JP2003014761A - 皮膚感作性検定方法 - Google Patents
皮膚感作性検定方法Info
- Publication number
- JP2003014761A JP2003014761A JP2001198634A JP2001198634A JP2003014761A JP 2003014761 A JP2003014761 A JP 2003014761A JP 2001198634 A JP2001198634 A JP 2001198634A JP 2001198634 A JP2001198634 A JP 2001198634A JP 2003014761 A JP2003014761 A JP 2003014761A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- solution
- glutathione
- mass
- substance
- test substance
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Other Investigation Or Analysis Of Materials By Electrical Means (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【課題】被験物質の皮膚感作性を、煩雑な動物実験を行
うことなく、少量の被験物質で、簡便かつ迅速に検定す
る方法を提供すること。 【解決手段】モノマーとしての分子量が５万以下のシス
テイン含有ペプチドと被験物質とを混合した後、前記ペ
プチドと被験物質との結合物の有無を測定することを特
徴とする被験物質の皮膚感作性の検定方法。
うことなく、少量の被験物質で、簡便かつ迅速に検定す
る方法を提供すること。 【解決手段】モノマーとしての分子量が５万以下のシス
テイン含有ペプチドと被験物質とを混合した後、前記ペ
プチドと被験物質との結合物の有無を測定することを特
徴とする被験物質の皮膚感作性の検定方法。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、被験物質の皮膚感
作性の検定方法に関する。
作性の検定方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】化学物質が皮膚に接触するとアレルギー
反応が惹起されることがあることから、例えば医・農薬
や化粧品等の化学物質を含む製品を開発するに当って
は、その内容物質の皮膚感作性の検定が必要となる。従
来、被験物質の皮膚感作性を検定する方法としては、実
験動物に被験物質を経皮投与して、その投与部位の皮膚
反応を観察する方法（Maximization試験、Buehler試験
等）、実験動物に被験物質を経皮投与して、リンパ球の
増殖を調べる方法（Local Lymph Node Assay等）などが
知られている。そして、かかる検定方法は、実験動物の
飼育の他、被験物質の実験動物への投与や、皮膚観察、
血液検査といった煩雑な作業を必要とし、また、そのた
めの期間を要する。
反応が惹起されることがあることから、例えば医・農薬
や化粧品等の化学物質を含む製品を開発するに当って
は、その内容物質の皮膚感作性の検定が必要となる。従
来、被験物質の皮膚感作性を検定する方法としては、実
験動物に被験物質を経皮投与して、その投与部位の皮膚
反応を観察する方法（Maximization試験、Buehler試験
等）、実験動物に被験物質を経皮投与して、リンパ球の
増殖を調べる方法（Local Lymph Node Assay等）などが
知られている。そして、かかる検定方法は、実験動物の
飼育の他、被験物質の実験動物への投与や、皮膚観察、
血液検査といった煩雑な作業を必要とし、また、そのた
めの期間を要する。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】医・農薬や化粧品等の
開発に際しては、厳格な毒性試験が要求されていること
から、最終的には上記のような動物実験による皮膚感作
性の有無についての検定も必要とされている。しかしな
がら、開発初期段階における開発候補化合物の全てにつ
いて、このような動物実験を実施すると、多数の実験動
物、多量の被験物質および多大な時間を要することか
ら、被験物質の皮膚感作性を、少量の被験物質で、より
簡便に、かつ迅速に検定する方法の開発が強く求められ
ていた。本発明の目的は、このような煩雑な動物実験を
行うことなく、被験物質の皮膚感作性を簡便かつ迅速に
検定する方法を提供することである。
開発に際しては、厳格な毒性試験が要求されていること
から、最終的には上記のような動物実験による皮膚感作
性の有無についての検定も必要とされている。しかしな
がら、開発初期段階における開発候補化合物の全てにつ
いて、このような動物実験を実施すると、多数の実験動
物、多量の被験物質および多大な時間を要することか
ら、被験物質の皮膚感作性を、少量の被験物質で、より
簡便に、かつ迅速に検定する方法の開発が強く求められ
ていた。本発明の目的は、このような煩雑な動物実験を
行うことなく、被験物質の皮膚感作性を簡便かつ迅速に
検定する方法を提供することである。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、かかる状
況の下、鋭意検討した結果、モノマーとしての分子量が
約５万以下のシステイン含有ペプチドと被験物質とを混
合し反応させた際の該ペプチドと被験物質との結合の有
無を測定することにより、当該被験物質の皮膚感作性を
検定し得ることを見出し、本発明に至った。すなわち、
本発明は、モノマーとしての分子量が５万以下のシステ
イン含有ペプチドと被験物質とを混合した後、前記ペプ
チドと被験物質との結合物の有無を測定することを特徴
とする被験物質の皮膚感作性の検定方法を提供するもの
である。
況の下、鋭意検討した結果、モノマーとしての分子量が
約５万以下のシステイン含有ペプチドと被験物質とを混
合し反応させた際の該ペプチドと被験物質との結合の有
無を測定することにより、当該被験物質の皮膚感作性を
検定し得ることを見出し、本発明に至った。すなわち、
本発明は、モノマーとしての分子量が５万以下のシステ
イン含有ペプチドと被験物質とを混合した後、前記ペプ
チドと被験物質との結合物の有無を測定することを特徴
とする被験物質の皮膚感作性の検定方法を提供するもの
である。
【０００５】
【発明の実施の形態】以下、本発明の検定方法につき説
明する。本発明の検定方法において使用し得るペプチド
は、システイン残基を1個以上含み、かつ、モノマーと
しての分子量が約５万以下のペプチドであって、具体的
には例えばグルタチオン等が挙げられる。かかるペプチ
ドを、例えば、リン酸ナトリウム、リン酸カリウム等の
リン酸アルカリ金属塩などの無機酸塩や、酢酸ナトリウ
ム、酢酸カリウム、酢酸アンモニウム等の酢酸塩などの
有機酸塩等を含む水性緩衝液、もしくは水、またはこれ
らと有機溶媒との混合溶媒に、例えば約０．０１μM〜
約１M程度の濃度、通常約１０μM〜約１００ｍM程度の
濃度となるよう溶解する。被験物質は、例えば、メタノ
ール、エタノール、アセトニトリル、アセトンなどの有
機溶媒またはこれらの混合溶媒に、例えば約０．０１μ
M〜約１M程度の濃度、通常約１ｍM〜約５００ｍM程度の
濃度となるよう溶解する。次いで、上記のペプチド溶液
と被験物質溶液とを、ペプチドと被験物質のモル濃度比
が例えば１：１００〜２０：１となるように混合し反応
させる。該反応には、ペプチド溶液と被験物質溶液との
混合液を、例えば約４℃から約６０℃程度の温度範囲に
て保温しながら、通常約１０分間〜約２日間程度静置す
る。
明する。本発明の検定方法において使用し得るペプチド
は、システイン残基を1個以上含み、かつ、モノマーと
しての分子量が約５万以下のペプチドであって、具体的
には例えばグルタチオン等が挙げられる。かかるペプチ
ドを、例えば、リン酸ナトリウム、リン酸カリウム等の
リン酸アルカリ金属塩などの無機酸塩や、酢酸ナトリウ
ム、酢酸カリウム、酢酸アンモニウム等の酢酸塩などの
有機酸塩等を含む水性緩衝液、もしくは水、またはこれ
らと有機溶媒との混合溶媒に、例えば約０．０１μM〜
約１M程度の濃度、通常約１０μM〜約１００ｍM程度の
濃度となるよう溶解する。被験物質は、例えば、メタノ
ール、エタノール、アセトニトリル、アセトンなどの有
機溶媒またはこれらの混合溶媒に、例えば約０．０１μ
M〜約１M程度の濃度、通常約１ｍM〜約５００ｍM程度の
濃度となるよう溶解する。次いで、上記のペプチド溶液
と被験物質溶液とを、ペプチドと被験物質のモル濃度比
が例えば１：１００〜２０：１となるように混合し反応
させる。該反応には、ペプチド溶液と被験物質溶液との
混合液を、例えば約４℃から約６０℃程度の温度範囲に
て保温しながら、通常約１０分間〜約２日間程度静置す
る。
【０００６】かかる反応により生成した被験物質とペプ
チドとの結合物の有無は、ペプチド溶液と被験物質溶液
との混合液を次のようにして分析することにより測定さ
れる。混合液の分析方法としては、例えば、高速液体ク
ロマトグラフィー（HPLC）、ガスクロマトグラフィー
（GC）、薄層クロマトグラフィー（TLC）、質量分析（M
S）等をあげることができる。また、HPLC、GC、またはT
LCのいずれかとMSとを組み合わせた分析方法（LC-MS，G
C-MS，TLC-MS）等を用いることもできる。該方法によれ
ば、試料に複数成分が含まれていてもそれらを個々に分
離し、それぞれについて質量分析することができる。上
記のHPLC、GC、またはTLCに用いることのできるクロマ
トグラフ手法としては、逆相、正相、イオン交換などを
挙げることができる。このようなクロマトグラフ手法に
使用可能な市販のカラムやTLCとしては、例えば、LCカ
ラムとしてはSUMIPAX ODS A-212（住化分析センター
製）、L-column ODS（化学品検査協会製）、コスモシー
ル5C18-AR-II（ナカライテスク社製）等をあげることが
でき、TLCプレートではシリカゲル60F254（メルク社
製）、Silica Gel 60 Plate（ナカライテスク社製）な
どを挙げることができる。また、質量分析で利用するこ
とのできるイオン化法としては、例えば、マトリクス支
援レーザーイオン化（MALDI）法、エレクトロスプレー
イオン化（ESI）法、大気圧イオン化（API）法、電子衝
撃イオン化（EI）法、高速原子衝撃イオン化（FAB）法
などを挙げることができる。このようなイオン化法に使
用可能な市販のイオン源としては、MALDI法の場合、島
津／KRATOS社製、PE バイオシステムズ社製、マイクロ
マス社製、Bruker社製等のイオン源が挙げられる。また
ESI法の場合、Finnigan Mat社製、マイクロマス社製、
サイエックス社製、Hewlett-Packard社製、PE バイオシ
ステムズ社製等のイオン源が挙げられる。質量分析計と
しては、磁場型、四重極型、イオントラップ型、フーリ
エ変換−イオンサイクロトン共鳴型、飛行時間型の質量
分析計をあげることができる。上記のようにして得られ
た混合液の分析結果を、例えば、混合前のペプチド溶液
および被験物質溶液各々の分析結果と比較し、混合前の
ペプチド溶液および被験物質溶液からは検出されず、か
つ保温後の混合液からのみ検出される成分の有無を調べ
ることにより、ペプチドと被験物質との結合物の有無を
測定することができる。かかる分析に、MS、LC-MS、GC-
MS、TLC-MS等の質量分析法を用いると、各成分につい
て、質量スペクトルから得られる情報に基づいて質量、
構造等を解析してその組成や構造を確認することによ
り、ペプチドと被験物質との結合物を特定することもで
きる。
チドとの結合物の有無は、ペプチド溶液と被験物質溶液
との混合液を次のようにして分析することにより測定さ
れる。混合液の分析方法としては、例えば、高速液体ク
ロマトグラフィー（HPLC）、ガスクロマトグラフィー
（GC）、薄層クロマトグラフィー（TLC）、質量分析（M
S）等をあげることができる。また、HPLC、GC、またはT
LCのいずれかとMSとを組み合わせた分析方法（LC-MS，G
C-MS，TLC-MS）等を用いることもできる。該方法によれ
ば、試料に複数成分が含まれていてもそれらを個々に分
離し、それぞれについて質量分析することができる。上
記のHPLC、GC、またはTLCに用いることのできるクロマ
トグラフ手法としては、逆相、正相、イオン交換などを
挙げることができる。このようなクロマトグラフ手法に
使用可能な市販のカラムやTLCとしては、例えば、LCカ
ラムとしてはSUMIPAX ODS A-212（住化分析センター
製）、L-column ODS（化学品検査協会製）、コスモシー
ル5C18-AR-II（ナカライテスク社製）等をあげることが
でき、TLCプレートではシリカゲル60F254（メルク社
製）、Silica Gel 60 Plate（ナカライテスク社製）な
どを挙げることができる。また、質量分析で利用するこ
とのできるイオン化法としては、例えば、マトリクス支
援レーザーイオン化（MALDI）法、エレクトロスプレー
イオン化（ESI）法、大気圧イオン化（API）法、電子衝
撃イオン化（EI）法、高速原子衝撃イオン化（FAB）法
などを挙げることができる。このようなイオン化法に使
用可能な市販のイオン源としては、MALDI法の場合、島
津／KRATOS社製、PE バイオシステムズ社製、マイクロ
マス社製、Bruker社製等のイオン源が挙げられる。また
ESI法の場合、Finnigan Mat社製、マイクロマス社製、
サイエックス社製、Hewlett-Packard社製、PE バイオシ
ステムズ社製等のイオン源が挙げられる。質量分析計と
しては、磁場型、四重極型、イオントラップ型、フーリ
エ変換−イオンサイクロトン共鳴型、飛行時間型の質量
分析計をあげることができる。上記のようにして得られ
た混合液の分析結果を、例えば、混合前のペプチド溶液
および被験物質溶液各々の分析結果と比較し、混合前の
ペプチド溶液および被験物質溶液からは検出されず、か
つ保温後の混合液からのみ検出される成分の有無を調べ
ることにより、ペプチドと被験物質との結合物の有無を
測定することができる。かかる分析に、MS、LC-MS、GC-
MS、TLC-MS等の質量分析法を用いると、各成分につい
て、質量スペクトルから得られる情報に基づいて質量、
構造等を解析してその組成や構造を確認することによ
り、ペプチドと被験物質との結合物を特定することもで
きる。
【０００７】
【実施例】以下に実施例により本発明を詳細に説明する
が、本発明はこれらに限定されるものではない。
が、本発明はこれらに限定されるものではない。
【０００８】実施例１
１−クロロ−２，４−ジニトロベンゼン（以下、DNCBと
記す。皮膚感作性陽性。質量２０２）を2mg/ml（10mM）
となるようアセトンに溶解した溶液0.1mlと、以下に記
載のグルタチオン溶液1〜３のいずれか1mlとを混合し、
３７℃で１時間保温した後、その20μlを以下に記載の
条件にてHPLCに供した。得られたクロマトグラムを、上
記のＤＮＣＢ溶液およびグルタチオン溶液のそれぞれを
同様に分析して得られたクロマトグラムと比較した。そ
の結果、１〜３のいずれのグルタチオン溶液を用いた場
合にも、ＤＮＣＢ溶液およびグルタチオン溶液それぞれ
のクロマトグラムには認められないピーク（以下、ピー
ク１と記す。）が検出された。
記す。皮膚感作性陽性。質量２０２）を2mg/ml（10mM）
となるようアセトンに溶解した溶液0.1mlと、以下に記
載のグルタチオン溶液1〜３のいずれか1mlとを混合し、
３７℃で１時間保温した後、その20μlを以下に記載の
条件にてHPLCに供した。得られたクロマトグラムを、上
記のＤＮＣＢ溶液およびグルタチオン溶液のそれぞれを
同様に分析して得られたクロマトグラムと比較した。そ
の結果、１〜３のいずれのグルタチオン溶液を用いた場
合にも、ＤＮＣＢ溶液およびグルタチオン溶液それぞれ
のクロマトグラムには認められないピーク（以下、ピー
ク１と記す。）が検出された。
【０００９】[グルタチオン溶液]
１；グルタチオンを3.0mg/ml（9.8mM）となるよう0.2M
NaH2PO4-Na2HPO4 pH 6に溶解 ２；グルタチオンを3.0mg/ml（9.8mM）となるよう0.2M
NaH2PO4-Na2HPO4 pH 8に溶解 ３；グルタチオンを3.0mg/ml（9.8mM）となるよう0.2M
Na2CO3-NaHCO3 pH 10に溶解
NaH2PO4-Na2HPO4 pH 6に溶解 ２；グルタチオンを3.0mg/ml（9.8mM）となるよう0.2M
NaH2PO4-Na2HPO4 pH 8に溶解 ３；グルタチオンを3.0mg/ml（9.8mM）となるよう0.2M
Na2CO3-NaHCO3 pH 10に溶解
【００１０】[HPLC測定条件]
島津製作所製LC-10AD
カラム：ＳＵＭＩＰＡＸ ＯＤＳ Ａ−２１２（６ｍｍ
×１５０ｍｍ） カラム温度：２５℃ 流速：１ｍl/min. 検出波長：220nm 溶出液A：蒸留水にＴＦＡを0.1％添加した溶液 溶出液B：アセトニトリルにＴＦＡを0.08％添加した溶
液 溶出条件：溶出液Aが95％、溶出液Bが5％の割合で混合
された溶出液で平衡化 されたカラムにサンプルを注入した後、30分間かけて溶
出液Bの割合を5％から80％にまで上げながら溶出液Aと
溶出液Bの混合液を流した。
×１５０ｍｍ） カラム温度：２５℃ 流速：１ｍl/min. 検出波長：220nm 溶出液A：蒸留水にＴＦＡを0.1％添加した溶液 溶出液B：アセトニトリルにＴＦＡを0.08％添加した溶
液 溶出条件：溶出液Aが95％、溶出液Bが5％の割合で混合
された溶出液で平衡化 されたカラムにサンプルを注入した後、30分間かけて溶
出液Bの割合を5％から80％にまで上げながら溶出液Aと
溶出液Bの混合液を流した。
【００１１】DNCBを20mg/ml(100mM)となるようアセトン
に溶解した溶液0.4mlと、グルタチオンを6.5mMとなるよ
う0.2M酢酸アンモニウムに溶解した溶液2mlとを混合
し、３７℃で１時間保温した後、凍結乾燥した。凍結乾
燥物をメタノールに溶解し、ＭＳに供した。その結果、
上記のピーク１に相当する化合物の質量数は４７３と測
定された。該質量数は、DNCBから塩素が脱離してグルタ
チオン（質量３０７）と結合してなる化合物の質量と一
致する。
に溶解した溶液0.4mlと、グルタチオンを6.5mMとなるよ
う0.2M酢酸アンモニウムに溶解した溶液2mlとを混合
し、３７℃で１時間保温した後、凍結乾燥した。凍結乾
燥物をメタノールに溶解し、ＭＳに供した。その結果、
上記のピーク１に相当する化合物の質量数は４７３と測
定された。該質量数は、DNCBから塩素が脱離してグルタ
チオン（質量３０７）と結合してなる化合物の質量と一
致する。
【００１２】[ＭＳ測定条件]
PEバイオシステムズ製Voyager DE-STR型質量分析計
イオン化；MALDI法
【００１３】実施例２
トリニトロベンゼンスルホン酸ナトリウム（以下、TNBS
と記す。皮膚感作性陽性。質量３１５）を3.5mg/ml（10
mM）となるようアセトンに溶解した溶液0.1mlと、実施
例１に記載のグルタチオン溶液２の1mlとを混合し、３
７℃で１時間保温した後、その20μlを実施例１に記載
の条件にてＨＰＬＣに供した。得られたクロマトグラム
（図３）を、上記のグルタチオン溶液およびTNBS溶液を
それぞれ同様に分析して得られたクロマトグラム（図１
および図２）と比較した。その結果、TNBS溶液およびグ
ルタチオン溶液それぞれのクロマトグラムには認められ
ないピーク（図３；ピーク、）が検出された。上記
のTNBSとグルタチオンとの混合液を、以下に記載の条件
にてＬＣ−ＭＳに供した。上記のピークおよびにそ
れぞれ相当するピークのＭＳスペクトル（図４、図５）
から、これらのピークに相当する化合物の質量数は、
が５１８、が５１８と測定された。該質量数は、TNBS
から−SO3Na基が脱離してグルタチオンと結合してなる
化合物の質量と一致する。また、グルタチオン溶液２に
替えて、グルタチオン溶液１を用いて同様に分析した。
グルタチオン溶液２を用いた上記結果と同様の結果が得
られた。
と記す。皮膚感作性陽性。質量３１５）を3.5mg/ml（10
mM）となるようアセトンに溶解した溶液0.1mlと、実施
例１に記載のグルタチオン溶液２の1mlとを混合し、３
７℃で１時間保温した後、その20μlを実施例１に記載
の条件にてＨＰＬＣに供した。得られたクロマトグラム
（図３）を、上記のグルタチオン溶液およびTNBS溶液を
それぞれ同様に分析して得られたクロマトグラム（図１
および図２）と比較した。その結果、TNBS溶液およびグ
ルタチオン溶液それぞれのクロマトグラムには認められ
ないピーク（図３；ピーク、）が検出された。上記
のTNBSとグルタチオンとの混合液を、以下に記載の条件
にてＬＣ−ＭＳに供した。上記のピークおよびにそ
れぞれ相当するピークのＭＳスペクトル（図４、図５）
から、これらのピークに相当する化合物の質量数は、
が５１８、が５１８と測定された。該質量数は、TNBS
から−SO3Na基が脱離してグルタチオンと結合してなる
化合物の質量と一致する。また、グルタチオン溶液２に
替えて、グルタチオン溶液１を用いて同様に分析した。
グルタチオン溶液２を用いた上記結果と同様の結果が得
られた。
【００１４】[ＬＣ−ＭＳ測定条件]
ＬＣ；日立製L-6200(UVはL-4000)
カラム：ＳＵＭＩＰＡＸ ＯＤＳ Ａ−２１２（６ｍｍ
×１５０ｍｍ） カラム温度：２５℃ 流速：１ｍl/min. 検出波長：254nm 溶出液A：蒸留水にＴＦＡを0.1％添加した溶液 溶出液B：アセトニトリルにＴＦＡを0.08％添加した溶
液 溶出条件：溶出液Aが95％、溶出液Bが5％の割合で混合
された溶出液で平衡化 されたカラムにサンプルを注入した後、30分間かけて溶
出液Bの割合を5％から80％にまで上げながら溶出液Aと
溶出液Bの混合液を流した。
×１５０ｍｍ） カラム温度：２５℃ 流速：１ｍl/min. 検出波長：254nm 溶出液A：蒸留水にＴＦＡを0.1％添加した溶液 溶出液B：アセトニトリルにＴＦＡを0.08％添加した溶
液 溶出条件：溶出液Aが95％、溶出液Bが5％の割合で混合
された溶出液で平衡化 されたカラムにサンプルを注入した後、30分間かけて溶
出液Bの割合を5％から80％にまで上げながら溶出液Aと
溶出液Bの混合液を流した。
【００１５】ＭＳ；Finnigan Mat製 TSQ700型質量分
析計 イオン化：ＥＳＩ法 スプレー電圧：4.5kV キャピラリー温度：２８５℃ シースガス：80psi オグジュラリーガス：10Unit
析計 イオン化：ＥＳＩ法 スプレー電圧：4.5kV キャピラリー温度：２８５℃ シースガス：80psi オグジュラリーガス：10Unit
【００１６】実施例３
１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミド（以下、DCC
と記す。皮膚感作性陽性。質量２０６）を21mg/ml（100
mM）となるようメタノールに溶解した溶液0.1mlと、実
施例１に記載のグルタチオン溶液1〜３のいずれか1mlと
を混合し、３７℃で１時間保温した後、その20μlを実
施例２に記載の条件にてＬＣ−ＭＳに供した。ＬＣにて
得られたクロマトグラムを、上記のグルタチオン溶液お
よびDCC溶液のそれぞれを同様に分析して得られたクロ
マトグラムと比較した。その結果、１〜３のいずれのグ
ルタチオン溶液を用いた場合にも、DCC溶液およびグル
タチオン溶液それぞれのクロマトグラムには認められな
いピークが検出された。このピークのＭＳスペクトルか
ら、当該ピークに含まれる化合物の質量数は、５１３と
測定された。該質量数は、DCC（質量206）とグルタチオ
ン（質量307）との結合物の質量と一致する。
と記す。皮膚感作性陽性。質量２０６）を21mg/ml（100
mM）となるようメタノールに溶解した溶液0.1mlと、実
施例１に記載のグルタチオン溶液1〜３のいずれか1mlと
を混合し、３７℃で１時間保温した後、その20μlを実
施例２に記載の条件にてＬＣ−ＭＳに供した。ＬＣにて
得られたクロマトグラムを、上記のグルタチオン溶液お
よびDCC溶液のそれぞれを同様に分析して得られたクロ
マトグラムと比較した。その結果、１〜３のいずれのグ
ルタチオン溶液を用いた場合にも、DCC溶液およびグル
タチオン溶液それぞれのクロマトグラムには認められな
いピークが検出された。このピークのＭＳスペクトルか
ら、当該ピークに含まれる化合物の質量数は、５１３と
測定された。該質量数は、DCC（質量206）とグルタチオ
ン（質量307）との結合物の質量と一致する。
【００１７】実施例４
１，２−エポキシオクタン（以下、１，２EOと記す。皮
膚感作性陽性。質量１２８）を12mg/ml（100mM）となる
ようメタノールに溶解した溶液0.1mlと、実施例１に記
載のグルタチオン溶液1〜３のいずれか1mlとを混合し、
３７℃で１時間保温した後、その20μlを実施例２に記
載の条件にてＬＣ−ＭＳに供した。ＬＣにて得られたク
ロマトグラムを、上記のグルタチオン溶液および1,2EO
溶液のそれぞれを同様に分析して得られたクロマトグラ
ムと比較した。その結果、１〜３のいずれのグルタチオ
ン溶液を用いた場合にも、1,2EO溶液およびグルタチオ
ン溶液それぞれのクロマトグラムには認められないピー
クが検出された。このピークのＭＳスペクトルから、当
該ピークに含まれる化合物の質量数は、４３５と測定さ
れた。該質量数は、1,2EO（質量128）とグルタチオン
（質量307）との結合物の質量と一致する。
膚感作性陽性。質量１２８）を12mg/ml（100mM）となる
ようメタノールに溶解した溶液0.1mlと、実施例１に記
載のグルタチオン溶液1〜３のいずれか1mlとを混合し、
３７℃で１時間保温した後、その20μlを実施例２に記
載の条件にてＬＣ−ＭＳに供した。ＬＣにて得られたク
ロマトグラムを、上記のグルタチオン溶液および1,2EO
溶液のそれぞれを同様に分析して得られたクロマトグラ
ムと比較した。その結果、１〜３のいずれのグルタチオ
ン溶液を用いた場合にも、1,2EO溶液およびグルタチオ
ン溶液それぞれのクロマトグラムには認められないピー
クが検出された。このピークのＭＳスペクトルから、当
該ピークに含まれる化合物の質量数は、４３５と測定さ
れた。該質量数は、1,2EO（質量128）とグルタチオン
（質量307）との結合物の質量と一致する。
【００１８】実施例５
１−メチル−３−ニトロ−１−ニトロソグアニジン（以
下、MNNGと記す。皮膚感作性陽性。質量１４７）を14mg
/ml（100mM）となるようメタノールに溶解した溶液0.1m
lと、実施例１に記載のグルタチオン溶液１または２の
いずれか1mlとを混合し、３７℃で１時間保温した後、
その20μlを実施例２に記載の条件にてＬＣ−ＭＳに供
した。ＬＣにて得られたクロマトグラムを、上記のグル
タチオン溶液およびMNNG溶液のそれぞれを同様に分析し
て得られたクロマトグラムと比較した。その結果、１ま
たは２のいずれのグルタチオン溶液を用いた場合にも、
MNNG溶液およびグルタチオン溶液それぞれのクロマトグ
ラムには認められないピークが検出された。このピーク
のＭＳスペクトルから、当該ピークに含まれる化合物の
質量数は、３９４と測定された。該質量数は、MNNGから
−Ｎ（ＮＯ）ＣＨ3基が脱離してグルタチオンと結合し
てなる化合物の質量と一致する。
下、MNNGと記す。皮膚感作性陽性。質量１４７）を14mg
/ml（100mM）となるようメタノールに溶解した溶液0.1m
lと、実施例１に記載のグルタチオン溶液１または２の
いずれか1mlとを混合し、３７℃で１時間保温した後、
その20μlを実施例２に記載の条件にてＬＣ−ＭＳに供
した。ＬＣにて得られたクロマトグラムを、上記のグル
タチオン溶液およびMNNG溶液のそれぞれを同様に分析し
て得られたクロマトグラムと比較した。その結果、１ま
たは２のいずれのグルタチオン溶液を用いた場合にも、
MNNG溶液およびグルタチオン溶液それぞれのクロマトグ
ラムには認められないピークが検出された。このピーク
のＭＳスペクトルから、当該ピークに含まれる化合物の
質量数は、３９４と測定された。該質量数は、MNNGから
−Ｎ（ＮＯ）ＣＨ3基が脱離してグルタチオンと結合し
てなる化合物の質量と一致する。
【００１９】実施例６
ホルムアルデヒド（３７％水溶液）（以下、FAと記す。
皮膚感作性陽性。質量３０）を3mg/ml（37mM）となるよ
うメタノールに溶解した溶液0.1mlと、実施例１に記載
のグルタチオン溶液1または２のいずれか1mlとを混合
し、３７℃で１時間保温した後、その20μlを実施例２
に記載の条件にてＬＣ−ＭＳに供した。ＬＣにて得られ
たクロマトグラムを、上記のグルタチオン溶液およびFA
溶液のそれぞれを同様に分析して得られたクロマトグラ
ムと比較した。その結果、１または２のいずれのグルタ
チオン溶液を用いた場合にも、FA溶液およびグルタチオ
ン溶液それぞれのクロマトグラムには認められないピー
クが検出された。このピークのＭＳスペクトルから、当
該ピークに含まれる化合物の質量数は、３３７と測定さ
れた。該質量数は、FAとグルタチオンとの結合物の質量
と一致する。
皮膚感作性陽性。質量３０）を3mg/ml（37mM）となるよ
うメタノールに溶解した溶液0.1mlと、実施例１に記載
のグルタチオン溶液1または２のいずれか1mlとを混合
し、３７℃で１時間保温した後、その20μlを実施例２
に記載の条件にてＬＣ−ＭＳに供した。ＬＣにて得られ
たクロマトグラムを、上記のグルタチオン溶液およびFA
溶液のそれぞれを同様に分析して得られたクロマトグラ
ムと比較した。その結果、１または２のいずれのグルタ
チオン溶液を用いた場合にも、FA溶液およびグルタチオ
ン溶液それぞれのクロマトグラムには認められないピー
クが検出された。このピークのＭＳスペクトルから、当
該ピークに含まれる化合物の質量数は、３３７と測定さ
れた。該質量数は、FAとグルタチオンとの結合物の質量
と一致する。
【００２０】実施例７
グルタルアルデヒド（25%水溶液）（以下、ＧＡと記
す。皮膚感作性陽性。質量１００）を52mg/ml（130mM）
となるようメタノールに溶解した溶液0.1mlと、実施例
１に記載のグルタチオン溶液1または２のいずれか1mlと
を混合し、３７℃で１時間保温した後、その20μlを実
施例２に記載の条件にてＬＣ−ＭＳに供した。ＬＣにて
得られたクロマトグラムを、上記のグルタチオン溶液お
よびGA溶液のそれぞれを同様に分析して得られたクロマ
トグラムと比較した。その結果、１または２のいずれの
グルタチオン溶液を用いた場合にも、GA溶液およびグル
タチオン溶液それぞれのクロマトグラムには認められな
いピークが２本検出された。これらのピークのＭＳスペ
クトルから、これらのピークに含まれる化合物の質量数
はそれぞれ、４０７および４８９と測定された。質量数
４０７は、GAとグルタチオンとの結合物の質量と一致す
る。また、質量数４８９は、２原子の水素と１原子の酸
素の脱離を伴って２分子のGAと１分子のグルタチオンと
が結合してなる化合物の質量と一致する。
す。皮膚感作性陽性。質量１００）を52mg/ml（130mM）
となるようメタノールに溶解した溶液0.1mlと、実施例
１に記載のグルタチオン溶液1または２のいずれか1mlと
を混合し、３７℃で１時間保温した後、その20μlを実
施例２に記載の条件にてＬＣ−ＭＳに供した。ＬＣにて
得られたクロマトグラムを、上記のグルタチオン溶液お
よびGA溶液のそれぞれを同様に分析して得られたクロマ
トグラムと比較した。その結果、１または２のいずれの
グルタチオン溶液を用いた場合にも、GA溶液およびグル
タチオン溶液それぞれのクロマトグラムには認められな
いピークが２本検出された。これらのピークのＭＳスペ
クトルから、これらのピークに含まれる化合物の質量数
はそれぞれ、４０７および４８９と測定された。質量数
４０７は、GAとグルタチオンとの結合物の質量と一致す
る。また、質量数４８９は、２原子の水素と１原子の酸
素の脱離を伴って２分子のGAと１分子のグルタチオンと
が結合してなる化合物の質量と一致する。
【００２１】実施例８
サリチル酸メチル（以下、MSCと記す。皮膚感作性陰
性。質量１５２）を15mg/ml（100mM）となるようメタノ
ールに溶解した溶液0.1mlと、実施例１に記載のグルタ
チオン溶液1または２のいずれか1mlとを混合し、３７℃
で１時間保温した後、その20μlを実施例２に記載の条
件にてＬＣ−ＭＳに供した。ＬＣにて得られたクロマト
グラムを、上記のグルタチオン溶液およびMSC溶液のそ
れぞれを同様に分析して得られたクロマトグラムと比較
した。その結果、１または２のいずれのグルタチオン溶
液を用いた場合にも、MSC溶液およびグルタチオン溶液
それぞれのクロマトグラムに認められないピークは検出
されなかった。
性。質量１５２）を15mg/ml（100mM）となるようメタノ
ールに溶解した溶液0.1mlと、実施例１に記載のグルタ
チオン溶液1または２のいずれか1mlとを混合し、３７℃
で１時間保温した後、その20μlを実施例２に記載の条
件にてＬＣ−ＭＳに供した。ＬＣにて得られたクロマト
グラムを、上記のグルタチオン溶液およびMSC溶液のそ
れぞれを同様に分析して得られたクロマトグラムと比較
した。その結果、１または２のいずれのグルタチオン溶
液を用いた場合にも、MSC溶液およびグルタチオン溶液
それぞれのクロマトグラムに認められないピークは検出
されなかった。
【００２２】実施例９
フェノール（以下、PHと記す。皮膚感作性陰性。質量９
４）を9mg/ml（100mM）となるようメタノールに溶解し
た溶液0.1mlと、実施例１に記載のグルタチオン溶液1ま
たは２のいずれか1mlとを混合し、３７℃で１時間保温
した後、その20μlを実施例２に記載の条件にてＬＣ−
ＭＳに供した。ＬＣにて得られたクロマトグラムを、上
記のグルタチオン溶液およびPH溶液のそれぞれを同様に
分析して得られたクロマトグラムと比較した。その結
果、１または２のいずれのグルタチオン溶液を用いた場
合にも、PH溶液およびグルタチオン溶液それぞれのクロ
マトグラムに認められないピークは検出されなかった。
４）を9mg/ml（100mM）となるようメタノールに溶解し
た溶液0.1mlと、実施例１に記載のグルタチオン溶液1ま
たは２のいずれか1mlとを混合し、３７℃で１時間保温
した後、その20μlを実施例２に記載の条件にてＬＣ−
ＭＳに供した。ＬＣにて得られたクロマトグラムを、上
記のグルタチオン溶液およびPH溶液のそれぞれを同様に
分析して得られたクロマトグラムと比較した。その結
果、１または２のいずれのグルタチオン溶液を用いた場
合にも、PH溶液およびグルタチオン溶液それぞれのクロ
マトグラムに認められないピークは検出されなかった。
【００２３】実施例１０
エチルスルホニルベンゼン（以下、PVSと記す。皮膚感
作性陽性。質量１６８）を16mg/ml（100mM）となるよう
アセトンに溶解した溶液0.4mlと、グルタチオンを2mg/m
l（6.5mM）となるよう0.2M酢酸アンモニウムに溶解した
溶液2mlとを混合し、３７℃で１時間保温した後、凍結
乾燥した。凍結乾燥物をメタノールに溶解し、実施例１
に記載の条件にてＭＳに供した。その結果、試料中に
は、質量数４７５の化合物と質量数６４３の化合物が含
まれることが判明した。質量数４７５は、１分子のPVS
と１分子のグルタチオンが結合してなる化合物の質量と
一致する。また、質量数６４３は、2分子のPVSと１分子
のグルタチオンが結合してなる化合物の質量と一致す
る。
作性陽性。質量１６８）を16mg/ml（100mM）となるよう
アセトンに溶解した溶液0.4mlと、グルタチオンを2mg/m
l（6.5mM）となるよう0.2M酢酸アンモニウムに溶解した
溶液2mlとを混合し、３７℃で１時間保温した後、凍結
乾燥した。凍結乾燥物をメタノールに溶解し、実施例１
に記載の条件にてＭＳに供した。その結果、試料中に
は、質量数４７５の化合物と質量数６４３の化合物が含
まれることが判明した。質量数４７５は、１分子のPVS
と１分子のグルタチオンが結合してなる化合物の質量と
一致する。また、質量数６４３は、2分子のPVSと１分子
のグルタチオンが結合してなる化合物の質量と一致す
る。
【００２４】実施例１１
無水マレイン酸（以下、MAと記す。皮膚感作性陽性。質
量９８）を9.8mg/ml（100mM）となるようアセトンに溶
解した溶液0.4mlと、グルタチオンを2mg/ml（6.5mM）と
なるよう0.2M酢酸アンモニウムに溶解した溶液2mlとを
混合し、３７℃で１時間保温した後、凍結乾燥した。凍
結乾燥物をメタノールに溶解し、実施例１に記載の条件
にてＭＳに供した。その結果、試料中には、質量数４２
３の化合物と質量数５２１の化合物が含まれることが判
明した。質量数４２３は、１分子のMAと１分子のグルタ
チオンが結合してなる化合物のＮＨ4 +塩の質量と一致す
る。また、質量数５２１は、2分子のMAと１分子のグル
タチオンが結合してなる化合物のＮＨ4 +塩の質量と一致
する。
量９８）を9.8mg/ml（100mM）となるようアセトンに溶
解した溶液0.4mlと、グルタチオンを2mg/ml（6.5mM）と
なるよう0.2M酢酸アンモニウムに溶解した溶液2mlとを
混合し、３７℃で１時間保温した後、凍結乾燥した。凍
結乾燥物をメタノールに溶解し、実施例１に記載の条件
にてＭＳに供した。その結果、試料中には、質量数４２
３の化合物と質量数５２１の化合物が含まれることが判
明した。質量数４２３は、１分子のMAと１分子のグルタ
チオンが結合してなる化合物のＮＨ4 +塩の質量と一致す
る。また、質量数５２１は、2分子のMAと１分子のグル
タチオンが結合してなる化合物のＮＨ4 +塩の質量と一致
する。
【００２５】実施例１２
メチルメタンスルホネート（以下、ＭＭＳと記す。皮膚
感作性陽性。質量１１０）を10mg/ml（100mM）となるよ
うアセトンに溶解した溶液0.4mlと、グルタチオンを2mg
/ml（6.5mM）となるよう0.2M酢酸アンモニウムに溶解し
た溶液2mlとを混合し、３７℃で１時間保温した後、凍
結乾燥した。凍結乾燥物をメタノールに溶解し、実施例
１に記載の条件にてMSに供した。その結果、試料中に
は、質量数４９７の化合物が含まれることが判明した。
該質量数は、２分子のMMSからそれぞれメチル基が脱離
し、１分子のグルタチオンに結合してなる化合物の質量
と一致する。
感作性陽性。質量１１０）を10mg/ml（100mM）となるよ
うアセトンに溶解した溶液0.4mlと、グルタチオンを2mg
/ml（6.5mM）となるよう0.2M酢酸アンモニウムに溶解し
た溶液2mlとを混合し、３７℃で１時間保温した後、凍
結乾燥した。凍結乾燥物をメタノールに溶解し、実施例
１に記載の条件にてMSに供した。その結果、試料中に
は、質量数４９７の化合物が含まれることが判明した。
該質量数は、２分子のMMSからそれぞれメチル基が脱離
し、１分子のグルタチオンに結合してなる化合物の質量
と一致する。
【００２６】実施例１３
フルオレセインイソチオシアネート（以下、FITCと記
す。皮膚感作性陽性。質量数３８９）を40mg/ml（100m
M）となるようアセトンに溶解した溶液0.4mlと、グルタ
チオンを2mg/ml（6.5mM）となるよう0.2M酢酸アンモニ
ウムに溶解した溶液2mlとを混合し、３７℃で１時間保
温した後、凍結乾燥した。凍結乾燥物をメタノールに溶
解し、実施例１に記載の条件にてMSに供した。その結
果、試料中には、質量数６９６の化合物が含まれること
が判明した（図７）。該質量数は、FITCとグルタチオン
との結合物の質量と一致する。
す。皮膚感作性陽性。質量数３８９）を40mg/ml（100m
M）となるようアセトンに溶解した溶液0.4mlと、グルタ
チオンを2mg/ml（6.5mM）となるよう0.2M酢酸アンモニ
ウムに溶解した溶液2mlとを混合し、３７℃で１時間保
温した後、凍結乾燥した。凍結乾燥物をメタノールに溶
解し、実施例１に記載の条件にてMSに供した。その結
果、試料中には、質量数６９６の化合物が含まれること
が判明した（図７）。該質量数は、FITCとグルタチオン
との結合物の質量と一致する。
【００２７】
【発明の効果】医・農薬や化粧品等の開発初期段階にお
いて、多数の候補化合物のいずれが皮膚感作性を発現す
るかを、少量の被験化合物で、動物実験を実施すること
なく、迅速に、かつ簡便に検定することが可能となる。
いて、多数の候補化合物のいずれが皮膚感作性を発現す
るかを、少量の被験化合物で、動物実験を実施すること
なく、迅速に、かつ簡便に検定することが可能となる。
【図1】グルタチオン溶液２（ｐＨ８）の液体クロマト
グラムである。GSHはグルタチオンのピークを示す。
グラムである。GSHはグルタチオンのピークを示す。
【図２】トリニトロベンセンスルホン酸ナトリウム溶液
の液体クロマトグラムである。TNBSはトリニトロベンセ
ンスルホン酸ナトリウムのピークを示す。
の液体クロマトグラムである。TNBSはトリニトロベンセ
ンスルホン酸ナトリウムのピークを示す。
【図３】トリニトロベンセンスルホン酸ナトリウム溶液
とグルタチオン溶液２（ｐＨ８）を混合し反応させた溶
液の液体クロマトグラムである。GSHはグルタチオンの
ピークを示し、TNBSはトリニトロベンセンスルホン酸ナ
トリウムのピークを示す。TNBS・GSH反応物、TNBS・G
SH反応物は、グルタチオン溶液２（ｐＨ８）およびト
リニトロベンセンスルホン酸ナトリウム溶液それぞれの
液体クロマトグラムでは検出されなかったピークを示
す。
とグルタチオン溶液２（ｐＨ８）を混合し反応させた溶
液の液体クロマトグラムである。GSHはグルタチオンの
ピークを示し、TNBSはトリニトロベンセンスルホン酸ナ
トリウムのピークを示す。TNBS・GSH反応物、TNBS・G
SH反応物は、グルタチオン溶液２（ｐＨ８）およびト
リニトロベンセンスルホン酸ナトリウム溶液それぞれの
液体クロマトグラムでは検出されなかったピークを示
す。
【図４】TNBS・GSH反応物のESI-MSスペクトルであ
る。
る。
【図５】TNBS・GSH反応物のESI-MSスペクトルであ
る。
る。
【図６】フルオレセインイソチオシアネート（FITC）の
MALDI-MSスペクトルである。
MALDI-MSスペクトルである。
【図７】FITCとグルタチオンとの反応生成物のMALDI-MS
スペクトルである。
スペクトルである。
─────────────────────────────────────────────────────
フロントページの続き
(51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考）
Ｇ０１Ｎ 33/566 Ｇ０１Ｎ 33/566
// Ｇ０１Ｎ 33/50 33/50 Ｑ
(72)発明者 岡本 昌彦
大阪市此花区春日出中３丁目１番98号 住
友化学工業株式会社内
Ｆターム(参考） 2G045 AA40 CB09 DA77 FB02 FB03
4H045 AA30 BA12 EA50
Claims (3)
- 【請求項１】モノマーとしての分子量が５万以下のシス
テイン含有ペプチドと被験物質とを混合した後、前記ペ
プチドと被験物質との結合物の有無を測定することを特
徴とする被験物質の皮膚感作性の検定方法。 - 【請求項２】結合物の有無を質量分析計を用いて測定す
る請求項１に記載の方法。 - 【請求項３】ペプチドがグルタチオンである請求項１ま
たは２に記載の方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2001198634A JP4595257B2 (ja) | 2001-06-29 | 2001-06-29 | 皮膚感作性検定方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2001198634A JP4595257B2 (ja) | 2001-06-29 | 2001-06-29 | 皮膚感作性検定方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2003014761A true JP2003014761A (ja) | 2003-01-15 |
| JP4595257B2 JP4595257B2 (ja) | 2010-12-08 |
Family
ID=19036049
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2001198634A Expired - Fee Related JP4595257B2 (ja) | 2001-06-29 | 2001-06-29 | 皮膚感作性検定方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP4595257B2 (ja) |
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2009222466A (ja) * | 2008-03-14 | 2009-10-01 | Sumitomo Chemical Co Ltd | 蛍光システイン誘導体を用いる感作性検定方法及び蛍光システイン誘導体 |
| JP2011059102A (ja) * | 2009-08-13 | 2011-03-24 | Fujifilm Corp | 皮膚感作性測定試薬 |
| JP2012525131A (ja) * | 2009-04-30 | 2012-10-22 | イミュノサーチ | 試験化合物の感作性のインビトロ評価のためのポリペプチド |
| JP2018054579A (ja) * | 2016-09-30 | 2018-04-05 | 学校法人甲南学園 | 被験物質の皮膚感作性の評価方法、及び樹脂固定ペプチド |
| JPWO2021060477A1 (ja) * | 2019-09-26 | 2021-04-01 | ||
| WO2022085762A1 (ja) | 2020-10-22 | 2022-04-28 | 富士フイルム株式会社 | 皮膚感作性測定試薬、化合物、及び皮膚感作性の測定方法 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS63500396A (ja) * | 1985-02-11 | 1988-02-12 | ペツク，カ−ル シ−． | 皮膚物質採集装置 |
| JPH08504513A (ja) * | 1992-12-11 | 1996-05-14 | スダー パートナーズ | 汗中の化学種の測定法および測定器具 |
-
2001
- 2001-06-29 JP JP2001198634A patent/JP4595257B2/ja not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS63500396A (ja) * | 1985-02-11 | 1988-02-12 | ペツク，カ−ル シ−． | 皮膚物質採集装置 |
| JPH08504513A (ja) * | 1992-12-11 | 1996-05-14 | スダー パートナーズ | 汗中の化学種の測定法および測定器具 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| JPN6010018944, 絵柳玲子 他, "Ｓｕｌｆａｎｉｌａｍｉｄｅアレルギーの研究：３−Ｈｙｄｒｏｘｙｓｕｌｆａｎｉｌａｍｉｄｅの抗原性について", 皮膚, 1992, Ｖｏｌ．３４ Ｎｏ．Ｓｕｐｐｌ １３, ｐ．３７−４１ * |
Cited By (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2009222466A (ja) * | 2008-03-14 | 2009-10-01 | Sumitomo Chemical Co Ltd | 蛍光システイン誘導体を用いる感作性検定方法及び蛍光システイン誘導体 |
| JP2012525131A (ja) * | 2009-04-30 | 2012-10-22 | イミュノサーチ | 試験化合物の感作性のインビトロ評価のためのポリペプチド |
| JP2011059102A (ja) * | 2009-08-13 | 2011-03-24 | Fujifilm Corp | 皮膚感作性測定試薬 |
| JP2018054579A (ja) * | 2016-09-30 | 2018-04-05 | 学校法人甲南学園 | 被験物質の皮膚感作性の評価方法、及び樹脂固定ペプチド |
| JPWO2021060477A1 (ja) * | 2019-09-26 | 2021-04-01 | ||
| WO2021060477A1 (ja) | 2019-09-26 | 2021-04-01 | 富士フイルム株式会社 | 皮膚感作性測定試薬、皮膚感作性の測定方法、及び化合物 |
| JP7273173B2 (ja) | 2019-09-26 | 2023-05-12 | 富士フイルム株式会社 | 皮膚感作性測定試薬、皮膚感作性の測定方法、及び化合物 |
| WO2022085762A1 (ja) | 2020-10-22 | 2022-04-28 | 富士フイルム株式会社 | 皮膚感作性測定試薬、化合物、及び皮膚感作性の測定方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP4595257B2 (ja) | 2010-12-08 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Xiang et al. | N, N-dimethyl leucines as novel isobaric tandem mass tags for quantitative proteomics and peptidomics | |
| Huang et al. | Isotope labelling–paired homologous double neutral loss scan-mass spectrometry for profiling of metabolites with a carboxyl group | |
| WO2005116629A1 (ja) | アミノ官能性化合物の分析方法及び装置 | |
| EP2467350B1 (en) | Mass labels | |
| Guo et al. | To tag or not to tag: A comparative evaluation of immunoaffinity-labeling and tandem mass spectrometry for the identification and localization of posttranslational protein carbonylation by 4-hydroxy-2-nonenal, an end-product of lipid peroxidation | |
| Delobel et al. | Characterization of hydrophobic peptides by atmospheric pressure photoionization-mass spectrometry and tandem mass spectrometry | |
| Wen et al. | Screening and characterization of reactive metabolites using glutathione ethyl ester in combination with Q‐trap mass spectrometry | |
| Leng et al. | Direct infusion electrospray ionization–ion mobility–mass spectrometry for comparative profiling of fatty acids based on stable isotope labeling | |
| Chen et al. | Development of a hydrophilic interaction liquid chromatography coupled with matrix-assisted laser desorption/ionization-mass spectrometric imaging platform for N-glycan relative quantitation using stable-isotope labeled hydrazide reagents | |
| Ayciriex et al. | Development of a novel method for quantification of sterols and oxysterols by UPLC-ESI-HRMS: application to a neuroinflammation rat model | |
| Merdas et al. | On‐tissue chemical derivatization reagents for matrix‐assisted laser desorption/ionization mass spectrometry imaging | |
| JP4595257B2 (ja) | 皮膚感作性検定方法 | |
| Brancia et al. | Comprehensive analysis of glycated human serum albumin tryptic peptides by off‐line liquid chromatography followed by MALDI analysis on a time‐of‐flight/curved field reflectron tandem mass spectrometer | |
| US20120258886A1 (en) | Protected amine labels and use in detecting analytes | |
| Zheng et al. | Combination of β-elimination and liquid chromatography/quadrupole time-of-flight mass spectrometry for the determination of O-glycosylation sites | |
| Niwayama et al. | Synthesis of d-labeled N-alkylmaleimides and application to quantitative peptide analysis by isotope differential mass spectrometry | |
| Yang et al. | Fragmentation study and analysis of benzoylurea insecticides and their analogs by liquid chromatography–electrospray ionization-mass spectrometry | |
| Goto et al. | Bile acid acyl adenylate: a possible intermediate to produce a protein‐bound bile acid | |
| JP2007183208A (ja) | 感作性物質のインビトロ評価法 | |
| Lehmann et al. | Qualitative and quantitative analyses of bansyl derivatives of dopamine and some of its metabolites in urine samples by electron impact and field desorption mass spectrometry | |
| Keski-Hynnilä et al. | Analysis of catechol-type glucuronides in urine samples by liquid chromatography–electrospray ionization-tandem mass spectrometry | |
| Ilyushenkova et al. | Derivatization to increase the detectability of small peptides in blood serum in the analysis by ESI and MALDI high resolution mass spectrometric methods | |
| Keski-Hynnilä et al. | Mass spectrometric and tandem mass spectrometric behavior of nitrocatechol glucuronides: a comparison of atmospheric pressure chemical ionization and electrospray ionization | |
| Deng et al. | Covalent protein binding and tissue distribution of houttuynin in rats after intravenous administration of sodium houttuyfonate | |
| JP2008139275A (ja) | 皮膚感作性検定方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| RD05 | Notification of revocation of power of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7425 Effective date: 20080128 |
|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20080414 |
|
| A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20100401 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20100413 |
|
| A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20100611 |
|
| TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20100824 |
|
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 |
|
| A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20100906 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20131001 Year of fee payment: 3 |
|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |