JP2003207505A - 生体分子の分析方法 - Google Patents

生体分子の分析方法

Info

Publication number
JP2003207505A
JP2003207505A JP2002004611A JP2002004611A JP2003207505A JP 2003207505 A JP2003207505 A JP 2003207505A JP 2002004611 A JP2002004611 A JP 2002004611A JP 2002004611 A JP2002004611 A JP 2002004611A JP 2003207505 A JP2003207505 A JP 2003207505A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
biomolecule
solid phase
analyzing
scanner
biomolecules
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
JP2002004611A
Other languages
English (en)
Inventor
Naoki Kimura
直紀 木村
Osamu Suzuki
収 鈴木
Masayuki Osumi
雅之 大住
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Nisshinbo Holdings Inc
Original Assignee
Nisshinbo Industries Inc
Nisshin Spinning Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Nisshinbo Industries Inc, Nisshin Spinning Co Ltd filed Critical Nisshinbo Industries Inc
Priority to JP2002004611A priority Critical patent/JP2003207505A/ja
Priority to EP03075100A priority patent/EP1327690A3/en
Priority to US10/339,704 priority patent/US20030203379A1/en
Priority to CA002416033A priority patent/CA2416033A1/en
Publication of JP2003207505A publication Critical patent/JP2003207505A/ja
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N27/00—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means
    • G01N27/26—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means by investigating electrochemical variables; by using electrolysis or electrophoresis
    • G01N27/416—Systems
    • G01N27/447—Systems using electrophoresis
    • G01N27/44704—Details; Accessories
    • G01N27/44717—Arrangements for investigating the separated zones, e.g. localising zones
    • G01N27/44721—Arrangements for investigating the separated zones, e.g. localising zones by optical means
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J2219/00—Chemical, physical or physico-chemical processes in general; Their relevant apparatus
    • B01J2219/00274—Sequential or parallel reactions; Apparatus and devices for combinatorial chemistry or for making arrays; Chemical library technology
    • B01J2219/00277—Apparatus
    • B01J2219/00351—Means for dispensing and evacuation of reagents
    • B01J2219/00364—Pipettes
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J2219/00—Chemical, physical or physico-chemical processes in general; Their relevant apparatus
    • B01J2219/00274—Sequential or parallel reactions; Apparatus and devices for combinatorial chemistry or for making arrays; Chemical library technology
    • B01J2219/00277—Apparatus
    • B01J2219/00351—Means for dispensing and evacuation of reagents
    • B01J2219/00387—Applications using probes
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J2219/00—Chemical, physical or physico-chemical processes in general; Their relevant apparatus
    • B01J2219/00274—Sequential or parallel reactions; Apparatus and devices for combinatorial chemistry or for making arrays; Chemical library technology
    • B01J2219/00277—Apparatus
    • B01J2219/00497—Features relating to the solid phase supports
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J2219/00—Chemical, physical or physico-chemical processes in general; Their relevant apparatus
    • B01J2219/00274—Sequential or parallel reactions; Apparatus and devices for combinatorial chemistry or for making arrays; Chemical library technology
    • B01J2219/00277—Apparatus
    • B01J2219/00497—Features relating to the solid phase supports
    • B01J2219/00527—Sheets
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J2219/00—Chemical, physical or physico-chemical processes in general; Their relevant apparatus
    • B01J2219/00274—Sequential or parallel reactions; Apparatus and devices for combinatorial chemistry or for making arrays; Chemical library technology
    • B01J2219/00583—Features relative to the processes being carried out
    • B01J2219/00585—Parallel processes
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J2219/00—Chemical, physical or physico-chemical processes in general; Their relevant apparatus
    • B01J2219/00274—Sequential or parallel reactions; Apparatus and devices for combinatorial chemistry or for making arrays; Chemical library technology
    • B01J2219/00583—Features relative to the processes being carried out
    • B01J2219/00596—Solid-phase processes
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J2219/00—Chemical, physical or physico-chemical processes in general; Their relevant apparatus
    • B01J2219/00274—Sequential or parallel reactions; Apparatus and devices for combinatorial chemistry or for making arrays; Chemical library technology
    • B01J2219/00583—Features relative to the processes being carried out
    • B01J2219/00603—Making arrays on substantially continuous surfaces
    • B01J2219/00605—Making arrays on substantially continuous surfaces the compounds being directly bound or immobilised to solid supports
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J2219/00—Chemical, physical or physico-chemical processes in general; Their relevant apparatus
    • B01J2219/00274—Sequential or parallel reactions; Apparatus and devices for combinatorial chemistry or for making arrays; Chemical library technology
    • B01J2219/00583—Features relative to the processes being carried out
    • B01J2219/00603—Making arrays on substantially continuous surfaces
    • B01J2219/00605—Making arrays on substantially continuous surfaces the compounds being directly bound or immobilised to solid supports
    • B01J2219/0061—The surface being organic
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J2219/00—Chemical, physical or physico-chemical processes in general; Their relevant apparatus
    • B01J2219/00274—Sequential or parallel reactions; Apparatus and devices for combinatorial chemistry or for making arrays; Chemical library technology
    • B01J2219/00583—Features relative to the processes being carried out
    • B01J2219/00603—Making arrays on substantially continuous surfaces
    • B01J2219/00605—Making arrays on substantially continuous surfaces the compounds being directly bound or immobilised to solid supports
    • B01J2219/00612—Making arrays on substantially continuous surfaces the compounds being directly bound or immobilised to solid supports the surface being inorganic
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J2219/00—Chemical, physical or physico-chemical processes in general; Their relevant apparatus
    • B01J2219/00274—Sequential or parallel reactions; Apparatus and devices for combinatorial chemistry or for making arrays; Chemical library technology
    • B01J2219/00583—Features relative to the processes being carried out
    • B01J2219/00603—Making arrays on substantially continuous surfaces
    • B01J2219/00605—Making arrays on substantially continuous surfaces the compounds being directly bound or immobilised to solid supports
    • B01J2219/00623—Immobilisation or binding
    • B01J2219/00626—Covalent
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J2219/00—Chemical, physical or physico-chemical processes in general; Their relevant apparatus
    • B01J2219/00274—Sequential or parallel reactions; Apparatus and devices for combinatorial chemistry or for making arrays; Chemical library technology
    • B01J2219/00583—Features relative to the processes being carried out
    • B01J2219/00603—Making arrays on substantially continuous surfaces
    • B01J2219/00605—Making arrays on substantially continuous surfaces the compounds being directly bound or immobilised to solid supports
    • B01J2219/00632—Introduction of reactive groups to the surface
    • B01J2219/00637—Introduction of reactive groups to the surface by coating it with another layer
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J2219/00—Chemical, physical or physico-chemical processes in general; Their relevant apparatus
    • B01J2219/00274—Sequential or parallel reactions; Apparatus and devices for combinatorial chemistry or for making arrays; Chemical library technology
    • B01J2219/00583—Features relative to the processes being carried out
    • B01J2219/00603—Making arrays on substantially continuous surfaces
    • B01J2219/00639—Making arrays on substantially continuous surfaces the compounds being trapped in or bound to a porous medium
    • B01J2219/00641—Making arrays on substantially continuous surfaces the compounds being trapped in or bound to a porous medium the porous medium being continuous, e.g. porous oxide substrates
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J2219/00—Chemical, physical or physico-chemical processes in general; Their relevant apparatus
    • B01J2219/00274—Sequential or parallel reactions; Apparatus and devices for combinatorial chemistry or for making arrays; Chemical library technology
    • B01J2219/00583—Features relative to the processes being carried out
    • B01J2219/00603—Making arrays on substantially continuous surfaces
    • B01J2219/00659—Two-dimensional arrays
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J2219/00—Chemical, physical or physico-chemical processes in general; Their relevant apparatus
    • B01J2219/00274—Sequential or parallel reactions; Apparatus and devices for combinatorial chemistry or for making arrays; Chemical library technology
    • B01J2219/00583—Features relative to the processes being carried out
    • B01J2219/00603—Making arrays on substantially continuous surfaces
    • B01J2219/00677—Ex-situ synthesis followed by deposition on the substrate
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J2219/00—Chemical, physical or physico-chemical processes in general; Their relevant apparatus
    • B01J2219/00274—Sequential or parallel reactions; Apparatus and devices for combinatorial chemistry or for making arrays; Chemical library technology
    • B01J2219/00718—Type of compounds synthesised
    • B01J2219/0072—Organic compounds
    • B01J2219/00722—Nucleotides
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J2219/00—Chemical, physical or physico-chemical processes in general; Their relevant apparatus
    • B01J2219/00274—Sequential or parallel reactions; Apparatus and devices for combinatorial chemistry or for making arrays; Chemical library technology
    • B01J2219/00718—Type of compounds synthesised
    • B01J2219/0072—Organic compounds
    • B01J2219/00725—Peptides
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J2219/00—Chemical, physical or physico-chemical processes in general; Their relevant apparatus
    • B01J2219/00274—Sequential or parallel reactions; Apparatus and devices for combinatorial chemistry or for making arrays; Chemical library technology
    • B01J2219/00718—Type of compounds synthesised
    • B01J2219/0072—Organic compounds
    • B01J2219/00731—Saccharides

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Electrochemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Investigating Or Analysing Materials By Optical Means (AREA)

Abstract

(57)【要約】 【課題】 ２次元シグナルを検出することによって行う
生体分子の分析を、簡便、かつ、定量的に行う方法を提
供する。 【解決手段】 生体分子を固相上に局在化させ、可視的
な２次元シグナルとして前記生体分子を検出する、生体
分子の分析方法において、前記固相上の２次元画像を、
固相に光を照射する光源と、固相からの反射光を受ける
イメージセンサとを有し、固相上を２次元的に走査する
ことによって固相上の２次元画像を読み取るスキャナを
用いて読取り、得られた２次元画像データを解析するこ
とによって、前記シグナルを検出する。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、生体分子分析方法
の発明に関する。詳しくは、ガラス等の基板上に固定し
た生体分子の検出を簡便かつ効率的に行える手法に関す
るものである。
【０００２】
【従来の技術】従来、電気泳動法、サザンブロッティン
グ法等、核酸や蛋白質の生体分子を２次元シグナルによ
って分析する手法において、それらを検出する方法とし
ては、次の２つの方法が主に用いられている（特表平１
０−５０３８４１号、ＷＯ９７１０３６５等）。 検
出する核酸等の生体分子をポリシアニン等の蛍光分子で
標識し、蛍光イメージアナライザー等を用いて検出する
方法。 検出する核酸等の生体分子をビオチン等で標
識し、それに、アビジン又はスレトプトアビジンを付加
した酵素を結合させ、同酵素の基質となり得るベンジジ
ン等の発色基質を用いて検出する方法。
【０００３】しかしながら、上記方法のうちの方法
は、検出感度には優れるが、非常に高価な蛍光イメージ
アナライザー等を購入する必要があり、さらに、蛍光物
質は可視、紫外等の光照射により容易に劣化する等の欠
点があった。また、の方法は、高価な検出器を購入す
る必要はないが、肉眼での検出が主流であり、検出結果
が定量性に乏しい等の欠点が指摘されてきた。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、２次元シグ
ナルを検出することによって行う生体分子の分析を、簡
便、かつ、定量的に行う方法を提供することを課題とす
る。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、生体分子
の２次元シグナルをイメージスキャナを用いて検出すれ
ば、高価な装置を必要とせず、定量的かつ再現性良く生
体分子を分析することができることを見出し、本発明の
完成に至った。すなわち本発明は、以下のとおりであ
る。
【０００６】（１）生体分子を固相上に局在化させ、可
視的な２次元シグナルとして前記生体分子を検出する、
生体分子の分析方法において、前記固相上の２次元画像
を、固相に光を照射する光源と、固相からの反射光を受
けるイメージセンサとを有し、固相上を２次元的に走査
することによって固相上の２次元画像を読み取るスキャ
ナを用いて読取り、得られた２次元画像データを解析す
ることによって、前記シグナルを検出することを特徴と
する、生体分子の分析方法。 （２）固相が、プラスチック、無機高分子、金属、天然
高分子、セラミックから選ばれる材質で構成される基板
である(1)記載の生体分子の分析方法。 （３）前記生体分子が、核酸、蛋白質、酵素、抗原、抗
体、糖から選ばれる(1)又は(2)に記載の生体分子の分析
方法。 （４）前記固相が、ＤＮＡを固定化したＤＮＡチップで
ある(1)〜(3)のいずれかに記載の生体分子の分析方法。 （５）前記生体分子を、光源からの照射光の透過率、屈
折率または反射率が固相と異なる標識物質、又は同標識
物質で標識され、かつ、前記生体物質に特異的に結合す
る物質を結合させることによって可視化することを特徴
とする(1)〜(4)のいずれかに記載の生体分子の分析方
法。 （６）固相の生体分子が固定化されていない部分とスキ
ャナの読み取り面との間にスペーサを介在させて固相上
の２次元画像を読みとる請求項１〜５のいずれか一項に
記載の生体分子の分析方法。
【０００７】本発明において２次元シグナルとは、固相
上に２次元的に分離又は配置された生体分子のシグナル
をいう。典型的には、固相上に局在化する生体分子の個
々のシグナルと、バックグラウンドのシグナルとを含
む。
【０００８】
【発明の実施の形態】以下に、本発明を詳細に説明す
る。本発明の方法においては、生体分子を固相上に局在
化させ、可視的な２次元シグナルとして前記生体分子を
検出する。この操作に用いる方法は、生体分子の二次元
シグナルを固相上に形成できるものであれば、特に制限
されず、従来、生体分子の分析に用いられている種々の
方法、例えばハイブリダイゼーションによる核酸検出法
等を用いることができる。また、現在知られていなくて
も、本発明を適用することができる方法であれば、採用
することができる。
【０００９】以下に、固相化核酸を用いた核酸同士のハ
イブリダイゼーションにより核酸を検出する方法を中心
として、本発明の実施の形態を説明する。 ※＜１＞生体分子の固相上への局在化 本発明に用いられる固相は、生体分子を局在化するため
に用いられる。生体分子としては、核酸、蛋白質、酵
素、抗原、抗体、糖等が挙げられる。核酸としては、天
然もしくは合成ＤＮＡ（オリゴデオキシリボヌクレオチ
ドを含む。）、またはＲＮＡ（オリゴリボヌクレオチド
を含む。）が挙げられる。核酸は、１本鎖であっても、
２本鎖であってもよい。
【００１０】生体分子の固相上への局在化は、電気泳動
等の手段を用いて物理的又は化学的特性によって生体分
子を固相中で分離することによって行ってもよいし、ま
た、固相上に設定された位置に人為的に配置することに
よって行ってもよい。生体分子を固相上に配置するに
は、例えば、生体分子を含む溶液を、ピペット、ディス
ペンサ、又はピン等を用いて固相上に滴下する等の方法
を用いることができる。このように微量の溶液を供給す
る装置は、一般に市販されており、本発明においてもこ
れらを用いることが可能である。例えば、ＤＮＡチップ
の製造に用いられるスポッタ等を用いると、生体分子を
高密度に固相上に配置することができる。ＤＮＡチップ
として好ましいスポットの大きさは、１０μｍ〜１０ｍ
ｍである。
【００１１】固相上に局在化された生体分子は、固相に
化学的又は物理的結合によって固定化されていてもよい
し、ゲルマトリクス等によって固定化されていてもよ
い。固相上に固定化される生体分子は、同一であっても
異なってもよい。また、一つの固相上に複数種の生体分
子を固定する場合の配置等については、生体分子の種
類、検出方法、用途等により適宜選択されうる。
【００１２】生体分子は、固相を形成する基板に直接固
定化されていてもよいし、生体分子に結合性を有するリ
ガンド（生体分子固定試薬）を介して固定化されてもよ
い。前記基板としては、生体分子を固定化することがで
き、ハイブリダイゼーション等、通常の生体分子の分析
の条件に耐えうるものであれば特に制限されない。具体
的には、核酸の固定及びハイブリダイゼーション等に用
いる溶剤に不溶であり、かつ常温若しくはその付近の温
度範囲内（例えば０℃〜１００℃）で固体又はゲル状で
あるものが挙げられる。尚、基板が溶剤に不溶性である
とは、基板に後述のようにしてカルボジイミド基等の核
酸に結合性を有するリガンドが胆持され、ついで核酸が
固相化され、その後、例えば、ＤＮＡチップ等として使
用される際の各過程で用いられる水性溶剤、有機溶剤等
の各種溶剤に実質的に不溶性であることをいう。
【００１３】上記のような基板の材質として、具体的に
は、プラスチック、無機高分子、金属、天然高分子、セ
ラミック等が挙げられる上記プラスチックとして具体的
には、ポリエチレン、ポリスチレン、ポリカーボネー
ト、ポリプロピレン、ポリアミド、フェノール樹脂、エ
ポキシ樹脂、ポリカルボジイミド樹脂、ポリ塩化ビニ
ル、ポリフッ化ビニリデン、ポリフッ化エチレン、ポリ
イミド及びアクリル樹脂等が挙げられる。
【００１４】また、無機高分子として具体的には、ガラ
ス、カーボン、シリカゲル及びグラファイト等が挙げら
れる。また、金属として具体的には、金、白金、銀、
銅、鉄、アルミニウム、パラマグネット及びアパタイト
等が挙げられる。
【００１５】また、天然高分子としては、セルロース、
キチン、キトサン、アルギン酸及びそれら誘導体が挙げ
られる。また、セラミックとして具体的には、アルミ
ナ、シリカ、炭化ケイ素、窒化ケイ素及び炭化ホウ素等
が挙げられる。
【００１６】また、前記生体分子固定試薬としては、例
えば、窒素イペリット、ポリ−Ｌ−リジン、ポリカルボ
ジイミド、メンブレン、ニトロセルロース等を挙げるこ
とができる。
【００１７】窒素イペリットは、U. S. Pat. ２１４１
０９０、U. S. Pat. ５２７３９９１及びU. S. Pat. ５
３８７７０７号公報等に開示されている方法等によって
製造できる。また、ニトロセルロース、ポリ−Ｌ−リジ
ンまたはメンブレンは、J. Sambrok, E. F. Fritsch an
d T. Maniatis, Molecular Cloning, Cold Spring Harb
or Laboratory Pres, Second Edition, page 2.109-2.
113 and page 9.34-9.46、特表平１０−５０３８４１号
等に開示されている方法等によって製造できる。
【００１８】本発明において、上記生体分子固定試薬は
上記基板上に担持される限り、単に物理的な接着性を利
用して担持されていてもよく、また、化学的に共有結合
等を介して担持されていてもよい。
【００１９】また、生体分子固定試薬は、必要に応じ、
基板上の全面において担持されても、また、その一部に
おいて担持されてもよい。また、生体分子を固定する際
に紫外線等の電磁波を照射しても良い。上記生体分子固
定試薬が基板上に物理的な接着性を利用して担持されて
いる担体を製造する場合に用いる生体分子固定試薬とし
ては、上記生体分子固定試薬が高分子に結合した化合物
を特に制限無く挙げることができる。
【００２０】このような、生体分子固定試薬が結合した
高分子化合物は、上記基板に対して高い接着性を有する
ものであり、この接着性を利用して基板に担持されるも
のである。尚、前記生体分子固定試薬が結合した高分子
化合物が基板上に物理的な接着性を利用して担持される
際の代表的な形態は皮膜である。
【００２１】前記基板上に前記生体分子固定試薬が結合
した高分子化合物を皮膜でコートさせる方法としては、
スプレー、浸漬、ブラッシング、スタンプ、蒸着、フィ
ルムコータを用いたコーティング等の公知の方法を用い
ることができる。
【００２２】本発明においては、固相に固定化された生
体分子以外の他の生体分子等を固相に接触させる機会が
多いが、基板上に残存する未反応試薬にこのような生体
分子等が非特異的に結合することを防ぐため、目的の生
体分子を固相に固定化した後に、過剰量のウシ血清アル
ブミン（ＢＳＡ）、カゼイン、サケ精子ＤＮＡ等を固相
に接触させ、活性部位をブロックしておくことが好まし
い。
【００２３】＜２＞生体分子の２次元シグナルの検出 固相上の生体分子は、可視的な２次元シグナルとして検
出される。従来、このような２次元シグナルは、直接、
又は写真として記録された後に、肉眼により検出される
か、又は蛍光イメージアナライザー等を用いて検出され
る。一方、本発明においては、生体分子の２次元シグナ
ルは、固相上の２次元画像をスキャナを用いて読取り、
得られた２次元画像データを解析することによって検出
される。前記スキャナは、固相に光を照射する光源と、
固相からの反射光を受けるイメージセンサとを有し、固
相上を２次元的に走査することによって固相上の２次元
画像を読み取ることができる装置である。このような２
次元スキャナとしては、コンピュータの周辺機器として
用いられているイメージスキャナが挙げられ、各電機メ
ーカーから市販されている製品を利用することができ
る。また、このようなスキャナは、電子写真装置（コピ
ー機）及びファクシミリ等の装置に内蔵されている。ス
キャナとしてＴＷＡＩＮ対応の装置を用いると、パーソ
ナルコンピュータによるデータの保存、解析が容易とな
り、定量的な解析も可能となる。
【００２４】生体分子のシグナルは、固相に前記光源か
らの光を照射することにより直接検出してもよい。ま
た、生体分子を、光源からの照射光の透過率、屈折率ま
たは反射率が固相と異なる標識物質、又は同標識物質が
結合し、かつ、前記生体物質に特異的に結合する物質を
結合させることによって可視化してから検出してもよ
い。可視化の方法は、生体分子の種類によって適宜選択
すればよい。
【００２５】例えば、電気泳動ゲル又はゲルからフィル
ターに転写された核酸又は蛋白質等は、適当な色素を用
いて染色することによって可視化することができる。ま
た、特定の蛋白質は、標識物質で標識された抗体等の蛋
白質を用いて可視化することができる。同様に、特定の
核酸は、それに特異的に結合する核酸プローブを用いて
可視化することができる。
【００２６】標識物質は、それ自体、可視的であっても
よいが、発色反応により可視化できるものであれば、不
可視であってもよい。このような標識物質としては、ア
ルカリホスファターゼ、ホースラディッシュパーオキシ
ダーゼ等の酵素が挙げられる。また、標識物質として、
抗原もしくは抗体、又はビオチンもしくはアビジン等を
用い、抗原−抗体、又はビオチン−アビジン等の結合に
より、標識物質に酵素を特異的に結合させてもよい。
【００２７】標識物質としては、具体的には例えば、発
色基質、フォトクロミック化合物等を挙げることができ
る。上記発色基質としては、ベンジジン等を挙げること
ができ、ジゴキシゲニン等と酵素等を組み合わせること
により発色する。
【００２８】上記フォトクロミック化合物としては、ア
ゾベンゼン、スピロピラン、フルギド、ジアリールエテ
ン、スチルベンゼン、フェノキシナフタセンキノン、チ
オインジゴ、マラカイトグリーン等を挙げることができ
る。
【００２９】また、Ｐ−Ｔｙｐｅのフォトクロミック化
合物も、光照射による検出時には光定常状態となり着色
を保持することから、生体分子の検出に用いることがで
きる。さらに、アゾベンゼン等のアゾ染料は、検出前に
紫外線等を照射することにより着色させ、検出すること
もできる。
【００３０】このようなフォトクロミック化合物を用い
て、生体分子に標識する方法としては、フォトクロミッ
ク化合物の着色を阻害しない適切な位置にスクシンイミ
ドエステル基、イソチオシアネート基、カルボジイミド
基、イソシアネート基、アミノ基、ハロゲン、窒素イペ
リット、チオール基等の官能基を導入し、その後、水も
しくはバッファー中で生体分子に標識（反応）すれば良
い。
【００３１】また、核酸に発色物質やフォトクロミック
化合物を導入する場合は、適切なリンカーを有するイン
ターカレーターに発色物質やフォトクロミック化合物を
導入後、水もしくはバッファー中で核酸にインターカレ
ートさせることもできる。
【００３２】固相上の２次元画像は、イメージスキャナ
を用いて、通常の写真や文書等の２次元画像の読取りと
同様にして読みとられる。スキャナのスキャン面に固相
を載置する際、固相の生体分子が固定化されている側を
読み取り面に向けるようにすることが好ましい。また、
固相の生体分子が固定化されていない部分と読み取り面
との間にスペーサを介在させてもよい。このようなスペ
ーサを用いることによって、読み取り面や固相の平面性
が完全でない場合、微少な隙間が形成され、それによっ
て生ずるモアレ（干渉縞）が発生することを防ぎ、安定
した画像を得ることができる。また、スペーサを用いる
ことによって、固相の生体分子が固定化されている部分
が読み取り面に直接接触することを防ぎ、固相の保護、
及びスキャナの汚染防止に効果的である。スペーサの好
ましい厚さは、１００〜２００μｍ程度である。
【００３３】スキャナによる画像の読み取りは、例え
ば、６００ｄｐｉの解像度程度で行われる。読みとられ
た２次元画像データは、コンピュータを用いて、適当な
画像解析ソフトウエアを使用して解析される。例えば、
読み取られた画像データはコンピュータの記憶装置に白
黒２５６階調のデータとして保存される。このデータ
は、画像をメモリ上に展開し、ディスプレイ上に表示さ
れる。メモリ上に展開された画像にソフトウエア上で自
動的に、又はディスプレー上の画像にマニュアル操作に
より、グリッドを設定する。次に、上下限フィルタ処理
してバックグラウンドノイズを除去し、引き続き白黒２
５６階調のドットデータを一旦、反射濃度に変換し、こ
れをグリッドロケーションと対比して、各グリッド上に
積算する。得られた積算値を正規化し、発色特性及びス
キャナ等の特性に合わせてリニアな信号レベルに変換す
るために、ガンマ補正を施し、結果を計算、出力する。
得られた結果から、スポットやバンドのシグナルの位置
や大きさ、及び濃度を測定することができる。
【００３４】本発明の生体分子検出方法は、高価な検出
器を購入する必要が無く、これを用いて解析した場合、
再現性、定量性に優れた解析が可能となる。本発明の検
出方法は、多数の生体分子を用いてハイブリダイゼーシ
ョン法等により塩基配列を決定する技術、ＳＢＨ（Sequ
encing By Hybridization）法、ＳＨＯＭ（Sequencing
by Hybridization with Oligonucleotide Matrix）法等
に用いられるＤＮＡチップ等に、好適に適用することが
できる。
【００３５】
【実施例】以下、本発明を実施例によりさらに具体的に
説明する。
【００３６】
【製造例】ポリカルボジイミド化スライドガラスの作製 （１）アミノ化スライドガラスの作製 蒸留水１８０ｍｌに１０％（ｖ/ｖ）３−アミノプロピ
ルトリエトキシシラン/エタノール溶液２０ｍｌを加え
攪拌した。そこに６Ｎ ＨＣｌを加え、ｐＨ３〜４に調
整した後、スライドガラスを１５枚浸漬し、７５℃にて
２時間加熱処理した。加熱終了後、スライドガラスを溶
液から引き上げ、蒸留水でよく洗い流した後、１１５℃
にて４時間加熱処理して、アミノ化スライドガラスを得
た。この操作を繰り返し、さらにアミノ化スライドガラ
スを作製した。
【００３７】（２）ポリカルボジイミド樹脂の作製 ４，４’−ジシクロヘキシルメタンジイソシアナート
（アルドリッチ社製）１１７．９ｇに、イソシアン酸シ
クロヘキシル（東京化成社製）１２．５ｇ及び３−メチ
ル−１−フェニル−２−ホスホレン−１−オキシド（ア
ルドリッチ社製）１．３ｇを加えた。次いで、窒素を流
速０．５ｍｌ／分で加えながら、１８５℃にて９６時間
攪拌した。冷却後、ポリカルボジイミド樹脂を粉末とし
て得た。得られたポリカルボジイミド樹脂の平均重合度
は１０であり、数平均分子量は約２４００であった。
【００３８】（３）ポリカルボジイミド化スライドガラ
スの作製 前記（２）で作製したカルボジイミド樹脂の１０％クロ
ロホルム溶液を作製し、これに前記（１）で作製したア
ミノ化スライドガラスを１５枚浸漬し、直ちに引き上げ
た。次いで、クロロホルム２００ｍｌによる１０分間の
洗浄を２回行った後、４０℃で２時間乾燥して、ポリカ
ルボジイミド化スライドガラスを得た。この操作を繰り
返し、さらにポリカルボジイミド化スライドガラスを作
製した。
【００３９】
【実施例１】（１）核酸の固定 配列番号１〜５に示す塩基配列を有するオリゴヌクレオ
チドを作製した。配列番号４の塩基配列は、λファージ
ＤＮＡの一部の塩基配列に相当し、後述のプローブにハ
イブリダイズすることができる。それ他の配列は、配列
番号４の塩基配列において１０番目の塩基が他の塩基に
置換されたものである。尚、配列番号５のオリゴヌクレ
オチドのみ、ポジティブコントロールとして５'末端を
ビオチンで標識した。これらのオリゴヌクレオチドを１
００ｐｍｏｌ/μｌになるように２Ｍ ＮａＣｌに溶解
し、ＤＮＡ溶液とした。スポッタ（Certesian社製）を
用い、上記製造例で得たポリカルボジイミド化スライド
ガラスの所定の位置に、前記ＤＮＡ溶液を５箇づつスポ
ットした。これを乾燥機に入れ、３７℃にて１５分間乾
燥し、さらに紫外線を照射した。次いで、３％ＢＳＡ
（ウシ血清アルブミン）を含む緩衝液Ａ（０．２Ｍ塩化
ナトリウム、０．１Ｍトリス塩酸（ｐＨ７．５）、０．
０５％トライトンＸ−１００）に浸し、３７℃にて１５
分間乾燥した。次に、このスライドガラスをＴＥ緩衝液
（１０ｍＭトリス塩酸、ｐＨ７．２/１ｍＭ ＥＤＴ
Ａ）で洗浄後、３７℃にて１５分間乾燥した。このとき
作製したDNAマイクロアレイは１８枚であった。
【００４０】［緩衝液Ａの組成］ ０．２M NaCl ０．１M トリス塩酸（ｐH７．５） ０．０５％ トライトンX-100
【００４１】［緩衝液Ｂの組成］ ０．１M NaCl ０．１M トリス塩酸（ｐH９．５）
【００４２】（２）ハイブリダイゼーション 上記の各スライドガラスのＤＮＡを固定化した部分に、
ハイブリダイゼーション溶液［３×ＳＳＣ（ＳＳＣ：
１．５Ｍ ＮａＣｌ、０．１５Ｍクエン酸ナトリウ
ム）、１０％デキストラン、１pmolビオチン化プロー
ブ］３０μｌをのせ、４２℃のウォーターバスで１晩加
熱した。前記ビオチン化プローブは、ビオチン標識プラ
イマーを用いてＰＣＲ法により、配列番号４のオリゴマ
ーと相補的な配列を有するλＤＮＡ断片を増幅すること
により調製した。得られた断片をアガロース電気泳動
し、エチジウムブロマイド染色により検出した結果、そ
の断片の長さは約１００ｂであった。
【００４３】（３）ポストハイブリダイゼーション ハイブリダイゼーションの後、スライドガラスからハイ
ブリダイゼーション溶液を軽く吸い取り、以下の条件で
ポストハイブリダイゼーション洗浄を行い、非特異的に
吸着したプローブを除去した。
【００４４】［ポストハイブリダイゼーション洗浄液及
びその条件］ （i）２ｘＳＳＣ、１％ＳＤＳ；室温、５分間、２回 （ii）０．２ｘＳＳＣ、１％ＳＤＳ；４０℃、５分間、
２回 （iii）２ｘＳＳＣ；室温、５分間、１回
【００４５】（４）ハイブリダイゼーションの検出 ３％ＢＳＡを含む緩衝液Ａ ５００ｍｌに、上記ポスト
ハイブリダイゼーション洗浄後のスライドガラスを浸漬
し、室温で３０分間ブロッキングを行った。次に、スト
レストアビジンアルカリホスファターゼコンジュゲート
溶液（３％ＢＳＡを含む緩衝液Ａで原液を２０００倍に
希釈したもの。ベーリンガーマイハイム社製）４５ｍｌ
に浸し、室温で３０分間反応させた。次に、スライドガ
ラスを緩衝液Ａ ５０ｍｌに浸し、室温で５分間放置し
た。これを２回繰り返し、ビオチンと結合しなかったコ
ンジュゲートを除去した。次にスライドガラスを緩衝液
Ｂ３０ｍｌで１回洗浄した。最後に基質溶液（緩衝液Ｂ
２０ｍｌ、ＢＣＩＰ（５−ブロモ−４−クロロ−３−
インドリルフォスフェート）溶液１８μｌ、ＮＢＴ（ニ
トロブルーテトラゾリウム）溶液３６μｌ）溶液３６μ
ｌ）に浸し、室温で３時間放置し、発色反応を行った。
【００４６】このようにして得られたスライドガラスを
スキャナ（ＧＴ８７００Ｆ、エプソン（株）社製）に１
８枚（長手方向に３列、幅方向に６列）配置し、同時に
読み取った。
【００４７】また、得られた画像を解析した結果を表１
に示す。ここでの画像解析値は、一枚のDNAマイクロア
レイ上に固定された同一オリゴヌクレオチドの５点のス
ポット間の平均値を表し、スキャンした領域中の最小値
は０で最大値は１００の数値でシグナルのコントラスト
を表している。
【００４８】また、各DNAマイクロアレイの中から任意
に４枚を選択し、DNAがスポットされている領域を拡大
した画像を図１に示す。
【００４９】
【表１】
【００５０】表１の結果から、各DNAマイクロアレイに
おいて、ハイブリダイゼーションシグナルが配列番号４
のみから特異的に得られていることから、本発明の核酸
の検出方法によれば、核酸の検出が非常に明瞭なシグナ
ルとしてあらわれることが分かる。さらに、得られたハ
イブリダイゼーションシグナル数値として表すことがで
き、定量性に優れた結果となった。
【００５１】
【発明の効果】本発明により、安価な市販スキャナで生
体分子を感度良く検出でき、さらに、その検出画像をパ
ソコン等に保存でき解析を容易にできるため、簡便かつ
コストパフォーマンスに優れた方法であることが分か
る。
【００５２】さらに、市販スキャナを利用できるため、
再現性、定量性に優れたＤＮＡチップ等としての用途に
有効な生体分子検出方法となり得る。
【００５３】
【配列表】 SEQUENCE LISTING <110> Nisshinbo Industries, Inc. <120> 生体分子の分析方法 <130> P-8770 <140> <141> 2002-01-11 <160> 5 <170> PatentIn version 3.0
【００５４】 <210> 1 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial/Unknown
【００５５】 <220> <221> misc_feature <222> ()..() <223> Description of Artificial Sequence: artificial oligonucleotide <400> 1 cctgttctga ctgccgtttc
【００５６】 <210> 2 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial/Unknown <220> <221> misc_feature <222> ()..() <223> Description of Artificial Sequence: artificial oligonucleotide <400> 2 cctgttctgt ctgccgtttc
【００５７】 <210> 3 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial/Unknown <220> <221> misc_feature <222> ()..() <223> Description of Artificial Sequence: artificial oligonucleotide <400> 3 cctgttctgg ctgccgtttc
【００５８】 <210> 4 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial/Unknown <220> <221> misc_feature <222> ()..() <223> Description of Artificial Sequence: artificial oligonucleotide <400> 4 cctgttctgc ctgccgtttc
【００５９】 <210> 5 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial/Unknown <220> <221> misc_feature <222> ()..() <223> Description of Artificial Sequence: artificial oligonucleotide <400> 5 aggctcagat tccacgaagc
【図面の簡単な説明】
【図１】 ＤＮＡ固定化スライドグラスの、ＤＮＡがス
ポットされている領域の画像の拡大図。
フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｇ０１Ｎ 33/58 Ｇ０１Ｎ 33/58 Ａ Ｚ 33/68 33/68 (72)発明者 大住 雅之 東京都中央区日本橋人形町２−31−11 日 清紡績株式会社カラーシステム事業部内 Ｆターム(参考） 2G045 DA12 DA13 DA14 DA30 DA36 DA37 FA11 FB02 FB07 4B063 QA01 QA18 QQ42 QQ53 QR08 QR14 QR32 QR42 QR56 QR82 QS03 QS34 QS39 QX02

Claims (6)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 生体分子を固相上に局在化させ、可視的
    な２次元シグナルとして前記生体分子を検出する、生体
    分子の分析方法において、 前記固相上の２次元画像を、固相に光を照射する光源
    と、固相からの反射光を受けるイメージセンサとを有
    し、固相上を２次元的に走査することによって固相上の
    ２次元画像を読み取るスキャナを用いて読取り、得られ
    た２次元画像データを解析することによって、前記シグ
    ナルを検出することを特徴とする、生体分子の分析方
    法。
  2. 【請求項２】 固相が、プラスチック、無機高分子、金
    属、天然高分子、セラミックから選ばれる材質で構成さ
    れる基板である請求項１記載の生体分子の分析方法。
  3. 【請求項３】 前記生体分子が、核酸、蛋白質、酵素、
    抗原、抗体、糖から選ばれる請求項１又は２に記載の生
    体分子の分析方法。
  4. 【請求項４】 前記生体分子を局在化させた固相が、Ｄ
    ＮＡを固定化したＤＮＡチップである請求項１〜３のい
    ずれか一項に記載の生体分子の分析方法。
  5. 【請求項５】 前記生体分子を、光源からの照射光の透
    過率、屈折率または反射率が固相と異なる標識物質、又
    は同標識物質で標識され、かつ、前記生体物質に特異的
    に結合する物質を結合させることによって可視化するこ
    とを特徴とする請求項１〜４のいずれか一項に記載の生
    体分子の分析方法。
  6. 【請求項６】 固相の生体分子が固定化されていない部
    分とスキャナの読み取り面との間にスペーサを介在させ
    て固相上の２次元画像を読みとる請求項１〜５のいずれ
    か一項に記載の生体分子の分析方法。
JP2002004611A 2002-01-11 2002-01-11 生体分子の分析方法 Pending JP2003207505A (ja)

Priority Applications (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2002004611A JP2003207505A (ja) 2002-01-11 2002-01-11 生体分子の分析方法
EP03075100A EP1327690A3 (en) 2002-01-11 2003-01-08 Solid phase method for analyzing a biomolecule
US10/339,704 US20030203379A1 (en) 2002-01-11 2003-01-09 Method for analyzing biomolecule
CA002416033A CA2416033A1 (en) 2002-01-11 2003-01-10 Method for analyzing biomolecule

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2002004611A JP2003207505A (ja) 2002-01-11 2002-01-11 生体分子の分析方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
JP2003207505A true JP2003207505A (ja) 2003-07-25

Family

ID=19191016

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2002004611A Pending JP2003207505A (ja) 2002-01-11 2002-01-11 生体分子の分析方法

Country Status (4)

Country Link
US (1) US20030203379A1 (ja)
EP (1) EP1327690A3 (ja)
JP (1) JP2003207505A (ja)
CA (1) CA2416033A1 (ja)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2005071099A1 (ja) * 2003-12-24 2005-08-04 National Institute Of Advanced Industrial Science And Technology 酵素チップ及びその利用
CN100424186C (zh) * 2006-02-28 2008-10-08 宋家武 一种高灵敏度生物传感器基因芯片及临床诊断技术
JP2016187352A (ja) * 2010-08-31 2016-11-04 コンプリート・ゲノミックス・インコーポレーテッド 高密度生化学アレイチップ

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20040072274A1 (en) * 2002-05-09 2004-04-15 Lebrun Stewart J. System and method for visualization and digital analysis of protein and other macromolecule microarrays
AU2003284679A1 (en) * 2002-11-25 2004-06-18 Nisshinbo Industries, Inc. Method of fixing biomolecule on metal support
CN117347530B (zh) * 2023-12-04 2024-02-13 天津玉健生物工程有限公司 一种维生素b2中塑化剂的检测方法

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2000270899A (ja) * 1999-03-26 2000-10-03 Academia Sinica 別々に発現している遺伝子の検出方法
JP2001103981A (ja) * 1999-08-03 2001-04-17 Nisshinbo Ind Inc 結核菌診断キット
JP2001242152A (ja) * 2000-02-28 2001-09-07 Sanko Junyaku Kk 発色画像測定セット、発色画像測定用シート容器の固定治具及び発色画像測定方法

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5571639A (en) * 1994-05-24 1996-11-05 Affymax Technologies N.V. Computer-aided engineering system for design of sequence arrays and lithographic masks
EP1130121A3 (en) * 2000-01-26 2003-04-16 Nisshinbo Industries Inc. Immobilized nucleic acid and method for detecting nucleic acid

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2000270899A (ja) * 1999-03-26 2000-10-03 Academia Sinica 別々に発現している遺伝子の検出方法
JP2001103981A (ja) * 1999-08-03 2001-04-17 Nisshinbo Ind Inc 結核菌診断キット
JP2001242152A (ja) * 2000-02-28 2001-09-07 Sanko Junyaku Kk 発色画像測定セット、発色画像測定用シート容器の固定治具及び発色画像測定方法

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2005071099A1 (ja) * 2003-12-24 2005-08-04 National Institute Of Advanced Industrial Science And Technology 酵素チップ及びその利用
CN100424186C (zh) * 2006-02-28 2008-10-08 宋家武 一种高灵敏度生物传感器基因芯片及临床诊断技术
JP2016187352A (ja) * 2010-08-31 2016-11-04 コンプリート・ゲノミックス・インコーポレーテッド 高密度生化学アレイチップ

Also Published As

Publication number Publication date
EP1327690A2 (en) 2003-07-16
CA2416033A1 (en) 2003-07-11
US20030203379A1 (en) 2003-10-30
EP1327690A3 (en) 2003-09-17

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US10927406B2 (en) Microarray system and a process for detecting target analytes using the system
Vo-Dinh et al. Biosensors and biochips: advances in biological and medical diagnostics
EP1307743B1 (en) Colloid compositions for solid phase biomolecular analytical systems
US6861251B2 (en) Translucent solid matrix assay device for microarray analysis
JP3883539B2 (ja) エポキシ基を有する放射状ポリエチレングリコール誘導体を用いたハイドロゲルバイオチップの製造方法
US20030082601A1 (en) Enzyme-amplified redox microarray detection process
JP2004526420A (ja) 直接的な吸着によるアミノ化基質への生体高分子の不動化
JP2004526420A6 (ja) 直接的な吸着によるアミノ化基質への生体高分子の不動化
WO2005108609A1 (en) Method for identification and analysis of certain molecules using the dual function of single strand nucleic acid
US20070004027A1 (en) Method for manufacturing a biosensor element
EP1054259A1 (en) Method for the identification of a target compound
US20080254999A1 (en) Linear nucleic acid and sequence therefor
US8288128B2 (en) Real-time quantification of multiple targets on a micro-array
CN102971629A (zh) 微阵列
US20080312105A1 (en) Sensor For Biomolecules and a Method of Analysis Using Said Sensor
JP2003207505A (ja) 生体分子の分析方法
JP4740876B2 (ja) 規準領域付き分析チップ、キットおよび分析方法
US20050074781A1 (en) Nucleic acid braided J-probes
EP1010764B1 (en) Hydridization detection method using biochips
US20030232379A1 (en) Methods of performing array based assays and compositions for practicing the same
KR100670799B1 (ko) 단일가닥핵산의 이중기능을 이용한 특정물질의 동정 및분석방법
US20040241668A1 (en) Ligand array assays that include a low surface tension fluid wash step and compositions for practicing the same
JP2001017166A (ja) Ｄｎａチップ、ｄｎａチップの検定キットおよびｄｎａチップの検定法
US20100167955A1 (en) Microarray including layer comprising dna molecule and method of manufacturing the same
JP2006029953A (ja) 生体関連物質検出用固相化担体及びプローブの固相化方法、並びに生体関連物質解析方法

Legal Events

Date Code Title Description
A621 Written request for application examination

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621

Effective date: 20041220

A977 Report on retrieval

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007

Effective date: 20051111

A131 Notification of reasons for refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131

Effective date: 20051122

A02 Decision of refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02

Effective date: 20060509