および（ｉｉｉ）ＡＢＣ２輸送体タ
ンパク質の異常な翻訳後修飾のうちの少なくとも１つによって特徴付けられる遺
伝的改変の存在または非存在を同定するための診断アッセイを提供し、ここで、
遺伝子の野生型形態は、ＡＢＣ２輸送体活性を有するタンパク質をコードする。
【００２５】 別の局面において、本発明は、ＡＢＣ２輸送体タンパク質に結合するか、また
はＡＢＣ２輸送体タンパク質の活性を調節する化合物を同定するための方法を提
供し、この方法は、ＡＢＣ２輸送体活性を有するＡＢＣ２輸送体タンパク質を含
むインジケーター組成物を提供し、このインジケーター組成物を試験化合物と接
触させ、そしてＡＢＣ２輸送体活性に対するこの試験化合物の効果をインジケー
ター組成物において決定し、ＡＢＣ２輸送体タンパク質（例えば、膜と結合する
ＡＢＣ２輸送体タンパク質）の活性を調節する化合物を同定することによる。
【００２６】 （発明の詳細な説明） 本発明は、少なくとも部分的に、新規のＡＴＰ結合カセット（ＡＢＣ）輸送体
ファミリーメンバー（本明細書中において、ＡＢＣ２輸送体核酸およびタンパク
質分子といわれる）の発見に基づく。ＡＢＣ輸送体分子は、生物学的膜を横切る
内因性または外因性の基質のＡＴＰ依存性輸送を触媒する膜貫通タンパク質であ
る。ＡＢＣ輸送体は、ポリペプチド（例えば、βアミロイド（これは、アルツハ
イマー病に関与する）のような神経毒性ポリペプチド）の輸送に関連している。
神経毒性ポリペプチドによって引き起こされる他の神経学的疾患としては、プリ
オン病、パーキンソン病、ハンチントン舞踏病などが挙げられる（概説について
は、Ｈａｒｄｙら（１９９８）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２８２：１０７５−１０７９を
参照のこと）。特に、ＡＢＣ輸送体は、血液脳関門を横切る基質の輸送に関連す
る。さらに、ＡＢＣ輸送体は、細胞、特に例えば、細胞傷害性抗癌薬物に不応性
である細胞において見出された多剤耐性に関連する（Ｂｏｒｓｔ，Ｐ．（１９９
７）Ｓｅｍ．Ｃａｎｃｅｒ Ｂｉｏ．８：１３１−１３４）。
【００２７】 従って、本発明のＡＢＣ２輸送体分子は、新規の診断標的および治療剤の開発
のための適切な標的であり、脳の細胞（例えば、神経細胞）における細胞性輸送
、および血液脳関門を横切る輸送を制御する。さらに、ＡＢＣ２輸送体分子は、
多剤耐性を有する細胞もしくは組織（例えば、癌）の検出および／または処置の
ための診断標的および治療剤の開発のための適切な標的である。
【００２８】 特に、本明細書中に記載される新規のヒトＡＢＣ２輸送体分子は、１つ以上の
以下の機能および／または適用を有すると考えられる： −脳において発現されるＡＢＣ輸送体は、血液脳関門を介した基質の輸送に関
与し（Ｓｃｈｉｎｋｅｌ Ａ．Ｈ．ら、（１９９４）Ｃｅｌｌ、７７、４９１）
、従って、本明細書中に記載されるヒトＡＢＣ２輸送体の配列の同定は、血液脳
関門の機能の変更のための新規のストラテジーの開発を可能にする。脳の疾患の
処置における多くの薬物の潜在的な有用性が放棄されていると仮定すれば（なぜ
なら、これらの薬物は、治療的に適切な濃度で脳に入らないからである）、本発
明は、薬物の脳への送達を助けるためのストラテジーの開発を可能にする。
【００２９】 −脳において発現されるＡＢＣ輸送体（例えば、米国特許出願０８／８４７，
６１６およびＰＣＴ／ＵＳ９８／０８４６３（これらの本文は、本明細書中にお
いて援用される）において記載される）は、βアミロイドペプチド（老人斑にお
ける沈着が、アルツハイマー病の重要な特徴であるペプチド）についての潜在的
な輸送体である。従って、βアミロイド沈着を制御する新規の輸送体の同定は、
アルツハイマー病についての治療的処置の開発に決定的である。
【００３０】 −Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｍｅｌａｎｏｇａｓｔｅｒの白色（ｗｈｉｔｅ）遺
伝子のヒトホモログは、気分（ｍｏｏｄ）および恐慌性障害に関連することが報
告されており（Ｎａｋａｍｕｒａ Ｍら、（１９９９）、Ｍｏｌ．Ｐｓｙｃｈｉ
ａｔｒｙ、４、１５５−１６２）、そしてこの遺伝子は、ＡＢＣ輸送体のスーパ
ーファミリーのメンバーである。本発明のヒトＡＢＣ２輸送体はまた、脳におい
て発現され、従って、気分および恐慌性障害に関与し得る。本明細書中に記載さ
れるヒトＡＢＣ輸送体の配列の同定は、気分および恐慌性障害のための新規の処
置の開発を可能にする。
【００３１】 −ＡＢＣ輸送体は、多剤耐性の現象に関与することが示されており（Ｌｉｎｇ
，Ｖ．（１９９７）Ｃａｎｃｅｒ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ
４０：Ｓ３−Ｓ８）、そしてヒトＡＢＣ２の過剰発現は、多剤表現型に関連する
ことが示されている（Ｎａｏｍｉ，Ｍ．ら、（１９９８）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ
ｅａｒｃｈ、５８：１３３２−１３３７）。本発明は、ＡＢＣ２が多剤耐性表現
型に寄与する能力の正確な決定、およびＢｏｅｒ，Ｒ．ら（（１９９６）Ｅｕｒ
ｏｐｅａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ、３２Ａ：８５７−８６１）
によって記載される技術と類似の技術を使用した、多剤耐性を改良し得る因子の
設計を可能にする。
【００３２】 −ヒトＡＢＣ１タンパク質は、コレステロール流出に関連することが示されて
おり、そして変異形態は、タンジール病および家族性高密度リポタンパク質欠乏
症を引き起こす（Ｂｒｏｏｋｓ−Ｗｉｌｓｏｎ Ａ．ら、Ｂｏｄｚｉｏｃｈ Ｍ
．ら、Ｒｕｓｔ Ｓ．ら、Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ、２２、それぞれ３
３６−３４５、３４７−３５１、３５２−３５５）。ＡＢＣ１タンパク質は、Ａ
ＢＣ２タンパク質の近いホモログであるので、ヒトＡＢＣ２は、コレステロール
輸送体のようである。ヒトＡＢＣ２の配列の同定は、コレステロール誤調節を伴
う疾患についての新規の処置の開発を可能にする。
【００３３】 −マウスＡｂｃ１タンパク質は、マクロファージからのインターロイキン−１
β（ＩＬ−１β）分泌に関係している（Ｈａｍｏｎ Ｙ．ら、１９９７、Ｂｌｏ
ｏｄ、９０、２９１１−２９１５）。ＩＬ−１βは、炎症反応のメディエータで
あり、そしてその産生または分泌を損ない得る因子は、治療的に重要である可能
性がある。従って、ヒトＡＢＣ２の関連配列の同定は、炎症性疾患についての新
規の処置の開発を可能にする。
【００３４】 本発明のタンパク質および核酸分子をいう場合の用語「ファミリー」は、共通
の構造ドメインまたはモチーフを有し、そして本明細書中で規定されるように十
分なアミノ酸配列相同性またはヌクレオチド配列相同性を有する２つ以上のタン
パク質または核酸分子を意味することが意図される。このようなファミリーメン
バーは、天然に存在し得るか、または天然には存在しないかもしれず、そして同
一または異なる種のいずれかに由来し得る。例えば、ファミリーは、ヒト起源の
第一のタンパク質、ならびにヒト起源の他の異なるタンパク質を含み得るか、あ
るいは、非ヒト起源のホモログを含み得る。ファミリーのメンバーはまた、共通
の機能的特徴を有し得る。
【００３５】 例えば、ＡＢＣ輸送体タンパク質のファミリーは、少なくとも１つの「膜貫通
ドメイン」および好ましくは２つの膜貫通ドメインを含む。本明細書中で使用さ
れる場合、用語「膜貫通ドメイン」は、形質膜にまたがる約１８アミノ酸残基長
のアミノ酸配列を含む。より好ましくは、膜貫通ドメインは、およそ少なくとも
１８、２０、２５、３０、３５、４０または４５残基以上を含み、そして形質膜
にまたがる。膜貫通ドメインは、例えば、Ｚａｇｏｔｔａ Ｗ．Ｎ．ら、（１９
９６）Ａｎｎｕａｌ Ｒｅｖ．Ｎｅｕｒｏｎｓｃｉ．１９：２３５−６３（この
文脈は、本明細書中において参考として援用される）に記載される。膜貫通ドメ
インを含むヒトＡＢＣ２輸送体タンパク質のアミノ酸配列は、図２に示される。
１つ以上のこれらの膜貫通ドメインが結合して、膜にまたがる（ｍｅｍｂｒａｎ
ｅ−ｓｐａｎｎｉｎｇ）ドメインを形成し得る。
【００３６】 本発明の単離されたタンパク質、好ましくは、ＡＢＣ２輸送体タンパク質は、
配列番号２のアミノ酸配列に十分に相同なアミノ酸配列を有するか、または配列
番号１もしくは３に十分に相同なヌクレオチド配列によってコードされる。本明
細書中で使用される場合、用語「十分に相同な」は、第二のアミノ酸またはヌク
レオチド配列に対して十分または最小限の数の同一または等価なアミノ酸残基（
例えば、類似の側鎖を有するアミノ酸残基）またはヌクレオチドを含む第一のア
ミノ酸またはヌクレオチド配列をいい、その結果、第一および第二のアミノ酸配
列、または第一および第二のヌクレオチド配列が、共通の構造ドメインもしくは
モチーフおよび／または共通の機能的活性を共有する。例えば、共通の構造ドメ
インを共有し、ドメインのアミノ酸配列に渡って少なくとも６０％の相同性、よ
り好ましくは、７０％〜８０％の相同性、そしてなおより好ましくは、９０〜９
５％の相同性を有し、そして少なくとも１つ、好ましくは２つの構造ドメインま
たはモチーフを含むアミノ酸配列またはヌクレオチド配列は、本明細書中で十分
に相同であると規定される。さらに、少なくとも６０％、より好ましくは、７０
〜８０％、または９０〜９５％の相同性を共有し、そして共通の機能的活性を共
有するアミノ酸配列またはヌクレオチド配列は、本明細書中で十分に相同である
と規定される。
【００３７】 本明細書中で交換可能に使用される場合、「ＡＢＣ２輸送体活性」、「ＡＢＣ
２輸送体の生物学的活性」または「ＡＢＣ２輸送体の機能的活性」は、標準的な
技術に従ってインビボまたはインビトロで決定されるような、ＡＢＣ２輸送体応
答細胞またはＡＢＣ２輸送体タンパク質基質に対するＡＢＣ２輸送体タンパク質
、ポリペプチドまたは核酸分子によって発揮される活性をいう。好ましくは、Ａ
ＢＣ２輸送体活性は、エネルギー依存性（ＡＴＰ）分子ポンプとして作用する能
力を有する。１つの実施形態において、ＡＢＣ２活性は、膜結合タンパク質との
結合および／または生物学的膜を横切る内因性もしくは外因性基質の輸送のよう
な直接的な活性である。別の実施形態において、ＡＢＣ２活性は、ポリペプチド
が他の膜タンパク質の機能をアロステリックに改変する能力である。例えば、い
くつかの細胞において、ＡＢＣ輸送体モジュレータによるｐ糖タンパク質の調節
は、容量活性化塩素イオン流動の規模を変更することが示されている（Ｈｉｇｇ
ｉｎｓ，Ｃ．Ｆ． Ｖｏｌｕｍｅ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｃｈｌｏｒｉｄｅ ｃ
ｕｒｒｅｎｔｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｍｕｌｔｉｄｒｕ
ｇ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ Ｐ−ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ、Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏ
ｌ．４８２：３１Ｓ−３６Ｓ（１９９５）に概説される）。従って、このモデル
において、ｐ糖タンパク質および他のＡＢＣ２輸送体は、複数の機能を有し、こ
れらの機能のうちの１つは、他の膜タンパク質の機能をアロステリックに改変す
ることである。本発明は、例えば、ＡＢＣ２輸送体による他の膜タンパク質のア
ロステリックな改変が、基質（例えば、βアミロイド）、細胞傷害性薬物または
他の低分子の輸送における変化を担うモデルに一致する。従って、ＡＢＣ２活性
は、少なくとも１つ以上の以下の活性である：（ｉ）ＡＢＣ２依存性シグナル伝
達経路の活性化；（ｉｉ）膜を横切る基質（例えば、細胞傷害性薬物、βアミロ
イド）の輸送の調節；（ｉｉｉ）ＡＢＣ２タンパク質の非ＡＢＣ２膜結合分子と
の相互作用；（ｉｖ）ＡＢＣ２発現細胞の発生または分化の調節；（ｖ）非ＡＢ
Ｃ２発現細胞の発生または分化の調節；（ｖｉ）ＡＢＣ２発現細胞のホメオスタ
シスの調節；および（ｖｉｉ）非ＡＢＣ２発現細胞のホメオスタシスの調節。
【００３８】 従って、本発明の別の実施形態は、ＡＢＣ２輸送体活性を有する単離されたＡ
ＢＣ２輸送体タンパク質およびポリペプチドを特徴とする。好ましいタンパク質
は、少なくとも１つの膜貫通ドメイン、好ましくは２つの膜貫通ドメイン、そし
て好ましくは、ＡＢＣ２輸送体活性を有するＡＢＣ２輸送体タンパク質である。
【００３９】 単離されたヒトＡＢＣ２輸送体タンパク質ｃＤＮＡのヌクレオチド配列、およ
びヒトＡＢＣ２輸送体ポリペプチドの推定アミノ酸配列を、図５ならびにそれぞ
れ配列番号１および２に示す。ヒトＡＢＣ２輸送体遺伝子（これは、約６７９２
ヌクレオチド長である）は、約２２３ｋＤａの分子量を有し、そして約２００１
アミノ酸残基長であるタンパク質をコードする。
【００４０】 本発明の種々の局面を、以下の小節においてさらに詳細に記載する： （Ｉ．単離された核酸分子） 本発明の１つの局面は、ＡＢＣ２輸送体タンパク質またはその生物学的に活性
な部分をコードする単離された核酸分子、ならびにＡＢＣ２コード核酸分子（例
えば、ＡＢＣ２輸送体ｍＲＮＡ）を同定するためのハイブリダイゼーションプロ
ーブとしての使用に適切な核酸フラグメント、およびＡＢＣ２輸送体核酸分子の
増幅または変異のためのＰＣＲプライマーとしての使用のためのフラグメントに
関する。本明細書中で使用される場合、用語「核酸分子」は、ＤＮＡ分子（例え
ば、ｃＤＮＡまたはゲノムＤＮＡ）およびＲＮＡ分子（例えば、ｍＲＮＡ）なら
びにヌクレオチドアナログを使用して作製されたＤＮＡまたはＲＮＡのアナログ
を含むことが意図される。核酸分子は、一本鎖または二本鎖ＤＮＡであり得るが
、好ましくは、二本鎖ＤＮＡである。
【００４１】 用語「単離された核酸分子」は、核酸の天然の供給源に存在する他の核酸分子
から分離された核酸分子を含む。例えば、ゲノムＤＮＡに関しては、用語「単離
された」は、ゲノムＤＮＡが本来関連する染色体から分離された核酸分子を含む
。好ましくは、「単離された」核酸は、核酸が由来する生物のゲノムＤＮＡにお
いて、核酸に本来隣接する配列（すなわち、その核酸の５’および３’末端に位
置する配列）を含まない。例えば、種々の実施形態において、単離されたＡＢＣ
２輸送体核酸分子は、核酸が由来する細胞のゲノムＤＮＡにおいて、核酸分子に
本来隣接する約５ｋｂ、４ｋｂ、３ｋｂ、２ｋｂ、１ｋｂ、０．５ｋｂまたは０
．１ｋｂ未満のヌクレオチド配列を含み得る。さらに、ｃＤＮＡ分子のような「
単離された」核酸分子は、組換え技術によって産生された場合、他の細胞性物質
または培養培地を実質的に含むことができないか、あるいは化学合成された場合
、化学的前駆体または他の化学薬品を実質的に含むことができない。
【００４２】 本発明の核酸分子、例えば、配列番号１もしくは３のヌクレオチド配列を有す
る核酸分子、またはその一部分は、標準的な分子生物学技術を使用して単離され
得、そしてこの配列情報は、本明細書中で提供され得る。配列番号１または３の
核酸配列のすべてまたは一部分をハイブリダイゼーションプローブとして使用し
て、ＡＢＣ２輸送体核酸分子は、標準的なハイブリダイゼーション技術およびク
ローニング技術を使用して単離され得る（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｊ．、Ｆ
ｒｉｔｓｈ，Ｅ．Ｆ．およびＭａｎｉａｔｉｓ，Ｔ． Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃ
ｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、第２版、Ｃｏｌｄ
Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ
Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ
Ｈａｒｂｏｒ、ＮＹ、１９８９に記載されるように）。さらに、配列番号１ま
たは３のすべてまたは一部分を含む核酸分子は、配列番号１または３の配列に基
づいて設計された合成オリゴヌクレオチドプライマーを使用して、ポリメラーゼ
連鎖反応（ＰＣＲ）によって単離され得る。
【００４３】 本発明の核酸は、標準的なＰＣＲ増幅技術に従って、鋳型および適切なオリゴ
ヌクレオチドプライマーとして、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡあるいはゲノムＤＮＡを使
用して増幅され得る。このように増幅された核酸は、適切なベクターにクローニ
ングされ得、そしてＤＮＡ配列分析によって特徴付けられ得る。さらに、ＡＢＣ
２輸送体ヌクレオチド配列に対応するオリゴヌクレオチドは、標準的な合成技術
によって（例えば、自動化ＤＮＡ合成機を使用して）調製され得る。
【００４４】 好ましい実施形態において、本発明の単離された核酸分子は、配列番号１に示
されるヌクレオチド配列を含む。配列番号１の配列は、ヒトＡＢＣ２ ｃＤＮＡ
に対応する。このｃＤＮＡは、ヒトＡＢＣ２タンパク質をコードする配列（すな
わち、ヌクレオチド９１〜６０９６由来の「コード領域」）、ならびに５’非翻
訳配列（ヌクレオチド１〜９０）および３’非翻訳配列（ヌクレオチド６０９７
〜６７９２）を含む。あるいは、核酸分子は、配列番号１のコード領域（例えば
、配列番号３に対応するヌクレオチド９１〜６０９６）のみを含み得る。
【００４５】 別の好ましい実施形態において、本発明の単離された核酸分子は、配列番号１
または３に示されたヌクレオチド配列の相補体である核酸分子、あるいはこれら
のヌクレオチド配列の任意の一部分を含む。配列番号１または３に示されたヌク
レオチド配列に相補的である核酸分子は、配列番号１または３に示されたヌクレ
オチド配列に十分に相補的である核酸分子であり、その結果、配列番号１または
３に示されたヌクレオチド配列にハイブリダイズし得、それによって、安定な二
重鎖を形成する。
【００４６】 さらに別の好ましい実施形態において、本発明の単離された核酸分子は、配列
番号１もしくは３に示されたヌクレオチド配列の全長またはこれらのヌクレオチ
ド配列の任意の一部分に少なくとも約５０％、５５％、６０％、６５％、７０％
、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％
、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％またはより相同な
ヌクレオチド配列を含む。
【００４７】 さらに、本発明の核酸分子は、配列番号１または３の核酸配列の一部分（例え
ば、プローブもしくはプライマーとして使用され得るフラグメント、またはＡＢ
Ｃ２輸送体タンパク質の一部分（例えば、ＡＢＣ２輸送体タンパク質の生物学的
に活性な部分）をコードするフラグメント）のみを含み得る。ＡＢＣ２輸送体遺
伝子のクローニングから決定されたヌクレオチド配列は、他のＡＢＣ２輸送体フ
ァミリーメンバーならびに他の種由来のＡＢＣ２輸送体ホモログの、同定および
／またはクローニングにおける使用のために設計されたプローブおよびプライマ
ーの作製を考慮する。プローブ／プライマーは、代表的には、実質的に精製され
たオリゴヌクレオチドを含む。オリゴヌクレオチドは、代表的には、ストリンジ
ェントな条件下で、配列番号１または３のセンス配列、配列番号１または３のア
ンチセンス配列、あるいは配列番号１または３の天然に存在する対立遺伝子改変
体または変異体の少なくともおよそ１２または１５、好ましくは、およそ２０ま
たは２５、より好ましくはおよそ３０、３５、４０、４５，５０、５５、６０、
６５または７５の連続したヌクレオチドにハイブリダイズするヌクレオチド配列
の領域を含む。例示的な実施形態において、本発明の核酸分子は、５０、６０、
７０、８０、９０、１００、１５０、２００、３００、４００、５００〜１００
０、１０００〜１５００、１５００〜２０００または２０００〜２５００以上の
ヌクレオチド長を超え、そしてストリンジェントなハイブリダイゼーション条件
下で配列番号１または３の核酸分子にハイブリダイズするヌクレオチド配列を含
む。
【００４８】 ＡＢＣ２輸送体ヌクレオチド配列に基づくプローブを使用して、同一または相
同なタンパク質をコードする転写物またはゲノム配列を検出し得る。好ましい実
施形態において、プローブは、プローブに付着した標識群（例えば、この標識群
は、放射性同位体、蛍光化合物、酵素または酵素コファクターであり得る）をさ
らに含む。このようなプローブは、ＡＢＣ２輸送体タンパク質を誤発現する細胞
または組織の同定のための診断試験キットの一部分として使用され得、これは、
例えば、被験体由来の細胞サンプル中のＡＢＣ２コード核酸のレベルの測定（例
えば、ＡＢＣ２輸送体ｍＲＮＡレベルの検出、あるいはゲノムＡＢＣ２輸送体遺
伝子が変異または欠失したか否かの決定）による。
【００４９】 「ＡＢＣ２輸送体タンパク質の生物学的に活性な部分」をコードする核酸フラ
グメントは、ＡＢＣ２輸送体の生物学的活性（ＡＢＣ２輸送体タンパク質の生物
学的活性は、本明細書中で記載される）を有するポリペプチドをコードする配列
番号１または３のヌクレオチド配列の一部分を単離し、ＡＢＣ２輸送体タンパク
質のコードされた部分を発現し（例えば、インビトロでの組換え発現によって）
、そしてＡＢＣ２輸送体タンパク質のコード部分の活性を評価することによって
調製され得る。
【００５０】 本発明はさらに、遺伝コードの縮重に起因して配列番号１または３に示される
ヌクレオチド配列とは異なり、それ故、配列番号１または３に示されるヌクレオ
チド配列によってコードされるタンパク質と同じＡＢＣ２輸送体タンパク質をコ
ードする核酸分子を含む。別の実施形態において、本発明の単離された核酸分子
は、配列番号２に示されるアミノ酸配列を有するタンパク質をコードするヌクレ
オチド配列を有する。
【００５１】 配列番号１または３に示されるＡＢＣ２輸送体ヌクレオチド配列に加えて、Ａ
ＢＣ２輸送体タンパク質のアミノ酸配列における変化を導くＤＮＡ配列多型が、
集団（例えば、ヒト集団）内に存在し得ることが当業者に理解される。ＡＢＣ２
輸送体遺伝子におけるこのような遺伝的多型は、天然の対立遺伝子変異に起因し
て、集団内部の個体間に存在し得る。本明細書中で使用される場合、用語「遺伝
子」および「組換え遺伝子」は、ＡＢＣ２輸送体タンパク質、好ましくは哺乳動
物ＡＢＣ２輸送体タンパク質をコードするオープンリーディングフレームを含み
、そして非コード調節配列およびイントロンをさらに含み得る核酸分子をいう。
【００５２】 ヒトＡＢＣ２輸送体の対立遺伝子改変体は、機能的ＡＢＣ２輸送体タンパク質
および非機能的ＡＢＣ２輸送体タンパク質の両方を含む。機能的対立遺伝子改変
体は、ヒトＡＢＣ２輸送体の天然に存在するアミノ酸配列改変体であり、このヒ
トＡＢＣ２輸送体は、ＡＢＣ２輸送体リガンドを結合する能力を維持する。機能
的対立遺伝子改変体は、代表的には、配列番号２の、１つ以上のアミノ酸の保存
的置換のみ、あるいはタンパク質の重要でない領域の重要でない残基の置換、欠
失または挿入を含む。
【００５３】 非機能的対立遺伝子改変体は、ヒトＡＢＣ２輸送体タンパク質の天然に存在す
るアミノ酸配列改変体であり、このヒトＡＢＣ２輸送体タンパク質は、ＡＢＣ２
輸送体リガンドもまた結合する能力を有さない。非機能的対立遺伝子改変体は、
代表的には、配列番号２のアミノ酸配列の非保存的置換、欠失もしくは挿入また
は未成熟な短縮（ｐｒｅｍａｔｕｒｅ ｔｒｕｎｃａｔｉｏｎ）、あるいは重要
な残基または重要な領域における置換、挿入または欠失を含む。
【００５４】 本発明はさらに、ヒトＡＢＣ２輸送体タンパク質の非ヒトオーソログを提供す
る。ヒトＡＢＣ２輸送体タンパク質のオーソログは、非ヒト生物から単離され、
そしてヒトＡＢＣ２輸送体タンパク質と同じＡＢＣ２輸送体活性を有するタンパ
ク質である。ヒトＡＢＣ２タンパク質のオーソログは、配列番号２に実質的に相
同なアミノ酸配列を含むとして容易に同定され得る。
【００５５】 さらに、他のＡＢＣ２輸送体ファミリーメンバーをコードし、それ故、配列番
号１または３のＡＢＣ２輸送体配列とは異なるヌクレオチド配列を有する核酸分
子は、本発明の範囲内であることが意図される。例えば、別のＡＢＣ２輸送体ｃ
ＤＮＡは、ヒトＡＢＣ２輸送体のヌクレオチド配列に基づいて同定され得る。さ
らに、異なる種（例えば、哺乳動物）由来のＡＢＣ２輸送体タンパク質をコード
し、それ故、配列番号１または３のＡＢＣ２輸送体配列とは異なるヌクレオチド
配列を有する核酸分子は、本発明の範囲内であることが意図される。例えば、マ
ウスＡＢＣ２輸送体ｃＤＮＡは、ヒトＡＢＣ２輸送体のヌクレオチド配列に基づ
いて同定され得る。
【００５６】 本発明のＡＢＣ２輸送体ｃＤＮＡの天然の対立遺伝子改変体およびホモログに
対応する核酸分子は、本明細書中に開示されるｃＤＮＡを使用して、本明細書中
に開示されるＡＢＣ２輸送体核酸またはその一部分との相同性に基づいて、スト
リンジェントなハイブリダイゼーション条件下で標準的なハイブリダイゼーショ
ン技術に従って、ハイブリダイゼーションプローブとして単離され得る。本発明
のＡＢＣ２輸送体ｃＤＮＡの天然の対立遺伝子改変体およびホモログに対応する
核酸分子は、ＡＢＣ２輸送体遺伝子と同じ染色体または遺伝子座へのマッピング
によってさらに単離され得る。
【００５７】 従って、別の実施形態において、本発明の単離された核酸分子は、少なくとも
１５、２０、２５、３０以上のヌクレオチド長であり、そしてストリンジェント
な条件下で、配列番号１または３のヌクレオチド配列を含む核酸分子にハイブリ
ダイズする。他の実施形態において、核酸は、少なくとも３０、５０、１００、
１５０、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、
１０００、１２５０、１５００、１７５０、２０００、２２５０、２５００、２
７３９以上のヌクレオチド長である。本明細書中で使用される場合、用語「スト
リンジェントな条件下でハイブリダイズする」は、互いに少なくとも７５％相同
なヌクレオチド配列が、代表的には、互いにハイブリダイズしたままであるハイ
ブリダイゼーションおよび洗浄についての条件を記載することが意図される。好
ましくは、この条件は、互いに少なくとも約８０％、なおより好ましくは、互い
に少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９
２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％または９８％相同な配列が、代
表的には、互いにハイブリダイズしたままであるような条件である。このような
ストリンジェントな条件は、当業者に公知であり、そしてＣｕｒｒｅｎｔ Ｐｒ
ｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｊｏｈｎ Ｗｉ
ｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ、Ｎ．Ｙ．（１９８９）、６．３．１〜６．３．６に見出され
得る。ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件の好ましい非限定的な例
は、約４５℃での６×塩化ナトリウム／クエン酸ナトリウム（ＳＳＣ）における
ハイブリダイゼーション、その後の５０℃、好ましくは５５℃、より好ましくは
６０℃、そしてなおより好ましくは６５℃での０．２×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ
における１回以上の洗浄である。好ましくは、ストリンジェントな条件下で配列
番号１または３の配列にハイブリダイズする本発明の単離された核酸分子は、天
然に存在する核酸分子に対応する。本明細書中で使用される場合、「天然に存在
する」核酸分子は、自然に現存するヌクレオチド配列を有する（例えば、天然の
タンパク質をコードする）ＲＮＡ分子またはＤＮＡ分子をいう。
【００５８】 集団内に存在し得るＡＢＣ２輸送体配列の天然に存在する対立遺伝子改変体に
加えて、当業者は、変化が配列番号１または３のヌクレオチド配列への変異によ
って誘導され得、それによって、ＡＢＣ２輸送体タンパク質の機能的能力を変更
せずに、コードされたＡＢＣ２輸送体タンパク質のアミノ酸配列における変化を
導くことをさらに理解する。例えば、「非本質的な」アミノ酸残基でのアミノ酸
置換を導くヌクレオチド置換は、配列番号１または３の配列において作製され得
る。「非本質的な」アミノ酸残基は、生物学的活性を変更せずに、ＡＢＣ２輸送
体の野生型配列（例えば、配列番号２の配列）から変更され得る残基であり、一
方、「本質的な」アミノ酸残基は、生物学的活性に不可欠である。
【００５９】 従って、本発明の別の局面は、活性に本質的ではないアミノ酸残基における変
化を含むＡＢＣ２輸送体タンパク質をコードする核酸分子に関係する。このよう
なＡＢＣ２輸送体タンパク質は、配列番号２とはアミノ酸配列が異なるが、生物
学的活性は保持する。１つの実施形態において、単離された核酸分子は、タンパ
ク質をコードするヌクレオチド配列を含み、ここで、このタンパク質は、配列番
号２と少なくとも約７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％
、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％
、９５％、９６％、９７％またはより相同なアミノ酸配列を含む。
【００６０】 配列番号２のタンパク質に相同なＡＢＣ２輸送体タンパク質をコードする単離
された核酸分子は、配列番号１または３のヌクレオチド配列に１つ以上のヌクレ
オチド置換、付加または欠失を導入することによって作製され得、その結果、１
つ以上のアミノ酸置換、付加または欠失が、コードタンパク質に導入される。変
異は、標準的な技術（例えば、部位特異的変異誘発およびＰＣＲ媒介性変異誘発
）によって、配列番号１または３に導入され得る。好ましくは、保存的アミノ酸
置換は、１つ以上の推定非本質的アミノ酸残基で作製される。「保存的アミノ酸
置換」は、アミノ酸残基が、類似の側鎖を有するアミノ酸残基で置換される置換
である。類似の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、当該分野で規定され
ている。これらのファミリーとしては、塩基性側鎖（例えば、リジン、アルギニ
ン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非電
荷極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、トレオニ
ン、チロシン、システイン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシ
ン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン
）、β分枝側鎖（例えば、トレオニン、バリン、イソロイシン）および芳香族側
鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）を有
するアミノ酸が挙げられる。従って、ＡＢＣ２輸送体タンパク質における推定非
本質的アミノ酸残基は、好ましくは、同じ側鎖ファミリー由来の別のアミノ酸残
基で置換される。あるいは、別の実施形態において、変異は、ＡＢＣ２輸送体コ
ード配列のすべてまたは一部に沿って、例えば飽和変異誘発によってランダムに
導入され得、そして、得られた変異体は、ＡＢＣ２輸送体生物学的活性について
スクリーニングされ、活性を保持する変異体を同定し得る。配列番号１または３
の変異誘発後に、コードタンパク質は、組換え的に発現され得、そしてタンパク
質の活性が決定され得る。
【００６１】 好ましい実施形態において、変異体ＡＢＣ２輸送体タンパク質を、非ＡＢＣ２
輸送体分子（例えば、ＡＢＣ２輸送体リガンド（例えば、ポリペプチドまたは低
分子））と相互作用する能力についてアッセイし得る。
【００６２】 上記のＡＢＣ２輸送体タンパク質をコードする核酸分子に加えて、本発明の別
の局面は、その核酸分子にアンチセンスな単離された核酸分子に関係する。「ア
ンチセンス」核酸は、タンパク質をコードする「センス」核酸に相補的な（例え
ば、二本鎖ｃＤＮＡ分子のコード鎖に相補的、またはｍＲＮＡ配列に相補的な）
ヌクレオチド配列を含む。従って、アンチセンス核酸は、センス核酸に水素結合
し得る。アンチセンス核酸は、ＡＢＣ２輸送体コード鎖全体、またはその一部分
のみに相補的であり得る。１つの実施形態において、アンチセンス核酸分子は、
ＡＢＣ２をコードするヌクレオチド配列のコード鎖の「コード領域」にアンチセ
ンスである。用語「コード領域」は、アミノ酸残基に翻訳されるコドンを含むヌ
クレオチド配列の領域をいう（例えば、ヒトＵＭＡＴのコード領域は、配列番号
３に対応する）。別の実施形態において、アンチセンス核酸分子は、ＡＢＣ２を
コードするヌクレオチド配列のコード鎖の「非コード領域」にアンチセンスであ
る。用語「非コード領域」は、アミノ酸に翻訳されないコード領域に隣接する５
’および３’配列をいう（すなわち、また５’および３’非翻訳領域といわれる
）。
【００６３】 本明細書中で開示されるＡＢＣ２輸送体をコードするコード鎖配列（例えば、
配列番号３）が与えられると、本発明のアンチセンス核酸は、ワトソン・クリッ
ク型塩基対形成の法則に従って設計され得る。アンチセンス核酸分子は、ＡＢＣ
２輸送体ｍＲＮＡのコード領域全体に相補的であり得るが、より好ましくは、Ａ
ＢＣ２輸送体ｍＲＮＡのコード領域または非コード領域の一部分のみにアンチセ
ンスなオリゴヌクレオチドである。例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチドは
、ＡＢＣ２輸送体ｍＲＮＡの翻訳開始部位を囲む領域に相補的であり得る。アン
チセンスオリゴヌクレオチドは、例えば、およそ５、１０、１５、２０、２５、
３０、３５、４０、４５または５０ヌクレオチド長、あるいはそれを超えるヌク
レオチド長であり得る。本発明のアンチセンス核酸は、当該分野で公知の手順を
使用した化学合成および酵素連結反応を使用して構築され得る。例えば、アンチ
センス核酸（例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチド）は、天然に存在するヌ
クレオチド、あるいは分子の生物学的安定性を増加するか、またはアンチセンス
核酸とセンス核酸との間に形成された二重鎖の物理的安定性を増加するように設
計された様々に改変されたヌクレオチドを使用して（例えば、ホスホロチオエー
ト誘導体およびアクリジン置換ヌクレオチドが使用され得る）化学合成され得る
。アンチセンス核酸を作製するために使用され得る改変されたヌクレオチドの例
としては、５−フルオロウラシル、５−ブロモウラシル、５−クロロウラシル、
５−ヨードウラシル、ヒポキサンチン、キサンチン、４−アセチルシトシン、５
−（カルボキシヒドロキシルメチル）ウラシル、５−カルボキシメチルアミノメ
チル−２−チオウリジン、５−カルボキシメチルアミノメチルウラシル、ジヒト
ドウラシル、β−Ｄ−ガラクトシルキューオシン（ｇａｌａｃｔｏｓｙｌｑｕｅ
ｏｓｉｎｅ）、イノシン、Ｎ６−イソペンテニルアデニン、１−メチルグアニン
、１−メチルイノシン、２，２−ジメチルグアニン、２−メチルアデニン、２−
メチルグアニン、３−メチルシトシン、５−メチルシトシン、Ｎ６−アデニン、
７−メチルグアニン、５−メチルアミノメチルウラシル、５−メトキシアミノメ
チル−２−チオウラシル、β−Ｄ−マンノシルキューオシン（ｍａｎｎｏｓｙｌ
ｑｕｅｏｓｉｎｅ）、５’−メトキシカルボキシメチルウラシル、５−メトキシ
ウラシル、２−メチルチオ−Ｎ６−イソペンテニルアデニン、ウラシル−５−オ
キシ酢酸（ｖ）、ワイブトキソシン（ｗｙｂｕｔｏｘｏｓｉｎｅ）、プソイドウ
ラシル、キューオシン（ｑｕｅｏｓｉｎｅ）、２−チオシトシン、５−メチル−
２−チオウラシル、２−チオウラシル、４−チオウラシル、５−メチルウラシル
、ウラシル−５−オキシ酢酸メチルエステル、ウラシル−５−オキシ酢酸（ｖ）
、５−メチル−２−チオウラシル、３−（３−アミノ−３−Ｎ−２−カルボキシ
プロピル）ウラシル、（ａｃｐ３）ｗおよび２，６−ジアミノプリンが挙げられ
る。あるいは、アンチセンス核酸は、核酸がアンチセンス方向にサブクローニン
グされた発現ベクターを使用して生物学的に産生され得る（すなわち、挿入され
た核酸から転写されたＲＮＡは、目的の標的核酸にアンチセンス方向である。こ
れについては、以下の小節でさらに記載される）。
【００６４】 本発明のアンチセンス核酸分子は、代表的には、被験体に投与されるか、また
はインサイチュで作製され、その結果、この核酸分子は、ＡＢＣ２輸送体タンパ
ク質をコードする細胞性ｍＲＮＡおよび／またはゲノムＤＮＡとハイブリダイズ
するか、あるいはこの細胞性ｍＲＮＡおよび／またはゲノムＤＮＡに結合し、そ
れによって、タンパク質の発現を阻害する（例えば、転写および／または翻訳を
阻害することによって）。ハイブリダイゼーションは、安定な二重鎖を形成する
従来のヌクレオチド相補性によって、また例えば、ＤＮＡ二重鎖に結合するアン
チセンス核酸分子の場合は、二重ヘリックスの主要な溝における特異的相互作用
を介して生じ得る。本発明のアンチセンス核酸分子の投与経路の例としては、組
織部位への直接注入が挙げられる。あるいは、アンチセンス核酸分子は、選択さ
れた細胞を標的化するように改変され得、次いで、全身性に投与され得る。例え
ば、全身性投与については、アンチセンス分子が改変され得、その結果、これら
の分子は、例えば、細胞表面レセプターまたは抗原に結合するペプチドまたは抗
体にアンチセンス核酸分子を連結することによって、選択された細胞表面上で発
現したレセプターまたは抗原に特異的に結合する。このアンチセンス核酸分子は
また、本明細書中に記載されるベクターを使用して細胞に送達され得る。アンチ
センス分子の十分な細胞内濃度を達成するために、アンチセンス核酸分子が強力
なｐｏｌＩＩまたはｐｏｌＩＩＩプロモーターの制御下に配置されるベクター構
築物が好ましい。
【００６５】 なお別の実施形態において、本発明のアンチセンス核酸分子は、α−アノマー
核酸分子である。α−アノマー核酸分子は、相補的ＲＮＡと特異的な二本鎖ハイ
ブリッドを形成し、これは、通常のβ単位と反対に、鎖が互いに平行に走る（Ｇ
ａｕｌｔｉｅｒら、（１９８７）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ．Ｒｅｓ．１５：
６６２５−６６４１）。アンチセンス核酸分子はまた、２’−ｏ−メチルリボヌ
クレオチドを含み得るか、（Ｉｎｏｕｅら、（１９８７）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃ
ｉｄｓ Ｒｅｓ．１５：６１３１−６１４８）またはキメラＲＮＡ−ＤＮＡアナ
ログ（Ｉｎｏｕｅら、（１９８７）ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．２１５：３２７−３３
０）を含み得る。
【００６６】 なお別の実施形態において、本発明のアンチセンス核酸は、リボザイムである
。リボザイムは、リボヌクレアーゼ活性を有する触媒ＲＮＡ分子であり、この活
性は、相補的領域を有する一本鎖核酸（例えば、ｍＲＮＡ）を切断し得る。従っ
て、リボザイム（例えば、ハンマーヘッドリボザイム（Ｈａｓｅｌｈｏｆｆおよ
びＧｅｒｌａｃｈ（１９８８）Ｎａｔｕｒｅ ３３４：５８５−５９１に記載さ
れる））を使用して、ＡＢＣ２輸送体ｍＲＮＡ転写物を触媒的に切断し、それに
よって、ＡＢＣ２輸送体ｍＲＮＡの翻訳を阻害し得る。ＡＢＣ２コード核酸につ
いての特異性を有するリボザイムは、本明細書中で開示されるＡＢＣ２輸送体ｃ
ＤＮＡのヌクレオチド配列（すなわち、配列番号１）に基づいて設計され得る。
例えば、Ｔｅｔｒａｈｙｍｅｎａ Ｌ−１９ ＩＶＳ ＲＮＡの誘導体が構築さ
れ得、この誘導体は、活性部位のヌクレオチド配列が、ＡＢＣ２コードｍＲＮＡ
において切断されるべきヌクレオチド配列に相補的である。例えば、Ｃｅｃｈら
、米国特許第４，９８７，０７１号；およびＣｅｃｈら、米国特許第５，１１６
，７４２号を参照のこと。あるいは、ＡＢＣ２輸送体ｍＲＮＡを使用して、特異
的リボヌクレアーゼ活性を有する触媒ＲＮＡを、ＲＮＡ分子のプールから選択し
得る。例えば、Ｂａｒｔｅｌ，Ｄ．およびＳｚｏｓｔａｋ，Ｊ．Ｗ．（１９９３
） Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６１：１４１１−１４１８を参照のこと。
【００６７】 あるいは、ＡＢＣ２輸送体遺伝子発現は、ＡＢＣ２輸送体の調節領域（例えば
、ＡＢＣ２輸送体プロモーターおよび／またはエンハンサー）に相補的なヌクレ
オチド配列の標的化によって阻害され、標的細胞におけるＡＢＣ２輸送体遺伝子
の転写を阻害する三重ヘリックス構造を形成し得る。一般的には、Ｈｅｌｅｎｅ
，Ｃ．（１９９１）Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｄｒｕｇ Ｄｅｓ．６（６）：５６
９−８４；Ｈｅｌｅｎｅ，Ｃ．ら、（１９９２）Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓ
ｃｉ．６６０：２７−３６；およびＭａｈｅｒ，Ｌ．Ｊ．（１９９２）Ｂｉｏａ
ｓｓａｙｓ １４（１２）：８０７−１５を参照のこと。
【００６８】 なお別の実施形態において、本発明のＡＢＣ２輸送体核酸分子は、塩基部分、
糖部分またはリン酸骨格で、例えば分子の安定性、ハイブリダイゼーションまた
は溶解度を向上するように改変され得る。例えば、核酸分子のデオキシリボース
リン酸骨格は、ペプチド核酸を産生するように改変され得る（Ｈｙｒｕｐ Ｂ．
ら、（１９９６）Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ＆Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔ
ｒｙ ４（１）：５−２３を参照のこと）。本明細書中で使用される場合、用語
「ペプチド核酸」または「ＰＮＡ」は、核酸模倣物（例えば、ＤＮＡ模倣物）を
いい、この模倣物は、デオキシリボースリン酸骨格が、偽ペプチド（ｐｓｅｕｄ
ｏｐｅｐｔｉｄｅ）骨格によって置換され、そして４つの天然の核塩基（ｎｕｃ
ｌｅｏｂａｓｅ）のみが保持される。ＰＮＡの中性の骨格は、低イオン強度の条
件下で、ＤＮＡおよびＲＮＡへの特異的なハイブリダイゼーションを考慮するこ
とが示されている。ＰＮＡオリゴマーの合成は、Ｈｙｒｕｐ Ｂ．ら、（１９９
６）前出；Ｐｅｒｒｙ−Ｏ’Ｋｅｅｆｅら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓ
ｃｉ．９３：１４６７０−６７５に記載されるような標準的な固相ペプチド合成
プロトコルを使用して行われ得る。
【００６９】 ＡＢＣ２輸送体核酸分子のＰＮＡは、治療的適用および診断適用に使用され得
る。例えば、ＰＮＡは、例えば転写停止または翻訳停止の誘導、あるいは複製の
阻害による遺伝子発現の配列特異的調節のためのアンチセンスまたは抗遺伝子（
ａｎｔｉｇｅｎｅ）因子として使用され得る。ＡＢＣ２輸送体核酸分子のＰＮＡ
はまた、遺伝子における１塩基対変異の分析において（例えば、ＰＮＡ指向性Ｐ
ＣＲクランピングによって）；他の酵素（例えば、Ｓ１ヌクレアーゼ（Ｈｙｒｕ
ｐ Ｂ．（１９９６）前出））と組み合わせて使用される場合の「人工制限酵素
」として；またはＤＮＡ配列決定もしくはハイブリダイゼーションのためのプロ
ーブもしくはプライマーとして（Ｈｙｒｕｐ Ｂ．ら、（１９９６）前出；Ｐｅ
ｒｒｙ−Ｏ’Ｋｅｅｆｅ前出）使用され得る。
【００７０】 別の実施形態において、ＡＢＣ２輸送体核酸分子のＰＮＡは、脂肪親和性基も
しくは他のヘルパー基のＰＮＡへの接着、ＰＮＡ−ＤＮＡキメラの形成、または
リポソームもしくは当該分野で公知の薬物送達の他の技術の使用によって改変さ
れ得る（例えば、これらの安定性または細胞取り込みを増大するために）。例え
ば、ＰＮＡおよびＤＮＡの有利な性質を組み合わせ得るＡＢＣ２輸送体核酸分子
のＰＮＡ−ＤＮＡキメラが作製され得る。このようなキメラは、ＤＮＡ認識酵素
（例えば、ＲＮＡｓｅ ＨおよびＤＮＡポリメラーゼ）が、ＤＮＡ部分と相互作
用することを可能にしながら、ＰＮＡ部分は、高い結合親和性および特異性を提
供する。ＰＮＡ−ＤＮＡキメラは、塩基スタッキング、核塩基間の結合数および
配向に関して選択された適切な長さのリンカーを使用して連結され得る（Ｈｙｒ
ｕｐ Ｂ．（１９９６）前出）。ＰＮＡ−ＤＮＡキメラの合成は、Ｈｙｒｕｐ
Ｂ．（１９９６）前出およびＦｉｎｎ Ｐ．Ｊ．ら、（１９９６）Ｎｕｃｌｅｉ
ｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２４（１７）：３３５７−６３において記載されるよ
うに行われ得る。例えば、ＤＮＡ鎖は、標準的なホスホロアミダイト結合化学を
使用した固体支持体上で合成され得、そして改変されたヌクレオシドアナログ（
例えば、５’−（４−メトキシトリチル）アミノ−５’−デオキシ−チミジンホ
スホロアミダイト）は、ＰＮＡとＤＮＡの５’末端との間として使用され得る（
Ｍａｇ，Ｍ．ら、（１９８９）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｒｅｓ．１７：５９
７３−８８）。次いで、ＰＮＡモノマーが段階様式で結合され、５’ＰＮＡセグ
メントおよび３’ＤＮＡセグメントとのキメラ分子を産生する（Ｆｉｎｎ Ｐ．
Ｊ．ら、（１９９６）前出）。あるいは、キメラ分子は、５’ＤＮＡセグメント
および３’ＰＮＡセグメントとともに合成され得る（Ｐｅｔｅｒｓｅｒ，Ｋ．Ｈ
．ら、（１９７５）Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．５：
１１１９−１１１２４）。
【００７１】 他の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、ペプチドのような他の付属（
ａｐｐｅｎｄｅｄ）基（例えば、インビボでの宿主細胞レセプターの標的化のた
めに）、または細胞膜（例えば、Ｌｅｔｓｉｎｇｅｒら、（１９８９）Ｐｒｏｃ
．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：６５５３−６５５６；Ｌｅｍａ
ｉｔｒｅら、（１９８７）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８
４：６４８−６５２；ＰＣＴ公開ＷＯ８８／０９８１０を参照のこと）もしくは
血液脳関門（例えば、ＰＣＴ公開ＷＯ８９／１０１３４を参照のこと）を横切る
輸送を促進する因子を含み得る。さらに、オリゴヌクレオチドは、ハイブリダイ
ゼーション誘発性切断因子（例えば、Ｋｒｏｌら、（１９８８）Ｂｉｏ−Ｔｅｃ
ｈｎｉｑｕｅｓ ６：９５８−９７６を参照のこと）または挿入剤（例えば、Ｚ
ｏｎ（１９８８）Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．５：５３９−５４９を参照のこと）を用
いて改変され得る。このために、このオリゴヌクレオチドは、別の分子（例えば
、ペプチド、ハイブリダイゼーション誘発性架橋剤、輸送因子またハイブリダイ
ゼーション誘発性切断因子）に結合体化され得る。
【００７２】 （ＩＩ．単離されたＡＢＣ２輸送体タンパク質および抗ＡＢＣ２輸送体抗体） 本発明の１つの局面は、単離されたＡＢＣ２輸送体タンパク質およびその生物
学的に活性な部分、ならびに抗ＡＢＣ２輸送体抗体を惹起するための免疫原とし
ての使用に適切なポリペプチドフラグメントに関係する。１つの実施形態におい
て、ネイティブのＡＢＣ２輸送体タンパク質は、標準的なタンパク質精製技術を
使用した適切な精製スキームによって、細胞または組織供給源から単離され得る
。別の実施形態において、ＡＢＣ２輸送体タンパク質は、組換えＤＮＡ技術によ
って産生される。組換え発現の代わりに、ＡＢＣ２輸送体タンパク質またはポリ
ペプチドは、標準的なペプチド合成技術を使用して化学合成され得る。
【００７３】 「単離された」または「精製された」タンパク質あるいはその生物学的に活性
な部分は、ＡＢＣ２輸送体タンパク質が由来する、細胞または組織供給源由来の
細胞性物質または他の汚染タンパク質を実質的に含まないか、あるいは化学合成
された場合に、化学的前駆体または他の化学薬品を実質的に含まない。用語「細
胞性物質を実質的に含まない」は、タンパク質が細胞（単離されたか、または組
換え的に産生された細胞）の細胞成分から分離されたＡＢＣ２輸送体タンパク質
の調製を含む。１つの実施形態において、用語「細胞性物質を実質的に含まない
」は、約３０％未満（乾燥重量で）の非ＡＢＣ２輸送体タンパク質（また、本明
細書中で「汚染タンパク質」といわれる）、より好ましくは、約２０％未満の非
ＡＢＣ２輸送体タンパク質、なおより好ましくは、約１０％未満の非ＡＢＣ２輸
送体タンパク質、そして最も好ましくは、約５％未満の非ＡＢＣ２輸送体タンパ
ク質を有するＡＢＣ２輸送体タンパク質の調製を含む。ＡＢＣ２輸送体タンパク
質またはその生物学的に活性な部分が、組換え的に産生される場合、培養培地を
実質的に含まないこともまた好ましい（すなわち、培養培地は、約２０％未満、
より好ましくは、約１０％未満、そして最も好ましくは、約５％未満のタンパク
質調製物容量を示す）。
【００７４】 用語「化学的前駆体または他の化学薬品を実質的に含まない」は、タンパク質
がタンパク質の合成に関与する化学的前駆体または他の化学薬品から分離された
ＡＢＣ２輸送体タンパク質の調製を含む。１つの実施形態において、用語「化学
的前駆体または他の化学薬品を実質的に含まない」は、約３０％未満（乾燥重量
で）の化学的前駆体もしくは非ＡＢＣ２輸送体化学薬品、より好ましくは、約２
０％未満の化学的前駆体もしくは非ＡＢＣ２輸送体化学薬品、なおより好ましく
は、約１０％未満の化学的前駆体もしくは非ＡＢＣ２輸送体化学薬品、そして最
も好ましくは、約５％未満の化学的前駆体もしくは非ＡＢＣ２輸送体化学薬品を
有するＡＢＣ２輸送体タンパク質の調製を含む。
【００７５】 本明細書中で使用される場合、ＡＢＣ２輸送体タンパク質の「生物学的に活性
な部分」は、ＡＢＣ２輸送体分子と非ＡＢＣ２輸送体分子との間の相互作用に関
与するＡＢＣ２輸送体タンパク質のフラグメントを含む。ＡＢＣ２輸送体タンパ
ク質の生物学的に活性な部分は、ＡＢＣ２輸送体タンパク質のアミノ酸配列（例
えば、配列番号２に示されるアミノ酸配列）に十分に相同か、またはこの配列に
由来するアミノ酸配列を含むペプチドを含み、この配列は、全長のＡＢＣ２輸送
体タンパク質よりも少ないアミノ酸を含み、そしてＡＢＣ２輸送体タンパク質の
少なくとも１つの活性を示す。代表的には、生物学的に活性な部分は、ＡＢＣ２
輸送体タンパク質の少なくとも１つの活性を有するドメインまたはモチーフを含
む。ＡＢＣ２輸送体タンパク質の生物学的に活性な部分は、ポリペプチドであり
得、これは例えば、１０、２５、５０、１００、２００、３００、４００、５０
０、６００、７００、８００以上のアミノ酸長である。ＡＢＣ２輸送体タンパク
質の生物学的に活性な部分は、ＡＢＣ２輸送体媒介性活性を調節する因子の開発
のための標的として使用され得る。
【００７６】 １つの実施形態において、ＡＢＣ２輸送体タンパク質の生物学的に活性な部分
は、少なくとも１つの膜貫通ドメインを含む。本発明のＡＢＣ２輸送体タンパク
質の好ましい生物学的に活性な部分は、少なくとも１つの膜貫通ドメインを含み
得ることが理解されるべきである。ＡＢＣ２輸送体タンパク質の別の好ましい生
物学的に活性な部分は、少なくとも２つの膜貫通ドメインを含み得る。１つ以上
のこれらの膜貫通ドメインが結合し、膜にわたるドメインを形成し得る。さらに
、またはあるいは、ＡＢＣ２輸送体タンパク質の生物学的に活性な部分は、ＡＴ
Ｐ結合ドメインを規定する保存された残基の複数のクラスターを含み得る。さら
に、またはあるいは、ＡＢＣ２輸送体タンパク質の生物学的に活性な部分は、Ｗ
ａｌｋｅｒドメイン（例えば、Ｗａｌｋｅｒ Ａドメインおよび／またはＷａｌ
ｋｅｒ Ｂドメイン）を含み得る（図２；Ｐａｔｅｌら、（１９９８）Ｔｒｅｎ
ｄｓ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ ８：６５−７１を参照のこと）。これらのドメイン
の同定は、本明細書中に記載されるような、任意の数の当該分野で認識された分
子モデリング技術を使用して容易にされ得る（実施例２もまた参照のこと）。さ
らに、他の生物学的に活性な部分（タンパク質の他の領域が欠失した部分）は、
組換え技術によって調製され得、そしてネイティブのＡＢＣ２輸送体タンパク質
の１つ以上の機能的活性について評価され得る。
【００７７】 好ましい実施形態において、ＡＢＣ２輸送体タンパク質は、配列番号２に示さ
れるアミノ酸配列を有する。他の実施形態において、ＡＢＣ２輸送体タンパク質
は配列番号２に実質的に相同であり、そして配列番号２のタンパク質の機能的活
性を保持するが、上記の小節Ｉに詳細に記載されるように、天然の対立遺伝子変
異または突然変異に起因してアミノ酸配列が異なる。従って、別の実施形態にお
いて、ＡＢＣ２輸送体タンパク質は、配列番号２に少なくとも約７５％、８０％
、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％
、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％
またはより相同であるアミノ酸配列を含むタンパク質である。
【００７８】 ２つのアミノ酸配列または２つの核酸配列のパーセント同一性を決定するため
に、配列を最適の比較目的のために整列する（例えば、ギャップが、最適の整列
のために、第一および第二のアミノ酸配列または第一および第二の核酸配列のう
ちの１つまたは両方に導入され得、そして非相同配列が、比較目的のために無視
され得る）。好ましい実施形態において、比較目的のために整列された参照配列
の長さは、参照配列の長さの少なくとも７０％、好ましくは、８０％、９０％ま
たは１００％である（例えば、２００１のアミノ酸残基を有する配列番号２のＡ
ＢＣ２輸送体ミノ酸配列に対して第二の配列を整列した場合、少なくとも６００
のアミノ酸残基、好ましくは少なくとも８００のアミノ酸残基、より好ましくは
少なくとも１０００のアミノ酸残基、なおより好ましくは少なくとも１２００の
アミノ酸残基、そしてなおより好ましくは少なくとも１４００、１６００、１８
００または２００１のアミノ酸残基が整列される）。次いで、対応するアミノ酸
位置またはヌクレオチド位置のアミノ酸残基またはヌクレオチドが比較される。
第一の配列における位置が、第二の配列における対応する位置と同じアミノ酸残
基またはヌクレオチドによって占有される場合、その時分子は、その位置で同一
である（本明細書中で使用される場合、アミノ酸または核酸の「同一性」は、ア
ミノ酸または核酸の「相同性」に等しい）。２つの配列間のパーセント同一性は
、配列によって共有される同一な位置の数の関数であり、ギャップの数および各
々のギャップの長さを斟酌し、このギャップは、２つの配列の最適の整列のため
に導入される必要がある。
【００７９】 配列の比較および２つの配列間のパーセント同一性の決定は、数学的アルゴリ
ズムを用いて達成され得る。好ましい実施形態において、２つのアミノ酸配列間
のパーセント同一性は、標準的なパラメーター設定を用いて、標準的な当該分野
で認識された比較ソフトウェアを使用して決定される。例えば、ＧＣＧソフトウ
ェアパッケージ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｃｇ．ｃｏｍで入手可能）のＧＡＰ
プログラムに組み込まれたＮｅｅｄｌｅｍａｎおよびＷｕｎｓｃｈ（Ｊ．Ｍｏｌ
．Ｂｉｏｌ．（４８）：４４４−４５３（１９７０））アルゴリズムは、Ｂｌｏ
ｓｓｕｍ６２マトリックスまたはＰＡＭ２５０マトリックスのいずれか、ならび
に１６、１４、１２、１０、８、６、または４のギャップウェイトおよび１、２
、３、４、５、または６の長さウェイトを用いて使用され得る。なお別の好まし
い実施形態において、２つのヌクレオチド配列間のパーセント同一性は、ＧＣＧ
ソフトウェアパッケージ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｃｇ．ｃｏｍで入手可能）
のＧＡＰプログラムを用いて、ＮＷＳｇａｐｄｎａ．ＣＭＰマトリックス、なら
びに４０、５０、６０、７０、または８０のギャップウェイトおよび１、２、３
、４、５、または６の長さウェイトを用いて決定される。別の実施形態において
、２つのアミノ酸配列または２つのヌクレオチド配列の間のパーセント同一性は
、ＰＡＭ１２０ウェイト残基表、１２のギャップ長ペナルティーおよび４のギャ
ップペナルティーを用いて、ＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に組み
込まれたＥ．ＭｅｙｅｒｓおよびＷ．Ｍｉｌｌｅｒ（ＣＡＢＩＯＳ ４：１１−
１７（１９８８））のアルゴリズムを用いて決定される。
【００８０】 本発明の核酸配列およびタンパク質配列は、例えば、他のファミリーのメンバ
ーまたは関連配列を同定するために、公的なデータベースに対して検索を行うた
めの「問い合わせ配列」としてさらに使用され得る。このような検索は、Ａｌｔ
ｓｃｈｕｌら（１９９０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３−１０のＮＢ
ＬＡＳＴおよびＸＢＬＡＳＴプログラム（バージョン２．０）を用いて行われ得
る。ＢＬＡＳＴヌクレオチド検索は、ＮＢＬＡＳＴプログラム、スコア＝１００
、ワード長＝１２で行われて、本発明のＡＢＣ２輸送体核酸分子に相同なヌクレ
オチドが獲得され得る。ＢＬＡＳＴタンパク質検索は、ＸＢＬＡＳＴプログラム
、スコア＝５０、ワード長＝３を用いて行われて、本発明のＡＢＣ２輸送体タン
パク質分子に対して相同なアミノ酸配列が獲得され得る。比較目的でギャップを
入れた整列を得るために、Ｇａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴは、Ａｌｔｓｃｈｕｌら（
１９９７）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２５（１７）：３３８９−３
４０２に記載されるように利用され得る。ＢＬＡＳＴおよびＧａｐｐｅｄ ＢＬ
ＡＳＴプログラムを利用する場合、それぞれのプログラム（例えば、ＸＢＬＡＳ
ＴおよびＮＢＬＡＳＴ）のデフォルトパラメーターが使用され得る。ｈｔｔｐ：
／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖを参照のこと。
【００８１】 本発明はまた、ＡＢＣ２輸送体のキメラタンパク質または融合タンパク質を提
供する。本明細書中で使用される場合、ＡＢＣ２輸送体の「キメラタンパク質」
または「融合タンパク質」は、非ＡＢＣ２輸送体ポリペプチドに作動可能に連結
されたＡＢＣ２輸送体ポリペプチドを含む。「ＡＢＣ２輸送体ポリペプチド」と
は、ＡＢＣ２に対応するアミノ酸配列を有するポリペプチドをいうのに対し、「
非ＡＢＣ２輸送体ポリペプチド」とは、ＡＢＣ２輸送体タンパク質に対して実質
的に相同でないタンパク質（例えば、ＡＢＣ２輸送体タンパク質とは異なり、か
つ同じかまたは異なる生物に由来するタンパク質）に対応するアミノ酸配列を有
するポリペプチドをいう。ＡＢＣ２輸送体融合タンパク質において、ＡＢＣ２輸
送体ポリペプチドは、ＡＢＣ２輸送体タンパク質の全てまたは一部に対応し得る
。好ましい実施形態において、ＡＢＣ２輸送体融合タンパク質は、ＡＢＣ２輸送
体タンパク質の少なくとも１つの生物学的に活性な部分を含む。別の好ましい実
施形態において、ＡＢＣ２輸送体融合タンパク質は、少なくとも２つの生物学的
に活性なＡＢＣ２輸送体タンパク質の部分を含む。この融合タンパク質において
、用語「作動可能に連結された」は、ＡＢＣ２輸送体ポリペプチドおよび非ＡＢ
Ｃ２輸送体ポリペプチドが互いにインフレームで融合されていることを示すこと
が意図される。非ＡＢＣ２輸送体ポリペプチドは、ＡＢＣ２輸送体ポリペプチド
のＮ末端またはＣ末端に融合され得る。
【００８２】 例えば、１つの実施形態において、この融合タンパク質は、ＧＳＴ−ＡＢＣ２
輸送体融合タンパク質である。ここで、ＡＢＣ２輸送体配列は、ＧＳＴ配列のＣ
末端に融合される。このような融合タンパク質は、組換えＡＢＣ２の精製を容易
にし得る。
【００８３】 別の実施形態において、この融合タンパク質は、そのＮ末端に異種シグナル配
列を含むＡＢＣ２輸送体タンパク質である。特定の宿主細胞（例えば、哺乳動物
宿主細胞）において、ＡＢＣ２輸送体の発現および／または分泌は、異種シグナ
ル配列の使用により増加され得る。
【００８４】 本発明のＡＢＣ２輸送体融合タンパク質は、薬学的組成物に組み込まれ得、そ
してインビボで被験体に投与され得る。ＡＢＣ２輸送体融合タンパク質は、ＡＢ
Ｃ２輸送体基質のバイオアベイラビリティーに影響を及ぼすために使用され得る
。ＡＢＣ２輸送体融合タンパク質の使用は、例えば、以下により引き起こされる
障害の処置に治療的に有用であり得る：（ｉ）ＡＢＣ２輸送体タンパク質をコー
ドする遺伝子の異常型の改変または変異；（ｉｉ）ＡＢＣ２輸送体遺伝子の誤調
節；および（ｉｉｉ）ＡＢＣ２輸送体タンパク質の異常型翻訳後修飾。
【００８５】 さらに、本発明のＡＢＣ２融合タンパク質は、被験体における抗ＡＢＣ２輸送
体抗体を生成するための免疫原として、ＡＢＣ２輸送体リガンドを精製するため
に、およびＡＢＣ２輸送体とＡＢＣ２輸送体基質との相互作用を阻害する分子を
同定するためのアッセイにおいて使用され得る。
【００８６】 好ましくは、本発明のＡＢＣ２輸送体キメラタンパク質または融合タンパク質
は、標準的な組換えＤＮＡ技術により生成される。例えば、異なるポリペプチド
配列をコードするＤＮＡフラグメントは、例えば、連結のための平滑末端もしく
は付着末端、適切な末端を提供するための制限酵素消化、適切な場合には付着末
端のフィルイン（ｆｉｌｌ−ｉｎ）、所望でない連結を回避するためのアルカリ
ホスファターゼ処理、および酵素的連結を用いることにより、従来の技術に従っ
てインフレームでともに連結される。別の実施形態において、この融合遺伝子は
、従来の技術（自動化ＤＮＡ合成機を含む）により合成され得る。あるいは、遺
伝子フラグメントのＰＣＲ増幅は、２つの連続する遺伝子フラグメント間の相補
的オーバーハングを生じるアンカープライマーを用いて行われ得る。引き続いて
、これらの遺伝子フラグメントは、アニールされ、そして再増幅されて、キメラ
遺伝子配列を生成し得る（例えば、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ
Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ａｕｓｕｂｅｌら編、Ｊｏｈｎ Ｗｉ
ｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ：１９９２を参照のこと）。さらに、既に融合部分（例えば、
ＧＳＴポリペプチド）をコードしている多くの発現ベクターが市販される。ＡＢ
Ｃ２輸送体コード核酸は、この融合部分がＡＢＣ２輸送体タンパク質にインフレ
ームで連結されるように、このような発現ベクターへクローニングされ得る。
【００８７】 本発明はまた、ＡＢＣ２輸送体アゴニストまたはＡＢＣ２輸送体アンタゴニス
トのいずれかとして機能するＡＢＣ２輸送体タンパク質の改変体に関する。ＡＢ
Ｃ２輸送体タンパク質の改変体は、変異誘発により生成され得る（例えば、ＡＢ
Ｃ２輸送体タンパク質の不連続点変異または短縮化）。ＡＢＣ２輸送体タンパク
質のアゴニストは、天然に存在する形態のＡＢＣ２輸送体タンパク質の実質的に
同じ生物学的活性またはサブセットを保持し得る。ＡＢＣ２輸送体タンパク質の
アンタゴニストは、例えば、ＡＢＣ２輸送体タンパク質の活性を競合的に調節す
ることにより、天然に存在する形態のＡＢＣ２輸送体タンパク質の１以上の活性
を阻害し得る。従って、特定の生物学的効果は、制限された機能の改変体で処置
することにより誘発され得る。１つの実施形態において、天然に存在する形態の
タンパク質の生物学的活性のサブセットを有する改変体で被験体を処置すること
は、天然に存在する形態のＡＢＣ２輸送体タンパク質で処置することと比較して
、被験体においてより少ない副作用を有する。
【００８８】 １つの実施形態において、ＡＢＣ２輸送体アゴニスト（模倣物）またはＡＢＣ
２輸送体アンタゴニストのいずれかとして機能するＡＢＣ２輸送体タンパク質の
改変体は、ＡＢＣ２輸送体タンパク質の変異体（例えば、短縮変異体）のコンビ
ナトリアルライブラリーを、ＡＢＣ２輸送体タンパク質のアゴニストまたはアン
タゴニストの活性についてスクリーニングすることにより同定され得る。１つの
実施形態において、ＡＢＣ２輸送体改変体の変化を与えた（ｖａｒｉｅｇａｔｅ
ｄ）ライブラリーは、核酸レベルにおけるコンビナトリアル変異誘発により生成
され、そして変化を与えた遺伝子ライブラリーによりコードされる。ＡＢＣ２輸
送体改変体の変異を与えたライブラリーを、例えば、潜在的なＡＢＣ２輸送体配
列の変性セットが個々のポリペプチドとして発現され得るように、合成オリゴヌ
クレオチドの混合物を遺伝子配列に酵素的に連結することにより、あるいは、そ
こにＡＢＣ２輸送体配列のセットを含む、より大きな融合タンパク質のセット（
例えば、ファージディスプレイ）として生成し得る。変性オリゴヌクレオチド配
列に由来する潜在的なＡＢＣ２輸送体改変体のライブラリーを生成するために使
用され得る種々の方法が存在する。変性遺伝子配列の化学的合成は、自動化ＤＮ
Ａ合成機において行われ得、次いで、合成遺伝子が、適切な発現ベクターに連結
され得る。遺伝子の変性セットの使用により、１つの混合物で、潜在的なＡＢＣ
２輸送体配列の所望のセットをコードする配列の全ての準備が可能になる。変性
オリゴヌクレオチドを合成するための方法は、当該分野で公知である（例えば、
Ｎａｒａｎｇ，Ｓ．Ａ．（１９８３）Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ ３９：３；Ｉｔ
ａｋｕｒａら（１９８４）Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．５３：３２３；
Ｉｔａｋｕｒａら（１９８４）Ｓｃｉｅｎｃｅ １９８：１０５６；Ｉｋｅら（
１９８３）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１１：４７７を参照のこと）
。
【００８９】 さらに、ＡＢＣ２輸送体タンパク質コード配列のフラグメントのライブラリー
を使用して、ＡＢＣ２輸送体タンパク質の改変体のスクリーニングおよび引き続
く選択のために、ＡＢＣ２輸送体フラグメントの変化を与えた集団を生成し得る
。１つの実施形態において、コード配列フラグメントのライブラリーは、ＡＢＣ
２輸送体コード配列の二重鎖ＰＣＲフラグメントを、ニックが一分子あたり約１
回のみ生じる条件下でヌクレアーゼで処理し、二重鎖ＤＮＡを変性させ、ＤＮＡ
を再生して、異なるニックが入った産物からセンス／アンチセンス対を含み得る
二重鎖ＤＮＡを形成し、Ｓ１ヌクレアーゼで処置することにより、再形成した二
重鎖から単鎖部分を除去し、そして得られたフラグメントライブラリーを発現ベ
クターに連結することにより生成され得る。この方法により、ＡＢＣ２輸送体タ
ンパク質の種々のサイズのＮ末端フラグメント、Ｃ末端フラグメントおよび中間
フラグメントをコードする発現ライブラリーが得られ得る。
【００９０】 点変異または短縮により作製されたコンビナトリアルライブラリーの遺伝子産
物をスクリーニングするため、および選択された特性を有する遺伝子産物のｃＤ
ＮＡライブラリーをスクリーニングするためのいくつかの技術は、当該分野で公
知である。このような技術は、ＡＢＣ２輸送体タンパク質のコンビナトリアル変
異誘発により生成された遺伝子ライブラリーの迅速なスクリーニングに適合する
。高スループット分析に敏感に反応し、大きな遺伝子ライブラリーをスクリーニ
ングするために最も広範に使用される技術は、代表的には、複製可能な発現ベク
ターにこの遺伝子ライブラリーをクローニングする工程、得られたベクターのラ
イブラリーで適切な細胞を形質転換する工程、およびこのコンビナトリアル遺伝
子を、所望の活性の検出が、遺伝子産物が検出された遺伝子をコードするベクタ
ーの単離を容易にする条件下で発現させる工程を包含する。ライブラリーにおけ
る機能的変異体の頻度を増大させる新たな技術である循環的集団変異誘発（ｒｅ
ｃｕｒｓｉｖｅ ｅｎｓｅｍｂｌｅ ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ）（ＲＥＭ）は、
ＡＢＣ２輸送体改変体を同定するためのスクリーニングアッセイとともに使用さ
れ得る（ＡｒｋｉｎｓおよびＹｏｕｒｖａｎ（１９９２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．
Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：７８１１−７８１５；Ｄｅｌｇｒａｖｅら（
１９９３）Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ６（３）：３２７−３３
１）。
【００９１】 単離されたＡＢＣ２輸送体タンパク質またはそれらの一部もしくはフラグメン
トは、ポリクローナル抗体およびモノクローナル抗体の調製のための標準的な技
術を用いて、ＡＢＣ２輸送体を結合する抗体を生成するための免疫原として使用
され得る。全長ＡＢＣ２輸送体タンパク質が用いられ得、あるいは、本発明は、
免疫原として使用するためのＡＢＣ２輸送体の抗原性ペプチドフラグメントを提
供する。この抗原性ペプチドにより含まれる好ましいエピトープは、このタンパ
ク質の表面に位置するＡＢＣ２輸送体の領域（例えば、親水性領域および高抗原
性を有する領域）である。
【００９２】 ＡＢＣ２輸送体免疫原は、代表的には、適切な被験体（例えば、ウサギ、ヤギ
、マウスまたは他の哺乳動物）を免疫原で免疫することにより、抗体を調製する
ために使用される。適切な免疫原性調製物は、例えば、組換え発現されたＡＢＣ
２輸送体タンパク質または化学的に合成されたＡＢＣ２輸送体ポリペプチドを含
み得る。この調製物は、アジュバント（例えば、フロイントの完全アジュバント
または不完全アジュバント）または類似の免疫刺激性薬剤をさらに含み得る。適
切な被験体を免疫原性ＡＢＣ２輸送体調製物で免疫することにより、ポリクロー
ナル抗ＡＢＣ２輸送体抗体応答が誘導される。
【００９３】 従って、本発明の別の局面は、抗ＡＢＣ２輸送体抗体に関する。本明細書中で
使用される場合、用語「抗体」とは、免疫グロブリン分子および免疫グロブリン
分子の免疫学的に活性な部分（すなわち、ＡＢＣ２輸送体のような抗原を特異的
に結合する（抗原と免疫反応する）抗原結合部位を含む分子）をいう。免疫グロ
ブリン分子の免疫学的に活性な部分の例としては、ペプシンのような酵素で抗体
を処理することにより生成され得るＦ（ａｂ）およびＦ（ａｂ’）２のフラグメ
ントが挙げられる。本発明は、ＡＢＣ２輸送体を結合するポリクローナル抗体お
よびモノクローナル抗体を提供する。本明細書中で使用される場合、用語「モノ
クローナル抗体」または「モノクローナル抗体組成物」は、ＡＢＣ２輸送体の特
定のエピトープと免疫反応し得る抗原結合部位の１種のみを含む抗体分子の集団
をいう。従って、モノクローナル抗体組成物は、代表的には、この抗体が免疫反
応する特定のＡＢＣ２輸送体タンパク質に対する単一の結合親和性を示す。
【００９４】 ポリクローナル抗ＡＢＣ２輸送体抗体は適切な被験体をＡＢＣ２輸送体免疫原
によって免疫化することによって、上記に記載したように、調製され得る。免疫
化された被験体の抗ＡＢＣ２輸送体抗体力価は、固定化されたＡＢＣ２輸送体を
使用する固相酵素免疫検定法（ＥＬＩＳＡ）などの標準的技術によって、経時的
にモニターされ得る。所望される場合、ＡＢＣ２輸送体に対する抗体分子は、哺
乳動物から（例えば、血液から）単離され得、そしてさらに、ＩｇＧ画分を得る
ためのプロテインＡクロマトグラフィーなどの周知の技術で精製され得る。免疫
化後の適切な時間において、例えば、抗ＡＢＣ２輸送体抗体力価の最も高い場合
において、抗体産生細胞が、被験体から得られ得、そして標準的な技術（例えば
、ＫｏｈｌｅｒおよびＭｉｌｓｔｅｉｎ（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４
９５−４９７に本来記載のハイブリドーマ技術（Ｂｒｏｗｎら（１９８１）Ｊ．
Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２７：５３９−４６；Ｂｒｏｗｎら（１９８０）Ｊ．Ｂｉｏ
ｌ．Ｃｈｅｍ．２５５：２９８０−８３；Ｙｅｈら（１９７６）Ｐｒｏｃ．Ｎａ
ｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７６：２９２７−３１；およびＹｅｈら（１
９８２）Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ ２９：２６９−７５もまた参照のこと）、
さらにより最近のヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術（Ｋｏｚｂｏｒら（１９８３）
Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｔｏｄａｙ ４：７２）、ＥＢＶハイブリドーマ技術（Ｃｏｌ
ｅら（１９８５）、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｃ
ａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ、Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．，ｐｐ．７７
−９６）またはトリオーマ（ｔｒｉｏｍａ）技術）によってモノクローナル抗体
を調製するため使用され得る。モノクローナル抗体ハイブリドーマを作製する技
術は、周知である（Ｒ．Ｈ．Ｋｅｎｎｅｔｈ，ｉｎ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａ
ｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｎｅｗ Ｄｉｍｅｎｓｉｏｎ Ｉｎ Ｂｉｏｌｏｇｉ
ｃａｌ Ａｎａｌｙｓｅｓ，Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｒｐ．
，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８０）；Ｅ．Ａ．Ｌｅｒｎｅｒ（
１９８１）Ｙａｌｅ Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｍｅｄ．５４：３８７−４０２；Ｍ．Ｌ．
Ｇｅｆｔｅｒら（１９７７）Ｓｏｍａｔｉｃ Ｃｅｌｌ Ｇｅｎｅｔ．３：２３
１−３６）を概して参照のこと）。簡単には、不死の細胞株（典型的には骨髄腫
）が、上記に記載されるようにＡＢＣ２輸送体免疫原によって免疫化された哺乳
動物由来のリンパ球（典型的には脾細胞）と融合され、そして生じたハイブリド
ーマ細胞の培養上澄みは、ＡＢＣ２輸送体と結合するモノクローナル抗体を産生
するハイブリドーマを同定するため、スクリーニングされる。
【００９５】 リンパ球と不死化された細胞株を融合するため使用される多くの周知のプロト
コールのいずれかは、抗ＡＢＣ２輸送体モノクローナル抗体を生成する目的で適
用され得る（例えば、Ｇ．Ｇａｌｆｒｅら（１９７７）Ｎａｔｕｒｅ ２６６：
５５０５２；ＧｅｆｔｅｒらＳｏｍａｔｉｃ Ｃｅｌｌ Ｇｅｎｅｔ．（上述）
；Ｌｅｒｎｅｒ，Ｙａｌｅ Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｍｅｄ．（上述）；Ｋｅｎｎｅｔｈ
，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（上述）を参照のこと）。さら
に、当業者は、また有用であるこのような方法の多くの改変があることを正しく
認識する。典型的に、不死の細胞株（例えば、骨髄腫細胞株）は、リンパ球と同
じ哺乳動物種に由来する。例えば、マウスハイブリドーマは、不死化されたマウ
ス細胞株と、本発明の免疫抗原調製物によって免疫化されたマウス由来のリンパ
球とを融合することによって作製され得る。好ましい不死の細胞株は、ヒポキサ
ンチン、アミノプテリンおよびチミジンを含む培養培地（「ＨＡＴ培地」）に感
受性のあるマウス骨髄腫細胞株である。多数の骨髄腫細胞株のいずれかが、標準
的な技術に従って融合パートナーとして使用され得る（例えば、Ｐ３−ＮＳ１／
１−Ａｇ４−１、Ｐ３−ｘ６３−Ａｇ８．６５３またはＳｐ２／Ｏ−Ａｇ１４骨
髄腫株）。これらの骨髄腫株は、ＡＴＣＣから入手可能である。典型的に、ＨＡ
Ｔ感受性マウス骨髄腫細胞は、ポリエチレングリコール（「ＰＥＧ」）を使用し
てマウス脾細胞に融合される。次いで、その融合から生じるハイブリドーマ細胞
は、非融合骨髄腫細胞および非生産性融合細胞を殺す（非融合脾細胞は形質転換
されないため数日後に死ぬ）ＨＡＴ培地を使用して選択される。本発明のモノク
ローナル抗体を産生するハイブリドーマ細胞は、例えば標準的なＥＬＩＳＡアッ
セイを使用してＡＢＣ２に結合する抗体についてハイブリドーマ培養上澄みをス
クリーニングすることによって検出される。
【００９６】 モノクローナル抗体分泌ハイブリドーマを調製する代わりに、モノクローナル
抗ＡＢＣ２輸送体抗体は、ＡＢＣ２輸送体によってＡＢＣ２に結合する免疫グロ
ブリンライブラリーメンバーを単離するため、ＡＢＣ２輸送体を用いて組換えコ
ンビナトリアル配列免疫グロブリンライブラリー（例えば、抗体ファージディス
プレイライブラリー）をスクリーニングすることによって同定および単離され得
る。ファージディスプレイライブラリーを生成およびスクリーニングするための
キットは、市販されている（例えば、Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｒｅｃｏｍｂｉｎａ
ｎｔ Ｐｈａｇｅ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｓｙｓｔｅｍ、カタログ番号２７−９４
００−０１；およびＳｔｒａｔａｇｅｎｅ ＳｕｒｆＺＡＰTM Ｐｈａｇｅ Ｄ
ｉｓｐｌａｙ Ｋｉｔ、カタログ番号２４０６１２）。さらに、特に抗体ディス
プレイライブラリーの生成およびスクリーニングに使用できる方法および試薬の
例は、例えば、Ｌａｄｎｅｒら米国特許第５，２２３，４０９号；Ｋａｎｇら、
ＰＣＴ国際公開番号ＷＯ９２／１８６１９；Ｄｏｗｅｒら、ＰＣＴ国際公開番号
ＷＯ９１／１７２７１；ＷｉｎｔｅｒらＰＣＴ国際公開番号ＷＯ９２／２０７９
１；ＭａｒｋｌａｎｄらＰＣＴ国際公開番号ＷＯ９２／１５６７９；Ｂｒｅｉｔ
ｌｉｎｇらＰＣＴ国際公開番号ＷＯ９３／０１２８８；ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら
ＰＣＴ国際公開番号ＷＯ／９２／０１０４７；ＧａｒｒａｒｄらＰＣＴ国際公開
番号ＷＯ９２／０９６９０；ＬａｄｎｅｒらＰＣＴ国際公開番号ＷＯ９０／０２
８０９；Ｆｕｃｈｓら（１９９１）Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ９：１３７
０−１３７２；Ｈａｙら（１９９２）Ｈｕｍ．Ａｎｔｉｂｏｄ．Ｈｙｂｒｉｄｏ
ｍａｓ ３：８１−８５；Ｈｕｓｅら（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４６：１
２７５−１２８１；Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓら（１９９３）ＥＭＢＯ Ｊ １２：７
２５−７３４；Ｈａｗｋｉｎｓら（１９９２）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２６：
８８９−８９６；Ｃｌａｒｋｓｏｎら（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ ３５２：６２
４−６２８；Ｇｒａｍら（１９９２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．
ＵＳＡ ８９：３５７６−３５８０：Ｇａｒｒａｄら（１９９１）Ｂｉｏ／Ｔｅ
ｃｈｎｏｌｏｇｙ ９：１３７３−１３７７；Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍら（１９９
１）Ｎｕｃ．Ａｃｉｄ Ｒｅｓ．１９：４１３３−４１３７；Ｂａｒｂａｓら（
１９９１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８８：７９７８−
７９８２；およびＭｃＣａｆｆｅｒｔｙらＮａｔｕｒｅ（１９９０）３４８：５
５２−５５４に見出され得る。
【００９７】 さらに、組換え抗ＡＢＣ２輸送体抗体（例えば、キメラモノクローナル抗体お
よびヒト化モノクローナル抗体（これは、ヒト部分および非ヒト部分の両方を含
む）標準的な組換えＤＮＡ技術を使用して作製され得る）は、本発明の範囲内で
ある。そのようなキメラモノクローナル抗体およびヒト化モノクローナル抗体は
、例えばＲｏｂｉｎｓｏｎら国際出願番号ＰＣＴ／ＵＳ８６／０２２６９；Ａｋ
ｉｒａら欧州特許出願１８４，１８７；Ｔａｎｉｇｕｃｈｉ，Ｍ，欧州特許出願
１７１，４９６；Ｍｏｒｒｉｓｏｎら欧州特許出願１７３，４９４；Ｎｅｕｂｅ
ｒｇｅｒらＰＣＴ国際公開番号ＷＯ８６／０１５３３；Ｃａｂｉｌｌｙら米国特
許第４，８１６，５６７号；Ｃａｂｉｌｌｙら欧州特許出願１２５，０２３；Ｂ
ｅｔｔｅｒら（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４０：１０４１−１０４３；Ｌｉ
ｕら（１９８７）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８４：３４
３９−３４４３；Ｌｉｕら（１９８７）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３９：３５２１
−３５２６；Ｓｕｎら（１９８７）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ
ＳＡ ８４：２１４−２１８；Ｎｉｓｈｉｍｕｒａら（１９８７）Ｃａｎｃ．Ｒ
ｅｓ．４７：９９９−１００５；Ｗｏｏｄら（１９８５）Ｎａｔｕｒｅ ３１４
：４４６−４４９；およびＳｈａｗら（１９８８）Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ
Ｉｎｓｔ．８０：１５５３−１５５９：Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｓ．Ｌ．（１９８
５）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２９：１２０２−１２０７；Ｏｉら（１９８６）Ｂｉｏ
Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ４：２１４；Ｗｉｎｔｅｒ米国特許第５，２２５，５３
９号；Ｊｏｎｅｓら（１９８６）Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５５２−５２５；Ｖｅ
ｒｈｏｅｙａｎら（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３９：１５３４；およびＢｅ
ｉｄｌｅｒら（１９８８）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４１：４０５３−４０６０に
記載の方法を使用して当該分野で公知の組換えＤＮＡ技術によって生成され得る
。
【００９８】 抗ＡＢＣ２輸送体抗体（例えば、モノクローナル抗体）は、標準的な技術（ア
フィニティークロマトグラフィーまたは免疫沈降法など）によってＡＢＣ２輸送
体を単離するため使用され得る。抗ＡＢＣ２輸送体抗体は、細胞からの天然ＡＢ
Ｃ２輸送体および宿主細胞で発現された組換え産生されたＡＢＣ２輸送体の精製
を容易にし得る。さらに、抗ＡＢＣ２輸送体抗体は、ＡＢＣ２輸送体タンパク質
の発現の発生量およびパターンを評価するため（例えば、細胞性溶解産物または
細胞上澄み中で）ＡＢＣ２輸送体タンパク質を検出するために使用され得る。抗
ＡＢＣ２輸送体抗体は、例えば、所定の処置養生法の効力を決定するための臨床
試験手順との一環として、組織内のタンパク質レベルをモニターするため、診断
的に使用され得る。検出は、検出可能な物質と抗体をカップリング（すなわち、
物理的な連結）することで容易になり得る。検出可能な物質の例は、種々の酵素
、補欠分子団、蛍光物質、生物発光物質および放射性物質を含む。適切な酵素の
例は、セイヨウワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、ガラクトシ
ダーゼ、またはアセチルコリンエステラーゼを含み；適切な補体分子団複合体の
例は、ストレプトアビジン／ビオチン、およびアビジン／ビオチンを含み；適切
な蛍光物質の例は、ウンベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチ
オシアネート、ローダミン、ジクロロトリアジニラミン（ｄｉｃｈｌｏｒｏｔｒ
ｉａｚｉｎｙｌａｍｉｎｅ）フルオレセイン、ダンシルクロリドまたはフィコエ
リトリンを含み；発光物質の例は、ルミノールを含み；生物発光物質の例は、ル
シフェラーゼ、ルシフェリンおよびエクオリンを含み、そして適切な放射性物質
の例は、125Ｉ、131Ｉ、35Ｓ、33Ｐ、32Ｐまたは3Ｈを含む。
【００９９】 （ＩＩＩ．組換え発現ベクターおよび宿主細胞） 本発明の別の局面は、ベクター、好ましくは発現ベクター（ＡＢＣ２輸送体タ
ンパク質（またはその部分）をコードする核酸を含む）に関する。本明細書中で
使用する用語「ベクター」とは、連結された別の核酸を運搬し得る核酸分子のこ
とである。ベクターの１つの型は、「プラスミド」であり、これは付加ＤＮＡセ
グメントが連結され得る環状２本鎖標準ＤＮＡループを指す。ベクターの別の型
は、付加ＤＮＡセグメントがウイルスゲノム中に連結反応され得るウイルスベク
ターである。あるベクターは、導入される宿主細胞中で自律複製し得る（例えば
、細菌の複製起点を有する細菌ベクターおよびエピソーム哺乳動物ベクター）。
他のベクター（例えば、非エピソーム哺乳動物ベクター）は、宿主細胞への導入
の際に宿主細胞のゲノムへ組み込まれ、それによって宿主ゲノムと共に複製され
る。さらに、あるベクターは、作動可能に連結された遺伝子の発現を方向付け得
る。そのようなベクターは、本明細書中では、「発現ベクター」と称する。概し
て、組換えＤＮＡ技術において有用な発現ベクターは、しばしばプラスミドの形
態である。本明細書において、プラスミドは、ベクターの最も一般的に使用され
る形態であるので、「プラスミド」および「ベクター」は、交換して使用され得
る。しかし、本発明は、同等の機能を有するそのような他の形態の発現ベクター
（ウイルスベクター（例えば、複製欠損レトロウイルス、アデノウイルスおよび
アデノ随伴ウイルス）など）を含むことが意図される。
【０１００】 本発明の組換え発現ベクターは、宿主細胞における核酸の発現に適切な形態で
本発明の核酸を含み、このことは、その組換え発現ベクターが、発現に使用され
る宿主細胞に基づいて選択される１つ以上の調節配列（これは、発現される核酸
配列に作動可能に連結される）を含むことを意味する。組換え発現ベクターにお
いて、「作動可能に連結された」とは、目的のヌクレオチド配列が、ヌクレオチ
ド配列の発現が可能な様式で調節配列に連結される（例えば、インビトロの転写
／翻訳系またはベクターが宿主細胞に導入される場合宿主細胞において）ことを
意味すると意図される。用語「調節配列」は、プロモーター、エンハンサーおよ
び他の発現制御エレメント（例えば、ポリアデニル化シグナル）を含むことが意
図される。そのような調節配列は、例えば、Ｇｏｅｄｄｅｌ；Ｇｅｎｅ Ｅｘｐ
ｒｅｓｓｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏ
ｌｏｇｙ １８５、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ
（１９９０）に記載されている。調節配列は、多くの宿主細胞型においてヌクレ
オチド配列の構成性発現を方向付ける調節配列、および特定の宿主細胞において
のみヌクレオチド配列の発現を方向付ける調節配列（例えば、組織特異的調節配
列）を含む。発現ベクターの設計が、形質転換される宿主細胞の選択、所望され
るタンパク質の発現レベルなどのような因子に依存し得ることは、当業者によっ
て正しく認識される。本発明の発現ベクターは、宿主細胞に導入され得、それに
よって、本明細書中に記載のような核酸によってコードされたタンパク質または
ペプチド（融合タンパク質または融合ペプチドを含む）（例えば、ＡＢＣ２輸送
体タンパク質、ＡＢＣ２輸送体タンパク質の変異形態、融合タンパク質など）を
生成し得る。
【０１０１】 本発明の組換え発現ベクターは、原核生物細胞または真核生物細胞におけるＡ
ＢＣ２輸送体タンパク質の発現用に設計され得る。例えば、ＡＢＣ２輸送体タン
パク質は、細菌細胞（Ｅ．ｃｏｌｉなど）、昆虫細胞（バキュロウイルス発現ベ
クターを用いる）、酵母細胞または哺乳動物細胞で発現され得る。適切な宿主細
胞は、Ｇｏｅｄｄｅｌ，Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇ
ｙ：Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ １８５，Ａｃａｄｅｍｉｃ
Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ（１９９０）にさらに議論される。あ
るいは、組換え発現ベクターは、インビトロで、例えばＴ７プロモーター調節配
列およびＴ７ポリメラーゼを使用して、転写および翻訳され得る。
【０１０２】 原核生物におけるタンパク質の発現は、融合タンパク質または非融合タンパク
質のいずれかの発現を方向付ける構成的なまたは誘導性のプロモーターを含むベ
クターを用いてＥ．ｃｏｌｉにおいて最も良く行われる。融合ベクターは、そこ
にコードされるタンパク質に（通常は組換えタンパク質のアミノ末端に）多くの
アミノ酸を付加する。このような融合ベクターは、典型的に、３つの目的を果た
す：１）組換えタンパク質の発現を増加すること；２）組換えタンパク質の可溶
性を増加すること；３）アフィニティー精製においてリガンドとして作用するこ
とによって組換えタンパク質の精製を助けること。しばしば、融合発現ベクター
においては、タンパク質分解性切断部位が融合部分と組換えタンパク質との接合
部に導入され、融合タンパク質の精製に続いて融合部分から組換えタンパク質を
分離させることができる。このような酵素およびそのコグネイト（ｃｏｇｎａｔ
ｅ）認識配列は、第Ｘａ因子、トロンビンおよびエンテロキナーゼを含む。代表
的な融合発現ベクターは、ｐＧＥＸ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ Ｉ
ｎｃ；Ｓｍｉｔｈ，Ｄ．Ｂ．およびＪｏｈｎｓｏｎ，Ｋ．Ｓ．（１９８８）Ｇｅ
ｎｅ ６７：３１−４０）、ｐＭＡＬ（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂ
ｓ，Ｂｅｎｅｒｌｙ，ＭＡ）およびｐＲＩＴ５（Ｐｈａｒｍａｃｉａ，Ｐｉｓｃ
ａｔａｗａｙ，ＮＪ）を含み、これらはそれぞれ、標的組換えタンパク質にグル
タチオンＳ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）、マルトースＥ結合タンパク質また
はプロテインＡをそれぞれ融合する。
【０１０３】 精製された融合タンパク質は、ＡＢＣ２輸送体活性アッセイ（例えば、以下に
詳細に記載される直接アッセイまたは競合アッセイ）に、または例えばＡＢＣ２
輸送体タンパク質に特異的な抗体を生成するために利用され得る。好ましい実施
形態において、本発明のレトロウイルス発現ベクターにおいて発現されるＡＢＣ
２輸送体融合タンパク質は、骨髄細胞を感染するため利用され得、続いてその骨
髄細胞は、照射されたレシピエントに移植される。次いで、被験体レシピエント
の病理学が、十分な時間が経過した（例えば６週）後試験される。
【０１０４】 適切な誘導性の非融合Ｅ．ｃｏｌｉ発現ベクターの例は、ｐＴｒｃ（Ａｍａｎ
ｎら、（１９８８）Ｇｅｎｅ ６９：３０１−３１５）およびｐＥＴ １１ｄ（
Ｓｔｕｄｉｅｒら、Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：
Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ １８５，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐ
ｒｅｓｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ（１９９０）６０−８９
）を含む。ｐＴｒｃベクターからの標的遺伝子発現は、ハイブリッドｔｒｐ−ｌ
ａｃ融合プロモーターからの宿主ＲＮＡポリメラーゼ転写による。ｐＥＴ １１
ｄベクターからの標的遺伝子発現は、同時発現されるウイルスＲＮＡポリメラー
ゼ（Ｔ７ ｇｎｌ）によって媒介されるＴ７ ｇｎ１０−ｌａｃ融合プロモータ
ーからの転写による。このウイルスポリメラーゼは、ｌａｃＵＶ５プロモーター
の転写条件下でＴ７ ｇｎｌ遺伝子を収容するレジデントプロファージから宿主
株ＢＬ２１（ＤＥ３）またはＨＭＳ１７４（ＤＥ３）によって供給される。
【０１０５】 Ｅ．ｃｏｌｉにおける組換えタンパク質発現を最大にするストラテジーの１つ
は、組換えタンパク質をタンパク質分解的に切断する能力を損なわた宿主細菌に
おいてタンパク質を発現させることである（Ｇｏｔｔｅｓｍａｎ，Ｓ．，Ｇｅｎ
ｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅ
ｎｚｙｍｏｌｏｇｙ １８５，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅ
ｇｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ（１９９０）１１９−１２８）。別のストラテジー
は、各アミノ酸の個々のコドンが、Ｅ．ｃｏｌｉにおいて優先的に利用されるよ
うに発現ベクターに挿入される核酸の核酸配列を変化させることである（Ｗａｄ
ａら、（１９９２）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２０：２１１１−２
１１８）。本発明の核酸配列のこのような変化は、標準的なＤＮＡ合成技術によ
って行われ得る。
【０１０６】 別の実施形態において、ＡＢＣ２輸送体発現ベクターは、酵母発現ベクターで
ある。酵母Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅにおける発現のためのベクターの例は、ｐ
ＹｅｐＳｅｃ１（Ｂａｌｄａｒｉら、（１９８７）Ｅｍｂｏ Ｊ．６：２２９−
２３４）、ｐＭＦａ（ＫｕｒｊａｎおよびＨｅｒｓｋｏｗｉｔｚ、（１９８２）
Ｃｅｌｌ ３０：９３３−９４３）、ｐＪＲＹ８８（Ｓｃｈｕｌｔｚら、（１９
８７）Ｇｅｎｅ ５４：１１３−１２３）、ｐＹＥＳ２（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ
Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）およびｐｉｃＺ（Ｉｎ
Ｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｃｏｒｐ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）を含む。
【０１０７】 あるいは、ＡＢＣ２輸送体タンパク質は、バキュロウイルス発現ベクターを使
用して昆虫細胞において発現され得る。培養された昆虫細胞（例えば、Ｓｆ９細
胞）におけるタンパク質の発現に利用可能なバキュロウイルスベクターは、ｐＡ
ｃシリーズ（Ｓｍｉｔｈら（１９８３）Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．３：２１
５６−２１６５）およびｐＶＬシリーズ（ＬｕｃｋｌｏｗおよびＳｕｍｍｅｒｓ
（１９８９）Ｖｉｒｏｌｏｇｙ １７０：３１−３９）を含む。
【０１０８】 さらに別の実施形態において、本発明の核酸は、哺乳動物発現ベクターを使用
して哺乳動物細胞において発現される。哺乳動物発現ベクターの例は、ｐＣＤＭ
８（Ｓｅｅｄ，Ｂ．（１９８７）Ｎａｔｕｒｅ ３２９：８４０）およびｐＭＴ
２ＰＣ(Ｋａｕｆｍａｎら（１９８７）ＥＭＢＯ Ｊ．６：１８７−１９５）を
含む。哺乳動物細胞において使用する場合、発現ベクターの制御機能は、しばし
ばウイルス調節エレメントによって提供される。例えば、一般的に使用されるプ
ロモーターは、ポリオーマ、アデノウイルス２、サイトメガロウイルスおよびシ
ミアンウイルス４０由来である。原核生物細胞および真核生物細胞ともに他の適
切な発現系については、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｊ．，Ｆｒｉｔｓｈ，Ｅ．Ｆ．，お
よびＭａｎｉａｔｉｓ，Ｔ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂ
ｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ．第２版，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏ
ｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｂｏｒ Ｌａｂｏｒ
ａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ，１９
８９を参照のこと。
【０１０９】 別の実施形態では、この組換え哺乳動物発現ベクターは、特定の細胞型におい
て、この核酸の発現を優先的に指向し得る（例えば、組織特異的調節因子は、こ
の核酸を発現するために使用される）。組織特異的調節因子は、当該分野で公知
である。適切な組織特異的プロモーターの非制限的な例としては、アルブミンプ
ロモーター（肝臓特異的；Ｐｉｎｋｅｒｔら（１９８７）Ｇｅｎｅｓ Ｄｅｖ．
１：２６８−２７７）、リンパ系特異的プロモーター（ＣａｌａｍｅおよびＥａ
ｔｏｎ（１９８８）Ａｄｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４３：２３５−２７５）、特にＴ
細胞レセプターのプロモーター（ＷｉｎｏｔｏおよびＢａｌｔｉｍｏｒｅ（１９
８９）ＥＭＢＯ Ｊ．８：７２９−７３３）ならびに免疫グロブリン（Ｂａｎｅ
ｒｊｉら（１９８３）Ｃｅｌｌ ３３：７２９−７４０；ＱｕｅｅｎおよびＢａ
ｌｔｉｍｏｒｅ（１９８３）Ｃｅｌｌ ３３：７４１−７４８）、ニューロン特
異的プロモーター（例えば、神経フィラメントプロモーター；Ｂｙｒｎｅおよび
Ｒｕｄｄｌｅ（１９８９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８
６：５４７３−５４７７）、膵臓特異的プロモーター（Ｅｄｌｕｎｄら（１９８
５）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３０：９１２−９１６）、ならびに乳腺特異的プロモー
ター（例えば、乳清プロモーター；米国特許第４，８７３，３１６号および欧州
特許出願番号２６４，１６６）が挙げられる。発育時に調節されるプロモーター
としてはまた、例えば、マウスホックス（ｈｏｘ）プロモーター（Ｋｅｓｓｅｌ
およびＧｒｕｓｓ（１９９０）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：３７４−３７９）なら
びにα−フェトプロテインプロモーター（ＣａｍｐｅｓおよびＴｉｌｇｈｍａｎ
（１９８９）Ｇｅｎｅｓ Ｄｅｖ．３：５３７−５４６）が挙げられる。
【０１１０】 本発明は、アンチセンス配位で発現ベクターにクローニングされた本発明のＤ
ＮＡ分子を含む組換え発現ベクターをさらに提供する。すなわち、このＤＮＡ分
子は、ＡＢＣ２輸送体ｍＲＮＡに対してアンチセンスであるＲＮＡ分子の発現（
ＤＮＡ分子の転写による）を可能にする様式で、調節配列に作動可能に連結され
ている。アンチセンス配位でクローニングされた核酸に作動可能に連結された、
種々の細胞型におけるアンチセンスＲＮＡ分子の連続的な発現を指向する調節配
列が、選択され得る（例えば、構成的な、組織特異的なまたは細胞型特異的なア
ンチセンスＲＮＡの発現を指向するウイルスプロモーターおよび／もしくはエン
ハンサー、すなわち調節配列が選択され得る）。このアンチセンス発現ベクター
は、アンチセンス核酸が、高い効率の調節領域の制御下で生成される、組換えプ
ラスミド、ファージミドまたは弱毒ウイルスの形態で存在し得、このベクターの
活性は、このベクターが導入される細胞型によって決定され得る。アンチセンス
を用いる遺伝子発現の調節の考察については、Ｗｅｉｎｔｒａｕｂ，Ｈ．ら、Ａ
ｎｔｉｓｅｎｓｅ ＲＮＡ ａｓ ａ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｔｏｏｌ ｆｏｒ
ｇｅｎｅｔｉｃ ａｎａｌｙｓｉｓ，Ｒｅｖｉｅｗｓ−Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ
Ｇｎｅｎｅｔｉｃｓ，第１巻（１）１９８６を参照のこと。
【０１１１】 本発明の別の局面は、本発明のＡＢＣ２輸送体核酸分子が導入される宿主細胞
に関する（例えば、組換え発現ベクター内のＡＢＣ２輸送体核酸分子、または、
宿主細胞ゲノムの特定の部位に相同的に組換えるのを可能にする配列を含むＡＢ
Ｃ２輸送体核酸分子）。用語「宿主細胞」および「組換え宿主細胞」は、本明細
書中で交換可能に使用される。このような用語は、特定の目的細胞だけでなく、
このような細胞の子孫または潜在的子孫についてもいう。突然変異または環境的
影響のどちらかに起因して、特定の改変が、続く世代で発生し得るので、このよ
うな子孫は、実際には、親細胞と同一ではないが、本明細書中で使用される用語
の範囲内になお含まれる。
【０１１２】 宿主細胞は、任意の原核生物細胞または真核生物細胞であり得る。例えば、Ａ
ＢＣ２輸送体タンパク質は、Ｅ．ｃｏｌｉのような細菌細胞、昆虫細胞、酵母細
胞、または哺乳動物細胞（チャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ）またはＣ
ＯＳ細胞など）において、発現され得る。他の適切な宿主細胞は、当業者に公知
である。
【０１１３】 ベクターＤＮＡは、慣例的な形質転換またはトランスフェクション技術を介し
て、原核生物細胞または真核生物細胞に導入され得る。本明細書中で使用される
場合、用語「形質転換」および「トランスフェクション」は、外来核酸（例えば
、ＤＮＡ）を宿主細胞に導入するための、当業者に認識された種々の技術につい
ていうことを意図され、リン酸カルシウムまたは塩化カルシウム同時沈殿、ＤＥ
ＡＥ−デキストラン媒介トランスフェクション、リポフェクション、あるいは、
エレクトロポレーションを含む。宿主細胞の形質転換またはトランスフェクショ
ンについての適切な方法は、Ｓａｍｂｒｏｏｋら（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏ
ｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ．第２版、Ｃｏｌｄ Ｓｐ
ｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈ
ａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ編、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ
Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ，１９８９）および他の研究マニュアルにおいて見出され得
る。
【０１１４】 哺乳動物細胞の安定なトランスフェクションについては、使用される発現ベク
ターおよびトランスフェクション技術に依存して、ごく少量の細胞画分が、外来
ＤＮＡを、そのゲノムへと組み込み得ることが公知である。これらの組み込み体
を同定および選択するために、選択マーカー（例えば、抗生物質に対する耐性）
をコードする遺伝子は、一般的に、目的の遺伝子と共に宿主細胞に導入される。
好ましい選択マーカーとしては、薬物（例えば、Ｇ４１８、ハイグロマイシンお
よびメトトレキセート）に対して耐性を付与するマーカーが挙げられる。選択マ
ーカーをコードする核酸は、ＡＢＣ２輸送体タンパク質をコードするベクターと
同じベクターで宿主細胞に導入され得るか、または、別のベクターで導入され得
る。導入された核酸で安定してトランスフェクトされた細胞は、薬物選択によっ
て同定され得る（例えば、この選択マーカー遺伝子が組み込まれた細胞は生き残
るが、他の細胞は死ぬ）。
【０１１５】 本発明の宿主細胞（例えば、培養物中の原核生物または真核生物宿主細胞）は
、ＡＢＣ２輸送体タンパク質を産生する（すなわち、発現する）ために使用され
得る。従って、本発明は、本発明の宿主細胞を用いてＡＢＣ２輸送体タンパク質
を産生するための方法をさらに提供する。１つの実施形態では、この方法は、Ａ
ＢＣ２輸送体タンパク質が産生されるように、適切な培地で、本発明の宿主細胞
（これに、ＡＢＣ２輸送体タンパク質をコードする組換え発現ベクターが導入さ
れる）を培養する工程を包含する。別の実施形態では、この方法は、この培地ま
たはこの宿主細胞からＡＢＣ２輸送体タンパク質を単離する工程をさらに包含す
る。
【０１１６】 本発明の宿主細胞はまた、非ヒトトランスジェニック動物を作成するために使
用され得る。例えば、１つの実施形態では、本発明の宿主細胞は、ＡＢＣ２コー
ド配列が導入された受精卵母細胞または胚幹細胞である。次いで、このような宿
主細胞は、外因性ＡＢＣ２輸送体配列がそれらのゲノムに導入された非ヒトトラ
ンスジェニック動物、または、内因性ＡＢＣ２輸送体配列が変更された相同な組
換え動物を作成するために使用され得る。このような動物は、ＡＢＣ２輸送体の
機能および／または活性を研究するために、そして、ＡＢＣ２輸送体活性のモジ
ュレーターを同定および／または評価するために有用である。本明細書中で使用
される場合、「トランスジェニック動物」は、非ヒト動物、好ましくは、哺乳動
物、さらに好ましくは、ラットまたはマウスなどのげっ歯類である（ここで、こ
れらの動物の１以上の細胞が導入遺伝子を含む）。トランスジェニック動物の他
の例としては、非ヒト霊長類、ヒツジ、イヌ、ウシ、ヤギ、ニワトリ、両生類な
どが挙げられる。導入遺伝子は、トランスジェニック動物が発生する細胞のゲノ
ムに組み込まれ、そして、成熟動物のゲノムに残ったままであり、これによって
、トランスジェニック動物の１以上の細胞型または組織におけるコードされた遺
伝子産物の発現を指向する、外来ＤＮＡである。本明細書中で使用される場合、
「相同な組換え動物」は、非ヒト動物、好ましくは、哺乳動物、さらに好ましく
は、マウスである（ここで、内因性のＡＢＣ２輸送体遺伝子は、この動物の発生
の前に、内因性遺伝子とこの動物の細胞（例えば、この動物の胚細胞）に導入さ
れた外因性ＤＮＡ分子との間の相同組換えによって変化されている）。
【０１１７】 本発明のトランスジェニック動物は、受精卵母細胞の雄性前核にＡＢＣ２コー
ド核酸を導入することによって（例えば、微小注入、レトロウイルス感染、およ
び偽妊娠メスフォスター動物において、卵母細胞が発育するのを可能にすること
によって）作成され得る。配列番号１のＡＢＣ輸送体ｃＤＮＡ配列は、非ヒト動
物のゲノムに導入遺伝子として導入され得る。あるいは、ヒトＡＢＣ２輸送体遺
伝子（例えば、マウスまたはラットＡＢＣ２輸送体遺伝子）の非ヒト相同体は、
導入遺伝子として使用され得る。あるいは、ＡＢＣ２輸送体遺伝子相同体（例え
ば、別のＡＢＣ２輸送体ファミリーメンバー）は、配列番号１または３のＡＢＣ
２輸送体ｃＤＮＡ配列（上記サブセクションＩにさらに記載される）に対するハ
イブリダイゼーションに基づいて単離され得、そして、導入遺伝子として使用さ
れ得る。イントロン配列およびポリアデニル化シグナルはまた、この導入遺伝子
の発現の効率を増加するための導入遺伝子に含まれ得る。組織特異的調節配列（
単数または複数）は、特定の細胞にＡＢＣ２輸送体タンパク質の発現を指向する
ために、ＡＢＣ２輸送体導入遺伝子に作動可能に連結され得る。胚操作および微
小注入を介してトランスジェニック動物を作成する方法（特にマウスなどの動物
）は、当該分野で慣例となり、そして、例えば、共にＬｅｄｅｒらによる、米国
特許第４，７３６，８６６号および同４，８７０，００９号、Ｗａｇｎｅｒらに
よる、米国特許第４，８７３，１９１号、およびＨｏｇａｎ，Ｂ．，Ｍａｎｉｐ
ｕｌａｔｉｎｇ ｔｈｅ Ｍｏｕｓｅ Ｅｍｂｒｙｏ，（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎ
ｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ
Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，１９８６）において記載される。同様の方法が、他
のトランスジェニック動物の作成のために使用される。トランスジェニック創始
（ｆｏｕｎｄｅｒ）動物は、ＡＢＣ２輸送体導入遺伝子のそのゲノムにおける存
在および／またはこの動物の組織または細胞におけるＡＢＣ２輸送体ｍＲＮＡの
発現に基づいて同定され得る。次いで、トランスジェニック創始動物は、この導
入遺伝子を有するさらなる動物を繁殖するために使用され得る。さらに、ＡＢＣ
２輸送体タンパク質をコードする導入遺伝子を有するトランスジェニック動物は
、他の導入遺伝子を有する他のトランスジェニック動物（例えば、β−アミロイ
ドのような神経毒性ポリペプチドをコードする導入遺伝子を有する動物）をさら
に繁殖し得る。
【０１１８】 相同な組換え動物を作成するために、これらによってＡＢＣ２輸送体遺伝子を
変化する（例えば、機能的に破壊する）ように欠失、付加または置換が導入され
たＡＢＣ２輸送体遺伝子の少なくとも一部を含むベクターが調製される。このＡ
ＢＣ２輸送体遺伝子は、ヒト遺伝子（例えば、配列番号３のｃＤＮＡ）であり得
るが、より好ましくは、ヒトＡＢＣ２輸送体遺伝子の非ヒト相同体（例えば、配
列番号１の核酸配列とストリンジェントハイブリダイゼーションによって単離さ
れたｃＤＮＡ）である。例えば、マウスＡＢＣ２輸送体遺伝子は、このマウスゲ
ノムにおける内因性ＡＢＣ２輸送体遺伝子を変化するために適した、相同な組換
え核酸分子（例えば、ベクター）を構築するために使用され得る。好ましい実施
形態では、この相同な組換え核酸分子は、相同組換えの際、内因性ＡＢＣ２輸送
体遺伝子が機能的に破壊されるように設計される（すなわち、もはや機能的なタ
ンパク質をコードしない；また「ノックアウト」ベクターともいわれる）。ある
いは、この相同組換え核酸分子は、相同組換えの際、内因性ＡＢＣ２輸送体遺伝
子が変異されるかまたは他に変化されるが機能的タンパク質をコードするように
設計され得る（例えば、上流調節領域は、これによって内因性ＡＢＣ２輸送体タ
ンパク質の発現を変化するように変化され得る）。相同組換え核酸分子において
、ＡＢＣ２輸送体遺伝子の変化した部分は、ＡＢＣ２輸送体遺伝子のさらなる核
酸配列によって、その５’および３’末端に隣接され、相同組換えが、相同組換
え核酸分子によって有される外因性ＡＢＣ２輸送体遺伝子と細胞（例えば、胚幹
細胞）における内因性ＡＢＣ２輸送体遺伝子との間に発生することを可能にする
。このさらなる隣接するＡＢＣ２輸送体核酸配列は、この内因性遺伝子と上手く
相同組換えするのに十分な長さである。代表的には、隣接するＤＮＡの数千塩基
（５’および３’末端の両方において）が、相同組換え核酸分子に含まれる（例
えば、相同組換えベクターの記載について、Ｔｈｏｍａｓ，Ｋ．Ｒ．およびＣａ
ｐｅｃｃｈｉ，Ｍ．Ｒ．（１８９７）Ｃｅｌｌ ５１：５０３を参照のこと）。
この相同組換え核酸分子は、細胞（例えば、胚幹細胞株）に導入され（例えば、
エレクトロポレーションによって）、そして、この導入されたＡＢＣ２輸送体遺
伝子が内因性ＡＢＣ２輸送体遺伝子と相同的に組換えされた細胞が、選択される
（例えば、Ｌｉ，Ｅ．ら（１９９２）Ｃｅｌｌ ６９：９１５を参照のこと）。
次いで、これらの選択された細胞は、動物（例えば、マウス）の胚盤胞に注入さ
れ、凝集キメラを形成する（例えば、Ｂｒａｄｌｅｙ，Ａ．Ｔｅｒａｔｏｃａｒ
ｃｉｎｏｍａｓ ａｎｄ Ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌｓ：Ａ Ｐ
ｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ，Ｅ．Ｊ．Ｒｅｂｅｒｔｓｏｎ編（ＩＲＬ
，Ｏｘｆｏｒｄ，１９８７）１１３〜１５２頁を参照のこと）。次いで、キメラ
胚は、適切な偽妊娠メスフォスター動物に移植され得、そして、この胚は、限定
期間育てられ得る。これらの生殖細胞において相同的に組換えられたＤＮＡを有
する子孫は、導入遺伝子の生殖系列伝達によって、この動物の全ての細胞が相同
的に組換えられたＤＮＡを含む動物を繁殖するために使用され得る。相同組換え
核酸分子（例えば、ベクター）または相同組換え動物を構築するための方法は、
Ｂｒａｄｌｅｙ，Ａ．（１９９１）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎｉｎ Ｂｉ
ｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２：８２３−８２９ならびにＰＣＴ国際公開番号：Ｌ
ｅ ＭｏｕｅｌｌｅｃらによるＷＯ ９０／１１３５４；Ｓｍｉｔｈｉｅｓらに
よるＷＯ ９１／０１１４０；ＺｉｊｌｓｔｒａらによるＷＯ ９２／０９６８
；およびＢｅｒｎｓらによるＷＯ ９３／０４１６９にさらに記載される。
【０１１９】 別の実施形態では、調節された導入遺伝子の発現を可能にする選択システムを
含む非ヒトトランスジェニック動物が作成される。このようなシステムの１つの
例は、バクテリオファージＰ１のｃｒｅ／ｌｏｘＰ組換え酵素システムである。
ｃｒｅ／ｌｏｘＰ組換え酵素システムの記載としては、例えば、Ｌａｋｓｏら（
１９９２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：６２３２−
６２３６を参照のこと。組換え酵素システムの別の例としては、Ｓａｃｃｈａｒ
ｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅのＦＬＰ組換え酵素システムである（Ｏ’
Ｇｏｒｍａｎら（１９９１）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５１：１３５１−１３５５）。
ｃｒｅ／ｌｏｘＰ組換え酵素システムが、導入遺伝子の発現を調節するために使
用される場合、Ｃｒｅ組換え酵素および選択されるタンパク質の両方をコードす
る導入遺伝子を含む動物が必要とされる。このような動物は、「二重」トランス
ジェニック動物の構築を介して（例えば、２匹のトランスジェニック動物（一方
は選択されたタンパク質をコードする導入遺伝子を含み、他方は組換え酵素をコ
ードする導入遺伝子を含む）を交配させることによって）提供され得る。
【０１２０】 本明細書中に記載される非ヒトトランスジェニック動物のクローンはまた、Ｗ
ｉｌｍｕｔ，Ｉ．ら（１９９７）Ｎａｔｕｒｅ ３８５：８１０−８１３ならび
にＰＣＴ国際公開番号ＷＯ ９７／０７６６８およびＷＯ ９７／０７６６９に
記載される方法に従って作成され得る。簡潔には、トランスジェニック動物由来
の細胞（例えば、体細胞）は、単離され得そして増殖周期を出てＧ0期に入るよ
うに誘導され得る。次いで、休止状態の細胞は、休止状態の細胞が単離される同
種の動物から除核された卵母細胞に、融合され得る（例えば、電気パルスの使用
により）。次いで、この再構築された卵母細胞は、桑実胚または未分化胚芽細胞
へと分化するように培養され、次いで、偽妊娠メスフォスター動物に移される。
この偽妊娠メスフォスター動物の産まれた子孫は、細胞（例えば、体細胞）が単
離される動物のクローンである。
【０１２１】 （ＩＶ．薬学的組成物） ＡＢＣ２輸送体核酸分子、ＡＢＣ２輸送体タンパク質のフラグメント、抗ＡＢ
Ｃ２輸送体抗体（本明細書中で「活性化合物」ともいわれる）、ＡＢＣ２輸送体
をコードする発現可能な核酸（またはそのフラグメント）、またはＡＢＣ２輸送
体のモジュレーターとして同定された任意の化合物（本明細書中に記載されるよ
うに）は、投与に適した薬学的組成物に組み入れられ得る。このような組成物は
、代表的には、核酸分子、タンパク質、または抗体および薬学的に受容可能なキ
ャリアを含む。本明細書中で使用される場合、用語「薬学的に受容可能なキャリ
ア」は、薬学的投与に適合性の、任意および全ての溶媒、分散媒、被覆、抗細菌
剤および抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤などを含むことが意図される。薬学
的に活性な物質についてのこのような培体および薬剤の使用は、当業者に周知で
ある。任意の従来の培体または薬剤が、この活性化合物と不適合である場合を除
いて、この組成物におけるそれらの使用が意図される。補助的な活性化合物はま
た、この組成物に組み入れられる。
【０１２２】 本発明の薬学的組成物は、その意図される投与の経路と適合性となるように処
方される。投与の経路の例としては、非経口的（例えば、静脈内、皮内、皮下）
、経口的（例えば、吸入）、経皮的（局所的）、経粘膜的、および直腸投与が挙
げられる。非経口適用、皮内適用、または皮下適用のための溶液または懸濁液と
しては、以下の成分を含む：注射のための水、生理食塩水溶液、不揮発性油、ポ
リエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコールまたは他の合成溶媒
などの滅菌希釈液；ベンジルアルコールまたはメチルパラベンなどの抗細菌剤；
アスコルビン酸または亜硫酸水素ナトリウムなどの抗酸化剤；エチレンジアミン
四酢酸などのキレート剤；酢酸塩、クエン酸塩またはリン酸塩などの緩衝剤なら
びに塩化ナトリウムまたはデキストロースなどの張度の調節のための薬剤。ｐＨ
は、酸または塩基（例えば、塩酸または水酸化ナトリウム）を使用して調節され
得る。この非経口的調製物は、アンプル、使い捨てシリンジまたはガラスもしく
はプラスチック製の複数用量バイアルに封入され得る。
【０１２３】 注射可能な使用について適した薬学的組成物としては、滅菌水溶液（水溶性の
場合）または滅菌分散、および、滅菌注射可能な溶液または分散の即座の調製の
ための滅菌粉末が挙げられる。静脈内投与については、適切なキャリアとしては
、生理学的食塩水、静菌水、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ ＥＬTM（ＢＡＳＦ，Ｐａｒｓ
ｉｐｐａｎｙ，ＮＪ）またはリン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）が挙げられる。
全ての場合において、この組成物は、滅菌されなければならず、そして、容易な
注入能力が存在する程度に流動性であるべきである。それは、製造および貯蔵の
条件下で安定でなければならず、そして、細菌および真菌などの微生物の混入作
用に対して保存されなければならない。このキャリアは、例えば、水、エタノー
ル、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、および液体ポ
リエチレングリコールなど）およびその適切な混合物を含む溶媒または分散培体
であり得る。適切な流動性は、例えば、レシチンのような被覆の使用によって、
分散の場合に必要とされる粒子サイズの維持によって、そして、界面活性物質の
使用によって、維持され得る。微生物作用の防止は、種々の抗細菌剤および抗真
菌剤（例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸、チ
メロサールなど）によって達成され得る。多くの場合、組成物中に、等張剤（例
えば、マンニトール（ｍａｎｉｔｏｌ）、ソルビトールなどの糖、多価アルコー
ル、塩化ナトリウム）を含むことが好ましい。注射可能な組成物の長期吸収は、
吸収を遅らせる薬剤（例えば、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチン）
を組成物中に含むことによってもたらされ得る。
【０１２４】 滅菌注射可能な溶液は、必要な場合、上記に列挙された成分の１つかまたはそ
れらの組み合わせと共に、適切な溶媒中の、必要量の活性化合物（例えば、ＡＢ
Ｃ２輸送体タンパク質または抗ＡＢＣ２輸送体抗体のフラグメント）の組み込み
、その後のフィルター滅菌によって調製され得る。一般的に、分散は、基本的Ａ
ＢＣ２輸送体分散培体および上記列挙された他の必要な成分を含む滅菌ビヒクル
に、活性化合物を組み込むことによって、調製され得る。滅菌注射可能な溶液の
調製のための滅菌粉末の場合では、調製の好ましい方法は、以前に滅菌ろ過され
たその溶液由来の任意のさらなる所望の成分に加えて、活性成分の粉末を生じる
減圧乾燥および凍結乾燥である。
【０１２５】 経口組成物は、一般的に、不活性の希釈液または食用キャリアを含む。これら
は、ゼラチンカプセルに封入されるかまたは錠剤に圧縮され得る。経口治療的投
与の目的のために、活性化合物は賦形剤と取り込まれ得、そして、錠剤、トロー
チ、またはカプセルの形態で使用され得る。経口組成物はまた、うがい薬として
の使用のための流動性キャリアを用いて調製され得、ここで、流動性キャリア中
の化合物は、経口的に適用されそして口内をすすいで（ｓｗｉｓｈｅｄ）、そし
て、吐き出されるかまたは飲み込まれる。薬学的に適合性の結合薬剤および／ま
たはアジュバント物質は、組成物の一部として含まれ得る。錠剤、丸薬、カプセ
ル、トローチなどは、以下の成分または類似の性質の化合物のいずれかを含み得
る：微結晶性セルロース、ゴムトラガントまたはゼラチンなどの結合剤；デンプ
ンまたはラクトースなどの賦形剤；アルギン酸、Ｐｒｉｍｏｇｅｌ、またはコー
ンスターチなどの粉砕剤；ステアリン酸マグネシウムまたはＳｔｒｒｏｔｅｓな
どのすべり剤；コロイド状二酸化ケイ素などの滑空剤（ｇｌｉｄａｎｔ）；スク
ロースまたはサッカリンなどの甘味料；あるいはペパーミント、サリチル酸メチ
ル、またはオレンジ香味料などの香味料。
【０１２６】 吸引による投与については、化合物は、適切な噴霧剤（例えば、二酸化炭素な
どの気体）を含む加圧容器またはディスペンサーからかまたは噴霧器からエアロ
ゾル噴霧の形態で送達される。
【０１２７】 全身投与はまた、経粘膜的または経皮的方法によって行なわれ得る。経粘膜的
または経皮的投与について、浸透される障害に対する適切な浸透剤が、処方の際
に使用される。このような浸透剤は一般的に公知であり、そして、例えば、経粘
膜的投与については、界面活性剤、胆汁酸塩、およびフシジン酸誘導体が挙げら
れる。経粘膜的投与は、経鼻スプレーまたは坐薬を介して達成され得る。経皮的
投与については、活性化合物は、当該分野で一般的に公知の軟膏（ｏｉｎｔｍｅ
ｎｔ）、軟膏（ｓａｌｖｅ）、ゲルまたはクリームに処方される。
【０１２８】 化合物はまた、坐薬の形態（例えば、ココアバターおよび他のグリセリドなど
の慣例的な坐薬基剤を使用して）でかまたは直腸送達のための保持浣腸の形態で
、調製され得る。
【０１２９】 １つの実施形態では、活性化合物は、体からの迅速な除去に対して化合物を保
護するキャリア（例えば、制御放出処方物（インプラントおよび微小カプセル送
達システムを含む））と共に調製される。生分解性の生物適合性ポリマー（例え
ば、エチレンビニルアセテート、ポリ酸無水物（ｐｏｌｙａｎｈｙｄｒｉｄｅ）
、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、およびポリ乳酸）が使
用され得る。このような処方物の調製のための方法は、当業者に明らかである。
これらの材料はまた、Ａｌｚａ ＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎおよびＮｏｖａ Ｐｈ
ａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．より市販されている。リポソーム懸濁液
（ウイルス抗原に対するモノクローナル抗体を有する感染細胞に標的化されたリ
ポソームを含む）はまた、薬学的に受容可能なキャリアとして使用され得る。こ
れらは、例えば、米国特許第４，５２２，８１１号に記載されるように、当業者
に公知の方法に従って調製され得る。
【０１３０】 投与の容易さおよび投薬量の均一性のために、投薬単位形態における、経口組
成物または非経口組成物を処方することが特に有利である。本明細書において使
用する場合、投薬単位形態とは、処置される被験体のための単位投薬量として適
切な物理的に独立した単位をいう；各々の単位は、必要な薬理学的キャリアと会
合した、所望の治療的効果を生じるように計算された活性化合物の所定量を含む
。本発明の投薬単位形態についての詳細は、活性化合物に独特の特徴および達成
されるべき特定の治療効果、および個体の処置のためにそのような活性化合物を
配合する当該分野で固有の制限によって、ならびこれら特徴、治療効果および制
限に直接依存する。
【０１３１】 そのような化合物の毒性および治療有効性は、細胞培養または実験動物におけ
る標準的な薬学的手順（例えば、ＬＤ５０（集団の５０％の致死量）およびＥＤ
５０（集団の５０％の治療有効用量）を決定するために）によって決定され得る
。毒性と治療効果との間の用量比は、治療指数であり、ＬＤ５０／ＥＤ５０比と
して表され得る。高い治療指数を示す化合物が、好ましい。毒性の副作用を示す
化合物を使用し得るが、感染していない細胞に対する可能性のある損傷を最小化
し、それによって副作用を減少するために、罹患した組織の部位に対してそのよ
うな化合物を標的化する送達系を設計するために注意をはらうべきである。
【０１３２】 細胞培養アッセイおよび動物実験によって得られるデータを、ヒトにおける使
用のための投薬量の範囲を処方するために使用し得る。そのような化合物の投薬
量は、好ましくは、毒性をほとんど有さないか、または全く毒性を有さないＥＤ
５０を含む循環濃度の範囲内にある。投薬量は、使用される投薬形態および利用
される投与経路に依存して、この範囲内で変化し得る。本発明の方法において使
用される任意の化合物について、治療的有効用量を最初に、細胞培養アッセイか
ら推定し得る。動物モデルにおいて、用量は、細胞培養において決定されるＩＣ
５０（すなわち、症状の最大半減阻害を達成する試験化合物の濃度）を含む循環
血漿濃度範囲を達成するように処方され得る。そのような情報を使用して、ヒト
における有用な投薬量をより正確に決定し得る。血漿中のレベルを、例えば、高
速液体クロマトグラフィーによって測定し得る。
【０１３３】 本発明の核酸分子を、ベクター中に挿入して、遺伝子治療ベクターとして使用
し得る。遺伝子治療ベクターは、例えば、静脈内注射、局所投与（米国特許第５
，３２８，４７０号を参照のこと）または定位的注射（ｓｔｅｒｅｏｔａｃｔｉ
ｃ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ）（例えば、Ｃｈｅｎら（１９９４） Ｐｒｏｃ． Ｎ
ａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ９１： ３０５４−３０５７を参照
のこと）によって被験体に投与され得る。遺伝子治療ベクターの薬学的調製物と
しては、受容可能な希釈剤中の遺伝子治療ベクターを含み得るか、または遺伝子
送達ビヒクルを埋め込んだ徐放性マトリックスを含み得る。あるいは、完全な遺
伝子送達ベクターを、組換え細胞からインタクトで産生し得る場合（例えば、レ
トロウイルスベクター）薬学的調製物は、遺伝子送達系を産生する１つ以上の細
胞を含み得る。
【０１３４】 薬学的組成物は、容器、パック、またはディスペンサーを、投与のための説明
とともに含み得る。
【０１３５】 （Ｖ．本発明の使用および方法） 本明細書において記載される核酸分子、タンパク質、タンパク質ホモログ、お
よび抗体を、以下の方法の１つ以上において使用し得る：ａ）スクリーニングア
ッセイ；ｂ）予測医学（ｐｒｅｄｉｃｔｉｖｅ ｍｅｄｉｃｉｎｅ）（例えば、
診断アッセイ、予後アッセイ、臨床試験のモニター、および薬理遺伝学）；なら
びに処置方法（例えば、治療および予防）。
【０１３６】 本発明の単離された核酸分子を、例えば、以下にさらに記載するように、ＡＢ
Ｃ２輸送体タンパク質を発現するために（例えば、遺伝子治療適用における宿主
細胞中の組換え発現ベクターを介して）、ＡＢＣ２輸送体ｍＲＮＡ（例えば、生
物学的サンプル中）を検出するか、またはＡＢＣ２輸送体遺伝子における遺伝子
変異を検出するために、ならびにＡＢＣ２輸送体活性を調節するために使用し得
る。ＡＢＣ２輸送体タンパク質を、ＡＢＣ２輸送体基質の不充分な産生または過
剰な産生、あるいはＡＢＣ２輸送体インヒビターの産生によって特徴付けられる
障害を処置するために使用し得る。さらに、ＡＢＣ２輸送体タンパク質を、天然
に存在するＡＢＣ２輸送体基質をスクリーニングするために、ＡＢＣ２輸送体活
性を調節する薬物または化合物をスクリーニングするために、ならびにＡＢＣ２
輸送体タンパク質の不充分な産生または過剰な産生によって特徴づけられる障害
を処置するために、あるいはＡＢＣ２輸送体野生型タンパク質と比較して、減少
した異常なまたは望まれていない活性を有するＡＢＣ２輸送体タンパク質の形態
の産生によって特徴づけられる障害を処置するために使用され得る。さらに、本
発明の抗−ＡＢＣ２輸送体抗体を、ＡＢＣ２輸送体タンパク質の検出および単離
、ＡＢＣ２輸送体タンパク質の生物学的活性の調節、ならびにＡＢＣ２輸送体活
性の調節のために使用し得る。
【０１３７】 （Ａ．スクリーニングアッセイ：） 本発明は、モジュレーターを同定するための方法（本明細書において、「スク
リーニングアッセイ」ともいう）を提供する。このモジュレーターとは、すなわ
ち、ＡＢＣ２輸送体タンパク質に結合するか、あるいは、例えばＡＢＣ２輸送体
発現またはＡＢＣ２輸送体活性に対して、刺激性の効果または阻害性の効果を有
するか、あるいは、例えばＡＢＣ２輸送体基質の発現またはＡＢＣ２輸送体基質
の活性に対して、刺激性の効果または阻害性の効果を有する、候補または試験の
化合物または薬剤（例えば、ペプチド、ペプチド模倣物、低分子または他の薬物
）である。
【０１３８】 １つの実施形態において、本発明は、ＡＢＣ２輸送体タンパク質またはそのペ
プチドもしくは生物学的に活性な部分の基質である、候補化合物または試験化合
物をスクリーニングするためにアッセイを提供する。別の実施形態において、本
発明は、ＡＢＣ２輸送体タンパク質またはそのペプチドもしくは生物学的に活性
な部分に結合するか、またはその活性を調節する候補化合物または試験化合物を
スクリーニングするためのアッセイを提供する。本発明の試験化合物を、当該分
野で公知のコンビナトリアルライブラリー法における多数の任意のアプローチを
使用して得ることができる。当該分野で公知のコンビナトリアルライブラリーと
しては、以下：生物学的ライブラリー；空間的にアドレス可能な並行固相ライブ
ラリーまたは液相ライブラリー；逆重畳積分を必要とする合成ライブラリー法；
「１ビーズ１化合物」ライブラリー法；および親和性クロマトグラフィー選択を
を使用する合成ライブラリー法が挙げられる。生物学的ライブラリーアプローチ
は、ペプチドライブラリーに限定されるが、他の４つのアプローチは、ペプチド
、非ペプチドオリゴマーまたは化合物の低分子ライブラリーに適用可能である（
Ｌａｍ，Ｋ．Ｓ．（１９９７）Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｄｒｕｇ Ｄｅｓ．１２
： １４５）。
【０１３９】 分子ライブラリーの合成方法の例が、当該分野において見出され得る（例えば
、ＤｅＷｉｔｔら（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ
．Ａ．９０：６９０９；Ｅｒｂら（１９９４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．
Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９１：１１４２２；Ｚｕｃｋｅｒｍａｎｎら（１９９４）．Ｊ
．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３７：２６７８；Ｃｈｏら（１９９３）Ｓｃｉｅｎｃｅ
２６１：１３０３；Ｃａｒｒｅｌｌら（１９９４）Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎ
ｔ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．３３：２０５９；Ｃａｒｅｌｌら（１９９４）Ａｎｇｅｗ
．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．３３：２０６１；およびＧａｌｌｏｐら
（１９９４）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３７：１２３３）。
【０１４０】 化合物のライブラリーは、溶液中（例えば、Ｈｏｕｇｈｔｅｎ（１９９２）Ｂ
ｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ １３： ４１２−４２１）、あるいはビーズ上（Ｌ
ａｍ（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ ３５４：８２−８４）、チップ上（Ｆｏｄｏｒ
（１９９３）Ｎａｔｕｒｅ ３６４：５５５−５５６）、細菌上（Ｌａｄｎｅｒ
米国特許第５，２２３，４０９号）、胞子上（Ｌａｄｎｅｒ 米国特許第４０
９号）、プラスミド上（Ｃｕｌｌら（１９９２）Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ
Ｓｃｉ ＵＳＡ ８９：１８６５−１８６９）、またはファージ上（Ｓｃｏｔ
ｔおよびＳｍｉｔｈ（１９９０）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：３８６−３９０）；
（Ｄｅｖｌｉｎ（１９９０）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：４０４−４０６）；（Ｃ
ｗｉｒｌａら（１９９０）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８７：６３
７８−６３８２）；（Ｆｅｌｉｃｉ（１９９１）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ． ２２
２：３０１−３１０）；（Ｌａｄｎｅｒ上記）に存在し得る。
【０１４１】 １つの実施形態において、アッセイは、細胞ベースであり、そのアッセイでは
、ＡＢＣ２輸送体タンパク質またはその生物学的に活性な部分を発現する細胞を
、試験化合物と接触させ、そしてその試験化合物がＡＢＣ２輸送体活性を調節す
る能力を決定する。試験化合物がＡＢＣ２輸送体活性を調節する能力の決定は、
例えば、有機アニオン、有機カチオン、細胞障害性抗癌剤の細胞性輸送、細胞内
のカルシウム、カリウム、ホスファチジルコリン、ナトリウム濃度、ニューロン
の膜の脱分極、神経毒性ポリペプチド（例えば、β−アミロイド）、あるいはＡ
ＢＣ２輸送体によって調節される転写因子の活性をモニターすることによって達
成され得る。細胞は、例えば、哺乳動物起源（例えば、ニューロン細胞）であり
得る。試験化合物がＡＢＣ２輸送体の基質への結合を調節する能力、または試験
化合物がＡＢＣ２輸送体に結合する能力もまた、決定し得る。試験化合物がＡＢ
Ｃ２輸送体の基質への結合を調節する能力の決定は、例えば、ＡＢＣ２輸送体基
質を、放射性同位元素または酵素標識と結合させることによって達成し得、その
結果、ＡＢＣ２輸送体基質のＡＢＣ２輸送体への結合を、複合体中の標識された
ＡＢＣ２輸送体基質を検出することによって決定し得る。試験化合物がＡＢＣ２
輸送体に結合する能力の決定は、例えば、試験化合物を放射性同位元素または酵
素標識と結合させることによって達成し得、その結果、ＡＢＣ２輸送体への試験
化合物への結合を、複合体中の標識されたＡＢＣ２輸送体化合物を検出すること
によって決定し得る。例えば、化合物（例えば、ＡＢＣ２輸送体基質）を、125
Ｉ、35Ｓ、14Ｃ、33Ｐ、32Ｐ、または3Ｈを用いて、直接的または間接的のいず
れかで標識し得、そして放射性同位元素を、放射線放出を直接計数することによ
るか、またはシンチレーションカウンターによって検出し得る。あるいは、化合
物を、例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、または
ルシフェラーゼによって酵素的に標識し、酵素的標識を、適切な基質の産物への
変換を測定することによって検出し得る。
【０１４２】 １つの実施形態において、適切な化合物としては、以下が挙げられるが、これ
らに限定されない：ベラパミル、デスメトキシベラパミル、クロロキン、キニー
ネ、キンコニジン（ｃｈｉｎｃｈｏｎｉｄｉｎｅ）、プリマキン、タモキシフェ
ン、ジヒドロシクロスポリン、ヨヒンビン、コリナンチン、レセルピン、フィゾ
スチグミン、アクリジン、アクリジンオレンジ、キナクリン、トリフルオロペラ
ジン、クロルプロマジン、プロパノロール、アトロピン、トリプタミン、フォル
スコリン、１，９−ジデオキシフォルスコリン、シクロスポリン、（米国特許第
４，１１７，１１８号（１９７８））、ＰＳＣ−８３３（シクロスポリン Ｄ，
６−［（２Ｓ，４Ｒ，６Ｅ）−４−メチル−２−（メチルアミノ）−３−オキソ
−６−オクテン酸］−（９ＣＩ））、［米国特許第５，５２５，５９０号］［Ａ
ＣＳ １２１５８４−１８−７］、Ｋｅｌｌｅｒら、「ＳＤＺ ＰＳＣ ８３３
， ａ ｎｏｎ−ｉｍｍｕｎｏｓｕｐｐｒｅｓｓｉｖｅ ｃｙｌｃｏｓｐｏｒｉ
ｎｅ： ｉｔｓ ｐｏｔｅｎｃｙ ｉｎ ｏｖｅｒｃｏｍｉｎｇ ｐ−ｇｌｙｃ
ｏｐｒｏｔｅｉｎ−ｍｅｄｉａｔｅｄ ｍｕｌｔｉｄｒｕｇ ｒｅｓｉｓｔａｎ
ｃｅ ｏｆ ｍｕｒｉｎｅ ｌｅｕｋｅｍｉａ」、Ｉｎｔ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ
５０：５９３−５９７（１９９２））、ＲＵ−４８６（１７β−ヒドロキシ−ｌ
ｌβ−［４−ジメチルアミノフェニル］−１７αプロパ−１−イニル エストラ
−４，９−ジエン−３オン），ＲＵ−４９９５３（１７β−ヒドロキシ−１ｌβ
，１７α−［４−ジメチルアミノフェニル］−１７αプロパ−１−イニル エス
トラ−４，９−ジエン−３オン）、Ｓ９７７８（６−｛４−［２，２−ジ（）エ
チルアミノ］−１−ピペリジニル｝−Ｎ，Ｎ’，ジ−２−プロペニル−１，３，
５−トリアジン−２，４−ジアミン，ビスメタンスルホネート、［米国特許第５
，２２５，４１１号；ＥＰ４６６５８６号］［ＡＣＳ ＃ １４０９４５−０１
−３］；Ｄｈａｉｎａｕｔら，「Ｎｅｗ ｔｒｉａｚｉｎｅ ｄｅｒｉｖａｔｉ
ｖｅｓ ａｓ ｐｏｔｅｎｔ ｍｏｄｕｌａｔｏｒｓ ｏｆ ｍｕｌｔｉｄｒｕ
ｇ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ」、Ｊ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ
３５：２４８１−２４９６（１９９２）），ＭＳ−２０９（５−［３−［４−（
２，２−ジフェニルアセチル）ピペラジン−１−イル］−２−ヒドロキシプロポ
キシ］ キノリンセスキフマレート、［米国特許第５，４０５，８４３号（５，
１１２，８１７の継続出願）］、［ＡＣＳ ＃ １５８６８１−４９−３］、Ｓ
ａｔｏら，「Ｒｅｖｅｒｓａｌ ｏｆ ｍｕｌｔｉｄｒｕｇ ｒｅｓｉｓｔａｎ
ｃｅ ｂｙ ａ ｎｏｖｅｌ ｑｕｉｎｏｌｉｎｅ ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅ，
ＭＳ−２０９」、Ｃａｎｃｅｒ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ ３
５：２７１−２７７（１９９５））、ＭＳ−０７３（Ｆｕｋａｚａｗａら，欧州
特許出願０３６３２１２号（１９８９））、ＦＫ−５０６（Ｔａｎａｋａら，
Ｍ．「Ｐｈｙｓｉｃｏｃｈｅｍｉｃａｌ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ ＦＫ−
５０６， ａ ｎｏｖｅｌ ｉｍｍｕｎｏｓｕｐｐｒｅｓｓａｎｔ ｉｓｏｌａ
ｔｅｄ ｆｒｏｍ Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｔｓｕｋｕｂａｅｎｓｉｓ」、
Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ．１９ （５補遺６
）：１１−６、（１９８７）；Ｎａｉｔｏら，「Ｒｅｖｅｒｓａｌ ｏｆ ｍｕ
ｌｔｉｄｒｕｇ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｂｙ ａｎ ｉｍｍｕｎｏｓｕｐｐｒ
ｅｓｓｉｖｅ ａｇｅｎｔ ＦＫ−５０６」、Ｃａｎｃｅｒ Ｃｈｅｍｏｔｈｅ
ｒ ＆ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２９：１９５−２００（１９９２）； Ｐｏｕｒ
ｔｉｅｒ−Ｍａｎｚａｎｅｄｏら，「ＦＫ−５０６ （ｆｕｊｉｍｙｃｉｎ）
ｒｅｖｅｒｓｅｓ ｔｈｅ ｍｕｌｔｉｄｒｕｇ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｏｆ
ｔｕｍｏｒ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｖｉｔｒｏ」、Ａｎｔｉ−Ｃａｎｃｅｒ Ｄ
ｒｕｇｓ ２：２７９−８３（１９９１）；ＥｐａｎｄおよびＥｐａｎｄ、「Ｔ
ｈｅ ｎｅｗ ｐｏｔｅｎｔ ｉｍｍｕｎｏｓｕｐｐｒｅｓｓａｎｔ ＦＫ−５
０６ ｒｅｖｅｒｓｅｓ ｍｕｌｔｉｄｒｕｇ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｉｎ
Ｃｈｉｎｅｓｅ ｈａｍｓｔｅｒ ｏｖａｒｙ ｃｅｌｌｓ」、Ａｎｔｉ−Ｃａ
ｎｃｅｒ Ｄｒｕｇ Ｄｅｓｉｇｎ ６：１８９−９３（１９９１）），ＶＸ−
７１０（２ペペリジンカルボン酸（２ｐｅｐｅｒｉｄｉｎｅｃａｒｂｏｘｙｌｉ
ｃ ａｃｉｄ）、１−［オキソ（３，４，５−トリメトキシフェニル）アセチル
］−３−（３−ピリジニル）−１−［３−（３−ピリジニル）プロピル］ブチル
エステル［ＡＣＳ １５９９９７−９４−１］［米国特許第５，６２０，９７１
号］Ｇｅｒｍａｎｎら，「Ｃｈｅｍｏｓｅｎｓｉｔｉｚａｔｉｏｎ ａｎｄ ｄ
ｒｕｇ ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ＶＸ−７１０，
ｖｅｒａｐａｍｉｌ， ｃｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎ Ａ， ＭＳ２０９ ａｎｄ
ＧＦ１２０９１８ ｉｎ ｍｕｌｔｉｄｒｕｇ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ−ａｓｓ
ｏｃｉａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ＭＲＰ」、Ａｎｔｉ−Ｃａｎｃｅｒ Ｄｒｕ
ｇｓ ８，１４１−１５５（１９９７）；Ｇｅｒｍａｎｎら、「Ｃｅｌｌｕｌａ
ｒ ａｎｄ ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏ
ｆ ＶＸ−７１０ ａｓ ａ ｃｈｅｍｏｓｅｎｓｉｔｉｚｅｒ： ｒｅｖｅｒ
ｓａｌ ｏｆ Ｐ−ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ−ｍｅｄｉａｔｅｄ ｍｕｌｔｉ
ｄｒｕｇ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｉｎ ｖｉｔｒｏ」、Ａｎｔｉ−Ｃａｎｃｅ
ｒ Ｄｒｕｇｓ ８，１２５−１４０（１９９７））、ＶＸ−８５３（［米国特
許第５，５４３，４２３号］［ＡＣＳ ＃ １９０４５４−５８−１］、ＡＨＣ
−５２（メチル２−（Ｎ−ベンジル−Ｎ−メチルアミノ）エチル−２，６−ジメ
チル−４−（２−イソプロピルピラゾロ［１，５−ａ］ピリジン−３−イル）−
１，４−ジヒドロピリジン（ｄｉｈｙｒｏｐｙｒｉｄｉｎｅ）−３，５−ジカル
ボキシレート；［日本国特許６３−１３５３８１；欧州特許０２７０９２６］［
ＡＣＳ １１９６６６−０９−０］Ｓｈｉｎｏｄａら、「Ｉｎ ｖｉｖｏ ｃｉ
ｒｃｕｍｖｅｎｔｉｏｎ ｏｆ ｖｉｎｃｒｉｓｔｉｎｅ ｒｅｓｉｓｔａｎｃ
ｅ ｉｎ ｍｉｃｅ ｗｉｔｈ Ｐ３８８ ｌｅｕｋｅｍｉａ ｕｓｉｎｇ ａ
ｎｏｖｅｌ ｃｏｍｐｏｕｎｄ， ＡＨＣ−５２」、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ
４９：１７２２−６（１９８９）），ＧＦ−１２０９１８（９，１０−ジヒドロ
−５−メトキシ−９−オキソ−Ｎ−［４［２−（１，２，３，４−テトラヒドロ
−６，７−ジメトキシイソキノル−２−イル）エチル］フェニル］−４アクリジ
ンカルボキサミド、［米国特許第５，６０４，２３７号］［ＡＣＳ ＃ １４３
６６４−１１−３］Ｈｙａｆｉｌら、「Ｉｎ ｖｉｔｒｏ ａｎｄ ｉｎ ｖｉ
ｖｏ ｒｅｖｅｒｓａｌ ｏｆ ｍｕｌｔｉｄｒｕｇ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ
ｂｙ ＧＦ１２０９１８， ａｎ ａｃｒｉｄｏｎｅｃａｒｂｏｘａｍｉｄｅ
ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅ」、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ５３：４５９５−４６０２（
１９９３））、ならびにＸＲ−９０５１（３−［（３Ｚ，６Ｚ）−６−ベンジリ
デン−１−メチル−２，５−ジオキソピペラジン−３−イリデンメチル］−Ｎ−
［４−［２−（６，７−ジメトキシ−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリ
ン−２−イル）エチル］フェニル］ベンズアミドヒドロクロライド、［ＡＣＳ＃
５７−２２−７］）。
【０１４３】 反応物を全く標識することなく、化合物（例えば、ＡＢＣ２輸送体基質）が、
ＡＢＣ２輸送体と相互作用する能力を決定することもまた、本発明の範囲内であ
る。例えば、ミクロフィジオメーター（ｍｉｃｒｏｐｈｙｓｉｏｍｅｔｅｒ）を
、化合物もＡＢＣ２輸送体のいずれも標識することなく、その化合物とＡＢＣ２
輸送体の相互作用を決定するために使用し得る。ＭｃＣｏｎｎｅｌｌ，Ｈ．Ｍ．
ら（１９９２）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５７：１９０６−１９１２。本明細書におい
て使用する場合、「ミクロフィジオメーター」（例えば、Ｃｙｔｏｓｅｎｓｏｒ
）は、光−アドレス可能電位差測定センサー（ＬＡＰＳ）を使用して、細胞がそ
の環境を酸性化する速度を測定する分析機器である。この酸性化速度の変化を、
化合物とＡＢＣ２輸送体との間の相互作用の指標として使用し得る。
【０１４４】 別の実施形態において、アッセイは、細胞ベースのアッセイであり、これは、
ＡＢＣ２輸送体標的分子（例えば、ＡＢＣ２輸送体基質）を発現する細胞を、試
験化合物と接触させる工程、ならびにこの試験化合物が、ＡＢＣ２輸送体標的分
子の活性を調節（例えば、刺激または阻害）する能力を決定する工程を包含する
。この試験化合物が、ＡＢＣ２輸送体標的分子の活性を調節する能力の決定は、
例えば、ＡＢＣ２輸送体タンパク質が、ＡＢＣ２輸送体標的分子に結合またはこ
の標的分子と相互作用する能力を決定することによって、達成され得る。
【０１４５】 ＡＢＣ２輸送体タンパク質またはその生物学的に活性なフラグメントがＡＢＣ
２輸送体標的分子に結合するかまたはその標的分子と相互作用する能力の決定は
、直接的結合を決定するための上記方法の１つにより、達成され得る。好ましい
実施形態において、ＡＢＣ２輸送体タンパク質がＡＢＣ２輸送体標的分子に結合
するかまたはその標的分子と相互作用する能力の決定は、その標的分子の活性を
決定することにより、達成され得る。例えば、この標的分子の活性は、その標的
の細胞セカンドメッセンジャー（すなわち、細胞内Ｃａ2+、ジアシルグリセロー
ル、ＩＰ3など）の誘導を検出すること、適切な基質への標的の触媒活性／酵素
活性を検出すること、レポーター遺伝子（検出可能なマーカー（例えば、ルシフ
ェラーゼ）をコードする核酸に作動可能に連結された標的応答性調節エレメント
を含む）の誘導を検出すること、または例えば、参照化合物（例えば、神経毒性
ポリペプチド（例えば、β−アミロイド））の細胞性輸送を検出すること、ある
いは標的によって調節された細胞応答（例えば、細胞生存度、細胞分化、または
細胞増殖）を検出することにより、決定され得る。
【０１４６】 なお別の実施形態において、本発明のアッセイは、無細胞アッセイであり、Ａ
ＢＣ２輸送体タンパク質またはその生物学的に活性な部分を試験化合物に接触さ
せる工程、ならびにその試験化合物がＡＢＣ２輸送体タンパク質またはその生物
学的に活性な部分と結合する能力を決定する工程を包含する。本発明のアッセイ
において使用される、このＡＢＣ２輸送体タンパク質の、好ましい生物学的に活
性な部分としては、ＡＢＣ２輸送体ではない分子との相互作用に関与するフラグ
メント（例えば、高度な表面可能性（ｓｕｒｆａｃｅ ｐｒｏｂａｂｉｌｉｔｙ
）スコアを有するフラグメント（例えば、図２を参照のこと））が挙げられる。
この試験化合物の、ＡＢＣ２輸送体タンパク質への結合は、上記のように、直接
的または間接的にのいずれかで決定され得る。１つのこのような実施形態におい
て、このアッセイは、ＡＢＣ２輸送体タンパク質またはその生物学的に活性な部
分を、ＡＢＣ２輸送体を結合する公知の化合物に接触させて、アッセイ混合物を
形成する工程、このアッセイ混合物を試験化合物に接触させる工程、ならびにそ
の試験化合物がＡＢＣ２輸送体タンパク質と相互作用する能力を決定する工程を
包含し、ここで、この試験化合物がＡＢＣ２輸送体タンパク質と相互作用する能
力を決定する工程は、この試験化合物が、公知の化合物と比較して、ＡＢＣ２輸
送体、またはその生物学的に活性な部分と優先的に相互作用する能力を決定する
工程を包含する。
【０１４７】 さらに別の実施形態において、アッセイは、無細胞アッセイであり、ＡＢＣ２
輸送体タンパク質またはその生物学的に活性な部分を試験化合物と接触させる工
程、ならびにその試験化合物がＡＢＣ２輸送体タンパク質またはその生物学的に
活性な部分の活性を調節（例えば、刺激または阻害）する能力を決定する工程を
包含する。この試験化合物がＡＢＣ２輸送体の活性を調節する能力の決定は、例
えば、ＡＢＣ２輸送体タンパク質が、ＡＢＣ２輸送体標的分子に結合する能力を
、直接的結合の決定のための上記方法の１つによって決定することにより、達成
され得る。あるいは、例えば、ＡＴＰ結合を測定し得る。ＡＢＣ２輸送体タンパ
ク質がＡＢＣ２輸送体標的分子に結合する能力の決定がまた、リアルタイム生物
分子相互作用分析（Ｂｉｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ Ａｎ
ａｌｙｓｉｓ（ＢＩＡ））のような技術を使用して達成され得る。Ｓｊｏｌａｎ
ｄｅｒ，Ｓ．およびＵｒｂａｎｉｃｚｋｙ，Ｃ．（１９９１）Ａｎａｌ．Ｃｈｅ
ｍ．６３：２３３８〜２３４５、ならびにＳｚａｂｏら（１９９５）Ｃｕｒｒ．
Ｏｐｉｎ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．５：６９９〜７０５。本明細書において使
用する場合、「ＢＩＡ」とは、相互作用する物質を全く標識することなく、リア
ルタイムで生物特異的相互作用を研究するための技術である（例えば、ＢＩＡｃ
ｏｒｅ）。表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）の光学的現象の変化を、生物学的分子
間のリアルタイム反応の指標として使用し得る。
【０１４８】 代替の実施形態において、この試験化合物がＡＢＣ２輸送体タンパク質の活性
を調節する能力の決定は、ＡＢＣ２輸送体タンパク質が、ＡＢＣ２輸送体標的分
子の下流のエフェクターの活性をさらに調節する能力を決定することにより、達
成され得る。例えば、適切な標的に対するエフェクター分子の活性が上記のよう
に決定され得るか、または適切な標的に対するエフェクターの結合が上記のよう
に決定され得る。
【０１４９】 なお別の実施形態において、無細胞アッセイは、ＡＢＣ２輸送体タンパク質ま
たはその生物学的に活性な部分を、ＡＢＣ２輸送体タンパク質を結合する公知の
化合物に接触させてアッセイ混合物を形成する工程、このアッセイ混合物を試験
化合物と接触させる工程、ならびにこの試験化合物がＡＢＣ２輸送体タンパク質
と相互作用する能力を決定する工程を包含し、ここで、この試験化合物がＡＢＣ
２輸送体タンパク質と相互作用する能力の決定は、ＡＢＣ２輸送体タンパク質が
、ＡＢＣ２輸送体標的分子と優先的に結合するか、またはその標的分子の活性を
優先的に調節する能力を決定する工程を包含する。
【０１５０】 本発明の無細胞アッセイは、単離されたタンパク質（例えば、ＡＢＣ２輸送体
タンパク質、またはその生物学的に活性な部分）の、可溶性の形態および／また
は膜結合形態の両方の使用に受け入れられる。単離されたタンパク質の膜結合形
態を使用する無細胞アッセイの場合には、単離されたタンパク質の膜結合形態が
溶液中に維持されるように、可溶化剤を利用することが望ましくあり得る。この
ような可溶化剤の例には、非イオン性界面活性剤が挙げられ、例えば、ｎ−オク
チルグルコシド、ｎ−ドデシルグルコシド、ｎ−ドデシルマルトシド、オクタノ
イル−Ｎ−メチルグルカミド、デカノイル−Ｎ−メチルグルカミド、Ｔｒｉｔｏ
ｎ（登録商標）Ｘ−１００、Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）Ｘ−１１４、Ｔｈｅｓｉ
ｔ（登録商標）、イソトリデシルポリ（エチレングリコールエーテル）n（Ｉｓ
ｏｔｒｉｄｅｃｙｐｏｌｙ（ｅｔｈｙｌｅｎｅ ｇｌｙｃｏｌ ｅｔｈｅｒ）n
、３−（３−コラミドプロピル）ジメチルアンモニオ］−１−プロパンスルホネ
ート（３−（３−ｃｈｏｌａｍｉｄｏｐｒｏｐｙｌ）ｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｍｉ
ｎｉｏ］−１−ｐｒｏｐａｎｅ ｓｕｌｆｏｎａｔｅ）（ＣＨＡＰＳ）、３−（
３−コラミドプロピル）ジメチルアンモニオ］−２−ヒドロキシ−１−プロパン
スルホネート（３−（３−ｃｈｏｌａｍｉｄｏｐｒｏｐｙｌ）ｄｉｍｅｔｈｙｌ
ａｍｍｉｎｉｏ］−２−ｈｙｄｒｏｘｙ−１−ｐｒｏｐａｎｅ ｓｕｌｆｏｎａ
ｔｅ）（ＣＨＡＰＳＯ）、またはＮ−ドデシル＝Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−アンモ
ニオ−１−プロパンスルホネート、である。
【０１５１】 本発明の上記アッセイ方法の１つより多い実施形態において、ＡＢＣ２輸送体
またはその標的分子のいずれかを固定して、そのタンパク質の一方または両方の
非複合形態からの複合形態の分離を促進し、そしてそのアッセイの自動化に適用
させることが、望ましくあり得る。試験化合物の、ＡＢＣ２輸送体タンパク質へ
の結合、または候補化合物の存在下および非存在下での、ＡＢＣ２輸送体タンパ
ク質の標的分子との相互作用は、これらの反応物を収容するために適切な任意の
容器内で、達成され得る。このような容器の例には、マイクロタイタープレート
、試験管、および微小遠心管が挙げられる。１つの実施形態において、そのタン
パク質の一方または両方がマトリックスに結合することを可能にするドメインを
付加する融合タンパク質が、提供され得る。例えば、グルタチオン−Ｓ−トラン
スフェラーゼ／ＡＢＣ２輸送体融合タンパク質またはグルタチオン−Ｓ−トラン
スフェラーゼ／標的融合タンパク質は、グルタチオンセファロースビーズ（Ｓｉ
ｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）またはグルタチオン誘導
体化マイクロタイタープレート上に吸着され得、次いでこれらは、試験化合物と
合わせられるか、あるいは試験化合物と、吸着されない標的タンパク質、または
ＡＢＣ２輸送体タンパク質のいずれかと合わせられ、そしてこの混合物が、複合
体形成に貢献する条件下（例えば、塩およびｐＨに関して生理学的条件）でイン
キュベートされる。インキュベーションに続いて、ビーズまたはマイクロタイタ
ープレートウェルを洗浄して、結合していないあらゆる成分を除去し、ビーズの
場合にはマトリックスを固定し、例えば上記のように、複合体を直接的または間
接的のいずれかで決定する。あるいは、複合体がマトリックスから解離され得、
そしてＡＢＣ２輸送体の結合レベルまたは活性レベルを、標準的な技術を使用し
て決定し得る。
【０１５２】 タンパク質をマトリックス上に固定化するための他の技術がまた、本発明のス
クリーニングアッセイに使用され得る。例えば、ＡＢＣ２トランスポータータン
パク質またはＡＢＣ２トランスポーター標的分子のいずれかは、ビオチンおよび
ストレプトアビジンの結合体を用いて固定化され得る。ビオチン化ＡＢＣ２トラ
ンスポータータンパク質または標的分子は、当該分野で公知の技術を用いて（例
えば、ビオチン化キット、Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ、Ｒｏｃｋｆｏｒ
ｄ、ＩＬ）ビオチン−ＮＨＳ（Ｎ−ヒドロキシ−スクシンイミド）から調製され
得、そしてストレプトアビジンコートされた９６ウェルプレート（Ｐｉｅｒｃｅ
Ｃｈｅｍｉｃａｌ）のウェルに固定化される。あるいは、ＡＢＣ２トランスポ
ータータンパク質または標的分子と反応するがＡＢＣ２トランスポータータンパ
ク質のその標的分子への結合は妨害しない抗体が、プレートのウェルに誘導され
得、そして未結合の標的またはＡＢＣ２トランスポータータンパク質は、抗体結
合によってウェルに捕捉される。このような複合体を検出するための方法は、Ｇ
ＳＴ固定化複合体に関する上記のものに加えて、ＡＢＣ２トランスポータータン
パク質または標的分子と反応性の抗体を用いる複合体の免疫検出、ならびに、Ａ
ＢＣ２トランスポータータンパク質または標的分子と関連する酵素活性を検出す
ることに依存する酵素結合アッセイが挙げられる。
【０１５３】 別の実施形態において、ＡＢＣ２トランスポーター発現のモジュレーターは、
細胞が候補化合物と接触され、そしてその細胞におけるＡＢＣ２トランスポータ
ーｍＲＮＡまたはＡＢＣ２トランスポータータンパク質の発現が決定される方法
において同定される。候補化合物の存在下でのＡＢＣ２トランスポーターｍＲＮ
ＡまたはＡＢＣ２トランスポータータンパク質の発現レベルは、候補化合物の非
存在下でのＡＢＣ２トランスポーターｍＲＮＡまたはＡＢＣ２トランスポーター
タンパク質の発現レベルと比較される。次いで、この候補化合物は、この比較に
基づくＡＢＣ２トランスポーター発現のモジュレーターとして同定され得る。例
えば、ＡＢＣ２トランスポーターｍＲＮＡまたはＡＢＣ２トランスポータータン
パク質の発現が候補物質の非存在下よりも候補物質の存在下において大きい（統
計学的に有意に大きい）場合、この候補化合物は、ＡＢＣ２トランスポーターｍ
ＲＮＡ発現またはＡＢＣ２トランスポータータンパク質発現の刺激因子として同
定される。あるいは、ＡＢＣ２トランスポーターｍＲＮＡまたはＡＢＣ２トラン
スポータータンパク質の発現が候補物質の非存在下よりも候補物質の存在下にお
いて小さい（統計学的に有意に小さい）場合、この候補化合物は、ＡＢＣ２トラ
ンスポーターｍＲＮＡ発現またはＡＢＣ２トランスポータータンパク質発現のイ
ンヒビターとして同定される。細胞におけるＡＢＣ２トランスポーターｍＲＮＡ
発現またはＡＢＣ２トランスポータータンパク質発現のレベルは、ＡＢＣ２トラ
ンスポーターｍＲＮＡまたはＡＢＣ２トランスポータータンパク質を検出するた
めの本明細書中に記載される方法によって決定され得る。
【０１５４】 本発明のさらに別の局面において、ＡＢＣ２トランスポータータンパク質は、
ツーハイブリッドアッセイまたはスリーハイブリッドアッセイにおいて「ベイト
タンパク質」として使用され得（例えば、米国特許第５，２８３，３１７号；Ｚ
ｅｒｖｏｓら（１９９３）Ｃｅｌｌ ７２：２２３−２３２；Ｍａｄｕｒａら（
１９９３）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６８：１２０４６−１２０５４；Ｂａｒ
ｔｅｌら（１９９３）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ １４：９２０−９２４；Ｉ
ｗａｂｕｃｈｉら（１９９３）Ｏｎｃｏｇｅｎｅ ８：１６９３−１６９６；な
らびにＢｒｅｎｔ Ｗ０９４／１０３００を参照のこと）、ＡＢＣ２トランスポ
ーターと結合するかまたは相互作用し、ＡＢＣ２トランスポーター活性に関与す
る他のタンパク質（「ＡＢＣ２結合タンパク質」または「ＡＢＣ２−ｂｐ」）を
同定する。このようなＡＢＣ２結合タンパク質はまた、おそらくＡＢＣ２トラン
スポータータンパク質またはＡＢＣ２トランスポーター標的によるシグナルの伝
播（例えば、ＡＢＣ２媒介シグナル伝達経路の下流経路）に関与する。あるいは
、このようなＡＢＣ２結合タンパク質は、おそらくＡＢＣ２トランスポーターイ
ンヒビターである。
【０１５５】 ツーハイブリッドシステムは、ほとんどの転写因子（これは、分離可能なＤＮ
Ａ結合ドメインおよび活性化ドメインからなる）の調節性性質に基づく。簡単に
いうと、このアッセイは、２つの異なるＤＮＡ構築物を使用する。１つの構築物
において、ＡＢＣ２トランスポータータンパク質をコードする遺伝子が、既知の
転写因子（例えば、ＧＡＬ−４）のＤＮＡ結合ドメインをコードする遺伝子に融
合される。他方の構築物において、ＤＮＡ配列のライブラリー由来の、同定され
ていないタンパク質（「プレイ」または「サンプル」）をコードするＤＮＡ配列
は、既知の転写因子の活性化ドメインをコードする遺伝子に融合される。「ベイ
ト」タンパク質および「プレイ」タンパク質がインビボにおいてＡＢＣ２依存性
複合体を形成して相互作用し得る場合、この転写因子のＤＮＡ結合ドメインおよ
び活性化ドメインが、詰まった近接にもたらされる。この近接は、転写因子に応
答性である転写調節部位に作動可能に連結されるレポーター遺伝子（例えば、Ｌ
ａｃＺ）の転写を可能にする。レポーター遺伝子の発現が検出され得、そして機
能的転写因子を含む細胞コロニーが、単離されて、そしてＡＢＣトランスポータ
ータンパク質と相互作用するタンパク質をコードするクローン化遺伝子を得るた
めに使用され得る。
【０１５６】 別の局面において、本発明は、本明細書中に記載される２つ以上のアッセイの
組み合わせに関する。例えば、調節因子は、細胞ベースのアッセイまたは無細胞
アッセイを用いて同定され得、そしてこの因子がＡＢＣトランスポータータンパ
ク質の活性を調節する能力が、インビボ（例えば、動物中）で確認され得る。
【０１５７】 本発明はさらに、上記のスクリーニングアッセイによって同定された新規因子
に関する。従って、本明細書中に記載されるように同定された因子を適切な動物
モデルでさらに使用することは、本発明の範囲内である。例えば、本明細書中に
記載されるように同定された因子（例えば、ＡＢＣトランスポーター調節因子、
アンチセンスＡＢＣ２トランスポーター核酸分子、ＡＢＣ２特異的抗体、または
ＡＢＣ２結合パートナー）を動物モデルで使用して、そのような因子を用いた処
置の効果、毒性または副作用を決定し得る。あるいは、本明細書中に記載される
ように同定された因子を動物モデルで使用して、このような因子の作用機構を決
定し得る。さらに、本発明は、本明細書中に記載されるような処置に関する上記
のスクリーニングアッセイによって同定された新規因子の使用に関する。
【０１５８】 （Ｂ．検出アッセイ） 本明細書中に同定されるｃＤＮＡ配列（および対応する完全遺伝子配列）の一
部またはフラグメントを、ポリヌクレオチド試薬として多数の様式に使用し得る
。例えば、これらの配列は、以下のために使用され得る：（ｉ）そのそれぞれの
遺伝子を染色体上にマップし；このようにして、遺伝子疾患に関連した領域を配
置するため；（ｉｉ）微細な生物学的サンプルから個々を同定するため（組織型
決定（ｔｉｓｓｕｅ ｔｙｐｉｎｇ））；および（ｉｉｉ）生物学的サンプル中
の法医学的同定を補助するため。これらの適用は、以下の小区分に記載される。
【０１５９】 （１．染色体マッピング） 一旦遺伝子の配列（またはその配列の一部）が同定されると、この配列を使用
して、染色体上のこの遺伝子の位置がマップされ得る。このプロセスは、染色体
マッピングと呼ばれる。従って、本明細書中に記載されるＡＢＣ２トランスポー
ターヌクレオチド配列の一部またはフラグメントを使用して、染色体上のＡＢＣ
２トランスポーター遺伝子の位置がマップされ得る。ＡＢＣ２トランスポーター
配列の染色体へのマッピングは、これらの配列を疾患に関連する遺伝子と関連付
ける際に、重要な最初の工程である。
【０１６０】 簡単にいうと、ＡＢＣ２トランスポーター遺伝子は、ＡＢＣ２トランスポータ
ーヌクレオチド配列からＰＣＲプライマー（好ましくは１５〜２５長）を調製す
ることによって染色体にマップされ得る。ＡＢＣ２トランスポーター配列のコン
ピューター分析を使用して、ゲノムＤＮＡにおいて１つより多くのエキソンにま
たがらないプライマーが推定され得、従って、増幅プロセスを複雑にする。次い
で、これらのプライマーは、個々のヒト染色体を含む体細胞ハイブリッドのＰＣ
Ｒスクリーニングのために使用され得る。ＡＢＣトランスポーター配列に対応す
るヒト遺伝子を含むハイブリッドのみ、増幅フラグメントを生じる。
【０１６１】 体細胞ハイブリッドは、異なる哺乳動物（例えば、ヒト細胞およびマウス細胞
）由来の体細胞を融合することによって調製される。ヒト細胞およびマウス細胞
のハイブリッドが増殖され、そして分裂される場合、これらは徐々にヒト染色体
を無作為な順序で失うが、マウス染色体は保持する。マウス細胞は増殖し得ない
（なぜなら、これらは特定の酵素を欠くので）がヒト細胞は増殖し得る培地を用
いることによって、必要とされる酵素をコードする遺伝子を含むあるヒト染色体
が保持される。種々の培地を用いることによって、ハイブリッド細胞株のパネル
が樹立され得る。パネル中の各細胞株は、単一のヒト染色体または少数のヒト染
色体のいずれかおよび全セットのマウス染色体を含み、特定のヒト染色体に対す
る個々の遺伝子の簡便なマッピングを可能にする。（Ｄ Ｅｕｓｔａｃｈｉｏ
Ｐ．ら（１９８３）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２０：９１９−９２４）。ヒト染色体の
フラグメントのみを含む体細胞ハイブリッドはまた、転座および欠失を有するヒ
ト染色体を用いることによって生成され得る。
【０１６２】 体細胞ハイブリッドのＰＣＲマッピングは、特定の配列を特定の染色体に対し
て評価するための迅速な手順である。単一サーマルサイクラーを用いて、３つ以
上の配列が１日につき割り当てられ得る。ＡＢＣ２トランスポーターヌクレオチ
ド配列をオリゴヌクレオチドプライマーを設計するために使用して、部分局在化
が、特定の染色体由来のフラグメントのパネルを用いて達成され得る。ＡＢＣ２
トランスポーター配列をその染色体にマップするために単純に使用され得る他の
マッピングストラテジーとしては、インサイチュハイブリダイゼーション（Ｆａ
ｎ，Ｙ．ら（１９９０）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８７
：６２２３−２７によって記載される）、標識されたフロー分類される染色体を
用いたプレスクリーニング、および染色体特異的ｃＤＮＡライブラリーへのハイ
ブリダイゼーションによるプレセレクションが挙げられる。
【０１６３】 中期染色体スプレッドに対するＤＮＡ配列の蛍光インサイチュハイブリダイゼ
ーション（ＦＩＳＨ）がさらに使用されて、１工程で正確な染色体位置が提供さ
れ得る。染色体スプレッドは、紡錘体を崩壊するコルセミドのような化学物質に
よって分裂が中期でブロックされている細胞を用いて作製され得る。染色体は、
簡単にトリプシンを用いて処理され得、次いで、ギムザで染色される。明るいバ
ンドパターンおよび暗いバンドパターンが各染色体に対して発生され、その結果
、染色体は個々に同定され得る。ＦＩＳＨ技術は、５００〜６００塩基の短さの
ＤＮＡ配列を用いて使用され得る。しかし、１，０００塩基より大きいクローン
は、単一検出に関して十分なシグナル強度を伴う、特有の染色体位置に対するよ
り高い結合の尤度を有する。好ましくは、１，０００塩基、より好ましくは２，
０００塩基が、無理のない時間で良好な結果を得るのに十分である。この技術の
総説に関しては、Ｖｅｒｍａら、Ｈｕｍａｎ Ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅｓ：Ａ Ｍ
ａｎｕａｌ ｏｆ ＢＡＢＣ ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ
（Ｐｅｒｇａｍｏｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ １９８８）を参照のこと
。
【０１６４】 染色体マッピングのための試薬は、個々に使用されて単一染色体もしくはその
染色体の単一部位に印をつけるために使用され得るか、または、試薬のパネルは
、複数の部位および／もしくは複数の染色体に印をつけるために使用され得る。
この遺伝子の非コード領域に対応する試薬は、マッピング手順に対して実に好ま
しい。コード配列は、遺伝子ファミリー内でおそらくより保存され、従って、染
色体マッピングの間のクロスハイブリダイゼーションの機会は増加する。
【０１６５】 一旦配列が正確な染色体位置にマップされると、染色体上の配列の物理的な位
置は、遺伝子マップデータと相関され得る。（このようなデータは、例えば、Ｖ
．ＭｃＫｕｓｉｃｋ，Ｍｅｎｄｅｌｉａｎ Ｉｎｈｅｒｉｔａｎｃｅ ｉｎ Ｍ
ａｎ（Ｊｏｈｎｓ Ｈｏｐｋｉｎｓ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｗｅｌｃｈ Ｍｅ
ｄｉｃａｌ Ｌｉｂｒａｒｙを通してオンラインで利用可能）に見出される）。
同じ染色体領域にマップされた遺伝子と疾患との間の関係は、次いで、例えば、
Ｅｇｅｌａｎｄ，Ｊ．ら（１９８７）Ｎａｔｕｒｅ、３２５：７８３−７８７に
記載されるように、連結分析（物理的に隣接した遺伝子の同時遺伝形質）を介し
て同定され得る。
【０１６６】 さらに、ＡＢＣ２トランスポーター遺伝子と関連した疾患に冒された個体と冒
されていない個体との間のＤＮＡ配列における差異が、決定され得る。変異がこ
の冒された個体のいくつかまたは全体に観察されるが冒されていない個体のいず
れにも観察されない場合、この変異は、おそらくこの特定の疾患の原因因子であ
る。冒された個体と冒されていない個体の比較は、一般的に、最初に染色体の構
造変化（例えば、染色体スプレッドから可視であるかまたはそのＤＮＡ配列に基
づくＰＣＲを用いて検出可能である、欠失または転座）を探すことを含む。最後
に、いくつかの個体由来の遺伝子の完全な配列決定が実施され、変異の存在が確
認され、そして変異を多型から区別し得る。
【０１６７】 （２．組織型決定） 本発明のＡＢＣ２トランスポーター配列がまた使用されて、微小な生物学的サ
ンプルから個体を同定し得る。例えば、米国軍隊では、人員の同定のために制限
フラグメント長多型（ＲＦＬＰ）の使用を考慮している。この技術において、個
体のゲノムＤＮＡは、１つ以上の制限酵素を用いて消化され、そしてサザンブロ
ッドにプローブされ、同定のための特有のバンドを生じる。この方法は、現在の
制限である「ドッグタグ（Ｄｏｇ Ｔａｇ）」（これは、失われ得、スイッチさ
れ得、盗まれ得、陽性の同定を困難にする）の欠点をこうむらない。本発明の配
列は、ＲＦＬＰのためのさらなるＤＮＡマーカーとして有用である（米国特許第
５，２７２，０５７号に記載される）。
【０１６８】 さらに、本発明の配列が使用されて、個体ゲノムの選択された部分の、実際の
塩基毎のＤＮＡ配列を決定する代替技術を提供し得る。従って、本明細書中に記
載されるＡＢＣ２トランスポーターヌクレオチド配列が使用されて、この配列の
５’末端および３’末端由来の２つのＰＣＲプライマーが調製され得る。次いで
、これらのプライマーが使用されて、個々のＤＮＡを増幅し得、そしてこれを引
き続いて配列決定し得る。
【０１６９】 この様式で調製された個体由来の対応するＤＮＡ配列のパネルは、各個体が対
立遺伝子の差異に起因してこのようなＤＮＡ配列の特有なセットを有する場合、
特有の個体の同定を提供し得る。本発明の配列が使用されて、そのような同定配
列を、個体および組織から得ることができる。本発明のＡＢＣ２トランスポータ
ーヌクレオチド配列は、ヒトゲノムの一部を特有に示す。対立遺伝子改変体は、
これらの配列のコード領域にある程度で生じ、そして非コード領域により大きい
程度で生じる。個々のヒトの間の対立遺伝子改変体は、各５００塩基毎に約１回
の頻度で生じると概算される。本明細書中に記載される各配列は、ある程度、同
定目的のために比較され得る個体由来のＤＮＡに対する標準として使用され得る
。より大多数の多型が非コード領域に生じるので、より少ない配列が個体を区別
するために必要である。配列番号１の非コード配列は、おそらく１０〜１，００
０個のプライマー（各々は、１００塩基の非コード増幅配列を生じる）のパネル
を用いて陽性の個体同定を楽々と提供し得る。推定コード配列の場合、例えば配
列番号３中のものが使用され、陽性の個体同定のためのより適切な数のプライマ
ーは、５００〜２，０００である。
【０１７０】 本明細書中に記載されるＡＢＣ２トランスポーターヌクレオチド配列由来の試
薬のパネルが使用されて、個体のための特有の同定データベースを作製する場合
、これらの試薬は、個体から組織を同定するために後に使用され得る。特有の同
定データベースを使用して、（生きているかまたは死んでいる）個体の陽性同定
が、極度に小さい組織サンプルから作製され得る。
【０１７１】 （３．法生物学におけるＡＢＣ２トランスポーター配列の使用） ＤＮＡベースの同定技術はまた、法生物学に使用され得る。法生物学は、例え
ば、犯罪を犯した者を陽性に同定するための手段として、犯罪場面で見出された
生物学的証拠の遺伝子型決定を用いる科学分野である。そのような同定をなすた
めに、ＰＣＲ技術を使用して、犯罪場面で見出された組織（例えば、髪または皮
膚）または体液（例えば、血液、唾液、または精液）のような非常に小さい生物
学的サンプルから得られたＤＮＡ配列を増幅し得る。次いで、増幅された配列は
、標準と比較され、それによって、生物学的サンプル由来の同定を可能にする。
【０１７２】 本発明の配列を使用して、ヒトゲノムの特定の座位に対して標的化されたポリ
ヌクレオチド試薬（例えば、ＰＣＲプライマー）を提供し得、これは、例えば、
別の「同定マーカー」（すなわち、特定の個体に対して特有である別のＤＮＡ配
列）を提供することによってＤＮＡベースの法生物学の信頼性を増強し得る。上
記に言及されるように、実際の塩基配列情報は、制限酵素で作製されたフラグメ
ントによって形成されたパターンに対する正確な代替物として同定のために使用
され得る。配列番号１の非コード領域に対して標的化された配列は、非コード領
域に生じる大多数の多型の場合、この使用に特に適し、この技術を用いて個体を
分離することを容易にする。ポリヌクレオチド試薬の例としては、ＡＢＣ２トラ
ンスポーターヌクレオチド配列またはその部分（例えば、少なくとも２０塩基、
好ましくは少なくとも３０塩基の長さを有する配列番号１の非コード領域から由
来するフラグメント）が挙げられる。
【０１７３】 本明細書中に記載されるＡＢＣ２トランスポーターヌクレオチド配列はさらに
使用されて、特定の組織（例えば、脳組織）を同定するための、例えばインサイ
チュハイブリダイゼーション技術に使用され得る標識プローブまたは標識可能な
プローブのようなポリヌクレオチド試薬を提供する。これは、法病理学者が未知
起源の組織で示される場合、非常に有用であり得る。このようなＡＢＣ２トラン
スポータープローブのパネルは、種型および／または起源型によって組織を同定
するために使用され得る。
【０１７４】 同様に、これらの試薬（例えば、ＡＢＣ２トランスポータープライマーまたは
プローブ）は、夾雑物に関して組織培養物をスクリーニングするため（すなわち
、培養物中の異なる型の細胞混合物の存在に関するスクリーニング）に使用され
得る。
【０１７５】 （Ｃ．予防医薬） 本発明はまた、診断アッセイ、予後アッセイ、およびモニタリング臨床試験が
予後（予防）目的のために使用されて、それによって個々を予防的に処置する、
予防医薬の分野に関する。従って、本発明の１つの局面は、ＡＢＣ２トランスポ
ータータンパク質発現および／またはＡＢＣ２トランスポーター核酸発現ならび
にＡＢＣ２トランスポーター活性を決定するための診断アッセイに関し、生物学
的サンプル（例えば、血液、血清、細胞、組織）の文脈において、これらによっ
て、個体が異常または所望されないＡＢＣ２トランスポーターの発現または活性
と関連した、疾患または障害に苦しんでいるかどうか、あるいは個体が異常また
は所望されないＡＢＣ２トランスポーターの発現または活性と関連した障害を発
生する危険性があるかどうかが決定される。本発明はまた、個体がＡＢＣ２トラ
ンスポータータンパク質またはＡＢＣ２トランスポーター核酸の、発現または活
性と関連した障害を発生する危険性があるかどうかを決定するための予後（また
は予防）アッセイを提供する。例えば、ＡＢＣ２トランスポーター遺伝子中の変
異は、生物学的サンプルにおいてアッセイされ得る。このようなアッセイは、予
後目的または予防目的のために使用され得、これによって、ＡＢＣ２トランスポ
ータータンパク質またはＡＢＣ２トランスポーター核酸の、発現または活性によ
って特徴付けられる障害か、あるいはＡＢＣ２トランスポータータンパク質また
はＡＢＣ２トランスポーター核酸の、発現または活性と関連した障害の発症の前
に、個体を予防的に処置する。
【０１７６】 本発明の別の局面は、臨床試験中のＡＢＣ２トランスポーターの発現または活
性に対する、因子（例えば、薬物、化合物）の影響をモニタリングすることに関
する。
【０１７７】 これらの因子および他の因子は、以下の説により詳細に記載される。
【０１７８】 （１．診断アッセイ） 生物学的サンプル中のＡＢＣ２トランスポータータンパク質またはＡＢＣ２ト
ランスポーター核酸の存在または非存在を検出するための例示的な方法は、生物
学的サンプルを試験被験体から得る工程、およびこの生物学的サンプルをＡＢＣ
２トランスポータータンパク質もしくはＡＢＣ２トランスポータータンパク質を
コードする核酸（例えば、ｍＲＮＡ、ゲノムＤＮＡ）を検出し得る化合物または
因子と接触する工程を含み、その結果、ＡＢＣ２トランスポータータンパク質ま
たはＡＢＣ２トランスポーター核酸の存在が、生物学的サンプル中で検出される
。ＡＢＣ２トランスポーターｍＲＮＡまたはＡＢＣ２トランスポーターゲノムＤ
ＮＡを検出するための好ましい因子は、ＡＢＣ２トランスポーターｍＲＮＡまた
はＡＢＣ２トランスポーターゲノムＤＮＡにハイブリダイズし得る標識核酸プロ
ーブである。例えば、核酸プローブは、配列番号１の核酸のような全長ＡＢＣ２
トランスポーター核酸、またはその部分（例えば、少なくとも１５、３０、５０
、１００、２５０または５００ヌクレオチド長およびストリンジェントな条件下
でＡＢＣ２トランスポーターｍＲＮＡまたはＡＢＣ２トランスポーターゲノムＤ
ＮＡに特異的にハイブリダイズするに十分であるオリゴヌクレオチド）であり得
る。本発明の診断アッセイにおける使用のための他の適切なプローブは、本明細
書中に記載される。
【０１７９】 ＡＢＣ２トランスポータータンパク質を検出するための好ましい試薬は、ＡＢ
Ｃ２トランスポータータンパク質に結合し得る抗体、好ましくは、検出可能な標
識を有する抗体である。抗体は、ポリクローナル抗体、またはより好ましくはモ
ノクローナル抗体であり得る。インタクトな抗体またはそのフラグメント（例え
ば、ＦａｂまたはＦ（ａｂ’）2）が使用され得る。プローブまたは抗体に関し
て、用語「標識された」は、検出可能な基質のプローブまたは抗体への結合（す
なわち、物理的連結）によるプローブまたは抗体の直接標識、ならびに、直接標
識された別の試薬との反応性によるプローブまたは抗体の間接標識を含むことが
意図される。間接標識の例としては、蛍光標識された二次抗体を用いる一次抗体
の検出および蛍光標識されたストレプトアビジンで検出可能であり得るビオチン
を有するＤＮＡプローブの末端標識が挙げられる。用語「生物学的サンプル」は
、被験体から単離された組織、細胞および生物学的な液体、ならびに被験体内に
存在する組織、細胞および液体を含むことが意図される。すなわち、本発明の検
出方法は、生物学的サンプル中のＡＢＣ２トランスポーターのｍＲＮＡ、タンパ
ク質、またはゲノムＤＮＡを、インビトロならびにインビボで検出するために使
用され得る。例えば、ＡＢＣ２トランスポーターｍＲＮＡの検出のためのインビ
トロ技術としては、ノーザンハイブリダイゼーションおよびインサイチュハイブ
リダイゼーションが挙げられる。ＡＢＣ２トランスポータータンパク質の検出の
ためのインビトロ技術としては、酵素結合免疫吸収アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、ウ
ェスタンブロット、免疫沈降および免疫蛍光が挙げられる。ＡＢＣ２トランスポ
ーターゲノムＤＮＡの検出のためのインビトロ技術としては、サザンハイブリダ
イゼーションが挙げられる。さらに、ＡＢＣ２トランスポータータンパク質の検
出ためのインビボ技術としては、被験体に標識抗ＡＢＣ２トランスポーター抗体
を導入することが挙げられる。例えば、抗体は、被験体におけるその存在および
位置が標準的な画像技術によって検出され得る放射性マーカーを用いて標識され
得る。
【０１８０】 １つの実施形態において、生物学的サンプルは、試験被験体由来のタンパク質
分子を含む。あるいは、生物学的サンプルは、試験被験体由来のｍＲＮＡ分子ま
たは試験被験体由来のゲノムＤＮＡ分子を含み得る。好ましい生物学的サンプル
は、従来の手段によって被験体から単離された血清サンプルである。
【０１８１】 別の実施形態において、この方法はさらに、コントロール生物学的サンプルを
コントロール被験体から得る工程、このコントロールサンプルをＡＢＣ２トラン
スポーターのタンパク質、ｍＲＮＡ、またはゲノムＤＮＡを検出し得る化合物ま
たは因子と接触させて、その結果、ＡＢＣ２トランスポーターのタンパク質、ｍ
ＲＮＡまたはゲノムＤＮＡの存在が生物学的サンプル中で検出される工程、およ
びコントロールサンプル中のＡＢＣ２トランスポーターのタンパク質、ｍＲＮＡ
またはゲノムＤＮＡの存在を、試験サンプル中のＡＢＣ２トランスポーターのタ
ンパク質、ｍＲＮＡまたはゲノムＤＮＡの存在と比較する工程を包含する。
【０１８２】 本発明は、生物学的サンプル中のＡＢＣ２トランスポーターの存在を検出する
ためのキットもまた含む。例えば、このキットは、生物学的サンプル中のＡＢＣ
２トランスポータータンパク質またはＡＢＣ２トランスポーターｍＲＮＡを検出
し得る標識化合物または因子；このサンプル中のＡＢＣ２トランスポーターの量
を決定するための手段；およびこのサンプル中のＡＢＣ２トランスポーターの量
を標準と比較するための手段を含み得る。この化合物または因子は、適切な容器
中に梱包され得る。このキットはさらに、ＡＢＣ２トランスポータータンパク質
またはＡＢＣ２トランスポーター核酸を検出するためのキットを用いるための指
示書を含み得る。
【０１８３】 （２．予後アッセイ） 本明細書中に記載される診断アッセイはさらに、被験体が異常または所望され
ないＡＢＣ２トランスポーターの発現または活性と関連した、疾患または障害を
有するかどうか、あるいは被験体が異常または所望されないＡＢＣ２トランスポ
ーターの発現または活性と関連した障害を発生する危険性があるかどうかを同定
するために使用され得る。本明細書中に使用される場合、用語「異常（な）」と
は、野生型のＡＢＣ２トランスポーターの発現または活性から逸脱したＡＢＣ２
トランスポーターの発現または活性を含む。異常な発現または活性としては、増
加または減少した発現または活性、ならびに、野生型発育の発現パターンまたは
亜細胞の発現パターンに従わない発現または活性が挙げられる。例えば、異常な
ＡＢＣ２トランスポーターの発現または活性は、ＡＢＣ２トランスポーター遺伝
子の変異が抑制されていないかもしくは過剰発現されるＡＢＣ２トランスポータ
ー遺伝子を生じる場合、あるいは、そのような変異が機能的でないＡＢＣ２トラ
ンスポータータンパク質または野生型様式では機能しないタンパク質（例えば、
ＡＢＣ２トランスポーターリガンドと相互作用しないタンパク質または非ＡＢＣ
２トランスポーターリガンドと相互作用するタンパク質）を引き起こす状況を含
むことが意図される。本明細書中に使用される場合、用語「所望されない」とは
、生物学的応答に関与する所望されない現象を含む。例えば、この用語、所望さ
れない、は、被験体中で所望されないＡＢＣ２トランスポーターの発現または活
性を含む。
【０１８４】 本明細書中に記載されるアッセイ（例えば、先行するの診断アッセイまたは後
のアッセイは、ＡＢＣ２トランスポータータンパク質活性またはＡＢＣ２トラン
スポーター核酸発現における誤った調節に関連する障害を有するか、あるいは、
ＡＢＣ２トランスポータータンパク質活性またはＡＢＣ２トランスポーター核酸
発現における誤った調節に関連する障害を発生する危険性がある被験体を同定す
るために使用され得る。あるいは、予後アッセイが、ＡＢＣ２トランスポーター
タンパク質活性またはＡＢＣ２トランスポーター核酸発現における誤った調節に
関連する障害を有するか、あるいは、ＡＢＣ２トランスポータータンパク質活性
またはＡＢＣ２トランスポーター核酸発現における誤った調節に関連する障害を
発生する危険性がある被験体を同定するために使用され得る。従って、本発明は
、異常または所望されないＡＢＣ２トランスポーターの発現または活性と関連し
た、疾患または障害を同定するための方法を提供し、ここで、試験サンプルは、
被験体から得られ、そしてＡＢＣ２トランスポータータンパク質またはＡＢＣ２
トランスポーター核酸（例えば、ｍＲＮＡまたはゲノムＤＮＡ）が検出され、こ
こでＡＢＣ２トランスポータータンパク質またはＡＢＣ２トランスポーター核酸
の存在は、異常または所望されないＡＢＣ２トランスポーターの発現または活性
と関連した、疾患または障害を有するか、あるいは、異常または所望されないＡ
ＢＣ２トランスポーターの発現または活性と関連した、疾患または障害を発生す
る危険性がある被験体に関して診断的である。本明細書中に使用される場合、「
試験サンプル」は、目的の被験体から得られた生物学的サンプルをいう。例えば
、試験サンプルは、生物学的な液体（例えば、血清）、細胞サンプル、または組
織であり得る。
【０１８５】 さらに、本明細書中に記載される予後アッセイを使用して、被験体に薬剤（例
えば、アゴニスト、アンタゴニスト、ペプチド模倣物（ｐｅｐｔｉｄｏｍｉｍｅ
ｔｉｃ）、タンパク質、ペプチド、核酸、小分子、または他の薬物候補）を投与
して、異常なまたは望ましくないＡＢＣ２輸送体発現または活性に関連する疾患
または障害（例えば、癌細胞が多剤耐性を発生する癌）を処置し得るか否かを決
定し得る。従って、本発明は、被験体が、異常なまたは望ましくないＡＢＣ２輸
送体発現または活性に関連する障害のための薬剤を用いて、有効に処置され得る
か否かを決定するための方法を提供する。この方法において、試験サンプルが得
られ、そしてＡＢＣ輸送体タンパク質または核酸の発現または活性が検出される
（例えば、ここで、大量のＡＢＣ２輸送体タンパク質または核酸の発現または活
性は、異常なまたは望ましくないＡＢＣ２輸送体発現または活性に関連する障害
を処置するために薬剤を投与され得る被験体についての診断である）。
【０１８６】 本発明の方法をまた使用して、ＡＢＣ２輸送体遺伝子における遺伝的変化を検
出し、それによって変化した遺伝子を有する被験体に、ＡＢＣ２輸送体タンパク
質活性または核酸発現の調節不全によって特徴付けられる障害に対する危険性が
あるか否かを決定し得る。好ましい実施形態においては、この方法は、被験体由
来の細胞のサンプルにおいて、ＡＢＣ２タンパク質をコードする遺伝子の完全性
に影響を与える少なくとも１つの変化によって特徴付けられる、遺伝的変化の存
在または非存在、またはＡＢＣ２輸送体遺伝子の発現不全を検出する工程を包含
する。例えば、このような遺伝的変化は、以下のうちの少なくとも１つの存在を
確認することによって検出され得る：１）ＡＢＣ２輸送体遺伝子からの１以上の
ヌクレオチドの欠失；２）ＡＢＣ２輸送体遺伝子への１以上のヌクレオチドの付
加；３）ＡＢＣ２輸送体遺伝子の１以上のヌクレオチドの置換；４）ＡＢＣ２輸
送体遺伝子の染色体再配列；５）ＡＢＣ２輸送体遺伝子のメッセンジャーＲＮＡ
転写物のレベルにおける変化；６）ＡＢＣ２輸送体遺伝子の異常な改変（例えば
、ゲノムＤＮＡのメチル化パターン）；７）ＡＢＣ２輸送体遺伝子のメッセンジ
ャーＲＮＡ転写物の非野生型スプライシングパターンの存在；８）ＡＢＣ２タン
パク質の非野生型レベル；９）ＡＢＣ２輸送体遺伝子の対立遺伝子損失、および
１０）ＡＢＣ２タンパク質の不適切な翻訳後改変。本明細書中に記載されるよう
に、ＡＢＣ２輸送体遺伝子における変化を検出するために使用され得る、当該分
野において公知の多数のアッセイが存在する。好ましい生物学的サンプルは、被
験体から従来の手段によって単離された組織サンプルまたは血清サンプルである
。
【０１８７】 特定の実施形態においては、変化の検出は、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）
（例えば、米国特許第４，６８３，１９５号および同第４，６８３，２０２号を
参照のこと）（例えば、アンカーＰＣＲまたはＲＡＣＥ ＰＣＲ）、あるいは、
連結連鎖反応（ＬＣＲ）（例えば、Ｌａｎｄｅｇｒａｎら（１９８８）Ｓｃｉｅ
ｎｃｅ ２４１：１０７７−１０８０；およびＮａｋａｚａｗａら（１９９４）
Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９１：３６０−３６４を参照
のこと）におけるプローブ／プライマーの使用を含む。これらのうちの後者は、
ＡＢＣ２遺伝子における点変異を検出するために特に有用であり得る（Ａｂｒａ
ｖａｙａら（１９９５）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｒｅｓ．２３：６７５−６
８２を参照のこと）。この方法は、被験体から細胞のサンプルを収集する工程、
このサンプルの細胞から核酸（例えば、ゲノム、ｍＲＮＡまたは両方）を単離す
る工程、この核酸サンプルを、ＡＢＣ２遺伝子（存在する場合）のハイブリダイ
ゼーションおよび増幅が起こるような条件下で、ＡＢＣ２輸送体遺伝子に特異的
にハイブリダイズする１つ以上のプライマーと接触させる工程、ならびに増幅産
物の存在または非存在を検出する工程、または増幅産物のサイズを検出し、長さ
をコントロールサンプルと比較する工程、を包含し得る。ＰＣＲおよび／または
ＬＣＲは、本明細書中に記載される変異を検出するために使用される任意の技術
と組み合わせて、予備的な増幅工程として使用することが所望され得ることが予
測される。
【０１８８】 代替の増幅方法としては、以下が挙げられる：自己持続配列複製（Ｇｕａｔｅ
ｌｌｉ，Ｊ．Ｃ．ら、（１９９０）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ
ＳＡ ８７：１８７４−１８７８）、転写増幅系（Ｋｗｏｈ，Ｄ．Ｙ．ら、（１
９８９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：１１７３−１
１７７）、Ｑ−βレプリカーゼ（Ｌｉｚａｒｄｉ，Ｐ．Ｍ．ら、（１９８８）Ｂ
ｉｏ−Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ６：１１９７）、または任意の他の核酸増幅方法
、続いて当業者に周知の技術を用いた増幅された分子の検出。これらの検出スキ
ームは、このような分子が非常に少数で存在する場合に、核酸分子の検出のため
に特に有用である。
【０１８９】 代替の実施形態においては、サンプル細胞由来のＡＢＣ２輸送体遺伝子におけ
る変異は、制限酵素切断パターンにおける変化によって同定され得る。例えば、
サンプルおよびコントロールＤＮＡは、単離され、（必要に応じて）増幅され、
１つ以上の制限エンドヌクレアーゼで消化され、そしてゲル電気泳動によってフ
ラグメント長のサイズが決定され、そして比較される。サンプルとコントロール
ＤＮＡとの間のフラグメント長のサイズにおける差異は、サンプルＤＮＡにおけ
る変異を示す。さらに、配列特異的リボザイム（例えば、米国特許第５，４９８
，５３１号を参照のこと）の使用は、リボザイム切断部位の発生または損失によ
る特定の変異の存在を記録するために使用され得る。
【０１９０】 他の実施形態においては、ＡＢＣ２輸送体における遺伝的変異は、サンプルお
よびコントロール核酸（例えば、ＤＮＡまたはＲＮＡ）を、数百または数千のオ
リゴヌクレオチドプローブを含む高密度アレイにハイブリダイズすることによっ
て同定され得る（Ｃｒｏｎｉｎ，Ｍ．Ｔ．ら（１９９６）Ｈｕｍａｎ Ｍｕｔａ
ｔｉｏｎ ７：２４４−２５５；Ｋｏｚａｌ，Ｍ．Ｊ．ら（１９９６）Ｎａｔｕ
ｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ２：７５３−７５９）。例えば、ＡＢＣ２輸送体にお
ける遺伝的変異は、Ｃｒｏｎｉｎ，Ｍ．Ｔ．ら（前出）に記載されるような発光
ＤＮＡプローブを含む２次元アレイで同定され得る。簡潔には、プローブの第１
のハイブリダイゼーションアレイは、サンプルおよびコントロールにおけるＤＮ
Ａの長いストレッチを介して走査して、配列重複プローブの線形アレイを作製す
ることによって配列間の塩基変化を同定するために使用され得る。この工程は、
点変異の同定を可能にする第２のハイブリダイゼーションアレイである。この工
程の後は、検出されるすべての改変体または変異体に対して相補的な、より小さ
な、特定のプローブアレイを用いることによって、特定の変異体の特徴付けを可
能にする。各変異アレイは、パラレルなプローブセットで構成され、１つは野生
型遺伝子に対して相補的であり、他方は、変異遺伝子に対して相補的である。
【０１９１】 なお別の実施形態においては、当該分野で公知の任意の種々の配列決定反応を
使用して、ＡＢＣ２輸送体遺伝子を直接配列決定し、サンプルＡＢＣ２輸送体の
配列と対応する野生型（コントロール）配列とを比較することによって変異を検
出し得る。配列決定反応の例としては、ＭａｘａｍおよびＧｉｌｂｅｒｔ（（１
９７７）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７４：５６０）また
はＳａｎｇｅｒ（（１９７７）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ
７４：５４６３）によって開発された技術に基づく方法が挙げられる。任意の
種々の自動化された配列決定手順（質量分析法による配列決定（例えば、ＰＣＴ
国際公開番号ＷＯ９４／１６１０１；Ｃｏｈｅｎら（１９９６）Ａｄｖ．Ｃｈｒ
ｏｍａｔｏｇｒ．３６：１２７−１６２；およびＧｒｉｆｆｉｎら（１９９３）
Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．３８：１４７−１５９を参
照のこと）を含む）は、診断アッセイを行う場合に使用され得る（（１９９５）
Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ １９：４４８）。
【０１９２】 ＡＢＣ２輸送体遺伝子における変異を検出するための他の方法としては、ＲＮ
Ａ／ＲＮＡヘテロまたはＲＮＡ／ＤＮＡヘテロ二重鎖におけるミスマッチの塩基
を検出するために切断剤からの保護が使用される方法（Ｍｙｅｒｓら（１９８５
）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３０：１２４２）が挙げられる。一般的に、「ミスマッチ
切断」の技術分野は、野生型ＡＢＣ２輸送体配列を含む（標識）ＲＮＡまたはＤ
ＮＡを、組織サンプルから得られた潜在的な変異ＲＮＡまたはＤＮＡとハイブリ
ダイズすることによって形成されたヘテロ二重鎖を提供することによって開始す
る。二本鎖二重鎖は、二重鎖の一本鎖領域（例えば、コントロール鎖とサンプル
鎖との間の塩基対ミスマッチにより存在する領域）を切断する薬剤で処理される
。例えば、ＲＮＡ／ＤＮＡ二重鎖は、ＲＮａｓｅで処理され、そしてＤＮＡ／Ｄ
ＮＡハイブリッドは、Ｓ１ヌクレアーゼで処理されて、ミスマッチした領域を酵
素的に消化し得る。他の実施形態においては、ＤＮＡ／ＤＮＡ二重鎖またはＲＮ
Ａ／ＤＮＡ二重鎖のいずれかは、ミスマッチした領域を消化するために、ヒドロ
キシルアミンまたは四酸化オスミウムおよびピペリジンで処理され得る。ミスマ
ッチした領域の消化後、次いで、得られる物質は、変性ポリアクリルアミドゲル
上でサイズによって分離され、変異の部位が決定される。例えば、Ｃｏｔｔｏｎ
ら（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：４３９
７；Ｓａｌｅｅｂａら（１９９２）Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．２１７：
２８６−２９５を参照のこと。好ましい実施形態においては、コントロールＤＮ
ＡまたはＲＮＡは、検出のために標識され得る。
【０１９３】 なお別の実施形態においては、細胞のサンプル由来のＡＢＣ２輸送体ｃＤＮＡ
における点変異を検出およびマッピングするために、規定されたシステムにおい
て、ミスマッチ切断反応は、二本鎖ＤＮＡにおけるミスマッチの塩基対を認識す
る１以上のタンパク質（いわゆる「ＤＮＡミスマッチ修復」酵素）を使用する。
例えば、Ｅ．ｃｏｌｉのｍｕｔＹ酵素は、Ｇ／ＡミスマッチにおいてＡを切断し
そしてＨｅＬａ細胞由来のチミジンＤＮＡグリコシラーゼは、Ｇ／Ｔミスマッチ
においてＴを切断する（Ｈｓｕら（１９９４）Ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ
１５：１６５７−１６６２）。例示的な実施形態に従って、ＡＢＣ２輸送体配列
（例えば、野生型ＡＢＣ２輸送体配列）に基づくプローブは、試験細胞由来のｃ
ＤＮＡまたは他のＤＮＡ産物にハイブリダイズする。二重鎖は、ＤＮＡミスマッ
チ修復酵素で処理され、そして切断生成物は、存在する場合、電気泳動プロトコ
ルなどにより検出され得る。例えば、米国特許第５，４５９，０３９号を参照の
こと。
【０１９４】 他の実施形態においては、電気泳動移動における変化は、ＡＢＣ２輸送体遺伝
子における変異を同定するために使用される。例えば、一本鎖高次構造多型（Ｓ
ＳＣＰ）を使用して、変異核酸と野生型核酸との間の電気泳動移動における差異
を検出し得る（Ｏｒｉｔａら（１９８９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃ
ｉ ＵＳＡ：８６：２７６６、Ｃｏｔｔｏｎ（１９９３）Ｍｕｔａｔ．Ｒｅｓ．
２８５：１２５−１４４；およびＨａｙａｓｈｉ（１９９２）Ｇｅｎｅｔ．Ａｎ
ａｌ．Ｔｅｃｈ．Ａｐｐｌ．９：７３−３９もまた参照のこと）。サンプルおよ
びコントロールＡＢＣ２輸送体核酸の一本鎖ＤＮＡフラグメントは、変性され、
そして再生される。一本鎖核酸の二次構造は、配列に従って変化し、電気泳動移
動において得られる変化は、単一の塩基の変化の検出でさえも可能にする。ＤＮ
Ａフラグメントは、標識されたプローブを用いて標識または検出され得る。この
アッセイの感度は、（ＤＮＡではなく）ＲＮＡを用いることによって高められ得
、そのＲＮＡの二次構造は、配列における変化に対してより敏感である。好まし
い実施形態においては、目的の方法は、ヘテロ二重鎖分析を使用して、電気泳動
移動における変化に基づいて二本鎖ヘテロ二重鎖分子を分離する（Ｋｅｅｎら（
１９９１）Ｔｒｅｎｄｓ Ｇｅｎｅｔ ７：５）。
【０１９５】 なお別の実施形態においては、変性剤の勾配を含むポリアクリルアミドゲルに
おける変異または野生型フラグメントの移動は、変性勾配ゲル電気泳動（ＤＧＧ
Ｅ）を用いてアッセイされる（Ｍｙｅｒｓら（１９８５）Ｎａｔｕｒｅ ３１３
：４９５）。ＤＧＧＥが分析方法として使用される場合、ＤＮＡは、完全に変性
しないことを確実にするために改変される（例えば、ＰＣＲにより、約４０ｂｐ
の高融点のＧＣリッチなＤＮＡのＧＣクランプを加えることによって）。さらな
る実施形態においては、変性勾配の代わりに温度勾配が使用され、コントロール
およびサンプルＤＮＡの移動における差異を同定する（Ｒｏｓｅｎｂａｕｍおよ
びＲｅｉｓｓｎｅｒ（１９８７）Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｃｈｅｍ ２６５：１２７５
３）。
【０１９６】 点変異を検出するための他の技術の例としては、選択的オリゴヌクレオチドハ
イブリダイゼーション、選択的増幅、または選択的プライマー伸長が挙げられる
が、これらに限定されない。例えば、オリゴヌクレオチドプライマーが調製され
得、ここで公知の変異が中心に配置され、次いで完全な一致が見出される場合の
みハイブリダイゼーションを可能にする条件下で、標的ＤＮＡにハイブリダイズ
する（Ｓａｉｋｉら（１９８６）Ｎａｔｕｒｅ ３２４：１６３；Ｓａｉｋｉら
（１９８９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ ＵＳＡ ８６：６２３０
）。このような対立遺伝子特異的オリゴヌクレオチドは、このオリゴヌクレオチ
ドがハイブリダイジング膜に付着し、標識標的ＤＮＡとハイブリダイズする場合
に、ＰＣＲ増幅された標的ＤＮＡまたは多くの異なる変異体にハイブリダイズす
る。
【０１９７】 あるいは、選択的ＰＣＲ増幅に基づく対立遺伝子特異的増幅技術は、本発明と
共に使用され得る。特定の増幅のためのプライマーとして使用されるオリゴヌク
レオチドは、分子の中心（その結果、増幅は差次的なハイブリダイゼーションに
依存する）（Ｇｉｂｂｓら（１９８９）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．
１７：２４３７−２４４８）、または適切な条件下でミスマッチがポリメラーゼ
伸長を防ぐかまたは減少させ得る、１つのプライマーの最端の３’末端（Ｐｒｏ
ｓｓｎｅｒ（１９９３）Ｔｉｂｔｅｃｈ １１：２３８）に目的の変異を有し得
る。さらに、変異の領域に新規な制限部位を導入し、切断に基づく検出を作製す
ることが所望され得る（Ｇａｓｐａｒｉｎｉら（１９９２）Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ
Ｐｒｏｂｅｓ ６：１）。特定の実施形態においては、増幅はまた、増幅のため
のＴａｑリガーゼを用いて行われ得ることが予想される（Ｂａｒａｎｙ（１９９
１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ ＵＳＡ ８８：１８９）。このよ
うな場合において、連結は、５’配列の３’末端において完全な一致が存在する
場合にのみ起こり、増幅の存在または非存在を探すことによって、特定の部位に
おける公知の変異の存在を検出することを可能にする。
【０１９８】 本明細書中に記載される方法は、例えば、少なくとも１つの本明細書中に記載
されるプローブ核酸または抗体試薬を含む、予めパッケージングされた診断キッ
トを用いることによって行われ得、このキットは、例えば、症状を表しているか
、または疾患もしくは疾病の家族歴がＡＢＣ２輸送体遺伝子に関与している患者
を診断するための臨床的状況において、都合よく使用され得る。
【０１９９】 さらに、ＡＢＣ２輸送体が発現される任意の細胞型または組織は、本明細書中
に記載される予後アッセイにおいて使用され得る。
【０２００】 （３．臨床試験の間の効果のモニタリング） 薬剤（例えば、薬物）のＡＢＣ２輸送体タンパク質の発現または活性に対する
影響のモニタリングは、ＡＢＣ２輸送体薬物スクリーニングのみでなく、臨床試
験においても適用され得る。例えば、本明細書中に記載されるようなスクリーニ
ングアッセイによって決定された薬剤の、ＡＢＣ２輸送体遺伝子発現、タンパク
質レベルを増加させるか、またはＡＢＣ２輸送体活性を上方制御する効果は、減
少したＡＢＣ２輸送体遺伝子発現、タンパク質レベル、または下方制御されたＡ
ＢＣ２輸送体活性を示している被験体の臨床試験においてモニターされ得る。あ
るいは、スクリーニングアッセイによって決定された薬剤の、ＡＢＣ２輸送体遺
伝子発現、タンパク質レベルを減少させるか、またはＡＢＣ２輸送体活性を下方
制御する効果は、増加したＡＢＣ２輸送体遺伝子発現、タンパク質レベル、また
は上方制御されたＡＢＣ２輸送体活性を示している被験体の臨床試験においてモ
ニターされ得る。このような臨床試験においては、ＡＢＣ２輸送体遺伝子、およ
び好ましくは、例えば、ＡＢＣ２関連障害に関係してきた他の遺伝子の発現また
は活性は、特定の細胞の表現型の「読み取り（ｒｅａｄ ｏｕｔ）」またはマー
カーとして使用され得る。
【０２０１】 例えば、そして限定のためではなく、（例えば、本明細書中に記載されるよう
なスクリーニングアッセイにおいて同定された）ＡＢＣ２輸送体活性を調節する
薬剤（例えば、化合物、薬物または小分子）で処置することによって、細胞にお
いて調節される遺伝子（ＡＢＣ２を含む）が、同定され得る。従って、例えば、
臨床試験において、ＡＢＣ２関連障害に対する薬剤の効果を研究するために、細
胞が単離され得、そしてＲＮＡが調製され、ＡＢＣ２輸送体およびＡＢＣ２関連
障害に関係する他の遺伝子の発現レベルについてそれぞれ分析され得る。遺伝子
発現のレベル（例えば、遺伝子発現パターン）は、本明細書中に記載されるよう
なノーザンブロット分析またはＲＴ−ＰＣＲによって定量され得るか、あるいは
本明細書中に記載される方法のうちの１つにより生成されたタンパク質の量を測
定することによって、またはＡＢＣ２輸送体もしくは他の遺伝子の活性のレベル
を測定することによって定量され得る。このように、遺伝子発現パターンはマー
カーとして役立ち得、薬剤に対する細胞の生理学的応答を示す。従って、この応
答状態は、薬剤を用いた個体の処置の前、および処置の間の種々の時点において
決定され得る。
【０２０２】 好ましい実施形態においては、本発明は、薬剤（例えば、アゴニスト、アンタ
ゴニスト、ペプチド模倣物、タンパク質、ペプチド、核酸、小分子、または本明
細書中に記載されるスクリーニングアッセイによって同定された他の薬物候補）
を用いる被験体の処置の有効性をモニタリングするための方法を提供し、この方
法は以下の工程を包含する：（ｉ）薬剤の投与の前に、被験体から投与前（ｐｒ
ｅ−ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）サンプルを得る工程；（ｉｉ）投与前サン
プルにおけるＡＢＣ２輸送体タンパク質、ｍＲＮＡ、またはゲノムＤＮＡの発現
のレベルを検出する工程；（ｉｉｉ）被験体から１以上の投与後（ｐｏｓｔ−ａ
ｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）サンプルを得る工程；（ｉｖ）投与後サンプルに
おけるＡＢＣ２輸送体タンパク質、ｍＲＮＡ、またはゲノムＤＮＡの発現または
活性のレベルを検出する工程；（ｖ）投与前サンプルにおけるＡＢＣ２輸送体タ
ンパク質、ｍＲＮＡ、またはゲノムＤＮＡの発現または活性のレベルを、投与後
サンプルにおけるＡＢＣ２輸送体タンパク質、ｍＲＮＡ、またはゲノムＤＮＡと
比較する工程；ならびに（ｖｉ）従って、被験体への薬剤の投与を変更する工程
。例えば、薬剤の増加した投与は、ＡＢＣ２輸送体の発現または活性を、検出さ
れたよりも高いレベルにまで増加させるため（すなわち、薬剤の有効性を増加さ
せるため）に所望され得る。あるいは、薬剤の減少した投与は、ＡＢＣ２輸送体
の発現または活性を、検出されたよりも低いレベルにまで減少させるため（すな
わち、薬剤の有効性を減少させるため）に所望され得る。このような実施形態に
従って、ＡＢＣ２輸送体発現または活性は、観察可能な表現型応答の非存在下に
おいてさえ、薬剤の有効性の指標として使用され得る。
【０２０３】 （Ｄ．処置の方法：） 本発明は、異常なまたは望ましくないＡＢＣ２輸送体発現または活性に関連す
る障害の危険性がある（または感受性の）被験体、またはこのような障害を有し
ている被験体を処置する、予防方法および治療方法の両方を提供する。処置の予
防方法および治療方法の両方に関しては、このような処置は、薬理ゲノム学の分
野から得られる知識に基づいて、特別に変更または改変され得る。本明細書中で
使用される場合、「薬理ゲノム学」とは、臨床的開発および市場における薬物に
対する遺伝子配列決定、統計遺伝学、および遺伝子発現分析のようなゲノム技術
の適用をいう。より詳細には、この用語は、患者の遺伝子がどのようにその患者
の薬物に対する応答（例えば、患者の「薬物応答表現型」、または「薬物応答遺
伝子型」）を決定するかということの研究をいう。従って、本発明の別の局面は
、本発明のＡＢＣ２輸送体分子または個体の薬物応答遺伝子型に従うＡＢＣ２輸
送体調節因子のいずれかを用いて、個体の予防的処置または治療的処置を変更す
るための方法を提供する。薬理ゲノム学は、臨床医または医師が、この処置から
最も利益を受ける患者に対して予防的処置または治療的処置を標的とすること、
および毒性の薬物関連副作用を経験する患者の処置を避けることを可能にする。
【０２０４】 （１．予防方法） １つの局面においては、本発明は、被験体にＡＢＣ２輸送体、またはＡＢＣ２
輸送体発現もしくは少なくとも１つのＡＢＣ２活性を調節する薬剤を投与するこ
とによって、この被験体において、異常なまたは望ましくないＡＢＣ２輸送体発
現または活性に関連する疾患または状態を予防するための方法を提供する。異常
なまたは望ましくないＡＢＣ２輸送体発現または活性によって引き起こされるか
、あるいはこのような発現または活性に関与する疾患の危険性がある被験体は、
例えば、本明細書中に記載される診断アッセイもしくは予後アッセイのいずれか
またはそれらの組み合わせによって、同定され得る。予防的薬剤の投与は、ＡＢ
Ｃ２輸送体異常に特徴的な症状の出現の前に起こり得、その結果疾患または障害
が予防されるか、あるいはその進行が遅れる。ＡＢＣ２輸送体異常の型に依存し
て、例えば、ＡＢＣ２、ＡＢＣ２輸送体アゴニストまたはＡＢＣ２輸送体アンタ
ゴニスト薬剤が、被験体を処置するために使用され得る。適切な薬剤は、本明細
書中に記載されるスクリーニングアッセイに基づいて決定され得る。
【０２０５】 （２．治療方法） 本発明の別の局面は、治療目的のためにＡＢＣ２輸送体発現または活性を調節
する方法に関する。従って、例示的な実施形態においては、本発明の調節方法は
、細胞をＡＢＣ２輸送体またはその細胞に関連するＡＢＣ２輸送体タンパク質活
性のうちの１つ以上を調節する薬剤と接触させる工程を包含する。ＡＢＣ２輸送
体タンパク質活性を調節する薬剤は、本明細書中に記載されるような薬剤（例え
ば、核酸もしくはタンパク質、ＡＢＣ２輸送体タンパク質の天然に存在する標的
分子（例えば、ＡＢＣ２輸送体基質）、ＡＢＣ２輸送体抗体、ＡＢＣ２輸送体ア
ゴニストもしくはアンタゴニスト、ＡＢＣ２輸送体アゴニストもしくはアンタゴ
ニストのペプチド模倣物、または他の小分子）であり得る。１つの実施形態にお
いては、この薬剤は、１つ以上のＡＢＣ２輸送体活性を刺激する。このような刺
激薬剤の例としては、活性ＡＢＣ２輸送体タンパク質、および細胞に導入された
ＡＢＣ２輸送体をコードする核酸分子が挙げられる。別の実施形態においては、
この薬剤は、１以上のＡＢＣ輸送体活性を阻害する。このような阻害薬剤の例と
しては、アンチセンスＡＢＣ２輸送体核酸分子、抗ＡＢＣ２輸送体抗体、および
ＡＢＣ２輸送体インヒビターが挙げられる。これらの調節方法は、インビトロで
行われ得る（例えば、細胞を薬剤とともに培養することによって）か、あるいは
インビボで行われ得る（例えば、被験体に薬剤を投与することによって）。この
ように、本発明は、ＡＢＣ２輸送体タンパク質または核酸分子の異常なまたは望
ましくない発現または活性によって特徴付けられる疾患または障害に苦しむ個体
を処置する方法を提供する。１つの実施形態においては、この方法は、薬剤（例
えば、本明細書中に記載されるスクリーニングアッセイによって同定された薬剤
）、またはＡＢＣ２輸送体発現または活性を調節（上方制御または下方制御）す
る薬剤の組み合わせを投与する工程を包含する。別の実施形態においては、この
方法は、ＡＢＣ２輸送体タンパク質または核酸分子を、減少されたか、異常であ
るか、または望ましくないＡＢＣ２輸送体発現または活性を補正するための治療
として投与する工程を包含する。
【０２０６】 ＡＢＣ２輸送体活性の刺激は、ＡＢＣ２輸送体が異常に下方制御された状況お
よび／または増加したＡＢＣ２輸送体活性が有用な効果を有しているようである
状況において望ましい。例えば、ＡＢＣ２輸送体活性の刺激は、ＡＢＣ２輸送体
が下方制御された状況および／または増加したＡＢＣ２輸送体活性が有用な効果
を有しているようである状況において望ましい。同様に、ＡＢＣ２輸送体活性の
阻害は、ＡＢＣ２輸送体が異常に上方制御される状況および／または減少したＡ
ＢＣ２輸送体活性が有用な効果を有しているようである状況において望ましい。
【０２０７】 １つの実施形態においては、ＡＢＣ２輸送体活性を阻害することが見出された
薬剤は、別の治療と組み合わせて使用され、その結果、血液脳関門にわたるその
治療のターゲティングが達成される。
【０２０８】 （３．薬理ゲノム学） 本発明のＡＢＣ２輸送体分子、および本明細書中に記載されるスクリーニング
アッセイによって同定されたような、ＡＢＣ２輸送体活性（例えば、ＡＢＣ２輸
送体遺伝子発現）に対して刺激性の影響または阻害性の影響を有する薬剤または
調節因子は、異常なまたは望ましくないＡＢＣ２輸送体活性に関連するＡＢＣ２
関連障害を（予防的または治療的に）処置するために、個体に投与され得る。こ
のような処置と組み合わせて、薬理ゲノム学（すなわち、個体の遺伝子型とその
個体の外来化合物または薬物に対する応答との間の関係の研究）が考慮され得る
。治療剤の代謝における違いは、薬理学的に活性な薬物の用量と血中濃度との間
の関係を変更することによって、重篤な毒性または治療の失敗を導き得る。従っ
て、医師または臨床医は、ＡＢＣ２輸送体分子またはＡＢＣ２輸送体調節因子を
投与するか否かを決定する際、ならびにＡＢＣ２輸送体分子またはＡＢＣ２輸送
体調節因子を用いる処置の投薬量および／または治療レジメンを変更する際に、
関連する薬理ゲノム学研究において得られた知識を適用することを考慮し得る。
【０２０９】 薬理ゲノム学は、変更された薬物配置および罹患したヒトにおける異常な作用
のために、薬物に対する応答における臨床的に重要な遺伝的変化を扱う。例えば
、Ｅｉｃｈｅｌｂａｕｍ，Ｍ．ら（１９９６）Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｐｈａｒｍａ
ｃｏｌ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．２３（１０−１１）：９８３−９８５およびＬｉｎｄ
ｅｒ，Ｍ．Ｗ．ら（１９９７）Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ．４３（２）：２５４−２６
６を参照のこと。一般的に、２つの型の薬理ゲノム学的状態は区別され得る。遺
伝的状態は薬物が身体に作用する方法を変更する単一の因子（変更された薬物作
用）として伝達したか、または遺伝的状態は身体が薬物に作用する方法を変更す
る単一の因子（変更された薬物代謝）として伝達した。これらの薬理ゲノム学的
状態は、稀な遺伝的欠陥として、または天然に存在する多型としてのいずれかで
起こり得る。例えば、グルコース−６−ホスフェートデヒドロゲナーゼ欠乏（Ｇ
６ＰＤ）は、主な臨床的合併症が、酸化剤薬物（抗マラリア薬、スルホンアミド
、鎮痛薬、ニトロフラン）の摂取およびソラマメの消費の後の溶血である、一般
的な遺伝的酵素病である。
【０２１０】 薬物応答を推測する遺伝子を同定するためのゲノム薬理学的（ｐｈａｍａｃｏ
ｇｅｎｏｍｉｃｓ）アプローチ（「ゲノムワイド関連付け（ｇｅｎｏｍｅ−ｗｉ
ｄｅ ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ）」として公知）は既に公知の遺伝子関連マーカ
ー（例えばヒトゲノム上に６０，０００〜１００，０００の多型部位または可変
部位からなる「双対立」遺伝子（それらの各々が２つの改変体を有する））から
なるヒトゲノムの高解離地図に主に依存する。このような高解離遺伝子地図は、
特定の観察される薬物応答または副作用と関連するマーカーを同定するために、
第ＩＩ／ＩＩＩ相薬物試験に参加している統計学的に有意な数の患者の各々のゲ
ノムのマップと比較され得る。あるいは、このような高解離地図は、ヒトゲノム
中の数千万の公知の単一ヌクレオチド多型（ＳＮＰ）の組み合わせから作製され
得る。本明細書中で使用される場合、「ＳＮＰ」は、ＤＮＡのストレッチの単一
のヌクレオチド塩基に起こる一般的な変化である。例えば、ＳＮＰは、ＤＮＡの
１０００塩基毎に１回起こり得る。ＳＮＰは、疾患プロセスに関与し得るが、大
部分は、疾患関連性ではないかもしれない。このようなＳＮＰの発生に基づく、
遺伝子地図を考慮して個体を、それらの個々のゲノム中の特定のパターンのＳＮ
Ｐに依存して、遺伝的カテゴリーにグループ分けし得る。このような様式で、遺
伝的に類似した個体のグループに対して、このような遺伝的に類似した個体間の
共通の形質を考慮して治療レジメンを、あつらえ得る。
【０２１１】 あるいは、「候補遺伝子アプローチ（ｃａｎｄｉｄａｔｅ ｇｅｎｅ ａｐｒ
ｏａｃｈ）」と名づけられた方法は、薬物応答を推測する遺伝子を同定するのに
使用され得る。この方法によると、薬物標的をコードしている遺伝子が既知であ
る場合（例えば、本発明におけるＡＢＣ２トランスポータータンパク質）、その
遺伝子の全ての共通改変体を集団の中でかなり簡易に同定し得、遺伝子の一方の
改変体に対して他方の改変体を有することが特定の薬物応答に関与しているか否
かを決定し得る。
【０２１２】 具体的な例としては、薬物を代謝する酵素の活性が、薬物の作用の強さおよび
持続時間両方の主な決定因子である。薬物代謝酵素（例えばＮ−アセチルトラン
スフェラーゼ２（ＮＡＴ２）及びチトクロームＰ４５０酵素ＣＹＰ２Ｄ６及びＣ
ＹＰ２Ｃ１９）の遺伝的多型性の発見は、標準的または安全な用量の薬物を服用
した後、ある患者には、期待される薬物効果が得られず、薬物応答の悪化も、重
篤な毒性も示さないということがなぜ起こるのかの説明となってきた。これらの
多型性は集団中で二つの表現型、迅速代謝型（ＥＭ）および遅延代謝型（ＰＭ）
に発現される。異なる集団ではＰＭの有病率が異なる。例えば、ＣＹＰ２Ｄ６を
コードしている遺伝子は高度に多型性であり、ＰＭ中にいくつかの変異が同定さ
れており、その全てが機能性のＣＹＰ２Ｄ６欠如の原因となる。ＣＹＰ２Ｄ６お
よびＣＹＰ２Ｃ１９の遅延代謝型は標準用量を服用した際、悪化させる薬物反応
および副作用を非常に頻繁に経験する。代謝産物が活性な治療成分（ａｃｔｉｖ
ｅ ｔｈｒａｐｅｕｔｉｃ ｍｏｉｅｔｙ）である場合、ＰＭは治療応答を示さ
ない。コデインの鎮痛作用がＣＹＰ２Ｄ６が形成した代謝産物モルヒネにより媒
介されたことにより立証されたように、他の極端なものは標準の用量では反応し
ない、いわゆる超迅速代謝型と呼ばれる。近年、超迅速代謝の分子基準によりＣ
ＹＰ２Ｄ６遺伝子の増幅によることが同定された。
【０２１３】 あるいは、「遺伝子発現プロファイリング」と名づけられた方法は、薬物応答
を推測する遺伝子を同定するために利用され得る。例えば、薬物（例えば本発明
のＡＢＣ２輸送体分子またはＡＢＣ２輸送体修飾物質）を投与された動物の遺伝
子の発現は、毒性に関与する遺伝子経路が開いているか否かの指標となり得る。
【０２１４】 前述の一を超えるゲノム薬理学的アプローチから生み出される情報は、個体の
予防または治療の処置のための適切な投薬量と治療レジメンを決定するために使
用され得る。この知見は、投薬量または薬物選択に適用される際、有害な反応ま
たは治療の失敗をさけることができるため、本明細書中に示した１つの模範的ス
クリーニングアッセイにより同定された修飾因子のようなＡＢＣ２輸送体分子ま
たはＡＢＣ２輸送体修飾物質で被験体を処置した際に、治療効力および予防効力
を高め得る。
【０２１５】 本発明は、制限するものとして解釈されるべきでない以下の実施例によりさら
に例証される。
【０２１６】 （実施例） （実施例１：ヒトＡＢＣ２輸送体ｃＤＮＡの単離およびクローニング） 本実施例では、新規ヒトＡＢＣ２輸送体（すなわち、ヒトＡＢＣ２）をコード
している遺伝子の分離およびクローニングを示す。
【０２１７】 ヒトＡＢＣ２輸送体ｃＤＮＡ（すなわち、ＡＢＣ２）をポリメラーゼ連鎖反応
（ＰＣＲ）およびａｂｃ２（Ｇｅｎｅ Ｂａｎｋ 登録番号Ｘ７５９２７、Ｌｕ
ｃｉａｎｉ Ｍ．Ｆ．ら、（１９９４）Ｇｅｎｏｍｉｃｓ、２１、１５０−１５
９）と名づけられたＡＴＰ結合カセット輸送体の部分コード配列を含むマウスの
ヌクレオチド配列（マウスオルソログ）、および２つのヒト部分ヌクレオチド配
列（Ｇｅｎｅ Ｂａｎｋ 登録番号Ｕ１８２３５およびＡＢ０２８９８５、後者
は、Ｋｉｋｕｎｏら．，（１９９９）ＤＮＡ Ｒｅｓ．６，１９７−２０５によ
り記載される）から設計したプライマー（以下に示す）を用い単離した。
【０２１８】 単離された最初のＡＢＣ２ ｃＤＮＡフラグメント（ｈｓＡ２．０、図６参照
）は、５０９６塩基対（ｂｐ）のＣ−末端フラグメントで、オリゴヌクレオチド
Ｐ１およびＰ２（以下に定義、図６参照）を使用するヒト正常胎児脳のｃＤＮＡ
ライブラリー（Ｏｒｉｇｅｎｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｎｏ．ＬＬＦＢ−
１００１）に対して行われたポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）により得た。適切
な反応混合液（１０ｍＭトリス塩酸ｐＨ８．３、５０ｍＬ ＫＣｌ、１．５ｍＭ
ＭｇＣｌ2、各０．２ｍＭのｄＮＴＰ、各０．１μＭのプライマーＰ１および
Ｐ２、２％ＤＭＳＯ、１．２５ユニットのＡｍｐｌｉＴａｑ ＤＮＡ Ｐｏｌｙ
ｍｅｒａｓｅ（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ））中のｃＤＮＡライブラリーの５μ
ｌ（マスタープレート）または１μｌ（サブプレート）を用い、最終容量が２５
μｌとなるようにＰＣＲ反応を行った。サイクリングパラメーターは：９４℃２
分間の変性；９４℃３０秒間の変性、６０℃３０秒間のアニーリング、７２℃１
分間の伸長工程を３０サイクル；続いて、７２℃で５分間の最後の伸長であった
。自動ＤＮＡ配列決定機（ＬＩＣＯＲ）を用い、結果として合成されたヌクレオ
チド配列を得た。
【０２１９】 単離された２番目のＡＢＣ２ ｃＤＮＡフラグメント（Ａ２Ｒ１、図６参照）
は、１２４９ｂｐフラグメントであり、オリゴヌクレオチドＰ３及びｃＤＮＡラ
イブラリー（ＡＰ１、Ｃｌｏｎｔｅｃｈより）の５’および３’末端と連結した
アダプターに特異的なオリゴヌクレオチドを用い、ヒト通常胎児脳の二重鎖（ｄ
ｓ）ｃＤＮＡライブラリーに対して行った、５’ＲＡＣＥ ＰＣＲ（ｃＤＮＡ末
端ポリメラーゼ連鎖反応の高速増幅）により得た、オリゴヌクレオチドＰ４およ
びＰ５を、Ａ２Ｒ１フラグメントがｈｓＡ２．０ｃ ＤＮＡフラグメントの直接
上流の配列と連続し、かつこれを示すことを実証するために用いた。Ａ２Ｒ１お
よびｈｓ２．０クローンは、１６６ｂｐ重複する。
【０２２０】 前記の通常胎児脳の二重鎖（ｄｓ）ｃＤＮＡライブラリーは、１μｇのヒト通
常胎児脳のｐｏｌｙ（Ａ＋）ＲＮＡ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ ＃Ｄ６０３０−２
５）をＣｌｏｎｔｅｃｈ ＭＡＲＡＴＨＯＮ ｃＤＮＡ Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔ
ｉｏｎ Ｋｉｔ（＃Ｋ１８０２−１）に従い、第１鎖合成および第２鎖合成にか
けることで作製した。結果として得られた二重鎖のｃＤＮＡは生産者の使用説明
書にしたがって、フェノール−クロロフォルムで抽出し、アルコール沈殿し、二
重鎖ｃＤＮＡアダプターに結合させた。
【０２２１】 Ａ２Ｒ１を単離するために用いたＰＣＲ反応は、２μｌのｄｓ ｃＤＮＡおよ
びＣｌｏｎｔｅｃｈ Ａｄｖａｎｔａｇｅ ｃＤＮＡ ＰＣＲ Ｋｉｔ（＃Ｋ１
９０５−１）により提供され、かつこれに従う試薬を用いて、最終容量を２０μ
ｌとして行った。サイクリングパラメーターは：９４℃１分間の変性；９４℃で
３０秒間の変性、６０℃（Ｐ４、Ｐ５、Ｐ８およびＰ９）または７０℃（Ｐ３、
Ｐ７およびアダプターに特異的なプライマー）で３０秒間のアニーリング、７２
℃２分間の伸長を３０サイクル；続いて、７２℃で５分間の最後の伸長工程であ
った。
【０２２２】 単離された３番目のＡＢＣ２ ｃＤＮＡフラグメント（Ａ２Ｒ２）は、１１０
９ｂｐフラグメントであり、５’ＲＡＣＥ ＰＣＲ 産物を含むｐＢｌｕｅＳｃ
ｒｉｐｔ ＩＩ ｃＤＮＡライブラリーのスクリーニングにより得られた。５’
ＲＡＣＥ ＰＣＲ産物をオリゴヌクレオチドＰ６およびＡＰ１と前述したＰＣＲ
条件を用いて、ヒト正常脳のｄｓ ｃＤＮＡライブラリーから作製した。ヒト正
常成人の脳の二重鎖（ｄｓ）ｃＤＮＡライブラリーは、２．５μｇの正常ヒト正
常成人の脳の全ＲＮＡ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ＃Ｄ６０３０−０１）をオリゴヌ
クレオチドＰ５を用いた第１の鎖合成およびＣｌｏｎｔｅｃｈ ＭＡＲＡＴＨＯ
Ｎ ｃＤＮＡ Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｋｉｔ（＃Ｋ１８０２−１）によ
る第２の鎖合成にかけることにより作製した。二重鎖ｃＤＮＡを、生産者の説明
書に基いて二重鎖ｃＤＮＡアダプターを連結させる前にフェノール−クロロフォ
ルム抽出し、アルコール沈殿した。次いで、オリゴヌクレオチドＰ７およびＰ８
を、Ａ２Ｒ２フラグメントがＡ２Ｒ１ ｃＤＮＡフラグメントに隣接しており、
直接上流の配列を示すことを立証するために使用した。Ａ２Ｒ２とＡ２Ｒ１は４
７１ｂｐまで重複すると判明した（図６参照）。
【０２２３】
【表１】 次に、ｈｓＡ２．２と名づけた６７９２ｂｐのｃＤＮＡ（本明細書中発明とし
て示した全フラグメント）を生成するため、前述した３つのｃＤＮＡフラグメン
トを互いに連結させた。ｈｓＡ２．０と重複するｂｐフラグメント（Ａ２Ｒ１Ｒ
２）を生成するため、オリゴヌクレオチドＰ９及びＰ１０を用いた。Ａ２Ｒ１Ｒ
２およびｈｓＡ２．０を簡便なエンドヌクレアーゼ制限部位を用い融合させた。
【０２２４】 結果として得られた６７９２ｂｐのクローンを５’および３’の非翻訳領域（
ＵＴＲ）に加えてヒトＡＢＣ２輸送体遺伝子をコードしている配列を含むことが
判明した。ヒトＡＢＣ２輸送体タンパク質をコードしているヌクレオチド配列を
図１に示し、配列番号１として示す。ヒトＡＢＣ輸送体の最も長いオープンリー
ディングフレームは、９１番目のヌクレオチド位置でコンセンサスの真核生物翻
訳開始モチーフと適合する配列ＡＡＣＡＴＧＡで始まり、６０９４番目のＴＧＡ
終結シグナルにより終了する。配列番号１のコード領域（オープンリーディング
フレーム）は配列番号３として示される。推定されるポリアデニル化信号（ＡＡ
ＴＡＡＡＴＡＡ）は６７７２番目の３’非翻訳領域に位置する（図１）。１番目
のインフレームＡＴＧから始まり、オープンリーディングフレームは２００１個
のアミノ酸の２２３ｋＤａの分子量を有するポリペプチドをコードしていると予
測される。ポリペプチドの全長のアミノ酸配列を図２に示し、配列番号２に規定
する。
【０２２５】 （実施例２：新規ヒトＡＢＣ２輸送体分子の特徴づけ） 本実施例では、ヒトＡＢＣ２輸送体ポリペプチドのアミノ酸配列を既知のポリ
ペプチドのアミノ酸配列と比較し、そして種々のモチーフを同定した。
【０２２６】 特に、単離したクローンの核酸配列（および推測したアミノ酸配列）と公的に
利用可能なデータベース（例えばＧｅｎＢａｎｋ）で見出した他の配列との比較
によって、ｃＤＮＡフラグメントｈｓＡ２．０により表されたヒトＡＢＣ２クロ
ーンの領域はマウスａｂｃ２、ヒトＡＢＣＲおよびヒトＡＢＣｌのヌクレオチド
配列と相同性を共有している（各々８５％、６５％および６７％；非重複性のＧ
ｅｎＢａｎｋ＋ＥＭＢＬ＋ＤＤＢＪ＋ＰＤＢ配列に対するＢＬＡＳＴｎプログラ
ム）ことが判明した。ｈｓＡ２．０翻訳産物はマウスａｂｃ２（各々、非重複性
のＳｗｉｓｓ Ｐｒｏｔ配列に対するＧｌｏｂａｌ Ｐａｉｒｗｉｓｅ Ｃｌｕ
ｓｔａｌＷ ＡｌｉｇｎｍｅｎｔとＢＬＡＳＴｓプログラム）と９２％から９６
％のアミノ酸の同一性を共有しているポリペプチドである。したがって、クロー
ンｈｓＡ２．０はヒトＡＢＣ２輸送体および３’ＵＴＲ配列の一部をコードして
いることが判明した。ＧｅｎＢａｎｋ ＥＳＴ Ｄｉｖｉｓｉｏｎの非重複性の
データベースに対してＢＬＡＳＴｎプログラムを用い、ヒトＡＢＣ２遺伝子の３
’フラグメント（ｈｓＡ２．０、図６参照）が、少なくとも３２のヒト発現配列
タグ（ＥＳＴ）の配列との同一性があると見出す。これらＥＳＴのＧｅｎＢａｎ
ｋ登録番号はＡＩ１３９８０８、Ｔ３３９１９、Ｗ６９９２８、Ｒ８５２６５、
Ｈ３９０４５、Ｒ４４７９８、Ｆ１２８２９、Ｔ７４９７４、Ｒ６１６８８、Ｈ
１４４６５、Ｒ８３１３２、ＡＩ４９１９６２、Ｔ３１５７４、Ｍ７８０５６、
Ｗ６９７４７、Ｔ６５４３２、ＡＩ２４７２０３、Ｈ０５２４４、Ｈ１４２９９
、Ｚ１９１３３、ＡＡ５７３０６１、Ｒ１９１３３、Ｒ６１６８９、ＡＡ３５１
６２６、Ｒ２０４８１、ＡＡ３５１６２５、ＡＡ３２４８１７，ＡＡ７０２９６
８、Ｍ７８４８４、Ｒ４５３０４、ＡＩ５６７６１９、およびＡＩ０８５６７３
であり、そしてこれらの配列は本明細書中その全体が参考として援用される。
【０２２７】 ｃＤＮＡフラグメントＡ２Ｒ１により表されるヒトＡＢＣ２クローン領域は新
規で、ヒトＡＢＣ１およびＡＢＣＲと相同性を共有している（各々６２％および
５８％、非重複性のＧｅｎＢａｎｋ＋ＥＭＢＬ＋ＤＤＢＪ＋ＰＤＢ配列に対する
ＢＬＡＳＴｎプログラム）。
【０２２８】 ｃＤＮＡフラグメントＡ２Ｒ２により表されるヒトＡＢＣ２輸送体クローン領
域、特に最初の６３８ｂｐは新規な配列であり、前に同定されたＡＢＣ２輸送体
タンパク質と相同性を共有しない（非重複性のＧｅｎＢａｎｋ＋ＥＭＢＬ＋ＤＤ
ＢＪ＋ＰＤＢ配列に対するＢＬＡＳＴｎプログラム；非重複性のＧｅｎＢａｎｋ
ＣＤＳ 翻訳＋ＰＤＢ＋ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ＋Ｓｐｕｐｄａｔｅ＋ＰＩＲに対
するＢＬＡＳＴｘを用いる）。したがって、ＡＢＣ２クローン（ｈｓＡ２．２）
の最も５’末端は分類されておらず、コード配列のあまり保存されていない５’
末端もしくはヒトＡＢＣ２の５’ＵＴＲの一部のいずれかを表すようである。
【０２２９】 Ａ２Ｒ１およびＡ２Ｒ２により表されたＡＢＣ２クローンの１７２１ｂｐ領域
は、９のヒトＥＳＴヌクレオチド配列と相同性を共有している（ＧｅｎＢａｎｋ
ＥＳＴ Ｄｉｖｉｓｉｏｎの非重複性のデータベースに対してＢＬＡＳＴｎプ
ログラムを用いる）。これらＥＳＴのＧｅｎＢａｎｋ登録番号は、ＡＩ０３９８
３４、ＡＡ７７２６００、ＡＡ７４８７６８、ＡＩ０５０８９２、ＡＡ７２５３
５５、ＡＩ０８９７８５、ＡＩ６０３９１７、ＡＩ１７４１９６およびＡＩ３４
４６８１であり、これらの配列は本明細書中にその全体が参考として援用される
。
【０２３０】 本発明のヒトＡＢＣ２輸送体はＡＴＰ結合カセット（ＡＢＣ）スーパーファミ
リーに属する。このファミリーのメンバーは、構造的および機能的に生体膜を横
切る物質のトランスロケーションを触媒する能力において関連している。推測さ
れた２００１個のアミノ酸の配列は、Ｎ末端からＣ末端へ、Ｎ末端膜アンカード
メイン、膜貫通ドメインおよび第二の保存的ヌクレオチド結合フォールド（ｂｉ
ｎｄｉｎｇ ｆｏｌｄ）を含み、全輸送体（図２および配列番号２参照）として
ヒトＡＢＣ２ポリペプチドが特定されている。当該分野で標準的であると認めら
れた生化学技術情報ソフトウェアーを用い、ヒトＡＢＣ２輸送体は、Ｋａｚｕｓ
ａ ＤＮＡ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．
ｋａｚｕｓａ．ｏｒ．ｊｐ／参照）により維持されたＨＵＧＥデータベース（未
同定の遺伝子にコードされたヒト巨大タンパク質）におけるポリペプチドと部分
的な配列の同一性があると判明した。ＡＢＣ２と他の遺伝子産物間で、次に最も
大きな配列の相同性は、「ＡＢＣ１」と名づけられたヒトＡＢＣ輸送体ポリペプ
チドで見出された（５１％の類似性）。より少ない相同性はＡＢＣ２（ＨｓＡ２
．２）と他の輸送体間で示された（表２および図３参照）。
【０２３１】 （表２．標準的なパラメーター設定を用いるＰａｉｒｗｉｓｅ Ｇｌｏｂａｌ
Ａｌｉｇｍｅｎｔ（ＭａｃＶｅｃｔｏｒ ６．５）によるヒトＡＢＣ２タンパ
ク質とその最も近似するタンパク質オルソログ（類似性／相同性）間のアミノ酸
類似性および同一性パーセンテージ）
【０２３２】
【表２】 ヒトＡＢＣ２輸送体ポリペプチドを電位膜架橋セグメント（ｐｏｔｅｎｔｉａ
ｌ ｍｅｍｂｒａｎｅ ｓｐａｎｎｉｎｇ ｓｅｇｍｅｎｔｓ）に関しても解析
した。疎水性親水性指標（ｈｙｄｒｏｐａｔｈｙ）プロットおよび二次元折りた
たみモデルを、１２の推定された膜貫通領域（ＴＭＨ）として定義された公的に
利用可能な生化学技術情報ツール（Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ、Ｇｅｒｍａｎｙ、ｈ
ｔｔｐ：／／ｄｏｄｏ．ｃｐｍｃ．ｃｏｌｕｍｂｉａ．ｅｄｕ／ｐｒｅｄｉｃｔ
ｐｒｏｔｅｉｎ／）を用いて得た。６つのＴＭＨはタンパク質のＮ末端配列に存
在し、５つのＴＭＨはタンパク質のＣ末端配列に存在し、および１つのＴＭＨ（
ヒンジ）は中間領域に存在する。すべてのＴＭＨはらせん二次元折りたたみ構造
を持ち、それはヒトＡＢＣ２が膜アンカータンパク質（図４および５参照）であ
ることを示す。
【０２３３】 したがって、ヒトＡＢＣ２輸送体ポリペプチドはＡＢＣ輸送体間に保存された
典型的な特徴を示す。ＡＢＣ輸送体タンパク質の構造的構成（ｓｔｒｕｃｔｕｒ
ａｌ ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ）は共通のテーマにおいて変化を表す。１つの
共通のテーマは、いずれかの単一のポリペプチド鎖または１／２もしくは１／４
分子より構築された中に存在し、１２の疎水性膜貫通セグメントおよび２つの親
水性ＡＴＰ結合部を有するこれらの輸送体の基本構造である。
【０２３４】 したがって、ヒトＡＢＣ２のアミノ酸配列は、それを新規の完全輸送体として
定義する。当該分野で認められた生化学技術情報モデリングツールは、Ｎ末端部
分が「外部」コンフォメーションに存在し、一方推定されたＡＢＣ２タンパク質
のＡＴＰ結合カセットが「内部」コンフォメーションに存在することを示す。し
たがって、ヒトＡＢＣ２輸送体は、細胞内膜構造または細胞質膜と会合し得ると
思われる。
【０２３５】 （実施例３：ヒトＡＢＣ２輸送体ｍＲＮＡの組織分布） 本実施例では、ノーザンブロッドハイブリダイゼーションおよびインサイチュ
ハイブリダイゼーションにより決定し得るＡＢＣ２輸送体ｍＲＮＡの組織分布を
示す。
【０２３６】 種々のＲＮＡサンプルとのノーザンブロットハイブリダイゼーションを標準的
な条件で行い、そしてストリンジェントな条件下、すなわち６５℃、０．２ＸＳ
ＳＣで洗浄した。ＤＮＡプローブを業者の使用説明書に従い、Ｐｒｉｍｅ−Ｉｔ
Ｋｉｔ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ，Ｌａ Ｊｏｌｌａ、ＣＡ）を用いて32Ｐ−ｄ
ＣＴＲで放射活性標識した。ヒトｍＲＮＡ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ、Ｐａｌｏ、Ａｌ
ｔｏ、ＣＡからのＭｕｌｔｉＴｉｓｓｕｅ Ｎｏｒｔｈｅｒｎ Ｉ および Ｍ
ｕｌｔｉＴｉｓｓｕｅ Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ＩＩ）を含むフィルターをＥｘｐｒ
ｅｓｓＨｙｂハイブリダイゼーション溶液（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）中でプローブし
、生産者の推奨に従って、高ストリンジェンシーで洗浄した。
【０２３７】 インサイチュ分析に対しては、脳（例えばラットまたはマウス脳）から得た種
々の組織を最初にドライアイス上で凍結した。組織の１０マイクロメーター厚冠
状断片を、ＤＥＰＣ １Ｘリン酸緩衝生理食塩水で２回、０．１Ｍ トリエタノ
ールアミン−塩酸（ｐＨ８．０）で１回リンスする前に、室温で１０分間 ＤＥ
ＰＣ処理した１Ｘリン酸緩衝生理食塩水中の４％ホルムアルデヒドを用いて後固
定した。続いて０．２５％無水酢酸−０．１Ｍ トリエタノールアミン−塩酸中
で１０分間インキュベーションし、切片をＤＥＰＣ ２Ｘ ＳＳＣ（１Ｘ ＳＳ
Ｃは０．１５ＭのＮａＣｌと０．０１５Ｍのクエン酸ナトリウムを加えたもので
ある）でリンスする。次に組織を一連のエタノール洗浄により脱水し、１００％
クロロホルム中で５分間インキュベーションし、それから１００％エタノールで
１分間および９５％エタノールで１分間リンスし、空気中で乾燥させる。
【０２３８】 35Ｓで放射性同位元素標識した（５×１０7ｃｐｍ／ｍｌ）、ｃＲＮＡプロー
ブとのハイブリダイゼーションを行う。６００ｍＭ ＮａＣｌ、１０ｍＭ トリ
ス（ｐＨ７．５）、１ｍＭ ＥＤＴＡ、０．０１％の剪断したサーモン精子ＤＮ
Ａ、０．０１％の酵母ｔＲＮＡ、０．０５％の酵母全ＲＮＡタイプＸ１、１Ｘ
Ｄｅｎｈａｒｄｔ溶液、５０％ホルムアミド、１０％硫酸デキストラン、１００
ｍＭジチオスレイトール、０．１％ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）および０
．１％チオ硫酸ナトリウムを含む溶液の存在下で、プローブを、５５℃で１８時
間インキュベートする。
【０２３９】 ハイブリダイゼーション後、スライドを２Ｘ ＳＳＣで洗浄する。次に、切片
を順次 ＴＮＥ（１０ｍＭ トリス−塩酸（ｐＨ７．６）、５００ｍＭ ＮａＣ
ｌおよび１ｍＭ ＥＤＴＡを含む溶液）中で１０分間、１ｍｌ中１０μｇのＲＮ
ａｓｅ Ａを含有するＴＮＥ中で３０分間、および最後にＴＮＥ中で１０分間、
３７℃でインキュベートする。次にスライドを２Ｘ ＳＳＣを用いて室温でリン
スし、２Ｘ ＳＳＣを用いて５０℃で１時間洗浄し、０．２Ｘ ＳＳＣを用いて
５５℃で１時間および０．２ＸＳＳＣを用いて６０℃で１時間洗浄する。次に切
片を空気中で乾燥し、Ｋｏｄａｋ Ｂｉｏｍａｘ ＭＲ 科学的画像化フィルム
に２４時間露光する前に連続的なエタノール−０．３Ｍ酢酸ナトリウム濃縮によ
って迅速に脱水する。現像し、対比染色する前に、順次ＮＢ−２フォトエマルジ
ョンに浸漬し、４℃で７日間露光する。エレクトリックノーザン分析によりＡＢ
Ｃ２輸送体ｍＲＮＡがかなりニューロン特異的であることが示された。
【０２４０】 （実施例４：細菌細胞内における組換えヒトＡＢＣ２輸送体ポリペプチドの発
現） 本実施例では、ヒトＡＢＣ２輸送体をＥ．ｃｏｌｉにおいて組換えグルタチオ
ン−Ｓ−トランスフェラーゼ（ＧＴＳ）融合ポリペプチドとして発現し、その融
合ポリペプチドを単離し、特徴付けを行う。具体的には、ヒトＡＢＣ２輸送体を
ＧＳＴと融合し、この融合ポリペプチドをＥ．ｃｏｌｉ（例えば、ＰＥＢ１９９
株）において発現させる。ヒトＡＢＣ２輸送体ポリペプチドは、約２２３ｋＤａ
と予想され、ＧＳＴは２６ｋＤａと予想されるので、融合ポリペプチドは分子量
が、約２４９ｋＤと予想される。ＰＥＢ１９９におけるＧＴＳ−ＡＢＣ２輸送体
融合タンパク質の発現をＩＰＴＧを用いて誘導する。誘導されたＰＥＢ１９９株
の粗細菌溶解物から組換え融合ポリペプチドをグルタチオンビーズを用いるアフ
ィニティークロマトグラフィーにより精製する。細菌溶解物から精製したポリペ
プチドのポリアクリルアミドゲル電気泳動分析を用い、結果として得られた融合
ポリペプチドの分子量を決定する。必要であれば、当該分野で認められた手法を
用い、例えばミセルもしくは膜ベシクルのような膜との会合により、ポリペプチ
ドを調製し得る。
【０２４１】 （実施例５：哺乳動物細胞における組換えヒトＡＢＣ２輸送体ポリペプチドの
発現） 哺乳動物細胞（例えばＣＯＳ細胞）でＡＢＣ２輸送体遺伝子を発現するため、
Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）
によるｐｃＤＮＡ／Ａｍｐベクターを用いる。このベクターはＳＶ４０複製起点
、アンピシリン耐性遺伝子、Ｅ．ｃｏｌｉ複製起点、ＣＭＶプロモーター、続い
てポリリンカー領域、およびＳＶ４０のイントロンおよびポリアデニル化部位を
含む。ＡＢＣ２輸送体タンパク質全体をコードしているＤＮＡフラグメントおよ
びＨＡタグ（Ｗｉｌｓｏｎら（１９８４）Ｃｅｌｌ ３７：７６７）またはこの
フラグメントの３’末端とインフレームで融合したＦＬＡＧタグをベクターのポ
リリンカー領域にクローン化し、それによりＣＭＶプロモーターの制御下で組換
えタンパク質を発現させる。
【０２４２】 プラスミドを構築するため、ＡＢＣ２輸送体ＤＮＡ配列（例えば、配列番号３
参照）を、２つのプライマーを用いるＰＣＲにより増幅する。５’プライマーは
目的の制限部位、続いて開始コドンから開始する、約２０ヌクレオチドのＡＢＣ
２輸送体コード配列を含む；３’末端配列は、他の目的の制限部位、翻訳停止コ
ドン、ＨＡタグまたはＦＬＡＧタグおよびＡＢＣ２輸送体をコードしている配列
の最後の２０ヌクレオチドに対する相補性配列を含む。ＰＣＲで増幅したフラグ
メントおよびｐＣＤＮＡ／Ａｍｐベクターを、適切な制限酵素を用いて消化し、
このベクターを、ＣＩＡＰ酵素（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂｓ、Ｂ
ｅｖｅｒｌｙ、ＭＡ）を用いて脱リン酸化する。好ましくは、ＡＢＣ２輸送体遺
伝子が正しい配向で挿入されるように、選択した２つの制限部位は異なる。連結
混合物をＥ．ｃｏｌｉ細胞（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｓｙｓｔ
ｅｍ、Ｌａ Ｊｏｌｌａ、ＣＡより利用可能なＨＢ１０１、ＤＨ５α、ＳＵＲＥ
株を使用し得る）に形質転換し、形質転換した培養物をアンピシリン培地プレー
トにプレートし、耐性コロニーを選択する。形質転換物からプラスミドＤＮＡを
単離し、適切なフラグメントが存在することを制限分析により検査した。
【０２４３】 続いて、リン酸カルシウムまたは塩化カルシウム共沈殿法、ＤＥＡＥデキスト
ラン媒介トランスフェクション、リポフェクション、またはエレクトロポレーシ
ョンを用い、真核生物細胞、（例えばＣＯＳ細胞）をＡＢＣ２輸送体、ｐｃＤＮ
Ａ／ＡｍｐプラスミドＤＮＡでトランスフェクトする。宿主細胞のトランスフェ
クションに適した他の方法は、Ｓａｍｂｒｏｏｋ、Ｊ．Ｆｒｉｔｓｈ、Ｅ．Ｆ．
、およびＭｎｉａｔｉｓ、Ｔ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａ
ｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ．第２版。、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒ
ｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａ
ｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ、ＮＹ
、１９８９中に見出され得る。放射性同位元素標識（ＮＥＮ、Ｂｏｓｔｏｎ、Ｍ
Ａより利用可能な35Ｓ−メチオニンまたは35Ｓ−システインが使用し得る）、お
よびＨＡ特異的モノクローナル抗体を用いる免疫沈降（Ｈａｒｌｏｗ、Ｅ．およ
びＬａｎｅ、Ｄ．ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕ
ａｌ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅ
ｓｓ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ、ＮＹ、１９８８）によりＡＢＣ
２輸送体ポリペプチドの発現を検出し得る。概略すると、細胞を８時間35Ｓ−メ
チオニン（または35Ｓ−システイン）で標識する。次に培養培地を集め、界面活
性剤（ＲＩＰＡ緩衝液、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、１％ ＮＰ−４０、０．１％
ＳＤＳ，０．５％ ＤＯＣ、５０ｍＭ トリス、ｐＨ７．５）を用いて細胞を溶
解する。ＨＡ特異的モノクローナル抗体を用い、細胞溶解物および培養培地の両
方を沈降する。次に沈降したポリペプチドを、ＳＤＳ−ＰＡＧＥにより解析する
。
【０２４４】 あるいは、ＡＢＣ２輸送体をコードするを含むＤＮＡ配列を、適切な制限部位
を用いてｐｃＤＮＡ／Ａｍｐベクターのポリリンカーに直接クローン化する。得
られたプラスミドを上記の様式でＣＯＳ細胞にトランスフェクトし、そして放射
性同位元素標識およびＡＢＣ２輸送体特異的モノクローナル抗体を用いる免疫沈
降により、ＡＢＣ２輸送体ポリペプチドの発現を検出する。
【０２４５】 （実施例６：ヒトＡＢＣ２輸送体モジュレーターのインビトロおよびインビボ
スクリーニングアッセイ） 本実施例では、ヒトＡＢＣ２輸送体分子モジュレーターのインビトロおよびイ
ンビボスクリーニングアッセイを記載する。
【０２４６】 概略すると、ＡＢＣ２輸送体を上記のような哺乳動物細胞株中に発現させ、参
照分子（例えば、β−アミロイド、または他の小分子）の細胞輸送についてのベ
ースラインを確立する。次に、細胞を試験化合物とインキュベートし、標準的な
技術を用いて参照分子の細胞輸送レベルの変化を決定する。次に、検出可能な参
照分子の輸送を変化させる試験化合物を、ＡＢＣ２輸送体活性を変化させる候補
化合物として同定する。次に、リード化合物を、例えばニューロン起源の細胞上
、または試験動物由来の脳組織上で試験し得る。このようなアッセイを行う方法
は、当該分野では公知である。好ましくは、例えば、β−アミロイドのＡＢＣ２
媒介輸送を阻害する、リード試験化合物をインビボでさらに試験する。種々の神
経学的疾患（例えば、アミロイド疾患）についてのマウスモデルもまた、当該分
野で公知である（例えば、Ｈａｒｄｙら、（１９９８）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２８２
：１０７５−１０７９；Ｇｏａｔｅら、（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ ３４９：７
０４；Ｇａｍｅｓら、（１９９５）Ｎａｔｕｒｅ ３７３：５２３；およびＳｕ
ｚｕｋｉら、（１９９４）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６４：１３３６）。
【０２４７】 あるいは、本明細書中に記載した技術を用いて、ＡＢＣ２輸送体ポリペプチド
（例えば、ヒトＡＢＣ２輸送体ポリペプチド、または対応するマウスポリペプチ
ド）を過剰発現する、遺伝子組換えマウスモデルを作製する。次に、この動物を
、ヒトＡＢＣ２輸送体ポリペプチドのモジュレーターを試験するために、直接試
験し得るか、あるいは細胞または組織供給源（例えば、脳組織供給源）として用
い得る。好ましくは、この動物を試験化合物で直接試験し、生理学的結果（例え
ば、大脳脊髄液（ＣＳＦ）中のβ−アミロイドの存在）をモニターする。このイ
ンビボアッセイの関連した延長として、この動物を、所望でないポリペプチド（
例えば、アミロイドポリペプチド）を過剰発現する動物と共に育種し得、そのポ
リペプチドの輸送の変化を、コントロールと比較して測定する（例えば、ＣＳＦ
中で）。理想的には、これらの試験動物を、ＡＢＣ２輸送体モジュレーターの存
在下または非存在下においてさらにモニターする。
【０２４８】 このアッセイの改善において、ＡＢＣ２輸送体の活性を、検出可能な参照分子
が血液脳関門を通過する能力に関して決定する。改良アッセイのなお別の改変に
おいても、動物を多剤耐性細胞または組織の有病率、および／またはこの新生物
治療の処置に適切な細胞障害薬物に対するこの動物の感受性を試験する。
【０２４９】 従って、これらの動物は、ＡＢＣ２輸送体、および／またはＡＢＣ２輸送体モ
ジュレーターが疾患の発症を妨げるか、治療するか、または遅延させる活性を試
験するインビボアッセイシステムを表す。
【０２５０】 （等価物） 当業者は、本明細書中に記載される本発明の特定の実施形態に対する多くの等
価物を認識するか、または慣用的に過ぎない実験を使用して確かめ得る。このよ
うな等価物は、前述の特許請求の範囲に包含されることが意図される。
【図面の簡単な説明】
【図１−１】 図１−１は、ヒトＡＢＣ２輸送体のｃＤＮＡ配列および推定アミノ酸配列を示
す。このヌクレオチド配列は、配列番号１の核酸１〜６７９２に対応する。ヒト
ＡＢＣ２輸送体遺伝子の５’非翻訳領域および３’非翻訳領域を含まないコード
領域を、配列番号３に示す。
【図１−２】 図１−２は、ヒトＡＢＣ２輸送体のｃＤＮＡ配列および推定アミノ酸配列を示
す。このヌクレオチド配列は、配列番号１の核酸１〜６７９２に対応する。ヒト
ＡＢＣ２輸送体遺伝子の５’非翻訳領域および３’非翻訳領域を含まないコード
領域を、配列番号３に示す。
【図１−３】 図１−３は、ヒトＡＢＣ２輸送体のｃＤＮＡ配列および推定アミノ酸配列を示
す。このヌクレオチド配列は、配列番号１の核酸１〜６７９２に対応する。ヒト
ＡＢＣ２輸送体遺伝子の５’非翻訳領域および３’非翻訳領域を含まないコード
領域を、配列番号３に示す。
【図１−４】 図１−４は、ヒトＡＢＣ２輸送体のｃＤＮＡ配列および推定アミノ酸配列を示
す。このヌクレオチド配列は、配列番号１の核酸１〜６７９２に対応する。ヒト
ＡＢＣ２輸送体遺伝子の５’非翻訳領域および３’非翻訳領域を含まないコード
領域を、配列番号３に示す。
【図１−５】 図１−５は、ヒトＡＢＣ２輸送体のｃＤＮＡ配列および推定アミノ酸配列を示
す。このヌクレオチド配列は、配列番号１の核酸１〜６７９２に対応する。ヒト
ＡＢＣ２輸送体遺伝子の５’非翻訳領域および３’非翻訳領域を含まないコード
領域を、配列番号３に示す。
【図２−１】 図２−１は、配列番号２のアミノ酸１〜２００１に対応するＡＢＣ輸送体分子
のアミノ酸配列を示す。
【図２−２】 図２−２は、配列番号２のアミノ酸１〜２００１に対応するＡＢＣ輸送体分子
のアミノ酸配列を示す。
【図３−１】 図３−１は、種々の種において見出されたポリペプチドと比較したヒトＡＢＣ
２輸送体ポリペプチドのアミノ酸配列の整列を示す。符号（；）および（*）は
、それぞれ類似性または同一性を有するアミノ酸残基位置を示す。
【図３−２】 図３−２は、種々の種において見出されたポリペプチドと比較したヒトＡＢＣ
２輸送体ポリペプチドのアミノ酸配列の整列を示す。符号（；）および（*）は
、それぞれ類似性または同一性を有するアミノ酸残基位置を示す。
【図３−３】 図３−３は、種々の種において見出されたポリペプチドと比較したヒトＡＢＣ
２輸送体ポリペプチドのアミノ酸配列の整列を示す。符号（；）および（*）は
、それぞれ類似性または同一性を有するアミノ酸残基位置を示す。
【図３−４】 図３−４は、種々の種において見出されたポリペプチドと比較したヒトＡＢＣ
２輸送体ポリペプチドのアミノ酸配列の整列を示す。符号（；）および（*）は
、それぞれ類似性または同一性を有するアミノ酸残基位置を示す。
【図４】 図４は、ヒトＡＢＣ２輸送体ポリペプチドについての疎水性プロット、親水性
プロットおよび膜貫通プロットを示す。
【図５】 図５は、ヒトＡＢＣ２輸送体ポリペプチドについての膜貫通ヘリックス予測プ
ロットを示す。
【図６】 図６は、全長のＡＢＣ２輸送体クローン（ｈｓＡ２．２）に関する種々のｃＤ
ＮＡフラグメントのマップ位置およびプライマー位置を示す概略図を示す。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｃ１２Ｎ 1/21 Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ ４Ｃ０８６ 5/10 Ｃ１２Ｑ 1/02 ４Ｃ０８７ Ｃ１２Ｐ 21/02 1/68 Ａ ４Ｈ０４５ Ｃ１２Ｑ 1/02 Ｇ０１Ｎ 33/53 Ｄ 1/68 Ｍ Ｇ０１Ｎ 33/53 Ｙ 33/566 Ａ６１Ｋ 31/7088 33/566 35/76 // Ａ６１Ｋ 31/7088 45/00 35/76 48/00 38/00 Ａ６１Ｐ 3/06 45/00 25/14 48/00 25/16 Ａ６１Ｐ 3/06 25/22 25/14 25/24 25/16 25/28 25/22 29/00 25/24 35/00 25/28 43/00 １１１ 29/00 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ 35/00 5/00 Ａ 43/00 １１１ Ａ６１Ｋ 37/02 (31)優先権主張番号 ０９／６４１，０４０ (32)優先日 平成12年８月17日(2000．8．17) (33)優先権主張国 米国（ＵＳ） (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＭＺ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ， ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＧ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ， ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＢＺ，Ｃ Ａ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ ，ＤＺ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ， ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，Ｋ Ｅ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ， ＭＷ，ＭＸ，ＭＺ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，Ｒ Ｕ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ， ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ (72)発明者 ウィルソン， カトリオーナ カナダ国 ブイ６アール ３ビー９ ブリ ティッシュ コロンビア， バンクーバ ー， ダブリュー． 16ティーエイチ ア ベニュー 3461 (72)発明者 チャーレスト， デイビッド エル． カナダ国 ブイ６ティー １エックス７ ブリティッシュ コロンビア， バンクー バー， オソヨース クレセント ナンバ ー202−2715 Ｆターム(参考） 4B024 AA01 AA11 BA21 CA04 DA02 EA04 FA02 GA11 HA01 4B063 QA01 QA18 QQ08 QQ43 QR32 QR55 QR62 QS25 QS34 4B064 AG01 CA10 CA19 CC24 DA01 4B065 AA90X AA99Y AB01 AC14 BA02 CA24 CA44 4C084 AA02 AA03 AA07 AA13 AA17 BA35 BA44 MA13 MA17 MA22 MA23 MA24 MA28 MA31 MA35 MA36 MA37 MA41 MA44 MA52 MA57 MA59 MA60 MA63 MA66 MA67 NA14 ZA022 ZA122 ZA152 ZA162 ZA182 ZA222 ZB112 ZB262 ZC332 ZC412 4C086 AA01 AA02 AA03 EA16 MA01 MA04 MA13 MA17 MA22 MA23 MA24 MA28 MA31 MA35 MA36 MA37 MA41 MA44 MA52 MA57 MA59 MA60 MA63 MA66 MA67 NA14 ZA02 ZA12 ZA15 ZA16 ZA22 ZB11 ZB26 ZC33 ZC41 4C087 AA01 AA02 BC83 CA09 CA12 MA13 MA17 MA22 MA23 MA24 MA28 MA31 MA35 MA36 MA37 MA41 MA44 MA52 MA57 MA59 MA60 MA63 MA66 MA67 NA14 ZA02 ZA12 ZA15 ZA16 ZA22 ZB11 ZB26 ZC33 ZC41 4H045 AA10 AA20 AA30 BA10 CA40 DA01 EA28 EA50 FA74 【要約の続き】

Claims (25)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 以下からなる群： ａ）配列番号１に開示されるヌクレオチド配列を含む核酸分子、またはその相補
    体；および ｂ）配列番号３に開示されるヌクレオチド配列を含む核酸分子、またはその相補
    体、 から選択される、単離された核酸分子。
  2. 【請求項２】 配列番号２に開示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドを
    コードする、単離された核酸分子。
  3. 【請求項３】 配列番号２に開示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドの
    天然に存在する対立遺伝子改変体をコードする、単離された核酸分子。
  4. 【請求項４】 以下からなる群： ａ）配列番号１または３のヌクレオチド配列に少なくとも８６％相同なヌクレオ
    チド配列を含む核酸分子、あるいはその相補体； ｂ）配列番号１または３のヌクレオチド配列を含む核酸の少なくとも１５０ヌク
    レオチドのフラグメントを含む核酸分子、あるいはその相補体； ｃ）配列番号２のアミノ酸配列に少なくとも約９３％相同なアミノ酸配列を含む
    ポリペプチドをコードする核酸分子；ならびに ｄ）配列番号２のアミノ酸配列を含むポリペプチドのフラグメントをコードする
    核酸分子であって、該フラグメントが配列番号２のアミノ酸配列の少なくとも５
    ０の連続したアミノ酸残基を含む、核酸分子、 から選択される、単離された核酸分子。
  5. 【請求項５】 ストリンジェント条件下で、請求項１、２、３、または４の
    いずれか１項に記載の核酸分子にハイブリダイズする、単離された核酸分子。
  6. 【請求項６】 請求項１、２、３、または４のいずれか１項に記載の核酸分
    子のヌクレオチド配列に相補的なヌクレオチド配列を含む、単離された核酸分子
    。
  7. 【請求項７】 請求項１、２、３、または４のいずれか１項に記載の核酸分
    子、および異種ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む、単離された
    核酸分子。
  8. 【請求項８】 請求項１、２、３、または４のいずれか１項に記載の核酸分
    子を含む、ベクター。
  9. 【請求項９】 発現ベクターである、請求項８に記載のベクター。
  10. 【請求項１０】 請求項９に記載の発現ベクターでトランスフェクトされた
    、宿主細胞。
  11. 【請求項１１】 ポリペプチドを産生する方法であって、請求項１０に記載
    の宿主細胞を、適切な培養培地で培養し、それにより該ポリペプチドを産生する
    工程を包含する、方法。
  12. 【請求項１２】 以下からなる群： ａ）配列番号２のアミノ酸配列を含むポリペプチドのフラグメントであって、該
    フラグメントが、配列番号２の少なくとも１５の連続したアミノ酸を含む、フラ
    グメント； ｂ）配列番号２のアミノ酸配列を含むポリペプチドの天然に存在する対立遺伝子
    改変体であって、該ポリペプチドが、ストリンジェント条件下で、配列番号１ま
    たは３からなる核酸分子にハイブリダイズする核酸分子によってコードされる、
    対立遺伝子改変体； ｃ）配列番号１または３のヌクレオチド配列を含む核酸に少なくとも５０％相同
    なヌクレオチド配列を含む核酸分子によってコードされるポリペプチド； ｄ）配列番号２のアミノ酸配列に少なくとも５０％相同なアミノ酸配列を含むポ
    リペプチド、 から選択される、単離されたポリペプチド。
  13. 【請求項１３】 配列番号２のアミノ酸配列を含む、請求項１２に記載の、
    単離されたポリペプチド。
  14. 【請求項１４】 異種アミノ酸配列をさらに含む、請求項１２に記載のポリ
    ペプチド。
  15. 【請求項１５】 請求項１２に記載のポリペプチドに選択的に結合する、抗
    体。
  16. 【請求項１６】 サンプル中の請求項１２に記載のポリペプチドの存在を検
    出するための方法であって、該方法は、以下の工程： ａ）該ポリペプチドに選択的に結合する化合物と該サンプルを接触させる工程；
    ならびに ｂ）該化合物が、該サンプル中の該ポリペプチドに結合するか否かを決定し、そ
    れによって、該サンプル中の請求項１２に記載のポリペプチドの存在を検出する
    工程、 を包含する、方法。
  17. 【請求項１７】 前記ポリペプチドに結合する前記化合物が抗体である、請
    求項１６に記載の方法。
  18. 【請求項１８】 請求項１２に記載のポリペプチドに選択的に結合する化合
    物および使用のための説明書を含む、キット。
  19. 【請求項１９】 サンプル中の請求項１、２、３、または４のいずれか１項
    に記載の核酸分子の存在を検出するための方法であって、該方法は、以下を含む
    ： ａ）該核酸分子に選択的にハイブリダイズする核酸プローブまたはプライマーと
    、該サンプルを接触させる工程；および ｂ）該核酸プローブまたはプライマーが、該サンプル中の核酸分子に結合するか
    否かを決定し、それによって、該サンプル中の請求項１、２、３、または４のい
    ずれか１項に記載の核酸分子の存在を検出する工程 を包含する、方法。
  20. 【請求項２０】 前記サンプルがｍＲＮＡ分子を含み、そして、核酸プロー
    ブと接触される、請求項１９に記載の方法。
  21. 【請求項２１】 請求項１、２、３、または４のいずれか１項に記載の核酸
    分子に選択的にハイブリダイズする化合物および使用のための説明書を含む、キ
    ット。
  22. 【請求項２２】 請求項１２に記載のポリペプチドに結合する化合物を同定
    するための方法であって、該方法は、以下の工程： ａ）該ポリペプチドまたは該ポリペプチドを発現する細胞を、試験化合物と接触
    させる工程；および ｂ）該ポリペプチドが、該試験化合物に結合するか否かを決定する工程 を包含する、方法。
  23. 【請求項２３】 前記試験化合物の前記ポリペプチドに対する結合が、以下
    からなる群： ａ）試験化合物／ポリペプチド結合の直接的検出による結合の検出； ｂ）競合結合アッセイを用いる結合の検出；および ｃ）ＡＢＣ２輸送体活性についてのアッセイを用いる結合の検出、 から選択される方法によって検出される、請求項２２に記載の方法。
  24. 【請求項２４】 請求項１２に記載のポリペプチドの活性を調節するための
    方法であって、該ポリペプチドの活性を調節するために十分な濃度で、該ポリペ
    プチドに結合する化合物と、該ポリペプチドまたは該ポリペプチドを発現する細
    胞を、接触させる工程を包含する、方法。
  25. 【請求項２５】 請求項１２に記載のポリペプチドの活性を調節する化合物
    を同定するための方法であって、この方法は、以下の工程： ａ）請求項１２に記載のポリペプチドを、試験化合物と接触させる工程；および
    ｂ）該ポリペプチドの活性に対する該試験化合物の効果を決定し、それによって
    、該ポリペプチドの活性を調節する化合物を同定する工程、 を包含する、方法。
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