JP2003504311A - スペルミン：ペプチドをベースとする界面活性剤の化合物 - Google Patents

スペルミン：ペプチドをベースとする界面活性剤の化合物

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Abstract

(57)【要約】 スペルミン：ペプチドをベースとする界面活性剤の化合物が開示される。該化合物は、ペプチド基を有し、かつ、それに連結したヒドロカルビル基を有していてもよいスペルミン骨格を基礎とする。スペルミン：ペプチドをベースとする界面活性剤の化合物の使用およびそれらの生産方法もまた開示される。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】 （技術分野） 本発明は、新規に同定されたスペルミン：ペプチドをベースとする界面活性剤
の化合物、かかる化合物の使用およびそれらの製法に関する。本発明は、また、
ドラッグデリバリーのために細胞中への化合物の輸送を容易にするためのスペル
ミン：ペプチドをベースとする界面活性剤の化合物の使用に関する。
【０００２】 （背景技術） 界面活性剤は、低濃度であっても、液体の表面特性に顕著に影響を及ぼす物質
である。例えば、界面活性剤は、水または水溶液中に溶解し場合に表面張力を有
意に減少し、２液体間または液体と固体間の界面張力を減少する。界面活性剤分
子の該特性は、産業界、特に洗剤およびオイル業界において幅広く開発されてき
た。１９７０年代において、界面活性剤分子の新規なクラスが報告され、疎水性
架橋によって連結される極性末端を有する２つの疎水性鎖によって特徴付けられ
た（Deinega, Yら、Kolloidn. Zh. 36, 649, 1974）。「ジェミニ（gemini）」
と呼ばれるこれらの分子は（Menger, FMおよびLittau, CA, J. Am. Chem. Soc.
113, 1451, 1991）、それらの単量体等価物を越える非常に望ましい特性を有す
る。例えば、それらは、油および水をベースとする液体間の界面張力の減少にお
いて非常に効果的であり、非常に低い臨界ミセル濃度を有する。
【０００３】 陽イオン界面活性剤は、とりわけ、培養中の細胞中へのポリヌクレオチドのト
ランスフェクションに用いられ、かかる薬剤の例は遺伝子テクノロジーに関わる
科学者に市販されている（例えば、Promega Corp. WI, USAから入手可能な真核
生物細胞のトランスフェクション用の試薬TfxTM-50）。 遺伝子療法またはアンチセンス療法のいずれかの場合、イン・ビボでの細胞へ
のＤＮＡの効率のよいデリバリーが何年間かの主要な目的であった。デリバリー
ビヒクルとしてのウイルスの使用、例えば、嚢胞性繊維症（ＣＦ）の矯正的遺伝
子療法のために呼吸系における上皮細胞に対するアデノウイルスの使用に多くの
注目が集まった。しかしながら、ＣＦ患者における成功した遺伝子移入のいくつ
かの証拠にもかかわらず、炎症副作用および移入遺伝子の限られた一過性発現の
ため、アデノウイルス経路には疑問が残る。陽イオン界面活性剤を使用する研究
を包含するイン・ビボ遺伝子デリバリーのための数個の別法が研究された。Gao,
Xら、(1995) Gene Ther. 2, 710-722は、陽イオン脂質を有するアミンを用いて
、ＣＦ膜貫通調節タンパク質（ＣＦＴＲ）の正常なヒト遺伝子を用いるＣＦマウ
スの呼吸器上皮中への該アプローチの可能性を明らかにした。該グループは、引
き続いてリポソームＣＦ遺伝子療法試験を行い、それは、単に部分的な成功にす
ぎないが、ヒトにおける該アプローチの可能性を明らかにした（Caplen, NJ.ら
、Nature Medicine, 1, 39-46, 1995）。より近年には、他のグループが、遺伝
子デリバリーに対する他の陽イオン脂質、例えば、コレステロール誘導体の可能
性を研究した（Oudrhiri, N.ら、Proc. Natl. Acad. Sci. 94, 1651-1656, 1997
）。この限られた研究は、これらのコレステロールをベースとする化合物のイン
・ビトロおよびイン・ビボの両方での上皮細胞中への遺伝子の移入を容易にする
能力を明らかにし、それにより、この一般的なアプローチの妥当性の支持を導い
た。
【０００４】 これらの研究および他の研究は、この新たな研究分野において、細胞に基づく
実験におけるトランスフェクションの場合インビトロならびに遺伝子療法および
アンチセンス治療の場合イン・ビボの両方で、細胞中へのポリヌクレオチドの効
果的な移入を容易にするため新規な低毒性界面活性剤分子を開発することに対す
る継続した要望があることを示す。本発明は、既存の化合物によって示される困
難を克服しようとするものである。
【０００５】 （発明の開示） 本発明は、スペルミン骨格を有し、式（Ｉ）：
【化１３】 ［式中、Ｒ１およびＲ３は水素であり、Ｒ２およびＲ４は同一であっても異なっ
ていてもよく、直線状または分枝して、アミド（ＣＯＮＨ）結合によって互いに
連結し、さらに一般式（ＩＩ）：
【化１４】 （式中、ｐ１は０ないし５であり、ｐ２は１ないし５、好ましくは１であり；ｐ
３およびｐ４の値は同一であっても異なっていてもよく、０から５、好ましくは
０であり； Ａ１、Ａ３およびＡ４は同一であっても異なっていてもよく、セリン、リジン
、オルニチン、スレオニン、ヒスチジン、システイン、アルギニンおよびチロシ
ンから選択されるアミノ酸であり；および Ａ２は、リジン、オルニチンおよびヒスチジンから選択されるアミノ酸である
） で示されるアミド結合によってスペルミン骨格に連結した１以上のアミノ酸から
形成されるペプチド基であり； Ｒ５およびＲ６は、２４個までの炭素原子を有し、アミドまたはアミン（ＮＣ
Ｈ２）結合によってスペルミン骨格に連結した飽和または不飽和ヒドロカルビル
基であるか；または 式中、Ｒ１およびＲ３は水素であり、Ｒ２およびＲ４は同一であっても異なっ
ていてもよく、２４個までの炭素原子を有し、アミドまたはアミン結合によって
スペルミン骨格に連結した飽和または不飽和ヒドロカルビル基であり、Ｒ５およ
びＲ６は同一であっても異なっていてもよく、アミド結合によってスペルミン骨
格に連結した式（ＩＩ）のペプチド基である］ で示される一般構造を有するスペルミン：ペプチドをベースとする界面活性剤の
化合物またはその塩、好ましくは医薬上許容される塩に関する。
【０００６】 本明細書に使用される場合、「ヒドロカルビル」なる語は、直鎖または分枝鎖
であってもよい１ないし２４個の炭素原子を有する基を示し、３ないし６個の炭
素原子を有する飽和炭素環式環を包含し、その鎖は不飽和（二重および／または
三重炭素−炭素結合）を含んでいてもよい。 式（ＩＩ）のペプチド基におけるアミノ酸Ａ１、Ａ２およびＡ３間のアミド結
合は、アミノ酸がジアミン、例えば、リジンまたはオルニチンである場合を除い
て（この場合、該結合は２つのアミン基のどちらを含んでいてもよい）、標準的
なペプチド結合（α結合）である。例えば、Ａ１がリジンである場合、アミノ酸
Ａ２に対する結合は、標準的なアルファアミド結合であってもよく、またはリジ
ン側鎖のアミンが関与するイプシロン（ε）アミド結合であってもよい。同様に
、Ａ１がオルニチンである場合、Ａ１がＡ２に結合しているアミド結合はアルフ
ァ結合であってもよく、またはオルニチンアミノ酸残基の側鎖上のアミンを用い
て形成されるデルタ（δ）結合であってもよい。
【０００７】 好ましくは、化合物は対称性であり、すなわち、Ｒ１およびＲ３は同一であり
、Ｒ２およびＲ４は同一であり、Ｒ５およびＲ６は同一である。本発明の対称性
スペルミン：ペプチドをベースとする界面活性剤の化合物は、「ジェミニ」界面
活性剤である。 好ましい具体例において、式（ＩＩ）の基におけるＡ１はセリンまたはスレオ
ニン、好ましくはセリンである。好ましくは、式（ＩＩ）の基におけるＡ３およ
びＡ４はリジン、オルニチン、ヒスチジンまたはアルギニンである。
【０００８】 さらに好ましい具体例において、ヒドロカルビル基は：
【化１５】 から選択される。
【０００９】 もう一つ別の好ましい具体例において、ヒドロカルビル基は：
【化１６】 から選択される。
【００１０】 本発明の化合物は、当業者によく知られた合成ペプチド化学を用いて容易に入
手可能な出発材料から調製されうる。図１ａおよび１ｂに示されるスキームは、
ヒドロカルビル基がアミン結合によってスペルミン部分に連結している本発明の
化合物の一般的な合成法を示し、図２ａおよび２ｂに示されるスキームは、カル
ボニル基がアミド結合によってスペルミン部分に連結している本発明の化合物の
一般的な合成法を示す。
【００１１】 図１および２に示される方法は、対称性の、すなわち、「ジェミニ」のスペル
ミン：ペプチドをベースとする界面活性剤の合成についてである。本発明の非対
称性スペルミン：ペプチドをベースとする界面活性剤は、異なる保護基を用いる
ことによって、例えば、スペルミンの第一アミンに不斉を導入することによって
調製できる。適当な窒素保護基は、当該分野でよく知られており、例えば、"Pro
tective Groups in Organic Chemistry"（T.W.Greene, Wiley-Interscience, Ne
w York, 2nd Edition, 1991）に記載されている。
【００１２】 本発明のもう一つ別の態様は、スペルミン：ペプチドをベースとする界面活性
剤の化合物を用いる方法に関する。かかる使用は、イン・ビボまたはイン・ビト
ロにおけるＤＮＡまたはＲＮＡポリヌクレオチド、またはその類似体の真核生物
または原核生物細胞中への移入を容易にすることを包含する。これらの使用は、
生物全体における遺伝子療法および遺伝的免疫化（抗体の産生の場合）の場合、
アンチセンスノックアウト効果を達成するためのポリヌクレオチドのトランスフ
ェクションを容易にすることを包含する。他の使用は、培養細胞中へのポリヌク
レオチドの移入が必要な場合、例えば、特に遺伝子発現研究およびアンチセンス
調節実験において、培養中の細胞中へのポリヌクレオチドのトランスフェクショ
ンを容易にするために、本発明の化合物を使用することを包含する。ポリヌクレ
オチドは、化合物と混合でき、細胞に添加し、ポリヌクレオチドの取り込みが可
能になるようにインキュベートできる。さらなるインキュベーション後、トラン
スフェクトされたＤＮＡによって提供された表現型特性について細胞をアッセイ
でき、または該ＤＮＡから発現されたｍＲＮＡのレベルをノーザンブロッティン
グまたはＰＣＲに基づく定量法、例えば、TaqmanR（登録商標）法（Perkin Elme
r, Connecticut, USA）の使用によって決定できる。本発明の化合物は、培養基
中の細胞におけるＤＮＡの細胞性取り込み効率において、先行技術における化合
物と比べて、有意な改善、典型的には３〜６倍の改善を与える。トランスフェク
ションプロトコールにおいて、ジェミニ化合物は、トランスフェクション効率を
上げるために、１以上の補足物と組み合わせて使用してもよい。かかる補足物は
、例えば： （ｉ）中性担体、例えば、ジオレイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＯ
ＰＥ）（Farhood, H.ら、(1985) Biochim. Biophys. Acta 1235 289）； （ｉｉ）錯化試薬、例えば、市販のＰＬＵＳ試薬（Life Technologies Inc. M
aryland, USA）またはペプチド、例えば、ポリリジンまたはポリオルニチンペプ
チドまたは主として、排他的ではないが、リジン、オルニチンおよび／またはア
ルギニンのような塩基性アミノ酸を含むペプチド から選択されうる。上記のリストは、網羅されているわけではなく、トランスフ
ェクションの効率を上げる他の補足物が本発明の範囲内に入る。
【００１３】 また別の態様において、本発明は、本発明の化合物を用いる遺伝子療法におけ
る遺伝子材料の移入に関する。 本発明のさらに別の態様は、本発明の化合物を用いてイン・ビトロおよびイン
・ビボでのヌクレオチドをベースとしない薬剤化合物の細胞中へのデリバリーを
もたらす方法に関する。 さらなる態様において、本発明は、抗感染療法において使用する場合、ポリヌ
クレオチドまたは抗感染性化合物の原核生物または真核生物中への移入を容易に
する方法に関する。 下記の定義は、本明細書においてしばしば使用されるある特定の用語の理解を
容易にするために提供される。
【００１４】 「アミノ酸」なる語は、＋Ｈ３ＮＣＨ（Ｒ）ＣＯ２ −の形態の二極性イオン（
双極性イオン）をいう。それらは、Ｒ基の性質によって区別され、Ｒが水素以外
である場合、不斉であることができ、ＤおよびＬファミリーを形成する。アミノ
酸は、天然または非天然アミノ酸であってもよい。Ｒ基が例えば、非極性（例え
ば、アラニン、ロイシン、フェニルアラニン）または極性（例えば、グルタミン
酸、ヒスチジン、アルギニンおよびリジン）であることができる２０個の天然に
生じるアミノ酸が存在する。非天然アミノ酸の場合、Ｒは、天然に見出されるア
ミノ酸において見出されないいずれか他の基であることができる。
【００１５】 「ポリヌクレオチド」なる語は一般に、非修飾ＲＮＡまたはＤＮＡあるいは修
飾ＲＮＡまたはＤＮＡであってもよいいずれかのポリリボヌクレオチドまたはポ
リデオキシリボヌクレオチドをいう。「ポリヌクレオチド」なる語は、限定する
ものではないが、１本鎖および２本鎖ＤＮＡ、１本鎖および２本鎖領域の混合物
であるＤＮＡ、１本鎖および２本鎖ＲＮＡ、および１本鎖および２本鎖領域の混
合物であるＲＮＡ、１本鎖あるいはより典型的には、２本鎖または１本鎖および
２本鎖領域の混合物であってもよいＤＮＡおよびＲＮＡを含んでなるハイブリッ
ド分子を包含する。さらに、「ポリヌクレオチド」なる語は、ＲＮＡまたはＤＮ
ＡあるいはＲＮＡおよびＤＮＡの両方を含む３本鎖領域をいう。ポリヌクレオチ
ドなる語はまた、１以上の修飾塩基を含有するＤＮＡまたはＲＮＡおよび安定性
もしくは他の理由で修飾された骨格を有するＤＮＡまたはＲＮＡを包含する。「
修飾された」塩基は、例えば、トリチル化塩基およびイノシンのような普通でな
い塩基を包含する。種々の修飾がＤＮＡおよびＲＮＡに施され；したがって、「
ポリヌクレオチド」は、典型的には天然に見出されるようなポリヌクレオチドの
化学的、酵素的または代謝的に修飾された形態、ならびにウイルスおよび細胞に
特有のＤＮＡおよびＲＮＡの化学的形態を包含する。「ポリヌクレオチド」はま
た、しばしばオリゴヌクレオチドと呼ばれる比較的短いポリヌクレオチドを包含
する。
【００１６】 「トランスフェクション」なる語は、化学的または物理的手段のいずれかによ
る細胞膜の修飾を含む方法を用いる培養中の細胞中へのポリヌクレオチドの導入
をいう。かかる方法は、例えば、Sambrookら、MOLECULAR CLONING: A LABORATOR
Y MANUAL, 2nd Ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harb
or, N.Y. (1989)に記載されている。ポリヌクレオチドは、直線状または環状の
１本鎖または２本鎖であってもよく、ポリヌクレオチドの複製またはポリヌクレ
オチドの一部を含みうる同種もしくは異種遺伝子の発現を調節するエレメントを
包含する。 本発明は、ここに、下記の実施例によって記載される。
【００１７】 実施例 実施例１ ＧＳＣ１の合成 工程１：
【化１７】
【００１８】 Ｎ−カルボエトキシフタルイミド（４ミリモル、４３９ｍｇ）のクロロホルム
（５ｍｌ）中溶液を室温で、スペルミン（２ミリモル、４０６．７ｍｇ）のクロ
ロホルム（５ｍｌ）中攪拌溶液に一度に加えた。混合物を１時間攪拌し、溶媒を
除去し、粗生成物を適当な真空下で乾燥させて、さらに精製することなく標題化
合物を得た（Sosnovsky, G. (1986) Zeitschrift fuer Naturforschung 41b: 12
2-129）。
【００１９】 工程２：
【化１８】
【００２０】 保護されたスペルミン３５０ｍｇ（０．７６ミリモル）を１０ｍｌの乾燥ＴＨ
Ｆ中に溶解し、塩化ラウロイル３当量（２．２８ミリモル）および２ｍｌの乾燥
ピリジンを加えた。３０分還流後、混合物を室温で一晩攪拌した。溶媒を除去し
、粗生成物をＡｃＯＥｔ（２５ｍｌ）中に溶解し、飽和重炭酸塩（２ｘ２０ｍｌ
）で洗浄した。有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、蒸発させた。得られた
油をＡｃＯＥｔ／ヘキサン（１：１〜４：１）ｒｆ＝０．２０（ＡｃＯＥｔ／ヘ
キサン１：１）を用いるシリカゲル上のクロマトグラフィーに付して、油として
ビス−ドデシルを得（４９０ｍｇ、８４％）、それを白色の半固体結晶として結
晶化させた。1 H-NMR (CDCl3): 7.9-7.6 m (8H (-C6H4-)2); 3.7-3.6 m (4H); 3.4-3.2 m (8H)
; 2.3-2.1 m (4H); 2.0-1.8 m (4H);1.6-1.4 m (8H); 1.3-1.1 m (32H); 0.9-0
.8 m (6H). 13C-NMR (CDCl3): 173.1, 173.0, 172.9, 172.8, 168.3, 168.2, 13
4.2, 134.1, 133.9, 133.8, 132.2, 132.1, 132.0, 131.9, 123.4, 123.2, 47.6
, 45.7, 45.5, 45.4, 43.5, 43.4, 35.9, 33.9, 33.2, 33.1, 30.9, 29.6, 29.5
, 29.4, 29.3, 29.1, 28.3, 28.2 ,27.1, 26.7, 26.4, 25.5, 25.4, 25.2, 25.1
, 24.9, 22.7, 14.1
【００２１】 工程３：
【化１９】
【００２２】 ビス−フタルイミド（４００ｍｇ、０．４８ミリモル）を２０ｍｌのＭｅＯＨ
中に溶解し、ヒドラジン一水化物０．４ｍｌを加え、混合物を６時間還流した。
溶媒を除去し、粗生成物をＭｅＯＨ（２０ｍｌ）中に再溶解し、２ｍｌの濃ＨＣ
ｌを加えた。混合物を３０分間還流し、溶媒を除去した。残渣を水性ＮａＯＨ１
０％中に溶解し、沈殿物をろ過し、３量の冷水で洗浄した。残渣を乾燥させて白
色粉末を得た（１１２ｍｇ、４１％）。1 H-NMR (MeOH): 3.21 t (3J = 6.8Hz, 4H); 2.6-2.5 m (8H); 2.76 t (3J = 7.5
Hz, 4H); 1.7-1.5 m (12H); 1.4-1.2 m (32H); 0.89 t (3J = 6.9Hz, 6H (-CH3) 2 )
【００２３】 工程４：
【化２０】
【００２４】 ジアミン１００ｍｇ（０．１７６ミリモル）、ＨＯＢｔ２当量（０．３５３ミ
リモル、５４ｍｇ）、ＢＯＣ２Ｌｙｓ２．４当量（０．４２３ミリモル、１３５
ｍｇ）およびＤＩＰＥＡ２当量（０．３５３ミリモル、６２ｍｌ）をＣＨ２Ｃｌ ２ （２０ｍｌ）中に溶解した。混合物を−１０℃で冷却し、ＤＣＣ２．４当量（
０．４２３ミリモル、８７ｍｇ）を加えた。混合物を−１０℃で攪拌し、非常に
ゆっくりと室温に戻し、一晩放置した。ろ過によってＤＣＵを除去し、溶媒を蒸
発させた。粗生成物をＡｃＯＥｔ（３０ｍｌ）中に再溶解し、４％ＮａＨＣＯ３ （２ｘ１５ｍｌ）、４％クエン酸（２ｘ１５ｍｌ）、水（２０ｍｌ）および最後
にブライン（２０ｍｌ）で連続洗浄した。有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥さ
せ、蒸発乾固した。残渣をシリカゲル上のクロマトグラフィーに付し、ヘキサン
／ＡｃＯＥｔ１／１（ｒｆ＝０．０１）〜ＡｃＯＥｔ／ＭｅＯＨ９／１（ｒｆ＝
０．６）で溶出して、油を得た（１５２ｍｇ、７１％）。1 H-NMR (CDCl3): 7.05 sbroad(1H); 6.69 sbroad (1H); 5.6-4.7 m (6H); 4.9-4
.1 m (4H); 3.7-3.0 m (16H); 2.2-2.0 m (6H); 2.0-1.0 m (88H); 0.88 t (3J
= 6.8Hz, 6H (-CH3)2)
【００２５】 工程５：
【化２１】
【００２６】 テトラ保護ジェミニ１５０ｍｇ（０．１２ミリモル）をＣＨ２Ｃｌ２／ＴＦＡ
１／１（２５ｍｌ）中に溶解し、室温で０．５時間攪拌した。溶媒を除去して脱
保護した化合物をＴＦＡ塩として得、それを陰イオンＤｏｗｅｘ １Ｘ８上で交
換して、テトラヒドロクロリド塩を粘着性の油として得た。化合物を少量のＭｅ
ＯＨ中に再溶解し、エーテルで沈殿させ、デカンテーションによって溶媒を除去
し、これを３回繰り返してＧＳＣ１を得た。1 H-NMR (MeOH): 3.8-3.1 m (8H); 3.0-2.8 m (4H); 2.2-2.1 m (4H); 2.0-1.4 m
(26H); 1.4-1.2 m (36H); 0.90 t (3J = 6.8Hz, 6H (-CH3)2). M/z(H+): 823.7
5; (2H+): 412.38
【００２７】 実施例２ ＧＳＣ４の合成 工程１：
【化２２】
【００２８】 ジアミン１５０ｍｇ（０．２６５ミリモル）を５％水性アセトニトリル（１０
ｍｌ）中に溶解し、トリエチルアミン２．２当量（０．６ミリモル、８０μｌ）
を加えた。アセトニトル（８ｍｌ）中におけるＮα，Ｎε−ビス−ｔｅｒ−ブチ
ル−カルバメート−Ｌ−リジン−Ｌ−セリン−Ｏ−スクシンイミデート（通常の
ペプチド合成によって形成された）２当量（０．５２８ミリモル、２８０ｍｇ）
をゆっくりと加えた。混合物を室温で４８時間攪拌し、溶媒を除去した。粗生成
物をＡｃＯＥｔ（３０ｍｌ）中に再溶解し、水（２ｘ２０ｍｌ）、３％ＨＣｌ（
２ｘ２０ｍｌ）、水（２０ｍｌ）および最後にブライン（２０ｍｌ）で連続洗浄
した。有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、蒸発乾固して２５２ｍｇを得た
（６５％）。1 H-NMR (CDCl3): 4.9-4.1 m (4H); 3.6-3.0 m (20H); 2.2-2.0 m (8H); 2.0-1.0
m (80H); 0.88 t (3J = 6.8Hz, 6H (-CH3)2)
【００２９】 工程２：
【化２３】
【００３０】 テトラ保護ジェミニ２４８ｍｇ（０．１７７ミリモル）をＴＨＦ／濃ＨＣｌ
１／１（２５ｍｌ）中に溶解し、室温で１時間攪拌した。溶媒を除去して脱保護
した化合物を粘着性の暗色油として得、それを少量のＭｅＯＨ中に再溶解し、エ
ーテルで沈殿させ、デカンテーションによって溶媒を除去し、これを数回繰り返
して、ＧＳＣ４をピンク色の粉末として得た（１２０ｍｇ、６０％）。1 H-NMR (MeOH): 4.0-3.9 m (2H); 3.5-3.2 m ; 3.1-2.9 m (4H); 2.5-2.3 m (4H
); 2.3-2.1 m (1H); 2.0-1.5 m (20H); 1.4-1.2 m (32H); 0.90 t (3J = 6.8Hz,
6H (-CH3)2)
【００３１】 実施例３ ＧＳＣ４０の合成 工程１：
【化２４】
【００３２】 ジアミン１２０ｍｇ（０．２１２ミリモル）、ＨＯＢｔ２．５当量（０．５３
ミリモル、７２ｍｇ）、（ＢＯＣ２Ｌｙｓ）Ｌｙｓ２．５当量（０．５３ミリモ
ル、４２６ｍｇ）およびＤＩＰＥＡ２．５当量（０．５３ミリモル、９２μｌ）
をＣＨ２Ｃｌ２／ＴＨＦ１／１（２０ｍｌ）中に溶解した。混合物を−１０℃で
冷却し、ＤＣＣ２．４当量（０．５０８ミリモル、１０５ｍｇ）を加えた。混合
物を−１０℃で攪拌し、非常にゆっくりと室温に戻し、一晩放置した。ろ過によ
ってＤＣＵを除去し、溶媒を蒸発させた。粗生成物をＥｔＯＡｃ（３０ｍｌ）中
に再溶解し、４％ＮａＨＣＯ３（２Ｘ１５ｍｌ）、４％クエン酸（２Ｘ１５ｍｌ
）、水（２０ｍｌ）および最後にブライン（２０ｍｌ）で連続洗浄した。有機相
を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、蒸発乾固した。残渣をシリカゲル上のクロマ
トグラフィーに付し、ヘキサン／ＥｔＯＡｃ１／１（ｒｆ＝０．０１）〜ＥｔＯ
Ａｃ／ＭｅＯＨ９／１（ｒｆ＝０．５５）で溶出して油を得た（２１０ｍｇ、４
６％）。1 H-NMR (CDCl3): 4.9-4.6 m (2H); 4.1-3.9 m (4H); 3.5-2.9 m (16H); 2.3-2.1
m (2H); 1.9-1.0 m (164H); 0.88 t (3J = 6.8Hz, 6H (-CH3)2)
【００３３】 工程２：
【化２５】
【００３４】 オクタ保護ジェミニ２００ｍｇ（０．０９４ミリモル）をＴＨＦ／濃ＨＣｌ
１／１（２０ｍｌ）中に溶解し、室温で１時間攪拌した。溶媒を除去して脱保護
した化合物を黄色油として得、それを少量のＭｅＯＨ中に再溶解し、エーテルで
沈殿させ、デカンテーションによって溶媒を除去し、これを数回繰り返して、Ｇ
ＳＣ４０を黄色粉末として得た（１３０ｍｇ、８５％）。
【００３５】 実施例４ ＧＳＣ４１の合成 工程１：
【化２６】
【００３６】 ジアミン２００ｍｇ（０．３５ミリモル）を５％水性アセトニトリル（２０ｍ
ｌ）中に溶解し、トリエチルアミン２当量（０．７ミリモル、０．１ｍｌ）を加
えた。アセトニトリル（１０ｍｌ）中におけるビス−（Ｎα，Ｎε−ビス−ｔｅ
ｒ−ブチル−カルバメート−Ｌ−リジン）−Ｌ−リジン−Ｌ−セリン−Ｏ−スク
シンイミデート２当量（０．７１ミリモル、７００ｍｇ）をゆっくりと加えた。
混合物を室温で４８時間攪拌し、溶媒を除去した。粗生成物をＡｃＯＥｔ（３０
ｍｌ）中に再溶解し、水（２ｘ２０ｍｌ）、３％ＨＣｌ（２ｘ２０ｍｌ）、水（
２０ｍｌ）および最後にブライン（２０ｍｌ）で連続洗浄した。有機相を無水硫
酸ナトリウムで乾燥させ、蒸発乾固して５０９ｍｇを得た（６３％）。1 H-NMR (CDCl3): 4.9-4.6 m ; 4.1-3.9 m (4H); 3.6-2.9 m (22H); 2.3-2.1 m (
4H); 2.0-1.0 m ; 0.88 t (3J = 6.8Hz, 6H (-CH3)2)
【００３７】 工程２：
【化２７】
【００３８】 テトラ保護ジェミニ４９９ｍｇ（０．２１６ミリモル）をＴＨＦ／濃ＨＣｌ
１／１（３０ｍｌ）中に溶解し、室温で１時間攪拌した。溶媒を除去して脱保護
した化合物を粘着性の茶色の油として得、それを少量のＭｅＯＨ中に再溶解し、
エーテルで沈殿させ、デカンテーションによって溶媒を除去し、これを数回繰り
返してＧＳＣ４１を茶色粉末として得た（３５０ｍｇ、９０％）。
【００３９】 実施例５ ＧＳＣ４２の合成 工程１：
【化２８】
【００４０】 ジアミン２００ｍｇ（０．３５ミリモル）を５％水性アセトニトリル（２０ｍ
ｌ）中に溶解し、トリエチルアミン２当量（０．７ミリモル、０．１ｍｌ）を加
えた。アセトニトリル（１０ｍｌ）中におけるビス−（Ｎα，Ｎε−ビス−ｔｅ
ｒ−ブチル−カルバメート−Ｌ−リジン）−Ｌ−リジン−Ｌ−セリン−Ｏ−スク
シンイミデート２当量（０．７１ミリモル、７００ｍｇ）をゆっくりと加えた。
混合物を室温で４８時間攪拌し、溶媒を除去した。粗生成物をＡｃＯＥｔ（３０
ｍｌ）中に再溶解し、水（２ｘ２０ｍｌ）、３％ＨＣｌ（２ｘ２０ｍｌ）、水（
２０ｍｌ）および最後にブライン（２０ｍｌ）で連続洗浄した。有機相を無水硫
酸ナトリウムで乾燥させ、蒸発乾固して５２２ｍｇを得た（７０％）。1 H-NMR (CDCl3): 6.7-6.6 m (2H); 5.5-5.3 m (2H); 4.9-4.6 m (4H); 4.5-4.3
m (4H); 4.1-3.9 m (4H); 3.5-2.9 m (20H); 2.3-2.1 m (4H); 1.9-1.0 m ; 0.8
8 t (3J = 6.8Hz, 6H (-CH3)2)
【００４１】 工程２：
【化２９】
【００４２】 テトラ保護ジェミニ５１７ｍｇ（０．２４２ミリモル）をＴＨＦ／濃ＨＣｌ
１／１（３０ｍｌ）中に溶解し、室温で１時間攪拌した。溶媒を除去して脱保護
した化合物を粘着性の暗色の油として得、それを少量のＭｅＯＨ中に再溶解し、
エーテルで沈殿させ、デカンテーションによって溶媒を除去し、これを数回繰り
返して、ＧＳＣ４２を茶色粉末として得た（３４６ｍｇ、８８％）。
【００４３】 実施例６ ＧＳＣ２の合成 工程１：
【化３０】
【００４４】 保護されたスペルミン１．２３ｇ（２．６５ミリモル）を１，２−ジクロロエ
タン（２５ｍｌ）中に溶解し、ドデシルアルデヒド２．５当量（６．６ミリモル
、１．５ｍｌ）を加えた。１０分後、シアノ水素化ホウ素ナトリウム６当量（１
５．９ミリモル、１ｇ）を加え、混合物を室温で一晩攪拌した。次いで、シアノ
水素化ホウ素ナトリウム４．５当量（７５０ｍｇ）をさらに加え、混合物を室温
で一晩攪拌した。該溶液をジクロロメタン（１５０ｍｌ）と水（１５０ｍｌ）の
間に分配し、ｐＨ９に調整した。得られたエマルジョンを分液漏斗中に１２時間
放置した。次いで、有機相を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮した。粗生成物を
シリカゲル上のクロマトグラフィーに付し、０．１％ＮＥｔ３を含有するＥｔＯ
Ａｃ／ヘキサン１／４〜１／２（ｒｆ：０．３）で溶出して、半固体黄色化合物
を得た（５４０ｍｇ、２６％）。
【００４５】 工程２：
【化３１】
【００４６】 保護されたスペルミン２００ｍｇ（０．２５ミリモル）をメタノール（１０ｍ
ｌ）中に溶解し、ヒドラジン一水化物１０当量（２．５ミリモル、０．１３ｍｌ
）を加えた。混合物を８時間還流し、溶媒を除去した。粗生成物を１０ｍｌのメ
タノール中に再溶解し、濃ＨＣｌ（２ｍｌ）を加え、混合物を３０分間還流し、
氷中で冷却し、ろ過した。溶媒を除去し、粗生成物をジクロロメタン（３０ｍｌ
）中に再溶解し、室温で３０分攪拌し、ろ過によって沈殿を除去した。溶液を蒸
発させ、減圧下で乾燥させてＧＳＣ２を黄色半固体化合物として得た（１５０ｍ
ｇ、８８％）。
【００４７】 実施例７ ＧＳＣ１２の合成 工程１：
【化３２】
【００４８】 ジアミン１４３ｍｇ（０．２６５ミリモル）を５％水性ＴＨＦ（１０ｍｌ）お
よびＮＥｔ３０．６ミリモル（８０ｍｌ）中に溶解し、ＴＨＦ（５ｍｌ）中にお
ける活性化ペプチド２当量（０．５２８ミリモル、２８２ｍｇ）を加えた。混合
物を一晩攪拌し、濃縮した。次いで、粗生成物をＥｔＯＡｃ（６０ｍｌ）中に溶
解し、水（２ｘ２０ｍｌ）、３％ＨＣｌ（２ｘ２０ｍｌ）、水（２０ｍｌ）、ブ
ライン（２０ｍｌ）で連続洗浄した。有機相を硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶媒
を蒸発させて粘着性の白色化合物を得た（２１０ｍｇ、５８％）。
【００４９】 工程２：
【化３３】
【００５０】 テトラ−Ｂｏｃ２００ｍｇ（０．１４６ミリモル）をＴＨＦ／濃ＨＣｌ １／
１（２０ｍｌ）中に溶解し、室温で１時間攪拌した。溶媒を除去し、粗生成物を
少量のＭｅＯＨ中に再溶解し、エーテルで沈殿させ、−２０℃に冷却し、デカン
テーションによって溶媒を除去し、これを数回繰り返してＧＳＣ１２を黄色粉末
として得た（１５０ｍｇ、８７％）。
【００５１】 実施例８ スペルミン：ペプチドをベースとする界面活性剤の化合物を用いる
ルシフェラーゼを発現する組換えプラスミドの細胞中へのトランスフェクション トランスフェクション研究は、接着細胞系統ＣＨＯ−Ｋ１を用いて行われた（
Puckら、1958）。完全培地は、１０％ｖ／ｖ胎仔ウシ血清および１ｘＬ−グルタ
ミンを補足したＭＥＭアルファ培地より構成された。全培地および補足物は、Li
fe Technologiesより入手した。
【００５２】 β−ガラクトシダーゼを発現する安定なトランスフェクト細胞系統は、１０：
１比率におけるプラスミドｐＳＶ−β−ガラクトシダーゼ・コントロール・ベク
ター（pSV-β-Galactosidase Control Vector）（Promega）とプラスミド セレ
クタ・ベクタ−ネオ（Selecta Vecta-Neo）（R&D Systems）の同時トランスフェ
クションによって生じた。Ｇ４１８（Life Technologies）選択（０．８ｍｇ ｍ
ｌ−１）後、候補細胞系統をβ−ガラクトシダーゼ活性（β−Galレポーター遺
伝子アッセイ, 化学ルミネセンス; Roche Diagnostics）について試験した。
【００５３】 イン・ビトロ遺伝子トランスフェクション １ウェルあたり１ｘ１０４細胞の適当な密度でのトランスフェクションの１６
〜１８時間前に、細胞を９６ウェルＭＴＰプレート（Beckton Dickinson）中に
播種した。トランスフェクションのために、１ウェルあたり６４ｎｇのルシフェ
ラーゼリポーター遺伝子プラスミド、ｐＧＬ３−コントロール・ベクター（Prom
ega）を種々の濃度のスペルミン：ペプチドをベースとする界面活性剤の化合物
および錯化剤と一緒にインキュベートした。室温で３０分インキュベーション後
、OPTI-MEMR（登録商標）培地（Life Technologies）をトランスフェクション混
合物に加え、該溶液を細胞上に置いた（１ウェルあたりの最終容量：１００μｌ
）。３７℃で３時間または一晩インキュベーション後、トランスフェクション溶
液を完全培地と交換し、細胞をさらに３７℃でインキュベートした。製造者のガ
イドライン（Roche Diagnostics）にしたがって、トランスフェクションの約４
８時間後にレポーター遺伝子アッセイを行った。Packard TopCount NXT ミクロ
プレートシンチレーションおよびルミネセンスカウンターにおいてルミネセンス
を測定した。標準化目的で、β−ガラクトシダーゼ活性（β−Galレポーター遺
伝子アッセイ; 化学ルミネセンス; Roche Diagnostics）を測定し、β−ガラク
トシダーゼ活性あたりのルシフェラーゼ活性を計算した。
【図面の簡単な説明】
【図１】 図１ａおよび図１ｂ。ヒドロカルビル基（この場合、ドデシル）
がアミン結合によってスペルミン部分に連結しているスペルミン：ペプチドをベ
ースとする界面活性剤の化合物の合成のための一般的なスキーム。図１ａの最終
化合物は、図１ｂの最初の化合物である。
【図２】 図２ａおよび図２ｂ。カルボニル基（この場合、ドデカノイル）
がアミド結合によってスペルミン部分に連結しているスペルミン：ペプチドをベ
ースとする界面活性剤の化合物の合成のための一般的なスキーム。図２ａの最終
化合物は、図２ｂの最初の化合物である。
【図３】 スペルミン：ペプチドをベースとするジェミニ界面活性剤ＧＳ−
Ｃ−１、ＧＳ−Ｃ−２、ＧＳ−Ｃ−３、ＧＳ−Ｃ−４およびＧＳ−Ｃ−１２での
ＣＨＯ−Ｋ１細胞（ベータ−ガラクトシダーゼで安定にトランスフェクトした）
のトランスフェクション。棒は、８実験の平均ｃｐｓ（１秒あたりのカウント）
±平均の標準誤差を示す。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｃ０７Ｃ 233/36 Ｃ０７Ｃ 233/36 Ｃ０７Ｄ 209/48 Ｃ０７Ｋ 5/03 Ｃ０７Ｋ 5/03 5/068 5/068 5/11 5/11 Ｃ１２Ｎ 15/00 Ａ Ｃ１２Ｎ 15/09 Ｃ０７Ｄ 209/48 Ｚ (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＭＺ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ， ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＧ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ， ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，Ｃ Ｈ，ＣＮ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ，ＤＺ ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ， ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，Ｋ Ｇ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ， ＭＸ，ＭＺ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，Ｓ Ｄ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ， ＺＡ，ＺＷ (71)出願人 ケンブリッジ・ユニバーシティ・テクニカ ル・サービシーズ・リミテッド ＣＡＭＢＲＩＤＧＥ ＵＮＩＶＥＲＳＩＴ Ｙ ＴＥＣＨＮＩＣＡＬ ＳＥＲＶＩＣＥ Ｓ ＬＩＭＩＴＥＤ イギリス、シービー２・１ティエス、ケン ブリッジシャー、ケンブリッジ、トリニテ ィ・レイン、ジ・オールド・スクールズ (72)発明者 パトリック・カミレリ イギリス、シーエム19・５エイダブリュ ー、エセックス、ハーロウ、サード・アベ ニュー、ニュー・フロンティアーズ・サイ エンス・パーク・サウス、スミスクライ ン・ビーチャム・ファーマシューティカル ズ (72)発明者 フィリップ・グエダ フランス、エフ−69424リヨン・セデック ス03、アヴニュ・ラカッサーニュ115番、 サントル・ドゥ・ルシェルシュ・エ・デヴ ロップマン・ドゥ・リヨン、リファ・ソシ エテ・アノニム・フランス (72)発明者 アンソニー・ジョン・カービー イギリス、シービー２・１イーダブリュ ー、ケンブリッジシャー、ケンブリッジ、 レンズフィールド・ロード、ユニバーシテ ィ・ケミカル・ラボラトリー、デパートメ ント・オブ・ケミストリー、ユニバーシテ ィ・オブ・ケンブリッジ (72)発明者 アンドレアス・クレーマー イギリス、シーエム19・５エイダブリュ ー、エセックス、ハーロウ、サード・アベ ニュー、ニュー・フロンティアーズ・サイ エンス・パーク・サウス、スミスクライ ン・ビーチャム・ファーマシューティカル ズ Ｆターム(参考） 4B024 AA01 AA20 CA04 GA30 HA20 4C076 DD07 DD16 DD52 DD60 EE41 FF34 4C204 BB01 BB09 CB04 DB30 EB03 FB16 GB01 4H006 AA01 AA02 AA03 AB68 AC52 AC53 AC80 BE23 4H045 AA10 AA30 BA11 BA12 BA42 EA34 EA35 FA30 GA01 GA05

Claims (33)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 式（Ｉ）： 【化１】 ［式中、Ｒ１およびＲ３は水素であり、Ｒ２およびＲ４は同一であっても異なっ
    ていてもよく、直線状または分枝して、アミド（ＣＯＮＨ）結合によって互いに
    連結し、さらに一般式（ＩＩ）： 【化２】 （式中、ｐ１は０ないし５であり、ｐ２は１ないし５であり；ｐ３およびｐ４の
    値は同一であっても異なっていてもよく、０から５であり； Ａ１、Ａ３およびＡ４は同一であっても異なっていてもよく、セリン、リジン
    、オルニチン、スレオニン、ヒスチジン、システイン、アルギニンおよびチロシ
    ンから選択されるアミノ酸であり；および Ａ２は、リジン、オルニチンおよびヒスチジンから選択されるアミノ酸である
    ） で示されるアミド結合によってスペルミン骨格に連結した１以上のアミノ酸から
    形成されるペプチド基であり； Ｒ５およびＲ６は、２４個までの炭素原子を有し、アミドまたはアミン（ＮＣ
    Ｈ２）結合によってスペルミン骨格に連結した飽和または不飽和ヒドロカルビル
    基であるか；または 式中、Ｒ１およびＲ３は水素であり、Ｒ２およびＲ４は同一であっても異なっ
    ていてもよく、２４個までの炭素原子を有し、アミドまたはアミン結合によって
    スペルミン骨格に連結した飽和または不飽和ヒドロカルビル基であり、Ｒ５およ
    びＲ６は同一であっても異なっていてもよく、アミド結合によってスペルミン骨
    格に連結した式（ＩＩ）のペプチド基である］ で示される一般構造を有するスペルミン：ペプチドをベースとする界面活性剤の
    化合物またはその塩、好ましくはその医薬上許容される塩。
  2. 【請求項２】 Ｒ１およびＲ３が同一であり、Ｒ２およびＲ４が同一であり
    、Ｒ５およびＲ６が同一である対称性の請求項１記載のスペルミン：ペプチドを
    ベースとする界面活性剤の化合物。
  3. 【請求項３】 式（ＩＩ）のペプチド基においてｐ１が１であり、ｐ２、ｐ
    ３およびｐ４が全て０である請求項１または２記載のスペルミン：ペプチドをベ
    ースとする界面活性剤の化合物。
  4. 【請求項４】 式（ＩＩ）のペプチド基においてｐ１およびｐ２がどちらも
    １であり、ｐ３およびｐ４がどちらも０である請求項１または２記載のスペルミ
    ン：ペプチドをベースとする界面活性剤の化合物。
  5. 【請求項５】 式（ＩＩ）のペプチド基においてｐ１が０であり、ｐ２、ｐ
    ３およびｐ４が全て１である請求項１または２記載のスペルミン：ペプチドをベ
    ースとする界面活性剤の化合物。
  6. 【請求項６】 式（ＩＩ）のペプチド基においてｐ１およびｐ３が０であり
    、ｐ２が１であり、ｐ４が２である請求項１または２記載のスペルミン：ペプチ
    ドをベースとする界面活性剤の化合物。
  7. 【請求項７】 Ａ１がセリンである請求項１〜６のいずれか１項記載のスペ
    ルミン：ペプチドをベースとする界面活性剤の化合物。
  8. 【請求項８】 Ａ２がリジンである請求項１〜６のいずれか１項記載のスペ
    ルミン：ペプチドをベースとする界面活性剤の化合物。
  9. 【請求項９】 ヒドロカルビル基が： 【化３】 から選択される請求項１記載のスペルミン：ペプチドをベースとする界面活性剤
    の化合物。
  10. 【請求項１０】 ヒドロカルビル基が： 【化４】 から選択される請求項１記載のスペルミン：ペプチドをベースとする界面活性剤
    の化合物。
  11. 【請求項１１】 化合物： 【化５】 。
  12. 【請求項１２】 化合物： 【化６】 。
  13. 【請求項１３】 式： 【化７】 で示される化合物ＧＳＣ１。
  14. 【請求項１４】 式： 【化８】 で示される化合物ＧＳＣ４。
  15. 【請求項１５】 式： 【化９】 で示される化合物ＧＳＣ４０。
  16. 【請求項１６】 式： 【化１０】 で示される化合物ＧＳＣ４２。
  17. 【請求項１７】 式： 【化１１】 で示される化合物ＧＳＣ２。
  18. 【請求項１８】 式： 【化１２】 で示される化合物ＧＳＣ１２。
  19. 【請求項１９】 イン・ビボまたはイン・ビトロでの真核生物または原核生
    物細胞中へのＤＮＡまたはＲＮＡポリヌクレオチドまたはその類似体のトランス
    フェクションを容易にすることにおける請求項１〜１５のいずれか１項記載のス
    ペルミン：ペプチドをベースとする界面活性剤の化合物の使用。
  20. 【請求項２０】 化合物が （ｉ）中性担体；または （ｉｉ）錯化試薬 よりなる群から選択される１以上の補足物と組み合わせて使用される請求項１９
    記載のスペルミン：ペプチドをベースとする界面活性剤の化合物の使用。
  21. 【請求項２１】 中性担体がジオレオイルホスファチジルエタノールアミン
    （ＤＯＰＥ）である請求項２０記載の使用。
  22. 【請求項２２】 錯化試薬がＰＬＵＳ試薬である請求項２０記載の使用。
  23. 【請求項２３】 錯化試薬が主に塩基性アミノ酸を含んでなるペプチドであ
    る請求項２０記載の使用。
  24. 【請求項２４】 ペプチドが塩基性アミノ酸よりなる請求項２３記載の使用
    。
  25. 【請求項２５】 塩基性アミノ酸がリジンおよびアルギニンから選択される
    請求項２３または２４記載の使用。
  26. 【請求項２６】 ペプチドがポリリジンまたはポリオルニチンである請求項
    ２４記載の使用。
  27. 【請求項２７】 オリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドを細胞中へ移
    入してアンチセンスノックアウト効果を成し遂げる請求項１９〜２６のいずれか
    １項記載の使用。
  28. 【請求項２８】 遺伝子療法のためにオリゴヌクレオチドまたはポリヌクレ
    オチドを細胞中へ移入する請求項１９記載の使用。
  29. 【請求項２９】 生物全体において遺伝的免疫化（抗体の産生）のためにオ
    リゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドを細胞中へ移入する請求項１９記載の
    使用。
  30. 【請求項３０】 オリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドを培養中の細
    胞中へ移入する請求項１９〜２６のいずれか１項記載の使用。
  31. 【請求項３１】 抗感染療法における使用のために、真核生物または原核生
    物中へのポリヌクレオチドまたは抗感染性化合物の移入を容易にするための請求
    項１〜１８のいずれか１項記載のスペルミン：ペプチドをベースとする界面活性
    剤の化合物の使用。
  32. 【請求項３２】 互いのあるいは固体または半固体表面に対する培養中の細
    胞の接着を容易にするための請求項１〜１８のいずれか１項記載のスペルミン：
    ペプチドをベースとする界面活性剤の化合物の使用。
  33. 【請求項３３】 アミノ酸またはペプチドをヒドロカルビル化スペルミン骨
    格に付加することを特徴とする請求項１記載のスペルミン：ペプチドをベースと
    する界面活性剤の化合物の製法。
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