JP2002539079A

JP2002539079A - 抗−ｃｃｒ４抗体およびその使用方法

Info

Publication number: JP2002539079A
Application number: JP2000593640A
Authority: JP
Inventors: ウー，リーチュン; ラフィン，ナンシー; アンドリュー，デビッド
Original assignee: Millennium Pharmaceuticals Inc
Current assignee: Millennium Pharmaceuticals Inc
Priority date: 1999-01-15
Filing date: 2000-01-14
Publication date: 2002-11-19
Also published as: US6488930B1; AU773293B2; CA2358693A1; US20070031896A1; US20060246062A1; EP1144453A1; AU2726600A; WO2000042074A1; US7138117B1; WO2000042074A9

Abstract

(57)【要約】本発明は、哺乳動物（例えば、ヒト）ＣＣ−ケモカインレセプター４（ＣＣＲ４）または該レセプターの一部に結合し、かつ該レセプターへのリガンドの結合をブロックする抗体またはその機能的断片に関する。さらに、本発明は、哺乳動物ＣＣＲ４産生細胞と該ＣＣＲ４のリガンドとの相互作用を阻害する方法、並びに研究、治療法、予防法及び診断法における該抗体及び断片の使用に関する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】関連出願本願は、１９９９年１月１５日に出願した米国出願番号０９／２３１，７５９
号の一部継続出願であり、その教示は参照により全て本明細書に組み込まれる。

【０００２】発明の背景技術ケモカインはほとんど全ての白血球型に作用する数多くの炎症誘発活性を持つ
ことから、過去１０年の間に、重要な炎症メディエーターとして注目を集めるよ
うになった。また最近ケモカインは、正常な免疫監視と免疫応答ならびに造血、
血管新生、ウイルス感染の制御およびＴ細胞分化における他のいくつかの機能に
不可欠な基礎的な白血球の輸送（ｔｒａｆｆｉｃｋｉｎｇ）の重要な成分として
認識されるようになった（Ｂａｇｇｉｏｌｉｎｉら，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕ
ｎｏｌ．１５：６７５（１９９７）；Ｚｏｕら，Ｎａｔｕｒｅ３９３：５９
５（１９９８）；Ｔａｃｈｉｂａｎａら，Ｎａｔｕｒｅ３９３：５９１（１９
９８））。化学走性、脱顆粒、脂質メディエーターの合成およびインテグリン活
性化の誘因などといった白血球に対する一定の範囲の炎症誘発効果の媒介を含む
この多種多様な生物学的活性は、炎症性疾患の開始と維持にそれらが果たす重要
な役割および一定のケモカインレセプターがＨＩＶ−１侵入の補助レセプターと
して最近同定されたことと合わせて、ケモカインおよびケモカインレセプターを
魅力的な新しい治療標的群にしている。

【０００３】ケモカインファミリーのメンバーはＩＬ−１βやＴＮＦαなどの初期の炎症メ
ディエーターに応答して多くの細胞型によって産生され分泌される。ケモカイン
スーパーファミリーは２つの主要なブランチ、すなわち最初の２つのシステイン
の間に１つのアミノ酸が挿入されていることを特徴とするα−ケモカイン（すな
わちＣＸＣケモカイン）と、隣接した２つのシステインを含有するβ−ケモカイ
ン（ＣＣケモカイン）を含む。α−ケモカインのブランチにはＩＬ−８、好中球
活性化ペプチド−２（ＮＡＰ−２）、黒色腫成長刺激活性（ＭＧＳＡ／ｇｒｏま
たはＧＲＯα）およびＥＮＡ−７８などのタンパク質が含まれ、これらのタンパ
ク質はそれぞれ主として好中球に対する誘引および活性化効果を持つ。β−ケモ
カインのブランチのメンバーは単球、リンパ球、好塩基球および好酸球などとい
った他の細胞型に作用し（Ｏｐｐｅｎｈｅｉｍ，Ｊ．Ｊ．ら，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ
．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，９：６１７−６４８（１９９１）；Ｂａｇｇｉｏｌｉｎｉ
，Ｍ．ら，Ａｄｖ．Ｉｍｕｎｏｌ．，５５：９７−１７９（１９９４）；Ｍｉｌ
ｌｅｒおよびＫｒａｎｇｅｌ，Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１２：１
７−４６（１９９２）；Ｊｏｓｅ，Ｐ．Ｊ．ら，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１７９
：８８１−１１８（１９９４）；Ｐｏｎａｔｈ，Ｐ．Ｄ．ら，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉ
ｎｖｅｓｔ．，９７：６０４−６１２（１９９６））、そして、単球の化学走性
タンパク質１〜４（ＭＣＰ−１、ＭＣＰ−２、ＭＣＰ−３およびＭＣＰ−４）、
ＲＡＮＴＥＳ、マクロファージ炎症性タンパク質（ＭＩＰ−１α、ＭＩＰ−１
β）、胸腺および活性化制御されたケモカイン（ｔｈｙｍｕｓａｎｄａｃｔ
ｉｖａｔｉｏｎ−ｒｅｇｕｌａｔｅｄｃｈｅｍｏｋｉｎｅ）（ＴＡＲＣ；Ｉｍ
ａｉら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１：２１５１４−２１５２１（１９９
６））およびマクロファージ由来ケモカイン（ＭＤＣ；Ｇｏｄｉｓｋａら，Ｊ．
Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８５：１５９５−１６０４（１９９７））などのタンパク
質を含む。

【０００４】ケモカインは７回膜貫通型Ｇタンパク質共役レセプターに結合する（Ｍｕｒｐ
ｈｙ，Ｐ．Ｍ．，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１２：５９３−６３３
（１９９４））。現在までに多くのβ−ケモカインレセプター（ＣＣＲ１〜ＣＣ
Ｒ１０）が同定されており、さらなるケモカインレセプターの探索が活発な研究
の対象になっている（Ｂａｇｇｉｏｌｉｎｉ，Ｎａｔｕｒｅ３９２：５６５−
５６８（１９９８））。ケモカインレセプターＣＣＲ４はＰｏｗｅｒら（Ｊ．Ｂ
ｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７０：１９４９５−１９５００（１９９５）；Ｇｅｎｂ
ａｎｋ登録番号Ｘ８５７４０）とＭｅｙｅｒら（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２
７１（２４）：１４４４５−１４４５１（１９９６）；Ｇｅｎｂａｎｋ登録番号
Ｘ９４１５１）によって同定された。ヒトＣＣＲ４のネズミのホモログも同定さ
れている（Ｙｏｕｎら，Ｂｌｏｏｄ８９（１２）：４４４８−４４６０（１９
９７））。当初ＣＣＲ４はＭＣＰ−１、ＭＩＰ−１αとＲＡＮＴＥＳに応答して
シグナル伝達することが見出されたが、最近になってケモカインＴＡＲＣおよび
ＭＤＣに特異的であることが明らかになった（Ｉｍａｉら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈ
ｅｍ．２７２（２３）：１５０３６−１５０４２（１９９７）；Ｉｍａｉら，
Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７８：１７６４−１７６８（１９９８））。

【０００５】炎症部位への白血球サブセットの選択的な補充と、循環系、組織、リンパ系お
よび二次リンパ系器官を通した白血球の規則正しい輸送は、幾分、細胞のサブセ
ットでのケモカインレセプターの差次的発現によって制御される。このような発
現パターンは機能的に関連した一群の白血球が与えられた刺激によって誘導され
る特定のケモカイン群に対して協調的に応答できることを保証しているようであ
る。Ｔ細胞の場合、ＰＣＲまたはノーザンブロット法により、ＣＣケモカインの
既知のレセプターがＴ細胞のサブセット上に発現することが示される。どのサブ
セットが特定のレセプターを発現するかを正確に記述する作業は熾烈な研究分野
になっている。なぜならケモカインレセプター発現はＴＨ１もしくはＴＨ２Ｔ
細胞または組織ホーミングサブセットなどの様々な細胞型の局在または遊走の説
明になるかもしれないからである。また、これはＨＩＶ−１の様々な株にどのＴ
細胞が感染されるかを決定するかもしれない。しかしほとんどの白血球は数種類
のケモカインレセプターを発現し、その多くは複雑で入り交じったリガンド相互
作用を伴なう。これが、所定の細胞型上の特定のレセプターに関する正常な免疫
機能の解明ならびに疾患の開始および進行との関連性の決定を困難にしている。
それは特に、多くのケモカインレセプターで、特異的抗体が利用できないからで
ある。

【０００６】発明の要約本発明は、哺乳動物のＣＣケモカインレセプター４（ＣＣＲ４、ＣＫＲ−４、
ＴＡＲＣレセプターおよびＭＤＣレセプターともいう）または該レセプターの一
部に結合する抗体（免疫グロブリン）またはその機能的断片（例えば抗原結合断
片）（抗−ＣＣＲ４）に関する。一実施態様において、本発明の抗体またはその
断片はヒトＣＣＲ４またはその一部に対する特異性を有する。もう一つの実施態
様において、本発明の抗体または断片は、上記レセプターに対するリガンド（例
えばＴＡＲＣ、ＭＤＣ、ＭＣＰ−１、ＭＩＰ−１α、ＲＡＮＴＥＳ）の結合をブ
ロックし、前記レセプターに対するリガンドの結合に関連する１つ以上の機能（
例えば白血球の輸送）を阻害する。好ましい実施態様では、そのリガンドがＴＡ
ＲＣおよび／またはＭＤＣである。例えば本明細書に記載するようにヒトＣＣＲ
４またはその一部を結合する本発明の抗体とその断片は、レセプターに対するケ
モカイン（例えばＴＡＲＣ、ＭＤＣ、ＭＣＰ−１、ＭＩＰ−１α、ＲＡＮＴＥＳ
）の結合をブロックし、レセプターに対するケモカインの結合に関連する機能を
阻害することができる。好ましい実施態様では、ケモカインはＴＡＲＣおよび／
またはＭＤＣである。一実施態様において、抗体はモノクローナル抗体（ｍＡｂ
）ＬＳ１４１−１Ｇ１（１Ｇ１）であるか、ヒトＣＣＲ４またはヒトＣＣＲ４の
一部に対する結合に関して１Ｇ１と競合できる抗体である。もう一つの実施態様
において、抗体はモノクローナル抗体（ｍＡｂ）ＬＳ１８５−２Ｂ１０（２Ｂ１
０）であるか、ヒトＣＣＲ４またはヒトＣＣＲ４の一部に対する結合に関して２
Ｂ１０と競合できる抗体である。もう一つの実施態様において、抗体はモノクロ
ーナル抗体（ｍＡｂ）ＬＳ２５７−１０Ｅ４（１０Ｅ４）であるか、ヒトＣＣＲ
４またはヒトＣＣＲ４の一部に対する結合に関して１０Ｅ４と競合できる抗体で
ある。上述した抗体の機能的断片も考えられる。

【０００７】また本発明は、哺乳動物のＣＣＲ４またはそのレセプターの一部に結合し、他
の抗−ＣＣＲ４抗体と比較してＣＣＲ４またはＣＣＲ４含有組成物の増大した蛍
光染色強度を与える抗体またはその機能的断片（例えば抗原結合断片）に関する
。一実施態様において、抗体はモノクローナル抗体１Ｇ１、２Ｂ１０もしくは１
０Ｅ４、またはヒトＣＣＲ４もしくはヒトＣＣＲ４の一部に対する結合に関して
１Ｇ１、２Ｂ１０もしくは１０Ｅ４と競合できる抗体である。

【０００８】さらに本発明は、細胞が保有している哺乳動物（例えばヒト、ヒト以外の霊長
類またはネズミ）のＣＣＲ４とそのリガンドとの相互作用を阻害する方法に関す
る。この方法は、上記細胞を哺乳動物のＣＣＲ４もしくはＣＣＲ４の一部に結合
する抗体もしくはその機能的断片の有効量と接触させる工程を包含する。適切な
細胞としては顆粒球、白血球（単球、マクロファージ、好塩基球および好酸球な
ど）、およびマスト細胞、Ｔｈ１細胞やＴｈ２細胞などのＴ細胞を含むリンパ球
（例えばＣＤ８＋細胞、ＣＤ４＋細胞、ＣＤ２５＋細胞、ＣＤ４５ＲＯ＋細胞）
ならびにＣＣＲ４を発現する組換え細胞（例えばトランスフェクト細胞）のよう
な、ＣＣＲ４またはその一部を発現する他の細胞などが挙げられる。ある特定の
態様では、抗体は１Ｇ１、２Ｂ１０もしくは１０Ｅ４、またはヒトのＣＣＲ４も
しくはヒトのＣＣＲ４の一部に対する結合に関して１Ｇ１、２Ｂ１０もしくは１
０Ｅ４と競合できる抗体である。

【０００９】本発明の別の態様は、哺乳動物のＣＣＲ４産生細胞とケモカインとの相互作用
を阻害する方法に関する。この方法は、上記細胞をＣＣＲ４または上記レセプタ
ーの一部に結合する抗体またはその機能的断片の有効量と接触させる工程を包含
する。本方法の実施態様では、上記の抗体またはその機能的断片は、任意の１つ
以上の、１Ｇ１、２Ｂ１０もしくは１０Ｅ４、または１Ｇ１、２Ｂ１０もしくは
１０Ｅ４の抗原結合断片、または１Ｇ１、２Ｂ１０もしくは１０Ｅ４と同一もし
くは類似のエピトープ特異性を有する抗体もしくはその断片である。さらに本発
明は、ＣＣＲ４に対するケモカインの結合に関連する機能を阻害する方法に関す
る。この方法は、哺乳動物のＣＣＲ４または上記レセプターの一部に結合する抗
体またはその機能的断片の有効量を投与する工程を包含する。この方法の１つの
局面において、上記の抗体またはその機能的断片は、任意の１つ以上の、１Ｇ１
、２Ｂ１０もしくは１０Ｅ４、または１Ｇ１、２Ｂ１０もしくは１０Ｅ４の抗原
結合断片、または１Ｇ１、２Ｂ１０もしくは１０Ｅ４のものと同一もしくは類似
のエピトープ特異性を有する抗体もしくはその断片である。

【００１０】本発明の別の局面は、細胞による哺乳動物のＣＣＲ４またはこのレセプターの
一部の発現を同定する方法である。この方法では、細胞またはその画分（例えば
膜画分）を含む組成物を、哺乳動物のＣＣＲ４タンパク質またはこのレセプター
の一部に結合する抗体またはその機能的断片（例えば１Ｇ１、２Ｂ１０または１
０Ｅ４）と、それに対する抗体の結合に適した条件で接触させ、そして該抗体ま
たは断片と該タンパク質またはその一部との複合体の形成が検出される。複合体
の検出は、直接的または間接的に、上記細胞またはその画分上に上記レセプター
またはその一部が存在することを示す。また、本発明は生物学的試料中のＣＣＲ
４またはその一部の存在を検出することにおける使用のためのキットに関する。
このキットは、哺乳動物のＣＣＲ４または上記レセプターの一部に結合する抗体
またはその機能的断片と、該抗体または断片と該タンパク質またはその一部との
複合体の存在を検出するのに適した１つ以上の補助試薬を含む。

【００１１】また本発明は、哺乳動物のＣＣＲ４機能の阻害物質および／または促進物質を
含む哺乳動物のＣＣＲ４タンパク質に結合するさらなるリガンドまたは他の物質
を同定する方法も包含する。例えば、本発明の抗体またはその機能的断片のもの
と同一または類似の結合特異性を有する試薬が、上記抗体または断片を用いる競
合アッセイによって同定できる。したがって、本発明は、レセプター機能の阻害
物質（例えばアンタゴニスト）または促進物質（例えばアゴニスト）を含むＣＣ
Ｒ４レセプターに結合するリガンドまたは他の基質を同定する方法も包含する。
一実施態様において、ＣＣＲ４レセプタータンパク質を天然に発現する細胞、ま
たは細胞内に導入された核酸によってコードされるＣＣＲ４レセプターもしくは
バリアントを発現するように操作されている適当な宿主細胞を、リガンド、レセ
プター機能の阻害物質または促進物質を同定し、その効力を評価するためのアッ
セイにおいて使用する。このような細胞は発現されたレセプタータンパク質また
はポリペプチドの機能を評価することにおいて有用である。

【００１２】したがって、本発明は哺乳動物のＣＣＲ４またはそのリガンド結合性バリアン
トに結合する試薬を検出するまたは同定する方法に関する。この方法は、試験さ
れる試薬、本発明の抗体または抗原結合断片（例えばモノクローナル抗体１Ｇ１
、モノクローナル抗体２Ｂ１０もしくはモノクローナル抗体１０Ｅ４、または１
Ｇ１、２Ｂ１０もしくは１０Ｅ４と同一または類似のエピトープ特異性を持つ抗
体、または１Ｇ１、２Ｂ１０もしくは１０Ｅ４の抗原結合断片）および哺乳動物
のＣＣＲ４タンパク質またはそのリガンド結合性バリアントを含有する組成物を
混合する工程を包含する。上記の成分は哺乳動物のＣＣＲ４タンパク質またはそ
のリガンド結合性バリアントに対する上記抗体または抗原結合断片の結合に適し
た条件で混合することができ、哺乳動物のＣＣＲ４タンパク質またはリガンド結
合性バリアントに対する上記抗体または断片の結合が、本明細書に記載の方法ま
たは他の適切な方法に従って直接的または間接的に検出もしくは測定される。適
切な対照（例えば試験される試薬の不在下）と比較した複合体形成量の減少は、
その試薬が上記レセプターまたはバリアントに結合することの指標である。哺乳
動物のＣＣＲ４タンパク質またはそのリガンド結合性バリアントを含有する組成
物は、組換えＣＣＲ４タンパク質またはそのリガンド結合性バリアントを産生す
る細胞の膜画分であり得る。抗体またはその断片は放射性同位体、スピン標識、
抗原標識、酵素標識、蛍光基および化学発光基などの標識で標識することができ
る。これらのアッセイおよび類似のアッセイは、ＣＣＲ４を結合し、レセプター
への結合に関して本明細書に記載の抗体と競合できる物質、例えばリガンド（例
えば、ＣＣＲ４と相互作用するケモカイン）またはレセプター機能の阻害物質も
しくは促進物質を含めた他の基質などを検出するために使用できる。

【００１３】本発明によればリガンド、レセプター機能の阻害物質または促進物質を適切な
アッセイで同定し、さらにそれらを治療効果について評価することができる。レ
セプター機能の阻害物質はレセプター活性を阻害（減少または防止）するために
使用でき、リガンドおよび／または促進物質は正常なレセプター機能を必要に応
じて誘導する（惹起するまたは増進する）ために使用できる。本発明は、炎症性
疾患、自己免疫疾患、アテローム性動脈硬化症および移植片拒絶またはＨＩＶ感
染症の治療方法を提供する。この方法は、レセプター機能（例えばケモカインの
結合またはＨＩＶの結合）の阻害物質を個体（例えばヒトなどの哺乳動物）に投
与する工程を包含する。さらに本発明は新規リガンドまたは促進物質を個体に投
与することによってレセプター機能を刺激する方法を提供する。これは例えば感
染性疾患や癌の治療などに役立つ、白血球の機能を選択的に刺激するための新規
の手がかりを提供する。

【００１４】また本発明は患者における白血球の輸送を阻害する方法も含む。この方法は、
哺乳動物のＣＣＲ４またはレセプターの一部に結合してそのレセプターに対する
リガンドの結合に関連する機能を阻害する抗体またはその機能的断片の有効量を
患者に投与する工程を包含する。

【００１５】また、本発明は、炎症性障害などのＣＣＲ４が媒介する障害を抑制または治療
する方法に関する。この方法は、哺乳動物のＣＣＲ４またはレセプターの一部に
結合してＣＣＲ４が媒介する機能を阻害する抗体またはその機能的断片の有効量
を患者に投与する工程を包含する。

【００１６】さらに本発明は、治療（予防を含む）または診断における使用のため本明細書
に記載の抗体もしくはその断片（例えば、モノクローナル抗体１Ｇ１、モノクロ
ーナル抗体２Ｂ１０もしくはモノクローナル抗体１０Ｅ４、または１Ｇ１、２Ｂ
１０もしくは１０Ｅ４の抗原結合断片、または１Ｇ１、２Ｂ１０もしくは１０Ｅ
４のものと同一または類似のエピトープ特異性を持つ抗体）ならびにＣＣＲ４が
媒介する障害または本明細書に記載の他の疾患もしくは炎症状態を処置するため
の医薬品を製造するための上記抗体または断片の使用に関する。

【００１７】発明の詳細な説明本発明は、哺乳動物のＣＣケモカインレセプター４（ＣＣＲ４、ＣＫＲ−４、
ＴＡＲＣレセプターもしくはＭＤＣレセプター）またはＣＣＲ４の一部に結合す
る抗体（抗−ＣＣＲ４）またはその機能的断片に関する。一実施態様において、
抗体はヒトＣＣＲ４またはその一部に対する特異性を有する。一実施態様におい
て、抗体（免疫グロブリン）は単離されたおよび／または組換えの哺乳動物のＣ
ＣＲ４またはその一部（例えば、ペプチド）に対してあるいは、哺乳動物のＣＣ
Ｒ４を発現する宿主細胞に対して産生される。好ましい一実施態様において、抗
体は、ヒトＣＣＲ４レセプターまたはその一部に特異的に結合し、また特に好ま
しい一実施態様において、抗体は天然に存在するか、または内因性のヒトのＣＣ
Ｒ４に対して特異性を有する。哺乳動物のＣＣＲ４に特有の１つ以上の機能、例
えば結合活性（例えば、リガンド、阻害物質および／または促進物質の結合）、
シグナル伝達活性（例えば、哺乳動物のＧタンパク質の活性化、細胞質ゾルの遊
離カルシウム濃度［Ｃａ²⁺］_iの急速でそして一時的な増大の誘導）および／ま
たは細胞性の応答の刺激（例えば、化学走性の刺激、エキソサイトーシスまたは
白血球による炎症メディエーターの放出、インテグリン活性化）などを阻害でき
る抗体またはその機能的断片も本発明に包含される。この抗体は、ＣＣＲ４に対
するリガンド（すなわち１つ以上のリガンド）の結合および／またはリガンドに
応答してＣＣＲ４によって媒介される１つ以上の機能を阻害できる。例えば、一
つの局面においては、抗体またはその機能的断片は、レセプターと、ＭＤＣ、Ｔ
ＡＲＣ、ＭＣＰ−１、ＭＩＰ−１αまたはＲＡＮＴＥＳなどの天然リガンドとの
相互作用を阻害（減少または防止）し得る。ある態様では、そのリガンドはＴＡ
ＲＣおよび／またはＭＤＣである。別の局面においては、ＣＣＲ４に結合する抗
体またはその機能的断片は、哺乳動物のＣＣＲ４（例えばヒトのＣＣＲ４、ヒト
以外の霊長類のＣＣＲ４、ネズミのＣＣＲ４、モルモット起源のＣＣＲ４）に対
するＴＡＲＣ、ＭＤＣ、ＭＣＰ−１、ＭＩＰ−１αおよび／またはＲＡＮＴＥＳ
の結合を阻害し得る。本発明の抗体またはその機能的断片は、例えば白血球の輸
送、Ｔ細胞の活性化、炎症メディエーターの放出および／または白血球の脱顆粒
を含む、ヒトのＣＣＲ４によって媒介される機能を阻害し得る。ある特定の態様
では抗体またはその機能的断片がケモカインによって誘発される（例えばＴＡＲ
ＣまたはＭＤＣによって誘発される）細胞の化学走性の阻害を、好ましくは約０
．５０μｇ／ｍｌ未満、好ましくは約０．３０μｇ／ｍｌ未満、より好ましくは
約０．２７μｇ／ｍｌ未満で示す。

【００１８】本発明のさらなる実施態様において、本発明の抗体またはその機能的断片は、
ＣＣＲ４に対するＣＣＲ４リガンド（例えばケモカイン）の結合を、好ましくは
約１．５μｇ／ｍｌ未満のＩＣ₅₀で阻害できる。別の実施態様において、本発明
の抗体またはその機能的断片はＣＣＲ４に対するＣＣＲ４リガンド（例えばケモ
カイン）の結合を約１．５ｎｇ／ｍｌ未満のＩＣ₅₀で阻害できる。

【００１９】ＣＣＲ４に対して特異的なネズミモノクローナル抗体（１Ｇ１、２Ｂ１０およ
び１０Ｅ４と命名した）を本明細書に記載するように産生させた。好ましい一実
施態様において、本発明の抗体はヒトのＣＣＲ４に結合し、本明細書に記載のネ
ズミの１Ｇ１、２Ｂ１０または１０Ｅ４抗体のものと同一もしくは類似のエピト
ープ特異性を有する。ネズミの１Ｇ１モノクローナル抗体のものと同一または類
似のエピトープ特異性を有する抗体は、ヒトＣＣＲ４（例えば、ヒノのＣＣＲ４
産生細胞（例えば、ＣＣＲを産生するトランスフェクタント、ＣＤ８＋細胞、Ｃ
Ｄ４＋細胞、ＣＤＲ４５ＲＯ＋細胞、ＣＤ２５＋細胞、単球、樹状細胞、マクロ
ファージおよび好塩基球））に対する結合に関してネズミの１Ｇ１モノクローナ
ル抗体と競合するそれらの能力によって同定できる。同様に、ネズミの２Ｂ１０
または１０Ｅ４モノクローナル抗体のものと同一もしくは類似のエピトープ特異
性を持つ抗体は、ヒトのＣＣＲ４に対する結合に関してそれぞれネズミの２Ｂ１
０または１０Ｅ４モノクローナル抗体と競合するそれらの能力によって同定でき
る。レセプターのキメラ（例えば、Ｒｕｃｋｅｒら，Ｃｅｌｌ８７：４３７−
４４６（１９９６）に記載されているもの）を使用することにより、ｍＡｂ１
Ｇ１、２Ｂ１０および１０Ｅ４のＣＣＲ４結合部位（すなわちエピトープ特異性
）をマッピングすることができる。あるいは、ＣＣＲ４の特定のアミノ酸配列を
持つペプチドを競合アッセイに使って所定の抗体への結合に関してＣＣＲ４と競
合できるペプチドを同定するペプチドブロッキング法を用いて、抗体のエピトー
プ特異性を評価することもできる。ＣＣＲ４と競合できるペプチドをさらに評価
することで、所定の抗体が結合するＣＣＲ４エピトープをさらに詳しく規定する
ことができる。これらの技術または他の適切な技術を使用することにより、本発
明の抗体のものと同一または類似のエピトープ特異性を持つ抗体を同定できる。

【００２０】また本発明は、本明細書に記載の抗体のうち少なくとも２種類と同一または類
似のエピトープ特異性を持つ二重特異性抗体またはその機能的断片（例えばＦ（
ａｂ’）₂）に関する（例えば、米国特許第５，１４１，７３６号（Ｉｗａｓａ
ら）、米国特許第４，４４４，８７８号、第５，２９２，６６８号、第５，５２
３，２１０号（以上Ｐａｕｌｕｓら）および米国特許第５，４９６，５４９号（
Ｙａｍａｚａｋｉら）を参照されたい）。例えば本発明の二重特異性抗体はｍＡ
ｂ１Ｇ１および２Ｂ１０、ｍＡｂ１Ｇ１並びに１０Ｅ４、またはｍＡｂ２
Ｂ１０および１０Ｅ４と同一もしくは類似のエピトープ特異性を有し得る。

【００２１】本発明の抗体を産生するネズミハイブリドーマ細胞株は、１９９９年１月６日
にＬｅｕｋｏＳｉｔｅ，Ｉｎｃ．，２１５ＦｉｒｓｔＳｔｒｅｅｔ，Ｃａｍ
ｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ０２１４２，Ｕ．Ｓ．Ａ．を代表してアメリカン・タイプ
・カルチャー・コレクション（ＡｍｅｒｉｃａｎＴｙｐｅＣｕｌｔｕｒｅ
Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）、１０８０１、ＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＢｏｕｌｅｖａ
ｒｄ，Ｍａｎａｓｓａｓ，Ｖｉｒｇｉｎｉａ２０１１０，Ｕ．Ｓ．Ａ．に、登
録番号ＨＢ−１２６２４（ＬＳ１４１−１Ｇ１−６５−１５−１（１Ｇ１））お
よびＨＢ−１２６２５（ＬＳ１８５−２Ｂ１０−４−１（２Ｂ１０））で寄託さ
れた。本発明のさらなる抗体を産生するネズミハイブリドーマ細胞株は、２００
０年１月１４日にＬｅｕｋｏＳｉｔｅ，Ｉｎｃ．，２１５ＦｉｒｓｔＳｔｒ
ｅｅｔ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ０２１４２，Ｕ．Ｓ．Ａ．を代表してアメ
リカン・タイプ・カルチャー・コレクション、１０８０１、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔ
ｙＢｏｕｌｅｖａｒｄ，Ｍａｎａｓｓａｓ，Ｖｉｒｇｉｎｉａ２０１１０，
Ｕ．Ｓ．Ａ．に、登録番号（ＬＳ２５７−１０Ｅ４．１．１（
１０Ｅ４））で寄託された。本発明はまた、ＡＴＣＣ登録番号ＨＢ−１２６２４
、ＡＴＣＣ登録番号ＨＢ−１２６２５、およびＡＴＣＣ登録番号の下で寄託されたハイブリーマ細胞株、ならびにＡＴＣＣ登録番号ＨＢ−１２６
２４、ＨＢ−１２６２５およびＡＴＣＣ登録番号の下で寄託され
たハイブリドーマ細胞株により産生されるモノクローナル抗体に関する。

【００２２】本発明の抗体はポリクローナルであってもモノクローナルであってもよく、「
抗体」という用語はポリクローナル抗体とモノクローナル抗体の両方を包含する
ことが意図される。さらにまた、１Ｇ１を利用する本明細書に記載の方法では１
Ｇ１の機能的断片（例えば抗原結合断片）、１Ｇ１と同一または類似のエピトー
プ特異性を有する抗体およびそれらの組み合わせも、必要であれば１Ｇ１とは同
じでなく類似してもいないエピトープ特異性を持つ抗体または断片と組み合わせ
て使用できる；同様に、２Ｂ１０を利用すると記載されている方法では、２Ｂ１
０の機能的断片、２Ｂ１０と同一または類似のエピトープ特異性を持つ抗体およ
びそれらの組み合わせも、必要であれば２Ｂ１０とは同じでなく類似してもいな
いエピトープ特異性を持つ抗体または断片と組み合わせて使用することもできる
ことが理解される。１０Ｅ４を使用すると記載される方法では、１０Ｅ４の機能
的断片、１０Ｅ４と同一または類似のエピトープ特異性を持つ抗体およびそれら
の組み合わせも、必要であれば１０Ｅ４とは同じでなく類似してもいないエピト
ープ特異性を持つ抗体または断片と組み合わせて使用することもできる。本発明
の抗体は適当な免疫原（例えば単離および／または組換えの哺乳動物のＣＣＲ４
タンパク質もしくはその一部）または合成分子（例えば、合成ペプチド）に対し
て産生させることができる。好ましい一実施態様において、レセプターを発現す
る細胞（例えばトランスフェクト細胞）は免疫原としてまたはレセプターに結合
する抗体のスクリーニングに使用され得る。

【００２３】本発明の抗体およびその断片は、本明細書に記載するように治療適用、診断適
用および研究適用において有用である。本発明は、治療（予防を含む）または（
例えば本明細書に記載するような特定の疾患または状態の）診断に使用するため
の、および本明細書に記載するような疾患または状態の治療に使用するための医
薬品の製造における本発明の抗体またはその機能的部分（例えばｍＡｂ１Ｇ１
、２Ｂ１０もしくは１０Ｅ４またはその抗原結合断片）の使用を包含する。

【００２４】免疫化抗原の調製とポリクローナルおよびモノクローナル抗体の産生は本明細
書に記載のようにまたは他の適当な技術を使って行なうことができる。様々な方
法が記載されている（例えばＫｏｈｌｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ，２５６：４９５−
４９７（１９７５）およびＥｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６：５１１−５１９
（１９７６）；Ｍｉｌｓｔｅｉｎら，Ｎａｔｕｒｅ２６６：５５０−５５２
（１９９７）；Ｋｏｐｒｏｗｓｋｉら、米国特許第４，１７２，１２４号；Ｈａ
ｒｌｏｗ，Ｅ．およびＤ．Ｌａｎｅ（１９９８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ
ＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ（コールドスプリングハーバー研究所，ニ
ューヨーク州コールドスプリングハーバー）；Ａｕｓｕｂｅｌ，Ｆ．Ｍ．ら編，
ＣｕｒｒｅｎｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓＩｎＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏ
ｇｙＶｏｌ．２（Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ２７，１９９４年夏）（Ｊｏｈｎ
Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，ニューヨーク州ニューヨーク）のＣｈａｐｔｅｒ
１１（１９９１）などを参照されたい）。一般にハイブリドーマは適当な不死化
細胞株（例えばＳＰ２／０などの骨髄腫細胞株）を抗体産生細胞と融合させるこ
とによって産生され得る。抗体産生細胞、好ましくは脾臓またはリンパ節由来の
細胞は、対象とする抗原で免疫した動物から得られる。融合細胞（ハイブリドー
マ）は選択培養条件を使って単離し、限界希釈法によってクローン化できる。望
ましい結合特性をもつ抗体を産生する細胞は適切なアッセイ（例えばＥＬＩＳＡ
）によって選択し得る。

【００２５】ＣＣＲ４に結合する抗体（ヒト抗体または人工的な抗体を含む）を産生または
単離する他の適切な方法が使用され得る。これは、例えば組換え抗体（例えば、
単鎖ＦｖまたはＦａｂ）をライブラリーから選択する方法や、ヒト抗体または人
工的な抗体のレパートリーを産生できるトランスジェニック動物（例えばマウス
）の免疫化による方法などを含む（例えば、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓら，Ｐｒｏｃ
．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：２５５１−２５５５（１９９３
）；Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓら，Ｎａｔｕｒｅ，３６２：２５５−２５８（１９９
３）；Ｌｏｎｂｅｒｇら、米国特許第５，５４５，８０６号；Ｓｕｒａｎｉら、
米国特許第５，５４５，８０７号などを参照されたい）。

【００２６】単鎖抗体およびキメラ抗体、ヒト化抗体または霊長類化（ｐｒｉｍａｔｉｚｅ
ｄ）（ＣＤＲ移植）抗体ならびに異なる種に由来する部分を含むキメラ抗体また
はＣＤＲ移植単鎖抗体なども、本発明および「抗体」という用語に包含される。
これらの抗体の種々の部分は従来の技術によって化学的に互いに連結されたり、
遺伝子操作技術を使って連続するタンパク質として製造されうる。例えば、キメ
ラ鎖またはヒト化鎖をコードする核酸は、連続したタンパク質を産生するように
発現され得る。例えば、Ｃａｂｉｌｌｙら、米国特許第４，８１６，５６７号、
Ｃａｂｉｌｌｙら、欧州特許第０，１２５，０２３Ｂ１号；Ｂｏｓｓら、米国
特許第４，８１６，３９７号；Ｂｏｓｓら、欧州特許第０，１２０，６９４Ｂ
１号；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ，Ｍ．Ｓ．ら、国際公開第８６／０１５３３号；Ｎｅ
ｕｂｅｒｇｅｒ，Ｍ．Ｓ．ら、欧州特許第０，１９４，２７６Ｂ１号；Ｗｉｎ
ｔｅｒ、米国特許第５，２２５，５３９号；Ｗｉｎｔｅｒ、欧州特許第０，２３
９，４００Ｂ１号；Ｑｕｅｅｎら、米国特許第５，５８５，０８９号、第５，
６９８，７６１号および第５，６９８，７６２号などを参照されたい。また、霊
長類化抗体についてはＮｅｗｍａｎ，Ｒ．ら，ＢｉｏＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１
０：１４５５−１４６０（１９９２）、単鎖抗体についてはＬａｄｎｅｒら、米
国特許第４，９４６，７７８号およびＢｉｒｄ，Ｒ．Ｅ．ら、Ｓｃｉｅｎｃｅ，
２４２：４２３−４２６（１９８８））も参照されたい。

【００２７】さらに、抗体の機能的断片（キメラ抗体、ヒト化抗体、霊長類化抗体または単
鎖抗体の断片を含む）も産生され得る。上述した抗体の機能的断片は、それらの
元となる完全長抗体の少なくとも１つの結合機能および／または調節機能を保持
している。好ましい機能的断片は対応する完全長抗体の抗原結合機能を保持して
いる（例えば哺乳動物のＣＣＲ４を結合する能力を保持している）。特に好まし
い機能的断片は、哺乳動物のＣＣＲ４に特有な１つ以上の機能（例えば結合活性
、シグナル伝達活性および／または細胞性の応答の刺激など）を阻害する能力を
保持している。例えば、一実施態様において、機能的断片はＣＣＲ４と１つ以上
のリガンド（例えばＴＡＲＣ、ＭＤＣ、ＭＣＰ−１、ＭＩＰ−１αおよび／また
はＲＡＮＴＥＳ）との相互作用を阻害しおよび／または１つ以上のレセプターが
媒介する機能（例えば白血球の輸送、細胞へのＨＩＶの侵入、Ｔ細胞の活性化、
炎症メディエーターの放出および／または白血球の脱顆粒）を阻害することがで
きる。

【００２８】例えば、哺乳動物のＣＣＲ４レセプターまたはその一部に結合できる抗体断片
（Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’およびＦ（ａｂ’）₂を含むが、これらに限定されな
い）は本発明に包含される。このような断片は、例えば酵素的切断や組換え技術
によって産生し得る。例えばパパインまたはペプシンによる切断によってそれぞ
れＦａｂ断片またはＦ（ａｂ’）₂断片を生成することができる。抗体は、１つ
以上の停止コドンが天然の停止部位の上流に導入されている抗体遺伝子を使って
種々の切断された形態で産生することもできる。例えばＦ（ａｂ’）₂重鎖部分
をコードするキメラ遺伝子は重鎖のＣＨ₁ドメインとヒンジ領域とをコードする
ＤＮＡ配列を含むように設計することができる。

【００２９】本明細書で使用される「ヒト化免疫グロブリン」という用語は、異なる起源を
持つ免疫グロブリンの部分を含む免疫グロブリンであって少なくとも１つの部分
がヒト起源のものをいう。したがって本発明は、哺乳動物のＣＣＲ４（例えば、
ヒトのＣＣＲ４、ネズミのＣＣＲ４、モルモットのＣＣＲ４）に結合するヒト化
免疫グロブリンであって、ヒト以外の起源（例えばげっ歯類）の抗原結合領域と
、ヒト起源の免疫グロブリン（例えば、ヒトのフレームワーク領域、ヒトの定常
領域またはその一部）の少なくとも一部とを含む免疫グロブリンに関する。例え
ば、ヒト化抗体は、互いに従来の技術（例えば合成）によって化学的に連結され
たまたは遺伝子操作技術を使って連続したポリペプチドとして調製された（例え
ば、キメラ抗体のタンパク質部分をコードするＤＮＡを発現させて連続したポリ
ペプチド鎖を製造することができる）必要な特異性を持つヒト以外の起源（例え
ばマウス）の免疫グロブリンに由来する部分と、ヒト起源の免疫グロブリン配列
に由来する部分（例えば、キメラ免疫グロブリン）を含み得る。本発明のヒト化
免疫グロブリンの別の例は、ヒト以外の起源のＣＤＲ（例えばヒト以外の起源の
抗体に由来する１種以上のＣＤＲ）とヒト起源の軽鎖および／または重鎖由来の
フレームワーク領域とを含有する１つ以上の免疫グロブリン鎖を含有する免疫グ
ロブリン（例えばフレームワーク変異を持つまたは持たないＣＤＲ移植抗体）で
ある。一実施態様において、ヒト化免疫グロブリンは、ヒトのＣＣＲ４に対する
結合に関してネズミの１Ｇ１、２Ｂ１０または１０Ｅ４モノクローナル抗体と競
合し得る。好ましい実施態様では、ヒト化免疫グロブリン（ａ）の抗原結合領域
が（例えば１Ｇ１、２Ｂ１０または１０Ｅ４軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣ
ＤＲ３と、１Ｇ１、２Ｂ１０または１０Ｅ４重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣ
ＤＲ３とからなるヒト化免疫グロブリンの場合のように）１Ｇ１、２Ｂ１０また
は１０Ｅ４モノクローナル抗体に由来する。キメラまたはＣＤＲ移植単鎖抗体も
ヒト化免疫グロブリンという用語に包含される。

【００３０】このようなヒト化免疫グロブリンは、所望のヒト化鎖をコードする遺伝子（例
えばｃＤＮＡ）を作製するために合成および／または組換え核酸を使って産生さ
れ得る。例えば、ヒト化可変領域をコードする核酸（例えば、ＤＮＡ）配列は、
ヒトまたはヒト化鎖をコードするＤＮＡ配列（例えば、予めヒト化された可変領
域から得られるＤＮＡ鋳型）を改変するためにＰＣＲ突然変異導入法を用いて構
築できる（例えばＫａｍｍａｎ，Ｍ．ら，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ．Ｒｅｓ．，１
７：５４０４（１９８９）；Ｓａｔｏ，Ｋ．ら，ＣａｎｃｅｒＲｅｓｅａｒｃ
ｈ，５３：８５１−８５６（１９９３）；Ｄａｕｇｈｅｒｔｙ，Ｂ．Ｌ．ら，Ｎ
ｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓＲｅｓ．，１９（９）：２４７１−２４７６（１９
９１）；Ｌｅｗｉｓ，Ａ．Ｐ．およびＪ．Ｓ．Ｃｒｏｗｅ，Ｇｅｎｅ，１０１
：２９７−３０２（１９９１）などを参照されたい）。バリアントはこれらの方
法または他の適切な方法を使って容易に産生され得る。一実施態様において、ク
ローン化された可変領域は、突然変異され得、所望の特異性を持つバリアントを
コードする配列が選択され得る（例えばファージライブラリーから、例えばＫｒ
ｅｂｂｅｒら、米国特許第５，５１４，５４８号；１９９３年４月１日に公開さ
れたＨｏｏｇｅｎｂｏｏｍら、国際公開第９３／０６２１３号；１９９７年３月
６日に公開されたＫｎａｐｐｉｋら、国際公開第９７／０８３２０号などを参照
されたい）。

【００３１】抗イディオタイプ抗体も提供される。抗イディオタイプ抗体は別の抗体の抗原
結合部位に関わる抗原決定基を認識する。抗イディオタイプ抗体は、二次抗体を
産生するのに使用される動物と同じ種の、好ましくは同じ系統の動物を免疫化す
ることによって、二次抗体に対して産生させることができる。例えば米国特許第
４，６９９，８８０号を参照されたい。

【００３２】また本発明は、ＡＴＣＣ登録番号ＨＢ−１２６２４、ＨＢ−１２６２５およびの下で寄託されたハイブリドーマ細胞株ならびにＡＴＣＣ登録
番号ＨＢ−１２６２４、ＨＢ−１２６２５およびの下で寄託さ
れたハイブリドーマ細胞株によって産生されるモノクローナル抗体に関する。本
発明の細胞株はモノクローナル抗体の産生の他にも用途を有する。例えば、本発
明の細胞株をさらなるハイブリドーマを作製するために、他の細胞（適当な薬剤
標識された（ｄｒｕｇ−ｍａｒｋｅｄ）ヒトの骨髄腫、マウスの骨髄腫、ヒト−
マウスヘテロ骨髄腫またはヒトのリンパ芽球細胞など）と融合させて、モノクロ
ーナル抗体をコードする遺伝子の伝達を提供することができる。またこれらの細
胞株は抗−ＣＣＲ４免疫グロブリン鎖をコードする核酸の供給源として使用する
こともできる。これは、単離し、発現させることができる（例えば任意の適切な
技術を使って他の細胞に移入したとき、例えばＣａｂｉｌｌｙら、米国特許第４
，８１６，５６７号；Ｗｉｎｔｅｒ、米国特許第５，２２５，５３９号を参照さ
れたい）。例えば、再配列された抗−ＣＣＲ４軽鎖または重鎖を含むクローンは
（例えばＰＣＲによって）単離され得るか、またはこれらの細胞株から単離され
るｍＲＮＡからｃＤＮＡライブラリーを作成して抗−ＣＣＲ４免疫グロブリン鎖
をコードするｃＤＮＡクローンが単離され得る。したがって、特異的な免疫グロ
ブリン、免疫グロブリン鎖またはそのバリアント（例えばヒト化免疫グロブリン
）を様々な宿主細胞中またはインビトロ翻訳系中で産生するために、抗体または
その一部の重鎖および／または軽鎖をコードする核酸を組換えＤＮＡ技術に従っ
て取得し使用することができる。例えば、核酸（ｃＤＮＡ、またはヒト化免疫グ
ロブリンもしくは免疫グロブリン鎖などのバリアントをコードするその誘導体を
含む）は、適切な原核生物または真核生物ベクター（例えば発現ベクター）中に
配置され得る。これを適切な宿主細胞中に適当な方法（例えば形質転換、トラン
スフェクション、エレクトロポレーション、感染など）によって導入することが
できる。その結果、核酸が（例えばベクター中または宿主細胞のゲノム中に組み
込まれた）１つ以上の発現制御因子に作動可能な形で連結される。産生のために
は、宿主細胞を発現に適した条件下に（例えば誘導物質、適当な塩類が補足され
た適切な培地、成長因子、抗生物質、栄養補充剤の存在下に）維持することがで
き、それによりコードされたポリペプチドが産生される。所望であれば、コード
されたタンパク質を（例えば、宿主細胞、培地、乳から）回収および／または単
離し得る。この産生方法にトランスジェニック動物の宿主細胞中での発現が包含
されることは理解されるだろう（例えば、１９９２年３月１９日に公開された国
際公開第９２／０３９１８号，ＧｅｎＰｈａｒｍＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ
を参照されたい）。

【００３３】本明細書で記載されているように、本発明の抗体とその機能的断片はＣＣＲ４
に対するリガンドの結合をブロック（阻害）および／またはＣＣＲ４に対するそ
のリガンドの結合に関連する機能を阻害することができる。以下に述べるように
、ＣＣＲ４に対するリガンドの結合の阻害、および／またはレセプターに対する
リガンドの結合に関連する機能を評価するためには、様々な方法を使用すること
ができる。

【００３４】結合アッセイ本明細書で用いられる「哺乳動物ＣＣＲ４」とは、天然に生じる(naturally o
ccuring)もしくは内因性の哺乳動物ＣＣＲ４タンパク質、および天然に生じるも
しくは内因性哺乳動物ＣＣＲ４タンパク質のものと同一であるアミノ酸配列を有
するタンパク質（例えば、組換えタンパク質）をいう。従って、本明細書におい
て規定されるように、前記用語は、成熟受容体タンパク質、多型または対立遺伝
子バリアント、および（例えば、オルタナティブスプライシングまたは他の細胞
プロセスによって産生された）哺乳動物ＣＣＲ４のイソ型、および前記のものの
修飾型または未修飾型（例えば、グリコシル化、非グリコシル化）を含む。哺乳
動物ＣＣＲ４タンパク質は単離および／または組換えタンパク質（合成により生
産されたタンパク質など）でありうる。天然に生じるまたは内因性の哺乳動物Ｃ
ＣＲ４タンパク質としては、成熟ＣＣＲ４などの野生型タンパク質、多型または
対立遺伝子バリアントおよび哺乳動物（例えば、ヒト、非ヒト霊長類）において
、天然に生じる他のイソ型が挙げられる。かかるタンパク質は、例えば、天然に
哺乳動物ＣＣＲ４を生じる供給源から回収または単離されうる。これらのタンパ
ク質および天然に生じるまたは内因性の対応する哺乳動物ＣＣＲ４と同一のアミ
ノ酸配列を有する哺乳動物ＣＣＲ４タンパク質を、対応する哺乳動物の名称によ
って呼称する。例えば、対応する哺乳動物が、ヒトである場合、タンパク質は、
ヒトＣＣＲ４タンパク質（例えば、適切な宿主細胞で産生された組換えヒトＣＣ
Ｒ４タンパク質）として表示される。

【００３５】哺乳動物ＣＣＲ４タンパク質の「機能的バリアント」としては、機能的断片、
機能的変異タンパク質、および／または機能的融合タンパク質（例えば、変異誘
発および／または組換え技術を介して産生されたもの）が挙げられる。一般に、
哺乳動物ＣＣＲ４タンパク質の断片または一部としては、（Ｎ−末端、Ｃ−末端
または内部欠失などの）成熟哺乳動物ＣＣＲ４タンパク質に関してアミノ酸（す
なわち、１以上のアミノ酸）の欠失（すなわち、１以上の欠失）を有するものが
挙げられる。成熟哺乳動物ＣＣＲ４タンパク質に関して連続した(contiguous)ア
ミノ酸のみが欠失された断片もしくはタンパク質、または非連続アミノ酸が欠失
された断片もしくはタンパク質も考えられる。

【００３６】一般に、哺乳動物ＣＣＲ４タンパク質のバリアントとしては、１以上の連続ま
たは非連続アミノ酸残基の付加、欠失および／または置換だけ異なる哺乳動物Ｃ
ＣＲ４タンパク質の天然または人工バリアント（例えば、受容体キメラ）を含む
。かかる変異は、例えば、（他のＣＸＣ（α）および／またはＣＣ（β）ケモカ
イン受容体と比較して）保存領域または非保存領域、細胞外領域、細胞質領域、
または膜貫通領域であり得る。

【００３７】一般に、融合タンパク質は、ペプチド結合を介して、天然に見出される哺乳動
物ＣＣＲ４には存在しない第２の部分(moiety)に連結した、哺乳動物ＣＣＲ４（
例えば、ヒトＣＣＲ４）またはそのバリアントを第１の部分として含有したポリ
ペプチドを包含する。したがって、第２の部分は、アミノ酸、オリゴペプチドま
たはポリペプチドであり得る。第１の部分は、融合タンパク質に対してＮ−末端
位置、Ｃ−末端位置または内部であり得る。１つの態様において、融合タンパク
質は、親和性リガンド（例えば、酵素、抗原、エピトープタグ）を第１の部位と
し、リンカー配列とヒトＣＣＲ４またはその一部とを含有した第２の部位とを含
有する。

【００３８】哺乳動物ＣＣＲ４タンパク質の「機能的断片または一部(portion) 」、「機能
的バリアント」および／または「機能的融合タンパク質」とは、結合活性、シグ
ナル伝達活性および／または細胞応答を刺激する能力などの、本明細書に記載さ
れた哺乳動物ＣＣＲ４タンパク質の少なくとも１つの機能的特徴を有する単離さ
れたおよび／または組換えタンパク質またはポリペプチドをいう。好ましい機能
的バリアントは、リガンド（すなわち、ＴＡＲＣ、ＭＤＣ、ＭＣＰ−１、ＭＩＰ
−１αおよび／またはＲＡＮＴＥＳなどの１以上のリガンド）に結合することが
でき、本明細書において、「リガンド結合バリアント」と称される。

【００３９】１つの態様において、哺乳動物ＣＣＲ４の機能的バリアントは、該哺乳動物Ｃ
ＣＲ４と少なくとも約８５％の配列同一性、好ましくは、該哺乳動物ＣＣＲ４と
少なくとも約９０％の配列同一性、より好ましくは、少なくとも約９５％の配列
同一性を有する。他の態様において、機能的融合タンパク質は、哺乳動物ＣＣＲ
４と少なくとも約８５％、好ましくは、少なくとも約９０％配列同一性、より好
ましくは、哺乳動物ＣＣＲ４と少なくとも約９５％配列同一性を有する第１の部
分を含有する。配列同一性は、Ｂｌａｓｔｘプログラム（バージョン１．４）な
どの適切なプログラムを用い、デフォルトパラメーターなどの適切なパラメータ
ーを用いて決定することができる。１つの態様において、Ｂｌａｓｔｘサーチに
ついてのパラメーターは、スコアリングマトリックスＢＬＯＳＵＭ６２、Ｗ＝３
である。他の態様において、機能的バリアントは、天然に生じる核酸分子と異な
るが、遺伝子コードの縮重により、哺乳動物ＣＣＲ４またはその一部をコードす
る核酸配列を含有する。

【００４０】単離されたおよび／または組換え哺乳動物ＣＣＲ４またはその機能的バリアン
トを含有した組成物(composition) を、結合に適した条件下に維持することがで
き、哺乳動物ＣＣＲ４またはバリアントと、試験対象抗体または断片とを接触さ
せ、結合を直接的または間接的に検出または測定する。１つの態様において、天
然にＣＣＲ４を発現する細胞または哺乳動物ＣＣＲ４またはそのバリアントをコ
ードする組換え核酸配列を含有した細胞が使用される。前記細胞を、受容体の発
現に適した条件下に維持する。前記細胞を、結合に適した条件下で（例えば、適
切な結合緩衝液中で）、抗体または断片と接触させ、標準的な技術によって、結
合を検出する。結合を測定するには、結合の程度を適切な対照について測定する
ことができる（例えば、抗体の非存在下で測定されたバックグラウンドと比較し
、第２の抗体（例えば、標準）の結合と比較し、抗体の非トランスフェクト細胞
への結合と比較する）。受容体を含有した膜画分または受容体を含有したリポソ
ームを含有した膜画分などの細胞画分を全細胞の代わりに使用することができる
。

【００４１】１つの態様において、抗体を適切な標識（例えば、蛍光標識、同位体標識、抗
原またはエピトープ標識、酵素標識）で標識し、標識の検出により、結合を測定
する。他の態様において、結合した抗体を、標識された第２の抗体によって検出
することができる。結合の特異性は、例えば、非標識抗体またはコンペティター
としての非標識抗体またはリガンドを用い、競合または置換によって評価するこ
とができる。

【００４２】また、結合阻害アッセイを用いて、ＣＣＲ４に結合し、かつリガンド（例えば
、ＴＡＲＣ、ＭＤＣ、ＭＣＰ−１、ＭＩＰ−１αおよび／またはＲＡＮＴＥＳ）
などの他の化合物のＣＣＲ４または機能的バリアントへの結合を阻害する抗体ま
たはその断片を同定することができる。例えば、抗体の非存在下におけるリガン
ドの結合と比較して、（抗体の存在下での）ＣＣＲ４のリガンドの結合の減少を
検出または測定する結合アッセイを行なうことができる。単離されたおよび／ま
たは組換え哺乳動物ＣＣＲ４もしくはその機能的バリアントを含有した組成物を
、リガンドおよび抗体と同時、または他方の後に一方を、いずれかの順序で接触
させるうる。抗体の非存在下におけるリガンドの結合の程度の低下は、抗体によ
る結合の阻害の指標である。例えば、リガンドの結合は減少または破壊する(abo
lish) ことができる。

【００４３】１つの態様において、リガンド（例えば、ＴＡＲＣまたはＭＤＣなどのケモカ
イン）の哺乳動物ＣＣＲ４またはそのバリアントの結合の、抗体または断片によ
る直接的阻害をモニターする。例えば、¹²⁵Ｉ−標識ＴＡＲＣ、¹²⁵Ｉ−標識Ｍ
ＤＣ、¹²⁵Ｉ−標識ＭＣＰ−１、¹²⁵Ｉ−標識ＭＩＰ−１αまたは¹²⁵Ｉ−標識
ＲＡＮＴＥＳの哺乳動物ＣＣＲ４への結合を阻害する抗体の能力をモニターする
ことができる。そのようなアッセイは、例えば、単離された血液細胞（例えば、
Ｔ細胞など）または天然にＣＣＲ４を発現する適切な細胞株、または哺乳動物Ｃ
ＣＲ４をコードする核酸を含有する細胞株、または該細胞からの膜画分などの、
ＣＣＲ４を生じる適切な細胞株またはその機能的バリアントを用いて行なうこと
ができる。

【００４４】他の適切な結合アッセイ、またはシグナル伝達機能および／または細胞応答の
刺激（例えば、白血球の輸送）を含む、受容体結合により引き起こされる事象を
モニターする方法などの、ＣＣＲ４に結合する抗体の存在を同定する他の方法が
利用できる。

【００４５】本発明の抗体の阻害効果は、結合阻害アッセイで評価されうることが理解され
よう。受容体結合のための抗体の間の競合を、該方法で評価することもできる。
このようにして同定された抗体をさらに評価して、結合に続いて、それらがＣＣ
Ｒ４の他の機能を阻害するように、および／またはそれらの治療利用性を評価す
るように作用するか否かを判断することができる。

【００４６】シグナル伝達アッセイアゴニストなどのリガンドまたは促進物質のＣＣＲ４への結合は、このＧタン
パク質−共役型受容体によるシグナル伝達がもたらされ得、Ｇタンパク質ならび
に他の細胞内シグナル伝達分子の活性が刺激される。化合物（例えば、抗体また
はその断片）によるシグナル伝達機能の誘導は、いかなる適切な方法を用いても
モニターすることができる。そのようなアッセイを用いて、ＣＣＲ４の抗体アゴ
ニストを同定することができる。抗体またはその機能的断片の阻害活性は、アッ
セイにおいてリガンドまたは促進物質を用い、リガンドまたは促進物質によって
誘導された活性を阻害する抗体の能力を評価し、測定することができる。

【００４７】ＧＴＰのＧＤＰへの加水分解、または細胞内（細胞質）遊離カルシウム［Ｃａ ²⁺ ］_iの濃度の迅速かつ一過性の増加の誘導などの、受容体結合により引き起こ
される後のシグナル伝達事象のようなＧタンパク質活性は、当該分野で公知の方
法または他の適切な方法によってアッセイすることができる（例えば、Ｎｅｏｔ
ｅ，Ｋ．ら，Ｃｅｌｌ７２：４１５−４２５１９９３）；ＶａｎＲ
ｉｐｅｒら，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１７７：８５１−８５６（１９９３）
；Ｄａｈｉｎｄｅｎ，Ｃ．Ａ．ら，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１７９：７５
１−７５６（１９９４））。

【００４８】例えば、ハイブリッドＧタンパク質結合受容体を用いるＳｌｅｄｚｉｅｗｓｋ
ｉらの機能アッセイを用いて、受容体に結合ｓｉ、かつＧタンパク質を活性化す
るリガンドまたは促進物質の能力をモニターすることができる（Ｓｌｅｄｚｉｅ
ｗｓｋｉら，米国特許第５，２８４，７４６号明細書、その教示は、参照により
本明細書に取り込まれる）。

【００４９】かかるアッセイは、評価対象である抗体またはその断片の存在下で行なうこと
ができ、リガンドまたは促進物質によって誘導された活性を阻害する抗体または
断片の能力は、公知の方法および／または本明細書に記載された方法を用いて測
定される。

【００５０】化学走性および細胞刺激のアッセイまた、化学走性アッセイを用いて、リガンドの哺乳動物ＣＣＲ４またはその機
能的バリアントへの結合をブロックする能力、および／またはリガンドの受容体
への結合に関連する機能を阻害する抗体またはその機能的断片の能力を評価する
ことができる。これらのアッセイは、化合物によって誘導されたイン・ビトロま
たはイン・ビボでの細胞の機能的移動に基づく。化学走性は、例えば、９６−ウ
ェル化学走性プレートを用い、または化学走性を評価するための他の当該分野で
認識された方法を用いるアッセイにおいて、実施例に記載したように評価しうる
。例えば、イン・ビトロ経内皮細胞化学走性アッセイの使用はＳｐｒｉｎｇｅｒ
らによって記載されている（Ｓｐｒｉｎｇｅｒら，国際公開第９４／２０１４２
号パンフレット，１９９４年９月１５日に発表、その教示は、参照により本明細
書に取り込まれる；また、Ｂｅｒｍａｎら，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｎｖｅｓｔ．
，１７：６２５−６７７（１９８８））。内皮を通過するコラーゲンゲルへの
移動もまた記載されている（Ｋａｖａｎａｕｇｈら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，
１４６：４１４９−４１５６（１９９１））。例えば、マウスＬ１．２プレ−
Ｂ細胞の、および化学走化しうる適切な宿主細胞の安定なトランスフェクタント
を化学走性アッセイで用いることができる。

【００５１】一般に、化学走性アッセイは、バリアー（例えば、内皮、フィルター）の中へ
のまたはそれを通っての、化合物の増大したレベルに向けての、バリアーの表面
から対向する第２の表面に向けてへの、（リンパ球、好酸球、好塩基球などの）
適切な細胞の方向性運動または移動をモニターする。膜またはフィルターは、適
切な細胞のフィルターへのまたはそれを通っての、フィルターの第２の表面への
、フィルターの第１の表面からフィルターの対向する第２の表面への方向性運動
または移動がモニターされるように、便宜なバリアーを提供する。いくつかのア
ッセイにおいて、膜は、ＩＣＡＭ−１、フィブロネクチンまたはコラーゲンなど
の接着を容易にする物質で被覆する。そのようなアッセイは白血球「ホーミング
(homing)」のイン・ビトロ近似を提供する。

【００５２】例えば、試験対象の抗体と接触し、膜によって第１のチャンバーから分割され
る第２のチャンバーへの多孔性膜へのまたはそれを通っての第１のチャンバーか
らの、（包含手段(a containig means) ）適切な容器中の細胞の移動の阻害を検
出または測定することができる。例えば、ニトロセルロース、ポリカーボネート
を含めた、化合物に応答しての特異的移動をモニターするための適切なポアサイ
ズを有する適切な膜を選択する。例えば、約３−８ミクロン、好ましくは約５−
８ミクロンのポアサイズを用いることができる。ポアサイズはアィルター上で均
一であるか、または適切なポアサイズの範囲内である。

【００５３】移動および移動の阻害を評価するには、フィルターへの移動の距離、フィルタ
ーの第２の表面に接着したままであるフィルターを横切る細胞の数、および／ま
たは第２のチャンバーに蓄積する細胞の数を、標準的な技術（例えば、顕微鏡）
を用いて検出することができる。１つの態様において、細胞を検出可能な標識（
例えば、放射性同位体、蛍光標識、抗原またはエピトープ標識）を用いて測定す
ることができ、移動は、適切な方法を用い、膜に接着したおよび／または第２の
チャンバーに存在するまたは標識の存在を測定することによって（例えば、放射
活性、蛍光、イムノアッセイによって）、抗体または断片の存在または非存在下
で評価することができる。抗体アゴニストによって誘導された移動の程度は、適
切な対照に対して測定することができる（例えば、抗体の非存在下で測定したバ
ックグラウンド移動と比較し、第２の化合物（すなわち、標準）によって誘導さ
れた移動の程度と比較し、抗体によって誘導された非トランスフェクト細胞の移
動と比較する）。

【００５４】１つの態様において、特に、Ｔ細胞、単球、または哺乳動物ＣＣＲ４発現細胞
については、経内皮細胞移動をモニターすることができる。この態様において、
内皮細胞層を介する移動を評価する。細胞層を調製するには、内皮細胞を、所望
により、内皮細胞の付着を容易にするためのコラーゲン、フィブロネクチン、ま
たは他の細胞内マトリックスタンパク質などの物質で被覆される多孔性フィルタ
ーまたは膜上で培養することができる。好ましくは、内皮細胞は、コンフルエン
トな単層が形成されるまで培養する。例えば、ヒト臍帯静脈内皮細胞（Ｃｌｏｎ
ｅｔｉｃｓＣｏｒｐ，ＳａｎＤｉｅｇｏ，ＣＡ）などの、静脈、動脈ま
たは微小血管内皮細胞などの種々の哺乳動物内皮細胞が単層形成のために利用で
きる。特定の哺乳動物受容体に応答しての化学走性を評価するには、同一哺乳動
物の内皮細胞が好ましい；しかしながら、異種哺乳動物種または属からの内皮細
胞も使用できる。

【００５５】一般に、前記アッセイは、第１の表面に内皮細胞層を含むフィルターの第１の
表面からフィルターの対向する第２の表面に向けての、化合物の増大するレベル
に向けての方向での、膜またはフィルターへのまたはそれを通っての細胞の方向
性の移動を検出することによって行われる。方向性の移動は、第１の表面に隣接
する領域から、膜へのまたはそれを通っての、フィルターの対向する側に位置す
る化合物に向けて起こる。第２の表面に隣接する領域に存在する化合物の濃度が
第１の表面に隣接する領域におけるものよりも大きい。

【００５６】抗体阻害物質について試験するのに用いられる１つの態様において、移動でき
、かつ哺乳動物ＣＣＲ４受容体を発現しうる細胞を含有した組成物が、第１のチ
ャンバーに配置されうる。第１のチャンバー中の細胞の化学走性を誘導できる１
以上のリガンドまたは促進物質を含有した組成物（化学誘因機能を有する）を第
２のチャンバーに入れる。好ましくは、細胞を第１のチャンバーに入れる直前ま
たは該細胞と同時に、試験対象の抗体を含有した組成物を、好ましくは、第１の
チャンバーに入れる。このアッセイにおいては、受容体に結合し、哺乳動物ＣＣ
Ｒ４発現細胞の化学走性の、リガンドまたは促進物質による誘導を阻害できる抗
体またはその機能的断片は、受容体機能の阻害物質（例えば、刺激機能の阻害物
質）である。抗体または断片の存在下に、リガンドまたは促進物質によって誘導
される移動の程度の低下は、阻害活性の指標である。別の結合試験（前記参照）
を行なって、阻害が、抗体または受容体の結合の結果であるか、異なるメカニズ
ムを介して起こるか否かを判断できる。

【００５７】組織における化合物（例えば、ケモカインまたは抗体）の注入に応答した組織
の白血球侵潤をモニターするイン・ビボアッセイを後述する（Ｍｏｄｅｌｓｏ
ｆＩｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ参照）。イン・ビボホーミングのこれらのモデル
は、炎症の部位への移動および化学走性によるリガンドまたは促進物質に応答す
る細胞の能力を測定し、およびこの移動をブロックする抗体またはその断片の能
力を評価する。

【００５８】記載された方法において、ＣＣＲ４の刺激機能に対する抗体または断片の効果
は、受容体を含む適切な宿主を用い、活性受容体によって誘導された細胞応答を
モニターすることにより評価されうる。

【００５９】哺乳動物のＣＣＲ４機能のさらなるリガンド、阻害物質、および／または促進物
質の同定本発明の抗体および断片の結合および機能を評価するために用いられうる上記
アッセイ法を調整し、哺乳動物ＣＣＲ４、またはその機能的バリアントに結合す
る別のリガンドまたはそれ以外の物質、ならびにＣＣＲ４機能の阻害物質および
／または哺乳動物ＣＣＲ４機能の促進物質を同定することができる。例えば、本
発明の抗体またはその一部を用いた競合アッセイ法によって、本発明の抗体また
はその機能的部分の機能と同一ないし類似した結合特異性を有する薬剤を同定す
ることができる。したがって、本発明は、レセプターのリガンド、または哺乳動
物ＣＣＲ４タンパク質に結合する他の物質、および、レセプター機能の阻害物質
（例えば、アンタゴニスト）または促進物質（例えば、アゴニスト）の同定法を
も包含する。１つの態様において、哺乳動物ＣＣＲ４タンパク質、またはその機
能的バリアントを産生する細胞（例えば、細胞に導入された核酸によりコードさ
れた哺乳動物ＣＣＲ４タンパク質または機能的バリアントを発現するよう改変さ
れた白血球、細胞株または適切な宿主細胞）は、リガンドや、レセプター機能の
阻害物質または促進物質などの、レセプターに結合する他の物質の効力を同定お
よび判定するアッセイ法に用いられる。かかる細胞は、発現されたレセプタータ
ンパク質またはポリペプチドの機能を評価するのに有用である。

【００６０】本発明によれば、リガンド、およびレセプターに結合する他の物質、すなわち
レセプター機能の阻害物質または促進物質を適切なアッセイ法によって同定し、
さらに、治療効果を評価することができる。レセプター機能の阻害物質は、レセ
プター活性を阻害（低下または阻止）するのに用いられ得、リガンドおよび／ま
たは促進物質は、示された正常なレセプター機能を誘導（開始または促進）する
のに用いられうる。したがって、本発明は、レセプター機能の阻害物質を個体（
例えば、哺乳動物）に投与することを含む、自己免疫疾患および移植片拒絶など
の炎症疾患を治療する方法を提供する。さらに、本発明は、レセプター機能の新
規のリガンドまたは促進物質を個体に投与することによって、レセプター機能を
刺激する方法を提供し、白血球機能を選択的に刺激するための新規の手がかりを
提供するが、これは、例えば、感染症や癌の治療に役立つ。

【００６１】本明細書に用いられるように、哺乳動物ＣＣＲ４の「リガンド」とは、天然の
リガンド、ならびに天然リガンドの合成型および／または組換型を含む、哺乳動
物ＣＣＲ４タンパク質に結合する物質の特定の分類群を意味する。哺乳動物ＣＣ
Ｒ４陽性細胞に対する親和性を有する感染病原体（例えば、ＨＩＶなどのウイル
ス）も、哺乳動物ＣＣＲ４タンパク質に結合することができる。選ばれたレセプ
ターの天然のリガンドは、哺乳動物ＣＣＲ４タンパク質のリガンド（例えば、Ｔ
ＡＲＣ、ＭＤＣ、ＭＣＰ−１、ＭＩＰ−１αおよび／またはＲＡＮＴＥＳなどの
ケモカインなど）と同じ哺乳動物由来である。好ましい態様では、哺乳動物ＣＣ
Ｒ４タンパク質のリガンド結合は、高い親和性で生じる。

【００６２】本明細書に用いられるように、「阻害物質」とは、結合活性（例えば、リガン
ド結合、促進物質結合、抗体結合）、シグナル伝達活性（例えば、哺乳動物Ｇタ
ンパク質の活性化、細胞質中の遊離カルシウム［Ｃａ²⁺］_iの急速かつ一過的な
濃度上昇の誘発など）、および／または細胞応答機能（例えば、白血球の走化性
、エキソサイトーシス、または炎症メディエーター放出）など、哺乳動物ＣＣＲ
４タンパク質（例えば、ヒトＣＣＲ４）に特徴的な機能の一つ以上を阻害（低下
または阻止）する物質である。阻害物質は、ＨＩＶが細胞の中に侵入するのを阻
害する物質でもある。阻害物質という語は、レセプターに結合するアンタゴニス
ト（例えば、抗体、天然リガンドのバリアント、低分子量の有機分子、その他リ
ガンド結合の競合阻害物質）、および、レセプターに結合することなく、レセプ
ター機能を阻害する物質（例えば、抗イディオタイプ抗体）などの物質を意味す
る。

【００６３】ここで、「促進物質」とは、結合活性（例えば、リガンド結合、促進物質結合
、抗体結合）、シグナル伝達活性（例えば、哺乳動物Ｇタンパク質の活性化、細
胞質中の遊離カルシウム［Ｃａ²⁺］_iの急速かつ一過的な濃度上昇の誘導など）
、および／または細胞応答機能（例えば、白血球の走化性、エキソサイトーシス
、または炎症メディエーター放出）など、哺乳動物ＣＣＲ４タンパク質（例えば
、ヒトＣＣＲ４）に特徴的な機能の１つ以上を促進（誘導、惹起、亢進、または
増加させる）物質である。促進物質という語は、レセプターに結合するアゴニス
ト（例えば、抗体、別種由来の天然リガンドのホモログなど）、および、レセプ
ターに結合することなくレセプター機能を（例えば、会合するタンパク質を活性
化することによって）促進させる物質を意味する。好ましい態様においては、ア
ゴニストは、天然のリガンドのホモログ以外のものである。

【００６４】したがって、本発明は、哺乳動物のＣＣ−ケモカインレセプター４またはその
リガンド結合バリアントに結合する、リガンド、阻害物質、促進物質、および哺
乳動物ＣＣＲ４タンパク質またはその機能的バリアントに結合する他の物質など
の薬剤を検出または同定する方法にも関する。本方法によれば、試験対象の薬剤
、本発明の抗体または抗原結合断片（例えば、１Ｇ１；２Ｂ１０；１０Ｅ４；１
Ｇ１、２Ｂ１０または１０Ｅ４のエピトープ特異性と同一または類似のエピトー
プ特異性を有する抗体、およびこれらの抗原結合断片）、および哺乳動物のＣＣ
−ケモカインレセプター４またはそのリガンド結合バリアントを含有した組成物
を組合わせることができる。抗体または抗原結合断片が哺乳動物のＣＣ−ケモカ
インレセプター４またはそのリガンド結合バリアントに結合するのに適した条件
下で上記成分を組合わせ、哺乳動物ＣＣ−ケモカインレセプター４またはそのリ
ガンド結合バリアントへの抗体またはその断片の結合を、本明細書記載の方法ま
たは適切な他の方法により、直接または間接的に検出または測定する。適切な対
照（例えば、試験対象の薬剤非存在下）に比べて、形成された複合体の量が減少
すれば、薬剤が該レセプターまたはそのバリアントに結合することの指標となる
。哺乳動物ＣＣ−ケモカインレセプター４またはそのリガンド結合バリアントを
含有した組成物は、組換えケモカインレセプター４またはそのリガンド結合バリ
アントを産生する細胞の膜画分でもよい。抗体またはその断片は、放射性同位元
素、スピン標識、抗原またはエピトープ標識、酵素標識、蛍光基および化学発光
基などの標識によって標識することができる。

【００６５】１つの態様において、本発明は、試験対象の薬剤、本発明の抗体または抗原結
合断片（例えば、１Ｇ１；２Ｂ１０；１０Ｅ４；１Ｇ１、２Ｂ１０または１０Ｅ
４のエピトープ特異性と同一または類似のエピトープ特異性をもつ抗体、または
これらの抗原結合断片）、および哺乳動物のＣＣケモカインレセプター４または
そのリガンド結合バリアントを産生する細胞を組み合わせることを含む、哺乳動
物ＣＣ−ケモカインレセプター４またはそのリガンド結合バリアントに結合する
薬剤を検出または同定する方法に関する。上記成分は、抗体または抗原結合断片
が哺乳動物のＣＣケモカインレセプター４またはそのリガンド結合バリアントに
結合するのに適した条件下で組み合わせられ、該抗体またはその断片によるＣＣ
Ｒ４タンパク質またはそのリガンド結合バリアントへの結合を、本明細書記載の
方法または適切な他の方法により、直接または間接的に検出または測定する。適
切な対照と比べて、形成された複合体の量が減少すれば、薬剤が該レセプターま
たはそのバリアントに結合することの指標となる。抗体またはその断片は、放射
性同位元素、スピン標識、抗原またはエピトープ標識、酵素標識、蛍光基および
化学発光基からなるグループより選択された標識によって標識することができる
。これらのアッセイ、および同様のアッセイを用いて、リガンド（例えば、ケモ
カイン、ＣＣＲ４と相互作用するＨＩＶ株）または他の物質で、レセプター機能
の阻害物質または促進物質など、ＣＣＲ４に結合して、レセプター結合について
、本明細書記載の抗体と競合する物質などの薬剤を検出することができる。

【００６６】前記アッセイ法は、単独で、もしくはそれぞれを組み合わせて、または、適切
な別法と組み合わせて、哺乳動物ＣＣＲ４タンパク質に結合するリガンドまたは
他の物質、および哺乳動物ＣＣＲ４タンパク質またはそのバリアントの阻害物質
または促進物質を同定するために用いることができる。本発明のインビトロ法は
、多数の試料を処理するハイスループットスクリーニング（例えば、９６穴方式
）を行うために調整することができる。ハイスループットスクリーニングを行な
うのに適した量の哺乳動物ＣＣＲ４（例えば、ヒトＣＣＲ４）を発現する細胞を
用いることができるため、このような細胞は、レセプターに結合するリガンドま
たは他の物質、および哺乳動物ＣＣＲ４タンパク質の阻害物質または促進物質を
同定および／または単離するのに有用である。レセプターの発現は、さまざまな
方法でモニターすることができる。例えば、レセプターまたはその一部に結合す
る、本発明の抗体を用いて、発現を観察することができる。また、市販の抗体を
用いて、レセプタータンパク質またはポリペプチド（例えば、ＦＬＡＧでタグし
たレセプター）を含み、抗原またはエピトープでタギングした融合タンパク質の
発現を検出することができ、所望の量を発現する細胞を選択することができる。

【００６７】哺乳動物ＣＣＲ４タンパク質またはその機能的バリアントをコードする核酸を
発現系に組み込んで、レセプタータンパク質またはポリペプチドを産生しうる。
哺乳動物ＣＣＲ４タンパク質またはそのバリアントをコードする組換え核酸を含
有した構築物により、安定にまたは一過的にトランスフェクトされた細胞内、ま
たはレセプターを含む細胞画分（例えば、トランスフェクト細胞、レセプターを
組み込んだリポソーム）の中で発現するレセプターなど、単離および／または組
換え哺乳動物ＣＣＲ４タンパク質またはバリアントを、レセプター機能を調べる
ために用いることができる。所望であれば、前記レセプターをさらに精製するこ
とができる。レセプター機能の試験は、インビトロまたはインビボで行なわれう
る。

【００６８】ヒトＣＣＲ４などの、単離されたおよび／または組換え哺乳動物ＣＣＲ４タン
パク質またはその機能的バリアントを、本明細書に記載したように、レセプター
機能をモニターすることまたは他の適切な技術を用いることにより、化合物の効
果を判定する本方法で用いることができる。例えば、安定または一過的なトラン
スフェクタント（例えば、バキュロウイルス感染Ｓｆ９細胞、マウスＬ１．２プ
レＢ細胞など）を、結合アッセイ法において用いることができる。例えば、ジャ
ーカット細胞、または化学走性しうる他の適切な細胞（例えば、マウスＬ１．２
プレＢ細胞）の安定なトランスフェクタントを走化性アッセイに用いうる。

【００６９】本発明の方法によれば、化合物を個別にスクリーニングしたり、本明細書記載
の方法によって１種以上の化合物を同時に調べることもできる。化合物の混合物
を試験する場合、記載されたプロセスにより選択された化合物を適切な方法（例
えば、ＰＣＲ、シークエンシング、クロマトグラフィー、質量分析法）によって
、（適切に）分離し、同定することができる。試験対象の試料における１種以上
の化合物（例えば、リガンド、阻害物質、促進物質など）の存在も、これらの方
法によって決定することができる。

【００７０】コンビナトリアル化学合成法または別法によって作出された化合物（例えば、
有機化合物、組換えまたは合成したペプチド、“ペプトイド”、核酸など）のラ
ージコンビナトリアルライブラリーを調べることができる（例えば、Ｚｕｃｋｅ
ｒｍａｎ，Ｒ．Ｎ．ら、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，３７：２６７８−２６８５（
１９９４）およびそこで引用されている文献を参照のこと；また、Ｏｈｌｍｅｙ
ｅｒ，Ｍ．Ｈ．Ｊ．ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９０
：１０９２２−１０９２６（１９９３）、ならびに、タグされた化合物について
は、ＤｅＷｉｔｔ，Ｓ．Ｈ．ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳ
Ａ９０：６９０９−６９１３（１９９３）；Ｒｕｔｔｅｒ，Ｗ．Ｊ．ら、米国
特許第５，０１０，１７５号明細書；Ｈｕｅｂｎｅｒ，Ｖ．Ｄ．ら、米国特許第
５，１８２，３６６号明細書；およびＧｅｙｓｅｎ，Ｈ．Ｍ．米国特許第４，８
３３，０９２号明細書参照）。本方法によりコンビナトリアルライブラリーから
選抜された化合物がユニークなタグを持っていれば、クロマトグラフィー法によ
る各化合物の同定が可能になる。

【００７１】１つの態様において、ファージディスプレイ法を用いる。例えば、哺乳動物Ｃ
ＣＲ４タンパク質またはその機能的バリアント、本発明の抗体またはその機能的
部位、およびポリペプチドを提示するファージ（例えば、ファージ、またはライ
ブラリーなどのファージのコレクション）を、抗体またはその一部が哺乳動物Ｃ
ＣＲ４タンパク質またはバリアントに結合するのに適した条件下（例えば、適切
な結合バッファー中）で組み合わせることができる。抗体またはその一部と競合
して、哺乳動物ＣＣＲ４タンパク質またはその機能的バリアントに結合するファ
ージは、標準的な技術または他の適切な方法を用いて検出または選抜することが
できる。結合したファージは、適切な溶出用バッファーを用いて、レセプターか
ら分離することができる。例えば、イオン強度またはｐＨを変えてファージの遊
離をもたらすことができる。または、溶出用バッファーは、遊離成分、または、
化合物の結合を破壊するように設計された成分（例えば、結合を競合阻害するリ
ガンド、阻害物質、および／または促進物質など、提示されたペプチドがレセプ
ターに結合するのを破壊できる１種以上の化合物）を含有する。任意に、選抜プ
ロセスを繰り返したり、別の選抜ステップを用いて、レセプターに結合するファ
ージをさらに富化することができる。提示されたポリペプチドの特徴を（例えば
、ファージＤＮＡの配列を決定して）調べることができる。同定されたポリペプ
チドを産生させて、さらに結合について、および阻害物質または促進物質の機能
について調べることができる。かかるペプチドのアナログで、安定性が増加した
か、他の所望の性質を有するペプチドアナログを製造することができる。

【００７２】１つの態様において、任意の配列の核酸によってコードされたＮ末側ペプチド
を有するコートタンパク質を含有し、融合タンパク質を発現し提示するファージ
を作出することができる。哺乳動物ＣＣＲ４タンパク質またはバリアント、およ
び抗−ＣＣＲ４抗体またはその機能的部位を発現する適切な宿主細胞をファージ
と一緒にして、結合してファージを選抜し、回収して特徴を調べる。（例えば、
ＤｏｏｒｂａｒおよびＷｉｎｔｅｒ、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２４４：３６１（
１９９４）（Ｇタンパク質共役型レセプターとともに用いられるファージディス
プレイ法を検討している）、および１９９７年３月６日に公開された国際公開第
９７／０８３２０号パンフレット（Ｍｏｒｐｈｏｓｙｓ）を参照のこと）。

【００７３】哺乳動物ＣＣＲ４タンパク質のリガンド、それに結合する他の物質、またはそ
の阻害物質および／または促進物質の可能性のあるものが得られる他のソースと
しては、限定されないが、ＴＡＲＣ、ＭＤＣ、ＭＣＰ−１、ＭＩＰ−１αおよび
／またはＲＡＮＴＥＳの天然、合成、または組換えバリアントなどのＣＣＲ４リ
ガンドのバリアント、他の化学誘引物質またはケモカインなどの物質、それらの
バリアント、低分子量有機分子、他の阻害物質および／または促進物質（例えば
、抗−ＣＣＲ４抗体、アンタゴニスト、アゴニストなど）、他のＧタンパク質共
役型レセプターリガンド、阻害物質および／または促進物質（例えば、アンタゴ
ニスト、アゴニストなど）、および、適切なレセプターペプチド、またはレセプ
ター機能を阻害することのできる適切なレセプターペプチドまたはアナログなど
、哺乳動物ＣＣＲ４レセプターの可溶性部分（例えば、Ｍｕｒｐｈｙ，Ｒ．Ｂ．
，国際公開第９４／０５６９５号パンフレットを参照）などが挙げられる。

【００７４】炎症のモデル本発明の抗体および断片のインビボでの治療薬としての効果を判定するために
用いることのできるインビボの炎症モデルを利用することができる。例えば、ウ
サギ、マウス、ラット、モルモット、またはアカゲザルなど、適当な動物にケモ
カインと、哺乳動物ＣＣＲ４に反応する抗体またはその断片を皮内注射したとき
の白血球の浸潤をモニターすることができる（例えば、ＶａｎＤａｍｍｅ、Ｊ
．ら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１７６：５９−６５（１９９２）；Ｚａｃｈａｒ
ｉａｅ，Ｃ．Ｏ．Ｃ．ら、；Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１７１：２１７７−２１８
２（１９９０）；Ｊｏｓｅ，Ｐ．Ｊ．ら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１７９：８８
１−８８７（１９９４）参照）。一つの実施態様において、皮膚の生検を、白血
球（例えば、好酸球、顆粒球など）の浸潤について組織学的に判定する。別の実
施態様において、化学走性および血管外遊出能力をもつ標識された細胞（例えば
、哺乳動物ＣＣＲ４を発現する安定にトランスフェクトされた細胞で、¹¹¹Ｉｎ
で標識されたもの）を動物に投与する。例えば、判定対象の抗体または断片は、
リガンドまたはアゴニストを試験動物に投与する前か後、またはこれと同時に投
与することができる。阻害物質不在下での浸潤の程度と較べた場合の、抗体存在
下での浸潤の程度の減少が阻害の指標となる。

【００７５】診断および治療への適用本発明の抗体および断片は、研究、診断、および治療への適用など、さまざま
な適用場面に役立つ。一つの実施態様において、適当な標識（例えば、蛍光標識
、化学発光標識、アイソトープ標識、抗原またはエピトープ標識、または酵素標
識）によって抗体を標識する。例えば、それらを用いて、レセプターまたはその
一部を単離および／または精製したり、レセプター構造（例えば、立体構造）お
よび機能を研究することができる。

【００７６】さらに、本発明のさまざまな抗体を用いて、ＣＣＲ４を検出したり、例えば、
Ｔ細胞（例えば、ＣＤ８＋細胞、ＣＤ４５ＲＯ＋細胞）、単球、および／または
レセプター遺伝子でトランスフェクトされた細胞などの上でのレセプター発現を
測定することができる。したがって、診断や研究目的で、細胞選別（例えば、フ
ローサイトメトリー、蛍光標示式細胞分取）などに適用することもできる。

【００７７】本発明の抗−ＣＣＲ４抗体は、診断に適用する上で価値がある。抗−ＣＣＲ４
抗体またはその断片は、抗−ＣＤ４をＨＩＶの段階の診断指標として用いたとき
と同様の方法で、各個体におけるこのレセプターの発現をモニターすることがで
きる。

【００７８】一般的に、診断アッセイでは、抗体またはその断片がＣＣＲ４に結合してでき
る複合体の形成を検出する必要がある。診断目的で、抗体または抗原結合断片を
標識したり、非標識化することができる。抗体または断片を直接標識することが
できる。放射性核種、蛍光剤、酵素、酵素基質、酵素補助因子、酵素阻害物質お
よびリガンド（例えば、ビオチン、ハプテンなど）などがあるが、これらに限定
されない、さまざまな標識を用いることができる。数多くの適切な免疫アッセイ
法が当業者に知られている（例えば、米国特許第３，８１７，８２７号；第３，
８５０，７５２号；第３，９０１，６５４号および第４，０９８，８７６号を参
照）。標識されていないときには、例えば、凝集アッセイ法など、適当な手段を
用いて、抗体または断片を検出することができる。非標識抗体または断片は、最
初の抗体と反応する標識抗体（例えば、二次抗体）など、抗体を検出するために
使用できる別の（すなわち、一つ以上の）適当な試薬（例えば、抗イディオタイ
プ抗体、または、非標識免疫グロブリンに特異的な別の抗体）、または他の適当
な試薬（例えば、標識されたプロテインＡ）と組み合わせて用いることもできる
。

【００７９】一つの実施態様において、本発明の抗体または断片は、酵素免疫測定法に利用
することができるが、その場合、本発明の抗体または断片、もしくは二次抗体が
酵素に結合している。哺乳動物ＣＣＲ４タンパク質を含む生物学的試料を該抗体
と合わせると、抗体とＣＣＲ４タンパク質の間で結合が生じる。一つの実施態様
において、ヒト血液のように、哺乳動物ＣＣＲ４タンパク質を発現する細胞を含
む試料を該抗体と合わせると、抗体と、該抗体によって認識されるエピトープを
含むヒトＣＣＲ４タンパク質を有する細胞との間で結合が生じる。これらの結合
細胞を非結合の試薬から分離し、例えば、試料を、酵素作用を受けると発色やそ
の他検出可能な変化を生じる酵素基質に接触させて、細胞に特異的に結合してい
る抗体−酵素結合物の存在を測定することができる。別の実施態様において、本
発明の抗体を標識せずに、該抗体を認識する標識二次抗体を加えることができる
。

【００８０】生物学的試料中に哺乳動物ＣＣＲ４タンパク質が存在することを検出するとき
に使用するキットを調製することもできる。このようなキットには、哺乳動物Ｃ
Ｃ−ケモカインレセプター４または該レセプターの一部に結合する抗体またはそ
の機能的断片、および、抗体または断片とＣＣＲ４またはその一部との間の複合
体の存在を検出するのに適した一種類以上の補助試薬が含まれている。本発明の
抗体組成物は、単独、または、別のエピトープに特異的な別の抗体と組み合わせ
て、凍結乾燥した形で提供することができる。抗体は、標識されていてもいなく
ても、添加成分（例えば、トリス、リン酸および炭酸などの緩衝液、安定化剤、
賦形剤、殺生物剤、および／または、例えば、ウシ血清アルブミンなどの不活性
タンパク質）とともにキットに含まれる。例えば、抗体は、添加成分との凍結乾
燥混合物として提供することができるが、もしくは使用者が組み合わせられるよ
うに添加成分を別に提供することもできる。一般的に、これらの添加物質は、活
性抗体量に基づいて約５重量％よりも少なく、通常は、全量で、抗体濃度の約０
．００１重量％以上存在する。モノクローナル抗体に結合できる二次抗体を利用
するとき、この抗体は、例えば、別のバイアル瓶または容器に入れて、キットの
中で提供することができる。二次抗体が存在するときには、この二次抗体は、一
般的には標識されており、上記の抗体処方物と同様の方法で処方することができ
る。

【００８１】同様に、本発明は、哺乳動物ＣＣＲ４またはこのレセプターの一部の細胞によ
る発現を検出および／または定量する方法で、抗体またはその断片が結合するの
に適した条件下で、細胞またはその画分（例えば、膜画分）を含む組成物を、哺
乳動物ＣＣＲ４またはこのレセプターの一部に結合する抗体またはその機能的断
片（例えば、１Ｇ１および／または２Ｂ１０および／または１０Ｅ４）に接触さ
せ、結合をモニターする方法にも関する。抗体と、ＣＣＲ４またはその一部との
間で複合体を形成したことを示す、抗体の検出は、該レセプターの存在を示して
いる。抗体の細胞への結合は、例えば、「結合アッセイ」という見出しの下で上
記したようにして測定することができる。この方法を用いて、（例えば、血液、
唾液などの体液などの試料、またはその他適当な試料中の）個体由来の細胞上で
のＣＣＲ４発現を検出することができる。また、Ｔ細胞または単球の表面におけ
るＣＣＲ４発現量を、例えば、フローサイトメトリーによって測定することがで
き、発現量（例えば、染色強度）が、病気感受性、病気の進行またはリスクと相
関していることがある。

【００８２】ケモカインレセプターは、身体全体、特に、炎症部位に白血球が移動するとき
に機能する。脈管からの炎症細胞の遊出は、白血球および内皮細胞接着タンパク
質および細胞特異的化学誘引物質および活性化因子との相互作用を含む３段階の
プロセスによって制御されている（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ，Ｔ．Ａ．，Ｃｅｌｌ，７
６：３０１−３１４（１９９４）；Ｂｕｔｃｈｅｒ，Ｅ．Ｃ．，Ｃｅｌｌ，６７
：１０３３−１０３６（１９９１）；Ｂｕｔｃｈｅｒ，Ｅ．Ｃ．とＰｉｃｋｅｒ
，Ｌ．Ｊ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ（Ｗａｓｈ．ＤＣ），２７２：６０−６６（１９９
６））。これらは：（ａ）白血球のセレクチンと内皮細胞の炭水化物との間の低
親和性相互作用；（ｂ）白血球の化学誘引物質レセプターと化学誘引物質／活性
化因子との間の高親和性相互作用；ならびに（ｃ）白血球のインテグリンと、免
疫グロブリンスーパーファミリーの内皮細胞接着タンパク質との間の緊密な結合
である。白血球のサブセットが異なると、セレクチン、化学誘引物質レセプター
、およびインテグリンの異なったレパートリーを発現する。さらに、炎症が起き
ると、内皮接着タンパク質の発現、および化学誘引物質および白血球活性化因子
の発現が変わる。その結果、血管外部位に白血球を補充するときの選択性の制御
が非常に多様になる。第二の工程は、白血球化学誘引物質レセプターの活性化が
、セレクチン媒介性のセルローリング（cell rolling）からインテグリン媒介性
の緊密な結合への変化を引き起こすと考えられている点で重要である。この結果
、白血球が血管周囲部位に遊出する準備ができる。化学誘引物質／化学誘引物質
レセプター相互作用も、経内皮遊走、および組織内への局在化にとって重要であ
る（Ｃａｍｐｂｅｌｌ，Ｊ．Ｊ．ら、Ｊ．ＣｅｌｌＢｉｏｌ．，１３４：２５
５−２６６（１９９６）；Ｃａｒｒ，Ｍ．Ｗ．ら、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，４：１７
９−１８７（１９９６））。この遊走は、炎症の中心に導く化学誘引物質の濃度
勾配によって誘発される。

【００８３】ＣＣＲ４は、白血球輸送に重要な役割を果たしている。ＣＣＲ４は、一定の炎
症部位へのＴ細胞、Ｔ細胞サブセット、または単球の遊走に関する重要なケモカ
インレセプターである可能性が高いため、抗−ＣＣＲ４ｍＡｂを用いて、Ｔ細胞
または単球の遊走、特に、自己免疫疾患またはアレルギー反応などのＴ細胞機能
異常、または、アテローム性動脈硬化症など、単球媒介性障害に関連する遊走を
阻害（減少または阻止）することができる。したがって、本発明の抗体およびそ
の断片を用いて、研究や治療への適用場面で、レセプター機能を調節することも
できる。例えば、本明細書記載の抗体および機能的断片は、（ａ）（例えば、リ
ガンド、阻害物質、またはプロモーター（promoter）の）レセプターへの結合、
（ｂ）レセプターのシグナル伝達機能、および／または（ｃ）刺激機能を阻害（
低下または阻止）するための阻害物質として作用することができる。レセプター
機能の阻害物質として作用する抗体は、（例えば、立体構造の変化を生じさせる
ことによって）直接または間接的に、リガンドまたはプロモーターの結合をブロ
ックすることができる。例えば、抗体は、リガンドの結合を阻害することによっ
て、または、（リガンドの結合を阻害したり、阻害することなしに）脱感作する
ことによってレセプター機能を阻害することができる。レセプターに結合する抗
体は、レセプター機能のアゴニストとしても作用することができ、レセプターに
結合して、レセプターのシグナル伝達機能および／または刺激機能（例えば、白
血球の輸送）などのレセプター機能を開始または刺激する。

【００８４】このように、本発明は、哺乳動物（例えば、ヒトの患者）における白血球の輸
送を阻害する方法で、哺乳動物に本発明の抗体またはその機能的断片を有効量投
与することを含む方法を提供する。本発明の抗体または断片を投与すると、疾病
状態の改善または解消をもたらすことができる。

【００８５】また、本発明の抗体またはその機能的断片は、ケモカインの結合によるＣＣＲ
４レセプターの活性化が関与している病気の治療に用いることができる。例えば
、抗体またはその機能的断片（例えば１Ｇ１および／または２Ｂ１０および／ま
たは１０Ｅ４またはその機能的断片）を用いて、アレルギー、アテローム発生、
アナフィラキシー、悪性腫瘍、慢性および急性炎症、ヒスタミンおよびＩｇＥ媒
介性のアレルギー反応、ショック、および慢性関節リューマチ、アテローム性動
脈硬化症、多発性硬化症，同種移植片拒絶、線維症、喘息、および炎症性糸球体
症を治療することができる。

【００８６】ＣＣＲ４レセプター機能の阻害物質（抗体またはその好適な断片など）を用い
て治療可能な、ヒトまたは他の生物種の病気または症状には以下のものがあるが
，それらに限定されない。すなわち：

【００８７】 ● 喘息、アレルギー性鼻炎、過敏性肺疾患、過敏性肺炎、間質性肺疾患（Ｉ
ＬＤ）（例えば特発性肺線維症、または慢性関節リューマチと関連したＩＬＤ、
全身性エリテマトーデス、強直性脊椎炎、全身性硬化症、シェーグレン症候群、
多発性筋炎または皮膚筋炎）等の呼吸器系統のアレルギー性疾患；アナフィラキ
シーまたは過敏性反応、（例えばペニシリン、セファロスポリンに対する）薬物
アレルギー、昆虫の刺毛アレルギー；クローン病および潰瘍性大腸炎等の炎症性
腸疾患；脊椎関節症；硬皮症；乾癬、および皮膚炎、湿疹、アトピー性皮膚炎、
アレルギー性接触皮膚炎，蕁麻疹のような炎症性皮膚炎；血管炎（例えば壊死性
血管炎，皮膚血管炎および過敏性血管炎）を含む、炎症性またはアレルギー性の
疾患および症状；

【００８８】 ● 関節炎（例えば慢性関節リューマチ、乾癬性関節炎）、多発性硬化症、全
身性エリテマトーデス、重症筋無力症、若年性糖尿病、糸球体腎炎等の腎炎，自
己免疫性甲状腺炎、ベーチェット病等の自己免疫疾患；

【００８９】 ● 同種移植片拒絶または移植片対宿主疾患を含む移植片拒絶（例えば臓器移
植における）；

【００９０】 ● アテローム性動脈硬化症；

【００９１】 ● 皮膚または器官の白血球の浸潤を伴う癌；

【００９２】 ● 望ましくない炎症反応を阻害することで治療できる他の疾患または症状
（ＣＣＲ４媒介性疾患または症状を含む）には、再潅流障害，ある種の血液学的
な悪性腫瘍、サイトカインが誘発する毒性（例えば敗血症性ショック，内毒性シ
ョック）、多発性筋炎、皮膚筋炎、および全身性肉芽腫症を含む肉芽腫性疾患な
どがあるが、それらに限定されない

【００９３】ＣＣＲ４レセプター機能のプロモーター（抗体およびその断片を含む）を用い
て治療可能な疾患または症状には以下のものがあるが、それらに限定されない：

【００９４】 ● たとえばＡＩＤＳのような免疫不全症候群に罹った個体、免疫抑制を生じ
る放射線治療、化学治療、自己免疫疾患の治療または他の薬物治療（例えば副腎
皮質ホルモン治療）を受けている個体における免疫抑制；およびレセプター機能
の先天的な不全または他の原因による免疫抑制。

【００９５】本発明の抗−ＣＲＲ４抗体は、１種類以上のケモカインの結合をブロックする
ことができ、その結果、上述の障害をもたらす一つ以上の事象のカスケードの下
流をブロックすることができる。

【００９６】投与法本発明の一つ以上の抗体または断片は、適当な経路で、単独で、または別の薬
物または薬剤と組み合わせて（その投与前に、同時に、または投与後に）、個体
に投与することができる。例えば、本発明の抗体は、他のモノクローナル抗体ま
たはポリクローナル抗体と組み合わせて（例えば、ＣＣＲ３およびＣＣＲ５など
であるが、これらに限定されない、他のケモカインレセプターに結合する抗体を
組み合わせて）、または、予防処置または治療処置に用いる市販のガンマグロブ
リン製剤および免疫グロブリン製剤のような既存の血液血漿産物と組み合わせて
用いることもできる。本発明の抗体または断片は、抗生物質および／または抗菌
剤と共に供される、別個に投与される組成物として用いることができる。

【００９７】有効量の抗体または断片（すなわち１種類以上の抗体または断片）が投与され
る。有効量とは，ＣＣＲ４機能を阻害し、それによって、炎症反応またはＨＩＶ
感染を阻害するのにするのに十分な量、または、上述のように、ＣＣＲ４機能を
促進するのに十分な量というように、投薬条件下で、所望の治療効果（予防も含
む）を達成するのに十分な量のことである。

【００９８】経口、摂食、局部、非経口（例えば、静脈内、動脈内、筋肉内、および皮下へ
の注射）、吸入、（例えば、気管支内、眼球内、鼻腔内または経口吸入、点鼻剤
）などであり、必ずしもこれらに限定されない、さまざまな投与経路が、治療対
象の疾患と症状に応じて可能である。他の適当な投与方法には、再充填可能な、
または生物分解性のデバイス（devices）や、緩徐放出ポリマーデバイスなどが
ある。本発明の医薬組成物は、他の薬剤との併用治療の一部として投与すること
も可能である。

【００９９】投与対象の抗体または断片の処方は、選択した投与経路および処方（例えば、
溶液、乳濁物、カプセルなど）によって様々である。投与対象の抗体またはその
機能的断片を含む、適当な医薬組成物を生理学的に許容できるビヒクル（vehicl
e）や担体に入れて調製することができる。抗体および／または断片の混合物を
用いることもできる。溶液または乳濁物の場合、適当な担体は、例えば、生理食
塩水や緩衝化媒体などの、水溶液もしくはアルコール／水溶液、乳濁物もしくは
懸濁物などである。非経口的なビヒクルには、塩化ナトリウム溶液、リンガーの
デキストロース、デキストロース、および塩化ナトリウム、乳酸加リンガーのま
たは固定された油などがある。水、緩衝化された水、緩衝化生理食塩水、ポリオ
ール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、液体ポリエチレングリコ
ールなど）、デキストロース液、およびグリシンなど、当業者には、さまざまな
適当な水性担体が知られている。静脈内ビヒクルとしては、さまざまな添加剤、
保存剤、または液剤、栄養素または電解質の補充剤などがある（一般的には、レ
ミントンの薬剤科学、第１６版、マック編、１９８０（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ
ＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅ，１６ｔｈ，Ｅｄｉｔｉｏｎ
，Ｍａｃｋ，Ｅｄ．１９８０）を参照）。該組成物は、例えば、酢酸ナトリウム
、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、および乳酸ナトリウムなど
のｐＨ調節剤、緩衝剤、および毒性調節剤のように、生理的条件に近づけるのに
必要な薬学的に許容される補助物質を任意に含むことができる。本発明の抗体お
よび断片は、当技術分野において既知の凍結乾燥および再構成の技術によって、
貯蔵するために凍結乾燥し、使用する前に適当な担体中で再構成することができ
る。選択した媒体中の活性成分の至適濃度は、所望の最終的な薬剤処方に応じて
、当業者に公知の手順によって経験的に決定される。吸入の場合には、抗体また
は断片を可溶化し、適当な投薬用容器（例えば、アトマイザー、ネブライザー、
または加圧エアロゾル投薬容器）に入れることができる。

【０１００】ここで、以下の実施例によって、本発明をさらに具体的に説明するが、それら
は、本発明の範囲を制限するためのものではない。本明細書において引用されて
いるすべての文献が教示するところは、すべて参照してここに組み込まれる。

【０１０１】実施例材料および方法ＣＣＲ４の安定なトランスフェクタントの構築側方にそれぞれＨｉｎｄＩＩＩ部位とＸｂａＩ部位を含む５^`−オリゴヌクレ
オチドプライマー（５’−ＣＣＡＡＣＣＡＡＧＣＴＴＡＴＧＡＡＣＣＣＣＡＣＧ
ＧＡＴＡＴＡＧＣＡＧ−３’；配列番号：１）および３’−オリゴヌクレオチド
プライマー（５’−ＣＣＡＡＣＣＴＣＴＡＧＡＴＴＡＧＡＧＣＡＴＣＡＴＧＧＡ
ＧＡＴＣＡＴＧＡＴＣＣ−３’；配列番号：２）を用いたＰＣＲによって、ＣＣ
Ｒ４ｃＤＮＡを得た。ＰＣＲ断片をｐＭＲＢ１０１のＨｉｎｄＩＩＩおよびＸｂ
ａＩ部位にサブクロニーングし、挿入した遺伝子をＣＭＶプロモーターによって
作動させた。このＤＮＡを、既述されているように（Ｐｏｎａｔｈら、Ｊ．Ｅｘ
ｐ．Ｍｅｄ．１８３：２４３７（１９９６）；Ｗｕら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ
．２７１：３１２０２（１９９６）；Ｗｕら、Ｎａｔｕｒｅ，３８４：１７９（
１９９６））、マウスのプレＢリンパ腫細胞株（Ｌ１．２またはＬ１／２）の中
に安定にトランスフェクトした。ＴＡＲＣおよびＭＤＣに対する化学走性能力に
ついて、連続稀釈／サブクロニーングを行なって、ＣＣＲ４を高レベル発現する
細胞を選抜した。モノクローナル抗体を作製するには、細胞を５ｍＭの酪酸で１
６〜１８時間処理し、マウスを免疫するために用いた。

【０１０２】細胞および細胞株ボランティアのドナーから静脈血を集め、既述されているように（Ｐｏｎａｔ
ｈら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８３：２４３７（１９９６））、フィコール−ヒ
パーク（ｆｉｃｏｌｌ−ｈｙｐａｑｕｅ）密度勾配遠心によってＰＢＭＣを単離
した。この他に使用した細胞株には、さまざまなケモカインレセプターまたはオ
ーファンＧタンパク質共役型レセプターを発現する、Ｌ１．２マウスプレＢリン
パ腫細胞株のトランスフェクタントなどがある。

【０１０３】ヒト末梢血を１０％（ｖ／ｖ）の０．１ＭＥＤＴＡの中に集めて、１ステッ
プポリモルフ勾配（ニューヨーク州（ＮＹ）のアキュレートケミカル社（Ａｃｃ
ｕｒａｔｅＣｈｅｍｉｃａｌＣｏ．））の上に重層し、室温下、４００×ｇ
で３０分間遠心分離した。好中球および単球の細胞層を集めて、カルシウムおよ
びマグネシウムを含まないＤＰＢＳ（ニューヨーク州グランドアイランド（Ｇｒ
ａｎｄＩｓｌａｎｄ、ＮＹ）のライフテクノロジーズ社（ＬｉｆｅＴｅｃｈ
ｎｏｌｏｇｉｅｓ））に再懸濁して、７５０×ｇで１５分間遠心分離した。この
ペレットをＥ−Ｌｙｓｅ（ニューメキシコ州サンタフェ（ＳａｎｔａＦｅ，Ｎ
Ｍ）のカーディナルアソシエイツ社（ＣａｒｄｉｎａｌＡｓｓｏｃｉａｔｅｓ
）に再懸濁して５分間氷上に置いて、赤血球細胞を好中球画分に溶解した。両方
の細胞画分を氷冷ＤＰＢＳで２回洗浄した。１０⁷個の単球を５×１０⁷細胞／
ｍｌで、１０⁷単球あたり２０μｌのＣＤ１４Ｍｉｌｔｅｎｙｉビーズ（カリフ
ォルニア州オーバーン（Ａｕｂｕｒｎ，ＣＡ）のミルテニイバイオテック社（Ｍ
ｉｌｔｅｎｙｉＢｉｏｔｅｃｈ））とともに、ＰＢＳ、１％ＢＳＡ、５ｍＭ
ＥＤＴＡの中で３０分間４℃でインキュベートして、末梢単球からＣＤ１４陽性
単球を取り出した。そして、これらをスピンダウンして、ＰＢＳ、１％ＢＳＡ、
５ｍＭＥＤＴＡで５×１０⁷細胞／ｍｌになるよう再懸濁して、磁界中に置い
たＶＳカラム（カリフォルニア州オーバーン（Ａｕｂｕｒｎ，ＣＡ）のミルテニ
イバイオテック社（ＭｉｌｔｅｎｙｉＢｉｏｔｅｃｈ））に通して、タギング
されていない細胞を除去した。磁界の外で５ｍｌのＰＢＳ、１％ＢＳＡ、５ｍＭ
ＥＤＴＡをＶＳカラムに流して細胞を除去した。この手順を、ＣＤ４Ｍｉｌｔ
ｅｎｙｉビーズを用いて繰り返してＣＤ４リンパ球を単離し、化学走性アッセイ
に用いる前に、１０％ＦＣＳ（ユタ州（Ｕｔａｈ）８４３２１のハイクローン社
（Ｈｙｃｌｏｎｅ））入りのＤＭＥＭ、２ｎＭグルタミン、５０Ｕ／ｍｌペニシ
リン、５０ｕｇ／ｍｌストレプトマイシン、１ｎＭＭＥＭピルビン酸ナトリウ
ム、１０ｎＭＨｅｐｅｓ（すべて、ニューヨーク州１４０７２、グランドアイ
ランド（ＧｒａｎｄＩｓｌａｎｄ、ＮＹ１４０７２）のギブコ（Ｇｉｂｃｏ）
ＢＲＬ社から入手）の中で一晩インキュベートした。

【０１０４】慢性的に活性化されているＴＨ１およびＴＨ２リンパ球の調製６穴の組織培養皿（Ｆａｌｃｏｎ３０４６，ニュージャージー州フランクリン
レイクス（ＦｒａｎｋｌｉｎＬａｋｅｓ，ＮＪ）のベクトン・ディキンソン・
ラボウエア社（ＢｅｃｋｔｏｎＤｉｃｋｉｎｓｏｎＬａｂｗａｒｅ））を１
０μｇ／ｍｌの抗−ＣＤ２８（ベクトン・ディキンソン社（ＢｅｃｋｔｏｎＤ
ｉｃｋｉｎｓｏｎ））および２μｇ／ｍｌのＯＫＴ３（バージニア州マナッサス
（Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）のアメリカンタイプカルチャーコレクション（Ａｍ
ｅｒｉｃａｎＴｙｐｅＣｕｌｔｕｒｅＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎ））によって
一晩コートした後、ＰＢＳで２回洗浄した。臍帯血のＣＤ４リンパ球（メリーラ
ンド州ジャーマンタウン（ＧｅｒｍａｎＴｏｗｎ，ＭＤ）のポイエティックシ
ステムズ社（ＰｏｉｅｔｉｃＳｙｓｔｅｍｓ））を、１０％ＦＣＳ（ユタ州（
Ｕｔａｈ）のハイクローン社（Ｈｙｃｌｏｎｅ））およびＩＬ−２（４ｎｇ／ｍ
ｌ）入りのＤＭＥＭ、２ｎＭグルタミン、５０Ｕ／ｍｌペニシリン、５０ｕｇ／
ｍｌストレプトマイシン、１ｎＭＭＥＭピルビン酸ナトリウム、１０ｎＭＨ
ｅｐｅｓ（すべて、ニューヨーク州グランドアイランド（ＧｒａｎｄＩｓｌａ
ｎｄＮＹ）のギブコ（Ｇｉｂｃｏ）ＢＲＬ社から入手）の中で、１０⁵〜１０ ⁶ 細胞／ｍｌで培養した。ＩＬ−１２（５ｎｇ／ｍｌ）および抗−ＩＬ４（１ｍ
ｇ／ｍｌ）を用いてＴＨ１を誘発する一方、ＩＬ−４（５ｎｇ／ｍｌ）および抗
−ＩＦＮガンマ（１μｇ／ｍｌ）を用いてＴＨ２を誘発した。４〜５日後、活性
化されたＴＨ１リンパ球とＴＨ２リンパ球を一度ＤＭＥＭで洗浄してから、１０
％ＦＢＳおよびＩＬ−２（１ｎｇ／ｍｌ）入りのＤＭＥＭ中で４〜７日間培養し
た。その後、活性化されたＴＨ１リンパ球とＴＨ２リンパ球を、上記のごとく、
抗−ＣＤ２８／ＯＫＴ３およびサイトカインによって５日間再刺激したが、アポ
トーシスを防止するために抗−ＣＤ９５Ｌ（１ｍｇ／ｍｌ）を加えた。４〜５日
後、ＴＨ１およびＴＨ２リンパ球を洗浄してから、再び、ＩＬ−２とともに４日
間培養した。活性化ＴＨ１およびＴＨ２リンパ球は、このようにして、最大３回
まで維持した。サイトカインはすべて、ＲアンドＤシステムズ社（ニューメキシ
コ州ミネアポリス（Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ、ＭＮ）から入手したが、抗ＩＬ−
４、抗−ＣＤ９５Ｌ、および抗−ＩＦＮガンマはファーミンゲン社（Ｐｈａｒｍ
ｉｎｇｅｎ）（カリフォルニア州サンディエゴ（ＳａｎＤｉｅｇｏ，ＣＡ））
から入手した。

【０１０５】抗−ＣＣＲ４モノクローナル抗体の作製、免疫蛍光染色、およびＦＡＣＳ（登
録商標）解析トランスフェクトされたＣＣＲ４を大量に発現するＬ１．２細胞でマウスを免
疫して、ＣＣＲ４と反応するｍＡｂを作製した。６匹のメスのＣ５７ＢＬ６マウ
スを、１０⁷細胞で２週間隔で８〜１２回腹膜内から免疫し、ＣＣＲ４特異的な
ｍＡｂを同定するために、融合を６回行なった。具体的には、ＣＣＲ４／Ｌ１．
２細胞を静脈内注射してから４日後、脾臓を取り出し、既述のごとく（Ｃｏｌｉ
ｇａｎら、免疫学の最新プロトコル（ＣｕｒｒｅｎｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓｉ
ｎＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ）、ニューヨーク（ＮｅｗＹｏｒｋ）のジョン・ワ
イリー・アンド・サンズ社（ＪｏｈｎＷｉｌｅｙａｎｄＳｏｎｓ））、細
胞をＳＰ２／０細胞株と融合させた。一般的に、一回の融合あたり３０００〜５
０００個のハイブリドーマをスクリーニングした。６回の融合のうち１回におい
て、抗−ＣＣＲ４ｍＡｂを検出した；このｍＡｂを１Ｇ１（ＩｇＧ１）と名付け
た。さらに７回融合を行なって、２番目の抗−ＣＣＲ４ｍＡｂを検出した；この
ｍＡｂを２Ｂ１０（ＩｇＧ２ａ）と呼んだ。また、さらに抗−ＣＣＲ４ｍＡｂを
同定し、１０Ｅ４（ＩｇＧ１）と呼んだ。１Ｇ１、２Ｂ１０、および１０Ｅ４の
ハイブリドーマは、ＤＭＥＭ、１０％ウシ胎仔血清、２ｍＭグルタミン、１ｍＭ
ピルビン酸ナトリウム、および１００ｎｇ／ｍｌのＩＬ−６、ならびにペニシリ
ン（５０ユニット／ｍｌ）およびストレプトマイシン（５０ｕｇ／ｍｌ）の中で
培養することができる。

【０１０６】ケモカインレセプターまたはオーファンＧタンパク質共役型レセプターを発現
する、様々なＬ１．２トランスフェクタントに対する反応性に関して、１Ｇ１、
２Ｂ１０、および１０Ｅ４をスクリーニングした。ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１４、
ＣＤ２０、ＣＤ２５、ＣＤ２６、ＣＤ６９、ＣＤ４５ＲＯ、およびＣＤ４５ＲＡ
に対するＰＥ結合ｍＡｂを、ベクトン・ディキンソン社（ＢｅｃｋｔｏｎＤｉ
ｃｋｉｎｓｏｎ）（カリフォルニア州サンノゼ（ＳａｎＪｏｓｅ、ＣＡ））か
ら入手した。ファーミンゲン社（Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）（カリフォルニア州ラ
ホヤ（ＬａＪｏｌｌａ，ＣＡ））から、同様のｍＡｂ、および抗−ＣＤ９５
ＰＥ、抗−ＣＤ３Ｃｙ−Ｃｈｒｏｍｅ、および抗−ＣＤ４Ｃｙ−Ｃｈｒｏｍ
ｅの供給を受けた。

【０１０７】トランスフェクトされた細胞または白血球に対するｍＡｂの反応性を判定する
ために、間接免疫蛍光法とフローサイトメトリーを用いた。細胞を一度ＰＢＳで
洗浄し、５％ヒト血清および０．１％アジ化ナトリウムを含む１００μｌのＰＢ
Ｓ（染色用緩衝液）、５μｇ／ｍｌ精製抗体、５μｇ／ｍｌＩｇＧ１アイソタ
イプに適合した対照ｍＡｂのＭＯＰＣ２１（ミズーリ州セントルイス（Ｓｔ．Ｌ
ｏｕｉｓ、ＭＯ）のシグマケミカル社（ＳｉｇｍａＣｈｅｍｉｃａｌＣｏ．
））または５０ｍｌのハイブリドーマ培養上清の中に再懸濁した。４℃に２０分
間置いた後、染色用緩衝液で細胞を２回洗浄し、ＦＩＴＣに結合した、アフィニ
ティー精製されたＦ（ａｂ’）２ヤギ抗−マウスＩｇＧ（ペンシルバニア州ウエ
ストグローブ（ＷｅｓｔＧｒｏｖｅ，ＰＡ）のジャクソン・イムノリサーチ
研究所（ＪａｃｋｓｏｎＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈＬａｂｏｒａｔｏｒ
ｉｅｓ））５０ｍｌに再懸濁した。４℃で２０分間インキュベートした後、染色
用緩衝液で細胞を１回洗浄してから、ＦＡＣＳｃａｎ（登録商標）上で解析して
、表面発現量を測定した。

【０１０８】組織および免疫組織化学国立疾患研究交流機関（ＮａｔｉｏｎａｌＤｉｓｅａｓｅＲｅｓｅａｒｃ
ｈＩｎｔｅｒｃｈａｎｇｅ）（ＮＤＲＩ、ペンシルバニア州フィラデルフィア
（Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，ＰＡ））から正常なヒト縦隔リンパ節を入手し
た。既述の技術（Ｓｉｌｂｅｒら、Ｌａｂ．Ｉｎｖｅｓｔ．７０：１６３（１９
９４））を用い、凍結組織試料に対して、ＣＣＲ４についての免疫組織化学的解
析を行なった。抗−ＣＣＲ４ｍＡｂ１Ｇ１（０．３％トリトンＸ１００／０．２
％トゥイーン２０（Ｔｗｅｅｎ２０）／１％ＦＣＳ／５％ヒトＡＢ血清、０．１
％アジ化ナトリウム中１０μｇ／ｍｌ）を組織切片の上に適用し、４℃で一晩イ
ンキュベートした。アイソタイプが適合する無関係なｍＡｂ（ＭＯＰＣ２１；ミ
ズーリ州セントルイス（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）のシグマ社（Ｓｉｇｍａ））
を、縦隔節の段階的切片に対し、陰性対照として同じ濃度で用いた。次に、ビオ
チン化ヤギ抗−マウスＩｇＧおよびアビジン−ビオチン−アルカリホスファター
ゼ複合体（カリフォルニア州サンラモン（ＳａｎＲａｍｏｎ，ＣＡ）のバイオ
ジェネックス社（Ｂｉｏｇｅｎｅｘ））を順々に加えた。内因性アルカリホスフ
ァターゼ活性をブロックするためにレバミゾールを含むファーストレッド（Ｆａ
ｓｔＲｅｄ）（カリフォルニア州サンラモン（ＳａｎＲａｍｏｎ，ＣＡ）の
バイオジェネックス社（Ｂｉｏｇｅｎｅｘ））を色素原として用い、メイヤーの
ヘマトキシリンを対比染色に用いた。

【０１０９】 ¹²⁵Ｉ−ＴＡＲＣ結合 ¹²⁵Ｉで標識したヒトＴＡＲＣをデュポン・ＮＥＮ社（ＤｕＰｏｎｔＮＥＮ
）（マサチューセッツ州ボストン（Ｂｏｓｔｏｎ，ＭＡ））から購入し、非標識
ケモカインは、ペプロテック社（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ）（ニュージャージー州ロ
ッキーヒル（ＲｏｃｋｙＨｉｌｌ，ＮＪ））またはＲ＆Ｄシステムズ社（ニュ
ーメキシコ州ミネアポリス（Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ、ＭＮ））から購入した。
標的細胞へのケモカインの結合は、以下の手順で行なった：ＣＣＲ４／Ｌ１．２
細胞を洗浄して、結合用緩衝液（５０ｍＭＨＥＰＥＳ，ｐＨ７．５，１ｍＭ
ＣａＣｌ₂，５ｍＭＭｇＣｌ₂，および０．５％ＢＳＡ）に１０⁷／ｍｌとな
るよう再懸濁した。各結合反応液（最終容量１００μｌ）について、２５μｌの
細胞懸濁液（２．５×１０⁵細胞）を、適当な量の抗−ＣＣＲ４のｍＡｂ、また
はアイソタイプが適合する対照ｍＡｂとともに、またはそれを入れずに、０．１
ｎＭの放射性標識ケモカインと混合した。全結合は、放射性標識ケモカインのみ
存在するところで測定し、非特異的結合（バックグラウンド）は、１００ｎＭの
非標識ケモカイン存在下で測定した。反応液を室温で４５〜６０分間インキュベ
ートし、混合液をＧＦＢフィルタープレートに移して停止させ、次に、０．５Ｍ
ＮａＣｌを含む結合用緩衝液で２〜３回洗浄した。プレートを乾燥させ、計測
する前にマイクロセイント（ＭｉｃｒｏＳｅｉｎｔ）シンチレーション液を加え
た。各試料は反復して測定した。結果を図５に示す。２Ｂ１０のＩＣ₅₀値は、約
１ｎｇ／ｍｌであり、１Ｇ１のＩＣ₅₀値は約１μｇ／ｍｌであった（カレイダグ
ラフソフトウエア（Ｋａｌｅｉｄａｇｒａｐｈｓｏｆｔｗａｒｅ））。

【０１１０】化学走性アッセイＣＣＲ４／Ｌ１．２トランスフェクタント細胞およびピア（Ｐｅｅｒ）細胞株
を用いた化学走性を、以前の記載にしたがって行なった（Ｗｕら、Ｊ．Ｂｉｏｌ
．Ｃｈｅｍ．２７１：３１２０２（１９９６）；Ｗｕら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．
１８６：１３７３（１９９７））。簡単にいうと、コスター社（Ｃｏｓｔａｒ、
マサチューセッツ州）から入手した３μＭ口径のトランスウエルインサートを用
いた。０．５ｍｌのＲＰＭＩ、０．５％ＢＳＡ、１０ｍＭＨｅｐｅｓ中１００
ｎｇ／ｍｌになるようケモカインを下方のウエルに加えた。調査中の細胞をＲＰ
ＭＩで洗浄してＲＰＭＩ、０．５％ＢＳＡおよび１０ｍＭＨｅｐｅｓ中で４×
１０⁶細胞／ｍｌとなるよう再懸濁した。場合によっては、ｍＡｂを細胞懸濁液
に５０μｇ／ｍｌとなるまで加え、４℃で１０分間結合させた。２００μｌの細
胞懸濁液のアリコート（aliquot）（２×１０⁶個の細胞投入）を各インサート
に加えた。５％ＣＯ₂インキュベーター内に３℃で２〜４時間置いた後、インサ
ートをプレートから外した。トランスウエルの底部チャンバーに遊走した細胞を
、ＦＡＣＳｃａｎ（登録商標）を用いて３０秒間、細胞を数えて数量化した。フ
ォワードアングル（Forward angle）とサイドスキャッターゲート（side scatte
r gates）を、細胞残さまたは無関係な細胞を排出させるために設けた。ＭＤＣ
およびＴＡＲＣに対する化学走性の１Ｇ１阻害のＩＣ₅₀値は約０．２５μｇ／ｍ
ｌであった。

【０１１１】結果ＣＣＲ４は、Ｔ細胞上で発現する、ＴＡＲＣおよびＭＤＣによって特異的に活
性化されうるケモカインレセプターである。ＣＣＲ４の発現と機能をさらに調べ
るため、ヒトＣＣＲ４レセプターに対するモノクローナル抗体（１Ｇ１，２Ｂ１
０および１０Ｅ４）を作製した。モノクローナル抗体１Ｇ１は、ＣＣＲ４／Ｌ１
．２トランスフェクタントを染色するが、他のケモカインレセプターやオーファ
ンＧタンパク質共役型レセプターを発現する２０種類以上の異なるＬ１．２トラ
ンスフェクタントのパネルは染色しなかった（図１）。モノクローナル抗体２Ｂ
１０は、Ｌ１．２ＣＣＲ４トランスフェクタントと反応するが、これまでに調べ
た別の２種類のケモカインレセプタートランスフェクタントと反応しなかった。
モノクローナル抗体（ｍＡｂ）１Ｇ１は、ＣＤ４＋末梢血リンパ球の約１５％を
染色するが、ＣＤ８＋Ｔリンパ球を染色することはほとんどない（図２と３）。
ＣＣＲ４は、活性化メモリーＴ細胞のサブセット上で発現しており；ほとんどの
ＣＬＡ＋／ａ４ｂ７−上で発現しているが、ＣＬＡ−／ａ４ｂ７＋細胞上では発
現しない。より具体的には、ｍＡｂ１Ｇ１は、インビトロ由来のＴｈ２を特異的
に染色するが、Ｔｈ１細胞は染色しない。一方、ＣＸＣＲ３は、ほとんどのＴｈ
１上で発現しているが、Ｔｈ２細胞では発現しない。ＣＣＲ２はどちらの細胞型
でも発現している（図４）。さらに、予備的な免疫組織化学実験では、ＣＣＲ４
が、ヒトの扁桃腺およびいくつか別の組織におけるＴ細胞のサブセット、マクロ
ファージ、および内皮で検出されうることが示されている。ｍＡｂ１Ｇ１は、¹² ⁵ Ｉ標識ＴＡＲＣがＣＣＲ４／Ｌ１．２トランスフェクタントに結合するのを阻
害し（図５）、また、これらの細胞のＴＡＲＣおよびＭＤＣに対する化学走性も
阻害する（図６Ａ〜６Ｄ、７Ａ〜７Ｂ、８、９および１０）。

【０１１２】モノクローナル抗体２Ｂ１０は、Ｌ１．２ＣＣＲ４トランスフェクタントを染
色するが、Ｌ１．２の親細胞株や、別の２種類のケモカインレセプタートランス
フェクタント（ｇｐｒ−９−６とＶ２８）は染色しないと認められた。１Ｇ１と
合わせて考えてみると、２Ｂ１０は、末梢ＣＤ４リンパ球の約１５％のサブセッ
トを染色するが、ＣＤ８リンパ球はほとんど染色しないことが分かった。ＣＤ１
９リンパ球およびＮＫ細胞は、２Ｂ１０では染色されなかった。２Ｂ１０で染色
されたＣＤ４リンパ球は、ＣＤ４５ＲＯの発現によって区別したところ、メモリ
ーＣＤ４リンパ球のサブセットであった。１Ｇ１と合わせて考えてみると、２Ｂ
１０は、インビトロ由来のＴｈ２リンパ球と選択的に反応して、インビトロ由来
のＴｈ１リンパ球とは反応しないことが分かった。化学走性アッセイにおいて、
２Ｂ１０は、末梢血ＣＤ４リンパ球とインビトロ由来のＴｈ２リンパ球のＴＡＲ
ＣおよびＭＤＣに対する化学走性を有意にブロックした。全体的に見て、１０Ｅ
４が、もっとも優れたブロッキングを行なう抗−ＣＣＲ４モノクローナル抗体で
あり、次が２Ｂ１０、その次が１Ｇ１であることが明らかとなった（図１０Ａと
１０Ｂ）。これらをまとめた結果は、ＣＣＲ４およびそのリガンドが、Ｔｈ２媒
介性炎症反応および皮膚では重要な役割を果たしているが、粘膜、Ｔリンパ球の
ホーミングでは、重要な役割は果たしていない可能性を示唆している。

【０１１３】本発明は、その好ましい実施態様を挙げながら、具体的に説明されているが、
添付の特許請求の範囲によって規定される発明の精神と範囲を逸脱することなく
、その形状や細部にさまざまな変更を加えることができることは、当業者の理解
しているところである。

【配列表】

【図面の簡単な説明】

【図１】図１は、様々なＬ１．２トランスフェクタントのｍＡｂ１Ｇ１染色を示すＦ
ＡＣＳｃａｎ（登録商標）プロフィールである。異なるケモカインレセプターＣ
ＣＲ１〜ＣＣＲ８を発現させる安定Ｌ１．２トランスフェクタントを抗−ＣＣＲ
４ｍＡｂ１Ｇ１で染色した。陰性対照染色はどのＬ１．２トランスフェクタ
ントについてもＣＣＲ１／Ｌ１．２細胞の染色と似ていた。

【図２】図２は、末梢血リンパ球の様々な集団でのＣＣＲ４発現を示すＦＡＣＳｃａｎ
（登録商標）ドットプロットである。２色染色プロトコールにより、ｍＡｂ１
Ｇ１（全てのプロットでｘ軸）と、細胞マーカー（全てのプロットでｙ軸）ＣＤ
１４（単球）、ＣＤ４とＣＤ８（Ｔ細胞）、ＣＤ１６とＣＤ５６（ＮＫ細胞）お
よびＣＤ１９とＣＤ２０（Ｂ細胞）とを使って、ＣＣＲ４の発現を評価した。各
プロットにサブセットマーカーを表示する。各象現は対照ｍＡｂの染色に従って
設定した。染色は解析したドナーを示す。

【図３】図３は、ＣＤ４＋Ｔ細胞でのＣＣＲ４発現を示すＦＡＣＳｃａｎ（登録商標）
ドットプロットである。３色染色プロトコールを使って、ＣＤ４＋Ｔ細胞でのＣ
ＣＲ４（全てのプロットでｘ軸）とＴ細胞サブセットマーカー（全てのプロット
でｙ軸）の発現を評価した。各プロットにサブセットマーカーを表示する。各象
現は対照ｍＡｂの染色に従って設定した。染色は解析した複数のドナーを示す。
ＣＤ４＋リンパ球にゲートをかけ、ＣＣＲ４対様々な細胞マーカーをグラフに表
すことによって細胞を解析した。各象現は対照ｍＡｂの染色に従って設定した。
メモリー／ナイーブ（ｎａｉｖｅ）マーカー：ＣＤ４５ＲＯ、ＣＤ４５ＲＡ。セ
レクチン／リガンド：ＣＬＡ、Ｐ−セレクチンリガンド、Ｅ−セレクチンリガン
ド、Ｌ−セレクチン。インテグリン：ＡＣＴ−１（α４β７）、ＣＤ４９ｄ（α
４）、インテグリンβ７、ＣＤ２９（β１）、ＣＤ１０４（β４）およびＣＤ１
０３（αｅ）。ｍＡｂ２Ｂ１０によるＣＣＲ４染色は同じ染色パターンを示す
。

【図４】図４は、Ｔｈ２細胞でのＣＣＲ４の発現を示すＦＡＣＳｃａｎ（登録商標）プ
ロフィールである。臍帯血ＣＤ４リンパ球から２サイクルの活性化によって産生
した慢性活性化Ｔｈ１リンパ球（線）と慢性活性化Ｔｈ２リンパ球（塗り潰した
部分）を陽性対照として抗α４β７ｍＡｂＡｃｔ１で染色した。このインテ
グリンはＴｈ１リンパ球とＴｈ２リンパ球の両方に発現するからである。抗−Ｃ
ＣＲ２ｍＡｂ１Ｄ９による染色はＴｈ１およびＴｈ２ｍＡｂがどちらもＣ
ＣＲ２を発現することを示し、抗−ＣＸＣＲ３ｍＡｂ（Ｒ＆Ｄ、ミネソタ州ミ
ネアポリス）による染色はＣＸＣＲ３がインビトロ誘導Ｔｈ１細胞に選択的に発
現されることを示した。１Ｇ１を使用することにより、ＣＣＲ４はＴｈ２リンパ
球に選択的に発現することを見出した。

【図５】図５は、ｍＡｂ１Ｇ１および２Ｂ１０がＣＣＲ４／Ｌ１．２トランスフェク
タントに対する¹²⁵Ｉ−ＴＡＲＣの結合を阻害することを示すグラフである。Ｃ
ＣＲ４／Ｌ１．２細胞をある用量範囲のｍＡｂ１Ｇ１、ｍＡｂ２Ｂ１０また
はＭＯＰＣ２１（ＩｇＧ１イソタイプ対照）の不在下（総結合量）または存在下
（競合結合量）で０．１ｎＭの¹²⁵Ｉ−ＴＡＲＣと共にインキュベートした。６
０分後に過剰の抗体とケモカインを洗い流し、反応液をカウントした。示された
データは、総結合量に対する阻害パーセントである。

【図６】図６Ａ−６Ｄは、ＴＡＲＣおよびＭＤＣに対するＣＣＲ４／Ｌ．１２化学走性
のｍＡｂ１Ｇ１による阻害を示すグラフである。トランスウェル化学走性アッ
セイにおいてＣＣＲ４／Ｌ１．２細胞をｍＡｂ１Ｇ１またはｍＡｂＭＯＰＣ
２１（イソタイプ対照）の存在下または不在下でＴＡＲＣまたはＭＤＣに向かっ
て走化させた。図６Ａおよび６Ｂではある濃度範囲のケモカインを２０μｇ／ｍ
ｌのｍＡｂ１Ｇ１およびＭＯＰＣ２１と共に使用した。図６Ｃおよび６Ｄでは
５ｎＭのケモカインをある濃度範囲の１Ｇ１およびＭＯＰＣ２１と共に使用した
。移動した細胞数は前方散乱と側方散乱を用いてフローサイトメトリーによって
カウントした。

【図７】図７Ａ−７Ｂは、ＴＡＲＣ（図７Ａ）およびＭＤＣ（図７Ｂ）に対するＰｅｅ
ｒ細胞（ヒトデルタ・ガンマＴ細胞レセプター株）化学走性のｍＡｂ１Ｇ１に
よる阻害を示すグラフである。トランスウェル化学走性アッセイにおいてＰｅｅ
ｒ細胞をｍＡｂ１Ｇ１の存在下または不在下でＴＡＲＣまたはＭＤＣに向かっ
て走化させた。ある濃度範囲のＴＡＲＣまたはＭＤＣを５０μｇ／ｍｌの抗−Ｃ
ＣＲ４ｍＡｂ１Ｇ１およびｍＡｂＭＯＰＣ２１（イソタイプ対照）と共に
使用した。移動した細胞数は前方散乱と側方散乱を用いてフローサイトメトリー
によってカウントした。

【図８】図８は、Ｔｈ２の移動に対する抗−ＣＣＲ４ｍＡｂ１Ｇ１および２Ｂ１０
の効果を示す。慢性活性化Ｔｈ１／Ｔｈ２を臍帯血ＣＤ４リンパ球から２サイク
ルの活性化によって産生し、５０μｇ／ｍｌのＩｇＧ１対照ｍＡｂ、抗−ＣＣＲ
４ｍＡｂ１Ｇ１または抗−ＣＣＲ４ｍＡｂ２Ｂ１０と共にプレインキュ
ベートした。氷上で１０分の後、Ｔｈ２細胞を１００ｎｇ／ｍｌのＭＤＣ、ＴＡ
ＲＣまたはＲＡＮＴＥＳに向かって２時間移動させた。ある場合は、ＭＤＣをＭ
ＤＣに対するウサギポリクローナルと共に１０分間プレインキュベートしてから
使用した（ＭＤＣ／−ＭＤＣ）。バックグラウンドの移動を確定するために、下
部ウェルにケモカインを使用しなかった（−）。この時間の後、下部ウェルに蓄
積された細胞をＦＡＣＳＣＡＮを用いてカウントした。

【図９】図９は、２４時間齢のＣＤ４リンパ球の移動に対する抗−ＣＣＲ４ｍＡｂ
１Ｇ１および２Ｂ１０の効果を示す。２４時間齢のＣＤ４リンパ球を５０μｇ／
ｍｌの対照ｍＡｂ、抗−ＣＣＲ４ｍＡｂ１Ｇ１または抗−ＣＣＲ４ｍＡｂ２Ｂ１０と共にプレインキュベートした。氷上で１０分の後、そのＣＤ４リン
パ球を１００ｎｇ／ｍｌのＭＤＣ、ＴＡＲＣまたはＲＡＮＴＥＳに向かって２時
間移動させた。ある場合は、ＭＤＣをＭＤＣに対するウサギポリクローナルと共
に１０分間プレインキュベートしてから使用した（ＭＤＣ／−ＭＤＣ）。バック
グラウンドの移動を確定するために、下部ウェルにケモカインを使用しなかった
（−）。この時間の後、下部ウェルに蓄積した細胞をＦＡＣＳＣＡＮを用いてカ
ウントした。

【図１０】図１０Ａと１０Ｂは、ＭＤＣとＴＡＲＣに対するＬ１．２／ＣＣＲ４トランス
フェクタントの移動をモノクローナル抗体１０Ｅ４、２Ｂ１０および１Ｇ１がブ
ロックすることを示すグラフである。Ｌ１．２／ＣＣＲ４トランスフェクタント
（２×１０⁶細胞／ｍｌＲＰＭＩ、０．５％ウシ血清アルブミン、１０ｍＭ
Ｈｅｐｅｓ）を様々な濃度の精製抗−ＣＣＲ４モノクローナル抗体１０Ｅ４（Ｉ
ｇＧ１）、２Ｂ１０（ＩｇＧ２ａ）および１Ｇ１（ＩｇＧ１）と共に氷上で１０
分間前処理し、次に各２００μｌの細胞のアリコートをＣｏｓｔａｒ３．０μ
Ｍトランスウェルフィルター（Ｃｏｓｔａｒ、マサチューセッツ州ケンブリッ
ジ）を使った化学走性アッセイに使用して、５０ｎｇ／ｍｌのＭＤＣ（図１０Ａ
）または１００ｎｇ／ｍｌのＴＡＲＣ（図１０Ｂ）に向かって走化させた。次に
ＢｅｃｔｏｎＤｉｃｋｉｎｓｏｎのＦＡＣＳＣＡＮで細胞をカウントした。１
０Ｅ４が最もよいブロッキング抗−ＣＣＲ４モノクローナル抗体であり、２Ｂ１
０がこれに続き、１Ｇ１はその次であることがわかった。ＩｇＧ１対照モノクロ
ーナル抗体はＬ１．２／ＣＣＲ４トランスフェクタントのＭＤＣ（３１５±３０
）またはＴＡＲＣ（３８２±１１）への移動に対して何の効果も持たなかった。

【手続補正書】特許協力条約第３４条補正の翻訳文提出書

【提出日】平成１３年１月１２日（２００１．１．１２）

【手続補正１】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】請求項７

【補正方法】変更

【補正の内容】

【手続補正２】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】請求項８

【補正方法】変更

【補正の内容】

【手続補正３】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】請求項４４

【補正方法】変更

【補正の内容】

【手続補正４】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００２１

【補正方法】変更

【補正の内容】

【００２１】本発明の抗体を産生するネズミハイブリドーマ細胞株は、１９９９年１月５日
にＬｅｕｋｏＳｉｔｅ，Ｉｎｃ．，２１５ＦｉｒｓｔＳｔｒｅｅｔ，Ｃａｍ
ｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ０２１４２，Ｕ．Ｓ．Ａ．を代表してアメリカン・タイプ
・カルチャー・コレクション（ＡｍｅｒｉｃａｎＴｙｐｅＣｕｌｔｕｒｅ
Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）、１０８０１、ＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＢｏｕｌｅｖａ
ｒｄ，Ｍａｎａｓｓａｓ，Ｖｉｒｇｉｎｉａ２０１１０，Ｕ．Ｓ．Ａ．に、登
録番号ＨＢ−１２６２４（ＬＳ１４１−１Ｇ１−６５−１５−１（１Ｇ１））お
よびＨＢ−１２６２５（ＬＳ１８５−２Ｂ１０−４−１（２Ｂ１０））で寄託さ
れた。本発明のさらなる抗体を産生するネズミハイブリドーマ細胞株は、２００
０年１月１４日にＬｅｕｋｏＳｉｔｅ，Ｉｎｃ．，２１５ＦｉｒｓｔＳｔｒ
ｅｅｔ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ０２１４２，Ｕ．Ｓ．Ａ．を代表してアメ
リカン・タイプ・カルチャー・コレクション、１０８０１、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔ
ｙＢｏｕｌｅｖａｒｄ，Ｍａｎａｓｓａｓ，Ｖｉｒｇｉｎｉａ２０１１０，
Ｕ．Ｓ．Ａ．に、登録番号ＰＴＡ−１２０３（ＬＳ２５７−１０Ｅ４．１．１（
１０Ｅ４））で寄託された。本発明はまた、ＡＴＣＣ登録番号ＨＢ−１２６２４
、ＡＴＣＣ登録番号ＨＢ−１２６２５、およびＡＴＣＣ登録番号ＰＴＡ−１２０
３の下で寄託されたハイブリーマ細胞株、ならびにＡＴＣＣ登録番号ＨＢ−１２
６２４、ＨＢ−１２６２５およびＡＴＣＣ登録番号ＰＴＡ−１２０３の下で寄託
されたハイブリドーマ細胞株により産生されるモノクローナル抗体に関する。

【手続補正５】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００３２

【補正方法】変更

【補正の内容】

【００３２】また本発明は、ＡＴＣＣ登録番号ＨＢ−１２６２４、ＨＢ−１２６２５および
ＰＴＡ−１２０３の下で寄託されたハイブリドーマ細胞株ならびにＡＴＣＣ登録
番号ＨＢ−１２６２４、ＨＢ−１２６２５およびＰＴＡ−１２０３の下で寄託さ
れたハイブリドーマ細胞株によって産生されるモノクローナル抗体に関する。本
発明の細胞株はモノクローナル抗体の産生の他にも用途を有する。例えば、本発
明の細胞株をさらなるハイブリドーマを作製するために、他の細胞（適当な薬剤
標識された（ｄｒｕｇ−ｍａｒｋｅｄ）ヒトの骨髄腫、マウスの骨髄腫、ヒト−
マウスヘテロ骨髄腫またはヒトのリンパ芽球細胞など）と融合させて、モノクロ
ーナル抗体をコードする遺伝子の伝達を提供することができる。またこれらの細
胞株は抗−ＣＣＲ４免疫グロブリン鎖をコードする核酸の供給源として使用する
こともできる。これは、単離し、発現させることができる（例えば任意の適切な
技術を使って他の細胞に移入したとき、例えばＣａｂｉｌｌｙら、米国特許第４
，８１６，５６７号；Ｗｉｎｔｅｒ、米国特許第５，２２５，５３９号を参照さ
れたい）。例えば、再配列された抗−ＣＣＲ４軽鎖または重鎖を含むクローンは
（例えばＰＣＲによって）単離され得るか、またはこれらの細胞株から単離され
るｍＲＮＡからｃＤＮＡライブラリーを作成して抗−ＣＣＲ４免疫グロブリン鎖
をコードするｃＤＮＡクローンが単離され得る。したがって、特異的な免疫グロ
ブリン、免疫グロブリン鎖またはそのバリアント（例えばヒト化免疫グロブリン
）を様々な宿主細胞中またはインビトロ翻訳系中で産生するために、抗体または
その一部の重鎖および／または軽鎖をコードする核酸を組換えＤＮＡ技術に従っ
て取得し使用することができる。例えば、核酸（ｃＤＮＡ、またはヒト化免疫グ
ロブリンもしくは免疫グロブリン鎖などのバリアントをコードするその誘導体を
含む）は、適切な原核生物または真核生物ベクター（例えば発現ベクター）中に
配置され得る。これを適切な宿主細胞中に適当な方法（例えば形質転換、トラン
スフェクション、エレクトロポレーション、感染など）によって導入することが
できる。その結果、核酸が（例えばベクター中または宿主細胞のゲノム中に組み
込まれた）１つ以上の発現制御因子に作動可能な形で連結される。産生のために
は、宿主細胞を発現に適した条件下に（例えば誘導物質、適当な塩類が補足され
た適切な培地、成長因子、抗生物質、栄養補充剤の存在下に）維持することがで
き、それによりコードされたポリペプチドが産生される。所望であれば、コード
されたタンパク質を（例えば、宿主細胞、培地、乳から）回収および／または単
離し得る。この産生方法にトランスジェニック動物の宿主細胞中での発現が包含
されることは理解されるだろう（例えば、１９９２年３月１９日に公開された国
際公開第９２／０３９１８号，ＧｅｎＰｈａｒｍＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ
を参照されたい）。

【手続補正６】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】図面の簡単な説明

【補正方法】変更

【補正の内容】

【図面の簡単な説明】

【図２】図２Ａ−２Ｂは、末梢血リンパ球の様々な集団でのＣＣＲ４発現を示すＦＡＣ
Ｓｃａｎ（登録商標）ドットプロットである。２色染色プロトコールにより、ｍ
Ａｂ１Ｇ１（全てのプロットでｘ軸）と、細胞マーカー（全てのプロットでｙ
軸）ＣＤ１４（単球）、ＣＤ４とＣＤ８（Ｔ細胞）、ＣＤ１６とＣＤ５６（ＮＫ
細胞）およびＣＤ１９とＣＤ２０（Ｂ細胞）とを使って、ＣＣＲ４の発現を評価
した。各プロットにサブセットマーカーを表示する。各象現は対照ｍＡｂの染色
に従って設定した。染色は解析したドナーを示す。

【図３】図３Ａ−３Ｄは、ＣＤ４＋Ｔ細胞でのＣＣＲ４発現を示すＦＡＣＳｃａｎ（登
録商標）ドットプロットである。３色染色プロトコールを使って、ＣＤ４＋Ｔ細
胞でのＣＣＲ４（全てのプロットでｘ軸）とＴ細胞サブセットマーカー（全ての
プロットでｙ軸）の発現を評価した。各プロットにサブセットマーカーを表示す
る。各象現は対照ｍＡｂの染色に従って設定した。染色は解析した複数のドナー
を示す。ＣＤ４＋リンパ球にゲートをかけ、ＣＣＲ４対様々な細胞マーカーをグ
ラフに表すことによって細胞を解析した。各象現は対照ｍＡｂの染色に従って設
定した。メモリー／ナイーブ（ｎａｉｖｅ）マーカー：ＣＤ４５ＲＯ、ＣＤ４５
ＲＡ。セレクチン／リガンド：ＣＬＡ、Ｐ−セレクチンリガンド、Ｅ−セレクチ
ンリガンド、Ｌ−セレクチン。インテグリン：ＡＣＴ−１（α４β７）、ＣＤ４
９ｄ（α４）、インテグリンβ７、ＣＤ２９（β１）、ＣＤ１０４（β４）およ
びＣＤ１０３（αｅ）。ｍＡｂ２Ｂ１０によるＣＣＲ４染色は同じ染色パター
ンを示す。

【図９】図９は、２４時間齢のＣＤ４リンパ球の移動に対する抗−ＣＣＲ４ｍＡｂ
１Ｇ１および２Ｂ１０の効果を示す。２４時間齢のＣＤ４リンパ球を５０μｇ／
ｍｌの対照ｍＡｂ、抗−ＣＣＲ４ｍＡｂ１Ｇ１または抗−ＣＣＲ４ｍＡｂ
２Ｂ１０と共にプレインキュベートした。氷上で１０分の後、そのＣＤ４リン
パ球を１００ｎｇ／ｍｌのＭＤＣ、ＴＡＲＣまたはＲＡＮＴＥＳに向かって２時
間移動させた。ある場合は、ＭＤＣをＭＤＣに対するウサギポリクローナルと共
に１０分間プレインキュベートしてから使用した（ＭＤＣ／−ＭＤＣ）。バック
グラウンドの移動を確定するために、下部ウェルにケモカインを使用しなかった
（−）。この時間の後、下部ウェルに蓄積した細胞をＦＡＣＳＣＡＮを用いてカ
ウントした。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ｃ１２Ｎ 5/10 Ｇ０１Ｎ 33/532 Ｇ０１Ｎ 33/532 33/566 33/566 33/577 Ｂ 33/577 Ｃ１２Ｐ 21/08 // Ｃ１２Ｐ 21/08 Ｃ１２Ｎ 5/00 Ｂ (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ，ＺＷ )，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ (72)発明者アンドリュー，デビッドアメリカ合衆国マサチューセッツ 02451 ウォールサム，ナンバー1628，ブラックベアドライブ 85 Ｆターム(参考） 4B064 AG27 CA10 CA20 CC24 DA01 DA13 4B065 AA92X AB05 BA08 CA25 CA44 CA46 4C085 AA14 AA16 BB31 BB41 BB43 CC02 CC22 CC23 EE01 GG01 GG02 GG03 GG04 GG08 GG10 4H045 AA11 AA30 CA40 DA75 EA22 EA54 FA72 FA74

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】哺乳動物のＣＣ−ケモカインレセプター４（ＣＣＲ４）また
は該レセプターの一部に結合し、該レセプターへのリガンドの結合を阻害する、
抗体またはその抗原結合断片。
【請求項２】該抗体またはその抗原結合断片がレセプターへのリガンドの
結合に関連する１つ以上の機能を阻害するものである、請求項１記載の抗体また
は抗原結合断片。
【請求項３】哺乳動物のＣＣ−ケモカインレセプター４（ＣＣＲ４）がヒ
トのＣＣ−ケモカインレセプター４（ＣＣＲ４）である、請求項１記載の抗体ま
たはその抗原結合断片。
【請求項４】抗体が：ａ）モノクローナル抗体１Ｇ１；ｂ）１Ｇ１のエピトープ特異性と同一または類似のエピトープ特異性を有する抗
体；ｃ）哺乳動物のＣＣ−ケモカインレセプター４（ＣＣＲ４）への結合に関して１
Ｇ１と競合することができる抗体；ｄ）モノクローナル抗体２Ｂ１０；ｅ）２Ｂ１０のエピトープ特異性と同一または類似のエピトープ特異性を有する
抗体；ｆ）哺乳動物のＣＣ−ケモカインレセプター４（ＣＣＲ４）への結合に関して２
Ｂ１０と競合することができる抗体；ｇ）モノクローナル抗体１０Ｅ４；ｈ）１０Ｅ４のエピトープ特異性と同一または類似のエピトープ特異性を有する
抗体；ｉ）哺乳動物のＣＣ−ケモカインレセプター４（ＣＣＲ４）への結合に関して１
０Ｅ４と競合することができる抗体；およびｊ）哺乳動物のＣＣ−ケモカインレセプター４（ＣＣＲ４）またはその一部に結
合するものである、（ａ）〜（ｉ）のいずれか１つの抗原結合断片、からなる群より選択されるものである、請求項１記載の抗体またはその抗原結合
断片。
【請求項５】リガンドがケモカインである、請求項１記載の抗体またはそ
の抗原結合断片。
【請求項６】ケモカインが、ＴＡＲＣ、ＭＤＣ、ＭＣＰ−１、ＭＩＰ−１
αおよびＲＡＮＴＥＳのいずれか１つ以上である、請求項５記載の抗体またはそ
の抗原結合断片。
【請求項７】ＡＴＣＣ登録番号の下
に寄託された１Ｇ１ハイブリドーマ細胞株。
【請求項８】ＡＴＣＣ登録番号の下
に寄託された２Ｂ１０ハイブリドーマ細胞株。
【請求項９】請求項７記載のハイブリドーマ細胞株によって産生されたモ
ノクローナル抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１０】請求項８記載のハイブリドーマ細胞株によって産生された
モノクローナル抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１１】ａ）哺乳動物のＣＣ−ケモカインレセプター４（ＣＣＲ４
）または該レセプターの一部に結合し、該レセプターへのリガンドの結合を阻害
する、少なくとも１つの抗体またはその抗原結合断片、およびｂ）該抗体またはその抗原結合断片と該哺乳動物のＣＣ−ケモカインレセプター
４（ＣＣＲ４）またはその一部との複合体の存在を検出するのに適した１つ以上
の補助試薬、を含有する、生物学的試料中の哺乳動物のＣＣ−ケモカインレセプター４（ＣＣ
Ｒ４）の存在の検出に使用するための試験キット。
【請求項１２】抗体がｉ）モノクローナル抗体１Ｇ１；ｉｉ）１Ｇ１のエピトープ特異性と同一または類似のエピトープ特異性を有する
抗体；ｉｉｉ）哺乳動物のＣＣ−ケモカインレセプター４（ＣＣＲ４）への結合に関し
て１Ｇ１と競合することができる抗体；ｉｖ）モノクローナル抗体２Ｂ１０；ｖ）２Ｂ１０のエピトープ特異性と同一または類似のエピトープ特異性を有する
抗体；ｖｉ）哺乳動物のＣＣ−ケモカインレセプター４（ＣＣＲ４）への結合に関して
２Ｂ１０と競合することができる抗体；ｖｉｉ）モノクローナル抗体１０Ｅ４；ｖｉｉｉ）１０Ｅ４のエピトープ特異性と同一または類似のエピトープ特異性を
有する抗体；ｉｘ）哺乳動物のＣＣ−ケモカインレセプター４（ＣＣＲ４）への結合に関して
１０Ｅ４と競合することができる抗体；およびｘ）哺乳動物のＣＣ−ケモカインレセプター４（ＣＣＲ４）またはその一部に結
合する、（ｉ）〜（ｉｘ）のいずれか１つの抗原結合断片、からなる群より選択されるものである、請求項１１記載の試験キット。
【請求項１３】哺乳動物のＣＣ−ケモカインレセプター４（ＣＣＲ４）産
生細胞と、哺乳動物のＣＣ−ケモカインレセプター４（ＣＣＲ４）または前記レ
セプターの一部に結合し、かつ該レセプターへのリガンドの結合を阻害する抗体
またはその抗原結合断片の有効量とを接触させる工程を含む、前記リガンドと哺
乳動物のＣＣ−ケモカインレセプター４（ＣＣＲ４）産生細胞との相互作用の阻
害方法。
【請求項１４】細胞が、リンパ球、単球、顆粒球、Ｔ細胞、好塩基球、お
よびＣＣＲ４またはその一部をコードする組換え核酸を含有する細胞からなる群
より選択されるものである、請求項１３記載の方法。
【請求項１５】Ｔ細胞が、ＣＤ８＋細胞、ＣＤ２５＋細胞、ＣＤ４＋細胞
およびＣＤ４５ＲＯ＋細胞からなる群より選択されるものである、請求項１４記
載の方法。
【請求項１６】リガンドがケモカインである、請求項１３記載の方法。
【請求項１７】ケモカインが、ＴＡＲＣ、ＭＤＣ、ＭＣＰ−１、ＭＩＰ−
１αおよびＲＡＮＴＥＳのいずれか１つ以上である、請求項１６記載の方法。
【請求項１８】抗体またはその抗原結合断片が：ａ）モノクローナル抗体１Ｇ１；ｂ）１Ｇ１のエピトープ特異性と同一または類似のエピトープ特異性を有する抗
体；ｃ）哺乳動物のＣＣ−ケモカインレセプター４（ＣＣＲ４）への結合に関して１
Ｇ１と競合することができる抗体；ｄ）モノクローナル抗体２Ｂ１０；ｅ）２Ｂ１０のエピトープ特異性と同一または類似のエピトープ特異性を有する
抗体；ｆ）哺乳動物のＣＣ−ケモカインレセプター４（ＣＣＲ４）への結合に関して２
Ｂ１０と競合することができる抗体；ｇ）モノクローナル抗体１０Ｅ４；ｈ）１０Ｅ４のエピトープ特異性と同一または類似のエピトープ特異性を有する
抗体；ｉ）哺乳動物のＣＣ−ケモカインレセプター４（ＣＣＲ４）への結合に関して１
０Ｅ４と競合することができる抗体；およびｊ）哺乳動物のＣＣ−ケモカインレセプター４（ＣＣＲ４）またはその一部に結
合する（ａ）〜（ｉ）のいずれか１つの抗原結合断片、からなる群より選択されるものである、請求項１３記載の方法。
【請求項１９】ａ）細胞または試験対象の細胞の画分を含有した組成物と
、哺乳動物のＣＣ−ケモカインレセプター４（ＣＣＲ４）または該レセプターの
一部に結合し、該レセプターへのリガンドの結合を阻害する抗体またはその抗原
結合断片とを、哺乳動物のＣＣＲ４またはその一部への前記抗体またはその抗原
結合断片の結合に適した条件下で接触させる工程；ならびにｂ）前記抗体またはその抗原結合断片の結合を検出する工程を含み、前記抗体またはその抗原結合断片の結合が、前記細胞上での前記レセプ
ターまたは前記レセプターの一部の存在を示す、細胞または該細胞の画分による
哺乳動物のＣＣ−ケモカインレセプター４（ＣＣＲ４）またはその一部の発現の
検出方法。
【請求項２０】抗体またはその抗原結合断片がｉ）モノクローナル抗体１Ｇ１；ｉｉ）１Ｇ１のエピトープ特異性と同一または類似のエピトープ特異性を有する
抗体；ｉｉｉ）哺乳動物のＣＣ−ケモカインレセプター４（ＣＣＲ４）への結合に関し
て１Ｇ１と競合することができる抗体；ｉｖ）モノクローナル抗体２Ｂ１０；ｖ）２Ｂ１０のエピトープ特異性と同一または類似のエピトープ特異性を有する
抗体；ｖｉ）哺乳動物のＣＣ−ケモカインレセプター４（ＣＣＲ４）への結合に関して
２Ｂ１０と競合することができる抗体；ｖｉｉ）哺乳動物のＣＣ−ケモカインレセプター４（ＣＣＲ４）またはその一部
に結合する（ｉ）〜（ｖｉ）のいずれか１つの抗原結合断片；ｖｉｉｉ）モノクローナル抗体１０Ｅ４；ｉｘ）１０Ｅ４のエピトープ特異性と同一または類似のエピトープ特異性を有す
る抗体；ｘ）哺乳動物のＣＣ−ケモカインレセプター４（ＣＣＲ４）への結合に関して１
０Ｅ４と競合することができる抗体；ならびにｘｉ）上記の組み合せからなる群より選ばれるものである、請求項１９記載の方法。
【請求項２１】組成物がヒトの細胞を含有する試料である、請求項２０記
載の方法。
【請求項２２】ａ）試験対象の試料と、哺乳動物のＣＣ−ケモカインレセ
プター４（ＣＣＲ４）または該レセプターの一部に結合し、該レセプターへのリ
ガンドの結合を阻害する抗体またはその抗原結合断片とを、哺乳動物のＣＣＲ４
またはその一部への前記抗体またはその断片の結合に適した条件下で接触させる
工程；ならびにｂ）前記抗体またはその抗原結合断片の結合を検出または測定する工程を含み、試料中における物質への前記抗体またはその抗原結合断片の結合が、前
記試料中における哺乳動物のＣＣ−ケモカインレセプター４（ＣＣＲ４）または
該レセプターの一部の存在を示す、哺乳動物のＣＣ−ケモカインレセプター４（
ＣＣＲ４）または該レセプターの一部の検出方法。
【請求項２３】抗体またはその抗原結合断片が、ｉ）モノクローナル抗体１Ｇ１；ｉｉ）１Ｇ１のエピトープ特異性と同一または類似のエピトープ特異性を有する
抗体；ｉｉｉ）哺乳動物のＣＣ−ケモカインレセプター４（ＣＣＲ４）への結合に関し
て１Ｇ１と競合することができる抗体；ｉｖ）モノクローナル抗体２Ｂ１０；ｖ）２Ｂ１０のエピトープ特異性と同一または類似のエピトープ特異性を有する
抗体；ｖｉ）哺乳動物のＣＣ−ケモカインレセプター４（ＣＣＲ４）への結合に関して
２Ｂ１０と競合することができる抗体；ｖｉｉ）モノクローナル抗体１０Ｅ４；ｖｉｉｉ）１０Ｅ４のエピトープ特異性と同一または類似のエピトープ特異性を
有する抗体；ｉｘ）哺乳動物のＣＣ−ケモカインレセプター４（ＣＣＲ４）への結合に関して
１０Ｅ４と競合することができる抗体；ｘ）哺乳動物のＣＣ−ケモカインレセプター４（ＣＣＲ４）またはその一部に結
合する（ｉ）〜（ｉｘ）のいずれか１つの抗原結合断片；およびｘｉ）上記の組み合せからなる群より選ばれる、請求項２２記載の方法。
【請求項２４】試料が、正常個体における哺乳動物のＣＣ−ケモカインレ
セプター４（ＣＣＲ４）または該レセプターの一部を含有してなる細胞の画分で
ある、請求項２２記載の方法。
【請求項２５】哺乳動物のＣＣ−ケモカインレセプター４（ＣＣＲ４）ま
たは該レセプターの一部に結合する抗体またはその抗原結合断片の有効量と、前
記レセプターまたはその一部を含有する組成物とを接触させる工程を含み、該抗
体または断片が前記ケモカインの哺乳動物のＣＣ−ケモカインレセプター４（Ｃ
ＣＲ４）への結合を阻害し、かつケモカインの前記レセプターへの結合に関連す
る１以上の機能を阻害する、哺乳動物のＣＣ−ケモカインレセプター４（ＣＣＲ
４）または前記レセプターの機能性断片へのケモカインの結合に関連する機能の
阻害方法。
【請求項２６】ケモカインが、ＴＡＲＣ、ＭＤＣ、ＭＣＰ−１、ＭＩＰ−
１αおよびＲＡＮＴＥＳのいずれか１つ以上である、請求項２５記載の方法。
【請求項２７】抗体またはその抗原結合断片が：ａ）モノクローナル抗体１Ｇ１；ｂ）１Ｇ１のエピトープ特異性と同一または類似のエピトープ特異性を有する抗
体；ｃ）哺乳動物のＣＣ−ケモカインレセプター４（ＣＣＲ４）への結合に関して１
Ｇ１と競合することができる抗体；ｄ）モノクローナル抗体２Ｂ１０；ｅ）２Ｂ１０のエピトープ特異性と同一または類似のエピトープ特異性を有する
抗体；ｆ）哺乳動物のＣＣ−ケモカインレセプター４（ＣＣＲ４）への結合に関して２
Ｂ１０と競合することができる抗体；ｇ）モノクローナル抗体１０Ｅ４；ｈ）１０Ｅ４のエピトープ特異性と同一または類似のエピトープ特異性を有する
抗体；ｉ）哺乳動物のＣＣ−ケモカインレセプター４（ＣＣＲ４）への結合に関して１
０Ｅ４と競合することができる抗体；およびｊ）哺乳動物のＣＣ−ケモカインレセプター４（ＣＣＲ４）またはその一部に結
合する（ａ）〜（ｉ）のいずれか１つの抗原結合断片、からなる群より選択されるものである、請求項２５記載の方法。
【請求項２８】ａ）試験対象の試薬、ｂ）哺乳動物のＣＣ−ケモカインレセプター４（ＣＣＲ４）または該レセプター
の一部に結合し、リガンドの該レセプターへの結合を阻害する、抗体または抗原
結合断片：並びにｃ）哺乳動物のＣＣ−ケモカインレセプター４（ＣＣＲ４）またはそのリガンド
結合バリアントを含有する組成物を、前記哺乳動物のＣＣ−ケモカインレセプター４（ＣＣＲ４）またはそのリガ
ンド結合バリアントへの前記抗体または抗原結合断片の結合、および前記哺乳動
物のＣＣ−ケモカインレセプター４（ＣＣＲ４）またはそのリガンド結合バリア
ントへの前記抗体または抗原結合断片の結合を検出または測定するのに適した条
件下で混合する（combining)工程を有する、哺乳動物のＣＣ−ケモカインレセプ
ター４（ＣＣＲ４）またはそのリガンド結合バリアントに結合する試薬の検出ま
たは同定方法。
【請求項２９】抗体またはその抗原結合断片が：ａ）モノクローナル抗体１Ｇ１；ｂ）１Ｇ１のエピトープ特異性と同一または類似のエピトープ特異性を有する抗
体；ｃ）哺乳動物のＣＣ−ケモカインレセプター４（ＣＣＲ４）への結合に関して１
Ｇ１と競合することができる抗体；ｄ）モノクローナル抗体２Ｂ１０；ｅ）２Ｂ１０のエピトープ特異性と同一または類似のエピトープ特異性を有する
抗体；ｆ）哺乳動物のＣＣ−ケモカインレセプター４（ＣＣＲ４）への結合に関して２
Ｂ１０と競合することができる抗体；ｇ）モノクローナル抗体１０Ｅ４；ｈ）１０Ｅ４のエピトープ特異性と同一または類似のエピトープ特異性を有する
抗体；ｉ）哺乳動物のＣＣ−ケモカインレセプター４（ＣＣＲ４）への結合に関して１
０Ｅ４と競合することができる抗体；ｊ）哺乳動物のＣＣ−ケモカインレセプター４（ＣＣＲ４）またはその一部に結
合する（ａ）〜（ｉ）のいずれか１つの抗原結合断片；およびｋ）上記の組み合わせからなる群より選択されるものである、請求項２８記載の方法。
【請求項３０】前記抗体または抗原結合断片と前記哺乳動物のＣＣ−ケモ
カインレセプター４（ＣＣＲ４）またはリガンド結合バリアントとの複合体の形
成をモニターし、かつ適切な対照と比較して形成された複合体の量における減少
が、薬剤が前記レセプターまたはそのリガンド結合バリアントに結合することを
示す、請求項２８記載の方法。
【請求項３１】哺乳動物のＣＣ−ケモカインレセプター４（ＣＣＲ４）ま
たはそのリガンド結合バリアントを含有してなる組成物が、組換えＣＣ−ケモカ
インレセプター４（ＣＣＲ４）またはそのリガンド結合バリアントを産生する細
胞である、請求項２８記載の方法。
【請求項３２】哺乳動物のＣＣ−ケモカインレセプター４（ＣＣＲ４）ま
たはそのリガンド結合バリアントを含有してなる組成物が、前記の組換えＣＣ−
ケモカインレセプター４（ＣＣＲ４）またはそのリガンド結合バリアントを産生
する細胞の膜画分である、請求項２８記載の方法。
【請求項３３】抗体またはその抗原結合断片が、放射性同位体、スピン標
識、抗原標識、酵素標識、蛍光性基および化学発光基からなる群より選択される
標識で標識される、請求項２８記載の方法。
【請求項３４】薬剤が、哺乳動物のＣＣ−ケモカインレセプター４（ＣＣ
Ｒ４）またはその抗原結合断片に対する特異性を有する抗体である、請求項２８
記載の方法。
【請求項３５】哺乳動物のＣＣ−ケモカインレセプター４（ＣＣＲ４）ま
たは該レセプターの一部に結合する抗体またはその抗原結合断片であり、かつレ
セプターへのリガンドの結合を阻害する抗体またはその抗原結合断片の有効量を
含有する組成物を患者に投与する工程を含む、患者における白血球輸送（traffi
cking)の阻害方法。
【請求項３６】リガンドがケモカインである、請求項３５記載の方法。
【請求項３７】ケモカインが、ＴＡＲＣ、ＭＤＣ、ＭＣＰ−１、ＭＩＰ−
１αおよびＲＡＮＴＥＳのいずれか１つ以上である、請求項３６記載の方法。
【請求項３８】抗体またはその抗原結合断片が：ａ）モノクローナル抗体１Ｇ１；ｂ）１Ｇ１のエピトープ特異性と同一または類似のエピトープ特異性を有する抗
体；ｃ）哺乳動物のＣＣ−ケモカインレセプター４（ＣＣＲ４）への結合に関して１
Ｇ１と競合することができる抗体；ｄ）モノクローナル抗体２Ｂ１０；ｅ）２Ｂ１０のエピトープ特異性と同一または類似のエピトープ特異性を有する
抗体；ｆ）哺乳動物のＣＣ−ケモカインレセプター４（ＣＣＲ４）への結合に関して２
Ｂ１０と競合することができる抗体；ｇ）モノクローナル抗体１０Ｅ４；ｈ）１０Ｅ４のエピトープ特異性と同一または類似のエピトープ特異性を有する
抗体；ｉ）哺乳動物のＣＣ−ケモカインレセプター４（ＣＣＲ４）への結合に関して１
０Ｅ４と競合することができる抗体；およびｊ）哺乳動物のＣＣ−ケモカインレセプター４（ＣＣＲ４）またはその一部に結
合する（ａ）〜（ｉ）のいずれか１つの抗原結合断片からなる群より選択されるものである、請求項３５記載の方法。
【請求項３９】哺乳動物のＣＣ−ケモカインレセプター４（ＣＣＲ４）ま
たは前記レセプターの一部に結合し、該レセプターへのリガンドの結合を阻害す
る抗体またはその抗原結合断片、および任意に薬学的に許容され得るベヒクルを
含有してなる組成物。
【請求項４０】哺乳動物のＣＣ−ケモカインレセプター４（ＣＣＲ４）ま
たは該レセプターの一部に結合し、約１．５μｇ／ｍｌ未満のＩＣ₅₀で該レセプ
ターへのリガンドの結合を阻害する、抗体またはその抗原結合断片。
【請求項４１】哺乳動物のＣＣ−ケモカインレセプター４（ＣＣＲ４）ま
たは該レセプターの一部に結合し、約１．５ｎｇ／ｍｌ未満のＩＣ₅₀で該レセプ
ターへのリガンドの結合を阻害する、抗体またはその抗原結合断片。
【請求項４２】哺乳動物のＣＣ−ケモカインレセプター４（ＣＣＲ４）ま
たはその一部に結合する抗体またはその抗原結合断片の有効量を患者に投与する
工程を含む、患者のＣＣ−ケモカインレセプター４（ＣＣＲ４）媒介性障害の治
療方法。
【請求項４３】哺乳動物のＣＣ−ケモカインレセプター４（ＣＣＲ４）ま
たはその一部に結合する抗体またはその抗原結合断片の有効量を患者に投与する
工程を含む、患者の炎症性障害の治療方法。
【請求項４４】ＡＴＣＣ登録番号の
下に寄託された１０Ｅ４ハイブリドーマ細胞株。
【請求項４５】請求項４４記載のハイブリドーマ細胞株によって産生され
たモノクローナル抗体またはその抗原結合断片。