JP2003245097A - 光障害を分析するための遺伝子発現 - Google Patents
光障害を分析するための遺伝子発現Info
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Abstract
(57)【要約】 （修正有）
【課題】光傷害を検出する肌のパーソナルケア方法を提
供する。 【解決手段】既知の肌状態を有する皮膚サンプルの第１
の遺伝子発現と既知の肌状態を有していない皮膚サンプ
ルの第２の遺伝子発現をを測定する。複数の光傷害のマ
ーカーを使用し、遺伝子の発現を比較・評価する。光傷
害マーカーとしてのポリヌクレオチド配列に提供され
る。
供する。 【解決手段】既知の肌状態を有する皮膚サンプルの第１
の遺伝子発現と既知の肌状態を有していない皮膚サンプ
ルの第２の遺伝子発現をを測定する。複数の光傷害のマ
ーカーを使用し、遺伝子の発現を比較・評価する。光傷
害マーカーとしてのポリヌクレオチド配列に提供され
る。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、遺伝子アレイにお
ける、光障害のマーカーとして機能するポリヌクレオチ
ド配列、およびこれらのマーカーを使用して光障害を検
出する方法に関する。
ける、光障害のマーカーとして機能するポリヌクレオチ
ド配列、およびこれらのマーカーを使用して光障害を検
出する方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】本出願は、２００１年１１月８日に出願
され、参照によって本明細書に組み込む米国仮出願第６
０／３３７，８５６号の優先権を、米国特許法第１１９
条に基づいて主張する。
され、参照によって本明細書に組み込む米国仮出願第６
０／３３７，８５６号の優先権を、米国特許法第１１９
条に基づいて主張する。
【０００３】細胞の全遺伝子がゲノムを構成する。ヒト
ゲノムは、約４０，０００の遺伝子を含んでいる。しか
し、所与のいずれの細胞においても、発現する、あるい
はその結果が表現型に現れるのは、これらの遺伝子のほ
んの一部だけである。表現型とは、遺伝子型と環境との
相互作用によって生じる、生物の、目に見える特性を意
味する。したがって、各細胞型において、どの瞬間にも
発現しているのはヒトゲノムのほんの一部だけである。
それぞれの遺伝子が発現する時期は正確であり、レベル
も正確である。
ゲノムは、約４０，０００の遺伝子を含んでいる。しか
し、所与のいずれの細胞においても、発現する、あるい
はその結果が表現型に現れるのは、これらの遺伝子のほ
んの一部だけである。表現型とは、遺伝子型と環境との
相互作用によって生じる、生物の、目に見える特性を意
味する。したがって、各細胞型において、どの瞬間にも
発現しているのはヒトゲノムのほんの一部だけである。
それぞれの遺伝子が発現する時期は正確であり、レベル
も正確である。
【０００４】自動ＤＮＡシーケンサーにより、生物のゲ
ノムの配列の決定が容易になった。例えば、Ｈａｅｍｏ
ｐｈｉｌｉｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ、Ｍｙｃｏｐｌ
ａｓｍａ ｇｅｎｉｔａｌｉｕｍ、およびＣａｅｎｏｒ
ｈａｂｄｉｔｉｓ ｅｌｅｇａｎｓのゲノム配列が発表
されており、それによってヒトなどのより高等な生物の
ゲノム配列が得られる可能性がもたらされている（Ｆｌ
ｅｉｓｃｈｍａｎｎ，Ｒ．Ｄ．ｅｔ ａｌ．（１９９
５）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６９：４９６；Ｆｒａｓｅｒ，
Ｃ．Ｍ．ｅｔ ａｌ．（１９９５）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２
７０：３９７；Ｈｏｄｇｋｉｎ，Ｊ．ｅｔ ａｌ．（１
９９５）Ｓｃｉｅｎｃｅ２７０：４１０）。
ノムの配列の決定が容易になった。例えば、Ｈａｅｍｏ
ｐｈｉｌｉｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ、Ｍｙｃｏｐｌ
ａｓｍａ ｇｅｎｉｔａｌｉｕｍ、およびＣａｅｎｏｒ
ｈａｂｄｉｔｉｓ ｅｌｅｇａｎｓのゲノム配列が発表
されており、それによってヒトなどのより高等な生物の
ゲノム配列が得られる可能性がもたらされている（Ｆｌ
ｅｉｓｃｈｍａｎｎ，Ｒ．Ｄ．ｅｔ ａｌ．（１９９
５）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６９：４９６；Ｆｒａｓｅｒ，
Ｃ．Ｍ．ｅｔ ａｌ．（１９９５）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２
７０：３９７；Ｈｏｄｇｋｉｎ，Ｊ．ｅｔ ａｌ．（１
９９５）Ｓｃｉｅｎｃｅ２７０：４１０）。
【０００５】所与の系列の通常の哺乳類の細胞は、その
ゲノムに含まれる４０，０００余りの生殖系列遺伝子の
うち約２０，０００〜３０，０００を発現している。ほ
とんどすべての細胞は、多くの遺伝子を普遍的に発現
し、これらは「ハウスキーピング」遺伝子と呼ばれる。
ハウスキーピング遺伝子の例には、解糖に関与する酵
素、または細胞構造に関与するタンパク質をコードする
遺伝子がある。しかし、細胞を分化させるのは、非普遍
的に発現する遺伝子である。細胞が分化細胞に成熟する
につれて、非恒常的に発現するある種の遺伝子が、異な
る段階で、オンになったりオフになったりする。したが
って、細胞間の遺伝子発現パターンの違いにより、例え
ば神経細胞が、血液細胞と違ったものになる。
ゲノムに含まれる４０，０００余りの生殖系列遺伝子の
うち約２０，０００〜３０，０００を発現している。ほ
とんどすべての細胞は、多くの遺伝子を普遍的に発現
し、これらは「ハウスキーピング」遺伝子と呼ばれる。
ハウスキーピング遺伝子の例には、解糖に関与する酵
素、または細胞構造に関与するタンパク質をコードする
遺伝子がある。しかし、細胞を分化させるのは、非普遍
的に発現する遺伝子である。細胞が分化細胞に成熟する
につれて、非恒常的に発現するある種の遺伝子が、異な
る段階で、オンになったりオフになったりする。したが
って、細胞間の遺伝子発現パターンの違いにより、例え
ば神経細胞が、血液細胞と違ったものになる。
【０００６】疾患または障害のある個体の状態のよう
な、異常細胞の状態では、個々の細胞内の遺伝子発現の
パターンは、正常な非疾患状態で見られる発現パターン
と比較して変化している可能性がある。遺伝子発現の変
化は、例えば腫瘍細胞中などにおいて、疾患または異常
の結果あるいは原因である可能性がある。ある種の疾患
は、特定の遺伝子の変異によって引き起こされると理解
されているので、そのゲノム配列を調べることによって
潜在的に検出できる可能性があるが、多くの疾患および
障害は、遺伝子の発現レベルにおける機能不全を伴い、
ゲノムの配列決定によって検出することはできず、細胞
の遺伝子発現パターンを同定することによってのみ検出
することができる。したがって、ある生物中の（その生
涯の特定の時期での）特定の細胞型の機能を理解するた
めに、あるいは疾患または障害の進行状況を理解するた
めに、その生物の発達の異なる段階でのこうした特定の
細胞型内の個々の遺伝子の発現状態を理解することが必
要である。
な、異常細胞の状態では、個々の細胞内の遺伝子発現の
パターンは、正常な非疾患状態で見られる発現パターン
と比較して変化している可能性がある。遺伝子発現の変
化は、例えば腫瘍細胞中などにおいて、疾患または異常
の結果あるいは原因である可能性がある。ある種の疾患
は、特定の遺伝子の変異によって引き起こされると理解
されているので、そのゲノム配列を調べることによって
潜在的に検出できる可能性があるが、多くの疾患および
障害は、遺伝子の発現レベルにおける機能不全を伴い、
ゲノムの配列決定によって検出することはできず、細胞
の遺伝子発現パターンを同定することによってのみ検出
することができる。したがって、ある生物中の（その生
涯の特定の時期での）特定の細胞型の機能を理解するた
めに、あるいは疾患または障害の進行状況を理解するた
めに、その生物の発達の異なる段階でのこうした特定の
細胞型内の個々の遺伝子の発現状態を理解することが必
要である。
【０００７】肌の老化は、同時に起こる２つのプロセス
からなると考えられている。第１のプロセスは、内因性
の、経時的老化であり、他の組織の老化とおそらく同様
のものである（Ｕｉｔｔｏ、１９８６）。第２のプロセ
スは、光老化、すなわち、皮膚が太陽光に繰り返し曝さ
れる結果起こる、環境によって引き起こされる真皮のリ
モデリングである。最近の研究では（Ｖａｒａｎｉ他、
１９９８；Ｖａｒａｎｉ他、２０００）、内因性の老化
も光老化も、プロコラーゲン遺伝子発現の減少や、いく
つかのマトリックスメタロプロテイナーゼをコードする
遺伝子の発現の増加などのある種の共通の特性を有する
ことが示されており、光老化は、日光に曝された肌の外
観の早期老化（ｐｒｅｍａｔｕｒｅｌｙ ａｇｅｄ）に
寄与する主な要因であることが示唆されている（Ｙａａ
ｒおよびＧｉｌｃｈｒｅｓｔ、１９９８）。
からなると考えられている。第１のプロセスは、内因性
の、経時的老化であり、他の組織の老化とおそらく同様
のものである（Ｕｉｔｔｏ、１９８６）。第２のプロセ
スは、光老化、すなわち、皮膚が太陽光に繰り返し曝さ
れる結果起こる、環境によって引き起こされる真皮のリ
モデリングである。最近の研究では（Ｖａｒａｎｉ他、
１９９８；Ｖａｒａｎｉ他、２０００）、内因性の老化
も光老化も、プロコラーゲン遺伝子発現の減少や、いく
つかのマトリックスメタロプロテイナーゼをコードする
遺伝子の発現の増加などのある種の共通の特性を有する
ことが示されており、光老化は、日光に曝された肌の外
観の早期老化（ｐｒｅｍａｔｕｒｅｌｙ ａｇｅｄ）に
寄与する主な要因であることが示唆されている（Ｙａａ
ｒおよびＧｉｌｃｈｒｅｓｔ、１９９８）。
【０００８】臨床的には、日光により障害を受けた肌
は、しわ、弾力性の喪失、およびきめの変化が特徴であ
る（Ｋｌｉｇｍａｎ、１９８９；Ｔａｙｌｏｒ他、１９
９０）。組織病理学的な分析により、日光に曝された肌
の真皮内の様々な細胞外マトリックスタンパク質の変性
が明らかになったので、以前の研究では、これらの特徴
は主に、真皮の変化に帰するとされた。こうした真皮の
変化のうちもっとも顕著なものは、日光に曝された肌の
真皮の表層（ｓｕｐｅｒｆｉｃｉａｌ ｄｅｒｍｉｓ）
に明らかに形態変化した弾性線維が著しく蓄積すること
である。日光への曝露に続いて起こる、異常な真皮弾性
線維のこの蓄積は、日光性弾力線維症（ｓｏｌａｒ ｅ
ｌａｓｔｏｓｉｓ）と呼ばれている（Ｇｉｌｃｈｒｅｓ
ｔ、１９８９）。
は、しわ、弾力性の喪失、およびきめの変化が特徴であ
る（Ｋｌｉｇｍａｎ、１９８９；Ｔａｙｌｏｒ他、１９
９０）。組織病理学的な分析により、日光に曝された肌
の真皮内の様々な細胞外マトリックスタンパク質の変性
が明らかになったので、以前の研究では、これらの特徴
は主に、真皮の変化に帰するとされた。こうした真皮の
変化のうちもっとも顕著なものは、日光に曝された肌の
真皮の表層（ｓｕｐｅｒｆｉｃｉａｌ ｄｅｒｍｉｓ）
に明らかに形態変化した弾性線維が著しく蓄積すること
である。日光への曝露に続いて起こる、異常な真皮弾性
線維のこの蓄積は、日光性弾力線維症（ｓｏｌａｒ ｅ
ｌａｓｔｏｓｉｓ）と呼ばれている（Ｇｉｌｃｈｒｅｓ
ｔ、１９８９）。
【０００９】日光性弾力線維症をもたらす細胞の機構は
理解されておらず、それどころか、日光性弾力線維症の
間の弾性線維の合成に関しては、異論の多い知見が報告
されている。いくつかの報告では、日光性弾力線維症の
間に蓄積した弾性線維は、通常の弾性線維と同じ成分か
らなり、これは、エラスチン（弾性線維の無定形成分を
構成する、架橋した不溶性タンパク質）、およびフィブ
リリン、すなわち弾性線維のミクロフィブリルの主な成
分を含むことが報告されている。ケラチノサイトは、Ｕ
ＶＡおよび／またはＵＶＢ放射線に応答して、線維芽細
胞合成活性を刺激することができる多くのメディエータ
を分泌し、それらのうちのいくつか、例えばＴＧＦ−
β、ＩＬ−１β、およびＩＬ−１０は、エラスチン遺伝
子のプロモーター活性、定常状態のｍＲＮＡレベル、お
よび増加したエラスチンの蓄積を増すことが示されてい
る（Ｋａｈａｒｉ他、１９９２；Ｍａｕｖｉｅｌ他、１
９９３；Ｒｅｉｔａｍｏ他、１９９４）。Ｂｅｒｎｓｔ
ｅｉｎ他（１９９４）が日光により障害を受けた肌にお
いてエラスチンｍＲＮＡレベルが増加することを報告し
ているが、Ｗｅｒｔｈ他（Ｗｅｒｔｈ他、１９９７）
は、日光性弾力線維症の間のエラスチンｍＲＮＡの定常
状態レベルに差がないことを報告している。後者の発見
は、転写後の機構により、ｍＲＮＡレベルが上昇するこ
となく、紫外線照射に応答して、エラスチン蓄積の原因
である翻訳効率の増進がもたらされることを示唆する
（Ｓｃｈｗａｒｔｚ他、１９９５）以前の研究に一致し
ている。これらの結果は、ＵＶへの曝露の結果として
の、弾性線維を構成するタンパク質をコードする遺伝子
の異常な発現が、日光性弾力線維症の基盤である可能性
があることを意味する。さらに、いくつかの報告では、
エラスチンだけでなくフィブリリンの定常状態のｍＲＮ
Ａレベルの変化が実証されている（Ｂｅｒｎｓｔｅｉｎ
他、１９９４）。追加の観察ではまた、リシルオキシダ
ーゼ、すなわちエラスチン架橋の触媒作用の原因である
銅依存型アミンオキシダーゼなど弾性線維タンパク質の
レベルの変化にも言及されている（Ｓｍｉｔｈ−Ｍｕｎ
ｇｏおよびＫａｇａｎ、１９９８）。
理解されておらず、それどころか、日光性弾力線維症の
間の弾性線維の合成に関しては、異論の多い知見が報告
されている。いくつかの報告では、日光性弾力線維症の
間に蓄積した弾性線維は、通常の弾性線維と同じ成分か
らなり、これは、エラスチン（弾性線維の無定形成分を
構成する、架橋した不溶性タンパク質）、およびフィブ
リリン、すなわち弾性線維のミクロフィブリルの主な成
分を含むことが報告されている。ケラチノサイトは、Ｕ
ＶＡおよび／またはＵＶＢ放射線に応答して、線維芽細
胞合成活性を刺激することができる多くのメディエータ
を分泌し、それらのうちのいくつか、例えばＴＧＦ−
β、ＩＬ−１β、およびＩＬ−１０は、エラスチン遺伝
子のプロモーター活性、定常状態のｍＲＮＡレベル、お
よび増加したエラスチンの蓄積を増すことが示されてい
る（Ｋａｈａｒｉ他、１９９２；Ｍａｕｖｉｅｌ他、１
９９３；Ｒｅｉｔａｍｏ他、１９９４）。Ｂｅｒｎｓｔ
ｅｉｎ他（１９９４）が日光により障害を受けた肌にお
いてエラスチンｍＲＮＡレベルが増加することを報告し
ているが、Ｗｅｒｔｈ他（Ｗｅｒｔｈ他、１９９７）
は、日光性弾力線維症の間のエラスチンｍＲＮＡの定常
状態レベルに差がないことを報告している。後者の発見
は、転写後の機構により、ｍＲＮＡレベルが上昇するこ
となく、紫外線照射に応答して、エラスチン蓄積の原因
である翻訳効率の増進がもたらされることを示唆する
（Ｓｃｈｗａｒｔｚ他、１９９５）以前の研究に一致し
ている。これらの結果は、ＵＶへの曝露の結果として
の、弾性線維を構成するタンパク質をコードする遺伝子
の異常な発現が、日光性弾力線維症の基盤である可能性
があることを意味する。さらに、いくつかの報告では、
エラスチンだけでなくフィブリリンの定常状態のｍＲＮ
Ａレベルの変化が実証されている（Ｂｅｒｎｓｔｅｉｎ
他、１９９４）。追加の観察ではまた、リシルオキシダ
ーゼ、すなわちエラスチン架橋の触媒作用の原因である
銅依存型アミンオキシダーゼなど弾性線維タンパク質の
レベルの変化にも言及されている（Ｓｍｉｔｈ−Ｍｕｎ
ｇｏおよびＫａｇａｎ、１９９８）。
【００１０】細胞外マトリックスタンパク質の、ＵＶ照
射に応答する他の変化も実証されている。例えば、コラ
ーゲン原線維の量は、光老化肌では、劇的に減少するこ
とが示されている。この変化は、コラーゲンｍＲＮＡレ
ベルの変化に伴うのではなく、コラーゲン原線維の分解
は、ＵＶへの曝露に伴うことが示唆されている（Ｂｅｒ
ｎｓｔｅｉｎ他、１９９６）。コラーゲン沈着における
こうした変化を説明するために、Ｖｏｏｒｈｅｅｓ他
は、ＵＶ照射が、成長因子の増加、ならびに線維芽細胞
およびケラチノサイトにおけるサイトカイン受容体合成
を誘発することを提案している。この受容体合成の増大
により、続いて、ＭＡＰキナーゼ（マイトジェン活性化
プロテインキナーゼ）シグナル伝達カスケードを通し
て、転写因子ＡＰ−１が活性化され（Ｆｉｓｈｅｒ他、
１９９６；ＦｉｓｈｅｒおよびＶｏｏｒｈｅｅｓ、１９
９８）、コラーゲンを分解するいくつかのマトリックス
メタロプロテイナーゼをコードする遺伝子の発現が上昇
し（Ｆｉｓｈｅｒ他、１９９６）、Ｉ型およびＩＩＩ型
プロコラーゲンをコードする遺伝子の発現が低下する。
射に応答する他の変化も実証されている。例えば、コラ
ーゲン原線維の量は、光老化肌では、劇的に減少するこ
とが示されている。この変化は、コラーゲンｍＲＮＡレ
ベルの変化に伴うのではなく、コラーゲン原線維の分解
は、ＵＶへの曝露に伴うことが示唆されている（Ｂｅｒ
ｎｓｔｅｉｎ他、１９９６）。コラーゲン沈着における
こうした変化を説明するために、Ｖｏｏｒｈｅｅｓ他
は、ＵＶ照射が、成長因子の増加、ならびに線維芽細胞
およびケラチノサイトにおけるサイトカイン受容体合成
を誘発することを提案している。この受容体合成の増大
により、続いて、ＭＡＰキナーゼ（マイトジェン活性化
プロテインキナーゼ）シグナル伝達カスケードを通し
て、転写因子ＡＰ−１が活性化され（Ｆｉｓｈｅｒ他、
１９９６；ＦｉｓｈｅｒおよびＶｏｏｒｈｅｅｓ、１９
９８）、コラーゲンを分解するいくつかのマトリックス
メタロプロテイナーゼをコードする遺伝子の発現が上昇
し（Ｆｉｓｈｅｒ他、１９９６）、Ｉ型およびＩＩＩ型
プロコラーゲンをコードする遺伝子の発現が低下する。
【００１１】マトリックスメタロプロテイナーゼ遺伝子
発現の、ＡＰ−１活性化についてのこのモデルは、魅力
的な仮説ではあるが、ＵＶへの曝露に伴うことが示され
ている細胞外マトリックスの他の多くの変化を説明する
ものではない。さらに、日光により障害を受けた肌の病
理生物学は、真皮および表皮における遺伝子発現の、複
数の直接的変化と間接的変化（ＡＰ−１活性化はこうし
た変化の一例にすぎない）の複雑な相互作用を通して現
れる可能性が高い。
発現の、ＡＰ−１活性化についてのこのモデルは、魅力
的な仮説ではあるが、ＵＶへの曝露に伴うことが示され
ている細胞外マトリックスの他の多くの変化を説明する
ものではない。さらに、日光により障害を受けた肌の病
理生物学は、真皮および表皮における遺伝子発現の、複
数の直接的変化と間接的変化（ＡＰ−１活性化はこうし
た変化の一例にすぎない）の複雑な相互作用を通して現
れる可能性が高い。
【００１２】日光による障害に関連する事象の複雑なカ
スケードは、あまり分かっていない。日光への曝露に応
答する転写産物のプロファイルの変化を特定するため
に、研究者らは、例えば様々な細胞からタンパク質を単
離し、それらのタンパク質のそれぞれの存在量を比較す
る技術など、多くの技術を使用してきた。別の方法は、
ｍＲＮＡプールから産生されたペプチド集団を探るため
の抗体を使用するものである。したがって、米国特許第
５，２４２，７９８号に記載されているように、ｍＲＮ
Ａ分子によってコードされたポリペプチドに相当する合
成ポリペプチドの「ライブラリ」を作製し、次いで個々
の抗体で探索する。
スケードは、あまり分かっていない。日光への曝露に応
答する転写産物のプロファイルの変化を特定するため
に、研究者らは、例えば様々な細胞からタンパク質を単
離し、それらのタンパク質のそれぞれの存在量を比較す
る技術など、多くの技術を使用してきた。別の方法は、
ｍＲＮＡプールから産生されたペプチド集団を探るため
の抗体を使用するものである。したがって、米国特許第
５，２４２，７９８号に記載されているように、ｍＲＮ
Ａ分子によってコードされたポリペプチドに相当する合
成ポリペプチドの「ライブラリ」を作製し、次いで個々
の抗体で探索する。
【００１３】所与の組織または細胞によってどの遺伝子
が発現するかの決定において行われた進歩に平行して、
遺伝子の「アレイ」技術の設計および製造が、バイオテ
クノロジー業界で、大きく進歩した。ＳＡＧＥ（Ｓｅｒ
ｉａｌ Ａｎａｌｙｓｉｓｏｆ Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅ
ｓｓｉｏｎ）などの技術を使用して、ケラチノサイト
（または表皮）でのデータを作成し、それによって遺伝
子アレイを開発することができる。
が発現するかの決定において行われた進歩に平行して、
遺伝子の「アレイ」技術の設計および製造が、バイオテ
クノロジー業界で、大きく進歩した。ＳＡＧＥ（Ｓｅｒ
ｉａｌ Ａｎａｌｙｓｉｓｏｆ Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅ
ｓｓｉｏｎ）などの技術を使用して、ケラチノサイト
（または表皮）でのデータを作成し、それによって遺伝
子アレイを開発することができる。
【００１４】遺伝子アレイは、（機能が分かっているあ
るいは分かっていない）数１０００個までの問題の個々
の遺伝子を表す、固定されたヌクレオチド配列を含む固
相系である。このようなアレイを利用して、組織または
細胞培養物の抽出物を試験し、治療、傷害、年齢、性
別、民族、薬物、食物、および化粧品に応答して、どの
遺伝子がオンまたはオフであるか決定することができ
る。しかし、従来技術で利用できるこの方法では、依然
として、実験モデルにおいて、またはヒトの組織におい
て、少数の遺伝子の発現さえ追跡することが困難であ
る。
るいは分かっていない）数１０００個までの問題の個々
の遺伝子を表す、固定されたヌクレオチド配列を含む固
相系である。このようなアレイを利用して、組織または
細胞培養物の抽出物を試験し、治療、傷害、年齢、性
別、民族、薬物、食物、および化粧品に応答して、どの
遺伝子がオンまたはオフであるか決定することができ
る。しかし、従来技術で利用できるこの方法では、依然
として、実験モデルにおいて、またはヒトの組織におい
て、少数の遺伝子の発現さえ追跡することが困難であ
る。
【００１５】いくつかの特許は、ＳＡＧＥ技術の使用
に、あるいはアレイの作製に関係し、アレイを作製し、
加工するために設計された器具を保護している。例え
ば、ＥＰ７９９８９７は、プローブアレイ中のタグ核酸
を選択するための方法および組成物を開示している。Ｗ
Ｏ９７４３４５０は、オリゴヌクレオチドアレイ上のハ
イブリダイゼーションアッセイを開示している。ＷＯ９
８１５６５１は、アンチセンスオリゴヌクレオチド結合
を同定するための方法を開示している。しかし、知られ
ている特許はどれも、光障害の識別のための特定の遺伝
子アレイの構成および使用を開示していない。
に、あるいはアレイの作製に関係し、アレイを作製し、
加工するために設計された器具を保護している。例え
ば、ＥＰ７９９８９７は、プローブアレイ中のタグ核酸
を選択するための方法および組成物を開示している。Ｗ
Ｏ９７４３４５０は、オリゴヌクレオチドアレイ上のハ
イブリダイゼーションアッセイを開示している。ＷＯ９
８１５６５１は、アンチセンスオリゴヌクレオチド結合
を同定するための方法を開示している。しかし、知られ
ている特許はどれも、光障害の識別のための特定の遺伝
子アレイの構成および使用を開示していない。
【００１６】本明細書では、用語「備える（ｃｏｍｐｒ
ｉｓｉｎｇ）」は、含む、構成される（ｍａｄｅ ｕｐ
ｏｆ）、構成される（ｃｏｍｐｏｓｅｄ ｏｆ）、か
らなる、および／または本質的にからなるを意味する。
実施例および比較例中を除いて、あるいは別段の明確な
指示がなければ、この説明中の、材料または反応の条
件、材料の物理的性質、および／または使用の量または
比を示すすべての数は、「約」という語で修飾されるこ
とを理解されたい。
ｉｓｉｎｇ）」は、含む、構成される（ｍａｄｅ ｕｐ
ｏｆ）、構成される（ｃｏｍｐｏｓｅｄ ｏｆ）、か
らなる、および／または本質的にからなるを意味する。
実施例および比較例中を除いて、あるいは別段の明確な
指示がなければ、この説明中の、材料または反応の条
件、材料の物理的性質、および／または使用の量または
比を示すすべての数は、「約」という語で修飾されるこ
とを理解されたい。
【００１７】本明細書では、「皮膚」という用語は、
顔、首、胸、背中、腕、手、脚、および頭皮の皮膚を含
む。「表皮」または「ケラチノサイト」という用語は、
用語「皮膚」に含まれるのと同じであると考えられる。
顔、首、胸、背中、腕、手、脚、および頭皮の皮膚を含
む。「表皮」または「ケラチノサイト」という用語は、
用語「皮膚」に含まれるのと同じであると考えられる。
【００１８】
【非特許文献１】Ｆｌｅｉｓｃｈｍａｎｎ，Ｒ．Ｄ．ｅ
ｔ ａｌ．（１９９５）Ｓｃｉｅｎｃｅ２６９：４９６
ｔ ａｌ．（１９９５）Ｓｃｉｅｎｃｅ２６９：４９６
【非特許文献２】Ｆｒａｓｅｒ，Ｃ．Ｍ．ｅｔ ａｌ．
（１９９５）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２７０：３９７
（１９９５）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２７０：３９７
【非特許文献３】Ｈｏｄｇｋｉｎ，Ｊ．ｅｔ ａｌ．
（１９９５）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２７０：４１０
（１９９５）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２７０：４１０
【特許文献１】米国特許第５，２４２，７９８号
【特許文献２】ＥＰ７９９８９７
【特許文献３】ＷＯ９７４３４５０
【特許文献４】ＷＯ９８１５６５１
【特許文献５】米国特許第５，６９５，９３７号
【００１９】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、遺伝子アレ
イにおける、光障害のマーカーとして機能するポリヌク
レオチド配列、およびこれらのマーカーを使用して光障
害を検出する方法に関する。
イにおける、光障害のマーカーとして機能するポリヌク
レオチド配列、およびこれらのマーカーを使用して光障
害を検出する方法に関する。
【００２０】
【課題を解決するための手段】光障害を検出するパーソ
ナルケア方法であって、（ａ）配列番号５１、配列番号
５２、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配
列番号５６、配列番号５７、配列番号５８、配列番号５
９、配列番号６０、配列番号６１、配列番号６２、配列
番号６３、配列番号６４、配列番号６５、配列番号６
６、配列番号６７、配列番号６８、および配列番号６９
からなる群から選択される１つまたは複数の配列から選
択される、少なくとも１種の光障害のマーカーを使用す
るステップと、（ｂ）該マーカー中の変化を検出して、
光障害の存在を決定するステップを含む方法。
ナルケア方法であって、（ａ）配列番号５１、配列番号
５２、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配
列番号５６、配列番号５７、配列番号５８、配列番号５
９、配列番号６０、配列番号６１、配列番号６２、配列
番号６３、配列番号６４、配列番号６５、配列番号６
６、配列番号６７、配列番号６８、および配列番号６９
からなる群から選択される１つまたは複数の配列から選
択される、少なくとも１種の光障害のマーカーを使用す
るステップと、（ｂ）該マーカー中の変化を検出して、
光障害の存在を決定するステップを含む方法。
【００２１】
【発明の実施の形態】本明細書では、これから説明する
用語は、以下の通りであると理解されたい。
用語は、以下の通りであると理解されたい。
【００２２】「医療用適用物（Ｍｅｄｉｃａｌ Ａｐｐ
ｌｉｃａｔｉｏｎ）」は、処方箋によってのみ配布され
る、あるいは医療専門職にのみ配布される装置および組
成物である。
ｌｉｃａｔｉｏｎ）」は、処方箋によってのみ配布され
る、あるいは医療専門職にのみ配布される装置および組
成物である。
【００２３】「パーソナルケア適用物」は、ヒトの皮膚
の清浄化およびケアのための、医療用適用物以外の装置
および組成物である。
の清浄化およびケアのための、医療用適用物以外の装置
および組成物である。
【００２４】「遺伝子」は、ヒトの染色体中に見られる
遺伝する（ｉｎｈｅｒｉｔａｂｌｅ）遺伝物質の単位で
ある。
遺伝する（ｉｎｈｅｒｉｔａｂｌｅ）遺伝物質の単位で
ある。
【００２５】すべての核酸の繰り返し構成単位は、８つ
の異なるヌクレオチドであり、ヌクレオチドのうち４種
は、ＤＮＡの構成単位であり、他の４種は、ＲＮＡの構
成単位である。例えば、ＤＮＡの４文字の語は、タンパ
ク質の２０文字の語に翻訳される。
の異なるヌクレオチドであり、ヌクレオチドのうち４種
は、ＤＮＡの構成単位であり、他の４種は、ＲＮＡの構
成単位である。例えば、ＤＮＡの４文字の語は、タンパ
ク質の２０文字の語に翻訳される。
【００２６】「オリゴヌクレオチド」は、２つ以上、好
ましくは３つより多いデオキシリボヌクレオチドまたは
リボヌクレオチドからなるオリゴマー断片である。
ましくは３つより多いデオキシリボヌクレオチドまたは
リボヌクレオチドからなるオリゴマー断片である。
【００２７】「ポリヌクレオチド配列」は、モノヌクレ
オチドの所与の順序のポリマー鎖である。ポリヌクレオ
チド配列は、５’〜３’末端、またはその相補鎖である
３’〜５’が報告されている。
オチドの所与の順序のポリマー鎖である。ポリヌクレオ
チド配列は、５’〜３’末端、またはその相補鎖である
３’〜５’が報告されている。
【００２８】「発現配列タグ」（「ＥＳＴ」）は、例え
ばｃＤＮＡ（相補的デオキシリボ核酸）配列を特異的に
指定するものなど、十分な数の塩基対を含むヌクレオチ
ド配列である。ＥＳＴは、単離することも精製すること
もできる。
ばｃＤＮＡ（相補的デオキシリボ核酸）配列を特異的に
指定するものなど、十分な数の塩基対を含むヌクレオチ
ド配列である。ＥＳＴは、単離することも精製すること
もできる。
【００２９】「単離された」は、他の細胞成分から分離
された核酸を意味する。
された核酸を意味する。
【００３０】「精製された」は、核酸のみを残すように
できるだけ他の材料を取り除いた単離された核酸混合物
を意味する。
できるだけ他の材料を取り除いた単離された核酸混合物
を意味する。
【００３１】遺伝子発現分析法は、光障害または乾燥肌
などの特定の肌状態を示すマーカーを同定するために利
用できる手段である。光障害、乾燥肌、脂性肌、および
他の「美容上の」肌状態は、生物学的にあまり理解され
ていない。旧来、これらの状態は、一時に１つの生物学
的内経路に取り組むことによって研究されている。本発
明は、肌状態を包括的に研究し、新規の経路を解明する
ために、以下により詳細に説明するＳＡＧＥ技術の適用
を提供する。本発明は、特定の肌状態を示すものである
ポリヌクレオチド配列を提供する。具体的には、本発明
は、光障害において変化し、したがって光障害のマーカ
ーとして使用できる特異的な「ＥＳＴ」（遺伝子のセッ
ト）を提供する。本発明のＥＳＴすなわちマーカーが、
光障害を確認するために重要である、あるいは使用され
ることは、以前には全く知られていなかった。
などの特定の肌状態を示すマーカーを同定するために利
用できる手段である。光障害、乾燥肌、脂性肌、および
他の「美容上の」肌状態は、生物学的にあまり理解され
ていない。旧来、これらの状態は、一時に１つの生物学
的内経路に取り組むことによって研究されている。本発
明は、肌状態を包括的に研究し、新規の経路を解明する
ために、以下により詳細に説明するＳＡＧＥ技術の適用
を提供する。本発明は、特定の肌状態を示すものである
ポリヌクレオチド配列を提供する。具体的には、本発明
は、光障害において変化し、したがって光障害のマーカ
ーとして使用できる特異的な「ＥＳＴ」（遺伝子のセッ
ト）を提供する。本発明のＥＳＴすなわちマーカーが、
光障害を確認するために重要である、あるいは使用され
ることは、以前には全く知られていなかった。
【００３２】ポリヌクレオチド配列を同定する好ましい
方法は、米国特許第５，６９５，９３７号に記載されて
いるように、ＳＡＧＥ（Ｓｅｒｉａｌ Ａｎａｌｙｓｉ
ｓｏｆ Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ）を使用する
ことによるものである。この技術により、多数の転写産
物の分析が可能になる。本質的には、ｃＤＮＡオリゴヌ
クレオチドを生成する。次いで、第１の定義されたヌク
レオチド配列タグを、第１のｃＤＮＡオリゴヌクレオチ
ドから単離し、第２の定義されたヌクレオチド配列タグ
を、第２のｃＤＮＡオリゴヌクレオチドから単離する。
第１のタグおよび第２のタグのヌクレオチド配列を決定
すると、これらのタグは、発現した遺伝子に対応する。
方法は、米国特許第５，６９５，９３７号に記載されて
いるように、ＳＡＧＥ（Ｓｅｒｉａｌ Ａｎａｌｙｓｉ
ｓｏｆ Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ）を使用する
ことによるものである。この技術により、多数の転写産
物の分析が可能になる。本質的には、ｃＤＮＡオリゴヌ
クレオチドを生成する。次いで、第１の定義されたヌク
レオチド配列タグを、第１のｃＤＮＡオリゴヌクレオチ
ドから単離し、第２の定義されたヌクレオチド配列タグ
を、第２のｃＤＮＡオリゴヌクレオチドから単離する。
第１のタグおよび第２のタグのヌクレオチド配列を決定
すると、これらのタグは、発現した遺伝子に対応する。
【００３３】本発明は、光障害を確認するためのＥＳ
Ｔ、およびそれがコードするタンパク質を使用する方法
を提供する。この方法は、少なくとも１つの配列を有す
る第１の表皮サンプルを選択し、同じ配列を有する第２
の表皮サンプルを選択する第１のステップを含む。第１
の表皮サンプルを第２の表皮サンプルと比較して、配列
に変化があるかどうか判定する。配列に変化があった場
合、第２の表皮サンプルには光障害が存在する。同じ方
法を、真皮または皮膚全体のサンプルにも適用できる。
Ｔ、およびそれがコードするタンパク質を使用する方法
を提供する。この方法は、少なくとも１つの配列を有す
る第１の表皮サンプルを選択し、同じ配列を有する第２
の表皮サンプルを選択する第１のステップを含む。第１
の表皮サンプルを第２の表皮サンプルと比較して、配列
に変化があるかどうか判定する。配列に変化があった場
合、第２の表皮サンプルには光障害が存在する。同じ方
法を、真皮または皮膚全体のサンプルにも適用できる。
【００３４】耳介後部の皮膚と耳介前部の皮膚のＳＡＧ
Ｅライブラリの比較 日光に曝された肌で特異的に発現する遺伝子を同定する
ため、耳介前部の皮膚と耳介後部の皮膚についてＳＡＧ
Ｅライブラリを比較した。分析されたＳＡＧＥ配列タグ
の、小さいが重要な分画が、耳介前部の皮膚と耳介後部
の皮膚のコピー数について、著しい差を示した。日光に
曝された耳介前部の皮膚では、１９個の特異的なタグ
が、（少なくとも４分の１の）かなり低レベルで見られ
たのに対し、耳介前部の皮膚では、１５個が、少なくと
も４倍高いレベルで見られた。表４および表５は、こう
したコピー数が著しく異なるタグを列挙する。これらの
タグのうち、２４個は、ＵｎｉＧｅｎｅデータベースに
特異的に適合し、１０個のタグは、多重適合する、ある
いは適合しなかった。これらの適合しなかったタグのう
ち３個は、主として複数のデオキシアデノシン残基から
なる配列をもつ：表Ｉ中のタグ配列番号５１（ＣＡＡＡ
ＡＡＡＡＡＡＡ）およびタグ配列番号６５（ＧＧＡＡＡ
ＡＡＡＡＡＡ）、表ＩＩ中のタグ配列番号７７（ＴＡＡ
ＡＡＡＡＡＡＡＡ）。別の４個のタグは、２個の異なる
遺伝子に信頼度の高い適合をし、１個のタグは、いずれ
の指向型（ｏｒｉｅｎｔｅｄ）ＧｅｎＢａｎｋ ｃＤＮ
Ａ配列とも著しい類似性は示さなかったが他のＳＡＧＥ
ライブラリ中には見られ、１個のタグは、ＵｎｉＧｅｎ
ｅまたは他のいずれのＳＡＧＥライブラリに対しても適
合しなかった。残りの同定されていないタグは、Ａｌｕ
反復配列を表し、その結果多数の適合がもたらされた。
Ｅライブラリの比較 日光に曝された肌で特異的に発現する遺伝子を同定する
ため、耳介前部の皮膚と耳介後部の皮膚についてＳＡＧ
Ｅライブラリを比較した。分析されたＳＡＧＥ配列タグ
の、小さいが重要な分画が、耳介前部の皮膚と耳介後部
の皮膚のコピー数について、著しい差を示した。日光に
曝された耳介前部の皮膚では、１９個の特異的なタグ
が、（少なくとも４分の１の）かなり低レベルで見られ
たのに対し、耳介前部の皮膚では、１５個が、少なくと
も４倍高いレベルで見られた。表４および表５は、こう
したコピー数が著しく異なるタグを列挙する。これらの
タグのうち、２４個は、ＵｎｉＧｅｎｅデータベースに
特異的に適合し、１０個のタグは、多重適合する、ある
いは適合しなかった。これらの適合しなかったタグのう
ち３個は、主として複数のデオキシアデノシン残基から
なる配列をもつ：表Ｉ中のタグ配列番号５１（ＣＡＡＡ
ＡＡＡＡＡＡＡ）およびタグ配列番号６５（ＧＧＡＡＡ
ＡＡＡＡＡＡ）、表ＩＩ中のタグ配列番号７７（ＴＡＡ
ＡＡＡＡＡＡＡＡ）。別の４個のタグは、２個の異なる
遺伝子に信頼度の高い適合をし、１個のタグは、いずれ
の指向型（ｏｒｉｅｎｔｅｄ）ＧｅｎＢａｎｋ ｃＤＮ
Ａ配列とも著しい類似性は示さなかったが他のＳＡＧＥ
ライブラリ中には見られ、１個のタグは、ＵｎｉＧｅｎ
ｅまたは他のいずれのＳＡＧＥライブラリに対しても適
合しなかった。残りの同定されていないタグは、Ａｌｕ
反復配列を表し、その結果多数の適合がもたらされた。
【００３５】特異的に適合した２４個のタグのうち、耳
介前部の皮膚では、ケラチン１タグの数が７倍多いこと
が観察された。また、日光により障害を受けた肌におけ
るいくつかの他の遺伝子（表ＩＩ）から誘導されたタグ
についてコピー数が増加していることを発見した。これ
らには次のものが含まれる。
介前部の皮膚では、ケラチン１タグの数が７倍多いこと
が観察された。また、日光により障害を受けた肌におけ
るいくつかの他の遺伝子（表ＩＩ）から誘導されたタグ
についてコピー数が増加していることを発見した。これ
らには次のものが含まれる。
【００３６】１．ｐｓｏｒｉａｓｉｎ遺伝子は、Ｓ１０
０カルシウム結合タンパク質ファミリーのメンバーをコ
ードし、この遺伝子から誘導されたタグは、耳介前部の
皮膚では４倍高いレベルであることが判明した。Ｐｓｏ
ｒｉａｓｉｎタンパク質およびｍＲＮＡレベルは、ｉｎ
ｖｉｖｏのＵＶＢに曝された肌において、曝露後１０
日まで上昇することが報告されている（Ｄｉ Ｎｕｚｚ
ｏ他、２０００）。さらに、Ｐｓｏｒｉａｓｉｎは、乾
癬症の表皮のすべての層に存在することが以前に示され
ており、表皮の脂肪酸結合タンパク質（ＥＦＡＢＰ）に
関連することが示されており、Ｐｓｏｒｉａｓｉｎをコ
ードする遺伝子も、ＥＦＡＢＰをコードする遺伝子も、
乾癬症において上方制御されることが知られている（Ｈ
ａｇｅｎｓ他、１９９９）。ＥＦＡＢＰ遺伝子発現はま
た、ヒトの皮膚において、レチノイン酸の局所適用によ
って誘発されることも示されている（Ｌａｒｓｅｎ他、
１９９４年）。本発明のＳＡＧＥデータでは、日光に曝
された肌では、通常の皮膚に比べて、ＥＦＡＢＰ ｍＲ
ＮＡについて６倍多いタグ数が示された。
０カルシウム結合タンパク質ファミリーのメンバーをコ
ードし、この遺伝子から誘導されたタグは、耳介前部の
皮膚では４倍高いレベルであることが判明した。Ｐｓｏ
ｒｉａｓｉｎタンパク質およびｍＲＮＡレベルは、ｉｎ
ｖｉｖｏのＵＶＢに曝された肌において、曝露後１０
日まで上昇することが報告されている（Ｄｉ Ｎｕｚｚ
ｏ他、２０００）。さらに、Ｐｓｏｒｉａｓｉｎは、乾
癬症の表皮のすべての層に存在することが以前に示され
ており、表皮の脂肪酸結合タンパク質（ＥＦＡＢＰ）に
関連することが示されており、Ｐｓｏｒｉａｓｉｎをコ
ードする遺伝子も、ＥＦＡＢＰをコードする遺伝子も、
乾癬症において上方制御されることが知られている（Ｈ
ａｇｅｎｓ他、１９９９）。ＥＦＡＢＰ遺伝子発現はま
た、ヒトの皮膚において、レチノイン酸の局所適用によ
って誘発されることも示されている（Ｌａｒｓｅｎ他、
１９９４年）。本発明のＳＡＧＥデータでは、日光に曝
された肌では、通常の皮膚に比べて、ＥＦＡＢＰ ｍＲ
ＮＡについて６倍多いタグ数が示された。
【００３７】２．インシュリン様成長因子結合タンパク
質６（ＩＧＦＢＰ−６）をコードするｍＲＮＡは、耳介
前部の皮膚では６個のタグによって、耳介後部の皮膚で
は１個のタグによって表され、ＩＧＦＢＰ−６は、イン
シュリン様成長因子ＩＩ（ＩＧＦ−ＩＩ）と高い親和性
で結合し、この結合は、ＩＧＦ−ＩＩの作用を抑制す
る。ＩＧＦＢＰプロテアーゼのうち３グループ（マトリ
ックスメタロプロテイナーゼ、カリクレイン、およびカ
テプシン）は、ＩＧＦＢＰ−ＩＧＦ複合体を切断し、ま
た、その結合タンパク質から、機能的なＩＧＦを放出す
ることが示されている。ＩＧＦＢＰ−６は、静止状態の
非増殖性細胞と関連していたが、これは、ＩＧＦＢＰ−
６が、自己分泌型（ａｕｔｏｃｒｉｎｅ）成長因子とし
て作用することを示唆している（Ｋａｔｏ他、１９９
５）。Ｋｅｌｌｅｙ他（Ｋｅｌｌｅｙ他、１９９６）
は、ＩＧＦＢＰが、ＩＧＦとは無関係に、追加の固有の
生物活性も有することを示唆している。
質６（ＩＧＦＢＰ−６）をコードするｍＲＮＡは、耳介
前部の皮膚では６個のタグによって、耳介後部の皮膚で
は１個のタグによって表され、ＩＧＦＢＰ−６は、イン
シュリン様成長因子ＩＩ（ＩＧＦ−ＩＩ）と高い親和性
で結合し、この結合は、ＩＧＦ−ＩＩの作用を抑制す
る。ＩＧＦＢＰプロテアーゼのうち３グループ（マトリ
ックスメタロプロテイナーゼ、カリクレイン、およびカ
テプシン）は、ＩＧＦＢＰ−ＩＧＦ複合体を切断し、ま
た、その結合タンパク質から、機能的なＩＧＦを放出す
ることが示されている。ＩＧＦＢＰ−６は、静止状態の
非増殖性細胞と関連していたが、これは、ＩＧＦＢＰ−
６が、自己分泌型（ａｕｔｏｃｒｉｎｅ）成長因子とし
て作用することを示唆している（Ｋａｔｏ他、１９９
５）。Ｋｅｌｌｅｙ他（Ｋｅｌｌｅｙ他、１９９６）
は、ＩＧＦＢＰが、ＩＧＦとは無関係に、追加の固有の
生物活性も有することを示唆している。
【００３８】３．カルモジュリン様皮膚タンパク質（Ｃ
ＬＳＰ）に対するｍＲＮＡは、日光により障害を受けた
肌と日光から保護された肌でタグ比１６：４で表され
る。ＣＬＳＰは、最近同定されたタンパク質であり、特
に表皮に豊富であることが報告されている。さらに、Ｃ
ＬＳＰ遺伝子発現は、ケラチノサイト分化と直接的に関
連することが示されている（Ｍｅｈｕｌ他、２００
０）。
ＬＳＰ）に対するｍＲＮＡは、日光により障害を受けた
肌と日光から保護された肌でタグ比１６：４で表され
る。ＣＬＳＰは、最近同定されたタンパク質であり、特
に表皮に豊富であることが報告されている。さらに、Ｃ
ＬＳＰ遺伝子発現は、ケラチノサイト分化と直接的に関
連することが示されている（Ｍｅｈｕｌ他、２００
０）。
【００３９】４．マクロファージ遊走阻止因子（ＭＩ
Ｆ）ｍＲＮＡは、耳介前部の皮膚では４倍に上方制御さ
れた。活性化Ｔ細胞によって放出されることがもともと
報告されていたＭＩＦは、マクロファージの遊走を阻止
し、炎症部位でマクロファージを活性化させる。さら
に、以前の研究では、ＭＩＦを、表皮の免疫および細胞
分化における制御因子として関係づけている（Ｓｈｉｍ
ｉｚｕ他、１９９５）。ＵＶＢ照射は、ｉｎ ｖｉｖｏ
およびｉｎ ｖｉｔｒｏで、ヒトの表皮のケラチノサイ
トにおけるＭＩＦ産生を誘発することが示されている
（Ｓｈｉｍｉｚｕ他、１９９９）。さらに、乾癬症のプ
ラークにおいてＭＩＦレベルが上昇するので、ＭＩＦは
また、乾癬症に関与するとも考えられている（Ｓｔｅｉ
ｎｈｏｆｆ他、１９９９）。したがって、ＭＩＦは、い
くつかの炎症誘発性のサイトカインを調整すること、か
つ免疫細胞の活性化およびサイトカインの産生に対する
ステロイドの免疫抑制効果を制御することによって、抗
炎症作用の阻害物質として機能していると思われる。
Ｆ）ｍＲＮＡは、耳介前部の皮膚では４倍に上方制御さ
れた。活性化Ｔ細胞によって放出されることがもともと
報告されていたＭＩＦは、マクロファージの遊走を阻止
し、炎症部位でマクロファージを活性化させる。さら
に、以前の研究では、ＭＩＦを、表皮の免疫および細胞
分化における制御因子として関係づけている（Ｓｈｉｍ
ｉｚｕ他、１９９５）。ＵＶＢ照射は、ｉｎ ｖｉｖｏ
およびｉｎ ｖｉｔｒｏで、ヒトの表皮のケラチノサイ
トにおけるＭＩＦ産生を誘発することが示されている
（Ｓｈｉｍｉｚｕ他、１９９９）。さらに、乾癬症のプ
ラークにおいてＭＩＦレベルが上昇するので、ＭＩＦは
また、乾癬症に関与するとも考えられている（Ｓｔｅｉ
ｎｈｏｆｆ他、１９９９）。したがって、ＭＩＦは、い
くつかの炎症誘発性のサイトカインを調整すること、か
つ免疫細胞の活性化およびサイトカインの産生に対する
ステロイドの免疫抑制効果を制御することによって、抗
炎症作用の阻害物質として機能していると思われる。
【００４０】５．本発明の耳介前部の皮膚ライブラリに
おいて、精巣増強遺伝子（Ｔｅｓｔｉｓ ｅｎｈａｎｃ
ｅｄ ｇｅｎｅ）転写産物（ＴＥＧＴ）に対する４個の
ＳＡＧＥタグが同定されたのに対し、すべての耳介後部
のタグ中では、１個のタグのみが、検出された。ＴＥＧ
Ｔは、前アポトーシス（ｐｒｏ−ａｐｏｐｔｏｔｉｃ）
タンパク質ｂａｘの最近記載されたリプレッサーである
ｂａｘインヒビター１（ＢＩ−１）に一致することが判
明している（ＸｕおよびＲｅｅｄ、１９９８）。アポト
ーシス抑制の機構は未だ明確にされていないが、ＢＩ−
１が、ｂａｘのレベルに対してそれほど影響を与えない
ことが示されている。したがって、ＢＩ−１は、ｂａｘ
を間接的に、おそらく抗アポトーシスタンパク質ｂｃｌ
−２の代わりに用いることによって抑制することが示唆
された。
おいて、精巣増強遺伝子（Ｔｅｓｔｉｓ ｅｎｈａｎｃ
ｅｄ ｇｅｎｅ）転写産物（ＴＥＧＴ）に対する４個の
ＳＡＧＥタグが同定されたのに対し、すべての耳介後部
のタグ中では、１個のタグのみが、検出された。ＴＥＧ
Ｔは、前アポトーシス（ｐｒｏ−ａｐｏｐｔｏｔｉｃ）
タンパク質ｂａｘの最近記載されたリプレッサーである
ｂａｘインヒビター１（ＢＩ−１）に一致することが判
明している（ＸｕおよびＲｅｅｄ、１９９８）。アポト
ーシス抑制の機構は未だ明確にされていないが、ＢＩ−
１が、ｂａｘのレベルに対してそれほど影響を与えない
ことが示されている。したがって、ＢＩ−１は、ｂａｘ
を間接的に、おそらく抗アポトーシスタンパク質ｂｃｌ
−２の代わりに用いることによって抑制することが示唆
された。
【００４１】６．耳介前部の皮膚では、セルギリン（ｃ
ｅｌｌｕｇｙｒｉｎ）ｍＲＮＡを表すタグの数が、４倍
に増加した。セルギリンは、シナプトギリン（ｓｙｎａ
ｐｔｏｇｙｒｉｎ）のシナプス小胞タンパク質ファミリ
ーの、広範に発現するメンバーであり、シナプス小胞輸
送の調節に不可欠である（ＪａｎｚおよびＳｕｄｈｏ
ｆ、１９９８）。例えば、脂肪細胞では、インシュリン
は、細胞内区画から原形質膜への、グルコーストランス
ポーター４（Ｇｌｕｔ４）を含有する膜小胞の移動を活
性化し、最終的に、グルコースの取り込みを増大させ
る。セルギリン陽性Ｇｌｕｔ４小胞の原形質膜への再分
配は、インシュリンの刺激では開始しないので、これら
の小胞は、原形質膜に移動するＧｌｕｔ４小胞とは無関
係に、特異的な機能特性を有していると考えられる（Ｋ
ｕｐｒｉｙａｎｏｖａおよびＫａｎｄｒｏｒ、２００
０）。
ｅｌｌｕｇｙｒｉｎ）ｍＲＮＡを表すタグの数が、４倍
に増加した。セルギリンは、シナプトギリン（ｓｙｎａ
ｐｔｏｇｙｒｉｎ）のシナプス小胞タンパク質ファミリ
ーの、広範に発現するメンバーであり、シナプス小胞輸
送の調節に不可欠である（ＪａｎｚおよびＳｕｄｈｏ
ｆ、１９９８）。例えば、脂肪細胞では、インシュリン
は、細胞内区画から原形質膜への、グルコーストランス
ポーター４（Ｇｌｕｔ４）を含有する膜小胞の移動を活
性化し、最終的に、グルコースの取り込みを増大させ
る。セルギリン陽性Ｇｌｕｔ４小胞の原形質膜への再分
配は、インシュリンの刺激では開始しないので、これら
の小胞は、原形質膜に移動するＧｌｕｔ４小胞とは無関
係に、特異的な機能特性を有していると考えられる（Ｋ
ｕｐｒｉｙａｎｏｖａおよびＫａｎｄｒｏｒ、２００
０）。
【００４２】７．イモゲン（ｉｍｏｇｅｎ）３８（ミト
コンドリア３８ｋＤ島（ｉｓｌｅｔ）抗原）に対するｍ
ＲＮＡも、耳介前部の皮膚においてタグ数が４倍に増加
することによって表される。この抗原は、Ｉ型糖尿病
（インシュリン依存性糖尿病）における自己反応性Ｔ細
胞の分子標的の１つである。
コンドリア３８ｋＤ島（ｉｓｌｅｔ）抗原）に対するｍ
ＲＮＡも、耳介前部の皮膚においてタグ数が４倍に増加
することによって表される。この抗原は、Ｉ型糖尿病
（インシュリン依存性糖尿病）における自己反応性Ｔ細
胞の分子標的の１つである。
【００４３】日光に曝された肌における、知られている
タンパク質をコードするｍＲＮＡからの、数が減少した
タグ（表Ｉ）には、次のものが含まれる。
タンパク質をコードするｍＲＮＡからの、数が減少した
タグ（表Ｉ）には、次のものが含まれる。
【００４４】１．カテプシンＤ（配列番号５５）は、耳
介前部の皮膚において、ｍＲＮＡの定常状態レベルが最
も著しく低下（５分の１未満）することが示された。カ
テプシンＤは、表皮ならびに他の多くの組織に存在する
ことが知られているリソソームのアスパラギン酸プロテ
イナーゼである。このタンパク質の活性化および分解の
時期は、細胞分化の段階と関係することが示されてお
り、また、表皮におけるカテプシンＤの発現は、ケラチ
ン１０、インボルクリン、およびトランスグルタミナー
ゼなど、カルシウム濃度の変化に応答する他の構造タン
パク質の発現に似ている（Ｈｏｒｉｋｏｓｈｉ他、１９
９８）。
介前部の皮膚において、ｍＲＮＡの定常状態レベルが最
も著しく低下（５分の１未満）することが示された。カ
テプシンＤは、表皮ならびに他の多くの組織に存在する
ことが知られているリソソームのアスパラギン酸プロテ
イナーゼである。このタンパク質の活性化および分解の
時期は、細胞分化の段階と関係することが示されてお
り、また、表皮におけるカテプシンＤの発現は、ケラチ
ン１０、インボルクリン、およびトランスグルタミナー
ゼなど、カルシウム濃度の変化に応答する他の構造タン
パク質の発現に似ている（Ｈｏｒｉｋｏｓｈｉ他、１９
９８）。
【００４５】２．耳介後部ライブラリに比べて、本発明
者らの耳介前部ライブラリにおいて、代表的なＳＡＧＥ
タグが５分の１に減少していることが示されたラジニン
（Ｌａｄｉｎｉｎ）ｍＲＮＡ（下の表Ｉ中の配列番号５
６）は、係留細線維（ａｎｃｈｏｒｉｎｇ−ｆｉｌａｍ
ｅｎｔ）関連タンパク質であり、線状ＩｇＡ疾患などの
自己免疫異常に寄与するいくつかの基底（ｂａｓｅｍｅ
ｎｔ）関連タンパク質の１つである（ＭｏｌｌおよびＭ
ｏｌｌ、１９９８）。
者らの耳介前部ライブラリにおいて、代表的なＳＡＧＥ
タグが５分の１に減少していることが示されたラジニン
（Ｌａｄｉｎｉｎ）ｍＲＮＡ（下の表Ｉ中の配列番号５
６）は、係留細線維（ａｎｃｈｏｒｉｎｇ−ｆｉｌａｍ
ｅｎｔ）関連タンパク質であり、線状ＩｇＡ疾患などの
自己免疫異常に寄与するいくつかの基底（ｂａｓｅｍｅ
ｎｔ）関連タンパク質の１つである（ＭｏｌｌおよびＭ
ｏｌｌ、１９９８）。
【００４６】３．下の表Ｉ中の配列番号５７は、耳介後
部の皮膚では９倍、耳介前部の皮膚ではわずか２倍であ
ることが判明した。このタグは、２つの異なるＵｎｉＧ
ｅｎｅデータベースエントリー、すなわちレシチン−コ
レステロールアシルトランスフェラーゼ（ＬＣＡＴ）を
コードするｍＲＮＡに対するものと、Ｂｃｌ−２−アン
タゴニスト（Ｂａｋ）をコードするｍＲＮＡに対する第
２のエントリーに適合していた。ＬＣＡＴは、コレステ
ロールをコレステリルエステルに転換し、また、血中の
コレステロールの恒常性を保つ際の重要な酵素である。
感染症または炎症により、リポタンパク質代謝、ならび
に脂質およびリポタンパク質の血漿濃度が撹乱され、ま
た、ＬＣＡＴは、こうした条件下で変化することが知ら
れている（Ｋｈｏｖｉｄｈｕｎｋｉｔ他、２０００）。
一方、Ｂａｋは、ｂａｘと高い配列相同性を有する前ア
ポトーシスタンパク質である。どちらのタンパク質も、
ミトコンドリア膜でオリゴマー化し、チトクロムｃを容
易に流出する孔を形成し（Ｋｏｒｓｍｅｙｅｒ他、２０
００）、アポトーシスカスケードを誘発すると考えられ
ている。
部の皮膚では９倍、耳介前部の皮膚ではわずか２倍であ
ることが判明した。このタグは、２つの異なるＵｎｉＧ
ｅｎｅデータベースエントリー、すなわちレシチン−コ
レステロールアシルトランスフェラーゼ（ＬＣＡＴ）を
コードするｍＲＮＡに対するものと、Ｂｃｌ−２−アン
タゴニスト（Ｂａｋ）をコードするｍＲＮＡに対する第
２のエントリーに適合していた。ＬＣＡＴは、コレステ
ロールをコレステリルエステルに転換し、また、血中の
コレステロールの恒常性を保つ際の重要な酵素である。
感染症または炎症により、リポタンパク質代謝、ならび
に脂質およびリポタンパク質の血漿濃度が撹乱され、ま
た、ＬＣＡＴは、こうした条件下で変化することが知ら
れている（Ｋｈｏｖｉｄｈｕｎｋｉｔ他、２０００）。
一方、Ｂａｋは、ｂａｘと高い配列相同性を有する前ア
ポトーシスタンパク質である。どちらのタンパク質も、
ミトコンドリア膜でオリゴマー化し、チトクロムｃを容
易に流出する孔を形成し（Ｋｏｒｓｍｅｙｅｒ他、２０
００）、アポトーシスカスケードを誘発すると考えられ
ている。
【００４７】４．日光により障害を受けた肌では、ジキ
シン（ｚｙｘｉｎ）をコードするｍＲＮＡについて、通
常の肌に比べて４分の１のｍＲＮＡレベルが検出され
た。ジキシンは、表皮のすべての層で発現することが報
告されている（Ｌｅｃｃｉａ他、１９９９年）局所接着
性リンタンパク質である。さらに、ジキシンはまた、タ
ンパク質が、細胞−基層間接着性結合部（ａｄｈｅｒｅ
ｎｓ ｊｕｎｃｔｉｏｎ）とも細胞−細胞間接着性結合
部とも共存していることが示されている線維芽細胞にも
みられる。ジキシンは、（ＬＩＭドメイン、二重の（ｄ
ｏｕｂｌｅ）Ｚｎフィンガーモチーフなどの）構造的特
性を、発生調節に関与するシグナルトランスデューサー
と共に有しており、以前の研究では、ジキシンはまた、
細胞の増殖および分化の調節に関与する可能性もあるこ
とが示唆されている（Ｂｅｃｋｅｒｌｅ、１９９７）。
シン（ｚｙｘｉｎ）をコードするｍＲＮＡについて、通
常の肌に比べて４分の１のｍＲＮＡレベルが検出され
た。ジキシンは、表皮のすべての層で発現することが報
告されている（Ｌｅｃｃｉａ他、１９９９年）局所接着
性リンタンパク質である。さらに、ジキシンはまた、タ
ンパク質が、細胞−基層間接着性結合部（ａｄｈｅｒｅ
ｎｓ ｊｕｎｃｔｉｏｎ）とも細胞−細胞間接着性結合
部とも共存していることが示されている線維芽細胞にも
みられる。ジキシンは、（ＬＩＭドメイン、二重の（ｄ
ｏｕｂｌｅ）Ｚｎフィンガーモチーフなどの）構造的特
性を、発生調節に関与するシグナルトランスデューサー
と共に有しており、以前の研究では、ジキシンはまた、
細胞の増殖および分化の調節に関与する可能性もあるこ
とが示唆されている（Ｂｅｃｋｅｒｌｅ、１９９７）。
【００４８】５．日光により障害を受けた肌から誘導さ
れたＳＡＧＥライブラリでは、カルシウムイオン結合タ
ンパク質Ｓ１００ Ａ３をコードするｍＲＮＡのレベル
は低下していることが示された。Ｐｓｏｒｉａｓｉｎと
同じように、Ｓ１００ Ａ３は、Ｓ１００カルシウム結
合遺伝子ファミリーのメンバーである。Ｓ１００ Ａ３
をコードする遺伝子の、マウスにおける著しい発現は、
毛嚢に限られ、この遺伝子の発現のタイミングは、ヘア
成長サイクルの新生（ｎｅｏｎａｔａｌ）期および成長
（ａｄｏｌｅｓｃｅｎｔ）期と同時期である（Ｋｉｚａ
ｗａ他、１９９８）。
れたＳＡＧＥライブラリでは、カルシウムイオン結合タ
ンパク質Ｓ１００ Ａ３をコードするｍＲＮＡのレベル
は低下していることが示された。Ｐｓｏｒｉａｓｉｎと
同じように、Ｓ１００ Ａ３は、Ｓ１００カルシウム結
合遺伝子ファミリーのメンバーである。Ｓ１００ Ａ３
をコードする遺伝子の、マウスにおける著しい発現は、
毛嚢に限られ、この遺伝子の発現のタイミングは、ヘア
成長サイクルの新生（ｎｅｏｎａｔａｌ）期および成長
（ａｄｏｌｅｓｃｅｎｔ）期と同時期である（Ｋｉｚａ
ｗａ他、１９９８）。
【００４９】６．軟骨基質オリゴマータンパク質（ｃａ
ｒｔｉｌａｇｅ ｏｌｉｇｏｍｅｒｉｃ ｍａｔｒｉｘ
ｐｒｏｔｅｉｎ）（ＣＯＭＰ）と呼ばれる別のＣａ
２＋結合タンパク質について、日光に曝された肌におけ
るタグ数の減少が観察された。ＣＯＭＰは、軟骨および
靱帯中だけでなく、ｉｎ ｖｉｔｒｏのヒトの真皮の線
維芽細胞（Ｄｏｄｇｅ他、１９９８）およびヒトの血管
平滑筋培養細胞（Ｒｉｅｓｓｅｎ他、２００１）中でも
発現する細胞外マトリックス糖タンパク質である。ＣＯ
ＭＰにおける変異は、カルシウム結合能力を低下させ、
最終的に骨格の障害である偽性軟骨無形成症（ＰＳＡＣ
Ｈ）をもたらすことが示されている（Ｍａｄｄｏｘ他、
２０００）。しかし、他の点では、ＣＯＭＰの機能につ
いて知られていることは非常に少ない。
ｒｔｉｌａｇｅ ｏｌｉｇｏｍｅｒｉｃ ｍａｔｒｉｘ
ｐｒｏｔｅｉｎ）（ＣＯＭＰ）と呼ばれる別のＣａ
２＋結合タンパク質について、日光に曝された肌におけ
るタグ数の減少が観察された。ＣＯＭＰは、軟骨および
靱帯中だけでなく、ｉｎ ｖｉｔｒｏのヒトの真皮の線
維芽細胞（Ｄｏｄｇｅ他、１９９８）およびヒトの血管
平滑筋培養細胞（Ｒｉｅｓｓｅｎ他、２００１）中でも
発現する細胞外マトリックス糖タンパク質である。ＣＯ
ＭＰにおける変異は、カルシウム結合能力を低下させ、
最終的に骨格の障害である偽性軟骨無形成症（ＰＳＡＣ
Ｈ）をもたらすことが示されている（Ｍａｄｄｏｘ他、
２０００）。しかし、他の点では、ＣＯＭＰの機能につ
いて知られていることは非常に少ない。
【００５０】日光に曝された耳介前部の皮膚では、リボ
ソームＲＮＡから誘導されたタグ（ＡＣＡＴＣＡＴＣＧ
ＡＴ−配列番号５３およびＡＣＴＣＣＡＡＡＡＡＡ−配
列番号５４）、ならびに知られていないタンパク質をコ
ードするｍＲＮＡから誘導されたタグ（ＣＡＡＡＡＡＡ
ＡＡＡＡ−配列番号５１およびＡＣＧＴＴＡＡＡＧＡ−
配列番号５２）の数の減少が観察された。
ソームＲＮＡから誘導されたタグ（ＡＣＡＴＣＡＴＣＧ
ＡＴ−配列番号５３およびＡＣＴＣＣＡＡＡＡＡＡ−配
列番号５４）、ならびに知られていないタンパク質をコ
ードするｍＲＮＡから誘導されたタグ（ＣＡＡＡＡＡＡ
ＡＡＡＡ−配列番号５１およびＡＣＧＴＴＡＡＡＧＡ−
配列番号５２）の数の減少が観察された。
【００５１】
【表１】
【００５２】
【表２】
【００５３】実施例１
繰り返し日光に曝されたヒトの肌において、表現型の変
化をトランスクリプトームレベルで研究するため、日光
により障害を受けた耳介前部の皮膚と日光から保護され
た耳介後部の皮膚、ならびに日光から保護された表皮の
比較Ｓｅｒｉａｌ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｇｅｎｅ
Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ（ＳＡＧＥ）を行った。複数の
ｍＲＮＡから誘導されたタグ組換え体を含むＳＡＧＥラ
イブラリを、ヒトの耳介後部の皮膚および耳介前部の皮
膚、ならびに表皮のニック（ｎｉｃｋ）生検サンプルか
ら単離されたポリＡ（＋）ＲＮＡに対して作製した。耳
介後部のＳＡＧＥライブラリから得たｍＲＮＡから誘導
された５，３３０個のｃＤＮＡタグの配列を決定し、こ
れらのタグ配列を、耳介前部のＳＡＧＥライブラリから
得た、分析された５，１０５個のタグから同定されたｃ
ＤＮＡ配列と比較した。両方のライブラリで表された、
合計で４，７４２個の異なるタグのうち、ライブラリ間
のタグの存在量が少なくとも４倍異なる３５個のタグを
発見した。日光により障害を受けた肌において定常状態
レベルが変化したｍＲＮＡの中で、ケラチン１、マクロ
ファージ抑制因子、およびカルモジュリン様皮膚タンパ
ク質をコードするものを検出した。さらに、表皮の生検
サンプル（５，２５７個のｃＤＮＡタグ）から得られた
ＳＡＧＥライブラリ中で同定されたｃＤＮＡ配列と、全
層（ｆｕｌｌ−ｔｈｉｃｋｎｅｓｓ）の皮膚サンプルか
ら得られたＳＡＧＥライブラリ中で同定されたｃＤＮＡ
配列の両方を比較すると、日光への曝露後、表皮のケラ
チノサイトで、定常状態の転写産物レベルが変化した多
数の遺伝子が発現することが示された。この結果は、慢
性的に日光に曝された肌での真皮の大きな変化の疾患機
構（ｐａｔｈｏｍｅｃｈａｎｉｓｍ）における、表皮の
主要な役割を示唆している。
化をトランスクリプトームレベルで研究するため、日光
により障害を受けた耳介前部の皮膚と日光から保護され
た耳介後部の皮膚、ならびに日光から保護された表皮の
比較Ｓｅｒｉａｌ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｇｅｎｅ
Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ（ＳＡＧＥ）を行った。複数の
ｍＲＮＡから誘導されたタグ組換え体を含むＳＡＧＥラ
イブラリを、ヒトの耳介後部の皮膚および耳介前部の皮
膚、ならびに表皮のニック（ｎｉｃｋ）生検サンプルか
ら単離されたポリＡ（＋）ＲＮＡに対して作製した。耳
介後部のＳＡＧＥライブラリから得たｍＲＮＡから誘導
された５，３３０個のｃＤＮＡタグの配列を決定し、こ
れらのタグ配列を、耳介前部のＳＡＧＥライブラリから
得た、分析された５，１０５個のタグから同定されたｃ
ＤＮＡ配列と比較した。両方のライブラリで表された、
合計で４，７４２個の異なるタグのうち、ライブラリ間
のタグの存在量が少なくとも４倍異なる３５個のタグを
発見した。日光により障害を受けた肌において定常状態
レベルが変化したｍＲＮＡの中で、ケラチン１、マクロ
ファージ抑制因子、およびカルモジュリン様皮膚タンパ
ク質をコードするものを検出した。さらに、表皮の生検
サンプル（５，２５７個のｃＤＮＡタグ）から得られた
ＳＡＧＥライブラリ中で同定されたｃＤＮＡ配列と、全
層（ｆｕｌｌ−ｔｈｉｃｋｎｅｓｓ）の皮膚サンプルか
ら得られたＳＡＧＥライブラリ中で同定されたｃＤＮＡ
配列の両方を比較すると、日光への曝露後、表皮のケラ
チノサイトで、定常状態の転写産物レベルが変化した多
数の遺伝子が発現することが示された。この結果は、慢
性的に日光に曝された肌での真皮の大きな変化の疾患機
構（ｐａｔｈｏｍｅｃｈａｎｉｓｍ）における、表皮の
主要な役割を示唆している。
【００５４】遺伝子アレイの確立
タグの配列決定のプロトコル：ＡＢＩ Ｐｒｉｓｍ ３
１０ Ｇｅｎｅｔｉｃ Ａｎａｌｙｚｅｒ，Ｐｅｒｋｉ
ｎ Ｅｌｍｅｒ，Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍ
ｓ，Ｓｈｅｌｔｏｎ，ＣＴを使用して、得られたジタグ
コンカテマーの配列分析を行った。このシステムは、Ｄ
ＮＡ断片の塩基配列、またはサイズおよび量を決定する
ことができる自動装置である。これは、ポリアクリルア
ミドキャピラリー電気泳動を多色蛍光ＤＮＡ検出法と組
み合わせて使用するものである。
１０ Ｇｅｎｅｔｉｃ Ａｎａｌｙｚｅｒ，Ｐｅｒｋｉ
ｎ Ｅｌｍｅｒ，Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍ
ｓ，Ｓｈｅｌｔｏｎ，ＣＴを使用して、得られたジタグ
コンカテマーの配列分析を行った。このシステムは、Ｄ
ＮＡ断片の塩基配列、またはサイズおよび量を決定する
ことができる自動装置である。これは、ポリアクリルア
ミドキャピラリー電気泳動を多色蛍光ＤＮＡ検出法と組
み合わせて使用するものである。
【００５５】使用するＢｉｇＤｙｅ Ｔｅｒｍｉｎａｔ
ｏｒ Ｃｙｃｌｅ Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ Ｒｅａｄｙ
Ｒｅａｃｔｉｏｎ Ｋｉｔ（ＰＥ Ｃａｔ．＃４０３
０４４）Ａｎａｌｙｚｅｒ，Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅ
ｒ，Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｓｈｅｌ
ｔｏｎ，ＣＴは、いわゆるサーマルサイクル塩基配列決
定法、すなわちサンガーの蛍光ジデオキシ塩基配列決定
法の手順を、ＤＮＡ鋳型のリニア増幅法と併用する方法
に頼っている。
ｏｒ Ｃｙｃｌｅ Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ Ｒｅａｄｙ
Ｒｅａｃｔｉｏｎ Ｋｉｔ（ＰＥ Ｃａｔ．＃４０３
０４４）Ａｎａｌｙｚｅｒ，Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅ
ｒ，Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｓｈｅｌ
ｔｏｎ，ＣＴは、いわゆるサーマルサイクル塩基配列決
定法、すなわちサンガーの蛍光ジデオキシ塩基配列決定
法の手順を、ＤＮＡ鋳型のリニア増幅法と併用する方法
に頼っている。
【００５６】配列決定反応１回につき、典型的な例とし
て、鎖状体−インサートサイズチェックＰＣＲ試薬（ｃ
ｏｎｃａｔａｍｅｒ−ｉｎｓｅｒｔ−ｓｉｚｅ−ｃｈｅ
ｃｋＰＣＲ ｒｅａｃｔｉｏｎ）１μｌ（約１００ｎ
ｇ）を、Ｒｅａｄｙ ｒｅａｃｔｉｏｎ Ｍｉｘ（Ａｍ
ｐｌｉｔａｑ ＦＳ、シーケンシングバッファー（ｓｅ
ｑｕｅｎｃｉｎｇ ｂｕｆｆｅｒ）、および蛍光標識し
たｄｄＮＴＰ）４μｌ、Ｍ１３ Ｒｅｖｅｒｓｅ ｐｒ
ｉｍｅｒ ３．２ｐｍｏｌ、およびｄｄＨ２Ｏ１１μｌ
を含む２００μｌ ＰＣＲ管に加えた。この溶液を混合
し、ＡＢＩＧｅｎｅＡｍｐ ＰＣＲ Ｓｙｓｔｅｍ ９
７００，Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ，Ａｐｐｌｉｅｄ
Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｓｈｅｌｔｏｎ，ＣＴで、次の
条件でサイクル塩基配列決定反応を行った：２５サイク
ル（９６℃で１０秒間、５５℃で５秒間、６０℃で４分
間）。
て、鎖状体−インサートサイズチェックＰＣＲ試薬（ｃ
ｏｎｃａｔａｍｅｒ−ｉｎｓｅｒｔ−ｓｉｚｅ−ｃｈｅ
ｃｋＰＣＲ ｒｅａｃｔｉｏｎ）１μｌ（約１００ｎ
ｇ）を、Ｒｅａｄｙ ｒｅａｃｔｉｏｎ Ｍｉｘ（Ａｍ
ｐｌｉｔａｑ ＦＳ、シーケンシングバッファー（ｓｅ
ｑｕｅｎｃｉｎｇ ｂｕｆｆｅｒ）、および蛍光標識し
たｄｄＮＴＰ）４μｌ、Ｍ１３ Ｒｅｖｅｒｓｅ ｐｒ
ｉｍｅｒ ３．２ｐｍｏｌ、およびｄｄＨ２Ｏ１１μｌ
を含む２００μｌ ＰＣＲ管に加えた。この溶液を混合
し、ＡＢＩＧｅｎｅＡｍｐ ＰＣＲ Ｓｙｓｔｅｍ ９
７００，Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ，Ａｐｐｌｉｅｄ
Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｓｈｅｌｔｏｎ，ＣＴで、次の
条件でサイクル塩基配列決定反応を行った：２５サイク
ル（９６℃で１０秒間、５５℃で５秒間、６０℃で４分
間）。
【００５７】３Ｍ 酢酸ナトリウム２μｌと、９５％エ
タノール５０μｌを管に加えることによって、得られた
伸長した生成物を精製した。少なくとも１５分沈殿させ
た後、この混合物を２０分間最高速度で回転させ、上清
を注意深く吸引し、残ったペレットを７０％エタノール
で２回洗浄した。このペレットを乾燥させ、Ｔｅｍｐｌ
ａｔｅ Ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ ｒｅａｇｅｎｔ（Ｐ
Ｅ Ｃａｔ．＃４０１６７４）２０μｌに再び溶解させ
た。最高で９６本のこれらの管をまとめて、ＡＢＩ Ｐ
ｒｉｓｍ ３１０ Ｇｅｎｅｔｉｃ Ａｎａｌｙｚｅｒ
に装入した。
タノール５０μｌを管に加えることによって、得られた
伸長した生成物を精製した。少なくとも１５分沈殿させ
た後、この混合物を２０分間最高速度で回転させ、上清
を注意深く吸引し、残ったペレットを７０％エタノール
で２回洗浄した。このペレットを乾燥させ、Ｔｅｍｐｌ
ａｔｅ Ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ ｒｅａｇｅｎｔ（Ｐ
Ｅ Ｃａｔ．＃４０１６７４）２０μｌに再び溶解させ
た。最高で９６本のこれらの管をまとめて、ＡＢＩ Ｐ
ｒｉｓｍ ３１０ Ｇｅｎｅｔｉｃ Ａｎａｌｙｚｅｒ
に装入した。
【００５８】タグの遺伝子への転換
ＳＡＧＥタグを構成する１０〜１１塩基対を、ＮＣＢＩ
ＳＡＧＥデータベース（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃ
ｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ＳＡＧＥ／）と比較し
た。遺伝子地図に対するタグのオプションを選択した。
これにより、このタグに適合するＵｎｉＧｅｎｅ クラ
スターが同定された。このＩＤに適合する配列も同定さ
れた。次いで、このタグを含む個々の配列を、ＮＣＢＩ
から抽出し、Ｍｕｌｔｉｐｌｅ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａ
ｌｉｇｎｍｅｎｔが完了した。次いで、最も長いクロー
ンを逆転写させると、タンパク質の推定上の一次構造が
明らかになった。
ＳＡＧＥデータベース（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃ
ｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ＳＡＧＥ／）と比較し
た。遺伝子地図に対するタグのオプションを選択した。
これにより、このタグに適合するＵｎｉＧｅｎｅ クラ
スターが同定された。このＩＤに適合する配列も同定さ
れた。次いで、このタグを含む個々の配列を、ＮＣＢＩ
から抽出し、Ｍｕｌｔｉｐｌｅ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａ
ｌｉｇｎｍｅｎｔが完了した。次いで、最も長いクロー
ンを逆転写させると、タンパク質の推定上の一次構造が
明らかになった。
【００５９】ノーザンブロット分析：ＳＡＧＥによって
示された光障害における発現変化を確認するため、３つ
の異なるメッセージを使用して、確認用（ｃｏｎｆｉｒ
ｍａｔｏｒｙ）ノーザンブロットを行った。これを下の
表Ａに示す。これらは、ＳＡＧＥによって決定された関
係に十分に一致している。ケラチン１は、７倍増加し、
ＭＩＦすなわち遊走阻止因子は４倍増加し、ｈｒｐ Ｓ
９（ヒトリボソームタンパク質Ｓ９）は２．２倍増加し
た。
示された光障害における発現変化を確認するため、３つ
の異なるメッセージを使用して、確認用（ｃｏｎｆｉｒ
ｍａｔｏｒｙ）ノーザンブロットを行った。これを下の
表Ａに示す。これらは、ＳＡＧＥによって決定された関
係に十分に一致している。ケラチン１は、７倍増加し、
ＭＩＦすなわち遊走阻止因子は４倍増加し、ｈｒｐ Ｓ
９（ヒトリボソームタンパク質Ｓ９）は２．２倍増加し
た。
【００６０】ケラチン１、マクロファージ遊走阻止因子
（ＭＩＦ）、およびヒトリボソームタンパク質Ｓ９（ｈ
ｒｐ Ｓ９）に対するｍＲＮＡに相補的な、放射標識し
たｃＤＮＡを使用し、ＳＡＧＥライブラリを構成するた
めに使用した、同じ耳介前部および耳介後部の皮膚サン
プルから得たポリ（Ａ＋）ＲＮＡにおけるこれらのｍＲ
ＮＡのレベルを決定した。コントロールのＧＡＰＤＨ
ｍＲＮＡのレベルに比べて、耳介前部および耳介後部の
皮膚におけるケラチン１ ｍＲＮＡ、ＭＩＦｍＲＮＡ、
およびｈｒｐ Ｓ９のレベル（下の表Ａ）は、本発明者
らのＳＡＧＥタグ回収データと矛盾がなかった。
（ＭＩＦ）、およびヒトリボソームタンパク質Ｓ９（ｈ
ｒｐ Ｓ９）に対するｍＲＮＡに相補的な、放射標識し
たｃＤＮＡを使用し、ＳＡＧＥライブラリを構成するた
めに使用した、同じ耳介前部および耳介後部の皮膚サン
プルから得たポリ（Ａ＋）ＲＮＡにおけるこれらのｍＲ
ＮＡのレベルを決定した。コントロールのＧＡＰＤＨ
ｍＲＮＡのレベルに比べて、耳介前部および耳介後部の
皮膚におけるケラチン１ ｍＲＮＡ、ＭＩＦｍＲＮＡ、
およびｈｒｐ Ｓ９のレベル（下の表Ａ）は、本発明者
らのＳＡＧＥタグ回収データと矛盾がなかった。
【００６１】
【表３】
【００６２】実施例２
以下の実施例は、タグの配列決定のデータを提供するＳ
ＡＧＥ分析。Ｖｅｌｃｕｌｅｓｃｕ他 １９９５に記載
されている通りに、ＳＡＧＥ分析を行った。本質的に、
２本鎖ｃＤＮＡを、ビオチン化オリゴｄＴプライマーを
使用してｍＲＮＡから合成し、次いでＮｌａ ＩＩＩで
消化させた。このビオチン化３’ｍｏｓｔ ｃＤＮＡ断
片を、ストレプトアビジン磁性ビーズ（Ｄｙｎａｌ，Ｏ
ｓｌｏ，Ｎｏｒｗａｙ）で分離し、２つの異なるアリコ
ートに分けた。Ｂｓｍｆ Ｉ認識部位、Ｎｌａ ＩＩＩ
認識部位、およびＰＣＲプライマー結合（ｐｒｉｍｉｎ
ｇ）部位を含む２つの異なるオリゴヌクレオチドリンカ
ーを、各サンプル中のＤＮＡに結合させた。Ｂｓｍｆ
Ｉで消化させた後、タグを結合させ、ジタグ生成物をＰ
ＣＲ増幅させ、Ｎｌａ ＩＩＩで消化させることによっ
て単離し、鎖状化し、継続的にｐＺｅｒｏベクター（Ｉ
ｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ ＣＡ）にクロ
ーン化した。組換えプラスミドを含む個々の細菌コロニ
ーを、Ｍ１３ ｆｏｒｗａｒｄプライマーおよびＭ１３
ｒｅｖｅｒｓｅプライマーを使用するＰＣＲによっ
て、インサートサイズについて調べた。次いで、最低４
００ｂｐのインサートから誘導されたＰＣＲ産物を、Ｂ
ｉｇＤｙｅ Ｔｅｒｍｉｎａｔｏｒ Ｋｉｔ（Ｐｅｒｋ
ｉｎ Ｅｌｍｅｒ，Ｆｏｓｔｅｒ Ｃｉｔｙ，ＣＡ）お
よび３１０ ＡＢＩ 自動ＤＮＡシーケンサーを用いて
配列決定した。タグをＧｅｎｂａｎｋ／ＥＭＢＬデータ
ベースと比較し、リンカーから誘導された重複した（ｄ
ｕｐｌｉｃａｔｅ）ジタグおよびタグを同定し、除外す
るＳＡＧＥ ２０００ソフトウェアプログラム（ｖｅｒ
ｓｉｏｎ ４．１２）によって、配列を分析した。示差
的に発現したｍＲＮＡ由来のタグを、ＮＣＢＩ’ｓ Ｓ
ＡＧＥ ｍａｐ「タグから遺伝子（ｔａｇ ｔｏ ｇｅ
ｎｅ）」ソフトウェアを使用してさらに分析した。
ＡＧＥ分析。Ｖｅｌｃｕｌｅｓｃｕ他 １９９５に記載
されている通りに、ＳＡＧＥ分析を行った。本質的に、
２本鎖ｃＤＮＡを、ビオチン化オリゴｄＴプライマーを
使用してｍＲＮＡから合成し、次いでＮｌａ ＩＩＩで
消化させた。このビオチン化３’ｍｏｓｔ ｃＤＮＡ断
片を、ストレプトアビジン磁性ビーズ（Ｄｙｎａｌ，Ｏ
ｓｌｏ，Ｎｏｒｗａｙ）で分離し、２つの異なるアリコ
ートに分けた。Ｂｓｍｆ Ｉ認識部位、Ｎｌａ ＩＩＩ
認識部位、およびＰＣＲプライマー結合（ｐｒｉｍｉｎ
ｇ）部位を含む２つの異なるオリゴヌクレオチドリンカ
ーを、各サンプル中のＤＮＡに結合させた。Ｂｓｍｆ
Ｉで消化させた後、タグを結合させ、ジタグ生成物をＰ
ＣＲ増幅させ、Ｎｌａ ＩＩＩで消化させることによっ
て単離し、鎖状化し、継続的にｐＺｅｒｏベクター（Ｉ
ｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ ＣＡ）にクロ
ーン化した。組換えプラスミドを含む個々の細菌コロニ
ーを、Ｍ１３ ｆｏｒｗａｒｄプライマーおよびＭ１３
ｒｅｖｅｒｓｅプライマーを使用するＰＣＲによっ
て、インサートサイズについて調べた。次いで、最低４
００ｂｐのインサートから誘導されたＰＣＲ産物を、Ｂ
ｉｇＤｙｅ Ｔｅｒｍｉｎａｔｏｒ Ｋｉｔ（Ｐｅｒｋ
ｉｎ Ｅｌｍｅｒ，Ｆｏｓｔｅｒ Ｃｉｔｙ，ＣＡ）お
よび３１０ ＡＢＩ 自動ＤＮＡシーケンサーを用いて
配列決定した。タグをＧｅｎｂａｎｋ／ＥＭＢＬデータ
ベースと比較し、リンカーから誘導された重複した（ｄ
ｕｐｌｉｃａｔｅ）ジタグおよびタグを同定し、除外す
るＳＡＧＥ ２０００ソフトウェアプログラム（ｖｅｒ
ｓｉｏｎ ４．１２）によって、配列を分析した。示差
的に発現したｍＲＮＡ由来のタグを、ＮＣＢＩ’ｓ Ｓ
ＡＧＥ ｍａｐ「タグから遺伝子（ｔａｇ ｔｏ ｇｅ
ｎｅ）」ソフトウェアを使用してさらに分析した。
【００６３】ＳＡＧＥライブラリ
１人のドナーから得た耳介前部の皮膚と耳介後部の皮
膚、およびプールされた表皮のニック生検から単離した
ポリ（Ａ＋）ＲＮＡを用いて、３つの異なるＳＡＧＥラ
イブラリを構成した。リンカーから誘導されたタグを除
くと、耳介前部の皮膚から誘導された４，８３０個のＳ
ＡＧＥタグ、および耳介後部の皮膚から誘導された４，
９９０個のタグが産生された。さらに、ヒトの表皮から
誘導された５，２１５個のＳＡＧＥタグが産生された。
これらをまとめて言うと、１５，０３５個のタグは、
６，５９８個の特異的な遺伝子を表していた。
膚、およびプールされた表皮のニック生検から単離した
ポリ（Ａ＋）ＲＮＡを用いて、３つの異なるＳＡＧＥラ
イブラリを構成した。リンカーから誘導されたタグを除
くと、耳介前部の皮膚から誘導された４，８３０個のＳ
ＡＧＥタグ、および耳介後部の皮膚から誘導された４，
９９０個のタグが産生された。さらに、ヒトの表皮から
誘導された５，２１５個のＳＡＧＥタグが産生された。
これらをまとめて言うと、１５，０３５個のタグは、
６，５９８個の特異的な遺伝子を表していた。
【００６４】耳介後部の皮膚から得たＳＡＧＥタグの分
析 耳介後部の皮膚から得た２，８５８個の特異的なタグの
うち、１２７個のタグが少なくとも５回観察され、これ
らの反復性のタグの総数が、全体のタグ数の３２％を表
していた。残りの存在量が少ないタグのうち２，２５４
個のタグは、１回のみ検出された。表ＩＩＩに、検出さ
れた５０個の最も量の多い耳介後部のＳＡＧＥタグと、
これらのタグの頻度、ＵｎｉＧｅｎｅとの信頼度の高い
適合、および対応するＧｅｎＢａｎｋ受託番号とを列挙
する。ミトコンドリアＤＮＡ由来のタグは除外した。使
用できる場合は必ず、ＳＡＧＥタグ配列中の１５番目
（ＣＡＴＧ＋１１ｂｐ）を使用して、同じタグについて
多重適合を区別した。２つ（タグ１３とタグ３３）以外
のすべてのタグは、少なくとも１つの遺伝子に割り当て
られた。タグ３３（ＡＣＣＴＣＣＡＣＴＧ）が、Ｕｎｉ
ＧｅｎｅデータベースにおけるＥＳＴのクラスターにの
み割り当てられたのに対し、タグ１３（ＡＣＴＴＴＴＴ
ＣＡＡ）はどのＵｎｉＧｅｎｅクラスターに対しても信
頼度の高い適合をしなかった。さらに、ＮＣＢＩ ＳＡ
ＧＥデータベースによれば、原発性卵巣腫瘍から産生さ
れた他のＳＡＧＥライブラリ中で、タグ３３だけが、少
ないコピー数で見られた。１２個のタグが多重に割り当
てられていた；これらのタグのうち５個は、２つの異な
る遺伝子から誘導された配列に適合し、７個は、２個以
上の異なる遺伝子由来であった。これらの量の多いタグ
のうち多くは、様々な細胞型において広く発現すること
が知られている遺伝子、特にリボソームタンパク質をコ
ードする遺伝子、たんぱく質合成に関与する遺伝子（伸
長因子１）、細胞骨格遺伝子（ラミンＡ／Ｃ）、および
エネルギー代謝において活性な遺伝子（グルコースリン
酸イソメラーゼ）から誘導された。皮膚で特異的に発現
することが知られている遺伝子から誘導されたｍＲＮＡ
に適合するタグも発見された。こうした皮膚に特異的な
最も量の多いＳＡＧＥタグの中から、いくつかのケラチ
ン、ならびにガレクチン７およびカルグラニュリン（ｃ
ａｌｇｒａｎｕｌｉｎ）（これらはすべて、一般に全層
の皮膚に見られる）をコードするｍＲＮＡから誘導され
たタグを検出した。
析 耳介後部の皮膚から得た２，８５８個の特異的なタグの
うち、１２７個のタグが少なくとも５回観察され、これ
らの反復性のタグの総数が、全体のタグ数の３２％を表
していた。残りの存在量が少ないタグのうち２，２５４
個のタグは、１回のみ検出された。表ＩＩＩに、検出さ
れた５０個の最も量の多い耳介後部のＳＡＧＥタグと、
これらのタグの頻度、ＵｎｉＧｅｎｅとの信頼度の高い
適合、および対応するＧｅｎＢａｎｋ受託番号とを列挙
する。ミトコンドリアＤＮＡ由来のタグは除外した。使
用できる場合は必ず、ＳＡＧＥタグ配列中の１５番目
（ＣＡＴＧ＋１１ｂｐ）を使用して、同じタグについて
多重適合を区別した。２つ（タグ１３とタグ３３）以外
のすべてのタグは、少なくとも１つの遺伝子に割り当て
られた。タグ３３（ＡＣＣＴＣＣＡＣＴＧ）が、Ｕｎｉ
ＧｅｎｅデータベースにおけるＥＳＴのクラスターにの
み割り当てられたのに対し、タグ１３（ＡＣＴＴＴＴＴ
ＣＡＡ）はどのＵｎｉＧｅｎｅクラスターに対しても信
頼度の高い適合をしなかった。さらに、ＮＣＢＩ ＳＡ
ＧＥデータベースによれば、原発性卵巣腫瘍から産生さ
れた他のＳＡＧＥライブラリ中で、タグ３３だけが、少
ないコピー数で見られた。１２個のタグが多重に割り当
てられていた；これらのタグのうち５個は、２つの異な
る遺伝子から誘導された配列に適合し、７個は、２個以
上の異なる遺伝子由来であった。これらの量の多いタグ
のうち多くは、様々な細胞型において広く発現すること
が知られている遺伝子、特にリボソームタンパク質をコ
ードする遺伝子、たんぱく質合成に関与する遺伝子（伸
長因子１）、細胞骨格遺伝子（ラミンＡ／Ｃ）、および
エネルギー代謝において活性な遺伝子（グルコースリン
酸イソメラーゼ）から誘導された。皮膚で特異的に発現
することが知られている遺伝子から誘導されたｍＲＮＡ
に適合するタグも発見された。こうした皮膚に特異的な
最も量の多いＳＡＧＥタグの中から、いくつかのケラチ
ン、ならびにガレクチン７およびカルグラニュリン（ｃ
ａｌｇｒａｎｕｌｉｎ）（これらはすべて、一般に全層
の皮膚に見られる）をコードするｍＲＮＡから誘導され
たタグを検出した。
【００６５】
【表４】
【００６６】耳介前部の皮膚から得たＳＡＧＥタグの分
析 耳介前部の皮膚から産生された４，８３０個のタグの中
で、２，９３１個が特異的であると判明した。これらの
うち１２７個の特異的なタグ（４％）が、５回以上出現
した；タグの全体量の３０％が、これらの反復性のタグ
配列によって表された。すべてのタグのうちほぼ５０
％、すなわち２，３９３個が、１回だけ出現していた。
表２は、耳介前部の皮膚から構成された本発明者らのＳ
ＡＧＥライブラリにおいて検出された５０個の最も量の
多いタグの一覧を示す。耳介後部の皮膚に関しては、１
個のタグ（ＡＣＣＴＣＣＡＣＴＧ、耳介前部の皮膚にお
けるタグ２２、耳介後部の皮膚におけるタグ３３）を除
くすべてが、少なくとも１個の遺伝子に適合し、複数の
タグは、１個を超える遺伝子に割り当てることができ
た。最も量の多い耳介前部の皮膚タグのほとんどすべて
が、耳介後部の皮膚においてコピー数が多いことも判明
した。タグ２８（ＡＴＣＣＧＣＧＡＧＧＣ、カルモジュ
リン様皮膚タンパク質）を除いて、５０個の最も量の多
い耳介前部タグのリスト中のすべてのタグは、耳介後部
における５０個の最も量の多いタグの中にあると判明し
た、あるいはほぼ同じタグ数で検出された。耳介前部の
皮膚ににおける最も量の多いタグの大部分は、ハウスキ
ーピング遺伝子によってコードされるｍＲＮＡから誘導
されたものであり、他の組織を用いた以前のＳＡＧＥ研
究（Ｃｈｅｎ他、１９９８；Ｖｅｌｃｕｌｅｓｃｕ他、
１９９７）と矛盾しなかった。
析 耳介前部の皮膚から産生された４，８３０個のタグの中
で、２，９３１個が特異的であると判明した。これらの
うち１２７個の特異的なタグ（４％）が、５回以上出現
した；タグの全体量の３０％が、これらの反復性のタグ
配列によって表された。すべてのタグのうちほぼ５０
％、すなわち２，３９３個が、１回だけ出現していた。
表２は、耳介前部の皮膚から構成された本発明者らのＳ
ＡＧＥライブラリにおいて検出された５０個の最も量の
多いタグの一覧を示す。耳介後部の皮膚に関しては、１
個のタグ（ＡＣＣＴＣＣＡＣＴＧ、耳介前部の皮膚にお
けるタグ２２、耳介後部の皮膚におけるタグ３３）を除
くすべてが、少なくとも１個の遺伝子に適合し、複数の
タグは、１個を超える遺伝子に割り当てることができ
た。最も量の多い耳介前部の皮膚タグのほとんどすべて
が、耳介後部の皮膚においてコピー数が多いことも判明
した。タグ２８（ＡＴＣＣＧＣＧＡＧＧＣ、カルモジュ
リン様皮膚タンパク質）を除いて、５０個の最も量の多
い耳介前部タグのリスト中のすべてのタグは、耳介後部
における５０個の最も量の多いタグの中にあると判明し
た、あるいはほぼ同じタグ数で検出された。耳介前部の
皮膚ににおける最も量の多いタグの大部分は、ハウスキ
ーピング遺伝子によってコードされるｍＲＮＡから誘導
されたものであり、他の組織を用いた以前のＳＡＧＥ研
究（Ｃｈｅｎ他、１９９８；Ｖｅｌｃｕｌｅｓｃｕ他、
１９９７）と矛盾しなかった。
【００６７】
【表５】
【００６８】表皮から得たＳＡＧＥタグの分析
５，２１５個のＳＡＧＥタグを、表皮のニック生検から
生成し、これは２，９８２個の特異的な遺伝子に相当し
た。このライブラリにおけるタグ分布は、耳介前部およ
び耳介後部の皮膚ライブラリから得られたＳＡＧＥライ
ブラリで観察された分布とほぼ同じであった。表皮のラ
イブラリ中で最も量の多いタグ（５個以上のタグ）は、
特異的なタグの４％に相当した。単一のタグは、特異的
なタグの８０％およびこのＳＡＧＥライブラリに存在す
るすべてのタグの４５％に相当した。５０個の最も頻度
の高い表皮のタグを、表Ｖに列挙する。これらの５０個
のタグのうち、２個は、ＵｎｉＧｅｎｅデータベースと
比較したときいずれの遺伝子適合も示さず、３個のタグ
は、ＵｎｉＧｅｎｅ ＥＳＴ クラスターに割り当てら
れただけであり、１４個のタグ（２８％）は、単一の遺
伝子に属さなかった。７個の最も高度に発現した遺伝子
のうち、４個の異なるケラチン（ケラチン１、１０、
５、および１４）が、一般に、表皮のケラチノサイトで
発現することが判明した。中間径フィラメントタンパク
質のケラチン５および１４の遺伝子が、表皮の基底層で
高度に発現することが知られているのに対し、ケラチン
１および１０は、主に、表皮の基底上皮（ｓｕｐｒａｂ
ａｓａｌ ｌａｙｅｒ）の分化しているケラチノサイト
に見られた。ケラチンを架橋するフィラグリン、および
同様に中間径フィラメントの架橋体（ｃｒｏｓｓ−ｌｉ
ｎｋｅｒ）であるプラコグロビン、および接着斑の高密
度プラークをコードするｍＲＮＡから得たタグも、５０
個の最も量の多いタグの中にあった。この表中のこれら
のタグの残りは、多くの異なる組織で発現することが知
られた遺伝子から広く誘導されている。
生成し、これは２，９８２個の特異的な遺伝子に相当し
た。このライブラリにおけるタグ分布は、耳介前部およ
び耳介後部の皮膚ライブラリから得られたＳＡＧＥライ
ブラリで観察された分布とほぼ同じであった。表皮のラ
イブラリ中で最も量の多いタグ（５個以上のタグ）は、
特異的なタグの４％に相当した。単一のタグは、特異的
なタグの８０％およびこのＳＡＧＥライブラリに存在す
るすべてのタグの４５％に相当した。５０個の最も頻度
の高い表皮のタグを、表Ｖに列挙する。これらの５０個
のタグのうち、２個は、ＵｎｉＧｅｎｅデータベースと
比較したときいずれの遺伝子適合も示さず、３個のタグ
は、ＵｎｉＧｅｎｅ ＥＳＴ クラスターに割り当てら
れただけであり、１４個のタグ（２８％）は、単一の遺
伝子に属さなかった。７個の最も高度に発現した遺伝子
のうち、４個の異なるケラチン（ケラチン１、１０、
５、および１４）が、一般に、表皮のケラチノサイトで
発現することが判明した。中間径フィラメントタンパク
質のケラチン５および１４の遺伝子が、表皮の基底層で
高度に発現することが知られているのに対し、ケラチン
１および１０は、主に、表皮の基底上皮（ｓｕｐｒａｂ
ａｓａｌ ｌａｙｅｒ）の分化しているケラチノサイト
に見られた。ケラチンを架橋するフィラグリン、および
同様に中間径フィラメントの架橋体（ｃｒｏｓｓ−ｌｉ
ｎｋｅｒ）であるプラコグロビン、および接着斑の高密
度プラークをコードするｍＲＮＡから得たタグも、５０
個の最も量の多いタグの中にあった。この表中のこれら
のタグの残りは、多くの異なる組織で発現することが知
られた遺伝子から広く誘導されている。
【００６９】
【表６】
【００７０】実施例３
ヒトの皮膚におけるｍＲＮＡプロファイルのこのＳＡＧ
Ｅ分析では、１５，０００個以上のタグが同定され、こ
れは６，５００個以上の異なる遺伝子からのｍＲＮＡに
相当していた。選択的な顔面形成術を受けている、日光
による障害を患う患者から得られた、慢性的に日光に曝
された耳介前部の皮膚および日光から保護された耳介後
部の皮膚から単離されたポリ（Ａ＋）ＲＮＡ中で、全層
の皮膚におけるこれらのｍＲＮＡが同定された。耳介前
部および耳介後部の皮膚のこのモデルを選択することに
よって、日光性弾力線維症を研究するためのマウスの固
有の問題点を含めて、少なくとも他のモデルシステムの
制限のいくつかが回避された。日光に曝されたヒトの皮
膚を使用することにより、太陽光の異なる成分の影響を
識別するのではなく、自然の太陽光の影響を研究するこ
とも可能になった。Ｂｒｏｗｎ他（Ｂｒｏｗｎ他、２０
００）による最近の研究は、例えば、普通の蛍光太陽灯
（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ ｓｕｎｌａｍｐ）は、自然
の太陽光の代わりに用いるには不適当であることを報告
している。さらに、細胞培養モデルは、例えば、細胞型
間の相互作用を無視することなどの結果、異なる細胞
型、ならびに組織の三次元構造を十分に表すことはめっ
たにない。さらに、本研究における皮膚の生検は、皮膚
における体の異なる部位との表現型の違いを最小限にす
る試みで、顔の近接する部位から採取された。しかし、
耳介前部と耳介後部のヒトの皮膚を使用すると、日光へ
の曝露の合計時間などの実験条件を制御したり、同実験
条件に影響を与えたりする可能性が制限される。さら
に、本発明者らのモデルは、制御および制限された、Ｕ
Ｖ光線への曝露によって引き起こされる変化を表すので
はなく、長年の日光への曝露によるｍＲＮＡの定常状態
レベルの変化を反映することが分かっている。
Ｅ分析では、１５，０００個以上のタグが同定され、こ
れは６，５００個以上の異なる遺伝子からのｍＲＮＡに
相当していた。選択的な顔面形成術を受けている、日光
による障害を患う患者から得られた、慢性的に日光に曝
された耳介前部の皮膚および日光から保護された耳介後
部の皮膚から単離されたポリ（Ａ＋）ＲＮＡ中で、全層
の皮膚におけるこれらのｍＲＮＡが同定された。耳介前
部および耳介後部の皮膚のこのモデルを選択することに
よって、日光性弾力線維症を研究するためのマウスの固
有の問題点を含めて、少なくとも他のモデルシステムの
制限のいくつかが回避された。日光に曝されたヒトの皮
膚を使用することにより、太陽光の異なる成分の影響を
識別するのではなく、自然の太陽光の影響を研究するこ
とも可能になった。Ｂｒｏｗｎ他（Ｂｒｏｗｎ他、２０
００）による最近の研究は、例えば、普通の蛍光太陽灯
（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ ｓｕｎｌａｍｐ）は、自然
の太陽光の代わりに用いるには不適当であることを報告
している。さらに、細胞培養モデルは、例えば、細胞型
間の相互作用を無視することなどの結果、異なる細胞
型、ならびに組織の三次元構造を十分に表すことはめっ
たにない。さらに、本研究における皮膚の生検は、皮膚
における体の異なる部位との表現型の違いを最小限にす
る試みで、顔の近接する部位から採取された。しかし、
耳介前部と耳介後部のヒトの皮膚を使用すると、日光へ
の曝露の合計時間などの実験条件を制御したり、同実験
条件に影響を与えたりする可能性が制限される。さら
に、本発明者らのモデルは、制御および制限された、Ｕ
Ｖ光線への曝露によって引き起こされる変化を表すので
はなく、長年の日光への曝露によるｍＲＮＡの定常状態
レベルの変化を反映することが分かっている。
【００７１】全層のヒトの皮膚は、様々な異なる細胞集
団を含んでいるが、ヒトの皮膚において最も量の多い細
胞型は、表皮から誘導されたケラチノサイトである。し
たがって、全層の皮膚から得られたｍＲＮＡプロファイ
ルは、広くケラチノサイトから誘導されたｍＲＮＡのス
ペクトルを反映することが予想され、実際にこの結果が
得られた。耳介前部の皮膚と耳介後部の皮膚の両方にお
ける、５０個の最も量の多いｍＲＮＡを、表皮のニック
生検から得られたＳＡＧＥライブラリ中で同定されたｍ
ＲＮＡプロファイルと比較すると、これらのタグの多く
が、表皮に一般に見られるタンパク質をコードするｍＲ
ＮＡから誘導されていることが明白である。これらの例
には、ケラチン、ガレクチン７、カルモジュリン様皮膚
タンパク質がある。
団を含んでいるが、ヒトの皮膚において最も量の多い細
胞型は、表皮から誘導されたケラチノサイトである。し
たがって、全層の皮膚から得られたｍＲＮＡプロファイ
ルは、広くケラチノサイトから誘導されたｍＲＮＡのス
ペクトルを反映することが予想され、実際にこの結果が
得られた。耳介前部の皮膚と耳介後部の皮膚の両方にお
ける、５０個の最も量の多いｍＲＮＡを、表皮のニック
生検から得られたＳＡＧＥライブラリ中で同定されたｍ
ＲＮＡプロファイルと比較すると、これらのタグの多く
が、表皮に一般に見られるタンパク質をコードするｍＲ
ＮＡから誘導されていることが明白である。これらの例
には、ケラチン、ガレクチン７、カルモジュリン様皮膚
タンパク質がある。
【００７２】ヒトの皮膚線維芽細胞のＳＡＧＥライブラ
リ（データは示していない）から得られたタグの同様の
分析により、皮膚の繊維芽細胞において最も量の多いも
のの中にあると予想されるいくつかのｍＲＮＡが現れ
た。これらのｍＲＮＡには、プロα１（Ｉ）、プロα２
（Ｉ）、およびプロα１（ＩＩＩ）コラーゲン、ならび
にいくつかのマトリックスメタロプロテイナーゼをコー
ドするｍＲＮＡが含まれる。これらのｍＲＮＡから誘導
されたタグは、本発明者らの全層の皮膚ライブラリ中で
は観察されず、このことは、全層の皮膚のこのＳＡＧＥ
分析で観察された量の多いｍＲＮＡの大部分が、表皮の
ケラチノサイトから誘導されたという結論を支えてい
た。
リ（データは示していない）から得られたタグの同様の
分析により、皮膚の繊維芽細胞において最も量の多いも
のの中にあると予想されるいくつかのｍＲＮＡが現れ
た。これらのｍＲＮＡには、プロα１（Ｉ）、プロα２
（Ｉ）、およびプロα１（ＩＩＩ）コラーゲン、ならび
にいくつかのマトリックスメタロプロテイナーゼをコー
ドするｍＲＮＡが含まれる。これらのｍＲＮＡから誘導
されたタグは、本発明者らの全層の皮膚ライブラリ中で
は観察されず、このことは、全層の皮膚のこのＳＡＧＥ
分析で観察された量の多いｍＲＮＡの大部分が、表皮の
ケラチノサイトから誘導されたという結論を支えてい
た。
【００７３】表ＩおよびＩＩに、耳介前部と耳介後部の
皮膚の間で存在量が増加または減少した３４個の異なる
遺伝子から誘導されたタグを列挙する。このタグ数の変
化は、これらのタグが誘導されたｍＲＮＡについての定
常状態レベルの変化を直接反映するものであり、遺伝子
発現の変化を間接的に反映する。この根元的な仮定は、
ｍＲＮＡレベルの変化が、そのｍＲＮＡがコードするタ
ンパク質の量の変化に反映されるということである。
皮膚の間で存在量が増加または減少した３４個の異なる
遺伝子から誘導されたタグを列挙する。このタグ数の変
化は、これらのタグが誘導されたｍＲＮＡについての定
常状態レベルの変化を直接反映するものであり、遺伝子
発現の変化を間接的に反映する。この根元的な仮定は、
ｍＲＮＡレベルの変化が、そのｍＲＮＡがコードするタ
ンパク質の量の変化に反映されるということである。
【００７４】耳介前部と耳介後部の皮膚の間で存在量が
少なくとも４倍異なることによって表される３４個の異
なるｍＲＮＡのうち、６個のｍＲＮＡはリボソームタン
パク質をコードし、２個のｍＲＮＡは翻訳開始因子タン
パク質をコードしている。この研究では、リボソームタ
ンパク質と開始因子タンパク質のｍＲＮＡのこうした変
化が、日光への慢性的曝露に関連するタンパク質合成に
おける全般的な変化を反映すると想定される。リボソー
ムタンパク質をコードするｍＲＮＡから誘導されたタグ
は、たいていのＳＡＧＥ研究において普通に存在するの
で、たいていの著者は、これらのタグの出現に特別な機
能的重要性を置いていない。
少なくとも４倍異なることによって表される３４個の異
なるｍＲＮＡのうち、６個のｍＲＮＡはリボソームタン
パク質をコードし、２個のｍＲＮＡは翻訳開始因子タン
パク質をコードしている。この研究では、リボソームタ
ンパク質と開始因子タンパク質のｍＲＮＡのこうした変
化が、日光への慢性的曝露に関連するタンパク質合成に
おける全般的な変化を反映すると想定される。リボソー
ムタンパク質をコードするｍＲＮＡから誘導されたタグ
は、たいていのＳＡＧＥ研究において普通に存在するの
で、たいていの著者は、これらのタグの出現に特別な機
能的重要性を置いていない。
【００７５】表ＩおよびＩＩ中の４個のタグは、多重適
合していることが示された。これらのタグのうち３個
は、ポリ（Ａ）のストレッチに対応する。ＳＡＧＥタグ
は、ｍＲＮＡの３’端から構成されるので、これらのポ
リ（Ａ）配列は、ほぼ確実に、１つまたは複数のｍＲＮ
Ａの３’未翻訳領域（ＵＴＲ）内のポリ（Ａ）のストレ
ッチ、あるいはｍＲＮＡの３’ＵＴＲの３’端に転写後
に付加されたポリ（Ａ）テールに相当する。どちらの例
でも、たいていのｍＲＮＡ中のこれらの共通の配列に対
するタグ適合により、これらのタグが誘導されたｍＲＮ
Ａのより的確な同定が妨げられる。同様に、仮想タンパ
ク質（ｈｙｐｏｔｈｅｔｉｃａｌ ｐｒｏｔｅｉｎ）
（ＡＦ１５１０７５）と同定された、表ＩＩ中のタグに
ついてのＵｎｉＧｅｎｅとの適合は、以前に同定され
た、機能の知られていないＥＳＴクラスターを表す。タ
ンパク質ＡＡＢ５４２４４０を合成すると予測されるｍ
ＲＮＡに対して相同性が限定されたＥＳＴもまた、機能
が知られていないタンパク質をコードするＥＳＴであ
る。表Ｉ中の、ＧｅｎＢａｎｋ中で同定されなかった２
個のタグは、以前にＥＳＴと同定されなかったｍＲＮＡ
に相当する。
合していることが示された。これらのタグのうち３個
は、ポリ（Ａ）のストレッチに対応する。ＳＡＧＥタグ
は、ｍＲＮＡの３’端から構成されるので、これらのポ
リ（Ａ）配列は、ほぼ確実に、１つまたは複数のｍＲＮ
Ａの３’未翻訳領域（ＵＴＲ）内のポリ（Ａ）のストレ
ッチ、あるいはｍＲＮＡの３’ＵＴＲの３’端に転写後
に付加されたポリ（Ａ）テールに相当する。どちらの例
でも、たいていのｍＲＮＡ中のこれらの共通の配列に対
するタグ適合により、これらのタグが誘導されたｍＲＮ
Ａのより的確な同定が妨げられる。同様に、仮想タンパ
ク質（ｈｙｐｏｔｈｅｔｉｃａｌ ｐｒｏｔｅｉｎ）
（ＡＦ１５１０７５）と同定された、表ＩＩ中のタグに
ついてのＵｎｉＧｅｎｅとの適合は、以前に同定され
た、機能の知られていないＥＳＴクラスターを表す。タ
ンパク質ＡＡＢ５４２４４０を合成すると予測されるｍ
ＲＮＡに対して相同性が限定されたＥＳＴもまた、機能
が知られていないタンパク質をコードするＥＳＴであ
る。表Ｉ中の、ＧｅｎＢａｎｋ中で同定されなかった２
個のタグは、以前にＥＳＴと同定されなかったｍＲＮＡ
に相当する。
【００７６】１８個の異なるｍＲＮＡをコードする残り
のタグについて、これらのｍＲＮＡがコードするタンパ
ク質が、主に表皮に限られる機能的に異なるグループの
タンパク質に相当することは、印象的である。まとめて
考えると、これらの変化は、皮膚、特に表皮のＵＶ照射
への慢性的曝露に対する、ＭＩＦのレベルの上昇によっ
て示されるような持続的な炎症反応を含めた防御機構を
示唆する。さらに、ＩＧＦＢＰ−６、ＣＬＳＰ、および
ＥＦＡＢＰ（どれもケラチノサイト分化に関係する）
は、ｍＲＮＡの定常状態レベルの上昇を示し、さらに、
Ｂｃｌ−２アンタゴニストおよびＢａｘインヒビター１
による、アポトーシス抑制のレベルの上昇は、日光によ
り障害を受けた肌におけるケラチノサイト増殖−分化サ
イクルの変化を意味する。さらに、Ｃａ２＋レベルは、
ケラチノサイトにおけるこのサイクルのスイッチにとっ
て重要な因子であることが知られているので、日光によ
り障害を受けた肌において、いくつかのＣａ２＋結合タ
ンパク質をコードするｍＲＮＡレベルも変化することは
意外ではない。
のタグについて、これらのｍＲＮＡがコードするタンパ
ク質が、主に表皮に限られる機能的に異なるグループの
タンパク質に相当することは、印象的である。まとめて
考えると、これらの変化は、皮膚、特に表皮のＵＶ照射
への慢性的曝露に対する、ＭＩＦのレベルの上昇によっ
て示されるような持続的な炎症反応を含めた防御機構を
示唆する。さらに、ＩＧＦＢＰ−６、ＣＬＳＰ、および
ＥＦＡＢＰ（どれもケラチノサイト分化に関係する）
は、ｍＲＮＡの定常状態レベルの上昇を示し、さらに、
Ｂｃｌ−２アンタゴニストおよびＢａｘインヒビター１
による、アポトーシス抑制のレベルの上昇は、日光によ
り障害を受けた肌におけるケラチノサイト増殖−分化サ
イクルの変化を意味する。さらに、Ｃａ２＋レベルは、
ケラチノサイトにおけるこのサイクルのスイッチにとっ
て重要な因子であることが知られているので、日光によ
り障害を受けた肌において、いくつかのＣａ２＋結合タ
ンパク質をコードするｍＲＮＡレベルも変化することは
意外ではない。
【００７７】本明細書で説明する耳介前部および耳介後
部のＳＡＧＥライブラリは、そのとき選択的な顔面形成
術を受けている５５歳の女性のドナーから得られた皮膚
サンプルから構成した。したがって、この耳介前部の皮
膚サンプルは、数十年間繰り返し日光への曝露を受けた
皮膚を表していた。日光への慢性的かつ繰り返しの曝露
の生合成的結果に取り組んだ研究はこれまでほとんどな
かった。例えば、Ｖｏｏｒｈｅｅｓ他は、繰り返し日光
に曝される間の真皮の結合組織のコラーゲンおよび他の
成分の異常なリモデリングのための根元的機構として
の、マトリックスメタロプロテイナーゼの、ＵＶにより
誘発され、ＭＡＰキナーゼが仲介する活性化という魅力
的な仮説を提案している。
部のＳＡＧＥライブラリは、そのとき選択的な顔面形成
術を受けている５５歳の女性のドナーから得られた皮膚
サンプルから構成した。したがって、この耳介前部の皮
膚サンプルは、数十年間繰り返し日光への曝露を受けた
皮膚を表していた。日光への慢性的かつ繰り返しの曝露
の生合成的結果に取り組んだ研究はこれまでほとんどな
かった。例えば、Ｖｏｏｒｈｅｅｓ他は、繰り返し日光
に曝される間の真皮の結合組織のコラーゲンおよび他の
成分の異常なリモデリングのための根元的機構として
の、マトリックスメタロプロテイナーゼの、ＵＶにより
誘発され、ＭＡＰキナーゼが仲介する活性化という魅力
的な仮説を提案している。
【００７８】概要を述べると、本発明に関して実施され
るＳＡＧＥ分析は、日光への慢性的曝露に伴うヒトの全
層の皮膚における生合成的変化の包括的なプロファイル
を得るための初めての試みである。分析された特異的な
６，５００個の転写産物の全体から、日光への慢性的曝
露に伴って定常状態レベルがかなり変化した１８個の異
なるｍＲＮＡが同定された。
るＳＡＧＥ分析は、日光への慢性的曝露に伴うヒトの全
層の皮膚における生合成的変化の包括的なプロファイル
を得るための初めての試みである。分析された特異的な
６，５００個の転写産物の全体から、日光への慢性的曝
露に伴って定常状態レベルがかなり変化した１８個の異
なるｍＲＮＡが同定された。
【００７９】本発明を、多少具体的に、そのある種の好
ましい実施形態に関して、本明細書で説明してきたが、
これまで説明してきた本発明の範囲および趣旨に含まれ
る、実施可能なその多数の変形形態、修正形態、および
代替形態は、当分野の技術者には理解されるであろう。
これらの修正形態および変形形態はすべて、本明細書で
説明および主張した通りの本発明の範囲内であり、本発
明は頭記の特許請求の範囲によってのみ限定され、こう
した特許請求の範囲は適度に広く解釈されるものとす
る。この出願全体を通して、様々な刊行物を引用してき
た。これらのそれぞれの刊行物の全体を、参照によって
本明細書に組み込む。
ましい実施形態に関して、本明細書で説明してきたが、
これまで説明してきた本発明の範囲および趣旨に含まれ
る、実施可能なその多数の変形形態、修正形態、および
代替形態は、当分野の技術者には理解されるであろう。
これらの修正形態および変形形態はすべて、本明細書で
説明および主張した通りの本発明の範囲内であり、本発
明は頭記の特許請求の範囲によってのみ限定され、こう
した特許請求の範囲は適度に広く解釈されるものとす
る。この出願全体を通して、様々な刊行物を引用してき
た。これらのそれぞれの刊行物の全体を、参照によって
本明細書に組み込む。
─────────────────────────────────────────────────────
フロントページの続き
(72)発明者 カート・マシユー・シリング
アメリカ合衆国、ニユー・ジヤージー・
07020、エツジウオーター、リバー・ロー
ド・45、ユニリーバー・リサーチ・ユー・
エス・インコーポレイテツド
(72)発明者 チヤールズ・ボイド
アメリカ合衆国、ハワイ・96822、ホノル
ル、スイート・280、ウツドローン・ドラ
イブ・2800、ユニバーシテイ・オブ・ハワ
イ
(72)発明者 ヨハン・ウーアシツツ
アメリカ合衆国、ハワイ・96822、ホノル
ル、スイート・280、ウツドローン・ドラ
イブ・2800、ユニバーシテイ・オブ・ハワ
イ
Ｆターム(参考） 4B024 AA11 CA04 CA12 HA12
4B063 QA19 QA20 QQ08 QQ53 QR08
QR42 QR56 QS25 QS34 QX02
Claims (6)
- 【請求項１】 光障害を検出するパーソナルケア方法で
あって、（ａ）配列番号５１、配列番号５２、配列番号
５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号５６、配
列番号５７、配列番号５８、配列番号５９、配列番号６
０、配列番号６１、配列番号６２、配列番号６３、配列
番号６４、配列番号６５、配列番号６６、配列番号６
７、配列番号６８、および配列番号６９からなる群から
選択される１つまたは複数の配列から選択される、少な
くとも１種の光障害のマーカーを使用するステップと、
（ｂ）該マーカー中の変化を検出して、光障害の存在を
決定するステップを含む方法。 - 【請求項２】 検出ステップ（ｂ）が、（ｂ１）第１の
皮膚サンプルを、第２の皮膚サンプルと比較して、マー
カー中に変化があるかどうか決定するステップをさらに
含む請求項１に記載の方法。 - 【請求項３】 表皮もしくは真皮または皮膚全体のサン
プルにおける肌状態を測定するためのパーソナルケア方
法であって、（ａ）既知の肌状態を有する所定の皮膚サ
ンプルの第１の遺伝子発現を測定するステップと、
（ｂ）既知の肌状態を有していない所定の皮膚サンプル
の第２の遺伝子発現を測定するステップと、（ｃ）第１
の遺伝子発現と第２の遺伝子発現の変化の、既知の肌状
態を特定する複数のマーカーを同定するステップを含む
方法。 - 【請求項４】 同定ステップ（ｃ）が、（ｃ１）第１の
遺伝子発現と第２の遺伝子発現の間の遺伝子発現の変化
を評価することによって、マーカーを決定するステップ
をさらに含む請求項３に記載の方法。 - 【請求項５】 既知の肌状態が、光障害、老化、乾燥
肌、および脂性肌を含む状態から選択される請求項３に
記載の方法。 - 【請求項６】 既知の肌状態が光障害であり、複数のマ
ーカーが、配列番号５１、配列番号５２、配列番号５
３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号５６、配列
番号５７、配列番号５８、配列番号５９、配列番号６
０、配列番号６１、配列番号６２、配列番号６３、配列
番号６４、配列番号６５、配列番号６６、配列番号６
７、配列番号６８、および配列番号６９からなる群から
選択される請求項３に記載の方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US337856 | 1989-04-14 | ||
| US33785601P | 2001-11-08 | 2001-11-08 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2003245097A true JP2003245097A (ja) | 2003-09-02 |
Family
ID=28675226
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2002300727A Pending JP2003245097A (ja) | 2001-11-08 | 2002-10-15 | 光障害を分析するための遺伝子発現 |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US20030170739A1 (ja) |
| JP (1) | JP2003245097A (ja) |
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2005033710A1 (ja) * | 2003-10-01 | 2005-04-14 | Shiseido Company, Ltd. | しみ部位亢進遺伝子群を指標とした皮膚しみ形成予知方法、皮膚しみ形成抑制剤のスクリーニング方法 |
| WO2007126104A1 (ja) | 2006-04-25 | 2007-11-08 | Shiseido Company, Ltd. | しみ部位亢進遺伝子群を指標とした皮膚しみ形成予知方法、皮膚しみ形成抑制剤のスクリーニング方法 |
| JP2008178390A (ja) * | 2006-12-27 | 2008-08-07 | Nippon Menaade Keshohin Kk | 皮膚の状態を評価する方法及びその用途 |
| WO2009113446A1 (ja) | 2008-03-11 | 2009-09-17 | 株式会社資生堂 | 皮膚美白方法、並びに、皮膚シミ形成抑制及び／又は除去因子のスクリーニング方法 |
| JP2010115131A (ja) * | 2008-11-12 | 2010-05-27 | Kao Corp | 肌評価方法及び皮膚老化改善剤・皮膚老化予防剤のスクリーニング方法 |
| JP2016105296A (ja) * | 2011-02-22 | 2016-06-09 | ザ プロクター アンド ギャンブル カンパニー | スキンケア組成物用の化粧剤を同定するための方法 |
Families Citing this family (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20030088437A1 (en) * | 2001-11-08 | 2003-05-08 | Iobst Susanne Teklits | Method for identifying skin conditions, selecting suitable treatment products, or predicting product efficacy |
| US7229778B2 (en) * | 2004-02-26 | 2007-06-12 | The Procter & Gamble Company | Methods for determining the relative benefits and/or evaluating quantitative changes of products on epithelial tissue |
| US20060116319A1 (en) * | 2004-11-29 | 2006-06-01 | Unilever Home & Personal Care Usa, Division Of Conopco, Inc. | Method for identifying and treating photodamaged skin |
| WO2012135651A1 (en) | 2011-03-31 | 2012-10-04 | The Procter & Gamble Company | Systems, models and methods for identifying and evaluating skin-active agents effective for treating dandruff/seborrheic dermatitis |
| WO2013184908A2 (en) | 2012-06-06 | 2013-12-12 | The Procter & Gamble Company | Systems and methods for identifying cosmetic agents for hair/scalp care compositions |
| EP3155435A1 (en) * | 2014-06-12 | 2017-04-19 | The Procter & Gamble Company | System and methods of detecting and demonstrating ultraviolet damage to hair via evaluation of protein fragments |
-
2002
- 2002-10-07 US US10/265,509 patent/US20030170739A1/en not_active Abandoned
- 2002-10-15 JP JP2002300727A patent/JP2003245097A/ja active Pending
Cited By (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2005033710A1 (ja) * | 2003-10-01 | 2005-04-14 | Shiseido Company, Ltd. | しみ部位亢進遺伝子群を指標とした皮膚しみ形成予知方法、皮膚しみ形成抑制剤のスクリーニング方法 |
| KR101122415B1 (ko) | 2003-10-01 | 2012-03-09 | 가부시키가이샤 시세이도 | 반점 부위 항진 유전자군을 지표로 한 피부 반점 형성 예지방법, 피부 반점 형성 억제제의 스크리닝 방법 |
| WO2007126104A1 (ja) | 2006-04-25 | 2007-11-08 | Shiseido Company, Ltd. | しみ部位亢進遺伝子群を指標とした皮膚しみ形成予知方法、皮膚しみ形成抑制剤のスクリーニング方法 |
| JP2008178390A (ja) * | 2006-12-27 | 2008-08-07 | Nippon Menaade Keshohin Kk | 皮膚の状態を評価する方法及びその用途 |
| WO2009113446A1 (ja) | 2008-03-11 | 2009-09-17 | 株式会社資生堂 | 皮膚美白方法、並びに、皮膚シミ形成抑制及び／又は除去因子のスクリーニング方法 |
| JP2010115131A (ja) * | 2008-11-12 | 2010-05-27 | Kao Corp | 肌評価方法及び皮膚老化改善剤・皮膚老化予防剤のスクリーニング方法 |
| JP2016105296A (ja) * | 2011-02-22 | 2016-06-09 | ザ プロクター アンド ギャンブル カンパニー | スキンケア組成物用の化粧剤を同定するための方法 |
| US9434993B2 (en) | 2011-02-22 | 2016-09-06 | The Procter & Gamble Company | Systems for identifying cosmetic agents for skin care compositions |
| US10563258B2 (en) | 2011-02-22 | 2020-02-18 | The Procter & Gamble Company | Method of making skin care compositions |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US20030170739A1 (en) | 2003-09-11 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20050815 |
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| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20080311 |
|
| A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20080604 |
|
| A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20080609 |
|
| A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20081118 |