JP2003159060A - ヒトｍａｔｅｒ蛋白質 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 （修正有） 【課題】 受精などに関与する新規な蛋白質及びそれを
コードする核酸、および薬剤の提供。 【解決手段】 下記のヌクレオチド：(a) 特定の配列に
示すヌクレオチド配列；(b) 遺伝子コードの縮重の範囲
内で、上記(a)の配列に対応する配列；又は(c) ストリ
ンゼント条件下で上記(a)又は(b)の配列とハイブリダイ
ズし、ヒトMASTER蛋白質の機能を有する蛋白質をコード
するヌクレオチド配列；を含んでなる核酸、及びこれが
コードする蛋白質、並びにその使用。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、MATER、及び産児制限
において基本的な役割を演ずるアポトシス過程（apopto
tic process）に影響を与える医薬製剤としての使用に
関する。

【０００２】

【従来の技術】産児制御のため、「標準的ピル」は、女
性の避妊剤として最も頻繁に選択される手段である。常
用により、女性における排卵阻害をもたらす。この方法
の原理は、ピルの摂取による卵巣における内因性ステロ
イドホルモン生産の抑制、及びそれによる排卵阻害であ
る。欠点は、女性において自然なサイクルがもはや存在
しなくなる事である。更に、ピルを摂取する事に関し、
潜在的危険を有する患者において、胸部の緊張、体重の
増加、などの副作用が生ずる。

【０００３】女性が年をとるに従って妊娠が減少するこ
とを、多くの研究が確認している。これは、例えば、卵
細胞の質の低下、流産率の上昇、及び感染菌（クラミジ
ア、ゴノコッカス）への暴露の増加に帰せられる。しか
しながら、工業国においては、最初に妊娠する女性の年
齢は常に後退しているので、妊娠の改善のための可能性
を見出すことが必要である。

【０００４】このことは、女性のみならず男子にも妥当
する。妊娠障害を有する夫婦にとって、援助された生殖
技術(assisted reproduction)（例えば、体外受精（in
vitro fertilization；IVF）、配偶子イントラファロ
ピアン移行(gamete intrafallopian transfer；GIFT)、
子宮内授精(intrauterine insemination)）が利用可能
である。しかしながら、これらの方法は侵襲的であり、
そして殆どの場合、蛋白質性ホルモン（濾胞刺激ホルモ
ン)（FSH）による、女性における前濾胞成熟刺激と結び
付けられている。これは、好ましくない副作用、例えば
頭痛又腹痛、更に最悪のケースでは、いわゆる卵巣過刺
激症候群をもたらす可能性がある。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】従って、出産制御、即
ち出産の促進及び出産の抑制の両方のための新規な物質
及び薬剤を緊急に提供する事が求められている。

【０００６】

【発明の実施の形態】マウスにおいて、OP（卵細胞質特
異的蛋白質)-Ｉ遺伝子を有さない雌性マウスは不妊であ
る（Tong and Nelson, 1999, Endocrinology 140, 3720
-3726；及びTong et al., Nature Genetics, 2000, 26,
267-267）が、雄性マウスは変化しない事が示されてい
る。不妊は、二細胞段階の後の受精卵の発達のブロック
に結果であることを示すことが可能であった。マウスの
サイクルは正常であり、動物はゴナドトロピンによる刺
激の後、自律的に排卵する。しかしながら、これらのト
ランスジェニック動物の受精卵は、二細胞段階に留ま
り、受精後約３日間で更なる発達又は退化を行わない。
OP-Ｉはまた、MATER（Maternal-Antigen-That-Embryosr
equire）とも称される。

【０００７】自己免疫卵巣炎のマウスモデルにおいて、
マウスMATERに対する抗体が検出可能であった。このモ
デルは、「自己免疫早発性卵巣不全」（Autoimmuune pr
emature ovarian failure）のヒト臨床モデルと多くの
類似性を有するので、推定上のヒトMATER蛋白質が、マ
ウスMATERに類似する受精の制御における重要な役割を
演じている可能性が存在する。しかしながら、今まで、
マウスMATER蛋白質に対するヒト相同体が存在するか否
かは知られていない。

【０００８】本発明において、ヒトTATERが子宮におい
て強く発現されることを示すことが可能であった。この
場合、子宮の内膜、即ち子宮内膜、における発現が受精
サイクルに基づく明瞭な制御を示す。MASTERの発現は、
排卵直後の時期に比べて、いわゆる受精サイクルの「移
植ウインドウ」（implantation window）（排卵を開始
させる黄体形成ホルモン；LHの増加の後の約８日間）に
おいて有意に低下する（図４）。定量的測定により、３
つの異なる臨床研究グループによるヒト子宮内膜からの
mRNAが相互に比較された。

【０００９】この研究の結果が示すところによれば、対
照群（移植ウインドウが開く前）と比較したMATERのmRN
Aは、健常な女性におけるグループLH+8（移植ウインド
ウが開く時）において、大きく低下した。グループLH+8
/EMT（子宮内膜炎患者）において、３人の患者中２人の
患者において、増加した量のMATER-mRNAが検出できた。
子宮内膜炎患者の場合に観察されるように、不妊の一つ
の原因は上昇したMASTER発現に基づいている可能性があ
る。なぜなら、移植ウインドウにおいて、即ち妊娠期に
おいて、妊娠期女性の子宮内膜におけるMATER発現が低
下するからである。

【００１０】従って、ヒトMATER蛋白質は、産児制御の
ための新規な薬剤を同定するための適切な標的物質であ
る。 本発明は、下記のヌクレオチド： (a) 配列番号：１又は３に示すヌクレオチド配列； (b) 遺伝子コードの縮重の範囲内で、上記(a)の配列に
対応する配列；又は (c) ストリンゼント条件下で上記(a)又は(b)の配列とハ
イブリダイズし、ヒトMASTER蛋白質の機能を有する蛋白
質をコードするヌクレオチド配列； を含んでなる核酸を提供する。

【００１１】本発明によれば、用語「ストリンジェント
条件下でのハイブリダイゼーション」とは、Sambrook e
t al.,(Molecular Cloning, A Laboratory Manual, Col
d Spring Harbor Laboratory Press, 1989）に定義され
ている通りである。ストリンジェントなハイブリダイジ
ェーションは、例えば、１×SSD及び0.1％SDS中50℃、
好ましくは55℃、特に好ましくは62℃、そして最も好ま
しくは68℃において１時間、特に0.2×SSD及び0.1％SDS
中で55℃、好ましくは62℃、そして最も好ましくは68℃
にて１時間、洗浄した後、ハイブリダイジェーションシ
グナルが存在する場合、に存在する。これらの条件下
で、配列番号：１及び／又は３に記載の核酸、或いは遺
伝子コードの縮重の範囲内で前記の配列に対応するヌク
レオチド配列とハイブリダイズする核酸も本発明の対象
である。

【００１２】核酸は、１本鎖又は二本鎖のDNA、例えばc
DNA、或いはRNA、例えばmRNA、cRNA又はpre-mRNAを含む
ことが出来る。 配列番号：１及び３に示す核酸はヒトMATER蛋白質をコ
ードする。これらは同じ遺伝子のスプライス変異体であ
る。配列番号：３に示す配列においてエクソン４が欠け
ている。 配列番号：１又は３に示す核酸配列の蛋白質コードセク
ションを含む核酸が好ましい。配列番号：１に示す配列
の蛋白質コードセクションは、１〜3489のヌクレイチド
の範囲であり、そして配列番号：３に示す配列の蛋白質
コードセクションは、１〜3432のヌクレイチドの範囲で
ある。

【００１３】本発明の対象は又、配列番号：２又は４に
示すアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードする核
酸である。本発明の核酸は、哺乳類、例えばヒトの細
胞、又は例えばヒトの細胞から得られる、cDNAライブラ
リー若しくはゲノムライブラリー、から得ることが出来
る。これは、ハイブリダイジェーションプローブ又は増
幅プライマーとして配列番号：１又は３に示す核酸の短
セクションを用いる既知の方法に従って単離することが
出来る。

【００１４】更に、本発明は、本発明の核酸によりコー
ドされるポリペプチドに関する。これらのポリペプチド
は、ヒトMATER蛋白質の機能を有する。MATER蛋白質の機
能はTNPaseのそれであり、この活性はアポとシスと関連
する。MATER蛋白質における機能不全は、二細胞段階に
おいて見出される受精卵の発達の拘束をもたらす。細胞
はアポトシスに遭遇し、そしてもはや発達は不可能であ
る。更に、本発明の対象は、配列番号：２又は４に示す
アミノ酸配列を含んでなるポリペプチドである。本発明
のポリペプチドは、組換えポリペプチド、天然の単離さ
れたポリペプチド、又は合成ポリペプチドである事が出
来る。

【００１５】本発明のポリペプチドは種々のドメイン：
Dapin（Domain in apoptosis and interferon respons
e）ドメイン、NACHT（NAIP,CIIA,HET-及びTP-1）ドメイ
ン、及びDUF（Domain of unknown function）ドメイン
を含有する。こらのドメインはアポトシスシスと関連し
ている（Staub, E. et al., TIBS, 26(2), 83-85；Koon
in, E. V., Aravind,L., TIBS,2000, 25(5), 223-22
4)。このことは、NACHTファミリーのメンバーが、抗ア
ポトシス作用を有するNTPaseを含むことを示唆する。

【００１６】ホモダイマー又ヘテロダイマーの形成を担
当するDapinドメインは、アポトシス又は炎症過程に関
与する蛋白質の場合、既に記載されている。MATERは抗
アポトシス作用を有するが、MATER蛋白質のエラー又は
機能異常の場合、細胞はアポトシスに入りそして二細胞
段階の更なる発達はもはや不可能である。更に、MATER
14は、所謂「ロイシン−リッチ反復」を含有し（LRR, K
ajiva, A. V., 1998,J. Mol. Biol. 227, 519-527）、
これは蛋白質−蛋白質相互作用を担当する。ヒトの配列
とマウスの配列との間の相同性は僅か52％であるが、マ
ウス−MASTERポリペプチドとヒト−MASTERポリペプチド
は、Dapinドメインを除く全てのドメインの領域におい
て、高い配列相同性を示す（図１〜３及び図２を参照の
こと）。

【００１７】配列番号：２又は４の本発明のポリペプチ
ドのmRNAは、主として卵巣、こう丸及び胎盤において転
写される。本発明のポリペプチド又はその部分領域（ペ
プチド）は、抗体の製造のために使用することが出来
る。ポリクローナル抗体の製造のため、ポリペプチド又
はペプチドを例えばKLH（Keyhole Limpet Hemocyanin）
に結合させ、そして動物、例えばウサギにスプレイする
事ができる。これらは又、モノクローナル抗体の製造の
ために使用することが出来る。抗体製造のため、本発明
のポリペプチド若しくはペプチド又は本発明の幾つかの
ペプチドの混合物を使用することが出来る。この場合、
抗体の製造は、標準的方法に従って、例えば、Kohler,
G. and Milstein, C., Nature 1975, 256, 495-497；及
びNelson, P. N. et AL., Mol. Pathol.2000, 53, 111-
117に記載されている様にして行なうことが出来る。

【００１８】本発明の対象は又、本発明のポリペプチド
に対して向けられる抗体である。本発明の抗体は、本発
明のポリペプチドの検出のために使用することが出来
る。これは例えば、免疫組織化学により行なわれる。本
発明の抗体は又、他の免疫試験において、例えばELISA
（Enzyme Linked Immunosorbent Assay）又は放射免疫
試験において使用することが出来る。従って、本発明の
ポリペプチドの検出を組織または細胞抽出物中で行なう
事が出来る。

【００１９】本発明のポリペプチドの検出は又、細胞中
のmRNAの検出を介して行なう事も出来る。従って、本発
明の対象は又、本発明に従う細胞中のmRNAの存在の検出
のための試薬の製造にための、本発明のペプチドをコー
ドする核酸配列に対して相補的な核酸配列を有するプロ
ーブの使用である。プローブは、少なくとも14ヌクレオ
チドを有するDNAの短鎖である。本発明のプローブは、
例えばノーサンブロット（Northern Blot）分析におい
て使用することが出来る。この方法は、例えば、Sambro
ok, J. et al., 1989, Cold Spring Harbor Laboratory
Pressに記載されている。RNAを検出するための他の方
法はイン−シチュ（その場での）ハイブリダイゼーショ
ン、RNAse保護測定（RNAse protection assay）又はPCR
である。

【００２０】更に、本発明は、本発明の核酸配列に対し
て向けられ、そしてMATER蛋白質の発現を抑制する事が
出来るアンチセンス分子に関する。更に、本発明の対象
は、本発明の核酸の少なくとも１コピーを含むベクター
である。ベクターは原核性ベクター又は真核性ベクター
であることが出来る。ベクターの例は、pPRO（Clontec
h）、pBAD（Invitrogen）、pSG5（Strategene）、pCI
（Promega）、pIRES（Clontech）、pBAC（Clonech）、p
MET（Invitrogen）およびpBlueBac（Invitrogen）であ
る。本発明の核酸は、当業界において知られている方法
により上記のベクターに挿入する事が出来る。例えばプ
ロモーター及びエンハンサーの如き発現シグナルと関連
して、本発明の核酸は好ましくはベクター中に見出され
る。

【００２１】本発明は又、本発明の核酸配列により又は
本発明のベクターによりトランスフェクトされた細胞に
関する。細胞として、例えば、大腸菌、酵母、ピチア(P
icha)、Sf９、COS、CV-1又はBHKを使用することが出来
る。これらの細胞は本発明のポリペプチドの製造のため
又は試験系のために使用することが出来る。

【００２２】米国においては、女性の１％が「自己免疫
早発性卵巣不全」（Autoimmuune premature ovarian fa
ilure）にかかっており、この疾患の臨床症状は、エス
トロゲン欠乏症及びゴナドトロピン過剰症により惹起さ
れる、無月経の形成（40歳未満で）、不妊及び閉経症状
により特徴付けられる（Nelson and Tong, Endocrinolo
gy, 1999, 140, 3720-3726)。自己免疫−卵巣炎の類似
のマウスモデルにおいて、この疾患の原因の一つがマウ
スMATER蛋白質に対する抗体の生成であることを示す事
が出来た。従って、本発明の対象の一つは、本発明のポ
リペプチド又はそれをコードする核酸を、その原因がMA
TER蛋白質の機能不全である受精不全を治療するための
剤の製造のための標的物質として使用することである。

【００２３】特に、本発明は、(a) 本発明の核酸、(b)
本発明のポリペプチド、又は(c) 本発明の細胞、を、本
発明のポリペプチドのエフェクターの同定のために使用
することである。

【００２４】エフェクターは、本発明のポリペプチドに
阻害的効果又は活性化効果を有しそして本発明のポリペ
プチドのMATER機能に影響を与える事が出来る物質であ
る。特異的避妊のため、胚を二細胞段階に維持して更な
る発達を回避するのが有利である。本発明のポリペプチ
ドに対して向けられた抗体の投与によりMATERの内因性
機能を障害し、又は除去する事が出来る。従って、本発
明はまた、本発明のポリペプチドに対する抗体の使用に
関する。

【００２５】更に、本発明は、本発明のポリペプチドの
エフェクターを同定するための試験系に関し、この場合
本発明のポリペプチドをその完全な配列又は部分配列と
して、モジュレーターと共にインキュベートし、そして
例えばMATERと他の蛋白質又はその部分配列との相互作
用を測定することが出来る（蛋白質相互作用アッセ
イ）。蛋白質−蛋白質相互作用は、哺乳類二−ハイブリ
ド測定系（Strategenes）により測定され、この場合、M
ATERと他の蛋白質又はその部分配列との相互作用がレポ
ーター遺伝子の発現の活性化を介して測定される。

【００２６】更に、本発明は本発明のポリペプチドのエ
フェクターを同定するための試験系に関し、この場合、
本発明のポリペプチドを、その完全な配列又は部分配列
として、モジュレーターと共にインキュベートし、そし
て例えば、ハイブリダイズしたヌクレオチドを測定する
ことが出来る。部分配列として、例えば、「ロイシン−
リッチ反復」及びNACHTドメインを含んでなる領域又は
その更に短い鎖を用いることが出来る。エフェクターの
活性は、例えば、標識されたNTPを使用しそしてNDPとPi
戸の間の開裂を測定する（NTPaseアッセイ）により測定
することが出来る。

【００２７】NTPの加水分解に加えて、MATERへのNTPase
の結合を防止する物質を同定するために結合試験を行な
うことが出来る。この結合試験はまた、本発明のポリペ
プチドを含有する本発明の細胞を用いて行なう事も出来
る。被験物質のMATERへの結合に加えて、細胞内効果を
測定する事も出来る。

【００２８】本発明のポリペプチドのエフェクターは、
MATER蛋白質の機能不全に基づく疾患の治療のために用
いることが出来る。この例は、卵巣機能不全、「自己免
疫早発性卵巣不全」（Autoimmuune premature ovarian
failure）、炎症性疾患及び免疫系の疾患である。更
に、これらのエフェクターは女性の不妊の治療のために
使用することが出来る。本発明のポリペプチドのエフェ
クターは、女性における避妊のために使用することが出
来る。これらがMATERのNTPase活性をブロックすれば、
受精卵はアポトシスを受け、そしてもはや更なる発達が
不可能である。

【００２９】更に本発明は、本発明のポリペプチドのエ
フェクターを同定するための試験系に関し、この試験系
においては、本発明のポリペプチドをその全配列又は部
分配列としてモジュレーターと共にインキュベートし、
そして例えば、細胞におけるアポトシスの誘導を測定す
ることが出来る。部分配列として、例えば、「ロイシン
−リッチ反復」及びNACHTドメインを含んでなる領域又
はその更に短い鎖を用いることが出来る。エフェクター
の活性は、例えば、MATER又はMATERの断片と共にインキ
ュベートされた細胞に置けるアポトシスの誘導に対する
それらの影響により測定することが出来る（細胞死アッ
セイ）。

【００３０】本発明のポリペプチドは、二細胞段階を超
えて胚が発達するために絶対に必要な抗原を産生する事
が見出された。この抗原は、妊娠不全に罹っている女性
に直接投与する事が出来る。他の可能性は、生体外での
卵細胞培養への使用である。更なる可能性は、受精培地
又は胚培養用培地への添加である。次に、こうして調製
された卵細胞は体外受精のために使用される。従って、
本発明のポリペプチド又はセグメントに対する抗体によ
る処理は、産児調節のために女性により使用されうる。

【００３１】更に、本発明は、医薬製剤の製造方法にお
いて、 (a) 物質を本発明の試験系と接触せしめ； (b) 前記試験系のおける前記物質の作用を対照と比較し
て測定し； (c) 工程(b)において本発明のポリペプチドの活性の変
更を示す物質を同定し；そして (d) 工程(c)において同定された物質を医薬において使
用される製剤化物質と混合する； ことを特徴とする方法に関する。

【００３２】本発明のポリペプチドの活性は、該ポリペ
プチドのNTPase活性又はアポトシスを誘導するその性質
として定義される。本発明の方法により同定される物質
は、所望により、代謝安定性、本発明の試験系における
活性及び／又は生物利用性（bio-availability）に関し
て最適化されうる。この目的のため、化学において一般
的な方法を用いることが出来る。

【００３３】好ましい調製生物は、経口、経腸又は非経
口投与に適する調剤形から成ることが出来る。このよう
な調剤形は、例えば錠剤、フィルム錠剤、コート錠剤、
ピル、カプセル、粉末又はデポット形、あるいは座薬で
ある事が出来る。対応する錠剤は、例えば、活性成分
を、既知の助剤、例えばデキストロース、糖、ソルビト
ール、マンニトール、ポリビニルピロディドンの如き希
釈剤、コーンスターチ又はアルギン酸の如き崩壊剤、澱
粉又はジェラチンの如きバインダー、カルボキシポリメ
チレン、カルボキシメチルセルロース、セルロースアセ
テートフタレート又はポリビニルアセテートの如き滑剤
を混合する事により得る事が出来る。

【００３４】錠剤は又、幾つかの層から成ることも出来
る。本発明は又、MATER蛋白質に対する自己免疫抗体を
測定するための方法に関する。免疫応答は「早発性卵巣
不全」（premature ovarian failure）のよく記載され
たメカニズムであり、この疾患においては女性の卵巣が
自身の免疫系により攻撃され、殆どの場合、卵巣の炎症
がその結果である。受精不全の診断のため、女性の体試
料（組織又は液体）が研究される。自己免疫抗体の含量
が免疫試験手段、例えばELISA（Enzyme LinkedImmunoso
rbent Assay）試験、又は放射免疫試験において測定さ
れる。従って、組織又は細胞抽出物中の自己免疫抗体の
存在を検出する事ができ、卵巣の健康状態の結論を可能
にする。

【００３５】卵細胞の質がMATERの発現に依存すること
も見出された。卵細胞におけるMATERの発現は又、卵細
胞の質を決定するための診断マーカーとして使用するこ
とが出来る。更に、本発明は、その原因がMATER蛋白質
の変異だある疾患の診断方法に関する。この目的のた
め、DNAチップが使用される。従って、本発明は更に、D
NAチップに関し、この場合配列番号：１に記載されてい
る配列の完全なcDNA配列、部分配列または相補的配列に
対応する少なくとも一つのオリゴヌクレオチドが固定化
されている。従って本発明は又、例えば卵巣及び子宮内
膜における妊娠不全の診断のための、DNAチップの使用
に関する。

【００３６】DNAマイクロアレイとしても知られるDMAチ
ップは、殆どの場合ガラス又はシリコンから作られた、
最小にされた基体（vehicle）であり、その表面に既知
配列のDNA分子が規則的な格子状に、高密度に固定化さ
れている。この表面に結合したDNA分子は、相補的な、
場合によっては標識されている核酸とハイブリダイズす
る。標識は蛍光色素であってよい。

【００３７】オリゴヌクレオチドチップの場合、本発明
のDNAチップに結合する事が出来るオリゴヌクレオチド
は、遺伝子生成物（mRMA又はそれに由来するcDNA９の部
分配列を代表する。遺伝子当り１又は複数のオリゴヌク
レオチドをDANチップに結合させることが出来る。25ヌ
クレオチド長のオリゴヌクレオチドが好ましい。後者は
好ましくは、遺伝子の対応する３'−非翻訳末端から選
択される。DNAチップの製造及び使用方法は例えば、例
えば米国特許No.5,578,832、No.5,556,752、及びNo.5,5
10,270に記載されている。cDNAチップの場合、完全な遺
伝子生成物(cDNA）又はサブ断片（200-500bpの長さ）が
チップに結合される。この方法は、例えば、Eckmann,
L. et al., J. Biol. Cnem, 2000, 275(19),14084-1409
4に記載されている。

【００３８】先ず、配列番号：１又は３に従って、適当
なDNA配列が決定される。選択された遺伝子転写物とハ
イブリダイズする事が出来る配列が適当である。次に、
オリゴヌクレオチドがフォトリソグラフ工程上に基づく
化学的過程によりチップ上に生成される。この目的のた
め、適当なコンピュターアルゴリズムにより製造される
フォトリソグラフマスクが使用される。標識されたRNA
がハイブリダイゼーション容器中でチップと共にインキ
ュベートされる。次に、チップが、ハイブリダイゼーシ
ョンプロフィールを決定するスキャナーにより分析され
る。次に、転写に対する変化（例えば、変異、末端切
断）が起こったか否かが決定される。これは又、転写
物、及び従っての定量を可能にし、そしてMATER蛋白質
及び断片が例えばプロモーター中の変異に光を当てる。

【００３９】移植ウインドウ(LH+8)の間、MATERはプレ
レセプティブ（prereceptive）期（LH+4）におけるより
も少ない程度に発現される。従って、MATERの発現を測
定する事により、生体外で受精した卵母細胞の移植のた
めの最適時期が決定され得る。更に、MTERの発現の決定
は子宮内非細胞における移植ウインドウを決定するため
の診断マーカーとして使用されうる。

【００４０】

【実施例】実施例において使用される分子生物学的方
法、例えばポリメラ-ゼ連鎖反応（PCR）、cDNAの生産、
DMAのクローニング、及びDNAの配列決定は、既知の教科
書、たとえば、Molecular Cloning, A Laboratory Manu
al（Sambrook, J. et al., 1989, Cold Spring Harbor
Laboratory Press）に記載されているようにして行っ
た。

【００４１】実施例１. ヒトMATER蛋白質のコローニン
グ、発現及び精製 MATER蛋白質の２種のスプライス変異体の発現のため、
ポリメラーゼ連鎖反応によりコード領域を増幅し（反応
条件については実施例２を参照の事)(Ｎ−末端領域のた
めのプライマー：5'-ATGGAAGGAGACAAATCGCTC-3'；Ｃ−
末端領域のためのプライマー：5'-TAGTTGGCATTCTTTTGAT
G-3')、そしてバキュロウイルス発現ベクター（pBlueBa
c4.5/V5-His-TOPO（Invitrogen）又は真核発現ベクター
pcDNA3.1/V5-His-TOPO（Invitrogen）に挿入した。検出
及び精製を単純化するため、His-タグとの融合を行なっ
た。Bac-N-Blue DNAによる昆虫細胞の同時トランスフェ
クションの後、PCR法により同定された組換えウイルス
を生産した。次に、追加のトランスフェクション及びMA
TERの生産のため、ファージストックが適用され、そし
て多量に使用された。Hisタグを付した蛋白質の精製は
ニッケル親和性カラムにより行なった。

【００４２】実施例２. ヒトMATER蛋白質のmRNAの発現
についての研究 a) mRANAの発現を研究するため下記のとおりにPCRを行
なった 鋳型として、下記の組織からのcDNAを用いた：骨、輸精
管、前立腺、こう丸、胎盤、乳房、卵巣、甲状腺、皮
膚、腎臓及び肺。反応バッチは次のものを含んだ。２μ
LのcDNA、20μmのプライマー（アンチセンスプライマ
ー：5'-cacatgaacatccttctccc-3'；センスプライマー5'
-cacagtcctccagtatcaga-3'）、10 mmolのNTP、1.5 mmol
のMgCl₂及び0.5ユニットのTaq銀（Perkin Elmer）を含
む。PCRの条件は、94℃にて10分間；次に94℃にて１分
間、58度にて１分間及び72℃にて1.5分間の40サイク
ル。次に、アリコットを１×TAEランニング緩衝液中ア
ガロースゲルに適用した。これらの条件下で、mRNAの発
現が次の組織：こう丸、胎盤及び卵巣（図５を参照のこ
と）。

【００４３】b) リアルタイム定量的RT-PCR分析による
子宮内皮試料におけるMATER-RNA量の測定 ３グループ：LH+4、LH+8及びLH+8/子宮内皮炎のいずれ
かに属する患者から、子宮内皮を取り出し、そして液体
窒素中でストック凍結した。TRIZOLにより液体窒素の下
で「乳鉢」により破砕した組織から全RNAを単離した。
５μgの全RNAから出発して、先ずDNAase Ｉ−消化、そ
して次に第一鎖合成をSUPER-SCRIPT First-Strand Synt
hesis System for RT-PCT(Invitrogen)を用いて行なっ
た。相対的定量のための転写物の増幅のため、0.125μL
の第一鎖DNAを用いた。

【００４４】ヒトMATER-特異的プライマー対（前方プラ
イマー：5'-CCT CCC AAG TTG AGG GAT CTT-3'、及び後
方プライマー：5'-TAC CCC TGG TGT GCA GCA C-3'）の
使用により、次のPCR条件下で増幅を行なった：95℃に
て10分間；95℃にて15秒間、60度にて１分間（40サイク
ル）。PCRにおいて、内部対照として、ヒトサイクロフ
ィリン（huCYC）Part Number 4310857（EP Biosynthesi
s）のためのプライマーを使用した。増幅生成物の増加
についての物差しとしての蛍光の測定は、ABI Prism 77
00 Sequence Detector（PE Biosystems）により行なっ
た。増幅生成物の純度はプロッテング メルト カーブに
より試験した（図６及び図７を参照のこと）。

【００４５】実施例３. TNAase活性に影響を与える物質
を見出すための試験系 標準的NTPase測定を次のようにして行なった：30℃にて
30分間のインキュベーション．５〜30 pMolの精製され
たMATER蛋白質又はNTPaseドメインを含む断片を、反応
緩衝液[20 mmolのTris/HCl pH7.5；３ mmolのMgCl₂；１
mmolの２−メルカプトエタノール；10％グリセロー
ル；0.01％ Triton X-100；0.1 mg/mLのBSA；11μM[γ-
³²P]NTP（0.5μCi)]中でインキュベートした。0.5mLの
活性炭素（２mg/mL）の添加により反応を停止させた。
次に、このバッチを10,000×Gにて10分間遠心分離し、
そして50μLの上清をシンチレーションカウンター（Cer
enkov）においてカウントした。MATERのNTPaseに影響を
与える物質を反応緩衝液に加えた。

【００４６】実施例４. MATERへのヌクレオチドの結合
を防止する物質を見出すための試験系 反応混合物[20 mmolのTris/HCl pH7.5、３ mmolのMgC
l₂、1 mmolの2-メルカプトエタノール、10％グリセロー
ル、0.01％Triton X-100、0.1mg/mlのBSAおよび50 μM
の[γ-³²P]ATP(0.5μCi)]を、30〜80 pMolの精製したMA
TER蛋白質又はATP結合部位を含んで成るMATER蛋白質の
断片と共に、30℃にて30分間インキュベートした。氷冷
したNaCl/P₁を添加する事により反応を完了し、そして
サンプルをBA85ニトロセルロースフィルターにより微小
濾過した。次に、ニトロセルロースを２mLのNaCl/P₁に
より２回洗浄し、乾燥し、そして結合した[γ-³²P]ATP
をCerencovの方法に従ってカウントした。結合に影響を
与える物質を反応混合物に加える。

【００４７】実施例５. アポトシスを誘導する物質を見
出すための試験系 アポトシスを誘導する物質を見出すため、真核性発現ベ
クター（pCDNA3.1、実施例１を参照のこと）にクローニ
ングされたMATERまたはMATERの部分配列を真核細胞、例
えばMCF-7に、製造者の指示によりLipfectAMINE（Life
Technology,Inc.）によりトランスフェクトした。ト
ランスフェクションの24時時間後、細胞を0.5％グルタ
ルアルデヒド中で固定し、そして5-ブロモ-4-クロロ-3-
インドリルβ-Dガラクトピラノシド（X-gal）と共に４
時間インキュベートした。細胞を位相差顕微鏡により可
視化し、そしてアポトシス細胞の比率をカウントした。
アポトシス誘導に影響を与える物質を細胞培養培地（RP
MI 1640中10％熱不活性化ウシ胎児血清）に添加する。

【００４８】

【配列表】 SEQUENCE LISTING <110> SCHERING AKTIENGESELLSCHAFT <120> Humanes Mater Protein <130> 52174A <160> 4 <170> PatentIn Ver. 2.1

【００４９】 <210> 1 <211> 3926 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 1 atggaaggag acaaatcgct caccttttcc agctacgggc tgcaatggtg tctctatgag 60 ctagacaagg aagaatttca gacattcaag gaattactaa agaagaaatc ttcagaatcg 120 accacatgct ctattccaca gtttgaaatc gagaatgcca acgtggaatg tctggcactc 180 ctcttgcatg agtattatgg agcatcgctg gcctgggcta cgtccattag catctttgaa 240 aacatgaacc tgcgaaccct ctcggagaag gcacgggatg acatgaaaaa ttcaccagaa 300 gatcctgaag caacgatgac tgaccaagga ccaagcaagg aaaaagtgcc agaaaataaa 360 tatggcatga ctaagcttat cttgggggtg tctgacatct ctgactcgaa taataaacac 420 aagtatgttg gaattcattc ttcttttgca gaaatttcac aagctatgga acaagaaggt 480 gccacagcag cagagacaga agaacaagaa atttcacaag ctatggaaca agaaggtgcc 540 acagcagcag agacagaaga acaaggacat ggaggtgaca catgggacta caagagtcac 600 gtgatgacca aattcgctga ggaggaggat gtacgtcgta gttttgaaaa cactgctgct 660 gactggccgg aaatgcaaac gttggctggt gcttttgatt cagaccggtg gggcttccgg 720 cctcgcacgg tggttctgca cggaaagtca ggaattggga aatcggctct agccagaagg 780 atcgtgctgt gctgggcgca aggtggactc taccagggaa tgttctccta cgtcttcttc 840 ctccccgtta gagagatgca gcggaagaag gagagcagtg tcacagagtt catctccagg 900 gagtggccag actcccaggc tccggtgacg gagatcatgt cccgaccaga aaggctgttg 960 ttcatcattg acggtttcga tgacctgggc tctgtcctca acaatgacac aaagctctgc 1020 aaagactggg ctgagaagca gcctccgttc accctcatac gcagtctgct gaggaaggtc 1080 ctgctccctg agtccttcct gatcgtcacc gtcagagacg tgggcacaga gaagctcaag 1140 tcagaggtcg tgtctccccg ttacctgtta gttagaggaa tctccgggga acaaagaatc 1200 cacttgctcc ttgagcgcgg gattggtgag catcagaaga cacaagggtt gcgtgcgatc 1260 atgaacaacc gtgagctgct cgaccagtgc caggtgcccg ccgtgggctc tctcatctgc 1320 gtggccctgc agctgcagga cgtggtgggg gagagcgtcg cccccttcaa ccaaacgctc 1380 acaggcctgc acgccgcttt tgtgtttcat cagctcaccc ctcgaggcgt ggtccggcgc 1440 tgtctcaatc tggaggaaag agttgtcctg aagcgcttct gccgtatggc tgtggaggga 1500 gtgtggaata ggaagtcagt gtttgacggt gacgacctca tggttcaagg actcggggag 1560 tctgagctcc gtgctctgtt tcacatgaac atccttctcc cagacagcca ctgtgaggag 1620 tactacacct tcttccacct cagtctccag gacttctgtg ccgccttgta ctacgtgtta 1680 gagggcctgg aaatcgagcc agctctctgc cctctgtacg ttgagaagac aaagaggtcc 1740 atggagctta aacaggcagg cttccatatc cactcgcttt ggatgaagcg tttcttgttt 1800 ggcctcgtga gcgaagacgt aaggaggcca ctggaggtcc tgctgggctg tcccgttccc 1860 ctgggggtga agcagaagct tctgcactgg gtctctctgt tgggtcagca gcctaatgcc 1920 accaccccag gagacaccct ggacgccttc cactgtcttt tcgagactca agacaaagag 1980 tttgttcgct tggcattaaa cagcttccaa gaagtgtggc ttccgattaa ccagaacctg 2040 gacttgatag catcttcctt ctgcctccag cactgtccgt atttgcggaa aattcgggtg 2100 gatgtcaaag ggatcttccc aagagatgag tccgctgagg catgtcctgt ggtccctcta 2160 tggatgcggg ataagaccct cattgaggag cagtgggaag atttctgctc catgcttggc 2220 acccacccac acctgcggca gctggacctg ggcagcagca tcctgacaga gcgggccatg 2280 aagaccctgt gtgccaagct gaggcatccc acctgcaaga tacagaccct gatgtttaga 2340 aatgcacaga ttacccctgg tgtgcagcac ctctggagaa tcgtcatggc caaccgtaac 2400 ctaagatccc tcaacttggg aggcacccac ctgaaggaag aggatgtaag gatggcgtgt 2460 gaagccttaa aacacccaaa atgtttgttg gagtctttga ggctggattg ctgtggattg 2520 acccatgcct gttacctgaa gatctcccaa atccttacga cctcccccag cctgaaatct 2580 ctgagcctgg caggaaacaa ggtgacagac cagggagtaa tgcctctcag tgatgccttg 2640 agagtctccc agtgcgccct gcagaagctg atactggagg actgtggcat cacagccacg 2700 ggttgccaga gtctggcctc agccctcgtc agcaaccgga gcttgacaca cctgtgccta 2760 tccaacaaca gcctggggaa cgaaggtgta aatctactgt gtcgatccat gaggcttccc 2820 cactgtagtc tgcagaggct gatgctgaat cagtgccacc tggacacggc tggctgtggt 2880 tttcttgcac ttgcgcttat gggtaactca tggctgacgc acctgagcct tagcatgaac 2940 cctgtggaag acaatggcgt gaagcttctg tgcgaggtca tgagagaacc atcttgtcat 3000 ctccaggacc tggagttggt aaagtgtcat ctcaccgccg cgtgctgtga gagtctgtcc 3060 tgtgtgatct cgaggagcag acacctgaag agcctggatc tcacggacaa tgccctgggt 3120 gacggtgggg ttgctgcact gtgcgaggga ctgaagcaaa agaacagtgt tctgacgaga 3180 ctcgggttga aggcatgtgg actgacttct gattgctgtg aggcactctc cttggccctt 3240 tcctgcaacc ggcatctgac cagtctaaac ctggtgcaga ataacttcag tcccaaagga 3300 atgatgaagc tgtgttcggc ctttgcctgt cccacgtcta acttacagat aattgggctg 3360 tggaaatggc agtaccctgt gcaaataagg aagctgctgg aggaagtgca gctactcaag 3420 ccccgagtcg taattgacgg tagttggcat tcttttgatg aagatgaccg gtactggtgg 3480 aaaaactgaa gatacggaaa cctgccccac tcacacccat ctgatggagg aactttaaac 3540 gctgttttct cagagcaagc tatgcacctg ggagttcctt ctcaaagatg gagaatgatt 3600 tctgattctc acaaagccct caatggtagt gattcttctg tgttcactct acgttggtta 3660 ctggatttga aggctagaga ccttcaagtc ataggactca gtatctgtga aatgtccgtc 3720 atatctcaga gcatatagag ggaattaaat aaacacaaag catttggaaa agttgtcaag 3780 tggttttctt aactagtgga gatatggttt aggagcagag aggttgggag gacctagatc 3840 ttcaaaagaa gcccctgaat ttgggtacca caactagtgg tggttttttg ttttttgtgt 3900 ttttcttttt gttttttggt tttttt 3926

【００５０】 <210> 2 <211> 1162 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2 Met Glu Gly Asp Lys Ser Leu Thr Phe Ser Ser Tyr Gly Leu Gln Trp 1 5 10 15 Cys Leu Tyr Glu Leu Asp Lys Glu Glu Phe Gln Thr Phe Lys Glu Leu 20 25 30 Leu Lys Lys Lys Ser Ser Glu Ser Thr Thr Cys Ser Ile Pro Gln Phe 35 40 45 Glu Ile Glu Asn Ala Asn Val Glu Cys Leu Ala Leu Leu Leu His Glu 50 55 60 Tyr Tyr Gly Ala Ser Leu Ala Trp Ala Thr Ser Ile Ser Ile Phe Glu 65 70 75 80 Asn Met Asn Leu Arg Thr Leu Ser Glu Lys Ala Arg Asp Asp Met Lys 85 90 95 Asn Ser Pro Glu Asp Pro Glu Ala Thr Met Thr Asp Gln Gly Pro Ser 100 105 110 Lys Glu Lys Val Pro Glu Asn Lys Tyr Gly Met Thr Lys Leu Ile Leu 115 120 125 Gly Val Ser Asp Ile Ser Asp Ser Asn Asn Lys His Lys Tyr Val Gly 130 135 140 Ile His Ser Ser Phe Ala Glu Ile Ser Gln Ala Met Glu Gln Glu Gly 145 150 155 160 Ala Thr Ala Ala Glu Thr Glu Glu Gln Glu Ile Ser Gln Ala Met Glu 165 170 175 Gln Glu Gly Ala Thr Ala Ala Glu Thr Glu Glu Gln Gly His Gly Gly 180 185 190 Asp Thr Trp Asp Tyr Lys Ser His Val Met Thr Lys Phe Ala Glu Glu 195 200 205 Glu Asp Val Arg Arg Ser Phe Glu Asn Thr Ala Ala Asp Trp Pro Glu 210 215 220 Met Gln Thr Leu Ala Gly Ala Phe Asp Ser Asp Arg Trp Gly Phe Arg 225 230 235 240 Pro Arg Thr Val Val Leu His Gly Lys Ser Gly Ile Gly Lys Ser Ala 245 250 255 Leu Ala Arg Arg Ile Val Leu Cys Trp Ala Gln Gly Gly Leu Tyr Gln 260 265 270 Gly Met Phe Ser Tyr Val Phe Phe Leu Pro Val Arg Glu Met Gln Arg 275 280 285 Lys Lys Glu Ser Ser Val Thr Glu Phe Ile Ser Arg Glu Trp Pro Asp 290 295 300 Ser Gln Ala Pro Val Thr Glu Ile Met Ser Arg Pro Glu Arg Leu Leu 305 310 315 320 Phe Ile Ile Asp Gly Phe Asp Asp Leu Gly Ser Val Leu Asn Asn Asp 325 330 335 Thr Lys Leu Cys Lys Asp Trp Ala Glu Lys Gln Pro Pro Phe Thr Leu 340 345 350 Ile Arg Ser Leu Leu Arg Lys Val Leu Leu Pro Glu Ser Phe Leu Ile 355 360 365 Val Thr Val Arg Asp Val Gly Thr Glu Lys Leu Lys Ser Glu Val Val 370 375 380 Ser Pro Arg Tyr Leu Leu Val Arg Gly Ile Ser Gly Glu Gln Arg Ile 385 390 395 400 His Leu Leu Leu Glu Arg Gly Ile Gly Glu His Gln Lys Thr Gln Gly 405 410 415 Leu Arg Ala Ile Met Asn Asn Arg Glu Leu Leu Asp Gln Cys Gln Val 420 425 430 Pro Ala Val Gly Ser Leu Ile Cys Val Ala Leu Gln Leu Gln Asp Val 435 440 445 Val Gly Glu Ser Val Ala Pro Phe Asn Gln Thr Leu Thr Gly Leu His 450 455 460 Ala Ala Phe Val Phe His Gln Leu Thr Pro Arg Gly Val Val Arg Arg 465 470 475 480 Cys Leu Asn Leu Glu Glu Arg Val Val Leu Lys Arg Phe Cys Arg Met 485 490 495 Ala Val Glu Gly Val Trp Asn Arg Lys Ser Val Phe Asp Gly Asp Asp 500 505 510 Leu Met Val Gln Gly Leu Gly Glu Ser Glu Leu Arg Ala Leu Phe His 515 520 525 Met Asn Ile Leu Leu Pro Asp Ser His Cys Glu Glu Tyr Tyr Thr Phe 530 535 540 Phe His Leu Ser Leu Gln Asp Phe Cys Ala Ala Leu Tyr Tyr Val Leu 545 550 555 560 Glu Gly Leu Glu Ile Glu Pro Ala Leu Cys Pro Leu Tyr Val Glu Lys 565 570 575 Thr Lys Arg Ser Met Glu Leu Lys Gln Ala Gly Phe His Ile His Ser 580 585 590 Leu Trp Met Lys Arg Phe Leu Phe Gly Leu Val Ser Glu Asp Val Arg 595 600 605 Arg Pro Leu Glu Val Leu Leu Gly Cys Pro Val Pro Leu Gly Val Lys 610 615 620 Gln Lys Leu Leu His Trp Val Ser Leu Leu Gly Gln Gln Pro Asn Ala 625 630 635 640 Thr Thr Pro Gly Asp Thr Leu Asp Ala Phe His Cys Leu Phe Glu Thr 645 650 655 Gln Asp Lys Glu Phe Val Arg Leu Ala Leu Asn Ser Phe Gln Glu Val 660 665 670 Trp Leu Pro Ile Asn Gln Asn Leu Asp Leu Ile Ala Ser Ser Phe Cys 675 680 685 Leu Gln His Cys Pro Tyr Leu Arg Lys Ile Arg Val Asp Val Lys Gly 690 695 700 Ile Phe Pro Arg Asp Glu Ser Ala Glu Ala Cys Pro Val Val Pro Leu 705 710 715 720 Trp Met Arg Asp Lys Thr Leu Ile Glu Glu Gln Trp Glu Asp Phe Cys 725 730 735 Ser Met Leu Gly Thr His Pro His Leu Arg Gln Leu Asp Leu Gly Ser 740 745 750 Ser Ile Leu Thr Glu Arg Ala Met Lys Thr Leu Cys Ala Lys Leu Arg 755 760 765 His Pro Thr Cys Lys Ile Gln Thr Leu Met Phe Arg Asn Ala Gln Ile 770 775 780 Thr Pro Gly Val Gln His Leu Trp Arg Ile Val Met Ala Asn Arg Asn 785 790 795 800 Leu Arg Ser Leu Asn Leu Gly Gly Thr His Leu Lys Glu Glu Asp Val 805 810 815 Arg Met Ala Cys Glu Ala Leu Lys His Pro Lys Cys Leu Leu Glu Ser 820 825 830 Leu Arg Leu Asp Cys Cys Gly Leu Thr His Ala Cys Tyr Leu Lys Ile 835 840 845 Ser Gln Ile Leu Thr Thr Ser Pro Ser Leu Lys Ser Leu Ser Leu Ala 850 855 860 Gly Asn Lys Val Thr Asp Gln Gly Val Met Pro Leu Ser Asp Ala Leu 865 870 875 880 Arg Val Ser Gln Cys Ala Leu Gln Lys Leu Ile Leu Glu Asp Cys Gly 885 890 895 Ile Thr Ala Thr Gly Cys Gln Ser Leu Ala Ser Ala Leu Val Ser Asn 900 905 910 Arg Ser Leu Thr His Leu Cys Leu Ser Asn Asn Ser Leu Gly Asn Glu 915 920 925 Gly Val Asn Leu Leu Cys Arg Ser Met Arg Leu Pro His Cys Ser Leu 930 935 940 Gln Arg Leu Met Leu Asn Gln Cys His Leu Asp Thr Ala Gly Cys Gly 945 950 955 960 Phe Leu Ala Leu Ala Leu Met Gly Asn Ser Trp Leu Thr His Leu Ser 965 970 975 Leu Ser Met Asn Pro Val Glu Asp Asn Gly Val Lys Leu Leu Cys Glu 980 985 990 Val Met Arg Glu Pro Ser Cys His Leu Gln Asp Leu Glu Leu Val Lys 995 1000 1005 Cys His Leu Thr Ala Ala Cys Cys Glu Ser Leu Ser Cys Val Ile Ser 1010 1015 1020 Arg Ser Arg His Leu Lys Ser Leu Asp Leu Thr Asp Asn Ala Leu Gly 1025 1030 1035 1040 Asp Gly Gly Val Ala Ala Leu Cys Glu Gly Leu Lys Gln Lys Asn Ser 1045 1050 1055 Val Leu Thr Arg Leu Gly Leu Lys Ala Cys Gly Leu Thr Ser Asp Cys 1060 1065 1070 Cys Glu Ala Leu Ser Leu Ala Leu Ser Cys Asn Arg His Leu Thr Ser 1075 1080 1085 Leu Asn Leu Val Gln Asn Asn Phe Ser Pro Lys Gly Met Met Lys Leu 1090 1095 1100 Cys Ser Ala Phe Ala Cys Pro Thr Ser Asn Leu Gln Ile Ile Gly Leu 1105 1110 1115 1120 Trp Lys Trp Gln Tyr Pro Val Gln Ile Arg Lys Leu Leu Glu Glu Val 1125 1130 1135 Gln Leu Leu Lys Pro Arg Val Val Ile Asp Gly Ser Trp His Ser Phe 1140 1145 1150 Asp Glu Asp Asp Arg Tyr Trp Trp Lys Asn 1155 1160

【００５１】 <210> 3 <211> 3830 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 3 atggaaggag acaaatcgct caccttttcc agctacgggc tgcaatggtg tctctatgag 60 ctagacaagg aagaatttca gacattcaag gaattactaa agaagaaatc ttcagaatcg 120 accacatgct ctattccaca gtttgaaatc gagaatgcca acgtggaatg tctggcactc 180 ctcttgcatg agtattatgg agcatcgctg gcctgggcta cgtccattag catctttgaa 240 aacatgaacc tgcgaaccct ctcggagaag gcacgggatg acatgaaaaa ttcaccagaa 300 gatcctgaag caacgatgac tgaccaagga ccaagcaagg aaaaagtgcc agaaaataaa 360 tatggcatga ctaagcttat cttgggggtg tctgacatct ctgactcgaa taataaacac 420 aagtatgttg gaattcattc ttcttttgca gaaatttcac aagctatgga acaagaaggt 480 gccacagcag cagagacaga agaacaagga catggaggtg acacatggga ctacaagagt 540 cacgtgatga ccaaattcgc tgaggaggag gatgtacgtc gtagttttga aaacactgct 600 gctgactggc cggaaatgca aacgttggct ggtgcttttg attcagaccg gtggggcttc 660 cggcctcgca cggtggttct gcacggaaag tcaggaattg ggaaatcggc tctagccaga 720 aggatcgtgc tgtgctgggc gcaaggtgga ctctaccagg gaatgttctc ctacgtcttc 780 ttcctccccg ttagagagat gcagcggaag aaggagagca gtgtcacaga gttcatctcc 840 agggagtggc cagactccca ggctccggtg acggagatca tgtcccgacc agaaaggctg 900 ttgttcatca ttgacggttt cgatgacctg ggctctgtcc tcaacaatga cacaaagctc 960 tgcaaagact gggctgagaa gcagcctccg ttcaccctca tacgcagtct gctgaggaag 1020 gtcctgctcc ctgagtcctt cctgatcgtc accgtcagag acgtgggcac agagaagctc 1080 aagtcagagg tcgtgtctcc ccgttacctg ttagttagag gaatctccgg ggaacaaaga 1140 atccacttgc tccttgagcg cgggattggt gagcatcaga agacacaagg gttgcgtgcg 1200 atcatgaaca accgtgagct gctcgaccag tgccaggtgc ccgccgtggg ctctctcatc 1260 tgcgtggccc tgcagctgca ggacgtggtg ggggagagcg tcgccccctt caaccaaacg 1320 ctcacaggcc tgcacgccgc ttttgtgttt catcagctca cccctcgagg cgtggtccgg 1380 cgctgtctca atctggagga aagagttgtc ctgaagcgct tctgccgtat ggctgtggag 1440 ggagtgtgga ataggaagtc agtgtttgac ggtgacgacc tcatggttca aggactcggg 1500 gagtctgagc tccgtgctct gtttcacatg aacatccttc tcccagacag ccactgtgag 1560 gagtactaca ccttcttcca cctcagtctc caggacttct gtgccgcctt gtactacgtg 1620 ttagagggcc tggaaatcga gccagctctc tgccctctgt acgttgagaa gacaaagagg 1680 tccatggagc ttaaacaggc aggcttccat atccactcgc tttggatgaa gcgtttcttg 1740 tttggcctcg tgagcgaaga cgtaaggagg ccactggagg tcctgctggg ctgtcccgtt 1800 cccctggggg tgaagcagaa gcttctgcac tgggtctctc tgttgggtca gcagcctaat 1860 gccaccaccc caggagacac cctggacgcc ttccactgtc ttttcgagac tcaagacaaa 1920 gagtttgttc gcttggcatt aaacagcttc caagaagtgt ggcttccgat taaccagaac 1980 ctggacttga tagcatcttc cttctgcctc cagcactgtc cgtatttgcg gaaaattcgg 2040 gtggatgtca aagggatctt cccaagagat gagtccgctg aggcatgtcc tgtggtccct 2100 ctatggatgc gggataagac cctcattgag gagcagtggg aagatttctg ctccatgctt 2160 ggcacccacc cacacctgcg gcagctggac ctgggcagca gcatcctgac agagcgggcc 2220 atgaagaccc tgtgtgccaa gctgaggcat cccacctgca agatacagac cctgatgttt 2280 agaaatgcac agattacccc tggtgtgcag cacctctgga gaatcgtcat ggccaaccgt 2340 aacctaagat ccctcaactt gggaggcacc cacctgaagg aagaggatgt aaggatggcg 2400 tgtgaagcct taaaacaccc aaaatgtttg ttggagtctt tgaggctgga ttgctgtgga 2460 ttgacccatg cctgttacct gaagatctcc caaatcctta cgacctcccc cagcctgaaa 2520 tctctgagcc tggcaggaaa caaggtgaca gaccagggag taatgcctct cagtgatgcc 2580 ttgagagtct cccagtgcgc cctgcagaag ctgatactgg aggactgtgg catcacagcc 2640 acgggttgcc agagtctggc ctcagccctc gtcagcaacc ggagcttgac acacctgtgc 2700 ctatccaaca acagcctggg gaacgaaggt gtaaatctac tgtgtcgatc catgaggctt 2760 ccccactgta gtctgcagag gctgatgctg aatcagtgcc acctggacac ggctggctgt 2820 ggttttcttg cacttgcgct tatgggtaac tcatggctga cgcacctgag ccttagcatg 2880 aaccctgtgg aagacaatgg cgtgaagctt ctgtgcgagg tcatgagaga accatcttgt 2940 catctccagg acctggagtt ggtaaagtgt catctcaccg ccgcgtgctg tgagagtctg 3000 tcctgtgtga tctcgaggag cagacacctg aagagcctgg atctcacgga caatgccctg 3060 ggtgacggtg gggttgctgc actgtgcgag ggactgaagc aaaagaacag tgttctgacg 3120 agactcgggt tgaaggcatg tggactgact tctgattgct gtgaggcact ctccttggcc 3180 ctttcctgca accggcatct gaccagtcta aacctggtgc agaataactt cagtcccaaa 3240 ggaatgatga agctgtgttc ggcctttgcc tgtcccacgt ctaacttaca gataattggg 3300 ctgtggaaat ggcagtaccc tgtgcaaata aggaagctgc tggaggaagt gcagctactc 3360 aagccccgag tcgtaattga cggtagttgg cattcttttg atgaagatga ccggtactgg 3420 tggaaaaact gaagatacgg aaacctgccc cactcacacc catctgatgg aggaacttta 3480 aacgctgttt tctcagagca agctatgcac ctgggagttc cttctcaaag atggagaatg 3540 atttctgatt ctcacaaagc cctcaatggt agtgattctt ctgtgttcac tctacgttgg 3600 ttactggatt tgaaggctag agaccttcaa gtcataggac tcagtatctg tgaaatgtcc 3660 gtcatatctc agagcatata gagggaatta aataaacaca aagcatttgg aaaagttgtc 3720 aagtggtttt cttaactagt ggagatatgg tttaggagca gagaggttgg gaggacctag 3780 atcttcaaaa gaagcccctg aatttgggta ccacaactag tggtggtttt 3830

【００５２】 <210> 4 <211> 1143 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 4 Met Glu Gly Asp Lys Ser Leu Thr Phe Ser Ser Tyr Gly Leu Gln Trp 1 5 10 15 Cys Leu Tyr Glu Leu Asp Lys Glu Glu Phe Gln Thr Phe Lys Glu Leu 20 25 30 Leu Lys Lys Lys Ser Ser Glu Ser Thr Thr Cys Ser Ile Pro Gln Phe 35 40 45 Glu Ile Glu Asn Ala Asn Val Glu Cys Leu Ala Leu Leu Leu His Glu 50 55 60 Tyr Tyr Gly Ala Ser Leu Ala Trp Ala Thr Ser Ile Ser Ile Phe Glu 65 70 75 80 Asn Met Asn Leu Arg Thr Leu Ser Glu Lys Ala Arg Asp Asp Met Lys 85 90 95 Asn Ser Pro Glu Asp Pro Glu Ala Thr Met Thr Asp Gln Gly Pro Ser 100 105 110 Lys Glu Lys Val Pro Glu Asn Lys Tyr Gly Met Thr Lys Leu Ile Leu 115 120 125 Gly Val Ser Asp Ile Ser Asp Ser Asn Asn Lys His Lys Tyr Val Gly 130 135 140 Ile His Ser Ser Phe Ala Glu Ile Ser Gln Ala Met Glu Gln Glu Gly 145 150 155 160 Ala Thr Ala Ala Glu Thr Glu Glu Gln Gly His Gly Gly Asp Thr Trp 165 170 175 Asp Tyr Lys Ser His Val Met Thr Lys Phe Ala Glu Glu Glu Asp Val 180 185 190 Arg Arg Ser Phe Glu Asn Thr Ala Ala Asp Trp Pro Glu Met Gln Thr 195 200 205 Leu Ala Gly Ala Phe Asp Ser Asp Arg Trp Gly Phe Arg Pro Arg Thr 210 215 220 Val Val Leu His Gly Lys Ser Gly Ile Gly Lys Ser Ala Leu Ala Arg 225 230 235 240 Arg Ile Val Leu Cys Trp Ala Gln Gly Gly Leu Tyr Gln Gly Met Phe 245 250 255 Ser Tyr Val Phe Phe Leu Pro Val Arg Glu Met Gln Arg Lys Lys Glu 260 265 270 Ser Ser Val Thr Glu Phe Ile Ser Arg Glu Trp Pro Asp Ser Gln Ala 275 280 285 Pro Val Thr Glu Ile Met Ser Arg Pro Glu Arg Leu Leu Phe Ile Ile 290 295 300 Asp Gly Phe Asp Asp Leu Gly Ser Val Leu Asn Asn Asp Thr Lys Leu 305 310 315 320 Cys Lys Asp Trp Ala Glu Lys Gln Pro Pro Phe Thr Leu Ile Arg Ser 325 330 335 Leu Leu Arg Lys Val Leu Leu Pro Glu Ser Phe Leu Ile Val Thr Val 340 345 350 Arg Asp Val Gly Thr Glu Lys Leu Lys Ser Glu Val Val Ser Pro Arg 355 360 365 Tyr Leu Leu Val Arg Gly Ile Ser Gly Glu Gln Arg Ile His Leu Leu 370 375 380 Leu Glu Arg Gly Ile Gly Glu His Gln Lys Thr Gln Gly Leu Arg Ala 385 390 395 400 Ile Met Asn Asn Arg Glu Leu Leu Asp Gln Cys Gln Val Pro Ala Val 405 410 415 Gly Ser Leu Ile Cys Val Ala Leu Gln Leu Gln Asp Val Val Gly Glu 420 425 430 Ser Val Ala Pro Phe Asn Gln Thr Leu Thr Gly Leu His Ala Ala Phe 435 440 445 Val Phe His Gln Leu Thr Pro Arg Gly Val Val Arg Arg Cys Leu Asn 450 455 460 Leu Glu Glu Arg Val Val Leu Lys Arg Phe Cys Arg Met Ala Val Glu 465 470 475 480 Gly Val Trp Asn Arg Lys Ser Val Phe Asp Gly Asp Asp Leu Met Val 485 490 495 Gln Gly Leu Gly Glu Ser Glu Leu Arg Ala Leu Phe His Met Asn Ile 500 505 510 Leu Leu Pro Asp Ser His Cys Glu Glu Tyr Tyr Thr Phe Phe His Leu 515 520 525 Ser Leu Gln Asp Phe Cys Ala Ala Leu Tyr Tyr Val Leu Glu Gly Leu 530 535 540 Glu Ile Glu Pro Ala Leu Cys Pro Leu Tyr Val Glu Lys Thr Lys Arg 545 550 555 560 Ser Met Glu Leu Lys Gln Ala Gly Phe His Ile His Ser Leu Trp Met 565 570 575 Lys Arg Phe Leu Phe Gly Leu Val Ser Glu Asp Val Arg Arg Pro Leu 580 585 590 Glu Val Leu Leu Gly Cys Pro Val Pro Leu Gly Val Lys Gln Lys Leu 595 600 605 Leu His Trp Val Ser Leu Leu Gly Gln Gln Pro Asn Ala Thr Thr Pro 610 615 620 Gly Asp Thr Leu Asp Ala Phe His Cys Leu Phe Glu Thr Gln Asp Lys 625 630 635 640 Glu Phe Val Arg Leu Ala Leu Asn Ser Phe Gln Glu Val Trp Leu Pro 645 650 655 Ile Asn Gln Asn Leu Asp Leu Ile Ala Ser Ser Phe Cys Leu Gln His 660 665 670 Cys Pro Tyr Leu Arg Lys Ile Arg Val Asp Val Lys Gly Ile Phe Pro 675 680 685 Arg Asp Glu Ser Ala Glu Ala Cys Pro Val Val Pro Leu Trp Met Arg 690 695 700 Asp Lys Thr Leu Ile Glu Glu Gln Trp Glu Asp Phe Cys Ser Met Leu 705 710 715 720 Gly Thr His Pro His Leu Arg Gln Leu Asp Leu Gly Ser Ser Ile Leu 725 730 735 Thr Glu Arg Ala Met Lys Thr Leu Cys Ala Lys Leu Arg His Pro Thr 740 745 750 Cys Lys Ile Gln Thr Leu Met Phe Arg Asn Ala Gln Ile Thr Pro Gly 755 760 765 Val Gln His Leu Trp Arg Ile Val Met Ala Asn Arg Asn Leu Arg Ser 770 775 780 Leu Asn Leu Gly Gly Thr His Leu Lys Glu Glu Asp Val Arg Met Ala 785 790 795 800 Cys Glu Ala Leu Lys His Pro Lys Cys Leu Leu Glu Ser Leu Arg Leu 805 810 815 Asp Cys Cys Gly Leu Thr His Ala Cys Tyr Leu Lys Ile Ser Gln Ile 820 825 830 Leu Thr Thr Ser Pro Ser Leu Lys Ser Leu Ser Leu Ala Gly Asn Lys 835 840 845 Val Thr Asp Gln Gly Val Met Pro Leu Ser Asp Ala Leu Arg Val Ser 850 855 860 Gln Cys Ala Leu Gln Lys Leu Ile Leu Glu Asp Cys Gly Ile Thr Ala 865 870 875 880 Thr Gly Cys Gln Ser Leu Ala Ser Ala Leu Val Ser Asn Arg Ser Leu 885 890 895 Thr His Leu Cys Leu Ser Asn Asn Ser Leu Gly Asn Glu Gly Val Asn 900 905 910 Leu Leu Cys Arg Ser Met Arg Leu Pro His Cys Ser Leu Gln Arg Leu 915 920 925 Met Leu Asn Gln Cys His Leu Asp Thr Ala Gly Cys Gly Phe Leu Ala 930 935 940 Leu Ala Leu Met Gly Asn Ser Trp Leu Thr His Leu Ser Leu Ser Met 945 950 955 960 Asn Pro Val Glu Asp Asn Gly Val Lys Leu Leu Cys Glu Val Met Arg 965 970 975 Glu Pro Ser Cys His Leu Gln Asp Leu Glu Leu Val Lys Cys His Leu 980 985 990 Thr Ala Ala Cys Cys Glu Ser Leu Ser Cys Val Ile Ser Arg Ser Arg 995 1000 1005 His Leu Lys Ser Leu Asp Leu Thr Asp Asn Ala Leu Gly Asp Gly Gly 1010 1015 1020 Val Ala Ala Leu Cys Glu Gly Leu Lys Gln Lys Asn Ser Val Leu Thr 1025 1030 1035 1040 Arg Leu Gly Leu Lys Ala Cys Gly Leu Thr Ser Asp Cys Cys Glu Ala 1045 1050 1055 Leu Ser Leu Ala Leu Ser Cys Asn Arg His Leu Thr Ser Leu Asn Leu 1060 1065 1070 Val Gln Asn Asn Phe Ser Pro Lys Gly Met Met Lys Leu Cys Ser Ala 1075 1080 1085 Phe Ala Cys Pro Thr Ser Asn Leu Gln Ile Ile Gly Leu Trp Lys Trp 1090 1095 1100 Gln Tyr Pro Val Gln Ile Arg Lys Leu Leu Glu Glu Val Gln Leu Leu 1105 1110 1115 1120 Lys Pro Arg Val Val Ile Asp Gly Ser Trp His Ser Phe Asp Glu Asp 1125 1130 1135 Asp Arg Tyr Trp Trp Lys Asn 1140

【図面の簡単な説明】

【図１】図１は、マウス及びヒトのMATER蛋白質の多数
配列アラインメントを示す。図１は図２に続く。

【図２】図２は、マウス及びヒトのMATER蛋白質の多数
配列アラインメントを示す。図２は図３に続く。

【図３】図３は、マウス及びヒトのMATER蛋白質の多数
配列アラインメントを示す。

【図４】図４は、ヒトMATER蛋白質内の種々のドメイン
の位置を示す。「から」及び」まで」のカラムは、配列
番号：３によるアミノ酸の番号付与を示す。

【図５】図５は、PCRで示される、種々の組織における
ヒトMATER蛋白質のmRNA発現パターンを示す。内部対照
として、シクロオキシゲナーゼ(COX)のプライマーを使
用した。PCR増幅の後、生成物をアガロースゲル上で分
離し、そして臭化エチジュウムにより着色した。

【図６】図６は、リアルタイム定量的PCR法により示
す、種々の組織におけるMATERからのRNAの遺伝子発現を
示す。MATERが胎盤及び子宮内皮において強く発現され
ることが容易に明らかである。卵巣において、MATERは
弱く発現されるのみである。ここで、これらは閉経期患
者の卵巣である。これらの卵巣には、極少数の卵細胞の
み存在し、そしてこれらの卵細胞は低い質のものであ
り、MATERは僅かにのみ発現される。

【図７】図７は、リアルタイム定量的PCR法により示
す、子宮内皮似おけるMATERからのRNAの遺伝子発現を示
す。グループLH+4に比べてグループLH+8におけるヒトMA
TER遺伝子の非常に低下した制御が明らかである。MATER
のための特異的「プライマー」が使用された。グループ
LH+4：移植ウインドウが開く前；グループLH+8：健常女
性における移植ウインドウが開く時期；グループLH+8EM
T：子宮内皮炎疾患を有する女性における移植ウインド
ウが開く時期；LH：黄体形成ホルモン；４又は８：期間
（日）。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｃ０７Ｋ 14/47 Ｃ０７Ｋ 16/18 ４Ｈ０４５ 16/18 Ｃ１２Ｍ 1/00 Ａ Ｃ１２Ｍ 1/00 Ｃ１２Ｎ 1/15 Ｃ１２Ｎ 1/15 1/19 1/19 1/21 1/21 Ｃ１２Ｑ 1/02 5/10 1/68 Ａ Ｃ１２Ｑ 1/02 Ｃ１２Ｎ 15/00 Ａ 1/68 Ｆ 5/00 Ａ (72)発明者 モニカ レッスル ドイツ連邦共和国，デー−16548 ギーニ ケ−ノルトバーン，ピルシュガンク 14ア ー (72)発明者 ミヒャエル ペーターズ−コティッヒ ドイツ連邦共和国，デー−10437 ベルリ ン，シュタルガルデルシュトラーセ 76 (72)発明者 ゲオルク ベックマン ドイツ連邦共和国，デー−10439 ベルリ ン，シェンハウザー アレー 82 Ｆターム(参考） 4B024 AA01 AA11 BA80 CA04 DA02 DA06 EA04 GA11 4B029 AA07 BB20 CC03 FA15 4B063 QA01 QA18 QQ08 QQ63 QR07 QR32 QR56 QR62 QR77 QR82 QS25 QS34 QS36 QX01 QX02 QX07 4B065 AA26X AA90X AA93Y AB01 BA02 CA24 CA25 CA44 CA46 4C084 AA17 NA14 ZA812 ZA862 ZB212 4H045 AA10 AA11 AA20 AA30 BA10 CA40 DA75 EA20 EA50 FA74

Claims (26)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 下記のヌクレオチド： (a) 配列番号：１又は３に示すヌクレオチド配列； (b) 遺伝子コードの縮重の範囲内で、上記(a)の配列に
   対応する配列；又は (c) ストリンゼント条件下で上記(a)又は(b)の配列とハ
   イブリダイズし、ヒトMASTER蛋白質の機能を有する蛋白
   質をコードするヌクレオチド配列； を含んでなる核酸。
2. 【請求項２】 配列番号：１又は３に示すヌクレオチド
   配列の蛋白質コードセクションを含んでなる、請求項１
   に記載の核酸。
3. 【請求項３】 配列番号：１又は３に示すアミノ酸配列
   を有するポリペプチドをコードする核酸。
4. 【請求項４】 請求項１〜３のいずれか１項に記載の核
   酸によりコードされるポリペプチド。
5. 【請求項５】 配列番号：２又は４に示すアミノ酸配列
   又はその部分を含んでなるポリペプチド。
6. 【請求項６】 抗体の製造のための、請求項４又は５に
   記載のポリペプチドの使用。
7. 【請求項７】 請求項４又は５に記載のポリペプチドに
   対する抗体。
8. 【請求項８】 細胞中のmRNAの存在を決定するための試
   薬の製造のための、請求項１〜３のいずれか１項に記載
   の核酸配列に相補的な核酸配列を有するプローブの使
   用。
9. 【請求項９】 請求項１に記載の核酸に対して向けられ
   るアンチセンス分子。
10. 【請求項１０】 請求項１〜３のいずれか１項に記載の
    核酸の少なくとも１コピーを含んでなるベクター。
11. 【請求項１１】 請求項１〜３のいずれか１項又は請求
    項９に記載の核酸によりトランスフェクトされた細胞。
12. 【請求項１２】 請求項１〜３のいずれか１項に記載の
    核酸の発現のための、請求項１１に記載の細胞の使用。
13. 【請求項１３】 請求項４又は５に記載のエフェクター
    の同定のための、 (a) 請求項１〜３のいずれか１項に記載の核酸； (b) 請求項４又は５に記載のポリペプチド；又は (c) 請求項１１に記載の細胞； の使用。
14. 【請求項１４】 MATER遺伝子及び／又は蛋白質と病因
    的に関連する疾患の薬剤の製造のための標的物質として
    の、請求項１〜３のいずれか１項に記載の核酸、請求項
    ４又は５に記載のポリペプチド、請求項７に記載の抗体
    或いは請求項９に記載のアンチセンス分子の使用。
15. 【請求項１５】 請求項４又は５に記載のポリペプチド
    のエフェクターの同定のための試験系であって、本発明
    のポリペプチドをその完全な配列又は部分配列として、
    他の蛋白質のドメインと接触せしめ、そしてそれらの相
    互作用を測定する、ことを特徴とする試験系。
16. 【請求項１６】 前記エフェクターが、前記ポリペプチ
    ド又はその部分配列と前記他の蛋白質のドメインとの相
    互作用を活性化又は阻害する、請求項１５に記載の試験
    系。
17. 【請求項１７】 請求項４又は５に記載のポリペプチド
    のエフェクターの同定のための試験系であって、本発明
    のポリペプチドをその完全な配列又は部分配列として、
    モジュレーター（エフェクター）と共にインキュウベー
    トし、そしてハイブリダイズしたNTPを検出する、こと
    を特徴とする補方法。
18. 【請求項１８】 前記エフェクターが、NTPase活性を阻
    害又は活性化する、請求項１４又は１７に記載の方法。
19. 【請求項１９】 細胞内のリン酸化を測定する、請求項
    １７に記載のポリペプチドのTNPase活性のエフェクター
    を同定する試験系。
20. 【請求項２０】 医薬製剤の製造方法において、 (a) 物質を請求項１７〜１９のいずれか１項に記載の試
    験系と接触せしめ； (b) 前記試験系のおける前記物質の作用を対照と比較し
    て測定し； (c) 工程(b)において請求項４又は５に記載のポリペプ
    チドの活性の変更を示す物質を同定し；そして (d) 工程(c)において同定された物質を医薬において使
    用される製剤化物質と混合する； ことを特徴とする方法。
21. 【請求項２１】 体試料（組織、液体）中のMATERに対
    する自己免疫抗体測定する診断方法。
22. 【請求項２２】 卵細胞中のMATTER蛋白質又はMATER m
    RNAの量を測定するための診断方法。
23. 【請求項２３】 配列番号：１又は３に記載の配列に対
    して相補的な配列、又は完全なcDNA配列若しくは部分配
    列に対応する、固定化された少なくとも１個のオリゴヌ
    クレオチドを特徴とするDNAチップ。
24. 【請求項２４】 出産障害の診断のための請求項２０に
    記載のDNAチップの使用。
25. 【請求項２５】 子宮内膜炎 (endometriosis)により生
    ずる出産障害を治療するための、MASTER発現のモジュレ
    ーターの使用。
26. 【請求項２６】 細胞中の請求項４又は５に記載のポリ
    ペプチドの活性を阻害する方法であって、前記ポリペプ
    チドを、請求項１７〜１９のいずれか１項に記載の試験
    系により見出されるエフェクターと接触せしめることを
    含んでなる方法。