JP2003018941A - レチノイン酸代謝酵素遺伝子欠損動物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【解決手段】 ＣＹＰ２６遺伝子の機能が欠損した非ヒ
ト動物又はその子孫。 【効果】 本発明の非ヒト動物は、発生過程或いは生体
においてレチノイン酸の果たす役割を解明するために有
用。また、本発明の動物はビタミンＡ過剰症、レチノイ
ン酸過剰症等のＣＹＰ２６が関連すると考えられる疾患
の病態機序の解明及びこれらの疾患の治療方法を検討す
るためのモデルとなり、斯かる疾病の予防・治療薬のス
クリーニングに使用することもできる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明はレチノイン酸代謝酵
ＣＹＰ２６遺伝子の機能を欠損させたトランスジェニッ
ク非ヒト動物に関する。

【０００２】

【従来の技術】レチノイン酸は、ビタミンＡの活性代謝
物であり、正常な胚発生において重要な役割を果たして
いる（Conlon, R.A. 1995.Trends Genet. 11: 314-31
9）。また、レチノイン酸は、紫外線角化症、ざ瘡、乾
癬、及び魚鱗癬のような皮膚疾患、急性前骨髄性白血病
（ＡＰＬ）、頭頸部腫瘍及び皮膚癌を含む癌の治療に有
用であることが知られ、一方で、妊娠期間中にレチノイ
ン酸を過剰摂取すると、多岐にわたる発生異常が起こる
ことも報告されている。従って、レチノイン酸を疾患の
治療薬として安全に用いるためには、発生過程或いは生
体レベルでレチノイン酸の果たす役割を十分に解明する
ことが重要である。

【０００３】レチノイン酸は、ＲＡＲｓ及びＲＸＲｓと
いう核レセプターのリガンドとして働くことによってそ
の作用を発現し、ＲＡＲ−ＲＸＲホモダイマー又はヘテ
ロダイマーは、レチノイン酸の存在下において、一組の
遺伝子の発現を制御できると考えられている。従来、胚
形成におけるレチノイン酸の役割は、ＲＡＲ又はＲＸＲ
が欠損した変異マウスを作製することによって検討され
てきたが、複数のレセプターの機能が重複しているため
に、レチノイン酸の役割については混乱が生じていた。

【０００４】一方、レチノイン酸合成酵素であるＲａｌ
ｄｈ２の遺伝子欠損マウスも作製されているが、レチノ
イン酸を全く持たず重度の発生異常を呈して変異胚は早
期に死んでしまうため（Niederreither, K., et al., 1
999. Nature Genet. 21: 444-448.）、後のステージで
レチノイン酸が果たす役割は明らかにならなかった。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】従って、本発明は、発
生過程及び生体におけるレチノイン酸の役割やレチノイ
ン酸が関与する疾患の発症機序等の解明に有用なモデル
動物を提供することを目的とする。

【０００６】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、斯かる実
情に鑑み、レチノイン酸代謝酵素として知られているＣ
ＹＰ２６が、インビトロにおいてレチノイン酸を酸化型
レチノイン酸に代謝すること及び培養細胞においてＣＹ
Ｐ２６が過剰に発現すると細胞のレチノイン酸に対する
感受性が低下することに着目して検討したことろ、不活
性化したＣＹＰ２６遺伝子を動物に導入することにより
レチノイン酸を過剰に生成する個体を得ることができ、
発生過程や生体におけるレチノイン酸の役割等を解明す
る上で有用であることを見出し、本発明を完成した。

【０００７】すなわち本発明は、ＣＹＰ２６遺伝子の機
能が欠損した非ヒト動物又はその子孫を提供するもので
ある。

【０００８】

【発明の実施の形態】本発明におけるＣＹＰ２６とは、
Ｐ４５０ＲＡとも呼ばれるレチノイン酸を代謝するＰ４
５０酵素である（White，T.A., et al. 1996. Biol Che
m. 271: 29922-29927）。ＣＹＰ２６については、これ
まで、インビトロにおいてレチノイン酸を５，８−エポ
キシレチノイン酸、４−ヒドロキシレチノイン酸、１８
−ヒドロキシレチノイン酸といった酸化型に代謝するこ
と（Fujii, H., et al. 1997. EMBO J. 16: 4163-417
3、White，J.A., et al. 1996. J. Biol Chem. 271: 29
922-29927）、培養細胞においては、ＣＹＰ２６が過剰
に発現すると細胞のレチノイン酸に対する感受性が低下
すること（Fujii, H., et al. 1997. EMBO J. 16: 4163
-4173）等が報告されている。従って、ＣＹＰ２６はイ
ンビトロにおけるレチノイン酸分解酵素であると考えら
れ、細胞内の活性型レチノイン酸濃度は、Ｒａｌｄｈ２
によるレチノイン酸の合成とＣＹＰ２６によるレチノイ
ン酸分解とのバランスによって決定されているものと考
えられる。

【０００９】本発明において、「ＣＹＰ２６遺伝子の機
能が欠損した」とは、該遺伝子の遺伝子産物であるＣＹ
Ｐ２６が正常に産生されないことをいい、ＣＹＰ２６自
体が産生されないこと及び一部を欠損するなどして機能
を発現し得ないＣＹＰ２６様タンパク質を産生すること
が含まれる。

【００１０】本発明のＣＹＰ２６遺伝子の機能欠損動物
を得るためには、ＣＹＰ２６遺伝子をクローニングし、
インビトロで該遺伝子の機能を欠損させた後に、該欠損
遺伝子を動物に戻して染色体上のＣＹＰ２６遺伝子との
間で相同組換えを起こさせ、染色体上のＣＹＰ２６遺伝
子を破壊し、その動物自体又はその子孫の該遺伝子の機
能を欠損させるという方法が一般的に用いられる。

【００１１】ＣＹＰ２６遺伝子としては、動物から単
離、抽出されたゲノム由来のＣＹＰ２６遺伝子であって
もよく、或いは遺伝子工学的手法を用いてクローニング
されたＣＹＰ２６ｃＤＮＡであってもよい。例えばマウ
スＣＹＰ２６遺伝子等が用いられる。

【００１２】遺伝子の機能を欠損させる方法としては、
遺伝子に人為的に変異を加えて該遺伝子を破壊する方法
が挙げられ、例えばプロモーター領域及び／又はコード
領域の少なくとも一部の欠失や、他の遺伝子を挿入又は
置換することが挙げられる。

【００１３】本発明でいう非ヒト動物は、ＣＹＰ２６遺
伝子の機能が欠損したもであればよく、ＣＹＰ２６遺伝
子がヘテロに欠損している動物及びホモに欠損している
動物のいずれもが含まれる。また、使用される動物は特
に限定されず、ヒトを除く全ての動物が挙げられ、好ま
しくはモルモット、ハムスター、マウス、ラット、ウサ
ギ、ブタ等の哺乳動物であり、病態モデルとしての扱い
が容易で且つ生物サイクルが比較的短い齧歯動物、特に
マウスが好ましい。

【００１４】動物に遺伝子を導入してその動物の個体又
は子孫にその遺伝子を発現させる手法としては、従来か
らトランスジェニック動物の作成に常用されている公知
の手法を挙げることができ、例えば遺伝子ＤＮＡを受精
卵の前核期胚に注入する方法、組換えレトロウイルスを
初期胚に感染させる方法、相同組換えを起こさせた胚性
幹細胞（ＥＳ細胞）を胚盤胞又は８細胞期胚に注入する
方法等によって得られた宿主胚を動物に移植して産仔を
得、これを他の個体と交配し、Ｆ１ヘテロ変異動物、さ
らにはＦ２ホモ又はヘミ変異動物を作成する方法が挙げ
られる。このうち、ＥＳ細胞を用いる遺伝子導入の方法
は、相同組換えにより遺伝子を破壊（ノックアウト）す
るのに適しており、ＥＳ細胞に遺伝子を導入する工程と
キメラ動物を作出する工程とを分けて行えるという利点
を有しているので好ましい。ＥＳ細胞を用いる遺伝子導
入の方法は、公知の方法に準じて行えばよい。

【００１５】以下、ＥＳ細胞を用いた遺伝子の導入の方
法について、マウスを例にして具体的に説明する。マウ
スのＣＹＰ２６遺伝子は、図１に示す通りであり、斯か
る遺伝子機能の欠損には、プロモーター領域及び／又は
コード領域の少なくとも一部を欠失させるか、いずれか
の部位に他の遺伝子を挿入すればよい。また、ＣＹＰ２
６遺伝子の機能を欠損させることができる限り、欠失又
は他の遺伝子を挿入する部位は、イントロンであっても
よい。そして、ＣＹＰ２６遺伝子との間で相同組換えを
行うにあたり、このように遺伝子を破壊するように構築
したＤＮＡ配列を有するＤＮＡ（ターゲティングベクタ
ー）を作製する。

【００１６】挿入する遺伝子としては、ＣＹＰ２６遺伝
子の欠損を検出するためのマーカー遺伝子として機能す
る遺伝子を用いることが好ましく、そのような遺伝子と
しては、ポジティブ選別に用いるマーカー遺伝子とし
て、例えばネオマイシン（ｎｅｏ）耐性遺伝子が、ネガ
ティブ選別に用いるマーカー遺伝子として、例えばチミ
ジンキナーゼ（ｔｋ）遺伝子やジフテリアトキシンＡフ
ラグメント（ＤＴ−Ａ）遺伝子等が用いられる。尚、ネ
オマイシン耐性遺伝子は、ネオマイシン類似体であるＧ
４１８を用いることにより目的遺伝子の選別を可能にす
る。

【００１７】好ましい遺伝子ターゲティングとしては、
５’−末端領域（７−ｋｂ ＳａｌＩ−ＣｌａＩ断
片）、エキソン−イントロン領域（５．５ｋｂ Ｃｌａ
Ｉ−ＸｈｏＩ断片）、及び３’−末端領域（４．５−ｋ
ｂ ＸｈｏＩ断片）を改変したｐＭＣ１−ＤＴｐＡをタ
ーゲティングベクターとして用い、ＣｌａＩ部位を含む
ｌｏｘ Ｐ断片を、５’−非翻訳領域に挿入し、ｌｏｘ
Ｐ−ｎｅｏフラグメントを３’−末端領域のＸｈｏＩ
部位に挿入すること等が挙げられる。尚、これらの遺伝
子の挿入は、インビトロで常用のＤＮＡ組換え技術によ
り行うことができる。

【００１８】次に、こうして得られたターゲティングベ
クターと、ＥＳ細胞中のＣＹＰ２６遺伝子との間で相同
組換えを行う。相同組換え用ＤＮＡのＥＳ細胞への導入
は、例えば常用のエレクトロポレーションにより行うこ
とができる。この相同組換えにおいては、ＥＳ細胞中の
ＣＹＰ２６遺伝子のＤＮＡと相同組換え用ＤＮＡの対応
する領域との間で組換えが生じ、相同組換え用ＤＮＡ中
に挿入されていたマーカー遺伝子がＥＳ細胞のゲノムの
ＣＹＰ２６遺伝子に挿入される。この結果、ＥＳ細胞
は、ＣＹＰ２６遺伝子の機能を欠損し、同時にマーカー
遺伝子を含むことになる。このマーカー遺伝子の選別機
能に基づいて、ＣＹＰ２６遺伝子の機能を欠損したＥＳ
細胞を選別することができる。

【００１９】次に、このＥＳ細胞をマウスの胚盤胞等の
宿主胚に注入し、得られた胚を偽妊娠マウスの子宮角に
移植してキメラマウスを得る。このキメラマウスを適当
な系統のマウスと交配することによりＦ１へテロ型の産
仔を得る。キメラマウスの生殖細胞が相同組換え体、す
なわちＣＹＰ２６遺伝子が破壊されているＥＳ細胞に由
来していれば、ＣＹＰ２６遺伝子の機能が欠損したマウ
スを得ることができる。また、得られたヘテロ欠損動物
同士を交配させ、その産仔の中からホモ欠損動物を得る
ことができる。

【００２０】ＣＹＰ２６遺伝子の欠損や、該遺伝子がヘ
テロ又はホモに欠損したものであるかは、離乳に至った
後に尾からＤＮＡを注出後、サザンブロット又はＰＣＲ
を行って、確認することができる。

【００２１】尚、本発明の動物の飼育方法は、特別な方
法を用いる必要はなく、正常な動物と同様な方法により
飼育することができる。

【００２２】本発明により得られたＣＹＰ２６遺伝子の
機能が欠損したマウスは、後記実施例で示すように、レ
チノイン酸を過剰投与した場合と同様に尾部非形成等の
異常を呈し、また通常ＣＹＰ２６が発現する領域でレチ
ノイン酸の上昇が認められた。従って、ＣＹＰ２６がレ
チノイン酸分解酵素であることが裏付けられると共に、
本発明の動物はレチノイン酸を過剰生成する動物モデル
となり得る。

【００２３】

【実施例】実施例１ ＣＹＰ２６変異マウスの作製 （１）ＣＹＰ２６遺伝子のクローニング ＣＹＰ２６クローンは、Ｅ１４の胚性幹（ＥＳ）細胞か
ら構築されたゲノムライブラリから単離した。

【００２４】（２）ターゲティングベクターの構築（図
１） （ｉ）ＣＹＰ２６^neo作製のためのターゲティングベク
ター ＣＹＰ２６の ５’−末端領域（７−ｋｂ ＳａｌＩ−
ＣｌａＩ断片）、エキソン−イントロン領域（５．５ｋ
ｂ ＣｌａＩ−ＸｈｏＩ断片）、及び３’−末端領域
（４．５−ｋｂ ＸｈｏＩ断片）を改変したｐＭＣ１−
ＤＴｐＡベクターへサブクローニングすることによって
ターゲティングベクターを作製した（Taniguchi et al.
1997. Neuron 19: 519-530）。ＣｌａＩ部位を含むｌｏ
ｘ Ｐ断片を、５’−非翻訳領域に挿入し、ｌｏｘＰ−
ｎｅｏカセットを３’−末端領域のＸｈｏＩ部位に挿入
した。遺伝子ターゲティングは、既報の方法と同様に実
施した（Sawai, S., et al., 1991. New Biologist 9：
861−869）。ターゲティングベクターは、ＮｓｉＩによ
って直線状にした後、エレクトロポレーションによりＲ
１ ＥＳ細胞に導入した。Ｇ４１８耐性のＥＳクローン
１３３個のうち１個（Ｒ１９）は相同的組換えを受けた
ことが示され、これは、５’プローブ、３’プローブ、
ｎｅｏプローブなどの様々なプローブによるサザンブロ
ット分析によって確認された。

【００２５】（ｉｉ）ＣＹＰ２６^-作製のためのターゲ
ティングベクター ヌル対立遺伝子を作製するために、Ｒ１９細胞にＣｒｅ
発現ベクターによるエレクトロポレーションを実施した
後（pCre−Pac；Taniguchi,M., et al., 1997.Neuron 1
9: 519-530）、ピューロマイシン（1μg／ml；Sigma）
による選択を行なった。Ｃｒｅ介在した欠損は、ＰＣＲ
及びサザンブロット分析によって証明した。 ＰＣＲは、プライマーＰ１（5'−GGTAACGTGGGCAGTAACCT
G（配列番号１））、 Ｐ２（5'−TCCATGAGCCGAGTTCTGTAG（配列番号２））、
及びＰ３（5'−TCCGTTCAGTCAGTCTCATAC（配列番号
３））を用いて実施した。ＣＹＰ２６エキソンを失った
ことが明らかな１つのクローン（Ｒ１９−Ｒ９３）を用
いた。

【００２６】（３）キメラマウスの作製 Ｒ１９又はＲ１９−Ｒ９３細胞を、Ｃ５７ＢＬ／６Ｃｒ
マウスを（Ｃ５７ＢＬ／６Ｃｒ×ＤＢＡ）Ｆ₁マウスと
交配させて得られた胚盤胞に注入し、キメラ動物を誕生
させた。各ＥＳ細胞株に由来する雄キメラをＣ５７ＢＬ
／６Ｃｒ雌と交配させ、ヘテロ接合体Ｆ₁子孫を出生さ
せた。Ｆ₁ヘテロ接合体同士を交配し、ＣＹＰ２６
^neo/neoマウス及びＣＹＰ２６^-/-マウスを取得した。

【００２７】実施例２ ＣＹＰ２６変異マウスの性質 エキソンを全て欠失させたヌル対立遺伝子（ＣＹＰ２６
^-）及びｎｅｏ遺伝子を３’−末端領域に挿入した低次
形態対立遺伝子（ＣＹＰ２６^neo）を有する変異マウス
の性質を以下に示す。 （１）ＣＹＰ２６±ヘテロ接合体は肉眼的には正常であ
るように思われ、多数取得された。これらのヘテロ接合
体の異種交配によりＣＹＰ２６^-/-マウスが誕生した
が、そのほとんどは１日以内に死亡した。ＣＹＰ２６
^-/-マウスの表現型は、厳密に言えば多様であったが、
尾部欠損、脊椎のトランスフォーメーション、及び菱脳
のパターン形成異常という特徴は大きく共通していた
（表１）。ＣＹＰ２６^-/-マウスの外見は人魚様の奇形
（合脚体）を呈し、体の尾部は重度に欠損し、それ以外
の前方部分は比較的正常な状態を維持していた（図２
Ａ、Ｂ）。後肢は総じて正中線で融合しており、尻尾は
欠失していた。二分脊椎（図２Ｄ）も著明であった。Ｃ
ＹＰ２６^-/-マウスの腹部器官の剖検により、腎などの
泌尿生殖器系の無形成や形成不全が明らかになった。後
腸の後端は虫垂で終了しているものが多かった（図２
Ｅ）。胚の組織学的分析により、泌尿生殖器系の無形成
又は形成不全が確認された（図２Ｆ、Ｇ）。腎はしばし
ば融合しており、馬蹄腎の発生を呈した（図２Ｆ）。Ｃ
ＹＰ２６^neo/neoマウスは正常であるように思われた
が、ＣＹＰ２６^neo/-マウスは短い尾又はよじれた尾を
特徴とする微かな表現型を示したことから（図２Ｇ）、
ＣＹＰ２６^neoは形質発現作用の弱い対立遺伝子である
ことが示された。

【００２８】

【表１】

【００２９】出生時点におけるＣＹＰ２６^-/-マウスの
発現頻度は予想より低く（表２）、これらの動物の２／
３以上が子宮内で死亡することが示された。

【００３０】

【表２】

【００３１】（２）ヌル対立遺伝子のホモ接合体におけ
る胎仔の致死性 ヘテロ接合体の異種交配から生まれた同腹仔を分析した
ことろ、ホモ接合変異胚は、胎生９．５日目（Ｅ９．
５）に予想された頻度で検出され、Ｅ８．５までは形態
学的に正常であった。形態学的異常が最初に明らかにな
ったのはＥ９．５であり、その時点で、ＣＹＰ２６^-/-
胚は全て（２５／２５）が後部欠損を呈しており、その
中には、前方神経管閉鎖不全がある胚（１８／２５）も
あれば、前方神経管不全がない胚（７／２５）もあっ
た。さらに重度に冒された胚（１０／２５）は、神経管
の不規則な折れ曲がり、不規則な体節、不完全な軸の回
転、心臓異常といった別の欠陥をきたしていた。Ｅ１
２．５〜Ｅ１８．５の変異胚は、尾部欠損を発現したほ
か（重症例を図２Ｃに示す）、一部（３／１３）には脳
脱が見られた。

【００３２】（３）レチノイン酸応答性トランスジーン
（ＲＡＲＥ−ｈｓｐｌａｃＺ）の発現 ＲＡＲＥ−ｈｓｐｌａｃＺは、ｈｓｐ６８プロモーター
及びｌａｃＺ遺伝子と関連した３つのレチノイン酸応答
配列から構成されており、これにより内因性レチノイン
酸のトランスアクティベーション活性を明らかにするこ
とができるが（Rossant，J.,et al., 1991．Genesa & D
ev．5：1333-1344）、野生型胚におけるＣＹＰ２６発現
レベルは、ＲＡＲＥ−ｈｓｐｌａｃＺの発現レベルと逆
相関するように思われた。Ｅ７．７５に、ＣＹＰ２６の
発現は前部領域に制限されていたが（図３Ａ）、ｌａｃ
Ｚトランスジーンの発現は後部領域で顕著であった（図
３Ｅ）。Ｅ８．２５に尾芽でＣＹＰ２６発現が開始する
ときに（図３Ｂ、Ｃ）、尾芽のｌａｃＺ発現は低下を始
める（図３Ｆ、Ｇ）。Ｅ８．５〜Ｅ９．０に、尾芽にお
けるＣＹＰ２６の発現が最大のとき（図３Ｄ）、トラン
スジーンの発現は尾芽全体から消失している（図３
Ｈ）。一方、ＣＹＰ２６^-/-胚では、Ｅ８．２５及びＥ
９．０に、尾芽におけるＲＡＲＥ−ｈｓｐｌａｃＺトラ
ンスジーンの発現は続いており（図３Ｊ−Ｌ）、このこ
とは、ＣＹＰ２６の欠如によりレチノイン酸濃度が上昇
することを示している。

【００３３】

【発明の効果】本発明のＣＹＰ２６遺伝子の機能が欠損
した非ヒト動物は、発生過程或いは生体においてレチノ
イン酸の果たす役割を解明するために有用である。ま
た、本発明の動物はビタミンＡ過剰症、レチノイン酸過
剰症或いはビタミンＡ欠乏症等のＣＹＰ２６が関連する
と考えられる疾患の病態機序の解明及びこれらの疾患の
治療方法を検討するためのモデルとなり、更にＣＹＰ２
６遺伝子欠損に起因する疾病の予防・治療薬のスクリー
ニングに使用することもできる。

【００３４】

【配列表】 SEQUENCE LISTING <110>JAPAN SCIENCE AND TECHNOLOGY CORPORATION <120> Animal deficient in retinoic acid-inactivating enzyme gene <130>P02971307 <160> 3 <170> PatentIn Ver. 2.1 <210>1 <211>21 <212>DNA <213>Artificial Sequence <400>1 ggtaacgtgg gcagtaacct g 21 <210>2 <211>21 <212>DNA <213>Artificial Sequence <400>2 tccatgagcc gagttctgta g 21 <210>3 <211>21 <212>DNA <213>Artificial Sequence <400>3 tccgttcagt cagtctcata c 21

【図面の簡単な説明】

【図１】図１は、ターゲティングベクターの構築図であ
る。挿入対立遺伝子（ＣＹＰ２６^neo）は、野生型ＣＹ
Ｐ２６対立遺伝子（エキソンを黒い四角形で示す）とタ
ーゲティングベクターの間の相同的組換えにより作製
し、ヌル対立遺伝子（ＣＹＰ２６^-）は、その後のｌｏ
ｘ Ｐ部位間に位置する指定領域のＣｒｅ介在欠失によ
り作製した。

【図２】図２は、ＣＹＰ２６突然変異マウスにおける尾
部欠損を示す図である。 Ａ：生後１日目（Ｐ１）の野生型（＋／＋）マウス及び
ＣＹＰ２６^-/-マウス。 Ｂ：Ｐ１の野生型マウス及びＣＹＰ２６^-/-マウスを腹
部側から見たもの。 Ｃ：後肢及び尻尾が完全に欠損したＥ１６．５のＣＹＰ
２６^-/-胚を側方から見たもの。 Ｄ：Ｐ１における二分脊椎を呈するホモ接合突然変異胚
を背部から見たもの。 Ｅ：Ｐ１におけるＣＹＰ２６^-/-胚の腸の閉鎖。 Ｆ、Ｇ：Ｐ１におけるＣＹＰ２６^-/-マウス腹部の組織
学的所見。 ｖｂ：脊椎体。 Ｈ：生後８−１０週のＣＹＰ２６^neo/neoマウス及びＣ
ＹＰ２６^neo/-マウス。Ｃ−Ｇの縮尺表示は１ｍｍであ
る。

【図３】図３は、尾芽におけるＣＹＰ２６発現と内因性
ＲＡ濃度との相関を示した図である。 Ａ−Ｄ：Ｅ７．７５、Ｅ８．２５、Ｅ９．０の野生型胚
におけるＣＹＰ２６の発現。 Ｅ−Ｈ：野生型胚におけるＲＡＲＥ−ｈｓｐｌａｃＺト
ランスジーンの発現。 Ｉ−Ｊ：ＣＹＰ２６^-/-胚におけるＲＡＲＥ−ｈｓｐｌ
ａｃＺトランスジーンの発現。 Ａ：前部、Ｐ：後部、ｎ：節、矢印先端部（Ｃ、Ｇ、
Ｋ）：尾部先端の位置、＊印（Ｄ、Ｈ、Ｌ）：尿膜底
部。縮尺表示は３００μｍである。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 目野 主税 大阪府吹田市山田丘１−３ 大阪大学 細 胞生体工学センター内 (72)発明者 藤井 秀太 大阪府吹田市山田丘１−３ 大阪大学 細 胞生体工学センター内 (72)発明者 西野 仁輔 大阪府吹田市山田丘１−３ 大阪大学 細 胞生体工学センター内 (72)発明者 白鳥 秀卓 大阪府吹田市山田丘１−３ 大阪大学 細 胞生体工学センター内 (72)発明者 西條 幸男 大阪府吹田市山田丘１−３ 大阪大学 細 胞生体工学センター内 Ｆターム(参考） 4B024 AA01 AA10 BA07 CA02 DA02 GA14 GA18 HA20

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 ＣＹＰ２６遺伝子の機能が欠損した非ヒ
   ト動物又はその子孫。
2. 【請求項２】 ＣＹＰ２６遺伝子のいずれかの部位が欠
   失しているか、又はいずれかの部位に他の遺伝子が挿入
   されることにより該遺伝子の機能が欠損したものである
   請求項１記載の動物。
3. 【請求項３】 他の遺伝子がネオマイシン耐性遺伝子で
   ある請求項２記載の動物。