JP2003334066A - 海洋深層水を用いた細胞培養方法 - Google Patents
海洋深層水を用いた細胞培養方法Info
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 細胞が要求する多様な培養条件を満たす汎用
性のある細胞培養方法を提供すること。 【解決手段】 細胞培養液を作製するときに使用される
蒸留水の代替水として海洋深層水を用いる手法や細胞培
養液の添加栄養素の代替栄養素として海洋深層水を用い
る手法等に基づいて行うように工夫し、細胞汎用性の高
い細胞培養方法を提供し、更に、無血清条件の下で、ヒ
ト正常細胞を前記細胞培養方法に基づいて増殖させるよ
うに工夫した自家培養方法を提供する。
性のある細胞培養方法を提供すること。 【解決手段】 細胞培養液を作製するときに使用される
蒸留水の代替水として海洋深層水を用いる手法や細胞培
養液の添加栄養素の代替栄養素として海洋深層水を用い
る手法等に基づいて行うように工夫し、細胞汎用性の高
い細胞培養方法を提供し、更に、無血清条件の下で、ヒ
ト正常細胞を前記細胞培養方法に基づいて増殖させるよ
うに工夫した自家培養方法を提供する。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、細胞培養技術に関
する。特に再生医療等の分野で有用である、海洋深層水
を用いた細胞培養方法及び該方法に関連する技術に関す
る。
する。特に再生医療等の分野で有用である、海洋深層水
を用いた細胞培養方法及び該方法に関連する技術に関す
る。
【０００２】
【従来の技術】２０世紀の初頭に確立された動物細胞培
養法は、細胞に必要な最小限のアミノ酸等の栄養素を培
養容器内の細胞に添加して増殖させる技術であり、培養
容器の所定の培養箇所に移入された細胞が、該細胞の走
化性（化学走性）に基づいて、その周辺領域に、栄養素
を利用しながら細胞を徐々に移住させて増殖する性質を
利用する技術である。現在、この細胞培養技術は、分子
生物学や細胞生物学等の研究、医薬品の生産やスクリー
ニング、検査等の医療やその関連産業に必須のものとな
っている。
養法は、細胞に必要な最小限のアミノ酸等の栄養素を培
養容器内の細胞に添加して増殖させる技術であり、培養
容器の所定の培養箇所に移入された細胞が、該細胞の走
化性（化学走性）に基づいて、その周辺領域に、栄養素
を利用しながら細胞を徐々に移住させて増殖する性質を
利用する技術である。現在、この細胞培養技術は、分子
生物学や細胞生物学等の研究、医薬品の生産やスクリー
ニング、検査等の医療やその関連産業に必須のものとな
っている。
【０００３】従来の細胞培養は、癌細胞や遺伝子導入細
胞等の不死化された細胞株を扱うものであったが、近
年、再生医療等の基盤技術となる正常細胞の培養技術が
研究されている。
胞等の不死化された細胞株を扱うものであったが、近
年、再生医療等の基盤技術となる正常細胞の培養技術が
研究されている。
【０００４】この正常細胞培養では、細胞が自己由来の
ものであるか否かで、「自家培養細胞」と「同種培養細
胞」に分類され、今後は、永久生着が可能であって、倫
理上の問題も無くなり、非自己由来のウイルスやプリオ
ン等による感染の危険性も根本的に排除できるという利
点を有することから、自家培養細胞を用いた技術が再生
医療等の分野で進展するものと考えられる。
ものであるか否かで、「自家培養細胞」と「同種培養細
胞」に分類され、今後は、永久生着が可能であって、倫
理上の問題も無くなり、非自己由来のウイルスやプリオ
ン等による感染の危険性も根本的に排除できるという利
点を有することから、自家培養細胞を用いた技術が再生
医療等の分野で進展するものと考えられる。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】しかしながら、従来の
細胞培養、とりわけ自家細胞培養技術においては、必要
とする成長因子の種類が多く、また、培養する細胞の由
来や個体によっても要求される成長因子が異なる等によ
り、培養条件は多様であるので、均一かつ的確な培養条
件を設定することが困難であった。
細胞培養、とりわけ自家細胞培養技術においては、必要
とする成長因子の種類が多く、また、培養する細胞の由
来や個体によっても要求される成長因子が異なる等によ
り、培養条件は多様であるので、均一かつ的確な培養条
件を設定することが困難であった。
【０００６】即ち、選択された最小限の栄養素（ビタミ
ン、タンパク質等）を培養液に添加して行う従来の手法
では、様々な細胞が要求する多様な培養条件を全て満た
すような培地を形成することはできない。このため、正
常細胞等の細胞を培養する際には、基本培地にビタミン
や種々の蛋白質等を添加することによって、培養目的と
する細胞の増殖が可能な培養条件を調整し、作製する手
法を採用せざるを得なかった。
ン、タンパク質等）を培養液に添加して行う従来の手法
では、様々な細胞が要求する多様な培養条件を全て満た
すような培地を形成することはできない。このため、正
常細胞等の細胞を培養する際には、基本培地にビタミン
や種々の蛋白質等を添加することによって、培養目的と
する細胞の増殖が可能な培養条件を調整し、作製する手
法を採用せざるを得なかった。
【０００７】そこで、本発明では、細胞が要求する多様
な培養条件を満たす細胞培養培地を新規に創作するとと
もに、該細胞培養液を用いた細胞培養法及びこの細胞培
養法を基礎にした自家培養方法を提供することを主目的
とする。
な培養条件を満たす細胞培養培地を新規に創作するとと
もに、該細胞培養液を用いた細胞培養法及びこの細胞培
養法を基礎にした自家培養方法を提供することを主目的
とする。
【０００８】
【課題を解決するための手段】上記技術的課題を解決す
るため、本願では、以下の細胞培養に係わる方法を提供
する。
るため、本願では、以下の細胞培養に係わる方法を提供
する。
【０００９】まず、細胞培養液に海洋深層水を用いる細
胞培養方法を提供する。具体的には、細胞培養液を作製
するための蒸留水の代替水として海洋深層水を用いる方
法や細胞培養液の添加栄養素の代替栄養素として海洋深
層水を用いる方法を提供することができる。
胞培養方法を提供する。具体的には、細胞培養液を作製
するための蒸留水の代替水として海洋深層水を用いる方
法や細胞培養液の添加栄養素の代替栄養素として海洋深
層水を用いる方法を提供することができる。
【００１０】ここで、「海洋深層水」とは、一般的に深
度２００メートルより深いところの海水であって、グリ
ーンランド周辺において、塩分濃度差によって生じた
「プルーム」と呼ばれる垂直に沈む地球規模の海流が始
まりとなって、一度も大気に触れる事なく、何世紀もの
歳月をかけて地球を回っているといわれる海水である。
この海洋深層水は、太陽光線がほとんど届かず、しかも
低温高圧の状態にあるので、細菌が少なく、無機栄養塩
（ミネラル）等を豊富に含んでいる。
度２００メートルより深いところの海水であって、グリ
ーンランド周辺において、塩分濃度差によって生じた
「プルーム」と呼ばれる垂直に沈む地球規模の海流が始
まりとなって、一度も大気に触れる事なく、何世紀もの
歳月をかけて地球を回っているといわれる海水である。
この海洋深層水は、太陽光線がほとんど届かず、しかも
低温高圧の状態にあるので、細菌が少なく、無機栄養塩
（ミネラル）等を豊富に含んでいる。
【００１１】本発明に係る細胞培養方法は、この「海洋
深層水」を細胞培養液（培地）として積極的に利用する
点が特徴である。従来の細胞培養方法では、既に知得さ
れている多種多様な栄養素群、成長因子群の中から培養
対象の細胞に適すると思われるものだけを適宜選択して
蒸留水に添加し、当該細胞の培養に適する培養条件を整
えるという手法を前提するものであった。
深層水」を細胞培養液（培地）として積極的に利用する
点が特徴である。従来の細胞培養方法では、既に知得さ
れている多種多様な栄養素群、成長因子群の中から培養
対象の細胞に適すると思われるものだけを適宜選択して
蒸留水に添加し、当該細胞の培養に適する培養条件を整
えるという手法を前提するものであった。
【００１２】しかし、本発明に係る方法では、この従来
の細胞培養に関する発想を根本的に転換して、バランス
良く、かつ多様なミネラル成分を含有する海洋深層水を
細胞培養液として用いるように工夫した。
の細胞培養に関する発想を根本的に転換して、バランス
良く、かつ多様なミネラル成分を含有する海洋深層水を
細胞培養液として用いるように工夫した。
【００１３】本来、正常な細胞は多種多様な成分を代謝
利用して増殖、成長するものであるから、本発明に係る
細胞培養方法は、とりわけ正常細胞の培養には、大変理
にかなった手法である。また、その由来や個体が異なる
細胞を培養する場合であっても、成長因子となり得る多
様なミネラル成分を豊富に含む海洋深層水を細胞培養液
として用いるので、細胞種に合わせて、その都度培養条
件を整える煩雑な作業を行う必要がなくなるという利点
がある。
利用して増殖、成長するものであるから、本発明に係る
細胞培養方法は、とりわけ正常細胞の培養には、大変理
にかなった手法である。また、その由来や個体が異なる
細胞を培養する場合であっても、成長因子となり得る多
様なミネラル成分を豊富に含む海洋深層水を細胞培養液
として用いるので、細胞種に合わせて、その都度培養条
件を整える煩雑な作業を行う必要がなくなるという利点
がある。
【００１４】更に、本発明に係る細胞培養方法を、無血
清条件の下で、ヒト正常細胞を培養する自家培養方法に
応用すれば、非自己由来のウイルスやプリオン等による
感染の危険性も根本から排除できるので、再生医療等の
分野で有用な安全な細胞培養技術となり得る。
清条件の下で、ヒト正常細胞を培養する自家培養方法に
応用すれば、非自己由来のウイルスやプリオン等による
感染の危険性も根本から排除できるので、再生医療等の
分野で有用な安全な細胞培養技術となり得る。
【００１５】即ち、前記自家培養方法の下で培養された
細胞や培養液へ産生されるコラーゲンその他の細胞産生
成分を利用した医療材料、化粧品、医薬品は、感染の心
配がなく安全であるのえ、アレルギー反応や拒絶反応の
懸念がない自己専用の医療材料、化粧品、医薬品等を安
心して提供することができる。
細胞や培養液へ産生されるコラーゲンその他の細胞産生
成分を利用した医療材料、化粧品、医薬品は、感染の心
配がなく安全であるのえ、アレルギー反応や拒絶反応の
懸念がない自己専用の医療材料、化粧品、医薬品等を安
心して提供することができる。
【００１６】また、本発明では、少なくとも海洋深層水
を含有する細胞培養培地を提供することにより、上記し
た細胞培養法並びに自家培養方法に供することができ
る。
を含有する細胞培養培地を提供することにより、上記し
た細胞培養法並びに自家培養方法に供することができ
る。
【００１７】以上のように本発明は、細胞汎用性のある
細胞培養方法と該方法に基づく自家培養方法に係わる技
術を関連業界に提供するという技術的意義を有する。
細胞培養方法と該方法に基づく自家培養方法に係わる技
術を関連業界に提供するという技術的意義を有する。
【００１８】
【実施例】本発明に係る細胞培養方法の効果を検証する
ため、以下の実験１〜３を行った。
ため、以下の実験１〜３を行った。
【００１９】＜実験１（血清培地）＞予め海洋深層水に
粉末のＤＭＥＭ培地（日水製薬株式会社製）を溶解して
オートクレーブ滅菌し、抗生物質（終濃度、ペニシリ
ン：５０ｕｎｉｔ／ｍｌ，ストレプトマイシン：５０μ
ｇ／ｍｌ）、グルタミン酸（終濃度、３．６ｍＭ）、炭
酸水素ナトリウム（終濃度、０．０９％）及び終濃度１
０％のウドウシ胎児血清（以下、「ＦＢＳ」と称す
る。）をそれぞれの終濃度になるように添加して、海洋
深層水含有ＤＭＥＭ培地を作製した。次に、ヒト初代線
維芽細胞（ヒト正常細胞）を、９６−ウエル培養プレー
トに１×１０３個／ウエル：５％ＦＢＳ含有ＤＭＥＭ培
地（日水製薬株式会社製）に播種し、翌日に、前記海洋
深層水含有ＤＭＥＭ培地を、海洋深層水の重量％濃度
が、１、５、１０、２０、３０％になるようにそれぞれ
添加し、海洋深層水含有ＤＭＥＭ培地が無添加のサンプ
ルととともに、３７℃インキュベーター内で培養した。
２日間培養後、細胞の増殖性をＭＴＴアッセイ（ＷＳＴ
−１:Ｔａｋａｒａ）にて測定した。
粉末のＤＭＥＭ培地（日水製薬株式会社製）を溶解して
オートクレーブ滅菌し、抗生物質（終濃度、ペニシリ
ン：５０ｕｎｉｔ／ｍｌ，ストレプトマイシン：５０μ
ｇ／ｍｌ）、グルタミン酸（終濃度、３．６ｍＭ）、炭
酸水素ナトリウム（終濃度、０．０９％）及び終濃度１
０％のウドウシ胎児血清（以下、「ＦＢＳ」と称す
る。）をそれぞれの終濃度になるように添加して、海洋
深層水含有ＤＭＥＭ培地を作製した。次に、ヒト初代線
維芽細胞（ヒト正常細胞）を、９６−ウエル培養プレー
トに１×１０３個／ウエル：５％ＦＢＳ含有ＤＭＥＭ培
地（日水製薬株式会社製）に播種し、翌日に、前記海洋
深層水含有ＤＭＥＭ培地を、海洋深層水の重量％濃度
が、１、５、１０、２０、３０％になるようにそれぞれ
添加し、海洋深層水含有ＤＭＥＭ培地が無添加のサンプ
ルととともに、３７℃インキュベーター内で培養した。
２日間培養後、細胞の増殖性をＭＴＴアッセイ（ＷＳＴ
−１:Ｔａｋａｒａ）にて測定した。
【００２０】その結果を、以下の表１に示す。なお、細
胞の増殖性は、４５０ｎｍの吸光度の大きさで表せるの
で、細胞の増殖が促進されたものほど、吸光度も大きな
値となる。
胞の増殖性は、４５０ｎｍの吸光度の大きさで表せるの
で、細胞の増殖が促進されたものほど、吸光度も大きな
値となる。
【００２１】
【表１】
【００２２】前掲した表１に示されているように、培地
に海洋深層水が添加されることによって、明らかに細胞
増殖が促進されることがわかった。具体的には、培地中
の海洋深層水濃度が１０重量％、２０重量％添加された
時が、増殖がとくに良好で、無添加の場合と比較して約
１．４倍の値を示した。従って、培地中の海洋深層水の
添加濃度は、１〜３０重量％の範囲が良好であって、特
に１０〜２０重量％の範囲が好適と考えられる。
に海洋深層水が添加されることによって、明らかに細胞
増殖が促進されることがわかった。具体的には、培地中
の海洋深層水濃度が１０重量％、２０重量％添加された
時が、増殖がとくに良好で、無添加の場合と比較して約
１．４倍の値を示した。従って、培地中の海洋深層水の
添加濃度は、１〜３０重量％の範囲が良好であって、特
に１０〜２０重量％の範囲が好適と考えられる。
【００２３】＜実験２（血清培地）＞６ウエル-プレー
トに５×１０４個のヒト繊維芽細胞に、５％ＦＢＳ及び
抗生物質（終濃度、ペニシリン：５０ｕｎｉｔ／ｍｌ，
ストレプトマイシン：５０μｇ／ｍｌ）、グルタミン酸
（終濃度、３．６ｍＭ）、炭酸水素ナトリウム（終濃
度、０．０９％）をそれぞれの終濃度になるように添加
して、ＤＭＥＭ培地に播種し、１日培養後、上記の培地
組成に更に海洋深層水を、２０、３０、４０、５０、６
０、７０重量％含有する培地にそれぞれ交換して培養し
た。それぞれ翌日の培養状態を電子顕微鏡で観察、撮影
し、その各写真を図１〜図６に示した。
トに５×１０４個のヒト繊維芽細胞に、５％ＦＢＳ及び
抗生物質（終濃度、ペニシリン：５０ｕｎｉｔ／ｍｌ，
ストレプトマイシン：５０μｇ／ｍｌ）、グルタミン酸
（終濃度、３．６ｍＭ）、炭酸水素ナトリウム（終濃
度、０．０９％）をそれぞれの終濃度になるように添加
して、ＤＭＥＭ培地に播種し、１日培養後、上記の培地
組成に更に海洋深層水を、２０、３０、４０、５０、６
０、７０重量％含有する培地にそれぞれ交換して培養し
た。それぞれ翌日の培養状態を電子顕微鏡で観察、撮影
し、その各写真を図１〜図６に示した。
【００２４】その結果、４０〜７０重量％濃度の海洋深
層水を含む培地では、細胞の死滅が観察されたが、海洋
深層水が２０、３０重量％濃度の培地では、細胞が良好
に生存し、増殖していることが判明した。
層水を含む培地では、細胞の死滅が観察されたが、海洋
深層水が２０、３０重量％濃度の培地では、細胞が良好
に生存し、増殖していることが判明した。
【００２５】＜実験３（無血清培地）＞実験１、２と同
様の海洋深層水で粉末のＤＭＥＭ培地（日水製薬株式会
社製）を溶解してオートクレーブ滅菌し、抗生物質（終
濃度、ペニシリン：５０ｕｎｉｔ／ｍｌ，ストレプトマ
イシン：５０μｇ／ｍｌ）、グルタミン酸（終濃度、
３．６ｍＭ）、炭酸水素ナトリウム（終濃度、０．０９
％）をそれぞれの終濃度になるように添加して、無血清
・海洋深層水／ＤＭＥＭ培地を作製した。ヒト初代線維
芽細胞（ヒト正常細胞）を９６-ウエル培養プレートに
１×１０３個/ウエル：５％ＦＢＳ含有ＤＭＥＭ培地
（日水製薬株式会社製）に播種し、翌日にＰＢＳ(―)に
て３回洗浄後、無血清・海洋深層水／ＤＭＥＭ培地に交
換して、３７℃インキュベーター内で培養を継続した。
２日間培養後、細胞の増殖性をＭＴＴアッセイ（ＷＳＴ
−１：Ｔａｋａｒａ）にて測定した。その結果を以下の
表２に示す。
様の海洋深層水で粉末のＤＭＥＭ培地（日水製薬株式会
社製）を溶解してオートクレーブ滅菌し、抗生物質（終
濃度、ペニシリン：５０ｕｎｉｔ／ｍｌ，ストレプトマ
イシン：５０μｇ／ｍｌ）、グルタミン酸（終濃度、
３．６ｍＭ）、炭酸水素ナトリウム（終濃度、０．０９
％）をそれぞれの終濃度になるように添加して、無血清
・海洋深層水／ＤＭＥＭ培地を作製した。ヒト初代線維
芽細胞（ヒト正常細胞）を９６-ウエル培養プレートに
１×１０３個/ウエル：５％ＦＢＳ含有ＤＭＥＭ培地
（日水製薬株式会社製）に播種し、翌日にＰＢＳ(―)に
て３回洗浄後、無血清・海洋深層水／ＤＭＥＭ培地に交
換して、３７℃インキュベーター内で培養を継続した。
２日間培養後、細胞の増殖性をＭＴＴアッセイ（ＷＳＴ
−１：Ｔａｋａｒａ）にて測定した。その結果を以下の
表２に示す。
【００２６】
【表２】
【００２７】前掲した表２に示すように、海洋深層水が
５、１０、２０重量％濃度の無血清培地では、それぞれ
細胞増殖が１３％、２１％、１８％促進された。しか
し、海洋深層水が３０重量％濃度である無血清培地で
は、逆に細胞増殖が阻害された。従って、無血清培地に
おいては、海洋深層水が５〜２０重量％濃度、特には１
０〜２０重量％濃度の場合において、細胞増殖が促進さ
れることが明らかになった。
５、１０、２０重量％濃度の無血清培地では、それぞれ
細胞増殖が１３％、２１％、１８％促進された。しか
し、海洋深層水が３０重量％濃度である無血清培地で
は、逆に細胞増殖が阻害された。従って、無血清培地に
おいては、海洋深層水が５〜２０重量％濃度、特には１
０〜２０重量％濃度の場合において、細胞増殖が促進さ
れることが明らかになった。
【００２８】以上の実験例から、海洋深層水を、細胞培
養液を作製するための蒸留水の代替水として用いたり、
細胞培養液の添加栄養素の代替栄養素として用いたり等
する構成の細胞培養方法、並びに海洋深層水を含む無血
清培地で、ヒト正常細胞を増殖させる自家培養方法を提
供できることがわかった。
養液を作製するための蒸留水の代替水として用いたり、
細胞培養液の添加栄養素の代替栄養素として用いたり等
する構成の細胞培養方法、並びに海洋深層水を含む無血
清培地で、ヒト正常細胞を増殖させる自家培養方法を提
供できることがわかった。
【００２９】
【発明の効果】本発明によれば、海洋深層水を含む細胞
培養液（培地）を用いて細胞培養を行うことによって、
細胞の増殖を促進させることができる。
培養液（培地）を用いて細胞培養を行うことによって、
細胞の増殖を促進させることができる。
【００３０】また、海洋深層水には、多様なミネラル成
分がバランス良く含まれているので、多種多様な細胞の
培養にも適用可能である、細胞汎用性の大きい細胞培養
技術を提供できる。即ち、海洋深層水を含む培地を用い
ることによって、その由来や個体が異なる様々な細胞を
培養する場合でも、前記培地には、成長因子となり得る
広範かつ多様なミネラル成分が含まれているので、細胞
種毎に培養条件を整えるための煩雑な作業を行う必要が
なくなる。
分がバランス良く含まれているので、多種多様な細胞の
培養にも適用可能である、細胞汎用性の大きい細胞培養
技術を提供できる。即ち、海洋深層水を含む培地を用い
ることによって、その由来や個体が異なる様々な細胞を
培養する場合でも、前記培地には、成長因子となり得る
広範かつ多様なミネラル成分が含まれているので、細胞
種毎に培養条件を整えるための煩雑な作業を行う必要が
なくなる。
【００３１】本発明に係る細胞培養方法は、無血清条件
の下で、ヒト正常細胞を培養する自家培養方法に応用で
き、この自家培養方法は、非自己由来のウイルスやプリ
オン等による感染の危険性のない細胞培養を行うことが
できる。従って、再生医療に有用な技術となる。具体的
には、前記自家培養方法の下で培養された細胞や培養液
へ産生されるコラーゲンその他の細胞産生成分を利用し
た医療材料、化粧品、医薬品は、感染の心配がなく安全
であり、更には、アレルギー反応や拒絶反応の懸念がな
い自己専用の医療材料、化粧品、医薬品等の研究、開発
に役立てることができる。
の下で、ヒト正常細胞を培養する自家培養方法に応用で
き、この自家培養方法は、非自己由来のウイルスやプリ
オン等による感染の危険性のない細胞培養を行うことが
できる。従って、再生医療に有用な技術となる。具体的
には、前記自家培養方法の下で培養された細胞や培養液
へ産生されるコラーゲンその他の細胞産生成分を利用し
た医療材料、化粧品、医薬品は、感染の心配がなく安全
であり、更には、アレルギー反応や拒絶反応の懸念がな
い自己専用の医療材料、化粧品、医薬品等の研究、開発
に役立てることができる。
【図１】実験２の結果を示す電子顕微鏡写真（海洋深層
水２０重量％濃度培地）
水２０重量％濃度培地）
【図２】実験２の結果を示す電子顕微鏡写真（海洋深層
水３０重量％濃度培地）
水３０重量％濃度培地）
【図３】実験２の結果を示す電子顕微鏡写真（海洋深層
水４０重量％濃度培地）
水４０重量％濃度培地）
【図４】実験２の結果を示す電子顕微鏡写真（海洋深層
水５０重量％濃度培地）
水５０重量％濃度培地）
【図５】実験２の結果を示す電子顕微鏡写真（海洋深層
水６０重量％濃度培地）
水６０重量％濃度培地）
【図６】実験２の結果を示す電子顕微鏡写真（海洋深層
水７０重量％濃度培地）
水７０重量％濃度培地）
─────────────────────────────────────────────────────
【手続補正書】
【提出日】平成１４年５月２１日（２００２．５．２
１）
１）
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１９
【補正方法】変更
【補正内容】
【００１９】＜実験１（血清培地）＞予め海洋深層水に
粉末のＤＭＥＭ培地（日水製薬株式会社製）を溶解して
オートクレーブ滅菌し、抗生物質（終濃度、ペニシリ
ン：５０ｕｎｉｔ／ｍｌ，ストレプトマイシン：５０μ
ｇ／ｍｌ）、グルタミン酸（終濃度、３．６ｍＭ）、炭
酸水素ナトリウム（終濃度、０．０９％）及び終濃度１
０％のウシ胎児血清（以下、「ＦＢＳ」と称する。）を
それぞれの終濃度になるように添加して、海洋深層水含
有ＤＭＥＭ培地を作製した。次に、ヒト初代線維芽細胞
（ヒト正常細胞）を、９６−ウエル培養プレートに１×
１０３個／ウエル：５％ＦＢＳ含有ＤＭＥＭ培地（日水
製薬株式会社製）に播種し、翌日に、前記海洋深層水含
有ＤＭＥＭ培地を、海洋深層水の重量％濃度が、１、
５、１０、２０、３０％になるようにそれぞれ添加し、
海洋深層水含有ＤＭＥＭ培地が無添加のサンプルととも
に、３７℃インキュベーター内で培養した。２日間培養
後、細胞の増殖性をＭＴＴアッセイ（ＷＳＴ−１:Ｔａ
ｋａｒａ）にて測定した。
粉末のＤＭＥＭ培地（日水製薬株式会社製）を溶解して
オートクレーブ滅菌し、抗生物質（終濃度、ペニシリ
ン：５０ｕｎｉｔ／ｍｌ，ストレプトマイシン：５０μ
ｇ／ｍｌ）、グルタミン酸（終濃度、３．６ｍＭ）、炭
酸水素ナトリウム（終濃度、０．０９％）及び終濃度１
０％のウシ胎児血清（以下、「ＦＢＳ」と称する。）を
それぞれの終濃度になるように添加して、海洋深層水含
有ＤＭＥＭ培地を作製した。次に、ヒト初代線維芽細胞
（ヒト正常細胞）を、９６−ウエル培養プレートに１×
１０３個／ウエル：５％ＦＢＳ含有ＤＭＥＭ培地（日水
製薬株式会社製）に播種し、翌日に、前記海洋深層水含
有ＤＭＥＭ培地を、海洋深層水の重量％濃度が、１、
５、１０、２０、３０％になるようにそれぞれ添加し、
海洋深層水含有ＤＭＥＭ培地が無添加のサンプルととも
に、３７℃インキュベーター内で培養した。２日間培養
後、細胞の増殖性をＭＴＴアッセイ（ＷＳＴ−１:Ｔａ
ｋａｒａ）にて測定した。
Claims (5)
- 【請求項１】 細胞培養液に海洋深層水が用いられたこ
とを特徴とする細胞培養方法。 - 【請求項２】 前記細胞培養液を作製するための蒸留水
の代替水として海洋深層水を用いることを特徴とする請
求項１記載の細胞培養法。 - 【請求項３】 前記細胞培養液の添加栄養素の代替栄養
素として海洋深層水を用いることを特徴とする請求項１
記載の細胞培養法。 - 【請求項４】 ヒト正常細胞の培養を、無血清条件下で
請求項１から請求項３のいずれか１項に記載された細胞
培養方法に基づいて行うことを特徴とする自家培養方
法。 - 【請求項５】 少なくとも海洋深層水を含有することを
特徴とする細胞培養培地。
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2002141036A JP2003334066A (ja) | 2002-05-16 | 2002-05-16 | 海洋深層水を用いた細胞培養方法 |
| AU2003236182A AU2003236182A1 (en) | 2002-05-16 | 2003-03-28 | Cell culture method using marine deep water |
| PCT/JP2003/003941 WO2003097819A1 (fr) | 2002-05-16 | 2003-03-28 | Methode de culture cellulaire au moyen d'eau de mer des grands fonds |
| TW92109192A TW200307046A (en) | 2002-05-16 | 2003-04-18 | The cell culture method using deep sea water |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2002141036A JP2003334066A (ja) | 2002-05-16 | 2002-05-16 | 海洋深層水を用いた細胞培養方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2003334066A true JP2003334066A (ja) | 2003-11-25 |
Family
ID=29544940
Family Applications (1)
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|---|---|---|---|
| JP2002141036A Pending JP2003334066A (ja) | 2002-05-16 | 2002-05-16 | 海洋深層水を用いた細胞培養方法 |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2003334066A (ja) |
| AU (1) | AU2003236182A1 (ja) |
| TW (1) | TW200307046A (ja) |
| WO (1) | WO2003097819A1 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2022004822A1 (ja) * | 2020-06-30 | 2022-01-06 | 国立大学法人高知大学 | 胎児付属物由来組織細胞及び／又は臍帯血細胞を培養するための海洋深層水を含む培地 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2002153267A (ja) * | 2000-11-22 | 2002-05-28 | Toyama Prefecture | 深層水を利用した動物卵子及び初期胚の培養方法 |
-
2002
- 2002-05-16 JP JP2002141036A patent/JP2003334066A/ja active Pending
-
2003
- 2003-03-28 WO PCT/JP2003/003941 patent/WO2003097819A1/ja active Search and Examination
- 2003-03-28 AU AU2003236182A patent/AU2003236182A1/en not_active Abandoned
- 2003-04-18 TW TW92109192A patent/TW200307046A/zh unknown
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2022004822A1 (ja) * | 2020-06-30 | 2022-01-06 | 国立大学法人高知大学 | 胎児付属物由来組織細胞及び／又は臍帯血細胞を培養するための海洋深層水を含む培地 |
Also Published As
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|---|---|
| AU2003236182A1 (en) | 2003-12-02 |
| TW200307046A (en) | 2003-12-01 |
| WO2003097819A1 (fr) | 2003-11-27 |
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