JP2003026699A - Ｉｌ−６シグナル伝達拮抗ペプチド - Google Patents
Ｉｌ−６シグナル伝達拮抗ペプチドInfo
- Publication number
- JP2003026699A JP2003026699A JP2001214164A JP2001214164A JP2003026699A JP 2003026699 A JP2003026699 A JP 2003026699A JP 2001214164 A JP2001214164 A JP 2001214164A JP 2001214164 A JP2001214164 A JP 2001214164A JP 2003026699 A JP2003026699 A JP 2003026699A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- amino acid
- acid sequence
- peptide
- residue
- signal transduction
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【課題】比較的に低分子量であって、ＩＬ−６異常産生
に伴う疾患の予防・治療に使用可能性のあるペプチドを
提供する。 【解決手段】(1)ＩＬ−６受容体に結合して三次構造上
ＩＬ−６機能阻害作用を有し、(2)その基本一次構造は
両端をシスティンではさまれた６〜９個のアミノ酸配列
を含有し、(3)分子量が３ｋｄ以下である、ＩＬ−６シ
グナル伝達拮抗ペプチドであって、ヒトＩＬ−６受容体
に対するヒトＩＬ−６のシグナリング阻害作用を有する
ＩＬ−６結合モチーフペプチドである。
に伴う疾患の予防・治療に使用可能性のあるペプチドを
提供する。 【解決手段】(1)ＩＬ−６受容体に結合して三次構造上
ＩＬ−６機能阻害作用を有し、(2)その基本一次構造は
両端をシスティンではさまれた６〜９個のアミノ酸配列
を含有し、(3)分子量が３ｋｄ以下である、ＩＬ−６シ
グナル伝達拮抗ペプチドであって、ヒトＩＬ−６受容体
に対するヒトＩＬ−６のシグナリング阻害作用を有する
ＩＬ−６結合モチーフペプチドである。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、インターロイキン
６（ＩＬ−６）の受容体に結合してＩＬ−６とＩＬ−６
受容体の結合を阻害し、ＩＬ−６の異常産生に伴う疾患
の予防・治療に寄与し得る、ＩＬ−６シグナル伝達拮抗
ペプチドに関する。
６（ＩＬ−６）の受容体に結合してＩＬ−６とＩＬ−６
受容体の結合を阻害し、ＩＬ−６の異常産生に伴う疾患
の予防・治療に寄与し得る、ＩＬ−６シグナル伝達拮抗
ペプチドに関する。
【０００２】
【従来の技術】サイトカインは、細胞間の情報伝達を担
う蛋白性の化学物質であり、標的細胞の表面上に特徴的
な受容体が発現されている。そして、サイトカインが持
つ細胞増殖、分化などの生理活性はこの受容体分子とサ
イトカインが結合することによって発揮される。サイト
カインの異常産生は、さまざまな病態に関与することが
知られている。
う蛋白性の化学物質であり、標的細胞の表面上に特徴的
な受容体が発現されている。そして、サイトカインが持
つ細胞増殖、分化などの生理活性はこの受容体分子とサ
イトカインが結合することによって発揮される。サイト
カインの異常産生は、さまざまな病態に関与することが
知られている。
【０００３】ＩＬ−６は炎症性サイトカインの一つであ
り、その異常産生が病態の中心と考えられる疾患が多く
みられる。そのような疾患の例として、慢性関節リウマ
チ、血管炎症候群、二次性アミロイドーシス、キャッス
ルマン病、間質性肺炎（ＬＩＰ）、増殖性糸球体腎炎、
炎症性腸疾患（クローン病）、腎移植に伴う拒絶、骨粗
鬆症、エイズ、ＩＬ−６産生腫瘍（多発性骨髄腫、腎
癌、子宮頸癌、肺癌、心房粘液腫）あるいは悪液質など
が挙げられる。
り、その異常産生が病態の中心と考えられる疾患が多く
みられる。そのような疾患の例として、慢性関節リウマ
チ、血管炎症候群、二次性アミロイドーシス、キャッス
ルマン病、間質性肺炎（ＬＩＰ）、増殖性糸球体腎炎、
炎症性腸疾患（クローン病）、腎移植に伴う拒絶、骨粗
鬆症、エイズ、ＩＬ−６産生腫瘍（多発性骨髄腫、腎
癌、子宮頸癌、肺癌、心房粘液腫）あるいは悪液質など
が挙げられる。
【０００４】本発明者らは、これまでにＩＬ−６の異常
産生に伴う疾患に対して、ヒト型化抗ＩＬ−６受容体抗
体（ＭＲＡ）によるＩＬ−６の機能阻害が、有効な治療
法になることを示している。
産生に伴う疾患に対して、ヒト型化抗ＩＬ−６受容体抗
体（ＭＲＡ）によるＩＬ−６の機能阻害が、有効な治療
法になることを示している。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】しかし、ＭＲＡはヒト
型化とはいえマウス異種蛋白を含むため、ＭＲＡに対す
る抗体の出現を否定することはできず、ＭＲＡの作用低
下あるいはアナフィラキシー出現の危険性も完全に除外
するわけにはいかない。また、ＭＲＡは抗体で高分子
（１５０ｋｄ）であるため、経静脈注入を余儀なくさ
れ、患者の利便性を著しく損なっている。さらに高額で
あるため経済的にも負担がかかる。
型化とはいえマウス異種蛋白を含むため、ＭＲＡに対す
る抗体の出現を否定することはできず、ＭＲＡの作用低
下あるいはアナフィラキシー出現の危険性も完全に除外
するわけにはいかない。また、ＭＲＡは抗体で高分子
（１５０ｋｄ）であるため、経静脈注入を余儀なくさ
れ、患者の利便性を著しく損なっている。さらに高額で
あるため経済的にも負担がかかる。
【０００６】そこで、本発明の目的は、以上の障害を改
善し、より低分子で経口可能な安全性の高いＩＬ−６機
能阻害剤を提供しようとするものである。
善し、より低分子で経口可能な安全性の高いＩＬ−６機
能阻害剤を提供しようとするものである。
【０００７】
【課題を解決するための手段】本発明は、生体反応を制
御するレセプターとリガンドの結合によるシグナルの伝
達を阻害し、かつ当該分子の立体構造を認識するモノク
ロナール抗体を用いて、ファージペプチドライブラリー
より得られる、目的タンパク分子の三次構造を模倣した
ペプチド配列をもつ免疫制御分子が単離できるという本
発明者らの知見(Nature biotech. 16: 267-270, 1998,
J. Immunol. 161: 6622-6628, 1998)に基づき、上述の
課題を解決するために、より低分子のＩＬ−６阻害剤と
してＭ１３ファージライブラリー（ＰｈＤ−Ｃ７Ｃ， B
io Labs，USA）を用いたペプチド開発を試み、数種の抗
ＩＬ−６抗体結合ファージクローンを得ることに成功
し、次いでそれらファージクローンに挿入されたペプチ
ドは共通のアミノ酸配列部位を有することを見出し、そ
れらの知見に基いて本発明を完成したものである。
御するレセプターとリガンドの結合によるシグナルの伝
達を阻害し、かつ当該分子の立体構造を認識するモノク
ロナール抗体を用いて、ファージペプチドライブラリー
より得られる、目的タンパク分子の三次構造を模倣した
ペプチド配列をもつ免疫制御分子が単離できるという本
発明者らの知見(Nature biotech. 16: 267-270, 1998,
J. Immunol. 161: 6622-6628, 1998)に基づき、上述の
課題を解決するために、より低分子のＩＬ−６阻害剤と
してＭ１３ファージライブラリー（ＰｈＤ−Ｃ７Ｃ， B
io Labs，USA）を用いたペプチド開発を試み、数種の抗
ＩＬ−６抗体結合ファージクローンを得ることに成功
し、次いでそれらファージクローンに挿入されたペプチ
ドは共通のアミノ酸配列部位を有することを見出し、そ
れらの知見に基いて本発明を完成したものである。
【０００８】すなわち、本発明は、以下の発明を包含す
る。［１］下記の性質を有するＩＬ−６シグナル伝達拮
抗ペプチド： (1)ＩＬ−６受容体に結合して三次構造上ＩＬ−６機能
阻害の作用を有する； (2)前記(1)の特異三次構造形成の基本一次構造は両端を
システインではさまれた６〜９個のアミノ酸配列を含有
する；および (3)前記(2)のアミノ酸配列の分子量は、３ｋｄ以下であ
る。
る。［１］下記の性質を有するＩＬ−６シグナル伝達拮
抗ペプチド： (1)ＩＬ−６受容体に結合して三次構造上ＩＬ−６機能
阻害の作用を有する； (2)前記(1)の特異三次構造形成の基本一次構造は両端を
システインではさまれた６〜９個のアミノ酸配列を含有
する；および (3)前記(2)のアミノ酸配列の分子量は、３ｋｄ以下であ
る。
【０００９】［２］ 前記(2)のアミノ酸配列がシステイ
ンではさまれた７個の天然アミノ配列からなり、そのＮ
−末端側から４番目および７番目が疎水性基を有するア
ミノ酸残基であり、親水性／疎水性のプロットパターン
が疎水性パターンを示す前記［１］項記載のＩＬ−６シ
グナル伝達拮抗ペプチド。 ［３］ 前記疎水性基を有するアミノ酸残基がトリプト
ファン残基である前記［２］項記載のＩＬ−６シグナル
伝達拮抗ペプチド。
ンではさまれた７個の天然アミノ配列からなり、そのＮ
−末端側から４番目および７番目が疎水性基を有するア
ミノ酸残基であり、親水性／疎水性のプロットパターン
が疎水性パターンを示す前記［１］項記載のＩＬ−６シ
グナル伝達拮抗ペプチド。 ［３］ 前記疎水性基を有するアミノ酸残基がトリプト
ファン残基である前記［２］項記載のＩＬ−６シグナル
伝達拮抗ペプチド。
【００１０】［４］下記のアミノ酸配列を有する前記
［１］項記載のＩＬ−６シグナル伝達拮抗ペプチド： (1)システィンではさまれたアミノ酸配列が トリプトフ
ァン、リジン、ヒスチジン、グルタミン、セリン、バリ
ン、プロリン、メチオニン、アスパラギンおよびアルギ
ニンの群から選択された７アミノ酸を構成アミノ酸とす
る；および(2) Ｎ−末端側から３番目がトリプトファン
残基であり、４番目がトリプトファン残基またはアルギ
ニン残基であり、５番目がリジン残基であり、７番目が
トリプトファン残基またはアルギニン残基であり、８番
目がグルタミン残基である。
［１］項記載のＩＬ−６シグナル伝達拮抗ペプチド： (1)システィンではさまれたアミノ酸配列が トリプトフ
ァン、リジン、ヒスチジン、グルタミン、セリン、バリ
ン、プロリン、メチオニン、アスパラギンおよびアルギ
ニンの群から選択された７アミノ酸を構成アミノ酸とす
る；および(2) Ｎ−末端側から３番目がトリプトファン
残基であり、４番目がトリプトファン残基またはアルギ
ニン残基であり、５番目がリジン残基であり、７番目が
トリプトファン残基またはアルギニン残基であり、８番
目がグルタミン残基である。
【００１１】［５］配列番号１〜４のいずれかのアミノ
酸配列を含有する前記［１］項記載のＩＬ−６シグナル
伝達拮抗ペプチド。 ［６］配列番号５のアミノ酸配列を含有する前記［１］
項記載のＩＬ−６シグナル伝達拮抗ペプチド。 本発明のＩＬ−６シグナル伝達拮抗ペプチドは、後述の
試験例でも示されるとおり、ヒトＩＬ−６レセプターを
表現するヒトＫＴ−３細胞に対して増殖抑制作用を示す
が、マウスＩＬ−６受容体を有するマウスＭＨ６０に対
しては増殖抑制を示さない。すなわち、ヒトＩＬ−６受
容体へのＩＬ−６の結合を特異的に阻害する。このこと
は、本ペプチドはヒトＩＬ−６受容体に結合する抗原そ
のもの、あるいは立体構造上機能的に類似であることを
意味する。すなわち、ＩＬ−６受容体に結合して三次構
造上ＩＬ−６機能阻害の作用を有するものである。
酸配列を含有する前記［１］項記載のＩＬ−６シグナル
伝達拮抗ペプチド。 ［６］配列番号５のアミノ酸配列を含有する前記［１］
項記載のＩＬ−６シグナル伝達拮抗ペプチド。 本発明のＩＬ−６シグナル伝達拮抗ペプチドは、後述の
試験例でも示されるとおり、ヒトＩＬ−６レセプターを
表現するヒトＫＴ−３細胞に対して増殖抑制作用を示す
が、マウスＩＬ−６受容体を有するマウスＭＨ６０に対
しては増殖抑制を示さない。すなわち、ヒトＩＬ−６受
容体へのＩＬ−６の結合を特異的に阻害する。このこと
は、本ペプチドはヒトＩＬ−６受容体に結合する抗原そ
のもの、あるいは立体構造上機能的に類似であることを
意味する。すなわち、ＩＬ−６受容体に結合して三次構
造上ＩＬ−６機能阻害の作用を有するものである。
【００１２】前記［１］項のペプチドにおいて、「両端
をシステインではさまれた６〜９個のアミノ酸配列」と
は、両端のシステインを含み計８〜１１個のアミノ酸配
列を含有することを意味する。前記［３］項のＩＬ−６
シグナル伝達拮抗ペプチドにおいて、疎水性基を有する
アミノ酸残基としては、例えばトリプトファン、フェニ
ルアラニン、イソロイシン、ロイシンあるいはバリン残
基などが挙げられ、特にトリプトファン残基であること
が好ましい。そして、このペプチドは、親水性／疎水性
のプロットパターンが疎水性パターンを有するものが、
ＩＬ−６受容体に結合して三次構造上ＩＬ−６機能を阻
害する作用をより高く示す。
をシステインではさまれた６〜９個のアミノ酸配列」と
は、両端のシステインを含み計８〜１１個のアミノ酸配
列を含有することを意味する。前記［３］項のＩＬ−６
シグナル伝達拮抗ペプチドにおいて、疎水性基を有する
アミノ酸残基としては、例えばトリプトファン、フェニ
ルアラニン、イソロイシン、ロイシンあるいはバリン残
基などが挙げられ、特にトリプトファン残基であること
が好ましい。そして、このペプチドは、親水性／疎水性
のプロットパターンが疎水性パターンを有するものが、
ＩＬ−６受容体に結合して三次構造上ＩＬ−６機能を阻
害する作用をより高く示す。
【００１３】本発明のＩＬ−６シグナル伝達拮抗ペプチ
ドは、前記［１］〜［６］のいずれかに記載のペプチド
を有し、ＩＬ−６の機能阻害作用を有するペプチドを包
含する。また、前記［１］〜［６］のいずれかに記載の
ペプチドを複数にわたって有していてもよく、例えば配
列番号１〜５のアミノ酸配列を同一または異なって２種
以上を有していてもよい。本発明のＩＬ−６シグナル伝
達拮抗ペプチドを構成するアミノ酸としては、天然アミ
ノ酸を包含する。
ドは、前記［１］〜［６］のいずれかに記載のペプチド
を有し、ＩＬ−６の機能阻害作用を有するペプチドを包
含する。また、前記［１］〜［６］のいずれかに記載の
ペプチドを複数にわたって有していてもよく、例えば配
列番号１〜５のアミノ酸配列を同一または異なって２種
以上を有していてもよい。本発明のＩＬ−６シグナル伝
達拮抗ペプチドを構成するアミノ酸としては、天然アミ
ノ酸を包含する。
【００１４】
【発明の実施の形態】本発明のペプチドは、ファージデ
ィスプレー法によりＩＬ−６阻害分子を検索することに
より得られる。例えば、両端をシステインではさまれ、
無差別配列した７アミノ酸より成るペプチドを表現した
Ｍ１３ファージライブラリー（ＰｈＤ−Ｃ７Ｃ， Ｂｉ
ｏ Ｌａｂｓ， ＵＳＡ）を用いて、抗ＩＬ−６抗体をコ
ートしたプレートにまき、結合したファージを溶出す
る。次に、溶出ファージを大腸菌（ＥＲ２５３７）に感
染させて増幅する。この操作を再度繰返すことによりフ
ァージのクローン化を行う。抗ＩＬ−６抗体特異結合ク
ローンを選択するため、抗ＩＬ−６抗体、ヒトIg、ヒト
アルブミン、ＢＳＡ、またはゼラチンをコートしたディ
ッシュを用いて、得られるクローンをビオチン化抗Ｍ１
３抗体に反応させて検出し、抗ＩＬ−６抗体に特異的に
結合するクローンを得る。通常、この方法により、３〜
５種のクローンが得られるが、数を増やすために繰返し
て実施してもよい。ＩＬ−６依存増殖するヒトリンパ球
細胞に対して増殖阻害試験を行い、目的とするクローン
を選択する。
ィスプレー法によりＩＬ−６阻害分子を検索することに
より得られる。例えば、両端をシステインではさまれ、
無差別配列した７アミノ酸より成るペプチドを表現した
Ｍ１３ファージライブラリー（ＰｈＤ−Ｃ７Ｃ， Ｂｉ
ｏ Ｌａｂｓ， ＵＳＡ）を用いて、抗ＩＬ−６抗体をコ
ートしたプレートにまき、結合したファージを溶出す
る。次に、溶出ファージを大腸菌（ＥＲ２５３７）に感
染させて増幅する。この操作を再度繰返すことによりフ
ァージのクローン化を行う。抗ＩＬ−６抗体特異結合ク
ローンを選択するため、抗ＩＬ−６抗体、ヒトIg、ヒト
アルブミン、ＢＳＡ、またはゼラチンをコートしたディ
ッシュを用いて、得られるクローンをビオチン化抗Ｍ１
３抗体に反応させて検出し、抗ＩＬ−６抗体に特異的に
結合するクローンを得る。通常、この方法により、３〜
５種のクローンが得られるが、数を増やすために繰返し
て実施してもよい。ＩＬ−６依存増殖するヒトリンパ球
細胞に対して増殖阻害試験を行い、目的とするクローン
を選択する。
【００１５】本発明のペプチドは、アミノ酸配列におい
て前記［１］のとおりの特徴を有し、ヒトＩＬ−６シグ
ナル伝達に対し拮抗作用を有する。配列番号１〜５のペ
プチドは、その具体例である。本発明のペプチドは、公
知の方法によって化学合成することもでき、例えばペプ
チド自動合成装置によって合成することができる。この
基本的な合成過程はR.B. Merifield ［アドバンス イ
ン エンザイモロジー（Advance in Enzymology） 32,
221-296(1969)］の方法を適用できる。この方法は、カ
ルボキシル末端のアミノ酸を樹脂担体に共有結合させて
おき、α−アミノ基の保護基の除去、保護アミノ酸の縮
合を順次繰返して、アミノ末端に向けてペプチド鎖を延
長させ目的のアミノ酸配列を有するペプチド樹脂を得る
ことを原理とするものである。
て前記［１］のとおりの特徴を有し、ヒトＩＬ−６シグ
ナル伝達に対し拮抗作用を有する。配列番号１〜５のペ
プチドは、その具体例である。本発明のペプチドは、公
知の方法によって化学合成することもでき、例えばペプ
チド自動合成装置によって合成することができる。この
基本的な合成過程はR.B. Merifield ［アドバンス イ
ン エンザイモロジー（Advance in Enzymology） 32,
221-296(1969)］の方法を適用できる。この方法は、カ
ルボキシル末端のアミノ酸を樹脂担体に共有結合させて
おき、α−アミノ基の保護基の除去、保護アミノ酸の縮
合を順次繰返して、アミノ末端に向けてペプチド鎖を延
長させ目的のアミノ酸配列を有するペプチド樹脂を得る
ことを原理とするものである。
【００１６】各アミノ酸の縮合やα−アミノ基の保護基
の除去等は、ほぼ同一の条件でなされ、中間体の精製も
行わないため、合成に際しては一般に高度な熟練は要求
されない。しかもこの方法は迅速であり、種々のペプチ
ドを合成するに際し、非常に便利な方法である。こうし
て得られた保護ペプチド樹脂を、例えば無水フッ化水
素、トリフルオロメタンスルホン酸もしくはトリフルオ
ロ酢酸と種々の添加物の共存下に反応させることによ
り、ペプチドを樹脂から脱離させることと全保護基の除
去を一段階で行うことができる。
の除去等は、ほぼ同一の条件でなされ、中間体の精製も
行わないため、合成に際しては一般に高度な熟練は要求
されない。しかもこの方法は迅速であり、種々のペプチ
ドを合成するに際し、非常に便利な方法である。こうし
て得られた保護ペプチド樹脂を、例えば無水フッ化水
素、トリフルオロメタンスルホン酸もしくはトリフルオ
ロ酢酸と種々の添加物の共存下に反応させることによ
り、ペプチドを樹脂から脱離させることと全保護基の除
去を一段階で行うことができる。
【００１７】得られたペプチド粗製物は、ペプチドを精
製する公知の手段で精製することができる。例えば、ゲ
ル濾過、陽イオン交換樹脂もしくは陰イオン交換樹脂を
用いるイオン交換クロマトグラフィー、さらには疎水ク
ロマトグラフィー、分配吸着クロマトグラフィーなど、
種々の原理によるカラムクロマトグラフィーや高速液体
クロマトグラフィーが挙げられる。本発明のペプチドは
種々の塩の形で得ることできる。その塩としては、例え
ば無機酸や、蟻酸、酢酸、酒石酸、クエン酸などの有機
酸との塩、もしくはナトリウムやアンモニアなどの無機
塩基や、トリエチルアミン、エチルアミン、メチルアミ
ンなどの有機塩基との塩が挙げられる。
製する公知の手段で精製することができる。例えば、ゲ
ル濾過、陽イオン交換樹脂もしくは陰イオン交換樹脂を
用いるイオン交換クロマトグラフィー、さらには疎水ク
ロマトグラフィー、分配吸着クロマトグラフィーなど、
種々の原理によるカラムクロマトグラフィーや高速液体
クロマトグラフィーが挙げられる。本発明のペプチドは
種々の塩の形で得ることできる。その塩としては、例え
ば無機酸や、蟻酸、酢酸、酒石酸、クエン酸などの有機
酸との塩、もしくはナトリウムやアンモニアなどの無機
塩基や、トリエチルアミン、エチルアミン、メチルアミ
ンなどの有機塩基との塩が挙げられる。
【００１８】本発明のペプチドは、ＩＬ−６の異常産生
に伴う疾患の予防・治療薬として使用可能である。それ
らの疾患としては、前記したように、慢性関節リウマ
チ、血管炎症候群、二次性アミロイドーシス、キャッス
ルマン病、間質性肺炎（ＬＩＰ）、増殖性糸球体腎炎、
炎症性腸疾患（クローン病）、腎移植に伴う拒絶、骨粗
鬆症、エイズ、ＩＬ−６産生腫瘍（多発性骨髄腫、腎
癌、子宮頸癌、肺癌、心房粘液腫）あるいは悪液質など
が挙げられる。
に伴う疾患の予防・治療薬として使用可能である。それ
らの疾患としては、前記したように、慢性関節リウマ
チ、血管炎症候群、二次性アミロイドーシス、キャッス
ルマン病、間質性肺炎（ＬＩＰ）、増殖性糸球体腎炎、
炎症性腸疾患（クローン病）、腎移植に伴う拒絶、骨粗
鬆症、エイズ、ＩＬ−６産生腫瘍（多発性骨髄腫、腎
癌、子宮頸癌、肺癌、心房粘液腫）あるいは悪液質など
が挙げられる。
【００１９】本発明のペプチドを医薬として用いるに
は、そのまま粉末として、または他の薬理学的に許容さ
れ得る担体、賦形剤または希釈剤とともに医薬組成物
（例、注射剤、錠剤、カプセル剤、液剤）として、温血
動物（例、ヒト）に対して非経口的または経口的に安全
に投与することができる。注射剤の製剤化は、例えば生
理食塩水またはブドウ糖やその他の補助薬を含む水溶液
を用い、常法に従って行われる。錠剤、カプセル剤等の
医薬組成物も常法に従って調製し得る。また、徐放性の
錠剤、顆粒剤、カプセル剤などに製剤化してもよい。
は、そのまま粉末として、または他の薬理学的に許容さ
れ得る担体、賦形剤または希釈剤とともに医薬組成物
（例、注射剤、錠剤、カプセル剤、液剤）として、温血
動物（例、ヒト）に対して非経口的または経口的に安全
に投与することができる。注射剤の製剤化は、例えば生
理食塩水またはブドウ糖やその他の補助薬を含む水溶液
を用い、常法に従って行われる。錠剤、カプセル剤等の
医薬組成物も常法に従って調製し得る。また、徐放性の
錠剤、顆粒剤、カプセル剤などに製剤化してもよい。
【００２０】本発明のペプチドを上記の疾患用医薬とし
て用いるとき、その投与量は、症状、投与経路などを考
慮して適宜に選択されるが、例えば１日量１μｇないし
１ｍｇ／ｋｇの範囲から適当量を投与することが考えら
れる。本発明ペプチドが有するＩＬ−６機能阻害作用
は、常法によって、ヒトＩＬ−６遺伝子またはその関連
遺伝子トランスジェニックアニマル（例、トランスジェ
ニックマウス）あるいはまたヒト組織を移植した免疫不
全マウス（ＳＣＩＤマウス）を用いて確認することも可
能である。
て用いるとき、その投与量は、症状、投与経路などを考
慮して適宜に選択されるが、例えば１日量１μｇないし
１ｍｇ／ｋｇの範囲から適当量を投与することが考えら
れる。本発明ペプチドが有するＩＬ−６機能阻害作用
は、常法によって、ヒトＩＬ−６遺伝子またはその関連
遺伝子トランスジェニックアニマル（例、トランスジェ
ニックマウス）あるいはまたヒト組織を移植した免疫不
全マウス（ＳＣＩＤマウス）を用いて確認することも可
能である。
【００２１】なお、この明細書や図面におけるアミノ酸
配列の左から右への方向は、Ｎ末端からＣ末端への方向
を表す。アミノ酸を略号で表示する場合、次に示すとお
り、IUPAC-IUB Commission on Biochemical Nomenclatu
re による略語に基いて記載する。また、アミノ酸に関
して光学異性体があり得る場合、Ｌ−体を示すものとす
る。ＴｒｐまたはＷ：トリプトファン、Ｌｙｓまたは
Ｋ：リジン、ＨｉｓまたはＨ：ヒスチジン、Ｇｌｎまた
はＱ：グルタミン、ＳｅｒまたはＳ：セリン、Ｖａｌま
たはＶ：バリン、ＰｒｏまたはＰ：プロリン、Ｍｅｔま
たはＭ：メチオニン、ＡｓｐまたはＤ：アスパラギン
酸、ＡｒｇまたはＲ：アルギニン、ＣｙｓまたはＣ：シ
ステイン。
配列の左から右への方向は、Ｎ末端からＣ末端への方向
を表す。アミノ酸を略号で表示する場合、次に示すとお
り、IUPAC-IUB Commission on Biochemical Nomenclatu
re による略語に基いて記載する。また、アミノ酸に関
して光学異性体があり得る場合、Ｌ−体を示すものとす
る。ＴｒｐまたはＷ：トリプトファン、Ｌｙｓまたは
Ｋ：リジン、ＨｉｓまたはＨ：ヒスチジン、Ｇｌｎまた
はＱ：グルタミン、ＳｅｒまたはＳ：セリン、Ｖａｌま
たはＶ：バリン、ＰｒｏまたはＰ：プロリン、Ｍｅｔま
たはＭ：メチオニン、ＡｓｐまたはＤ：アスパラギン
酸、ＡｒｇまたはＲ：アルギニン、ＣｙｓまたはＣ：シ
ステイン。
【００２２】
【実施例】以下に、実施例および試験例を挙げて本発明
をさらに具体的に説明する。 実施例１．抗ＩＬ−６抗体結合ファ−ジクローンの取得 Ｍ１３ファージのＰIIIのＮ末に無差別配列した両端に
システィンを配する計９アミノ酸よりなるペプチドを発
現するライブラリーを用いてマウス抗ＩＬ−６抗体（Ｂ
−Ｅ８ （ＩｇＧ１，ＤＩＡＣＬＯＮＥ））をコートし
た３５ｍｍのプラスチックプレートにまき、非結合ファ
ージを０．５％Ｔｗｅｅｎ２０／トリスバッファー（ｐ
Ｈ７．５）で洗浄後、結合したファージを０．１Ｍ グ
リシン塩酸バッファー（ｐＨ ２．２）で溶出した。フ
ァージクローンを含む溶出液を直ちにトリス塩酸バッフ
ァー（ｐＨ９．１）で中和した後、大腸菌（ＥＲ２５３
７）に感染させファージを増殖させた。上記方法を２−
３度繰返し、抗ＩＬ−６抗体結合ファージクローンを得
た（図１）。
をさらに具体的に説明する。 実施例１．抗ＩＬ−６抗体結合ファ−ジクローンの取得 Ｍ１３ファージのＰIIIのＮ末に無差別配列した両端に
システィンを配する計９アミノ酸よりなるペプチドを発
現するライブラリーを用いてマウス抗ＩＬ−６抗体（Ｂ
−Ｅ８ （ＩｇＧ１，ＤＩＡＣＬＯＮＥ））をコートし
た３５ｍｍのプラスチックプレートにまき、非結合ファ
ージを０．５％Ｔｗｅｅｎ２０／トリスバッファー（ｐ
Ｈ７．５）で洗浄後、結合したファージを０．１Ｍ グ
リシン塩酸バッファー（ｐＨ ２．２）で溶出した。フ
ァージクローンを含む溶出液を直ちにトリス塩酸バッフ
ァー（ｐＨ９．１）で中和した後、大腸菌（ＥＲ２５３
７）に感染させファージを増殖させた。上記方法を２−
３度繰返し、抗ＩＬ−６抗体結合ファージクローンを得
た（図１）。
【００２３】実施例２．抗ＩＬ−６抗体特異結合クロー
ンの取得 マイクロタイタープレートにそれぞれ抗ＩＬ−６抗体、
ＢＳＡ、ＭＩＰ−１α、ＩｇＧ等を結合させ、５％ゼラ
チンでブロック後、抗ＩＬ−６抗体結合クローンを加
え、非結合ファージを洗い出した後、ビオチン化抗Ｍ１
３ｍＡｂを反応させ、アルカリフォスファターゼ結合ス
トレプトアビジン（Vector Lab, Burlingame, Californ
ia）を用いて発色させ、４０５ｎＭの吸光で検出した。
ンの取得 マイクロタイタープレートにそれぞれ抗ＩＬ−６抗体、
ＢＳＡ、ＭＩＰ−１α、ＩｇＧ等を結合させ、５％ゼラ
チンでブロック後、抗ＩＬ−６抗体結合クローンを加
え、非結合ファージを洗い出した後、ビオチン化抗Ｍ１
３ｍＡｂを反応させ、アルカリフォスファターゼ結合ス
トレプトアビジン（Vector Lab, Burlingame, Californ
ia）を用いて発色させ、４０５ｎＭの吸光で検出した。
【００２４】実施例３．ファージクローンによるＩＬ−
６依存増殖阻害 １）ＩＬ−６依存性マウスＭＨ−６０細胞を用いた増殖
阻害 ＩＬ−６依存性に増殖するマウスミエローマＭＨ−６０
細胞（マウスＩＬ−６受容体を表現）にファージクロー
ン液（５０μｌ）を加え、その後７．５ｐｇ/ｍｌのｒ
ｈＩＬ−６を加えて４８時間培養し、その増殖阻害を、
ＭＴＴアッセイを用いて検討した。完全阻害のコントロ
ールとして１μｇ／ｍｌのラット抗マウスＩＬ−６受容
体抗体（ＭＲ１６−１）を用いた。
６依存増殖阻害 １）ＩＬ−６依存性マウスＭＨ−６０細胞を用いた増殖
阻害 ＩＬ−６依存性に増殖するマウスミエローマＭＨ−６０
細胞（マウスＩＬ−６受容体を表現）にファージクロー
ン液（５０μｌ）を加え、その後７．５ｐｇ/ｍｌのｒ
ｈＩＬ−６を加えて４８時間培養し、その増殖阻害を、
ＭＴＴアッセイを用いて検討した。完全阻害のコントロ
ールとして１μｇ／ｍｌのラット抗マウスＩＬ−６受容
体抗体（ＭＲ１６−１）を用いた。
【００２５】２）ＩＬ−６依存性ヒトＫＴ−３細胞を用
いた増殖阻害 ＩＬ−６依存性ヒトＫＴ−３細胞（ヒトＩＬ−６受容体
を表現）にファ−ジクローンを２．５μｇ／ｍｌ、５μ
ｇ／ｍｌ、１０μｇ／ｍｌ、２０μｇ／ｍｌ、４０μｇ
／ｍｌ加え、その後２５０ｐｇ／ｍｌのｒｈＩＬ−６を
加えて５日間培養し、ＷＳＴ−８（同仁化学）アッセイ
を行い増殖抑制の有無を検討した。完全阻害のコントロ
ールとして１０μｇ／ｍｌのヒト型化抗ＩＬ−６受容体
抗体（ＭＲＡ）を用いた。
いた増殖阻害 ＩＬ−６依存性ヒトＫＴ−３細胞（ヒトＩＬ−６受容体
を表現）にファ−ジクローンを２．５μｇ／ｍｌ、５μ
ｇ／ｍｌ、１０μｇ／ｍｌ、２０μｇ／ｍｌ、４０μｇ
／ｍｌ加え、その後２５０ｐｇ／ｍｌのｒｈＩＬ−６を
加えて５日間培養し、ＷＳＴ−８（同仁化学）アッセイ
を行い増殖抑制の有無を検討した。完全阻害のコントロ
ールとして１０μｇ／ｍｌのヒト型化抗ＩＬ−６受容体
抗体（ＭＲＡ）を用いた。
【００２６】試験例１．抗ＩＬ−６抗体結合Ｍ１３ファ
ージクローンによるＩＬ−６依存性増殖細胞の増殖抑制
の検討 １）マウスＭＨ−６０細胞（マウスＩＬ−６受容体を表
現） 抗ＩＬ−６抗体に結合する９種のファージクローンによ
る７．５ｐｇ／ｍｌのｒｈＩＬ−６存在下でのＭＨ−６
０細胞増殖阻害効果を検討したところ、図２に示すよう
にいずれのクローンも阻害効果を示さなかった。
ージクローンによるＩＬ−６依存性増殖細胞の増殖抑制
の検討 １）マウスＭＨ−６０細胞（マウスＩＬ−６受容体を表
現） 抗ＩＬ−６抗体に結合する９種のファージクローンによ
る７．５ｐｇ／ｍｌのｒｈＩＬ−６存在下でのＭＨ−６
０細胞増殖阻害効果を検討したところ、図２に示すよう
にいずれのクローンも阻害効果を示さなかった。
【００２７】２）ヒトＫＴ−３細胞（ヒトＩＬ−６受容
体を表現） 上記１）で用いた８種のファージクローンを２５０ｐｇ
／ｍｌのｒｈＩＬ−６存在下でＫＴ−３細胞と培養し、
その増殖抑制効果を検討したところ、図３に示すように
数種のクローンで濃度依存性に抑制効果が示された。特
に、クローン＃７、＃３７、＃６、＃１４、＃２０が強
く抑制した。実施例４．ＩＬ−６依存増殖クローンの発
現ペプチド解析 システインではさんで挿入された７アミノ酸は以下の表
１の配列であった。アミノ酸配列から＃７、＃３７、＃
６および＃２０のペプチドは疎水性を示し、そのパター
ンに類似性が示された。
体を表現） 上記１）で用いた８種のファージクローンを２５０ｐｇ
／ｍｌのｒｈＩＬ−６存在下でＫＴ−３細胞と培養し、
その増殖抑制効果を検討したところ、図３に示すように
数種のクローンで濃度依存性に抑制効果が示された。特
に、クローン＃７、＃３７、＃６、＃１４、＃２０が強
く抑制した。実施例４．ＩＬ−６依存増殖クローンの発
現ペプチド解析 システインではさんで挿入された７アミノ酸は以下の表
１の配列であった。アミノ酸配列から＃７、＃３７、＃
６および＃２０のペプチドは疎水性を示し、そのパター
ンに類似性が示された。
【００２８】
【表１】
【００２９】表１において、＃６、＃７、＃２０、＃３
７および＃１４のペプチドは、それぞれ配列番号１、配
列番号２、配列番号３、配列番号４および配列番号５に
相当するものである。また、＃１のペプチドは、配列番
号６に相当する。
７および＃１４のペプチドは、それぞれ配列番号１、配
列番号２、配列番号３、配列番号４および配列番号５に
相当するものである。また、＃１のペプチドは、配列番
号６に相当する。
【００３０】
【発明の効果】本発明のペプチドは、ヒトＩＬ−６受容
体に対するヒトＩＬ−６のシグナリング阻害作用を有す
るＩＬ−６結合モチーフペプチドであるが、げっ歯類の
ＩＬ−６受容体にはこの阻害作用を示さない。従って、
本発明のペプチドは、ヒトＩＬ−６の異常産生に伴う炎
症性疾患に対して免疫療法的な予防・治療薬として、安
全に使用できる。また、このペプチドは３ｋｄ以下の低
分子量であってもよく、医薬として用いるとき、吸収性
や製剤化において有利に適用可能である。
体に対するヒトＩＬ−６のシグナリング阻害作用を有す
るＩＬ−６結合モチーフペプチドであるが、げっ歯類の
ＩＬ−６受容体にはこの阻害作用を示さない。従って、
本発明のペプチドは、ヒトＩＬ−６の異常産生に伴う炎
症性疾患に対して免疫療法的な予防・治療薬として、安
全に使用できる。また、このペプチドは３ｋｄ以下の低
分子量であってもよく、医薬として用いるとき、吸収性
や製剤化において有利に適用可能である。
【００３１】
【配列表】SEQUENCE LISTING
<110> Inter Cyto Nano Science. Co.
<120> Peptides having antagonistic activity to IL-
6 receptor <130> 103363 <160> 6 <210> 1 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> unsure <221> unsure <222> unsure <223> Antagonist <400> 1 Cys Val Trp Trp Lys His Trp Gln Cys <210> 2 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> unsure <223> Antagonist <400> 2 Cys Ser Trp Trp Lys Gln Trp Gln Cys <210> 3 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> unsure <223> Antagonist <400> 3 Cys Val Trp Trp Lys His Trp Gln Cys <210> 4 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> unsure <223> Antagonist <400> 4 Cys Pro Trp Trp Lys Met Trp Gln Cys <210> 5 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> unsure <223> Antagonist <400> 5 Cys Asp Trp Arg Lys Hist Arg Gln Cys <210> 6 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> unsure <221> unsure <222> unsure <223> Antagonist <400> 6 Cys Pro Trp His Lys Ser Trp Gln Cys
6 receptor <130> 103363 <160> 6 <210> 1 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> unsure <221> unsure <222> unsure <223> Antagonist <400> 1 Cys Val Trp Trp Lys His Trp Gln Cys <210> 2 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> unsure <223> Antagonist <400> 2 Cys Ser Trp Trp Lys Gln Trp Gln Cys <210> 3 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> unsure <223> Antagonist <400> 3 Cys Val Trp Trp Lys His Trp Gln Cys <210> 4 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> unsure <223> Antagonist <400> 4 Cys Pro Trp Trp Lys Met Trp Gln Cys <210> 5 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> unsure <223> Antagonist <400> 5 Cys Asp Trp Arg Lys Hist Arg Gln Cys <210> 6 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> unsure <221> unsure <222> unsure <223> Antagonist <400> 6 Cys Pro Trp His Lys Ser Trp Gln Cys
【図１】特異的結合能を持つファージクローンの選択方
法を示す。
法を示す。
【図２】ＩＬ−６依存マウス細胞株、ＭＨ６０を用いた
ファージクローンによる増殖阻害実験の結果を示す。
ファージクローンによる増殖阻害実験の結果を示す。
【図３】ファージクローンによるＩＬ−６依存性ヒト細
胞株、ＫＴ−３の増殖阻害を示す。
胞株、ＫＴ−３の増殖阻害を示す。
─────────────────────────────────────────────────────
フロントページの続き
(51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考）
Ａ６１Ｐ 13/12 Ａ６１Ｐ 19/02
19/02 19/10
19/10 29/00 １０１
29/00 １０１ 31/18
31/18 35/00
35/00 37/06
37/06 43/00 １１１
43/00 １１１ Ａ６１Ｋ 37/02
Ｆターム(参考） 4C084 AA07 BA01 BA08 BA17 BA23
DA18 NA14 ZA511 ZA661
ZA811 ZA961 ZA971 ZB081
ZB111 ZB151 ZB261 ZC421
ZC551
4H045 AA10 CA40 EA22 FA74
Claims (6)
- 【請求項１】下記の性質を有するＩＬ−６シグナル伝達
拮抗ペプチド： (1)ＩＬ−６受容体に結合して三次構造上ＩＬ−６機能
阻害の作用を有する； (2)前記(1)の特異三次構造形成の基本一次構造は両端を
システインではさまれた６〜９個のアミノ酸配列を含有
する；および (3)前記(2)のアミノ酸配列の分子量は、３ｋｄ以下であ
る。 - 【請求項２】前記(2)のアミノ酸配列がシステインでは
さまれた７個のアミノ配列からなり、そのＮ−末端側か
ら４番目および７番目が疎水性基を有するアミノ酸残基
であり、親水生／疎水性のプロットパターンが疎水性パ
ターンを示す請求項１記載のＩＬ−６シグナル伝達拮抗
ペプチド。 - 【請求項３】前記疎水性基を有するアミノ酸残基がトリ
プトファン残基である請求項２記載のＩＬ−６シグナル
伝達拮抗ペプチド。 - 【請求項４】下記のアミノ酸配列を有する請求項１記載
のＩＬ−６シグナル伝達拮抗ペプチド： (1)システィンではさまれたアミノ酸配列が トリプトフ
ァン、リジン、ヒスチジン、グルタミン、セリン、バリ
ン、プロリン、メチオニン、アスパラギンおよびアルギ
ニンの群から選択された７アミノ酸を構成アミノ酸とす
る；および(2) Ｎ−末端側から３番目がトリプトファン
残基であり、４番目がトリプトファン残基またはアルギ
ニン残基であり、５番目がリジン残基であり、７番目が
トリプトファン残基またはアルギニン残基であり、８番
目がグルタミン残基である。 - 【請求項５】配列番号１〜４のいずれかのアミノ酸配列
を含有する請求項１記載のＩＬ−６シグナル伝達拮抗ペ
プチド。 - 【請求項６】配列番号５のアミノ酸配列を含有する請求
項１記載のＩＬ−６シグナル伝達拮抗ペプチド。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2001214164A JP2003026699A (ja) | 2001-07-13 | 2001-07-13 | Ｉｌ−６シグナル伝達拮抗ペプチド |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2001214164A JP2003026699A (ja) | 2001-07-13 | 2001-07-13 | Ｉｌ−６シグナル伝達拮抗ペプチド |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2003026699A true JP2003026699A (ja) | 2003-01-29 |
Family
ID=19049031
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2001214164A Pending JP2003026699A (ja) | 2001-07-13 | 2001-07-13 | Ｉｌ−６シグナル伝達拮抗ペプチド |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2003026699A (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2005061000A1 (ja) * | 2003-12-19 | 2005-07-07 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | 血管炎治療剤 |
| US8617550B2 (en) | 2003-12-19 | 2013-12-31 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Treatment of vasculitis with IL-6 antagonist |
| CN110283249A (zh) * | 2018-03-19 | 2019-09-27 | 江苏莱博德医疗科技有限公司 | 一种抗白介素6的人ScFv单链抗体 |
-
2001
- 2001-07-13 JP JP2001214164A patent/JP2003026699A/ja active Pending
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2005061000A1 (ja) * | 2003-12-19 | 2005-07-07 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | 血管炎治療剤 |
| JPWO2005061000A1 (ja) * | 2003-12-19 | 2007-07-12 | 中外製薬株式会社 | 血管炎治療剤 |
| AU2004305379B2 (en) * | 2003-12-19 | 2011-04-07 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Remedy for angitis |
| JP4785534B2 (ja) * | 2003-12-19 | 2011-10-05 | 中外製薬株式会社 | 血管炎治療剤 |
| KR101218532B1 (ko) | 2003-12-19 | 2013-01-03 | 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 | 혈관염 치료제 |
| US8617550B2 (en) | 2003-12-19 | 2013-12-31 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Treatment of vasculitis with IL-6 antagonist |
| CN110283249A (zh) * | 2018-03-19 | 2019-09-27 | 江苏莱博德医疗科技有限公司 | 一种抗白介素6的人ScFv单链抗体 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KR100852523B1 (ko) | Ｉｌ-17 길항질 항체 | |
| CA2579798C (en) | Interleukin-15 antagonist peptide | |
| CA2741834C (en) | Fibronectin type iii domain based scaffold compositions, methods and uses | |
| JP2015108015A (ja) | Ｉｌ−１７ａ／ｆヘテロ二量体ポリペプチドおよびその治療上の使用 | |
| JP2003518075A (ja) | 生理活性化合物の消失半減期延長のための方法及び組成物 | |
| KR20050044405A (ko) | 변형된 항-ｔｎｆ 알파 항체 | |
| JP2010273689A (ja) | 新規のＦａｂフラグメントライブラリーおよびそれらの使用方法 | |
| KR20050033563A (ko) | 포유동물 ｅｐｏ 모방 ｃｈ1 결실된 모방체, 조성물, 방법및 용도 | |
| CN100591686C (zh) | Cngh0010特异性的多核苷酸、多肽、抗体、组合物、方法和用途 | |
| HUE034269T2 (en) | Human anti-IL-23 antibodies, preparations, methods and applications | |
| JP2012021015A (ja) | Ｔｎｆアンタゴニスト及びそれを有効成分とするｔｎｆ阻害剤 | |
| JP2008531608A (ja) | Ｙｋｌ−４０モノクローナル抗体 | |
| CN105518025B (zh) | 人抗IFN-α抗体 | |
| JP2001518287A (ja) | アポトーシス関連化合物およびその使用 | |
| Simon et al. | Mapping of neutralizing epitopes and the receptor binding site of human interleukin 1 beta | |
| KR20110093899A (ko) | 종양 괴사 인자 알파 억제 펩티드 및 이의 용도 | |
| JP2003026699A (ja) | Ｉｌ−６シグナル伝達拮抗ペプチド | |
| KR101525919B1 (ko) | 자가면역 질환 예방 및 치료를 위한 ｔｎｆｒ２를 기반으로 하는 이중 항체 | |
| CN114751962B (zh) | 订书肽、其制备方法及其制药用途 | |
| EP2909235B1 (en) | Polypeptides specifically binding to il-23 | |
| JP4253900B2 (ja) | Ｉｌ−６に特異的に結合し生理活性を阻害するペプチド | |
| CN118019760A (zh) | 抗IL-1-β抗体 | |
| CN117820475A (zh) | 针对il-17a的新型纳米抗体、药物、制备、方法及应用 | |
| CN116867807A (zh) | Siglec-15结合蛋白的制备及其用途 | |
| JP2019507744A (ja) | テネイシンに対するヒト抗体及びその結合断片 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A711 | Notification of change in applicant |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A711 Effective date: 20070129 |
|
| A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20070130 |
|
| A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20070402 |
|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20080625 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20110217 |
|
| A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20111027 |