JP2003047472A - 新規ｇタンパク質共役型レセプタータンパク質およびそのｄｎａ - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 アゴニスト／アンタゴニストのスクリーニン
グ等に有用な新規タンパク質の提供。 【解決手段】 ヒト由来のタンパク質またはその塩、該
タンパク質をコードするＤＮＡ、該タンパク質に対する
リガンドの決定方法、リガンドと該タンパク質との結合
性を変化させる化合物のスクリーニング方法／スクリー
ニング用キット、該スクリーニングで得られる化合物ま
たはその塩など。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、ヒト由来の新規Ｇ
タンパク質共役型レセプタータンパク質またはその塩お
よびそれをコードするＤＮＡに関する。

【０００２】

【従来の技術】多くのホルモンや神経伝達物質などの生
理活性物質は、細胞膜に存在する特異的なレセプタータ
ンパク質を通じて生体の機能を調節している。これらの
レセプタータンパク質のうち多くは共役しているguanin
e nucleotide-binding protein（以下、Ｇタンパク質と
略称する）の活性化を通じて細胞内のシグナル伝達を行
ない、また、７個の膜貫通領域を有する共通した構造を
もっていることから、Ｇタンパク質共役型レセプタータ
ンパク質あるいは７回膜貫通型レセプタータンパク質
（７ＴＭＲ）と総称される。Ｇタンパク質共役型レセプ
タータンパク質は生体の細胞や臓器の各機能細胞表面に
存在し、それら細胞や臓器の機能を調節する分子、例え
ば、ホルモン、神経伝達物質および生理活性物質等の標
的として生理的に重要な役割を担っている。レセプター
は生理活性物質との結合を介してシグナルを細胞内に伝
達し、このシグナルにより細胞の賦活や抑制といった種
々の反応が惹起される。各種生体の細胞や臓器の内の複
雑な機能を調節する物質と、その特異的レセプタータン
パク質、特にはＧタンパク質共役型レセプタータンパク
質との関係を明らかにすることは、各種生体の臓器や細
胞の機能を解明し、それら機能と密接に関連した医薬品
開発に非常に重要な手段を提供することとなる。

【０００３】例えば、生体の種々の器官では、多くのホ
ルモン、ホルモン様物質、神経伝達物質あるいは生理活
性物質による調節のもとで生理的な機能の調節が行なわ
れている。特に、生理活性物質は生体内の様々な部位に
存在し、それぞれに対応するレセプタータンパク質を通
してその生理機能の調節を行っている。生体内には未知
のホルモンや神経伝達物質その他の生理活性物質も多
く、それらのレセプタータンパク質の構造に関しても、
これまで報告されていないものが多い。さらに、既知の
レセプタータンパク質においてもサブタイプが存在する
かどうかについても分かっていないものが多い。生体に
おける複雑な機能を調節する物質と、その特異的レセプ
タータンパク質との関係を明らかにすることは、レセプ
タータンパク質に対するアゴニスト、アンタゴニストを
含む医薬品開発に非常に重要な手段である。しかし従来
は、レセプタータンパク質に対するアゴニスト、アンタ
ゴニストを効率よくスクリーニングし、医薬品を開発す
るためには、生体内で発現しているレセプタータンパク
質の遺伝子の機能を解明し、それらを適当な発現系で発
現させることが必要であった。また、近年、生体内で発
現している遺伝子を解析する手段として、ｃＤＮＡの配
列をランダムに解析する研究が活発に行なわれており、
このようにして得られたｃＤＮＡの断片配列がExpresse
d Sequence Tag（ＥＳＴ）としてデータベースに登録さ
れ、公開されている。しかし、多くのＥＳＴは配列情報
のみを提供するものであり、配列情報だけからその機能
を推定することは困難である。

【０００４】

【発明が解決しようとする課題】従来、Ｇタンパク質共
役型レセプターとそのリガンドである生理活性物質との
結合を阻害する物質や、結合して生理活性物質と同様な
シグナル伝達を引き起こす物質は、これらレセプターの
特異的なアンタゴニストまたはアゴニストとして、生体
機能を調節する医薬品として活用されてきた。従って、
生体内での生理発現において重要であるばかりでなく、
医薬品開発の標的ともなりうるＧタンパク質共役型レセ
プタータンパク質を新規に見出し、その遺伝子（例えば
ゲノムＤＮＡ）をクローニングすることは、新規Ｇタン
パク質共役型レセプタータンパク質の特異的リガンド
や、アゴニスト、アンタゴニストを見出す際に、非常に
重要な手段となる。しかし、Ｇタンパク質共役型レセプ
ターはその全てが見出されているわけではなく、現時点
でもなお、未知のＧタンパク質共役型レセプター、また
そのリガンドが同定されていない、いわゆるオーファン
レセプターが多数存在しており、新たなＧタンパク質共
役型レセプターの探索および機能解明が切望されてい
る。Ｇタンパク質共役型レセプターは、そのシグナル伝
達作用を指標とする、新たなリガンド（生理活性物質）
の探索、また、該レセプターに対するアゴニストまたは
アンタゴニストの探索に有用である。一方、生理的なリ
ガンドが見出されなくても、該レセプターの不活化実験
（ノックアウト動物）から該レセプターの生理作用を解
析することにより、該レセプターに対するアゴニストま
たはアンタゴニストを作製することも可能である。これ
ら該レセプターに対するリガンド、アゴニストまたはア
ンタゴニストなどは、Ｇタンパク質共役型レセプターの
機能不全に関連する疾患の予防／治療薬や診断薬として
活用することが期待できる。さらにまた、Ｇタンパク質
共役型レセプターの遺伝子変異に基づく、生体での該レ
セプターの機能の低下または昂進が、何らかの疾患の原
因となっている場合も多い。この場合には、該レセプタ
ーに対するアンタゴニストやアゴニストの投与だけでな
く、該レセプター遺伝子の生体内（またはある特定の臓
器）への導入や、該レセプター遺伝子に対するアンチセ
ンス核酸の導入による、遺伝子治療に応用することもで
きる。この場合には該レセプターの塩基配列は遺伝子上
の欠失や変異の有無を調べるために必要不可欠な情報で
あり、該レセプターの遺伝子は、該レセプターの機能不
全に関与する疾患の予防／治療薬や診断薬に応用するこ
ともできる。本発明は、上記のように有用な新規Ｇタン
パク質共役型レセプタータンパク質を提供するものであ
る。すなわち、新規Ｇタンパク質共役型レセプタータン
パク質もしくはその部分ペプチドまたはその塩、該Ｇタ
ンパク質共役型レセプタータンパク質またはその部分ペ
プチドをコードするポリヌクレオチド（ＤＮＡ、ＲＮＡ
およびそれらの誘導体）を含有するポリヌクレオチド
（ＤＮＡ、ＲＮＡおよびそれらの誘導体）、該ポリヌク
レオチドを含有する組換えベクター、該組換えベクター
を保持する形質転換体、該Ｇタンパク質共役型レセプタ
ータンパク質またはその塩の製造法、該Ｇタンパク質共
役型レセプタータンパク質もしくはその部分ペプチドま
たはその塩に対する抗体、該Ｇタンパク質共役型レセプ
タータンパク質の発現量を変化させる化合物、該Ｇタン
パク質共役型レセプターに対するリガンドの決定方法、
リガンドと該Ｇタンパク質共役型レセプタータンパク質
との結合性を変化させる化合物（アンタゴニスト、アゴ
ニスト）またはその塩のスクリーニング方法、該スクリ
ーニング用キット、該スクリーニング方法もしくはスク
リーニングキットを用いて得られうるリガンドと該Ｇタ
ンパク質共役型レセプタータンパク質との結合性を変化
させる化合物（アンタゴニスト、アゴニスト）またはそ
の塩、およびリガンドと該Ｇタンパク質共役型レセプタ
ータンパク質との結合性を変化させる化合物（アンタゴ
ニスト、アゴニスト）もしくは該Ｇタンパク質共役型レ
セプタータンパク質の発現量を変化させる化合物または
その塩を含有する医薬などを提供する。

【０００５】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、鋭意研究
を重ねた結果、ヒト由来の新規なＧタンパク質共役型レ
セプタータンパク質をコードするＤＮＡの全塩基配列を
解析することに成功した。そして、この塩基配列をアミ
ノ酸配列に翻訳したところ、第１〜第７膜貫通領域が図
１に示される疎水性プロット上で確認され、このＤＮＡ
にコードされるタンパク質が７回膜貫通型のＧタンパク
質共役型レセプタータンパク質であることを確認した。
このアミノ酸配列を含有する新規Ｇタンパク質共役型レ
セプタータンパク質をＴＧＲ３７と命名した。本発明の
レセプタータンパク質は、α−ラトロトキシンレセプタ
ー（Journal of Biological Chemistry 274 (9): 5491-
8(1999)）にアミノ酸配列レベルで、24％程度の相同性
が認められる新規７回膜貫通型受容体タンパク質であ
る。本発明者らは、これらの知見に基づいて、さらに研
究を重ねた結果、本発明を完成するに至った。

【０００６】すなわち、本発明は、（１）配列番号：１
で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一の
アミノ酸配列を含有することを特徴とするＧタンパク質
共役型レセプタータンパク質またはその塩、（２）上記
（１）記載のＧタンパク質共役型レセプタータンパク質
の部分ペプチドまたはその塩、（３）上記（１）記載の
Ｇタンパク質共役型レセプタータンパク質をコードする
ポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、（４）
ＤＮＡである上記（３）記載のポリヌクレオチド、
（５）配列番号：２で表される塩基配列を有する上記
（３）記載のポリヌクレオチド、（６）上記（３）記載
のポリヌクレオチドを含有する組換えベクター、（７）
上記（６）記載の組換えベクターで形質転換させた形質
転換体、（８）上記（７）記載の形質転換体を培養し、
上記（１）記載のＧタンパク質共役型レセプタータンパ
ク質を生成せしめることを特徴とする上記（１）記載の
Ｇタンパク質共役型レセプタータンパク質またはその塩
の製造法、（９）上記（１）記載のＧタンパク質共役型
レセプタータンパク質もしくは上記（２）記載の部分ペ
プチドまたはその塩に対する抗体、（１０）上記（１）
記載のＧタンパク質共役型レセプタータンパク質のシグ
ナル伝達を不活性化する中和抗体である上記（９）記載
の抗体、（１１）上記（９）記載の抗体を含有してなる
診断薬、（１２）上記（１）記載のＧタンパク質共役型
レセプタータンパク質もしくは上記（２）記載の部分ペ
プチドまたはその塩を用いることにより得られうる上記
（１）記載のＧタンパク質共役型レセプタータンパク質
またはその塩に対するリガンド、（１３）上記（１２）
記載のＧタンパク質共役型レセプターのリガンドを含有
してなる医薬、（１４）上記（１）記載のＧタンパク質
共役型レセプタータンパク質もしくは上記（２）記載の
部分ペプチドまたはその塩を用いることを特徴とする上
記（１）記載のＧタンパク質共役型レセプタータンパク
質またはその塩に対するリガンドの決定方法、（１５）
上記（１）記載のＧタンパク質共役型レセプタータンパ
ク質もしくは上記（２）記載の部分ペプチドまたはその
塩を用いることを特徴とするリガンドと上記（１）記載
のＧタンパク質共役型レセプタータンパク質またはその
塩との結合性を変化させる化合物またはその塩のスクリ
ーニング方法、（１６）上記（１）記載のＧタンパク質
共役型レセプタータンパク質もしくは上記（２）記載の
部分ペプチドまたはその塩を含有することを特徴とする
リガンドと上記（１）記載のＧタンパク質共役型レセプ
タータンパク質またはその塩との結合性を変化させる化
合物またはその塩のスクリーニング用キット、（１７）
上記（１５）記載のスクリーニング方法または上記（１
６）記載のスクリーニング用キットを用いて得られうる
リガンドと上記（１）記載のＧタンパク質共役型レセプ
タータンパク質またはその塩との結合性を変化させる化
合物またはその塩、（１８）上記（１５）記載のスクリ
ーニング方法または上記（１６）記載のスクリーニング
用キットを用いて得られうるリガンドと上記（１）記載
のＧタンパク質共役型レセプタータンパク質またはその
塩との結合性を変化させる化合物またはその塩を含有し
てなる医薬、（１９）上記（３）記載のポリヌクレオチ
ドとハイストリンジェントな条件下でハイブリダイズす
るポリヌクレオチド、（２０）上記（３）記載のポリヌ
クレオチドと相補的な塩基配列またはその一部を含有し
てなるポリヌクレオチド、（２１）上記（３）記載のポ
リヌクレオチドまたはその一部を用いることを特徴とす
る上記（１）記載のＧタンパク質共役型レセプタータン
パク質のｍＲＮＡの定量方法、（２２）上記（９）記載
の抗体を用いることを特徴とする上記（１）記載のＧタ
ンパク質共役型レセプタータンパク質の定量方法、（２
３）上記（２１）または（２２）記載の定量方法を用い
ることを特徴とする上記（１）記載のＧタンパク質共役
型レセプターの機能が関連する疾患の診断方法、（２
４）上記（２１）記載の定量方法を用いることを特徴と
する上記（１）記載のＧタンパク質共役型レセプタータ
ンパク質の発現量を変化させる化合物またはその塩のス
クリーニング方法、（２５）上記（２２）記載の定量方
法を用いることを特徴とする細胞膜における上記（１）
記載のＧタンパク質共役型レセプタータンパク質量を変
化させる化合物またはその塩のスクリーニング方法、
（２６）上記（２４）記載のスクリーニング方法を用い
て得られうる上記（１）記載のＧタンパク質共役型レセ
プタータンパク質の発現量を変化させる化合物またはそ
の塩、（２７）上記（２５）記載のスクリーニング方法
を用いて得られうる細胞膜における上記（１）記載のＧ
タンパク質共役型レセプタータンパク質量を変化させる
化合物またはその塩、（２８）上記（２４）記載のスク
リーニング方法を用いて得られうる上記（１）記載のＧ
タンパク質共役型レセプタータンパク質の発現量を変化
させる化合物またはその塩を含有してなる医薬、（２
９）上記（２５）記載のスクリーニング方法を用いて得
られうる細胞膜における上記（１）記載のＧタンパク質
共役型レセプタータンパク質量を変化させる化合物また
はその塩を含有してなる医薬、（３０）中枢疾患、炎症
性疾患、循環器疾患、癌、代謝性疾患、免疫系疾患また
は消化器系疾患の予防・治療剤である上記（１８）、
（２８）または（２９）記載の医薬、（３１）哺乳動物
に対して、上記（１５）記載のスクリーニング方法また
は上記（１６）記載のスクリーニング用キットを用いて
得られうるリガンドと上記（１）記載のＧタンパク質共
役型レセプタータンパク質またはその塩との結合性を変
化させる化合物またはその塩の有効量を投与することを
特徴とする中枢疾患、炎症性疾患、循環器疾患、癌、代
謝性疾患、免疫系疾患または消化器系疾患の予防・治療
方法、（３２）哺乳動物に対して、上記（２４）記載の
スクリーニング方法を用いて得られうる上記（１）記載
のＧタンパク質共役型レセプタータンパク質の発現量を
変化させる化合物またはその塩の有効量を投与すること
を特徴とする中枢疾患、炎症性疾患、循環器疾患、癌、
代謝性疾患、免疫系疾患または消化器系疾患の予防・治
療方法、（３３）哺乳動物に対して、上記（２５）記載
のスクリーニング方法を用いて得られうる細胞膜におけ
る上記（１）記載のＧタンパク質共役型レセプタータン
パク質量を変化させる化合物またはその塩の有効量を投
与することを特徴とする中枢疾患、炎症性疾患、循環器
疾患、癌、代謝性疾患、免疫系疾患または消化器系疾患
の予防・治療方法、（３４）中枢疾患、炎症性疾患、循
環器疾患、癌、代謝性疾患、免疫系疾患または消化器系
疾患の予防・治療剤を製造するための上記（１５）記載
のスクリーニング方法または上記（１６）記載のスクリ
ーニング用キットを用いて得られうるリガンドと上記
（１）記載のＧタンパク質共役型レセプタータンパク質
またはその塩との結合性を変化させる化合物またはその
塩の使用、（３５）中枢疾患、炎症性疾患、循環器疾
患、癌、代謝性疾患、免疫系疾患または消化器系疾患の
予防・治療剤を製造するための上記（２４）記載のスク
リーニング方法を用いて得られうる上記（１）記載のＧ
タンパク質共役型レセプタータンパク質の発現量を変化
させる化合物またはその塩の使用、（３６）中枢疾患、
炎症性疾患、循環器疾患、癌、代謝性疾患、免疫系疾患
または消化器系疾患の予防・治療剤を製造するための上
記（２５）記載のスクリーニング方法を用いて得られう
る細胞膜における上記（１）記載のＧタンパク質共役型
レセプタータンパク質を変化させる化合物またはその塩
の使用等に関する。

【０００７】さらには、（３７）タンパク質が、配列
番号：１で表わされるアミノ酸配列、配列番号：１で表
わされるアミノ酸配列中の１または２個以上（好ましく
は、１〜３０個程度、より好ましくは１〜１０個程度、
さらに好ましくは数個（１〜５個））のアミノ酸が欠失
したアミノ酸配列、配列番号：１で表わされるアミノ
酸配列に１または２個以上（好ましくは、１〜３０個程
度、より好ましくは１〜１０個程度、さらに好ましくは
数個（１〜５個））のアミノ酸が付加したアミノ酸配
列、配列番号：１で表わされるアミノ酸配列中の１ま
たは２個以上（好ましくは１〜３０個程度、より好まし
くは１〜１０個程度、さらに好ましくは数個（１〜５
個））のアミノ酸が他のアミノ酸で置換されたアミノ酸
配列、またはそれらを組み合わせたアミノ酸配列を含
有するタンパク質である上記（１）記載のＧタンパク質
共役型レセプタータンパク質またはその塩、（３８）上
記（１）記載のＧタンパク質共役型レセプタータンパク
質もしくはその塩または上記（２）記載の部分ペプチド
もしくはその塩と、試験化合物とを接触させることを特
徴とする上記（１４）記載のリガンドの決定方法、（３
９）リガンドが、例えば、アンギオテンシン、ボンベシ
ン、カナビノイド、コレシストキニン、グルタミン、セ
ロトニン、メラトニン、ニューロペプチドＹ、オピオイ
ド、プリン、バソプレッシン、オキシトシン、ＰＡＣＡ
Ｐ（例、ＰＡＣＡＰ２７、ＰＡＣＡＰ３８）、セクレチ
ン、グルカゴン、カルシトニン、アドレノメジュリン、
ソマトスタチン、ＧＨＲＨ、ＣＲＦ、ＡＣＴＨ、ＧＲ
Ｐ、ＰＴＨ、ＶＩＰ（バソアクティブ・インテスティナ
ル・ポリペプチド）、ソマトスタチン、ドーパミン、モ
チリン、アミリン、ブラジキニン、ＣＧＲＰ（カルシト
ニンジーンリレーティッドペプチド）、ロイコトリエ
ン、パンクレアスタチン、プロスタグランジン、トロン
ボキサン、アデノシン、アドレナリン、ケモカインスー
パーファミリー（例、ＩＬ−８、ＧＲＯα、ＧＲＯβ、
ＧＲＯγ、ＮＡＰ−２、ＥＮＡ−７８、ＧＣＰ−２、Ｐ
Ｆ４、ＩＰ１０、Ｍｉｇ、ＰＢＳＦ／ＳＤＦ−１などの
ＣＸＣケモカインサブファミリー；ＭＣＡＦ／ＭＣＰ−
１、ＭＣＰ−２、ＭＣＰ−３、ＭＣＰ−４、ｅｏｔａｘ
ｉｎ、ＲＡＮＴＥＳ、ＭＩＰ−１α、ＭＩＰ−１β、Ｈ
ＣＣ−１、ＭＩＰ−３α／ＬＡＲＣ、ＭＩＰ−３α／Ｅ
ＬＣ、Ｉ−３０９、ＴＡＲＣ、ＭＩＰＦ−１、ＭＩＰＦ
−２／ｅｏｔａｘｉｎ−２、ＭＤＣ、ＤＣ−ＣＫ１／Ｐ
ＡＲＣ、ＳＬＣなどのＣＣケモカインサブファミリー；
lymphotactinなどのＣケモカインサブファミリー；frac
talkineなどのＣＸ３Ｃケモカインサブファミリー
等）、エンドセリン、エンテロガストリン、ヒスタミ
ン、ニューロテンシン、ＴＲＨ、パンクレアティックポ
リペプタイド、ガラニン、リゾホスファチジン酸（ＬＰ
Ａ）またはスフィンゴシン１−リン酸である上記（３
８）記載のリガンドの決定方法、

【０００８】（４０）（ｉ）上記（１）記載のＧタンパ
ク質共役型レセプタータンパク質もしくはその塩または
上記（２）記載の部分ペプチドもしくはその塩と、リガ
ンドとを接触させた場合と、（ｉｉ）上記（１）記載の
Ｇタンパク質共役型レセプタータンパク質もしくはその
塩または上記（２）記載の部分ペプチドもしくはその塩
と、リガンドおよび試験化合物とを接触させた場合との
比較を行なうことを特徴とする上記（１５）記載のスク
リーニング方法、（４１）（ｉ）標識したリガンドを上
記（１）記載のＧタンパク質共役型レセプタータンパク
質もしくはその塩または上記（２）記載の部分ペプチド
もしくはその塩に接触させた場合と、（ｉｉ）標識した
リガンドおよび試験化合物を上記（１）記載のＧタンパ
ク質共役型レセプタータンパク質もしくはその塩または
上記（２）記載の部分ペプチドもしくはその塩に接触さ
せた場合における、標識したリガンドの上記（１）記載
のＧタンパク質共役型レセプタータンパク質もしくはそ
の塩または上記（２）記載の部分ペプチドもしくはその
塩に対する結合量を測定し、比較することを特徴とする
リガンドと上記（１）記載のＧタンパク質共役型レセプ
タータンパク質またはその塩との結合性を変化させる化
合物またはその塩のスクリーニング方法、（４２）
（ｉ）標識したリガンドを上記（１）記載のＧタンパク
質共役型レセプタータンパク質を含有する細胞に接触さ
せた場合と、（ｉｉ）標識したリガンドおよび試験化合
物を上記（１）記載のＧタンパク質共役型レセプタータ
ンパク質を含有する細胞に接触させた場合における、標
識したリガンドの該細胞に対する結合量を測定し、比較
することを特徴とするリガンドと上記（１）記載のＧタ
ンパク質共役型レセプタータンパク質またはその塩との
結合性を変化させる化合物またはその塩のスクリーニン
グ方法、（４３）（ｉ）標識したリガンドを上記（１）
記載のＧタンパク質共役型レセプタータンパク質を含有
する細胞の膜画分に接触させた場合と、（ｉｉ）標識し
たリガンドおよび試験化合物を上記（１）記載のＧタン
パク質共役型レセプタータンパク質を含有する細胞の膜
画分に接触させた場合における、標識したリガンドの該
細胞の膜画分に対する結合量を測定し、比較することを
特徴とするリガンドと上記（１）記載のＧタンパク質共
役型レセプタータンパク質またはその塩との結合性を変
化させる化合物またはその塩のスクリーニング方法、

【０００９】（４４）（ｉ）標識したリガンドを上記
（７）記載の形質転換体を培養することによって該形質
転換体の細胞膜に発現したＧタンパク質共役型レセプタ
ータンパク質に接触させた場合と、（ｉｉ）標識したリ
ガンドおよび試験化合物を上記（７）記載の形質転換体
を培養することによって該形質転換体の細胞膜に発現し
たＧタンパク質共役型レセプタータンパク質に接触させ
た場合における、標識したリガンドの該Ｇタンパク質共
役型レセプタータンパク質に対する結合量を測定し、比
較することを特徴とするリガンドと上記（１）記載のＧ
タンパク質共役型レセプタータンパク質またはその塩と
の結合性を変化させる化合物またはその塩のスクリーニ
ング方法、（４５）（ｉ）上記（１）記載のＧタンパク
質共役型レセプタータンパク質またはその塩を活性化す
る化合物を上記（１）記載のＧタンパク質共役型レセプ
タータンパク質を含有する細胞に接触させた場合と、
（ｉｉ）上記（１）記載のＧタンパク質共役型レセプタ
ータンパク質またはその塩を活性化する化合物および試
験化合物を上記（１）記載のＧタンパク質共役型レセプ
タータンパク質を含有する細胞に接触させた場合におけ
る、Ｇタンパク質共役型レセプタータンパク質を介した
細胞刺激活性を測定し、比較することを特徴とするリガ
ンドと上記（１）記載のＧタンパク質共役型レセプター
タンパク質またはその塩との結合性を変化させる化合物
またはその塩のスクリーニング方法、（４６）上記
（１）記載のＧタンパク質共役型レセプタータンパク質
またはその塩を活性化する化合物を上記（７）記載の形
質転換体を培養することによって該形質転換体の細胞膜
に発現したＧタンパク質共役型レセプタータンパク質に
接触させた場合と、上記（１）記載のＧタンパク質共役
型レセプタータンパク質またはその塩を活性化する化合
物および試験化合物を上記（７）記載の形質転換体を培
養することによって該形質転換体の細胞膜に発現したＧ
タンパク質共役型レセプタータンパク質に接触させた場
合における、Ｇタンパク質共役型レセプタータンパク質
を介する細胞刺激活性を測定し、比較することを特徴と
するリガンドと上記（１）記載のＧタンパク質共役型レ
セプタータンパク質またはその塩との結合性を変化させ
る化合物またはその塩のスクリーニング方法、

【００１０】（４７）上記（１）記載のＧタンパク質共
役型レセプタータンパク質を活性化する化合物が、アン
ギオテンシン、ボンベシン、カナビノイド、コレシスト
キニン、グルタミン、セロトニン、メラトニン、ニュー
ロペプチドＹ、オピオイド、プリン、バソプレッシン、
オキシトシン、ＰＡＣＡＰ（例、ＰＡＣＡＰ２７、ＰＡ
ＣＡＰ３８）、セクレチン、グルカゴン、カルシトニ
ン、アドレノメジュリン、ソマトスタチン、ＧＨＲＨ、
ＣＲＦ、ＡＣＴＨ、ＧＲＰ、ＰＴＨ、ＶＩＰ（バソアク
ティブ・インテスティナル・ポリペプチド）、ソマトス
タチン、ドーパミン、モチリン、アミリン、ブラジキニ
ン、ＣＧＲＰ（カルシトニンジーンリレーティッドペプ
チド）、ロイコトリエン、パンクレアスタチン、プロス
タグランジン、トロンボキサン、アデノシン、アドレナ
リン、ケモカインスーパーファミリー（例、ＩＬ−８、
ＧＲＯα、ＧＲＯβ、ＧＲＯγ、ＮＡＰ−２、ＥＮＡ−
７８、ＧＣＰ−２、ＰＦ４、ＩＰ１０、Ｍｉｇ、ＰＢＳ
Ｆ／ＳＤＦ−１などのＣＸＣケモカインサブファミリ
ー；ＭＣＡＦ／ＭＣＰ−１、ＭＣＰ−２、ＭＣＰ−３、
ＭＣＰ−４、ｅｏｔａｘｉｎ、ＲＡＮＴＥＳ、ＭＩＰ−
１α、ＭＩＰ−１β、ＨＣＣ−１、ＭＩＰ−３α／ＬＡ
ＲＣ、ＭＩＰ−３β／ＥＬＣ、Ｉ−３０９、ＴＡＲＣ、
ＭＩＰＦ−１、ＭＩＰＦ−２／ｅｏｔａｘｉｎ−２、Ｍ
ＤＣ、ＤＣ−ＣＫ１／ＰＡＲＣ、ＳＬＣなどのＣＣケモ
カインサブファミリー；lymphotactinなどのＣケモカイ
ンサブファミリー；fractalkineなどのＣＸ３Ｃケモカ
インサブファミリー等）、エンドセリン、エンテロガス
トリン、ヒスタミン、ニューロテンシン、ＴＲＨ、パン
クレアティックポリペプタイド、ガラニン、リゾホスフ
ァチジン酸（ＬＰＡ）またはスフィンゴシン１−リン酸
である上記（４６）または（４７）記載のスクリーニン
グ方法、（４８）上記（４０）〜（４７）記載のスクリ
ーニング方法で得られうるリガンドと上記（１）記載の
Ｇタンパク質共役型レセプタータンパク質またはその塩
との結合性を変化させる化合物またはその塩、（４９）
上記（４０）〜上記（４７）記載のスクリーニング方法
で得られうるリガンドと上記（１）記載のＧタンパク質
共役型レセプタータンパク質またはその塩との結合性を
変化させる化合物またはその塩を含有することを特徴と
する医薬、

【００１１】（５０）上記（１）記載のＧタンパク質共
役型レセプタータンパク質を含有する細胞を含有するこ
とを特徴とする上記（１６）記載のスクリーニング用キ
ット、（５１）上記（１）記載のＧタンパク質共役型レ
セプタータンパク質を含有する細胞の膜画分を含有する
ことを特徴とする上記（１６）記載のスクリーニング用
キット、（５２）上記（７）記載の形質転換体を培養す
ることによって該形質転換体の細胞膜に発現したＧタン
パク質共役型レセプタータンパク質を含有することを特
徴とする上記（１６）記載のスクリーニング用キット、
（５３）上記（５０）〜（５２）記載のスクリーニング
用キットを用いて得られうる、リガンドと上記（１）記
載のＧタンパク質共役型レセプタータンパク質またはそ
の塩との結合性を変化させる化合物またはその塩、（５
４）上記（５０）〜（５２）記載のスクリーニング用キ
ットを用いて得られうる、リガンドと上記（１）記載の
Ｇタンパク質共役型レセプタータンパク質またはその塩
との結合性を変化させる化合物またはその塩を含有する
ことを特徴とする医薬、（５５）上記（９）記載の抗体
と、上記（１）記載のＧタンパク質共役型レセプタータ
ンパク質もしくは上記（２）記載の部分ペプチドまたは
その塩とを接触させることを特徴とする上記（１）のＧ
タンパク質共役型レセプタータンパク質もしくは上記
（２）記載の部分ペプチドまたはその塩の定量法、（５
６）上記（９）記載の抗体と、被検液および標識化され
た上記（１）記載のＧタンパク質共役型レセプタータン
パク質もしくは上記（２）記載の部分ペプチドまたはそ
の塩とを競合的に反応させ、該抗体に結合した標識化さ
れた上記（１）記載のＧタンパク質共役型レセプタータ
ンパク質もしくは上記（２）記載の部分ペプチドまたは
その塩の割合を測定することを特徴とする被検液中の上
記（１）記載のＧタンパク質共役型レセプタータンパク
質もしくは上記（２）記載の部分ペプチドまたはその塩
の定量法、および（５７）被検液と担体上に不溶化した
上記（９）記載の抗体および標識化された上記（９）記
載の抗体とを同時あるいは連続的に反応させたのち、不
溶化担体上の標識剤の活性を測定することを特徴とする
被検液中の上記（１）記載のＧタンパク質共役型レセプ
タータンパク質もしくは上記（２）記載の部分ペプチド
またはその塩の定量法等を提供する。

【００１２】

【発明の実施の形態】本発明のＧタンパク質共役型レセ
プタータンパク質（以下、レセプタータンパク質と略記
する場合がある）は、配列番号：１で表わされるアミノ
酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含
有するレセプタータンパク質である。本発明のレセプタ
ータンパク質は、例えば、ヒトやその他哺乳動物（例え
ば、モルモット、ラット、マウス、ウサギ、ブタ、ヒツ
ジ、ウシ、サルなど）のあらゆる細胞（例えば、脾細
胞、神経細胞、グリア細胞、膵臓β細胞、骨髄細胞、メ
サンギウム細胞、ランゲルハンス細胞、表皮細胞、上皮
細胞、内皮細胞、繊維芽細胞、繊維細胞、筋細胞、脂肪
細胞、免疫細胞（例、マクロファージ、Ｔ細胞、Ｂ細
胞、ナチュラルキラー細胞、肥満細胞、好中球、好塩基
球、好酸球、単球）、巨核球、滑膜細胞、軟骨細胞、骨
細胞、骨芽細胞、破骨細胞、乳腺細胞、肝細胞もしくは
間質細胞、またはこれら細胞の前駆細胞、幹細胞もしく
はガン細胞など）や血球系の細胞、またはそれらの細胞
が存在するあらゆる組織、例えば、脳、脳の各部位
（例、嗅球、扁頭核、大脳基底球、海馬、視床、視床下
部、視床下核、大脳皮質、延髄、小脳、後頭葉、前頭
葉、側頭葉、被殻、尾状核、脳染、黒質）、脊髄、下垂
体、胃、膵臓、腎臓、肝臓、生殖腺、甲状腺、胆のう、
骨髄、副腎、皮膚、筋肉、肺、消化管（例、大腸、小
腸）、血管、心臓、胸腺、脾臓、顎下腺、末梢血、末梢
血球、前立腺、睾丸、精巣、卵巣、胎盤、子宮、骨、関
節、骨格筋などに由来するタンパク質であってもよく、
また合成タンパク質であってもよい。

【００１３】配列番号：１で表わされるアミノ酸配列と
実質的に同一のアミノ酸配列としては、例えば、配列番
号：１で表わされるアミノ酸配列と約50％以上、好まし
くは約60％以上、より好ましくは約70％以上、さらに好
ましくは約80％以上、なかでも好ましくは約90％以上、
最も好ましくは約95％以上の相同性を有するアミノ酸配
列などが挙げられる。本発明の配列番号：１で表わされ
るアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列を含有す
るタンパク質としては、例えば、配列番号：１で表わさ
れるアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列を含有
し、配列番号：１で表わされるアミノ酸配列を含有する
タンパク質と実質的に同質の活性を有するタンパク質な
どが好ましい。実質的に同質の活性としては、例えば、
リガンド結合活性、シグナル情報伝達作用などが挙げら
れる。実質的に同質とは、それらの活性が性質的に同質
であることを示す。したがって、リガンド結合活性やシ
グナル情報伝達作用などの活性が同等（例、約0.01〜10
0倍、好ましくは約0.5〜20倍、より好ましくは約0.5〜
２倍）であることが好ましいが、これらの活性の程度や
タンパク質の分子量などの量的要素は異なっていてもよ
い。リガンド結合活性やシグナル情報伝達作用などの活
性の測定は、公知の方法に準じて行なうことができる
が、例えば、後に記載するリガンドの決定方法やスクリ
ーニング方法に従って測定することができる。

【００１４】また、本発明のレセプタータンパク質とし
ては、配列番号：１で表わされるアミノ酸配列中の１
または２個以上（好ましくは、１〜30個程度、より好ま
しくは１〜10個程度、さらに好ましくは数個（１〜５
個））のアミノ酸が欠失したアミノ酸配列、配列番
号：１で表わされるアミノ酸配列に１または２個以上
（好ましくは、１〜30個程度、より好ましくは１〜10個
程度、さらに好ましくは数個（１〜５個））のアミノ酸
が付加したアミノ酸配列、配列番号：１で表わされる
アミノ酸配列中の１または２個以上（好ましくは、１〜
30個程度、より好ましくは１〜10個程度、さらに好まし
くは数個（１〜５個））のアミノ酸が他のアミノ酸で置
換されたアミノ酸配列、またはそれらを組み合わせた
アミノ酸配列を含有するタンパク質なども用いられる。

【００１５】本明細書におけるレセプタータンパク質の
アミノ酸配列は、ペプチド標記の慣例に従って、左端が
Ｎ末端（アミノ末端）、右端がＣ末端（カルボキシル末
端）である。配列番号：１で表わされるアミノ酸配列を
含有するレセプタータンパク質をはじめとする、本発明
のレセプタータンパク質は、Ｃ末端がカルボキシル基
（−COOH）、カルボキシレート（−COO^-）、アミド（−
CONH₂）またはエステル（−COOR）の何れであってもよ
い。ここでエステルにおけるＲとしては、例えば、メチ
ル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピルもしくはｎ−
ブチルなどのＣ_1-6アルキル基、例えば、シクロペンチ
ル、シクロヘキシルなどのＣ_3-8シクロアルキル基、例
えば、フェニル、α−ナフチルなどのＣ_6-12アリール
基、例えば、ベンジル、フェネチルなどのフェニル−Ｃ
_1-2アルキル基もしくはα−ナフチルメチルなどのα−
ナフチル−Ｃ_1-2アルキル基などのＣ_7-14アラルキル基
のほか、経口用エステルとして汎用されるピバロイルオ
キシメチル基などが用いられる。本発明のレセプタータ
ンパク質がＣ末端以外にカルボキシル基（またはカルボ
キシレート）を有している場合、カルボキシル基がアミ
ド化またはエステル化されているものも本発明のレセプ
タータンパク質に含まれる。この場合のエステルとして
は、例えば上記したＣ末端のエステルなどが用いられ
る。さらに、本発明のレセプタータンパク質には、上記
したタンパク質において、Ｎ末端のメチオニン残基のア
ミノ基が保護基（例えば、ホルミル基、アセチルなどの
Ｃ_2-6アルカノイル基などのＣ_1-6アシル基など）で保護
されているもの、Ｎ端側が生体内で切断され生成したグ
ルタミル基がピログルタミン酸化したもの、分子内のア
ミノ酸の側鎖上の置換基（例えば、−ＯＨ、−ＳＨ、ア
ミノ基、イミダゾール基、インドール基、グアニジノ基
など）が適当な保護基（例えば、ホルミル基、アセチル
などのＣ_2-6アルカノイル基などのＣ_1-6アシル基など）
で保護されているもの、あるいは糖鎖が結合したいわゆ
る糖タンパク質などの複合タンパク質なども含まれる。
本発明のレセプタータンパク質の具体例としては、例え
ば、配列番号：１で表わされるアミノ酸配列を含有する
レセプタータンパク質などが用いられる。

【００１６】本発明のレセプタータンパク質の部分ペプ
チド（以下、部分ペプチドと略記する場合がある）とし
ては、上記した本発明のレセプタータンパク質の部分ペ
プチドであれば何れのものであってもよいが、例えば、
本発明のレセプタータンパク質分子のうち、細胞膜の外
に露出している部位であって、実質的に同質の活性を有
するものなどが用いられる。ここで、「実質的に同質の
活性」とは、例えばリガンド結合活性を示す。リガンド
結合活性の測定は上記と同様に行なうことができる。具
体的には、配列番号：１で表わされるアミノ酸配列を有
するレセプタータンパク質の部分ペプチドとしては、図
１に示される疎水性プロット解析において細胞外領域
（親水性（Hydrophilic）部位）であると分析された部
分を含むペプチドである。また、疎水性（Hydrophobi
c）部位を一部に含むペプチドも同様に用いることがで
きる。個々のドメインを個別に含むペプチドも用い得る
が、複数のドメインを同時に含む部分のペプチドでもよ
い。本発明の部分ペプチドのアミノ酸数は、上記した本
発明のレセプタータンパク質の構成アミノ酸配列のうち
少なくとも20個以上、好ましくは50個以上、より好まし
くは100個以上のアミノ酸配列を有するペプチドなどが
好ましい。実質的に同一のアミノ酸配列とは、これらア
ミノ酸配列と約50％以上、好ましくは約60％以上、より
好ましくは約70％以上、さらに好ましくは約80％以上、
なかでも好ましくは約90％以上、最も好ましくは約95％
以上の相同性を有するアミノ酸配列を示す。

【００１７】また、本発明の部分ペプチドは、上記ア
ミノ酸配列中の１または２個以上（好ましくは、１〜10
個程度、さらに好ましくは数個（１〜５個））のアミノ
酸が欠失し、上記アミノ酸配列に１または２個以上
（好ましくは、１〜20個程度、より好ましくは１〜10個
程度、さらに好ましくは数個（１〜５個））のアミノ酸
が付加し、または上記アミノ酸配列中の１または２個
以上（好ましくは、１〜10個程度、より好ましくは数
個、さらに好ましくは１〜５個程度）のアミノ酸が他の
アミノ酸で置換されていてもよい。また、本発明の部分
ペプチドはＣ末端がカルボキシル基（−COOH）、カルボ
キシレート（−COO^-）、アミド（−CONH₂）またはエス
テル（−COOR）の何れであってもよい（Ｒは該と同意義
を示す）。本発明の部分ペプチドがＣ末端以外にカルボ
キシル基（またはカルボキシレート）を有している場
合、カルボキシル基がアミド化またはエステル化されて
いるものも本発明の部分ペプチドに含まれる。この場合
のエステルとしては、例えば上記したＣ末端のエステル
などが用いられる。さらに、本発明の部分ペプチドに
は、上記した本発明のレセプタータンパク質と同様に、
Ｎ末端のメチオニン残基のアミノ基が保護基で保護され
ているもの、Ｎ端側が生体内で切断され生成したGlnが
ピログルタミン酸化したもの、分子内のアミノ酸の側鎖
上の置換基が適当な保護基で保護されているもの、ある
いは糖鎖が結合したいわゆる糖ペプチドなどの複合ペプ
チドなども含まれる。本発明のレセプタータンパク質ま
たはその部分ペプチドの塩としては、酸または塩基との
生理学的に許容される塩が挙げられ、とりわけ生理学的
に許容される酸付加塩が好ましい。この様な塩として
は、例えば、無機酸（例えば、塩酸、リン酸、臭化水素
酸、硫酸）との塩、あるいは有機酸（例えば、酢酸、ギ
酸、プロピオン酸、フマル酸、マレイン酸、コハク酸、
酒石酸、クエン酸、リンゴ酸、蓚酸、安息香酸、メタン
スルホン酸、ベンゼンスルホン酸）との塩などが用いら
れる。

【００１８】本発明のレセプタータンパク質またはその
塩は、上記したヒトやその他の哺乳動物の細胞または組
織から公知のレセプタータンパク質の精製方法によって
製造することもできるし、後に記載する本発明のレセプ
タータンパク質をコードするＤＮＡを含有する形質転換
体を培養することによっても製造することができる。ま
た、後に記載するタンパク質合成法またはこれに準じて
製造することもできる。ヒトやその他の哺乳動物の組織
または細胞から製造する場合、その組織または細胞をホ
モジナイズした後、酸などで抽出を行ない、該抽出液を
逆相クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィ
ーなどのクロマトグラフィーを組み合わせることにより
精製単離することができる。

【００１９】本発明のレセプタータンパク質もしくはそ
の部分ペプチドまたはその塩またはそのアミド体の合成
には、通常市販のタンパク質合成用樹脂を用いることが
できる。そのような樹脂としては、例えば、クロロメチ
ル樹脂、ヒドロキシメチル樹脂、ベンズヒドリルアミン
樹脂、アミノメチル樹脂、４−ベンジルオキシベンジル
アルコール樹脂、４−メチルベンズヒドリルアミン樹
脂、ＰＡＭ樹脂、４−ヒドロキシメチルメチルフェニル
アセトアミドメチル樹脂、ポリアクリルアミド樹脂、４
−（２',４'−ジメトキシフェニル−ヒドロキシメチ
ル）フェノキシ樹脂、４−（２',４'−ジメトキシフェ
ニル−Ｆｍｏｃアミノエチル）フェノキシ樹脂などを挙
げることができる。このような樹脂を用い、α−アミノ
基と側鎖官能基を適当に保護したアミノ酸を、目的とす
るタンパク質またはペプチドのアミノ酸配列通りに、公
知の各種縮合方法に従い、樹脂上で縮合させる。反応の
最後に樹脂からタンパク質またはペプチドを切り出すと
同時に各種保護基を除去し、さらに高希釈溶液中で分子
内ジスルフィド結合形成反応を実施し、目的のタンパク
質もしくは部分ペプチドまたはそのアミド体を取得す
る。上記した保護アミノ酸の縮合に関しては、タンパク
質合成に使用できる各種活性化試薬を用いることができ
るが、特に、カルボジイミド類がよい。カルボジイミド
類としては、ＤＣＣ、Ｎ,Ｎ'−ジイソプロピルカルボジ
イミド、Ｎ−エチル−Ｎ'−（３−ジメチルアミノプロ
リル）カルボジイミドなどが用いられる。これらによる
活性化にはラセミ化抑制添加剤（例えば、ＨＯＢｔ、Ｈ
ＯＯＢｔ）とともに保護アミノ酸を直接樹脂に添加する
か、または、対称酸無水物またはＨＯＢｔエステルある
いはＨＯＯＢｔエステルとしてあらかじめ保護アミノ酸
の活性化を行なった後に樹脂に添加することができる。

【００２０】保護アミノ酸の活性化や樹脂との縮合に用
いられる溶媒としては、タンパク質縮合反応に使用しう
ることが知られている溶媒から適宜選択されうる。例え
ば、Ｎ,Ｎ−ジメチルホルムアミド，Ｎ,Ｎ−ジメチルア
セトアミド，Ｎ−メチルピロリドンなどの酸アミド類、
塩化メチレン，クロロホルムなどのハロゲン化炭化水素
類、トリフルオロエタノールなどのアルコール類、ジメ
チルスルホキシドなどのスルホキシド類、ピリジン，ジ
オキサン，テトラヒドロフランなどのエーテル類、アセ
トニトリル，プロピオニトリルなどのニトリル類、酢酸
メチル，酢酸エチルなどのエステル類あるいはこれらの
適宜の混合物などが用いられる。反応温度はタンパク質
結合形成反応に使用され得ることが知られている範囲か
ら適宜選択され、通常約−20℃〜50℃の範囲から適宜選
択される。活性化されたアミノ酸誘導体は通常1.5〜４
倍過剰で用いられる。ニンヒドリン反応を用いたテスト
の結果、縮合が不十分な場合には保護基の脱離を行うこ
となく縮合反応を繰り返すことにより十分な縮合を行な
うことができる。反応を繰り返しても十分な縮合が得ら
れないときには、無水酢酸またはアセチルイミダゾール
を用いて未反応アミノ酸をアセチル化することができ
る。

【００２１】原料のアミノ基の保護基としては、例え
ば、Ｚ、Ｂｏｃ、ターシャリーペンチルオキシカルボニ
ル、イソボルニルオキシカルボニル、４−メトキシベン
ジルオキシカルボニル、Ｃｌ−Ｚ、Ｂｒ−Ｚ、アダマン
チルオキシカルボニル、トリフルオロアセチル、フタロ
イル、ホルミル、２−ニトロフェニルスルフェニル、ジ
フェニルホスフィノチオイル、Ｆｍｏｃなどが用いられ
る。カルボキシル基は、例えば、アルキルエステル化
（例えば、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ターシ
ャリーブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シク
ロヘプチル、シクロオクチル、２−アダマンチルなどの
直鎖状、分枝状もしくは環状アルキルエステル化）、ア
ラルキルエステル化（例えば、ベンジルエステル、４−
ニトロベンジルエステル、４−メトキシベンジルエステ
ル、４−クロロベンジルエステル、ベンズヒドリルエス
テル化）、フェナシルエステル化、ベンジルオキシカル
ボニルヒドラジド化、ターシャリーブトキシカルボニル
ヒドラジド化、トリチルヒドラジド化などによって保護
することができる。セリンの水酸基は、例えば、エステ
ル化またはエーテル化によって保護することができる。
このエステル化に適する基としては、例えば、アセチル
基などの低級アルカノイル基、ベンゾイル基などのアロ
イル基、ベンジルオキシカルボニル基、エトキシカルボ
ニル基などの炭酸から誘導される基などが用いられる。
また、エーテル化に適する基としては、例えば、ベンジ
ル基、テトラヒドロピラニル基、ｔ−ブチル基などであ
る。チロシンのフェノール性水酸基の保護基としては、
例えば、Ｂｚｌ、Ｃｌ₂−Ｂｚｌ、２−ニトロベンジ
ル、Ｂｒ−Ｚ、ターシャリーブチルなどが用いられる。
ヒスチジンのイミダゾールの保護基としては、例えば、
Ｔｏｓ、４−メトキシ−２,３,６−トリメチルベンゼン
スルホニル、ＤＮＰ、ベンジルオキシメチル、Ｂｕｍ、
Ｂｏｃ、Ｔｒｔ、Ｆｍｏｃなどが用いられる。

【００２２】原料のカルボキシル基の活性化されたもの
としては、例えば、対応する酸無水物、アジド、活性エ
ステル〔アルコール（例えば、ペンタクロロフェノー
ル、２,４,５−トリクロロフェノール、２,４−ジニト
ロフェノール、シアノメチルアルコール、パラニトロフ
ェノール、ＨＯＮＢ、Ｎ−ヒドロキシスクシミド、Ｎ−
ヒドロキシフタルイミド、ＨＯＢｔ）とのエステル〕な
どが用いられる。原料のアミノ基の活性化されたものと
しては、例えば、対応するリン酸アミドが用いられる。
保護基の除去（脱離）方法としては、例えば、Ｐｄ−黒
あるいはＰｄ−炭素などの触媒の存在下での水素気流中
での接触還元や、また、無水フッ化水素、メタンスルホ
ン酸、トリフルオロメタンスルホン酸、トリフルオロ酢
酸あるいはこれらの混合液などによる酸処理や、ジイソ
プロピルエチルアミン、トリエチルアミン、ピペリジ
ン、ピペラジンなどによる塩基処理、また液体アンモニ
ア中ナトリウムによる還元なども用いられる。上記酸処
理による脱離反応は、一般に約−20℃〜40℃の温度で行
なわれるが、酸処理においては、例えば、アニソール、
フェノール、チオアニソール、メタクレゾール、パラク
レゾール、ジメチルスルフィド、１,４−ブタンジチオ
ール、１,２−エタンジチオールなどのようなカチオン
捕捉剤の添加が有効である。また、ヒスチジンのイミダ
ゾール保護基として用いられる２,４−ジニトロフェニ
ル基はチオフェノール処理により除去され、トリプトフ
ァンのインドール保護基として用いられるホルミル基は
上記の１,２−エタンジチオール、１,４−ブタンジチオ
ールなどの存在下の酸処理による脱保護以外に、希水酸
化ナトリウム溶液、希アンモニアなどによるアルカリ処
理によっても除去される。

【００２３】原料の反応に関与すべきでない官能基の保
護、保護基の脱離、反応に関与する官能基の活性化など
は公知の手段から、また保護基は公知の基から適用でき
る。タンパク質のアミド体を得る別の方法としては、例
えば、まず、カルボキシ末端アミノ酸のα−カルボキシ
ル基をアミド化して保護した後、アミノ基側にペプチド
（タンパク質）鎖を所望の鎖長まで延ばした後、該ペプ
チド鎖のＮ末端のα−アミノ基の保護基のみを除いたタ
ンパク質とＣ末端のカルボキシル基の保護基のみを除去
したタンパク質とを製造し、この両タンパク質を上記し
たような混合溶媒中で縮合させる。縮合反応の詳細につ
いては上記と同様である。縮合により得られた保護タン
パク質を精製した後、上記方法によりすべての保護基を
除去し、所望の粗タンパク質を得ることができる。この
粗タンパク質は既知の各種精製手段を駆使して精製し、
主要画分を凍結乾燥することで所望のタンパク質のアミ
ド体を得ることができる。タンパク質のエステル体を得
るには、例えば、カルボキシ末端アミノ酸のα−カルボ
キシル基を所望のアルコール類と縮合しアミノ酸エステ
ルとした後、タンパク質のアミド体と同様にして、所望
のタンパク質のエステル体を得ることができる。

【００２４】本発明のタンパク質の部分ペプチドまたは
その塩は、公知のペプチドの合成法に従って、あるいは
本発明のタンパク質を適当なペプチダーゼで切断するこ
とによって製造することができる。ペプチドの合成法と
しては、例えば、固相合成法、液相合成法のいずれによ
っても良い。すなわち、本発明のタンパク質を構成し得
る部分ペプチドもしくはアミノ酸と残余部分とを縮合さ
せ、生成物が保護基を有する場合は保護基を脱離するこ
とにより目的のペプチドを製造することができる。公知
の縮合方法や保護基の脱離としては、例えば、以下の
〜に記載された方法が挙げられる。 M. Bodanszky および M.A. Ondetti、ペプチド シン
セシス (Peptide Synthesis), Interscience Publisher
s, New York (1966年) SchroederおよびLuebke、ザ ペプチド(The Peptide),
Academic Press, NewYork (1965年) 泉屋信夫他、ペプチド合成の基礎と実験、 丸善(株)
（1975年） 矢島治明 および榊原俊平、生化学実験講座 1、 タン
パク質の化学IV、 205、(1977年) 矢島治明監修、続医薬品の開発 第14巻 ペプチド合成
広川書店 また、反応後は通常の精製法、例えば、溶媒抽出・蒸留
・カラムクロマトグラフィー・液体クロマトグラフィー
・再結晶などを組み合わせて本発明の部分ペプチドを精
製単離することができる。上記方法で得られる部分ペプ
チドが遊離体である場合は、公知の方法によって適当な
塩に変換することができるし、逆に塩で得られた場合
は、公知の方法によって遊離体に変換することができ
る。

【００２５】本発明のレセプタータンパク質をコードす
るポリヌクレオチドとしては、上記した本発明のレセプ
タータンパク質をコードする塩基配列（ＤＮＡまたはＲ
ＮＡ、好ましくはＤＮＡ）を含有するものであればいか
なるものであってもよい。該ポリヌクレオチドとして
は、本発明のレセプタータンパク質をコードするＤＮ
Ａ、ｍＲＮＡ等のＲＮＡであり、二本鎖であっても、一
本鎖であってもよい。二本鎖の場合は、二本鎖ＤＮＡ、
二本鎖ＲＮＡまたはＤＮＡ：ＲＮＡのハイブリッドでも
よい。一本鎖の場合は、センス鎖（すなわち、コード
鎖）であっても、アンチセンス鎖（すなわち、非コード
鎖）であってもよい。本発明のレセプタータンパク質を
コードするポリヌクレオチドを用いて、公知の実験医学
増刊「新ＰＣＲとその応用」15(7)、1997記載の方法ま
たはそれに準じた方法、例えば、TaqMan PCRなどの方法
により、本発明のレセプタータンパク質のｍＲＮＡを定
量することができる。本発明のレセプタータンパク質を
コードするＤＮＡとしては、ゲノムＤＮＡ、ゲノムＤＮ
Ａライブラリー、上記した細胞・組織由来のｃＤＮＡ、
上記した細胞・組織由来のｃＤＮＡライブラリー、合成
ＤＮＡのいずれでもよい。ライブラリーに使用するベク
ターは、バクテリオファージ、プラスミド、コスミド、
ファージミドなどいずれであってもよい。また、上記し
た細胞・組織より全ＲＮＡまたはｍＲＮＡ画分を調製し
たものを用いて直接Reverse Transcriptase Polymerase
Chain Reaction（以下、ＲＴ−ＰＣＲ法と略称する）に
よって増幅することもできる。具体的には、本発明のレ
セプタータンパク質をコードするＤＮＡとしては、例え
ば、配列番号：２で表わされる塩基配列を含有するＤＮ
Ａ、または配列番号：２で表わされる塩基配列を含有す
るＤＮＡとハイストリンジェントな条件下でハイブリダ
イズするＤＮＡを含有し、本発明のレセプタータンパク
質と実質的に同質の活性（例、リガンド結合活性、シグ
ナル情報伝達作用など）を有するレセプタータンパク質
をコードするＤＮＡであれば何れのものでもよい。配列
番号：２で表わされる塩基配列を有するＤＮＡとハイス
トリンジェントな条件下でハイブリダイズするＤＮＡと
しては、例えば、配列番号：２で表わされる塩基配列と
約70％以上、好ましくは約80％以上、より好ましくは約
90％以上、さらに好ましくは約95％以上の相同性を有す
る塩基配列を含有するＤＮＡなどが用いられる。

【００２６】ハイブリダイゼーションは、公知の方法あ
るいはそれに準じる方法、例えば、モレキュラー・クロ
ーニング（Molecular Cloning）２nd（J. Sambrook et
al.,Cold Spring Harbor Lab. Press, 1989）に記載の
方法などに従って行なうことができる。また、市販のラ
イブラリーを使用する場合、添付の使用説明書に記載の
方法に従って行なうことができる。より好ましくは、ハ
イストリンジェントな条件に従って行なうことができ
る。該ハイストリンジェントな条件とは、例えば、ナト
リウム濃度が約19〜40 ｍＭ、好ましくは約19〜20 ｍＭ
で、温度が約50〜70℃、好ましくは約60〜65℃の条件を
示す。特に、ナトリウム濃度が約19 ｍＭで温度が約65
℃の場合が最も好ましい。より具体的には、配列番号：
１で表わされるアミノ酸配列を含有するレセプタータン
パク質をコードするＤＮＡとしては、配列番号：２で表
わされる塩基配列を含有するＤＮＡなどが用いられる。
本発明のレセプタータンパク質をコードするＤＮＡの塩
基配列の一部、または該ＤＮＡと相補的な塩基配列の一
部を含有するポリヌクレオチドとは、下記の本発明の部
分ペプチドをコードするＤＮＡを包含するだけではな
く、ＲＮＡをも包含する意味で用いられる。本発明に従
えば、Ｇタンパク質共役型レセプタータンパク質遺伝子
の複製または発現を阻害することのできるアンチセンス
・ポリヌクレオチド（核酸）を、クローン化した、ある
いは決定されたＧタンパク質共役型レセプタータンパク
質をコードするＤＮＡの塩基配列情報に基づき設計し、
合成しうる。そうしたポリヌクレオチド（核酸）は、Ｇ
タンパク質共役型レセプタータンパク質遺伝子のＲＮＡ
とハイブリダイズすることができ、該ＲＮＡの合成また
は機能を阻害することができるか、あるいはＧタンパク
質共役型レセプタータンパク質関連ＲＮＡとの相互作用
を介してＧタンパク質共役型レセプタータンパク質遺伝
子の発現を調節・制御することができる。Ｇタンパク質
共役型レセプタータンパク質関連ＲＮＡの選択された配
列に相補的なポリヌクレオチド、およびＧタンパク質共
役型レセプタータンパク質関連ＲＮＡと特異的にハイブ
リダイズすることができるポリヌクレオチドは、生体内
および生体外でＧタンパク質共役型レセプタータンパク
質遺伝子の発現を調節・制御するのに有用であり、また
病気などの治療または診断に有用である。また、Ｇタン
パク質共役型レセプタータンパク質遺伝子の５'端ヘア
ピンループ、５'端６−ベースペア・リピート、５'端非
翻訳領域、ポリペプチド翻訳開始コドン、タンパク質コ
ード領域、ＯＲＦ翻訳開始コドン、３'端非翻訳領域、
３'端パリンドローム領域、および３'端ヘアピンループ
は好ましい対象領域として選択しうるが、Ｇタンパク質
共役型レセプタータンパク質遺伝子内の如何なる領域も
対象として選択しうる。

【００２７】目的核酸と、対象領域の少なくとも一部に
相補的なポリヌクレオチドとの関係、即ち、対象物とハ
イブリダイズすることができるポリヌクレオチドとの関
係は「アンチセンス」であるということができる。アン
チセンス・ポリヌクレオチドは、２−デオキシ−Ｄ−リ
ボースを含有しているポリデオキシヌクレオチド、Ｄ−
リボースを含有しているポリヌクレオチド、プリンまた
はピリミジン塩基のＮ−グリコシドであるその他のタイ
プのポリヌクレオチド、あるいは非ヌクレオチド骨格を
有するその他のポリマー（例えば、市販のタンパク質核
酸および合成配列特異的な核酸ポリマー）または特殊な
結合を含有するその他のポリマー（但し、該ポリマーは
ＤＮＡやＲＮＡ中に見出されるような塩基のペアリング
や塩基の付着を許容する配置をもつヌクレオチドを含有
する）などが挙げられる。それらは、二本鎖ＤＮＡ、一
本鎖ＤＮＡ、二本鎖ＲＮＡ、一本鎖ＲＮＡ、さらにＤＮ
Ａ：ＲＮＡハイブリッドであることができ、さらに非修
飾ポリヌクレオチド（または非修飾オリゴヌクレオチ
ド）、さらには公知の修飾の付加されたもの、例えば当
該分野で知られた標識のあるもの、キャップの付いたも
の、メチル化されたもの、１個以上の天然のヌクレオチ
ドを類縁物で置換したもの、分子内ヌクレオチド修飾の
されたもの、例えば非荷電結合（例えば、メチルホスホ
ネート、ホスホトリエステル、ホスホルアミデート、カ
ルバメートなど）を持つもの、電荷を有する結合または
硫黄含有結合（例えば、ホスホロチオエート、ホスホロ
ジチオエートなど）を持つもの、例えばタンパク質（ヌ
クレアーゼ、ヌクレアーゼ・インヒビター、トキシン、
抗体、シグナルペプチド、ポリ−Ｌ−リジンなど）や糖
（例えば、モノサッカライドなど）などの側鎖基を有し
ているもの、インターカレント化合物（例えば、アクリ
ジン、ソラレンなど）を持つもの、キレート化合物（例
えば、金属、放射活性をもつ金属、ホウ素、酸化性の金
属など）を含有するもの、アルキル化剤を含有するも
の、修飾された結合を持つもの（例えば、αアノマー型
の核酸など）であってもよい。ここで「ヌクレオシ
ド」、「ヌクレオチド」および「核酸」とは、プリンお
よびピリミジン塩基を含有するのみでなく、修飾された
その他の複素環型塩基をもつようなものを含んでいて良
い。こうした修飾物は、メチル化されたプリンおよびピ
リミジン、アシル化されたプリンおよびピリミジン、あ
るいはその他の複素環を含むものであってよい。修飾さ
れたヌクレオチドおよび修飾されたヌクレオチドはまた
糖部分が修飾されていてよく、例えば、１個以上の水酸
基がハロゲンとか、脂肪族基などで置換されていたり、
あるいはエーテル、アミンなどの官能基に変換されてい
てよい。

【００２８】本発明のアンチセンス・ポリヌクレオチド
（核酸）は、ＲＮＡ、ＤＮＡ、あるいは修飾された核酸
（ＲＮＡ、ＤＮＡ）である。修飾された核酸の具体例と
しては核酸の硫黄誘導体やチオホスフェート誘導体、そ
してポリヌクレオシドアミドやオリゴヌクレオシドアミ
ドの分解に抵抗性のものが挙げられるが、それに限定さ
れるものではない。本発明のアンチセンス核酸は次のよ
うな方針で好ましく設計されうる。すなわち、細胞内で
のアンチセンス核酸をより安定なものにする、アンチセ
ンス核酸の細胞透過性をより高める、目標とするセンス
鎖に対する親和性をより大きなものにする、そしてもし
毒性があるならアンチセンス核酸の毒性をより小さなも
のにする。このような修飾は当該分野で数多く知られて
おり、例えば J. Kawakami et al., Pharm Tech Japan,
Vol. 8, pp.247, 1992; Vol. 8, pp.395, 1992; S. T.
Crooke et al. ed., Antisense Research and Applica
tions, CRC Press, 1993などに開示がある。本発明のア
ンチセンス核酸は、変化せしめられたり、修飾された
糖、塩基、結合を含有していて良く、リポゾーム、ミク
ロスフェアのような特殊な形態で供与されたり、遺伝子
治療により適用されたり、付加された形態で与えられる
ことができうる。こうして付加形態で用いられるものと
しては、リン酸基骨格の電荷を中和するように働くポリ
リジンのようなポリカチオン体、細胞膜との相互作用を
高めたり、核酸の取込みを増大させるような脂質（例え
ば、ホスホリピド、コレステロールなど）といった疎水
性のものが挙げられる。付加するに好ましい脂質として
は、コレステロールやその誘導体（例えば、コレステリ
ルクロロホルメート、コール酸など）が挙げられる。こ
うしたものは、核酸の３'端あるいは５'端に付着させる
ことができ、塩基、糖、分子内ヌクレオシド結合を介し
て付着させることができうる。その他の基としては、核
酸の３'端あるいは５'端に特異的に配置されたキャップ
用の基で、エキソヌクレアーゼ、ＲＮａｓｅなどのヌク
レアーゼによる分解を阻止するためのものが挙げられ
る。こうしたキャップ用の基としては、ポリエチレング
リコール、テトラエチレングリコールなどのグリコール
をはじめとした当該分野で知られた水酸基の保護基が挙
げられるが、それに限定されるものではない。アンチセ
ンス核酸の阻害活性は、本発明の形質転換体、本発明の
生体内や生体外の遺伝子発現系、あるいはＧタンパク質
共役型レセプタータンパク質の生体内や生体外の翻訳系
を用いて調べることができる。アンチセンス核酸は公知
の各種の方法で細胞に適用できる。本発明で用いられる
タンパク質または部分ペプチドをコードするポリヌクレ
オチド（例、ＤＮＡ）の塩基配列に相補的な、または実
質的に相補的な塩基配列を有するアンチセンスポリヌク
レオチドとしては、本発明のポリヌクレチド（例、ＤＮ
Ａ）の塩基配列に相補的な、または実質的に相補的な塩
基配列を有し、該ポリヌクレオチド（例、ＤＮＡ）がコ
ードする遺伝子の発現を抑制し得る作用を有するもので
あれば、いずれのアンチセンスポリヌクレオチドであっ
てもよいが、アンチセンスＤＮＡが好ましい。本発明の
ポリヌクレオチド（例、ＤＮＡ）に実質的に相補的な塩
基配列とは、例えば、本発明のポリヌクレオチド（例、
ＤＮＡ）に相補的な塩基配列（すなわち、本発明のポリ
ヌクレオチドの相補鎖）の全塩基配列あるいは部分塩基
配列と約70％以上、好ましくは約80％以上、より好まし
くは約90％以上、最も好ましくは約95％以上の相同性を
有する塩基配列などが挙げられる。特に、本発明のポリ
ヌクレオチド（例、ＤＮＡ）の相補鎖の全塩基配列う
ち、本発明のタンパク質のＮ末端部位をコードする部分
の塩基配列（例えば、開始コドン付近の塩基配列など）
の相補鎖と約70％以上、好ましくは約80％以上、より好
ましくは約90％以上、最も好ましくは約95％以上の相同
性を有するアンチセンスポリヌクレオチドが好適であ
る。具体的には、配列番号：２で表わされる塩基配列を
有するＤＮＡの塩基配列に相補的な、もしくは実質的に
相補的な塩基配列、またはその一部分を有するアンチセ
ンスポリヌクレオチドなどが挙げられる。アンチセンス
ポリヌクレオチドは通常、10〜40個程度、好ましくは15
〜30個程度の塩基から構成される。ヌクレアーゼなどの
加水分解酵素による分解を防ぐために、アンチセンスポ
リヌクレオチドを構成する各ヌクレオチドのりん酸残基
（ホスフェート）は、例えば、ホスホロチオエート、メ
チルホスホネート、ホスホロジチオネートなどの化学修
飾りん酸残基に置換されていてもよい。これらのアンチ
センスポリヌクレオチドは、公知のＤＮＡ合成装置など
を用いて製造することができる。

【００２９】本発明の部分ペプチドをコードするＤＮＡ
としては、上記した本発明の部分ペプチドをコードする
塩基配列を含有するものであればいかなるものであって
もよい。また、ゲノムＤＮＡ、ゲノムＤＮＡライブラリ
ー、上記した細胞・組織由来のｃＤＮＡ、上記した細胞
・組織由来のｃＤＮＡライブラリー、合成ＤＮＡのいず
れでもよい。ライブラリーに使用するベクターは、バク
テリオファージ、プラスミド、コスミド、ファージミド
などいずれであってもよい。また、上記した細胞・組織
よりｍＲＮＡ画分を調製したものを用いて直接ＲＴ−Ｐ
ＣＲ法によって増幅することもできる。具体的には、本
発明の部分ペプチドをコードするＤＮＡとしては、例え
ば、（1）配列番号：２で表わされる塩基配列を含有す
るＤＮＡの部分塩基配列を有するＤＮＡ、または（2）
配列番号：２で表わされる塩基配列を含有するＤＮＡと
ハイストリンジェントな条件下でハイブリダイズするＤ
ＮＡを含有し、本発明のタンパク質（またはペプチド）
と実質的に同質の活性（例、リガンド結合活性、シグナ
ル情報伝達作用など）を有するタンパク質をコードする
ＤＮＡの部分塩基配列を有するＤＮＡなどが用いられ
る。配列番号：２で表わされる塩基配列を含有するＤＮ
Ａとハイストリンジェントな条件でハイブリダイズする
ＤＮＡとしては、例えば、配列番号：２で表わされる塩
基配列と約70％以上、好ましくは約80％以上、より好ま
しくは約90％以上、さらに好ましくは約95％以上の相同
性を有する塩基配列を含有するＤＮＡなどが用いられ
る。

【００３０】本発明のレセプタータンパク質またはその
部分ペプチド（以下、本発明のレセプタータンパク質と
略記する場合がある）を完全にコードするＤＮＡのクロ
ーニングの手段としては、本発明のペプチドをコードす
るＤＮＡの塩基配列の部分塩基配列を有する合成ＤＮＡ
プライマーを用いてＰＣＲ法によって増幅するか、また
は適当なベクターに組み込んだＤＮＡを本発明のレセプ
タータンパク質の一部あるいは全領域をコードするＤＮ
Ａ断片もしくは合成ＤＮＡを用いて標識したものとのハ
イブリダイゼーションによって選別することができる。
ハイブリダイゼーションの方法は、例えば、モレキュラ
ー・クローニング（Molecular Cloning）2nd（J. Sambr
ook et al., Cold Spring Harbor Lab. Press, 1989）
に記載の方法などに従って行なうことができる。また、
市販のライブラリーを使用する場合、添付の使用説明書
に記載の方法に従って行なうことができる。

【００３１】ＤＮＡの塩基配列の置換は、ＰＣＲや公知
のキット、例えば、Mutan^TM−superExpress Km（宝酒造
（株））、Mutan^TM−K（宝酒造（株））等を用いて、OD
A−LA PCR法、gapped duplex法、Kunkel法等の公知の方
法あるいはそれらに準じる方法に従って行なうことがで
きる。レセプタータンパク質をコードするクローン化さ
れたＤＮＡは目的によりそのまま、または所望により制
限酵素で消化したり、リンカーを付加したりして使用す
ることができる。該ＤＮＡはその５'末端側に翻訳開始
コドンとしてのＡＴＧを有し、また３'末端側には翻訳
終止コドンとしてのＴＡＡ、ＴＧＡまたはＴＡＧを有し
ていてもよい。これらの翻訳開始コドンや翻訳終止コド
ンは、適当な合成ＤＮＡアダプターを用いて付加するこ
ともできる。本発明のレセプタータンパク質の発現ベク
ターは、例えば、（イ）本発明のレセプタータンパク質
をコードするＤＮＡを含む、例えばｃＤＮＡから目的と
するＤＮＡ断片を切り出し、（ロ）該ＤＮＡ断片を適当
な発現ベクター中のプロモーターの下流に連結すること
により製造することができる。

【００３２】ベクターとしては、大腸菌由来のプラスミ
ド（例、pCR4、pCR2.1、pBR322、pBR325、pUC12、pUC1
3）、枯草菌由来のプラスミド（例、pUB110、pTP5、pC1
94）、酵母由来プラスミド（例、pSH19、pSH15）、λフ
ァージなどのバクテリオファージ、レトロウイルス、ワ
クシニアウイルス、バキュロウイルスなどの動物ウイル
スなどの他、pA1-11、pXT1、pRc/CMV、pRc/RSV、pcDNAI
/Neoなどが用いられる。本発明で用いられるプロモータ
ーとしては、遺伝子の発現に用いる宿主に対応して適切
なプロモーターであればいかなるものでもよい。例え
ば、動物細胞を宿主として用いる場合は、ＳＲαプロモ
ーター、ＳＶ４０プロモーター、ＬＴＲプロモーター、
ＣＭＶプロモーター、ＨＳＶ−ＴＫプロモーターなどが
挙げられる。これらのうち、ＣＭＶプロモーター、ＳＲ
αプロモーターなどを用いるのが好ましい。宿主がエシ
ェリヒア属菌である場合は、ｔｒｐプロモーター、ｌａ
ｃプロモーター、ｒｅｃＡプロモーター、λP_Lプロモー
ター、ｌｐｐプロモーターなどが、宿主がバチルス属菌
である場合は、ＳＰＯ１プロモーター、ＳＰＯ２プロモ
ーター、ｐｅｎＰプロモーターなど、宿主が酵母である
場合は、ＰＨＯ５プロモーター、ＰＧＫプロモーター、
ＧＡＰプロモーター、ＡＤＨプロモーターなどが好まし
い。宿主が昆虫細胞である場合は、ポリヘドリンプロモ
ーター、Ｐ１０プロモーターなどが好ましい。

【００３３】発現ベクターには、以上の他に、所望によ
りエンハンサー、スプライシングシグナル、ポリＡ付加
シグナル、選択マーカー、ＳＶ４０複製オリジン（以
下、ＳＶ４０oriと略称する場合がある）などを含有し
ているものを用いることができる。選択マーカーとして
は、例えば、ジヒドロ葉酸還元酵素（以下、dhfrと略称
する場合がある）遺伝子〔メソトレキセート（ＭＴＸ）
耐性〕、アンピシリン耐性遺伝子（以下、Ａｍｐ^rと略
称する場合がある）、ネオマイシン耐性遺伝子（以下、
Ｎｅｏ^rと略称する場合がある、Ｇ４１８耐性）等が挙
げられる。特に、ＣＨＯ（dhfr^-）細胞を用いてdhfr遺
伝子を選択マーカーとして使用する場合、チミジンを含
まない培地によっても目的遺伝子を選択できる。また、
必要に応じて、宿主に合ったシグナル配列を、本発明の
レセプタータンパク質のＮ端末側に付加する。宿主がエ
シェリヒア属菌である場合は、ＰｈｏＡシグナル配列、
ＯｍｐＡシグナル配列などが、宿主がバチルス属菌であ
る場合は、α−アミラーゼ・シグナル配列、サブチリシ
ン・シグナル配列などが、宿主が酵母である場合は、Ｍ
Ｆα・シグナル配列、ＳＵＣ２・シグナル配列など、宿
主が動物細胞である場合には、インシュリン・シグナル
配列、α−インターフェロン・シグナル配列、抗体分子
・シグナル配列などがそれぞれ利用できる。このように
して構築された本発明のレセプタータンパク質をコード
するＤＮＡを含有するベクターを用いて、形質転換体を
製造することができる。

【００３４】宿主としては、例えば、エシェリヒア属
菌、バチルス属菌、酵母、昆虫細胞、昆虫、動物細胞な
どが用いられる。エシェリヒア属菌の具体例としては、
エシェリヒア・コリ（Escherichia coli）K12・DH1〔プ
ロシージングズ・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・
オブ・サイエンシイズ・オブ・ザ・ユーエスエー（Pro
c. Natl. Acad. Sci. USA），60巻，160 (1968)〕，JM1
03〔ヌクイレック・アシッズ・リサーチ，（Nucleic Ac
idsResearch），9巻，309 (1981)〕，JA221〔ジャーナ
ル・オブ・モレキュラー・バイオロジー（Journal of M
olecular Biology），120巻，517 (1978)〕，HB101〔ジ
ャーナル・オブ・モレキュラー・バイオロジー，41巻，
459 (1969)〕，C600〔ジェネティックス（Genetics），
39巻，440 (1954)〕，DH5α〔Inoue, H., Nojima, H. a
nd Okayama, H., Gene, 96, 23-28 (1990)〕，DH10B
〔プロシージングズ・オブ・ザ・ナショナル・アカデミ
ー・オブ・サイエンシイズ・オブ・ザ・ユーエスエー
（Proc. Natl. Acad. Sci. USA），87巻，4645−4649
(1990)〕などが用いられる。バチルス属菌としては、例
えば、バチルス・ズブチルス（Bacillus subtilis）MI1
14〔ジーン，24巻，255 (1983)〕，207−21〔ジャーナ
ル・オブ・バイオケミストリー（Journal of Biochemis
try），95巻，87 (1984)〕などが用いられる。酵母とし
ては、例えば、サッカロマイセス セレビシエ（Saccha
romyces cerevisiae）AH22、AH22R^-、NA87-11A、DKD-5
D、20B-12、シゾサッカロマイセス ポンベ（Schizosac
charomyces pombe）NCYC1913、NCYC2036、ピキア パス
トリス（Pichia pastoris）などが用いられる。

【００３５】昆虫細胞としては、例えば、ウイルスがＡ
ｃＮＰＶの場合は、夜盗蛾の幼虫由来株化細胞（Spodop
tera frugiperda cell；Ｓｆ細胞）、Trichoplusia ni
の中腸由来のＭＧ１細胞、Trichoplusia niの卵由来のH
igh Five^TM 細胞、Mamestrabrassicae由来の細胞または
Estigmena acrea由来の細胞などが用いられる。ウイル
スがＢｍＮＰＶの場合は、蚕由来株化細胞（Bombyx mor
i N；ＢｍＮ細胞）などが用いられる。該Ｓｆ細胞とし
ては、例えば、Ｓｆ９細胞（ATCC CRL1711）、Ｓｆ２１
細胞（以上、Vaughn, J.L.ら、イン・ヴィボ（In Viv
o）, 13, 213-217(1977)）などが用いられる。昆虫とし
ては、例えば、カイコの幼虫などが用いられる〔前田
ら、ネイチャー（Nature），315巻，592 (1985)〕。動
物細胞としては、例えば、サル細胞ＣＯＳ−７、Ｖｅｒ
ｏ、チャイニーズハムスター細胞ＣＨＯ（以下、ＣＨＯ
細胞と略記）、dhfr遺伝子欠損チャイニーズハムスター
細胞ＣＨＯ（以下、ＣＨＯ（dhfr^-）細胞と略記）、マ
ウスＬ細胞，マウスＡｔＴ−２０、マウスミエローマ細
胞、ラットＧＨ３、ヒトＦＬ細胞などが用いられる。

【００３６】エシェリヒア属菌を形質転換するには、例
えば、プロシージングズ・オブ・ザ・ナショナル・アカ
デミー・オブ・サイエンジイズ・オブ・ザ・ユーエスエ
ー（Proc. Natl. Acad. Sci. USA），69巻，2110 (197
2)やジーン（Gene），17巻，107 (1982)などに記載の方
法に従って行なうことができる。バチルス属菌を形質転
換するには、例えば、モレキュラー・アンド・ジェネラ
ル・ジェネティックス（Molecular ＆ General Genetic
s），168巻，111 (1979)などに記載の方法に従って行な
うことができる。酵母を形質転換するには、例えば、メ
ッソズ・イン・エンザイモロジー（Methods in Enzymol
ogy），194巻，182−187（1991）、プロシージングズ・
オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンシ
イズ・オブ・ザ・ユーエスエー（Proc. Natl. Acad. Sc
i. USA），75巻，1929 (1978)などに記載の方法に従っ
て行なうことができる。昆虫細胞または昆虫を形質転換
するには、例えば、バイオ／テクノロジー（Bio/Techno
logy）, 6, 47-55 (1988))などに記載の方法に従って行
なうことができる。動物細胞を形質転換するには、例え
ば、細胞工学別冊８ 新細胞工学実験プロトコール．26
3−267（1995）（秀潤社発行）、ヴィロロジー（Virolo
gy），52巻，456 (1973)に記載の方法に従って行なうこ
とができる。このようにして、Ｇタンパク質共役型レセ
プタータンパク質をコードするＤＮＡを含有する発現ベ
クターで形質転換された形質転換体が得られる。宿主が
エシェリヒア属菌、バチルス属菌である形質転換体を培
養する際、培養に使用される培地としては液体培地が適
当であり、その中には該形質転換体の生育に必要な炭素
源、窒素源、無機物その他が含有せしめられる。炭素源
としては、例えば、グルコース、デキストリン、可溶性
澱粉、ショ糖など、窒素源としては、例えば、アンモニ
ウム塩類、硝酸塩類、コーンスチープ・リカー、ペプト
ン、カゼイン、肉エキス、大豆粕、バレイショ抽出液な
どの無機または有機物質、無機物としては、例えば、塩
化カルシウム、リン酸二水素ナトリウム、塩化マグネシ
ウムなどが挙げられる。また、酵母エキス、ビタミン
類、生長促進因子などを添加してもよい。培地のｐＨは
約５〜８が望ましい。

【００３７】エシェリヒア属菌を培養する際の培地とし
ては、例えば、グルコース、カザミノ酸を含むＭ９培地
〔ミラー（Miller），ジャーナル・オブ・エクスペリメ
ンツ・イン・モレキュラー・ジェネティックス（Journa
l of Experiments in Molecular Genetics），431−43
3，Cold Spring Harbor Laboratory, New York 1972〕
が好ましい。ここに必要によりプロモーターを効率よく
働かせるために、例えば、3β−インドリルアクリル酸
のような薬剤を加えることができる。宿主がエシェリヒ
ア属菌の場合、培養は通常約15〜43℃で約３〜24時間行
ない、必要により、通気や撹拌を加えることもできる。
宿主がバチルス属菌の場合、培養は通常約30〜40℃で約
６〜24時間行ない、必要により通気や撹拌を加えること
もできる。宿主が酵母である形質転換体を培養する際、
培地としては、例えば、バークホールダー（Burkholde
r）最小培地〔Bostian, K. L. ら、「プロシージングズ
・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエン
シイズ・オブ・ザ・ユーエスエー（Proc. Natl. Acad.
Sci. USA），77巻，4505 (1980)」や0.5％カザミノ酸を
含有するＳＤ培地〔Bitter, G. A. ら、「プロシージン
グズ・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイ
エンシイズ・オブ・ザ・ユーエスエー（Proc. Natl. Ac
ad. Sci. USA），81巻，5330（1984）」が挙げられる。
培地のｐＨは約５〜８に調整するのが好ましい。培養は
通常約20℃〜35℃で約24〜72時間行ない、必要に応じて
通気や撹拌を加える。

【００３８】宿主が昆虫細胞または昆虫である形質転換
体を培養する際、培地としては、Grace's Insect Mediu
m（Grace, T.C.C., ネイチャー（Nature）,195, 788 (1
962)）に非動化した10％ウシ血清等の添加物を適宜加え
たものなどが用いられる。培地のｐＨは約6.2〜6.4に調
整するのが好ましい。培養は通常約27℃で約３〜５日間
行ない、必要に応じて通気や撹拌を加える。宿主が動物
細胞である形質転換体を培養する際、培地としては、例
えば、約５〜20％の胎児牛血清を含むＭＥＭ培地〔サイ
エンス（Science），122巻，501 (1952)〕，ＤＭＥＭ培
地〔ヴィロロジー（Virology），8巻，396 (1959)〕，
ＲＰＭＩ1640培地〔ジャーナル・オブ・ザ・アメリカン
・メディカル・アソシエーション（The Journal of the
American Medical Association）199巻，519 (196
7)〕，199培地〔プロシージング・オブ・ザ・ソサイエ
ティ・フォー・ザ・バイオロジカル・メディスン（Proc
eeding of the Society for the Biological Medicin
e），73巻，１ (1950)〕などが用いられる。ｐＨは約６
〜８であるのが好ましい。培養は通常約30℃〜40℃で約
15〜60時間行ない、必要に応じて通気や撹拌を加える。
以上のようにして、形質転換体の細胞内、細胞膜または
細胞外に本発明のＧタンパク質共役型レセプタータンパ
ク質を生成せしめることができる。

【００３９】上記培養物から本発明のレセプタータンパ
ク質を分離精製するには、例えば、下記の方法により行
なうことができる。本発明のレセプタータンパク質を培
養菌体あるいは細胞から抽出するに際しては、培養後、
公知の方法で菌体あるいは細胞を集め、これを適当な緩
衝液に懸濁し、超音波、リゾチームおよび／または凍結
融解などによって菌体あるいは細胞を破壊したのち、遠
心分離やろ過によりレセプタータンパク質の粗抽出液を
得る方法などが適宜用いられる。緩衝液の中に尿素や塩
酸グアニジンなどのタンパク質変性剤や、トリトンＸ−
100^TMなどの界面活性剤が含まれていてもよい。培養液
中にレセプタータンパク質が分泌される場合には、培養
終了後、公知の方法で菌体あるいは細胞と上清とを分離
し、上清を集める。このようにして得られた培養上清、
あるいは抽出液中に含まれるレセプタータンパク質の精
製は、公知の分離・精製法を適切に組み合わせて行なう
ことができる。これらの公知の分離、精製法としては、
塩析や溶媒沈澱法などの溶解度を利用する方法、透析
法、限外ろ過法、ゲルろ過法、およびＳＤＳ−ポリアク
リルアミドゲル電気泳動法などの主として分子量の差を
利用する方法、イオン交換クロマトグラフィーなどの荷
電の差を利用する方法、アフィニティークロマトグラフ
ィーなどの特異的親和性を利用する方法、逆相高速液体
クロマトグラフィーなどの疎水性の差を利用する方法、
等電点電気泳動法などの等電点の差を利用する方法など
が用いられる。

【００４０】このようにして得られるレセプタータンパ
ク質が遊離体で得られた場合には、公知の方法あるいは
それに準じる方法によって塩に変換することができ、逆
に塩で得られた場合には公知の方法あるいはそれに準じ
る方法により、遊離体または他の塩に変換することがで
きる。なお、組換え体が産生するレセプタータンパク質
を、精製前または精製後に適当な蛋白修飾酵素を作用さ
せることにより、任意に修飾を加えたり、ポリペプチド
を部分的に除去することもできる。蛋白修飾酵素として
は、例えば、トリプシン、キモトリプシン、アルギニル
エンドペプチダーゼ、プロテインキナーゼ、グリコシダ
ーゼなどが用いられる。このようにして生成する本発明
のレセプタータンパク質またはその塩の活性は、標識し
たリガンドとの結合実験および特異抗体を用いたエンザ
イムイムノアッセイなどにより測定することができる。

【００４１】本発明のレセプタータンパク質もしくはそ
の部分ペプチドまたはその塩に対する抗体は、本発明の
レセプタータンパク質もしくはその部分ペプチドまたは
その塩を認識し得る抗体であれば、ポリクローナル抗
体、モノクローナル抗体の何れであってもよい。本発明
のレセプタータンパク質もしくはその部分ペプチドまた
はその塩（以下、本発明のレセプタータンパク質等と略
記する場合がある）に対する抗体は、本発明のレセプタ
ータンパク質等を抗原として用い、公知の抗体または抗
血清の製造法に従って製造することができる。

【００４２】〔モノクローナル抗体の作製〕 （a）モノクローナル抗体産生細胞の作製 本発明のレセプタータンパク質等は、哺乳動物に対して
投与により抗体産生が可能な部位にそれ自体あるいは担
体、希釈剤とともに投与される。投与に際して抗体産生
能を高めるため、完全フロイントアジュバントや不完全
フロイントアジュバントを投与してもよい。投与は通常
２〜６週毎に１回ずつ、計２〜10回程度行なわれる。用
いられる哺乳動物としては、例えば、サル、ウサギ、イ
ヌ、モルモット、マウス、ラット、ヒツジ、ヤギが挙げ
られるが、マウスおよびラットが好ましく用いられる。
モノクローナル抗体産生細胞の作製に際しては、抗原を
免疫された温血動物、例えば、マウスから抗体価の認め
られた個体を選択し最終免疫の２〜５日後に脾臓または
リンパ節を採取し、それらに含まれる抗体産生細胞を骨
髄腫細胞と融合させることにより、モノクローナル抗体
産生ハイブリドーマを調製することができる。抗血清中
の抗体価の測定は、例えば、後記の標識化レセプタータ
ンパク質等と抗血清とを反応させたのち、抗体に結合し
た標識剤の活性を測定することにより行なうことができ
る。融合操作は既知の方法、例えば、ケーラーとミルス
タインの方法〔ネイチャー（Nature）、256巻、495頁
（1975年）〕に従い実施することができる。融合促進剤
としては、例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）
やセンダイウィルスなどが挙げられるが、好ましくはＰ
ＥＧが用いられる。骨髄腫細胞としては、例えば、ＮＳ
−１、Ｐ３Ｕ１、SP2/0などが挙げられるが、Ｐ３Ｕ１
が好ましく用いられる。用いられる抗体産生細胞（脾臓
細胞）数と骨髄腫細胞数との好ましい比率は１：１〜2
0：１程度であり、ＰＥＧ（好ましくは、PEG1000〜PEG6
000）が10〜80％程度の濃度で添加され、約20〜40℃、
好ましくは約30〜37℃で約１〜10分間インキュベートす
ることにより効率よく細胞融合を実施できる。

【００４３】モノクローナル抗体産生ハイブリドーマの
スクリーニングには種々の方法が使用できるが、例え
ば、レセプタータンパク質等の抗原を直接あるいは担体
とともに吸着させた固相（例、マイクロプレート）にハ
イブリドーマ培養上清を添加し、次に放射性物質や酵素
などで標識した抗免疫グロブリン抗体（細胞融合に用い
られる細胞がマウスの場合、抗マウス免疫グロブリン抗
体が用いられる）またはプロテインＡを加え、固相に結
合したモノクローナル抗体を検出する方法、抗免疫グロ
ブリン抗体またはプロテインＡを吸着させた固相にハイ
ブリドーマ培養上清を添加し、放射性物質や酵素などで
標識したレセプタータンパク質等を加え、固相に結合し
たモノクローナル抗体を検出する方法などが挙げられ
る。モノクローナル抗体の選別は、公知あるいはそれに
準じる方法に従って行なうことができるが、通常はＨＡ
Ｔ（ヒポキサンチン、アミノプテリン、チミジン）を添
加した動物細胞用培地などで行なうことができる。選別
および育種用培地としては、ハイブリドーマが生育でき
るものならばどのような培地を用いても良い。例えば、
１〜20％、好ましくは10〜20％の牛胎児血清を含むＲＰ
ＭＩ1640培地、１〜10％の牛胎児血清を含むＧＩＴ培地
（和光純薬工業（株））またはハイブリドーマ培養用無
血清培地（ＳＦＭ−１０１、日水製薬（株））などを用
いることができる。培養温度は、通常20〜40℃、好まし
くは約37℃である。培養時間は、通常５日〜３週間、好
ましくは１週間〜２週間である。培養は、通常５％炭酸
ガス下で行なうことができる。ハイブリドーマ培養上清
の抗体価は、上記の抗血清中の抗体価の測定と同様にし
て測定できる。

【００４４】（b）モノクローナル抗体の精製 モノクローナル抗体の分離精製は、通常のポリクローナ
ル抗体の分離精製と同様に免疫グロブリンの分離精製法
〔例、塩析法、アルコール沈殿法、等電点沈殿法、電気
泳動法、イオン交換体（例、ＤＥＡＥ）による吸脱着
法、超遠心法、ゲルろ過法、抗原結合固相またはプロテ
インＡあるいはプロテインＧなどの活性吸着剤により抗
体のみを採取し、結合を解離させて抗体を得る特異的精
製法〕に従って行なうことができる。

【００４５】〔ポリクローナル抗体の作製〕本発明のポ
リクローナル抗体は、公知あるいはそれに準じる方法に
したがって製造することができる。例えば、免疫抗原
（本発明のタンパク質等の抗原）とキャリアータンパク
質との複合体をつくり、上記のモノクローナル抗体の製
造法と同様に哺乳動物に免疫を行ない、該免疫動物から
本発明のレセプタータンパク質等に対する抗体含有物を
採取して、抗体の分離精製を行なうことにより製造でき
る。哺乳動物を免疫するために用いられる免疫抗原とキ
ャリアータンパク質との複合体に関し、キャリアータン
パク質の種類およびキャリアーとハプテンとの混合比
は、キャリアーに架橋させて免疫したハプテンに対して
抗体が効率良くできれば、どの様なものをどの様な比率
で架橋させてもよいが、例えば、ウシ血清アルブミン、
ウシサイログロブリン、キーホール・リンペット・ヘモ
シアニン等を重量比でハプテン1に対し、約0.1〜20、好
ましくは約１〜５の割合でカプルさせる方法が用いられ
る。また、ハプテンとキャリアーのカプリングには、種
々の縮合剤を用いることができるが、グルタルアルデヒ
ドやカルボジイミド、マレイミド活性エステル、チオー
ル基、ジチオビリジル基を含有する活性エステル試薬等
が用いられる。縮合生成物は、温血動物に対して、抗体
産生が可能な部位にそれ自体あるいは担体、希釈剤とと
もに投与される。投与に際して抗体産生能を高めるた
め、完全フロイントアジュバントや不完全フロイントア
ジュバントを投与してもよい。投与は、通常約２〜６週
毎に１回ずつ、計約３〜10回程度行なうことができる。
ポリクローナル抗体は、上記の方法で免疫された哺乳動
物の血液、腹水など、好ましくは血液から採取すること
ができる。抗血清中のポリクローナル抗体価の測定は、
上記の血清中の抗体価の測定と同様にして測定できる。
ポリクローナル抗体の分離精製は、上記のモノクローナ
ル抗体の分離精製と同様の免疫グロブリンの分離精製法
に従って行なうことができる。

【００４６】本発明のレセプタータンパク質またはその
塩、その部分ペプチドまたはその塩、および該レセプタ
ータンパク質またはその部分ペプチドをコードするＤＮ
Ａは、（1）本発明のＧタンパク質共役型レセプタータ
ンパク質に対するリガンド（アゴニスト）の決定、
（2）本発明のＧタンパク質共役型レセプタータンパク
質の機能不全に関連する疾患の予防および／または治療
剤、（3）遺伝子診断剤、（4）本発明のレセプタータン
パク質またはその部分ペプチドの発現量を変化させる化
合物のスクリーニング方法、（5）本発明のレセプター
タンパク質またはその部分ペプチドの発現量を変化させ
る化合物を含有する各種疾病の予防および／または治療
剤、（6）本発明のＧタンパク質共役型レセプタータン
パク質に対するリガンドの定量法、（7）本発明のＧタ
ンパク質共役型レセプタータンパク質とリガンドとの結
合性を変化させる化合物（アゴニスト、アンタゴニスト
など）のスクリーニング方法、（8）本発明のＧタンパ
ク質共役型レセプタータンパク質とリガンドとの結合性
を変化させる化合物（アゴニスト、アンタゴニスト）を
含有する各種疾病の予防および／または治療剤、（9）
本発明のレセプタータンパク質もしくはその部分ペプチ
ドまたはその塩の定量、（10）細胞膜における本発明の
レセプタータンパク質またはその部分ペプチドの量を変
化させる化合物のスクリーニング方法、（11）細胞膜に
おける本発明のレセプタータンパク質またはその部分ペ
プチドの量を変化させる化合物を含有する各種疾病の予
防および／または治療剤、（12）本発明のレセプタータ
ンパク質もしくはその部分ペプチドまたはその塩に対す
る抗体による中和、（13）本発明のＧタンパク質共役型
レセプタータンパク質をコードするＤＮＡを有する非ヒ
トトランスジェニック動物の作出などに用いることがで
きる。特に、本発明の組換え型Ｇタンパク質共役型レセ
プタータンパク質の発現系を用いたレセプター結合アッ
セイ系を用いることによって、ヒトやその他の哺乳動物
に特異的なＧタンパク質共役型レセプターに対するリガ
ンドの結合性を変化させる化合物（例、アゴニスト、ア
ンタゴニストなど）をスクリーニングすることができ、
該アゴニストまたはアンタゴニストを各種疾病の予防・
治療剤などとして使用することができる。本発明のレセ
プタータンパク質もしくは部分ペプチドまたはその塩
（以下、本発明のレセプタータンパク質等と略記する場
合がある）、本発明のレセプタータンパク質またはその
部分ペプチドをコードするＤＮＡ（以下、本発明のＤＮ
Ａと略記する場合がある）および本発明のレセプタータ
ンパク質等に対する抗体（以下、本発明の抗体と略記す
る場合がある）の用途について、以下に具体的に説明す
る。

【００４７】（1）本発明のＧタンパク質共役型レセプ
タータンパク質に対するリガンド（アゴニスト）の決定 本発明のレセプタータンパク質もしくはその塩または本
発明の部分ペプチドもしくはその塩は、本発明のレセプ
タータンパク質またはその塩に対するリガンド（アゴニ
スト）を探索し、または決定するための試薬として有用
である。すなわち、本発明は、本発明のレセプタータン
パク質もしくはその塩または本発明の部分ペプチドもし
くはその塩と、試験化合物とを接触させることを特徴と
する本発明のレセプタータンパク質に対するリガンドの
決定方法を提供する。試験化合物としては、公知のリガ
ンド（例えば、アンギオテンシン、ボンベシン、カナビ
ノイド、コレシストキニン、グルタミン、セロトニン、
メラトニン、ニューロペプチドＹ、オピオイド、プリ
ン、バソプレッシン、オキシトシン、ＰＡＣＡＰ（例、
ＰＡＣＡＰ２７、ＰＡＣＡＰ３８）、セクレチン、グル
カゴン、カルシトニン、アドレノメジュリン、ソマトス
タチン、ＧＨＲＨ、ＣＲＦ、ＡＣＴＨ、ＧＲＰ、ＰＴ
Ｈ、ＶＩＰ（バソアクティブ インテスティナル アン
ドリレイテッド ポリペプチド）、ソマトスタチン、ド
ーパミン、モチリン、アミリン、ブラジキニン、ＣＧＲ
Ｐ（カルシトニンジーンリレーティッドペプチド）、ロ
イコトリエン、パンクレアスタチン、プロスタグランジ
ン、トロンボキサン、アデノシン、アドレナリン、ケモ
カインスーパーファミリー（例、ＩＬ−８、ＧＲＯα、
ＧＲＯβ、ＧＲＯγ、ＮＡＰ−２、ＥＮＡ−７８、ＧＣ
Ｐ−２、ＰＦ４、ＩＰ１０、Ｍｉｇ、PBSF/SDF-1などの
ＣＸＣケモカインサブファミリー；MCAF/MCP-1、ＭＣＰ
−２、ＭＣＰ−３、ＭＣＰ−４、eotaxin、ＲＡＮＴＥ
Ｓ、ＭＩＰ−１α、ＭＩＰ−１β、ＨＣＣ−１、MIP-3
α/LARC、MIP-3β/ELC、Ｉ−３０９、ＴＡＲＣ、ＭＩＰ
Ｆ−１、MIPF-2/eotaxin-2、ＭＤＣ、DC-CK1/PARC、Ｓ
ＬＣなどのＣＣケモカインサブファミリー；lymphotact
inなどのＣケモカインサブファミリー；fractalkineな
どのＣＸ３ケモカインサブファミリー等）、エンドセリ
ン、エンテロガストリン、ヒスタミン、ニューロテンシ
ン、ＴＲＨ、パンクレアティックポリペプタイド、ガラ
ニン、リゾホスファチジン酸（ＬＰＡ）、スフィンゴシ
ン１−リン酸など）の他に、例えば、ヒトまたは哺乳動
物（例えば、マウス、ラット、ブタ、ウシ、ヒツジ、サ
ルなど）の組織抽出物、細胞培養上清などが用いられ
る。例えば、該組織抽出物、細胞培養上清などを本発明
のレセプタータンパク質に添加し、細胞刺激活性などを
測定しながら分画し、最終的に単一のリガンドを得るこ
とができる。

【００４８】具体的には、本発明のリガンド決定方法
は、本発明のレセプタータンパク質もしくはその部分ペ
プチドもしくはその塩を用いるか、または組換え型レセ
プタータンパク質の発現系を構築し、該発現系を用いた
レセプター結合アッセイ系を用いることによって、本発
明のレセプタータンパク質に結合して細胞刺激活性（例
えば、アラキドン酸遊離、アセチルコリン遊離、細胞内
Ｃａ²⁺遊離、細胞内ｃＡＭＰ生成、細胞内ｃＧＭＰ生
成、イノシトールリン酸産生、細胞膜電位変動、細胞内
タンパク質のリン酸化、ｃ−ｆｏｓ活性化、ｐＨの低下
などを促進する活性または抑制する活性）を有する化合
物（例えば、ペプチド、タンパク質、非ペプチド性化合
物、合成化合物、発酵生産物など）またはその塩を決定
する方法である。本発明のリガンド決定方法において
は、本発明のレセプタータンパク質またはその部分ペプ
チドと試験化合物とを接触させた場合の、例えば、該レ
セプタータンパク質または該部分ペプチドに対する試験
化合物の結合量や、細胞刺激活性などを測定することを
特徴とする。

【００４９】より具体的には、本発明は、 標識した試験化合物を、本発明のレセプタータンパク
質もしくはその塩または本発明の部分ペプチドもしくは
その塩に接触させた場合における、標識した試験化合物
の該タンパク質もしくはその塩、または該部分ペプチド
もしくはその塩に対する結合量を測定することを特徴と
する本発明のレセプタータンパク質またはその塩に対す
るリガンドの決定方法、 標識した試験化合物を、本発明のレセプタータンパク
質を含有する細胞または該細胞の膜画分に接触させた場
合における、標識した試験化合物の該細胞または該膜画
分に対する結合量を測定することを特徴とする本発明の
レセプタータンパク質またはその塩に対するリガンドの
決定方法、 標識した試験化合物を、本発明のレセプタータンパク
質をコードするＤＮＡを含有する形質転換体を培養する
ことによって細胞膜上に発現したレセプタータンパク質
に接触させた場合における、標識した試験化合物の該レ
セプタータンパク質またはその塩に対する結合量を測定
することを特徴とする本発明のレセプタータンパク質に
対するリガンドの決定方法、 試験化合物を、本発明のレセプタータンパク質を含有
する細胞に接触させた場合における、レセプタータンパ
ク質を介した細胞刺激活性（例えば、アラキドン酸遊
離、アセチルコリン遊離、細胞内Ｃａ²⁺遊離、細胞内ｃ
ＡＭＰ生成、細胞内ｃＧＭＰ生成、イノシトールリン酸
産生、細胞膜電位変動、細胞内タンパク質のリン酸化、
ｃ−ｆｏｓの活性化、ｐＨの低下などを促進する活性ま
たは抑制する活性など）を測定することを特徴とする本
発明のレセプタータンパク質またはその塩に対するリガ
ンドの決定方法、および 試験化合物を、本発明のレセプタータンパク質をコー
ドするＤＮＡを含有する形質転換体を培養することによ
って細胞膜上に発現したレセプタータンパク質に接触さ
せた場合における、レセプタータンパク質を介する細胞
刺激活性（例えば、アラキドン酸遊離、アセチルコリン
遊離、細胞内Ｃａ²⁺遊離、細胞内ｃＡＭＰ生成、細胞内
ｃＧＭＰ生成、イノシトールリン酸産生、細胞膜電位変
動、細胞内タンパク質のリン酸化、ｃ−ｆｏｓの活性
化、ｐＨの低下などを促進する活性または抑制する活性
など）を測定することを特徴とする本発明のレセプター
タンパク質またはその塩に対するリガンドの決定方法を
提供する。

【００５０】特に、上記〜の試験を行ない、試験化
合物が本発明のレセプタータンパク質に結合することを
確認した後に、上記〜の試験を行なうことが好まし
い。まず、リガンド決定方法に用いるレセプタータンパ
ク質としては、上記した本発明のレセプタータンパク質
または本発明の部分ペプチドを含有するものであれば何
れのものであってもよいが、動物細胞を用いて大量発現
させたレセプタータンパク質が適している。

【００５１】本発明のレセプタータンパク質を製造する
には、上記の発現方法が用いられるが、該レセプタータ
ンパク質をコードするＤＮＡを哺乳動物細胞や昆虫細胞
で発現することにより行なうことが好ましい。目的とす
るタンパク質部分をコードするＤＮＡ断片には、通常、
ｃＤＮＡが用いられるが、必ずしもこれに制約されるも
のではない。例えば、遺伝子断片や合成ＤＮＡを用いて
もよい。本発明のレセプタータンパク質をコードするＤ
ＮＡ断片を宿主動物細胞に導入し、それらを効率よく発
現させるためには、該ＤＮＡ断片を昆虫を宿主とするバ
キュロウイルスに属する核多角体病ウイルス（nuclear
polyhedrosis virus；ＮＰＶ）のポリヘドリンプロモー
ター、ＳＶ４０由来のプロモーター、レトロウイルスの
プロモーター、メタロチオネインプロモーター、ヒトヒ
ートショックプロモーター、サイトメガロウイルスプロ
モーター、ＳＲαプロモーターなどの下流に組み込むの
が好ましい。発現したレセプターの量と質の検査は公知
の方法で行うことができる。例えば、文献〔Nambi，P．
ら、ザ・ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミスト
リー（J. Biol. Chem.），267巻，19555〜19559頁，199
2年〕に記載の方法に従って行うことができる。

【００５２】したがって、本発明のリガンド決定方法に
おいて、本発明のレセプタータンパク質もしくはその部
分ペプチドまたはその塩を含有するものとしては、公知
の方法に従って精製したレセプタータンパク質もしくは
その部分ペプチドまたはその塩であってもよいし、該レ
セプタータンパク質を含有する細胞またはその細胞膜画
分を用いてもよい。本発明のリガンド決定方法におい
て、本発明のレセプタータンパク質を含有する細胞を用
いる場合、該細胞をグルタルアルデヒド、ホルマリンな
どで固定化してもよい。固定化方法は公知の方法に従っ
て行なうことができる。本発明のレセプタータンパク質
を含有する細胞としては、本発明のレセプタータンパク
質を発現した宿主細胞をいうが、該宿主細胞としては、
大腸菌、枯草菌、酵母、昆虫細胞、動物細胞などが用い
られる。細胞膜画分としては、細胞を破砕した後、公知
の方法で得られる細胞膜が多く含まれる画分のことをい
う。細胞の破砕方法としては、Potter−Elvehjem型ホモ
ジナイザーで細胞を押し潰す方法、ワーリングブレンダ
ーやポリトロン（Kinematica社製）による破砕、超音波
による破砕、フレンチプレスなどで加圧しながら細胞を
細いノズルから噴出させることによる破砕などが挙げら
れる。細胞膜の分画には、分画遠心分離法や密度勾配遠
心分離法などの遠心力による分画法が主として用いられ
る。例えば、細胞破砕液を低速（500〜3000 ｒｐｍ）で
短時間（通常、約１分〜10分）遠心し、上清をさらに高
速（15000〜30000 ｒｐｍ）で通常30分〜２時間遠心
し、得られる沈澱を膜画分とする。該膜画分中には、発
現したレセプタータンパク質と細胞由来のリン脂質や膜
タンパク質などの膜成分が多く含まれる。

【００５３】該レセプタータンパク質を含有する細胞や
その膜画分中のレセプタータンパク質の量は、1細胞当
たり10³〜10⁸分子であるのが好ましく、10⁵〜10⁷分子で
あるのが好適である。なお、発現量が多いほど膜画分当
たりのリガンド結合活性（比活性）が高くなり、高感度
なスクリーニング系の構築が可能になるばかりでなく、
同一ロットで大量の試料を測定できるようになる。本発
明のレセプタータンパク質またはその塩に対するリガン
ドを決定する上記の〜の方法を実施するためには、
適当なレセプタータンパク質画分と、標識した試験化合
物が必要である。レセプタータンパク質画分としては、
天然型のレセプタータンパク質画分か、またはそれと同
等の活性を有する組換え型レセプター画分などが望まし
い。ここで、同等の活性とは、同等のリガンド結合活
性、シグナル情報伝達作用などを示す。標識した試験化
合物としては、〔³Ｈ〕、〔¹²⁵Ｉ〕、〔¹⁴Ｃ〕、
〔³⁵Ｓ〕などで標識したアンギオテンシン、ボンベシ
ン、カナビノイド、コレシストキニン、グルタミン、セ
ロトニン、メラトニン、ニューロペプチドＹ、オピオイ
ド、プリン、バソプレッシン、オキシトシン、ＰＡＣＡ
Ｐ（例、ＰＡＣＡＰ２７、ＰＡＣＡＰ３８）、セクレチ
ン、グルカゴン、カルシトニン、アドレノメジュリン、
ソマトスタチン、ＧＨＲＨ、ＣＲＦ、ＡＣＴＨ、ＧＲ
Ｐ、ＰＴＨ、ＶＩＰ（バソアクティブ インテスティナ
ル アンド リイテッド ポリペプチド）、ソマトスタ
チン、ドーパミン、モチリン、アミリン、ブラジキニ
ン、ＣＧＲＰ（カルシトニンジーンリレーティッドペプ
チド）、ロイコトリエン、パンクレアスタチン、プロス
タグランジン、トロンボキサン、アデノシン、アドレナ
リン、ケモカインスーパーファミリー（例、ＩＬ−８、
ＧＲＯα、ＧＲＯβ、ＧＲＯγ、ＮＡＰ−２、ＥＮＡ−
７８、ＧＣＰ−２、ＰＦ４、ＩＰ１０、Ｍｉｇ、PBSF/S
DF-1などのCXCケモカインサブファミリー；MCAF/MCP-
1、ＭＣＰ−２、ＭＣＰ−３、ＭＣＰ−４、eotaxin、Ｒ
ＡＮＴＥＳ、ＭＩＰ−１α、ＭＩＰ−１β、ＨＣＣ−
１、MIP-3α/LARC、MIP-3β/ELC、Ｉ−３０９、ＴＡＲ
Ｃ、ＭＩＰＦ−１、MIPF-2/eotaxin-2、ＭＤＣ、DC-CK1
/PARC、ＳＬＣなどのＣＣケモカインサブファミリー；l
ymphotactinなどのＣケモカインサブファミリー；fract
alkineなどのＣＸ３ケモカインサブファミリー等）、エ
ンドセリン、エンテロガストリン、ヒスタミン、ニュー
ロテンシン、ＴＲＨ、パンクレアティックポリペプタイ
ド、ガラニン、リゾホスファチジン酸（ＬＰＡ）、スフ
ィンゴシン１−リン酸などが好適である。

【００５４】具体的には、本発明のレセプタータンパク
質またはその塩に対するリガンドの決定方法を行なうに
は、まず本発明のレセプタータンパク質を含有する細胞
または細胞の膜画分を、決定方法に適したバッファーに
懸濁することによりレセプター標品を調製する。バッフ
ァーには、ｐＨ４〜10（望ましくはｐＨ６〜８）のリン
酸バッファー、トリス−塩酸バッファーなどのリガンド
とレセプタータンパク質との結合を阻害しないバッファ
ーであればいずれでもよい。また、非特異的結合を低減
させる目的で、ＣＨＡＰＳ、Tween-80^TM（花王−アトラ
ス社）、ジギトニン、デオキシコレートなどの界面活性
剤やウシ血清アルブミンやゼラチンなどの各種タンパク
質をバッファーに加えることもできる。さらに、プロテ
アーゼによるリセプターやリガンドの分解を抑える目的
でＰＭＳＦ、ロイペプチン、Ｅ−６４（ペプチド研究所
製）、ペプスタチンなどのプロテアーゼ阻害剤を添加す
ることもできる。0.01〜10 ｍｌの該レセプター溶液
に、一定量（5000〜500000 ｃｐｍ）の〔³Ｈ〕、〔¹²⁵
Ｉ〕、〔¹⁴Ｃ〕、〔³⁵Ｓ〕などで標識した試験化合物を
共存させる。非特異的結合量（ＮＳＢ）を知るために大
過剰の未標識の試験化合物を加えた反応チューブも用意
する。反応は約０℃〜50℃、望ましくは約４℃〜37℃
で、約20分〜24時間、望ましくは約30分〜３時間行な
う。反応後、ガラス繊維濾紙等で濾過し、適量の同バッ
ファーで洗浄した後、ガラス繊維濾紙に残存する放射活
性を液体シンチレーションカウンターあるいはγ−カウ
ンターで計測する。全結合量（Ｂ）から非特異的結合量
（ＮＳＢ）を引いたカウント（Ｂ−ＮＳＢ）が０ ｃｐ
ｍを越える試験化合物を本発明のレセプタータンパク質
またはその塩に対するリガンド（アゴニスト）として選
択することができる。

【００５５】本発明のレセプタータンパク質またはその
塩に対するリガンドを決定する上記の〜の方法を実
施するためには、該レセプタータンパク質を介する細胞
刺激活性（例えば、アラキドン酸遊離、アセチルコリン
遊離、細胞内Ｃａ²⁺遊離、細胞内ｃＡＭＰ生成、細胞内
ｃＧＭＰ生成、イノシトールリン酸産生、細胞膜電位変
動、細胞内タンパク質のリン酸化、ｃ−ｆｏｓの活性
化、ｐＨの低下などを促進する活性または抑制する活性
など）を公知の方法または市販の測定用キットを用いて
測定することができる。具体的には、まず、レセプター
タンパク質を含有する細胞をマルチウェルプレート等に
培養する。リガンド決定を行なうにあたっては前もって
新鮮な培地あるいは細胞に毒性を示さない適当なバッフ
ァーに交換し、試験化合物などを添加して一定時間イン
キュベートした後、細胞を抽出あるいは上清液を回収し
て、生成した産物をそれぞれの方法に従って定量する。
細胞刺激活性の指標とする物質（例えば、アラキドン酸
など）の生成が、細胞が含有する分解酵素によって検定
困難な場合は、該分解酵素に対する阻害剤を添加してア
ッセイを行なってもよい。また、ｃＡＭＰ産生抑制など
の活性については、フォルスコリンなどで細胞の基礎的
産生量を増大させておいた細胞に対する産生抑制作用と
して検出することができる。

【００５６】本発明のレセプタータンパク質またはその
塩に結合するリガンド決定用キットは、本発明のレセプ
タータンパク質もしくはその塩、本発明の部分ペプチド
もしくはその塩、本発明のレセプタータンパク質を含有
する細胞、または本発明のレセプタータンパク質を含有
する細胞の膜画分などを含有するものである。本発明の
リガンド決定用キットの例としては、次のものが挙げら
れる。 1. リガンド決定用試薬 測定用緩衝液および洗浄用緩衝液 Hanks' Balanced Salt Solution（ギブコ社製）に、0.0
5％のウシ血清アルブミン（シグマ社製）を加えたも
の。孔径0.45 μｍのフィルターで濾過滅菌し、４℃で
保存するか、あるいは用時調製しても良い。 Ｇタンパク質共役型レセプタータンパク質標品 本発明のレセプタータンパク質を発現させたＣＨＯ細胞
を、12穴プレートに5×10⁵個／穴で継代し、37℃、５％
CO₂、95％ airで２日間培養したもの。 標識試験化合物 市販の〔³Ｈ〕、〔¹²⁵Ｉ〕、〔¹⁴Ｃ〕、〔³⁵Ｓ〕などで
標識した化合物、または適当な方法で標識化したもの。
水溶液の状態のものを４℃あるいは−20℃にて保存し、
用時に測定用緩衝液にて１ μＭに希釈する。水に難溶
性を示す試験化合物については、ジメチルホルムアミ
ド、ＤＭＳＯ、メタノール等に溶解する。 非標識試験化合物 標識化合物と同じものを100〜1000倍濃い濃度に調製す
る。

【００５７】2. 測定法 12穴組織培養用プレートにて培養した本発明のレセプ
タータンパク質発現ＣＨＯ細胞を、測定用緩衝液１ ｍ
ｌで２回洗浄した後、490 μｌの測定用緩衝液を各穴に
加える。 標識試験化合物を５ μｌ加え、室温にて１時間反応
させる。非特異的結合量を知るためには非標識試験化合
物を５ μｌ加えておく。 反応液を除去し、１ ｍｌの洗浄用緩衝液で3回洗浄す
る。細胞に結合した標識試験化合物を0.2Ｎ ＮａＯＨ−
１％ ＳＤＳで溶解し、４ ｍｌの液体シンチレーターＡ
（和光純薬製）と混合する。 液体シンチレーションカウンター（ベックマンコール
ター社製）を用いて放射活性を測定する。

【００５８】本発明のレセプタータンパク質またはその
塩に結合することができるリガンドとしては、例えば、
視床下部、大脳皮質、結腸癌、肺癌、心臓、胎盤、肺な
どに特異的に存在する物質などが挙げられ、具体的に
は、アンギオテンシン、ボンベシン、カナビノイド、コ
レシストキニン、グルタミン、セロトニン、メラトニ
ン、ニューロペプチドＹ、オピオイド、プリン、バソプ
レッシン、オキシトシン、ＰＡＣＡＰ（例、ＰＡＣＡＰ
２７、ＰＡＣＡＰ３８）、セクレチン、グルカゴン、カ
ルシトニン、アドレノメジュリン、ソマトスタチン、Ｇ
ＨＲＨ、ＣＲＦ、ＡＣＴＨ、ＧＲＰ、ＰＴＨ、ＶＩＰ
（バソアクティブ インテスティナル アンドリイテッ
ド ポリペプチド）、ソマトスタチン、ドーパミン、モ
チリン、アミリン、ブラジキニン、ＣＧＲＰ（カルシト
ニンジーンリレーティッドペプチド）、ロイコトリエ
ン、パンクレアスタチン、プロスタグランジン、トロン
ボキサン、アデノシン、アドレナリン、ケモカインスー
パーファミリー（例、ＩＬ−８、ＧＲＯα、ＧＲＯβ、
ＧＲＯγ、ＮＡＰ−２、ＥＮＡ−７８、ＧＣＰ−２、Ｐ
Ｆ４、ＩＰ１０、Ｍｉｇ、PBSF/SDF-1などのＣＸＣケモ
カインサブファミリー；MCAF/MCP-1、ＭＣＰ−２、ＭＣ
Ｐ−３、ＭＣＰ−４、eotaxin、ＲＡＮＴＥＳ、ＭＩＰ
−１α、ＭＩＰ−１β、ＨＣＣ−１、MIP-3α/LARC、MI
P-3β/ELC、Ｉ−３０９、ＴＡＲＣ、ＭＩＰＦ−１、MIP
F-2/eotaxin-2、ＭＤＣ、DC-CK1/PARC、ＳＬＣなどのＣ
Ｃケモカインサブファミリー；lymphotactinなどのＣケ
モカインサブファミリー；fractalkineなどのＣＸ３ケ
モカインサブファミリー等）、エンドセリン、エンテロ
ガストリン、ヒスタミン、ニューロテンシン、ＴＲＨ、
パンクレアティックポリペプタイド、ガラニン、リゾホ
スファチジン酸（ＬＰＡ）、スフィンゴシン１−リン酸
などが用いられる。

【００５９】（2）本発明のＧタンパク質共役型レセプ
タータンパク質の機能不全に関連する疾患の予防および
／または治療剤 上記（1）の方法において、本発明のレセプタータンパ
ク質に対するリガンドが明らかになれば、該リガンドが
有する作用に応じて、本発明のレセプタータンパク質
または該レセプタータンパク質をコードするＤＮＡ
を、本発明のレセプタータンパク質の機能不全に関連す
る疾患の予防および／または治療剤などの医薬として使
用することができる。例えば、生体内において本発明の
レセプタータンパク質が減少しているためにリガンドの
生理作用が期待できない（該レセプタータンパク質の欠
乏症）患者がいる場合に、本発明のレセプタータンパ
ク質を該患者に投与し該レセプタータンパク質の量を補
充したり、（イ）本発明のレセプタータンパク質をコ
ードするＤＮＡを該患者に投与し発現させることによっ
て、あるいは（ロ）対象となる細胞に本発明のレセプタ
ータンパク質をコードするＤＮＡを挿入し発現させた後
に、該細胞を該患者に移植することなどによって、患者
の体内におけるレセプタータンパク質の量を増加させ、
リガンドの作用を充分に発揮させることができる。すな
わち、本発明のレセプタータンパク質をコードするＤＮ
Ａは、安全で低毒性な本発明のレセプタータンパク質の
機能不全に関連する疾患の予防および／または治療剤と
して有用である。本発明のレセプタータンパク質また
は該レセプタータンパク質をコードするＤＮＡは中枢疾
患（例えば、アルツハイマー病、痴呆、摂食障害な
ど）、炎症性疾患（例えば、アレルギー、喘息、リュウ
マチなど）、循環器疾患（例えば、高血圧症、心肥大、
狭心症、動脈硬化症等）、癌（例えば、非小細胞肺癌、
卵巣癌、前立腺癌、胃癌、膀胱癌、乳癌、子宮頸部癌、
結腸癌、直腸癌等）、代謝性疾患（例えば、糖尿病、糖
尿病合併症、肥満、痛風、白内障等）、免疫系疾患（例
えば、自己免疫疾患等）、消化器系疾患（例えば、胃潰
瘍、十二指腸潰瘍、胃炎、逆流性食道炎等）などの予防
および／または治療に有用である。本発明のレセプター
タンパク質を上記予防・治療剤として使用する場合は、
常套手段に従って製剤化することができる。一方、本発
明のレセプタータンパク質をコードするＤＮＡ（以下、
本発明のＤＮＡと略記する場合がある）を上記予防・治
療剤として使用する場合は、本発明のＤＮＡを単独ある
いはレトロウイルスベクター、アデノウイルスベクタ
ー、アデノウイルスアソシエーテッドウイルスベクター
などの適当なベクターに挿入した後、常套手段に従って
実施することができる。本発明のＤＮＡは、そのまま
で、あるいは摂取促進のための補助剤とともに、遺伝子
銃やハイドロゲルカテーテルのようなカテーテルによっ
て投与できる。例えば、本発明のレセプタータンパク
質または該レセプタータンパク質をコードするＤＮＡ
は、必要に応じて糖衣を施した錠剤、カプセル剤、エリ
キシル剤、マイクロカプセル剤などとして経口的に、あ
るいは水もしくはそれ以外の薬学的に許容し得る液との
無菌性溶液、または懸濁液剤などの注射剤の形で非経口
的に使用できる。例えば、本発明のレセプタータンパ
ク質または該レセプタータンパク質をコードするＤＮ
Ａを生理学的に認められる公知の担体、香味剤、賦形
剤、ベヒクル、防腐剤、安定剤、結合剤などとともに一
般に認められた製剤実施に要求される単位用量形態で混
和することによって製造することができる。これら製剤
における有効成分量は指示された範囲の適当な用量が得
られるようにするものである。

【００６０】錠剤、カプセル剤などに混和することがで
きる添加剤としては、例えば、ゼラチン、コーンスター
チ、トラガント、アラビアゴムのような結合剤、結晶性
セルロースのような賦形剤、コーンスターチ、ゼラチ
ン、アルギン酸などのような膨化剤、ステアリン酸マグ
ネシウムのような潤滑剤、ショ糖、乳糖またはサッカリ
ンのような甘味剤、ペパーミント、アカモノ油またはチ
ェリーのような香味剤などが用いられる。調剤単位形態
がカプセルである場合には、上記タイプの材料にさらに
油脂のような液状担体を含有することができる。注射の
ための無菌組成物は注射用水のようなベヒクル中の活性
物質、胡麻油、椰子油などのような天然産出植物油など
を溶解または懸濁させるなどの通常の製剤実施に従って
処方することができる。注射用の水性液としては、例え
ば、生理食塩水、ブドウ糖やその他の補助薬を含む等張
液（例えば、Ｄ−ソルビトール、Ｄ−マンニトール、塩
化ナトリウムなど）などが用いられ、適当な溶解補助
剤、例えば、アルコール（例、エタノール）、ポリアル
コール（例、プロピレングリコール、ポリエチレングリ
コール）、非イオン性界面活性剤（例、ポリソルベート
80^TM、ＨＣＯ−５０）などと併用してもよい。油性液と
しては、例えば、ゴマ油、大豆油などが用いられ、溶解
補助剤である安息香酸ベンジル、ベンジルアルコールな
どと併用してもよい。

【００６１】また、上記予防・治療剤は、例えば、緩衝
剤（例えば、リン酸塩緩衝液、酢酸ナトリウム緩衝
液）、無痛化剤（例えば、塩化ベンザルコニウム、塩酸
プロカインなど）、安定剤（例えば、ヒト血清アルブミ
ン、ポリエチレングリコールなど）、保存剤（例えば、
ベンジルアルコール、フェノールなど）、酸化防止剤な
どと配合してもよい。調製された注射液は通常、適当な
アンプルに充填される。このようにして得られる製剤は
安全で低毒性であるので、例えば、ヒトやその他の哺乳
動物（例えば、ラット、マウス、ウサギ、ヒツジ、ブ
タ、ウシ、ネコ、イヌ、サルなど）に対して投与するこ
とができる。本発明のレセプタータンパク質の投与量
は、投与対象、対象臓器、症状、投与方法などにより差
異はあるが、経口投与の場合、一般的に例えば、癌患者
（60ｋｇとして）においては、一日につき約0.1〜100
ｍｇ、好ましくは約1.0〜50ｍｇ、より好ましくは約1.0
〜20 ｍｇである。非経口的に投与する場合は、その１
回投与量は投与対象、対象臓器、症状、投与方法などに
よっても異なるが、例えば、注射剤の形では通常例え
ば、癌患者（60 ｋｇとして）においては、一日につき
約0.01〜30 ｍｇ程度、好ましくは約0.1〜20 ｍｇ程
度、より好ましくは約0.1〜10 ｍｇ程度を静脈注射によ
り投与するのが好都合である。他の動物の場合も、60
ｋｇ当たりに換算した量を投与することができる。本発
明のＤＮＡの投与量は、投与対象、対象臓器、症状、投
与方法などにより差異はあるが、経口投与の場合、一般
的に例えば、癌患者（60 ｋｇとして）においては、一
日につき約0.1〜100 ｍｇ、好ましくは約1.0〜50 ｍ
ｇ、より好ましくは約1.0〜20 ｍｇである。非経口的に
投与する場合は、その１回投与量は投与対象、対象臓
器、症状、投与方法などによっても異なるが、例えば、
注射剤の形では通常例えば、癌患者（60 ｋｇとして）
においては、一日につき約0.01〜30 ｍｇ程度、好まし
くは約0.1〜20 ｍｇ程度、より好ましくは約0.1〜10 ｍ
ｇ程度を静脈注射により投与するのが好都合である。他
の動物の場合も、60 ｋｇ当たりに換算した量を投与す
ることができる。

【００６２】（3）遺伝子診断剤 本発明のＤＮＡは、プローブとして使用することによ
り、ヒトまたはその他の哺乳動物（例えば、ラット、マ
ウス、ウサギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ネコ、イヌ、サル
など）における本発明のレセプタータンパク質またはそ
の部分ペプチドをコードするＤＮＡまたはｍＲＮＡの異
常（遺伝子異常）を検出することができるので、例え
ば、該ＤＮＡまたはｍＲＮＡの損傷、突然変異あるいは
発現低下や、該ＤＮＡまたはｍＲＮＡの増加あるいは発
現過多などの遺伝子診断剤として有用である。本発明の
ＤＮＡを用いる上記の遺伝子診断は、例えば、公知のノ
ーザンハイブリダイゼーションやＰＣＲ−ＳＳＣＰ法
（ゲノミックス（Genomics），第5巻，874〜879頁（198
9年）、プロシージングズ・オブ・ザ・ナショナル・ア
カデミー・オブ・サイエンシイズ・オブ・ユーエスエー
（Proceedings of the NationalAcademy of Sciences o
f the United States of America），第86巻，2766〜27
70頁（1989年））などにより実施することができる。

【００６３】（4）本発明のレセプタータンパク質また
はその部分ペプチドの発現量を変化させる化合物のスク
リーニング方法 本発明のＤＮＡは、プローブとして用いることにより、
本発明のレセプタータンパク質またはその部分ペプチド
の発現量を変化させる化合物のスクリーニングに用いる
ことができる。すなわち、本発明は、例えば、（i）非
ヒト哺乳動物の血液、特定の臓器、臓器から単離
した組織もしくは細胞、または（ii）形質転換体等に含
まれる本発明のレセプタータンパク質またはその部分ペ
プチドのｍＲＮＡ量を測定することによる、本発明のレ
セプタータンパク質またはその部分ペプチドの発現量を
変化させる化合物のスクリーニング方法を提供する。

【００６４】本発明のレセプタータンパク質またはその
部分ペプチドのｍＲＮＡ量の測定は具体的には以下のよ
うにして行なう。 （i）正常あるいは疾患モデル非ヒト哺乳動物（例え
ば、マウス、ラット、ウサギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ネ
コ、イヌ、サルなど、より具体的には痴呆ラット、肥満
マウス、動脈硬化ウサギ、担癌マウスなど）に対して、
薬剤（例えば、抗痴呆薬、血圧低下薬、抗癌剤、抗肥満
薬など）あるいは物理的ストレス（例えば、浸水ストレ
ス、電気ショック、明暗、低温など）などを与え、一定
時間経過した後に、血液、あるいは特定の臓器（例え
ば、脳、肺、大腸など）、または臓器から単離した組
織、あるいは細胞を得る。得られた細胞に含まれる本発
明のレセプタータンパク質またはその部分ペプチドのｍ
ＲＮＡは、例えば、通常の方法により細胞等からｍＲＮ
Ａを抽出し、例えば、TaqMan PCRなどの手法を用いるこ
とにより定量することができ、公知の手段によりノザン
ブロットを行うことにより解析することもできる。 （ii）本発明のレセプタータンパク質もしくはその部分
ペプチドを発現する形質転換体を上記の方法に従い作製
し、該形質転換体に含まれる本発明のレセプタータンパ
ク質またはその部分ペプチドのｍＲＮＡを同様にして定
量、解析することができる。

【００６５】本発明のレセプタータンパク質またはその
部分ペプチドの発現量を変化させる化合物のスクリーニ
ングは、（i）正常あるいは疾患モデル非ヒト哺乳動物
に対して、薬剤あるいは物理的ストレスなどを与える一
定時間前（30分前〜24時間前、好ましくは30分前〜12時
間前、より好ましくは１時間前〜６時間前）もしくは一
定時間後（30分後〜３日後、好ましくは１時間後〜２日
後、より好ましくは１時間後〜24時間後）、または薬剤
あるいは物理的ストレスと同時に被検化合物を投与し、
投与後一定時間経過後（30分後〜３日後、好ましくは１
時間後〜２日後、より好ましくは１時間後〜24時間
後）、細胞に含まれる本発明のレセプタータンパク質ま
たはその部分ペプチドのｍＲＮＡ量を定量、解析するこ
とにより行なうことができ、（ii）形質転換体を常法に
従い培養する際に被検化合物を培地中に混合させ、一定
時間培養後（１日後〜７日後、好ましくは１日後〜３日
後、より好ましくは２日後〜３日後）、該形質転換体に
含まれる本発明のレセプタータンパク質またはその部分
ペプチドのｍＲＮＡ量を定量、解析することにより行な
うことができる。

【００６６】本発明のスクリーニング方法を用いて得ら
れる化合物またはその塩は、本発明のレセプタータンパ
ク質またはその部分ペプチドの発現量を変化させる作用
を有する化合物であり、具体的には、（イ）本発明のレ
セプタータンパク質またはその部分ペプチドの発現量を
増加させることにより、Ｇタンパク質共役型レセプター
を介する細胞刺激活性（例えば、アラキドン酸遊離、ア
セチルコリン遊離、細胞内Ｃａ²⁺遊離、細胞内ｃＡＭＰ
生成、細胞内ｃＧＭＰ生成、イノシトールリン酸産生、
細胞膜電位変動、細胞内タンパク質のリン酸化、ｃ−ｆ
ｏｓの活性化、ｐＨの低下などを促進する活性または抑
制する活性など）を増強させる化合物、（ロ）本発明の
レセプタータンパク質またはその部分ペプチドの発現量
を減少させることにより、該細胞刺激活性を減弱させる
化合物である。該化合物としては、ペプチド、蛋白、非
ペプチド性化合物、合成化合物、発酵生産物などが挙げ
られ、これら化合物は新規な化合物であってもよいし、
公知の化合物であってもよい。該細胞刺激活性を増強さ
せる化合物は、本発明のレセプタータンパク質等の生理
活性を増強するための安全で低毒性な医薬として有用で
ある。該細胞刺激活性を減弱させる化合物は、本発明の
レセプタータンパク質等の生理活性を減少させるための
安全で低毒性な医薬として有用である。

【００６７】本発明のスクリーニング方法を用いて得ら
れる化合物またはその塩を医薬組成物として使用する場
合、常套手段に従って実施することができる。例えば、
上記した本発明のレセプタータンパク質を含有する医薬
と同様にして、錠剤、カプセル剤、エリキシル剤、マイ
クロカプセル剤、無菌性溶液、懸濁液剤などとすること
ができる。このようにして得られる製剤は安全で低毒性
であるので、例えば、ヒトやその他の哺乳動物（例え
ば、ラット、マウス、ウサギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ネ
コ、イヌ、サルなど）に対して投与することができる。
該化合物またはその塩の投与量は、投与対象、対象臓
器、症状、投与方法などにより差異はあるが、経口投与
の場合、一般的に、例えば、癌患者（60 ｋｇとして）
においては、一日につき約0.1〜100 ｍｇ、好ましくは
約1.0〜50 ｍｇ、より好ましくは約1.0〜20 ｍｇであ
る。非経口的に投与する場合は、その１回投与量は投与
対象、対象臓器、症状、投与方法などによっても異なる
が、例えば、注射剤の形では通常例えば、癌患者（60
ｋｇとして）においては、一日につき約0.01〜30 ｍｇ
程度、好ましくは約0.1〜20 ｍｇ程度、より好ましくは
約0.1〜10 ｍｇ程度を静脈注射により投与するのが好都
合である。他の動物の場合も、60 ｋｇ当たりに換算し
た量を投与することができる。

【００６８】（5）本発明のレセプタータンパク質また
はその部分ペプチドの発現量を変化させる化合物を含有
する各種疾病の予防および／または治療剤 本発明のレセプタータンパク質または該レセプタータン
パク質をコードするＤＮＡは中枢疾患（例えば、アルツ
ハイマー病、痴呆、摂食障害など）、炎症性疾患（例え
ば、アレルギー、喘息、リュウマチなど）、循環器疾患
（例えば、高血圧症、心肥大、狭心症、動脈硬化症
等）、癌（例えば、非小細胞肺癌、卵巣癌、前立腺癌、
胃癌、膀胱癌、乳癌、子宮頸部癌、結腸癌、直腸癌
等）、代謝性疾患（例えば、糖尿病、糖尿病合併症、肥
満、痛風、白内障等）、免疫系疾患（例えば、自己免疫
疾患等）、消化器系疾患（例えば、胃潰瘍、十二指腸潰
瘍、胃炎、逆流性食道炎等）などの予防および／または
治療に有用である。該化合物を本発明のレセプタータン
パク質の機能不全に関連する疾患の予防および／または
治療剤として使用する場合は、常套手段に従って製剤化
することができる。例えば、該化合物は、必要に応じて
糖衣を施した錠剤、カプセル剤、エリキシル剤、マイク
ロカプセル剤などとして経口的に、あるいは水もしくは
それ以外の薬学的に許容し得る液との無菌性溶液、また
は懸濁液剤などの注射剤の形で非経口的に使用できる。
例えば、該化合物を生理学的に認められる公知の担体、
香味剤、賦形剤、ベヒクル、防腐剤、安定剤、結合剤な
どとともに一般に認められた製剤実施に要求される単位
用量形態で混和することによって製造することができ
る。これら製剤における有効成分量は指示された範囲の
適当な用量が得られるようにするものである。

【００６９】錠剤、カプセル剤などに混和することがで
きる添加剤としては、例えば、ゼラチン、コーンスター
チ、トラガント、アラビアゴムのような結合剤、結晶性
セルロースのような賦形剤、コーンスターチ、ゼラチ
ン、アルギン酸などのような膨化剤、ステアリン酸マグ
ネシウムのような潤滑剤、ショ糖、乳糖またはサッカリ
ンのような甘味剤、ペパーミント、アカモノ油またはチ
ェリーのような香味剤などが用いられる。調剤単位形態
がカプセルである場合には、上記タイプの材料にさらに
油脂のような液状担体を含有することができる。注射の
ための無菌組成物は注射用水のようなベヒクル中の活性
物質、胡麻油、椰子油などのような天然産出植物油など
を溶解または懸濁させるなどの通常の製剤実施に従って
処方することができる。注射用の水性液としては、例え
ば、生理食塩水、ブドウ糖やその他の補助薬を含む等張
液（例えば、Ｄ−ソルビトール、Ｄ−マンニトール、塩
化ナトリウムなど）などが用いられ、適当な溶解補助
剤、例えば、アルコール（例、エタノール）、ポリアル
コール（例、プロピレングリコール、ポリエチレングリ
コール）、非イオン性界面活性剤（例、ポリソルベート
80^TM、ＨＣＯ−５０）などと併用してもよい。油性液と
しては、例えば、ゴマ油、大豆油などが用いられ、溶解
補助剤である安息香酸ベンジル、ベンジルアルコールな
どと併用してもよい。

【００７０】また、上記予防・治療剤は、例えば、緩衝
剤（例えば、リン酸塩緩衝液、酢酸ナトリウム緩衝
液）、無痛化剤（例えば、塩化ベンザルコニウム、塩酸
プロカインなど）、安定剤（例えば、ヒト血清アルブミ
ン、ポリエチレングリコールなど）、保存剤（例えば、
ベンジルアルコール、フェノールなど）、酸化防止剤な
どと配合してもよい。調製された注射液は通常、適当な
アンプルに充填される。このようにして得られる製剤は
安全で低毒性であるので、例えば、ヒトやその他の哺乳
動物（例えば、ラット、マウス、ウサギ、ヒツジ、ブ
タ、ウシ、ネコ、イヌ、サルなど）に対して投与するこ
とができる。該化合物またはその塩の投与量は、投与対
象、対象臓器、症状、投与方法などにより差異はある
が、経口投与の場合、一般的に例えば、癌患者（60 ｋ
ｇとして）においては、一日につき約0.1〜100 ｍｇ、
好ましくは約1.0〜50 ｍｇ、より好ましくは約1.0〜20
ｍｇである。非経口的に投与する場合は、その１回投与
量は投与対象、対象臓器、症状、投与方法などによって
も異なるが、例えば、注射剤の形では通常例えば、癌症
患者（60 ｋｇとして）においては、一日につき約0.01
〜30 ｍｇ程度、好ましくは約0.1〜20 ｍｇ程度、より
好ましくは約0.1〜10 ｍｇ程度を静脈注射により投与す
るのが好都合である。他の動物の場合も、60 ｋｇ当た
りに換算した量を投与することができる。

【００７１】（6）本発明のＧタンパク質共役型レセプ
タータンパク質に対するリガンドの定量法 本発明のレセプタータンパク質等は、リガンドに対して
結合性を有しているので、生体内におけるリガンド濃度
を感度良く定量することができる。本発明の定量法は、
例えば、競合法と組み合わせることによって用いること
ができる。すなわち、被検体を本発明のレセプタータン
パク質等と接触させることによって被検体中のリガンド
濃度を測定することができる。具体的には、例えば、以
下のまたはなどに記載の方法あるいはそれに準じる
方法に従って用いることができる。 入江寛編「ラジオイムノアッセイ」（講談社、昭和49
年発行） 入江寛編「続ラジオイムノアッセイ」（講談社、昭和
54年発行）

【００７２】（7）本発明のＧタンパク質共役型レセプ
タータンパク質とリガンドとの結合性を変化させる化合
物（アゴニスト、アンタゴニストなど）のスクリーニン
グ方法 本発明のレセプタータンパク質等を用いるか、または組
換え型レセプタータンパク質等の発現系を構築し、該発
現系を用いたレセプター結合アッセイ系を用いることに
よって、リガンドと本発明のレセプタータンパク質等と
の結合性を変化させる化合物（例えば、ペプチド、タン
パク質、非ペプチド性化合物、合成化合物、発酵生産物
など）またはその塩を効率よくスクリーニングすること
ができる。このような化合物には、（イ）Ｇタンパク質
共役型レセプターを介して細胞刺激活性（例えば、アラ
キドン酸遊離、アセチルコリン遊離、細胞内Ｃａ²⁺遊
離、細胞内ｃＡＭＰ生成、細胞内ｃＧＭＰ生成、イノシ
トールリン酸産生、細胞膜電位変動、細胞内タンパク質
のリン酸化、ｃ−ｆｏｓの活性化、ｐＨの低下などを促
進する活性または抑制する活性など）を有する化合物
（いわゆる、本発明のレセプタータンパク質に対するア
ゴニスト）、（ロ）該細胞刺激活性を有しない化合物
（いわゆる、本発明のレセプタータンパク質に対するア
ンタゴニスト）、（ハ）リガンドと本発明のＧタンパク
質共役型レセプタータンパク質との結合力を増強する化
合物、あるいは（ニ）リガンドと本発明のＧタンパク質
共役型レセプタータンパク質との結合力を減少させる化
合物などが含まれる（なお、上記（イ）の化合物は、上
記したリガンド決定方法によってスクリーニングするこ
とが好ましい）。すなわち、本発明は、（i）本発明の
レセプタータンパク質もしくはその部分ペプチドまたは
その塩と、リガンドとを接触させた場合と（ii）本発明
のレセプタータンパク質もしくはその部分ペプチドまた
はその塩と、リガンドおよび試験化合物とを接触させた
場合との比較を行なうことを特徴とするリガンドと本発
明のレセプタータンパク質もしくはその部分ペプチドま
たはその塩との結合性を変化させる化合物またはその塩
のスクリーニング方法を提供する。本発明のスクリーニ
ング方法においては、（i）と（ii）の場合における、
例えば、該レセプタータンパク質等に対するリガンドの
結合量、細胞刺激活性などを測定して、比較することを
特徴とする。

【００７３】より具体的には、本発明は、 標識したリガンドを、本発明のレセプタータンパク質
等に接触させた場合と、標識したリガンドおよび試験化
合物を本発明のレセプタータンパク質等に接触させた場
合における、標識したリガンドの該レセプタータンパク
質等に対する結合量を測定し、比較することを特徴とす
るリガンドと本発明のレセプタータンパク質等との結合
性を変化させる化合物またはその塩のスクリーニング方
法、 標識したリガンドを、本発明のレセプタータンパク質
等を含有する細胞または該細胞の膜画分に接触させた場
合と、標識したリガンドおよび試験化合物を本発明のレ
セプタータンパク質等を含有する細胞または該細胞の膜
画分に接触させた場合における、標識したリガンドの該
細胞または該膜画分に対する結合量を測定し、比較する
ことを特徴とするリガンドと本発明のレセプタータンパ
ク質等との結合性を変化させる化合物またはその塩のス
クリーニング方法、 標識したリガンドを、本発明のＤＮＡを含有する形質
転換体を培養することによって細胞膜上に発現したレセ
プタータンパク質等に接触させた場合と、標識したリガ
ンドおよび試験化合物を本発明のＤＮＡを含有する形質
転換体を培養することによって細胞膜上に発現した本発
明のレセプタータンパク質等に接触させた場合におけ
る、標識したリガンドの該レセプタータンパク質等に対
する結合量を測定し、比較することを特徴とするリガン
ドと本発明のレセプタータンパク質等との結合性を変化
させる化合物またはその塩のスクリーニング方法、

【００７４】本発明のレセプタータンパク質等を活性
化する化合物（例えば、本発明のレセプタータンパク質
等に対するリガンドなど）を本発明のレセプタータンパ
ク質等を含有する細胞に接触させた場合と、本発明のレ
セプタータンパク質等を活性化する化合物および試験化
合物を本発明のレセプタータンパク質等を含有する細胞
に接触させた場合における、レセプターを介した細胞刺
激活性（例えば、アラキドン酸遊離、アセチルコリン遊
離、細胞内Ｃａ²⁺遊離、細胞内ｃＡＭＰ生成、細胞内ｃ
ＧＭＰ生成、イノシトールリン酸産生、細胞膜電位変
動、細胞内タンパク質のリン酸化、ｃ−ｆｏｓの活性
化、ｐＨの低下などを促進する活性または抑制する活性
など）を測定し、比較することを特徴とするリガンドと
本発明のレセプタータンパク質等との結合性を変化させ
る化合物またはその塩のスクリーニング方法、および 本発明のレセプタータンパク質等を活性化する化合物
（例えば、本発明のレセプタータンパク質等に対するリ
ガンドなど）を本発明のＤＮＡを含有する形質転換体を
培養することによって細胞膜上に発現した本発明のレセ
プタータンパク質等に接触させた場合と、本発明のレセ
プタータンパク質等を活性化する化合物および試験化合
物を本発明のＤＮＡを含有する形質転換体を培養するこ
とによって細胞膜上に発現した本発明のレセプタータン
パク質等に接触させた場合における、レセプターを介す
る細胞刺激活性（例えば、アラキドン酸遊離、アセチル
コリン遊離、細胞内Ｃａ²⁺遊離、細胞内ｃＡＭＰ生成、
細胞内ｃＧＭＰ生成、イノシトールリン酸産生、細胞膜
電位変動、細胞内タンパク質のリン酸化、ｃ−ｆｏｓの
活性化、ｐＨの低下などを促進する活性または抑制する
活性など）を測定し、比較することを特徴とするリガン
ドと本発明のレセプタータンパク質等との結合性を変化
させる化合物またはその塩のスクリーニング方法を提供
する。

【００７５】本発明のレセプタータンパク質等が得られ
る以前は、Ｇタンパク質共役型レセプターアゴニストま
たはアンタゴニストをスクリーニングする場合、まずラ
ットなどのＧタンパク質共役型レセプタータンパク質を
含む細胞、組織またはその細胞膜画分を用いて候補化合
物を得て（一次スクリーニング）、その後に該候補化合
物が実際にヒトのＧタンパク質共役型レセプタータンパ
ク質とリガンドとの結合を阻害するか否かを確認する試
験（二次スクリーニング）が必要であった。細胞、組織
または細胞膜画分をそのまま用いれば他のレセプタータ
ンパク質も混在するために、目的とするレセプタータン
パク質に対するアゴニストまたはアンタゴニストを実際
に直接的にスクリーニングすることは困難であった。し
かしながら、例えば、本発明のヒト由来レセプタータン
パク質を用いることによって、一次スクリーニングの必
要がなくなり、リガンドとＧタンパク質共役型レセプタ
ータンパク質との結合を阻害する化合物を効率良くスク
リーニングすることができる。さらに、スクリーニング
された化合物がアゴニストかアンタゴニストかを簡便に
評価することができる。本発明のスクリーニング方法の
具体的な説明を以下にする。まず、本発明のスクリーニ
ング方法に用いる本発明のレセプタータンパク質等とし
ては、上記した本発明のレセプタータンパク質等を含有
するものであれば何れのものであってもよいが、本発明
のレセプタータンパク質等を含有する哺乳動物の臓器の
細胞膜画分が好適である。しかし、特にヒト由来の臓器
は入手が極めて困難なことから、スクリーニングに用い
られるものとしては、組換え体を用いて大量発現させた
ヒト由来のレセプタータンパク質等などが適している。

【００７６】本発明のレセプタータンパク質等を製造す
るには、上記の方法が用いられるが、本発明のＤＮＡを
哺乳細胞や昆虫細胞で発現することにより行なうことが
好ましい。目的とするタンパク質部分をコードするＤＮ
Ａ断片にはｃＤＮＡが用いられるが、必ずしもこれに制
約されるものではない。例えば、遺伝子断片や合成ＤＮ
Ａを用いてもよい。本発明のレセプタータンパク質をコ
ードするＤＮＡ断片を宿主動物細胞に導入し、それらを
効率よく発現させるためには、該ＤＮＡ断片を昆虫を宿
主とするバキュロウイルスに属する核多角体病ウイルス
（nuclear polyhedrosis virus；ＮＰＶ）のポリヘドリ
ンプロモーター、ＳＶ４０由来のプロモーター、レトロ
ウイルスのプロモーター、メタロチオネインプロモータ
ー、ヒトヒートショックプロモーター、サイトメガロウ
イルスプロモーター、ＳＲαプロモーターなどの下流に
組み込むのが好ましい。発現したレセプターの量と質の
検査は公知の方法で行うことができる。例えば、文献
〔Nambi，P．ら、ザ・ジャーナル・オブ・バイオロジカ
ル・ケミストリー（J. Biol. Chem.）,267巻, 19555〜1
9559頁, 1992年〕に記載の方法に従って行なうことがで
きる。したがって、本発明のスクリーニング方法におい
て、本発明のレセプタータンパク質等を含有するものと
しては、公知の方法に従って精製したレセプタータンパ
ク質等であってもよいし、該レセプタータンパク質等を
含有する細胞を用いてもよく、また該レセプタータンパ
ク質等を含有する細胞の膜画分を用いてもよい。

【００７７】本発明のスクリーニング方法において、本
発明のレセプタータンパク質等を含有する細胞を用いる
場合、細胞をグルタルアルデヒド、ホルマリンなどで固
定化してもよい。固定化方法は公知の方法に従って行な
うことができる。本発明のレセプタータンパク質等を含
有する細胞としては、該レセプタータンパク質等を発現
した宿主細胞をいうが、宿主細胞としては、大腸菌、枯
草菌、酵母、昆虫細胞、動物細胞などが好ましい。細胞
膜画分としては、細胞を破砕した後、公知の方法で得ら
れる細胞膜が多く含まれる画分のことをいう。細胞の破
砕方法としては、Potter−Elvehjem型ホモジナイザーで
細胞を押し潰す方法、ワーリングブレンダーやポリトロ
ン（Kinematica社製）のよる破砕、超音波による破砕、
フレンチプレスなどで加圧しながら細胞を細いノズルか
ら噴出させることによる破砕などが挙げられる。細胞膜
の分画には、分画遠心分離法や密度勾配遠心分離法など
の遠心力による分画法が主として用いられる。例えば、
細胞破砕液を低速（500〜3000 ｒｐｍ）で短時間（通
常、約１〜10分）遠心し、上清をさらに高速（15000〜3
0000 ｒｐｍ）で通常30分〜２時間遠心し、得られる沈
澱を膜画分とする。該膜画分中には、発現したレセプタ
ータンパク質等と細胞由来のリン脂質や膜タンパク質な
どの膜成分が多く含まれる。該レセプタータンパク質等
を含有する細胞や膜画分中のレセプタータンパク質の量
は、1細胞当たり10³〜10⁸分子であるのが好ましく、10⁵
〜10⁷分子であるのが好適である。なお、発現量が多い
ほど膜画分当たりのリガンド結合活性（比活性）が高く
なり、高感度なスクリーニング系の構築が可能になるば
かりでなく、同一ロットで大量の試料を測定できるよう
になる。

【００７８】リガンドと本発明のレセプタータンパク質
等との結合性を変化させる化合物をスクリーニングする
上記の〜を実施するためには、例えば、適当なレセ
プタータンパク質画分と、標識したリガンドが必要であ
る。レセプタータンパク質画分としては、天然型のレセ
プタータンパク質画分か、またはそれと同等の活性を有
する組換え型レセプタータンパク質画分などが望まし
い。ここで、同等の活性とは、同等のリガンド結合活
性、シグナル情報伝達作用などを示す。標識したリガン
ドとしては、標識したリガンド、標識したリガンドアナ
ログ化合物などが用いられる。例えば〔³Ｈ〕、
〔¹²⁵Ｉ〕、〔¹⁴Ｃ〕、〔³⁵Ｓ〕などで標識されたリガ
ンドなどが用いられる。具体的には、リガンドと本発明
のレセプタータンパク質等との結合性を変化させる化合
物のスクリーニングを行なうには、まず本発明のレセプ
タータンパク質等を含有する細胞または細胞の膜画分
を、スクリーニングに適したバッファーに懸濁すること
によりレセプタータンパク質標品を調製する。バッファ
ーには、ｐＨ４〜10（望ましくはｐＨ６〜８）のリン酸
バッファー、トリス−塩酸バッファーなどのリガンドと
レセプタータンパク質との結合を阻害しないバッファー
であればいずれでもよい。また、非特異的結合を低減さ
せる目的で、ＣＨＡＰＳ、Tween-80^TM（花王−アトラス
社）、ジギトニン、デオキシコレートなどの界面活性剤
をバッファーに加えることもできる。さらに、プロテア
ーゼによるレセプターやリガンドの分解を抑える目的で
ＰＭＳＦ、ロイペプチン、Ｅ−６４（ペプチド研究所
製）、ペプスタチンなどのプロテアーゼ阻害剤を添加す
ることもできる。0.01〜10 ｍｌの該レセプター溶液
に、一定量（5000〜500000 ｃｐｍ）の標識したリガン
ドを添加し、同時に10^-4〜10^-10 Ｍの試験化合物を共存
させる。非特異的結合量（ＮＳＢ）を知るために大過剰
の未標識のリガンドを加えた反応チューブも用意する。
反応は約０℃から50℃、望ましくは約４℃から37℃で、
約20分から24時間、望ましくは約30分から３時間行う。
反応後、ガラス繊維濾紙等で濾過し、適量の同バッファ
ーで洗浄した後、ガラス繊維濾紙に残存する放射活性を
液体シンチレーションカウンターまたはγ−カウンター
で計測する。拮抗する物質がない場合のカウント
（Ｂ₀）から非特異的結合量（ＮＳＢ）を引いたカウン
ト（Ｂ₀−ＮＳＢ）を100％とした時、特異的結合量（Ｂ
−ＮＳＢ）が、例えば、50％以下になる試験化合物を拮
抗阻害能力のある候補物質として選択することができ
る。

【００７９】リガンドと本発明のレセプタータンパク質
等との結合性を変化させる化合物スクリーニングする上
記の〜の方法を実施するためには、例えば、レセプ
タータンパク質を介する細胞刺激活性（例えば、アラキ
ドン酸遊離、アセチルコリン遊離、細胞内Ｃａ²⁺遊離、
細胞内ｃＡＭＰ生成、細胞内ｃＧＭＰ生成、イノシトー
ルリン酸産生、細胞膜電位変動、細胞内タンパク質のリ
ン酸化、ｃ−ｆｏｓの活性化、ｐＨの低下などを促進す
る活性または抑制する活性など）を公知の方法または市
販の測定用キットを用いて測定することができる。具体
的には、まず、本発明のレセプタータンパク質等を含有
する細胞をマルチウェルプレート等に培養する。スクリ
ーニングを行なうにあたっては前もって新鮮な培地ある
いは細胞に毒性を示さない適当なバッファーに交換し、
試験化合物などを添加して一定時間インキュベートした
後、細胞を抽出あるいは上清液を回収して、生成した産
物をそれぞれの方法に従って定量する。細胞刺激活性の
指標とする物質（例えば、アラキドン酸など）の生成
が、細胞が含有する分解酵素によって検定困難な場合
は、該分解酵素に対する阻害剤を添加してアッセイを行
なってもよい。また、ｃＡＭＰ産生抑制などの活性につ
いては、フォルスコリンなどで細胞の基礎的産生量を増
大させておいた細胞に対する産生抑制作用として検出す
ることができる。細胞刺激活性を測定してスクリーニン
グを行なうには、適当なレセプタータンパク質を発現し
た細胞が必要である。本発明のレセプタータンパク質等
を発現した細胞としては、天然型の本発明のレセプター
タンパク質等を有する細胞株、上記の組換え型レセプタ
ータンパク質等を発現した細胞株などが望ましい。試験
化合物としては、例えば、ペプチド、蛋白、非ペプチド
性化合物、合成化合物、発酵生産物、細胞抽出液、植物
抽出液、動物組織抽出液などが用いられ、これら化合物
は新規な化合物であってもよいし、公知の化合物であっ
てもよい。

【００８０】リガンドと本発明のレセプタータンパク質
等との結合性を変化させる化合物またはその塩のスクリ
ーニング用キットは、本発明のレセプタータンパク質
等、本発明のレセプタータンパク質等を含有する細胞、
または本発明のレセプタータンパク質等を含有する細胞
の膜画分を含有するものなどである。本発明のスクリー
ニング用キットの例としては、次のものが挙げられる。 1. スクリーニング用試薬 測定用緩衝液および洗浄用緩衝液 Hanks' Balanced Salt Solution（ギブコ社製）に、0.0
5％のウシ血清アルブミン（シグマ社製）を加えたも
の。孔径0.45 μｍのフィルターで濾過滅菌し、４℃で
保存するか、あるいは用時調製しても良い。 Ｇタンパク質共役型レセプター標品 本発明のレセプタータンパク質を発現させたＣＨＯ細胞
を、12穴プレートに5×10⁵個／穴で継代し、37℃、５％
CO₂、95％ airで２日間培養したもの。 標識リガンド 市販の〔³Ｈ〕、〔¹²⁵Ｉ〕、〔¹⁴Ｃ〕、〔³⁵Ｓ〕などで
標識したリガンド水溶液の状態のものを4℃あるいは−2
0℃にて保存し、用時に測定用緩衝液にて１ μＭに希釈
する。 リガンド標準液 リガンドを0.1％ ウシ血清アルブミン（シグマ社製）を
含むＰＢＳで１ ｍＭとなるように溶解し、−20℃で保
存する。

【００８１】2. 測定法 12穴組織培養用プレートにて培養した本発明のレセプ
タータンパク質発現ＣＨＯ細胞を、測定用緩衝液１ ｍ
ｌで２回洗浄した後、490 μｌの測定用緩衝液を各穴に
加える。 10^-3〜10^-10 Ｍの試験化合物溶液を５ μｌ加えた
後、標識リガンドを５ μｌ加え、室温にて１時間反応
させる。非特異的結合量を知るためには試験化合物の代
わりに10^-3 Ｍのリガンドを５ μｌ加えておく。 反応液を除去し、１ ｍｌの洗浄用緩衝液で３回洗浄
する。細胞に結合した標識リガンドを0.2Ｎ ＮａＯＨ−
１％ ＳＤＳで溶解し、４ ｍｌの液体シンチレーターＡ
（和光純薬製）と混合する。 液体シンチレーションカウンター（ベックマンコール
ター社製）を用いて放射活性を測定し、Percent Maximu
m Binding（ＰＭＢ）を次の式で求める。 PMB＝［（B−NSB）／（B₀−NSB）］×100 ＰＭＢ：Percent Maximum Binding Ｂ ：検体を加えた時の値 ＮＳＢ：Non-specific Binding（非特異的結合量） Ｂ₀ ：最大結合量

【００８２】本発明のスクリーニング方法またはスクリ
ーニング用キットを用いて得られる化合物またはその塩
は、リガンドと本発明のレセプタータンパク質等との結
合性を変化させる作用を有する化合物であり、具体的に
は、（イ）Ｇタンパク質共役型レセプターを介して細胞
刺激活性（例えば、アラキドン酸遊離、アセチルコリン
遊離、細胞内Ｃａ²⁺遊離、細胞内ｃＡＭＰ生成、細胞内
ｃＧＭＰ生成、イノシトールリン酸産生、細胞膜電位変
動、細胞内タンパク質のリン酸化、ｃ−ｆｏｓの活性
化、ｐＨの低下などを促進する活性または抑制する活性
など）を有する化合物（いわゆる、本発明のレセプター
タンパク質に対するアゴニスト）、（ロ）該細胞刺激活
性を有しない化合物（いわゆる、本発明のレセプタータ
ンパク質に対するアンタゴニスト）、（ハ）リガンドと
本発明のＧタンパク質共役型レセプタータンパク質との
結合力を増強する化合物、あるいは（ニ）リガンドと本
発明のＧタンパク質共役型レセプタータンパク質との結
合力を減少させる化合物である。該化合物としては、ペ
プチド、蛋白、非ペプチド性化合物、合成化合物、発酵
生産物などが挙げられ、これら化合物は新規な化合物で
あってもよいし、公知の化合物であってもよい。本発明
のレセプタータンパク質等に対するアゴニストは、本発
明のレセプタータンパク質等に対するリガンドが有する
生理活性と同様の作用を有しているので、該リガンド活
性に応じて安全で低毒性な医薬として有用である。本発
明のレセプタータンパク質等に対するアンタゴニスト
は、本発明のレセプタータンパク質等に対するリガンド
が有する生理活性を抑制することができるので、該リガ
ンド活性を抑制する安全で低毒性な医薬として有用であ
る。リガンドと本発明のＧタンパク質共役型レセプター
タンパク質との結合力を増強する化合物は、本発明のレ
セプタータンパク質等に対するリガンドが有する生理活
性を増強するための安全で低毒性な医薬として有用であ
る。リガンドと本発明のＧタンパク質共役型レセプター
タンパク質との結合力を減少させる化合物は、本発明の
レセプタータンパク質等に対するリガンドが有する生理
活性を減少させるための安全で低毒性な医薬として有用
である。

【００８３】本発明のスクリーニング方法またはスクリ
ーニング用キットを用いて得られる化合物またはその塩
を上記の医薬組成物として使用する場合、常套手段に従
って実施することができる。例えば、上記した本発明の
レセプタータンパク質を含有する医薬と同様にして、錠
剤、カプセル剤、エリキシル剤、マイクロカプセル剤、
無菌性溶液、懸濁液剤などとすることができる。このよ
うにして得られる製剤は安全で低毒性であるので、例え
ば、ヒトやその他の哺乳動物（例えば、ラット、ウサ
ギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ネコ、イヌ、サルなど）に対
して投与することができる。該化合物またはその塩の投
与量は、投与対象、対象臓器、症状、投与方法などによ
り差異はあるが、経口投与の場合、一般的に例えば、癌
患者（60 ｋｇとして）においては、一日につき約0.1〜
100 ｍｇ、好ましくは約1.0〜50 ｍｇ、より好ましくは
約1.0〜20 ｍｇである。非経口的に投与する場合は、そ
の１回投与量は投与対象、対象臓器、症状、投与方法な
どによっても異なるが、例えば、注射剤の形では通常例
えば、癌患者（60 ｋｇとして）においては、一日につ
き約0.01〜30 ｍｇ程度、好ましくは約0.1〜20 ｍｇ程
度、より好ましくは約0.1〜10ｍｇ程度を静脈注射によ
り投与するのが好都合である。他の動物の場合も、60ｋ
ｇ当たりに換算した量を投与することができる。

【００８４】（8）本発明のＧタンパク質共役型レセプ
タータンパク質とリガンドとの結合性を変化させる化合
物（アゴニスト、アンタゴニスト）を含有する各種疾病
の予防および／または治療剤 本発明のレセプタータンパク質または該レセプタータン
パク質をコードするＤＮＡは中枢疾患（例えば、アルツ
ハイマー病、痴呆、摂食障害など）、炎症性疾患（例え
ば、アレルギー、喘息、リュウマチなど）、循環器疾患
（例えば、高血圧症、心肥大、狭心症、動脈硬化症
等）、癌（例えば、非小細胞肺癌、卵巣癌、前立腺癌、
胃癌、膀胱癌、乳癌、子宮頸部癌、結腸癌、直腸癌
等）、代謝性疾患（例えば、糖尿病、糖尿病合併症、肥
満、痛風、白内障等）、免疫系疾患（例えば、自己免疫
疾患等）、消化器系疾患（例えば、胃潰瘍、十二指腸潰
瘍、胃炎、逆流性食道炎等）などの予防および／または
治療に有用である。該化合物やリガンドを本発明のレセ
プタータンパク質の機能不全に関連する疾患の予防およ
び／または治療剤として使用する場合は、常套手段に従
って製剤化することができる。例えば、該化合物やリガ
ンドは、必要に応じて糖衣を施した錠剤、カプセル剤、
エリキシル剤、マイクロカプセル剤などとして経口的
に、あるいは水もしくはそれ以外の薬学的に許容し得る
液との無菌性溶液、または懸濁液剤などの注射剤の形で
非経口的に使用できる。例えば、該化合物を生理学的に
認められる公知の担体、香味剤、賦形剤、ベヒクル、防
腐剤、安定剤、結合剤などとともに一般に認められた製
剤実施に要求される単位用量形態で混和することによっ
て製造することができる。これら製剤における有効成分
量は指示された範囲の適当な用量が得られるようにする
ものである。

【００８５】錠剤、カプセル剤などに混和することがで
きる添加剤としては、例えば、ゼラチン、コーンスター
チ、トラガント、アラビアゴムのような結合剤、結晶性
セルロースのような賦形剤、コーンスターチ、ゼラチ
ン、アルギン酸などのような膨化剤、ステアリン酸マグ
ネシウムのような潤滑剤、ショ糖、乳糖またはサッカリ
ンのような甘味剤、ペパーミント、アカモノ油またはチ
ェリーのような香味剤などが用いられる。調剤単位形態
がカプセルである場合には、上記タイプの材料にさらに
油脂のような液状担体を含有することができる。注射の
ための無菌組成物は注射用水のようなベヒクル中の活性
物質、胡麻油、椰子油などのような天然産出植物油など
を溶解または懸濁させるなどの通常の製剤実施に従って
処方することができる。注射用の水性液としては、例え
ば、生理食塩水、ブドウ糖やその他の補助薬を含む等張
液（例えば、Ｄ−ソルビトール、Ｄ−マンニトール、塩
化ナトリウムなど）などが用いられ、適当な溶解補助
剤、例えば、アルコール（例、エタノール）、ポリアル
コール（例、プロピレングリコール、ポリエチレングリ
コール）、非イオン性界面活性剤（例、ポリソルベート
80^TM、ＨＣＯ−５０）などと併用してもよい。油性液と
しては、例えば、ゴマ油、大豆油などが用いられ、溶解
補助剤である安息香酸ベンジル、ベンジルアルコールな
どと併用してもよい。

【００８６】また、上記予防・治療剤は、例えば、緩衝
剤（例えば、リン酸塩緩衝液、酢酸ナトリウム緩衝
液）、無痛化剤（例えば、塩化ベンザルコニウム、塩酸
プロカインなど）、安定剤（例えば、ヒト血清アルブミ
ン、ポリエチレングリコールなど）、保存剤（例えば、
ベンジルアルコール、フェノールなど）、酸化防止剤な
どと配合してもよい。調製された注射液は通常、適当な
アンプルに充填される。さらに、上記予防・治療剤は適
当な薬剤と組み合わせて例えば本発明のレセプタータン
パク質が高発現している臓器や組織を特異的なターゲッ
トとしたＤＤＳ製剤として使用することもできる。この
ようにして得られる製剤は安全で低毒性であるので、例
えば、ヒトやその他の哺乳動物（例えば、ラット、マウ
ス、ウサギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ネコ、イヌ、サルな
ど）に対して投与することができる。該化合物またはそ
の塩の投与量は、投与対象、対象臓器、症状、投与方法
などにより差異はあるが、経口投与の場合、一般的に例
えば、癌患者（60 ｋｇとして）においては、一日につ
き約0.1〜100 ｍｇ、好ましくは約1.0〜50 ｍｇ、より
好ましくは約1.0〜20 ｍｇである。非経口的に投与する
場合は、その１回投与量は投与対象、対象臓器、症状、
投与方法などによっても異なるが、例えば、注射剤の形
では通常例えば、癌患者（60 ｋｇとして）において
は、一日につき約0.01〜30 ｍｇ程度、好ましくは約0.1
〜20 ｍｇ程度、より好ましくは約0.1〜10ｍｇ程度を静
脈注射により投与するのが好都合である。他の動物の場
合も、60ｋｇ当たりに換算した量を投与することができ
る。

【００８７】（9）本発明のレセプタータンパク質もし
くはその部分ペプチドまたはその塩の定量 本発明の抗体は、本発明のレセプタータンパク質等を特
異的に認識することができるので、被検液中の本発明の
レセプタータンパク質等の定量、特にサンドイッチ免疫
測定法による定量などに使用することができる。すなわ
ち、本発明は、例えば、（i）本発明の抗体と、被検液
および標識化レセプタータンパク質等とを競合的に反応
させ、該抗体に結合した標識化レセプタータンパク質等
の割合を測定することを特徴とする被検液中の本発明の
レセプタータンパク質等の定量法、（ii）被検液と担体
上に不溶化した本発明の抗体および標識化された本発明
の抗体とを同時あるいは連続的に反応させたのち、不溶
化担体上の標識剤の活性を測定することを特徴とする被
検液中の本発明のレセプタータンパク質等の定量法を提
供する。上記（ii）においては、一方の抗体が本発明の
レセプタータンパク質等のＮ端部を認識する抗体で、他
方の抗体が本発明のレセプタータンパク質等のＣ端部に
反応する抗体であることが好ましい。

【００８８】本発明のレセプタータンパク質等に対する
モノクローナル抗体（以下、本発明のモノクローナル抗
体と称する場合がある）を用いて本発明のレセプタータ
ンパク質等の測定を行なえるほか、組織染色等による検
出を行なうこともできる。これらの目的には、抗体分子
そのものを用いてもよく、また、抗体分子のF(ab')₂、F
ab'、あるいはFab画分を用いてもよい。本発明のレセプ
タータンパク質等に対する抗体を用いる測定法は、特に
制限されるべきものではなく、被測定液中の抗原量（例
えば、レセプタータンパク質量）に対応した抗体、抗原
もしくは抗体−抗原複合体の量を化学的または物理的手
段により検出し、これを既知量の抗原を含む標準液を用
いて作製した標準曲線より算出する測定法であれば、い
ずれの測定法を用いてもよい。例えば、ネフロメトリ
ー、競合法、イムノメトリック法およびサンドイッチ法
が好適に用いられるが、感度、特異性の点で、後に記載
するサンドイッチ法を用いるのが特に好ましい。標識物
質を用いる測定法に用いられる標識剤としては、例え
ば、放射性同位元素、酵素、蛍光物質、発光物質などが
用いられる。放射性同位元素としては、例えば、〔¹²⁵
Ｉ〕、〔¹³¹Ｉ〕、〔³Ｈ〕、〔¹⁴Ｃ〕などが用いられ
る。上記酵素としては、安定で比活性の大きなものが好
ましく、例えば、β−ガラクトシダーゼ、β−グルコシ
ダーゼ、アルカリフォスファターゼ、パーオキシダー
ゼ、リンゴ酸脱水素酵素などが用いられる。蛍光物質と
しては、例えば、フルオレスカミン、フルオレッセンイ
ソチオシアネートなどが用いられる。発光物質として
は、例えば、ルミノール、ルミノール誘導体、ルシフェ
リン、ルシゲニンなどが用いられる。さらに、抗体ある
いは抗原と標識剤との結合にビオチン−アビジン系を用
いることもできる。

【００８９】抗原あるいは抗体の不溶化に当っては、物
理吸着を用いてもよく、また通常、タンパク質あるいは
酵素等を不溶化、固定化するのに用いられる化学結合を
用いる方法でもよい。担体としては、例えば、アガロー
ス、デキストラン、セルロースなどの不溶性多糖類、ポ
リスチレン、ポリアクリルアミド、シリコン等の合成樹
脂、あるいはガラス等が用いられる。サンドイッチ法に
おいては不溶化した本発明のモノクローナル抗体に被検
液を反応させ（一次反応）、さらに標識化した本発明の
モノクローナル抗体を反応させ（二次反応）た後、不溶
化担体上の標識剤の活性を測定することにより被検液中
の本発明のレセプタータンパク質量を定量することがで
きる。一次反応と二次反応は逆の順序に行なっても、ま
た、同時に行なってもよいし時間をずらして行なっても
よい。標識化剤および不溶化の方法は上記のそれらに準
じることができる。また、サンドイッチ法による免疫測
定法において、固相用抗体あるいは標識用抗体に用いら
れる抗体は必ずしも１種類である必要はなく、測定感度
を向上させる等の目的で２種類以上の抗体の混合物を用
いてもよい。本発明のサンドイッチ法によるレセプター
タンパク質等の測定法においては、一次反応と二次反応
に用いられる本発明のモノクローナル抗体はレセプター
タンパク質等の結合する部位が相異なる抗体が好ましく
用いられる。すなわち、一次反応および二次反応に用い
られる抗体は、例えば、二次反応で用いられる抗体が、
レセプタータンパク質のＣ端部を認識する場合、一次反
応で用いられる抗体は、好ましくはＣ端部以外、例えば
Ｎ端部を認識する抗体が用いられる。

【００９０】本発明のモノクローナル抗体をサンドイッ
チ法以外の測定システム、例えば、競合法、イムノメト
リック法あるいはネフロメトリーなどに用いることがで
きる。競合法では、被検液中の抗原と標識抗原とを抗体
に対して競合的に反応させたのち、未反応の標識抗原と
(Ｆ)と抗体と結合した標識抗原（Ｂ）とを分離し（B/F
分離）、Ｂ、Ｆ何れかの標識量を測定し、被検液中の抗
原量を定量する。本反応法には、抗体として可溶性抗体
を用い、B/F分離をポリエチレングリコール、上記抗体
に対する第2抗体などを用いる液相法、および、第１抗
体として固相化抗体を用いるか、あるいは、第１抗体は
可溶性のものを用い第２抗体として固相化抗体を用いる
固相化法とが用いられる。イムノメトリック法では、被
検液中の抗原と固相化抗原とを一定量の標識化抗体に対
して競合反応させた後固相と液相を分離するか、あるい
は、被検液中の抗原と過剰量の標識化抗体とを反応さ
せ、次に固相化抗原を加え未反応の標識化抗体を固相に
結合させたのち、固相と液相を分離する。次に、何れか
の相の標識量を測定し被検液中の抗原量を定量する。ま
た、ネフロメトリーでは、ゲル内あるいは溶液中で抗原
抗体反応の結果、生じた不溶性の沈降物の量を測定す
る。被検液中の抗原量が僅かであり、少量の沈降物しか
得られない場合にもレーザーの散乱を利用するレーザー
ネフロメトリーなどが好適に用いられる。

【００９１】これら個々の免疫学的測定法を本発明の測
定方法に適用するにあたっては、特別の条件、操作等の
設定は必要とされない。それぞれの方法における通常の
条件、操作法に当業者の通常の技術的配慮を加えて本発
明のレセプタータンパク質またはその塩の測定系を構築
すればよい。これらの一般的な技術手段の詳細について
は、総説、成書などを参照することができる〔例えば、
入江 寛編「ラジオイムノアッセイ」（講談社、昭和49
年発行）、入江 寛編「続ラジオイムノアッセイ」（講
談社、昭和54年発行）、石川栄治ら編「酵素免疫測定
法」（医学書院、昭和53年発行）、石川栄治ら編「酵素
免疫測定法」（第2版）（医学書院、昭和57年発行）、
石川栄治ら編「酵素免疫測定法」（第3版）（医学書
院、昭和62年発行）、「メソッズ・イン・エンザイモロ
ジー（Methods in ENZYMOLOGY）」 Vol.70 (Immunochem
ical Techniques (Part A))、 同書 Vol. 73 (Immunoch
emicalTechniques (Part B))、 同書 Vol. 74 (Immunoc
hemical Techniques (Part C))、同書 Vol. 84 (Immuno
chemical Techniques (Part D:Selected Immunoassay
s))、 同書 Vol. 92 (Immunochemical Techniques (Par
t E:Monoclonal Antibodies and General Immunoassay
Methods))、 同書 Vol. 121 (Immunochemical Techniqu
es (Part I:Hybridoma TechnoloGy and Monoclonal Ant
ibodies))(以上、アカデミックプレス社発行)など参
照〕。以上のように、本発明の抗体を用いることによっ
て、本発明のレセプタータンパク質またはその塩を感度
良く定量することができる。さらに、本発明の抗体を用
いて、生体内での本発明のレセプタータンパク質またそ
の塩を定量することによって、本発明のレセプタータン
パク質の機能不全に関連する各種疾患の診断をすること
ができる。また、本発明の抗体は、体液や組織などの被
検体中に存在する本発明のレセプタータンパク質等を特
異的に検出するために使用することができる。また、本
発明のレセプタータンパク質等を精製するために使用す
る抗体カラムの作製、精製時の各分画中の本発明のレセ
プタータンパク質等の検出、被検細胞内における本発明
のレセプタータンパク質の挙動の分析などのために使用
することができる。

【００９２】（10）細胞膜における本発明のレセプター
タンパク質またはその部分ペプチドの量を変化させる化
合物のスクリーニング方法 本発明の抗体は、本発明のレセプタータンパク質もしく
はその部分ペプチドまたはその塩を特異的に認識するこ
とができるので、細胞膜における本発明のレセプタータ
ンパク質またはその部分ペプチドの量を変化させる化合
物のスクリーニングに用いることができる。すなわち本
発明は、例えば、（i）非ヒト哺乳動物の血液、特
定の臓器、臓器から単離した組織もしくは細胞等を破
壊した後、細胞膜画分を単離し、細胞膜画分に含まれる
本発明のレセプタータンパク質またはその部分ペプチド
を定量することによる、細胞膜における本発明のレセプ
タータンパク質またはその部分ペプチドの量を変化させ
る化合物のスクリーニング方法、（ii）本発明のレセプ
タータンパク質もしくはその部分ペプチドを発現する形
質転換体等を破壊した後、細胞膜画分を単離し、細胞膜
画分に含まれる本発明のレセプタータンパク質またはそ
の部分ペプチドを定量することによる、細胞膜における
本発明のレセプタータンパク質またはその部分ペプチド
の量を変化させる化合物のスクリーニング方法、（ii
i）非ヒト哺乳動物の血液、特定の臓器、臓器か
ら単離した組織もしくは細胞等を切片とした後、免疫染
色法を用いることにより、細胞表層での該受容体タンパ
ク質の染色度合いを定量化することにより、細胞膜上の
該タンパク質を確認することによる、細胞膜における本
発明のレセプタータンパク質またはその部分ペプチドの
量を変化させる化合物のスクリーニング方法を提供す
る。（iv）本発明のレセプタータンパク質もしくはその
部分ペプチドを発現する形質転換体等を切片とした後、
免疫染色法を用いることにより、細胞表層での該受容体
タンパク質の染色度合いを定量化することにより、細胞
膜上の該タンパク質を確認することによる、細胞膜にお
ける本発明のレセプタータンパク質またはその部分ペプ
チドの量を変化させる化合物のスクリーニング方法を提
供する。

【００９３】細胞膜画分に含まれる本発明のレセプター
タンパク質またはその部分ペプチドの定量は具体的には
以下のようにして行なう。 （i）正常あるいは疾患モデル非ヒト哺乳動物（例え
ば、マウス、ラット、ウサギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ネ
コ、イヌ、サルなど、より具体的には痴呆ラット、肥満
マウス、動脈硬化ウサギ、担癌マウスなど）に対して、
薬剤（例えば、抗痴呆薬、血圧低下薬、抗癌剤、抗肥満
薬など）あるいは物理的ストレス（例えば、浸水ストレ
ス、電気ショック、明暗、低温など）などを与え、一定
時間経過した後に、血液、あるいは特定の臓器（例え
ば、脳、肺、大腸など）、または臓器から単離した組
織、あるいは細胞を得る。得られた臓器、組織または細
胞等を、例えば、適当な緩衝液（例えば、トリス塩酸緩
衝液、リン酸緩衝液、ヘペス緩衝液など）等に懸濁し、
臓器、組織あるいは細胞を破壊し、界面活性剤（例え
ば、トリトンＸ−100^TM、Tween-20^TMなど）などを用
い、さらに遠心分離や濾過、カラム分画などの手法を用
いて細胞膜画分を得る。

【００９４】細胞膜画分としては、細胞を破砕した後、
公知の方法で得られる細胞膜が多く含まれる画分のこと
をいう。細胞の破砕方法としては、Potter−Elvehjem型
ホモジナイザーで細胞を押し潰す方法、ワーリングブレ
ンダーやポリトロン（Kinematica社製）のよる破砕、超
音波による破砕、フレンチプレスなどで加圧しながら細
胞を細いノズルから噴出させることによる破砕などが挙
げられる。細胞膜の分画には、分画遠心分離法や密度勾
配遠心分離法などの遠心力による分画法が主として用い
られる。例えば、細胞破砕液を低速（500〜3000 ｒｐ
ｍ）で短時間（通常、約１〜10分）遠心し、上清をさら
に高速（15000〜30000 ｒｐｍ）で通常30分〜２時間遠
心し、得られる沈澱を膜画分とする。該膜画分中には、
発現したレセプタータンパク質等と細胞由来のリン脂質
や膜タンパク質などの膜成分が多く含まれる。

【００９５】細胞膜画分に含まれる本発明のレセプター
タンパク質またはその部分ペプチドは、例えば、本発明
の抗体を用いたサンドイッチ免疫測定法、ウエスタンブ
ロット解析などにより定量することができる。かかるサ
ンドイッチ免疫測定法は上記の方法と同様にして行なう
ことができ、ウエスタンブロットは公知の手段により行
なうことができる。

【００９６】（ii）本発明のレセプタータンパク質もし
くはその部分ペプチドを発現する形質転換体を上記の方
法に従い作製し、細胞膜画分に含まれる本発明のレセプ
タータンパク質またはその部分ペプチドを定量すること
ができる。

【００９７】細胞膜における本発明のレセプタータンパ
ク質またはその部分ペプチドの量を変化させる化合物の
スクリーニングは、 （i）正常あるいは疾患モデル非ヒト哺乳動物に対し
て、薬剤あるいは物理的ストレスなどを与える一定時間
前（30分前〜24時間前、好ましくは30分前〜12時間前、
より好ましくは１時間前〜６時間前）もしくは一定時間
後（30分後〜３日後、好ましくは１時間後〜２日後、よ
り好ましくは１時間後〜24時間後）、または薬剤あるい
は物理的ストレスと同時に被検化合物を投与し、投与後
一定時間経過後（30分後〜３日後、好ましくは１時間後
〜２日後、より好ましくは１時間後〜24時間後）、細胞
膜における本発明のレセプタータンパク質またはその部
分ペプチドの量を定量することにより行なうことがで
き、 （ii）形質転換体を常法に従い培養する際に被検化合物
を培地中に混合させ、一定時間培養後（１日後〜７日
後、好ましくは１日後〜３日後、より好ましくは２日後
〜３日後）、細胞膜における本発明のレセプタータンパ
ク質またはその部分ペプチドの量を定量することにより
行なうことができる。

【００９８】細胞膜画分に含まれる本発明のレセプター
タンパク質またはその部分ペプチドの確認は具体的には
以下のようにして行なう。 （iii）正常あるいは疾患モデル非ヒト哺乳動物（例え
ば、マウス、ラット、ウサギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ネ
コ、イヌ、サルなど、より具体的には痴呆ラット、肥満
マウス、動脈硬化ウサギ、担癌マウスなど）に対して、
薬剤（例えば、抗痴呆薬、血圧低下薬、抗癌剤、抗肥満
薬など）あるいは物理的ストレス（例えば、浸水ストレ
ス、電気ショック、明暗、低温など）などを与え、一定
時間経過した後に、血液、あるいは特定の臓器（例え
ば、心臓、胎盤、肺など）、または臓器から単離した組
織、あるいは細胞を得る。得られた臓器、組織または細
胞等を、常法に従い組織切片とし、本発明の抗体を用い
て免疫染色を行う。細胞表層での該受容体タンパク質の
染色度合いを定量化することにより、細胞膜上の該タン
パク質を確認することにより、定量的または定性的に、
細胞膜における本発明のレセプタータンパク質またはそ
の部分ペプチドの量を確認することができる。 （iv）本発明のレセプタータンパク質もしくはその部分
ペプチドを発現する形質転換体等を用いて同様の手段を
とることにより確認することもできる。

【００９９】本発明のスクリーニング方法を用いて得ら
れる化合物またはその塩は、細胞膜における本発明のレ
セプタータンパク質またはその部分ペプチドの量を変化
させる作用を有する化合物であり、具体的には、（イ）
細胞膜における本発明のレセプタータンパク質またはそ
の部分ペプチドの量を増加させることにより、Ｇタンパ
ク質共役型レセプターを介する細胞刺激活性（例えば、
アラキドン酸遊離、アセチルコリン遊離、細胞内Ｃａ²⁺
遊離、細胞内ｃＡＭＰ生成、細胞内ｃＧＭＰ生成、イノ
シトールリン酸産生、細胞膜電位変動、細胞内タンパク
質のリン酸化、ｃ−ｆｏｓの活性化、ｐＨの低下などを
促進する活性または抑制する活性など）を増強させる化
合物、（ロ）細胞膜における本発明のレセプタータンパ
ク質またはその部分ペプチドの量を減少させることによ
り、該細胞刺激活性を減弱させる化合物である。該化合
物としては、ペプチド、蛋白、非ペプチド性化合物、合
成化合物、発酵生産物などが挙げられ、これら化合物は
新規な化合物であってもよいし、公知の化合物であって
もよい。該細胞刺激活性を増強させる化合物は、本発明
のレセプタータンパク質等の生理活性を増強するための
安全で低毒性な医薬として有用である。該細胞刺激活性
を減弱させる化合物は、本発明のレセプタータンパク質
等の生理活性を減少させるための安全で低毒性な医薬と
して有用である。

【０１００】本発明のスクリーニング方法を用いて得ら
れる化合物またはその塩を医薬組成物として使用する場
合、常套手段に従って実施することができる。例えば、
上記した本発明のレセプタータンパク質を含有する医薬
と同様にして、錠剤、カプセル剤、エリキシル剤、マイ
クロカプセル剤、無菌性溶液、懸濁液剤などとすること
ができる。このようにして得られる製剤は安全で低毒性
であるので、例えば、ヒトやその他の哺乳動物（例え
ば、ラット、マウス、ウサギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ネ
コ、イヌ、サルなど）に対して投与することができる。
該化合物またはその塩の投与量は、投与対象、対象臓
器、症状、投与方法などにより差異はあるが、経口投与
の場合、一般的に例えば、癌患者（60 ｋｇとして）に
おいては、一日につき約0.1〜100 ｍｇ、好ましくは約
1.0〜50 ｍｇ、より好ましくは約1.0〜20 ｍｇである。
非経口的に投与する場合は、その１回投与量は投与対
象、対象臓器、症状、投与方法などによっても異なる
が、例えば、注射剤の形では通常例えば、癌患者（60
ｋｇとして）においては、一日につき約0.01〜30 ｍｇ
程度、好ましくは約0.1〜20 ｍｇ程度、より好ましくは
約0.1〜10ｍｇ程度を静脈注射により投与するのが好都
合である。他の動物の場合も、60ｋｇ当たりに換算した
量を投与することができる。

【０１０１】（11）細胞膜における本発明のレセプター
タンパク質またはその部分ペプチドの量を変化させる化
合物を含有する各種疾病の予防および／または治療剤 本発明のレセプタータンパク質または該レセプタータン
パク質をコードするＤＮＡは中枢疾患（例えば、アルツ
ハイマー病、痴呆、摂食障害など）、炎症性疾患（例え
ば、アレルギー、喘息、リュウマチなど）、循環器疾患
（例えば、高血圧症、心肥大、狭心症、動脈硬化症
等）、癌（例えば、非小細胞肺癌、卵巣癌、前立腺癌、
胃癌、膀胱癌、乳癌、子宮頸部癌、結腸癌、直腸癌
等）、代謝性疾患（例えば、糖尿病、糖尿病合併症、肥
満、痛風、白内障等）、免疫系疾患（例えば、自己免疫
疾患等）、消化器系疾患（例えば、胃潰瘍、十二指腸潰
瘍、胃炎、逆流性食道炎等）などの予防および／または
治療に有用である。該化合物を本発明のレセプタータン
パク質の機能不全に関連する疾患の予防・治療剤として
使用する場合は、常套手段に従って製剤化することがで
きる。例えば、該化合物は、必要に応じて糖衣を施した
錠剤、カプセル剤、エリキシル剤、マイクロカプセル剤
などとして経口的に、あるいは水もしくはそれ以外の薬
学的に許容し得る液との無菌性溶液、または懸濁液剤な
どの注射剤の形で非経口的に使用できる。例えば、該化
合物を生理学的に認められる公知の担体、香味剤、賦形
剤、ベヒクル、防腐剤、安定剤、結合剤などとともに一
般に認められた製剤実施に要求される単位用量形態で混
和することによって製造することができる。これら製剤
における有効成分量は指示された範囲の適当な用量が得
られるようにするものである。

【０１０２】錠剤、カプセル剤などに混和することがで
きる添加剤としては、例えば、ゼラチン、コーンスター
チ、トラガント、アラビアゴムのような結合剤、結晶性
セルロースのような賦形剤、コーンスターチ、ゼラチ
ン、アルギン酸などのような膨化剤、ステアリン酸マグ
ネシウムのような潤滑剤、ショ糖、乳糖またはサッカリ
ンのような甘味剤、ペパーミント、アカモノ油またはチ
ェリーのような香味剤などが用いられる。調剤単位形態
がカプセルである場合には、上記タイプの材料にさらに
油脂のような液状担体を含有することができる。注射の
ための無菌組成物は注射用水のようなベヒクル中の活性
物質、胡麻油、椰子油などのような天然産出植物油など
を溶解または懸濁させるなどの通常の製剤実施に従って
処方することができる。注射用の水性液としては、例え
ば、生理食塩水、ブドウ糖やその他の補助薬を含む等張
液（例えば、Ｄ−ソルビトール、Ｄ−マンニトール、塩
化ナトリウムなど）などが用いられ、適当な溶解補助
剤、例えば、アルコール（例、エタノール）、ポリアル
コール（例、プロピレングリコール、ポリエチレングリ
コール）、非イオン性界面活性剤（例、ポリソルベート
80^TM、ＨＣＯ−５０）などと併用してもよい。油性液と
しては、例えば、ゴマ油、大豆油などが用いられ、溶解
補助剤である安息香酸ベンジル、ベンジルアルコールな
どと併用してもよい。

【０１０３】また、上記予防・治療剤は、例えば、緩衝
剤（例えば、リン酸塩緩衝液、酢酸ナトリウム緩衝
液）、無痛化剤（例えば、塩化ベンザルコニウム、塩酸
プロカインなど）、安定剤（例えば、ヒト血清アルブミ
ン、ポリエチレングリコールなど）、保存剤（例えば、
ベンジルアルコール、フェノールなど）、酸化防止剤な
どと配合してもよい。調製された注射液は通常、適当な
アンプルに充填される。このようにして得られる製剤は
安全で低毒性であるので、例えば、ヒトやその他の哺乳
動物（例えば、ラット、マウス、ウサギ、ヒツジ、ブ
タ、ウシ、ネコ、イヌ、サルなど）に対して投与するこ
とができる。該化合物またはその塩の投与量は、投与対
象、対象臓器、症状、投与方法などにより差異はある
が、経口投与の場合、一般的に例えば、癌患者（60 ｋ
ｇとして）においては、一日につき約0.1〜100 ｍｇ、
好ましくは約1.0〜50 ｍｇ、より好ましくは約1.0〜20
ｍｇである。非経口的に投与する場合は、その１回投与
量は投与対象、対象臓器、症状、投与方法などによって
も異なるが、例えば、注射剤の形では通常例えば、癌患
者（60 ｋｇとして）においては、一日につき約0.01〜3
0 ｍｇ程度、好ましくは約0.1〜20 ｍｇ程度、より好ま
しくは約0.1〜10ｍｇ程度を静脈注射により投与するの
が好都合である。他の動物の場合も、60ｋｇ当たりに換
算した量を投与することができる。

【０１０４】（12）本発明のレセプタータンパク質、そ
の部分ペプチドまたはそれらの塩に対する抗体による中
和 本発明のレセプタータンパク質もしくはその部分ペプチ
ドまたはその塩に対する抗体の、それらレセプタータン
パク質などに対する中和活性とは、すなわち、該レセプ
タータンパク質の関与するシグナル伝達機能を不活性化
する活性を意味する。従って、該抗体が中和活性を有す
る場合は、該レセプタータンパク質の関与するシグナル
伝達、例えば、該レセプタータンパク質を介する細胞刺
激活性（例えば、アラキドン酸遊離、アセチルコリン遊
離、細胞内Ｃａ²⁺遊離、細胞内ｃＡＭＰ生成、細胞内ｃ
ＧＭＰ生成、イノシトールリン酸産生、細胞膜電位変
動、細胞内タンパク質のリン酸化、ｃ−ｆｏｓの活性
化、ｐＨの低下などを促進する活性または抑制する活性
など）を不活性化することができる。したがって、該レ
セプタータンパク質の過剰発現などに起因する疾患の予
防および／または治療に用いることができる。

【０１０５】（13）本発明のＧタンパク質共役型レセプ
タータンパク質をコードするＤＮＡを有するトランスジ
ェニック動物の作出 本発明のＤＮＡを用いて、本発明のレセプタータンパク
質等を発現するトランスジェニック動物を作出すること
ができる。動物としては、哺乳動物（例えば、ラット、
マウス、ウサギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ネコ、イヌ、サ
ルなど）など（以下、動物と略記する場合がある）が挙
げられるが、特に、マウス、ウサギなどが好適である。
本発明のＤＮＡを対象動物に導入するにあたっては、該
ＤＮＡを動物細胞で発現させうるプロモーターの下流に
結合した遺伝子コンストラクトとして用いるのが一般に
有利である。例えば、ウサギ由来の本発明のＤＮＡを導
入する場合、これと相同性が高い動物由来の本発明のＤ
ＮＡを動物細胞で発現させうる各種プロモーターの下流
に結合した遺伝子コンストラクトを、例えば、ウサギ受
精卵へマイクロインジェクションすることによって本発
明のレセプタータンパク質等を高産生するＤＮＡ導入動
物を作出できる。このプロモーターとしては、例えば、
ウイルス由来プロモーター、メタロチオネイン等のユビ
キアスな発現プロモーターも使用しうるが、好ましくは
心臓で特異的に発現する遺伝子のプロモーターが用いら
れる。

【０１０６】受精卵細胞段階における本発明のＤＮＡの
導入は、対象動物の胚芽細胞および体細胞の全てに存在
するように確保される。ＤＮＡ導入後の作出動物の胚芽
細胞において本発明のレセプタータンパク質等が存在す
ることは、作出動物の子孫が全てその胚芽細胞および体
細胞の全てに本発明のレセプタータンパク質等を有する
ことを意味する。遺伝子を受け継いだこの種の動物の子
孫はその胚芽細胞および体細胞の全てに本発明のレセプ
タータンパク質等を有する。本発明のＤＮＡ導入動物
は、交配により遺伝子を安定に保持することを確認し
て、該ＤＮＡ保有動物として通常の飼育環境で飼育継代
を行うことができる。さらに、目的ＤＮＡを保有する雌
雄の動物を交配することにより、導入遺伝子を相同染色
体の両方に持つホモザイゴート動物を取得し、この雌雄
の動物を交配することによりすべての子孫が該ＤＮＡを
有するように繁殖継代することができる。本発明のＤＮ
Ａが導入された動物は、本発明のレセプタータンパク質
等が高発現させられているので、本発明のレセプタータ
ンパク質等に対するアゴニストまたはアンタゴニストの
スクリーニング用の動物などとして有用である。本発明
のＤＮＡ導入動物を、組織培養のための細胞源として使
用することもできる。例えば、本発明のＤＮＡ導入マウ
スの組織中のＤＮＡもしくはＲＮＡを直接分析するか、
あるいは遺伝子により発現された本発明のレセプタータ
ンパク質が存在する組織を分析することにより、本発明
のレセプタータンパク質等について分析することができ
る。本発明のレセプタータンパク質等を有する組織の細
胞を標準組織培養技術により培養し、これらを使用し
て、例えば、脳や末梢組織由来のような一般に培養困難
な組織からの細胞の機能を研究することができる。ま
た、その細胞を用いることにより、例えば、各種組織の
機能を高めるような医薬の選択も可能である。また、高
発現細胞株があれば、そこから、本発明のレセプタータ
ンパク質等を単離精製することも可能である。

【０１０７】（14）アンチセンスポリヌクレオチド（核
酸）を含有する医薬 本発明のポリヌクレオチド（例、ＤＮＡ）に相補的に結
合し、該ポリヌクレオチド（例、ＤＮＡ）の発現を抑制
することができる本発明のアンチセンスポリヌクレオチ
ドは低毒性であり、生体内における本発明のタンパク質
または本発明のポリヌクレオチド（例、ＤＮＡ）の機能
を抑制することができるので、例えば、本発明のレセプ
タータンパク質の機能不全に関連する疾患の予防および
／または治療剤として用いることができる。上記アンチ
センスポリヌクレオチドを上記の治療・予防剤として使
用する場合、公知の方法に従って製剤化し、投与するこ
とができる。例えば、該アンチセンスポリヌクレオチド
を用いる場合、該アンチセンスポリヌクレオチドを単独
あるいはレトロウイルスベクター、アデノウイルスベク
ター、アデノウイルスアソシエーテッドウイルスベクタ
ーなどの適当なベクターに挿入した後、常套手段に従っ
て、ヒトまたは哺乳動物（例、ラット、ウサギ、ヒツ
ジ、ブタ、ウシ、ネコ、イヌ、サルなど）に対して経口
的または非経口的に投与することができる。該アンチセ
ンスポリヌクレオチドは、そのままで、あるいは摂取促
進のために補助剤などの生理学的に認められる担体とと
もに製剤化し、遺伝子銃やハイドロゲルカテーテルのよ
うなカテーテルによって投与できる。該アンチセンスポ
リヌクレオチドの投与量は、対象疾患、投与対象、投与
ルートなどにより差異はあるが、例えば、癌の治療の目
的で本発明のアンチセンスヌクレオチドを臓器（例、肝
臓、肺、心臓、腎臓など）に局所投与する場合、一般的
に成人（体重60 ｋｇ）においては、一日につき該アン
チセンスポリヌクレオチドを約0.1〜100 ｍｇ投与す
る。さらに、該アンチセンスポリヌクレオチドは、組織
や細胞における本発明のＤＮＡの存在やその発現状況を
調べるための診断用オリゴヌクレオチドプローブとして
使用することもできる。さらに、本発明は、 本発明のタンパク質をコードするＲＮＡの一部を含有
する二重鎖ＲＮＡ、 該二重鎖ＲＮＡを含有してなる医薬、 本発明のタンパク質をコードするＲＮＡの一部を含有
するリボザイム、 該リボザイムを含有してなる医薬を提供する。 上記アンチセンスポリヌクレオチドと同様に、二重鎖Ｒ
ＮＡ、リボザイムなども、本発明のＤＮＡの発現を抑制
することができ、生体内における本発明で用いられるタ
ンパク質または本発明で用いられるＤＮＡの機能抑制す
ることができるので、例えば、本発明のレセプタータン
パク質の機能不全に関連する疾患の予防および／または
治療剤などとして使用することができる。二重鎖ＲＮＡ
は、公知の方法（例、Nature, 411巻, 494頁, 2001年）
に準じて、本発明のポリヌクレオチドの配列を基に設計
して製造することができる。リボザイムは、公知の方法
（例、TRENDS in Molecular Medicine, 7巻, 221頁, 20
01年）に準じて、本発明のポリヌクレオチドの配列を基
に設計して製造することができる。例えば、本発明のタ
ンパク質をコードするＲＮＡの一部に公知のリボザイム
を連結することによって製造することができる。本発明
のタンパク質をコードするＲＮＡの一部としては、公知
のリボザイムによって切断され得る本発明のＲＮＡ上の
切断部位に近接した部分（ＲＮＡ断片）が挙げられる。
上記の二重鎖ＲＮＡまたはリボザイムを上記予防・治療
剤として使用する場合、アンチセンスポリヌクレオチド
と同様にして製剤化し、投与することができる。

【０１０８】本明細書および図面において、塩基やアミ
ノ酸などを略号で表示する場合、その表示は、IUPAC-IU
B Commission on Biochemical Nomenclatureによる略号
あるいは当該分野における慣用略号に基づくものであ
る。その例を以下に示す。またアミノ酸に関し光学異性
体があり得る場合は、特に明示しなければL体を示すも
のとする。

【０１０９】 Gly ：グリシン Ala ：アラニン Val ：バリン Leu ：ロイシン Ile ：イソロイシン Ser ：セリン Thr ：スレオニン Cys ：システイン Met ：メチオニン Glu ：グルタミン酸 Asp ：アスパラギン酸 Lys ：リジン Arg ：アルギニン His ：ヒスチジン Phe ：フェニルアラニン Tyr ：チロシン Trp ：トリプトファン Pro ：プロリン Asn ：アスパラギン Gln ：グルタミン pGlu ：ピログルタミン酸 Me ：メチル基 Et ：エチル基 Bu ：ブチル基 Ph ：フェニル基 TC ：チアゾリジン−４(Ｒ)−カルボキサミド基

【０１１０】また、本明細書中で繁用される置換基、保
護基および試薬を下記の記号で表記する。 Ｔｏｓ ：ｐ−トルエンスルフォニル ＣＨＯ ：ホルミル Ｂｚｌ ：ベンジル Ｃｌ₂Ｂｚｌ：２,６−ジクロロベンジル Ｂｏｍ ：ベンジルオキシメチル Ｚ ：ベンジルオキシカルボニル Ｃｌ-Ｚ ：2−クロロベンジルオキシカルボニル Ｂｒ-Ｚ ：2−ブロモベンジルオキシカルボニル Ｂｏｃ ：ｔ−ブトキシカルボニル ＤＮＰ ：ジニトロフェノール Ｔｒｔ ：トリチル Ｂｕｍ ：ｔ−ブトキシメチル Ｆｍｏｃ ：Ｎ-９−フルオレニルメトキシカルボニル ＨＯＢｔ ：１−ヒドロキシベンズトリアゾール ＨＯＯＢｔ ：３,４−ジヒドロ−３−ヒドロキシ−４−オキソ− １,２,３−ベンゾトリアジン ＨＯＮＢ ：１−ヒドロキシ−５−ノルボルネン−２,３−ジカルボ キシイミド ＤＣＣ ：Ｎ,Ｎ'−ジシクロヘキシルカルボジイミド

【０１１１】本明細書の配列表の配列番号は、以下の配
列を示す。 配列番号：１ 本発明のヒト由来新規Ｇタンパク質共役型レセプタータ
ンパク質ＴＧＲ３７のアミノ酸配列を示す。 配列番号：２ 本発明のヒト由来新規Ｇタンパク質共役型レセプタータ
ンパク質ＴＧＲ３７をコードするｃＤＮＡの塩基配列を
示す。 配列番号：３ 以下の実施例１におけるＰＣＲ反応で使用したプライマ
ー１の塩基配列を示す。 配列番号：４ 以下の実施例１におけるＰＣＲ反応で使用したプライマ
ー２の塩基配列を示す。 配列番号：５ 以下の実施例２におけるＰＣＲ反応で使用したプライマ
ー３の塩基配列を示す。 配列番号：６ 以下の実施例２におけるＰＣＲ反応で使用したプライマ
ー４の塩基配列を示す。 配列番号：７ 以下の実施例２におけるＰＣＲ反応で使用したプローブ
１の塩基配列を示す。（５‘末端にリポーター色素とし
てＦＡＭ、３’末端にはクエンチャーとしてＴＡＭＲＡ
を標識とした。） 後述の実施例１で得られた形質転換体Ｅｓｃｈｅｒｉｃ
ｈｉａ ｃｏｌｉ ＴＯＰ１０／ｐＴＢ２２３３は、２０
０１年７月５日付で、茨城県つくば市東１−１−１ 中
央第６ 独立行政法人産業技術総合研究所 特許生物寄
託センターに受託番号ＦＥＲＭ ＢＰ−７６４９として
寄託されている。

【０１１２】

【実施例】実施例１ ヒト脳由来Ｇタンパク質共役型レセプタータンパク質を
コードするｃＤＮＡのクローニングと塩基配列の決定 ヒト脳Ｃａｐ Ｓｉｔｅ ｃＤＮＡ（ニッポンジーン
社）を鋳型とし、２個のプライマー、プライマー１（配
列番号：３）およびプライマー２（配列番号：４）を用
いてＰＣＲ反応を行った。該反応における反応液の組成
は上記ｃＤＮＡ１μｌを鋳型として使用し、Ｐｆｕ Ｔ
ｕｒｂｏ ＤＮＡ Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ（ＳＴＲＡＴ
ＡＧＥＮＥ社）１Ｕ、プライマー１（配列番号：３）お
よびプライマー２（配列番号：４）を各０．５μＭ、ｄ
ＮＴＰｓを２００μＭ、および酵素に２ＸＧＣ Ｂｕｆ
ｆｅｒＩ（ＴａＫａＲａ社）を２５μｌ加え、５０μｌ
の液量とした。ＰＣＲ反応は、９５℃・１分の後、９５
℃・１分、６０℃・１分、７２℃・３分のサイクルを４
０回繰り返し行った。次にアガロースゲル電気泳動にて
１８４８ｂｐに相当する該ＰＣＲ反応産物を精製した
後、これをＺｅｒｏ Ｂｌｕｎｔ ＴＯＰＯ ＰＣＲ
クローニングキット（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社）の処方
に従いプラスミドベクターｐＣＲ−ＢｌｕｎｔＩＩ−Ｔ
ＯＰＯ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社）へサブクローニング
した。これを大腸菌ＴＯＰ１０に導入し、ｃＤＮＡを持
つクローンをカナマイシンを含むＬＢ寒天培地中で選択
した。個々のクローンの配列を解析した結果、新規Ｇタ
ンパク質共役型レセプタータンパク質をコードするｃＤ
ＮＡ配列（配列番号：２）を得た。そのプラスミドをｐ
ＴＢ２２３３と名付けた。このＤＮＡ配列がコードする
アミノ酸配列（配列番号：１）を含有する新規Ｇタンパ
ク質共役型レセプタータンパク質をＴＧＲ３７と命名し
た。さらに、その形質転換体を大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉ
ｃｈｉａ ｃｏｌｉ）ＴＯＰ１０／ｐＴＢ２２３３と命
名した。ＴＧＲ３７の疎水性プロット図を図１に示す。

【０１１３】実施例２ ヒト脳由来Ｇタンパク質共役型レセプタータンパク質の
発現組織の検討 ヒトＭＴＣ ｐａｎｅｌ ＨｕｍａｎＩ、およびＨｕｍ
ａｎＩＩ（ＣＬＯＮＴＥＣＨ社）を鋳型とし、２個のプ
ライマー、プライマー３（配列番号：５）、プライマー
４（配列番号：６）およびプローブ１（配列番号：７）
を用いてＰＣＲ反応を行った。該反応における反応液の
組成は上記ｃＤＮＡ１μｌを鋳型として使用し、プライ
マー３（配列番号：５）およびプライマー４（配列番
号：６）を各０．５μＭ、プローブ１（配列番号：７）
を０．１μＭ、およびＴａｑＭａｎＵｎｉｖｅｒｓａｌ
ＰＣＲ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ（アプライドバイオシ
ステムズ社）２５μｌを加え、５０μｌの液量とした。
ＰＣＲ反応は、ＡＢＩ７７００（アプライドバイオシス
テムズ社）を用いて５０℃・２分、９５℃・１０分の
後、９５℃・１５秒、６０℃・１分のサイクルを４０回
繰り返し行った。Ｔｈｒｅｓｈｏｌｄの値を０．０５と
し、解析を行った結果、脳ｃＤＮＡで３４コピー、心臓
ｃＤＮＡで５．０コピー、肝臓ｃＤＮＡで９．６コピ
ー、肺ｃＤＮＡで６．６コピー、腎臓ｃＤＮＡで６．３
コピー、膵臓ｃＤＮＡで６．１コピー、骨格筋ｃＤＮＡ
で４．２コピー、胎盤ｃＤＮＡで４．９コピー、脾臓ｃ
ＤＮＡで８．５コピー、胸腺ｃＤＮＡで４．８コピー、
小腸ｃＤＮＡで７．０コピー、大腸ｃＤＮＡで１０コピ
ー、精巣ｃＤＮＡで１８コピー、前立腺ｃＤＮＡで３．
２コピー、卵巣ｃＤＮＡで５．１コピー、白血球ｃＤＮ
Ａで５．０コピーの発現が確認された。

【０１１４】

【発明の効果】本発明のＧタンパク質共役型レセプター
タンパク質もしくはその部分ペプチドまたはその塩、該
レセプタータンパク質またはその部分ペプチドをコード
するポリヌクレオチド（例えば、ＤＮＡ、ＲＮＡおよび
それらの誘導体）は、リガンド（アゴニスト）の決
定、抗体および抗血清の入手、組換え型レセプター
タンパク質の発現系の構築、同発現系を用いたレセプ
ター結合アッセイ系の開発と医薬品候補化合物のスクリ
ーニング、構造的に類似したリガンド・レセプターと
の比較にもとづいたドラッグデザインの実施、遺伝子
診断におけるプローブやＰＣＲプライマーの作成のため
の試薬、トランスジェニック動物の作出または遺伝
子予防・治療剤等の医薬等として用いることができる。

【０１１５】

【配列表】 SEQUENCE LISTING <110> Takeda Chemical Industries, Ltd. <120> Novel G Protein-Coupled Receptor Protein and its DNA <130> P2001-180 <160> 7 <210> 1 <211> 560 <212> PRT <213> Human <400> 1 Met Asp Leu Lys Thr Val Leu Ser Leu Pro Arg Tyr Pro Gly Glu Phe 5 10 15 Leu His Pro Val Val Tyr Ala Cys Thr Ala Val Met Leu Leu Cys Leu 20 25 30 Leu Ala Ser Phe Val Thr Tyr Ile Val His Gln Ser Ala Ile Arg Ile 35 40 45 Ser Arg Lys Gly Arg His Thr Leu Leu Asn Phe Cys Phe His Ala Ala 50 55 60 Leu Thr Phe Thr Val Phe Ala Gly Gly Ile Asn Arg Thr Lys Tyr Pro 65 70 75 80 Ile Leu Cys Gln Ala Val Gly Ile Val Leu His Tyr Ser Thr Leu Ser 85 90 95 Thr Met Leu Trp Ile Gly Val Thr Ala Arg Asn Ile Tyr Lys Gln Val 100 105 110 Thr Lys Lys Ala Pro Leu Cys Leu Asp Thr Asp Gln Pro Pro Tyr Pro 115 120 125 Arg Gln Pro Leu Leu Arg Phe Tyr Leu Val Ser Gly Gly Val Pro Phe 130 135 140 Ile Ile Cys Gly Val Thr Ala Ala Thr Asn Ile Arg Asn Tyr Gly Thr 145 150 155 160 Glu Asp Glu Asp Thr Ala Tyr Cys Trp Met Ala Trp Glu Pro Ser Leu 165 170 175 Gly Ala Phe Tyr Gly Pro Ala Ala Ile Ile Thr Leu Val Thr Cys Val 180 185 190 Tyr Phe Leu Gly Thr Tyr Val Gln Leu Arg Arg His Pro Gly Arg Arg 195 200 205 Tyr Glu Leu Arg Thr Gln Pro Glu Glu Gln Arg Arg Leu Ala Thr Pro 210 215 220 Glu Gly Gly Arg Gly Ile Arg Pro Gly Thr Pro Pro Ala His Asp Ala 225 230 235 240 Pro Gly Ala Ser Val Leu Gln Asn Glu His Ser Phe Gln Ala Gln Leu 245 250 255 Arg Ala Ala Ala Phe Thr Leu Phe Leu Phe Thr Ala Thr Trp Ala Phe 260 265 270 Gly Ala Leu Ala Val Ser Gln Gly His Phe Leu Asp Met Val Phe Ser 275 280 285 Cys Leu Tyr Gly Ala Phe Cys Val Thr Leu Gly Leu Phe Val Leu Ile 290 295 300 His His Cys Ala Lys Arg Glu Asp Val Trp Gln Cys Trp Trp Ala Cys 305 310 315 320 Cys Pro Pro Arg Lys Asp Ala His Pro Ala Leu Asp Ala Asn Gly Ala 325 330 335 Ala Leu Gly Arg Ala Ala Cys Leu His Ser Pro Gly Leu Gly Gln Pro 340 345 350 Arg Gly Phe Ala His Pro Pro Gly Pro Cys Lys Met Thr Asn Leu Gln 355 360 365 Ala Ala Gln Gly His Ala Ser Cys Leu Ser Pro Ala Thr Pro Cys Cys 370 375 380 Ala Lys Met His Cys Glu Pro Leu Thr Ala Asp Glu Ala His Val His 385 390 395 400 Leu Gln Glu Glu Gly Ala Phe Gly His Asp Pro His Leu His Gly Cys 405 410 415 Leu Gln Gly Arg Thr Lys Pro Pro Tyr Phe Ser Arg His Pro Ala Glu 420 425 430 Glu Pro Glu Tyr Ala Tyr His Ile Pro Ser Ser Leu Asp Gly Ser Pro 435 440 445 Arg Ser Ser Arg Thr Asp Ser Pro Pro Ser Ser Leu Asp Gly Pro Ala 450 455 460 Gly Thr His Thr Leu Ala Cys Cys Thr Gln Gly Asp Pro Phe Pro Met 465 470 475 480 Val Thr Gln Pro Glu Gly Ser Asp Gly Ser Pro Ala Leu Tyr Ser Cys 485 490 495 Pro Thr Gln Pro Gly Arg Glu Ala Ala Leu Gly Pro Gly His Leu Glu 500 505 510 Met Leu Arg Arg Thr Gln Ser Leu Pro Phe Gly Gly Pro Ser Gln Asn 515 520 525 Gly Leu Pro Lys Gly Lys Leu Leu Glu Gly Leu Pro Phe Gly Thr Asp 530 535 540 Gly Thr Gly Asn Ile Arg Thr Gly Pro Trp Lys Asn Glu Thr Thr Val 545 550 555 560 <210> 2 <211> 1680 <212> DNA <213> Human <400> 2 atggatctga agacagtgct ctccctgccc cgctacccag gggagttcct gcaccccgtg 60 gtgtacgcgt gcacggccgt catgctgctc tgcctcctgg cctccttcgt cacctacatc 120 gtgcaccaga gcgccatccg catcagccgc aagggccggc acacgctcct gaatttctgc 180 ttccacgcgg ccctgacctt cactgtgttc gccggcggca tcaatcgcac caagtacccc 240 atcctgtgcc aggcggtggg catcgtgctg cactattcta cactgtccac catgctgtgg 300 ataggagtga ccgccaggaa catctacaag caggtgacca agaaggcccc tctgtgcctg 360 gacacagacc agccaccgta ccccaggcag cccctgctca ggttttacct cgtcagcgga 420 ggggtcccct ttatcatctg tggggtcacg gctgccacga acatcaggaa ttacgggaca 480 gaggacgagg acacggcgta ctgctggatg gcctgggagc ccagcctggg cgccttctac 540 ggcccagccg ccatcatcac cctggtcacc tgtgtgtact tcctgggcac ctacgtgcag 600 ctgcggcgcc acccagggcg caggtacgag ctgcgcacac agcccgagga gcagcggcgg 660 ctggcgacac ccgagggcgg ccgtgggatc cggccaggca ccccacccgc acacgatgcc 720 cccggcgcct ccgtgctgca gaacgagcac tcattccagg cacagctgcg cgccgccgcc 780 ttcacgctgt tcctgttcac ggccacgtgg gccttcgggg cgctggcggt gtcacagggc 840 cacttcctgg acatggtctt cagctgcctg tacggcgcct tctgcgtgac cctgggactc 900 ttcgtgctca tccaccactg cgccaagcgt gaggacgtgt ggcagtgctg gtgggcatgc 960 tgcccgcccc gcaaggacgc ccaccccgca cttgacgcca acggggccgc gctgggccgc 1020 gccgcctgcc tgcactcgcc gggactgggc cagccacggg gcttcgcgca cccaccgggc 1080 ccctgcaaga tgaccaacct gcaggccgcg cagggccacg ccagttgcct gtcaccggcc 1140 accccgtgct gcgccaagat gcactgcgag ccactgacgg cggacgaggc gcacgtgcac 1200 ctgcaggagg agggcgcctt cgggcacgac ccccacctgc acgggtgcct tcagggcaga 1260 actaagccgc cctactttag ccggcaccca gcagaggagc ccgagtacgc ctaccacatc 1320 ccatccagcc tggatggcag cccccgcagc tcgcgcacag acagcccccc cagctctctg 1380 gatggcccgg cggggacaca cacgctggcc tgctgcaccc agggcgaccc cttccccatg 1440 gtcacccagc ccgagggcag tgatgggagc cctgccctct acagctgccc cacgcagccg 1500 ggcagggagg cagcgctcgg gcccggccac ttggagatgc tgcggaggac acagtccctg 1560 ccctttggtg gccccagcca gaacgggctg cccaagggta aattgctaga aggcctgccg 1620 tttggcaccg acgggaccgg caacatccga acgggaccct ggaaaaacga aactactgtg 1680 <210> 3 <211> 29 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Designed oligonucleotide primer to amplify DNA encoding TGR37 <400> 3 gtctgggact ttgaccttcc agaggccat 29 <210> 4 <211> 30 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Designed oligonucleotide primer to amplify DNA encoding TGR37 <400> 4 tctgctctga agctcctcca ggaacaccgt 30 <210> 5 <211> 17 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Designed oligonucleotide primer to amplify DNA encoding TGR37 <400> 5 cggcatcaat cgcacca 17 <210> 6 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Designed oligonucleotide primer to amplify DNA encoding TGR37 <400> 6 atagtgcagc acgatgccc 19 <210> 7 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Designed oligonucleotide probe (labeled with FAM (5') and TAMRA (3 ')) <400> 7 accccatcct gtgccaggcg 20

【図面の簡単な説明】

【図１】 ＴＧＲ３７の疎水性プロット図である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｐ 25/00 Ａ６１Ｐ 29/00 ４Ｃ０８４ 29/00 35/00 ４Ｈ０４５ 35/00 37/00 37/00 Ｃ０７Ｋ 14/705 Ｃ０７Ｋ 14/705 16/28 16/28 Ｃ１２Ｎ 1/15 Ｃ１２Ｎ 1/15 1/19 1/19 1/21 1/21 Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ 5/10 Ｃ１２Ｑ 1/68 Ａ Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｇ０１Ｎ 33/15 Ｚ Ｃ１２Ｑ 1/68 33/50 Ｚ Ｇ０１Ｎ 33/15 33/53 Ｄ 33/50 Ｍ 33/53 33/566 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ 33/566 5/00 Ａ (72)発明者 宮嶋 伸行 茨城県つくば市吾妻４−16−４ プレビュ ー吾妻403 Ｆターム(参考） 2G045 AA34 AA35 DA13 DA36 FB02 4B024 AA01 AA11 BA63 CA01 GA11 HA11 4B063 QA01 QQ53 QR32 QR55 QS34 QX01 4B064 AG20 AG27 CA19 CC24 DA01 DA13 4B065 AA93Y AB01 AC14 BA02 CA24 CA25 CA44 CA46 4C084 AA17 ZA022 ZA362 ZA662 ZB072 ZB112 ZB262 ZC022 4H045 AA10 AA11 BA10 CA40 DA50 DA76 EA20 EA50 FA74

Claims (36)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 配列番号：１で表されるアミノ酸配列と
   同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するこ
   とを特徴とするＧタンパク質共役型レセプタータンパク
   質またはその塩。
2. 【請求項２】 請求項１記載のＧタンパク質共役型レセ
   プタータンパク質の部分ペプチドまたはその塩。
3. 【請求項３】 請求項１記載のＧタンパク質共役型レセ
   プタータンパク質をコードするポリヌクレオチドを含有
   するポリヌクレオチド。
4. 【請求項４】 ＤＮＡである請求項３記載のポリヌクレ
   オチド。
5. 【請求項５】 配列番号：２で表される塩基配列を有す
   る請求項３記載のポリヌクレオチド。
6. 【請求項６】 請求項３記載のポリヌクレオチドを含有
   する組換えベクター。
7. 【請求項７】 請求項６記載の組換えベクターで形質転
   換させた形質転換体。
8. 【請求項８】 請求項７記載の形質転換体を培養し、請
   求項１記載のＧタンパク質共役型レセプタータンパク質
   を生成せしめることを特徴とする請求項１記載のＧタン
   パク質共役型レセプタータンパク質またはその塩の製造
   法。
9. 【請求項９】 請求項１記載のＧタンパク質共役型レセ
   プタータンパク質もしくは請求項２記載の部分ペプチド
   またはその塩に対する抗体。
10. 【請求項１０】 請求項１記載のＧタンパク質共役型レ
    セプタータンパク質のシグナル伝達を不活性化する中和
    抗体である請求項９記載の抗体。
11. 【請求項１１】 請求項９記載の抗体を含有してなる診
    断薬。
12. 【請求項１２】 請求項１記載のＧタンパク質共役型レ
    セプタータンパク質もしくは請求項２記載の部分ペプチ
    ドまたはその塩を用いることにより得られうる請求項１
    記載のＧタンパク質共役型レセプタータンパク質または
    その塩に対するリガンド。
13. 【請求項１３】 請求項１２記載のＧタンパク質共役型
    レセプターのリガンドを含有してなる医薬。
14. 【請求項１４】 請求項１記載のＧタンパク質共役型レ
    セプタータンパク質もしくは請求項２記載の部分ペプチ
    ドまたはその塩を用いることを特徴とする請求項１記載
    のＧタンパク質共役型レセプタータンパク質またはその
    塩に対するリガンドの決定方法。
15. 【請求項１５】 請求項１記載のＧタンパク質共役型レ
    セプタータンパク質もしくは請求項２記載の部分ペプチ
    ドまたはその塩を用いることを特徴とするリガンドと請
    求項１記載のＧタンパク質共役型レセプタータンパク質
    またはその塩との結合性を変化させる化合物またはその
    塩のスクリーニング方法。
16. 【請求項１６】 請求項１記載のＧタンパク質共役型レ
    セプタータンパク質もしくは請求項２記載の部分ペプチ
    ドまたはその塩を含有することを特徴とするリガンドと
    請求項１記載のＧタンパク質共役型レセプタータンパク
    質またはその塩との結合性を変化させる化合物またはそ
    の塩のスクリーニング用キット。
17. 【請求項１７】 請求項１５記載のスクリーニング方法
    または請求項１６記載のスクリーニング用キットを用い
    て得られうるリガンドと請求項１記載のＧタンパク質共
    役型レセプタータンパク質またはその塩との結合性を変
    化させる化合物またはその塩。
18. 【請求項１８】 請求項１５記載のスクリーニング方法
    または請求項１６記載のスクリーニング用キットを用い
    て得られうるリガンドと請求項１記載のＧタンパク質共
    役型レセプタータンパク質またはその塩との結合性を変
    化させる化合物またはその塩を含有してなる医薬。
19. 【請求項１９】 請求項３記載のポリヌクレオチドとハ
    イストリンジェントな条件下でハイブリダイズするポリ
    ヌクレオチド。
20. 【請求項２０】 請求項３記載のポリヌクレオチドと相
    補的な塩基配列またはその一部を含有してなるポリヌク
    レオチド。
21. 【請求項２１】 請求項３記載のポリヌクレオチドまた
    はその一部を用いることを特徴とする請求項１記載のＧ
    タンパク質共役型レセプタータンパク質のｍＲＮＡの定
    量方法。
22. 【請求項２２】 請求項９記載の抗体を用いることを特
    徴とする請求項１記載のＧタンパク質共役型レセプター
    タンパク質の定量方法。
23. 【請求項２３】 請求項２１または請求項２２記載の定
    量方法を用いることを特徴とする請求項１記載のＧタン
    パク質共役型レセプターの機能が関連する疾患の診断方
    法。
24. 【請求項２４】 請求項２１記載の定量方法を用いるこ
    とを特徴とする請求項１記載のＧタンパク質共役型レセ
    プタータンパク質の発現量を変化させる化合物またはそ
    の塩のスクリーニング方法。
25. 【請求項２５】 請求項２２記載の定量方法を用いるこ
    とを特徴とする細胞膜における請求項１記載のＧタンパ
    ク質共役型レセプタータンパク質量を変化させる化合物
    またはその塩のスクリーニング方法。
26. 【請求項２６】 請求項２４記載のスクリーニング方法
    を用いて得られうる請求項１記載のＧタンパク質共役型
    レセプタータンパク質の発現量を変化させる化合物また
    はその塩。
27. 【請求項２７】 請求項２５記載のスクリーニング方法
    を用いて得られうる細胞膜における請求項１記載のＧタ
    ンパク質共役型レセプタータンパク質量を変化させる化
    合物またはその塩。
28. 【請求項２８】 請求項２４記載のスクリーニング方法
    を用いて得られうる請求項１記載のＧタンパク質共役型
    レセプタータンパク質の発現量を変化させる化合物また
    はその塩を含有してなる医薬。
29. 【請求項２９】 請求項２５記載のスクリーニング方法
    を用いて得られうる細胞膜における請求項１記載のＧタ
    ンパク質共役型レセプタータンパク質量を変化させる化
    合物またはその塩を含有してなる医薬。
30. 【請求項３０】 中枢疾患、炎症性疾患、循環器疾患、
    癌、代謝性疾患、免疫系疾患または消化器系疾患の予防
    ・治療剤である請求項１８、２８または２９記載の医
    薬。
31. 【請求項３１】 哺乳動物に対して、請求項１５記載の
    スクリーニング方法または請求項１６記載のスクリーニ
    ング用キットを用いて得られうるリガンドと請求項１記
    載のＧタンパク質共役型レセプタータンパク質またはそ
    の塩との結合性を変化させる化合物またはその塩の有効
    量を投与することを特徴とする中枢疾患、炎症性疾患、
    循環器疾患、癌、代謝性疾患、免疫系疾患または消化器
    系疾患の予防・治療方法。
32. 【請求項３２】 哺乳動物に対して、請求項２４記載の
    スクリーニング方法を用いて得られうる請求項１記載の
    Ｇタンパク質共役型レセプタータンパク質の発現量を変
    化させる化合物またはその塩の有効量を投与することを
    特徴とする中枢疾患、炎症性疾患、循環器疾患、癌、代
    謝性疾患、免疫系疾患または消化器系疾患の予防・治療
    方法。
33. 【請求項３３】 哺乳動物に対して、請求項２５記載の
    スクリーニング方法を用いて得られうる細胞膜における
    請求項１記載のＧタンパク質共役型レセプタータンパク
    質量を変化させる化合物またはその塩の有効量を投与す
    ることを特徴とする中枢疾患、炎症性疾患、循環器疾
    患、癌、代謝性疾患、免疫系疾患または消化器系疾患の
    予防・治療方法。
34. 【請求項３４】 中枢疾患、炎症性疾患、循環器疾患、
    癌、代謝性疾患、免疫系疾患または消化器系疾患の予防
    ・治療剤を製造するための請求項１５記載のスクリーニ
    ング方法または請求項１６記載のスクリーニング用キッ
    トを用いて得られうるリガンドと請求項１記載のＧタン
    パク質共役型レセプタータンパク質またはその塩との結
    合性を変化させる化合物またはその塩の使用。
35. 【請求項３５】 中枢疾患、炎症性疾患、循環器疾患、
    癌、代謝性疾患、免疫系疾患または消化器系疾患の予防
    ・治療剤を製造するための請求項２４記載のスクリーニ
    ング方法を用いて得られうる請求項１記載のＧタンパク
    質共役型レセプタータンパク質の発現量を変化させる化
    合物またはその塩の使用。
36. 【請求項３６】 中枢疾患、炎症性疾患、循環器疾患、
    癌、代謝性疾患、免疫系疾患または消化器系疾患の予防
    ・治療剤を製造するための請求項２５記載のスクリーニ
    ング方法を用いて得られうる細胞膜における請求項１記
    載のＧタンパク質共役型レセプタータンパク質を変化さ
    せる化合物またはその塩の使用。