JP2003002846A - 腫瘍治療剤 - Google Patents
腫瘍治療剤Info
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 新たな腫瘍治療剤を提供することを目的とす
る。 【解決手段】 β−１，４−ガラクトース転移酵素ＩＩ
（β−１，４−ＧａｌＴＩＩ）をコードする遺伝子を含
む発現ベクターおよびβ−１，４−ＧａｌＴＶのアンチ
センス遺伝子を含む発現ベクターは、腫瘍の形成および
転移を抑制し、腫瘍治療剤として極めて有効である。
る。 【解決手段】 β−１，４−ガラクトース転移酵素ＩＩ
（β−１，４−ＧａｌＴＩＩ）をコードする遺伝子を含
む発現ベクターおよびβ−１，４−ＧａｌＴＶのアンチ
センス遺伝子を含む発現ベクターは、腫瘍の形成および
転移を抑制し、腫瘍治療剤として極めて有効である。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、β−１，４−ガラ
クトース転移酵素ＩＩ（β−１，４−ＧａｌＴＩＩ）遺
伝子またはβ−１，４−ガラクトース転移酵素Ｖ（β−
１，４−ＧａｌＴ Ｖ）アンチセンス遺伝子を有効成分
とする腫瘍治療剤に関する。更に詳細には、糖蛋白質の
複合型糖鎖にみられるＧａｌβ１→４ＧｌｃＮＡｃβ１
→構造の生合成に関与する酵素であるβ−１，４−Ｇａ
ｌＴ ＩＩをコードする遺伝子またはβ−１，４−Ｇａ
ｌＴ Ｖのアンチセンス遺伝子を有効成分とするメラノ
ーマ等の腫瘍の遺伝子治療剤に関する。
クトース転移酵素ＩＩ（β−１，４−ＧａｌＴＩＩ）遺
伝子またはβ−１，４−ガラクトース転移酵素Ｖ（β−
１，４−ＧａｌＴ Ｖ）アンチセンス遺伝子を有効成分
とする腫瘍治療剤に関する。更に詳細には、糖蛋白質の
複合型糖鎖にみられるＧａｌβ１→４ＧｌｃＮＡｃβ１
→構造の生合成に関与する酵素であるβ−１，４−Ｇａ
ｌＴ ＩＩをコードする遺伝子またはβ−１，４−Ｇａ
ｌＴ Ｖのアンチセンス遺伝子を有効成分とするメラノ
ーマ等の腫瘍の遺伝子治療剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】近年、腫瘍治療に関して外来遺伝子を細
胞に導入して腫瘍を治療する遺伝子治療が注目されてい
る。腫瘍に対する遺伝子治療としては、癌遺伝子の働き
を抑制するか、もしくは失活した癌抑制遺伝子を活性化
する、癌遺伝子もしくは癌抑制遺伝子を標的とした遺伝
子治療、サイトカイン遺伝子などを細胞に導入してヒト
が本来有する免疫機能を高めて腫瘍を治療する免疫遺伝
子治療などがある。癌遺伝子を標的とした遺伝子治療に
は、標的ｍＲＮＡに相補的な塩基配列を持つアンチセン
ス遺伝子により標的遺伝子の発現を抑制する方法や、標
的ｍＲＮＡに対して切断活性を有するリボザイムを用い
る方法がある。一方、最近になって糖蛋白質の糖鎖構造
解析技術の進歩に伴い、腫瘍細胞には正常細胞が産生す
る糖蛋白質には認められない糖鎖構造が検出されること
が明らかになってきた。腫瘍細胞では、Ｇａｌβ１→４
ＧｌｃＮＡｃβ１→構造を有する複合型糖鎖を持つ糖蛋
白質が発現されることが知られている。このＧａｌβ１
→４ＧｌｃＮＡｃβ１→構造は、Ｎ−アセチルグルコサ
ミン転移酵素（ＧｌｃＮＡｃＴ）−Ｉ、ＩＩ、ＩＶ、Ｖ
が順に働いて糖鎖の分岐側鎖が作られ、それにβ−１，
４−ＧａｌＴによりガラクトースが転移されて作られ
る。また、β−１，４−ＧａｌＴには、β−１，４−Ｇ
ａｌＴ−Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、ＶおよびＶＩの６種
類のサブタイプが存在することが明らかにされている
（古川清：蛋白質 核酸 酵素、Vol.43, No.16, 45-5
3, 1998)。最近、マウスＮＩＨ３Ｔ３細胞とその悪性形
質転換細胞を用いたβ−１，４−ガラクトース転移酵素
（β−１，４−ＧａｌＴ）群の遺伝子解析により、細胞
の癌化に伴い、β−１，４−ＧａｌＴ ＩＩ遺伝子の発
現は約１／５に減少し、β−１，４−ＧａｌＴ Ｖ遺伝
子の発現は約３倍に増大することが明らかになった（K.
Furukawa et al., Biochem. Biophys. Res. Commun. 26
5, 434-438, 1999)。また、種々のヒト癌細胞を用いた
解析により、β−１，４−ＧａｌＴ Ｖ遺伝子の発現量
は、癌化に関与しているＧｌｃＮＡｃＴ Ｖの遺伝子発
現と相関していることも判明した（K.Furukawa et al.,
Biochem. Biophys. Res. Commun. 276, 1019-1023, 20
00)。
胞に導入して腫瘍を治療する遺伝子治療が注目されてい
る。腫瘍に対する遺伝子治療としては、癌遺伝子の働き
を抑制するか、もしくは失活した癌抑制遺伝子を活性化
する、癌遺伝子もしくは癌抑制遺伝子を標的とした遺伝
子治療、サイトカイン遺伝子などを細胞に導入してヒト
が本来有する免疫機能を高めて腫瘍を治療する免疫遺伝
子治療などがある。癌遺伝子を標的とした遺伝子治療に
は、標的ｍＲＮＡに相補的な塩基配列を持つアンチセン
ス遺伝子により標的遺伝子の発現を抑制する方法や、標
的ｍＲＮＡに対して切断活性を有するリボザイムを用い
る方法がある。一方、最近になって糖蛋白質の糖鎖構造
解析技術の進歩に伴い、腫瘍細胞には正常細胞が産生す
る糖蛋白質には認められない糖鎖構造が検出されること
が明らかになってきた。腫瘍細胞では、Ｇａｌβ１→４
ＧｌｃＮＡｃβ１→構造を有する複合型糖鎖を持つ糖蛋
白質が発現されることが知られている。このＧａｌβ１
→４ＧｌｃＮＡｃβ１→構造は、Ｎ−アセチルグルコサ
ミン転移酵素（ＧｌｃＮＡｃＴ）−Ｉ、ＩＩ、ＩＶ、Ｖ
が順に働いて糖鎖の分岐側鎖が作られ、それにβ−１，
４−ＧａｌＴによりガラクトースが転移されて作られ
る。また、β−１，４−ＧａｌＴには、β−１，４−Ｇ
ａｌＴ−Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、ＶおよびＶＩの６種
類のサブタイプが存在することが明らかにされている
（古川清：蛋白質 核酸 酵素、Vol.43, No.16, 45-5
3, 1998)。最近、マウスＮＩＨ３Ｔ３細胞とその悪性形
質転換細胞を用いたβ−１，４−ガラクトース転移酵素
（β−１，４−ＧａｌＴ）群の遺伝子解析により、細胞
の癌化に伴い、β−１，４−ＧａｌＴ ＩＩ遺伝子の発
現は約１／５に減少し、β−１，４−ＧａｌＴ Ｖ遺伝
子の発現は約３倍に増大することが明らかになった（K.
Furukawa et al., Biochem. Biophys. Res. Commun. 26
5, 434-438, 1999)。また、種々のヒト癌細胞を用いた
解析により、β−１，４−ＧａｌＴ Ｖ遺伝子の発現量
は、癌化に関与しているＧｌｃＮＡｃＴ Ｖの遺伝子発
現と相関していることも判明した（K.Furukawa et al.,
Biochem. Biophys. Res. Commun. 276, 1019-1023, 20
00)。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】しかしながら、細胞の
癌化でその発現量が減少するβ−１，４−ＧａｌＴ Ｉ
Ｉ遺伝子あるいは発現量が増大するβ−１，４−Ｇａｌ
Ｔ Ｖ遺伝子を利用した腫瘍の遺伝子治療については従
来全く検討されていない。従って、本発明の目的は、β
−１，４−ＧａｌＴ ＩＩ遺伝子あるいはβ−１，４−
ＧａｌＴ Ｖアンチセンス遺伝子を利用した腫瘍治療剤
を提供することにある。
癌化でその発現量が減少するβ−１，４−ＧａｌＴ Ｉ
Ｉ遺伝子あるいは発現量が増大するβ−１，４−Ｇａｌ
Ｔ Ｖ遺伝子を利用した腫瘍の遺伝子治療については従
来全く検討されていない。従って、本発明の目的は、β
−１，４−ＧａｌＴ ＩＩ遺伝子あるいはβ−１，４−
ＧａｌＴ Ｖアンチセンス遺伝子を利用した腫瘍治療剤
を提供することにある。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明者は、β−１，４
−ＧａｌＴ ＩＩをコードする遺伝子あるいはβ−１，
４−ＧａｌＴ Ｖのアンチセンス遺伝子をマウスメラノ
ーマに導入し、マウスに移植したところ、腫瘍塊形成が
著しく抑制されることを見出した。従って、β−１，４
−ＧａｌＴ ＩＩ遺伝子またはβ−１，４−ＧａｌＴ
Ｖアンチセンス遺伝子が腫瘍の治療に有効であることを
明らかにし、本発明を完成させた。即ち、本発明は、β
−１，４−ガラクトース転移酵素ＩＩ（β−１，４−Ｇ
ａｌＴ ＩＩ）遺伝子またはβ−１，４−ガラクトース
転移酵素Ｖ（β−１，４−ＧａｌＴ Ｖ）アンチセンス
遺伝子を有効成分とする腫瘍治療剤である。
−ＧａｌＴ ＩＩをコードする遺伝子あるいはβ−１，
４−ＧａｌＴ Ｖのアンチセンス遺伝子をマウスメラノ
ーマに導入し、マウスに移植したところ、腫瘍塊形成が
著しく抑制されることを見出した。従って、β−１，４
−ＧａｌＴ ＩＩ遺伝子またはβ−１，４−ＧａｌＴ
Ｖアンチセンス遺伝子が腫瘍の治療に有効であることを
明らかにし、本発明を完成させた。即ち、本発明は、β
−１，４−ガラクトース転移酵素ＩＩ（β−１，４−Ｇ
ａｌＴ ＩＩ）遺伝子またはβ−１，４−ガラクトース
転移酵素Ｖ（β−１，４−ＧａｌＴ Ｖ）アンチセンス
遺伝子を有効成分とする腫瘍治療剤である。
【０００５】
【発明の実施の形態】本発明の腫瘍治療剤の有効成分と
して用いるβ−１，４−ＧａｌＴ ＩＩ遺伝子とは、β
−１，４−ＧａｌＴ ＩＩを発現可能な遺伝子を指す。
具体的には、β−１，４−ＧａｌＴ ＩＩをコードする
遺伝子を含む発現ベクターの形態にある遺伝子が挙げら
れる。β−１，４−ＧａｌＴ ＩＩをコードする遺伝子
は、既に公知であり、Sato, T., DDBJ/GenBank/EMBL da
tabase (accession number AB024434); Almedia, R. et
al., J. Biol. Chem., 272, 31979-31991, (1997)；L
o, N-W. et al., Glycobiology, 8, 517-526 (1998)な
どに報告されている。具体的には、配列表の配列番号１
に示す１番目〜１，１１６番目までの塩基配列を有する
ＤＮＡである。このＤＮＡ以外にも、このＤＮＡとスト
リンジェントな条件下でハイブリダイズするＤＮＡであ
ってβ−１，４−ＧａｌＴ ＩＩと同様の酵素活性を有
する蛋白質をコードするＤＮＡや、配列番号１に示す１
番目〜１，１１６番目までの塩基配列を有するＤＮＡに
よりコードされる蛋白質のアミノ酸配列に対して１若し
くは複数（好ましくは数個）のアミノ酸残基が置換、欠
失及び／又は付加されたアミノ酸配列からなる蛋白質を
コードするＤＮＡであってβ−１，４−ＧａｌＴ ＩＩ
と同様の酵素活性を有する蛋白質をコードする変異体で
あってもよい。これらのＤＮＡは、前記文献に記載され
ている配列情報、GenBank等の配列情報等に基づき適当
なＤＮＡ部分をＰＣＲのプライマーとして用い、β−
１，４−ＧａｌＴ ＩＩのｍＲＮＡに対してＲＴ−ＰＣ
Ｒ反応を行うことなどにより、クローニングすることが
できる。また、アミノ酸配列情報に基づき化学的に合成
することも可能である。また上記したＤＮＡの変異体
は、例えば部位特異的突然変異誘発法、ＰＣＲ法、又は
通常のハイブリダイゼーション法などにより容易に得る
ことができる。
して用いるβ−１，４−ＧａｌＴ ＩＩ遺伝子とは、β
−１，４−ＧａｌＴ ＩＩを発現可能な遺伝子を指す。
具体的には、β−１，４−ＧａｌＴ ＩＩをコードする
遺伝子を含む発現ベクターの形態にある遺伝子が挙げら
れる。β−１，４−ＧａｌＴ ＩＩをコードする遺伝子
は、既に公知であり、Sato, T., DDBJ/GenBank/EMBL da
tabase (accession number AB024434); Almedia, R. et
al., J. Biol. Chem., 272, 31979-31991, (1997)；L
o, N-W. et al., Glycobiology, 8, 517-526 (1998)な
どに報告されている。具体的には、配列表の配列番号１
に示す１番目〜１，１１６番目までの塩基配列を有する
ＤＮＡである。このＤＮＡ以外にも、このＤＮＡとスト
リンジェントな条件下でハイブリダイズするＤＮＡであ
ってβ−１，４−ＧａｌＴ ＩＩと同様の酵素活性を有
する蛋白質をコードするＤＮＡや、配列番号１に示す１
番目〜１，１１６番目までの塩基配列を有するＤＮＡに
よりコードされる蛋白質のアミノ酸配列に対して１若し
くは複数（好ましくは数個）のアミノ酸残基が置換、欠
失及び／又は付加されたアミノ酸配列からなる蛋白質を
コードするＤＮＡであってβ−１，４−ＧａｌＴ ＩＩ
と同様の酵素活性を有する蛋白質をコードする変異体で
あってもよい。これらのＤＮＡは、前記文献に記載され
ている配列情報、GenBank等の配列情報等に基づき適当
なＤＮＡ部分をＰＣＲのプライマーとして用い、β−
１，４−ＧａｌＴ ＩＩのｍＲＮＡに対してＲＴ−ＰＣ
Ｒ反応を行うことなどにより、クローニングすることが
できる。また、アミノ酸配列情報に基づき化学的に合成
することも可能である。また上記したＤＮＡの変異体
は、例えば部位特異的突然変異誘発法、ＰＣＲ法、又は
通常のハイブリダイゼーション法などにより容易に得る
ことができる。
【０００６】本発明の腫瘍治療剤の有効成分として、β
−１，４−ＧａｌＴ ＩＩ遺伝子を用いる場合には、具
体的には、通常、β−１，４−ＧａｌＴ ＩＩをコード
する遺伝子を含む発現ベクターの形態で用いられる。発
現ベクターとしては、非ウイルスベクターを用いた場合
と、ウイルスベクターを用いた場合の二つに大別され
る。非ウイルスベクターとしては、生体内でβ−１，４
−ＧａｌＴ ＩＩをコードする遺伝子を発現させ分泌さ
せることのできるベクターであれば如何なる発現ベクタ
ーであっても良く、例えばｐＣＡＧＧＳ（Gene 108,193
-200(1991)）や、ｐｃＤＮＡ３．１、ｐＢＫ−ＣＭＶ、
ｐＺｅｏＳＶ（インビトロゲン社、ストラタジーン社）
などの発現ベクターが挙げられる。ウイルスベクターと
しては、組換えアデノウイルス、レトロウイルス等のウ
イルスベクターが代表的なものである。より具体的に
は、例えば、無毒化したレトロウイルス、アデノウイル
ス、アデノ随伴ウイルス、ヘルペスウイルス、ワクシニ
アウイルス、ポックスウイルス、ポリオウイルス、シン
ビスウイルス、センダイウイルス、ＳＶ４０、免疫不全
症ウイルス（ＨＩＶ）等のＤＮＡウイルスまたはＲＮＡ
ウイルスが挙げられる。これらのベクターに、β−１，
４−ＧａｌＴ ＩＩをコードする遺伝子を発現可能なよ
うに導入にすることにより、発現ベクターが構築でき
る。
−１，４−ＧａｌＴ ＩＩ遺伝子を用いる場合には、具
体的には、通常、β−１，４−ＧａｌＴ ＩＩをコード
する遺伝子を含む発現ベクターの形態で用いられる。発
現ベクターとしては、非ウイルスベクターを用いた場合
と、ウイルスベクターを用いた場合の二つに大別され
る。非ウイルスベクターとしては、生体内でβ−１，４
−ＧａｌＴ ＩＩをコードする遺伝子を発現させ分泌さ
せることのできるベクターであれば如何なる発現ベクタ
ーであっても良く、例えばｐＣＡＧＧＳ（Gene 108,193
-200(1991)）や、ｐｃＤＮＡ３．１、ｐＢＫ−ＣＭＶ、
ｐＺｅｏＳＶ（インビトロゲン社、ストラタジーン社）
などの発現ベクターが挙げられる。ウイルスベクターと
しては、組換えアデノウイルス、レトロウイルス等のウ
イルスベクターが代表的なものである。より具体的に
は、例えば、無毒化したレトロウイルス、アデノウイル
ス、アデノ随伴ウイルス、ヘルペスウイルス、ワクシニ
アウイルス、ポックスウイルス、ポリオウイルス、シン
ビスウイルス、センダイウイルス、ＳＶ４０、免疫不全
症ウイルス（ＨＩＶ）等のＤＮＡウイルスまたはＲＮＡ
ウイルスが挙げられる。これらのベクターに、β−１，
４−ＧａｌＴ ＩＩをコードする遺伝子を発現可能なよ
うに導入にすることにより、発現ベクターが構築でき
る。
【０００７】これらの発現ベクターは、生体内への導入
法にもよるが、通常、注射剤の形態としてヒトに投与さ
れる。なお、ウイルスベクターの場合にはそのままの形
態で投与することもできる。注射剤は常法により調製す
ることができ、例えば適切な溶剤（ＰＢＳ等の緩衝液、
生理食塩水、滅菌水等）に溶解した後、必要に応じてフ
ィルター等で濾過滅菌し、次いで無菌的な容器に充填す
ることにより調製することができる。注射剤には必要に
応じて慣用の担体等を加えても良い。また、リポソーム
製剤の形態とすることもできる。
法にもよるが、通常、注射剤の形態としてヒトに投与さ
れる。なお、ウイルスベクターの場合にはそのままの形
態で投与することもできる。注射剤は常法により調製す
ることができ、例えば適切な溶剤（ＰＢＳ等の緩衝液、
生理食塩水、滅菌水等）に溶解した後、必要に応じてフ
ィルター等で濾過滅菌し、次いで無菌的な容器に充填す
ることにより調製することができる。注射剤には必要に
応じて慣用の担体等を加えても良い。また、リポソーム
製剤の形態とすることもできる。
【０００８】かくして得られる発現ベクターを有効成分
とする腫瘍治療剤は、通常の方法によって投与すること
ができる。このような投与方法としては、細胞への遺伝
子導入による方法がある。具体的には、リポフェクショ
ン法、リン酸−カルシウム共沈法、ＤＥＡＥ−デキスト
ラン法、エレクトロポレーション法、微小ガラス管を用
いたＤＮＡの直接注入法などが挙げられる。また、組織
への遺伝子導入による方法もある。このような方法とし
ては、内包型リポソーム（internal type liposome）に
よる遺伝子導入法、静電気型リポソーム（electrostati
c type liposome）による遺伝子導入法、ＨＶＪ−リポ
ソーム法、改良型ＨＶＪ−リポソーム法（HVJ-AVEリポ
ソーム法）、レセプター介在性遺伝子導入法、パーティ
クル銃で担体（金属粒子）とともにＤＮＡ分子を細胞に
移入する方法、ｉｎ ｖｉｖｏエレクトロポレーション
法などが挙げられる。また、非ウイルスベクターである
発現プラスミドを生理食塩水に溶解してそのまま投与す
る、いわゆるｎａｋｅｄ−ＤＮＡの直接導入法、正電荷
ポリマーによる導入法等の方法を採用することもでき
る。本発明の腫瘍治療剤がウイルスベクターである場合
には、そのまま投与することもでき、また、上記した注
射剤の形態にして投与することもできる。
とする腫瘍治療剤は、通常の方法によって投与すること
ができる。このような投与方法としては、細胞への遺伝
子導入による方法がある。具体的には、リポフェクショ
ン法、リン酸−カルシウム共沈法、ＤＥＡＥ−デキスト
ラン法、エレクトロポレーション法、微小ガラス管を用
いたＤＮＡの直接注入法などが挙げられる。また、組織
への遺伝子導入による方法もある。このような方法とし
ては、内包型リポソーム（internal type liposome）に
よる遺伝子導入法、静電気型リポソーム（electrostati
c type liposome）による遺伝子導入法、ＨＶＪ−リポ
ソーム法、改良型ＨＶＪ−リポソーム法（HVJ-AVEリポ
ソーム法）、レセプター介在性遺伝子導入法、パーティ
クル銃で担体（金属粒子）とともにＤＮＡ分子を細胞に
移入する方法、ｉｎ ｖｉｖｏエレクトロポレーション
法などが挙げられる。また、非ウイルスベクターである
発現プラスミドを生理食塩水に溶解してそのまま投与す
る、いわゆるｎａｋｅｄ−ＤＮＡの直接導入法、正電荷
ポリマーによる導入法等の方法を採用することもでき
る。本発明の腫瘍治療剤がウイルスベクターである場合
には、そのまま投与することもでき、また、上記した注
射剤の形態にして投与することもできる。
【０００９】本発明の有効成分であるβ−１，４−Ｇａ
ｌＴ ＩＩをコードする遺伝子を含む発現ベクターは、
通常ヒトの皮膚、筋肉、腹腔等に投与される。投与量と
しては、発現ベクターの種類、投与形態、投与方法、対
象患者、疾患の種類などにより変動しうるが、通常、発
現ベクターとして、約０．１ｍｇ〜約１，０００ｍｇ、
好ましくは約１ｍｇ〜約１００ｍｇであり、通常１日１
回、合計２〜３回投与するのが好ましい。
ｌＴ ＩＩをコードする遺伝子を含む発現ベクターは、
通常ヒトの皮膚、筋肉、腹腔等に投与される。投与量と
しては、発現ベクターの種類、投与形態、投与方法、対
象患者、疾患の種類などにより変動しうるが、通常、発
現ベクターとして、約０．１ｍｇ〜約１，０００ｍｇ、
好ましくは約１ｍｇ〜約１００ｍｇであり、通常１日１
回、合計２〜３回投与するのが好ましい。
【００１０】本発明の腫瘍治療剤の有効成分として、β
−１，４−ＧａｌＴ Ｖアンチセンス遺伝子を用いる場
合には、アンチセンス遺伝子としては、β−１，４−Ｇ
ａｌＴ Ｖ遺伝子のｍＲＮＡと相補性を有しβ−１，４
−ＧａｌＴ Ｖの発現を阻害するＲＮＡを転写し得るＤ
ＮＡ、またはβ−１，４−ＧａｌＴ Ｖ遺伝子のｍＲＮ
Ａと相補性を有しβ−１，４−ＧａｌＴ Ｖの発現を阻
害するＲＮＡもしくはその改変体が挙げられる。具体的
には、β−１，４−ＧａｌＴ Ｖ遺伝子のｍＲＮＡと相
補性を有しβ−１，４−ＧａｌＴ Ｖの発現を阻害する
ＲＮＡを転写し得るＤＮＡとして、配列表の配列番号２
に示す１番目〜１，１６４番目までの塩基配列と逆向き
の塩基配列を有するＤＮＡが挙げられる。このＤＮＡ
に、その機能を阻害しない範囲で他のＤＮＡ配列が付加
されていてもよい。また、このＤＮＡの部分配列であっ
てもよい。部分配列としては、配列番号２に示す塩基配
列中の、少なくとも１５塩基以上、好ましくは１００塩
基以上、より好ましくは５００塩基以上の連続した塩基
配列の逆向きの塩基配列からなるＤＮＡが挙げられる。
更には、このＤＮＡまたはその部分配列の変異体であっ
てβ−１，４−ＧａｌＴ Ｖの発現を阻害するＲＮＡを
転写し得るＤＮＡであってもよい。このような変異体と
しては、β−１，４−ＧａｌＴ Ｖ遺伝子のｍＲＮＡと
ハイブリダイズするＤＮＡが挙げられる。
−１，４−ＧａｌＴ Ｖアンチセンス遺伝子を用いる場
合には、アンチセンス遺伝子としては、β−１，４−Ｇ
ａｌＴ Ｖ遺伝子のｍＲＮＡと相補性を有しβ−１，４
−ＧａｌＴ Ｖの発現を阻害するＲＮＡを転写し得るＤ
ＮＡ、またはβ−１，４−ＧａｌＴ Ｖ遺伝子のｍＲＮ
Ａと相補性を有しβ−１，４−ＧａｌＴ Ｖの発現を阻
害するＲＮＡもしくはその改変体が挙げられる。具体的
には、β−１，４−ＧａｌＴ Ｖ遺伝子のｍＲＮＡと相
補性を有しβ−１，４−ＧａｌＴ Ｖの発現を阻害する
ＲＮＡを転写し得るＤＮＡとして、配列表の配列番号２
に示す１番目〜１，１６４番目までの塩基配列と逆向き
の塩基配列を有するＤＮＡが挙げられる。このＤＮＡ
に、その機能を阻害しない範囲で他のＤＮＡ配列が付加
されていてもよい。また、このＤＮＡの部分配列であっ
てもよい。部分配列としては、配列番号２に示す塩基配
列中の、少なくとも１５塩基以上、好ましくは１００塩
基以上、より好ましくは５００塩基以上の連続した塩基
配列の逆向きの塩基配列からなるＤＮＡが挙げられる。
更には、このＤＮＡまたはその部分配列の変異体であっ
てβ−１，４−ＧａｌＴ Ｖの発現を阻害するＲＮＡを
転写し得るＤＮＡであってもよい。このような変異体と
しては、β−１，４−ＧａｌＴ Ｖ遺伝子のｍＲＮＡと
ハイブリダイズするＤＮＡが挙げられる。
【００１１】本発明の腫瘍治療剤の有効成分であるアン
チセンス遺伝子として、β−１，４−ＧａｌＴ Ｖ遺伝
子のｍＲＮＡと相補性を有しβ−１，４−ＧａｌＴ Ｖ
の発現を阻害するＲＮＡもしくはその改変体を用いる場
合、具体的には、配列表の配列番号２に示す１番目〜
１，１６４番目までの塩基配列の逆向きの塩基配列を有
するＤＮＡに対応するＲＮＡ、その部分配列、それらの
改変体が挙げられる。部分配列としては、少なくとも２
０塩基以上、好ましくは５０塩基以上の連続した塩基配
列からなるＲＮＡが挙げられる。改変体としては、これ
らのＲＮＡの塩基配列を変えずに、その構成ヌクレオシ
ドをホスホロチオエステル、ホスホロジチオエステル、
ホスホトリエステル結合等により結合させたもの、ある
いは構成ヌクレオシドの糖部分をアミノエチルグリシン
などに置換したペプチド核酸などが挙げられる（米国特
許第6031086、6107094、6225293、6204326、6187586、B
rettP. Monia et al., Nature Medicine, Vol.2, No.6,
June 1996, 668-675; Peter J.O'Dwyer et al., Clini
cal Cancer Research,Vol.5, 3977-3982, December199
9）。
チセンス遺伝子として、β−１，４−ＧａｌＴ Ｖ遺伝
子のｍＲＮＡと相補性を有しβ−１，４−ＧａｌＴ Ｖ
の発現を阻害するＲＮＡもしくはその改変体を用いる場
合、具体的には、配列表の配列番号２に示す１番目〜
１，１６４番目までの塩基配列の逆向きの塩基配列を有
するＤＮＡに対応するＲＮＡ、その部分配列、それらの
改変体が挙げられる。部分配列としては、少なくとも２
０塩基以上、好ましくは５０塩基以上の連続した塩基配
列からなるＲＮＡが挙げられる。改変体としては、これ
らのＲＮＡの塩基配列を変えずに、その構成ヌクレオシ
ドをホスホロチオエステル、ホスホロジチオエステル、
ホスホトリエステル結合等により結合させたもの、ある
いは構成ヌクレオシドの糖部分をアミノエチルグリシン
などに置換したペプチド核酸などが挙げられる（米国特
許第6031086、6107094、6225293、6204326、6187586、B
rettP. Monia et al., Nature Medicine, Vol.2, No.6,
June 1996, 668-675; Peter J.O'Dwyer et al., Clini
cal Cancer Research,Vol.5, 3977-3982, December199
9）。
【００１２】上記したアンチセンス遺伝子であるこれら
のＤＮＡ配列あるいはＲＮＡ配列は、Sato, T., et a
l., Pro. Natl. Acad. Sci. USA 95, 472-477 (1998);
Lo, N-W. et al., Glycobiology, 8, 517-526 (1998)な
どに報告されているβ−１，４−ＧａｌＴ Ｖ遺伝子の
配列情報、GenBank等の配列情報等に基づき、前記した
ＰＣＲ法、化学的合成法、部位特異的突然変異誘発法、
ＰＣＲ法、ハイブリダイゼーション法などにより容易に
得ることができる。
のＤＮＡ配列あるいはＲＮＡ配列は、Sato, T., et a
l., Pro. Natl. Acad. Sci. USA 95, 472-477 (1998);
Lo, N-W. et al., Glycobiology, 8, 517-526 (1998)な
どに報告されているβ−１，４−ＧａｌＴ Ｖ遺伝子の
配列情報、GenBank等の配列情報等に基づき、前記した
ＰＣＲ法、化学的合成法、部位特異的突然変異誘発法、
ＰＣＲ法、ハイブリダイゼーション法などにより容易に
得ることができる。
【００１３】アンチセンス遺伝子として上記したＤＮＡ
を、本発明の腫瘍治療剤の有効成分として用いる場合に
は、通常、これらのＤＮＡを含む発現ベクターの形態で
用いられる。発現ベクターとしては、前記したと同様の
ウイルスベクター、非ウイルスベクターを同様の方法で
用いることができる。また、同様の方法により投与する
ことができる。投与量としては、発現ベクターの種類、
投与形態、投与方法、対象患者、疾患の種類などにより
変動しうるが、通常、発現ベクターとして、約０．１ｍ
ｇ〜約１，０００ｍｇ、好ましくは約１ｍｇ〜約１００
ｍｇであり、通常１日１回、合計２〜３回投与するのが
好ましい。アンチセンス遺伝子として上記したＲＮＡま
たはその改変体を、本発明の腫瘍治療剤の有効成分とし
て用いる場合には、それらそのものを、通常の注射剤の
形態にして、静脈内、皮下、腫瘍組織内等に投与するこ
とができる。投与量としては、剤形の種類、投与形態、
投与方法、対象患者、疾患の種類などにより変動しうる
が、通常、約０．１ｍｇ〜約１，０００ｍｇ、好ましく
は約１ｍｇ〜約５００ｍｇであり、通常１日１回、合計
２〜３回投与するのが好ましい。
を、本発明の腫瘍治療剤の有効成分として用いる場合に
は、通常、これらのＤＮＡを含む発現ベクターの形態で
用いられる。発現ベクターとしては、前記したと同様の
ウイルスベクター、非ウイルスベクターを同様の方法で
用いることができる。また、同様の方法により投与する
ことができる。投与量としては、発現ベクターの種類、
投与形態、投与方法、対象患者、疾患の種類などにより
変動しうるが、通常、発現ベクターとして、約０．１ｍ
ｇ〜約１，０００ｍｇ、好ましくは約１ｍｇ〜約１００
ｍｇであり、通常１日１回、合計２〜３回投与するのが
好ましい。アンチセンス遺伝子として上記したＲＮＡま
たはその改変体を、本発明の腫瘍治療剤の有効成分とし
て用いる場合には、それらそのものを、通常の注射剤の
形態にして、静脈内、皮下、腫瘍組織内等に投与するこ
とができる。投与量としては、剤形の種類、投与形態、
投与方法、対象患者、疾患の種類などにより変動しうる
が、通常、約０．１ｍｇ〜約１，０００ｍｇ、好ましく
は約１ｍｇ〜約５００ｍｇであり、通常１日１回、合計
２〜３回投与するのが好ましい。
【００１４】本発明の腫瘍治療剤は、あらゆる種類の腫
瘍の治療に有効であり、特にメラノーマ、肺癌、大腸
癌、子宮癌、リンフォーマ、肝臓癌、胃癌などの腫瘍の
治療に適している。また、本発明の腫瘍治療剤の有効成
分として、β−１，４−ＧａｌＴ ＩＩ遺伝子を用いた
場合には、特に腫瘍の転移抑制にも有効である。
瘍の治療に有効であり、特にメラノーマ、肺癌、大腸
癌、子宮癌、リンフォーマ、肝臓癌、胃癌などの腫瘍の
治療に適している。また、本発明の腫瘍治療剤の有効成
分として、β−１，４−ＧａｌＴ ＩＩ遺伝子を用いた
場合には、特に腫瘍の転移抑制にも有効である。
【００１５】
【実施例】以下、実施例により本発明を具体的に説明す
るが、本発明はこれらの実施例によりなんら限定される
ものではない。 実施例１β−１，４−ＧａｌＴ ＩＩをコードする遺伝子を含む
発現ベクターおよびβ−１，４−ＧａｌＴ Ｖアンチセ
ンス遺伝子を含む発現ベクターの構築 配列表の配列番号１に示す１〜１，１１６番目の塩基配
列を有するヒトβ−１，４−ＧａｌＴ ＩＩをコードす
る全長ＤＮＡ配列を、図１（左）に示すように、哺乳動
物用の非ウイルスベクターである発現ベクターｐｃＤＮ
Ａ３．１（インビトロゲン社）のマルチクローニングサ
イトのＢａｍＨ Ｉ部位とＥｃｏＲ Ｉ部位の間にサブ
クローニングして、β−１，４−ＧａｌＴ ＩＩ発現ベ
クターｐｃＤＮＡ３．１／ＧＴＩＩを構築した。配列表
の配列番号２に示す１〜５００番目までの塩基配列に、
その５’−末端部分に更にＧＣＡＧＣの配列が付加し
た、ヒトβ−１，４−ＧａｌＴ Ｖの一部分をコードす
るＤＮＡ配列を、対応するアンチセンス遺伝子が発現さ
れるようにするために、３’側と５’側が逆向きになる
ように、図１（右）に示すように、発現ベクターｐｃＤ
ＮＡ３．１のマルチクローニングサイトのＢａｍＨ Ｉ
部位とＨｉｎｄ ＩＩＩ部位の間にサブクローニングし
て、β−１，４−ＧａｌＴＶアンチセンス遺伝子発現ベ
クターｐｃＤＮＡ３．１／ＧＴＶＡＳを構築した。この
発現ベクターには、配列表の配列番号２に示す１〜１，
１６４番目の塩基配列を有するヒトβ−１，４−Ｇａｌ
Ｔ Ｖをコードする全長ＤＮＡ配列の内の１〜５００番
目の塩基配列に、その５’−末端に更に−５〜−１番目
の配列に相当するＧＣＡＧＣの配列が付加したＤＮＡ配
列が逆向きに挿入されている。
るが、本発明はこれらの実施例によりなんら限定される
ものではない。 実施例１β−１，４−ＧａｌＴ ＩＩをコードする遺伝子を含む
発現ベクターおよびβ−１，４−ＧａｌＴ Ｖアンチセ
ンス遺伝子を含む発現ベクターの構築 配列表の配列番号１に示す１〜１，１１６番目の塩基配
列を有するヒトβ−１，４−ＧａｌＴ ＩＩをコードす
る全長ＤＮＡ配列を、図１（左）に示すように、哺乳動
物用の非ウイルスベクターである発現ベクターｐｃＤＮ
Ａ３．１（インビトロゲン社）のマルチクローニングサ
イトのＢａｍＨ Ｉ部位とＥｃｏＲ Ｉ部位の間にサブ
クローニングして、β−１，４−ＧａｌＴ ＩＩ発現ベ
クターｐｃＤＮＡ３．１／ＧＴＩＩを構築した。配列表
の配列番号２に示す１〜５００番目までの塩基配列に、
その５’−末端部分に更にＧＣＡＧＣの配列が付加し
た、ヒトβ−１，４−ＧａｌＴ Ｖの一部分をコードす
るＤＮＡ配列を、対応するアンチセンス遺伝子が発現さ
れるようにするために、３’側と５’側が逆向きになる
ように、図１（右）に示すように、発現ベクターｐｃＤ
ＮＡ３．１のマルチクローニングサイトのＢａｍＨ Ｉ
部位とＨｉｎｄ ＩＩＩ部位の間にサブクローニングし
て、β−１，４−ＧａｌＴＶアンチセンス遺伝子発現ベ
クターｐｃＤＮＡ３．１／ＧＴＶＡＳを構築した。この
発現ベクターには、配列表の配列番号２に示す１〜１，
１６４番目の塩基配列を有するヒトβ−１，４−Ｇａｌ
Ｔ Ｖをコードする全長ＤＮＡ配列の内の１〜５００番
目の塩基配列に、その５’−末端に更に−５〜−１番目
の配列に相当するＧＣＡＧＣの配列が付加したＤＮＡ配
列が逆向きに挿入されている。
【００１６】実施例２発現ベクターｐｃＤＮＡ３．１／ＧＴＩＩおよびｐｃＤ
ＮＡ３．１／ＧＴＶＡＳの抗腫瘍効果 発現ベクターｐｃＤＮＡ３．１／ＧＴＩＩおよびｐｃＤ
ＮＡ３．１／ＧＴＶＡＳのそれぞれの２μｇを、ＦｕＧ
ＥＮＥ ６トランスフェクション試薬（ベーリンガーマ
ンハイム社）で製剤化して、プロピレンチューブ中に脂
質と共に発現ベクターを含む８０％エタノール溶液を調
製した。同時に、対照として、ヒトβ−１，４−Ｇａｌ
Ｔ ＩＩのＤＮＡおよびヒトβ−１，４−ＧａｌＴ Ｖ
のアンチセンスＤＮＡのいずれも挿入されてない発現ベ
クターｐｃＤＮＡ３．１の２μｇを用いて同様に製剤化
した。これらの製剤化された発現ベクターを、６０％か
ら７０％コンフルエント段階におけるＢ１６−Ｆ１０マ
ウスメラノーマ細胞に加えて、７２時間培養した。発現
ベクターが組み込まれたメラノーマ細胞を７００μｇＧ
４１８／ｍｌ含む培地で１０日間培養し、選択した。こ
の遺伝子導入メラノーマ細胞（２×１０5個）を、マウ
スの皮下に移植し、２週間後に腫瘍塊形成を調べた。そ
の結果を表１に示した。
ＮＡ３．１／ＧＴＶＡＳの抗腫瘍効果 発現ベクターｐｃＤＮＡ３．１／ＧＴＩＩおよびｐｃＤ
ＮＡ３．１／ＧＴＶＡＳのそれぞれの２μｇを、ＦｕＧ
ＥＮＥ ６トランスフェクション試薬（ベーリンガーマ
ンハイム社）で製剤化して、プロピレンチューブ中に脂
質と共に発現ベクターを含む８０％エタノール溶液を調
製した。同時に、対照として、ヒトβ−１，４−Ｇａｌ
Ｔ ＩＩのＤＮＡおよびヒトβ−１，４−ＧａｌＴ Ｖ
のアンチセンスＤＮＡのいずれも挿入されてない発現ベ
クターｐｃＤＮＡ３．１の２μｇを用いて同様に製剤化
した。これらの製剤化された発現ベクターを、６０％か
ら７０％コンフルエント段階におけるＢ１６−Ｆ１０マ
ウスメラノーマ細胞に加えて、７２時間培養した。発現
ベクターが組み込まれたメラノーマ細胞を７００μｇＧ
４１８／ｍｌ含む培地で１０日間培養し、選択した。こ
の遺伝子導入メラノーマ細胞（２×１０5個）を、マウ
スの皮下に移植し、２週間後に腫瘍塊形成を調べた。そ
の結果を表１に示した。
【００１７】
【表１】
表１：発現ベクター投与による抗腫瘍効果
発現ベクター 腫瘍形成マウス 腫瘍サイズ 抑制率
（頭数） （ｍｍ） （％）
pcDNA3.1 12/12 12 ± 0.9 100
pcDNA3.1/GTII 7/10 5.3 ± 1.6 42.1
pcDNA3.1/GTVAS 10/10 5.9 ± 1.0 46.7
【００１８】更に、移植後のマウスの写真を図２に示し
た。図２のＡ、ＢおよびＣは、それぞれ発現ベクターｐ
ｃＤＮＡ３．１、ｐｃＤＮＡ３．１／ＧＴＩＩおよびｐ
ｃＤＮＡ３．１／ＧＴＶＡＳで遺伝子導入されたメラノ
ーマ細胞を移植し、移植２０日後のマウスを示す。これ
らの結果から、ヒトβ−１，４−ＧａｌＴ ＩＩをコー
ドする全長ＤＮＡ配列が挿入されたｐｃＤＮＡ３．１／
ＧＴＩＩおよびヒトβ−１，４−ＧａｌＴＶアンチセン
スＤＮＡが挿入されたｐｃＤＮＡ３．１／ＧＴＶＡＳを
導入したメラノーマ細胞を移植した場合には、有意に腫
瘍形成が抑制されることが明らかになった。
た。図２のＡ、ＢおよびＣは、それぞれ発現ベクターｐ
ｃＤＮＡ３．１、ｐｃＤＮＡ３．１／ＧＴＩＩおよびｐ
ｃＤＮＡ３．１／ＧＴＶＡＳで遺伝子導入されたメラノ
ーマ細胞を移植し、移植２０日後のマウスを示す。これ
らの結果から、ヒトβ−１，４−ＧａｌＴ ＩＩをコー
ドする全長ＤＮＡ配列が挿入されたｐｃＤＮＡ３．１／
ＧＴＩＩおよびヒトβ−１，４−ＧａｌＴＶアンチセン
スＤＮＡが挿入されたｐｃＤＮＡ３．１／ＧＴＶＡＳを
導入したメラノーマ細胞を移植した場合には、有意に腫
瘍形成が抑制されることが明らかになった。
【００１９】実施例３発現ベクターｐｃＤＮＡ３．１／ＧＴＩＩの腫瘍転移抑
制効果 ヒトβ−１，４−ＧａｌＴ ＩＩをコードする全長ＤＮ
Ａ配列が挿入されたｐｃＤＮＡ３．１／ＧＴＩＩが導入
されたＢ１６−Ｆ１０マウスメラノーマ細胞１×１０5
を、マウスの尾静脈へ注入して移植し、移植２０日後に
マウスを開腹し肺における結節の数を数えた。その結果
を、表２に示した。
制効果 ヒトβ−１，４−ＧａｌＴ ＩＩをコードする全長ＤＮ
Ａ配列が挿入されたｐｃＤＮＡ３．１／ＧＴＩＩが導入
されたＢ１６−Ｆ１０マウスメラノーマ細胞１×１０5
を、マウスの尾静脈へ注入して移植し、移植２０日後に
マウスを開腹し肺における結節の数を数えた。その結果
を、表２に示した。
【００２０】
【表２】
表２：発現ベクター投与による腫瘍転移抑制効果
発現ベクター 結節数
pcDNA3.1 74 ± 13
pcDNA3.1/GTII 29 ± 15
【００２１】この結果から、ヒトβ−１，４−ＧａｌＴ
ＩＩをコードする全長ＤＮＡ配列が挿入されたｐｃＤ
ＮＡ３．１／ＧＴＩＩが腫瘍の転移を有意に抑制するこ
とが明らかになった。
ＩＩをコードする全長ＤＮＡ配列が挿入されたｐｃＤ
ＮＡ３．１／ＧＴＩＩが腫瘍の転移を有意に抑制するこ
とが明らかになった。
【００２２】実施例４遺伝子導入マウスメラノーマ細胞の膜糖蛋白質のレクチ
ンブロット分析 図２に示すマウスＡ、ＢおよびＣで形成された腫瘍から
膜糖蛋白質のサンプルを調製し、レクチンブロット分析
を行った。ブロット分析は、ＣＢＢ（Coomassie Brilli
ant Blue）、ＲＣＡ−Ｉ（Ricinus communis agglutini
n-I：ヒママメから精製したレクチンで糖鎖のＧａｌβ
１→４ＧｌｃＮＡｃβ１→構造を認識し結合する）およ
びＬ−ＰＨＡ（Leuko phytohaem agglutinin：インゲン
マメから精製したレクチンで高分岐化糖鎖を認識し結合
する)にパーオキシダーゼを結合させたものを用いてブ
ロットと反応させて可視化して行った。結果を図３に示
した。図３から明らかなように、ｐｃＤＮＡ３．１／Ｇ
ＴＩＩおよびｐｃＤＮＡ３．１／ＧＴＶＡＳを導入した
メラノーマ細胞では、腫瘍細胞で通常観察される糖鎖の
Ｇａｌβ１→４ＧｌｃＮＡｃβ−構造および高分岐化構
造が変化していることが明らかになった。
ンブロット分析 図２に示すマウスＡ、ＢおよびＣで形成された腫瘍から
膜糖蛋白質のサンプルを調製し、レクチンブロット分析
を行った。ブロット分析は、ＣＢＢ（Coomassie Brilli
ant Blue）、ＲＣＡ−Ｉ（Ricinus communis agglutini
n-I：ヒママメから精製したレクチンで糖鎖のＧａｌβ
１→４ＧｌｃＮＡｃβ１→構造を認識し結合する）およ
びＬ−ＰＨＡ（Leuko phytohaem agglutinin：インゲン
マメから精製したレクチンで高分岐化糖鎖を認識し結合
する)にパーオキシダーゼを結合させたものを用いてブ
ロットと反応させて可視化して行った。結果を図３に示
した。図３から明らかなように、ｐｃＤＮＡ３．１／Ｇ
ＴＩＩおよびｐｃＤＮＡ３．１／ＧＴＶＡＳを導入した
メラノーマ細胞では、腫瘍細胞で通常観察される糖鎖の
Ｇａｌβ１→４ＧｌｃＮＡｃβ−構造および高分岐化構
造が変化していることが明らかになった。
【００２３】
【発明の効果】以上に詳細に記載した通り、β−１，４
−ＧａｌＴ ＩＩをコードする遺伝子を含む発現ベクタ
ーおよびβ−１，４−ＧａｌＴ Ｖのアンチセンス遺伝
子を含む発現ベクターを投与した場合には、腫瘍の形成
が抑制され、また腫瘍の転移も抑制され、腫瘍の治療に
極めて有効である。
−ＧａｌＴ ＩＩをコードする遺伝子を含む発現ベクタ
ーおよびβ−１，４−ＧａｌＴ Ｖのアンチセンス遺伝
子を含む発現ベクターを投与した場合には、腫瘍の形成
が抑制され、また腫瘍の転移も抑制され、腫瘍の治療に
極めて有効である。
【００２４】
【配列表】
SEQUENCE LISTING
<110> Primmune Cooperation Inc.
<120> Medicine for treatment of tumor
<130> DA-03117
<160> 2
<210> 1
<211> 1119
<212> DNA
<213> homosapiens
<400>>
atgagcagac tgctgggggg gacgctggag cgcgtctgca aggctgtgct ccttctctgc 60
ctgctgcact tcctcgtggc cgtcatcctc tactttgacg tctacgccca gcacctggcc 120
ttcttcagcc gcttcagtgc ccgaggccct gcccatgccc tccacccagc tgctagcagc 180
agcagcagca gcagcaactg ctcccggccc aacgccaccg cctctagctc cgggctccct 240
gaggtcccca gtgccctgcc cggtcccacg gctcccacgc tgccaccctg tcctgactcg 300
ccacctggtc ttgtgggcag actgctgatc gagttcacct cacccatgcc cctggagcgg 360
gtgcagaggg agaacccagg cgtgctcatg ggcggccgat acacaccgcc cgactgcacc 420
ccagcccaga cggtggcggt catcatcccc tttagacacc gggaacacca cctgcgctac 480
tggctccact atctacaccc catcttgagg cggcagcggc tgcgctacgg cgtctatgtc 540
atcaaccagc atggtgagga caccttcaac cgggccaagc tgcttaacgt gggcttccta 600
gaggcgctga aggaggatgc cgcctatgac tgcttcatct tcagcgatgt ggacctggtc 660
cccatggatg accgcaacct ataccgctgc ggcgaccaac cccgccactt tgccattgcc 720
atggacaagt ttggcttccg gcttccctat gctggctact ttggaggtgt gtcaggcctg 780
agtaaggctc agtttctgag aatcaatggc ttccccaatg agtactgggg ctggggtggc 840
gaggatgatg acatcttcaa ccggatctcc ctgactggga tgaagatctc acgcccagac 900
atccgaattg gccgctaccg catgatcaag cacgaccgcg acaagcataa cgaacctaac 960
cctcagaggt ttaccaagat tcaaaacacg aagctgacca tgaagcggga cggcattggg 1020
tcagtgcggt accaggtctt ggaggtgtct cggcaaccac tcttcaccaa tatcacagtg 1080
gacattgggc ggcctccgtc gtggccccct cggggctga 1119
<210> 2
<211> 1167
<212> DNA
<213> homosapiens
<400>
atgcgcgccc gccgggggct gctgcggctg ccgcgccgct cgctgctcgc cgcgctcttc 60
ttcttttctc tctcgtcctc gctgctgtac ttcgtctatg tggcgcccgg catagtgaac 120
acctacctct tcatgatgca agcccaaggc attctgatcc gggacaacgt gagaacaatc 180
ggtgctcagg tttatgagca ggtgcttcgg agtgcttatg ccaagaggaa cagcagtgta 240
aatgactcag attatcctct tgacttgaac cacagtgaaa ccttcctgca aactacaaca 300
tttcttcctg aagacttcac ctactttgca aaccatacct gccctgaaag actcccttcc 360
atgaagggcc caatagacat aaacatgagt gaaattggaa tggattacat tcatgaactc 420
ttctccaaag acccaaccat caagctcgga ggtcactgga agccttctga ttgcatgcct 480
cggtggaagg tggcgatcct tatccccttc cggaaccgcc acgagcacct cccagtcctg 540
ttcagacacc tgcttcccat gctccagcgc cagcgcctgc agtttgcatt ttatgtggtt 600
gaacaagttg gtacccaacc ctttaatcga gccatgcttt tcaacgttgg ctttcaagaa 660
gcaatgaaag acttggattg ggactgtttg atttttcatg atgtagatca cataccggaa 720
agtgatcgca actattatgg atgtggacag atgccgaggc attttgcaac caaattggat 780
aagtatatgt atctgcttcc ttataccgag ttctttggcg gagtgagtgg cttaacagtg 840
gaacaatttc ggaaaatcaa tggctttcct aatgctttct ggggttgggg tggagaagat 900
gacgacctct ggaacagagt acagaatgca ggctattctg tgagccggcc agagggtgac 960
acaggaaagt acaagtccat tcctcatcac catcgaggag aagtccagtt tcttggaagg 1020
tatgctctgc tgaggaagtc aaaagaacgg caagggctgg atggcctcaa caacctgaac 1080
tactttgcaa acatcacata cgacgccttg tataaaaaca taactgtcaa cctgacaccc 1140
gagctggctc aggtgaacga gtactga 1167
【図１】図１は、実施例１で構築した、本発明の腫瘍治
療剤の有効成分として用いる発現ベクターの構成を示
す。
療剤の有効成分として用いる発現ベクターの構成を示
す。
【図２】図２は、実施例１で構築した発現ベクターによ
る腫瘍治療効果を示すマウスの写真である。ＡはｐｃＤ
ＮＡ３．１のみ、ＢはｐｃＤＮＡ３．１／ＧＴＩＩ、Ｃ
はｐｃＤＮＡ３．１／ＧＴＶＡＳを導入した癌細胞が形
成した腫瘍を示す。写真中の矢印は、腫瘍塊の大きさを
示す。
る腫瘍治療効果を示すマウスの写真である。ＡはｐｃＤ
ＮＡ３．１のみ、ＢはｐｃＤＮＡ３．１／ＧＴＩＩ、Ｃ
はｐｃＤＮＡ３．１／ＧＴＶＡＳを導入した癌細胞が形
成した腫瘍を示す。写真中の矢印は、腫瘍塊の大きさを
示す。
【図３】図３は、実施例１で構築した発現ベクターを導
入した癌細胞が形成した腫瘍から調製した膜糖蛋白質サ
ンプルの、レクチンブロット分析結果を示す写真であ
る。
入した癌細胞が形成した腫瘍から調製した膜糖蛋白質サ
ンプルの、レクチンブロット分析結果を示す写真であ
る。
フロントページの続き
(51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考）
Ａ６１Ｐ 35/00 Ａ６１Ｐ 35/04
35/04 43/00 １０５
43/00 １０５ Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ
Ｃ１２Ｎ 15/09 ＺＮＡ Ａ６１Ｋ 37/52
Ｆターム(参考） 4B024 AA01 BA80 CA01 CA04 DA02
EA04 FA01 GA11 HA17
4C084 AA02 AA13 BA01 BA08 BA22
CA18 DC25 NA14 ZB261
ZC412
4C086 AA01 AA02 EA16 NA14 ZB26
ZC41
4C087 AA01 AA02 BC83 CA12 NA14
ZB26 ZC41
Claims (8)
- 【請求項１】 β−１，４−ガラクトース転移酵素ＩＩ
（β−１，４−ＧａｌＴ ＩＩ）遺伝子またはβ−１，
４−ガラクトース転移酵素Ｖ（β−１，４−ＧａｌＴ
Ｖ）アンチセンス遺伝子を有効成分とする腫瘍治療剤。 - 【請求項２】 β−１，４−ＧａｌＴ ＩＩ遺伝子が、
配列表の配列番号１に示す塩基配列を有しβ−１，４−
ＧａｌＴ ＩＩをコードするＤＮＡ、またはこのＤＮＡ
とストリンジェントな条件でハイブリダイズするＤＮＡ
であってβ−１，４−ＧａｌＴ ＩＩと同様の酵素活性
を有する蛋白質をコードするＤＮＡである請求項１の腫
瘍治療剤。 - 【請求項３】 請求項２に記載のＤＮＡを含むβ−１，
４−ＧａｌＴ ＩＩの発現ベクターを有効成分とする請
求項１または２の腫瘍治療剤。 - 【請求項４】 β−１，４−ＧａｌＴ Ｖアンチセンス
遺伝子が、β−１，４−ＧａｌＴ Ｖ遺伝子のｍＲＮＡ
と相補性を有しβ−１，４−ＧａｌＴ Ｖの発現を阻害
するＲＮＡを転写し得るＤＮＡ、またはβ−１，４−Ｇ
ａｌＴ Ｖ遺伝子のｍＲＮＡと相補性を有しβ−１，４
−ＧａｌＴ Ｖの発現を阻害するＲＮＡもしくはその改
変体である請求項１の腫瘍治療剤。 - 【請求項５】 β−１，４−ＧａｌＴ Ｖアンチセンス
遺伝子として、β−１，４−ＧａｌＴ Ｖ遺伝子のｍＲ
ＮＡと相補性を有しβ−１，４−ＧａｌＴＶの発現を阻
害するＲＮＡを転写し得るＤＮＡを含む発現ベクターを
有効成分とする請求項１または４の腫瘍治療剤。 - 【請求項６】 β−１，４−ＧａｌＴ Ｖアンチセンス
遺伝子が、配列表の配列番号２に示す塩基配列と逆向き
の塩基配列を有するＤＮＡ、またはその部分配列である
請求項１、４または５の腫瘍治療剤。 - 【請求項７】 β−１，４−ＧａｌＴ ＩＩ遺伝子を有
効成分とし腫瘍の転移を抑制する請求項１から３のいず
れかの腫瘍治療剤。 - 【請求項８】 腫瘍がメラノーマである請求項１から７
のいずれかの腫瘍治療剤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2001155650A JP2003002846A (ja) | 2001-05-24 | 2001-05-24 | 腫瘍治療剤 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2001155650A JP2003002846A (ja) | 2001-05-24 | 2001-05-24 | 腫瘍治療剤 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2003002846A true JP2003002846A (ja) | 2003-01-08 |
Family
ID=18999792
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2001155650A Pending JP2003002846A (ja) | 2001-05-24 | 2001-05-24 | 腫瘍治療剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2003002846A (ja) |
-
2001
- 2001-05-24 JP JP2001155650A patent/JP2003002846A/ja active Pending
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